JP2023081303A - 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体 - Google Patents

重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体 Download PDF

Info

Publication number
JP2023081303A
JP2023081303A JP2022174143A JP2022174143A JP2023081303A JP 2023081303 A JP2023081303 A JP 2023081303A JP 2022174143 A JP2022174143 A JP 2022174143A JP 2022174143 A JP2022174143 A JP 2022174143A JP 2023081303 A JP2023081303 A JP 2023081303A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
heavy chain
seq
cells
antibodies
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2022174143A
Other languages
English (en)
Other versions
JP2023081303A5 (ja
JP7462011B2 (ja
Inventor
キャサリン ハリス，
Harris Katherine
ウテ シェレンベルガー，
Schellenberg Ute
オミド バファ，
Vafa Omid
ネイサン トリンクライン，
Trinklein Nathan
ショーテン， ウィム ヴァン
Van Schooten Wim
アルドレッド， シェリー フォース
Force Aldred Shelley
デュイ ファム，
Pham Duy
スターリン クラーク，
Clarke Starlynn
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TeneoBio Inc
Original Assignee
TeneoBio Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from PCT/US2021/029909 external-priority patent/WO2021222578A1/en
Application filed by TeneoBio Inc filed Critical TeneoBio Inc
Publication of JP2023081303A publication Critical patent/JP2023081303A/ja
Publication of JP2023081303A5 publication Critical patent/JP2023081303A5/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP7462011B2 publication Critical patent/JP7462011B2/ja
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/64—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising a combination of variable region and constant region components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

【課題】有利な特性を付与する改変された重鎖定常領域を有する多重特異性ヒト重鎖抗体を提供する。【解決手段】変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＴ３６６Ｗを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第１の重鎖ポリペプチドサブユニット；ならびに変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第２の重鎖ポリペプチドサブユニットを含む、単離された多重特異性抗体を提供する。本発明はさらに、そのような抗体の作製方法、そのような抗体を含む医薬組成物などの組成物、及び本明細書に記載の１つ以上の結合標的の発現によって特徴付けられる障害を治療するためのそれらの使用に関する。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／０１７，５８９号、及び２０２０年１１月２日に出願された米国仮特許出願第６３／１０８，７９６号の出願日の優先権を主張し、その出願の開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本発明は、有利な特性を付与する修飾された重鎖定常領域を有する多重特異性ヒト重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））に関する。本発明はさらに、そのような抗体の作製方法、そのような抗体を含む医薬組成物などの組成物、及び本明細書に記載の結合標的の１つ以上の発現を特徴とする障害を治療するためのそれらの使用に関する。
修飾されたＦｃ領域
タンパク質工学の進歩により、２つ以上の標的に対して結合親和性を有する多重特異性抗体の製造及び臨床利用は成功を収めている。しかしながら、それらのヘテロ二量体の性質により、多重特異性抗体において、所望の組み合わせの結合配列、したがってポリペプチドサブユニットの適切な対形成を容易にするために、適切な手段を利用しなければならない。Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，ｍＡｂｓ １０：８，１２２６－１２３５（２０１８）。
不対合ポリペプチドサブユニットの問題を回避する１つのアプローチは、「ノブイントゥホール」（ＫｉＨ）として知られており、これは、ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインに変異を導入して接触界面を改変することによって２つの異なる抗体重鎖の対形成を強制することを目的としている。一方の鎖では、かさばるアミノ酸を短い側鎖を有するアミノ酸に置き換えて「ホール」を創出する。逆に、大きな側鎖を有するアミノ酸をもう一方の重鎖に導入して「ノブ」を創出する。これらの２つの重鎖を共発現させることにより、ノブ－ホール対合のより好ましい安定性により、ヘテロ二量体形成（「ノブ－ホール」）が、ホモ二量体形成（「ホール－ホール」または「ノブ－ノブ」）に対してより高い収率で観察される（Ｒｉｄｇｗａｙ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．９（１９９６）６１７－６２１；及びＷＯ９６／０２７０１１）。
この戦略は、所望のヘテロ二量体を達成するのに魅力的であるように思われるが、得られる多重特異性抗体の他の特性は、Ｆｃ領域の特定のアミノ酸配列、すなわち、例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）などのエフェクター機能に大きく依存する。さらに、エフェクター機能活性はサイトカインの産生を誘発する可能性があり、これは望ましくない炎症反応の「サイトカインストーム」をもたらし得る。Ｇｕｐｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ＆ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ４０：１，１９－２３（２０１９）。したがって、特定の状況では、例えば、多重特異性抗体が結合する免疫細胞（例えば、Ｔ細胞）の損傷または死滅を回避するために、及び／または望ましくないサイトカイン産生とその結果生じる望ましくない炎症反応を回避するために、エフェクター機能を低減または完全に排除する必要がある。
さらに、タンパク質へのアミノ酸改変の導入は、重大な欠点を有する可能性があり、すなわち、非天然配列の存在に基づいて、タンパク質に対する患者による免疫応答を誘発する可能性がある。そのため、多重特異性抗体の開発には、天然の抗体（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭなど）と一般的な構造が非常に類似しており、天然の配列からの逸脱が最小限であるが、同時に、所望のヘテロ二量体化を促進するという目標を達成する一方で、１つ以上のエフェクター機能の低減または排除も達成することができる改変を成功裏に組み込む配列を同定することが必要とされる。
これらの競合する要件のバランスを取るために、本発明者らは、天然配列が比較的低レベルのエフェクター機能活性を有することが知られているＩｇＧ４ Ｆｃに注目した。Ｃｒｅｓｃｉｏｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈｍａ Ｒｅｐ １６：７（２０１６）。しかしながら、このような表面的な利点にもかかわらず、ＩｇＧ４は、その特定のヒンジ領域配列に起因して、ｉｎ ｖｉｖｏで鎖交換反応を起こすことが知られており、所望のヘテロ二量体化を達成するうえで、さらなる複雑さを呈している。Ｌａｂｒｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２７，７６７－７１（２００９）。したがって、所望のヘテロ二量体化を達成し、エフェクター機能を低減または排除する修飾を組み込み、同時にＩｇＧ４の鎖交換反応を低減または排除する修飾を組み込む、修飾された重鎖定常領域配列が必要とされている。本明細書に記載の分子は、これら及び他の課題に対処する。
重鎖抗体
従来のＩｇＧ抗体では、重鎖と軽鎖の会合は、軽鎖定常領域と重鎖のＣＨ１定常ドメインとの間の疎水性相互作用に部分的に起因している。重鎖フレームワーク２（ＦＲ２）及びフレームワーク４（ＦＲ４）領域にも、重鎖と軽鎖の間のこの疎水性相互作用に寄与する追加の残基が存在する。
しかしながら、ラクダ科の動物（ラクダ、ヒトコブラクダ、及びラマを含むＴｙｌｏｐｏｄａ亜目）の血清には、対になったＨ鎖のみからなる主要なタイプの抗体（重鎖のみ抗体またはＵｎｉＡｂｓ（商標））が含まれていることが知られている。ラクダ科（Ｃａｍｅｌｕｓ ｄｒｏｍｅｄａｒｉｕｓ、Ｃａｍｅｌｕｓ ｂａｃｔｒｉａｎｕｓ、Ｌａｍａ ｇｌａｍａ、Ｌａｍａ ｇｕａｎａｃｏ、Ｌａｍａ ａｌｐａｃａ及びＬａｍａ ｖｉｃｕｇｎａ）のＵｎｉＡｂｓ（商標）は、単一の可変ドメイン（ＶＨＨ）、ヒンジ領域及び２個の定常ドメイン（ＣＨ２及びＣＨ３）からなる固有の構造を有し、これら定常ドメインは、古典的な抗体のＣＨ２及びＣＨ３ドメインと高度に相同性がある。これらＵｎｉＡｂｓ（商標）は、ゲノム中に存在するが、ｍＲＮＡプロセシング中にスプライシング除去される定常領域（ＣＨ１）の第１のドメインを欠損している。ＣＨ１ドメインがないということが、ＵｎｉＡｂｓ（商標）に軽鎖がないことを説明しており、なぜなら、このドメインが軽鎖の定常ドメインの固定場所であるからである。そのようなＵｎｉＡｂｓ（商標）は、従来の抗体またはその断片に由来する３つのＣＤＲによって、その抗原結合特異性及び高親和性を付与するように自然進化した（Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ，２００１；Ｊ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ７４：２７７－３０２、Ｒｅｖｅｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００５；Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｌ Ｔｈｅｒ ５：１１１－１２４）。サメなどの軟骨魚も、ＩｇＮＡＲと呼ばれる独特のタイプの免疫グロブリンを進化させており、これは、軽鎖ポリペプチドを欠損し、完全に重鎖からなる。ＩｇＮＡＲ分子を、分子工学によって操作し、単一の重鎖ポリペプチド（ｖＮＡＲ）の可変ドメインを生成することができる（Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３－３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５５，１８７－１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０，２５－３３（２００３））。
軽鎖を欠く重鎖のみの抗体が抗原に結合する能力は、１９６０年代に確立された（Ｊａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９６８）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，７，４１８５－４１９５）。軽鎖から物理的に分離された重鎖免疫グロブリンは、四量体抗体と比較して抗原結合活性の８０％を保持していた。Ｓｉｔｉａ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｃｅｌｌ，６０，７８１－７９０は、再構成したマウスμ遺伝子由来のＣＨ１ドメインを除去することにより、哺乳類細胞培養物中において、軽鎖を欠損した重鎖のみの抗体が産生されることを示した。産生された抗体は、ＶＨ結合特異性を保持するとともに、エフェクター機能を有していた。
免疫化によって、高い特異性と親和性を備えた重鎖抗体を、様々な抗原に対して生成することができ（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｉｎｄｅｎ，Ｒ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ． １４３１，３７－４６（１９９９））、ＶＨＨ部分は、容易に酵母中でクローニングし、発現させることができる（Ｆｒｅｎｋｅｎ，Ｌ．Ｇ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７８，１１－２１（２０００））。それらの発現、溶解度及び安定性のレベルは、古典的なＦ（ａｂ）またはＦｖフラグメントに比べて有意に高い（Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４１４，５２１－５２６（１９９７））。
λ（ラムダ）軽（Ｌ）鎖遺伝子座及び／またはλ及びκ（カッパ）Ｌ鎖遺伝子座が機能的にサイレンシングされているマウス、ならびにそのようなマウスによって産生される抗体は、米国特許第７，５４１，５１３号及び第８，３６７，８８８号に記載されている。マウス及びラットにおける重鎖のみの抗体の組換え産生は、例えば、ＷＯ２００６００８５４８、米国出願公開第２０１００１２２３５８号、Ｎｇｕｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；１０９（１），９３－１０１、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．；２００６，２６（５）：３７７－９０、及びＺｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ；２０４（１３）：３２７１－３２８３に報告されている。ジンクフィンガーヌクレアーゼの胚マイクロインジェクションによるノックアウトラットの作製は、Ｇｅｕｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２５（５９３９）：４３３に記載されている。可溶性重鎖のみ抗体及びそのような抗体を産生する異種重鎖遺伝子座を有するトランスジェニック齧歯動物は、米国特許第８，８８３，１５０号及び第９，３６５，６５５号に記載されている。結合（ターゲティング）ドメインとして単一ドメイン抗体を含むＣＡＲ－Ｔ構造は、例えば、Ｉｒｉ－Ｓｏｆｌａ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１７：２６３０－２６４１及びＪａｍｎａｎｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，１８４０：３７８－３８６に記載されている。
Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）
腫瘍壊死因子スーパーファミリーメンバー１７（ＴＮＦＲＳＦ１７）（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０２２２３）としても知られるＢＣＭＡは、形質細胞及び形質芽細胞上に排他的に発現する細胞表面受容体である。ＢＣＭＡは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーの２つのリガンド：ＡＰＲＩＬ（ＴＮＦＳＦ１３；ＴＡＬＬ－２及びＴＲＤＬ－１としても知られる増殖誘導リガンド；ＢＣＭＡの高親和性リガンド）ならびにＢ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）（ＢＬｙＳ；ＴＡＬＬ－１；ＴＨＡＮＫ；ｚＴＮＦ４；ＴＮＦＳＦ２０；及びＤ８Ｅｒｔｄ３８７ｅとしても知られる；ＢＣＭＡの低親和性リガンド）の受容体である。ＡＰＲＩＬとＢＡＦＦは、ＢＣＭＡに結合して形質細胞の生存を促進する成長因子である。ＢＣＭＡは、ヒト多発性骨髄腫（ＭＭ）の悪性形質細胞にも高度に発現している。ＢＣＭＡに結合する抗体は、例えば、Ｇｒａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：１０９３－１１０６，ＷＯ２００１２４８１１及びＷＯ２００１２４８１２に記載されている。ＴＡＣＩと交差反応する抗ＢＣＭＡ抗体は、ＷＯ２００２／０６６５１６に記載されている。ＢＣＭＡ及びＣＤ３に対する二重特異性抗体は、例えば、ＵＳ２０１３／０１５６７６９ Ａ１及びＵＳ２０１５／０３７６２８７ Ａ１に記載されている。抗ＢＣＭＡ抗体－ＭＭＡＥまたは抗ＢＣＭＡ抗体－ＭＭＡＦ複合体は、多発性骨髄腫細胞の死滅を選択的に誘導することが報告されている（Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１４，１２３（２０）：３１２８－３８）。Ａｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６，１２８（１３）：１６８８－７００は、臨床試験（＃ＮＣＴ０２２１５９６７）で、ＢＣＭＡを標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が、ヒト患者において多発性骨髄腫の寛解をもたらしたことを報告した。
ＰＳＭＡ
ＰＳＭＡは、前立腺特異的膜抗原及びグルタミン酸カルボキシペプチダーゼＩＩ（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０４６０９）とも呼ばれ、Ｎ－アセチル化－α結合－酸性ジペプチダーゼ、葉酸ヒドロラーゼ、及びジペプチジルペプチダーゼ活性を有するＩＩ型膜貫通タンパク質である。これは、ヒトのＦＯＬＨ１遺伝子によってコードされており、１９アミノ酸の細胞質ドメイン、２４アミノ酸の膜貫通部分、及び７０７アミノ酸の細胞外部分からなる。このタンパク質は、非共有結合ホモダイマーとして酵素的に活性である。ＰＳＭＡは、前立腺上皮組織に発現し、前立腺癌及び固形腫瘍の新生血管系で上方制御される。また、脳、腎臓、唾液腺などの健康な組織でも低レベルで発現するが、悪性前立腺組織での過剰発現は、前立腺癌の治療的処置の魅力的な標的となる。また、悪性新生血管系での発現が高いことから、固形腫瘍の治療または画像診断にも適し得る。ＰＳＭＡを標的とするモノクローナル抗体、抗体薬物複合体、及びキメラ抗原受容体Ｔ細胞は、転移性前立腺癌の治療に関して記載されている（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｈｏｙｏｓ ｅｔ ａｌ ２０１６，ＰＭＩＤ：２７４０６９８５、ＤｉＰｉｐｐｏ ｅｔ ａｌ ２０１４，ＰＭＩＤ：２５３２７９８６、Ｓｅｒｇａｎｏｖａ ｅｔ ａｌ ２０１６，ＰＭＩＤ：２８３４５０２３）。さらに、ＰＳＭＡに特異的な放射性核種複合体が、前立腺癌の画像化及び治療のために調査されているところである（例えば、Ｈｏｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８ ＰＭＩＤ：２９７５２１８０）。
ＣＤ１９
Ｂリンパ球表面抗原Ｂ４（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５３９１）としても知られるＣＤ１９は、すべてのヒトＢ細胞で発現するが、形質細胞には認められない細胞表面受容体である。ＣＤ１９は、細胞質シグナル伝達タンパク質を膜に動員する膜貫通タンパク質であり、ＣＤ１９／ＣＤ２１複合体内で作用して、Ｂ細胞受容体シグナル伝達経路の閾値を低下させる。ＣＤ１９は、比較的大きな２４０アミノ酸の細胞質尾部を有する。細胞外Ｉｇ様ドメインは、潜在的なジスルフィド結合非Ｉｇ様ドメインと、Ｎ結合炭水化物付加部位に分けられる。細胞質尾部は、Ｃ末端付近に少なくとも９つのチロシン残基を含み、その一部はリン酸化されていることが示されている。ＣＤ２０及びＣＤ２２に加えて、ＣＤ１９の発現がＢ細胞系統に限定されていることから、ＣＤ１９は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療処置に関して魅力的な標的となる。ＣＤ１９に特異的な多くのモノクローナル抗体及び抗体薬物複合体が記載されている（例えば、Ｎａｄｄａｆｉ ｅｔ ａｌ．２０１５，ＰＭＣ４６４４５２５）。さらに、抗ＣＤ１９キメラ抗原受容体Ｔ細胞は、白血病の治療に承認されている（例えば、Ｓａｄｅｌａｉｎ ｅｔ ａｌ．２０１７，ＰＭＩＤ：２９２４５００５）。
本発明の態様は、変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＴ３６６Ｗを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第１の重鎖ポリペプチドサブユニット；変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第２の重鎖ポリペプチドサブユニットを含む、単離された多重特異性抗体を含む。いくつかの実施形態では、第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの変異ヒトＩｇＧ４定常領域または第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの変異ヒトＩｇＧ４定常領域は、ＣＨ１ドメインを欠いている。いくつかの実施形態では、第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの変異ヒトＩｇＧ４定常領域は、配列番号７３または５５の配列を含み、第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの変異ヒトＩｇＧ４定常領域は、配列番号７２または５４の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の実施形態による多重特異性抗体は、配列番号３６の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号３７の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号３８の配列を含むＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号４１の配列を含むＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメインを含み、ＣＤ３に対する結合特異性を有する第１の結合部分をさらに含む。
いくつかの実施形態では、第１の結合部分の重鎖可変ドメイン内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、ヒトＶＨフレームワークに存在し；第１の結合部分の軽鎖可変ドメイン内のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列は、ヒトＶκフレームワークに存在する。いくつかの実施形態では、第１の結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号４２と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み、第１の結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号４３と少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合部分の重鎖可変ドメインは、配列番号４２の配列を含み；第１の結合部分の軽鎖可変ドメインは、配列番号４３の配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明の実施形態による多重特異性抗体は、ＣＤ３以外のタンパク質に対する結合特異性を有する第２の結合部分をさらに含む。いくつかの実施形態では、第２の結合部分は、一価または二価の構成で、単一の重鎖可変領域を含む。いくつかの実施形態では、第１の結合部分は、軽鎖ポリペプチドサブユニット及び重鎖ポリペプチドサブユニットを含み、第２の結合部分は、重鎖ポリペプチドサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、第１の結合部分の軽鎖ポリペプチドサブユニットは、軽鎖定常ドメインを含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３以外のタンパク質は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異抗原（ＴＳＡ）である。いくつかの実施形態では、ＴＡＡはＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）である。いくつかの実施形態では、ＴＡＡはＣＤ１９である。いくつかの実施形態では、ＴＡＡは前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である。
本発明の態様は、本明細書に記載の多重特異性抗体、本明細書に記載の多重特異性抗体をコードするポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター、及びそのようなベクターを含む細胞を含む医薬組成物を含む。
本発明の態様は、多重特異性抗体の発現を許容する条件下で本明細書に記載の細胞を増殖させ、細胞から多重特異性抗体を単離することを含む、本明細書に記載の多重特異性抗体の産生方法を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の多重特異性抗体、または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、治療方法を含む。
本発明の態様は、必要とする個体における疾患または障害の治療のための薬剤の調製における、本明細書に記載の多重特異性抗体の使用を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の多重特異性抗体または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＢＣＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法を含む。いくつかの実施形態では、疾患は自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患はがんである。いくつかの実施形態では、がんは骨髄腫である。いくつかの実施形態では、骨髄腫は多発性骨髄腫である。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の多重特異性抗体または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＰＳＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法を含む。いくつかの実施形態では、疾患はがんである。いくつかの実施形態では、がんは前立腺癌である。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の多重特異性抗体または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＣＤ１９の発現を特徴とする疾患または病態の治療方法を含む。いくつかの実施形態では、障害はびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である。いくつかの実施形態では、障害は急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である。いくつかの実施形態では、障害は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。いくつかの実施形態では、障害は全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。いくつかの実施形態では、障害は関節リウマチ（ＲＡ）である。いくつかの実施形態では、障害は多発性硬化症（ＭＳ）である。
本発明の態様は、本明細書に記載の多重特異性抗体または医薬組成物、及び使用説明書を含む、必要とする個体の疾患または障害を治療するためのキットを含む。いくつかの実施形態では、キットは、少なくとも１つの追加の試薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の試薬は、化学療法薬を含む。
本発明の態様は、配列番号４３の配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）を含む第１のポリペプチドサブユニット；配列番号４２の配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；及び配列番号７２または７３の配列を含む重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含む第２のポリペプチドサブユニットを含み；その場合、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインは、一緒になって、ＣＤ３に対する結合特異性を有する第１の結合部分を形成し；さらにＣＤ３以外のタンパク質に対する結合特異性を有する一価または二価構成の重鎖のみの可変領域、及び配列番号５４または５５の配列を含む重鎖定常ドメイン（ＣＨ）を含む第３のポリペプチドサブユニットを含む、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む。いくつかの実施形態では、第３のポリペプチドサブユニットは、ＢＣＭＡに対する結合特異性を有する二価構成の重鎖のみの可変領域を含む。
本発明の態様は、配列番号４９の配列を含む第１のポリペプチドサブユニット；配列番号５６の配列を含む第２のポリペプチドサブユニット；及び配列番号５８の配列を含む第３のポリペプチドサブユニットを含む、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子、本明細書に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子をコードするポリヌクレオチド、そのようなポリヌクレオチドを含むベクター、及びそのようなベクターを含む細胞を含む医薬組成物を含む。
本発明の態様は、二重特異性三本鎖抗体様分子の発現を許容する条件下で本明細書に記載の細胞を増殖させ、細胞から二重特異性三本鎖抗体様分子を単離することを含む、本明細書に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子の産生方法を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の二重特異性三本鎖抗体様分子または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む治療方法を含む。
本発明の態様は、必要とする個体における疾患または障害の治療のための薬剤の調製における、本明細書に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子の使用を含む。
本発明の態様は、本明細書に記載の有効用量の二重特異性三本鎖抗体様分子または医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＢＣＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法を含む。いくつかの実施形態では、疾患は自己免疫疾患である。いくつかの実施形態では、疾患はがんである。いくつかの実施形態では、がんは骨髄腫である。いくつかの実施形態では、骨髄腫は多発性骨髄腫である。
本発明の態様は、本明細書に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子または医薬組成物、及び使用説明書を含む、必要とする個体の疾患または障害を治療するためのキットを含む。いくつかの実施形態では、キットは、少なくとも１つの追加の試薬をさらに含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの追加の試薬は、化学療法薬を含む。
これらの態様、及びさらなる態様は、実施例を含む本開示の残りの部分において、さらに説明される。
パネルＡ～Ｃは、本発明の実施形態による様々な多重特異性抗体の図を示す。 パネルＡ～Ｂは、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製された様々な抗体種の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の画像を示す。 パネルＡは、プロテインＡクロマトグラフィーによって精製された様々な抗体種の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の画像を示す。パネルＢは、パネルＡと同じ抗体種の還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の画像を示す。 パネルＡ～Ｄは、本発明の実施形態による、様々なＩｇＧ１抗体種についてのＦｃγ受容体－抗体相互作用を示すグラフである。 パネルＡ～Ｅは、本発明の実施形態による、様々なＩｇＧ４抗体種についてのＦｃγ受容体－抗体相互作用を示すグラフである。 パネルＡ～Ｄは、本発明の実施形態による、様々なＩｇＧ１抗体種についてのＦｃγ受容体－抗体相互作用を示すグラフである。 パネルＡ～Ｅは、本発明の実施形態による、様々なＩｇＧ４抗体種についてのＦｃγ受容体－抗体相互作用を示すグラフである。 パネルＡは、ヒトＰＳＭＡへの細胞結合を示すグラフである。パネルＢは、カニクイザルＰＳＭＡへの細胞結合を示すグラフである。 非刺激Ｔ細胞を用いたＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示すグラフである。 事前活性化されたＴ細胞を用いたＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示すグラフである。 事前活性化されたＴ細胞の存在下での多重特異性抗体濃度の関数としてのＰＳＭＡ陰性ＤＵ１４５細胞のパーセント特異的溶解を示すグラフである。 ＰＳＭＡ陽性及び陰性細胞へのＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体の結合を示すグラフである。 ＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示すグラフである。 パネルＡは、抗体濃度の関数としてのＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介溶解を示すグラフである。パネルＢは、抗体濃度の関数としてのサイトカイン（ＩＦＮγ）放出を示すグラフである。パネルＣは、抗体濃度の関数としてのサイトカイン（ＩＬ－２）放出を示すグラフである。 パネルＡは、抗体濃度の関数としてのＴ細胞増殖を示すグラフである。パネルＢは、抗体濃度の関数としてのＴ細胞増殖を示すグラフである。パネルＣは、増殖したＴ細胞のＣＤ８対ＣＤ４の比を示すグラフである。パネルＤは、増殖したＴ細胞のＣＤ８対ＣＤ４の比を示すグラフである。 腫瘍異種移植モデルにおける２２Ｒｖ１腫瘍増殖の阻害を示すグラフである。 凡例に示される二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。 凡例に示される二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。 凡例に示される二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。 凡例に示される二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。 パネルＡ～Ｄは、二重特異性抗体媒介腫瘍細胞溶解を示すいくつかのグラフを示す。抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体を、活性化された初代Ｔ細胞のリダイレクションを通じて３つの異なるＢＣＭＡ＋腫瘍細胞と１つのＢＣＭＡ陰性細胞株を殺傷する能力についてアッセイした。この実験では、二重特異性抗体の添加とともに、腫瘍細胞を活性化汎Ｔ細胞と１０：１のＥ：Ｔ比で混合した。パネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞の殺傷を示し、パネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞の殺傷を示し、パネルＣは、Ｕ－２６６細胞の殺傷を示し、パネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞の殺傷を示す。ｘ軸は使用した抗体の濃度を示し、ｙ軸は抗体添加６時間後の腫瘍細胞の溶解（％）を示す。 パネルＡ～Ｄは、二重特異性抗体媒介性ＩＬ－２放出を示すいくつかのグラフを示す。休止ヒトＴ細胞を、様々な腫瘍細胞株及び漸増用量の抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体と共に培養した後、ＩＬ－２サイトカイン放出のレベルを測定した。パネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示し、パネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示し、パネルＣは、Ｕ－２６６細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示し、パネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示す。 パネルＡ～Ｄは、二重特異性抗体媒介性ＩＦＮ－γ放出を示すいくつかのグラフを示す。休止ヒトＴ細胞を、様々な腫瘍細胞株及び漸増用量の抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体と共に培養した後、ＩＦＮ－γサイトカイン放出のレベルを測定した。パネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示し、パネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示し、パネルＣは、Ｕ－２６６細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示し、パネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示す。 プロテインＡクロマトグラフィーによって精製した様々な抗体種の非還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析の画像である。 精製後の示された構築物の試料に由来するＨＭＷ種（％）、単量体（％）、及びＬＭＷ種（％）を示す表である。 パネルＡ～Ｄは、本発明の実施形態による、様々なＩｇＧ４抗体種についてのＦｃγ受容体－抗体相互作用を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＢＣＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＢＣＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＢＣＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＰＳＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＰＳＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＰＳＭＡ二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＣＤ１９二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＣＤ１９二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。 パネルＡ及びＢは、凡例に示されるＣＤ３×ＣＤ１９二重特異性抗体について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＡ）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）（パネルＢ）を示すグラフである。
本発明の実施は、特に明記しない限り、当技術分野の技術の範囲内である分子生物学（組換え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学、及び免疫学の従来の技術を使用する。そのような技術は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，ｓｅｃｏｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９８９）、“Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．，１９８４）、“Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ”（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．，１９８７）、“Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）、“Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９８７，ａｎｄ ｐｅｒｉｏｄｉｃ ｕｐｄａｔｅｓ）、“ＰＣＲ：Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ”，（Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，１９９４）、“Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ”（Ｐｅｒｂａｌ Ｂｅｒｎａｒｄ Ｖ．，１９８８）、“Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”（Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）、Ｈａｒｌｏｗ，Ｌａｎｅ ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：Ｐｏｒｔａｂｌｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌ Ｎｏ．Ｉ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９９８）、及びＨａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ；（１９８８）などの文献において完全に説明されている。
値の範囲が提供される場合、文脈が別途明確に指示しない限り、下限値の単位の１０分の１までの、その範囲の上限値から下限値の間の各介在値、ならびにその表示範囲の任意の他の表示値または介在値が、本発明に包含されることが理解される。これらのより小さい範囲の上限値及び下限値は、より小さい範囲内に独立して含まれてもよく、また、表示範囲内の任意の具体的な除外限度に従って、本明細書にも包含される。表示範囲がそれらの上限値及び下限値のうちの一方または両方を含む場合、それらの包含される上限値及び下限値のいずれかまたは両方を除外する範囲も本発明に包含される。
特に明記しない限り、本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔナンバリング方式に従って番号付けされる（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。
以下の説明では、本発明のより完全な理解を提供するために、多くの具体的な詳細が述べられている。しかしながら、本発明がこれらの具体的な詳細の１つ以上を伴わずに実施され得ることは、当業者には明らかであろう。他の例では、本発明を曖昧にすることを回避するために、周知の特徴及び当業者に周知の手順は記載されていない。
特許出願及び公報を含む、本開示を通じて引用されるすべての参考文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
Ｉ．定義
「含む」とは、記載する要素が組成物／方法／キットに必要であることを意味するが、特許請求の範囲内で他の要素が組成物／方法／キットなどを形成するために含まれ得る。
「～から本質的になる」とは、記載する組成物または方法の範囲を、本発明の基本的及び新規の特性（複数可）に実質的に影響を及ぼさない特定の物質またはステップに限定することを意味する。
「～からなる」とは、特許請求の範囲で指定されていない任意の要素、ステップ、または成分が、組成物、方法、またはキットから除外されることを意味する。
本明細書の抗体残基は、Ｋａｂａｔナンバリング方式及びＥＵナンバリング方式に従って番号付けされている。Ｋａｂａｔナンバリング方式は、一般的に、可変ドメイン内の残基（およそ、重鎖の１～１１３残基）に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ． ５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１））。「ＥＵナンバリング方式」または「ＥＵインデックス」は、一般的に、免疫グロブリン重鎖定常領域内の残基に言及する際に使用される（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（上記）で報告されているＥＵインデックス）。「Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックス」は、ヒトＩｇＧ１ ＥＵ抗体の残基ナンバリングを指す。本明細書中で特に明記しない限り、抗体の可変ドメインにおける残基番号への言及は、Ｋａｂａｔナンバリング方式による残基ナンバリングを意味する。本明細書中で特に明記しない限り、抗体の定常ドメインにおける残基番号への言及は、ＥＵナンバリング方式による残基ナンバリングを意味する。
「抗体」または「免疫グロブリン」とは、少なくとも１つの重鎖及び１つの軽鎖を含む分子を指し、重鎖及び軽鎖のアミノ末端ドメインは配列が可変であるため、一般的に可変領域ドメインまたは可変重鎖（ＶＨ）ドメインもしくは可変軽鎖（ＶＬ）ドメインと呼ばれる。２つのドメインは従来、会合して特異的結合領域を形成するが、本明細書で論じるように、特異的結合はまた、重鎖のみの可変配列で得ることができ、抗体の様々な非天然構成が知られており、当技術分野で使用されている。
「機能的」または「生物学的に活性な」抗体または抗原結合分子（重鎖のみ抗体及び多重特異性（例えば、二重特異性）三本鎖抗体様分子（本明細書に記載のＴＣＡ）を含む）は、構造的、調節的、生化学的または生物物理学的事象において、その天然の活性の１つ以上を発揮することができる分子である。例えば、機能的抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡは、抗原に特異的に結合する能力を有し得、その結合は、次に、シグナル伝達または酵素活性などの細胞事象または分子事象を誘発または変化させ得る。機能的抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡはまた、受容体のリガンド活性化を遮断するか、またはアゴニストもしくはアンタゴニストとして作用し得る。抗体または他の結合分子、例えば、ＴＣＡがその天然の活性の１つ以上を発揮する能力は、ポリペプチド鎖の適切なフォールディング及び集合を含むいくつかの要因に依存する。
抗体という用語は、全長の重鎖、全長の軽鎖、インタクトな免疫グロブリン分子、またはこれらのポリペプチドのいずれかの免疫学的に活性な部分、すなわち、目的の標的またはその一部の抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含むポリペプチドを指すものであり得、そのような標的には、がん細胞または自己免疫疾患に関連する自己免疫抗体を産生する細胞が含まれるが、これらに限定されない。本明細書に開示する免疫グロブリンは、免疫グロブリン分子の任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２）、またはサブクラス（エフェクター細胞活性を減弱させるまたは増強する改変Ｆｃ部分により操作されたサブクラスを含む）のものであり得る。対象の抗体の軽鎖は、κ軽鎖（Ｖκ）またはλ軽鎖（Ｖλ）であり得る。免疫グロブリンは、任意の種に由来し得る。一態様では、免疫グロブリンは、主にヒト起源である。
本明細書中で使用する用語「モノクローナル抗体」とは、実質的に同種の抗体の集団から得られた抗体を指し、すなわち、その集団を構成する個々の抗体は、少量で存在し得る天然に存在する変異の可能性を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位を指向し、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含む従来の（ポリクローナル）抗体製剤とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対して指向される。本発明によるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作製することができ、例えば、組換えタンパク質産生法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）を介して作製することもできる。
抗体に関連して使用する用語「可変」とは、抗体可変ドメインの特定の部分の配列が抗体間で大きく異なっており、その配列が各特定の抗体のその特定の抗原に対する結合及び特異性に使用されているという事実を指す。しかしながら、可変性は、抗体の可変ドメイン全体にわたって均等には分布していない。これは、軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインのいずれにおいても超可変領域と呼ばれる３つのセグメントに集中している。可変ドメインのより高度に保存された部分は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる。天然重鎖及び軽鎖の可変ドメインは各々、４つのＦＲを含み、これらは主にβシート構成を採用し、３つの超可変領域により連結され、これら超可変領域は、βシート構造に連結するループを形成し、ある場合にはその一部を形成するループを形成する。各鎖における超可変領域は、ＦＲによって、他方の鎖の超可変領域と近接して保持されており、抗体の抗原結合部位の形成に寄与している（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１）を参照のこと）。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与していないが、抗体の抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）への関与などの様々なエフェクター機能を呈する。
本明細書中で使用する場合、用語「超可変領域」とは、抗原結合を担う抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般的に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（例えば、重鎖可変ドメインの残基３１～３５（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）及び９５～１０２（Ｈ３）、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ． Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ．（１９９１））及び／または重鎖可変ドメインの「超可変ループ」残基２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）及び９６～１０１（Ｈ３）由来の残基、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７））を含む。いくつかの実施形態では、「ＣＤＲ」とは、Ｌｅｆｒａｎｃ，ＭＰ ｅｔ ａｌ．，ＩＭＧＴ，ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｄａｔａｂａｓｅ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２７：２０９－２１２（１９９９）において定義されるような抗体の相補性決定領域を意味する。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義される超可変領域／ＣＤＲ残基以外の可変ドメイン残基である。
例示的なＣＤＲの呼称を本明細書に示すが、当業者であれば、配列の変動性に基づき、最も一般的に使用されているＫａｂａｔ定義（“Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．Ａ ｇｅｒｍｌｉｎｅ ｋｎｏｗｌｅｄｇｅ ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１０；４７：６９４－７００を参照のこと）を含む、ＣＤＲのいくつかの定義が一般的に使用されていることを理解するであろう。Ｃｈｏｔｈｉａ定義は、構造ループ領域の位置に基づいている（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．“Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎｓ．”Ｎａｔｕｒｅ．１９８９；３４２：８７７－８８３）。目的の代替のＣＤＲ定義には、限定されないが、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ，“Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ．”Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２００１；３０９：６５７－６７０、Ｏｆｒａｎ ｅｔ ａｌ．“Ａｕｔｏｍａｔｅｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎｓ（ＣＤＲｓ）ｒｅｖｅａｌｓ ｐｅｃｕｌｉａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＣＤＲｓ ａｎｄ Ｂ－ｃｅｌｌ ｅｐｉｔｏｐｅｓ．”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００８；１８１：６２３０－６２３５、Ａｌｍａｇｒｏ“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｔｈａｔ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ａｎｔｉｇｅｎｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｉｚｅ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｔｉｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｐｅｒｔｏｉｒｅｓ．”Ｊ Ｍｏｌ Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．２００４；１７：１３２－１４３、及びＰａｄｌａｎｅｔ ａｌ．“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ－ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．”Ｆａｓｅｂ Ｊ．１９９５；９：１３３－１３９．によって開示された定義が含まれ、これらのそれぞれは、参照により本明細書に具体的に援用される。
用語「重鎖のみ抗体」及び「重鎖抗体」とは、本明細書では同じ意味で用いられ、最も広い意味で、抗体、または抗体の１つ以上の部分、例えば、従来の抗体の軽鎖を欠損した抗体の１つ以上のアームを指す。これらの用語には、具体的には、限定されないが、ＶＨ抗原結合ドメインならびにＣＨ２及びＣＨ３定常ドメインを含むがＣＨ１ドメインがないホモ二量体抗体、そのような抗体の機能的（抗原結合）バリアント、可溶性ＶＨバリアント、１つの可変ドメイン（Ｖ－ＮＡＲ）と５つのＣ様定常ドメイン（Ｃ－ＮＡＲ）のホモ二量体を含むＩｇ－ＮＡＲ及びその機能的断片、ならびに可溶性単一ドメイン抗体（ｓＵｎｉＤａｂｓ（商標））が含まれる。一実施形態では、重鎖のみ抗体は、フレームワーク１、ＣＤＲ１、フレームワーク２、ＣＤＲ２、フレームワーク３、ＣＤＲ３、及びフレームワーク４からなる可変領域抗原結合ドメインからなる。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインからなる。別の実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ２ドメインからなる。さらなる実施形態では、重鎖のみ抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ３ドメインからなる。ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインが短縮された重鎖のみ抗体もまた、本明細書に含まれる。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、及び少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメインからなるが、ヒンジ領域は含まない。重鎖のみ抗体は、２つの重鎖がジスルフィド結合しているか、そうでなければ、共有結合または非共有結合で互いに結合している二量体の形態であり得る。重鎖のみ抗体は、ＩｇＧサブクラスに属していてもよいが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する抗体もまた、本明細書に含まれる。特定の実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特にＩｇＧ１サブタイプのものである。一実施形態では、本明細書における重鎖のみ抗体を、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の結合（標的化）ドメインとして使用する。この定義には、具体的には、ＵｎｉＡｂｓ（商標）と呼ばれるヒト免疫グロブリントランスジェニックラット（ＵｎｉＲａｔ（商標））によって産生されるヒト重鎖のみ抗体が含まれる。ＵｎｉＡｂｓ（商標）の可変領域（ＶＨ）は、ＵｎｉＤａｂｓ（商標）と呼ばれ、また、多重特異性を有し、効力が増加し、半減期が延長された新規治療薬を開発するために、Ｆｃ領域または血清アルブミンに結合することができる可変性ビルディングブロックである。ホモ二量体型のＵｎｉＡｂｓ（商標）は、軽鎖を欠損しており、したがってＶＬドメインを欠いているため、抗原は、単一のドメイン、すなわち、重鎖抗体の重鎖の可変ドメイン（ＶＨまたはＶＨＨ）によって認識される。
本明細書中で使用する「インタクトな抗体鎖」とは、全長の可変領域及び全長の定常領域（Ｆｃ）を含む抗体鎖である。インタクトな「従来の」抗体は、インタクトな軽鎖及びインタクトな重鎖、ならびに分泌型ＩｇＧ用の軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメイン、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＩｇＭまたはＩｇＡなどの他のアイソタイプは、異なるＣＨドメインを有している場合がある。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。インタクトな抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有し得、これは、抗体のＦｃ定常領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に起因する生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例として、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害性、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、食作用、及び細胞表面受容体の下方調節が挙げられる。定常領域バリアントには、エフェクター特性、Ｆｃ受容体への結合などを変化させるバリアントが含まれる。
重鎖のＦｃ（定常ドメイン）のアミノ酸配列に応じて、抗体及び様々な抗原結合タンパク質は、異なるクラスとして提供され得る。５つの主要な重鎖Ｆｃ領域のクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２にさらに分類され得る。異なるクラスの抗体に対応するＦｃ定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ、及びμと呼ばれ得る。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニット構造及び三次元構成は、周知である。Ｉｇの形態には、ヒンジ修飾またはヒンジなしの形態が含まれる（Ｒｏｕｘ ｅｔ ａｌ（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：４０８３－４０９０、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６７：７２４６－７２５６、ＵＳ２００５／００４８５７２、ＵＳ２００４／０２２９３１０）。任意の脊椎動物種由来の抗体の軽鎖は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、κ（カッパ）及びλ（ラムダ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに割り当てられ得る。本発明の実施形態による抗体は、κ軽鎖配列またはλ軽鎖配列を含み得る。
「機能的Ｆｃ領域」は、天然配列Ｆｃ領域の「エフェクター機能」を保有する。エフェクター機能の非限定的な例として、Ｃ１ｑ結合、ＣＤＣ、Ｆｃ受容体結合、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御などが挙げられる。そのようなエフェクター機能は、一般的に、Ｆｃ領域が受容体、例えば、ＦｃγＲＩ、ＦＣγＲＩＩＡ、ＦｃγＲＩＩＢ１、ＦＣγＲＩＩＢ２、ＦＣγＲＩＩＩＡ、ＦＣγＲＩＩＩＢ受容体、及び低親和性ＦｃＲｎ受容体と相互作用することを必要とし、そして、当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評価することができる。「死んだ」または「サイレンシングされた」Ｆｃとは、例えば、血清半減期の延長に関して活性を保持するように変異導入されているが、高親和性Ｆｃ受容体を活性化しないか、またはＦｃ受容体に対する親和性が低下しているＦｃである。
「天然配列Ｆｃ領域」は、天然で見出されるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。天然配列ヒトＦｃ領域には、例えば、天然配列ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域（非Ａ及びＡアロタイプ）、天然配列ヒトＩｇＧ２ Ｆｃ領域、天然配列ヒトＩｇＧ３ Ｆｃ領域、及び天然配列ヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域、ならびにそれらの天然のバリアントが含まれる。
「バリアントＦｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾、好ましくは１つ以上のアミノ酸置換（複数可）によって天然配列Ｆｃ領域のアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列を含む。好ましくは、バリアントＦｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域と比較して少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば、天然配列Ｆｃ領域中または親ポリペプチドのＦｃ領域中に約１～約１０個のアミノ酸置換、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、及び好ましくは約１～約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書におけるバリアントＦｃ領域は、好ましくは、天然配列Ｆｃ領域及び／または親ポリペプチドのＦｃ領域と少なくとも約８０％の相同性、ならびに最も好ましくは、それらと少なくとも約９０％の相同性、より好ましくは、それらと少なくとも約９５％の相同性を保有する。
ヒトＩｇＧ４ Ｆｃアミノ酸配列（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ番号Ｐ０１８６１）は、本明細書において配列番号４５として示される。サイレンシングされたＩｇＧ１は、例えば、Ｂｏｅｓｃｈ，Ａ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，“Ｈｉｇｈｌｙ ｐａｒａｌｌｅｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＩｇＧ Ｆｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ．”ＭＡｂｓ，２０１４．６（４）：ｐ．９１５－２７に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
他のＦｃバリアントが可能であり、これには、限定されないが、ジスルフィド結合を形成することができる領域が欠失しているバリアント、または天然ＦｃのＮ末端において特定のアミノ酸残基が除去されているバリアント、またはメチオニン残基が付加されているバリアントが含まれる。したがって、いくつかの実施形態では、抗体の１つ以上のＦｃ部分は、ジスルフィド結合を排除するために、ヒンジ領域に１つ以上の変異を含み得る。さらに別の実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域を完全に除去することができる。さらに別の実施形態では、抗体は、Ｆｃバリアントを含み得る。
さらに、Ｆｃバリアントは、補体結合またはＦｃ受容体結合をもたらすために、アミノ酸残基を置換（変異）、欠失、または付加することによってエフェクター機能を除去または実質的に低減するように構築することができる。例えば、限定されないが、欠失を、Ｃ１ｑ結合部位などの補体結合部位で行ってもよい。免疫グロブリンＦｃフラグメントのそのような配列誘導体を調製するための技術は、国際特許公開第ＷＯ９７／３４６３１及びＷＯ９６／３２４７８に開示されている。さらに、Ｆｃドメインは、リン酸化、硫酸化、アシル化、グリコシル化、メチル化、ファルネシル化、アセチル化、アミド化などによって修飾され得る。
いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ３６６Ｗ変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ ＣＨ３ドメイン配列を含み、これは、本明細書において、任意選択でＩｇＧ４ ＣＨ３ノブ配列と呼ばれ得る。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異を含むバリアントヒトＩｇＧ４ ＣＨ３ドメイン配列を含み、これは、本明細書において、任意選択でＩｇＧ４ ＣＨ３ホール配列と呼ばれ得る。抗体二量体の第１の単量体の第１の重鎖定常領域に「ノブ」を配置し、抗体二量体の第２の単量体の第２の重鎖定常領域に「ホール」を配置し、それにより、抗体中の重鎖ポリペプチドサブユニットの所望のペアの適切な対形成（ヘテロ二量体化）を促進するために、本明細書に記載のＩｇＧ４ ＣＨ３変異を任意の適切な方法で利用することができる。
いくつかの実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む重鎖ポリペプチドサブユニットを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃ領域を含む重鎖ポリペプチドサブユニットを含む。
用語「Ｆｃ領域を含む抗体」とは、Ｆｃ領域を含む抗体を指す。Ｆｃ領域のＣ末端リジン（ＥＵナンバリング方式による残基４４７）を、例えば、抗体の精製中に、または抗体をコードする核酸の組換え操作により除去してもよい。したがって、本発明によるＦｃ領域を有する抗体は、Ｋ４４７を含むか、または含まない抗体を含み得る。
本発明の態様は、一価または二価構成の重鎖のみの可変領域を含む抗体を含む。本明細書中で使用する場合、重鎖のみの可変領域ドメインに関して使用する用語「一価構成」とは、単一の結合部位を有する、重鎖のみの可変領域ドメインが１つだけ存在することを意味する（図１、パネルＡ、抗体の右アームを参照のこと）。対照的に、重鎖のみの可変領域ドメインに関して使用する用語「二価構成」とは、２つの重鎖のみの可変領域ドメインが存在し（それぞれが単一の結合部位を有する）、リンカー配列によって接続されていることを意味する（図１、パネルＢ及びＣ、抗体の右アームを参照のこと）。リンカー配列の非限定的な例を、本明細書でさらに議論し、これには、限定されないが、様々な長さのＧＳリンカー配列が含まれる。重鎖のみの可変領域が二価構成にある場合、２つの重鎖のみの可変領域ドメインのそれぞれは、同じ抗原または異なる抗原（例えば、同じタンパク質上の異なるエピトープに対して、２つの異なるタンパク質に対して、など）に対する結合親和性を有する。しかしながら、特に明記しない限り、「二価構成」にあると示される重鎖のみの可変領域は、リンカー配列によって接続された２つの同一の重鎖のみの可変領域ドメインを含むと理解され、その場合、２つの同一の重鎖のみの可変領域ドメインのそれぞれは、同じ標的抗原に対して結合親和性を有する。
本発明の態様は、限定されないが、二重特異性、三重特異性などを含む多重特異性構成を有する抗体を含む。二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などにおいて多種多様な方法及びタンパク質構成が知られており、使用されている。
多価人工抗体を産生するための様々な方法が、２つ以上の抗体の可変ドメインを組換え的に融合することによって開発されてきた。いくつかの実施形態では、ポリペプチド上の第１及び第２の抗原結合ドメインを、ポリペプチドリンカーによって接続する。そのようなポリペプチドリンカーの１つの非限定的な例は、４つのグリシン残基とそれに続く１つのセリン残基のアミノ酸配列を有するＧＳリンカーであり、ＧＳリンカー中でこの配列はｎ回繰り返され、ｎは、１～約１０の範囲の整数、例えば、２、３、４、５、６、７、８、または９である。そのようなリンカーの非限定的な例として、ＧＧＧＧＳ（配列番号７０）（ｎ＝１）及びＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７１（ｎ＝２）が挙げられる。他の適切なリンカーも使用することができ、例えば、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ．２０１３ Ｏｃｔｏｂｅｒ １５；６５（１０）：１３５７－６９に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
用語「三本鎖抗体様分子」または「ＴＣＡ」は、本明細書中では、３つのポリペプチドサブユニットを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる抗体様分子を指すために用いられ、そのうちの２つは、抗原結合領域及び少なくとも１つのＣＨドメインを含む、モノクローナル抗体の１つの重鎖及び１つの軽鎖、またはそのような抗体鎖の機能的抗原結合断片を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。この重鎖／軽鎖ペアは、第１の抗原に対して結合特異性を有する。第３のポリペプチドサブユニットは、ＣＨ１ドメインを含まず、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分、及び第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する１つ以上の抗原結合ドメイン（例えば、２つの抗原結合ドメイン）を含む重鎖のみ抗体を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、そのような結合ドメインは、抗体の重鎖または軽鎖の可変領域に由来するか、またはそれに対して配列同一性を有する。そのような可変領域の部分は、ＶＨ及び／またはＶＬ遺伝子セグメント、Ｄ及びＪＨ遺伝子セグメント、またはＪＬ遺伝子セグメントによってコードされ得る。可変領域は、再配置されたＶＨＤＪＨ、ＶＬＤＪＨ、ＶＨＪＬ、またはＶＬＪＬ遺伝子セグメントによってコードされ得る。
ＴＣＡ結合化合物は、「重鎖のみ抗体」または「重鎖抗体」または「重鎖ポリペプチド」を利用し、これは、本明細書中で使用する場合、重鎖定常領域ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４を含むが、ＣＨ１ドメインは含まない単鎖抗体を意味する。一実施形態では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、ならびにＣＨ２及びＣＨ３ドメインからなる。別の実施形態では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ２ドメインからなる。さらなる実施形態では、重鎖抗体は、抗原結合ドメイン、ヒンジ領域の少なくとも一部、及びＣＨ３ドメインからなる。ＣＨ２及び／またはＣＨ３ドメインが短縮された重鎖抗体もまた、本明細書に含まれる。さらなる実施形態では、重鎖は、抗原結合ドメイン、及び少なくとも１つのＣＨ（ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、またはＣＨ４）ドメインからなるが、ヒンジ領域は含まない。重鎖のみ抗体は、２つの重鎖がジスルフィド結合しているか、または互いに共有結合もしくは非共有結合している二量体の形態であり得、任意選択で、ポリペプチド鎖間の適切なペアリングを促進するために、１つ以上のＣＨドメイン間に非対称界面を含み得る。重鎖抗体は、ＩｇＧサブクラスに属していてもよいが、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ及びＩｇＥサブクラスなどの他のサブクラスに属する抗体もまた、本明細書に含まれる。特定の実施形態では、重鎖抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４サブタイプ、特にＩｇＧ１サブタイプまたはＩｇＧ４サブタイプのものである。ＴＣＡ結合化合物の非限定的な例は、例えば、ＷＯ２０１７／２２３１１１及びＷＯ２０１８／０５２５０３に記載されており、その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される。
重鎖抗体は、ラクダ類、例えばラクダ及びラマによって産生されるＩｇＧ抗体の約４分の１を構成する（Ｈａｍｅｒｓ－Ｃａｓｔｅｒｍａｎ Ｃ．，ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ．３６３，４４６－４４８（１９９３））。これらの抗体は、２本の重鎖によって形成されるが、軽鎖を有さない。結果として、可変抗原結合部分はＶＨＨドメインと呼ばれ、それは、長さがわずか約１２０アミノ酸の、最小の天然のインタクトな抗原結合部位を表す（Ｄｅｓｍｙｔｅｒ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６，２６２８５－２６２９０（２００１））。免疫化によって、高い特異性と親和性を備えた重鎖抗体を、様々な抗原に対して生成することができ（ｖａｎ ｄｅｒ Ｌｉｎｄｅｎ，Ｒ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１４３１，３７－４６（１９９９））、ＶＨＨ部分は、容易に酵母中でクローニングし、発現させることができる（Ｆｒｅｎｋｅｎ，Ｌ．Ｇ．Ｊ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７８，１１－２１（２０００））。それらの発現、溶解度及び安定性のレベルは、古典的なＦ（ａｂ）またはＦｖフラグメントに比べて有意に高い（Ｇｈａｈｒｏｕｄｉ，Ｍ．Ａ．ｅｔ ａｌ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４１４，５２１－５２６（１９９７））。サメはまた、ＶＮＡＲと呼ばれる抗体に単一のＶＨ様ドメインを有することが示されている。（Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０，３５４３－３５５４（２００３）、Ｎｕｔｔａｌｌ ｅｔ ａｌ． Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ５５，１８７－１９７（２００４）、Ｄｏｏｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ４０，２５－３３（２００３））。
用語「ＣＤ３」とは、ヒトＣＤ３タンパク質多重サブユニット複合体を指す。ＣＤ３タンパク質の多重サブユニット複合体は、６つの特徴的なポリペプチド鎖で構成される。これらには、ＣＤ３γ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０９６９３）、ＣＤ３δ鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０４２３４）、２つのＣＤ３ε鎖（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ Ｐ０７７６６）、及び１つのＣＤ３ζ鎖ホモ二量体（ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ ２０９６３）が含まれ、これはＴ細胞受容体α鎖及びβ鎖と会合している。用語「ＣＤ３」には、特記されない限り、細胞（Ｔ細胞を含む）が天然に発現するか、またはそれらのポリペプチドをコードする遺伝子もしくはｃＤＮＡでトランスフェクトされた細胞上で発現可能な任意のＣＤ３バリアント、アイソフォーム、及び種ホモログが含まれる。
「ＢＣＭＡ×ＣＤ３抗体」は、多重特異性重鎖のみ抗体、例えば、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性重鎖のみ抗体であり、そのうちの一方が抗原ＢＣＭＡに特異的に結合し、一方がＣＤ３に特異的に結合する。「ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体」は、多重特異性重鎖のみ抗体、例えば、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性重鎖のみ抗体であり、そのうちの一方が抗原ＰＳＭＡに特異的に結合し、一方がＣＤ３に特異的に結合する。「ＣＤ１９×ＣＤ３抗体」は、多重特異性重鎖のみ抗体、例えば、２つの異なる抗原結合領域を含む二重特異性重鎖のみ抗体であり、そのうちの一方が抗原ＣＤ１９に特異的に結合し、一方がＣＤ３に特異的に結合する。
本明細書中で使用する用語「ＢＣＭＡ」は、ＢＣＭＡ、ＣＤ２６９、及びＴＮＦＲＳＦ１７（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０２２２３）としても知られるヒトＢ細胞成熟抗原に関し、これは、分化した形質細胞において優先的に発現する腫瘍壊死受容体スーパーファミリーのメンバーである。ヒトＢＣＭＡの細胞外ドメインは、ＵｎｉＰｒｏｔによると、アミノ酸１～５４（または５～５１）からなる。
用語「抗ＢＣＭＡ重鎖のみ抗体」及び「ＢＣＭＡ重鎖のみ抗体」は、ＢＣＭＡに免疫特異的に結合する上記定義の重鎖のみ抗体を指すために本明細書中で使用される。
本明細書中で使用する用語「ＰＳＭＡ」とは、Ｎ－アセチル化－α結合酸性デペプチダーゼ、葉酸ヒドロラーゼ及びジペプチジルペプチダーゼ活性を有するＩＩ型膜貫通タンパク質を指す。用語「ＰＳＭＡ」には、任意のヒト及び非ヒト動物種のＰＳＭＡタンパク質が含まれ、具体的には、ヒトＰＳＭＡならびに非ヒト哺乳類のＰＳＭＡが含まれる。
本明細書中で使用する用語「ヒトＰＳＭＡ」には、その供給源または調製様式に関係なく、ヒトＰＳＭＡ（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｑ０４６０９）の任意のバリアント、アイソフォーム及び種相同体が含まれる。したがって、「ヒトＰＳＭＡ」には、細胞が天然に発現するヒトＰＳＭＡと、ヒトＰＳＭＡ遺伝子を形質移入した細胞上で発現するＰＳＭＡが含まれる。
上記で定義されたように、用語「抗ＰＳＭＡ重鎖のみ抗体」、「ＰＳＭＡ重鎖のみ抗体」、「抗ＰＳＭＡ重鎖抗体」及び「ＰＳＭＡ重鎖抗体」は、本明細書中では、上記で定義されたようにヒトＰＳＭＡを含むＰＳＭＡに免疫特異的に結合する重鎖のみ抗体を指すために同じ意味で用いられる。この定義には、限定されないが、上記で定義されたようにヒト抗ＰＳＭＡ ＵｎｉＡｂ（商標）抗体を産生するＵｎｉＲａｔｓ（商標）を含む、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックラットまたはトランスジェニックマウスなどのトランスジェニック動物によって産生されるヒト重鎖抗体が含まれる。
本明細書中で使用する用語「ＣＤ１９」及び「分化クラスター１９」とは、形質細胞への最終分化までのＢ細胞発生のすべての段階で発現する分子を指す。用語「ＣＤ１９」には、任意のヒト及び非ヒト動物種のＣＤ１９タンパク質が含まれ、具体的には、ヒトＣＤ１９及び非ヒト哺乳動物のＣＤ１９が含まれる。
本明細書中で使用する用語「ヒトＣＤ１９」には、その供給源または調製様式に関係なく、ヒトＣＤ１９（ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ１５３９１）の任意のバリアント、アイソフォーム及び種ホモログが含まれる。したがって、「ヒトＣＤ１９」には、細胞が天然に発現するヒトＣＤ１９、及びヒトＣＤ１９遺伝子でトランスフェクトされた細胞上で発現するＣＤ１９が含まれる。
用語「抗ＣＤ１９重鎖のみ抗体」、「ＣＤ１９重鎖のみ抗体」、「抗ＣＤ１９重鎖抗体」及び「ＣＤ１９重鎖抗体」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、上記で定義されたヒトＣＤ１９を含むＣＤ１９に免疫特異的に結合する、上記で定義された重鎖のみ抗体を指す。この定義には、限定されないが、上記で定義されたようにヒト抗ＣＤ１９ ＵｎｉＡｂ（商標）抗体を産生するＵｎｉＲａｔｓ（商標）を含む、ヒト免疫グロブリンを発現するトランスジェニックラットまたはトランスジェニックマウスなどのトランスジェニック動物によって産生されるヒト重鎖抗体が含まれる。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント」とは、配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入して、最大の配列同一性パーセントを達成した後の、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される（いずれの保存的置換も配列同一性の一部としてみなさない）。アミノ酸配列同一性パーセントを決定することを目的としたアラインメントは、当技術分野における技術の範囲内である様々な方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者であれば、比較している配列の全長にわたる最大のアラインメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書における目的のために、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用してアミノ酸配列同一性の値（％）を生成する。
「単離された」抗体とは、その天然の環境の成分から同定され、分離され、及び／または回収された抗体である。その天然の環境の混入成分は、抗体の診断上または治療上の使用を妨げる物質であり、これらには、酵素、ホルモン、及び他のタンパク質性または非タンパク質性溶質が含まれ得る。好ましい実施形態では、抗体を、（１）ローリー法により判定した場合に抗体の９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超になるまで、（２）スピニングカップシーケネータ（ｓｐｉｎｎｉｎｇ ｃｕｐ ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用して少なくとも１５残基のＮ末端配列もしくは内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで、または（３）クーマシーブルー、もしくは好ましくは銀染色を用いて還元条件もしくは非還元条件下でのＳＤＳ－ＰＡＧＥによって、均質になるまで精製する。単離された抗体には、抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないため、組換え細胞内でのｉｎ ｓｉｔｕ抗体が含まれる。しかしながら、通常、単離された抗体は、少なくとも１つの精製ステップにより調製されるであろう。
本発明の抗体には、多重特異性抗体が含まれる。多重特異性抗体は、複数の結合特異性を有する。用語「多重特異性」には、具体的には、「二重特異性」及び「三重特異性」、ならびに高次のポリエピトープ特異性などの高次の独立した特異的結合親和性、ならびに四価抗体及び抗体断片が含まれる。用語「多重特異性抗体」、「多重特異性重鎖のみ抗体」、「多重特異性重鎖抗体」、及び「多重特異性ＵｎｉＡｂ（商標）」は、本明細書中では最も広い意味で用いられ、複数の結合特異性を有するすべての抗体を包含する。
本発明の多重特異性抗体には、具体的には、ヒトＢＣＭＡタンパク質、ヒトＰＳＭＡタンパク質、またはヒトＣＤ１９タンパク質などのＢＣＭＡタンパク質、ＰＳＭＡタンパク質、またはＣＤ１９タンパク質上の２つ以上の重複しないエピトープに免疫特異的に結合する抗体が含まれる（すなわち、二価及びバイパラトピック）。本発明の多重特異性重鎖抗体にはまた、具体的には、ヒトＢＣＭＡタンパク質、ヒトＰＳＭＡタンパク質、またはヒトＣＤ１９タンパク質などのＢＣＭＡタンパク質、ＰＳＭＡタンパク質、またはＣＤ１９タンパク質上のエピトープ、及び例えば、ＣＤ３タンパク質、例えば、ヒトＣＤ３などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する抗体が含まれる（すなわち、二価及びバイパラトピック）。本発明の多重特異性重鎖抗体にはまた、具体的には、ヒトＢＣＭＡタンパク質、ヒトＰＳＭＡタンパク質、またはヒトＣＤ１９タンパク質などのＢＣＭＡタンパク質、ＰＳＭＡタンパク質、またはＣＤ１９タンパク質上の２つ以上の重複しないまたは部分的に重複するエピトープ、及び例えば、ＣＤ３タンパク質、例えば、ヒトＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに免疫特異的に結合する抗体が含まれる（すなわち、二価及びバイパラトピック）。
「エピトープ」とは、単一の抗体分子が結合する抗原分子の表面上の部位である。一般的に、抗原はいくつかまたは多くの異なるエピトープを有し、多くの異なる抗体と反応する。この用語には、具体的には、直鎖状エピトープ及び立体構造エピトープが含まれる。
「エピトープマッピング」とは、標的抗原上の抗体の結合部位またはエピトープを同定するプロセスである。抗体エピトープは、直鎖状エピトープまたは立体構造エピトープであり得る。直鎖状エピトープは、タンパク質中のアミノ酸の連続配列によって形成される。立体構造エピトープは、タンパク質配列が不連続であるが、タンパク質がその三次元構造に折りたたまれると一緒になるアミノ酸により形成される。
「ポリエピトープ特異性」とは、同じまたは異なる標的（複数可）上の２つ以上の異なるエピトープに特異的に結合する能力を指す。上記のように、本発明には、具体的には、ポリエピトープ特異性を有する重鎖抗体、すなわち、ヒトＢＣＭＡタンパク質、ヒトＰＳＭＡタンパク質、またはヒトＣＤ１９タンパク質などのＢＣＭＡタンパク質、ＰＳＭＡタンパク質、またはＣＤ１９タンパク質上の１つ以上の重複しないエピトープに結合する重鎖抗体、ならびにＢＣＭＡタンパク質、ＰＳＭＡタンパク質、またはＣＤ１９タンパク質上の１つ以上のエピトープ、及び例えば、ＣＤ３タンパク質などの異なるタンパク質上のエピトープに結合する重鎖抗体が含まれる。抗原の「重複しないエピトープ（複数可）」または「非競合的エピトープ（複数可）」という用語は、本明細書中では、抗原特異的抗体のペアの一方のメンバーによって認識されるが、他方のメンバーには認識されないエピトープ（複数可）を意味するものとして定義される。重複しないエピトープを認識する抗体のペア、または多重特異性抗体上の同じ抗原を標的とする抗原結合領域は、その抗原への結合をめぐって競合せず、同時にその抗原に結合することができる。
２つの抗体が同一または立体的に重複するエピトープを認識する場合、抗体は参照抗体と「本質的に同じエピトープ」に結合する。２つのエピトープが同一または立体的に重複するエピトープに結合するかどうかを決定するために最も広く使用されている迅速な方法は競合アッセイであり、標識抗原または標識抗体のいずれかを使用して、様々な形式で構成することができる。通常、抗原を９６ウェルプレートに固定化し、非標識抗体が標識抗体の結合を遮断する能力を、放射性標識または酵素標識を使用して測定する。
本明細書中で使用する用語「価」とは、抗体分子内の特定の数の結合部位を指す。
「一価」抗体は、１つの結合部位を有する。したがって、一価抗体は、単一特異性でもある。
「多価」抗体は、２つ以上の結合部位を有する。したがって、用語「二価」、「三価」、及び「四価」とは、それぞれ、２つの結合部位、３つの結合部位、及び４つの結合部位が存在することを指す。したがって、本発明による二重特異性抗体は、少なくとも二価であり、三価、四価、または多価であり得る。本発明の実施形態による二価抗体は、同じエピトープ（すなわち、二価、モノパラトピック）、または２つの異なるエピトープ（すなわち、二価、バイパラトピック）に対する２つの結合部位を有し得る。
二重特異性モノクローナル抗体（ＢｓＭＡＢ）、三重特異性抗体などを調製するための多種多様な方法及びタンパク質構成が知られており、使用されている。
用語「三本鎖抗体様分子」または「ＴＣＡ」は、本明細書中では、３つのポリペプチドサブユニットを含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる抗体様分子を指すために用いられ、そのうちの２つは、抗原結合領域及び少なくとも１つのＣＨドメインを含む、モノクローナル抗体の１つの重鎖及び１つの軽鎖、またはそのような抗体鎖の機能的抗原結合断片を含むか、それらから本質的になるか、またはそれらからなる。この重鎖／軽鎖ペアは、第１の抗原に対して結合特異性を有する。第３のポリペプチドサブユニットは、ＣＨ１ドメインを含まず、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分、及び第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体を含むか、本質的にそれからなるか、またはそれからなり、そのような結合ドメインは、抗体の重鎖または軽鎖の可変領域に由来するか、またはそれに対して配列同一性を有する。そのような可変領域の部分は、ＶＨ及び／またはＶＬ遺伝子セグメント、Ｄ及びＪＨ遺伝子セグメント、またはＪＬ遺伝子セグメントによってコードされ得る。可変領域は、再配置されたＶＨＤＪＨ、ＶＬＤＪＨ、ＶＨＪＬ、またはＶＬＪＬ遺伝子セグメントによってコードされ得る。ＴＣＡタンパク質は、上記で定義されたような重鎖のみ抗体を利用する。
用語「キメラ抗原受容体」または「ＣＡＲ」は、本明細書中では最も広い意味で用いられ、膜貫通ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインに所望の結合特異性（例えば、モノクローナル抗体または他のリガンドの抗原結合領域）を移植する改変型受容体を指す。通常、受容体は、モノクローナル抗体の特異性をＴ細胞に移植して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を作成するために用いられる。（Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ，２０１５；１０８（７）：ｄｖｊ４３９、及びＪａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２０１６；１３：３７０－３８３）。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、免疫療法で使用するための人工Ｔ細胞受容体を産生するように遺伝子改変されたＴ細胞である。一実施形態では、「ＣＡＲ－Ｔ細胞」とは、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、及び少なくとも１つの細胞質ゾルドメインから最小限に構成される１つ以上のキメラ抗原受容体をコードする導入遺伝子を発現する治療用Ｔ細胞を意味する。
用語「ヒト抗体」は、本明細書中では、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域及び定常領域を有する抗体を含むように使用される。本明細書のヒト抗体には、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部位特異的変異誘発によって、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異によって導入される変異が含まれ得る。用語「ヒト抗体」には、具体的には、上記で定義されたように、トランスジェニックラットまたはマウスなどのトランスジェニック動物によって産生されるヒト重鎖可変領域配列を有する重鎖のみ抗体、特にＵｎｉＲａｔｓ（商標）によって生成されるＵｎｉＡｂｓ（商標）が含まれる。
「キメラ抗体」または「キメラ免疫グロブリン」とは、少なくとも２つの異なるＩｇ遺伝子座由来のアミノ酸配列を含む免疫グロブリン分子、例えば、ヒトＩｇ遺伝子座によってコードされる部分とラットＩｇ遺伝子座によってコードされる部分を含むトランスジェニック抗体を意味する。キメラ抗体には、非ヒトＦｃ領域または人工Ｆｃ領域を有するトランスジェニック抗体、及びヒトイディオタイプが含まれる。そのような免疫グロブリンは、そのようなキメラ抗体を産生するように改変された本発明の動物から単離することができる。
本明細書中で使用する場合、用語「エフェクター細胞」とは、免疫応答の認知及び活性化段階とは対照的に、免疫応答のエフェクター段階に関与する免疫細胞を指す。いくつかのエフェクター細胞は、特定のＦｃ受容体を発現し、特定の免疫機能を果たす。いくつかの実施形態では、ナチュラルキラー細胞などのエフェクター細胞は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を誘導することができる。例えば、ＦｃＲを発現する単球とマクロファージは、標的細胞の特異的な死滅と免疫系の他の成分への抗原の提示、または抗原を提示する細胞への結合に関与する。いくつかの実施形態では、エフェクター細胞は、標的抗原または標的細胞を貪食し得る。
「ヒトエフェクター細胞」とは、Ｔ細胞受容体やＦｃＲなどの受容体を発現し、エフェクター機能を果たす白血球のことである。好ましくは、これらの細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、ＡＤＣＣエフェクター機能を果たす。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例として、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、細胞傷害性Ｔ細胞及び好中球が挙げられ、ＮＫ細胞が好ましい。エフェクター細胞は、本明細書に記載するように、その天然の供給源から、例えば、血液またはＰＢＭＣから単離され得る。
用語「免疫細胞」は、本明細書では最も広い意味で用いられ、限定されないが、骨髄またはリンパ球起源の細胞、例えばリンパ球（例えば、Ｂ細胞及び細胞溶解性Ｔ細胞（ＣＴＬ）を含むＴ細胞）、キラー細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、単球、好酸球、多形核細胞、例えば、好中球、顆粒球、マスト細胞、及び好塩基球が挙げられる。
抗体の「エフェクター機能」は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列バリアントＦｃ領域）に帰属する生物学的活性を指す。抗体エフェクター機能の例として、Ｃ１ｑ結合、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体、ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。
「抗体依存性細胞傷害」及び「ＡＤＣＣ」とは、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７－９２（１９９１）の４６４ページの表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されているようなｉｎ ｖｉｔｒｏ ＡＤＣＣアッセイを行ってもよい。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー細胞が挙げられる。あるいは、またはさらに、目的とする分子のＡＤＣＣ活性を、動物モデル、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されているモデルにおいてｉｎ ｖｉｖｏで評価してもよい。
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」とは、補体の存在下で標的を溶解させる分子の能力を指す。補体活性化経路は、補体系の第１の成分（Ｃ１ｑ）が、同種抗原と複合体化した分子（例えば、抗体）に結合することにより開始される。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されているようなＣＤＣアッセイを行ってもよい。
「結合親和性」とは、分子の単一の結合部位（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有相互作用の合計の強度を指す。特に明記しない限り、本明細書中で使用する場合、「結合親和性」とは、結合ペアのメンバー（例えば、抗体と抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般的に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、当技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。低親和性抗体は、通常、抗原にゆっくり結合し、容易に解離する傾向があり、一方、高親和性抗体は、通常、抗原により早く結合し、結合したままである傾向がある。
本明細書中で使用する場合、「Ｋｄ」または「Ｋｄ値」とは、Ｏｃｔｅｔ ＱＫ３８４機器（Ｆｏｒｔｅｂｉｏ Ｉｎｃ．，Ｍｅｎｌｏ Ｐａｒｋ，ＣＡ）を反応速度モードで使用して、バイオレイヤー干渉法によって測定される解離定数を指す。例えば、抗マウスＦｃセンサーに、マウスＦｃ融合抗原をロードし、抗体を含有するウェルに浸して、濃度依存性の会合速度（ｋｏｎ）を測定する。緩衝液のみを含有するウェルにセンサーを浸す最終ステップにおいて、抗体の解離速度（ｋｏｆｆ）を測定する。Ｋｄは、ｋｏｆｆ／ｋｏｎの比率である。（詳細については、Ｃｏｎｃｅｐｃｉｏｎ，Ｊ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｍｂ Ｃｈｅｍ Ｈｉｇｈ Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｓｃｒｅｅｎ，１２（８），７９１－８００，２００９を参照のこと）。
用語「治療」、「治療する」などは、一般的に、所望の薬理学的及び／または生理学的効果を得ることを意味するものとして本明細書中で使用される。その効果は、その疾患または症状を完全にまたは部分的に予防するという観点において予防的であり得、及び／または疾患及び／またはその疾患に起因する副作用の部分的または完全な治癒という観点において治療的であり得る。本明細書中で使用する「治療」は、哺乳類における疾患の任意の治療を包含し、（ａ）その疾患にかかりやすい可能性があるが、まだそれを有すると診断されていない対象における発症を予防するか、（ｂ）その疾患を阻害する、すなわち、その発現を阻止するか、または（ｃ）その疾患を軽減する、すなわち、その疾患の退行を引き起こすことを含む。治療薬は、疾患または傷害の発症前、発症中、または発症後に投与してもよい。進行中の疾患の治療で、その治療が患者の望ましくない臨床症状を安定化するか、または軽減するものは、特に興味深い。そのような治療は、影響を受けた組織の機能が完全に失われる前に実施することが望ましい。対象の治療薬は、疾患の症候期の間、及びいくつかの場合では疾患の症候期の後に投与してもよい。
「治療有効量」は、対象に治療効果を与えるために必要な活性薬剤の量を意図している。例えば、「治療有効量」とは、疾患に関連する病理学的症状、疾患の進行または生理学的状態の改善を誘発、寛解、または引き起こすか、または障害に対する耐性を改善する量である。
本明細書中で使用する用語「前立腺癌」とは、前立腺にある腺起源の悪性腫瘍を指す。
用語「ＰＳＭＡの発現を特徴とする」とは、ＰＳＭＡ発現が、疾患または障害に特徴的な１つ以上の病理学的プロセスに関連するか、または関与する任意の疾患または障害を広く指す。そのような障害として、前立腺癌が挙げられるが、これに限定されない。
本発明に関して、用語「Ｂ細胞新生物」または「成熟Ｂ細胞新生物」には、すべてのリンパ性白血病及びリンパ腫、慢性リンパ球性白血病、急性リンパ芽球性白血病、前リンパ球性白血病、前駆Ｂ細胞リンパ芽球性白血病、有毛細胞白血病、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞性前リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、マントル細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、多発性骨髄腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、脾辺縁帯リンパ腫、形質細胞性骨髄腫などの形質細胞腫瘍、形質細胞腫、モノクローナル免疫グロブリン沈着症、重鎖疾患、ＭＡＬＴリンパ腫、リンパ節辺縁Ｂ細胞リンパ腫、血管内大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性浸出性リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、非ホジキンリンパ腫、ホジキンリンパ腫、有毛細胞白血病、原発性胸水リンパ腫及びエイズ関連非ホジキンリンパ腫が含まれるが、これらに限定されない。
用語「ＣＤ１９の発現によって特徴付けられる」とは、疾患または障害の特徴である１つ以上の病理学的プロセスにＣＤ１９発現が関連または関与する任意の疾患または障害を広く指す。そのような障害には、Ｂ細胞新生物が含まれるが、これに限定されない。
用語「ＢＣＭＡの発現によって特徴付けられる」とは、疾患または障害の特徴である１つ以上の病理学的プロセスにＢＣＭＡ発現が関連または関与する任意の疾患または障害を広く指す。そのような障害には、Ｂ細胞新生物が含まれるが、これに限定されない。
用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、本明細書中では同じ意味で用いられ、治療について評価されている、及び／または治療されている哺乳類を指す。一実施形態では、哺乳類は、ヒトである。用語「対象」、「個体」、及び「患者」は、限定されないが、がんを有する個体、自己免疫疾患を有する個体、病原体感染症を有する個体などを包含する。対象はヒトであり得るが、他の哺乳類、特にヒトの疾患の実験室モデルとして有用な哺乳類、例えば、マウス、ラットなども含まれる。
用語「医薬製剤」とは、活性成分の生物学的活性が有効になるような形態であり、及び製剤を投与する対象にとって許容できない程度に毒性である追加の成分を含有しない製剤を指す。そのような製剤は、無菌である。「薬学的に許容される」賦形剤（ビヒクル、添加剤）とは、対象哺乳類に適度に投与して、用いる有効用量の活性成分を提供することができる賦形剤である。
「無菌」製剤は、無菌であるか、またはすべての生存微生物及びそれらの胞子を含まないか、もしくはそれらを本質的に含まない。「凍結」製剤は、温度が０℃未満の製剤である。
「安定」製剤とは、内部のタンパク質が保管時にその物理的安定性及び／または化学的安定性及び／または生物学的活性を本質的に保持する製剤である。好ましくは、製剤は、保管時に、その物理的及び化学的安定性、ならびにその生物学的活性を本質的に保持する。保管期間は、一般的に、製剤の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。タンパク質安定性を測定するための様々な分析技術が当技術分野で利用可能であり、例えば、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，２４７－３０１． Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｌｅｅ Ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｐｕｂｓ．（１９９１）及びＪｏｎｅｓ．Ａ．Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖ．１０：２９－９０）（１９９３）に概説されている。安定性は、選択された温度で選択された期間にわたって測定され得る。安定性は、凝集体形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーを使用して、濁度を測定することによって、及び／または目視検査によって）、カチオン交換クロマトグラフィー、イメージキャピラリー等電点電気泳動（ｉｃＩＥＦ）またはキャピラリーゾーン電気泳動を使用して電荷不均一性を評定することによって、アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析、質量分光分析、還元されたインタクトな抗体を比較するＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析、ペプチドマッピング（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ－Ｃ）分析、抗体の生物学的活性または抗原結合機能の評価などを含む様々な異なる方法で、質的及び／または量的に評価され得る。不安定性には、凝集、脱アミド化（例えば、Ａｓｎ脱アミド化）、酸化（例えば、Ｍｅｔ酸化）、異性化（例えば、Ａｓｐ異性化）、クリッピング／加水分解／断片化（例えば、ヒンジ領域の断片化）、スクシンイミド形成、対形成していないシステイン（複数可）、Ｎ末端伸長、Ｃ末端プロセシング、グリコシル化の差異などのうちのいずれか１つ以上が含まれ得る。
ＩＩ．詳細な説明
抗ＢＣＭＡ抗体
本発明は、ヒトＢＣＭＡに結合する、近縁の抗体のいくつかのファミリーに関する。これらのファミリーの抗体の可変領域は、米国特許公開第ＵＳ２０１９０３５２４１２号、第ＵＳ２０２００１５７２３２号及び第ＵＳ２０２０００４８３４８号、ならびにＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８２３７０３７号及び第ＷＯ２０１９００６０７２号に記載されており、その出願の開示は参照によりその全体が本明細書に援用される。代表的な抗ＢＣＭＡ重鎖抗体可変ドメイン配列の非限定的な選択を以下の表１に示す。
Figure 2023081303000002
抗ＢＣＭＡ抗体配列は、開発及び治療法または、多重特異性、例えば二重特異性抗体としての使用を含むがこれに限定されない、他の使用のために本明細書に提供される抗体から選択され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性または多重特異性抗体を提供し、これは、ＴＣＡを含むがこれに限定されない、本明細書で述べる構成のいずれかを有し得る。二重特異性抗体は、ＢＣＭＡ以外のタンパク質に特異的な抗体の重鎖可変領域を少なくとも含む。
本発明のタンパク質が二重特異性抗体である場合、一方の結合部分はヒトＢＣＭＡに特異的であり、他方のアームは、標的細胞、腫瘍関連抗原、標的抗原、例えばインテグリンなど、病原体抗原、チェックポイントタンパク質などに特異的であり得る。標的細胞には、以下で述べるように、血液腫瘍、例えばＢ細胞腫瘍などのがん細胞が具体的に含まれる。
単一鎖ポリペプチド、二本鎖ポリペプチド、三本鎖ポリペプチド、四本鎖ポリペプチド、及びそれらの倍数を含むがこれらに限定されない、二重特異性抗体の様々な形式が本発明の範囲内にある。本明細書における二重特異性抗体は、具体的には、形質細胞（ＰＣ）及び多発性骨髄腫（ＭＭ）上で選択的に発現するＢＣＭＡ、及びＣＤ３に結合するＴ細胞二重特異性抗体（抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体）を含む。そのような抗体は、ＢＣＭＡを保有する細胞の強力なＴ細胞媒介性細胞死を誘導し、本明細書でさらに述べるように、腫瘍、特にＢ細胞腫瘍などの血液腫瘍を治療するために使用することができる。
好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と対になった抗ＣＤ３ ＶＨドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合わせてＣＤ３に対する結合親和性を有する）；一価または二価の構成で、ＢＣＭＡに対する結合親和性を有する重鎖のみ抗体の重鎖可変ドメイン；ならびにＳ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含む第１の重鎖定常領域配列と、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む第２の重鎖定常領域配列とを含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含むＴＣＡである。このバリアント、すなわち修飾ＩｇＧ４ Ｆｃ ドメインは、不要なＦａｂ交換を防ぎ、抗体のエフェクター機能を低下させ、さらにはまた、重鎖ポリペプチドサブユニットのヘテロ二量体化を促進して二重特異性抗体を形成させる。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第二の重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第二の重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号５８を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号５６を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号５９を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該２価の第２の重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含む、ヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性抗体を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含む二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及び配列番号７６を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、ｉ）配列番号７５を含む抗ＣＤ３重鎖、ｉｉ）配列番号４９を含む抗ＣＤ３軽鎖、及びｉｉｉ）配列番号７７を含む抗ＢＣＭＡ重鎖を含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、二重特異性抗体は、抗ＢＣＭＡ軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７６のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
いくつかの実施形態では、本発明は、（ｉ）ヒトＣＤ３に結合する第１の結合アーム及び（ｉｉ）ヒトＢＣＭＡに結合する第２の結合アームを含むヒトモノクローナルＩｇＧ４二重特異性三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）を含み、当該第１の結合アームは、第１の重鎖及び軽鎖を含み、当該第２の結合アームは、二価の第２の重鎖を含み、当該第１の重鎖は、配列番号７５のアミノ酸配列を含み、当該軽鎖は、配列番号４９のアミノ酸配列を含み、当該二価の第２の重鎖は、配列番号７７のアミノ酸配列を含み、当該第２の結合アームは、軽鎖を含まない。
抗ＣＤ１９抗体
本発明は、ヒトＣＤ１９に結合する近縁の抗体のファミリーを提供する。このファミリーの抗体の可変領域は、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０２００１８９２２号に記載されており、その開示はその全体が参照により本明細書に援用される。抗ＣＤ１９抗体配列は、多重特異性、例えば二重特異性抗体としての使用を含むがこれに限定されない、開発及び治療法または他の使用のために本明細書中で提供される配列から選択され得る。いくつかの実施形態では、二重特異性または多重特異性抗体を提供し、これは、ＴＣＡを含むがこれに限定されない、本明細書中で述べる構成のいずれかを有し得る。二重特異性抗体は、ＣＤ１９以外のタンパク質に特異的な抗体の少なくとも重鎖可変領域を含む。
本発明のタンパク質が二重特異性抗体である場合、一方の結合部分は、ヒトＣＤ１９に特異的であるが、他方のアームは、標的細胞、腫瘍関連抗原、標的抗原、例えばインテグリンなど、病原体抗原、チェックポイントタンパク質などに特異的であり得る。標的細胞には、具体的には、以下で述べるように、がん細胞、例えば、血液腫瘍、例えばＢ細胞腫瘍が含まれる。
単一鎖ポリペプチド、二本鎖ポリペプチド、三本鎖ポリペプチド、四本鎖ポリペプチド、及びそれらの倍数を含むがこれらに限定されない、二重特異性抗体の様々な形式が本発明の範囲内にある。本明細書における二重特異性抗体には、具体的には、成熟Ｂ細胞上で選択的に発現するＣＤ１９、及びＣＤ３に結合するＴ細胞二重特異性抗体（抗ＣＤ１９×抗ＣＤ３抗体）が含まれる。そのような抗体は、本明細書でさらに述べるように、ＣＤ１９を発現する細胞の強力なＴ細胞媒介性細胞死を誘導し、腫瘍、特にＢ細胞腫瘍などの血液腫瘍を治療するために使用することができる。
好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と対になった抗ＣＤ３ ＶＨドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合わせてＣＤ３に対する結合親和性を有する）；一価または二価の構成で、ＣＤ１９に対する結合親和性を有する重鎖のみ抗体の重鎖可変ドメイン；ならびにＳ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含む第１の重鎖定常領域配列と、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む第２の重鎖定常領域配列とを含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含むＴＣＡである。このバリアント、すなわち修飾ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、不要なＦａｂ交換を防ぎ、抗体のエフェクター機能を低下させ、さらにはまた、重鎖ポリペプチドサブユニットのヘテロ二量体化を促進して二重特異性抗体を形成させる。
抗ＰＳＭＡ抗体
本発明は、ヒトＰＳＭＡに結合する、近縁の抗体ファミリーを提供する。このファミリーの抗体は、表２に示す配列番号２４～５４の提供される重鎖可変領域（ＶＨ）配列によって例示される。この抗体のファミリーは、臨床治療薬（複数可）としての有用性に寄与する多くの利点を提供する。抗体には、様々な結合親和性を有するメンバーが含まれているため、所望の結合親和性を有する特定の配列が選択され得る。
Figure 2023081303000003
Figure 2023081303000004
Figure 2023081303000005
Figure 2023081303000006
好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と対になった抗ＣＤ３ ＶＨドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合わせてＣＤ３に対する結合親和性を有する）；一価または二価の構成で、ＰＳＭＡへの結合親和性を有する重鎖のみ抗体の重鎖可変ドメイン；ならびにＳ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含む第１の重鎖定常領域配列と、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む第２の重鎖定常領域配列とを含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含むＴＣＡである。このバリアント、すなわち修飾ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、不要なＦａｂ交換を防ぎ、抗体のエフェクター機能を低下させ、さらにはまた、重鎖ポリペプチドサブユニットのヘテロ二量体化を促進して二重特異性抗体を形成させる。
ＣＤ３×標的タンパク質三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）
いくつかの実施形態では、二重特異性または多重特異性抗体を提供し、これは、限定されないが、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む、本明細書中で述べる構成のいずれかを有し得る。いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、第１の抗原（例えば、ＣＤ３）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖ペア、及び重鎖のみ抗体由来の重鎖を含み得る。特定の実施形態では、重鎖のみ抗体由来の重鎖は、ＣＨ１ドメインを含まず、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む。特定の一実施形態では、二重特異性抗体は、エフェクター細胞上の抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖ペア、及びＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体由来の重鎖を含む。
好ましい実施形態では、二重特異性抗体は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）と対になった抗ＣＤ３ ＶＨドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインは、合わせてＣＤ３に対する結合親和性を有する）；ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９に対する結合親和性を有する重鎖のみ抗体の重鎖可変ドメイン；Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含む第１の重鎖定常領域配列と、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む第２の重鎖定常領域配列とを含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含むＴＣＡである。このバリアント、すなわち修飾ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、不要なＦａｂ交換を防ぎ、抗体のエフェクター機能を低下させ、さらにはまた、重鎖ポリペプチドサブユニットのヘテロ二量体化を促進して二重特異性抗体を形成させる。
いくつかの実施形態では、多重特異性抗体は、軽鎖可変ドメインと対になったＣＤ３結合ＶＨドメインを含む。特定の実施形態では、軽鎖は、固定軽鎖である。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、ヒトＶＨフレームワークにおいて、配列番号３６のＣＤＲ１配列、配列番号３７のＣＤＲ２配列、及び配列番号３８のＣＤＲ３配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、ヒトＶＬフレームワークにおいて、配列番号３９のＣＤＲ１配列、配列番号４０のＣＤＲ２配列、及び配列番号４１のＣＤＲ３配列を含む。合わせて、ＣＤ３結合ＶＨドメインと軽鎖可変ドメインはＣＤ３に対して結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、配列番号４２の重鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、ＣＤ３結合ＶＨドメインは、配列番号４２の重鎖可変領域配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、配列番号４３の軽鎖可変領域配列を含む。いくつかの実施形態では、固定軽鎖は、配列番号４３の重鎖可変領域配列に対して、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、または少なくとも約９９％の同一性を有する配列を含む。
上記のＣＤ３結合ＶＨドメイン及び軽鎖可変ドメインを含む多重特異性抗体は、例えば、ＰＣＴ公開第ＷＯ２０１８／０５２５０３号（その開示は、その全体が参照により本明細書に援用される）に記載されているように、有利な特性を有する。ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９への結合親和性を有する、本明細書に記載の多重特異性抗体及び抗原結合ドメインのいずれも、本明細書に記載のＣＤ３結合ドメイン及び固定軽鎖ドメインと組み合わせて、１つ以上のＢＣＭＡエピトープ、ＰＳＭＡエピトープ、またはＣＤ１９エピトープ及びＣＤ３に結合親和性を有する多重特異性抗体を生成することができる。
Figure 2023081303000007
Figure 2023081303000008
Figure 2023081303000009
Figure 2023081303000010
Figure 2023081303000011
Figure 2023081303000012
Figure 2023081303000013
Figure 2023081303000014
Figure 2023081303000015
Figure 2023081303000016
Figure 2023081303000017
Figure 2023081303000018
Figure 2023081303000019
Figure 2023081303000020
Figure 2023081303000021
いくつかの実施形態では、二重特異性または多重特異性抗体を提供し、これは、限定されないが、二重特異性三本鎖抗体様分子を含む、本明細書中で述べる構成のいずれかを有し得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域、及び異なるタンパク質、例えば、ＣＤ３に対する結合特異性を有する少なくとも１つの重鎖可変領域を含み得る。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、一価または二価の構成で、第１の抗原に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖ペア、及びＣＨ１ドメインを含まず、ＣＨ２及び／またはＣＨ３及び／またはＣＨ４ドメインを含むＦｃ部分を含む重鎖のみ抗体由来の重鎖、ならびに第２の抗原のエピトープまたは第１の抗原の異なるエピトープに結合する抗原結合ドメインを含み得る。特定の一実施形態では、二重特異性抗体は、一価または二価の構成で、エフェクター細胞上の抗原（例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）に対する結合特異性を有する重鎖／軽鎖ペア、及びＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９に対する結合特異性を有する抗原結合ドメインを含む重鎖のみ抗体由来の重鎖を含む。
本発明の抗体が二重特異性抗体であるいくつかの実施形態では、抗体の一方のアーム（１つの結合部分または１つの結合ユニット）は、ヒトＢＣＭＡ、ヒトＰＳＭＡ、またはヒトＣＤ１９に特異的であり、他方のアームは、標的細胞、腫瘍関連抗原、標的化抗原、例えば、インテグリンなど、病原体抗原、チェックポイントタンパク質などに特異的であり得る。標的細胞には、具体的には、以下に述べるように、限定されないが、固形腫瘍、例えば、前立腺腫瘍由来の細胞を含むがん細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、抗体の一方のアーム（１つの結合部分、または１つの結合ユニット）は、ヒトＢＣＭＡ、ヒトＰＳＭＡ、またはヒトＣＤ１９に特異的であり、他方のアームは、ＣＤ３に特異的である。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４８の配列に連結された配列番号４３の配列を含む抗ＣＤ３軽鎖ポリペプチド、配列番号４４、４５、４６、４７、５０、５１、５２、５３、５６または５７のいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ３重鎖ポリペプチド、及び配列番号７５、７６、７７、７８、８４または８５のいずれか１つの配列に連結された一価または二価の構成の配列番号５８、５９または６０のいずれか１つの配列を含む抗ＢＣＭＡ重鎖ポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号５８、５９または６０を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号５８を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号５８からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号５９を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号５９からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６０を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６０からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４８の配列に連結された配列番号４３の配列を含む抗ＣＤ３軽鎖ポリペプチド、配列番号４４、４５、４６、４７、５０、５１、５２、５３、５６または５７のいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ３重鎖ポリペプチド、及び配列番号６１、６２、６３、６４、６５または６６のいずれか１つの配列を含む抗ＰＳＭＡ重鎖ポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６１を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６１からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６２を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６２からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６３を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６３からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６４を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６４からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６５を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６５からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６６を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６６からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号４８の配列に連結された配列番号４３の配列を含む抗ＣＤ３軽鎖ポリペプチド、配列番号４４、４５、４６、４７、５０、５１、５２、５３、５６または５７のいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ３重鎖ポリペプチド、及び配列番号６７、６８または６９のいずれか１つの配列を含む抗ＣＤ１９重鎖ポリペプチドを含む。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６７を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６７からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６８を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６８からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９を含む第１のポリペプチド、配列番号５６を含む第２のポリペプチド、及び配列番号６９を含む第３のポリペプチドを含むＴＣＡである。好ましい一実施形態では、抗体は、配列番号４９からなる第１のポリペプチド、配列番号５６からなる第２のポリペプチド、及び配列番号６９からなる第３のポリペプチドからなるＴＣＡである。
限定されないが、一本鎖ポリペプチド、二本鎖ポリペプチド、三本鎖ポリペプチド、四本鎖ポリペプチド、及びそれらの倍数を含む、様々な形態の多重特異性抗体が本発明の範囲内にある。本明細書の多重特異性抗体には、具体的には、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、または１９、及びＣＤ３に結合するＴ細胞多重特異性（例えば、二重特異性）抗体（抗ＢＣＭＡ×抗ＣＤ３抗体、抗ＰＳＭＡ×抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ１９×抗ＣＤ３抗体）が含まれ、Ｓ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、及びＴ３６６Ｗ変異（ノブ）を含む第１の重鎖定常領域配列、ならびにＳ２２８Ｐ変異、Ｆ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異、Ｔ３６６Ｓ変異、Ｌ３６８Ａ変異、及びＹ４０７Ｖ変異（ホール）を含む第２の重鎖定常領域配列を含むバリアントヒトＩｇＧ４ Ｆｃドメインを含む。このバリアント、すなわち修飾ＩｇＧ４ Ｆｃドメインは、不要なＦａｂ交換を防ぎ、抗体のエフェクター機能を低下させ、重鎖ポリペプチドサブユニットのヘテロ二量体化を促進して二重特異性抗体を形成させる。そのような抗体は、それぞれ、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９を発現する細胞の強力なＴ細胞媒介性細胞死を誘導する。
抗体の調製
本発明の多重特異性抗体は、当技術分野で公知の方法によって調製することができる。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、内在性免疫グロブリン遺伝子がノックアウトまたは無効化されているトランスジェニックマウス及びラットを含むトランスジェニック動物、好ましくはラットによって産生される。好ましい実施形態では、本明細書の重鎖抗体は、ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生される。ＵｎｉＲａｔ（商標）は、内在性免疫グロブリン遺伝子がサイレンシングされており、ヒト免疫グロブリン重鎖導入遺伝子座を使用して、完全ヒトＨＣＡｂの多様で天然に最適化されたレパートリーを発現する。ラットの内在性免疫グロブリン遺伝子座は、様々な技術を使用してノックアウトまたはサイレンシングすることができるが、ＵｎｉＲａｔ（商標）では、ジンクフィンガー（エンド）ヌクレアーゼ（ＺＮＦ）技術を使用して、内在性ラット重鎖Ｊ遺伝子座、軽鎖Ｃκ遺伝子座及び軽鎖Ｃλ遺伝子座を不活性化した。卵母細胞へのマイクロインジェクション用のＺＮＦ構築物は、ＩｇＨ及びＩｇＬノックアウト（ＫＯ）系統を生成することができる。詳細については、例えば、Ｇｅｕｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２５：４３３を参照のこと。Ｉｇ重鎖ノックアウトラットの特徴決定は、Ｍｅｎｏｒｅｔ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４０：２９３２－２９４１によって報告されている。ＺＮＦ技術の利点は、最大、数ｋｂの欠失を介して遺伝子または遺伝子座をサイレンシングするための非相同末端結合もまた、相同組込みの標的部位を提供することができる点である（Ｃｕｉ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２９：６４－６７）。ＵｎｉＲａｔ（商標）で産生されたヒト重鎖抗体は、ＵｎｉＡｂｓ（商標）と呼ばれ、従来の抗体で攻撃することができないエピトープに結合することができる。それらの高い特異性、親和性、及びサイズの小ささは、単一及び多特異的な応用に理想的である。
ＵｎｉＡｂｓ（商標）に加えて、具体的には、ラクダ類のＶＨＨフレームワーク及び変異、ならびにそれらの機能的なＶＨ領域を欠く重鎖のみ抗体が本明細書に含まれる。そのような重鎖のみ抗体は、例えば、ＷＯ２００６／００８５４８に記載されているように、完全にヒトの重鎖のみの遺伝子座を含むトランスジェニックラットまたはマウスで産生することができるが、ウサギ、モルモット、ラットなどの他のトランスジェニック哺乳類も使用することができ、ラット及びマウスが好ましい。ＶＨＨまたはＶＨ機能断片を含む重鎖のみ抗体はまた、組換えＤＮＡ技術によって、例えば哺乳類細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）、Ｅ．ｃｏｌｉまたは酵母を含む適切な真核生物または原核生物宿主内でコード化核酸を発現させることによって産生することができる。
重鎖のみ抗体のドメインは、抗体と小分子薬の利点を兼ね備えており、一価または多価で有り得、毒性が低く、製造に対して費用効果がある。サイズが小さいため、これらのドメインは経口投与または局所投与を含めて投与が容易であり、胃腸の安定性を含む高い安定性を特徴とし、そして、それらの半減期は、所望の用途または効能に合わせて調整することができる。さらに、ＨＣＡｂのＶＨ及びＶＨＨドメインは、費用効果の高い方法で製造することができる。
特定の実施形態では、ＵｎｉＡｂｓ（商標）を含む本発明の重鎖抗体は、ＦＲ４領域の第１の位置（Ｋａｂａｔナンバリング方式によるアミノ酸位置１０１）の天然アミノ酸残基が別のアミノ酸残基に置換されており、これにより、その位置の天然アミノ酸残基を含むか、またはそれに関連する表面に露出した疎水性パッチが破壊され得る。そのような疎水性パッチは、通常、抗体の軽鎖定常領域との界面に埋もれるが、ＨＣＡｂでは表面に露出し、少なくとも部分的に、ＨＣＡｂの望ましくない凝集と軽鎖の会合に用いられる。置換アミノ酸残基は、好ましくは荷電しており、より好ましくは、リジン（Ｌｙｓ、Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ、Ｒ）またはヒスチジン（Ｈｉｓ、Ｈ）、好ましくはアルギニン（Ｒ）など、正に荷電している。好ましい実施形態では、トランスジェニック動物に由来する重鎖のみ抗体は、位置１０１にＴｒｐからＡｒｇへの変異を含む。得られるＨＣＡｂは、好ましくは、凝集のない生理学的条件下で高い抗原結合親和性及び溶解性を有する。
本発明の一部として、ＥＬＩＳＡタンパク質及び細胞結合アッセイにおいてヒトＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９に結合する、ＵｎｉＲａｔ（商標）動物由来の固有の配列を有するヒト重鎖抗体（ＵｎｉＡｂ（商標））を同定した。同定した重鎖可変領域（ＶＨ）配列（例えば、表１及び表２を参照のこと）は、タンパク質結合及び／または標的タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９）を発現する細胞への結合について陽性であり、標的タンパク質を発現しない細胞への結合についてはすべて陰性である。
標的タンパク質上の重複しないエピトープに結合する重鎖抗体、例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標）は、酵素結合免疫測定法（ＥＬＩＳＡアッセイ）またはフローサイトメトリー競合結合アッセイなどの競合結合アッセイによって同定することができる。例えば、標的抗原に結合する既知の抗体と目的の抗体との間の競合を使用することができる。このアプローチを使用することにより、抗体のセットを、参照抗体と競合するものと競合しないものに分類することができる。非競合抗体は、参照抗体が結合するエピトープと重複しない別個のエピトープに結合するものとして同定される。多くの場合、１つの抗体を固定化し、抗原を結合させ、第２の標識された（例えば、ビオチン化された）抗体を、捕捉された抗原への結合能力についてＥＬＩＳＡアッセイで試験する。これは、ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（ＢｉｏＲａｄ，Ｉｎｃ）、Ｂｉａｃｏｒｅ ２０００及びＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、及びＭＸ９６ ＳＰＲイメージャー（Ｉｂｉｓ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｂ．Ｖ．）などの表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）プラットフォーム、ならびにＯｃｔｅｔ Ｒｅｄ３８４及びＯｃｔｅｔ ＨＴＸ（ＦｏｒｔｅＢｉｏ，Ｐａｌｌ Ｉｎｃ）などのバイオレイヤー干渉法プラットフォームを使用して実行することもできる。詳細については、本明細書の実施例を参照されたい。
一般的には、抗体が、上記の競合結合アッセイなどの標準的な技術によって測定される、標的抗原への参照抗体の結合において約１５～１００％の減少を引き起こす場合、その抗体は参照抗体と「競合」する。様々な実施形態において、相対的阻害は、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％またはそれ以上である。
医薬組成物、使用及び治療方法
適切な薬学的に許容される担体と混合させた本発明の１つ以上の多重特異性結合化合物を含む医薬組成物を提供することは、本発明の別の態様である。本明細書中で使用する薬学的に許容される担体は、アジュバント、固体担体、水、緩衝液、もしくは治療成分を保持するために当技術分野で使用される他の担体、またはそれらの組み合わせが例示されるが、これらに限定されない。
一実施形態では、医薬組成物は、標的タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９）に結合する重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。別の実施形態では、医薬組成物は、標的タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９）上の２つ以上の重複しないエピトープに対する結合特異性を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。好ましい実施形態では、医薬組成物は、標的タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９）への結合特異性及びエフェクター細胞上の結合標的（例えば、Ｔ細胞上の結合標的、例えば、Ｔ細胞上のＣＤ３タンパク質）への結合特異性を有する多重特異性（二重特異性を含む）重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂ（商標））を含む。
本発明に従って使用される抗体の医薬組成物は、所望の純度を有するタンパク質を任意選択の薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することによって、例えば、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、貯蔵用に調製される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）を参照のこと）。許容される担体、賦形剤、または安定剤は、使用する用量及び濃度においてレシピエントに対して非毒性であり、これには、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸などの緩衝剤、アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤、防腐剤（オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、またはベンジルアルコール、メチルまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、及びｍ－クレゾールなど）、低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質、ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、ショ糖、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖、ナトリウムなどの塩形成対イオン、金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤が含まれる。
経口投与用の医薬組成物は、好ましくは無菌であり、実質的に等張であり、優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）条件下で製造される。医薬組成物は、単位剤形（すなわち、単回投与の用量）で提供することができる。製剤化は、選択した投与経路に依存する。本明細書の抗体は、静脈内への注射もしくは注入によって投与するか、または皮下投与することができる。注射による投与の場合、本明細書の抗体を、水溶液中に、好ましくは生理学的に適合性のある緩衝液中に製剤化して、注射部位の不快感を軽減することができる。溶液は、上記のように、担体、賦形剤、または安定剤を含有し得る。あるいは、抗体を、使用前に、適切なビヒクル、例えば、無菌のパイロジェンフリー水を用いて構成するために、凍結乾燥形態とすることができる。
抗体製剤は、例えば、米国特許第９，０３４，３２４号に開示されている。同様の製剤を、本発明のＵｎｉＡｂｓ（商標）を含む重鎖抗体に使用することができる。皮下抗体製剤は、例えば、ＵＳ２０１６０３５５５９１及びＵＳ２０１６０１６６６８９に記載されている。
使用方法
本明細書に記載の重鎖のみ抗体、多重特異性抗体、及び医薬組成物は、限定されないが、本明細書にさらに記載する病態及び疾患を含む、標的タンパク質（例えば、ＣＤ３、ＢＣＭＡ、ＰＳＭＡ、またはＣＤ１９）の発現を特徴とする疾患及び病態の治療に使用することができる。
抗ＢＣＭＡ抗体を含む本明細書の医薬組成物は、Ｂ細胞及び形質細胞悪性腫瘍ならびにＢＣＭＡの発現または過剰発現を特徴とする自己免疫疾患を含むＢ細胞関連疾患の治療に使用することができる。
そのようなＢ細胞関連障害として、限定されないが、形質細胞腫、ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、小型非分割細胞リンパ腫、地域性バーキットリンパ腫、散発性バーキットリンパ腫、辺縁帯リンパ腫、結節外粘膜関連リンパ組織リンパ腫、結節性単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾臓リンパ腫、マントル細胞リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、肺Ｂ細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、悪性の可能性のあるＢ細胞増殖、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節障害、関節リウマチ、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、抗リン脂質症候群、シャーガス病、グレーブ病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、抗リン脂質症候群、ＡＮＣＡ関連血管炎、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、及び急速進行性糸球体腎炎、重鎖疾患、原発性もしくは免疫細胞関連アミロイドーシス、または単クローン性免疫グロブリン血症を含むＢ細胞及び形質細胞悪性腫瘍ならびに自己免疫疾患が挙げられる。
ＢＣＭＡの発現を特徴とする形質細胞障害として、多発性骨髄腫（ＭＭ）が挙げられる。ＭＭは、骨髄コンパートメントにおける異常な形質細胞の単クローン性の増殖及び蓄積を特徴とするＢ細胞性悪性腫瘍である。ＭＭの現在の治療法は、多くの場合、寛解を引き起こすが、ほぼすべての患者が最終的に再発して死亡する。同種造血幹細胞移植の設定では、骨髄腫細胞が免疫を介して除去されるという実質的なエビデンスが存在するが；ただし、このアプローチの毒性は高く、治癒する患者はほとんどいない。一部のモノクローナル抗体は、前臨床研究及び初期の臨床試験でＭＭの治療に有望であることが示されているが、ＭＭに対するモノクローナル抗体療法の一貫した臨床的有効性は最終的に証明されていない。したがって、ＭＭの免疫療法を含む新規療法が大いに必要とされている（例えば、Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１３，１９（８）：２０４８－２０６０を参照のこと）。
増殖誘導リガンドであるＡＰＲＩＬによるＢＣＭＡの過剰発現または活性化は、ｉｎ ｖｉｖｏでヒト多発性骨髄腫（ＭＭ）の進行を促進することが知られている。ＢＣＭＡはまた、マウスでｐ５３変異を有する異種移植ＭＭ細胞のｉｎ ｖｉｖｏ増殖を促進することも示されている。ＡＰＲＩＬ／ＢＣＭＡ経路の活性は、腫瘍細胞とそれらをサポートする骨髄微小環境との間の双方向の相互作用を介してＭＭの病因と薬剤耐性において中心的な役割を果たしているため、ＢＣＭＡは、ＭＭの治療標的として同定されている。さらなる詳細については、例えば、Ｙｕ－Ｔｓｕ Ｔａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ２０１６；１２７（２５）：３２２５－３２３６を参照のこと。
形質細胞、すなわちＢＣＭＡを発現していることが関与する別のＢ細胞障害は、狼瘡としても知られる全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である。ＳＬＥは、全身性の自己免疫疾患で、身体のあらゆる部分に影響を与える可能性があり、典型的には、免疫系が身体自身の細胞や組織を攻撃し、慢性的な炎症や組織損傷を引き起こす。これは、抗体－免疫複合体が沈殿し、さらなる免疫応答を引き起こすＩＩＩ型過敏反応である（Ｉｎａｋｉ ＆ Ｌｅｅ，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２０１０；６：３２６－３３７）。
本発明の抗ＢＣＭＡ重鎖のみ抗体（ＵｎｉＡｂ）は、上記で挙げたものなど、ＢＣＭＡの発現を特徴とするＭＭ、ＳＬＥ、及び他のＢ細胞障害または形質細胞障害の治療のための治療薬を開発するために使用することができる。特に、本発明の抗ＢＣＭＡ重鎖のみ抗体（ＵｎｉＡｂ）は、単独で、または他のＭＭ治療と併用してＭＭを治療するための候補である。
ＰＳＭＡは、前立腺上皮組織に発現し、前立腺癌及び固形腫瘍の新生血管系で上方制御されるＩＩ型膜貫通タンパク質である。また、脳、腎臓、唾液腺などの健康な組織でも低レベルで発現するが、悪性前立腺組織での過剰発現は、前立腺癌の治療的処置の魅力的な標的となる。また、悪性新生血管系での発現が高いことから、固形腫瘍の治療または画像診断にも適し得る。ＰＳＭＡを標的とするモノクローナル抗体、抗体薬物複合体、及びキメラ抗原受容体Ｔ細胞は、転移性前立腺癌の治療に関して記載されている（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ－Ｈｏｙｏｓ ｅｔ ａｌ ２０１６，ＰＭＩＤ：２７４０６９８５、ＤｉＰｉｐｐｏ ｅｔ ａｌ ２０１４，ＰＭＩＤ：２５３２７９８６、Ｓｅｒｇａｎｏｖａ ｅｔ ａｌ ２０１６，ＰＭＩＤ：２８３４５０２３）。さらに、ＰＳＭＡに特異的な放射性核種複合体が、前立腺癌の画像化及び治療のために調査されているところである（例えば、Ｈｏｆｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１８ ＰＭＩＤ：２９７５２１８０）。
一態様では、本明細書のＰＳＭＡ重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））及び医薬組成物を使用して、限定されないが、前立腺癌及び固形腫瘍を含む、ＰＳＭＡの発現を特徴とする障害を治療することができる。
ＣＤ１９は、すべてのヒトＢ細胞に発現する細胞表面受容体であるが、形質細胞には認められない。ＣＤ１９は、比較的大きな２４０アミノ酸の細胞質尾部を有する。細胞外Ｉｇ様ドメインは、潜在的なジスルフィド結合非Ｉｇ様ドメイン及びＮ結合炭水化物付加部位によって分けられる。細胞質尾部は、Ｃ末端付近に少なくとも９つのチロシン残基を含み、その一部はリン酸化されていることが示されている。ＣＤ２０及びＣＤ２２に加えて、ＣＤ１９の発現がＢ細胞系統に限定されていることから、ＣＤ１９は、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療処置に関して魅力的な標的となる。ＣＤ１９は、多くの血液悪性腫瘍で発現が観察されているため、抗体ベースの治療法の有望な標的である。
一態様では、本明細書のＣＤ１９重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））及び医薬組成物を使用して、限定されないが、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及びＢ細胞急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）を含む、ＣＤ１９の発現を特徴とする血液悪性腫瘍を治療することができる。
びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬまたはＤＬＢＬ）は、成人における非ホジキンリンパ腫の最も一般的な形態であり（Ｂｌｏｏｄ １９９７ ８９（１１）：３９０９－１８）、推定年間発症率は、米国と英国において年間１００，０００人あたり７～８例である。それは、実質的に体のあらゆる部分に発生する可能性がある進行性のがんとして特徴付けられる。ＤＬＢＣＬの原因は十分に解明されておらず、正常なＢ細胞だけでなく、他のタイプのリンパ腫または白血病細胞の悪性形質転換からも発生し得る。治療アプローチには、一般に化学療法と放射線療法が含まれ、成人の全体的な５年生存率の平均は約５８％である。一部のモノクローナル抗体は、ＤＬＢＣＬの治療に有望であることが示されているが、一貫した臨床的有効性はまだ最終的に証明されていない。したがって、免疫療法を含むＤＬＢＣＬの新規治療法が大いに必要とされている。
別の態様では、本明細書のＣＤ１９重鎖抗体（例えば、ＵｎｉＡｂｓ（商標））及び医薬組成物を使用して、限定されないが、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、及び多発性硬化症（ＭＳ）を含む、ＣＤ１９を発現する病原性Ｂ細胞によって特徴付けられる自己免疫障害を治療することができる。
疾患を治療するための本発明の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与する他の薬剤、及び処置が予防的なものであるか治療的なものであるかを含む多くの異なる要因によって様々に異なる。通常、患者は、ヒトであるが、非ヒト哺乳類、例えば、イヌ、ネコ、ウマなどの伴侶動物や、例えば、ウサギ、マウス、ラットなどの実験用哺乳類などもまた、処置され得る。処置用量を漸増させて、安全性及び有効性を最適化することができる。
用量レベルは、当業者によって容易に決定され得るが、必要に応じて、例えば、治療への対象の応答を変化させる必要に応じて、変化させることができる。単一剤形を製造するために担体物質と組み合わせることができる活性成分の量は、治療する宿主及び特定の投与様式に応じて異なる。一般的に、単位剤形は、約１ｍｇ～約５００ｍｇの活性成分を含む。
いくつかの実施形態では、薬剤の治療用量は、宿主の体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より一般的には、０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。例えば、用量は、１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内で有り得る。例示的な治療計画は、２週間に１回もしくは１か月に１回または３～６か月に１回の投与を伴う。本発明の治療物質は、通常、複数回投与される。単回投与の間隔は、毎週、毎月または毎年とすることができる。間隔はまた、患者における治療物質の血中レベルを測定することによって指定されるように、不定期とすることもできる。あるいは、本発明の治療物質を徐放性製剤として投与することができ、その場合、あまり頻繁な投与を必要としない。用量と頻度は、患者におけるポリペプチドの半減期に依存して様々に異なる。
一般的に、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかの注射剤として調製され、注射前に液体ビヒクル中に溶解または懸濁するのに適した固体形態もまた、調製することができる。本明細書の医薬組成物は、直接の、または固体（例えば、凍結乾燥）組成物の再構成後の静脈内または皮下投与に適している。製剤はまた、上記のように、アジュバント効果を増強するために、リポソーム、またはポリラクチド、ポリグリコリド、もしくはコポリマーなどの微粒子に乳化またはカプセル化することができる。Ｌａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９：１５２７，１９９０及びＨａｎｅｓ，Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ ２８：９７－１１９，１９９７。本発明の薬剤は、活性成分の徐放またはパルス放出を可能にするような方法で製剤化することが可能な、デポー注射またはインプラント製剤の形態で投与することができる。医薬組成物は、一般的に、無菌で、実質的に等張であり、米国食品医薬品局のすべての優良医薬品製造基準（ＧＭＰ）の規制に完全に準拠して製剤化される。
本明細書に記載の抗体及び抗体構造の毒性は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に対する致死用量）を測定することによって決定することができる。毒性と治療効果との間の用量比が、治療指数である。これらの細胞培養アッセイ及び動物実験から得られるデータは、ヒトでの使用に毒性のない用量範囲を策定する際に用いることができる。本明細書に記載の抗体の用量は、好ましくは、毒性がほとんどまたは全くない有効用量を含む循環濃度の範囲内にある。用量は、用いる剤形及び利用する投与経路に応じて、この範囲内で様々に異なり得る。正確な製剤化、投与経路、及び用量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選択することができる。
投与用の組成物は、一般的に、薬学的に許容される担体、好ましくは水性担体に溶解した抗体または他の薬剤（例えば、別の削磨剤）を含むであろう。様々な水性担体、例えば、緩衝生理食塩水などを使用することができる。これらの溶液は無菌であり、一般的に望ましくない物質を含まない。これらの組成物を、従来の周知の滅菌技法によって無菌化してもよい。組成物は、生理的条件に近づけるために必要とされるような薬学的に許容される補助物質（ｐＨ調整剤及び緩衝剤、毒性調整剤など、例えば、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、乳酸ナトリウムなど）を含有し得る。これらの製剤中の活性薬剤の濃度は大きく変動し得、選択された特定の投与様式及び患者のニーズに従って、主に液量、粘度、体重などに基づいて選択される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（１５ｔｈ ｅｄ．，１９８０）及びＧｏｏｄｍａｎ ＆ Ｇｉｌｌｍａｎ，Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｈａｒｄｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ．，１９９６））。
本発明の活性薬剤及びその製剤ならびに使用のための指示書を含むキットもまた、本発明の範囲内である。キットはさらに、少なくとも１つの追加の試薬、例えば化学療法薬などを含み得る。キットは通常、キットの内容物の使用目的を示すラベルを含む。本明細書中で使用する用語「ラベル」には、キット上にもしくはキットと共に供給されるか、または他の方法でキットに付随する、あらゆる書面または記録物が含まれる。
ここで十分に説明されている本発明は、本発明の趣旨または範囲から逸脱することなく、様々な変更及び修正を行い得ることが当業者に明らかとなるであろう。
実施例１：ヘテロ二量体の形成
非還元及び還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析によってヘテロ二量体形成を分析し、ヒンジ及びＦｃ領域における様々な変異、及びノブインホール変異を含む本発明の実施形態による抗体が、首尾よく発現し、所望のヘテロ二量体の組み合わせに組み立てられ得るかどうかを判定した。これを試験するために、抗体構築物を組換えＣＨＯ細胞培養で発現させた。次いで、回収した細胞培養液をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィーで精製し、産生された様々な抗体断片を分析した。次いで、プロテインＡ溶出プールを還元及び非還元ゲルで分析して、異なる種を可視化した。
これらの分析の結果を、図２のパネルＡ及びＢ、図３のパネルＡ及びＢ、ならびに図２４に示し、ノブインホール変異を含む抗体種のヘテロ二量体形成のパーセンテージが、これに加えて重鎖配列にエフェクター機能サイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）及びＦａｂアーム交換防止変異（Ｓ２２８Ｐ）が存在する場合であっても、優れていることを示している。図２５に示すように、精製されたＣＤ１９構築物を評価して、高分子量（ＨＭＷ）及び低分子量（ＬＭＷ）種のパーセンテージ、ならびに単量体のパーセンテージを分析した。
実施例２：バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）によるＦｃγ受容体結合
Ｆｃγ受容体－ＩｇＧ相互作用を、Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサー（ＦｏｒｔｅＢｉｏ）を使用してＯｃｔｅｔプラットフォームで分析した。Ｎｉ－ＮＴＡバイオセンサーには、ニッケル（Ｎｉ２＋）を充填したＱＩＡＧＥＮのＴｒｉｓ－ＮＴＡが先端に固定化されている。Ｎｉ－ＮＴＡは、組換えタンパク質に結合させたＨＩＳタグに結合する。このフォーマットでは、Ｆｃγ受容体タンパク質をリガンドとしてバイオセンサーにロードし、続いてＩｇＧと結合させる。本発明の実施形態による抗体を調査して、それらのＦｃ領域と、バイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体タンパク質との間の相互作用の程度を分析した。
ここで、Ｆｃγ受容体は、ヒトＦｃγ受容体Ｉ／ＣＤ６４（Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）であった。試験した抗体濃度には、１００ｎＭから１．６ｎＭまでの２倍連続希釈系列が含まれていた。これらの研究の結果を、図４のパネルＡ～Ｄ、図５のパネルＡ～Ｅ、図６のパネルＡ～Ｄ、図７のパネルＡ～Ｅ、及び図２６のパネルＡ～Ｄに示し、結果は、ノブインホール変異及びＦａｂアーム交換変異がＦｃ領域に存在する場合であっても、サイレンシングされたＦｃ受容体抗体のヒトＦｃγＲ１への結合が有意に抑制されることを示している。
具体的には、図４のパネルＡは、ＫｉＨ変異またはサイレンシング変異を含まない二重特異性ＣＤ３×ＢＣＭＡ（一価）ＩｇＧ１抗体の結果を示す。データは、抗体が、バイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図４のパネルＢは、パネルＡで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異が含まれる。これらの結果は、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。図４のパネルＣは、ＫｉＨ変異を含むがサイレンシング変異を含まない二重特異性ＣＤ３×ＢＣＭＡ（一価）ＩｇＧ１抗体の結果を示す。これらのデータは、パネルＡの抗体で観察されたものと非常に類似した方法で、抗体が、バイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図４のパネルＤは、パネルＣで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異が含まれる。これらの結果は、ＫｉＨ変異が含まれている場合でも、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。
図５のパネルＡは、ＫｉＨ変異またはサイレンシング変異を含まないが、Ｆａｂアーム交換を防ぐためのＳ２２８Ｐ変異を含む、二重特異性ＣＤ３×ＢＣＭＡ（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。データは、抗体が、バイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図５のパネルＢは、パネルＡで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が含まれる。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ変異が存在する場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。図５のパネルＣは、ＫｉＨ変異及びＳ２２８Ｐ変異を含むがサイレンシング変異を含まない、二重特異性ＣＤ３×ＢＣＭＡ（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。これらのデータは、パネルＡの抗体で観察されたものと非常に類似した方法で、抗体がバイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図５のパネルＤは、パネルＣで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異に加えて、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）を含む。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異が含まれている場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。パネルＥは、Ｓ２２８Ｐ変異、サイレンシング変異Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ならびにＣＨ３ドメインのＫｉＨ変異を含む二重特異性ＣＤ３×ＢＣＭＡ（二価）ＩｇＧ４抗体の結果を示している。これらのデータは、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異が存在する場合であっても、この抗体とバイオセンサーに固定化したＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少したことを示している。
図６のパネルＡは、ＫｉＨ変異またはサイレンシング変異を含まない二重特異性ＣＤ３×ＰＳＭＡ（一価）ＩｇＧ１抗体の結果を示す。データは、抗体がバイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図６のパネルＢは、パネルＡで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異が含まれる。これらの結果は、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。図６のパネルＣは、ＫｉＨ変異を含むがサイレンシング変異を含まない二重特異性ＣＤ３×ＰＳＭＡ（一価）ＩｇＧ１抗体の結果を示す。これらのデータは、パネルＡの抗体で観察されたものと非常に類似した方法で、抗体が、バイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図６のパネルＤは、パネルＣで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異が含まれる。これらの結果は、ＫｉＨ変異が含まれている場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。
図７のパネルＡは、ＫｉＨ変異またはサイレンシング変異を含まないが、Ｆａｂアーム交換を防ぐためのＳ２２８Ｐ変異を含む、二重特異性ＣＤ３×ＰＳＭＡ（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。データは、抗体がバイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図７のパネルＢは、パネルＡで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が含まれる。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ変異が存在する場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。図７のパネルＣは、ＫｉＨ変異及びＳ２２８Ｐ変異を含むがサイレンシング変異を含まない、二重特異性ＣＤ３×ＰＳＭＡ（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。これらのデータは、パネルＡの抗体で観察されたものと非常に類似した方法で、抗体がバイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図７のパネルＤは、パネルＣで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異に加えて、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が含まれる。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異が含まれている場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。パネルＥは、Ｓ２２８Ｐ変異、サイレンシング変異Ｆ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ、ならびにＣＨ３ドメインにＫｉＨ変異を含む二重特異性ＣＤ３×ＰＳＭＡ（二価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。これらのデータは、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異が存在する場合であっても、この抗体とバイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少したことを示している。
図２６のパネルＡは、ＫｉＨ変異またはサイレンシング変異を含まないが、Ｆａｂアーム交換を防ぐためのＳ２２８Ｐ変異を含む、二重特異性ＣＤ３×ＣＤ１９（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。データは、抗体がバイオセンサーに固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図２６のパネルＢは、パネルＡで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が含まれる。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ変異が存在する場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃ γ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。図２６のパネルＣは、ＫｉＨ変異及びＳ２２８Ｐ変異を含むがサイレンシング変異を含まない、二重特異性ＣＤ３×ＣＤ１９（一価）ＩｇＧ４抗体の結果を示す。これらのデータは、パネルＡの抗体で観察されたものと非常に類似した方法で、抗体がバイオセンサー上に固定化されたＦｃγ受容体と相互作用することを示している。図２６のパネルＤは、パネルＣで使用した抗体と同じ二重特異性抗体の結果を示すが、こちらでは、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異に加えて、ＣＨ２ドメインにサイレンシング変異（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）が含まれる。これらの結果は、Ｓ２２８Ｐ及びＫｉＨ変異が含まれている場合であっても、サイレンシング変異の存在により、抗体とバイオセンサー上のＦｃγ受容体との間の相互作用が有意に減少することを示している。
まとめると、図４、５、６、７、及び２６に示すデータは、二重特異性抗体のＶＨ領域配列が、本明細書に記載のＩｇＧ４ Ｆｃ変異の機能特性に影響を及ぼさないことを示している。したがって、本明細書に記載のＩｇＧ４ Ｆｃ修飾（Ｓ２２８Ｐ；Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ；Ｔ３６６Ｗ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を、異なるＶＨ配列（すなわち、異なる結合標的）を有する抗体において実施し、Ｆａｂアーム交換の減少（Ｓ２２８Ｐ）、エフェクター機能活性の低下（Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）、及び適切なヘテロ二量体化（Ｔ３６６Ｗ；Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖ）を達成することができる。
実施例３：抗ＰＳＭＡ ＵｎｉＡｂｓ（商標）によるＰＳＭＡ陽性及び陰性細胞への結合のフローサイトメトリー分析
ヒトＰＳＭＡまたはＤＵ－１４５細胞株（ＡＴＣＣ ＨＴＢ－８１）を発現するように安定的に形質移入されたＬＮＣａＰ細胞株（ＡＴＣＣ：ＣＲＬ－１７４０）、２２Ｒｖ１細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－２５０５）、ＰＣ３細胞株（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１４３５）を使用したフローサイトメトリー（Ｇｕａｖａ ｅａｓｙＣｙｔｅ ８ＨＴ，ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって、ＰＳＭＡ陽性細胞への結合を評価した。簡潔に述べると、５０，０００個の標的細胞を、精製ＵｎｉＡｂｓ（商標）の希釈系列で、４℃にて３０分間染色した。インキュベーション後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液（１×ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、０．１％ＮａＮ３）で２回洗浄し、Ｒ－フィコエリトリン（ＰＥ）と複合体化したヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧで染色して（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０４２－０９）、細胞に結合した抗体を検出した。４℃で２０分間インキュベートした後、細胞をフローサイトメトリー緩衝液で２回洗浄し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）をフローサイトメトリーで測定した。二次抗体のみで染色された細胞のＭＦＩをバックグラウンドシグナルの測定に使用し、各抗体の結合をバックグラウンドの倍数に変換した。カニクイザルＰＳＭＡ陽性細胞への結合を、以下の変更を加えた同じプロトコルを使用して測定した：標的細胞は、カニクイザルＰＳＭＡの細胞外ドメインを発現するように一過性に形質移入したＦｒｅｅｓｔｙｌｅ ２９３－Ｆ細胞（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｒ７９００７）由来の細胞であった。いくつかの実験では、ＥＣ５０値を、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７を使用して計算した。
表８は、本明細書に記載の抗ＰＳＭＡ重鎖抗体（ＨＣＡｂ）の標的結合活性をまとめたものである。列１は、ＨＣＡｂのクローンＩＤを示す。列２は、バックグラウンドＭＦＩシグナルの倍数として測定されたＬＮＣａＰ細胞への結合を示す。

Figure 2023081303000022
図８のパネルＡ及びＢに示すように、カニクイザルＰＳＭＡへの結合の差異は、ＨＣＡｂ３４６１８１及び３４５４９７によって認識されるヒトＰＳＭＡエピトープの違いを裏付けている。
実施例４：バイパラトピック及び二価抗ＰＳＭＡ抗体の組成
表９に示すように、抗ＰＳＭＡクローンＩＤ３５０１２３は、架橋配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７１）でクローンＩＤ３４５４９７配列に連結されたクローンＩＤ３４６１８１配列からなる。クローンＩＤ３５０１２２は、同じリンカー配列によって連結されたクローンＩＤ３４６１８１の２つの繰り返しからなる。クローンＩＤ３５０１２３は、ＰＳＭＡ上の異なるエピトープを認識する２つの抗ＰＳＭＡドメインからなるため、バイパラトピックである。クローンＩＤ３５０１２２は二価であるが、同じ抗ＰＳＭＡドメインのタンデムからなるため、バイパラトピックではない。様々な三本鎖抗体様分子（ＴＣＡ）の模式図を図１のパネルＡ～Ｃに示す。
Figure 2023081303000023
実施例５：
Ｔ細胞リダイレクトによるＰＳＭＡ陽性前立腺腫瘍細胞の多重特異性抗体媒介性細胞死滅
休止Ｔ細胞を使用したアッセイ
標的細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり１５，０００細胞で播種し、３７℃で一晩増殖させた。インキュベーション後、休止状態のヒトＴ細胞と一緒に、多量の多重特異性抗体を、エフェクター細胞と標的細胞の比率１０：１で添加し、３７℃でさらに４８時間または７２時間インキュベートした（ＬＮＣａＰ、ＭＤＡ－ＰＣａ－２ｂ及びＰＣ３－ＰＳＭＡ細胞でのアッセイでは４８時間、２２Ｒｖ１細胞でのアッセイでは７２時間）。細胞増殖試薬ＷＳＴ－１（Ｓｉｇｍａカタログ番号：１１６４４８０７００１）またはフローサイトメトリーのいずれかを使用して細胞死を測定した。いくつかの実験では、インキュベーション後、ただし標的細胞の生存率の分析より前に、各上清の少量の試料を回収し、サイトカイン産生の分析用に保存した。細胞生存率をＷＳＴ－１試薬で分析した場合、試薬ストックを各ウェルに１：１０希釈で添加し、３７℃で９０分間インキュベートした。次いで、４５０ｎｍ（参照６９０ｎｍ）で吸光度を測定し、特異的溶解率（％）を計算した。
標的細胞の生存率をフローサイトメトリーで分析した場合は、次いで、標的細胞を標識した後、膜色素ＤｉＲ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｄ１２７３１）でアッセイを開始した。Ｔ細胞及び抗体とのインキュベーション後、上清をサイトカイン分析のために保存するか、または廃棄した。次いで、ウェルを１回洗浄して、死んだ腫瘍細胞とＴ細胞を回収し、フローサイトメトリープレートに移した。残りの付着した腫瘍細胞をトリプシン処理し、次いでフローサイトメトリープレートの対応するウェルに加えた。アネキシンＶ試薬を使用して死細胞を染色し、フローサイトメトリーを実施して（ＢＤ ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ）、ＤｉＲ染色によってゲーティングした各試料中の死んだ腫瘍細胞のパーセントを定量化した。未処理の標的細胞を含有するウェルを使用して、自発的な細胞死に対して正規化した。いくつかの実験では、ＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性分子と同じＣＤ３ターゲティングアームからなるが、腫瘍ターゲティングアームがＨＩＶタンパク質ｇｐ１２０に特異的なＶＨに置換された陰性対照抗体を使用した。
図９は、非刺激のＴ細胞を使用したＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示す。非刺激のヒトＴ細胞を、ＰＳＭＡ発現細胞（ＬＮＣａＰ）及び様々な濃度の多重特異性抗体と共にインキュベートした。バイパラトピック抗ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体（３５０１２３×ＣＤ３）は、モノパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体（３４６１８１×ＣＤ３）より優れていた。
事前に活性化されたＴ細胞を使用したアッセイ
ヒト汎Ｔ細胞をプレート結合ＯＫＴ３及びＩＬ－２で３日間、事前活性化した後、新鮮なＩＬ－２中でさらに１日インキュベートした。標的細胞をトリプシン処理し、Ｃａｌｃｅｉｎ－ＡＭ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｃ３１００ＭＰ）をロードし、活性化Ｔ細胞とＥ：Ｔ比率２０：１で混合し、９６ウェルプレートのウェルに添加した。異なる多重特異性抗体の希釈系列を加えた後、３７℃で４時間インキュベートした。次いで、上清を黒色の９６ウェルプレートに移し、吸光度を４８０ｎｍ／５２０ｎｍ ｅｘ／ｅｍで測定し、カルセインの放出を定量化した。Ｔ細胞の非存在下でインキュベートした標的細胞を使用して、インタクトな腫瘍細胞の自発的なカルセインの放出を正規化した。標的細胞を含有する対照ウェルへ２％Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘを添加することにより、最大の細胞溶解に対応するカルセインシグナルを計算することができた。この値を使用して、各実験ウェルを、最大の細胞溶解に対するパーセントとして報告した。ＧｒａｐｈＰａｄ ｐｒｉｓｍ ７を使用してデータ分析を実施した。
図１０は、事前に活性化されたＴ細胞を使用したＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示す。事前に活性化されたヒトＴ細胞を、ヒトＰＳＭＡ発現細胞（ＬＮＣａＰ）及び様々な濃度の多重特異性抗体と共にインキュベートした。腫瘍細胞死をカルセイン放出によって測定し、Ｔ細胞の非存在下での腫瘍細胞の自発的放出に対して正規化した。バイパラトピック抗ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体（３５０１２３×ＣＤ３）は、両方のモノパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体より優れていた。
図１１は、多重特異性抗体がＰＳＭＡ陰性細胞を溶解しないことを示す。事前に活性化されたヒトＴ細胞を、ＰＳＭＡ陰性前立腺癌細胞（ＤＵ１４５）及び様々な濃度の多重特異性抗体と共にインキュベートした。試験した抗体のいずれによっても、これらの細胞の溶解は起こらなかった。
図１２は、ＰＳＭＡ陽性細胞及び陰性細胞へのＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体の結合を示す。多重特異性抗ＰＳＭＡ×抗ＣＤ３抗体は、ＰＳＭＡ陽性前立腺腫瘍細胞（２２Ｒｖ１）への結合を示すが、ＰＳＭＡ陰性前立腺腫瘍細胞（ＤＵ１４５）への結合は示さない。バイパラトピック分子（３５０１２３）は、最も強いオンターゲット細胞結合を示した。
図１３は、ＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解を示す。図１３のデータは、２つの異なるエピトープを介したＰＳＭＡへの結合が、二価であるが単一特異性であるバージョンの抗体と比較して、細胞死滅を増加させることを示している。
実施例６：モノパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体は、バイパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体に比べてサイトカイン産生を誘導しない
休止Ｔ細胞を用いた腫瘍細胞傷害性アッセイにおいて、サイトカイン産生を分析した。これらのアッセイの設計については、他の場所で詳しく説明されている。アッセイの完了時に上清を回収した（２２Ｒｖ１細胞を使用したアッセイでは７２時間のインキュベーション後、他のすべての細胞株では４８時間後）。ＩＬ－２（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ４３１８０４）及びＩＦＮγ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ４３０１０４）を検出するために、ＥＬＩＳＡキットを製造元のプロトコルに従って使用した。サイトカインのレベルが各キットに付属の標準曲線の直線部分内に収まるように、ＥＬＩＳＡ分析の前に試験上清を希釈した。いくつかの場合では、試験ウェル中でサイトカインを検出することができず、値がアッセイの定量下限以下であると報告された。
図１４（パネルＡ、Ｂ、及びＣ）は、ＰＳＭＡ陽性細胞のＴ細胞媒介性溶解、及びサイトカイン産生との比較を示す。多重特異性ＰＳＭＡ×ＣＤ３抗体は、ＰＳＭＡ陽性前立腺癌細胞株ＬＮＣａＰのＴ細胞媒介性溶解を誘導する。バイパラトピック分子（３５０１２３）は、モノパラトピック分子（３４６１８１）と比較して、腫瘍細胞の死滅をより強力に刺激したが、図１４のパネルＢ及びＣに示すように、サイトカインであるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）及びインターロイキン２（ＩＬ－２）のより高レベルの産生も引き起こした。
表１０は、４種のＰＳＭＡ陽性前立腺腫瘍細胞株に対するＴ細胞媒介性溶解及びサイトカイン産生を示す。ＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体を、非刺激のＴ細胞及び４種のＰＳＭＡ陽性腫瘍細胞株パネルに対する一連の用量の抗体を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏでの腫瘍細胞の細胞傷害性アッセイで試験した。７２時間（２２Ｒｖ１）または４８時間（ＭＤＡ－ＰＣａ－２ｂ、ＬＮＣＡＰ、ＰＣ３－ＰＳＭＡ）後、腫瘍細胞死のパーセントを計算し、ＥＣ５０で記載し、達成された最高の死滅率も記載した。これらの試験ウェルから上清を回収し、サイトカインであるインターフェロンγ（ＩＦＮγ）またはインターロイキン－２（ＩＬ－２）について、ＥＬＩＳＡにより分析した。モノパラトピック分子（３４６１８８１）は、バイパラトピック分子と比較して、試験した４種の細胞株すべてに対してほぼ同等レベルの腫瘍細胞傷害性を誘発したが、サイトカイン産生のＥＣ５０がより高く、ほとんどの場合で最大サイトカイン産生の刺激レベルは低かった。

Figure 2023081303000024
実施例７：ＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体はＴ細胞の増殖を誘導する
ＰＳＭＡ陽性腫瘍細胞を９６ウェルプレートにウェルあたり２５，０００細胞で播種し、３７℃で一晩増殖させた。休止ＰＢＭＣから分離されたヒト汎Ｔ細胞（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ １３０－０９６－５３５）を、製造元の説明書（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｃ３４５５４）に従って系統追跡色素ＣＦＳＥで標識した。次いで、１００，０００個の標識された汎Ｔ細胞を、腫瘍細胞を含有するウェルに加え、続いて一連の抗体を希釈し、３７℃、８％ＣＯ２でインキュベートした。５日間のインキュベーション後、細胞を穏やかに混合し、フローサイトメトリープレートに移した。細胞をペレット化し、上清を除去した後、ＡＰＣと複合体化した抗ＣＤ８（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ３０１０４９）及びＰＥと複合体化した抗ＣＤ４（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ３１７４１０）により、氷上で２０分間染色した。次いで、細胞を洗浄し、分析のためにフローサイトメトリー緩衝液（ＢＤ ＦＡＣＳＣｅｌｅｓｔａ）に再懸濁した。細胞を、前方散乱及び側方散乱、ならびにＣＤ４発現またはＣＤ８発現でゲーティングした。ＣＤ４またはＣＤ８陽性染色及び低または陰性ＣＦＳＥシグナルによって示されるように、増殖したＴ細胞のパーセントを、Ｔ細胞集団全体ならびにＣＤ４及びＣＤ８サブセットについて計算した。ＦｌｏｗＪｏを使用してフローサイトメトリーデータを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ７においてプロットした。
図１５（パネルＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ）は、ＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体がＰＳＭＡ陽性腫瘍細胞の存在下でＴ細胞増殖を刺激し、モノパラトピックＰＳＭＡ二重特異性抗体がＣＤ３ Ｔ細胞を優先的に活性化することを示す。多重特異性抗体を、ＰＳＭＡ発現腫瘍細胞及び系統追跡色素ＣＦＳＥで標識されたＴ細胞と一緒にインキュベートした。５日間のインキュベーション後、Ｔ細胞増殖及び増殖したＴ細胞の組成（ＣＤ８＋対ＣＤ４＋）をフローサイトメトリーによって分析した。パネルＡ及びＢは、Ｔ細胞の総増殖を示しており、一方、パネルＣ及びＤは、増殖したウェルにおけるＣＤ８＋とＣＤ４＋のＴ細胞の比率を示している。水平の破線は、非刺激のＴ細胞のＣＤ８：ＣＤ４の比率を示しており、およそ１：２（実際の値＝０．６４）である。モノパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３二重特異性抗体（３４６１８１）は、ＣＤ８ Ｔ細胞を優先的に活性化し（増殖後のＣＤ８：ＣＤ４の比率はおよそ２：１）、一方、バイパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３多重特異性抗体（３５０１２３）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞をあまり優先的に活性化しない（ＣＤ８：ＣＤ４の比率は約１：１）。
実施例８：多重特異性抗体は、異種移植モデルにおいて前立腺腫瘍の成長を抑制する
５～６週齢の雄免疫不全ＣＩＥＡ－ＮＯＧマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ）に対し、右下側腹部に１，０００万個の２２Ｒｖ１細胞を皮下移植し、腫瘍移植の１日後に尾静脈注射により１，０００万個のヒトＰＢＭＣを加えた。この動物に対し、腫瘍移植の１日後に尾静脈注射により開始して、１、５、９、及び１３日目に１００μｇの多重特異性抗体またはビヒクルを処置した。キャリパーを使用して腫瘍体積を定量化し、２５日間記録した。
図１６は、２２Ｒｖ１腫瘍異種移植モデルの結果を示す。バイパラトピックＰＳＭＡ×ＣＤ３分子（３５０１２３）は、腫瘍異種移植モデルにおいて２２Ｒｖ１腫瘍増殖の阻害を示した。各処置群について３匹のマウスを試験し、各動物の腫瘍体積の変化を、立法ミリメートルでプロットした。動物に腫瘍移植後１日目にＰＢＭＣを投与し、１、５、９、及び１３日目に抗体で処置した。多重特異性抗体を処置した３匹の動物のうちの２匹が腫瘍進行の遅延を示した。
実施例９：Ｔ細胞活性化の分析
ＣＤ６９は、刺激により上方制御されるＴ細胞上の細胞表面マーカーであり、それによってＴ細胞活性化の指標として機能する。本実験では、ＣＤ６９の活性化を３つの異なる条件下で評価した：１）ＢＣＭＡコーティングなしの全末梢血単核球（ＰＢＭＣ）；２）ＢＣＭＡコーティングした汎Ｔ細胞；及び３）ＢＣＭＡコーティングなしの汎Ｔ細胞。Ｆｉｃｏｌｌ（密度１．０７７ｇ／ｍｌ）を使用してバフィーコートからＰＢＭＣを分離し、凍結保存したＰＢＭＣを解凍し、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０中、２×１０６細胞／ｍＬで３７℃にて２４時間静置した。２日目に、Ｍｉｌｔｅｎｙｉネガティブセレクションキットを使用して休止ＰＢＭＣから汎Ｔ細胞を分離し、分離した細胞を、第２及び第３のアッセイ条件で使用した。第１のアッセイ条件では、ＰＢＭＣをカウントし、アッセイプレートに播種した。
抗原コーティング条件下で評価した細胞について、９６ウェルプレートを、１μｇ／ｍＬの濃度の組換えＢＣＭＡタンパク質（ヒトＢＣＭＡタンパク質、Ｆｃタグ、Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＢＣ７－Ｈ５２５４）、１μｇ／ｍＬの濃度の組換えＰＳＭＡタンパク質（組換えヒトＰＳＭＡ／ＦＯＬＨ１タンパク質、ＲＮＤ ｓｙｓｔｅｍｓ製、カタログ番号－４２３４－ＺＮ－０１０１））、または１０μｇ／ｍＬの濃度の組換えＣＤ１９タンパク質（ヒトＣＤ１９タンパク質、Ｈｉｓタグ、Ａｃｒｏ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号－ＣＤ９－Ｈ５２Ｈ２）でコーティングした。最高用量を３００ｎＭとした、３倍希釈系列の１２点用量曲線を用いて二重特異性抗体を分析した。二重特異性抗体とＴ細胞を、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０に再懸濁し、１８時間インキュベートした。汎Ｔ細胞はエフェクター細胞であり、これを１００，０００個の細胞／ウェルでプレーティングした。
抗原コーティングなしの条件で評価した細胞について、二重特異性抗体を、３倍希釈系列による１２点用量曲線を使用して細胞と共にインキュベートした。３００ｎＭの二重特異性抗体は、このアッセイで試験した最高濃度であった。試料を、１０％ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０中、３７℃にて１８時間インキュベートした。ＰＢＭＣから分離した汎Ｔ細胞はエフェクター細胞であり、これを１００，０００個の細胞／ウェルでプレーティングした。
すべての実験条件について、細胞を洗浄し、細胞表面Ｔ細胞抗体で標識した。以下の抗体（１）ＣＤ４陽性Ｔ細胞（ＦＩＴＣ 抗ヒトＣＤ４抗体）、（２）ＣＤ８陽性Ｔ細胞（ＰＥ 抗ヒトＣＤ８ａ抗体）、（３）ＣＤ６９活性化（Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７抗ヒトＣＤ６９抗体）（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用して標識した。次いで、適切なテンプレートを使用してＢＤ Ｃｅｌｅｓｔａで細胞を分析し、ＣＤ６９活性化を測定した。
Ｔ細胞活性化研究の結果を以下の図：図１７～１８、図２７のパネルＡ～Ｂ（ＢＣＭＡ抗原コーティングなし、ＰＢＭＣを使用）；図３０のパネルＡ－Ｂ（ＰＳＭＡコーティングなし）；及び図３３のパネルＡ－Ｂ（ＣＤ１９コーティングなし）に示す。
図１７は、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数としてＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。一般に、ＩｇＧ１ Ｆｃ配列を含有する二重特異性抗体は、より低い濃度の二重特異性抗体でＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を示した。ＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む二重特異性抗体は、より高い濃度の二重特異性抗体でＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を示した。特に、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は低く、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＢＣＭＡ非依存的活性化が減少することが示された。
図１８は、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数としてＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合と同様に、ＩｇＧ１ Ｆｃ配列を含む二重特異性抗体は、より低濃度の二重特異性抗体でＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示した。ＩｇＧ４ Ｆｃ配列を含む二重特異性抗体は、より高濃度の二重特異性抗体でＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示した。特に、ＰＡＡ及びＫｉＨ 変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は低く、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＢＣＭＡ非依存的活性化が減少することが示された。
図２７のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ４＋Ｔ細胞活性化は、陰性対照（ｇｐ１２０、ＣＤ３（Ｆ２Ｂ））と同様であり、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＢＣＭＡ非依存的活性化が減少することを示している。図２７のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合と同様に、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、陰性対照と同様であり、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＢＣＭＡ非依存的活性化が減少することを示している。
図３０のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、陰性対照（ｇｐ１２０、ＣＤ３（Ｆ２Ｂ））と同様であり、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入が、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＰＳＭＡ非依存的活性化を減少させることを示している。図３０のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合と同様に、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、陰性対照と同様であり、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＰＳＭＡ非依存的活性化が減少することを示している。
図３３のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含まない他の抗体構築物から観察されたものよりもはるかに低く、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＣＤ１９非依存的活性化が減少することを示している。図３３のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ４＋Ｔ細胞の場合と同様に、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成されるＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含まない他の抗体構築物から観察されたものよりもはるかに低く、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入により、これらの二重特異性抗体によるＴ細胞のＣＤ１９非依存的活性化が減少することを示している。
休止中のＰＢＭＣから分離した汎Ｔ細胞を用いた抗原コーティングありのＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の結果を、図１９、図２８のパネルＢ、図３１のパネルＢ、及び図３４のパネルＢに示す。休止ＰＢＭＣから分離した汎Ｔ細胞を用いた抗原コーティングありのＣＤ４＋Ｔ細胞活性化の結果を、図２８のパネルＡ、図３１のパネルＡ、及び図３４のパネルＡに示す。ＢＣＭＡ及びＰＳＭＡの抗原コーティング濃度は１μｇ／ｍＬであったが、ＣＤ１９の抗原コーティング濃度は１０μｇ／ｍＬであった。
図１９は、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＢＣＭＡコーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示した。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入が、これらの分子のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化活性を排除しなかったことを示している。
図２８のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＢＣＭＡコーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を示した。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
図３１のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＰＳＭＡコーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を示した。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
図３４のパネルＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ１９コーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ８＋Ｔ細胞活性化を示した。特に、ＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
図２８のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＢＣＭＡコーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化を示した。特に、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ４＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
図３１のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＰＳＭＡコーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を示した。特に、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ４＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
図３４のパネルＡは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。ＣＤ１９コーティングなしの実験の場合とは異なり、すべての二重特異性抗体は、抗原コーティング細胞に対する二重特異性抗体と同様の濃度でＣＤ４＋Ｔ細胞活性化を示した。特に、ＣＤ４＋Ｔ細胞の活性化は、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異を含むＩｇＧ４ Ｆｃ二重特異性抗体によって達成され、ＰＡＡ及びＫｉＨ変異の導入がこれらの分子のＣＤ４＋Ｔ細胞活性化の活性を排除しなかったことを示している。
休止ＰＢＭＣから分離した汎Ｔ細胞を用いた、抗原コーティングなしのＣＤ８＋Ｔ細胞活性化の結果を、図２０、図２９のパネルＢ、図３２のパネルＢ、及び図３５のパネルＢに示す。休止ＰＢＭＣから分離した汎Ｔ細胞を用いた、抗原コーティングなしのＣＤ４＋Ｔ細胞活性化の結果を、図２９のパネルＡ、図３２のパネルＡ、及び図３５のパネルＡに示す。
図２０は、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、ＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。これらの結果は、ＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ６９活性化が、試験したすべての二重特異性抗体分子でＢＣＭＡ依存性であることを示している。
図２９のパネルＡ及びＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、それぞれ、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。これらの結果は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ６９活性化が、試験したすべての二重特異性抗体分子でＢＣＭＡ依存性であることを示している。ＣＤ６９活性化は、サイレンシング変異を含まないより高濃度の二重特異性抗体構築物において、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方でわずかに増加していた。
図３２のパネルＡ及びＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、それぞれ、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。これらの結果は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ６９活性化が、試験したすべての二重特異性抗体分子でＰＳＭＡ依存性であることを示している。
図３５のパネルＡ及びＢは、凡例に示される二重特異性抗体構築物について、二重特異性抗体濃度の関数として、それぞれ、ＣＤ４＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）及びＣＤ８＋ＣＤ６９＋Ｔ細胞（％）を示すグラフである。これらの結果は、ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞におけるＣＤ６９活性化が、試験したすべての二重特異性抗体分子でＣＤ１９依存性であることを示している。ＣＤ６９活性化は、サイレンシング変異を含まないより高濃度の二重特異性抗体構築物において、ＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の両方でわずかに増加していた。
実施例１０：腫瘍細胞の溶解
活性化された初代Ｔ細胞のリダイレクションを通じて、３つの異なるＢＣＭＡ＋腫瘍細胞及び１つのＢＣＭＡ陰性細胞株を殺傷する能力について、抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体をアッセイした。本実験では、二重特異性抗体の添加と共に、腫瘍細胞と活性化汎Ｔ細胞を１０：１のＥ：Ｔ比で混合した。結果を図２１のパネルＡ～Ｄに示す。パネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞の殺傷を示し、パネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞の殺傷を示し、パネルＣは、Ｕ－２６６細胞の殺傷を示し、パネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞の殺傷を示す。ｘ軸は、使用した抗体の濃度を示し、ｙ軸は、抗体添加６時間後の腫瘍細胞の溶解率（％）を示す。
休止ヒトＴ細胞を様々な腫瘍細胞株及び漸増用量の抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体と共に培養後、ＩＬ－２サイトカイン放出のレベルを測定した。図２２のパネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示す。図２２のパネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示す。図２２のパネルＣは、Ｕ－２６６細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示す。図２２のパネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞によって刺激したＩＬ－２放出を示す。
休止ヒトＴ細胞を様々な腫瘍細胞株及び漸増用量の抗ＣＤ３×抗ＢＣＭＡ二重特異性抗体と共に培養後、ＩＦＮ－γサイトカイン放出のレベルを測定した。図２３のパネルＡは、ＲＰＭＩ－８２２６細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示す。図２３のパネルＢは、ＮＣＩ－Ｈ９２９細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示す。図２３のパネルＣは、Ｕ－２６６細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示す。図２３のパネルＤは、陰性対照であるＫ５６２細胞によって刺激したＩＦＮ－γ放出を示す。
本発明の好適な実施形態を、本明細書中に示し、記載してきたが、そのような実施形態が単に例示として示すものに過ぎないことは、当業者には自明であろう。当業者であれば、本発明から逸脱することなく、数多くの変形、変更、及び置換を見出すであろう。本明細書に記載する本発明の実施形態に対する様々な代替手段が、本発明の実施において採用され得ることを理解すべきである。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲に含まれる方法及び構造、ならびにそれらの均等物が、それにより包含されることが意図される。

Claims (60)

  1. 変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＴ３６６Ｗを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第１の重鎖ポリペプチドサブユニット；ならびに
    変異Ｓ２２８Ｐ、Ｆ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ、及びＹ４０７Ｖを含む変異ヒトＩｇＧ４定常領域を含む第２の重鎖ポリペプチドサブユニット
    を含む、単離された多重特異性抗体。
  2. 前記第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域または前記第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、ＣＨ１ドメインを欠損している、請求項１に記載の単離された多重特異性抗体。
  3. 前記第１の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、配列番号７３または５５の配列を含み、前記第２の重鎖ポリペプチドサブユニットの前記変異ヒトＩｇＧ４定常領域が、配列番号７２または５４の配列を含む、請求項１または２に記載の単離された多重特異性抗体。
  4. 配列番号３６の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号３７の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号３８の配列を含むＣＤＲ３配列を含む重鎖可変ドメイン；ならびに
    配列番号３９の配列を含むＣＤＲ１配列、配列番号４０の配列を含むＣＤＲ２配列、及び配列番号４１の配列を含むＣＤＲ３配列を含む軽鎖可変ドメイン
    を含む、ＣＤ３に対する結合特異性を有する第１の結合部分をさらに含む、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の単離された多重特異性抗体。
  5. 前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメイン内の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列が、ヒトＶＨフレームワークに存在し；
    前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメイン内の前記ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３配列が、ヒトＶκフレームワークに存在する、請求項４に記載の単離された多重特異性抗体。
  6. 前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４２に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み；
    前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４３に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を含む、
    請求項５に記載の単離された多重特異性抗体。
  7. 前記第１の結合部分の前記重鎖可変ドメインが、配列番号４２の配列を含み；
    前記第１の結合部分の前記軽鎖可変ドメインが、配列番号４３の配列を含む、
    請求項６に記載の単離された多重特異性抗体。
  8. ＣＤ３以外のタンパク質に対する結合特異性を有する第２の結合部分をさらに含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の単離された多重特異性抗体。
  9. 前記第２の結合部分が、一価または二価の構成で単一の重鎖可変領域を含む、請求項８に記載の単離された多重特異性抗体。
  10. 前記第１の結合部分が、軽鎖ポリペプチドサブユニット及び重鎖ポリペプチドサブユニットを含み、前記第２の結合部分が、重鎖ポリペプチドサブユニットを含む、請求項９に記載の単離された多重特異性抗体。
  11. 前記第１の結合部分の前記軽鎖ポリペプチドサブユニットが、軽鎖定常ドメインを含む、請求項１０に記載の単離された多重特異性抗体。
  12. 前記ＣＤ３以外のタンパク質が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）または腫瘍特異的抗原（ＴＳＡ）である、請求項８～１１のいずれか一項に記載の単離された多重特異性抗体。
  13. 前記ＴＡＡがＢ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）である、請求項１２に記載の単離された多重特異性抗体。
  14. 前記ＴＡＡがＣＤ１９である、請求項１２に記載の単離された多重特異性抗体。
  15. 前記ＴＡＡが前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である、請求項１２に記載の単離された多重特異性抗体。
  16. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体を含む医薬組成物。
  17. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体をコードするポリヌクレオチド。
  18. 請求項１７に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  19. 請求項１８に記載のベクターを含む細胞。
  20. 前記多重特異性抗体の発現を許容する条件下で請求項１９に記載の細胞を増殖させ、前記細胞から前記多重特異性抗体を単離することを含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体の製造方法。
  21. 有効用量の請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体または請求項１６に記載の医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、治療方法。
  22. 必要とする個体における疾患または障害の治療のための薬剤の調製における、請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体の使用。
  23. 必要とする個体における療法に使用するための、請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項１６に記載の医薬組成物。
  24. 有効用量の請求項１３に記載の多重特異性抗体、または請求項１３に記載の多重特異性抗体を含む医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＢＣＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法。
  25. 前記疾患が自己免疫疾患である、請求項２４に記載の方法。
  26. 前記疾患ががんである、請求項２４に記載の方法。
  27. 前記がんが骨髄腫である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記骨髄腫が多発性骨髄腫である、請求項２７に記載の方法。
  29. 有効用量の請求項１５に記載の多重特異性抗体、または請求項１５に記載の多重特異性抗体を含む医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＰＳＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法。
  30. 前記疾患ががんである、請求項２９に記載の方法。
  31. 前記がんが前立腺癌である、請求項２９に記載の方法。
  32. 有効用量の請求項１４に記載の多重特異性抗体、または請求項１４に記載の多重特異性抗体を含む医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＣＤ１９の発現を特徴とする疾患または病態の治療方法。
  33. 前記障害がびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）である、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記障害が急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）である、請求項３２に記載の方法。
  35. 前記障害が非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である、請求項３２に記載の方法。
  36. 前記障害が全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）である、請求項３２に記載の方法。
  37. 前記障害が関節リウマチ（ＲＡ）である、請求項３２に記載の方法。
  38. 前記障害が多発性硬化症（ＭＳ）である、請求項３２に記載の方法。
  39. 請求項１～１５のいずれか一項に記載の多重特異性抗体、または請求項１６に記載の医薬組成物、及び使用説明書を含む、必要とする個体における疾患または障害を治療するためのキット。
  40. 少なくとも１つの追加の試薬をさらに含む、請求項３９に記載のキット。
  41. 前記少なくとも１つの追加の試薬が、化学療法薬を含む、請求項４０に記載のキット。
  42. 配列番号４３の配列を含む軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）；及び
    軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）
    を含む第１のポリペプチドサブユニット；
    配列番号４２の配列を含む重鎖可変ドメイン（ＶＨ）；及び
    配列番号７２または７３の配列を含む重鎖定常ドメイン（ＣＨ）
    を含む第２のポリペプチドサブユニットであって；
    前記軽鎖可変ドメイン及び重鎖可変ドメインが、一緒になって、ＣＤ３に結合する第１の結合部分を形成する、前記第２のポリペプチドサブユニット；ならびに
    ＣＤ３以外のタンパク質に結合する、一価または二価構成の重鎖のみの可変領域；及び
    配列番号５４または５５の配列を含む重鎖定常ドメイン（ＣＨ）
    を含む第３のポリペプチドサブユニット
    を含む、二重特異性三本鎖抗体様分子。
  43. 前記第３のポリペプチドサブユニットが、ＢＣＭＡに結合する二価構成の重鎖のみの可変領域を含む、請求項４２に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子。
  44. 配列番号４９の配列を含む第１のポリペプチドサブユニット；
    配列番号５６の配列を含む第２のポリペプチドサブユニット；及び
    配列番号５８の配列を含む第３のポリペプチドサブユニット
    を含む、請求項４３に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子。
  45. 請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子を含む医薬組成物。
  46. 請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子をコードするポリヌクレオチド。
  47. 請求項４６に記載のポリヌクレオチドを含むベクター。
  48. 請求項４７に記載のベクターを含む細胞。
  49. 前記二重特異性三本鎖抗体様分子の発現を許容する条件下で請求項４８に記載の細胞を増殖させ、前記細胞から前記二重特異性三本鎖抗体様分子を単離することを含む、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子の製造方法。
  50. 有効用量の請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子、または請求項４５に記載の医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、治療方法。
  51. 必要とする個体における疾患または障害の治療のための薬剤の調製における、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子の使用。
  52. 必要とする個体における治療に使用するための、請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子、または請求項４５に記載の医薬組成物。
  53. 有効用量の請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子、または請求項４５に記載の医薬組成物を、必要とする個体に投与することを含む、ＢＣＭＡの発現を特徴とする疾患または病態の治療方法。
  54. 前記疾患が自己免疫疾患である、請求項５３に記載の方法。
  55. 前記疾患ががんである、請求項５３に記載の方法。
  56. 前記がんが骨髄腫である、請求項５５に記載の方法。
  57. 前記骨髄腫が多発性骨髄腫である、請求項５６に記載の方法。
  58. 請求項４２～４４のいずれか一項に記載の二重特異性三本鎖抗体様分子、または請求項４５に記載の医薬組成物、及び使用説明書を含む、必要とする個体の疾患または障害を治療するためのキット。
  59. 少なくとも１つの追加の試薬をさらに含む、請求項５８に記載のキット。
  60. 前記少なくとも１つの追加の試薬が、化学療法薬を含む、請求項５９に記載のキット。
JP2022174143A 2020-04-29 2022-10-31 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体 Active JP7462011B2 (ja)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063017589P 2020-04-29 2020-04-29
US63/017,589 2020-04-29
US202063108796P 2020-11-02 2020-11-02
US63/108,796 2020-11-02
PCT/US2021/029909 WO2021222578A1 (en) 2020-04-29 2021-04-29 Multispecific heavy chain antibodies with modified heavy chain constant regions
JP2022564820A JP2023526774A (ja) 2020-04-29 2021-04-29 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022564820A Division JP2023526774A (ja) 2020-04-29 2021-04-29 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体

Publications (3)

Publication Number Publication Date
JP2023081303A true JP2023081303A (ja) 2023-06-09
JP2023081303A5 JP2023081303A5 (ja) 2023-06-16
JP7462011B2 JP7462011B2 (ja) 2024-04-04

Family

ID=78292536

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022564820A Pending JP2023526774A (ja) 2020-04-29 2021-04-29 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体
JP2022174143A Active JP7462011B2 (ja) 2020-04-29 2022-10-31 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022564820A Pending JP2023526774A (ja) 2020-04-29 2021-04-29 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体

Country Status (13)

Country Link
US (4) US20230203161A1 (ja)
EP (2) EP4121172A1 (ja)
JP (2) JP2023526774A (ja)
KR (1) KR20230005179A (ja)
CN (2) CN115894703A (ja)
AU (2) AU2021263448A1 (ja)
BR (1) BR112022021690A2 (ja)
CA (1) CA3176792A1 (ja)
CR (1) CR20230149A (ja)
DO (1) DOP2022000229A (ja)
IL (2) IL297601A (ja)
MX (1) MX2022013453A (ja)
PE (1) PE20230431A1 (ja)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20190053835A (ko) 2016-06-21 2019-05-20 테네오바이오, 인코포레이티드 Cd3 결합 항체
WO2018052503A1 (en) * 2016-09-14 2018-03-22 Teneobio, Inc. Cd3 binding antibodies
JP7254699B2 (ja) 2016-12-21 2023-04-10 テネオバイオ， インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体
KR20200018498A (ko) 2017-06-20 2020-02-19 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
CN117567624A (zh) 2017-06-20 2024-02-20 特纳奥尼股份有限公司 仅有重链的抗bcma抗体
AR119746A1 (es) 2019-06-14 2022-01-05 Teneobio Inc Anticuerpos multiespecíficos de cadena pesada que se unen a cd22 y cd3

Family Cites Families (85)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6750325B1 (en) 1989-12-21 2004-06-15 Celltech R&D Limited CD3 specific recombinant antibody
US5968509A (en) 1990-10-05 1999-10-19 Btp International Limited Antibodies with binding affinity for the CD3 antigen
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
GB9206422D0 (en) 1992-03-24 1992-05-06 Bolt Sarah L Antibody preparation
US7381803B1 (en) 1992-03-27 2008-06-03 Pdl Biopharma, Inc. Humanized antibodies against CD3
US6066721A (en) 1995-07-06 2000-05-23 Stanford University Method to produce novel polyketides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
AU751659B2 (en) 1997-05-02 2002-08-22 Genentech Inc. A method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
ATE437227T1 (de) 1999-01-07 2009-08-15 Zymogenetics Inc Verfahren zur therapeutischen verwendung von löslichen rezeptoren br43x2
US6326175B1 (en) 1999-07-13 2001-12-04 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for producing full length cDNA libraries
EE05673B1 (et) 1999-08-17 2013-08-15 Biogen, Inc. BAFF-retseptor (BCMA), immunoregulatoorne agens
UA74798C2 (uk) 1999-10-06 2006-02-15 Байоджен Айдек Ма Інк. Спосіб лікування раку у ссавця за допомогою поліпептиду, що протидіє взаємодії april з його рецепторами
WO2001024812A1 (en) 1999-10-06 2001-04-12 N.V. Nutricia USE OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR β AND GROWTH FACTORS IN THE TREATMENT AND PREVENTION OF DISEASES OF THE INTESTINAL MUCOSA
MXPA02011130A (es) 2000-05-12 2003-03-10 Amgen Inc Metodos y composiciones de materia que se refieren a april/g70, bcma, blys/agp-3, y taci.
US20020066516A1 (en) 2000-12-01 2002-06-06 Cornell Stephen W. Mechanism for attaching a lifter to a straw and method therefor
EP2301971A1 (en) 2001-02-20 2011-03-30 ZymoGenetics, L.L.C. Antibodies that bind both BCMA and TACI
CN1195779C (zh) 2001-05-24 2005-04-06 中国科学院遗传与发育生物学研究所 抗人卵巢癌抗人cd3双特异性抗体
GB0115256D0 (en) 2001-06-21 2001-08-15 Babraham Inst Mouse light chain locus
WO2004042017A2 (en) 2002-10-31 2004-05-21 Genentech, Inc. Methods and compositions for increasing antibody production
CA2513113A1 (en) 2003-01-23 2004-08-05 Genentech, Inc. Methods for producing humanized antibodies and improving yield of antibodies or antigen binding fragments in cell culture
JP5010281B2 (ja) 2003-05-31 2012-08-29 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｅｐｃａｍに対する二重特異性抗体を含む薬学的組成物
JP2008501621A (ja) 2003-05-31 2008-01-24 マイクロメット アクツィエン ゲゼルシャフト Ｂ細胞関連疾患を処置するための二重特異性抗ｃｄ３、抗ｃｄ１９抗体構築物を含む薬学的組成物
DK1673398T3 (da) 2003-10-16 2011-04-18 Micromet Ag Multispecifikke, deimmuniserede CD3-bindere
US20060008548A1 (en) 2003-11-19 2006-01-12 Invista North America S.A R.L. Spinneret plate for producing a bulked continuous filament having a three-sided exterior cross-section and a convex six-sided central void
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
BRPI0511782B8 (pt) 2004-06-03 2021-05-25 Novimmune Sa anticorpos anti-cd3, uso e método de produção dos mesmos, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico isolada e vetor
SI2311874T1 (sl) 2004-07-22 2017-12-29 Erasmus University Medical Center Rotterdam Department of Cell Biology and Genetics Vezavne molekule
US8207303B2 (en) 2005-02-18 2012-06-26 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against CD30 lacking in fucosyl residues
US20160355591A1 (en) 2011-05-02 2016-12-08 Immunomedics, Inc. Subcutaneous anti-hla-dr monoclonal antibody for treatment of hematologic malignancies
AR057807A1 (es) 2005-09-12 2007-12-19 Novimmune Sa Formulaciones de anticuerpo anti-cd3
CA2625440C (en) 2005-10-11 2023-06-13 Micromet Ag Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
WO2007062090A2 (en) 2005-11-23 2007-05-31 Genentech, Inc. Methods and compositions related to b cell assays
US7862813B2 (en) 2006-07-29 2011-01-04 Bjork Jr Robert Lamar Bi-specific monoclonal antibody (specific for both CD3 and CD11b) therapeutic drug
JP2010524851A (ja) 2007-04-03 2010-07-22 マイクロメット アーゲー 種間特異的結合ドメイン
CA2682626A1 (en) 2007-04-03 2008-10-09 Micromet Ag Cross-species-specific bispecific binders
KR101589759B1 (ko) 2007-04-03 2016-01-29 암젠 리서치 (뮌헨) 게엠베하 종간 특이적 ｃｄ３―입실론 결합 도메인
KR101886610B1 (ko) 2007-06-01 2018-08-09 오픈 모노클로날 테크놀로지, 인코포레이티드 내생적 면역글로불린 유전자를 억제하고 트랜스제닉 인간 이디오타입 항체를 생산하기 위한 방법 및 조성물
AU2009239437B2 (en) 2008-04-25 2014-11-13 University Of Washington Levels of BCMA protein expression on B cells and use in diagnostic methods
US20100122358A1 (en) 2008-06-06 2010-05-13 Crescendo Biologics Limited H-Chain-only antibodies
RU2547600C2 (ru) 2008-10-01 2015-04-10 Эмджен Рисерч (Мьюник) Гмбх Pscaxcd3, cd19xcd3, c-metxcd3, эндосиалинxcd3, epcamxcd3, igf-1rxcd3 или fap-альфаxcd3 биспецифическое одноцепочечное антитело с межвидовой специфичностью
US9260522B2 (en) 2008-10-01 2016-02-16 Amgen Research (Munich) Gmbh Bispecific single chain antibodies with specificity for high molecular weight target antigens
US10981998B2 (en) 2008-10-01 2021-04-20 Amgen Research (Munich) Gmbh Cross-species-specific single domain bispecific single chain antibody
NZ591134A (en) 2008-10-01 2012-08-31 Micromet Ag Cross-species-specific (human and primate) bispecific single chain antibody that binds both cd3 (epsilon) epitope and prostate specific membrane antigen (pmsa)
JP6061469B2 (ja) 2009-03-10 2017-01-25 バイオジェン・エムエイ・インコーポレイテッドＢｉｏｇｅｎ ＭＡ Ｉｎｃ． 抗ｂｃｍａ抗体
GB0905023D0 (en) 2009-03-24 2009-05-06 Univ Erasmus Medical Ct Binding molecules
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
TR201906650T4 (tr) 2010-02-08 2019-05-21 Regeneron Pharma Ortak hafif zincirli fare.
EP3974453A3 (en) 2010-11-16 2022-08-03 Amgen Inc. Agents and methods for treating diseases that correlate with bcma expression
TWI679212B (zh) 2011-11-15 2019-12-11 美商安進股份有限公司 針對ｂｃｍａ之e3以及ｃｄ３的結合分子
WO2014022540A1 (en) 2012-08-02 2014-02-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
JOP20200236A1 (ar) 2012-09-21 2017-06-16 Regeneron Pharma الأجسام المضادة لمضاد cd3 وجزيئات ربط الأنتيجين ثنائية التحديد التي تربط cd3 وcd20 واستخداماتها
ES2937015T3 (es) 2012-11-01 2023-03-23 Max Delbrueck Centrum Fuer Molekulare Medizin Helmholtz Gemeinschaft Anticuerpo contra CD269 (BCMA)
TW201425336A (zh) 2012-12-07 2014-07-01 Amgen Inc Ｂｃｍａ抗原結合蛋白質
LT2931030T (lt) 2012-12-14 2020-11-10 Open Monoclonal Technology, Inc. Polinukleotidai, koduojantys graužikų antikūnus su žmogaus idiotipais, ir juos apimantys gyvūnai
PL2953972T3 (pl) 2013-02-05 2021-03-08 Engmab Sàrl Metoda wyboru przeciwciał przeciwko bcma
PE20190920A1 (es) * 2013-04-29 2019-06-26 Hoffmann La Roche Anticuerpos modificados de union a fcrn humano y metodos de utilizacion
WO2015095412A1 (en) 2013-12-19 2015-06-25 Zhong Wang Bispecific antibody with two single-domain antigen-binding fragments
EP3105252B1 (en) 2014-02-12 2019-07-24 Michael Uhlin Bispecific antibodies for use in stem cell transplantation
TWI754319B (zh) 2014-03-19 2022-02-01 美商再生元醫藥公司 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物
US10174095B2 (en) 2014-07-21 2019-01-08 Novartis Ag Nucleic acid encoding a humanized anti-BCMA chimeric antigen receptor
BR112017001579A2 (pt) 2014-07-25 2017-11-21 Cytomx Therapeutics Inc anticorpos anti-cd3, anticorpos anti-cd3 ativáveis, anticorpos anti-cd3 multiespecíficos, anticorpos anti-cd3 ativáveis multiespecíficos e métodos de uso dos mesmos
MX2017006626A (es) 2014-11-20 2017-08-21 Hoffmann La Roche Cadenas ligeras comunes y metodos de uso.
EP3023437A1 (en) 2014-11-20 2016-05-25 EngMab AG Bispecific antibodies against CD3epsilon and BCMA
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
AU2016308567B2 (en) * 2015-08-17 2022-10-27 Janssen Biotech, Inc. Anti-BCMA antibodies, bispecific antigen binding molecules that bind BCMA and CD3, and uses thereof
KR20190053835A (ko) 2016-06-21 2019-05-20 테네오바이오, 인코포레이티드 Cd3 결합 항체
WO2018052503A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Teneobio, Inc. Cd3 binding antibodies
GB201621591D0 (en) * 2016-12-19 2017-02-01 Ucb Biopharma Sprl Antibody molecules and method
JP7254699B2 (ja) 2016-12-21 2023-04-10 テネオバイオ， インコーポレイテッド 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体
KR20200018498A (ko) 2017-06-20 2020-02-19 테네오바이오, 인코포레이티드 항-bcma 중쇄-단독 항체
CN117567624A (zh) 2017-06-20 2024-02-20 特纳奥尼股份有限公司 仅有重链的抗bcma抗体
CA3068444A1 (en) 2017-06-30 2019-01-03 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-b-cell maturation antigen chimeric antigen receptors with human domains
BR112020007002A2 (pt) * 2017-10-10 2020-11-17 Sanofi anticorpos anti-cd38 e métodos de uso
MX2020006715A (es) 2017-12-27 2020-08-20 Teneobio Inc Anticuerpos especificos del heterodimero de cd3-delta/epsilon.
JP2021526517A (ja) 2018-05-24 2021-10-07 アヤラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ビスフルオロアルキル−１，４−ベンゾジアゼピノン化合物および免疫療法剤を含む組成物ならびにそれらの使用方法
JP7439046B2 (ja) 2018-07-20 2024-02-27 テネオツー・インコーポレイテッド Ｃｄ１９に結合する重鎖抗体
US20210355215A1 (en) * 2018-09-21 2021-11-18 Teneobio, Inc. Methods for purifying heterodimeric, multispecific antibodies
US20210277121A1 (en) 2018-09-29 2021-09-09 Mab-Legend Biotech Co., Ltd. Dual targeting antigen binding molecule
KR20210149076A (ko) * 2019-04-05 2021-12-08 테네오바이오, 인코포레이티드 Psma에 결합하는 중쇄 항체
AR119746A1 (es) 2019-06-14 2022-01-05 Teneobio Inc Anticuerpos multiespecíficos de cadena pesada que se unen a cd22 y cd3

Also Published As

Publication number Publication date
US11186639B2 (en) 2021-11-30
JP2023526774A (ja) 2023-06-23
US20210340255A1 (en) 2021-11-04
EP4121172A1 (en) 2023-01-25
US20230203161A1 (en) 2023-06-29
EP4186564A1 (en) 2023-05-31
PE20230431A1 (es) 2023-03-08
MX2022013453A (es) 2022-11-16
AU2022259766B2 (en) 2023-07-06
IL297601A (en) 2022-12-01
EP4186564A9 (en) 2024-01-10
BR112022021690A2 (pt) 2022-12-20
CR20230149A (es) 2023-05-25
KR20230005179A (ko) 2023-01-09
US11390681B2 (en) 2022-07-19
US20220089729A1 (en) 2022-03-24
DOP2022000229A (es) 2023-02-15
JP7462011B2 (ja) 2024-04-04
CN115715220A (zh) 2023-02-24
IL297644A (en) 2022-12-01
AU2022259766A1 (en) 2022-12-01
AU2021263448A1 (en) 2022-11-24
CA3176792A1 (en) 2021-11-04
US20220332820A1 (en) 2022-10-20
CN115894703A (zh) 2023-04-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7439046B2 (ja) Ｃｄ１９に結合する重鎖抗体
JP7462011B2 (ja) 重鎖定常領域が修飾された多重特異性重鎖抗体
JP2022526595A (ja) Ｐｓｍａに結合する重鎖抗体
TW202330622A (zh) 具有經修飾重鏈恆定區之多特異性重鏈抗體
KR20230038211A (ko) Bcma에 결합하는 다중특이적 항체
KR20230171952A (ko) 항-cd20 항체 및 car-t 구조
CA3211138A1 (en) Anti-psma antibodies and car-t structures
CA3214283A1 (en) Anti-cd19 antibodies and car-t structures
KR20230110303A (ko) 폴레이트 수용체 알파에 결합하는 중쇄 항체
TWI838621B (zh) 具有經修飾重鏈恆定區之多特異性重鏈抗體
KR20220167336A (ko) 변형된 중쇄 불변 영역을 갖는 다중특이적 중쇄 항체
BR122022022755A2 (pt) Anticorpos de cadeia pesada multispecíficos com regiões constantes de cadeia pesada modificadas
CN117120472A (zh) 抗cd19抗体及car-t结构

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230607

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230607

A871 Explanation of circumstances concerning accelerated examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871

Effective date: 20230607

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20230725

A711 Notification of change in applicant

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711

Effective date: 20230817

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821

Effective date: 20230817

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20231023

TRDD Decision of grant or rejection written
A01 Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01

Effective date: 20240227

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20240325

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 7462011

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150