KR20230038211A

KR20230038211A - Bcma에 결합하는 다중특이적 항체

Info

Publication number: KR20230038211A
Application number: KR1020237003291A
Authority: KR
Inventors: 나단 트린클라인; 캐서린 해리스; 하바니 말리크; 유트 셸렌버거; 오미드 바파; 알드레드 쉘리 포스
Original assignee: 테네오바이오, 인코포레이티드
Priority date: 2020-06-30
Filing date: 2021-06-30
Publication date: 2023-03-17
Also published as: US20230257473A1; CL2022003754A1; JP2023532129A; CO2023000808A2; IL299027A; WO2022006316A1; CN116472049A; AU2021300179A1; CR20220656A; MX2022016342A; EP4171750A1; PE20230464A1; BR112022027101A2; CA3189297A1

Abstract

BCMA에 결합하는 다중특이적, 인간 중쇄 항체(예: UniAb^TM), 및 이러한 항체의 제조 방법, 이러한 항체를 포함하는 조성물(약학적 조성물 포함), 및 BCMA의 발현을 특징으로 하는 장애를 치료하기 위한 이러한 항체의 용도가 개시된다.

Description

BCMA에 결합하는 다중특이적 항체

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2020년 6월 30일에 출원된 미국 가출원 제63/046,477호의 출원일에 대한 우선권 이익을 주장하며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

기술분야

본 발명은 BCMA에 결합하는 다중특이적, 인간 중쇄 항체(예: UniAb^TM)에 관한 것이다. 본 발명은 또한 이러한 항체의 제조 방법, 이러한 항체를 포함하는 조성물(약학적 조성물 포함), 및 BCMA의 발현을 특징으로 하는 장애를 치료하기 위한 이러한 항체의 용도에 관한 것이다.

B-세포 성숙 항원(BCMA)

종양 괴사 인자 수퍼패밀리 구성원 17(TNFRSF17)(UniProt Q02223)로도 알려진 BCMA는 형질세포와 형질모세포에서만 발현되는 세포 표면 수용체이다. BCMA는 종양 괴사 인자(TNF) 수퍼패밀리의 두 리간드인 APRIL(TNFSF13, TALL-2, 및 TRDL-1로도 알려진 증식 유도 리간드; BCMA에 대한 고친화성 리간드) 및 B 세포 활성화 인자(BAFF)(BLyS, TALL-1, THANK, zTNF4, TNFSF20, 및 D8Ertd387e로도 알려짐; BCMA에 대한 저친화성 리간드)에 대한 수용체이다. APRIL 및 BAFF는 BCMA에 결합하고 형질세포의 생존을 촉진하는 성장 인자이다. BCMA는 또한 인간 다발성 골수종(MM)의 악성 형질세포에서 높게 발현된다. BCMA에 결합하는 항체는 예를 들어 문헌[Gras et al., 1995, Int. Immunol. 7:1093-1106, WO200124811, 및 WO200124812]에 기재되어 있다. TACI과 교차 반응하는 항-BCMA 항체는 WO2002/066516에 기재되어 있다. BCMA 및 CD3에 대한 이중특이적 항체는 예를 들어 US 2013/0156769 A1 및 US 2015/0376287 A1에 기재되어 있다. 항-BCMA 항체-MMAE 또는 -MMAF 접합체는 다발성 골수종 세포의 사멸을 선택적으로 유도하는 것으로 보고된 바 있다(Tai et al., Blood 2014, 123(20): 3128-38). Ali 등(Blood 2016, 128(13):1688-700)은 임상 시험(#NCT02215967)에서, BCMA를 표적화 하는 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포가 인간 환자에서 다발성 골수종의 관해를 야기했다고 보고한 바 있다.

중쇄 항체

통상적인 IgG 항체에서, 중쇄와 경쇄의 회합은 부분적으로 경쇄 불변 영역과 중쇄의 CH1 불변 도메인 사이의 소수성 상호작용에 기인한다. 중쇄 프레임워크 2(FR2) 및 프레임워크 4(FR4) 영역에는 중쇄와 경쇄 사이의 소수성 상호작용에도 기여하는 추가 잔기가 있다.

그러나, 낙타과(낙타, 단봉 낙타, 및 라마를 포함하는 틸로포다 아목)의 혈청에는 쌍을 이룬 H-사슬만으로 구성된 주요 유형의 항체(중쇄만의 항체 또는 UniAb^TM)가 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 낙타과(Camelidae)(단봉낙타, 쌍봉 낙타, 글라마 라마, 과나코 라마, 알파카 라마, 및 비쿠냐 라마)의 UniAb^TM는 단일 가변 도메인(VHH), 힌지 영역, 및 전형적 항체의 CH2 및 CH3 도메인과 매우 상동성인 2개의 불변 도메인(CH2 및 CH3)으로 이루어진 고유의 구조를 가지고 있다. 이러한 UniAb^TM에는 불변 영역의 제1 도메인(CH1)이 없으며, 이는 게놈에 존재하지만 mRNA 처리 중에 제거된다. CH1 도메인은 경쇄의 불변 도메인에 대한 고정 위치이므로, 이 도메인의 부재는 UniAb^TM에서의 경쇄의 부재를 설명한다. 이러한 UniAb^TM는 통상적인 항체 또는 이의 단편으로부터 3개의 CDR에 의해 항원 결합 특이성과 높은 친화성을 부여하도록 자연적으로 진화하였다(Muyldermans, 2001; J Biotechnol 74:277-302; Revets et al., 2005; Expert Opin Biol Ther 5:111-124). 상어와 같은 연골 어류는 또한, 폴리펩티드 경쇄가 없고 전부 중쇄로 구성된, IgNAR로 명명된 독특한 유형의 면역글로불린을 진화시켰다. IgNAR 분자는 단일 중쇄 폴리펩티드의 가변 도메인(vNAR)을 생성하도록 분자 공학에 의해 조작될 수 있다(Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187-197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).

경쇄가 없는 중쇄만의 항체가 항원에 결합하는 능력은 1960년대에 확립되었다(Jaton et al. (1968) Biochemistry, 7, 4185-4195). 경쇄로부터 물리적으로 분리된 중쇄 면역글로불린은 사량체 항체에 비해 항원 결합 활성의 80%를 유지하였다. Sitia 등((1990) Cell, 60, 781-790)은 재배열된 마우스 μ 유전자로에서 CH1 도메인을 제거함 포유류 세포 배양에서 경쇄가 없는 중쇄만의 항체가 생성됨을 입증하였다. 생성된 항체는 VH 결합 특이성과 이펙터 기능을 유지하였다.

높은 특이성과 친화성을 갖는 중쇄 항체는 면역화를 통해 다양한 항원에 대해 생성될 수 있으며(van der Linden, R. H., et al. Biochim. Biophys. Acta. 1431, 37-46 (1999)), VHH 부분은 쉽게 클로닝되어 효모에서 발현될 수 있다(Frenken, L. G. J., et al. J. Biotechnol. 78, 11-1 (2000)). 이들의 발현, 용해도, 및 안정성 수준은 전형적인 F(ab) 또는 Fv 단편보다 훨씬 높다(Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)).

λ(람다) 경(L)쇄 유전자좌 및/또는 λ 및 κ(카파) L쇄 유전자좌가 기능적으로 침묵된 마우스 및 이러한 마우스에 의해 생성된 항체는 미국 특허 7,541,513호 및 8,367,888호에 기재되어 있다. 마우스 및 래트에서의 중쇄만의 항체의 재조합 생성은 예를 들어 문헌[WO 2006008548; 미국 출원 공개 20100122358호; Nguyen et al., 2003, Immunology; 109(1), 93-101; Br

ggemann et al., Crit. Rev. Immunol.; 2006, 26(5):377-90; 및 Zou et al., 2007, J Exp Med; 204(13): 3271-3283]에 보고된 바 있다. 징크 핑거 뉴클레아제의 배아 미세주입을 통한 녹아웃 래트의 생성은 문헌[Geurts et al., 2009, Science, 325(5939):433]에 기재되어 있다. 가용성 중쇄만의 항체 및 이러한 항체를 생성하는 이종 중쇄 유전자좌를 포함하는 유전자이식 설치류는 미국 특허 8,883,150호 및 9,365,655호에 기재되어 있다. 결합(표적화) 도메인으로서 단일-도메인 항체를 포함하는 CAR-T 구조는 예를 들어 문헌[Iri-Sofla et al., 2011, Experimental Cell Research 317:2630-2641 및 Jamnani et al., 2014, Biochim Biophys Acta, 1840:378-386]에 기재되어 있다.

본 발명의 양태는 BCMA에 결합하는 항체, 예컨대 UniAb^TM를 포함하는(이에 한정되지 않음) 중쇄 항체에 관한 것이다. 본 발명의 추가 양태는 이러한 항체의 제조 방법, 이러한 항체를 포함하는 조성물, 및 BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료에서의 이러한 항체의 용도에 관한 것이다.

본 발명의 양태는 BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서, 서열번호 3에 대해 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하는 다중특이적 항체를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서, CDR1 서열, CDR2 서열, 및 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하고, CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열의 조합은 서열번호 1 내지 3의 조합에 대해 적어도 85% 서열 동일성을 갖는, 다중특이적 항체를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서, 서열번호 1의 서열을 포함하는 CDR1 서열; 서열번호 2의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및 서열번호 3의 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하는 다중특이적 항체를 포함한다.

일부 구현예에서, CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VH 프레임워크에 존재한다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 중쇄만의 가변 영역이다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 서열번호 12에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 서열번호 12를 포함하는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 영역은 1가 또는 2가 배열이다.

일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 CH1 서열의 부재하에 중쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역 서열은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하지만, CH1 도메인을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함한다.

일부 구현예에서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함한다.

일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 중쇄만의 가변 영역과 CH2 도메인 사이에 위치한 힌지 영역 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역 서열은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역 서열은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함한다.

일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함한다.

일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 La 단백질에 결합하는 제2 결합 유닛을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 (a) (i) 서열번호 4 또는 7의 서열 중 어느 하나를 포함하는 CDR1 서열; 및 (ii) 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및 (iii) 서열번호 6 또는 8의 서열 중 어느 하나를 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) (i) 서열번호 9의 서열을 포함하는 CDR1 서열; 및 (ii) 서열번호 10의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및 (iii) 서열번호 11의 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 (i) 서열번호 4의 서열을 포함하는 CDR1 서열, 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 6의 서열을 포함하는 CDR3 서열; 또는 (i) 서열번호 7의 서열을 포함하는 CDR1 서열, 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 8의 서열을 포함하는 CDR3 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VH 프레임워크에 존재한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛의 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VL 프레임워크에 존재한다. 일부 구현예에서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V카파 프레임워크이다. 일부 구현예에서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V람다 프레임워크이다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 서열번호 14에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 서열번호 14의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 서열번호 15에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 17에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 서열번호 15의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 17의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 공통 폴리펩티드 서브유닛 상에 있고, 링커 서열에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 상이한 폴리펩티드 서브유닛 상에 있다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 CH1 도메인, 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함한다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 인간 V카파 불변 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 인간 V람다 불변 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 이중특이적이다.

본 발명의 양태는 (a) La 단백질에 결합하는 제1 결합 유닛으로서, (i) 인간 VH 프레임워크에 서열번호 4 또는 7의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 6 또는 8의 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (ii) 인간 VL 프레임워크에 서열번호 9의 CDR1 서열, 서열번호 10의 CDR2 서열, 및 서열번호 11의 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛; 및 (b) BCMA에 결합하는 제2 결합 유닛으로서, (i) 인간 VH 프레임워크에 서열번호 1의 CDR1 서열, 서열번호 2의 CDR2 서열, 및 서열번호 3의 CDR3 서열을 포함하는, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인을 포함하고, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 1가 또는 2가 배열인, 제2 결합 유닛을 포함하는 다중특이적 항체를 포함한다.

일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 공통 폴리펩티드 서브유닛 상에 있고, 링커 서열에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 상이한 폴리펩티드 서브유닛 상에 있다.

일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 (i) 서열번호 4의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 6의 CDR3 서열; 또는 (ii) 서열번호 7의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 8의 CDR3 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V카파 프레임워크이다. 일부 구현예에서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V람다 프레임워크이다. 일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 서열번호 14 또는 서열번호 15에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 서열번호 14 또는 서열번호 15의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 또는 서열번호 17에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 결합 유닛의 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 또는 서열번호 17의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 서열번호 12의 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 가변 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 서열번호 12의 서열을 포함하는 가변 영역 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 2가 배열이고, 링커 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 G4S 링커 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 제1 결합 유닛은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역은 CH1 도메인, 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함한다.

일부 구현예에서, 제1 결합 유닛은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 인간 V카파 불변 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 경쇄 불변 영역은 인간 V람다 불변 영역 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 제2 결합 유닛은 CH1 서열의 부재하에 중쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 중쇄 불변 영역 서열은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하지만, CH1 도메인을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함한다.

일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 항체는 이중특이적이다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 18의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 24의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 18의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 26의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 21의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 24의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 21의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 26의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 19의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 25의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 19의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 27의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 22의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 25의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서, (a) 서열번호 22의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; (b) 서열번호 27의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및 (c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자를 포함한다.

본 발명의 양태는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함하는 약학적 조성물을 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료 방법으로서, 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 약학적 조성물을 상기 장애가 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료용 의약의 제조에 있어서, 본원에 기재된 바와 같은 항체의 용도를 포함한다.

본 발명의 양태는 BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료에 사용하기 위한, 본원에 기재된 바와 같은 항체를 포함한다.

일부 구현예에서, 장애는 다발성 골수종(MM)이다. 일부 구현예에서, 장애는 자가면역 장애이다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애는 전신 홍반성 루푸스(SLE)이다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애는 류마티스 관절염(RA)이다. 일부 구현예에서, 자가면역 장애는 다발성 경화증(MS)이다.

본 발명의 양태는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터, 및 본원에 기재된 바와 같은 벡터를 포함하는 세포.

본 발명의 양태는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 생성하는 방법으로서, 본원에 기재된 바와 같은 세포를 항체의 발현이 허용되는 조건하에 성장시키는 단계, 및 세포로부터 항체를 단리하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다.

본 발명의 양태는 본원에 기재된 바와 같은 항체를 제조하는 방법으로서, BCMA로 UniRat 동물을 면역화하는 단계, 및 BCMA 결합 중쇄 서열을 확인하는 단계를 포함하는 방법을 포함한다.

본 발명의 양태는 치료를 필요로 하는 개체에게 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 약학적 조성물의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법을 포함한다.

이러한 양태 및 추가 양태는 실시예를 포함하여 본 명세서의 나머지 부분에서 추가로 설명될 것이다.

도 1 내지 6은 표시된 단백질의 아미노산 서열을 제공하는 표이다.
도 7a는 3개의 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 3쇄 항체유사 분자의 개략도이다. 제1 결합 유닛은 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛과 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛으로부터 형성된다. 제2 중쇄 폴리펩티드는 2가 배열의 중쇄만의 가변 영역 도메인을 포함하고, 이는 제2 결합 유닛을 제공한다.
도 7b는 3개의 폴리펩티드 서브유닛을 포함하는 3쇄 항체유사 분자의 개략도이다. 제1 결합 유닛은 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛과 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛으로부터 형성된다. 제2 중쇄 폴리펩티드는 1가 배열의 중쇄만의 가변 영역 도메인을 포함하고, 이는 제2 결합 유닛을 제공한다.
도 8a는 본원에 기재된 바와 같은 항-BCMA 세포외 결합 도메인을 포함하는 CAR-T 구조의 개략도이다.
도 8b는 표시된 세포주에서 시험된, 본원에 기재된 바와 같은 항-BCMA 세포외 결합 도메인을 포함하는 CAR 구성체의 항원 특이적 결합 및 활성화를 보여주는 그래프이다.
도 9a는 MM1.S 세포에 결합하는 시험 항체에 대한 평균 형광 강도(MFI)를 보여주는 그래프이다.
도 9b는 H929 세포에 결합하는 시험 항체에 대한 평균 형광 강도(MFI)를 보여주는 그래프이다.
도 10a는 BCMA 작용제, APRIL의 존재하의 BCMA에 대한 AntiX**BCMA_F7E 결합을 나타내는 A450-A570 값을 보여주는 그래프이다.
도 10b는 BCMA 작용제, APRIL의 존재하의 BCMA에 대한 AntiX**BCMA_F7E_F7E 결합을 나타내는 A450-A570 값을 보여주는 그래프이다.
도 10c는 BCMA 작용제, APRIL의 존재하의 BCMA에 대한 AntiX**GP120_F8A 결합을 나타내는 A450-A570 값을 보여주는 그래프이다.

본 발명의 실시는 달리 나타내지 않는 한 당업계의 기술 범위 내에 있는 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학, 및 면역학의 통상적인 기술을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌, 예컨대 문헌["Molecular Cloning: A Laboratory Manual", second edition (Sambrook et al., 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (M. J. Gait, ed., 1984); "Animal Cell Culture" (R. I. Freshney, ed., 1987); "Methods in Enzymology" (Academic Press, Inc.); "Current Protocols in Molecular Biology" (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, and periodic updates); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis et al., ed., 1994); "A Practical Guide to Molecular Cloning" (Perbal Bernard V., 1988); "Phage Display: A Laboratory Manual" (Barbas et al., 2001); Harlow, Lane and Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); 및 Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988)]에 충분히 설명되어 있다.

값의 범위가 제공되는 경우, 문맥에서 달리 명시하지 않는 한, 해당 범위의 상한과 하한 사이에서 하한의 10분의 1 단위까지의 각 중간 값 및 명시된 범위 내의 임의의 다른 명시된 값 또는 중간 값은 본 발명 내에 포함되는 것으로 이해된다. 더 작은 범위에 독립적으로 포함될 수 있는 이러한 더 작은 범위의 상한 및 하한도 명시된 범위에서 임의의 특별히 배제된 한계에 따라 본 발명 내에 포함된다. 명시된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 포함된 한계의 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 본 발명에 포함된다.

달리 나타내지 않는 한, 본원의 항체 잔기는 Kabat 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]).

하기 설명에서, 본 발명의 보다 철저한 이해를 제공하기 위해 다수의 특정 세부사항이 제시된다. 그러나, 이러한 특정 세부사항 중 하나 이상 없이 본 발명이 실시될 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다. 다른 예에서, 당업자에게 잘 알려진 특징 및 절차는 본 발명을 모호하게 하는 것을 피하기 위해 설명되지 않았다.

특허 출원 및 간행물을 포함하여 본 명세서 전반에 걸쳐 인용된 모든 참고문헌은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

I. 정의

"포함하는"은 언급된 요소가 조성물/방법/키트에 필요하지만 청구범위 내에서 조성물/방법/키트 등을 형성하기 위해 다른 요소가 포함될 수 있음을 의미한다.

"~로 본질적으로 이루어진"은 대상 발명의 기본적이고 신규한 특성(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 명시된 재료 또는 단계로 기술된 조성물 또는 방법의 범위를 제한하는 것을 의미한다.

"~로 이루어진"은 청구범위에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 성분을 조성물, 방법, 또는 키트에서 제외함을 의미한다.

본원의 항체 잔기는 Kabat 넘버링 시스템 및 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된다. 가변 도메인의 잔기(대략적으로 중쇄의 잔기 1~113)를 언급하는 경우 Kabat 넘버링 시스템이 일반적으로 사용된다(예를 들어, 문헌[Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). 면역글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 언급하는 경우 "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"가 일반적으로 사용된다(예를 들어, 상기 Kabat 등의 문헌에 보고된 EU 인덱스). "Kabat에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 본원에서 달리 언급하지 않는 한, 항체의 가변 도메인 내의 잔기 번호에 대한 언급은 Kabat 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에서 달리 언급하지 않는 한, 항체의 불변 도메인 내의 잔기 번호에 대한 언급은 EU 넘버링 시스템에 의한 잔기 넘버링을 의미한다.

면역글로불린이라고도 하는 항체는 통상적으로 적어도 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄를 포함하며, 중쇄 및 경쇄의 아미노 말단 도메인은 서열이 가변적이므로, 일반적으로 가변 영역 도메인, 또는 가변 중쇄(VH) 또는 가변 경쇄(VL) 도메인이라고 한다. 두 도메인은 통상적으로 회합하여 특이적 결합 영역을 형성하고, 본원에서 논의하겠지만, 특이적 결합은 중쇄만의 가변 서열로도 얻을 수 있으며, 다양한 비천연 배열의 항체가 당업계에 알려져 있고 사용된다.

"기능적" 또는 "생물학적으로 활성인" 항체 또는 항원 결합 분자(본원에 기재된 중쇄만의 항체 및 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 3쇄 항체유사 분자(TCA) 포함)는 구조적, 조절적, 생화학적, 또는 생물물리학적 이벤트에서 천연 활성 중 하나 이상을 발휘할 수 있는 것이다. 예를 들어, 기능적 항체 또는 다른 결합 분자, 예를 들어 TCA는 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 가질 수 있으며, 결합은 결과적으로 신호 전달 또는 효소 활성과 같은 세포 또는 분자 이벤트를 유도하거나 변경할 수 있다. 기능적 항체 또는 다른 결합 분자, 예를 들어 TCA는 또한 수용체의 리간드 활성화를 차단하거나 작용제 또는 길항제로 작용할 수 있다. 항체 또는 다른 결합 분자, 예를 들어 TCA가 천연 활성 중 하나 이상을 발휘하는 능력은 폴리펩티드 사슬의 적절한 폴딩 및 어셈블리를 비롯한 여러 요인에 따라 달라진다.

본원에서 "항체"라는 용어는 가장 넓은 의미로 사용되며, 구체적으로 단일클론 항체, 다클론 항체, 단량체, 이량체, 다량체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체), 중쇄만의 항체, 3쇄 항체, 3쇄 항체유사 분자(TCA), 단일쇄 Fc(scFv), 나노바디 등을 포함하며, 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 한, 항체 단편도 포함한다(Miller et al (2003) Jour. of Immunology 170:4854-4861). 항체는 뮤린 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 또는 다른 종에서 유래된 항체일 수 있다.

"항체"라는 용어는 전장 중쇄, 전장 경쇄, 온전한 면역글로불린 분자, 또는 이러한 폴리펩티드 서브유닛 중 임의의 것의 면역학적 활성 부분, 즉 관심 표적의 항원 또는 이의 일부에 면역특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 포함하는 폴리펩티드를 지칭할 수 있으며, 이러한 표적은 암세포, 또는 자가면역 질환과 관련된 자가면역 항체를 생성하는 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본원에 개시된 면역글로불린은 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA), 클래스(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2), 또는 서브클래스(감소 또는 강화된 이펙터 세포 활성을 제공하는 변경된 Fc 부분을 갖는 조작된 서브클래스 포함)일 수 있다. 대상 항체의 경쇄는 카파 경쇄(V카파) 또는 람다 경쇄(V람다)일 수 있다. 면역글로불린은 임의의 종으로부터 유래될 수 있다. 일 양태에서, 면역글로불린은 주로 인간에서 유래된 것이다.

본원에서 사용되는 "단일클론 항체"라는 용어는 실질적으로 동종인 항체의 집단(즉, 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연발생적 돌연변이를 제외하고는, 집단을 구성하는 개별 항체가 동일함)으로부터 수득된 항체를 지칭한다. 단일클론 항체는 매우 특이적으로, 단일 항원 부위에 대해 유도된다. 또한, 일반적으로 상이한 결정기(에피토프)에 대해 유도된 상이한 항체를 포함하는 통상적인 (다클론) 항체 제제와는 대조적으로, 각각의 단일클론 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대해 유도된다. 본 발명에 따른 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al. (1975) Nature 256:495]에서 처음 설명된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있으며, 또한 예를 들어 재조합 단백질 생성 방법을 통해 제조될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 4,816,567호 참조).

항체와 관련하여 사용되는 "가변"이라는 용어는 항체 가변 도메인의 특정 부분이 항체 간에 서열에 있어 광범위하게 다르고 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 나타낸다. 그러나, 가변성이 항체의 가변 도메인 전체에 고르게 분포되어 있지는 않다. 이는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두에서 초가변 영역이라고 하는 세 부분에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분을 프레임워크 영역(FR)이라고 한다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 β-시트 구조를 연결(일부 경우에는 그 일부를 형성)하는 루프를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된, 주로 β-시트 배열을 채택하는, 4개의 FR을 포함한다. 각 쇄의 초가변 영역은 FR에 의해 밀접하게 함께 유지되고, 다른 쇄로부터의 초가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만, 항체 의존성 세포매개 세포독성(ADCC)에 대한 항체의 참여와 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낸다.

본원에서 사용되는 "초가변 영역"이라는 용어는 항원 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 초가변 영역은 일반적으로 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기(예를 들어, 중쇄 가변 도메인의 잔기 31~35(H1), 50~65(H2), 및 95~102(H3); 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)] 및/또는 중쇄 가변 도메인의 "초가변 루프" 잔기 26~32(H1), 53~55(H2), 및 96~101(H3)로부터의 잔기; 문헌[Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)])를 포함한다.

용어 "CDR" 및 이의 복수형 "CDRs"는 상보성 결정 영역(CDR)을 지칭하며, 그중 3개는 경쇄 가변 영역(CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3)의 결합 특징을 구성하고, 3개는 중쇄 가변 영역(CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3)의 결합 특징을 구성한다. CDR은 항체 분자의 기능적 활성에 기여하며, 스캐폴딩 또는 프레임워크 영역을 포함하는 아미노산 서열에 의해 분리된다. 정확한 정의의 CDR 경계 및 길이는 상이한 분류 및 넘버링 시스템에 영향을 받는다.

예시적인 CDR 명칭이 본원에 제시되어 있지만, 당업자는 서열 가변성 기반의 가장 일반적으로 사용되는 Kabat 정의(문헌["Zhao et al. A germline knowledge based computational approach for determining antibody complementarity determining regions." Mol Immunol. 2010;47:694-700] 참조)를 포함하여 다수의 CDR 정의가 일반적으로 사용되고 있음을 이해할 것이다. Chothia 정의는 구조적 루프 영역의 위치를 기반으로 한다(Chothia et al. "Conformations of immunoglobulin hypervariable regions." Nature. 1989; 342:877-883). 관심 있는 대체 CDR 정의는 문헌[Honegger, "Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool." J Mol Biol. 2001;309:657-670; Ofran et al. "Automated identification of complementarity determining regions (CDRs) reveals peculiar characteristics of CDRs and B cell epitopes." J Immunol. 2008;181:6230-6235; Almagro "Identification of differences in the specificity-determining residues of antibodies that recognize antigens of different size: implications for the rational design of antibody repertoires." J Mol Recognit. 2004;17:132-143; 및 Padlanet al. "Identification of specificity-determining residues in antibodies." Faseb J. 1995;9:133-139]에 개시된 것들을 제한 없이 포함하며, 각각의 문헌은 참조로 본원에 구체적으로 포함된다.

하나의 특정 구현예에서, "CDR"은 문헌[Lefranc, MP et al., IMGT, the international ImMunoGeneTics database, Nucleic Acids Res., 27:209-212 (1999)]에 정의된 바와 같은 항체의 상보성 결정 영역을 의미한다.

"프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 초가변 영역/CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.

"중쇄만의 항체" 및 "중쇄 항체"라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 가장 넓은 의미에서, 통상적인 항체의 경쇄가 결여된 항체를 지칭한다. 이 용어는 구체적으로, CH1 도메인의 부재하에 VH 항원 결합 도메인 및 CH2 및 CH3 불변 도메인을 포함하는 동종이량체 항체; 이러한 항체의 기능적 (항원 결합) 변이체, 가용성 VH 변이체, 1개의 가변 도메인(V-NAR) 및 5개의 C-유사 불변 도메인(C-NAR)을 포함하는 Ig-NAR 및 이의 기능적 단편; 및 가용성 단일 도메인 항체(sUniDab^TM)를 제한 없이 포함한다. 일 구현예에서, 중쇄만의 항체는 프레임워크 1, CDR1, 프레임워크 2, CDR2, 프레임워크 3, CDR3, 및 프레임워크 4로 구성된 가변 영역 항원 결합 도메인으로 구성된다. 다른 구현예에서, 중쇄만의 항체는 CH1 도메인의 부재하에, 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부 및 CH2 및 CH3 도메인으로 구성된다. 다른 구현예에서, 중쇄만의 항체는 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부, 및 CH2 도메인으로 구성된다. 추가 구현예에서, 중쇄만의 항체는 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부, 및 CH3 도메인으로 구성된다. CH2 및/또는 CH3 도메인이 절단된 중쇄만의 항체가 또한 본원에 포함된다. 추가 구현예에서, 중쇄만의 항체는 항원 결합 도메인, 및 적어도 하나의 CH(CH1, CH2, CH3, 또는 CH4) 도메인으로 구성되지만, 힌지 영역은 없다. 추가 구현예에서, 중쇄만의 항체는 항원 결합 도메인, 적어도 하나의 CH(CH1, CH2, CH3, 또는 CH4) 도메인, 및 힌지 영역의 적어도 일부로 구성된다. 중쇄만의 항체는 2개의 중쇄가 이황화 결합되거나 달리 공유적으로 또는 비공유적으로 서로 부착된 이량체 형태일 수 있다. 중쇄만의 항체는 IgG 서브클래스에 속할 수 있지만, IgM, IgA, IgD, 및 IgE 서브클래스와 같은 다른 서브클래스도 본원에 포함된다. 특정 구현예에서, 중쇄 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 서브타입, 특히 IgG1 또는 IgG4 서브타입이다. 일 구현예에서, 중쇄 항체는 CH 도메인 중 하나 이상이 항체의 이펙터 기능을 변경하도록 변형된 IgG4 서브타입이다. 일 구현예에서, 중쇄 항체는 CH 도메인 중 하나 이상이 항체의 이펙터 기능을 변경하도록 변형된 IgG1 서브타입이다. 이펙터 기능을 변경하는 CH 도메인의 변형은 본원에 추가로 설명된다. 중쇄 항체의 비제한적인 예는 예를 들어 WO2018/039180에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

일부 구현예에서, 본원의 항체(예를 들어, 중쇄만의 항체)는 키메라 항원 수용체(CAR)의 결합(표적화) 도메인으로서 사용된다. 이 정의는 구체적으로 인간 면역글로불린 유전자이식 래트(UniRat^TM)에 의해 생성되는 UniAb^TM라고 하는 중쇄만의 항체를 포함한다. UniAb^TM의 가변 영역(VH)은 UniDab^TM라고 하며, 다중특이성, 증가된 효능 및 연장된 반감기를 갖는 신규 치료제의 개발을 위해 Fc 영역 또는 혈청 알부민에 연결될 수 있는 다용도의 빌딩 블록이다. 동종이량체 UniAb^TM는 경쇄가 없고 따라서 VL 도메인이 없기 때문에, 항원은 하나의 단일 도메인, 즉 중쇄 항체의 중쇄의 가변 도메인(항원 결합 도메인)(VH 또는 VHH)에 의해 인식된다. 일부 구현예에서, 본원의 항체는 제1 관심 항원(예를 들어, 표적 세포 상의 항원, 예를 들어 BCMA)에 대한 결합 친화성을 갖는 제1 결합 유닛, 및 제2 관심 항원(예를 들어, 범용 키메라 항원 수용체(CAR) 복합체 상의 항원)에 대한 결합 친화성을 갖는 제2 결합 유닛을 포함하는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 항체이다. 이와 같이, 일부 구현예에서, 본원에 기재된 항체는 특정 항원 표적(예를 들어, BCMA)에 대한 결합 친화성을 제공함으로써 범용 CAR 복합체를 기능화할 수 있다.

본원에서 사용되는 "온전한 항체 사슬"은 전장 가변 영역 및 전장 불변 영역(Fc)을 포함하는 것이다. 온전한 "통상적인" 항체는 온전한 경쇄 및 온전한 중쇄를 포함할 뿐만 아니라, 분비된 IgG의 경우 경쇄 불변 도메인(CL) 및 중쇄 불변 도메인, CH1, 힌지, CH2 및 CH3을 포함할 수 있다. IgM 또는 IgA와 같은 다른 이소형은 다른 CH 도메인을 가질 수 있다. 불변 도메인은 천연 서열 불변 도메인(예를 들어, 인간 천연 서열 불변 도메인) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 온전한 항체는 하나 이상의 "이펙터 기능"을 가질 수 있으며, 이는 항체의 Fc 불변 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 의미한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 및 세포 표면 수용체의 하향 조절을 포함한다. 불변 영역 변이체는 이펙터 프로파일, Fc 수용체에 대한 결합 등을 변경하는 것들을 포함한다.

중쇄의 Fc(불변 도메인)의 아미노산 서열에 따라, 항체 및 다양한 항원 결합 단백질은 상이한 클래스로서 제공될 수 있다. 중쇄 Fc 영역에는 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM의 다섯 가지 주요 클래스가 있으며, 이들 중 일부는 "서브클래스"(이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 더 분류될 수 있다. 상이한 클래스의 항체에 상응하는 Fc 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ로 지칭될 수 있다. 상이한 클래스의 면역글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배열은 잘 알려져 있다. Ig 형태는 힌지-변형 형태 또는 힌지 없는 형태를 포함한다(Roux et al (1998) J. Immunol. 161:4083-4090; Lund et al (2000) Eur. J. Biochem. 267:7246-7256; US 2005/0048572; US 2004/0229310). 모든 척추동물 종의 항체 경쇄는 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 κ(카파) 및 λ(람다)라는 두 가지 유형 중 하나로 지정될 수 있다. 본 발명의 구현예에 따른 항체는 카파 경쇄 서열 또는 람다 경쇄 서열을 포함할 수 있다.

"기능적 Fc 영역"은 천연-서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 보유한다. 이펙터 기능의 비제한적인 예는 C1q 결합; CDC; Fc-수용체 결합; ADCC; ADCP; 세포 표면 수용체(예를 들어, B-세포 수용체)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 수용체, 예를 들어 FcγRI; FcγRIIA; FcγRIIB1; FcγRIIB2; FcγRIIIA; FcγRIIIB 수용체, 및 저친화성 FcRn 수용체와 상호작용하기 위해 Fc 영역을 필요로 하며; 당업계에 알려진 다양한 분석법을 사용하여 평가할 수 있다. "죽은" 또는 "침묵된" Fc는 예를 들어 혈청 반감기 연장과 관련하여 활성을 유지하도록 돌연변이되었지만, 고친화성 Fc 수용체를 활성화하지 않거나 Fc 수용체에 대해 감소된 친화도를 갖는 것이다.

"천연-서열 Fc 영역"은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 천연-서열 인간 Fc 영역은 예를 들어 천연-서열 인간 IgG1 Fc 영역(비-A 및 A 동종이형); 천연-서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연-서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연-서열 인간 IgG4 Fc 영역, 뿐만 아니라 이의 자연발생적 변이체를 포함한다.

"변이체 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형, 바람직하게는 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 천연-서열 Fc 영역의 아미노산 서열과는 다른 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게는, 변이체 Fc 영역은 천연-서열 Fc 영역 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어 천연-서열 Fc 영역 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역에 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게는 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 바람직하게는 천연-서열 Fc 영역 및/또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 가장 바람직하게는 적어도 약 90% 상동성, 더 바람직하게는 적어도 약 95% 상동성을 가질 것이다.

변이체 Fc 서열은 EU 인덱스 위치 234, 235, 및 237에서 FcγRI 결합을 감소시키기 위해 CH2 영역에 3개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다(문헌[Duncan et al., (1988) Nature 332:563] 참조). EU 인덱스 위치 330 및 331의 보체 C1q 결합 부위에서 2개의 아미노산 치환은 보체 고정을 감소시킨다(문헌[Tao et al., J. Exp. Med. 178:661 (1993) 및 Canfield and Morrison, J. Exp. Med. 173:1483 (1991)] 참조). 위치 233~236의 인간 IgG1 또는 IgG2 잔기로의 치환 및 위치 327, 330, 및 331의 IgG4 잔기로의 치환은 ADCC 및 CDC를 크게 감소시킨다(예를 들어, 문헌[Armour KL. et al., 1999 Eur J Immunol. 29(8):2613-24; 및 Shields RL. et al., 2001. J Biol Chem. 276(9):6591-604] 참조). 인간 IgG4 Fc 아미노산 서열(UniProtKB No. P01861)은 본원에서 서열번호 28로 제공된다. 침묵된 IgG1은 예를 들어 문헌[Boesch, A.W., et al., "Highly parallel characterization of IgG Fc binding interactions." MAbs, 2014. 6(4): p. 915-27]에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

이황화 결합을 형성할 수 있는 영역이 결실된 것, 또는 천연 Fc의 N-말단에서 특정 아미노산 잔기가 제거된 것, 또는 천연 Fc의 N-말단에 메티오닌 잔기가 추가된 것을 포함하여, 다른 Fc 변이체가 가능하다. 따라서, 일부 구현예에서, 결합 화합물의 하나 이상의 Fc 부분은 이황화 결합을 제거하기 위해 힌지 영역에 하나 이상의 돌연변이를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, Fc의 힌지 영역은 완전히 제거될 수 있다. 또 다른 구현예에서, 결합 화합물은 Fc 변이체를 포함할 수 있다.

또한, Fc 변이체는 보체 결합 또는 Fc 수용체 결합을 일으키기 위해 아미노산 잔기를 치환(돌연변이)시키거나 결실시키거나 추가함으로써 이펙터 기능을 제거하거나 실질적으로 감소시키도록 구성될 수 있다. 비제한적인 예를 들어, 결실은 C1q-결합 부위와 같은 보체-결합 부위에서 발생할 수 있다. 면역글로불린 Fc 단편의 이러한 서열 유도체를 제조하는 기술은 국제 특허 공보 WO 97/34631호 및 WO 96/32478호에 개시되어 있다. 또한, Fc 도메인은 인산화, 황산화, 아실화, 글리코실화, 메틸화, 파르네실화, 아세틸화, 아미드화 등에 의해 변형될 수 있다.

일부 구현예에서, 항체는 야생형 인간 IgG4의 힌지 영역 서열(서열번호 32)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 돌연변이 S228P를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인 서열(서열번호 36)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인 서열(서열번호 37)을 포함한다.

일부 구현예에서, 항체는 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인 서열(서열번호 38)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인 서열(서열번호 39)을 포함하며, 이는 본원에서 선택적으로 IgG4 CH3 노브 서열로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인 서열(서열번호 40)을 포함하며, 이는 본원에서 선택적으로 IgG4 CH3 홀 서열로 지칭될 수 있다. 본원에 기재된 IgG4 CH3 돌연변이는 임의의 적합한 방식으로 항체 이량체에서 제1 단량체의 제1 중쇄 불변 영역 상에 "노브"를 배치하고 항체 이량체에서 제2 단량체의 제2 중쇄 불변 영역 상에 "홀"을 배치함으로써 항체에서 중쇄 폴리펩티드 서브유닛의 목적하는 쌍의 적절한 쌍 형성(이종이량체화)을 촉진하도록 이용될 수 있다.

상기 확인된 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인 돌연변이는 임의의 조합으로 본 발명의 항체에 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 S228P 돌연변이, F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 및 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 Fc 영역을 포함하는 중쇄 폴리펩티드 서브유닛(노브)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 S228P 돌연변이, F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 Fc 영역을 포함하는 중쇄 폴리펩티드 서브유닛(홀)을 포함한다.

"Fc-영역 포함 항체"라는 용어는 Fc 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 정제 중에 또는 항체를 암호화하는 핵산의 재조합 조작에 의해 제거될 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 Fc 영역을 갖는 항체는 K447이 있거나 없는 항체를 포함할 수 있다.

본 발명의 양태는 이중특이적, 삼중특이적 등을 제한 없이 포함하는 다중특이적 배열을 갖는 결합 화합물을 포함한다. 매우 다양한 방법 및 단백질 배열이 이중특이적 단일클론 항체(BsMAB), 삼중특이적 항체 등에서 알려져 있고 사용된다.

본 발명의 양태는 1가 또는 2가 배열의 중쇄만의 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 중쇄만의 가변 영역 도메인과 관련하여 본원에서 사용되는 "1가 배열"이라는 용어는 단 하나의 중쇄만의 가변 영역 도메인이 단일 결합 부위를 갖고 존재함을 의미한다(도 7b 참조). 대조적으로, 중쇄만의 가변 영역 도메인과 관련하여 본원에서 사용되는 "2가 배열"이라는 용어는 2개의 중쇄만의 가변 영역 도메인이 존재하고(각각 단일 결합 부위를 가짐), 링커 서열에 의해 연결되어 있음을 의미한다(도 7a 참조). 링커 서열의 비제한적인 예는 본원에서 추가로 논의되며, 다양한 길이의 GS 링커 서열을 제한 없이 포함한다. 중쇄만의 가변 영역이 2가 배열인 경우, 2개의 중쇄만의 가변 영역 도메인 각각은 동일한 항원에 대해, 또는 상이한 항원에 대해(예를 들어, 동일한 단백질 상의 상이한 에피토프; 2개의 상이한 단백질 등에 대해) 결합 친화성을 가질 수 있다. 그러나, 특별히 달리 언급하지 않는 한, "2가 배열"인 것으로 표시되는 중쇄만의 가변 영역은 링커 서열에 의해 연결된 2개의 동일한 중쇄만의 가변 영역 도메인을 포함하고, 2개의 동일한 중쇄만의 가변 영역 도메인 각각은 동일한 표적 에피토프에 대한 결합 친화성을 갖는 것으로 이해된다.

2개 이상의 항체의 가변 도메인을 재조합적으로 융합함으로써 다가의 인공 항체를 생성하는 다양한 방법이 개발되었다. 일부 구현예에서, 폴리펩티드 상의 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 폴리펩티드 링커에 의해 연결된다. 이러한 폴리펩티드 링커의 하나의 비제한적인 예는 4개의 글리신 잔기에 이어 1개의 세린 잔기의 아미노산 서열을 갖는 GS 링커이며, 서열은 n번 반복되고, n은 1 내지 약 10까지의, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9의 정수이다. 이러한 링커의 비제한적인 예는 GGGGS(서열번호 34)(n=1) 및 GGGGSGGGGS(서열번호 35)(n=2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 중쇄만의 가변 영역 도메인 및 제2 중쇄만의 가변 영역 도메인은 항체의 동일한 중쇄 폴리펩티드 서브유닛 상에서 서로 연결되어 중쇄만의 가변 영역 도메인의 2가 배열을 형성한다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 항체의 동일한 중쇄 폴리펩티드 서브유닛 상에서 서로 연결되어(즉, 항체의 공통 폴리펩티드 서브유닛 상에 배치되어) 중쇄 및 경쇄 가변 영역 도메인의 scFv 배열을 형성한다. 일부 구현예에서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 항체의 상이한 폴리펩티드 서브유닛 상에 존재하여 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역의 통상적인 항체 배열을 갖는 결합 유닛을 형성한다. 다른 적합한 링커가 또한 사용될 수 있고, 예를 들어 문헌[Chen et al., Adv Drug Deliv Rev. 2013 October 15; 65(10): 1357-69]에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

"3쇄 항체유사 분자" 또는 "TCA"라는 용어는 3개의 폴리펩티드 서브유닛(그중 2개는 단일클론 항체의 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄, 또는 항원 결합 영역 및 적어도 하나의 CH 도메인을 포함하는, 이러한 항체 사슬의 기능적 항원 결합 단편을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어짐)을 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어진 항체유사 분자를 지칭하는 것으로 본원에서 사용된다. 이 중쇄/경쇄 쌍은 제1 항원에 대한 결합 특이성을 갖는다. 제3 폴리펩티드 서브유닛은 CH1 도메인의 부재하에 CH2 및/또는 CH3 및/또는 CH4 도메인을 포함하는 Fc 부분, 및 제2 항원의 에피토프 또는 제1 항원의 상이한 에피토프에 결합하는 하나 이상의 항원 결합 도메인(예를 들어, 2개의 항원 결합 도메인)을 포함하는 중쇄만의 항체를 포함하거나, 이로 본질적으로 이루어지거나, 이로 이루어지며, 이러한 결합 도메인은 항체 중쇄 또는 경쇄의 가변 영역으로부터 유래되거나 그와 서열 동일성을 갖는다. 이러한 가변 영역의 부분은 V_H 및/또는 V_L 유전자 분절, D 및 J_H 유전자 분절, 또는 J_L 유전자 분절에 의해 암호화될 수 있다. 가변 영역은 재배열된 V_HDJ_H, V_LDJ_H, V_HJ_L, 또는 V_LJ_L 유전자 분절에 의해 암호화될 수 있다. TCA 단백질은 상기 정의된 바와 같은 중쇄만의 항체를 사용한다.

TCA 결합 화합물은, 본원에서 사용되는 바와 같이 중쇄 불변 영역 CH2 및/또는 CH3 및/또는 CH4를 포함하지만 CH1 도메인을 포함하지 않는 단일쇄 항체를 의미하는 "중쇄만의 항체" 또는 "중쇄 항체" 또는 "중쇄 폴리펩티드"를 사용한다. 일 구현예에서, 중쇄 항체는 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부, 및 CH2 및 CH3 도메인으로 구성된다. 다른 구현예에서, 중쇄 항체는 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부, 및 CH2 도메인으로 구성된다. 추가 구현예에서, 중쇄 항체는 항원 결합 도메인, 힌지 영역의 적어도 일부, 및 CH3 도메인으로 구성된다. CH2 및/또는 CH3 도메인이 절단된 중쇄 항체가 또한 본원에 포함된다. 추가 구현예에서, 중쇄는 항원 결합 도메인, 및 적어도 하나의 CH(CH1, CH2, CH3, 또는 CH4) 도메인으로 구성되지만, 힌지 영역은 없다. 중쇄만의 항체는 2개의 중쇄가 이황화 결합되거나 달리 공유적으로 또는 비공유적으로 서로 부착된 이량체 형태일 수 있으며, 폴리펩티드 사슬 사이의 적절한 쌍 형성을 용이하게 하기 위해 CH 도메인 중 2개 이상 사이에 비대칭 인터페이스를 임의로 포함할 수 있다. 중쇄 항체는 IgG 서브클래스에 속할 수 있지만, IgM, IgA, IgD, 및 IgE 서브클래스와 같은 다른 서브클래스도 본원에 포함된다. 특정 구현예에서, 중쇄 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 서브타입, 특히 IgG1 서브타입 또는 IgG4 서브타입이다. TCA 결합 화합물의 비제한적인 예는 예를 들어 WO2017/223111 및 WO2018/052503에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

중쇄 항체는 낙타과, 예를 들어 낙타 및 라마에 의해 생성된 IgG 항체의 약 1/4을 구성한다(Hamers-Casterman C., et al. Nature. 363, 446-448 (1993)). 이러한 항체는 2개의 중쇄에 의해 형성되지만 경쇄는 없다. 결과적으로, 가변 항원 결합 부분은 VHH 도메인으로 지칭되며, 길이가 약 120개 아미노산에 불과한 가장 작은 자연발생적, 온전한 항원 결합 부위를 나타낸다(Desmyter, A., et al. J. Biol. Chem. 276, 26285-26290 (2001)). 높은 특이성과 친화성을 갖는 중쇄 항체는 면역화를 통해 다양한 항원에 대해 생성될 수 있으며(van der Linden, R. H., et al. Biochim. Biophys. Acta. 1431, 37-46 (1999)), VHH 부분은 쉽게 클로닝되어 효모에서 발현될 수 있다(Frenken, L. G. J., et al. J. Biotechnol. 78, 11-1 (2000)). 이들의 발현, 용해도, 및 안정성 수준은 전형적인 F(ab) 또는 Fv 단편보다 훨씬 높다(Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)). 상어는 또한 항체에 VNAR이라고 하는 단일 VH-유사 도메인을 갖는 것으로 나타났다(Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187-197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).

본원에서 사용되는 "BCMA"라는 용어는 분화된 형질세포에서 우선적으로 발현되는 종양 괴사 수용체 수퍼패밀리의 구성원인, BCMA, CD269, 및 TNFRSF17(UniProt Q02223)로도 알려진 인간 B 세포 성숙 항원에 관한 것이다. 인간 BCMA의 세포외 도메인은 아미노산 1~54(또는 5~51)의 UniProt에 따라 구성된다. "BCMA"라는 용어는 임의의 인간 또는 비인간 동물 종의 BCMA 단백질을 포함하며, 구체적으로 인간 BCMA뿐만 아니라 비인간 동물의 BCMA를 포함한다.

"항-BCMA 중쇄만의 항체" 및 "BCMA 중쇄만의 항체"라는 용어는 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 상기 정의된 바와 같은 중쇄만의 항체를 지칭하는 것으로 본원에서 사용된다. 본원에서 사용되는 "인간 BCMA"라는 용어는 공급원 또는 제조 방식에 관계없이, 인간 BCMA(UniProt Q02223)의 임의의 변이체, 동형체, 및 종 상동체를 포함한다. 따라서, "인간 BCMA"는 세포에 의해 자연적으로 발현된 인간 BCMA, 및 인간 BCMA 유전자로 형질감염된 세포에서 발현된 BCMA를 포함한다.

"항-BCMA 중쇄만의 항체", "BCMA 중쇄만의 항체", "항-BCMA 중쇄 항체", 및 "BCMA 중쇄 항체"라는 용어는 상기 정의된 바와 같은 인간 BCMA를 포함하는 BCMA에 면역특이적으로 결합하는 상기 정의된 바와 같은 중쇄만의 항체를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이 정의는 상기 정의된 바와 같은 인간 항-BCMA UniAb^TM 항체를 생성하는 UniRat^TM를 포함하여, 인간 면역글로불린을 발현하는 유전자이식 래트 또는 유전자이식 마우스와 같은 유전자이식 동물에 의해 생성된 인간 중쇄 항체를 제한 없이 포함한다.

기준 폴리펩티드 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)"은 서열을 정렬하고 최대 백분율의 서열 동일성을 달성하기 위해, 필요한 경우 갭을 도입한 후, 기준 폴리펩티드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의되며, 임의의 보존적 치환은 서열 동일성의 일부분으로 고려하지 않는다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어와 같이 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여, 당업계의 기술 내에 있는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전체 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 서열 정렬을 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다. 그러나 본원의 목적을 위해, 아미노산 서열 동일성 % 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 ALIGN-2를 사용하여 생성된다.

"단리된" 항체는 자연 환경의 성분으로부터 확인되어 분리 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단적 또는 치료적 사용을 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬, 및 기타 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 바람직한 구현예에서, 항체는 (1) Lowry 방법에 의해 측정시 95 중량% 초과, 가장 바람직하게는 99 중량% 초과의 항체까지, (2) 스피닝 컵 서열분석기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 바람직하게는, 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건에서 SDS-PAGE에 의해 균질하게 정제될 것이다. 단리된 항체는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에 재조합 세포 내의 제자리(in situ) 항체를 포함한다. 그러나 일반적으로 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조된다.

본 발명의 항체는 다중특이적 항체를 포함한다. 다중특이적 항체는 하나 초과의 결합 특이성을 갖는다. "다중특이적"이라는 용어는 구체적으로 "이중특이적" 및 "삼중특이적", 뿐만 아니라 고차 독립 특이적 결합 친화성, 예컨대 고차 폴리에피토프 특이성, 뿐만 아니라 4가 항체 및 항체 단편을 포함한다. "다중특이적 항체", "다중특이적 중쇄만의 항체", "다중특이적 중쇄 항체", "다중특이적 UniAb^TM", 및 "다중특이적 결합 화합물"이라는 용어는 가장 넓은 의미로 본원에서 사용되며, 하나 초과의 결합 특이성을 갖는 모든 항체를 포함한다. 본 발명의 다중특이적 항-BCMA 항체는 구체적으로 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 하나의 단일 에피토프, 및 예를 들어 CD3 단백질과 같은 다른 단백질 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명의 다중특이적 항-BCMA 항체는 구체적으로 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 2개 이상의 비중첩 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명의 다중특이적 항-BCMA 항체는 또한 구체적으로 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 에피토프, 및 예를 들어 인간 La 단백질과 같은 다른 단백질 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 본 발명의 다중특이적 항-BCMA 항체는 또한 구체적으로 인간 BCMA 단백질과 같은 BCMA 단백질 상의 2개 이상의 비중첩 또는 부분 중첩 에피토프, 및 예를 들어 인간 La 단백질과 같은 다른 단백질 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다.

본 발명의 항체는 하나의 결합 특이성을 갖는 단일특이적 항체를 포함한다. 단일특이적 항체는 구체적으로 단일 결합 특이성을 포함하는 항체, 뿐만 아니라 동일한 결합 특이성을 갖는 하나 초과의 결합 유닛을 포함하는 항체를 포함한다. "단일특이적 항체", "단일특이적 중쇄만의 항체", "단일특이적 중쇄 항체", 및 "단일특이적 UniAb^TM"라는 용어는 가장 넓은 의미로 본원에서 사용되며, 하나의 결합 특이성을 갖는 모든 항체를 포함한다. 본 발명의 단일특이적 중쇄 항-BCMA 항체는 구체적으로 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 하나의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 항체를 포함한다(1가 및 단일특이적). 본 발명의 단일특이적 중쇄 항-BCMA 항체는 또한 구체적으로 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 에피토프에 면역특이적으로 결합하는 하나 초과의 결합 유닛을 갖는 항체(예를 들어, 다가 항체)를 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 구현예에 따른 단일특이적 항체는 2개의 중쇄만의 항원 결합 도메인을 포함하는 중쇄만의 가변 영역(즉, 탠덤 배열의 항-BCMA 중쇄만의 가변 영역)을 포함할 수 있으며, 2개의 항원 결합 도메인 각각은 BCMA 단백질 상의 동일한 에피토프에 결합한다(즉, 2가 및 단일특이적).

"에피토프"는 단일 항체 분자가 결합하는 항원 분자의 표면 상의 부위이다. 일반적으로, 항원은 몇몇 또는 많은 상이한 에피토프를 가지고 있으며, 많은 상이한 항체와 반응한다. 이 용어는 구체적으로 선형 에피토프 및 입체형태 에피토프를 포함한다.

"에피토프 매핑"은 표적 항원 상의 항체의 결합 부위 또는 에피토프를 확인하는 프로세스이다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체형태 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질 내 아미노산의 연속 서열에 의해 형성된다. 입체형태 에피토프는 단백질 서열 내 불연속적인, 그러나 단백질 폴딩시 3차원 구조로 합쳐지는 아미노산으로 형성된다.

"폴리에피토프 특이성"은 동일하거나 상이한 표적(들) 상의 2개 이상의 상이한 에피토프에 특이적으로 결합하는 능력을 의미한다. 위에서 언급한 바와 같이, 본 발명은 구체적으로 폴리에피토프 특이성을 갖는 항-BCMA 중쇄 항체, 즉 인간 BCMA와 같은 BCMA 단백질 상의 하나 이상의 비중첩 에피토프에 결합하는 항-BCMA 중쇄 항체; 및 BCMA 단백질 상의 하나 이상의 에피토프 및 예를 들어 인간 La 단백질과 같은 다른 단백질 상의 에피토프에 결합하는 항-BCMA 중쇄 항체를 포함한다. 항원의 "비중첩 에피토프(들)" 또는 "비경쟁적 에피토프(들)"이라는 용어는 한 쌍의 항원 특이적 항체 중 하나의 구성원은 인식하지만 다른 구성원은 인식하지 못하는 에피토프(들)를 의미하는 것으로 본원에서 정의된다. 비중첩 에피토프를 인식하는, 다중특이적 항체 상의 동일한 항원을 표적화하는 항원 결합 영역, 또는 항체의 쌍은 해당 항원에 결합하기 위해 경쟁하지 않고 동시에 해당 항원에 결합할 수 있다.

항체가 기준 항체와 "본질적으로 동일한 에피토프"에 결합하는 것은 두 항체가 동일하거나 입체적으로 중첩하는 에피토프를 인식하는 경우이다. 2개의 에피토프가 동일하거나 입체적으로 중첩하는 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 가장 널리 사용되고 신속한 방법은 표지된 항원 또는 표지된 항체를 사용하여 다양한 형식으로 구성될 수 있는 경쟁 분석이다. 일반적으로, 항원을 96웰 플레이트에 고정시키고, 표지된 항체의 결합을 차단하는 표지되지 않은 항체의 능력을 방사성 또는 효소 표지를 사용하여 측정한다.

본원에서 사용되는 용어 "가(valent)"는 항체 분자에서의 명시된 결합 부위 수를 나타낸다.

"1가" 항체는 하나의 결합 부위를 갖는다. 따라서 1가 항체는 또한 단일특이적이다.

"다가" 항체는 2개 이상의 결합 부위를 갖는다. 따라서, 용어 "2가", "3가", 및 "4가"는 각각 2개의 결합 부위, 3개의 결합 부위, 및 4개의 결합 부위의 존재를 나타낸다. 따라서, 본 발명에 따른 이중특이적 항체는 적어도 2가이며, 3가, 4가, 또는 다가일 수 있다. 본 발명의 구현예에 따른 2가 항체는 동일한 에피토프에 대한 2개의 결합 부위(즉, 2가, 단일파라토프), 또는 2개의 상이한 에피토프에 대한 2개의 결합 부위(즉, 2가, 이중파라토프)를 가질 수 있다.

매우 다양한 방법 및 단백질 배열이 이중특이적 단일클론 항체(BsMAB), 삼중특이적 항체 등의 제조에 대해 알려져 있고 사용된다.

"키메라 항원 수용체" 또는 "CAR"이라는 용어는 목적하는 결합 특이성(예를 들어, 단일클론 항체 또는 다른 리간드의 항원 결합 영역)을 막관통 도메인 및 세포내 신호전달 도메인에 이식하는 조작된 수용체를 지칭하기 위해 가장 넓은 의미로 본원에서 사용된다. 일반적으로, 수용체는 단일클론 항체의 특이성을 T-세포에 이식하여 키메라 항원 수용체(CAR)를 생성하는 데 사용된다(J Natl Cancer Inst, 2015; 108(7):dvj439; and Jackson et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 2016; 13:370-383). CAR-T 세포는 면역요법에 사용하기 위한 인공 T-세포 수용체를 생성하도록 유전자 조작된 T-세포이다. 일 구현예에서, "CAR-T-세포"는, 최소한 세포외 도메인, 막관통 도메인, 및 적어도 하나의 세포기질 도메인으로 구성된 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 이식유전자를 발현하는 치료용 T-세포를 의미한다.

"인간 항체"라는 용어는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 본원에서 사용된다. 본원의 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기, 예를 들어 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이 유발에 의해 도입되거나 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이를 포함할 수 있다. "인간 항체"라는 용어는 구체적으로 유전자이식 래트 또는 마우스와 같은 유전자이식 동물에 의해 생성된, 인간 중쇄 가변 영역 서열을 갖는 중쇄만의 항체, 특히 상기 정의된 바와 같은 UniRat^TM에 의해 생성된 UniAb^TM를 포함한다.

"키메라 항체" 또는 "키메라 면역글로불린"은 적어도 2개의 상이한 Ig 유전자좌로부터의 아미노산 서열을 포함하는 면역글로불린 분자, 예를 들어 인간 Ig 유전자좌에 의해 암호화된 부분 및 래트 Ig 유전자좌에 의해 암호화된 부분을 포함하는 유전자이식 항체를 의미한다. 키메라 항체는 비인간 Fc 영역 또는 인공 Fc 영역, 및 인간 이디오타입을 갖는 유전자이식 항체를 포함한다. 이러한 면역글로불린은 이러한 키메라 항체를 생성하도록 조작된 본 발명의 동물로부터 단리될 수 있다.

본원에서 사용되는 "이펙터 세포"라는 용어는 면역 반응의 인지 및 활성화 단계가 아닌 면역 반응의 효과기 단계에 관여하는 면역 세포를 지칭한다. 이러한 이펙터 세포는 특정 Fc 수용체를 발현하며 특정 면역 기능을 수행한다. 일부 구현예에서, 자연살해 세포와 같은 이펙터 세포는 항체 의존성 세포매개 세포독성(ADCC)을 유도할 수 있다. 예를 들어, FcR을 발현하는 단핵구 및 대식세포는 표적 세포의 특이적 사멸 및 면역계의 다른 구성요소에 항원을 제시하는 것, 또는 항원을 제시하는 세포에 대한 결합에 관여한다. 일부 구현예에서, 이펙터 세포는 표적 항원 또는 표적 세포에 식균작용을 할 수 있다.

"인간 이펙터 세포"는 T 세포 수용체 또는 FcR과 같은 수용체를 발현하고 이펙터 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 세포는 적어도 FcγRIII를 발현하고 ADCC 이펙터 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 자연살해(NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포, 및 호중구를 포함하며, NK 세포가 바람직하다. 이펙터 세포는 이의 천연 공급원, 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 혈액 또는 PBMC로부터 단리될 수 있다.

"면역 세포"라는 용어는 골수성 또는 림프성 기원의 세포, 예를 들어 림프구(예컨대, B 세포 및 세포용해 T 세포(CTL)를 포함하는 T 세포), 살해 세포, 자연살해(NK) 세포, 대식세포, 단핵구, 호산구, 다형핵 세포, 예컨대 호중구, 과립구, 비만세포, 및 호염기구를 제한 없이 포함하는 가장 넓은 의미로 본원에서 사용된다.

항체 "이펙터 기능"은 항체의 Fc 영역(천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 의미한다. 항체 이펙터 기능의 예는 C1q 결합; 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포매개 세포독성(ADCC); 식균작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등을 포함한다.

"항체 의존성 세포매개 세포독성" 및 "ADCC"는 Fc 수용체(FcR)를 발현하는 비특이적 세포독성 세포(예를 들어, 자연살해(NK) 세포, 호중구, 및 대식세포)가 표적 세포에 결합된 항체를 인식하고 후속적으로 표적 세포의 용해를 유발하는 세포매개 반응을 의미한다. ADCC를 매개하는 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII를 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991)]의 464 페이지 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 5,500,362호 및 5,821,337호에 기재된 것과 같은 시험관내 ADCC 분석이 수행될 수 있다. 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어 문헌[Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다.

"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에 표적을 용해시키는 분자의 능력을 의미한다. 보체 활성화 경로는 동족 항원과 복합체를 형성한 분자(예를 들어, 항체)에 대한 보체 시스템(C1q)의 첫 번째 구성요소의 결합에 의해 시작된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석이 수행될 수 있다.

"결합 친화도"는 분자(예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용 총계의 강도를 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에서 사용되는 "결합 친화도"는 결합 쌍의 구성원(예를 들어, 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 의미한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(Kd)로 나타낼 수 있다. 친화도는 당업계에 알려진 일반적인 방법으로 측정될 수 있다. 저친화성 항체는 일반적으로 항원에 천천히 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면, 고친화성 항체는 일반적으로 항원에 더 빨리 결합하고 결합 상태를 유지하는 경향이 있다.

본원에서 사용되는 "Kd" 또는 "Kd 값"은 동역학 모드로 Octet QK384 기기(Fortebio Inc., Menlo Park, CA)를 사용하여 생물층 간섭계로 측정된 해리 상수를 의미한다. 예를 들어, 항마우스 Fc 센서에 마우스-Fc 융합 항원을 로드한 다음, 이를 항체가 포함된 웰에 침지시켜 농도 의존적 결합률(kon)을 측정한다. 항체 해리율(koff)은 최종 단계에서 센서를 버퍼만 포함하는 웰에 침지시켜 측정한다. Kd는 Koff/kon의 비이다(더 자세한 내용은 문헌[Concepcion, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12(8), 791-800, 2009] 참조).

본원에서 사용되는 "특이적 상호작용", "특이적 결합", 또는 "특이적으로 결합"이라는 용어는 결합 도메인이 특정 표적 단백질 또는 항원에 대한 평가가능한 친화도를 나타내며, 일반적으로 비표적 단백질 또는 항원과 유의한 반응성을 나타내지 않음을 의미한다. "평가가능한 친화도"는 약 10^-6 M (KD) 이상의 친화도를 갖는 결합을 포함한다. 바람직하게는, 결합은 결합 친화도가 약 10^-12 내지 10^-8 M, 10^-12 내지 10^-9 M, 10^-12 내지 10^-10 M, 10^-11 내지 10^-8 M, 바람직하게는 약 10^-11 내지 10^-9 M일 때 특이적인 것으로 간주된다. 결합 도메인이 표적 단백질 또는 항원과 특이적으로 반응 또는 결합하는지 여부는 특히 상기 결합 도메인과 표적 단백질 또는 항원의 반응을 상기 결합 도메인과 비표적 단백질 또는 항원의 반응과 비교함으로써 용이하게 시험될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 결합 도메인은 비표적 단백질 또는 항원에 본질적으로 결합하지 않거나 결합할 수 없다.

"본질적으로 결합하지 않는다" 또는 "결합할 수 없다"라는 용어는 본 발명의 결합 도메인이 비표적 단백질 또는 항원에 결합하지 않음, 즉 표적 단백질 또는 항원 각각에 대한 결합을 100%로 설정할 때, 비표적 단백질 또는 항원과 30% 초과, 바람직하게는 20% 초과, 더 바람직하게는 10% 초과, 특히 바람직하게는 9%, 8%, 7%, 6%, 또는 5% 초과의 반응성을 나타내지 않음을 의미한다.

"치료", "치료하는" 등의 용어는 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 일반적으로 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 효과는 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 면에서 예방적일 수 있고/있거나 질환 및/또는 질환에 기인한 부작용에 대한 부분적 또는 완전한 치유 면에서 치료적일 수 있다. 본원에서 사용되는 "치료"는 포유류의 질환 치료를 다루며, 다음을 포함한다: (a) 질환에 걸리기 쉬울 수 있지만 아직 질환이 있는 것으로 진단되지 않은 대상체에서 질환이 발생하는 것을 방지하는 것; (b) 질환을 억제하는 것, 즉 질환의 발달을 저지하는 것; 또는 (c) 질환을 완화시키는 것, 즉 질환의 퇴행을 유발하는 것. 치료제는 질환 또는 손상의 발병 전에, 발병 중에, 또는 발병 후에 투여될 수 있다. 치료가 환자의 바람직하지 않은 임상 증상을 안정화시키거나 감소시키는 진행중인 질환의 치료가 특히 중요하다. 이러한 치료는 영향을 받은 조직의 기능이 완전히 상실되기 전에 수행하는 것이 바람직하다. 대상 요법은 질환의 증상 단계 동안 투여될 수 있고, 일부 경우 질환의 증상 단계 후에 투여될 수 있다.

"치료 유효량"은 대상체에게 치료적 이점을 부여하는 데 필요한 활성제의 양을 의미한다. 예를 들어, "치료 유효량"은 질환과 관련된 병리학적 증상, 질환 진행, 또는 생리학적 상태의 호전을 유도, 개선, 또는 달리 유발하거나, 장애에 대한 내성을 향상시키는 양이다.

본 발명의 맥락에서 "B-세포 신생물" 또는 "성숙 B-세포 신생물"이라는 용어는 모든 림프성 백혈병 및 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병, 전림프구성 백혈병, 전구체 B-림프모구성 백혈병, 유모세포 백혈병, 소림프구성 림프종, B-세포 전림프구성 림프종, B-세포 만성 림프구성 백혈병, 맨틀 세포 림프종, 버킷 림프종, 소포림프종, 확산성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 다발성 골수종, 림프형질세포성 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질세포 신생물, 예컨대 형질세포 골수종, 형질세포종, 단일클론 면역글로불린 침착 질환, 중쇄 질환, MALT 림프종, 림프절 변연부 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출성 림프종, 림프종모양 육아종증, 비호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 털세포 백혈병, 원발성 삼출성 림프종, 및 AIDS 관련 비호지킨 림프종을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

"BCMA의 발현을 특징으로 하는"이라는 용어는 BCMA 발현이 질환 또는 장애의 특징인 하나 이상의 병리학적 과정과 연관되거나 관련된 임의의 질환 또는 장애를 광범위하게 지칭한다. 이러한 장애는 B-세포 신생물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

"대상체", "개체", 및 "환자"라는 용어는 치료에 대해 평가되고/되거나 치료받는 포유류를 지칭하는 것으로 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 일 구현예에서, 포유류는 인간이다. "대상체", "개체", 및 "환자"라는 용어는 암이 있는 개체, 자가면역 질환이 있는 개체, 병원균 감염이 있는 개체 등을 제한 없이 포함한다. 대상체는 인간일 수 있지만, 다른 포유동물, 특히 인간 질환에 대한 실험실 모델로 유용한 포유동물, 예를 들어 마우스, 래트 등을 포함할 수도 있다.

"약학적 조성물"이라는 용어는 활성 성분의 생물학적 활성이 유효하도록 하는 형태의 제제로, 제형이 투여되는 대상체에게 허용할 수 없을 정도로 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다. 이러한 제형은 무균이다. "약학적으로 허용가능한" 부형제(비히클, 첨가제)는 사용된 활성 성분의 유효 용량을 제공하기 위해 대상 포유동물에게 합리적으로 투여될 수 있는 것이다.

"멸균" 제형은 무균이거나 모든 살아있는 미생물 및 포자가 없거나 본질적으로 없다. "동결" 제형은 0℃ 미만 온도의 것이다.

"안정한" 제형은 제형 내의 단백질이 보관시 물리적 안정성 및/또는 화학적 안정성 및/또는 생물학적 활성을 본질적으로 유지하는 것이다. 바람직하게는, 제형은 보관시 물리적 및 화학적 안정성, 뿐만 아니라 생물학적 활성을 본질적으로 유지한다. 보관 기간은 일반적으로 제형의 의도된 유효 기간에 따라 선택된다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 당업계에서 이용가능하며, 예를 들어 문헌[Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301. Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) 및 Jones. A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)]에 검토되어 있다. 안정성은 선택 온도에서 선택 기간 동안 측정될 수 있다. 안정성은 응집체 형성 평가(예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 사용, 혼탁도 측정, 및/또는 육안 검사); 양이온 교환 크로마토그래피, 이미지 모세관 등전위 포커싱(icIEF), 또는 모세관 구역 전기영동을 사용한 전하 이질성 평가; 아미노-말단 또는 카복시-말단 서열 분석; 질량 분석; 감소된 항체와 온전한 항체를 비교하기 위한 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵(예를 들어, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능 평가 등을 비롯한, 다양한 방법으로 정성적 및/또는 정량적으로 평가될 수 있다. 불안정성은 다음 중 하나 이상을 수반할 수 있다: 응집, 탈아미드화(예를 들어, Asn 탈아미드화), 산화(예를 들어, Met 산화), 이성화(예를 들어, Asp 이성화), 클리핑/가수분해/단편화(예를 들어, 힌지 영역 단편화), 석신이미드 형성, 쌍을 이루지 않은 시스테인(들), N-말단 확장, C-말단 처리, 글리코실화 차이 등.

II. 상세한 설명

항-BCMA 항체

본 발명은 인간 BCMA에 결합하는 중쇄만의 항체(UniAb)를 포함하는(이에 한정되지 않음) 항체를 제공한다. 본 발명의 항-BCMA UniAb는 본원에 정의되고 도 1에 나타낸 바와 같은 CDR 서열 세트를 포함하며, 도 2에 제시된 서열번호 12의 제공된 중쇄 가변 영역(VH) 서열에 의해 예시된다. 이들 항체는 임상 치료제(들)로서의 유용성에 기여하는 다수의 이점을 제공한다. 이러한 항체는 다양한 결합 친화도를 갖는 구성원을 포함하여, 목적하는 결합 친화도를 갖는 특정 서열의 선택을 가능하게 한다.

본원에 제공된 항-BCMA 항체는 시노몰구스 마카크의 BCMA 단백질과 교차 반응하지 않지만, 필요한 경우, 시노몰구스 마카크의 BCMA 단백질, 또는 임의의 다른 동물 종의 BCMA와의 교차 반응성을 제공하도록 조작될 수 있다.

일부 구현예에서, 본원의 항-BCMA UniAb 항체는 인간 VH 프레임워크에 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. CDR 서열은 예를 들어 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 대해 각각, 서열번호 12에 제시된 제공된 예시적인 가변 영역 서열의 아미노산 잔기 26~35; 53~59; 및 98~117 부근의 영역에 위치할 수 있다. 일반적으로 서열의 순서는 동일하게 유지되지만, 상이한 프레임워크 서열이 선택되는 경우 CDR 서열이 상이한 위치에 있을 수 있음을 당업자는 이해할 것이다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호 1의 서열에 2개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및/또는 서열번호 2의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및/또는 서열번호 3의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호 1의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및 서열번호 2의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 3의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 서열번호 1의 CDR1 서열, 서열번호 2의 CDR2 서열, 및 서열번호 3의 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 각각 서열번호 1, 2, 및 3인 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 중쇄만의 가변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 1가 또는 2가 배열의 중쇄만의 가변 영역을 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명의 항-BCMA 항체는 1가 또는 2가 배열의 서열번호 12의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다(도 2).

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 바람직하게는 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열과 비교하여 2개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 CDR 서열을 포함하며(도 1), BCMA에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 바람직하게는 도 2에 나타낸 중쇄 가변 영역 서열(서열번호 12)에 대해 적어도 80% 동일성, 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 98% 동일성, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 서열을 포함하며, BCMA에 결합한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 바람직하게는 CDR3 서열이 서열번호 3에 대해 아미노산 수준에서 80% 이상의, 예컨대 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하며, BCMA에 결합한다.

일부 구현예에서, 항-BCMA 항체는 바람직하게는 CDR 1, 2, 및 3의 전체 세트(조합)가 서열번호 1 내지 3의 CDR 1, 2, 및 3(조합)에 대해 아미노산 수준에서 85 퍼센트(85%) 이상의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하며, BCMA에 결합한다.

본 발명은 인간 BCMA뿐만 아니라 인간 La 단백질에 결합하는 다중특이적 항체를 제공한다. 본 발명의 다중특이적 항체는 BCMA에 결합하는 제1 결합 유닛, 및 인간 La 단백질에 결합하는 제2 결합 유닛을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 La 단백질에 결합하는 결합 유닛은 본원에 정의되고 도 1에 나타낸 바와 같은 CDR 서열 세트를 포함하며, 도 3에 제시된, 서열번호 14 및 15의 제공된 중쇄 가변 영역(VH) 서열 및 서열번호 16 및 17의 경쇄 가변 영역(VL) 서열에 의해 예시된다. 일부 구현예에서, 인간 La 단백질에 결합하는 항체는 아미노산 서열 KPLPEVTDEY(서열번호 42)를 포함하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 인간 La 단백질에 결합하는 항체는 아미노산 서열 VEKEALKKIIEDQQESLNKW(서열번호 43)를 포함하는 에피토프에 결합한다. 인간 La 단백질에 결합하는 항체는 예를 들어 WO 2016030414, US20200181228, US20200131262, 및 US20170240612에 기재되어 있으며, 이들의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

본원에 기재된 항체는 임상 치료제(들)로서의 유용성에 기여하는 다수의 이점을 제공한다. 이러한 항체는 다양한 결합 친화도를 갖는 구성원을 포함하여, 목적하는 결합 친화도를 갖는 특정 서열의 선택을 가능하게 한다.

적합한 항체는 개발 및 치료적 사용 또는 이중특이적 또는 삼중특이적 항체, 또는 CAR-T 구조의 일부로서의 사용을 제한 없이 포함하는 기타 사용을 위해 본원에 제공된 항체로부터 선택될 수 있다.

후보 단백질에 대한 친화도의 결정은 Biacore 측정과 같은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 대상 항체는 약 10^-6 내지 약 10^-10; 약 10^-6 내지 약 10^-9; 약 10^-6 내지 약 10^-8; 약 10^-8 내지 약 10^-11; 약 10^-8 내지 약 10^-10; 약 10^-8 내지 약 10^-9; 약 10^-9 내지 약 10^-11; 약 10^-9 내지 약 10^-10; 또는 이들 범위 내의 임의의 값을 제한 없이 포함하는 약 10^-6 내지 약 10^-11의 Kd로 인간 La 단백질에 대한 친화도를 가질 수 있다. 친화도 선택은 잠재적 독성 평가뿐만 아니라, 시험관내 분석, 전임상 모델, 및 임상 시험을 포함하여, 목적하는 활성(예를 들어, 범용 CAR 구조와 대상 다중특이적 항체의 결합 유닛 간의 목적하는 결합 친화도)을 조절하기 위한, 예를 들어 증가시키기 위한 생물학적 평가로 확인될 수 있다.

일부 구현예에서, 대상 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 인간 VH 프레임워크에 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VH 도메인, 및 인간 VL 프레임워크, 예를 들어 인간 V카파 프레임워크 또는 인간 V람다 프레임워크에 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열을 포함하는 VL 도메인을 포함한다. CDR 서열은 예를 들어 CDR1, CDR2, 및 CDR3에 대해 각각, 서열번호 14 내지 17에 제시된 제공된 예시적인 가변 영역 서열의 아미노산 잔기 26~35; 53~59; 및 98~117 부근의 영역에 위치할 수 있다. 일반적으로 서열의 순서는 동일하게 유지되지만, 상이한 프레임워크 서열이 선택되는 경우 CDR 서열이 상이한 위치에 있을 수 있음을 당업자는 이해할 것이다.

일부 구현예에서, 대상 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 4 또는 7의 서열 중 어느 하나에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및/또는 서열번호 5의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및/또는 서열번호 6 또는 8의 서열 중 어느 하나에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 9의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및/또는 서열번호 10의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및/또는 서열번호 11의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일부 구현예에서, 대상 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 4 또는 7의 서열 중 어느 하나에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및 서열번호 5의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 6 또는 8의 서열 중 어느 하나에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 9의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR1 서열, 및 서열번호 10의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 11의 서열에 2개 이하의 치환을 포함하는 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.

일 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 4의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 6의 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 9의 CDR1 서열, 서열번호 10의 CDR2 서열, 및 서열번호 11의 CDR3 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 7의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 8의 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 9의 CDR1 서열, 서열번호 10의 CDR2 서열, 및 서열번호 11의 CDR3 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

추가 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 14의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열번호 16의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 서열번호 15의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열번호 17의 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.

일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛에서의 중쇄 CDR 서열은 서열번호 4 내지 8 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열(도 1)과 비교하여 2개 이하의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 도 3에 나타낸 중쇄 가변 영역 서열(서열번호 14 및 15)에 대해 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 98% 동일성, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역 서열을 포함할 것이다.

일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛에서의 경쇄 CDR 서열은 서열번호 9 내지 11 중 어느 하나의 CDR1, CDR2, 및/또는 CDR3 서열(도 1)과 비교하여 2개 이하의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 항체의 항-인간 La 단백질 결합 유닛은 도 3에 나타낸 경쇄 가변 영역 서열(서열번호 16 및 17)에 대해 적어도 85% 동일성, 적어도 90% 동일성, 적어도 95% 동일성, 적어도 98% 동일성, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역 서열을 포함할 것이다.

일부 구현예에서, 3쇄 이중특이적 항체 또는 3쇄 이중특이적 항체유사 분자(이중특이적 TCA)를 제한 없이 포함하는, 본원에 논의된 임의의 배열을 가질 수 있는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 항체가 제공된다. 이중특이적 항체는 BCMA 이외의 단백질에 대해 특이적인 항체의 적어도 중쇄 가변 영역을 포함한다.

본 발명의 단백질이 이중특이적 항체인 경우, 하나의 결합 유닛은 인간 BCMA에 특이적인 반면, 다른 결합 유닛은 표적 세포(예를 들어, 이펙터 세포, 예를 들어 T-세포), 종양 관련 항원, 표적 항원, 예를 들어 인테그린 등, 병원체 항원, 체크포인트 단백질, 범용 CAR 구조 상의 단백질 등에 특이적일 수 있다. 표적 세포는 구체적으로 암세포, 예컨대 혈액학적 종양, 예를 들어 하기 논의되는 바와 같은 B-세포 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중특이적 항체는 BCMA에 결합하는 제1 결합 유닛 및 인간 La 단백질에 결합하는 제2 결합 유닛을 포함한다.

단일쇄 폴리펩티드, 2쇄 폴리펩티드, 3쇄 폴리펩티드, 4쇄 폴리펩티드, 이들의 다중체를 포함하는 다양한 형태의 다중특이적 항체가 본 발명의 범위에 속한다. 본원의 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 항체는 구체적으로, 형질세포(PC) 및 다발성 골수종(MM) 세포에서 선택적으로 발현되는 BCMA, 및 CD3에 결합하는 T-세포 이중특이적 항체(항-BCMA × 항-CD3 항체)를 포함한다. 본원의 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 항체는 또한 구체적으로, 형질세포(PC) 및 다발성 골수종(MM) 세포에서 선택적으로 발현되는 BCMA, 및 범용 CAR 구조 상의 항원에 결합하는 범용 CAR 이중특이적 항체(항-BCMA × 항-La 단백질 항체)를 포함한다. 이러한 항체는 BCMA를 발현하는 세포의 강력한 T-세포 또는 CAR T-세포 매개 사멸을 유도하며, 종양, 특히 혈액학적 종양, 예컨대 하기 논의되는 바와 같은 B-세포 종양의 치료, 뿐만 아니라 본원에서 또한 추가로 설명되는 자가반응성 형질세포의 존재를 특징으로 하는 자가면역 장애의 치료에 사용될 수 있다.

CD3 및 BCMA에 대한 이중특이적 항체는 예를 들어 WO 2007117600, WO 2009132058, WO 2012066058, WO 2012143498, WO 2013072406, WO 2013072415, WO 2014122144, 및 US 20170051068에 기재되어 있다. 인간 La 단백질을 포함하는 범용 키메라 항원 수용체는 예를 들어 WO 2016030414에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

항체의 제조

본 발명의 다중특이적 항체는 당업계에 알려진 방법에 의해 제조될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원의 항체는 유전자이식 마우스 및 래트를 포함하는 유전자이식 동물, 바람직하게는 내인성 면역글로불린 유전자가 녹아웃되거나 비활성화된 래트에 의해 생성된다. 바람직한 구현예에서, 본원의 항체는 UniRat™에서 생성된다. UniRat™는 침묵된 내인성 면역글로불린 유전자를 갖고 있으며, 완전 인간 HCAb의 다양한, 자연적으로 최적화된 레퍼토리를 발현하기 위해 인간 면역글로불린 중쇄 전좌(translocus)를 사용한다. 래트의 내인성 면역글로불린 유전자좌는 다양한 기술을 사용하여 녹아웃 또는 침묵될 수 있지만, UniRat™에서는 징크 핑거 (엔도)뉴클레아제(ZNF) 기술을 사용하여 내인성 래트 중쇄 J-유전자좌, 경쇄 Cκ 유전자좌, 및 경쇄 Cλ 유전자좌를 비활성화시켰다. 난모세포에 미세주입하기 위한 ZNF 구성체는 IgH 및 IgL 녹아웃(KO) 계통을 생성할 수 있다. 자세한 내용은 예를 들어 문헌[Geurts et al., 2009, Science 325:433] 참조. Ig 중쇄 녹아웃 래트의 특성화는 문헌[Menoret et al., 2010, Eur. J. Immunol. 40:2932-2941]에 보고된 바 있다. ZNF 기술의 장점은 최대 수 kb의 결실을 통해 유전자 또는 유전자좌를 침묵시키기 위한 비상동 말단 연결도 상동성 통합을 위한 표적 부위를 제공할 수 있다는 것이다(Cui et al., 2011, Nat Biotechnol 29:64-67). UniRat™에서 생성된 인간 중쇄 항체는 UniAb^TM라고 하며, 통상적인 항체로는 공격할 수 없는 에피토프에 결합할 수 있다. 이들은 높은 특이성, 친화성, 및 작은 크기로 인해 단일 및 다중 특이적 용도에 이상적이다.

UniAb^TM 외에도, 낙타과 VHH 프레임워크 및 돌연변이, 및 이들의 기능적 VH 영역이 결여된 중쇄만의 항체가 본원에 구체적으로 포함된다. 이러한 중쇄만의 항체는 예를 들어 WO2006/008548에 기재된 바와 같이, 예를 들어 완전 인간 중쇄만의 유전자좌를 포함하는 유전자이식 래트 또는 마우스에서 생성될 수 있지만, 토끼, 기니피그, 래트와 같은 다른 유전자이식 포유동물도 사용될 수 있으며, 래트 및 마우스가 바람직하다. 중쇄만의 항체(이들의 VHH 또는 VH 기능적 단편 포함)는 또한, 예를 들어 포유류 세포(예: CHO 세포), E. 콜라이, 또는 효모를 비롯한 적합한 진핵 또는 원핵 숙주에서 암호화 핵산을 발현시켜, 재조합 DNA 기술에 의해 생성될 수 있다.

중쇄만의 항체의 도메인은 항체와 저분자 약물의 장점을 결합하여, 1가 또는 다가일 수 있으며; 독성이 낮고; 비용 효율적으로 제조할 수 있다. 작은 크기로 인해, 이러한 도메인은 경구 또는 국소 투여를 포함하여 투여하기 쉽고, 위장 안정성을 포함하여 높은 안정성을 특징으로 하며; 이들의 반감기는 목적하는 용도 또는 적응증에 맞춰질 수 있다. 또한, HCAb의 VH 및 VHH 도메인은 비용 효율적인 방식으로 제조될 수 있다.

특정 구현예에서, UniAb^TM를 포함하는 본 발명의 중쇄 항체는, 해당 위치에서 천연 아미노산 잔기를 포함하거나 이와 회합된 표면 노출된 소수성 패치를 파괴할 수 있는 다른 아미노산 잔기로 치환된 FR4 영역의 첫 번째 위치(Kabat 넘버링 시스템에 따른 아미노산 위치 101)에 천연 아미노산 잔기를 갖는다. 이러한 소수성 패치는 일반적으로 항체 경쇄 불변 영역과의 인터페이스에 묻혀 있지만, HCAb에서 표면 노출되며, 적어도 부분적으로는 HCAb의 원치 않는 응집 및 경쇄 회합을 위한 것이다. 치환된 아미노산 잔기는 바람직하게는 전하를 띤, 더 바람직하게는 양전하를 띤, 예컨대 라이신(Lys, K), 아르기닌(Arg, R), 또는 히스티딘(His, H), 바람직하게는 아르기닌(R)이다. 바람직한 구현예에서, 유전자이식 동물로부터 유래된 중쇄만의 항체는 위치 101에 Trp에서 Arg로의 돌연변이를 포함한다. 생성된 HCAb는 바람직하게는 응집의 부재하에 생리학적 조건에서 높은 항원 결합 친화도 및 용해도를 갖는다.

본 발명의 일부로서, ELISA 단백질 및 세포-결합 분석에서 인간 BCMA에 결합하는, UniRat^TM 동물로부터의 고유의 서열을 갖는 인간 항-BCMA 중쇄 항체(UniAb^TM)가 확인되었다. 확인된 중쇄 가변 영역(VH) 서열(예를 들어, 도 2 참조)은 인간 BCMA 단백질 결합 및/또는 BCMA+ 세포에 대한 결합에 대해 양성이고, BCMA를 발현하지 않는 세포에 대한 결합에 대해서는 모두 음성이다.

BCMA 단백질 상의 비중첩 에피토프에 결합하는 중쇄 항체, 예를 들어 UniAb^TM는 효소-결합 면역분석(ELISA 분석) 또는 유세포 경쟁 결합 분석과 같은 경쟁 결합 분석에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 표적 항원에 결합하는 알려진 항체와 관심 항체 사이의 경쟁을 사용할 수 있다. 이 접근법을 사용하면, 일련의 항체를 기준 항체와 경쟁하는 것과 그렇지 않은 것으로 나눌 수 있다. 비경쟁 항체는 기준 항체에 의해 결합된 에피토프와 중첩하지 않는 별개의 에피토프에 결합하는 것으로 확인된다. 대개, 하나의 항체가 고정되고, 항원이 결합되고, 제2의 표지된(예를 들어, 비오틴화) 항체가 포획 항원에 결합하는 능력에 대해 ELISA 분석에서 시험된다. 이는 또한, Octet Red384 및 Octet HTX(ForteBio, Pall Inc)와 같은 생물층 간섭계 플랫폼에서뿐만 아니라, ProteOn XPR36(BioRad, Inc), Biacore 2000 및 Biacore T200(GE Healthcare Life Sciences), 및 MX96 SPR 이미저(Ibis technologies B.V.)를 비롯한 표면 플라즈몬 공명(SPR) 플랫폼을 사용하여 수행될 수 있다. 더 자세한 내용은 본원의 실시예 참조.

일반적으로, 항체는 표준 기술, 예컨대 상기 경쟁 결합 분석으로 측정시 표적 항원에 대한 기준 항체의 결합을 약 15~100% 감소시키는 경우 기준 항체와 "경쟁"한다. 다양한 구현예에서, 상대적 억제는 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50% 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95% 또는 그 이상이다.

약학적 조성물

본 발명의 다른 양태는 본 발명의 하나 이상의 항체를 적합한 약학적으로 허용가능한 담체와의 혼합물로 포함하는 약학적 조성물을 제공하는 것이다. 본원에서 사용되는 "약학적으로 허용가능한 담체"의 예는 보조제, 고체 담체, 물, 완충제, 또는 치료 성분을 보유하기 위해 당업계에서 사용되는 다른 담체, 또는 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명에 따라 사용되는 항체의 약학적 조성물은 목적하는 정도의 순도를 갖는 단백질을 선택적인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)] 참조)와 혼합하여 보관을 위해, 예컨대 동결건조 제형 또는 수용액의 형태로 제조된다. 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제는 사용되는 용량 및 농도에서 수여자에게 무독성이며, 포스페이트, 시트레이트, 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸, 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 라이신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스, 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염-형성 반대-이온; 금속 착물(예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 TWEEN™, PLURONICS™, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.

비경구 투여용 약학적 조성물은 바람직하게는 무균이고 실질적으로 등장성이며, GMP(Good Manufacturing Practice) 조건하에 제조된다. 약학적 조성물은 단위 투약 형태(즉, 단일 투여에 대한 투여량)로 제공될 수 있다. 제형은 선택된 투여 경로에 따라 다르다. 본원의 항체는 정맥 주사 또는 주입 또는 피하로 투여될 수 있다. 주사 투여의 경우, 본원의 항체는 수용액, 바람직하게는 주사 부위의 불편함을 감소시키기 위해 생리학적으로 적합한 완충액으로 제형화될 수 있다. 용액은 상기 논의된 바와 같은 담체, 부형제, 또는 안정화제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 항체는 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어, 발열원이 없는 멸균수와 함께 구성하기 위한 동결건조 형태일 수 있다.

항-BCMA 항체 제형은 예를 들어 미국 특허 9,034,324호에 개시되어 있다. 유사한 제형이 본 발명의 단백질에 사용될 수 있다. 피하 항체 제형은 예를 들어 US 20160355591 및 US 20160166689에 기재되어 있다.

사용 방법

본원의 항체 및 약학적 조성물은 BCMA의 발현 또는 과발현을 특징으로 하는 B-세포 및 형질세포 악성종양 및 자가면역 장애를 포함하는 B-세포 관련 장애의 치료에 사용될 수 있다.

이러한 B-세포 관련 장애는 형질세포종, 호지킨 림프종, 소포림프종, 작은 비절개 세포 림프종, 엔데믹 버킷 림프종, 산발성 버킷 림프종, 변연부 림프종, 림프절외 점막 관련 림프조직 림프종, 림프절 단핵구 B 세포 림프종, 비장 림프종, 맨틀 세포 림프종, 거대 세포 림프종, 확산성 혼합 세포 림프종, 면역모세포성 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종, 폐 B 세포 혈관중심성 림프종, 소림프구성 림프종, 불확실한 악성 가능성의 B 세포 증식, 림프종모양 육아종증, 이식후 림프증식성 장애, 면역조절 장애, 류마티스성 관절염, 중증 근무력증, 특발성 혈소판감소 자반증, 항인지질 증후군, 샤가스병, 그레이브스병, 베게너 육아종증, 결절성 다발동맥염, 쇼그렌 증후군, 심상성 천포창, 피부경화증, 다발성 경화증, 항인지질 증후군, ANCA 관련 혈관염, 굿파스쳐병, 가와사키병, 자가면역 용혈성 빈혈, 급속진행성 사구체신염, 중쇄 질환, 원발성 또는 면역세포 관련 아밀로이드증, 또는 단일클론 감마병증을 제한 없이 포함하여, B-세포 및 형질세포 악성종양 및 자가면역 장애를 포함한다.

BCMA의 발현을 특징으로 하는 형질세포 장애는 다발성 골수종(MM)을 포함한다. MM은 골수 구획에서 비정상 형질세포의 단일클론 확장 및 축적을 특징으로 하는 B-세포 악성종양이다. MM에 대한 현재 치료법은 종종 관해를 유발하지만 거의 모든 환자가 결국 재발하고 사망한다. 동종이계 조혈모세포 이식 환경에서 골수종 세포의 면역 매개 제거에 대한 실질적인 증거가 있지만, 이 접근법의 독성은 높고 완치된 환자는 거의 없다. 일부 단일클론 항체가 전임상 연구 및 초기 임상 시험에서 MM 치료에 대한 가능성을 보여주었지만, MM에 대한 단일클론 항체 요법의 일관된 임상 효능이 확실하게 입증되지는 않았다. 따라서 MM에 대한 면역요법을 포함한 새로운 치료법의 필요성이 매우 크다(예를 들어, 문헌[Carpenter et al., Clin Cancer Res 2013, 19(8):2048-2060] 참조).

증식 유도 리간드, APRIL에 의한 BCMA의 과발현 또는 활성화는 생체내 인간 다발성 골수종(MM) 진행을 촉진하는 것으로 알려져 있다. BCMA는 또한 마우스에서 p53 돌연변이가 있는 이종이식된 MM 세포의 생체내 성장을 촉진하는 것으로 나타났다. APRIL/BCMA 경로의 활성은 종양 세포와 이들을 지지하는 골수 미세환경 사이의 양방향 상호작용을 통해 MM 병인 및 약물 내성에서 중심적인 역할을 하므로, BCMA는 MM 치료를 위한 표적으로서 확인되었다. 더 자세한 내용은 예를 들어 문헌[Yu-Tsu Tai et al., Blood 2016; 127(25):3225-3236] 참조.

BCMA를 발현하는 혈장세포와 관련된 또 다른 B-세포 장애는 루푸스로도 알려진 전신 홍반성 루푸스(SLE)이다. SLE는 신체의 어느 부분에나 영향을 줄 수 있는 전신성 자가면역 질환이며, 신체의 자신의 세포 및 조직을 공격하여 만성 염증과 조직 손상을 일으키는 면역계로 나타난다. 이는 항체-면역 복합체가 침전되어 추가적인 면역 반응을 일으키는 제3형 과민 반응이다(Inaki & Lee, Nat Rev Rheumatol 2010; 6: 326-337).

본 발명의 항-BCMA 중쇄만의 항체(UniAb)는 상기 열거된 것과 같은, BCMA의 발현을 특징으로 하는 MM, SLE, 및 기타 B-세포 장애 또는 형질세포 장애의 치료를 위한 치료제 개발에 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 항-BCMA 중쇄만의 항체(UniAb)는 단독으로 또는 다른 MM 치료와 조합하여사용되는, MM 치료에 대한 후보물질이다.

일 구현예에서, 본원의 항체는 중쇄만의 항-BCMA 항체-CAR 구조, 즉 중쇄만의 항-BCMA 항체-CAR-형질도입된 T-세포 구조의 형태일 수 있다. BCMA에 대한 항원 특이성을 갖는 CAR 및 이의 사용 방법은 예를 들어 WO2019/006072에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 전체가 본원에 참조로 포함된다.

일부 구현예에서, 본원의 항체는 BCMA에 대한 결합 친화성을 갖는 제1 결합 유닛, 및 이펙터 세포(예를 들어, T-세포) 상의 범용 키메라 항원 수용체(CAR) 복합체에 존재하는 La 단백질에 대한 결합 친화성을 갖는 제2 결합 유닛을 포함하는 다중특이적(예를 들어, 이중특이적) 항체이다. 이와 같이, 본 발명의 다중특이적 항체는 제1 결합 유닛을 통해 범용 CAR 복합체에 결합하고, 제2 결합 유닛을 통해 BCMA에 대한 결합 친화성을 제공함으로써 범용 CAR 복합체를 기능화하는 데 사용될 수 있다. 상기 방법은 BCMA의 발현을 특징으로 하는 질환 또는 장애에 대해 본 발명의 다중특이적 항체를 사용하여, BCMA에 결합하도록 기능화된 범용 CAR 복합체를 포함하는 복수의 세포를 포함하는 세포 치료제의 유효량을 투여하여 대상체의 질환 또는 장애를 치료함으로써, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.

질환의 치료를 위한 본 발명의 조성물의 유효 용량은 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리학적 상태, 환자가 인간인지 동물인지 여부, 기타 투여 약물, 및 치료가 예방적인지 치료적인지 여부를 포함한 다양한 요인에 따라 달라진다. 일반적으로, 환자는 인간이지만, 비인간 포유동물, 예를 들어 개, 고양이, 말 등과 같은 반려동물, 토끼, 마우스, 래트 등과 같은 실험용 포유동물 등도 치료될 수 있다. 치료 투여량은 안전성과 효능을 최적화하도록 적정될 수 있다.

투여량 수준은 통상의 숙련된 임상의에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 필요에 따라, 예를 들어 요법에 대한 대상체의 반응을 수정할 필요에 따라 수정될 수 있다. 단일 투약 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 조합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 다르다. 투약 단위 형태는 일반적으로 약 1 mg 내지 약 500 mg의 활성 성분을 함유한다.

일부 구현예에서, 제제의 치료적 투여량은 숙주 체중에 대해 약 0.0001 내지 100 mg/kg, 더 일반적으로는 0.01 내지 5 mg/kg의 범위일 수 있다. 예를 들어, 투여량은 체중(kg)당 1 mg 또는 체중(kg)당 10 mg, 또는 1~10 mg/kg의 범위일 수 있다. 예시적인 치료 요법은 2주에 1회, 또는 1개월에 1회, 또는 3 내지 6개월에 1회 투여를 수반한다. 본 발명의 치료제는 일반적으로 여러 차례 투여된다. 단일 투여량 사이의 간격은 매주, 매월, 또는 매년일 수 있다. 간격은 또한 환자에서 치료제의 혈중 농도를 측정하여 나타나는 바와 같이 불규칙할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 치료제는 서방형 제형으로서 투여될 수 있으며, 이 경우 덜 빈번한 투여가 필요하다. 투여량과 빈도는 환자에서의 폴리펩티드 반감기에 따라 다르다.

일반적으로, 조성물은 액체 용액 또는 현탁액으로서 주사제로서 제조되며; 주사 전에 액체 비히클에 용해 또는 현탁시키기에 적합한 고체 형태가 제조될 수도 있다. 본원의 약학적 조성물은 직접 또는 고체(예를 들어, 동결건조된) 조성물의 재구성 후, 정맥내 또는 피하 투여하기에 적합하다. 제제는 또한 유화되거나 리포솜 또는 마이크로 입자, 예컨대 폴리락티드, 폴리글리콜리드, 또는 공중합체에 캡슐화되어 상기 논의된 바와 같이 강화된 보조 효과를 가질 수 있다. 문헌[Langer, Science 249: 1527, 1990 및 Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997]. 본 발명의 제제는 활성 성분의 지속적 또는 주기적 방출을 허용하는 방식으로 제형화될 수 있는 데포 주사 또는 임플란트 제제의 형태로 투여될 수 있다. 약학적 조성물은 일반적으로 무균, 실질적으로 등장성 상태로 제형화되며, 미국 식품의약국의 모든 GMP(Good Manufacturing Practice) 규정을 완전히 따른다.

본원에 기재된 항체 및 항체 구조의 독성은 세포 배양 또는 실험 동물의 표준 약학 절차에 의해, 예를 들어 LD50(집단의 50%를 치사에 이르게 하는 용량) 또는 LD100(집단의 100%를 치사에 이르게 하는 용량)을 결정함으로써 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 용량비는 치료 지수이다. 이러한 세포 배양 분석 및 동물 연구에서 얻은 데이터는 인체에 사용하기에 독성이 없는 투여량 범위를 공식화하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 항체의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 또는 전혀 없는 유효 용량을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있다. 투여량은 사용된 투약 형태 및 사용된 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 달라질 수 있다. 정확한 제형, 투여 경로, 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 의사 각자가 선택할 수 있다.

투여용 조성물은 일반적으로, 약학적으로 허용가능한 담체, 바람직하게는 수성 담체에 용해된 항체 또는 기타 제거제(ablative agent)를 포함할 것이다. 다양한 수성 담체, 예를 들어 완충 식염수 등이 사용될 수 있다. 이러한 용액은 무균이며 일반적으로는 바람직하지 않은 물질을 함유하지 않는다. 이러한 조성물은 기존의 잘 알려진 멸균 기술에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 생리학적 조건에 가깝게 하는 데 필요한 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조절제 및 완충제, 독성 조절제 등, 예를 들어 아세트산나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 락트산나트륨 등을 함유할 수 있다. 이러한 제형에서의 활성제의 농도는 크게 달라질 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식 및 환자의 필요에 따라 주로 체액 부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택될 것이다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., 1980) 및 Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)]).

본 발명의 활성제, 이의 제형, 및 사용 지침을 포함하는 키트도 본 발명의 범위에 속한다. 키트는 적어도 하나의 추가 시약, 예를 들어 화학요법 약물 등을 추가로 포함할 수 있다. 키트는 일반적으로 키트 내용물의 용도를 나타내는 라벨을 포함한다. 라벨이라는 용어는 키트에 또는 키트와 함께 제공되거나, 달리 키트에 부속되는 임의의 글 또는 녹음 자료를 포함한다.

이제 본 발명을 충분히 설명하였지만, 본 발명의 사상 또는 범위를 벗어남이 없이 다양한 변경 및 수정이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.

실시예

하기 실시예는 특정 구현예를 설명하기 위해 제공되며, 어떤 식으로도 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.

실시예 1: 인간 종양 세포주에 의한 CAR-T 매개 T-세포 활성화

항-BCMA CAR 및 6x NFAT TK 나노 루시퍼라제 리포터로 Jurkat T 림프구 세포를 형질감염시켜 CAR-T 세포 활성을 측정하였다. 형질감염된 Jurkat 세포를 BCMA-양성 NCI-H929, U266, 및 Daudi, 또는 BCMA-음성 K562 세포와 함께 24시간 동안 공동 배양하였다. Promega Nano-Glo 루시퍼라제 분석 시스템(카탈로그 # N1110)을 사용하여 루시퍼라제 활성을 측정하고, 데이터를 CAR 형질감염된 Jurkat 및 BCMA-음성 K562 세포주를 함유하는 공동 배양물로 정규화하였다. 통계적 유의성은 독립표본 양방 t-검정을 사용하여 결정되었다.

결과는 도 8b에 제공되어 있다.

도 8a는 서열번호 12의 VH 서열을 포함하는 항-BCMA 세포외 결합 도메인을 포함하는 CAR-T 구조의 개략도이다(클론 ID No: 316302). 도 8b는 NCI-H929(*p= 0.04), U266(***p=0.0008), 및 Daudi(*p=0.03) 세포와 함께 T-세포 신호전달의 NFAT 루시퍼라제 리포터 및 항-BCMA 316302 CAR로 형질감염된 Jurkat 세포의 T 세포 활성을 나타내는 그래프이다. 이들 결과는 BCMA CAR Jurkat 세포와 BCMA-음성 K562 세포주의 공동 배양이 평가가능한 루시퍼라제 리포터 신호를 생성하지 않았다는 점에서 T-세포 활성화가 BCMA 표적 결합에 특이적임을 보여준다. 또한, BCMA 양성 NCI-H929, U266, 및 Daudi 세포와 함께 CAR이 아닌 리포터로 형질감염된 Jurkat 세포의 인큐베이션도 평가가능한 루시퍼라제 리포터 신호를 생성하지 않았다.

실시예 2: BCMA 발현 세포에 결합하는 항체

BCMA-발현 MM1.S 및 H929 세포에 결합하는 항체를 유세포 분석으로 평가하였다. 시험 항체는 La 단백질(본원에서 "AntiX"라고 함) 및 BCMA(본원에서 "BCMA_F7E"라고 함)에 결합하는 이중특이적 구성체를 포함하였다. 본원의 다른 곳에서 기술된 바와 같이, 본 발명의 구현예에 따른 이중특이적 구성체는 도 7a 우측에 도시된 바와 같은 2가 형태(본원에서 "BCMA_F7E_F7E"라고도 함), 또는 도 7b 우측에 도시된 바와 같은 1가 형태(본원에서 "BCMA_F7E"라고도 함)의 BCMA 결합 도메인을 포함할 수 있다.

결합 실험은 다음의 구성체를 사용하여 수행하였다: AntiX**BCMA_F7E, BCMA를 표적화하는 1가 아암(서열번호 12 포함) 및 La 단백질 결합 아암을 갖는 이중특이적 항체; AntiX**BCMA_F7E_F7E, BCMA를 표적화하는 2가 아암(2가 배열의 서열번호 12 포함) 및 La 단백질 결합 아암을 갖는 이중특이적 항체; AntiX**GP120_F8A, La 단백질 결합 아암 및 GP120에 결합하는 아암을 포함하는 이중특이적 음성 대조 항체. 간략하게, 300,000~500,000개의 세포를 표 1에 나열된 시험 항체 및 상용 항-BCMA 항체(Biolegend, 19F2)와 함께 150 μl의 FACS 완충액(1X PBS, 2% FBS, 1 mM EDTA)에서 0.5 μl/시험으로 공동 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 2회 세척하고 항-IgG(PE) 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 2회의 추가 세척 후, 세포를 Cytoflex 기기(Beckman Coulter)로 처리하고 FlowJo 소프트웨어 패키지를 사용하여 분석하였다. 표 1, 도 9a, 및 도 9b는 MM1.S 및 H929 세포에서의 항-IgG4 2차 항체에 대한 평균 형광 강도(MFI)를 나타낸다.

[표 1] 항-IgG4 2차 항체의 평균 형광 강도(MFI)

실시예 3: APRIL 및 시험 항체를 사용한 경쟁 ELISA

BAFF로도 알려진, BCMA의 천연 작용제 APRIL을 사용한 경쟁 ELISA로 이중특이적 BCMA-결합의 결합활성(avidity)을 시험하였다. 이 분석에서, 플레이트 표면에 결합된 BCMA를 다양한 농도의 시험 항체 및 APRIL과 함께 공동 인큐베이션하였다. Clear Flat-Bottom Immuno Nonsterile 96웰 플레이트(Corning, 카탈로그 번호 3455)를 100 μL의 PBS에서 웰당 10 ng의 재조합 BCMA(R&D Systems, 카탈로그 번호 193-BC)와 함께 밤새 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고 1X 차단제 BSA(Thermo Scientific, 카탈로그 번호 37525)와 함께 인큐베이션하였다.

시험 항체 및 재조합 APRIL(R&D Systems, 카탈로그 번호 560-AP)을 표 2에 기재된 농도로 BCMA-코팅 플레이트와 함께 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고 마우스 항-인간 IgG-HRP 항체(Southern Biotech, 카탈로그 번호 9200-05)와 함께 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고 제조사의 지침에 따라 Pierce TMB Substrate 키트(Thermo Fisher, 카탈로그 번호 34021)로 현상하였다. 15분 이내에 450 nm 및 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 표 2는 각 샘플에 대한 A450-A570 값을 나타낸다. 도 10a 내지 도 10c는 각각 이중특이적 항체 구성체 AntiX**BCMA_F7E(도 10a), AntiX**BCMA_F7E_F7E(도 10b), 및 AntiX**GP120_F8A(도 10c)에 대한 A450-A570 값을 보여주는 그래프이다. 더 많은 항체 결합은 더 높은 A450-A570 값으로 표시된다. 이중특이적 항체 구성체 농도에 비해 더 높은 APRIL 농도에서도, 2가 배열의 BCMA-결합 VH 서열을 포함하는 AntiX**BCMA_F7E_F7E 구성체는 상당한 결합을 보여준다. AntiX**BCMA_F7E_F7E 구성체는 1가 배열의 BCMA-결합 VH 서열을 포함하는 AntiX**BCMA_F7E 이중특이적 항체 구성체보다 강한 결합을 나타냈다.

[표 2] BCMA 작용제, APRIL의 존재하의 BCMA에 대한 항체 결합을 나타내는 (A450-A570) 값

Claims

BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서, 서열번호 3에 대해 적어도 85% 서열 동일성을 갖는 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하는 다중특이적 항체.
BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서, CDR1 서열, CDR2 서열, 및 CDR3 서열을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하고, CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열의 조합은 서열번호 1 내지 3의 조합에 대해 적어도 85% 서열 동일성을 갖는, 다중특이적 항체.
BCMA에 결합하는 다중특이적 항체로서,
서열번호 1의 서열을 포함하는 CDR1 서열;
서열번호 2의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및
서열번호 3의 서열을 포함하는 CDR3 서열
을 포함하는 가변 영역을 포함하는 제1 결합 유닛을 포함하는 다중특이적 항체.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VH 프레임워크에 존재하는, 다중특이적 항체.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 가변 영역은 중쇄만의 가변 영역인, 다중특이적 항체.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 가변 영역은 서열번호 12에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제6항에 있어서, 가변 영역은 서열번호 12를 포함하는 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 가변 영역은 1가 또는 2가 배열인, 다중특이적 항체.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, CH1 서열의 부재하에 중쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제9항에 있어서, 중쇄 불변 영역 서열은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하지만, CH1 도메인을 포함하지 않는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제10항에 있어서, 중쇄만의 가변 영역과 CH2 도메인 사이에 위치한 힌지 영역 서열을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제16항에 있어서, 힌지 영역 서열은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제16항에 있어서, 힌지 영역 서열은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제18항에 있어서, F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제19항에 있어서, T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제19항에 있어서, T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, La 단백질에 결합하는 제2 결합 유닛을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제22항에 있어서, 제2 결합 유닛은
(a) 중쇄 가변 영역으로서,
(i) 서열번호 4 또는 7의 서열 중 어느 하나를 포함하는 CDR1 서열; 및
(ii) 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및
(iii) 서열번호 6 또는 8의 서열 중 어느 하나를 포함하는 CDR3 서열
을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
(b) 경쇄 가변 영역으로서,
(i) 서열번호 9의 서열을 포함하는 CDR1 서열; 및
(ii) 서열번호 10의 서열을 포함하는 CDR2 서열; 및
(iii) 서열번호 11의 서열을 포함하는 CDR3 서열
을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는, 다중특이적 항체.
제23항에 있어서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은
(i) 서열번호 4의 서열을 포함하는 CDR1 서열, 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 6의 서열을 포함하는 CDR3 서열; 또는
(i) 서열번호 7의 서열을 포함하는 CDR1 서열, 서열번호 5의 서열을 포함하는 CDR2 서열, 및 서열번호 8의 서열을 포함하는 CDR3 서열
을 포함하는, 다중특이적 항체.
제23항 또는 제24항에 있어서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VH 프레임워크에 존재하는, 다중특이적 항체.
제23항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛의 경쇄 가변 영역의 CDR1, CDR2, 및 CDR3 서열은 인간 VL 프레임워크에 존재하는, 다중특이적 항체.
제26항에 있어서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V카파 프레임워크인, 다중특이적 항체.
제26항에 있어서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V람다 프레임워크인, 다중특이적 항체.
제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛은 서열번호 14에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 다중특이적 항체.
제29항에 있어서, 제2 결합 유닛은 서열번호 14의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 16의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 다중특이적 항체.
제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛은 서열번호 15에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 17에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 다중특이적 항체.
제31항에 있어서, 제2 결합 유닛은 서열번호 15의 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 17의 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 다중특이적 항체.
제23항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 공통 폴리펩티드 서브유닛 상에 있고, 링커 서열에 의해 연결되는, 다중특이적 항체.
제23항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 상이한 폴리펩티드 서브유닛 상에 있는, 다중특이적 항체.
제22항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
제35항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 CH1 도메인, 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제36항에 있어서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제43항에 있어서, F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제44항에 있어서, T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제44항에 있어서, T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제22항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
제47항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 인간 V카파 불변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제47항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 인간 V람다 불변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적인, 다중특이적 항체.
(a) La 단백질에 결합하는 제1 결합 유닛으로서,
(i) 인간 VH 프레임워크에 서열번호 4 또는 7의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 6 또는 8의 CDR3 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및
(ii) 인간 VL 프레임워크에 서열번호 9의 CDR1 서열, 서열번호 10의 CDR2 서열, 및 서열번호 11의 CDR3 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역
을 포함하는 제1 결합 유닛; 및
(b) BCMA에 결합하는 제2 결합 유닛으로서,
(i) 인간 VH 프레임워크에 서열번호 1의 CDR1 서열, 서열번호 2의 CDR2 서열, 및 서열번호 3의 CDR3 서열을 포함하는, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인을 포함하고, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 1가 또는 2가 배열인, 제2 결합 유닛
을 포함하는 다중특이적 항체.
제51항에 있어서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 공통 폴리펩티드 서브유닛 상에 있고, 링커 서열에 의해 연결되는, 다중특이적 항체.
제51항에 있어서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역은 다중특이적 항체의 상이한 폴리펩티드 서브유닛 상에 있는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은
(i) 서열번호 4의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 6의 CDR3 서열; 또는
(ii) 서열번호 7의 CDR1 서열, 서열번호 5의 CDR2 서열, 및 서열번호 8의 CDR3 서열
을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V카파 프레임워크인, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 VL 프레임워크는 인간 V람다 프레임워크인, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 서열번호 14 또는 서열번호 15에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제57항에 있어서, 제1 결합 유닛의 중쇄 가변 영역은 서열번호 14 또는 서열번호 15의 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 유닛의 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 또는 서열번호 17에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제59항에 있어서, 제1 결합 유닛의 경쇄 가변 영역은 서열번호 16 또는 서열번호 17의 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 서열번호 12의 서열에 대해 적어도 95% 동일성을 갖는 가변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제61항에 있어서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 서열번호 12의 서열을 포함하는 가변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 항-BCMA 중쇄만의 항체의 항원 결합 도메인은 2가 배열이고 링커 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제63항에 있어서, 링커 서열은 G4S 링커 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 유닛은 중쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
제65항에 있어서, 중쇄 불변 영역은 CH1 도메인, 힌지 영역, CH2 도메인, 및 CH3 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제66항에 있어서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제73항에 있어서, F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제74항에 있어서, T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제74항에 있어서, T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제51항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 결합 유닛은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
제77항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 인간 V카파 불변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제77항에 있어서, 경쇄 불변 영역은 인간 V람다 불변 영역 서열을 포함하는, 다중특이적 항체.
제51항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 결합 유닛은 CH1 서열의 부재하에 중쇄 불변 영역 서열을 추가로 포함하는, 다중특이적 항체.
제80항에 있어서, 중쇄 불변 영역 서열은 CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하지만, CH1 도메인을 포함하지 않는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, CH2 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH2 도메인의 서열(서열번호 36)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, CH2 도메인은 F234A 돌연변이, L235A 돌연변이, 또는 F234A 돌연변이와 L235A 돌연변이 둘 다를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, CH3 도메인은 야생형 인간 IgG4 CH3 도메인의 서열(서열번호 38)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, CH3 도메인은 T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 39)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, CH3 도메인은 T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인(서열번호 40)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, 힌지 영역은 야생형 인간 IgG4 힌지 영역의 서열(서열번호 32)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제81항에 있어서, 힌지 영역은 S228P 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 힌지 영역 서열(서열번호 33)을 포함하는, 다중특이적 항체.
제88항에 있어서, F234A 돌연변이 및 L235A 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH2 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제89항에 있어서, T366W 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제89항에 있어서, T366S 돌연변이, L368A 돌연변이, 및 Y407V 돌연변이를 포함하는 변이체 인간 IgG4 CH3 도메인을 추가로 포함하는 다중특이적 항체.
제51항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 이중특이적인, 다중특이적 항체.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 18의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 24의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 18의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 26의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 21의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 24의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 21의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 26의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 19의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 25의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 19의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 27의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 20의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 22의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 25의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
BCMA 및 La 단백질에 결합하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자로서,
(a) 서열번호 22의 서열을 포함하는 제1 중쇄 폴리펩티드 서브유닛;
(b) 서열번호 27의 서열을 포함하는 제2 중쇄 폴리펩티드 서브유닛; 및
(c) 서열번호 23의 서열을 포함하는 제1 경쇄 폴리펩티드 서브유닛
을 포함하는 이중특이적 3쇄 항체유사 분자.
제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 약학적 조성물.
BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료 방법으로서, 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체, 또는 제101항의 약학적 조성물을 상기 장애가 있는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법.
BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료용 의약의 제조에 있어서, 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체의 용도.
BCMA의 발현을 특징으로 하는 B-세포 장애의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체.
제102항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 장애는 다발성 골수종(MM)인, 방법, 용도, 또는 항체.
제102항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 장애는 자가면역 장애인, 방법, 용도, 또는 항체.
제106항에 있어서, 자가면역 장애는 전신 홍반성 루푸스(SLE)인, 방법, 용도, 또는 항체.
제106항에 있어서, 자가면역 장애는 류마티스 관절염(RA)인, 방법, 용도, 또는 항체.
제106항에 있어서, 자가면역 장애는 다발성 경화증(MS)인, 방법, 용도, 또는 항체.
제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드.
제110항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
제111항의 벡터를 포함하는 세포.
제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체를 생성하는 방법으로서, 제112항에 따른 세포를 항체의 발현이 허용되는 조건하에 성장시키는 단계, 및 세포로부터 항체를 단리하는 단계를 포함하는 방법.
제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체를 제조하는 방법으로서, BCMA로 UniRat 동물을 면역화하는 단계, 및 BCMA 결합 중쇄 서열을 확인하는 단계를 포함하는 방법.
치료를 필요로 하는 개체에게 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항의 항체, 또는 제101항의 약학적 조성물의 유효 용량을 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법.