JP2023026679A - ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 - Google Patents
ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023026679A JP2023026679A JP2023001284A JP2023001284A JP2023026679A JP 2023026679 A JP2023026679 A JP 2023026679A JP 2023001284 A JP2023001284 A JP 2023001284A JP 2023001284 A JP2023001284 A JP 2023001284A JP 2023026679 A JP2023026679 A JP 2023026679A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cell
- scnt
- cells
- seq
- mammalian
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000010374 somatic cell nuclear transfer Methods 0.000 title abstract description 307
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 200
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title abstract description 68
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 title abstract description 43
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 title description 17
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 title description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 326
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 abstract description 177
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 abstract description 84
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 abstract description 75
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 51
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 abstract description 35
- 230000011987 methylation Effects 0.000 abstract description 24
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 abstract description 24
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 18
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 10
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 181
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 178
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 169
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 145
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 129
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 129
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 119
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 117
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 110
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 110
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 109
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 105
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 104
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 104
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 104
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 103
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 99
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 98
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 91
- 101150032905 Kdm4d gene Proteins 0.000 description 85
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 84
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 84
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 79
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 79
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 76
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 74
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 71
- 102000008157 Histone Demethylases Human genes 0.000 description 61
- 108010074870 Histone Demethylases Proteins 0.000 description 61
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 61
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 57
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 55
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 49
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 44
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 44
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 44
- 239000003697 methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 41
- 101000687346 Homo sapiens PR domain zinc finger protein 2 Proteins 0.000 description 36
- 102000016397 Methyltransferase Human genes 0.000 description 34
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 34
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 34
- 229940123379 Methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 33
- 102100024885 PR domain zinc finger protein 2 Human genes 0.000 description 33
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 32
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 102000055027 Protein Methyltransferases Human genes 0.000 description 31
- 108700040121 Protein Methyltransferases Proteins 0.000 description 31
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 30
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- 102000011787 Histone Methyltransferases Human genes 0.000 description 29
- 108010036115 Histone Methyltransferases Proteins 0.000 description 29
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 29
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 29
- 238000011161 development Methods 0.000 description 28
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 28
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 27
- 101001088895 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 4D Proteins 0.000 description 26
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 26
- 101000613629 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 4B Proteins 0.000 description 25
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 25
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 25
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 25
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 25
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 24
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 24
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 24
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 241000894007 species Species 0.000 description 24
- 101000613625 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 4A Proteins 0.000 description 23
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 23
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 23
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 23
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 23
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 23
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 23
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 101001088893 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 4C Proteins 0.000 description 22
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 22
- 102100040860 Lysine-specific demethylase 4B Human genes 0.000 description 21
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 21
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 21
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 20
- 210000001109 blastomere Anatomy 0.000 description 19
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 19
- 102100040863 Lysine-specific demethylase 4A Human genes 0.000 description 18
- 102100033230 Lysine-specific demethylase 4C Human genes 0.000 description 18
- 102100033231 Lysine-specific demethylase 4D Human genes 0.000 description 18
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 18
- 230000008569 process Effects 0.000 description 18
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 18
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 17
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- GVUOPSNMFBICMM-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-6-morpholin-4-yl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound OC1=NC(O)=C(Br)C(N2CCOCC2)=N1 GVUOPSNMFBICMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 101000696705 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SUV39H1 Proteins 0.000 description 16
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 16
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 16
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 16
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 15
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 15
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 101000696699 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SUV39H2 Proteins 0.000 description 14
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 14
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 13
- 230000007159 enucleation Effects 0.000 description 13
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 description 13
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 13
- 239000002777 nucleoside Chemical class 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 12
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 12
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 12
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 12
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 11
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 11
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 11
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 11
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 10
- 238000001353 Chip-sequencing Methods 0.000 description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 10
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 10
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 10
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 10
- 230000006870 function Effects 0.000 description 10
- 102000054786 human SUV39H1 Human genes 0.000 description 10
- 102000050832 human SUV39H2 Human genes 0.000 description 10
- 210000004508 polar body Anatomy 0.000 description 10
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 9
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 9
- 101100422861 Mus musculus Suv39h1 gene Proteins 0.000 description 9
- 101100422868 Mus musculus Suv39h2 gene Proteins 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 9
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 9
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 9
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 9
- 102000049881 human KDM4D Human genes 0.000 description 9
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 9
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 9
- 108091033409 CRISPR Proteins 0.000 description 8
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 8
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 8
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 8
- 102100028998 Histone-lysine N-methyltransferase SUV39H1 Human genes 0.000 description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 8
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 8
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 description 8
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 8
- 125000001769 aryl amino group Chemical group 0.000 description 8
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 8
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 8
- 125000005240 diheteroarylamino group Chemical group 0.000 description 8
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 8
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 8
- 125000005241 heteroarylamino group Chemical group 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 8
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 8
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 8
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 8
- 230000016853 telophase Effects 0.000 description 8
- 238000002679 ablation Methods 0.000 description 7
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 7
- 210000001771 cumulus cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 7
- 125000004986 diarylamino group Chemical group 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 238000003197 gene knockdown Methods 0.000 description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 7
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 7
- 238000010373 organism cloning Methods 0.000 description 7
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 7
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 7
- 238000011191 terminal modification Methods 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 102100033636 Histone H3.2 Human genes 0.000 description 6
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 6
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 6
- DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N Uridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-XVFCMESISA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 6
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 6
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 230000017858 demethylation Effects 0.000 description 6
- 238000010520 demethylation reaction Methods 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 210000004039 endoderm cell Anatomy 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 6
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 6
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 6
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 6
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 6
- 101100422859 Bos taurus SUV39H1 gene Proteins 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 101000615488 Homo sapiens Methyl-CpG-binding domain protein 2 Proteins 0.000 description 5
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 5
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 5
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 102100021299 Methyl-CpG-binding domain protein 2 Human genes 0.000 description 5
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 5
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 5
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 5
- GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N UNPD149280 Natural products N1C(=O)C23OC(=O)C=CC(O)CCCC(C)CC=CC3C(O)C(=C)C(C)C2C1CC1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 5
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 5
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 5
- GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N cytochalasin B Natural products C[C@H]1CCC[C@@H](O)C=CC(=O)O[C@@]23[C@H](C=CC1)[C@H](O)C(=C)[C@@H](C)[C@@H]2[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O GBOGMAARMMDZGR-JREHFAHYSA-N 0.000 description 5
- GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N cytochalasin B Chemical compound C([C@H]1[C@@H]2[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]3/C=C/C[C@H](C)CCC[C@@H](O)/C=C/C(=O)O[C@@]23C(=O)N1)=C)C)C1=CC=CC=C1 GBOGMAARMMDZGR-TYHYBEHESA-N 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 5
- 102000045775 human KDM4A Human genes 0.000 description 5
- 102000052630 human KDM4B Human genes 0.000 description 5
- 102000046705 human KDM4C Human genes 0.000 description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 5
- 125000003835 nucleoside group Chemical class 0.000 description 5
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 5
- 150000004713 phosphodiesters Chemical class 0.000 description 5
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 239000002213 purine nucleotide Substances 0.000 description 5
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 5
- 108700024797 rat Suv39h1 Proteins 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 5
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 5
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 4
- 101100422864 Bos taurus SUV39H2 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000010354 CRISPR gene editing Methods 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 4
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 4
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 4
- 102100028988 Histone-lysine N-methyltransferase SUV39H2 Human genes 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 4
- 229910004856 P—O—P Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 4
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 4
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical group [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 4
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 4
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 4
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 4
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 4
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 4
- 125000001041 indolyl group Chemical group 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 4
- 102000035118 modified proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091005573 modified proteins Proteins 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000032361 posttranscriptional gene silencing Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000002719 pyrimidine nucleotide Substances 0.000 description 4
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 4
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 4
- QOECJCJVIMVJGX-UHFFFAOYSA-N 2-cyclohexyl-6-methoxy-N-(1-propan-2-yl-4-piperidinyl)-7-[3-(1-pyrrolidinyl)propoxy]-4-quinazolinamine Chemical compound N1=C(C2CCCCC2)N=C2C=C(OCCCN3CCCC3)C(OC)=CC2=C1NC1CCN(C(C)C)CC1 QOECJCJVIMVJGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- BKCDJTRMYWSXMC-UHFFFAOYSA-N 5'-methoxy-6'-(3-pyrrolidin-1-ylpropoxy)spiro[cyclobutane-1,3'-indole]-2'-amine Chemical compound COC1=CC(C2(CCC2)C(N)=N2)=C2C=C1OCCCN1CCCC1 BKCDJTRMYWSXMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 3
- 101100287812 Caenorhabditis elegans jmjd-2 gene Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 3
- NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N Guanosine Chemical group C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O NYHBQMYGNKIUIF-UUOKFMHZSA-N 0.000 description 3
- 102100035043 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Human genes 0.000 description 3
- 101710119194 Histone-lysine N-methyltransferase SUV39H1 Proteins 0.000 description 3
- 101000907904 Homo sapiens Endoribonuclease Dicer Proteins 0.000 description 3
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 3
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 101100287809 Mus musculus Kdm4d gene Proteins 0.000 description 3
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 206010033266 Ovarian Hyperstimulation Syndrome Diseases 0.000 description 3
- 241000282320 Panthera leo Species 0.000 description 3
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100287810 Rattus norvegicus Kdm4d gene Proteins 0.000 description 3
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108010041897 SU(VAR)3-9 Proteins 0.000 description 3
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N beta-L-uridine Natural products O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-PSQAKQOGSA-N 0.000 description 3
- 210000004703 blastocyst inner cell mass Anatomy 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 3
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 3
- PZPPOCZWRGNKIR-PNVYSBBASA-N chaetocin Chemical compound N([C@@H]1N2C(=O)[C@]3(CO)SS[C@]2(C(N3C)=O)C2)C3=CC=CC=C3[C@]12[C@@]12C[C@]3(SS4)C(=O)N(C)[C@]4(CO)C(=O)N3[C@H]2NC2=CC=CC=C12 PZPPOCZWRGNKIR-PNVYSBBASA-N 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K dioxido-sulfanylidene-sulfido-$l^{5}-phosphane Chemical compound [O-]P([O-])([S-])=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N dithiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=S NAGJZTKCGNOGPW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002304 esc Anatomy 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 3
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 3
- 208000012268 mitochondrial disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 3
- 210000000472 morula Anatomy 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 229940121649 protein inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 239000012268 protein inhibitor Substances 0.000 description 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000446 sulfanediyl group Chemical group *S* 0.000 description 3
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 3
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 3
- RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N trichostatin A Chemical compound ONC(=O)/C=C/C(/C)=C/[C@@H](C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-QEQCGCAPSA-N 0.000 description 3
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N uracil arabinoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DRTQHJPVMGBUCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 3
- SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 2'-O-methyl uridine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 2'-deoxythymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 2
- 102100025425 2-oxoglutarate and iron-dependent oxygenase JMJD4 Human genes 0.000 description 2
- GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C=C1 GJTBSTBJLVYKAU-XVFCMESISA-N 0.000 description 2
- OMKHWTRUYNAGFG-IEBDPFPHSA-N 3-deazaneplanocin a Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=CC=2N1[C@@H]1C=C(CO)[C@@H](O)[C@H]1O OMKHWTRUYNAGFG-IEBDPFPHSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrouracil Chemical compound O=C1CCNC(=O)N1 OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethoxy-2-(4-methyl-1,4-diazepan-1-yl)-N-[1-(phenylmethyl)-4-piperidinyl]-4-quinazolinamine Chemical compound C=12C=C(OC)C(OC)=CC2=NC(N2CCN(C)CCC2)=NC=1NC(CC1)CCN1CC1=CC=CC=C1 OSXFATOLZGZLSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 7-methylguanosine Chemical compound C1=2N=C(N)NC(=O)C=2[N+](C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OGHAROSJZRTIOK-KQYNXXCUSA-O 0.000 description 2
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 9beta-Ribofuranosyl-7-deazaadenin Natural products C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(O)C1O HDZZVAMISRMYHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035657 Abasia Diseases 0.000 description 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 2
- 102100023962 Bifunctional arginine demethylase and lysyl-hydroxylase JMJD6 Human genes 0.000 description 2
- 102100023960 Bifunctional peptidase and (3S)-lysyl hydroxylase JMJD7 Human genes 0.000 description 2
- 102100037468 Bifunctional peptidase and arginyl-hydroxylase JMJD5 Human genes 0.000 description 2
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 241001550206 Colla Species 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 2
- 102100023387 Endoribonuclease Dicer Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 2
- 241000283070 Equus zebra Species 0.000 description 2
- 108060002716 Exonuclease Proteins 0.000 description 2
- 102100027727 F-box/LRR-repeat protein 19 Human genes 0.000 description 2
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 2
- 241000282819 Giraffa Species 0.000 description 2
- 108010034791 Heterochromatin Proteins 0.000 description 2
- 102000003964 Histone deacetylase Human genes 0.000 description 2
- 108090000353 Histone deacetylase Proteins 0.000 description 2
- 102100035864 Histone lysine demethylase PHF8 Human genes 0.000 description 2
- 102100025210 Histone-arginine methyltransferase CARM1 Human genes 0.000 description 2
- 102100023696 Histone-lysine N-methyltransferase SETDB1 Human genes 0.000 description 2
- 102100029239 Histone-lysine N-methyltransferase, H3 lysine-36 specific Human genes 0.000 description 2
- 101000934666 Homo sapiens 2-oxoglutarate and iron-dependent oxygenase JMJD4 Proteins 0.000 description 2
- 101000975541 Homo sapiens Bifunctional arginine demethylase and lysyl-hydroxylase JMJD6 Proteins 0.000 description 2
- 101000975540 Homo sapiens Bifunctional peptidase and (3S)-lysyl hydroxylase JMJD7 Proteins 0.000 description 2
- 101001025948 Homo sapiens Bifunctional peptidase and arginyl-hydroxylase JMJD5 Proteins 0.000 description 2
- 101000862205 Homo sapiens F-box/LRR-repeat protein 19 Proteins 0.000 description 2
- 101001000378 Homo sapiens Histone lysine demethylase PHF8 Proteins 0.000 description 2
- 101000877314 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Proteins 0.000 description 2
- 101000634050 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase, H3 lysine-36 specific Proteins 0.000 description 2
- 101000975533 Homo sapiens JmjC domain-containing protein 8 Proteins 0.000 description 2
- 101000613958 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 2A Proteins 0.000 description 2
- 101001025971 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 6B Proteins 0.000 description 2
- 101001025945 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 7A Proteins 0.000 description 2
- 101000692954 Homo sapiens Lysine-specific demethylase PHF2 Proteins 0.000 description 2
- 101000613960 Homo sapiens Lysine-specific histone demethylase 1B Proteins 0.000 description 2
- 101000796144 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 9 Proteins 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 102000004375 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Human genes 0.000 description 2
- 108090000957 Insulin-like growth factor-binding protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 102100023958 JmjC domain-containing protein 8 Human genes 0.000 description 2
- 241000254158 Lampyridae Species 0.000 description 2
- 241000406668 Loxodonta cyclotis Species 0.000 description 2
- 102000006830 Luminescent Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010047357 Luminescent Proteins Proteins 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100040598 Lysine-specific demethylase 2A Human genes 0.000 description 2
- 102100040581 Lysine-specific demethylase 3A Human genes 0.000 description 2
- 102100033246 Lysine-specific demethylase 5A Human genes 0.000 description 2
- 102100033247 Lysine-specific demethylase 5B Human genes 0.000 description 2
- 102100037461 Lysine-specific demethylase 6B Human genes 0.000 description 2
- 102100037465 Lysine-specific demethylase 7A Human genes 0.000 description 2
- 102100026395 Lysine-specific demethylase PHF2 Human genes 0.000 description 2
- 102100040596 Lysine-specific histone demethylase 1B Human genes 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940122938 MicroRNA inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 2
- 240000000249 Morus alba Species 0.000 description 2
- 235000008708 Morus alba Nutrition 0.000 description 2
- 101100256746 Mus musculus Setdb1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100489547 Mus musculus Zscan4d gene Proteins 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 2
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 2
- 108700005081 Overlapping Genes Proteins 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 description 2
- 102100031369 Protein arginine N-methyltransferase 9 Human genes 0.000 description 2
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 241000282806 Rhinoceros Species 0.000 description 2
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N Trichostatin A Natural products ONC(=O)C=CC(C)=CC(C)C(=O)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 RTKIYFITIVXBLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 206010064930 age-related macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L calcium lactate Chemical compound [Ca+2].CC(O)C([O-])=O.CC(O)C([O-])=O MKJXYGKVIBWPFZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000008668 cellular reprogramming Effects 0.000 description 2
- PZPPOCZWRGNKIR-UHFFFAOYSA-N chaetocin Natural products C1C2(C(N3C)=O)SSC3(CO)C(=O)N2C2NC3=CC=CC=C3C21C12CC3(SS4)C(=O)N(C)C4(CO)C(=O)N3C2NC2=CC=CC=C12 PZPPOCZWRGNKIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- 108010030886 coactivator-associated arginine methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 2
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 description 2
- FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N cordysinin B Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000001995 cyclobutyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 2
- YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N cycloheximide Chemical compound C1[C@@H](C)C[C@H](C)C(=O)[C@@H]1[C@H](O)CC1CC(=O)NC(=O)C1 YPHMISFOHDHNIV-FSZOTQKASA-N 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 230000001335 demethylating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 2
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 2
- 230000009547 development abnormality Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000001158 estrous effect Effects 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 102000013165 exonuclease Human genes 0.000 description 2
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000001072 heteroaryl group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004458 heterochromatin Anatomy 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 102000051823 human PRDM2 Human genes 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 2
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 2
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 description 2
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 2
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 2
- 230000027758 ovulation cycle Effects 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000020775 positive regulation of microtubule depolymerization Effects 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 2
- 108010045647 puromycin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 235000021092 sugar substitutes Nutrition 0.000 description 2
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 2
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 2
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 2
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 2
- 210000004340 zona pellucida Anatomy 0.000 description 2
- GRYSXUXXBDSYRT-WOUKDFQISA-N (2r,3r,4r,5r)-2-(hydroxymethyl)-4-methoxy-5-[6-(methylamino)purin-9-yl]oxolan-3-ol Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1OC GRYSXUXXBDSYRT-WOUKDFQISA-N 0.000 description 1
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N (2r,3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-(2-methoxyethoxy)oxolane-2,4-diol Chemical compound COCCO[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O YIMATHOGWXZHFX-WCTZXXKLSA-N 0.000 description 1
- BNIFSVVAHBLNTN-XKKUQSFHSA-N (2s)-4-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-4-amino-2-[[2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-1-[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s,3r)-2-amino-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]hexan Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O)CCC1 BNIFSVVAHBLNTN-XKKUQSFHSA-N 0.000 description 1
- STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N (3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolane-2,4-diol Chemical compound CO[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 1
- 150000000178 1,2,4-triazoles Chemical class 0.000 description 1
- UIYWFOZZIZEEKJ-XVFCMESISA-N 1-[(2r,3r,4r,5r)-3-fluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound F[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 UIYWFOZZIZEEKJ-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- OTFGHFBGGZEXEU-PEBGCTIMSA-N 1-[(2r,3r,4r,5r)-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolan-2-yl]-3-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N(C)C(=O)C=C1 OTFGHFBGGZEXEU-PEBGCTIMSA-N 0.000 description 1
- QPHRQMAYYMYWFW-FJGDRVTGSA-N 1-[(2r,3s,4r,5r)-3-fluoro-3,4-dihydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]pyrimidine-2,4-dione Chemical compound O[C@]1(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 QPHRQMAYYMYWFW-FJGDRVTGSA-N 0.000 description 1
- HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 1-[(4s,5s)-4-azido-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1O[C@H](CO)[C@@H](N=[N+]=[N-])C1 HBOMLICNUCNMMY-KJFJCRTCSA-N 0.000 description 1
- DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 1-butoxybutane Chemical compound CCCCOCCCC DURPTKYDGMDSBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UNFCIEAAJFHALK-UHFFFAOYSA-N 1h-diazepine;quinazolin-2-amine Chemical class N1C=CC=CC=N1.C1=CC=CC2=NC(N)=NC=C21 UNFCIEAAJFHALK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methyladenosine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methylcytidine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVYNGSFVYRPRCG-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methylguanosine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC(N)=NC2=O)=C2N=C1 OVYNGSFVYRPRCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methylcytidine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RFCQJGFZUQFYRF-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- OVYNGSFVYRPRCG-KQYNXXCUSA-N 2'-O-methylguanosine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=C(N)NC2=O)=C2N=C1 OVYNGSFVYRPRCG-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 2'-O-methyluridine Chemical compound CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 SXUXMRMBWZCMEN-ZOQUXTDFSA-N 0.000 description 1
- MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 2'-deoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-SHYZEUOFSA-N 0.000 description 1
- WYDKPTZGVLTYPG-UHFFFAOYSA-N 2,8-diamino-3,7-dihydropurin-6-one Chemical compound N1C(N)=NC(=O)C2=C1N=C(N)N2 WYDKPTZGVLTYPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMADWRYCYBUIKH-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 SMADWRYCYBUIKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USCCECGPGBGFOM-UHFFFAOYSA-N 2-propyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CCCC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 USCCECGPGBGFOM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VPLZGVOSFFCKFC-UHFFFAOYSA-N 3-methyluracil Chemical compound CN1C(=O)C=CNC1=O VPLZGVOSFFCKFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASFAFOSQXBRFMV-LJQANCHMSA-N 3-n-(2-benzyl-1,3-dihydroxypropan-2-yl)-1-n-[(1r)-1-(4-fluorophenyl)ethyl]-5-[methyl(methylsulfonyl)amino]benzene-1,3-dicarboxamide Chemical compound N([C@H](C)C=1C=CC(F)=CC=1)C(=O)C(C=1)=CC(N(C)S(C)(=O)=O)=CC=1C(=O)NC(CO)(CO)CC1=CC=CC=C1 ASFAFOSQXBRFMV-LJQANCHMSA-N 0.000 description 1
- LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 3-nitro-1h-pyrrole Chemical compound [O-][N+](=O)C=1C=CNC=1 LOJNBPNACKZWAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 4-Thiouridine Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-dimethylaminopyridine Substances CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PHAFOFIVSNSAPQ-UHFFFAOYSA-N 4-fluoro-6-methyl-1h-benzimidazole Chemical compound CC1=CC(F)=C2NC=NC2=C1 PHAFOFIVSNSAPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 4-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=S)C=C1 ZLOIGESWDJYCTF-XVFCMESISA-N 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 125000004032 5'-inosinyl group Chemical group 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 5-Methylcytidine Natural products O=C1N=C(N)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPRQAJTUSRLECG-UHFFFAOYSA-N 5-[6-(dimethylamino)purin-9-yl]-2-(hydroxymethyl)-4-methoxyoxolan-3-ol Chemical compound COC1C(O)C(CO)OC1N1C2=NC=NC(N(C)C)=C2N=C1 IPRQAJTUSRLECG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSQFEYRZKLNHPX-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-6-(cyclopropylamino)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound OC1=NC(O)=C(Br)C(NC2CC2)=N1 DSQFEYRZKLNHPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 5-iodouracil Chemical compound IC1=CNC(=O)NC1=O KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound COC1=CNC(=O)NC1=O KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 5-methylcytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 ZAYHVCMSTBRABG-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 5-nitro-1h-indole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=C2NC=CC2=C1 OZFPSOBLQZPIAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091027075 5S-rRNA precursor Proteins 0.000 description 1
- JTDYUFSDZATMKU-UHFFFAOYSA-N 6-(1,3-dioxo-2-benzo[de]isoquinolinyl)-N-hydroxyhexanamide Chemical compound C1=CC(C(N(CCCCCC(=O)NO)C2=O)=O)=C3C2=CC=CC3=C1 JTDYUFSDZATMKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHILKUISCGPRMQ-UHFFFAOYSA-N 6-amino-5-(trifluoromethyl)-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound NC1=NC(=O)NC=C1C(F)(F)F OHILKUISCGPRMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 6-methyladenine Chemical compound CNC1=NC=NC2=C1N=CN2 CKOMXBHMKXXTNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 7,8-dihydro-8-oxoguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1NC(=O)N2 CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKUJKKGMOZDDJV-ZRNGKTOUSA-N 8-O-methylsterigmatocystin Chemical compound O([C@H]1OC=C[C@H]1C1=C2O3)C1=CC(OC)=C2C(=O)C1=C3C=CC=C1OC JKUJKKGMOZDDJV-ZRNGKTOUSA-N 0.000 description 1
- RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 8-oxoadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC(=O)N2 RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220504802 Acetylcholine receptor subunit alpha_G4C_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102100036664 Adenosine deaminase Human genes 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000282452 Ailuropoda melanoleuca Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108091029845 Aminoallyl nucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102100038778 Amphiregulin Human genes 0.000 description 1
- 108010033760 Amphiregulin Proteins 0.000 description 1
- 102100022987 Angiogenin Human genes 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 101100108891 Arabidopsis thaliana PRMT11 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 108700020463 BRCA1 Proteins 0.000 description 1
- 102000036365 BRCA1 Human genes 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283726 Bison Species 0.000 description 1
- ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N Boron Chemical compound [B] ZOXJGFHDIHLPTG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001027327 Bos taurus Growth-regulated protein homolog alpha Proteins 0.000 description 1
- 101001069913 Bos taurus Growth-regulated protein homolog beta Proteins 0.000 description 1
- 101001069912 Bos taurus Growth-regulated protein homolog gamma Proteins 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102100023705 C-C motif chemokine 14 Human genes 0.000 description 1
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 1
- 102100039398 C-X-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036189 C-X-C motif chemokine 3 Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102100028892 Cardiotrophin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100027473 Cartilage oligomeric matrix protein Human genes 0.000 description 1
- 101710176668 Cartilage oligomeric matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002157 Cellulin Polymers 0.000 description 1
- 241000282994 Cervidae Species 0.000 description 1
- 241000221955 Chaetomium Species 0.000 description 1
- GXGJIOMUZAGVEH-UHFFFAOYSA-N Chamazulene Chemical group CCC1=CC=C(C)C2=CC=C(C)C2=C1 GXGJIOMUZAGVEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 1
- 102000016950 Chemokine CXCL1 Human genes 0.000 description 1
- 108091060290 Chromatid Proteins 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 125000003317 D-arabinofuranosyl group Chemical group [H]OC([H])([H])[C@@]1([H])OC([H])(*)[C@@]([H])(O[H])[C@]1([H])O[H] 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 229940126190 DNA methyltransferase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 101100447432 Danio rerio gapdh-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091027757 Deoxyribozyme Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000619676 Drosophila melanogaster Lipid storage droplets surface-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 101150067270 Ehmt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001331845 Equus asinus x caballus Species 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010007005 Estrogen Receptor alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010041356 Estrogen Receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100029951 Estrogen receptor beta Human genes 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000289695 Eutheria Species 0.000 description 1
- 108091060211 Expressed sequence tag Proteins 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100038581 F-box only protein 10 Human genes 0.000 description 1
- 241000272184 Falconiformes Species 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108090000368 Fibroblast growth factor 8 Proteins 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N Gly-His-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CN=CN1 MVORZMQFXBLMHM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 241000650678 Gorilla gorilla diehli Species 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102100034221 Growth-regulated alpha protein Human genes 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039869 Histone H2B type F-S Human genes 0.000 description 1
- 108010016918 Histone-Lysine N-Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000000581 Histone-lysine N-methyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 102100022103 Histone-lysine N-methyltransferase 2A Human genes 0.000 description 1
- 102100022102 Histone-lysine N-methyltransferase 2B Human genes 0.000 description 1
- 102100027755 Histone-lysine N-methyltransferase 2C Human genes 0.000 description 1
- 108091016366 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT1 Proteins 0.000 description 1
- 102100035042 Histone-lysine N-methyltransferase EHMT2 Human genes 0.000 description 1
- 102100038970 Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027770 Histone-lysine N-methyltransferase KMT5B Human genes 0.000 description 1
- 102100027788 Histone-lysine N-methyltransferase KMT5C Human genes 0.000 description 1
- 102100032742 Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100027704 Histone-lysine N-methyltransferase SETD7 Human genes 0.000 description 1
- 101710168120 Histone-lysine N-methyltransferase SETDB1 Proteins 0.000 description 1
- 102100023676 Histone-lysine N-methyltransferase SETDB2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039489 Histone-lysine N-methyltransferase, H3 lysine-79 specific Human genes 0.000 description 1
- 101710095112 Histone-lysine N-methyltransferase, H3 lysine-9 specific SUVH1 Proteins 0.000 description 1
- 101000978381 Homo sapiens C-C motif chemokine 14 Proteins 0.000 description 1
- 101000947193 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 3 Proteins 0.000 description 1
- 101100173424 Homo sapiens FBXO10 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001069921 Homo sapiens Growth-regulated alpha protein Proteins 0.000 description 1
- 101001035372 Homo sapiens Histone H2B type F-S Proteins 0.000 description 1
- 101001045846 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2A Proteins 0.000 description 1
- 101001045848 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2B Proteins 0.000 description 1
- 101001008892 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2C Proteins 0.000 description 1
- 101001008894 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase 2D Proteins 0.000 description 1
- 101000877312 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EHMT2 Proteins 0.000 description 1
- 101000882127 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase EZH2 Proteins 0.000 description 1
- 101001008821 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase KMT5B Proteins 0.000 description 1
- 101001008824 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase KMT5C Proteins 0.000 description 1
- 101000654725 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000650682 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETD7 Proteins 0.000 description 1
- 101000684609 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETDB1 Proteins 0.000 description 1
- 101000684615 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase SETDB2 Proteins 0.000 description 1
- 101000963360 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase, H3 lysine-79 specific Proteins 0.000 description 1
- 101000614013 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 2B Proteins 0.000 description 1
- 101000614017 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 3A Proteins 0.000 description 1
- 101000614020 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 3B Proteins 0.000 description 1
- 101001088892 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 5A Proteins 0.000 description 1
- 101001088883 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 5B Proteins 0.000 description 1
- 101001088887 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 5C Proteins 0.000 description 1
- 101001088879 Homo sapiens Lysine-specific demethylase 5D Proteins 0.000 description 1
- 101001050886 Homo sapiens Lysine-specific histone demethylase 1A Proteins 0.000 description 1
- 101001008816 Homo sapiens N-lysine methyltransferase KMT5A Proteins 0.000 description 1
- 101000708645 Homo sapiens N-lysine methyltransferase SMYD2 Proteins 0.000 description 1
- 101100521074 Homo sapiens PRDM2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000595923 Homo sapiens Placenta growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001028703 Homo sapiens Probable JmjC domain-containing histone demethylation protein 2C Proteins 0.000 description 1
- 101000871708 Homo sapiens Proheparin-binding EGF-like growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101001056567 Homo sapiens Protein Jumonji Proteins 0.000 description 1
- 101000757216 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000757232 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000924541 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000775582 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 6 Proteins 0.000 description 1
- 101000693024 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 7 Proteins 0.000 description 1
- 101000796142 Homo sapiens Protein arginine N-methyltransferase 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000755643 Homo sapiens RIMS-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000756365 Homo sapiens Retinol-binding protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 108091066896 Homo sapiens miR-331 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091061778 Homo sapiens miR-615 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091068856 Homo sapiens miR-98 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 description 1
- 102100025947 Insulin-like growth factor II Human genes 0.000 description 1
- 102100040018 Interferon alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010078049 Interferon alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 101150086476 KDM5B gene Proteins 0.000 description 1
- 101150018389 Kdm3a gene Proteins 0.000 description 1
- 101150019772 Kdm4b gene Proteins 0.000 description 1
- 101150013319 Kdm4c gene Proteins 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N L-lactic acid Chemical group C[C@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- 235000019687 Lamb Nutrition 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 108010092277 Leptin Proteins 0.000 description 1
- 102000016267 Leptin Human genes 0.000 description 1
- 229930190887 Leptomycin Natural products 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 102100040584 Lysine-specific demethylase 2B Human genes 0.000 description 1
- 102100040582 Lysine-specific demethylase 3B Human genes 0.000 description 1
- 102100033249 Lysine-specific demethylase 5C Human genes 0.000 description 1
- 102100033143 Lysine-specific demethylase 5D Human genes 0.000 description 1
- 102100024985 Lysine-specific histone demethylase 1A Human genes 0.000 description 1
- 108700041567 MDR Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000009571 Macrophage Inflammatory Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010009474 Macrophage Inflammatory Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000218213 Morus <angiosperm> Species 0.000 description 1
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 1
- 101100225545 Mus musculus Ehmt1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- IYYIBFCJILKPCO-WOUKDFQISA-O N(2),N(2),N(7)-trimethylguanosine Chemical compound C1=2NC(N(C)C)=NC(=O)C=2N(C)C=[N+]1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O IYYIBFCJILKPCO-WOUKDFQISA-O 0.000 description 1
- ZBYRSRLCXTUFLJ-IOSLPCCCSA-O N(2),N(7)-dimethylguanosine Chemical compound CNC=1NC(C=2[N+](=CN([C@H]3[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)C=2N=1)C)=O ZBYRSRLCXTUFLJ-IOSLPCCCSA-O 0.000 description 1
- IJCKBIINTQEGLY-UHFFFAOYSA-N N(4)-acetylcytosine Chemical compound CC(=O)NC1=CC=NC(=O)N1 IJCKBIINTQEGLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N N(6)-methyladenosine Chemical compound C1=NC=2C(NC)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O VQAYFKKCNSOZKM-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- 102100027771 N-lysine methyltransferase KMT5A Human genes 0.000 description 1
- 102100032806 N-lysine methyltransferase SMYD2 Human genes 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108091007494 Nucleic acid- binding domains Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- JKUJKKGMOZDDJV-UHFFFAOYSA-N O-Methyl-sterigmatocystin Natural products O1C2=C3C4C=COC4OC3=CC(OC)=C2C(=O)C2=C1C=CC=C2OC JKUJKKGMOZDDJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N O=P1OCO1 Chemical group O=P1OCO1 TTZMPOZCBFTTPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 102000002584 Octamer Transcription Factor-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010068425 Octamer Transcription Factor-3 Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000630 Oncostatin M Proteins 0.000 description 1
- 102000004140 Oncostatin M Human genes 0.000 description 1
- XAFYCPTXURWXGH-UHFFFAOYSA-N P(O)(O)(O)=S.P(O)(O)=O Chemical compound P(O)(O)(O)=S.P(O)(O)=O XAFYCPTXURWXGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241000282377 Panthera tigris sumatrae Species 0.000 description 1
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 1
- ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N Phosphorous acid Chemical class OP(O)=O ABLZXFCXXLZCGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000254064 Photinus pyralis Species 0.000 description 1
- 102100035194 Placenta growth factor Human genes 0.000 description 1
- 102100039277 Pleiotrophin Human genes 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102100037169 Probable JmjC domain-containing histone demethylation protein 2C Human genes 0.000 description 1
- 241000283080 Proboscidea <mammal> Species 0.000 description 1
- 102100033762 Proheparin-binding EGF-like growth factor Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 102100025733 Protein Jumonji Human genes 0.000 description 1
- 102100022985 Protein arginine N-methyltransferase 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100022988 Protein arginine N-methyltransferase 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034603 Protein arginine N-methyltransferase 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100034607 Protein arginine N-methyltransferase 5 Human genes 0.000 description 1
- 101710084427 Protein arginine N-methyltransferase 5 Proteins 0.000 description 1
- 102100032140 Protein arginine N-methyltransferase 6 Human genes 0.000 description 1
- 102100026297 Protein arginine N-methyltransferase 7 Human genes 0.000 description 1
- 102100031365 Protein arginine N-methyltransferase 8 Human genes 0.000 description 1
- 229930185560 Pseudouridine Natural products 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N Pseudouridine C Natural products OC1C(O)C(CO)OC1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006819 RNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 241000283011 Rangifer Species 0.000 description 1
- 101100247004 Rattus norvegicus Qsox1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100020718 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Human genes 0.000 description 1
- 101710151245 Receptor-type tyrosine-protein kinase FLT3 Proteins 0.000 description 1
- 108010052090 Renilla Luciferases Proteins 0.000 description 1
- 241000242743 Renilla reniformis Species 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 108010057163 Ribonuclease III Proteins 0.000 description 1
- 102000003661 Ribonuclease III Human genes 0.000 description 1
- 102000004389 Ribonucleoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010081734 Ribonucleoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108020004487 Satellite DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000039471 Small Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- 108020003224 Small Nucleolar RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042773 Small Nucleolar RNA Human genes 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N Sterigmatocystin Natural products COc1cc2OC3C=COC3c2c4Oc5cccc(O)c5C(=O)c14 KYGRCGGBECLWMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N Sterigmatrocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1C=COC1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272534 Struthio camelus Species 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 102000002933 Thioredoxin Human genes 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 101710188297 Trehalose synthase/amylase TreS Proteins 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 241001147416 Ursus maritimus Species 0.000 description 1
- IMGTYEJTVRXGLW-UHFFFAOYSA-N Verticillin A Natural products C=1C=CC=C2C=1NC1N3C(=O)C(N(C4=O)C)(C)SSC34C(O)C21C1(C2O)C3=CC=CC=C3NC1N1C(=O)C3(C)SSC12C(=O)N3C IMGTYEJTVRXGLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091007416 X-inactive specific transcript Proteins 0.000 description 1
- 108091035715 XIST (gene) Proteins 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 208000037919 acquired disease Diseases 0.000 description 1
- 108010023082 activin A Proteins 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose 5-phosphate Chemical group OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PPQRONHOSHZGFQ-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 150000004703 alkoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 150000005215 alkyl ethers Chemical group 0.000 description 1
- 125000005600 alkyl phosphonate group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006350 alkyl thio alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002431 aminoalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- HSTJJKALJLWLBR-UHFFFAOYSA-N aminophosphonic acid;2-methoxyethoxyphosphonamidic acid Chemical compound NP(O)(O)=O.COCCOP(N)(O)=O HSTJJKALJLWLBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010072788 angiogenin Proteins 0.000 description 1
- 125000002178 anthracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- FIVPIPIDMRVLAY-UHFFFAOYSA-N aspergillin Natural products C1C2=CC=CC(O)C2N2C1(SS1)C(=O)N(C)C1(CO)C2=O FIVPIPIDMRVLAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M benzylpenicillin sodium Chemical compound [Na+].N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C([O-])=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 FCPVYOBCFFNJFS-LQDWTQKMSA-M 0.000 description 1
- WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N beta-Pseudouridine Natural products OC1OC(CN2C=CC(=O)NC2=O)C(O)C1O WGDUUQDYDIIBKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004952 blastocoel Anatomy 0.000 description 1
- 210000000625 blastula Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000007894 caplet Substances 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000000837 carbohydrate group Chemical group 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 108010041776 cardiotrophin 1 Proteins 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 229930191237 chaetoglobosin Natural products 0.000 description 1
- OUMWCYMRLMEZJH-VOXRAUTJSA-N chaetoglobosin A Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)[C@@H]1[C@@H]([C@]2(O[C@H]22)C)C)C(=O)[C@@]11[C@H]2\C=C\C[C@H](C)\C=C(C)\[C@@H](O)C(=O)\C=C\C1=O OUMWCYMRLMEZJH-VOXRAUTJSA-N 0.000 description 1
- 229930187278 chaetoglobosins Natural products 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 210000004756 chromatid Anatomy 0.000 description 1
- 230000010428 chromatin condensation Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 108010082025 cyan fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N desoxyuridine Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C=C1 MXHRCPNRJAMMIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000004720 dielectrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N dihydrosterigmatocystin Natural products O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(C1CCOC1O1)=C1C=C2OC RHGQIWVTIHZRLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N diphenyl ether Chemical compound C=1C=CC=CC=1OC1=CC=CC=C1 USIUVYZYUHIAEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001177 diphosphate Substances 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N dipropyl ether Chemical compound CCCOCCC POLCUAVZOMRGSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N disiloxane Chemical group [SiH3]O[SiH3] KPUWHANPEXNPJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 125000004119 disulfanediyl group Chemical group *SS* 0.000 description 1
- 239000003968 dna methyltransferase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004696 endometrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003989 endothelium vascular Anatomy 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 1
- 210000001842 enterocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000008995 epigenetic change Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 description 1
- 230000012173 estrus Effects 0.000 description 1
- 125000005745 ethoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 1
- 210000004186 follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000037440 gene silencing effect Effects 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- FIVPIPIDMRVLAY-RBJBARPLSA-N gliotoxin Chemical group C1C2=CC=C[C@H](O)[C@H]2N2[C@]1(SS1)C(=O)N(C)[C@@]1(CO)C2=O FIVPIPIDMRVLAY-RBJBARPLSA-N 0.000 description 1
- 229940103893 gliotoxin Drugs 0.000 description 1
- 229930190252 gliotoxin Natural products 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010038983 glycyl-histidyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 210000002503 granulosa cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940029575 guanosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000001401 hemangioblastic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 108010034429 heregulin alpha Proteins 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 101150113423 hisD gene Proteins 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000004191 hydrophobic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 1
- 229960001388 interferon-beta Drugs 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000145841 kine Species 0.000 description 1
- 229940116871 l-lactate Drugs 0.000 description 1
- 229940039781 leptin Drugs 0.000 description 1
- NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N leptin Chemical compound O=C([C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)CCSC)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NRYBAZVQPHGZNS-ZSOCWYAHSA-N 0.000 description 1
- YACHGFWEQXFSBS-RJXCBBHPSA-N leptomycin Chemical compound OC(=O)/C=C(C)/C[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)[C@H](C)/C=C(\C)/C=C/C[C@@H](C)\C=C(/CC)\C=C\[C@@H]1OC(=O)C=C[C@@H]1C YACHGFWEQXFSBS-RJXCBBHPSA-N 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003120 macrolide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 229940041033 macrolides Drugs 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004184 methoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 1
- YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N methylphosphonic acid Chemical class CP(O)(O)=O YACKEPLHDIMKIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002816 methylsulfanyl group Chemical group [H]C([H])([H])S[*] 0.000 description 1
- 238000002406 microsurgery Methods 0.000 description 1
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 1
- 238000010852 mitochondrial transfer Methods 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002636 mycotoxin Substances 0.000 description 1
- BPRQFDNBWVMLPS-UHFFFAOYSA-N n-(3-methylbut-3-enyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(=C)CCNC1=NC=NC2=C1NC=N2 BPRQFDNBWVMLPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FZQMZXGTZAPBAK-UHFFFAOYSA-N n-(3-methylbutyl)-7h-purin-6-amine Chemical compound CC(C)CCNC1=NC=NC2=C1NC=N2 FZQMZXGTZAPBAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229940075566 naphthalene Drugs 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000011242 neutrophil chemotaxis Effects 0.000 description 1
- YCWSUKQGVSGXJO-NTUHNPAUSA-N nifuroxazide Chemical group C1=CC(O)=CC=C1C(=O)N\N=C\C1=CC=C([N+]([O-])=O)O1 YCWSUKQGVSGXJO-NTUHNPAUSA-N 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000001668 nucleic acid synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000001293 nucleolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 230000005868 ontogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 210000004409 osteocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 150000002923 oximes Chemical class 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 230000026792 palmitoylation Effects 0.000 description 1
- 230000008186 parthenogenesis Effects 0.000 description 1
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 1
- 125000003933 pentacenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC4=CC5=CC=CC=C5C=C4C=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 108010012038 peptide 78 Proteins 0.000 description 1
- 229940125863 peptide 78 Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-N phosphinic acid Chemical compound O[PH2]=O ACVYVLVWPXVTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHDXSLLGPJSSGW-VEGRVEBRSA-N phosphoric acid;(2r,3r,4r)-2,3,4,5-tetrahydroxypentanal Chemical group OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O RHDXSLLGPJSSGW-VEGRVEBRSA-N 0.000 description 1
- 125000002743 phosphorus functional group Chemical group 0.000 description 1
- LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N phosphoryl Chemical class [P]=O LFGREXWGYUGZLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005642 phosphothioate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000006461 physiological response Effects 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000010181 polygamy Effects 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003334 potential effect Effects 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 1
- 238000007639 printing Methods 0.000 description 1
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 description 1
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000002568 propynyl group Chemical group [*]C#CC([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 1
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N pseudouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C1=CNC(=O)NC1=O PTJWIQPHWPFNBW-GBNDHIKLSA-N 0.000 description 1
- 239000002212 purine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003834 purine nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 1
- 125000001725 pyrenyl group Chemical group 0.000 description 1
- UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N pyridin-2-ol Chemical compound OC1=CC=CC=N1 UBQKCCHYAOITMY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002718 pyrimidine nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003235 pyrrolidines Chemical class 0.000 description 1
- JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N quinazoline Chemical compound N1=CN=CC2=CC=CC=C21 JWVCLYRUEFBMGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000006578 reductive coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013074 reference sample Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003583 retinal pigment epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N ribothymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-JXOAFFINSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052594 sapphire Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010980 sapphire Substances 0.000 description 1
- 230000008684 selective degradation Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N selenophosphoric acid Chemical class OP(O)([SeH])=O JRPHGDYSKGJTKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000002363 skeletal muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 108091029842 small nuclear ribonucleic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N sterigmatocystin Chemical compound O1C2=CC=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C([C@@H]1C=CO[C@@H]1O1)=C1C=C2OC UTSVPXMQSFGQTM-DCXZOGHSSA-N 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 150000003456 sulfonamides Chemical class 0.000 description 1
- 150000003871 sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 125000001935 tetracenyl group Chemical group C1(=CC=CC2=CC3=CC4=CC=CC=C4C=C3C=C12)* 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- VOVUARRWDCVURC-UHFFFAOYSA-N thiirane Chemical compound C1CS1 VOVUARRWDCVURC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFBPGACXRPVDQW-UHFFFAOYSA-N thiirane 1,1-dioxide Chemical compound O=S1(=O)CC1 OFBPGACXRPVDQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000005309 thioalkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004001 thioalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003568 thioethers Chemical class 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 1
- 108060008226 thioredoxin Proteins 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000003014 totipotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011222 transcriptome analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical class [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N triphosphoric acid Chemical compound OP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O UNXRWKVEANCORM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002993 trophoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-KCGFPETGSA-N 0.000 description 1
- HDZZVAMISRMYHH-LITAXDCLSA-N tubercidin Chemical compound C1=CC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@@H](CO)[C@H](O)[C@H]1O HDZZVAMISRMYHH-LITAXDCLSA-N 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- IMGTYEJTVRXGLW-DGCYEQIUSA-N verticillin a Chemical compound S([C@](N(C1=O)C)(C)C(=O)N2[C@H]3NC=4C5=CC=CC=4)S[C@]21[C@@H](O)[C@]53[C@@]1([C@@H]2O)C3=CC=CC=C3N[C@@H]1N1C(=O)[C@]3(C)SS[C@@]12C(=O)N3C IMGTYEJTVRXGLW-DGCYEQIUSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 150000003952 β-lactams Chemical group 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
- C12N15/877—Techniques for producing new mammalian cloned embryos
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0273—Cloned animals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/873—Techniques for producing new embryos, e.g. nuclear transfer, manipulation of totipotent cells or production of chimeric embryos
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0604—Whole embryos; Culture medium therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
- C12N5/0606—Pluripotent embryonic cells, e.g. embryonic stem cells [ES]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2517/00—Cells related to new breeds of animals
- C12N2517/04—Cells produced using nuclear transfer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y201/00—Transferases transferring one-carbon groups (2.1)
- C12Y201/01—Methyltransferases (2.1.1)
- C12Y201/01043—Histone-lysine N-methyltransferase (2.1.1.43)
Abstract
Description
本願は、35 U.S.C. 119(e)の下で、2014年9月15日に出願された米国仮特許出願第62/050,308号および2014年9月22日に出願された米国仮特許出願第62/053,514号の恩典を主張し、その各内容は全体として参照により本明細書に組み入れられる。
本発明は、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health/NIH)から授与されたNIH U01DK089565の下で政府の支援を受けてなされたものである。米国政府は、本発明に関して一定の権利を保有する。
最終分化した体細胞は、体細胞核移入(SCNT)によって除核卵母細胞内に移植されると全能状態にリプログラミングされることができる(Gurdon, 1962)。SCNTは、分化した体細胞の単一の核から動物全体の生成を可能にするので、農業、生物医学工業、および絶滅危惧種の保護に大きな潜在性を有する(Yang et al., 2007)。実際、ヒツジにおける哺乳動物クローニングが1997年に最初に成功して以来(Wilmut et al., 1997)、20種よりも多い哺乳動物種がSCNTを経てクローニングされている(Rodriguez-Osorio et al., 2012)。そのうえ、SCNTによって作製された胚盤胞から多能性胚性幹細胞を樹立することができるので(Wakayama et al., 2001)、SCNTは、ヒトの治療に大いに有望である(Hochedlinger and Jaenisch, 2003)。この有望性は、最初のヒト核移入胚性幹細胞(ntESC)の派生における最近の成功(Tachibana et al., 2013)、および高齢者またはヒト患者細胞からのヒトntESC作製(Chung et al., 2014; Yamada et al., 2014)の後に、より現実に近づいている。これらのntESCは、インビトロ疾患モデル化用の細胞の貴重な供給源として、ならびに再生療法および細胞/組織置換療法用の細胞の供給源として役立ち得る。
その基礎科学および治療用途の両方の莫大な潜在性にもかかわらず、体細胞核移入(SCNT)による哺乳動物クローニングの効率は、非常に低いままである。SCNT後の生きた幼体の出生率は、使用される種、ドナー細胞の種類、プロトコール、または技法に関わらず10%未満である。同様に、クローニングされた胚の発生率は、正常に受精した胚の発生率よりも低く、胚盤胞への発生不良および胚盤胞でのより少ない細胞数を招く。これらの欠損は、クローニングされたマウスSCNT胚からES細胞株の成功裏な樹立が滅多に起こらないことの原因にもなり、成功は、正常な胚が使用されるときの約30%の成功と比較して、マウス系統またはドナー細胞型にかかわらず約5%である。クローニングされた胚の機能不全は、主として、ドナー核における不完全な核プログラミングおよび/またはエピジェネティックなバリアが原因である。
便宜上、本出願全体に採用される特定の用語(明細書、実施例、および添付の特許請求の範囲を含む)を、ここに集める。特に定義しない限り、本明細書に使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の技術者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。
一局面では、本発明は、SCNTの効率を増加させる方法であって、ドナー哺乳動物細胞、またはSCNT胚、または卵母細胞の核または細胞質を、ヒストンメチル化を阻害する、特にH3K9メチル化を阻害する、特にH3H9me3トリメチル化を阻害する作用物質と接触させる段階を含む方法を提供する。いくつかの態様では、作用物質は、Kdm4ヒストンデメチラーゼ活性化剤である。
一局面では、本発明は、SCNTの効率を増加させる方法であって:ドナー哺乳動物細胞またはSCNT胚または卵母細胞の核または細胞質を、ヒストンメチル化を阻害する、特にH3K9メチル化を阻害する、特にH3H9me3トリメチル化を阻害する作用物質と接触させる段階を含む、方法を提供する。本発明の特定の態様では、作用物質は、ヒストンメチルトランスフェラーゼ活性を阻害する。本発明の特定の態様では、作用物質は、ヒストンメチルトランスフェラーゼの発現を阻害する。本発明の特定の態様では、阻害剤は、H3K9メチルトランスフェラーゼの阻害剤である。本明細書に述べられるように、本発明者らは、H3K9メチルトランスフェラーゼタンパク質の阻害をSCNTの効率を増加させるために使用することができることを発見した。いくつかの態様では、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤は、タンパク質 阻害剤であり、いくつかの態様では、阻害剤は、H3K9メチルトランスフェラーゼタンパク質の機能またはその遺伝子からのH3K9メチルトランスフェラーゼの発現を阻害する任意の作用物質である。
およびそれと少なくとも80%の配列同一性のフラグメントまたは誘導体である。
およびそのフラグメントまたは少なくとも80%の配列同一性の誘導体である。
未修飾オリゴヌクレオチドは、一部の適用において最適未満である可能性があり、例えば未修飾オリゴヌクレオチドは、例えば細胞ヌクレアーゼによる分解を受けやすい可能性がある。ヌクレアーゼは、核酸ホスホジエステル結合を加水分解することができる。しかし、オリゴヌクレオチドの1つまたは複数のサブユニットに対する化学修飾は、改善された性質を付与することができ、例えば、オリゴヌクレオチドをヌクレアーゼに対してより安定にすることができる。
リン酸基
リン酸基は、負荷電化学種である。電荷は、2つの非架橋型酸素原子に等しく分布される。しかし、リン酸基を、酸素の一方を異なる置換基により置換することによって修飾することができる。RNAリン酸エステル骨格に対するこの修飾の1つの結果は、核酸分解性破壊に対するオリゴリボヌクレオチドの増加した耐性であることができる。したがって、理論に縛られることを望むわけではないが、非荷電リンカーまたは非対称な電荷分布を有する荷電リンカーのいずれかを生じる変更を導入することが、いくつかの態様で理想的であることができる。
リン酸基を、リン不含コネクターによって置換することができる。理論に縛られることを望むわけではないが、荷電ホスホジエステル基は、核酸分解における反応中心であるので、中性構造模倣物によるその置換は、増強したヌクレアーゼ安定性を付与するはずであると考えられる。さらに、理論に縛られることを望むわけではないが、いくつかの態様において、荷電リン酸基が中性部分によって置換される変更を導入することが理想的であることができる。
リン酸リンカーおよびリボース糖が、ヌクレアーゼ耐性のヌクレオシド代用物またはヌクレオチド代用物によって置換されている、オリゴヌクレオチド模倣足場も構築することができる。理論に縛られることを望むわけではないが、反復荷電した骨格の非存在は、ポリアニオンを認識するタンパク質(例えばヌクレアーゼ)への結合を減少させると考えられる。さらに、理論に縛られることを望むわけではないが、ある態様において、塩基が中性代用物骨格によって繋がれている変更を導入することが理想的であることができる。例には、モルホリノ、シクロブチル、ピロリジンおよびペプチド核酸(PNA)ヌクレオシド代用物が含まれる。好ましい代用物は、PNA代用物である。
オリゴヌクレオチドは、核酸の糖基の全てまたは一部の修飾を含むことができる。例えば、2'ヒドロキシル基(OH)を、いくつかの異なる「オキシ」または「デオキシ」置換基により修飾または置換することができる。理論に縛られるわけではなく、ヒドロキシルが脱プロトン化されてもはや2'-アルコキシドイオンを形成することができないので、増強した安定性が予期される。2'-アルコキシドは、リンカーのリン原子への分子内求核攻撃による分解を触媒することができる。さらに、理論に縛られることを望むわけではないが、2'位でのアルコキシド形成が不可能である変更を導入することが、いくつかの態様に理想的であることができる。
オリゴヌクレオチドの3ダッシュ(3')および5ダッシュ(5')末端を修飾することができる。そのような修飾は、分子の3'末端、5'末端または両末端にあることができる。それらは、末端リン酸全体またはリン酸基の原子の1つまたは複数の修飾または置換を含むことができる。例えば、オリゴヌクレオチドの3'および5'末端を、標識部分、例えばフルオロフォア(例えば、ピレン、TAMRA、フルオレセイン、Cy3もしくはCy5色素)または保護基(例えば、硫黄、ケイ素、ホウ素またはエステルに基づく)のような他の機能的分子実体にコンジュゲートすることができる。機能的分子実体を、リン酸基および/またはリンカーを経由して糖に結合させることができる。リンカーの末端原子は、リン酸基の結合原子または糖のC-3'もしくはC-5'のO、N、SもしくはC基と結合またはそれを置換することができる。あるいは、リンカーは、ヌクレオチド代用物(例えばPNA)の末端原子と結合またはそれを置換することができる。
アデニン、グアニン、シトシンおよびウラシルは、RNAに見出される最も一般的な塩基である。これらの塩基を、修飾または置換して、改善された性質を有するRNAを提供することができる。例えばヌクレアーゼ耐性オリゴリボヌクレオチドを、これらの塩基を用いて、または合成および天然の核酸塩基(例えば、イノシン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌブラリン(nubularine)、イソグアニシン(isoguanisine)、もしくはツベルシジン)および上記修飾の任意の1つを用いて調製することができる。あるいは、上記塩基および「ユニバーサル塩基」のいずれかの置換または修飾類似体を用いることができる。例には、2-(ハロ)アデニン、2-(アルキル)アデニン、2-(プロピル)アデニン、2(アミノ)アデニン、2-(アミノアルキル)アデニン、2(アミノプロピル)アデニン、2(メチルチオ)N6(イソペンテニル)アデニン、6(アルキル)アデニン、6(メチル)アデニン、7(デアザ)アデニン、8(アルケニル)アデニン、8-(アルキル)アデニン、8(アルキニル)アデニン、8(アミノ)アデニン、8-(ハロ)アデニン、8-(ヒドロキシル)アデニン、8(チオアルキル)アデニン、8-(チオール)アデニン、N6-(イソペンチル)アデニン、N6(メチル)アデニン、N6,N6(ジメチル)アデニン、2-(アルキル)グアニン、2(プロピル)グアニン、6-(アルキル)グアニン、6(メチル)グアニン、7(アルキル)グアニン、7(メチル)グアニン、7(デアザ)グアニン、8(アルキル)グアニン、8-(アルケニル)グアニン、8(アルキニル)グアニン、8-(アミノ)グアニン、8(ハロ)グアニン、8-(ヒドロキシル)グアニン、8(チオアルキル)グアニン、8-(チオール)グアニン、N(メチル)グアニン、2-(チオ)シトシン、3(デアザ)5(アザ)シトシン、3-(アルキル)シトシン、3(メチル)シトシン、5-(アルキル)シトシン、5-(アルキニル)シトシン、5(ハロ)シトシン、5(メチル)シトシン、5(プロピニル)シトシン、5(プロピニル)シトシン、5(トリフルオロメチル)シトシン、6-(アゾ)シトシン、N4(アセチル)シトシン、3(3アミノ-3カルボキシプロピル)ウラシル、2-(チオ)ウラシル、5(メチル)2(チオ)ウラシル、5(メチルアミノメチル)-2(チオ)ウラシル、4-(チオ)ウラシル、5(メチル)4(チオ)ウラシル、5(メチルアミノメチル)-4(チオ)ウラシル、5(メチル)2,4(ジチオ)ウラシル、5(メチルアミノメチル)-2,4(ジチオ)ウラシル、5(2-アミノプロピル)ウラシル、5-(アルキル)ウラシル、5-(アルキニル)ウラシル、5-(アリルアミノ)ウラシル、5(アミノアリル)ウラシル、5(アミノアルキル)ウラシル、5(グアニジニウムアルキル)ウラシル、5(1,3-ジアゾール-1-アルキル)ウラシル、5-(シアノアルキル)ウラシル、5-(ジアルキルアミノアルキル)ウラシル、5(ジメチルアミノアルキル)ウラシル、5-(ハロ)ウラシル、5-(メトキシ)ウラシル、ウラシル-5オキシ酢酸、5(メトキシカルボニルメチル)-2-(チオ)ウラシル、5(メトキシカルボニル-メチル)ウラシル、5(プロピニル)ウラシル、5(プロピニル)ウラシル、5(トリフルオロメチル)ウラシル、6(アゾ)ウラシル、ジヒドロウラシル、N3(メチル)ウラシル、5-ウラシル(すなわち、プソイドウラシル)、2(チオ)プソイドウラシル、4(チオ)プソイドウラシル、2,4-(ジチオ)プソイドウラシル、5-(アルキル)プソイドウラシル、5-(メチル)プソイドウラシル、5-(アルキル)-2-(チオ)プソイドウラシル、5-(メチル)-2-(チオ)プソイドウラシル、5-(アルキル)-4(チオ)プソイドウラシル、5-(メチル)-4(チオ)プソイドウラシル、5-(アルキル)-2,4(ジチオ)プソイドウラシル、5-(メチル)-2,4(ジチオ)プソイドウラシル、1置換プソイドウラシル、1置換2(チオ)-プソイドウラシル、1置換4(チオ)プソイドウラシル、1置換2,4-(ジチオ)プソイドウラシル、1(アミノカルボニルエチレニル)-プソイドウラシル、1(アミノカルボニルエチレニル)-2(チオ)-プソイドウラシル、1(アミノカルボニルエチレニル)-4(チオ)プソイドウラシル、1(アミノカルボニルエチレニル)-2,4-(ジチオ)プソイドウラシル、1(アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル)-プソイドウラシル、1(アミノアルキルアミノ-カルボニルエチレニル)-2(チオ)-プソイドウラシル、1(アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル)-4(チオ)プソイドウラシル、1(アミノアルキルアミノカルボニルエチレニル)-2,4-(ジチオ)プソイドウラシル、1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェノキサジン-1-イル、1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェノキサジン-1-イル、1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェンチアジン(phenthiazin)-1-イル、1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェンチアジン-1-イル、7-置換1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェノキサジン-1-イル、7-置換1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェノキサジン-1-イル、7-置換1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェンチアジン-1-イル、7-置換1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェンチアジン-1-イル、7-(アミノアルキルヒドロキシ)-1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェノキサジン-1-イル、7-(アミノアルキルヒドロキシ)-1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェノキサジン-1-イル、7-(アミノアルキルヒドロキシ)-1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェンチアジン-1-イル、7-(アミノアルキルヒドロキシ)-1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェンチアジン-1-イル、7-(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)-1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェノキサジン-1-イル、7-(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)-1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェノキサジン-1-イル、7-(グアニジニウムアルキル-ヒドロキシ)-1,3-(ジアザ)-2-(オキソ)-フェンチアジン-1-イル、7-(グアニジニウムアルキルヒドロキシ)-1-(アザ)-2-(チオ)-3-(アザ)-フェンチアジン-1-イル、1,3,5-(トリアザ)-2,6-(ジオキサ)-ナフタレン、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、ヌブラリン、ツベルシジン、イソグアニシン(isoguanisine)、イノシニル、2-アザ-イノシニル、7-デアザ-イノシニル、ニトロイミダゾリル、ニトロピラゾリル、ニトロベンゾイミダゾリル、ニトロインダゾリル、アミノインドリル、ピロールピリミジニル、3-(メチル)イソカルボスチリリル(isocarbostyrilyl)、5-(メチル)イソカルボスチリリル、3-(メチル)-7-(プロピニル)イソカルボスチリリル、7-(アザ)インドリル、6-(メチル)-7-(アザ)インドリル、イミジゾピリジニル(imidizopyridinyl)、9-(メチル)-イミジゾピリジニル、ピロールピリジニル、イソカルボスチリリル、7-(プロピニル)イソカルボスチリリル、プロピニル-7-(アザ)インドリル、2,4,5-(トリメチル)フェニル、4-(メチル)インドリル、4,6-(ジメチル)インドリル、フェニル、ナフタレニル、アントラセニル、フェナントラセニル、ピレニル、スチルベニル、テトラセニル、ペンタセニル、ジフルオロトリル、4-(フルオロ)-6-(メチル)ベンゾイミダゾール、4-(メチル)ベンゾイミダゾール、6-(アゾ)チミン、2-ピリジノン、5ニトロインドール、3ニトロピロール、6-(アザ)ピリミジン、2(アミノ)プリン、2,6-(ジアミノ)プリン、5置換ピリミジン、N2-置換プリン、N6-置換プリン、O6-置換プリン、置換1,2,4-トリアゾール、またはその任意のO-アルキル化もしくはN-アルキル化誘導体が含まれる。
オリゴヌクレオチドへの修飾は、また、リン酸エステルまたは修飾リン酸エステル骨格部分の糖、塩基、および/またはリン原子に対する1つまたは複数の陽イオン性基の結合を含むことができる。陽イオン性基は、天然、異常またはユニバーサル塩基上での置換が可能な任意の原子に結合することができる。好ましい位置は、ハイブリダイゼーションを妨害しない、すなわち、塩基対形成のために必要な水素結合形成相互作用を妨害しない位置である。陽イオン性基は、例えば糖のC2'位または環式もしくは非環式糖代用物における類似の位置を経由して結合することができる。例えば、陽イオン性基は、例えば、O-アミン(アミン=NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、もしくはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ);アミノアルコキシ、例えば、O(CH2)nアミン、(例えば、アミン=NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、もしくはジヘテロアリールアミノ、エチレンジアミン、ポリアミノ);アミノ(例えばNH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、ジヘテロアリールアミノ、もしくはアミノ酸);またはNH(CH2CH2NH)nCH2CH2-アミン(アミン=NH2;アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ヘテロシクリル、アリールアミノ、ジアリールアミノ、ヘテロアリールアミノ、もしくはジヘテロアリールアミノ)から得られるプロトン化アミノ基を含むことができる。
いくつかの修飾は、好ましくは、オリゴヌクレオチド上の特定の部位で、例えば鎖の内部位置で、またはオリゴヌクレオチドの5'もしくは3'末端上に含まれることができる。オリゴヌクレオチド上の修飾の好ましい部位は、作用物質に好ましい性質を付与することができる。例えば、特定の修飾の好ましい部位は、最適な遺伝子サイレンシング性質、またはエンドヌクレアーゼもしくはエキソヌクレアーゼ活性に対する増加した耐性を付与することができる。
本発明により使用されるオリゴリボヌクレオチドおよびオリゴリボヌクレオシドは、固相合成で合成することができる。例えば、"Oligonucleotide synthesis, a practical approach", Ed. M. J. Gait, IRL Press, 1984; "Oligonucleotides and Analogues, A Practical Approach", Ed. F. Eckstein, IRL Press, 1991(特にChapter 1, Modern machine-aided methods of oligodeoxyribonucleotide synthesis、Chapter 2, Oligoribonucleotide synthesis、Chapter 3, 2'-O--Methyloligoribonucleotide- s: synthesis and applications、Chapter 4, Phosphorothioate oligonucleotides、Chapter 5, Synthesis of oligonucleotide phosphorodithioates、Chapter 6, Synthesis of oligo-2'-deoxyribonucleoside methylphosphonates、およびChapter 7, Oligodeoxynucleotides containing modified basesを参照されたい。他の特に有用な合成手順、試薬、ブロッキング基および反応条件は、Martin, P., Helv. Chim. Acta, 1995, 78, 486-504; Beaucage, S. L. and Iyer, R. P., Tetrahedron, 1992, 48, 2223-2311およびBeaucage, S. L. and Iyer, R. P., Tetrahedron, 1993, 49, 6123-6194、またはその中で参照される参考文献に記載されている。国際公開公報第00/44895号、同第01/75164号、または同第02/44321号に記載されている修飾を、本明細書において使用することができる。本明細書に挙げられる全ての刊行物、特許、および公開された特許出願の開示は、参照により本明細書に組み入れられる。
ホスフィン酸オリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第5,508,270号に記載されている。アルキルホスホネートオリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第4,469,863号に記載されている。ホスホロアミダイトオリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第5,256,775号または同第5,366,878号に記載されている。ホスホトリエステルオリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第5,023,243号に記載されている。ボラノリン酸オリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第5,130,302号および第5,177,198号に記載されている。3'-デオキシ-3'-アミノホスホルアミデートオリゴリボヌクレオチドの調製は、米国特許第5,476,925号に記載されている。3'-デオキシ-3'-メチレンホスホネートオリゴリボヌクレオチドは、An, H, et al. J. Org. Chem. 2001, 66, 2789-2801に記載されている。硫黄架橋ヌクレオチドの調製は、Sproat et al. Nucleosides Nucleotides 1988, 7,651およびCrosstick et al. Tetrahedron Lett. 1989, 30, 4693に記載されている。
2'修飾への修飾は、Verma, S. et al. Annu. Rev. Biochem. 1998, 67, 99-134およびその中の全ての参考文献に見出すことができる。リボースへの特異的修飾は、以下の参考文献中に見出すことができる:2'-フルオロ(Kawasaki et. al., J. Med. Chem., 1993, 36, 831-841)、2'-MOE(Martin, P. Helv. Chim. Acta 1996, 79, 1930-1938)、「LNA」(Wengel, J. Acc. Chem. Res. 1999, 32, 301-310)。
本明細書においてMMI結合型オリゴリボヌクレオシドとしても特定されるメチレンメチルイミノ結合型オリゴリボヌクレオシド、本明細書においてMDH結合型オリゴリボヌクレオシドとしても特定されるメチレンジメチルヒドラゾ結合型オリゴリボヌクレオシド、および本明細書においてアミド-3結合型オリゴリボヌクレオシドとしても特定されるメチレンカルボニルアミノ結合型オリゴヌクレオシド、および本明細書においてアミド-4結合型オリゴリボヌクレオシドとしても特定されるメチレンアミノカルボニル結合型オリゴヌクレオシド、ならびに例えば交互のMMI結合およびPOまたはPS結合として有する混合骨格化合物は、米国特許第5,378,825号、同第5,386,023号、同第5,489,677号および公開されたPCT出願PCT/US92/04294およびPCT/US92/04305(それぞれ国際公開公報第92/20822号および同第92/20823号として公開されている)に記載されているように調製することができる。ホルムアセタール結合型オリゴリボヌクレオシドおよびチオホルムアセタール結合型オリゴリボヌクレオシドは、米国特許第5,264,562号および同第5,264,564号に記載されているように調製することができる。エチレンオキシド結合型オリゴリボヌクレオシドは、米国特許第5,223,618号に記載されているように調製することができる。シロキサン置換は、Cormier,J.F. et al. Nucleic Acids Res. 1988, 16, 4583に記載されている。カルボネート置換は、Tittensor, J.R. J. Chem. Soc. C 1971, 1933に記載されている。カルボキシメチル置換は、Edge, M.D. et al. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 1972, 1991に記載されている。カルバメート置換は、Stirchak, E.P. Nucleic Acids Res. 1989, 17, 6129に記載されている。
シクロブチル糖代用化合物は、米国特許第5,359,044号に記載されているように調製することができる。ピロリジン糖代用物は、米国特許第5,519,134号に記載されているように調製することができる。モルホリノ糖代用物は、米国特許第5,142,047号および同第5,235,033号および他の関連特許開示に記載されているように調製することができる。ペプチド核酸(PNA)は、それ自体が公知であり、Peptide Nucleic Acids (PNA): Synthesis, Properties and Potential Applications, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 1996, 4, 5-23の中で参照される様々な手順のいずれかに従って調製することができる。それらは、その全体として参照により本明細書に組み入れられる米国特許第5,539,083号に従って調製することもできる。
末端修飾は、Manoharan, M. et al. Antisense and Nucleic Acid Drug Development 12, 103-128 (2002)およびその中の参考文献に記載されている。
N-2置換プリンヌクレオシドアミダイトは、米国特許第5,459,255号に記載されているように調製することができる。3-デアザプリンヌクレオシドアミダイトは、米国特許第5,457,191号に記載されているように調製することができる。5,6-置換ピリミジンヌクレオシドアミダイトは、米国特許第5,614,617号に記載されているように調製することができる。5-プロピニルピリミジンヌクレオシドアミダイトは、米国特許第5,484,908号に記載されているように調製することができる。追加的な参考文献は、塩基修飾に関する上記の節に開示されている。
本発明のオリゴヌクレオチド化合物は、溶液相または固相有機合成を使用して調製することができる。有機合成は、非天然ヌクレオチドまたは修飾ヌクレオチドを含むオリゴヌクレオチド鎖を容易に調製できるという利点を提供する。当技術分野において公知のそのような合成のための任意の他の手段を、追加的または代替的に用いることができる。ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートおよびアルキル化誘導体のような他のオリゴヌクレオチドを調製するために類似の技法を使用することも公知である。本発明の二本鎖オリゴヌクレオチド化合物は、二段階手順を使用して調製することができる。最初に、二本鎖分子の個別の鎖は、別々に調製される。次に、構成要素の鎖がアニーリングされる。
標的細胞(例えば、基底細胞または肺および/もしくは呼吸器系の細胞または他の所望の標的細胞)にRNAi剤、例えばsiRNA、またはRNAi剤を含有するベクターを送達する方法は、当業者に周知である。いくつかの態様では、Suv39h1、Suv39h2 Setdb1、Ehmt1および/またはPRDM2の任意の1つを阻害する、RNAi剤のようなH3K9メチルトランスフェラーゼの阻害剤である、RNAi剤(例えば遺伝子サイレンシングRNAi剤)を、エアロゾル手段を介して、例えばネブライザーなどを使用して、対象に投与することができる。代替的な態様では、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、Suv39h1、Suv39h2 Setdb1、Ehmt1および/またはPRDM2の任意の1つの阻害剤である、RNAi剤(例えば遺伝子サイレンシングRNAi剤)の投与は、例えば(i)RNA干渉剤、例えばsiRNAを含有する組成物の注射、または(ii)細胞(例えば、ドナー哺乳動物細胞、レシピエント卵母細胞、またはSCNT胚)を、RNAi剤、例えばsiRNAを含む組成物と直接接触させることを含むことができる。
いくつかの態様では、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤は、Suv39h1、Suv39h2、Setdb1、Ehmt1またはPRDM2のようなH3K9メチルトランスフェラーゼの任意の1つのタンパク質阻害剤および/またはペプチド阻害剤、例えば非限定的に、Suv39h1、Suv39h2、Setdb1、Ehmt1またはPRDM2のようなH3K9メチルトランスフェラーゼの変異型タンパク質;治療用タンパク質および組み換えタンパク質ならびにドミナントネガティブ阻害剤(例えば、H3K9メチルトランスフェラーゼの非機能的タンパク質、またはH3K9メチルトランスフェラーゼに競合的に結合するH3K9メチルトランスフェラーゼの非機能的リガンド)である。タンパク質およびペプチド阻害剤は、また、例えば変異型タンパク質、遺伝的に修飾されたタンパク質、ペプチド、合成ペプチド、組み換えタンパク質、キメラタンパク質、抗体、ヒト化タンパク質、ヒト化抗体、キメラ抗体、修飾タンパク質およびそのフラグメントを含むことができる。
いくつかの態様では、本発明の方法に有用なH3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤には、例えば、モノクローナル、キメラヒト化、および組み換え抗体ならびにその抗原結合性フラグメントを含めた抗体が含まれる。いくつかの態様では、中和抗体は、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤として使用することができる。抗体は、ウサギまたはマウスのような動物において、抗原を免疫処置することによって容易に産生される。免疫処置されたマウスは、ハイブリドーマを製造するためのB細胞源を提供するために特に有用であり、今度はハイブリドーマが培養されて、大量のモノクローナル抗体を産生する。Suv39h1および/またはSuv39h2の市販の抗体阻害剤が、本発明における使用のために包含され、例えばSanta Cruz biotechnologyなどから入手可能である。
上の節に述べられる適用の全ては、参照により本明細書に組み入れられる。いくつかの態様では、当業者は、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤として他の作用物質を使用することができ、例えば、抗体、デコイ抗体、またはRNAiは、本明細書開示のSCNTの効率を増加させるための方法、化合物およびキットに有効である。
本発明の目的は、SCNTの効率を増加させ、かつSCNTを使用して体細胞をより効率的にクローニングする手段を提供することである。本開示の方法は、哺乳動物をクローニングするため、全能細胞もしくは多能性細胞を得るため、または哺乳動物細胞をリプログラミングするために使用され得る。
特定の態様では、本発明の方法、キットおよび組成物に使用するためのレシピエント卵母細胞は、任意の哺乳動物種由来であり得る。特定の態様では、凍結保存した卵母細胞が、レシピエント卵母細胞として使用される。特定の態様では、レシピエント卵母細胞はヒト性である。卵母細胞の低温貯蔵および解凍は、当業者に公知である(Tucker et al., Curr Opin Obstet Gynecol. 1995 June; 7(3):188-92を参照されたい)。いくつかの態様では、レシピエント卵母細胞は、自発的な雌性ドナー、例えば卵ドナーから得られる。いくつかの態様では、卵母細胞は、卵巣刺激または卵巣の過剰刺激(すなわち排卵誘発または制御卵巣過剰刺激)を受けた雌性哺乳動物対象から得られる。制御卵巣過剰刺激の方法は、例えばその全体として参照により本明細書に組み入れられる米国特許第8,173,592号および国際特許出願である国際公開公報第2000/059542号に開示されるように、当技術分野において周知である。
本明細書開示の方法、キットおよび組成物は、ドナー哺乳動物細胞を含み、その細胞から核が除核卵母細胞内に注射されてSCNT胚が作製される。いくつかの態様では、ドナー哺乳動物細胞は、最終分化した体細胞である。いくつかの態様では、ドナー哺乳動物細胞は、胚性幹細胞または成熟幹細胞またはiPS細胞ではない。いくつかの態様では、ドナー哺乳動物細胞は、ドナー哺乳動物細胞として本明細書開示の方法に使用するためのヒトまたは動物細胞であり、その際、ドナー細胞由来の核は、除核卵母細胞内に移入される。いくつかの態様では、ドナー体細胞は、雄性哺乳動物対象、例えばXY対象から得られる。代替的な態様では、体細胞のドナーは、雌性対象、例えばXX対象から得られる。いくつかの態様では、体細胞のドナーは、XXY対象から得られる。
いくつかの態様では、ドナー哺乳動物体細胞は、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤および/またはKdm4ヒストンデメチラーゼ活性化剤で処置される、またはそれと接触される。いくつかの態様では、ドナー哺乳動物細胞の核(または核遺伝物質)は、H3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤および/またはKdm4ヒストンデメチラーゼ活性化剤で処置される、またはそれと接触される。いくつかの態様では、ドナー哺乳動物細胞の細胞質および/または核は、本明細書開示のH3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えばSuv39h1、Suv39h2および/またはSetdb1の任意の1つまたは組み合わせの阻害剤で処置される、またはそれと接触される。いくつかの態様では、接触は、ドナー哺乳動物体細胞の細胞質および/または核へのH3K9メチルトランスフェラーゼ阻害剤および/またはKdm4ヒストンデメチラーゼ活性化剤のマイクロインジェクションである。
本発明の一目的は、体細胞をより効率的にクローニングする手段を提供することである。本開示の方法および組成物は、哺乳動物、例えば非ヒト哺乳動物をクローニングするために、哺乳動物(例えば、ヒトおよび非ヒト哺乳動物)多能性細胞および全能細胞を得るために、および哺乳動物細胞をリプログラミングするために、使用され得る。
卵母細胞ドナーは、以前に記載されたように同期化および過排卵させることができ(Gavin W.G., 1996)、精管切除された雄と48時間にわたり交配された。収集後、2mM L-グルタミンおよび1%ペニシリン/ストレプトマイシン(各10,000I.U./ml)を補充した10%FBSを有する平衡化M199中で卵母細胞を培養した。核移入は、インビボまたはインビトロで成熟できた卵母細胞を利用することもできる。インビボ成熟した卵母細胞を、上に説明したように派生させ、インビトロ成熟した卵母細胞を特定の細胞期までインビトロで発生させ、その後、核移入に使用するためにそれらが回収される。
卵丘細胞が付着した卵母細胞は、典型的には廃棄される。卵丘細胞のない卵母細胞を2群に分類した:停止した分裂中期II(1つの極体)および分裂終期IIのプロトコール(はっきりと視認可能な極体または部分的に突出している第二極体の存在がない)。停止した分裂中期IIのプロトコールでは卵母細胞は最初に除核される。活性化分裂終期IIのプロトコールに割り当てられた卵母細胞は、M199/10%FBS中で2~4時間培養することによって調製された。この期間の後に、全ての活性化卵母細胞(部分的に突出した第二極体が存在)を、培養誘導カルシウム活性化分裂終期II卵母細胞(分裂終期II-Ca)として群分けし、除核した。続いて、培養期間中に活性化されなかった卵母細胞を、7%エタノール含有M199、10%FBS中で5分間インキュベートして活性化を誘導し、次に10%FBSを有するM199中で追加的に3時間培養して、分裂終期IIに到達させた(分裂終期II-EtOHプロトコール)。除核前に、全ての卵母細胞をサイトカラシン-Bで15~30分間処置する。ガラスピペットで第一極体および極体周囲の隣接細胞質(細胞質の約30%)吸引して赤道板を除去することによって、分裂中期IIの卵母細胞を除核した。第一極体および部分的に突出している第二極体を含む周囲の細胞質(細胞質の10~30%)を除去することによって、分裂終期II-Caおよび分裂終期II-EtOH卵母細胞を除核した。除核後、全ての卵母細胞を直ちに再構築した。
卵母細胞の除核のために使用された同じ培地中でドナー細胞の注射を行った。ガラスピペットを使用して、透明帯と卵細胞質膜との間にドナー細胞を1つ置いた。電気融合および活性化手順の前に、細胞-卵母細胞のカプレット(couplet)をM199中で30~60分間インキュベートした。再構築された卵母細胞を、融合緩衝液(300mM マンニトール、0.05mM CaCl2、0.1mM MgSO4、1mM K2HPO4、0.1mMグルタチオン、0.1mg/ml BSA)中で2分間平衡化した。融合培地で満たされた「融合スライド」になるよう形成された2つのステンレス鋼電極(間隙500μm; BTX-Genetronics, San Diego, Calif.)を有する融合チャンバー中において、電気融合および活性化を室温で行った。
SCNT胚の培養
SCNTによって得られた胚は、胚が通常培養される条件(少なくともインビボ)以外のインビボ培養条件から利益を得る、またはそれを必要にさえし得ると示唆されている。ウシ胚の日常的な増倍において、再構築された胚(その多くが一度に)は、ヒツジ輸卵管内で5~6日間培養されたものである(Willadsen, In Mammalian Egg Transfer (Adams, E. E., ed.) 185 CRC Press, Boca Raton, Fla. (1982)によって記載)。特定の態様では、SCNT胚は、移入前に寒天のような保護培地中に包埋され、次に一時的レシピエントから回収後に寒天から切り出され得る。保護寒天または他の培地の機能は、2つある:第一に、それは、透明帯を一緒に保持することによってSCNT胚用の構造補助物として作用し、第二に、それは、レシピエント動物の免疫系細胞に対するバリアとして作用する。このアプローチは、胚盤胞を形成する胚の比率を増加させるものの、いくつかの胚が失われ得るという欠点がある。いくつかの態様では、SCNT胚を、50μlの液滴中でフィーダー細胞、例えば初代ヤギ輸卵管上皮細胞の単層上で共培養することができる。胚培養物を、5%CO2を有する加湿39℃インキュベーター中で48時間維持し、その後、胚をレシピエント代理母に移入することができる。
全能細胞を得る段階
特定の態様では、全能細胞を得るために、SCNT胚から作製される割球は、ガラスピペットを使用して解離され得る。いくつかの態様では、解離は、0.25%トリプシンの存在下で起こり得る(Collas and Robl, 43 BIOL. REPROD. 877-84, 1992; Stice and Robl, 39 BIOL. REPROD. 657-664, 1988; Kanka et al., 43 MOL. REPROD. DEV. 135-44, 1996)。
いくつかの態様では、非ヒト哺乳動物をクローニングするためのSCNT胚の産生効率を増加させるために、該方法および組成物を使用することができる。本明細書開示の方法および組成物から得られるSCNT胚から非ヒト哺乳動物をクローニングための方法は、当技術分野において周知である。哺乳動物をクローニングするために使用される2つの主な手順は、Roslin法およびHonolulu法である。これらの手順は、1996年にスコットランドのRoslin InstituteでヒツジのDolly(Campbell, K. H. et al. (1996) Nature 380:64-66)が、および1998年にホノルルのUniversity of HawaiiでマウスのCumulina(Wakayama, T. et al. (1998) Nature 394:369-374)が作製されたことにちなんで名付けられた。
ヒツジ「Dolly」のクローニングにおけるWilmutらの発見(Wilmut, et al, Nature 385, 810 (1997)は、hESCを派生させることにおけるThomsonらの発見(Thomson et al., Science 282, 1145 (1998))と一緒になって、患者自身の核から作製されるSCNT胚またはSCNT操作された細胞塊から派生する患者特異的hESCの樹立に基づく再生細胞移植にかなりの熱狂を引き起こした。自家移植により免疫拒絶反応を避けることを目的とするこの戦略は、おそらく、SCNTについての最も強い臨床的な理論的根拠である。その証拠に、複合疾患特異的SCNT-hESCの派生は、疾患メカニズムの発見を加速し得る。細胞移植について、個別のマウス自身のSCNT由来mESCを用いたマウスSCIDおよびPDモデルの革新的な処置が有望である(Rideout et al, Cell 109, 17 (2002); Barberi, Nat. Biotechnol. 21, 1200 (2003))。最終的に、広い組織適合性を有するSCNT由来幹細胞のバンクを創出できることが、新しい卵母細胞を継続して供給する必要性を下げるであろう。
本発明の別の局面は、本明細書開示の方法によって生成されるSCNTから得られるntESC集団に関する。いくつかの態様では、ntESCは、ヒトntESC、例えば患者特異的ntESC、および/または患者特異的同質遺伝子ntESCである。いくつかの態様では、ntESCは、ntESCを全能または多能性状態に維持する培養培地のような培地中に存在する。いくつかの態様では、培養培地は、凍結保存に適した培地である。いくつかの態様では、ntESC集団は凍結保存される。低温保存は、例えば将来使用するために、例えば、治療使用のために、または他の使用、例えば研究使用のために、ntESCを貯蔵するために有用である。ntESCは増幅され得、増幅されたntESCの一部分が使用され得、別の部分が低温保存され得る。ntESCを増幅および保存できることは、かなりの柔軟性、例えば複数の患者特異的ヒトntESCの生成およびSCNT手順に使用するためのドナー体細胞の選択を可能にする。例えば、組織適合性ドナー由来の細胞が、増幅され、1つよりも多いレシピエントに使用され得る。組織バンクがntESCの低温保存を提供することができる。ntESCは、組織適合性データと共に凍結保存され得る。本明細書開示の方法を使用して生成されるntESCを、日常的な手順により凍結保存することができる。例えば、凍結保存を、適切な増殖培地、10%BSAおよび7.5%ジメチルスルホキシドを含むことができる「凍結」培地中の約100万~1000万個の細胞に関して実施することができる。ntESCは遠心分離される。成長培地が吸引され、凍結培養培地により置換される。ntESCが球体として再懸濁される。細胞は、例えば-80℃の容器中に入れることによってゆっくりと凍結される。凍結したntESCは、37℃の浴中でかきまぜることによって解凍され、新鮮幹細胞培地中に再懸濁され、上記のように成長される。
1.
体細胞核移入(SCNT)の効率を増加させるための方法であって、
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚を、ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚におけるH3K9me3メチル化を減少させる作用物質と接触させる段階であって、それによってSCNTの効率を増加させる、段階
を含む、SCNTの効率を増加させる方法。
2.
哺乳動物体細胞核移入(SCNT)胚を生成するための方法であって、
(a)ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物体細胞核移入(SCNT)胚の少なくとも1つを、ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚におけるH3K9me3メチル化を減少させる少なくとも1つの作用物質と接触させる段階であって、レシピエント哺乳動物卵母細胞が、有核または除核卵母細胞である、段階;
(b)レシピエント哺乳動物卵母細胞が有核である場合、レシピエント哺乳動物卵母細胞を除核する段階;
(c)ドナー哺乳動物細胞由来の核を除核卵母細胞に移入する段階;および
(d)哺乳動物SCNT胚を形成させるために十分な時間、レシピエント卵母細胞をインキュベートする段階
を含む、方法。
3.
作用物質が、Kdm4(Jmjd2)ファミリーのヒストンデメチラーゼの発現または活性を増加させる、パラグラフ1または2の方法。
4.
作用物質が、Kdm4a(Jmjd2a)、Kdm4b(Jmjd2b)、Kdm4c(Jmjd2c)、またはKdm4d(Jmjd2d)のうち少なくとも1つの発現または活性を増加させる、パラグラフ1~3のいずれか一つの方法。
5.
作用物質が、Kdm4d(Jmjd2D)またはKdm4A(Jmjd2A)の発現または活性を増加させる、パラグラフ1~4のいずれか一つの方法。
6.
作用物質が、SEQ ID NO:1~8に対応する核酸配列、またはSEQ ID NO:1~8の対応する配列と比較してSCNTの効率を同程度もしくはより大きな程度まで増加させるその生物学的に活性なフラグメントを含む、パラグラフ1~5のいずれか一つの方法。
7.
作用物質が、SEQ ID NO:1に対応する核酸配列、またはSEQ ID NO:1の核酸配列と比較してSCNTの効率を同程度もしくはより大きな程度まで増加させるその生物学的に活性なフラグメントを含む、パラグラフ6の方法。
8.
作用物質が、H3K9メチルトランスフェラーゼの阻害剤である、パラグラフ1~7のいずれか一つの方法。
9.
H3K9メチルトランスフェラーゼが、Suv39h1またはSuv39h2である、パラグラフ8の方法。
10.
H3K9メチルトランスフェラーゼが、Setdb1である、パラグラフ8の方法。
11.
Suv39h1、Suv39h2、およびSetdb1のうち2つ以上が阻害される、パラグラフ8の方法。
12.
H3K9メチルトランスフェラーゼを阻害する作用物質が、RNAi剤、CRISPR/Cas9、オリゴヌクレオチド、中和抗体または抗体フラグメント、アプタマー、小分子、ペプチド阻害剤、タンパク質阻害剤、アビジミル(avidimir)、およびそれらの機能的フラグメントまたは誘導体からなる群より選択される、パラグラフ8の方法。
13.
RNAi剤が、siRNAまたはshRNA分子である、パラグラフ12の方法。
14.
作用物質が、SEQ ID NO:9、11、13または15のいずれかの発現を阻害するための核酸阻害剤を含む、パラグラフ1~13のいずれか一つの方法。
15.
作用物質が、SEQ ID NO:10、12、14または16のいずれかの発現を阻害する核酸阻害剤を含む、パラグラフ1~13のいずれか一つの方法。
16.
RNAi剤が、SEQ ID NO:17またはSEQ ID NO:19の少なくとも一部とハイブリダイズする、パラグラフ15の方法。
17.
RNAi剤が、SEQ ID NO:18もしくはSEQ ID NO:20、またはその少なくとも10個の連続する核酸のフラグメント、またはSEQ ID NO:18もしくはSEQ ID NO:20と少なくとも80%同一の配列を有するホモログを含む、パラグラフ16の方法。
18.
レシピエント哺乳動物卵母細胞が、除核した哺乳動物卵母細胞である、パラグラフ1~17のいずれか一つの方法。
19.
SCNT胚が、1細胞期SCNT胚、活性化の5時間後(5hpa)のSCNT胚、活性化の10~12時間後(10~12hpa)のSCNT胚、活性化の20~28時間後(20~28hpa)のSCNT胚、2細胞期SCNT胚のいずれかより選択される、パラグラフ1~18のいずれか一つの方法。
20.
核移入前に、作用物質が、レシピエント哺乳動物卵母細胞または除核した哺乳動物卵母細胞と接触する、パラグラフ1~19のいずれか一つの方法。
21.
活性化の前もしくは5時間後に、またはSCNT胚が1細胞期のときに、作用物質が、SCNT胚と接触する、パラグラフ1~19のいずれか一つの方法。
22.
活性化の5時間後(5hpa)、もしくは活性化の12時間後(hpa)、もしくは活性化の20時間後(20hpa)に、またはSCNT胚が2細胞期のときに、または5hpaから28hpaの間の任意の時間に、作用物質が、SCNT胚と接触する、パラグラフ1~19のいずれか一つの方法。
23.
レシピエント哺乳動物卵母細胞またはSCNT胚を作用物質と接触させる段階が、レシピエント哺乳動物卵母細胞またはSCNT胚の核または細胞質に作用物質を注射することを含む、パラグラフ1~22のいずれか一つの方法。
24.
作用物質が、Kdm4ファミリーのヒストンデメチラーゼの発現または活性を増加させる、パラグラフ1~23のいずれか一つの方法。
25.
除核した哺乳動物卵母細胞にドナー哺乳動物細胞の核を注射する前に、作用物質が、ドナー哺乳動物細胞の細胞質またはドナー哺乳動物細胞の核と接触する、パラグラフ1~24のいずれか一つの方法。
26.
除核した哺乳動物卵母細胞にドナー哺乳動物細胞の核を注射する少なくとも24時間前に、または注射する前の少なくとも1日間、ドナー哺乳動物細胞が接触される、パラグラフ25の方法。
27.
除核した哺乳動物卵母細胞にドナー哺乳動物細胞の核を注射する前に、作用物質が、ドナー哺乳動物細胞と少なくとも24時間、または少なくとも48時間、または少なくとも3日間接触する、パラグラフ25の方法。
28.
作用物質が、H3K9メチルトランスフェラーゼを阻害する、パラグラフ25~27のいずれか一つの方法。
29.
H3K9メチルトランスフェラーゼが、Suv39h1もしくはSuv39h2、またはSuv39h1およびSuv39h2(Suv39h1/2)である、パラグラフ25~28のいずれか一つの方法。
30.
ドナー哺乳動物細胞が、最終分化した体細胞である、パラグラフ1~29のいずれか一つの方法。
31.
ドナー哺乳動物細胞が、胚性幹細胞でも、人工多能性幹(iPS)細胞でも、胎児細胞でも、胚細胞でもない、パラグラフ1~30のいずれか一つの方法。
32.
ドナー哺乳動物細胞が、卵丘細胞、上皮細胞、線維芽細胞、神経細胞、角化細胞、造血細胞、メラニン細胞、軟骨細胞、赤血球、マクロファージ、単球、筋細胞、Bリンパ球、Tリンパ球、胚性幹細胞、胚性生殖細胞、胎児細胞、胎盤細胞、および成熟細胞からなる群より選択される、パラグラフ1~32のいずれか一つの方法。
33.
ドナー哺乳動物細胞が、線維芽細胞または卵丘細胞である、パラグラフ1~32のいずれか一つの方法。
34.
除核したレシピエント哺乳動物卵母細胞に注射するためにドナー哺乳動物細胞から核を取り出す前に、作用物質が、ドナー哺乳動物細胞の核と接触する、パラグラフ1~33のいずれか一つの方法。
35.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚が、ヒトドナー細胞、レシピエントヒト卵母細胞、またはヒトSCNT胚である、パラグラフ1~34のいずれか一つの方法。
36.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚が、非ヒトドナー細胞、レシピエント非ヒト卵母細胞、または非ヒトSCNT胚である、パラグラフ1~34のいずれか一つの方法。
37.
ドナー非ヒト哺乳動物細胞、レシピエント非ヒト哺乳動物卵母細胞、または非ヒト哺乳動物SCNT胚が、マウス、ラット、ウサギ、雌ウシ、ウマ、ブタ、ニワトリ、イヌ、ネコ、雌ウシ、マカク、チンパンジーからなる群より選択される、パラグラフ36の方法。
38.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚が、飼育動物または商業用動物由来である、パラグラフ36の方法。
39.
飼育動物が、アルパカ、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、ゾウ、げっ歯動物、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ラマ、ウマ、サル、ラバ、雄ウシ、ブタ、ハト、非ヒト霊長類、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、またはヤクからなる群より選択される労役動物または競技動物または家畜動物または実験動物である、パラグラフ38の方法。
40.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚が、伴侶動物またはペット由来である、パラグラフ36の方法。
41.
伴侶動物が、イヌ、ネコ、雌ウシ、ハムスター、爬虫類、ウサギ、げっ歯動物、フェレット、チンチラ、鳥類ペット、モルモット、水生ペット、またはウマからなる群より選択される、パラグラフ41の方法。
42.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚が、絶滅に近い哺乳動物種由来である、パラグラフ36の方法。
43.
H3K9me3メチル化を減少させる作用物質の不在下で行われるSCNTと比較して、胚盤胞期へのSCNTの効率における少なくとも50%の増加を招く、パラグラフ1~42のいずれか一つの方法。
44.
H3K9me3メチル化を減少させる作用物質の不在下で行われるSCNTと比較して、SCNTの効率における50%~80%の増加を招く、パラグラフ1~43のいずれか一つの方法。
45.
H3K9me3メチル化を減少させる作用物質の不在下で行われるSCNTと比較して、SCNTの効率における80%よりも大きな増加を招く、パラグラフ1~44のいずれか一つの方法。
46.
SCNT効率における増加が、胚盤胞期へのSCNT胚の発生における増加である、パラグラフ44~45のいずれか一つの方法。
47.
SCNT効率における増加が、SCNT胚の着床後発生における増加である、パラグラフ44~46のいずれか一つの方法。
48.
SCNT効率における増加が、SCNT胚由来胚性幹細胞(ntESC)の派生における増加である、パラグラフ44~47のいずれか一つの方法。
49.
ドナー哺乳動物細胞が、遺伝的に修飾されたドナー哺乳動物細胞である、パラグラフ1~48のいずれか一つの方法。
50.
SCNT胚をインビトロ培養して胚盤胞を形成させる段階をさらに含む、パラグラフ2の方法。
51.
SCNT胚が、少なくとも1細胞期SCNT胚である、パラグラフ50の方法。
52.
SCNT胚が、少なくとも2細胞期SCNT胚である、パラグラフ50の方法。
53.
胚盤胞由来の内細胞塊から細胞を単離する段階、および
未分化状態の内細胞塊からの細胞を培養して哺乳動物胚性幹(ES)細胞を形成させる段階
をさらに含む、パラグラフ50の方法。
54.
ドナー哺乳動物細胞、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または哺乳動物SCNT胚のうち任意の1つまたは複数が、凍結および解凍されたものである、パラグラフ1または2の方法。
55.
パラグラフ1~54のいずれか一つの方法から生成された、哺乳動物SCNT胚由来胚性幹細胞(ntESC)集団。
56.
ntESCが、ヒトntESCである、パラグラフ55の哺乳動物ntESC集団。
57.
ntESCが、遺伝的に修飾されたntESCである、パラグラフ55の哺乳動物ntESC集団。
58.
ntESCが、多能性幹細胞である、パラグラフ55の哺乳動物ntESC集団。
59.
ntESCが、培養培地中に存在する、パラグラフ55の哺乳動物ntESC集団。
60.
培養培地が、ntESCを多能性または全能状態に維持する、パラグラフ59の哺乳動物ntESC集団。
61.
培養培地が、ntESCの凍結または凍結保存に適切な培地である、パラグラフ59の哺乳動物ntESC集団。
62.
凍結または凍結保存される、パラグラフ61の哺乳動物ntESC集団。
63.
パラグラフ1~54の方法によって生成される、哺乳動物SCNT胚。
64.
遺伝的に修飾されている、パラグラフ63の哺乳動物SCNT胚。
65.
非ヒト哺乳動物SCNT胚である、パラグラフ63の哺乳動物SCNT胚。
66.
レシピエント哺乳動物卵母細胞由来ではないミトコンドリアDNAを含む、パラグラフ65の哺乳動物SCNT胚。
67.
培養培地中に存在する、パラグラフ63の哺乳動物SCNT胚。
68.
培養培地が、哺乳動物SCNTの凍結または凍結保存に適切な培地である、パラグラフ67の哺乳動物SCNT胚。
69.
凍結または凍結保存される、パラグラフ68の哺乳動物SCNT胚。
70.
体細胞核移入(SCNT)胚から非ヒト哺乳動物子孫を生成するための方法であって、
(a)ドナー非ヒト哺乳動物細胞、レシピエント非ヒト哺乳動物卵母細胞、または非ヒト哺乳動物体細胞核移入(SCNT)胚のうち少なくとも1つを、ドナー非ヒト哺乳動物細胞、レシピエント非ヒト哺乳動物卵母細胞、または非ヒト哺乳動物SCNT胚におけるH3K9me3メチル化を減少させる少なくとも1つの作用物質と接触させる段階であって、レシピエント非ヒト哺乳動物卵母細胞が、有核または除核卵母細胞である、段階;
(b)レシピエント非ヒト哺乳動物卵母細胞が有核である場合に、除核する段階;
(c)ドナー非ヒト哺乳動物細胞由来の核を非ヒト哺乳動物除核卵母細胞に移入し、核を除核卵母細胞と融合させ、融合した卵母細胞を活性化させる段階;
(d)非ヒト哺乳動物SCNT胚を形成させるために十分な時間、レシピエント卵母細胞をインキュベートする段階;
(e)非ヒト哺乳動物SCNT胚を非ヒト代理母の輸卵管に体内移植し、非ヒト哺乳動物SCNTの非ヒト哺乳動物子孫への発生を可能にする段階
を含む、方法。
71.
非ヒト哺乳動物SCNT胚が、胚1細胞期、胚2細胞期、胚4細胞期、桑実胚、または胚盤胞胚期に非ヒト代理母に体内移植される、パラグラフ70の方法。
72.
非ヒト代理母が、ドナー細胞またはレシピエント卵母細胞の起源ではない、パラグラフ71の方法。
73.
非ヒト代理母にSCNT胚を満期まで妊娠させる段階をさらに含む、パラグラフ70の方法。
74.
パラグラフ1~47またはパラグラフ70~73のいずれか一つの方法によって生成されるSCNT胚から生成される、非ヒト哺乳動物子孫。
75.
哺乳動物SCNT胚、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または胚盤胞のうち少なくとも1つと、
(a)Kdm4ファミリーのヒストンデメチラーゼの発現もしくは活性を増加させる作用物質;または
(b)H3K9メチルトランスフェラーゼを阻害する作用物質
のうち少なくとも1つと
を含む、組成物。
76.
Kdm4(Jmjd2)ファミリーのヒストンデメチラーゼの発現または活性を増加させる作用物質が、 Kdm4a(Jmjd2a)、Kdm4b(Jmjd2b)、Kdm4c(Jmjd2c)、またはKdm4d(Jmjd2d)のうち少なくとも1つの発現または活性を増加させる、パラグラフ75の組成物。
77.
前記作用物質が、Kdm4d(Jmjd2d)またはKdm4a(Jmjd2a)の発現または活性を増加させる、パラグラフ76の組成物。
78.
前記作用物質が、SEQ ID NO:1~8に対応する核酸、またはSEQ ID NO:1~8の対応する配列と比較してSCNTの効率を同程度もしくはより大きな程度まで増加させるその生物学的に活性なフラグメントを含む、パラグラフ77の組成物。
79.
前記作用物質が、SEQ ID NO:1に対応する核酸、またはSEQ ID NO:1の核酸配列と比較してSCNTの効率を同程度もしくはより大きな程度まで増加させるその生物学的に活性なフラグメントを含む、パラグラフ75の組成物。
80.
H3K9メチルトランスフェラーゼの阻害剤が、Suv39h1、Suv39h2、またはSetdb1の少なくとも1つまたは任意の組み合わせを阻害する、パラグラフ75の組成物。
81.
哺乳動物SCNT胚が、1細胞期または2細胞期である、パラグラフ75の組成物。
82.
レシピエント哺乳動物卵母細胞が、除核したレシピエント哺乳動物卵母細胞である、パラグラフ75の組成物。
83.
哺乳動物SCNT胚が、最終分化した体細胞核の注射から生成され、または胚盤胞が、除核した哺乳動物卵母細胞に、最終分化した体細胞核を注射することから生成される哺乳動物SCNT胚から発生する、パラグラフ75の組成物。
84.
哺乳動物SCNT胚、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または胚盤胞が、ヒトSCNT胚、レシピエントヒト卵母細胞、またはヒト胚盤胞である、パラグラフ75~83のいずれか一つの組成物。
85.
哺乳動物SCNT胚、レシピエント哺乳動物卵母細胞、または胚盤胞が、非ヒト哺乳動物由来である、パラグラフ75~84のいずれか一つの組成物。
86.
非ヒト哺乳動物が、マウス、ラット、ウサギ、雌ウシ、ウマ、ブタ、ニワトリ、イヌ、ネコ、マカク、チンパンジーからなる群より選択される、パラグラフ85の組成物。
87.
非ヒト哺乳動物が、飼育動物または商業用動物である、パラグラフ85の組成物。
88.
飼育動物または商業用動物が、アルパカ、バイソン、ラクダ、ネコ、ウシ、シカ、ゾウ、げっ歯動物、イヌ、ロバ、ガヤル、ヤギ、モルモット、ラマ、ウマ、サル、ラバ、雄ウシ、ブタ、ハト、非ヒト霊長類、ウサギ、トナカイ、ヒツジ、スイギュウ、またはヤクからなる群より選択される労役動物または競技動物または家畜動物または実験動物である、パラグラフ87の組成物。
89.
非ヒト哺乳動物が、伴侶動物またはペットである、パラグラフ85の組成物。
90.
伴侶動物が、イヌ、ネコ、雌ウシ、ハムスター、爬虫類、ウサギ、げっ歯動物、フェレット、チンチラ、鳥類ペット、モルモット、水生ペット、またはウマからなる群より選択される、パラグラフ89の組成物。
91.
非ヒト哺乳動物が、絶滅に近い哺乳動物種である、パラグラフ85の組成物。
92.
(i)Kdm4ファミリーのヒストンデメチラーゼの発現または活性を増加させる作用物質および/またはH3K9メチルトランスフェラーゼを阻害する作用物質、ならびに
(ii)哺乳動物卵母細胞
を含む、キット。
93.
哺乳動物卵母細胞が、除核した卵母細胞である、パラグラフ92のキット。
94.
哺乳動物卵母細胞が、非ヒト卵母細胞である、パラグラフ92のキット。
動物
C57BL/6J雌性マウスをDBA/2J雄と交配して、B6D2F1/J(BDF1)マウスを生成した。BDF1およびCD-1(ICR)成体雌を、それぞれレシピエント卵母細胞の収集および胚移入レシピエントのために使用した。BDF1マウスを、発生分析用のドナー体細胞の収集のために使用した。(C57BL/6×CAST/EiJ)F1マウスを、RNA-seq用のドナー細胞の収集のために使用した。GOF18デルタ-PE(Jackson Laboratory, 004654:Tg(Pou5f1-EGFP)2Mnn、C57BL/6Jバックグラウンド)を有するE13.5胚をマウス胚性線維芽細胞(MEF)の単離のために使用した。全ての動物実験は、Harvard Medical Schoolの所内動物実験委員会(Institutional Animal Care and Use Committee)によって承認された。
妊馬血清性ゴナドトロピン(PMSG; Harbor)7.5IUおよびヒト絨毛性ゴナドトロピン(hCG; Millipore)7.5IUを注射することによる過排卵を経て成体BDF1雌から卵丘細胞を収集した。hCG注射の15時間後に、卵丘-卵母細胞複合体(COC)を輸卵管から収集し、300U/mlウシ精巣ヒアルロニダーゼ(Calbiochem #385931)を含有するHepes緩衝カリウムシンプレックス最適化培地(KSOM)で短時間処置して、解離した卵丘細胞を得た。記載されたように(Matoba et al., 2011)、セルトリ細胞を3~5日齢BDF1雄性マウスの精巣から収集した。精巣の塊を、0.1mg/mlコラゲナーゼ(Life Technologies #17104-019)を含有するPBS中に入れ、37℃で30分間インキュベートし、続いて、1mM EDTAを有する0.25%トリプシン(Life Technologies #25200-056)を用いて室温で5分処置した。3mg/mlウシ血清アルブミンを含有するPBSで4回洗浄後、解離した細胞をHepes-KSOM培地中で懸濁した。
マウスSuv39h1(Life Technologies #s74607)、Suv39h2(Life Technologies #s82300)およびSetdb1(Life Technologies #s96549)に対するsiRNAを、50μM 貯蔵液となるようにヌクレアーゼ不含水で希釈した。Lipofectamine RNAi Max(Life technologies #35050-061)を用いて、製造業者のプロトコールに従い、siRNAをMEFに導入した。簡潔には、MEF細胞1×105個を24ウェルプレート上に蒔いた(0日目;図5A参照)。24時間後に、Lipofectamine RNAi Maxを使用して5pM siRNAをMEF細胞にトランスフェクトした(1日目)。最初のトランスフェクションの24時間後に、培地を新鮮M293T培地[10%FBS、0.1mM可欠アミノ酸(Life technologies #11140-050)、2mM GlutaMAX(Life technologies #35050-079)、50U/ml ペニシリン-ストレプトマイシンおよび0.1mM 2-メルカプトエタノール(Life technologies #21985-023)を補充したDMEM]に交換した(2日目)。3日目に、MEF細胞を細胞1×105個の密度で24ウェルプレート上に再播種した。次に、トランスフェクションを上記のように1回繰り返した(4日目)。2回目のトランスフェクションの48時間後に(6日目)、MEF細胞を免疫染色、RT-qPCRまたはSCNTのために使用した。
以前に記載されたように、体細胞核移入を実施した(Matoba et al., 2011)。簡潔には、300U/ml ウシ精巣ヒアルロニダーゼ(Calbiochem)を用いた短時間処理により、過排卵成BDF1雌からレシピエントMII卵母細胞を収集した。単離されたMII卵母細胞を、7.5μg/ml サイトカラシンB(Calbiochem #250233)を含有するHepes緩衝KSOM培地中で除核した。圧電駆動マイクロマニピュレーター(Primetech #PMM-150FU)を使用して、ドナー卵丘細胞またはセルトリ細胞の核を除核卵母細胞中に注射した。不活性化センダイウイルスエンベロープ(HVJ-E; Ishihara Sangyo, Japan)によってMEF細胞を除核卵母細胞と融合した。KSOM中で1時間インキュベーション後に、再構築したSCNT卵母細胞を、5μg/ml サイトカラシンBを含有するCa不含KSOM中で1時間インキュベートすることによって活性化し、サイトカラシンBを有するKSOM中でさらに4時間培養した。活性化SCNT胚を、SrCl2処理の開始から5時間後(活性化後時間、hpa)に洗浄し、KSOM中で、5%CO2の加湿雰囲気中にて37.8℃で培養した。いくつかの実験では、圧電駆動マイクロマニピュレーター(Primetech)を使用することによって、5~6hpaにSCNT胚に水(対照)、1800ng/μl 野生型または変異型(H189A)Kdm4d mRNA約10plを注射した。一部の実験では、培養培地にトリコスタチンA(TSA)を15nMになるよう活性化の開始から合計8時間添加した。着床前発生率は、スチューデントのT検定によって統計解析した。ドナー細胞の調製、胚移入、mRNA調製および他の手順に関するさらなる詳細は、増補の実験手順に含まれる。
完全長Kdm4d mRNAのインビトロ転写用のテンプレートプラスミドを製造するために、マウスKdm4dのオープンリーディングフレームを、ES細胞から得られたcDNAからPCRによって増幅し、In-Fusionキット(Clonetech #638909)を使用することによってpcDNA3.1-ポリ(A)83プラスミド(Inoue & Zhang, 2014)中にクローニングした。PrimeSTAR変異誘発基本キット(TAKARA # R045A)を使用して触媒欠損変異体Kdm4d(H188A)を作製した。直線化されたテンプレートプラスミドから、mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra Kit(Life technologies # AM1345)を使用するインビトロ転写によって、製造業者の説明書に従ってmRNAを合成した。合成したmRNAを塩化リチウムで沈殿させ、ヌクレアーゼ不含水に溶解させた。NanoDrop ND-1000分光光度計(NanoDrop Technologies)によって濃度を測定した後、使用まで一定分量を-80℃で保存した。
マウスSuv39h1(Life Technologies #s74607)、Suv39h2(Life Technologies #s82300)およびSetdb1(Life Technologies #s96549)に対するsiRNAを、50μM貯蔵液となるようにヌクレアーゼ不含水で希釈した。Lipofectamine RNAi Max(Life technologies #35050-061)を用いて、製造業者のプロトコールに従ってsiRNAをMEFに導入した。簡潔には、MEF細胞1×105個を24ウェルプレート上に蒔いた(0日目;図5A参照)。24時間後に、Lipofectamine RNAi Maxを使用して5pM siRNAをMEF細胞中にトランスフェクトした(1日目)。最初のトランスフェクションの24時間後に、培地を新鮮M293T培地[10%FBS、0.1mM 可欠アミノ酸(Life technologies #11140-050)、2mM GlutaMAX(Life technologies #35050-079)、50U/ml ペニシリン-ストレプトマイシンおよび0.1mM 2-メルカプトエタノール(Life technologies #21985-023)を補充したDMEM]に交換した(2日目)。3日目に、MEF細胞を1×105個の密度で24ウェルプレート上に再播種した。次に、トランスフェクションを上記のように1回繰り返した(4日目)。2回目のトランスフェクションの48時間後に(6日目)、免疫染色、RT-qPCRまたはSCNTのためにMEF細胞を使用した。
RNeasyミニキット(Qiagen)を製造業者の説明書に従って使用して、MEF細胞から総RNAを精製した。オリゴ-dTプライマーおよびImProm-II Reverse Transcription Syetem(Promega)を用いてcDNAを合成した。Ssofast Evagreen Supermix(Bio-Rad)を使用するCFX384 Real-Time PCR検出システム(Bio-Rad)でリアルタイムPCRを行った。比較Ct法を使用して相対遺伝子発現レベルを分析し、CFX Managerソフトウェア(Bio-Rad)を使用してGapdhに対して標準化した。結果をスチューデントのT検定によって統計解析した。以下のプライマーを使用した:
。
SCNTまたはインビトロ受精によって作製した2細胞期胚を偽妊娠(E0.5)ICR雌の輸卵管に移入した。分娩日(E19.5)に、帝王切開によって子を回収し、泌乳ICR雌により授乳させた。
酸性タイロード処理により胚盤胞を裸化し、マイトマイシン処理MEFフィーダー細胞上で、5%FBS、10%KnockOut血清代替物(Life Technologies #10828-028)、0.1mM 可欠アミノ酸、2mM GlutaMAX、50U/ml ペニシリン-ストレプトマイシン、0.1mM 2-メルカプトエタノールおよび2000U 白血病抑制因子(LIF, Millipore #ESG1107)を補充したDMEM中に入れて、37℃および5%CO2で培養した。4~5日後に、付着した胚からの外植片を0.25%トリプシンで解離させ、全てを新しいフィーダー細胞上に継代した。翌日、培地を、N2B27-LIF培地[0.1mM 可欠アミノ酸、2mM GlutaMAX、50U/ml ペニシリン-ストレプトマイシン、0.1mM 2-メルカプトエタノール、0.5×N2サプリメント(Life technologies #17502-048)、0.5×B27サプリメント(Life technologies #17504-044)、3μM CHIR99021(STEMGENT #04-0004)、0.5μM PD0325901(STEMGENT #04-0006)および1000U LIFを補充したDMEM/F12(Life Technologies #10565-042)]により置換した。5日後に、増大した細胞を樹立ntESCとして再播種した。
胚またはMEF細胞を、3.7%パラホルムアルデヒド(PFA)を用いて室温で20分間固定した。10mg/ml BSAを含有するPBS(PBS/BSA)で洗浄後、固定された胚または細胞を0.5%トリトン-X100と共に15分間インキュベートすることによって透過処理した。PBS/BSA中に入れて室温で1時間ブロッキング後、それらを最初の抗体の混合物中に入れ、4℃で一晩インキュベートした。抗体には、マウス抗H3K9me3(1/500: Abcam #ab71604)、ウサギ抗H3K9me3(1/500: Millipore #07-442)、ウサギ抗H3K27me3(1/500: Millipore #07-449)、ヤギ抗Oct4(1/500: Santa Cruz #SC8628)、およびマウス抗Cdx2(1/100: BioGenex #AM392-5M)が含まれる。PBS/BSAで3回洗浄後、胚または細胞を2次抗体と共に室温で1時間インキュベートした。2次抗体には、フルオレセインイソチオシアネート-コンジュゲーション型ロバ抗マウスIgG(1/400, Jackson Immuno-Research)、Alexa Flour 568ロバ抗ウサギIgG(1/400, Life technologies)、および/またはAlexa Flour 647ロバ抗ヤギIgG(1/400, Life technologies)が含まれる。最終的に、4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール(DAPI)を有するVectashield(Vector Laboratories #H-1200)を用いてそれらを封入した。レーザー走査共焦点顕微鏡(Zeiss LSM510)およびEM-CCDカメラ(Hamamatsu ImagEM)を使用して蛍光シグナルを観察した。
胚を直接溶解し、SMARTer Ultra Low Input RNA cDNA調製キット(Clontech)を使用するcDNA合成のために使用した。増幅後、Covaris超音波処理器(Covaris)を使用してcDNA試料をフラグメント化した。Illumina用のNEBNext Ultra DNA Library Prep Kitを使用して、製造業者(New England Biolabs)の説明書に従って、フラグメント化されたDNAを用いて配列ライブラリーを製造した。単一端50bp配列決定を、HiSeq 2500シーケンサー(Illumina)で行った。NovoalignV3.02.00を用いてシーケンシングのリードをマウスゲノム(mm9)に対してマッピングした。全てのプログラムをデフォルト設定で行った(特に規定しない限り)。続いて、一意的にマッピングされるリード(総リードの約70%)をCufflinks v2.0.2を用いて集合させ、参照アノテーション(UCSC遺伝子モデル)によってガイドされる転写物を構築した。各遺伝子の発現レベルを、標準化FPKM(エキソン1キロ塩基あたり、マッピングされるフラグメント100万個あたりのフラグメント)を用いて定量した。有意に異なる転写物の機能的アノテーションおよびエンリッチメント解析をDAVIDで行った。統計解析をRで実行した(ワールドワイドウェブwww.r-project.org/)。独立した2群Wilcoxon順位和検定を使用して、Rでのwilcox.test関数を使用して分布を比較した。デフォルトのパラメーターを用いたcor関数を使用して、Pearsonのr係数を計算した。Rでのhearmap.2関数(gplotsパッケージ)を使用して、異なる試料での全般的遺伝子発現パターンの階層的クラスタリング分析を実施した。
スライドウインドウ(サイズ100kb、ステップサイズ20kb)を使用して、1細胞期胚および2細胞期胚のゲノムワイドな発現レベルを評価した。各ウインドウについて、標準化RPM(一意的にマッピングされるリード100万個あたりのリード)を用いて発現レベルを定量した。ストリンジェントな基準(FC>5、Fisherの正確検定p値<0.01、2細胞期IVF胚においてRPM>10)で、1細胞期IVF胚と比較して2細胞期IVF胚で有意に活性化された領域を特定し、オーバーラップする領域をマージした。これらの活性化領域を、SCNTおよびIVF 2細胞期胚におけるそれらの発現差に基づき3群に分類した。
図2およびS2においてヒストン修飾およびDNaseI過感受性エンリッチメント解析を行うために、本発明者らは、以下の公表されたChIP-seqおよびDNaseI-seqデータセットを使用した:MEF細胞でのH3K9me3およびH3K96me3(Pedersen et al., 2014);MEF細胞でのH3K4me2、H3K27me3(Chang et al., 2014);MEF細胞でのH3K4me1およびH3K27ac(ENCODE/LICRプロジェクト);CH12、赤芽球、巨核(ENCODE/PSUプロジェクト)および全脳(ENCODE/LICRプロジェクト)でのH3K9me3;NIH3T3、CH12、MEL、Treg、416Bおよび全脳(ENCODE/UWプロジェクト)でのDNaseI-seq。標準化FPKMを用いてChIP-seq強度を定量した。シーケンシングリードによりゲノム位置に関するカバー率を決定し、UCSCゲノムブラウザーでのカスタムトラックとして視覚化した。
2細胞期SCNT胚における異常なZGA
インビトロ受精(IVF)およびSCNTを経て派生するマウス胚の間の最も初期の転写差を特定するために、本発明者らは、1細胞期(活性化の12時間後:hpa)および2細胞後期(28hpa)のプール胚(25~40個/試料)を使用してRNA-seq実験を行った(図1A)。各試料について3000万個よりも多い一意的にマッピングされるリードを得、各試料の2つの生物学的反復は、高度に再現可能であった(図8Aおよび8B)。1細胞期トランスクリプトームの分析は、SCNT胚およびIVF胚がほぼ同一のトランスクリプトームを特徴とすることを明らかにした(R=0.99;図1B)。具体的には、検出された5517種の遺伝子(少なくとも1つの試料においてFPKM>5)の中で、106種の遺伝子だけがSCNT胚とIVF胚との間で3倍よりも大きな差を示した(図1B)。これは、ZGAが主としてマウス胚での最初の分割後に開始し(Schultz, 2002)、IVFまたはSCNTにかかわらず、1細胞期胚に存在する大部分の転写物が母方に保存される転写物であるという事実と一致する。したがって、本発明者らは、主要なZGAがマウス胚において明らかになる2細胞後期に本発明者らの分析の焦点を合わせた。
2細胞期SCNT胚におけるリプログラミング耐性領域(RRR)の特定
タンパク質コード遺伝子に加えて、以前の研究は、LTRクラスIIIレトロトランスポゾンおよび主要サテライト反復などの非遺伝子反復エレメントが、特に2細胞期のマウス着床前胚に高発現されることを明らかにした(Evsikov et al., 2004; Peaston et al., 2004; Probst et al., 2010)。IVF 2細胞期胚とSCNT 2細胞期胚との間のトランスクリプトームの差を包括的に特徴付けるために、本発明者らは、検出可能な転写物に関連する全てのゲノム領域を特定するためにスライドウインドウ戦略を適用した。最初に、本発明者らは、1細胞期IVF胚と比較して2細胞期IVF胚において有意に活性化された(Fisherの正確検定p値<0.01)、100~800kbの範囲の811種のゲノム領域を特定した[図2A、FC>5、IVF 2細胞期胚におけるRPM(一意的にマッピングされるリード100万個あたりのリード)>10]。811種のゲノム領域のうち、342種の領域が、IVF胚に類似したレベルでSCNT胚において活性化されたが(IVF 2細胞期胚をSCNT 2細胞期胚と比較してFC≦2)、これらの領域を、完全リプログラミング領域(FRR)と名付けた。本発明者らは、また、IVF胚と比較してSCNT胚において部分的に活性化された(FC>2およびFC≦5)「部分的リプログラミング領域」(PRR)と名付けられた247種の領域を特定した(図2A)。興味深いことに、本明細書において「リプログラミング耐性領域」(RRR)と呼ばれる残りの222種の領域は、SCNT胚において活性化できなかった(FC>5、図2A)。特に、RRR内で産出される転写物は、13番染色体上の代表的な領域に例示されるように、主として注釈を付けられない(図9A)。実際にFRRおよびPRRを比較して、RRRは、相対的に遺伝子に乏しい領域である(図9B)。しかし、RRRは、LINEおよびLTRなどの特異的リピート配列が濃縮されているが、SINEを枯渇している(図9C)。このように、比較トランスクリプトーム解析は、本発明者らに、SCNTによって作製される2細胞期胚での転写活性化に不応性の222種のRRRを特定させた。
RRRが2細胞期SCNT胚における転写活性化に不応性であるという事実は、RRRが、SCNT介在性リプログラミングについてのバリアとして役立つ特定のエピジェネティック修飾を有し得ることを示している。SCNT胚の発育不全が、マウス胚性線維芽(MEF)細胞を含めた異なるドナー体細胞型で観察されていることを考え(Ono et al., 2001)、本発明者らは、SCNT介在性リプログラミングについてのそのようなエピジェネティックなバリアが、異なる体細胞型に共通であるかどうかを評価した。MEF細胞は、包括的ヒストン修飾データベースのデータセットを有する数少ない体細胞型の1つであるので(Bernstein et al., 2012; Chang et al., 2014; Pedersen et al., 2014)、本発明者らは、6つの主要なヒストン修飾のいずれかがRRRで特異的に濃縮されているかどうかを評価した。本発明者らは、分析される任意の他の修飾でなくH3K9me3が、RRRで特異的に濃縮されたが、一方で、FRRまたはPRRにおいていかなるヒストン修飾の明白な濃縮も観察されなかったことを発見した(図2B)。実際、7番染色体上の代表的な領域の慎重な調査から、2細胞期SCNT胚で活性化できなかったRRRは、明らかにH3K9me3マークが濃縮されており、H3K9me3濃縮領域外側の領域は、2細胞期SCNT胚で適正に活性化されたことが示された(図2C)。RRRでのH3K9me3の類似の濃縮が、ENCODEプロジェクトからのH3K9me3 ChIP-seqデータセットの分析後に(図2Dおよび9D)、4つの他の体細胞型または組織型(CH12、赤芽球、巨核球および全脳)においても観察されたので(Bernstein et al., 2012)、この観察は、MEF細胞に独特ではない。したがって、本発明者らは、体細胞においてRRRにH3K9me3が濃縮されていると結論する。
Kdm4dによるH3K9me3の除去はSCNT胚における転写リプログラミングを回復する
RRRとH3K9me3濃縮との間の相関関係を立証したので、本発明者らは、次に、H3K9me3の除去がSCNT胚におけるRRRの転写リプログラミングを促進できるかどうかに取り組もうとした。この目的を達成するために、本発明者らは、H3K9me3特異的ヒストンデメチラーゼKdm4dをコードするmRNAを合成し(Krishnan and Trievel, 2013)、5hpaに該mRNAをSCNT胚に注射した(図3A)。免疫染色は、触媒欠損変異型ではなく、野生型Kdm4d mRNAの注射が、SCNT胚におけるH3K9me3レベルを大きく低下させたことを明らかにした(図3B)。
Kdm4d注射後のSCNT胚の転写回復の生物学的結果を調査するために、本発明者らは、最初に、卵丘細胞をドナー細胞として使用し、Kdm4d mRNAを注射されたSCNT胚の発生能を分析した。対照SCNT胚において、第一分割後に発生率は減少し始め、分割した胚の26.0%だけが、96時間培養後に胚盤胞期まで成功裏に発生したが(図4Aおよび4B、ならびに表S1)、これは、以前の研究に一致する知見である(Kishigami et al., 2006)。著しくは、野生型Kdm4d mRNAを注射されたSCNT胚は、2から4細胞期および4細胞期から桑実胚期の移行の間にめったに停止せず、胚盤胞期まで高い効率で発生する(88.6%;図4Aおよび4B、ならびに表3)。対照的に、触媒欠損変異型Kdm4d mRNAの注射は、SCNT胚の発生率に有意な影響を有さず、Kdm4d注射がSCNT胚発生に及ぼす改善がその酵素活性に依存することを示している。RRRにおけるH3K9me3濃縮が、異なる体細胞型における一般的な現象に見えることを考えれば、本発明者らは、SCNT胚発生に及ぼすKdm4dのプラス効果を他のドナー体細胞型に拡張できるはずだと予測した。実際、Kdm4d mRNAの注射は、セルトリ細胞またはC57BL/6バックグラウンドのMEF細胞がドナー細胞として使用されたときに、SCNT胚の発生効率も有意に改善した(図4Aおよび4B、表3)。まとめると、これらの結果は、Kdm4d mRNAの注射によるH3K9me3の除去が、ドナー体細胞型にかかわらずSCNT胚の着床前発生を有意に改善できることを実証している。
注射されたmRNAの濃度は1800ng/μlであった。siRNAの濃度はそれぞれ5pMであった。# トランスフェクション試薬のみで処置。* 水を注射された対照と比較してP<0.01。
注射されたKdm-4d mRNA濃度は1800ng/μlであった。N/A、該当なし。ET、胚移入。# IVF胚がBDF1精子および卵母細胞から生成された。
SCNT胚の発生表現型不良の原因となる遺伝子の候補
本発明者らは、次に、H3K9me3によって抑制される遺伝子のどれがSCNT胚の発生表現型不良の原因となるかを評価した。Kdm4dの過剰発現が胚盤胞期に達しつつあるSCNT胚の率を大きく増加させることを考えれば、原因遺伝子は、野生型Kdm4d注射SCNT胚において抑制解除されていなければならない。2細胞期SCNT胚において活性化できなかった遺伝子(図1Dの群3の遺伝子)、および変異型Kdm4d注射ではなく、野生型Kdm4d注射2細胞期SCNT胚において抑制解除される遺伝子の分析により、本発明者らは49種の共通遺伝子を特定した(図5Aおよび5B、FC>5)。GO分析は、この群の遺伝子に転写およびRNA代謝過程に関与する遺伝子が濃縮されていることを示した(図5A)。着床前発生における49種の遺伝子の大部分の機能は未知であるものの、2細胞期特異的Zscan4ファミリーのメンバーであるZscan4dは、着床前発生に重要であることが示されている(Falco et al., 2007)。したがって、本発明者らは、外因性Zscan4d mRNAの補充が、SCNT胚の発生効率を高めることができるかどうかを調査した。
Suv39h1/2は体細胞におけるH3K9me3バリアの樹立の原因である
H3K9me3がSCNT介在性リプログラミングのエピジェネティックなバリアであると実証したので、本発明者らは、次に、体細胞ゲノムにおけるRRR内へのH3K9me3沈着の原因となるヒストンメチルトランスフェラーゼを特定しようとした。以前の研究は、少なくとも3つのヒストンリジンメチルトランスフェラーゼ(KMT)であるSuv39h1、Suv39h2およびSetdb1が、哺乳動物細胞におけるH3K9me3産出を触媒することができると報告している(Matsui et al., 2010; Peters et al., 2001)。最初に、本発明者らは、Suv39h1、Suv39h2およびSetdb1を標的化する低分子干渉RNA(siRNA)の混合物をトランスフェクトすることによって、MEF細胞から3つのH3K9me3メチルトランスフェラーゼを枯渇させた(図6A)。RT-qPCR分析は、トランスフェクションの48時間後に80~60%のノックダウン効率が達成されたことを確認した(図12A~12B)。免疫染色は、これらのsiRNAのトランスフェクション(6日の細胞培養の間に2回)がMEF細胞におけるH3K9me3レベルを大きく低下させることができたことを示した(図6Aおよび6B)が、これは、他の未特定の酵素でなく、3つのH3K9me3メチルトランスフェラーゼを体細胞におけるH3K9me3沈着の責任因子として実証するものである。ドナーとしてトリプルKD MEF細胞を使用して、本発明者らは、SCNT胚を作製し、それらの着床前発生を調査した。本発明者らは、対照SCNT胚のわずか6.7%が96時間培養後に胚盤胞期まで発生した(図6C、6D、および表3)が、一方でトリプルノックダウンMEF由来胚の65.6%が胚盤胞期まで発生したことを発見した(図6C、6Dおよび表3)。この結果は、体細胞H3K9me3がSCNT介在性リプログラミングのエピジェネティックなバリアであることを確認するばかりでなく、これらの3つの酵素がこのエピジェネティックなバリアを産出する原因となることも実証している。
ツメガエル(Xenopus)卵における体細胞核移入による動物クローニングの最初の実証以来50年超が経過した(Gurdon, 1962)。莫大な尽力にかかわらず、大部分の種でクローニング効率は比較的低いままであり、SCNT後のエピジェネティックリプログラミングの基礎をなすメカニズムは、あまり理解されていないままである。本研究において、比較トランスクリプトームおよび統合エピゲノム分析により、本発明者らは、ドナー体細胞においてSuv39h1/2によって沈着するH3K9me3が、ヒトおよびマウス卵母細胞における体細胞核リプログラミングのエピジェネティックなバリアとして機能することを発見した。IVF胚のトランスクリプトームと比較することによって、本発明者らは、RRR(リプログラミング耐性領域)と呼ばれる、SCNT胚における転写リプログラミングに耐性な222種のゲノム領域を特定した。RRRは、分析されたいくつかの体細胞型において、Suv39h1/2によって沈着されるH3K9me3の顕著な濃縮および低いDNase I到達性(どちらもヘテロクロマチンの一般的特徴である)によって特徴付けられる。Suv39h1/2のノックダウンまたは外因性Kdm4dの発現のいずれかによるH3K9me3の除去が、RRR活性化およびSCNT胚発生の有意な改善を招くので、RRR内の転写物の効率的な活性化は、SCNT胚の発生に重要に見える。したがって、本発明者らは、本明細書において、体細胞でSuv39h1/2によって沈着されるH3K9me3が、卵母細胞において発生的に重要な遺伝子の活性化についてのバリアとしての役目をし、SCNT胚の発生停止を導くモデルを実証している(図7)。SCNT後の外因性Kdm4dまたはドナー細胞におけるSuv39h1/2枯渇のいずれかによるこのエピジェネティックなバリアの除去は、発生遺伝子の発現およびSCNT胚発生の改善を可能にする(図7)。
SEQUENCE LISTING
<110> THE CHILDREN'S MEDICAL CENTER CORPORATION
<120> METHODS AND COMPOSITIONS TO INCREASE SOMATIC CELL NUCLEAR
TRANSFER (SCNT) EFFICIENCY BY REMOVING HISTONE H3-LYSINE
TRIMETHYLATION
<150> US 62/053,514
<151> 2014-09-22
<150> US 62/050,308
<151> 2014-09-15
<160> 65
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1572
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
atggaaacta tgaagtctaa ggccaactgt gcccagaatc caaattgtaa cataatgata 60
tttcatccaa ccaaagaaga gtttaatgat tttgataaat atattgctta catggaatcc 120
caaggtgcac acagagctgg cttggctaag ataattccac ccaaagaatg gaaagccaga 180
gagacctatg ataatatcag tgaaatctta atagccactc ccctccagca ggtggcctct 240
gggcgggcag gggtgtttac tcaataccat aaaaaaaaga aagccatgac tgtgggggag 300
tatcgccatt tggcaaacag taaaaaatat cagactccac cacaccagaa tttcgaagat 360
ttggagcgaa aatactggaa gaaccgcatc tataattcac cgatttatgg tgctgacatc 420
agtggctcct tgtttgatga aaacactaaa caatggaatc ttgggcacct gggaacaatt 480
caggacctgc tggaaaagga atgtggggtt gtcatagaag gcgtcaatac accctacttg 540
tactttggca tgtggaaaac cacgtttgct tggcatacag aggacatgga cctttacagc 600
atcaactacc tgcaccttgg ggagcccaaa acttggtatg tggtgccccc agaacatggc 660
cagcgcctgg aacgcctggc cagggagctc ttcccaggca gttcccgggg ttgtggggcc 720
ttcctgcggc acaaggtggc cctcatctcg cctacagttc tcaaggaaaa tgggattccc 780
ttcaatcgca taactcagga ggctggagag ttcatggtga cctttcccta tggctaccat 840
gctggcttca accatggttt caactgcgca gaggccatca attttgccac tccgcgatgg 900
attgattatg gcaaaatggc ctcccagtgt agctgtgggg aggcaagggt gaccttttcc 960
atggatgcct tcgtgcgcat cctgcaacct gaacgctatg acctgtggaa acgtgggcaa 1020
gaccgggcag ttgtggacca catggagccc agggtaccag ccagccaaga gctgagcacc 1080
cagaaggaag tccagttacc caggagagca gcgctgggcc tgagacaact cccttcccac 1140
tgggcccggc attccccttg gcctatggct gcccgcagtg ggacacggtg ccacaccctt 1200
gtgtgctctt cactcccacg ccgatctgca gttagtggca ctgctacgca gccccgggct 1260
gctgctgtcc acagctctaa gaagcccagc tcaactccat catccacccc tggtccatct 1320
gcacagatta tccacccgtc aaatggcaga cgtggtcgtg gtcgccctcc tcagaaactg 1380
agagctcagg agctgaccct ccagactcca gccaagaggc ccctcttggc gggcacaaca 1440
tgcacagctt cgggcccaga acctgagccc ctacctgagg atggggcttt gatggacaag 1500
cctgtaccac tgagcccagg gctccagcat cctgtcaagg cttctgggtg cagctgggcc 1560
cctgtgccct aa 1572
<210> 2
<211> 1533
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 2
atgaagacga agtccacatg tgctcagaat ccaaattgca gcataatgat atttcgtcca 60
accaaagaag agtttaatga ttttgacaaa tacattgctt acatggagtc ccaaggggca 120
caccgagctg gactggccaa ggtcatccca ccaaaagaat ggagggccag gcagtcttat 180
gacaatatca gcaacatctt aatagcaact cccctgcagc aagtggtctc tgggcaggca 240
ggcgtgttca cccaatacca taagaagaag aaaggcatga cagtggggga gtaccgtgag 300
ctggccaaca gcaaaaagta ccagaccccg ccacacctgg attttgaaga tttggagcga 360
aaatactgga agaatcgcct gtatgagtca ccgatttatg gtgctgacgt cagcggctcc 420
ctgtttgatg ggaagactca acagtggaat gtgggtcacc tgggaacaat tcaagaccta 480
ttggaacagg aatgtggcat agtgattgag ggcgtcaaca cgccctacct gtactttggc 540
atgtggaaga ccacctttgc gtggcacacg gaggacatgg acctgtacag tatcaactac 600
ctacactttg ggcagcccaa gacctggtat gctgtgcccc ctgagcatgg caggcgcctg 660
gagcgcctgg ccagggaact cttccctggc agctcccagg gctgccaggc cttcctgagg 720
cacaaggtgg cgctcatctc gcccactgtg cttaaggaga atggcatccc ctttggtcgc 780
atcacccagg aggctgggga gttcatggtc acctttccct atggctacca cgcgggcttc 840
aaccatggct tcaactgcgc agaggccatc aattttgcca ccccaaggtg gattgactat 900
ggcaaggtgg catctcagtg cagctgtggg gaggccaggg tgagcttctc catggacgcc 960
tttgtgagga tcttgcagcc tgagcgatat gaactgtgga aacgtggcca agatcaggca 1020
gttgtggacc acacagagac tatggtgtct accagtcagg agctcaccac ccggcgggtg 1080
accaaagcac caagaaaaac ttggggcttg aagcgtctcc ggcttcgcca ggtctcacga 1140
tctcttctgc ctatagccac ggtaagtaac gttccttgca acatgcaggt gtgccacacc 1200
tccaggcaac catcagatgt gaaaggtgat gatgtccaga agtctgactc agccagagcc 1260
tcaccacatc ctctgagtct gccttcttct ggtcacatgt caactagaag atgtagtctt 1320
ggtcgtcgtc cttgtgaact aggagctcag gagtcctcca atggagctcc agtcaagagg 1380
caacttccag caggcagaga tgacacaagc cccagtccag agcttcagcc ccaggctgtg 1440
agtggagact taatagtcga ctcaggactt gtgaaccctg gcccacagca tcttatgaca 1500
gcttctgaag ggggattgac ctccgacccc taa 1533
<210> 3
<211> 1533
<212> DNA
<213> Rattus sp.
<400> 3
atgaagacta agtccacctg tgctcagaat ccaaattgca gcataatgat atttcgtcca 60
accaaagaag agtttaacga ctttgacaaa tacatcgcct acatggagtc ccaaggggca 120
cacagagctg gactggccaa ggtcatcccg ccaaaagaat ggagggccag gcagtcttat 180
gacaatatca gtaacatctt aatagcaact cccctgcagc aagtagtctc cgggcaggca 240
ggtgtgttca ctcaatacca taagaagaag aaagccatga cagttgggca gtaccggcac 300
ctggccaaca gtaaaaaata ccaaacccca ccacacctgg attttgaaga tttggagaga 360
aaatactgga agaatcgcct gtatgagtca ccaatttatg gtgctgacgt cagtggctcc 420
ctgtttgatg ggaagactca acagtggaat gtgggccacc tgggaacaat tcaagaccta 480
ttggaacagg aatgcggcat agtgattgag ggcgtcaaca cgccctacct gtactttggc 540
atgtggaaga cctcctttgc gtggcacacg gaggacatgg acctgtacag tatcaactac 600
ctgcactttg gacagcccaa gacctggtat gctgtacccc ctgagcatgg caggcgcctg 660
gagctcctag ccaaggaact cttcccaggc agctcccagg gctgccaggc cttcctgagg 720
cacaaggtgg cgctcatctc acccactgtg ctcaaggaga atggcatccc ctttggtcga 780
atcacccagg aggctgggga gttcatggtc acctttccct atggctacca cgcgggcttc 840
aaccatggct tcaactgtgc agaagccatc aatttcgcca cgccgaggtg gattgactat 900
ggcaaggtgg catctcagtg cagctgtggg gaggccaggg tgagcttctc catggatgcc 960
tttgtgagga tcctgcagcc tgagcgatat gagatgtgga aacgaggtca agatcaggca 1020
gttgtggacc acacagaggc tatggggcct accagtcagg agctcaccac ctggcgggtg 1080
atccaggcac caagaaaaac ttggggcctg aagcatctcc ggcttcgcca ggtttcacgc 1140
tgtcttctgc ctgtagccac tgacagtaac attgccaaca acacccagat gtgccacacc 1200
tccaggcaag cagcagattc gaaaggtgat gaggtccagg agtctgaccc agccatagcc 1260
ccaccatatc ctctgggtct atcttctcct ggccacatgt caactggaaa acgtggtctt 1320
ggtcgtcgcc cttgtgaact aggagttcag gagtccacca atggagctcc agtcaagagg 1380
cgacttccag aaggcagaga tgacagaagt cccagcccag agcttcagtc ccagtccgtg 1440
actggagact taatagtcaa ctcagacctt gtaaatcctg ggccacagca tcctgtgaca 1500
gcttctgaag ggggattgac ctctgacccc taa 1533
<210> 4
<211> 1485
<212> DNA
<213> Oryctolagus cuniculus
<400> 4
atgaagtcta aggcccatcg tgctcagaat ccaaattgca gcataatggt atttcatcca 60
accaaagaag agtttagtga ttttgataac tatattgctt acatggaatc tcagggtgca 120
caccggggag gcctggccaa ggtcatccca cccaaggagt ggagggccag acagacctat 180
gatgacatcg atgacatctt aataactcgc cccctccagc aggtggccta tggcggggca 240
ggtgtcttta ctcaattcca taaaaagagg agagccatga ccctgagaca gtatcgccag 300
ctggccacca gcacaaaata ccagacccca gcgcacctga ctttcgaaga gttggagcaa 360
aaatactgga aaaaccgtct ctacgatgcc ccaatctatg gtgctgatat cagcggctct 420
ctgtttgatg aaaacacggc acactggaac ctcaggcgcc tgggcaccat tcaggacctg 480
ttggagcagg aatgtggtgt cgtcatcgag ggcgtcaaca cgccctacct gtactttggc 540
atgtggaaga ccacgttcgc ctggcacacg gaggacatgg acctgtacag catcaactac 600
ctgcacttcg gggagcccaa gacgtggtac gcggtgcccc cggagcacgg gcggcgcctg 660
gagcgcctgg ccgggcagct gttcccgggc agttcccgca gctgccaggc cttcctgcgg 720
cacaaggtgg ccctcatctc gcccagcgtc ctgcggcaga acggcatccc cttccgccgc 780
atcactcagc aggctggcga gttcatggtg acctttcctt acggctacca cgcggggttc 840
aaccacggct tcaactgcgc cgaagccatc aatttcgcca ccccgcgctg gatcgagtat 900
ggcaaagtgg cctcccagtg cagctgcggg gaggccaggg tcaccttttc catggatgcc 960
ttcgttcgta tcctgcaacc cgagcgctac gaactgtgga agtgcggcca agaccggaag 1020
gccgtggacc acacggagcc tacggcacgc accagcccag agctgaccag gtggaagcag 1080
gatcgcaggc tctggagggc agcccgaggc ttggccccca aactcgctag gtccctggct 1140
gcaggtgatg gtactagctg caaggctccc aagcgcctac gggctgccag ggaatctaca 1200
gcacagccag ggggcgttgc ccacagttcc cggaaacctc acgcagcccc gcggacttcc 1260
ctgggtccct gtgccccaga ggtcctctca actgtcacac gtggctgtcg gcgtcgctct 1320
agggaactgg gggtgcagga gccaagcctc caatctccag caaagaggcg cctctcagtc 1380
agaacagggc gcacagctgc gcgctccaag cctcagtcct cacctgagcg tggtatcttg 1440
atggtcaatc ctgcaccaag cctggggccg cagctccccg cttag 1485
<210> 5
<211> 1521
<212> DNA
<213> Sus scrofa
<400> 5
atgacgtcca ggccctgtgg ggtccagaac ccaggctgtg ccattatgac cttctaccca 60
accctggaag aatttgaaga cttcagccaa tatatcgctt acatggaatc gcaaggggca 120
caccacgctg gcctggccaa ggtaattccc cccaaaggat ggaaagccag acagacttat 180
gaggatatca gtgacatcgt aatagctgcc cctctccagc aggtagcctt tggggaggca 240
ggtgtgttta ctcagtacca cagaaagaag agagccatga ctgtgagcca gtatcaccac 300
ctcgcacata ctgtaaaata tcaagctcca ccacacttgg attttgagga cctggagcaa 360
acatactgga aaacgcgcct gtacggttcc cccatctacg gcgcggatgt cagtggctcg 420
ttgttcgatg agaacacgaa gcagtggaac ctgggccacc tgggcaccat ccaggacctg 480
ctggagcagg agtgcggagt ggccatcgac ggcgtcaaca gcccgtacct gtacttcggc 540
atgtggaaga ccggcttcgc ctggcacacg gaggacatgg acctttacag cctcaacttc 600
ctgcacttcg gggagcccaa gacgtggtac gcggtgcccc ctgcgcatgg ccggcgcctg 660
gaacgcctgg ccagggagct gttccctggc cccgcgcggg gctgcgaggc cttcctgaga 720
cacaaggtgg cgctcatctc gcccacggtc ctcaaggccc agggcatccc ctttggccgc 780
gtcacgcagg aggcgggcga gttcatggtg acgtttccct atggctacca ctcgggcttc 840
aaccacggct tcaactgcgc cgaagccatc aatttcgcca ccccgcgctg ggtcgattat 900
ggcaaagtgg cgtcgcagtg cagctgcggg gaggcgcggg tggtgttctc catggacgcg 960
ttcgtgcgca tcctgcaacc cgagcgctat gagctgtgga aacggggcca ggatcgggtg 1020
gcgctggaac acacggagca cctgtcctcg cctggcagcc tggagttgag tgcctggagg 1080
gaggtccgcg agcctgcggg ggctgaactt ggcctggggc acagcccacc ccacactgcc 1140
cggggtcggc tctgggtggc aggccgtggg atccgccgcc gaaactctgt gtgttcggtg 1200
tctcggtgcc cctcgcctac ctggggttct tcctccgctg cccagttcca ggttgcaact 1260
ctctgcagct cccatgagcc aggacccacc ccgccgctgt caccaggctc ctctgctctg 1320
ggtctccaat caactggcag acgtggtcct gttcgatgtc gtaggtctcg accccatcgt 1380
cgtcctcggg tacaggagac tttggagcca acagtccagg ctccagctaa gaggctcctc 1440
tcagtaggta cagtgggcac agctgcagac ttggaagctc atgtcctttt ggccaaggaa 1500
cccttgatag acagccctgc c 1521
<210> 6
<211> 1503
<212> DNA
<213> Bos taurus
<400> 6
atggaagcta tgaagcccag ttgtgctcag aacccaagtt gtagcataat gatatttcat 60
ccaaccaaag aagagtttac tgattttgat aaatacattg cttacataga atcgcaaggg 120
gcccaccgag caggcttggc taagatagtt ccacccaagg aatggaaagc cagacagacc 180
tacgacgata tcaatgacat cttaataacc gctccgctcc agcaggtggt ctctgggcgg 240
gcaggtgtgt ttactcaata ccacaaaaag aagaaagcca tgaccgtggc agagtaccgc 300
cacttagcaa atactgaaaa ataccagact ccattctact ccgattttga ggaattggag 360
cgaaaatatt ggaaaacccg cctctttgag tccccaatat acggcgcgga catcagtggc 420
tctttatttg atgaaaacac gaagcagtgg aacctgggac gcctggggac catccaggac 480
ctgctggagc aggagtgcgg ggtggtcatc gagggcgtca acacccccta cctgtacttc 540
ggcatgtgga agaccgcctt cgcctggcac acggaggaca tggaccttta tagcatcaac 600
ttcctgcact tcggggagcc caagacctgg tacgcggtgc cgcccgagca cggccggcgc 660
ctggaacgcc tggccggcgc gctcttcccg ggcagctcgc ggagctgcga ggccttcctg 720
cgccacaagg cggcgctcat ctcgcccacg gtgctccggg acaacggcat ccccttcggt 780
cgggtcacgc aggaggcggg cgagttcatg gtgaccttcc cctacggcta ccactcgggc 840
ttcaaccacg gcttcaactg cgccgaggcc atcaatttcg ccaccccgcg ctggatcgat 900
tatggcaaag tggcctcgca gtgcagctgc ggcgaggcgc aggtggcctt ctccatggac 960
gccttcgtgc gcatcctgca gcccgagcgc tatgagctgt ggaagcgcgg gcaggaccgg 1020
gcggtggtga accacgccga gcccgcggcg ccgggcggcc aggagctgag agcctggaag 1080
gaggtgcaga cgctgggccc caagtacttc ccgcctcgcc gctccgcccg cctgcgtcag 1140
cccgtgtcct caagcgaggg cactgacccc agagcccctg tgcgggccgt gtccctgcga 1200
cccttgcctg cccggggttc ctgctcggct tcccagtttg acgctgtcgc cggcagcagc 1260
tcacggaagc ccagccagac ccctccgctg ttgccaggtc cgtcggtggc gtcgtgcctc 1320
cacccagttg gcagatgtgg ttctcgtcgt cgccctcagg aaaaaggcac tcaagagctg 1380
actgccccca tcggagctaa gaggggcctt gccttagacc gcaaggctca ggaccccaag 1440
gctcaacccc tgtctgcaga gggacggatg gacaatcctg ccccaacgag ccctggactc 1500
tag 1503
<210> 7
<211> 1572
<212> DNA
<213> Macaca sp.
<400> 7
atggaaacta tgaagtctaa ggccaactat ggccagaatc caaattgtaa cataatgata 60
tttcatccaa ccaaagaaga gtttaatgat tttgataaat atattgctta catggaatcc 120
caaggtgcac acagagctgg cttggctaag atagttccac ccaaagaatg gaaagccaga 180
gagacctatg ataacatcag tgaaatctta atagccactc ccctccaaca ggtggcctct 240
gggcgggcag gggtgtttac tcaataccat aaaaaaaaga aagccatgac cgtgggggag 300
tatcgccact tggcaaacag taaaaaatat caaactccac cacaccagaa tttcgaagat 360
ttggagcgaa aatactggaa gaaccgcatc tataattcac caatttatgg tgctgacatc 420
agtggctcct tgtttgatga aaacactaaa cagtggaatc ttgggcacct gggaacaatt 480
caggacctgt tggaaaagga atgtggggtt gtcatagaag gcgttaacac accctacttg 540
tactttggca tgtggaagac cacatttgct tggcacacgg aggacatgga cctttacagc 600
atcaactacc tgcacctcgg ggagcccaaa acttggtatg tggtgccccc agagcatggc 660
cagcgcctgg aacgcctggc cagggagctc ttcccaggca gttcccgggg ctgtggggcc 720
ttcctgcggc acaaggtggc cctcatctcg cctacagttc tcaaggaaaa tgggatcccc 780
ttcaatcgca taactcagga ggctggagag ttcatggtga cctttcccta tggctaccat 840
gctggcttca accatggttt caactgtgca gaggccatca attttgccac tccacgatgg 900
attgattatg gcaaaatggc ctcccagtgt agctgtgggg aggccagggt gaccttttcc 960
atggacgcct tcgtgcgcat cctgcaacct gagcgctatg agctgtggaa acgtgggcaa 1020
gaccgggcag ttgtggacca catggagccc agggtaccag ccagccaaga gctgagcacc 1080
cagaaggagg tccagttgcc caggagagca gcgctgggcc tgagacaact ccctcctcac 1140
tgggcccggc attccccttg gcctctggct gcccgcagtg ggacgcgctg ccacaccctt 1200
gtgtgctctt cactcccacg ccgatctgca gttagtggca ctgctacgca gccccgggct 1260
gctgccgtcc acagctctag gaagcccagc tcaactccat catccacccc tggtccatct 1320
gcacagatta tccacccgtc aaatggcaga cgtggacgtg gtcgccgtcc tcagaaactg 1380
agagctcagg agctgaccct ccagactcca gccaagaggc tcctcttagc gggcacaaca 1440
tgcacagttt caggcccaga acctgagccc ctacctgagg gtggggcttt gatggacaag 1500
cctgtaccac tgaatccagg gctccagcat cctgtaaagg cttctaggtg cagctgggcc 1560
cctgtgccct aa 1572
<210> 8
<211> 1572
<212> DNA
<213> Pan troglodytes
<400> 8
atggaaacta tgaagtctaa ggccaactgt gcccagaatc caaattgtaa cataatgata 60
tttcatccaa ccaaagaaga gtttaatgat tttgataaat atattgctta catggaatcc 120
caaggtgcac acagagctgg cttggctaag ataattccac ccaaagaatg gaaagccaga 180
gagacctatg ataatatcag tgaaatctta atagccactc ccctccagca ggtggcctct 240
gggcgggcag gggtgtttac tcaataccat aaaaaaaaga aagccatgac cgtgggggag 300
tatcgccatt tggcaaacag taaaaaatat cagactccac cacaccagaa tttcgaagat 360
ttggagcgaa aatactggaa gaaccgcatc tataattcac cgatttatgg tgctgacatc 420
agtggctcct tgtttgatga aaacactaaa caatggaatc ttgggcacct gggaacaatt 480
caggacctgc tggaaaagga atgtggggtt gtcatagaag gcgtcaatac accctacttg 540
tactttggca tgtggaaaac cacgtttgct tggcatacag aggacatgga cctttacagc 600
atcaactacc tgcaccttgg ggagcccaaa acttggtatg tggtgccccc agaacatggc 660
cagcgcctgg aacgcctggc cagggagctc ttcccaggca gttcccgggg ttgtggggcc 720
ttcctgcggc acaaggtggc cctcatctcg cctacagttc tcaaggaaaa tgggattccc 780
ttcaatcgca taactcagga ggctggagag ttcatggtga cctttcccta tggctaccat 840
gctggcttca accatggttt caactgcgca gaggccatca attttgccac tccacgatgg 900
attgattatg gcaaaatggc ctcccagtgt agctgtgggg aggcaagggt gaccttttcc 960
atggatgcct tcgtgcgcat cctgcaacct gaacgctatg acctgtggaa acgtgggcaa 1020
gaccgggcag ttgtggacca catggagccc agagtaccag ccagccaaga gctgagcacc 1080
cagaaggaag tccagttacc caggagagca gcgctgggcc tgagacaact cccttcccac 1140
tgggcccggc attccccttg gcctatggct gcccgcagtg ggacacggtg ccacaccctt 1200
gtgtgctctt cactcccacg ccgatctgca gttagtggca ctgctacgca gccccgggct 1260
gctgctgtcc acagctctaa gaagcccagc tcaactccat catccacccc tggtccatct 1320
gcacagatta tccacccgtc aaatgttaga cgtggtcgtg gtcgccctcc tcagaaactg 1380
agagctcagg agctgaccct ccagactcca gccaagaggc ccctcttggc gggcacaaca 1440
tgcacagctt cgggtccaga acctgagccc ctacctgaga atggggcttt gatggacaag 1500
cctgtaccac tgagcccagg gctccagcag cctgtcaagg cttctgggtg cagctgggcc 1560
cctgtgccct aa 1572
<210> 9
<211> 2745
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 9
cgcgaggccg gctaggcccg aatgtcgtta gccgtgggga aagatggcgg aaaatttaaa 60
aggctgcagc gtgtgttgca agtcttcttg gaatcagctg caggacctgt gccgcctggc 120
caagctctcc tgccctgccc tcggtatctc taagaggaac ctctatgact ttgaagtcga 180
gtacctgtgc gattacaaga agatccgcga acaggaatat tacctggtga aatggcgtgg 240
atatccagac tcagagagca cctgggagcc acggcagaat ctcaagtgtg tgcgtatcct 300
caagcagttc cacaaggact tagaaaggga gctgctccgg cggcaccacc ggtcaaagac 360
cccccggcac ctggacccaa gcttggccaa ctacctggtg cagaaggcca agcagaggcg 420
ggcgctccgt cgctgggagc aggagctcaa tgccaagcgc agccatctgg gacgcatcac 480
tgtagagaat gaggtggacc tggacggccc tccgcgggcc ttcgtgtaca tcaatgagta 540
ccgtgttggt gagggcatca ccctcaacca ggtggctgtg ggctgcgagt gccaggactg 600
tctgtgggca cccactggag gctgctgccc gggggcgtca ctgcacaagt ttgcctacaa 660
tgaccagggc caggtgcggc ttcgagccgg gctgcccatc tacgagtgca actcccgctg 720
ccgctgcggc tatgactgcc caaatcgtgt ggtacagaag ggtatccgat atgacctctg 780
catcttccgc acggatgatg ggcgtggctg gggcgtccgc accctggaga agattcgcaa 840
gaacagcttc gtcatggagt acgtgggaga gatcattacc tcagaggagg cagagcggcg 900
gggccagatc tacgaccgtc agggcgccac ctacctcttt gacctggact acgtggagga 960
cgtgtacacc gtggatgccg cctactatgg caacatctcc cactttgtca accacagttg 1020
tgaccccaac ctgcaggtgt acaacgtctt catagacaac cttgacgagc ggctgccccg 1080
catcgctttc tttgccacaa gaaccatccg ggcaggcgag gagctcacct ttgattacaa 1140
catgcaagtg gaccccgtgg acatggagag cacccgcatg gactccaact ttggcctggc 1200
tgggctccct ggctccccta agaagcgggt ccgtattgaa tgcaagtgtg ggactgagtc 1260
ctgccgcaaa tacctcttct agcccttaga agtctgaggc cagactgact gagggggcct 1320
gaagctacat gcacctcccc cactgctgcc ctcctgtcga gaatgactgc cagggcctcg 1380
cctgcctcca cctgccccca cctgctccta cctgctctac gttcagggct gtggccgtgg 1440
tgaggaccga ctccaggagt cccctttccc tgtcccagcc ccatctgtgg gttgcactta 1500
caaaccccca cccaccttca gaaatagttt ttcaacatca agactctctg tcgttgggat 1560
tcatggccta ttaaggaggt ccaaggggtg agtcccaacc cagccccaga atatatttgt 1620
ttttgcacct gcttctgcct ggagattgag gggtctgctg caggcctcct ccctgctgcc 1680
ccaaaggtat ggggaagcaa ccccagagca ggcagacatc agaggccaga gtgcctagcc 1740
cgacatgaag ctggttcccc aaccacagaa actttgtact agtgaaagaa agggggtccc 1800
tgggctacgg gctgaggctg gtttctgctc gtgcttacag tgctgggtag tgttggccct 1860
aagagctgta gggtctcttc ttcagggctg catatctgag aagtggatgc ccacatgcca 1920
ctggaaggga agtgggtgtc catgggccac tgagcagtga gaggaaggca gtgcagagct 1980
ggccagccct ggaggtaggc tgggaccaag ctctgccttc acagtgcagt gaaggtacct 2040
agggctcttg ggagctctgc ggttgctagg ggccctgacc tggggtgtca tgaccgctga 2100
caccactcag agctggaacc aagatctaga tagtccgtag atagcactta ggacaagaat 2160
gtgcattgat ggggtggtga tgaggtgcca ggcactgggt agagcacctg gtccacgtgg 2220
attgtctcag ggaagccttg aaaaccacgg aggtggatgc caggaaaggg cccatgtggc 2280
agaaggcaaa gtacaggcca agaattgggg gtgggggaga tggcttcccc actatgggat 2340
gacgaggcga gagggaagcc cttgctgcct gccattccca gaccccagcc ctttgtgctc 2400
accctggttc cactggtctc aaaagtcacc tgcctacaaa tgtacaaaag gcgaaggttc 2460
tgatggctgc cttgctcctt gctcccccac cccctgtgag gacttctcta ggaagtcctt 2520
cctgactacc tgtgcccaga gtgcccctac atgagactgt atgccctgct atcagatgcc 2580
agatctatgt gtctgtctgt gtgtccatcc cgccgacccc ccagactaac ctccaggcat 2640
ggactgaatc tggttctcct cttgtacacc cctcaaccct atgcagcctg gagtgggcat 2700
caataaaatg aactgtcgac tgaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 2745
<210> 10
<211> 3093
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 10
cggggccgag gcgcgaggag gtgaggctgg agcgcggccc cctcgccttc cctgttccca 60
ggcaagctcc caaggcccgg gcggcggggc cgtcccgcgg gccagccaga tggcgacgtg 120
gcggttcccc gcccgccgcg accccaactc cgggacgcac gctgcggacg cctatcctcc 180
cccaggccgc tgacccgcct ccctgcccgg ccggctcccg ccgcggagga tatggaatat 240
tatcttgtaa aatggaaagg atggccagat tctacaaata cttgggaacc tttgcaaaat 300
ctgaagtgcc cgttactgct tcagcaattc tctaatgaca agcataatta tttatctcag 360
gtaaagaaag gcaaagcaat aactccaaaa gacaataaca aaactttgaa acctgccatt 420
gctgagtaca ttgtgaagaa ggctaaacaa aggatagctc tgcagagatg gcaagatgaa 480
ctcaacagaa gaaagaatca taaaggaatg atatttgttg aaaatactgt tgatttagag 540
ggcccacctt cagacttcta ttacattaac gaatacaaac cagctcctgg aatcagctta 600
gtcaatgaag ctacctttgg ttgttcatgc acagattgct tctttcaaaa atgttgtcct 660
gctgaagctg gagttctttt ggcttataat aaaaaccaac aaattaaaat cccacctggt 720
actcccatct atgaatgcaa ctcaaggtgt cagtgtggtc ctgattgtcc caataggatt 780
gtacaaaaag gcacacagta ttcgctttgc atctttcgaa ctagcaatgg acgtggctgg 840
ggtgtaaaga cccttgtgaa gattaaaaga atgagttttg tcatggaata tgttggagag 900
gtaatcacaa gtgaagaagc tgaaagacga ggacagttct atgacaacaa gggaatcacg 960
tatctctttg atctggacta tgagtctgat gaattcacag tggatgcggc tcgatacggc 1020
aatgtgtctc attttgtgaa tcacagctgt gacccaaatc ttcaggtgtt caatgttttc 1080
attgataacc tcgatactcg tcttccccga atagcattgt tttccacaag aaccataaat 1140
gctggagaag agctgacttt tgattatcaa atgaaaggtt ctggagatat atcttcagat 1200
tctattgacc acagcccagc caaaaagagg gtcagaacag tatgtaaatg tggagctgtg 1260
acttgcagag gttacctcaa ctgaactttt tcaggaaata gagctgatga ttataatatt 1320
tttttcctaa tgttaacatt tttaaaaata catatttggg actcttatta tcaaggttct 1380
acctatgtta atttacaatt catgtttcaa gacatttgcc aaatgtatta ccgatgcctc 1440
tgaaaagggg gtcactgggt ctcatagact gatatgaagt cgacatattt atagtgctta 1500
gagaccaaac taatggaagg cagactattt acagcttagt atatgtgtac ttaagtctat 1560
gtgaacagag aaatgcctcc cgtagtgttt gaaagcgtta agctgataat gtaattaaca 1620
actgctgaga gatcaaagat tcaacttgcc atacacctca aattcggaga aacagttaat 1680
ttgggcaaat ctacagttct gtttttgcta ctctattgtc attcctgttt aatactcact 1740
gtacttgtat ttgagacaaa taggtgatac tgaattttat actgttttct acttttccat 1800
taaaacattg gcacctcaat gataaagaaa tttaaggtat aaaattaaat gtaaaaatta 1860
atttcagctt catttcgtat ttcgaagcaa tctagactgt tgtgatgagt gtatgtctga 1920
acctgtaatt cttaaaagac ttcttaatct tctagaagaa aaatctccga agagctctct 1980
ctagaagtcc aaaatggcta gccattatgc ttctttgaaa ggacatgata atgggaccag 2040
gatggttttt tggagtacca agcaagggga atggagcact ttaagggcgc ctgttagtaa 2100
catgaattgg aaatctgtgt cgagtacctc tgatctaaac ggtaaaacaa gctgcctgga 2160
gagcagctgt acctaacaat actgtaatgt acattaacat tacagcctct caatttcagg 2220
caggtgtaac agttcctttc caccagattt aatattttta tacttcctgc aggttcttct 2280
taaaaagtaa tctatatttt tgaactgata cttgttttat acataaattt tttttagatg 2340
tgataaagct aaacttggcc aaagtgtgtg cctgaattat tagacctttt tattagtcaa 2400
cctacgaaga ctaaaataga atatattagt tttcaaggga gtgggaggct tccaacatag 2460
tattgaatct caggaaaaac tattctttca tgtctgattc tgagatttct aattgtgttg 2520
tgaaaatgat aaatgcagca aatctagctt tcagtattcc taatttttac ctaagctcat 2580
tgctccaggc tttgattacc taaaataagc ttggataaaa ttgaaccaac ttcaagaatg 2640
cagcacttct taatctttag ctctttcttg ggagaagcta gactttattc attatattgc 2700
tatgacaact tcactctttc ataatatata ggataaattg tttacatgat tggaccctca 2760
gattctgtta accaaaattg cagaatgggg ggccaggcct gtgtggtggc tcacacctgt 2820
gatcccagca ctttgggagg ctgaggtagg aggatcacgt gaggtcggga gttcaagacc 2880
agcctggcca tcatggtgaa accctgtctc tactgaaaat acaaaaatta gccgggcgtg 2940
gtggcacacg cctgtagtcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat cacttgaatt 3000
caggaggcgg aggttgcagt gagccaagat cataccactg cactgcagcc tgagtgacac 3060
agtaagactg tctccaaaaa aaaaaaaaaa aaa 3093
<210> 11
<211> 2681
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 11
gttgttagct gtggagaaag atggcggaaa atttaaaagg ttgcagtgtg tgctgtaaat 60
cttcttggaa tcaactgcag gacctgtgcc gactagccaa gctttcttgt cctgcccttg 120
gtgtttctaa gaagaatctg tatgactttg aagttgaata cctgtgtgat tataagaaga 180
tccgtgagca ggagtattac ctggttaagt ggcgtgggta tcccgactca gaaaacacct 240
gggagccacg gcagaatcta aaatgtatac gagttcttaa gcagttccac aaggacttag 300
aaagagagct tgtccgacga caccgccggt caaagccacc caggcatctg gacccaaacc 360
tagccaatta cctggtgcag aaggccaagc agaggcgggc acttcagcgt tgggaacaag 420
agctcaatgc caagcgcagc cacctggggc ggatcaccgt ggagaatgag gtagacctgg 480
atggccctcc aaggtccttt gtctatatca atgagtatcg agttggtgag ggcatcaccc 540
tcaaccaggt agctgttggc tgtgagtgcc aggactgtct gttggcaccc actggaggct 600
gttgccctgg agcatccctg cacaagtttg cctacaatga ccaaggccag gtgcgactga 660
aagctgggca gcccatctac gagtgcaact cccgctgttg ctgtggctat gactgcccaa 720
accgtgtagt ccagaaaggc atccgctacg atctctgcat cttccgcact aatgatggcc 780
gaggctgggg tgtccgcacg ctggaaaaga tccgaaaaaa tagctttgtt atggagtatg 840
tgggagagat tattacctca gaggaggcag agcggagggg ccagatctac gaccgccagg 900
gcgccaccta cctctttgac ctggactacg tggaagacgt atataccgtg gatgccgctt 960
attatggcaa catctctcat tttgtcaacc atagttgtga tcccaacctg caggtgtaca 1020
acgtattcat agacaacctt gatgagcgac taccccgcat cgcattcttt gccacaagaa 1080
ccatctgggc gggcgaggag ctcacctttg attacaacat gcaagtggac cccgtggaca 1140
tggagagtac ccgaatggac tccaactttg gcctggctgg gctccccggc tcccccaaga 1200
aacgagtccg tattgaatgc aaatgtggga caacggcttg ccgaaaatac ctcttctagc 1260
cttgagaagt ctgaggccag actaactgaa ggggcctgaa gccaccttcc tctcctacag 1320
ctaccctctt gtcaaggatg accatcaatc agagccttgt ctgcctccac ttgtcctcac 1380
ctaccctaac ctgctctagg gtcagggctg ttgtgaggac taactccggg tacccttttc 1440
ctgttccttt ccccctgttc caggcccatc aggcattgca cttaaaactc ccagccccat 1500
tttcagaaac atatttttca catcatgatt cccctagagt tggaattcat gtcatataat 1560
ggaggtccag attgaggaac tcggctgtaa aacagattct ttgttttgac agcatctctg 1620
cagctctatg tagtaagtct ggtgtttgga ccgttaatct tcctgtctca gccttcctca 1680
tgatgagatt gtaggtgtaa acccagctaa gatttttgtt ctaattgcat ctgcttctgc 1740
ttggagcttg tgtgtgaacc tgttgcaggt cctcttcatt actctaatgg tatgaggaag 1800
caaccccctg gcagacagac ttcagagctg agataccagc ctaacatcaa gctggatcag 1860
caaccccaga gcctttgtac tcaggaaaga aaaggcaatc ttcagagctg ggagataagg 1920
ctggttccgc tctttgtgct tttgatgctg gctggtatta accttaagac ctatagggtc 1980
tcaacagttg caagtctgaa aagtagttgc ccaaatgcca tcagaatggg gatggagtaa 2040
atacctcttt gaaagcccca cagaaaggtt agaactaagt tttaccatca ggaagtacag 2100
tgctggactt gctggaaacc cagccttggc atttgatggc cactagaact actagaagct 2160
ggaaccaaga tctaggtatt ctttagatag cacttaagac agtaatgtgc atcgactaga 2220
aggcgatgtg atgccaggca cttggtagag cacctggtcc atacagattg tctcagggaa 2280
gccttgaaaa ccacaaaggt ggagcccaga aaaaagccca tgtgacagaa ggcaatgtct 2340
aggccaaaaa tacttgtcag ctcaagtatt cacctgggtc acttgtctca gttaactgcc 2400
tagaaatgta caaaaggcaa agattctgat ggctgccttg ccccctgctt ccccacctcc 2460
aggaagcctt tcctgacttc ctgtgcccag agtgccctat gtgaaactct gtaccctgct 2520
accagatgcc aggtctgtgt gtgtattttg tatatatgtt tcctgcccat acttcccata 2580
cttcccaggc tgaccttcag gcatggactg aatctggttc tctgtacccc tcagccctcc 2640
ctagcctgga gtgcacacca ataaactgtg ttgttgagtt a 2681
<210> 12
<211> 1452
<212> DNA
<213> Mus sp.
<400> 12
gaatgaaagc tccgcaagat ggcgacggcc agggccaagg cacggggcag tgaggcagga 60
gcgcggtgtc accgggctcc aggtccgccc ccgaggccca aggccaggcg aacggcgaga 120
cgccgccgcg cggagaccct gacggcgcga cgctcgcggc cgtctgcggg cgagaggcgc 180
gccggctccc agcgagcgtg gtccggagct ccgcgggccg cggtctttgg cgacgagtgt 240
gcacgaggtg ccttattcaa ggcctggtgt gtgccttgcc tagtttcact tgatactctc 300
caggaattat gtagaaaaga aaagctcaca tgtaaatcga ttggaatcac caaaaggaat 360
ctaaacaatt atgaggtgga gtacttgtgt gactacaagg tagcaaaggg tgtggaatat 420
tatcttgtaa aatggaaagg atggccagat tctacaaaca cctgggagcc cttgagaaac 480
ctcaggtgtc cacagctcct gcggcagttc tctgatgaca agaagactta cttagctcag 540
gaaaggaaat gcaaggctgt caattcaaaa tccttgcaac ctgcaattgc tgagtatatt 600
gtacagaaag ctaagcaaag aatagctctg cagagatggc aagattacct caacagaaga 660
aagaaccata aggggatgat atttgttgaa aacactgttg acttggaggg cccaccttta 720
gacttctact acattaacga gtacaggcca gctcccggga tcagcataaa cagtgaagcc 780
acctttggat gttcatgtac agactgcttc tttgacaagt gttgtcctgc tgaagctgga 840
gttgtgttgg cttataataa gaagcaacaa attaaaatcc aaccaggcac tcccatctac 900
gaatgcaact caaggtgtcg atgtggacct gaatgtccca ataggattgt acaaaaaggc 960
acacaatatt cactgtgcat ctttaaaact agcaatggct gtggttgggg tgtaaaaacc 1020
cttgtgaaga ttaaaagaat gagttttgtc atggaatatg ttggagaggt gatcacaagt 1080
gaagaggccg agagacgggg acagttctat gacaacaaag ggatcaccta cctctttgac 1140
ctggactacg agtctgatga gttcacagtg gatgcagctc gatatggaaa cgtatcccat 1200
tttgtgaatc atagttgtga cccaaatctt caggtgttta gtgttttcat cgataacctt 1260
gatactcggc tgcccaggat agcattgttc tctacaagaa ccataaacgc tggagaagag 1320
ctgacttttg actatcaaat gaaaggttct ggagaagcat cttcagactc cattgaccac 1380
agccctgcca aaaaaagggt cagaacccaa tgtaaatgtg gagccgagac ttgcagaggt 1440
tacctcaact ga 1452
<210> 13
<211> 2711
<212> DNA
<213> Rattus sp.
<400> 13
gtcgttagct gtggagaaag atggcggaaa atttaaaagg ttgcagtgtg tgctgtaaat 60
cttcctggaa tcagctgcag gatctgtgcc gactagccaa gctttcttgt cctgcccttg 120
gtgtttctaa gaagaatctg tatgactttg aagttgaata cctgtgtgat tataagaaga 180
tccgtgagca ggagtattac ctggttaaat ggcgtgggta tcctgactca gagaacacct 240
gggagccacg gcagaatctc aaatgtgtgc gcattcttaa gcagttccac aaggacttag 300
aaagagagct tgtccggcga caccgccggt caaagccacc caggcatctg gacccaaact 360
tagccaatta cctggtgcag aaggccaagc agaggcgggc actgcagcgt tgggaacaag 420
agctcaatgc caagcgcagc catctggggc ggatcactgt ggagaatgag gtagacctgg 480
atggccctcc aaggtccttt gtctatatca atgagtatcg agttggtgag ggcatcaccc 540
tcaaccaggt agctgttggc tgtgagtgcc aggactgtct gttggcaccc actggaggct 600
gttgccctgg agcatccctg cacaagtttg cctacaatga ccaaggccag gtgcgactga 660
aagctgggca gcccatctac gagtgcaact ctcgctgttg ctgtggctat gactgcccaa 720
accgtgtagt ccagaaaggc atccgctaca acctctgcat cttccgcact gatgatggcc 780
gaggctgggg tgtccgcacg ctggaaaaga tccgcaaaaa tagctttgtt atggagtatg 840
tgggagagat tattacctca gaggaggcag agcggagggg ccagatctac gaccgccagg 900
gcgccaccta cctctttgac ctggactacg tggaggacgt atataccgtg gatgccgcct 960
attatggcaa catctctcac tttgtcaacc atagttgtga tcccaacctg caggtgtaca 1020
acgtattcat agacaacctt gatgagcgac taccccgcat cgcattcttt gccacaagaa 1080
ccatctgggc gggcgaggag ctcacctttg attacaacat gcaagtggac cccgtggaca 1140
tggagagtac ccgaatggac tccaactttg gcctggcagg gctccccggc tcccccaaga 1200
aacgggtccg tattgaatgc aaatgtggga caacagcttg ccgaaaatac ctcttctagc 1260
cctgagaagt ctgaggccag actaactgaa ggggcctgaa gccaccttcc tcttctctac 1320
tgctaccctc ttgtcaagaa tgaccatcaa tcagagcctt gtctgcctcc acttgtcctc 1380
acctgcccca acctgctcca gggtcagggc tgttgtgagg actaactccc ggtacccttt 1440
ccctgttcct ttcccctatc caggcccatc aggcattgca cttaaaactc ccagccccat 1500
tttcagaagc atatttttca catcaggatt ccctagattt ggaattcatg tcaatggagg 1560
tccaaagact gaaaagactg agcaactcag ccccaaagca gatttttttc tctgcagctc 1620
tatgtagtta gttcaggctg gcgttggacc tttaatcctc ctgtctcagc tttcctcatg 1680
atgaaattat aggtgtaaac ccagctaatt gtatctgcta attttctaat tgtatctgct 1740
tcagctctga gcccgagtga cctgttgcag gcctcttcac tgctctatga ggaagcaacc 1800
cctaggcaga cagacatcag agctgagata ccagcccaac atcaaactgg atcagcaacc 1860
acggggcctt tgtactcatg aaagaaaagg caatctccag aaaggctgat tctgctcatt 1920
gtgcttttaa tgctggctaa tactaacctt aagacgcata gggttgcaaa gagagttgca 1980
ggtctgaaaa gtagttgccc aaatcccatc agaatgggaa tgaagtaaat acctctttga 2040
aagcccctca gaagggttag aactaagttt taccatcagg aagtagagtg ctgggcttac 2100
tggaaaccca gccatggcat ttgatggcca ctagaattag aagctggaac caagatctag 2160
gtattctgta gaaagcactt aaaaagacaa taacgtgcat cgattagaag gtgatgtgat 2220
gccaggcact tggtagagca cctggtccat atggattgtc tcagggaagc cttgaaaacc 2280
acagaggtgg agcccaggaa aaagcccatg tgacagaagg caatgtctag gcctaaaata 2340
cttgtcagct ccaagtattc acctgggtcc acttgtctca aagttaactg cctagagttg 2400
tacaaaaggc aaagattctg atggctgcct tgtcccctgc ttccccacct ccaggaagct 2460
tttcctgagt tcctataccc agagtacccc tttgtgaaac tctgtaccct gctaccagat 2520
gccaggtctg tgtgtgtatt ttgtatatat gtgtcctgcc cacactcccc aggctgacct 2580
tcaggcatgg actgaatctg gttttctgtg taccctcctc agccctctct agcctggagt 2640
gcacaccaat aaactttgtt gttgaattaa taagctggag aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2700
aaaaaaaaaa a 2711
<210> 14
<211> 4132
<212> DNA
<213> Rattus sp.
<400> 14
tgaatgaaag ctccgcaaga tggcggcggc cagggccaag gcacggagcg gtgaggccag 60
agcgcggtgt caccgggctc caggtccgcc ccagaggccc aaacccaggc gaacgacgag 120
acgctgccgc gcggacaccg tgacggcgcg acgctcgcgg tcgtctgcgg gcgggagacg 180
cgccggctcc aaccgagcga ggtccagagc tccgcgggcc gcggtctttg gcggcgagtg 240
tgcacgaggt gcctcattca aggcctggtg tgtgccttgc ctagtttcac ttgatactct 300
ccaggaatta tgtagaaaag aaaagctcac atgtaaatcg attggaatca ccaaaaggaa 360
tctaaacaat tatgaggtgg agtacttgtg tgactacaag gtagtaaagg gtgtggaata 420
ttatcttgta aagtggaaag gatggccaga ctctacaaac acctgggagc ccttgtggaa 480
cctcaggtgc ccacagctcc tgcagcagtt ctctgacgac aagaatactt acttatccca 540
gggaaggaaa cgcaaggcca tcacttcaaa agacaataac aaatccttgc aacctgcagt 600
tgctgagtat attgtacaga aagctaggca aagaatagct ctgcagagat ggcaagatta 660
cctcaacaga agaaagaacc acaaagggat gatatttgtt gaaaatactg ttgacttaga 720
gggcccacct tcagacttct actacatcaa tgaatacagg ccagctcctg ggatcacctt 780
aaacagtgaa gctacctttg ggtgttcgtg tacaaactgc ttctttgaaa agtgttgtcc 840
tgctgaagct ggagttgttt tggcttataa taagaaccga caaattaaaa tccaaccagg 900
cactcccatc tatgaatgca actcaaggtg ccgatgtgga cctgattgtc ccaataggat 960
tgtacagaaa ggcacacagt attccctgtg catctttaga actagcaatg gctgtggctg 1020
gggtgtaaaa acccttgtga agattaaaag gatgagtttt gtcatggaat atgttggaga 1080
ggtgatcacc agtgaagagg ctgagagacg gggacagctc tatgacaaca aagggatcac 1140
ctaccttttt gatctggact atgagtctga tgagttcaca gtggatgcag ctcgatatgg 1200
aaatgtgtct cattttgtga atcatagttg tgacccaaat cttcaggtgt ttagtgtttt 1260
catcgataac cttgatactc ggcttcccag gatagcattg ttctccacaa gaaccataaa 1320
ggctggagaa gagctgactt ttgactatca aatgaaaggt tctggagaac tgtcttcaga 1380
ctctattgac tacagccctg ccagaaaaag ggtcagaacc caatgcaaat gtggagctga 1440
gacgtgcaga ggttacctca actgaaattt caggaagtgg agctcacgtt gtttgttttt 1500
ttgttttgtt tgtcttctaa caactgaaaa aagtatttgg gactcctttc tattacctat 1560
gtattgtatt atatgatgtt aatgtacaat tcatggctca agatatatgc caagtatatt 1620
actattgatt ctaaaaagga ctgcaaggcc atgtaaacaa gatggtggtt acatgggaag 1680
tgaactgtat aaatcacttg cttactcgag agtcgaagta gacagtcgtc cctttagttt 1740
tggaagtgag tcgaccacag ctattattga gccttttatc ctgcctcaaa cagagaactc 1800
actttaggca aatgtataaa ttttattttt ttactatatt gtttctgttt aatactcact 1860
gatcttgtat cagagacaaa taagtgacac tgaatttttt tactgtattt tctactttta 1920
cattaaaaca ttggcatctt aatgatatat ttcaggtgta aaaaatgtga aagatttact 1980
tttagcttga tcttactttg aggcaataga taccattaca aaggtatcta aacctgaaat 2040
tcttaaaaga tgtttttact cccacagaag aaaagtctct gatcaccttc tcggaattct 2100
gtagtgctgg ccactgtgtt tctgtgaaca gacagacaga cagaacagtg actgaggacg 2160
cactggagtg tcaggcagga aaggagtaca gcgtaagcca ctcagcatgt gtgagcacga 2220
cagcaccgtg tctctctctc tctccggaac aggagagtga gatccctgag gggcacaggt 2280
ccccaatggc agtgtaattc acatcacata ctgtcatctc aaggcagttt taattcctac 2340
ccactaaatt tcaatacttt tgtattttgt gcatgccctt gaaaagcaag ctctatttgc 2400
cctgatgctt gttttataca agagttttta gataggatga aacttagctt ggccaaaagt 2460
cggcctgatt gaacttttat cacctctggg gttagatggg gcttcccctg tgtagtaaaa 2520
cccaataaag aaaaaaactt tcatttttct gggtctggga gttctaatcg tggtgtccaa 2580
tgtgaagaca gaaacaaaat gcagcaaata aacaaagctt ttggtatcct aagagtttcc 2640
taagctcact gctccaggct tgaataactg taataagctt aagtaaaatg aactgaattc 2700
aagaactcag tacttccttt aactttctaa ctcttaacct gttttgagag aagctacaat 2760
gttattcaga atattgcctt cgggggctac ttgttcacag tcatgcctgc tacccaaaac 2820
tttcagaatg tgtcaagaaa aaatataatt ttaaatggta tttcttttgt ttttctttga 2880
gaatcttaaa agcatcacag gtctgttttt ctcacacata cctccacccc cactgcaacc 2940
ctccatgacc aagctcactt tgaattattc tcaggttaaa aaattaaaaa aaaaatgttt 3000
gtctagatat ttggtcttat ttactgttta ggttaaaagg aaacttagga gggcaagaag 3060
aaaatgactt gtgtttagta aacgtgtggc tttgttttgt cttactaata gaaatttaat 3120
ggccctaagg ttctgtggga gtgggtgggc cttcagacag tatcttgtag ctcaggttgg 3180
ccttgaattt gctgtgtacc tgagtgcttt cttgaactct tcagtcctcc tgcctctccc 3240
tcccagtgct ggggttgtgg gcctgtgcca ccatgccctt tgacctttaa acgcacacca 3300
atttcactcg tgttccacac atggactgca ttactctctc tcagcattcc cccattactg 3360
tcctccagtt cctcttctgc tttcacctca tgagagctgt ccatacagcg gtgtgtgtat 3420
ttccttgttg ctgtgatcaa agcgatcaat tcagctctgc cttgattcct caaatcacat 3480
gttctaagta tgtcgtgtct tcatgacata ctcagctctg ggaggtgatc atgacaggaa 3540
ctttccagca gaggctagaa ctgtggagca cagctcactg gctggctccc tggctcccag 3600
gctcccctca gctaggcgtt cctacacagc ccacccgccc aggaatggtg taatggtacc 3660
taataagcga gaccctgcca catcagttag ccatcaagaa aatccgggcc aatgggacag 3720
agacagttcc tcagaggagg ttgtttcccc aggtaacccc agactgtcaa gtataaggta 3780
catgcaacca ttttgcattt gactgacatc tcttaaaggc tggcccgccc ttaggattct 3840
gggatgtatt gtgacattcc tagacgtttt taacctttgc taatctgtaa ctcttgaatg 3900
aagtagccac tatagttagt cctgcctgtt ttcctgctgt ctgtatggag cttccctcac 3960
acagcctaga taactctgaa gccctgctgc ttgcacctgg atgctggctg tgagcttact 4020
agctgtgtga actaacctgt gtgccttcct gcctacctca aagtgcgctt tcacagacta 4080
aagctttatg aagtgtgtgt gtgtttttaa atcacagaat aaacacatat gt 4132
<210> 15
<211> 2888
<212> DNA
<213> Bos taurus
<400> 15
ggaatgtcgt tagccgtggg gaaagatggc ggaaagttta aaaggctgca gtgtgtgttg 60
caaatcttct tggaatcagc tacaggacct gtgccgcctg gccaagctct cctgccctgc 120
ccttggcatc tccaagagga acctctatga ctttgaagtc gagtacctgt gcgattacaa 180
aaagatccgc gaacaggagt attacctggt aaaatggcgt gggtacccag actccgagag 240
cacttgggaa ccacggcaga atctcaagtg tgtgcgcatt ctcaagcagt tccacaagga 300
cttggaaagg gagctgctcc ggcggcacca ccggtcaaag ccaccccggc acctggaccc 360
aagcctggcc aactacctgg tgcagaaggc caagcagagg cgggcactcc ggcgctggga 420
gcaggagctc aatgccaagc gcagccacct gggacgcatc accgtggaga acgaagtgga 480
cctggatggc cccccacggg ccttcgtgta catcaacgag taccgtgttg gtgagggcat 540
caccctcaac caggtggctg tgggctgcga gtgccaggac tgtctgtggg caccggccgg 600
aggctgctgc cctggggcgt cactgcacaa gtttgcctac aatgaccagg gccaggtgcg 660
cctgcgagcc gggctgccca tctatgagtg caactcccgc tgccgctgtg gctatgactg 720
ccccaaccgc gtggtacaga agggcatccg ctacgacctc tgcatcttcc gcacggatga 780
tggacgcggc tggggtgtcc gcacgctgga gaagatccgc aagaacagtt tcgtcatgga 840
gtacgtgggc gagatcatta cctcagagga ggcagagcgg cggggccaga tctatgaccg 900
ccagggtgcc acctacctct tcgacctgga ctacgtggag gatgtgtaca ctgtggacgc 960
cgcctattac ggcaacatct ctcactttgt caaccacagt tgtgacccca acctccaggt 1020
gtacaacgtc ttcatagaca accttgatga gcggctgccc cgcattgctt tctttgccac 1080
cagaaccatc cgggcaggcg aggagctcac ctttgattac aacatgcaag tggacccggt 1140
ggacatggag agcacacgca tggactccaa ctttggcctg gctgggctcc ccggctctcc 1200
caagaagcgg gtccgcattg aatgcaagtg tgggactgaa tcctgccgca aatacctctt 1260
ctagccccgt gaagtctgag gccagactga ccaagggagg ctaaaaagct gcccacccca 1320
cctacccact gctgccctcc tgttgaagaa caactgccag ggcctcctgc ctgcctccgc 1380
ctgccccctg ctcagggctg catggccatg gggaagatgg actccaggag tcccctctcc 1440
ctgtcccagc cccatccatg ggttgcactt acaaacccct gcccaccttc agaagtgatt 1500
tttcaacacc aggactttct gcagttggga ttcatggcct agcaaggcgg tctgagggct 1560
gagcctcagc ccatacccaa agtagaaacg tttgtttttg cacctgcttc tggccagagc 1620
ttgaagggtc tgctgcaggc cctctccctg ctgccccaag ggtgtgagga agcattccca 1680
ggacaggctg accccagagc ccaggattcc cagtccattc acctcccctg ccacagaaat 1740
gtgctagtga agtggggggg ggggcggtct tcaagggctg caggctgtgg ctgggtcctg 1800
ctcatgcttg catgctggct ggtgttggcc tgacagctgt agggtctcct tttcaaagct 1860
gtgcctctga gaagcagaca cccacatgcc actagaggag agtggatgcc cacagcctgt 1920
tggccagtga gaggcagccc agactttgcc tgtccttaag gtgggcaacc cactccagta 1980
ttcttgcctg aaaaatccca tggacagagg aacctggtag gctacagtcc atggggtcac 2040
aaagagttgg acatgactaa gcgacttcac ttcactaagg tgggctggga ctcagctctg 2100
cctttgcaac agctagaagg tgcccagggc tcttgagctc aaaggatgct gggagccctt 2160
aacctgcagc gtgaggactg ctgatagcac ccagagctgg gcccaagacc tagctaggct 2220
gtagacagca cttagacaaa atgtgcatgg atgggatact gaggaggtgc caggcactgg 2280
gctgagcacc tggtccacgt ggatcgtctc agggaagcct tgaaaactat ggaggtggat 2340
cccaggaaag ggcccgtgtg gcagaaggca aagcacagac caagaatggg gtggggctgg 2400
cttacccacc agggtgtggc gaggtgaggg gaagcccctg tcgcctccta gccctccagc 2460
cctttgcact caccttgggt cctctggtct cagttccctg cccacaaatg tataaaaggt 2520
gaaggcgctg atggctgcct catcccttgc ttcccctgtg aggtcttctc taggaagcct 2580
tccatccctg actacctgtg cgcagtgtcc ccacgtgaga ctgtgtgccc tgccagcaga 2640
tgccagatct gtgtgtctgt ttttgtgtgt ctgtgctccc cacccccaga ctgaccttca 2700
ggcttgtact gaatctgatt ctcctcttgt atatcccctt ggccctccca gtctgggaat 2760
gggcgtcaat aaaacaggtt attgactgaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 2820
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa agaaaaaaaa 2880
aaaaaaaa 2888
<210> 16
<211> 1863
<212> DNA
<213> Bos taurus
<400> 16
gagtttgaat gaaagctcct caagatggcg gcggccgggg ccgaggcgcc aggagcttgg 60
tgtgtgcctt gcctagtttc acttgatact cttcaggaat tatgtagaaa agaaaagctc 120
acatgtaaat cgattggaat caccaaaagg aatctaaaca attatgaggt ggaatacttg 180
tgtgactaca aggtagtaaa ggatatggaa tattatcttg taaaatggaa aggatggcca 240
gattctacaa atacttggga acctttgcaa aatctcaagt gcccattact acttcagcag 300
ttctttaatg acaagcataa ttatttatct caggtaaaga aaggcaaagc aataactcta 360
aaagaaaatc acagagcctt gaaacctgct gttgctgaat acattgtaaa gaaggctaaa 420
caaaggatag ccctgcagag atggcaggat gaactcaaca gaaggaagac tcacaaagga 480
atgatttttg ttgaaaatac tgtggactta gaggggcccc cttcagactt ctactacatt 540
aatgaataca aaccagctcc tggaatcagc ttagtaaatg aagctacctt tggttgttca 600
tgcacagatt gcttctttga aaaatgttgt cctgctgaag ctggagttct tttggcttat 660
aataaaaatc aacaaattaa aatcccacct ggtaccccca tttatgagtg caactcaaga 720
tgtcaatgtg gacccgactg tcccaacagg atcgtacaaa aaggcacaca gtattcactt 780
tgcatctttc gaactagcaa tggctgtggc tggggtgtaa aaacccttgt gaagattaaa 840
agaatgagtt ttgtcatgga atatgttgga gaggtgatca ccagtgagga agctgagaga 900
cgtggccagt tatatgacaa caaaggaatc acgtatctct ttgatctgga ctatgaatct 960
gatgaattca cagtggatgc agctcgatat ggaaatgtgt ctcattttgt gaatcacagt 1020
tgtgacccaa accttcaggt gttcaatgtt ttcattgata acctcgatac ccgtcttccc 1080
cgaatagcat tattttccac gagaactatc aatgctggag aagagctcac ttttgattat 1140
caaatgaaag gttctggaga tgtatcttca gattctattg accacagccc agccaaaaag 1200
agggccagaa ctgtgtgcaa atgtggagct gtgacttgca gaggttacct caactgaatt 1260
ttcaggaaat agaacttatg acgattatag tgttttttct aatgttaaca ttttaaaagt 1320
attttggact cttttcatat tatcaagatt atacactacg ttgatttaca atttaccttt 1380
cagactattg accaaatgcg ttactgatcc ttttgaagag aggaacgtgg gggtcacata 1440
gactaattct acatatacat attcagtggt tagataccaa acatgaaagg aaaactgttt 1500
gcaaatcaac aactatatac ttaacaggaa gtctatgtga atatagagaa atgcctcctt 1560
cagtgtttaa gtgttaaact gatgatgtaa cagttgctaa gattgaacat tcaatttgcc 1620
atataccttg aatttagaat tggacaaata cacaagttct atttttgtta ttgtcattcc 1680
tgtttaccta cttaacaact ctttgtactt gtatttgaga caaataggtg atactgaatt 1740
atactctatt ttctactttc attaaaacat tggtatctta aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1800
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaagaaa aaaaaaaaaa 1860
aaa 1863
<210> 17
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 17
gaaacgaguc cguauugaat t 21
<210> 18
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 18
uucaauacgg acucguuuct t 21
<210> 19
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 19
gcucacaugu aaaucgauut t 21
<210> 20
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 20
aaucgauuua caugugagct t 21
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 21
gguguacaac guauucauat t 21
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 22
uaugaauacg uuguacacct g 21
<210> 23
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 23
gguccuuugu cuauaucaat t 21
<210> 24
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 24
uugauauaga caaaggacct t 21
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 25
gcucacaugu aaaucgauut t 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 26
aaucgauuua caugugagct t 21
<210> 27
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 27
gugucgaugu ggaccugaat t 21
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 28
uucaggucca caucgacacc t 21
<210> 29
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 29
ggacuacagu aucaugacat t 21
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 30
ugucaugaua cuguaguccc a 21
<210> 31
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 31
ggacgaugca ggagauagat t 21
<210> 32
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 32
ucuaucuccu gcaucguccg a 21
<210> 33
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 33
ggaugggugu cgggauaaat t 21
<210> 34
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 34
uuuaucccga cacccaucct t 21
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 35
gcaccuuugu cugcgaauat t 21
<210> 36
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 36
uauucgcaga caaaggugcc c 21
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 37
gaucaaaccu gcucggaaat t 21
<210> 38
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 38
uuuccgagca gguuugaucc a 21
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 39
gaauuugccu ucuuaugcat t 21
<210> 40
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 40
ugcauaagaa ggcaaauuct t 21
<210> 41
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 41
gaggaauucu agucccguat t 21
<210> 42
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<223> Description of Combined DNA/RNA Molecule: Synthetic
oligonucleotide
<400> 42
uacgggacua gaauuccuca a 21
<210> 43
<211> 2752
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 43
cgctcttctc gcgaggccgg ctaggcccga atgtcgttag ccgtggggaa agatggcgga 60
aaatttaaaa ggctgcagcg tgtgttgcaa gtcttcttgg aatcagctgc aggacctgtg 120
ccgcctggcc aagctctcct gccctgccct cggtatctct aagaggaacc tctatgactt 180
tgaagtcgag tacctgtgcg attacaagaa gatccgcgaa caggaatatt acctggtgaa 240
atggcgtgga tatccagact cagagagcac ctgggagcca cggcagaatc tcaagtgtgt 300
gcgtatcctc aagcagttcc acaaggactt agaaagggag ctgctccggc ggcaccaccg 360
gtcaaagacc ccccggcacc tggacccaag cttggccaac tacctggtgc agaaggccaa 420
gcagaggcgg gcgctccgtc gctgggagca ggagctcaat gccaagcgca gccatctggg 480
acgcatcact gtagagaatg aggtggacct ggacggccct ccgcgggcct tcgtgtacat 540
caatgagtac cgtgttggtg agggcatcac cctcaaccag gtggctgtgg gctgcgagtg 600
ccaggactgt ctgtgggcac ccactggagg ctgctgcccg ggggcgtcac tgcacaagtt 660
tgcctacaat gaccagggcc aggtgcggct tcgagccggg ctgcccatct acgagtgcaa 720
ctcccgctgc cgctgcggct atgactgccc aaatcgtgtg gtacagaagg gtatccgata 780
tgacctctgc atcttccgca cggatgatgg gcgtggctgg ggcgtccgca ccctggagaa 840
gattcgcaag aacagcttcg tcatggagta cgtgggagag atcattacct cagaggaggc 900
agagcggcgg ggccagatct acgaccgtca gggcgccacc tacctctttg acctggacta 960
cgtggaggac gtgtacaccg tggatgccgc ctactatggc aacatctccc actttgtcaa 1020
ccacagttgt gaccccaacc tgcaggtgta caacgtcttc atagacaacc ttgacgagcg 1080
gctgccccgc atcgctttct ttgccacaag aaccatccgg gcaggcgagg agctcacctt 1140
tgattacaac atgcaagtgg accccgtgga catggagagc acccgcatgg actccaactt 1200
tggcctggct gggctccctg gctcccctaa gaagcgggtc cgtattgaat gcaagtgtgg 1260
gactgagtcc tgccgcaaat acctcttcta gcccttagaa gtctgaggcc agactgactg 1320
agggggcctg aagctacatg cacctccccc actgctgccc tcctgtcgag aatgactgcc 1380
agggcctcgc ctgcctccac ctgcccccac ctgctcctac ctgctctacg ttcagggctg 1440
tggccgtggt gaggaccgac tccaggagtc ccctttccct gtcccagccc catctgtggg 1500
ttgcacttac aaacccccac ccaccttcag aaatagtttt tcaacatcaa gactctctgt 1560
cgttgggatt catggcctat taaggaggtc caaggggtga gtcccaaccc agccccagaa 1620
tatatttgtt tttgcacctg cttctgcctg gagattgagg ggtctgctgc aggcctcctc 1680
cctgctgccc caaaggtatg gggaagcaac cccagagcag gcagacatca gaggccagag 1740
tgcctagccc gacatgaagc tggttcccca accacagaaa ctttgtacta gtgaaagaaa 1800
gggggtccct gggctacggg ctgaggctgg tttctgctcg tgcttacagt gctgggtagt 1860
gttggcccta agagctgtag ggtctcttct tcagggctgc atatctgaga agtggatgcc 1920
cacatgccac tggaagggaa gtgggtgtcc atgggccact gagcagtgag aggaaggcag 1980
tgcagagctg gccagccctg gaggtaggct gggaccaagc tctgccttca cagtgcagtg 2040
aaggtaccta gggctcttgg gagctctgcg gttgctaggg gccctgacct ggggtgtcat 2100
gaccgctgac accactcaga gctggaacca agatctagat agtccgtaga tagcacttag 2160
gacaagaatg tgcattgatg gggtggtgat gaggtgccag gcactgggta gagcacctgg 2220
tccacgtgga ttgtctcagg gaagccttga aaaccacgga ggtggatgcc aggaaagggc 2280
ccatgtggca gaaggcaaag tacaggccaa gaattggggg tgggggagat ggcttcccca 2340
ctatgggatg acgaggcgag agggaagccc ttgctgcctg ccattcccag accccagccc 2400
tttgtgctca ccctggttcc actggtctca aaagtcacct gcctacaaat gtacaaaagg 2460
cgaaggttct gatggctgcc ttgctccttg ctcccccacc ccctgtgagg acttctctag 2520
gaagtccttc ctgactacct gtgcccagag tgcccctaca tgagactgta tgccctgcta 2580
tcagatgcca gatctatgtg tctgtctgtg tgtccatccc gccggccccc cagactaacc 2640
tccaggcatg gactgaatct ggttctcctc ttgtacaccc ctcaacccta tgcagcctgg 2700
agtgggcatc aataaaatga actgtcgact gaacaaaaaa aaaaaaaaaa aa 2752
<210> 44
<211> 3093
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 44
cggggccgag gcgcgaggag gtgaggctgg agcgcggccc cctcgccttc cctgttccca 60
ggcaagctcc caaggcccgg gcggcggggc cgtcccgcgg gccagccaga tggcgacgtg 120
gcggttcccc gcccgccgcg accccaactc cgggacgcac gctgcggacg cctatcctcc 180
cccaggccgc tgacccgcct ccctgcccgg ccggctcccg ccgcggagga tatggaatat 240
tatcttgtaa aatggaaagg atggccagat tctacaaata cttgggaacc tttgcaaaat 300
ctgaagtgcc cgttactgct tcagcaattc tctaatgaca agcataatta tttatctcag 360
gtaaagaaag gcaaagcaat aactccaaaa gacaataaca aaactttgaa acctgccatt 420
gctgagtaca ttgtgaagaa ggctaaacaa aggatagctc tgcagagatg gcaagatgaa 480
ctcaacagaa gaaagaatca taaaggaatg atatttgttg aaaatactgt tgatttagag 540
ggcccacctt cagacttcta ttacattaac gaatacaaac cagctcctgg aatcagctta 600
gtcaatgaag ctacctttgg ttgttcatgc acagattgct tctttcaaaa atgttgtcct 660
gctgaagctg gagttctttt ggcttataat aaaaaccaac aaattaaaat cccacctggt 720
actcccatct atgaatgcaa ctcaaggtgt cagtgtggtc ctgattgtcc caataggatt 780
gtacaaaaag gcacacagta ttcgctttgc atctttcgaa ctagcaatgg acgtggctgg 840
ggtgtaaaga cccttgtgaa gattaaaaga atgagttttg tcatggaata tgttggagag 900
gtaatcacaa gtgaagaagc tgaaagacga ggacagttct atgacaacaa gggaatcacg 960
tatctctttg atctggacta tgagtctgat gaattcacag tggatgcggc tcgatacggc 1020
aatgtgtctc attttgtgaa tcacagctgt gacccaaatc ttcaggtgtt caatgttttc 1080
attgataacc tcgatactcg tcttccccga atagcattgt tttccacaag aaccataaat 1140
gctggagaag agctgacttt tgattatcaa atgaaaggtt ctggagatat atcttcagat 1200
tctattgacc acagcccagc caaaaagagg gtcagaacag tatgtaaatg tggagctgtg 1260
acttgcagag gttacctcaa ctgaactttt tcaggaaata gagctgatga ttataatatt 1320
tttttcctaa tgttaacatt tttaaaaata catatttggg actcttatta tcaaggttct 1380
acctatgtta atttacaatt catgtttcaa gacatttgcc aaatgtatta ccgatgcctc 1440
tgaaaagggg gtcactgggt ctcatagact gatatgaagt cgacatattt atagtgctta 1500
gagaccaaac taatggaagg cagactattt acagcttagt atatgtgtac ttaagtctat 1560
gtgaacagag aaatgcctcc cgtagtgttt gaaagcgtta agctgataat gtaattaaca 1620
actgctgaga gatcaaagat tcaacttgcc atacacctca aattcggaga aacagttaat 1680
ttgggcaaat ctacagttct gtttttgcta ctctattgtc attcctgttt aatactcact 1740
gtacttgtat ttgagacaaa taggtgatac tgaattttat actgttttct acttttccat 1800
taaaacattg gcacctcaat gataaagaaa tttaaggtat aaaattaaat gtaaaaatta 1860
atttcagctt catttcgtat ttcgaagcaa tctagactgt tgtgatgagt gtatgtctga 1920
acctgtaatt cttaaaagac ttcttaatct tctagaagaa aaatctccga agagctctct 1980
ctagaagtcc aaaatggcta gccattatgc ttctttgaaa ggacatgata atgggaccag 2040
gatggttttt tggagtacca agcaagggga atggagcact ttaagggcgc ctgttagtaa 2100
catgaattgg aaatctgtgt cgagtacctc tgatctaaac ggtaaaacaa gctgcctgga 2160
gagcagctgt acctaacaat actgtaatgt acattaacat tacagcctct caatttcagg 2220
caggtgtaac agttcctttc caccagattt aatattttta tacttcctgc aggttcttct 2280
taaaaagtaa tctatatttt tgaactgata cttgttttat acataaattt tttttagatg 2340
tgataaagct aaacttggcc aaagtgtgtg cctgaattat tagacctttt tattagtcaa 2400
cctacgaaga ctaaaataga atatattagt tttcaaggga gtgggaggct tccaacatag 2460
tattgaatct caggaaaaac tattctttca tgtctgattc tgagatttct aattgtgttg 2520
tgaaaatgat aaatgcagca aatctagctt tcagtattcc taatttttac ctaagctcat 2580
tgctccaggc tttgattacc taaaataagc ttggataaaa ttgaaccaac ttcaagaatg 2640
cagcacttct taatctttag ctctttcttg ggagaagcta gactttattc attatattgc 2700
tatgacaact tcactctttc ataatatata ggataaattg tttacatgat tggaccctca 2760
gattctgtta accaaaattg cagaatgggg ggccaggcct gtgtggtggc tcacacctgt 2820
gatcccagca ctttgggagg ctgaggtagg aggatcacgt gaggtcggga gttcaagacc 2880
agcctggcca tcatggtgaa accctgtctc tactgaaaat acaaaaatta gccgggcgtg 2940
gtggcacacg cctgtagtcc cagctactca ggaggctgag gcaggagaat cacttgaatt 3000
caggaggcgg aggttgcagt gagccaagat cataccactg cactgcagcc tgagtgacac 3060
agtaagactg tctccaaaaa aaaaaaaaaa aaa 3093
<210> 45
<211> 4449
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 45
ggcactaaag gtttgcttcc gggcgtttct tttgcttccc cttccctctt tcacgcttcc 60
tcccctcccc ctcctccctt atcccttcgc tttcgctctt ttccgtcgag gccgacccct 120
gagttgtgag tctggggtct ggttggtgaa aaagagccct tgaagctgga agacgggaga 180
ggacaaaagc atgtcttccc ttcctgggtg cattggtttg gatgcagcaa cagctacagt 240
ggagtctgaa gagattgcag agctgcaaca ggcagtggtt gaggaactgg gtatctctat 300
ggaggaactt cggcatttca tcgatgagga actggagaag atggattgtg tacagcaacg 360
caagaagcag ctagcagagt tagagacatg ggtaatacag aaagaatctg aggtggctca 420
cgttgaccaa ctctttgatg atgcatccag ggcagtgact aattgtgagt ctttggtgaa 480
ggacttctac tccaagctgg gactacaata ccgggacagt agctctgagg acgaatcttc 540
ccggcctaca gaaataattg agattcctga tgaagatgat gatgtcctca gtattgattc 600
aggtgatgct gggagcagaa ctccaaaaga ccagaagctc cgtgaagcta tggctgcctt 660
aagaaagtca gctcaagatg ttcagaagtt catggatgct gtcaacaaga agagcagttc 720
ccaggatctg cataaaggaa ccttgagtca gatgtctgga gaactaagca aagatggtga 780
cctgatagtc agcatgcgaa ttctgggcaa gaagagaact aagacttggc acaaaggcac 840
ccttattgcc atccagacag ttgggccagg gaagaaatac aaggtgaaat ttgacaacaa 900
aggaaagagt ctactgtcgg ggaaccatat tgcctatgat taccaccctc ctgctgacaa 960
gctgtatgtg ggcagtcggg tggtcgccaa atacaaagat gggaatcagg tctggctcta 1020
tgctggcatt gtagctgaga caccaaacgt caaaaacaag ctcaggtttc tcattttctt 1080
tgatgatggc tatgcttcct atgtcacaca gtcggaactg tatcccattt gccggccact 1140
gaaaaagact tgggaggaca tagaagacat ctcctgccgt gacttcatag aggagtatgt 1200
cactgcctac cccaaccgcc ccatggtact gctcaagagt ggccagctta tcaagactga 1260
gtgggaaggc acgtggtgga agtcccgagt tgaggaggtg gatggcagcc tagtcaggat 1320
cctcttcctg gatgacaaaa gatgtgagtg gatctatcga ggctctacac ggctggagcc 1380
catgttcagc atgaaaacat cctcagcctc tgcactggag aagaagcaag gacagctcag 1440
gacacgtcca aatatgggtg ctgtgaggag caaaggccct gttgtccagt acacacagga 1500
tctgaccggt actggaaccc agttcaagcc agtggaaccc ccacagccta cagctccacc 1560
tgccccacct ttcccacctg ctccacctct atccccccaa gcaggtgaca gtgacttgga 1620
aagccagctt gcccagtcac ggaagcaggt agccaaaaag agcacgtcct ttcgaccagg 1680
atctgtgggc tctggtcatt cctcccctac atctcctgca ctcagtgaaa atgtctctgg 1740
tgggaaacct gggatcaacc agacatatag atcaccttta ggctccacag cctctgcccc 1800
agcaccctca gcactcccgg cccctccagc acccccagtc ttccatggca tgctggagcg 1860
ggccccagca gagccctcct accgtgctcc catggagaag cttttctact tacctcatgt 1920
ctgcagctat acctgtctgt ctcgagtcag acctatgagg aatgagcagt accggggcaa 1980
gaaccctctg ctggtcccgt tactatatga cttccggcgg atgacagccc ggcgtcgagt 2040
taaccgcaag atgggctttc atgttatcta taagacacct tgtggtctct gccttcggac 2100
aatgcaggag atagaacgct accttttcga gactggctgt gacttcctct tcctggagat 2160
gttctgtttg gatccatatg ttcttgtgga ccgaaagttt cagccctata agccttttta 2220
ctatattttg gacatcactt atgggaagga agatgttccc ctatcctgtg tcaatgagat 2280
tgacacaacc cctccacccc aggtggccta cagcaaggaa cgtatcccgg gcaagggtgt 2340
tttcattaac acaggccctg aatttctggt tggctgtgac tgcaaggatg ggtgtcggga 2400
caagtccaag tgtgcctgcc atcaactaac tatccaggct acagcctgta ccccaggagg 2460
ccaaatcaac cctaactctg gctaccagta caagagacta gaagagtgtc tacccacagg 2520
ggtatatgag tgtaacaaac gctgcaaatg tgacccaaac atgtgcacaa accggttggt 2580
gcaacatgga ctacaagttc ggctacagct attcaagaca cagaacaagg gctggggtat 2640
ccgctgcttg gatgacattg ccaaaggctc ttttgtttgt atttatgcag gcaaaatcct 2700
gacagatgac tttgcagaca aggagggtct ggaaatgggt gatgagtact ttgcaaatct 2760
ggaccatatc gagagcgtgg agaacttcaa agaaggatat gagagtgatg ccccctgttc 2820
ctctgacagc agtggtgtag acttgaagga ccaggaagat ggcaacagcg gtacagagga 2880
ccctgaagag tccaatgatg atagctcaga tgataacttc tgtaaggatg aggacttcag 2940
caccagttca gtgtggcgga gctatgctac ccggaggcag acccggggcc agaaagagaa 3000
cggactctct gagacaactt ccaaggactc ccacccccca gatcttggac ccccacatat 3060
tcctgttcct ccctcaatcc ctgtaggtgg ctgcaatcca ccttcctccg aagagacacc 3120
caagaacaag gtggcctcat ggttgagctg caatagtgtc agtgaaggtg gttttgctga 3180
ctctgatagc cattcatcct tcaagactaa tgaaggtggg gagggccggg ctgggggaag 3240
ccgaatggag gctgagaagg cctccacctc aggactaggc atcaaggatg agggagacat 3300
caaacaggcc aagaaagagg acactgacga ccgaaacaag atgtcagtag ttactgaaag 3360
ctctcgaaat tacggttaca atccttctcc tgtgaagcct gaaggacttc gccgcccacc 3420
tagtaagact agtatgcatc aaagccgaag actcatggct tctgctcagt ccaaccctga 3480
tgatgtcctg acactgtcca gcagcacaga aagtgagggg gaaagtggga ccagccgaaa 3540
gcccactgct ggtcagactt cggctacagc ggttgacagt gatgatatcc agaccatatc 3600
ctctggctct gaaggggatg actttgagga caagaagaac atgactggtc caatgaagcg 3660
tcaagtggca gtaaaatcaa cccgaggctt tgctcttaaa tcaacccatg ggattgcaat 3720
taaatcaacc aacatggcct ctgtggacaa gggggagagc gcacctgttc gtaagaacac 3780
acgccaattc tatgatggcg aggagtcttg ctacatcatt gatgccaagc ttgaaggcaa 3840
cctgggccgc tacctcaacc acagttgcag ccccaacctg tttgtccaga atgtcttcgt 3900
ggatacccat gatcttcgct tcccctgggt ggccttcttt gccagcaaaa gaatccgggc 3960
tgggacagaa cttacttggg actacaacta cgaggtgggc agtgtggaag gcaaggagct 4020
actctgttgc tgtggggcca ttgaatgcag aggacgtctt ctttagagga cagccttctt 4080
cccaaccctt cttgaactgt cgtttcctca ggaactgggt cttcctgatt gttgaaccct 4140
gacccgaagt ctctgggcta gctactcccc ccagctccta gttgatagaa atgggggttc 4200
tggaccagat gatcccttcc aatgtggtgc tagcaggcag gatcccttct ccacctccaa 4260
aggccctaaa gggtggggag agatcaccac tctaacctcg gcctgacatc cctcccatcc 4320
catatttgtc caagtgttcc tgcttctaac agactttgtt cttagaatgg agcctgtgta 4380
tctactatct ccagtttgta ttatttcttg aaagtctttt aacaatatga taaaactaag 4440
attgtgaaa 4449
<210> 46
<211> 5123
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 46
gcgcgggagg ggcggggcca cgctgcgggc ccgggccatg gccgccgccg atgccgaggc 60
agttccggcg aggggggagc ctcagcagga ttgctgtgtg aaaaccgagc tgctgggaga 120
agagacacct atggctgccg atgaaggctc agcagagaaa caggcaggag aggcccacat 180
ggctgcggac ggtgagacca atgggtcttg tgaaaacagc gatgccagca gtcatgcaaa 240
tgctgcaaag cacactcagg acagcgcaag ggtcaacccc caggatggca ccaacacact 300
aactcggata gcggaaaatg gggtttcaga aagagactca gaagcggcga agcaaaacca 360
cgtcactgcc gacgactttg tgcagacttc tgtcatcggc agcaacggat acatcttaaa 420
taagccggcc ctacaggcac agcccttgag gactaccagc actctggcct cttcgctgcc 480
tggccatgct gcaaaaaccc ttcctggagg ggctggcaaa ggcaggactc caagcgcttt 540
tccccagacg ccagccgccc caccagccac ccttggggag gggagtgctg acacagagga 600
caggaagctc ccggcccctg gcgccgacgt caaggtccac agggcacgca agaccatgcc 660
gaagtccgtc gtgggcctgc atgcagccag taaagatccc agagaagttc gagaagctag 720
agatcataag gaaccaaaag aggagatcaa caaaaacatt tctgactttg gacgacagca 780
gcttttaccc cccttcccat cccttcatca gtcgctacct cagaaccagt gctacatggc 840
caccacaaaa tcacagacag cttgcttgcc ttttgtttta gcagctgcag tatctcggaa 900
gaaaaaacga agaatgggaa cctatagcct ggttcctaag aaaaagacca aagtattaaa 960
acagaggacg gtgattgaga tgtttaagag cataactcat tccactgtgg gttccaaggg 1020
ggagaaggac ctgggcgcca gcagcctgca cgtgaatggg gagagcctgg agatggactc 1080
ggatgaggac gactcagagg agctcgagga ggacgacggc catggtgcag agcaggcggc 1140
cgcgttcccc acagaggaca gcaggacttc caaggagagc atgtcggagg ctgatcgcgc 1200
ccagaagatg gacggggagt ccgaggagga gcaggagtcc gtggacaccg gggaggagga 1260
ggaaggcggt gacgagtctg acctgagttc ggaatccagc attaagaaga aatttctcaa 1320
gaggaaagga aagaccgaca gtccctggat caagccagcc aggaaaagga ggcggagaag 1380
tagaaagaag cccagcggtg ccctcggttc tgagtcgtat aagtcatctg caggaagcgc 1440
tgagcagacg gcaccaggag acagcacagg gtacatggaa gtttctctgg actccctgga 1500
tctccgagtc aaaggaattc tgtcttcaca agcagaaggg ttggccaacg gtccagatgt 1560
gctggagaca gacggcctcc aggaagtgcc tctctgcagc tgccggatgg aaacaccgaa 1620
gagtcgagag atcaccacac tggccaacaa ccagtgcatg gctacagaga gcgtggacca 1680
tgaattgggc cggtgcacaa acagcgtggt caagtatgag ctgatgcgcc cctccaacaa 1740
ggccccgctc ctcgtgctgt gtgaagacca ccggggccgc atggtgaagc accagtgctg 1800
tcctggctgt ggctacttct gcacagcggg taattttatg gagtgtcagc ccgagagcag 1860
catctctcac cgtttccaca aagactgtgc ctctcgagtc aataacgcca gctattgtcc 1920
ccactgtggg gaggagagct ccaaggccaa agaggtgacg atagctaaag cagacaccac 1980
ctcgaccgtg acaccagtcc ccgggcagga gaagggctcg gccctggagg gcagggccga 2040
caccacaacg ggcagtgctg ccgggccacc actctcggag gacgacaagc tgcagggtgc 2100
agcctcccac gtgcccgagg gctttgatcc aacgggacct gctgggcttg ggaggccaac 2160
tcccggcctt tcccagggac cagggaagga aaccttggag agcgctctca tcgccctcga 2220
ctcggaaaaa cccaagaagc ttcgcttcca cccaaagcag ctgtacttct ccgccaggca 2280
aggggagctt cagaaggtgc tcctcatgct ggtggacgga attgacccca acttcaaaat 2340
ggagcaccag aataagcgct ctccactgca cgccgcggca gaggctggac acgtggacat 2400
ctgccacatg ctggttcagg cgggcgctaa tattgacacc tgctcagaag accagaggac 2460
cccgttgatg gaagcagccg aaaacaacca tctggaagca gtgaagtacc tcatcaaggc 2520
tggggccctg gtggatccca aggacgcaga gggctctacg tgtttgcacc tggctgccaa 2580
gaaaggccac tacgaagtgg tccagtacct gctttcaaat ggacagatgg acgtcaactg 2640
tcaggatgac ggaggctgga cacccatgat ctgggccaca gagtacaagc acgtggacct 2700
cgtgaagctg ctgctgtcca agggctctga catcaacatc cgagacaacg aggagaacat 2760
ttgcctgcac tgggcggcgt tctccggctg cgtggacata gccgagatcc tgctggctgc 2820
caagtgcgac ctccacgccg tgaacatcca cggagactcg ccactgcaca ttgccgcccg 2880
ggagaaccgc tacgactgtg tcgtcctctt tctttctcgg gattcagatg tcaccttaaa 2940
gaacaaggaa ggagagacgc ccctgcagtg tgcgagcctc aactctcagg tgtggagcgc 3000
tctgcagatg agcaaggctc tgcaggactc ggcccccgac aggcccagcc ccgtggagag 3060
gatagtgagc agggacatcg ctcgaggcta cgagcgcatc cccatcccct gtgtcaacgc 3120
cgtggacagc gagccatgcc ccagcaacta caagtacgtc tctcagaact gcgtgacgtc 3180
ccccatgaac atcgacagaa atatcactca tctgcagtac tgcgtgtgca tcgacgactg 3240
ctcctccagc aactgcatgt gcggccagct cagcatgcgc tgctggtacg acaaggatgg 3300
ccggctcctg ccagagttca acatggcgga gcctcccttg atcttcgaat gcaaccacgc 3360
gtgctcctgc tggaggaact gccgaaatcg cgtcgtacag aatggtctca gggcaaggct 3420
gcagctctac cggacgcggg acatgggctg gggcgtgcgg tccctgcagg acatcccacc 3480
aggcaccttt gtctgcgagt atgttgggga gctgatttca gactcagaag ccgacgttcg 3540
agaggaagat tcttacctct ttgatctcga caataaggac ggggaggttt actgcatcga 3600
cgcgcggttc tacgggaacg tcagccggtt catcaaccac cactgcgagc ccaacctggt 3660
gcccgtgcgc gtgttcatgg cccaccagga cctgcggttc ccccggatcg ccttcttcag 3720
cacccgcctg atcgaggccg gcgagcagct cgggtttgac tatggagagc gcttctggga 3780
catcaaaggc aagctcttca gctgccgctg cggctccccc aagtgccggc actcgagcgc 3840
ggccctggcc cagcgtcagg ccagcgcggc ccaggaggcc caggaggacg gcttgcccga 3900
caccagctcc gcggctgccg ccgaccccct atgagacgcc gccggccagc ggggcgctcg 3960
ggagccaggg accgccgcgt cgccgattag aggacgagga ggagagattc cgcacgcaac 4020
cgaaagggtc cttcggggct gcgccgccgg cttcctggag gggtcggagg tgaggctgca 4080
gcccctgcgg gcgggtgtgg atgcctccca gccaccttcc cagacctgcg gcctcaccgc 4140
gggcccagtg cccaggctgg agcgcacact ttggtccgcg cgccagagac gctgggagtc 4200
cgcactggca tcaccttctg agtttctgat gctgatttgt cgttgcgaag tttctcgttt 4260
cttcctctga cctccgaggt ccccgctgca ccacggggtt gctctgttct cctgtccggc 4320
ccagactctt ctgtgtggcg ccgccgaagc caccgttagc gcgagctgct ccgttcgccc 4380
tgcccacggc ctgcgtggct ggggccgagt cccaggggcc gcacggaggg cacagtctcc 4440
tgtcaggctc ggagaggtca ggagaccgac cccaccacta actttggaga aaatgtgggt 4500
ttgcttttta aaggaatcct atatctagtc ctatatatca aacctctaac tgacgtttct 4560
tttcgaggaa gtggcttggt gggtgcagcc cccgccggtt ccgttgacgc tggcaccttc 4620
tgttgatttt ttaagccaca tgctatgatg aataaactga tttattttct accattactg 4680
aacattagga caaacacaaa ataaaaaaca aaacacagac aacggtgctg attctggtgt 4740
ggtttctact caccacgtga aataaactat caactgtata aagagaacaa agtgatttta 4800
gaataaaatg caggaaaaac ttttttaaag atgttagtct tgtagcgtga ataaatttgc 4860
catcaccttt tgtgtggtgg cctggcaggt catatacttt tttttggcat ataccttttt 4920
aaagactgta attagtgcag taacagtggg gttttttttg tgcaactctt ctaaaaacat 4980
tcataatgca gtcatgttta tttttttctg ttaaaatgtt tttgacagtt ttaagagcag 5040
tcttttggct ctgaccattt cttgttctgt ttccaatgaa atcaataaaa aaaaagaagt 5100
actttaaaaa aaaaaaaaaa aaa 5123
<210> 47
<211> 7970
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 47
gtaaaagtga cattctaaat gttcctcact ctgcgaggct tattttttag ggactttgct 60
ataattctga aagacttagt tttacagtac atctgaaagt aggagttttc agaagtatgg 120
ctcttgggat aaatttagat tcttaattgt gaagctctgt taccacttgt tagaaggcag 180
gtcagctcac ctgcttgggg aggtaaatat atgaatgcac tctcgagtaa tttaatggag 240
ccctacctca atgtacagaa tgacagtatc acagatcaag aatggagtac gagtgatttt 300
cggctatggt gggggtaggt aggtcacttg tcccctgttg tctcttacta tttgtaaagt 360
gaagactatg attagtcttt ttgatcggga tggtttgaga tgaataaaga ataggcaggc 420
aatttggata ctttaggctt ttcaagaaca ttagtaacat tttttcttag atatttctcc 480
taatacaatg agtgttgtga aataacatgg cagttattgt tgagagaaaa gccttcccag 540
ttatgtattg agtccttagg cgttttgacc ttccctccac tcttacagaa cttggtggaa 600
ggggccacta tgttttctac ctccttccgt gcctttcaca aagccacatc ctgcaccgtc 660
tacccttctc tgtggatatt tttccgcttg gcaatttcct ttcctgaggc acccacttgg 720
gacatctgaa tctccatctc catgttgatg gcccgtttgt gcttggacgt gttcttccac 780
ttgagactga gggttcatgt aatcaaagaa gtttctttgt tgtgtgtatc tttacagaac 840
acaacaggaa ttgaaaatga atcagaacac tactgagcct gtggcggcca ccgagaccct 900
ggctgaggta cccgaacatg tgctgcgagg acttccggag gaagtgaggc ttttcccttc 960
tgctgttgac aagacccgga ttggtgtctg ggccactaaa ccaattttaa aaggcaaaaa 1020
atttgggcca tttgttggtg ataagaaaaa aagatctcag gttaagaata atgtatacat 1080
gtgggaggtg tattacccaa atttgggatg gatgtgcatt gatgccactg atccagagaa 1140
gggaaactgg ctgcgatatg tgaattgggc ttgctcagga gaagagcaaa atttattccc 1200
actggaaatc aacagagcca tttactataa aactttaaag ccaatcgcgc cgggcgagga 1260
gctcctggtc tggtacaatg gggaagacaa ccctgagata gcagctgcga ttgaggaaga 1320
gcgagccagc gcccggagca agcggagctc ccccaagagc cggaaaggga agaaaaaatc 1380
ccaggaaaat aaaaacaaag gaaacaaaat ccaagacata caactgaaga caagtgagcc 1440
agatttcacc tctgcaaata tgagagattc tgcagaaggt cctaaagaag acgaagagaa 1500
gccttcagcc tcagcacttg agcagccggc caccctccag gaggtggcca gtcaggaggt 1560
gcctccagaa ctagcaaccc ctgcccctgc ctgggagcca cagccagaac cagacgagcg 1620
attagaagcg gcagcttgtg aggtgaatga tttgggggaa gaggaggagg aggaagagga 1680
ggaggatgaa gaagaagaag aagatgatga tgatgatgag ttggaagacg agggggaaga 1740
agaagccagc atgccaaatg aaaattctgt gaaagagcca gaaatacggt gtgatgagaa 1800
gccagaagat ttattagagg aaccaaaaac aacttcagaa gaaactcttg aagactgctc 1860
agaggtaaca cctgccatgc aaatccccag aactaaagaa gaggccaatg gtgatgtatt 1920
tgaaacgttt atgtttccgt gtcaacattg tgaaaggaag tttacaacca aacaggggct 1980
tgagcgtcac atgcatatcc atatatccac cgtcaatcat gctttcaaat gcaagtactg 2040
tgggaaagcc tttggcacac agattaaccg gcggcgacat gagcggcgcc atgaagcagg 2100
gttaaagcgg aaacccagcc aaacactaca gccgtcagag gatctggctg atggcaaagc 2160
atctggagaa aacgttgctt caaaagatga ttcgagtcct cccagtcttg ggccagactg 2220
tctgatcatg aattcagaga aggcttccca agacacaata aattcttctg tcgtagaaga 2280
gaatggggaa gttaaagaac ttcatccgtg caaatattgt aaaaaggttt ttggaactca 2340
tactaatatg agacggcatc agcgtagagt tcacgaacgt catctgattc ccaaaggtgt 2400
acggcgaaaa ggaggccttg aagagcccca gcctccagca gaacaggccc aggccaccca 2460
gaacgtgtat gtaccaagca cagagccgga ggaggaaggg gaagcagatg atgtgtacat 2520
catggacatt tctagcaata tctctgaaaa cttaaattac tatattgatg gtaaaattca 2580
aactaataac aacactagta actgtgatgt gattgagatg gagtctgctt cggcagattt 2640
gtatggtata aattgtctgc tcactccagt tacagtggaa attactcaaa atataaagac 2700
cacacaggtc cctgtaacag aagatcttcc taaagagcct ttgggcagca caaatagtga 2760
ggccaagaag cggagaactg cgagcccacc tgcactgccc aaaattaagg ccgaaacaga 2820
ctctgacccc atggtcccct cttgctcttt aagtcttcct cttagcatat caacaacaga 2880
ggcagtgtct ttccacaaag agaaaagtgt ttatttgtca tcaaagctca aacaacttct 2940
tcaaacccaa gataaactaa ctcctgcagg gatttcagca actgaaatag ctaaattagg 3000
tcctgtttgt gtgtctgctc ctgcatcaat gttgcctgtg acctcaagta ggtttaagag 3060
gcggaccagc tctcctccca gttctccaca gcacagtcct gcccttcgag actttggaaa 3120
gccaagtgat gggaaagcag catggaccga tgccgggctg acttccaaaa aatccaaatt 3180
agaaagtcac agcgactcac cagcatggag tttgtctggg agagatgaga gagaaactgt 3240
gagccctcca tgctttgatg aatataaaat gtctaaagag tggacagcta gttctgcttt 3300
tagcagtgtg tgcaaccagc agccactgga tttatccagc ggtgtcaaac agaaggctga 3360
gggtacaggc aagactccag tccagtggga atctgtctta gatctcagtg tgcataaaaa 3420
gcattgtagt gactctgaag gcaaggaatt caaagaaagt cattcagtgc agcctacgtg 3480
tagtgctgta aagaaaagga aaccaaccac ctgcatgctg cagaaggttc ttctcaatga 3540
atataatggc atcgatttac ctgtagaaaa ccctgcagat gggaccagga gcccaagtcc 3600
ttgtaaatcc ctagaagctc agccagatcc tgacctcggt ccgggctctg gtttccctgc 3660
ccctactgtt gagtccacac ctgatgtttg tccttcatca cctgccctgc agacaccctc 3720
cctttcatcc ggtcagctgc ctcctctctt gatccccaca gatccctctt cccctccacc 3780
ctgtcccccg gtattaactg ttgccactcc gccccctccc ctccttccta ccgtacctct 3840
tccagccccc tcttccagtg catctccaca cccatgcccc tctccactct caaatgccac 3900
cgcacagtcc ccacttccaa ttctgtcccc aacagtgtcc ccctctccct ctcccattcc 3960
tcccgtggag cccctgatgt ctgccgcctc acccgggcct ccaacacttt cttcttcctc 4020
ctcttcatct tcctcctcct cttcgttttc ttcttcatct tcctcctctt ctccttctcc 4080
acctcctctc tccgcaatat catctgttgt ttcctctggt gataatctgg aggcttctct 4140
ccccatgata tctttcaaac aggaggaatt agagaatgaa ggtctgaaac ccagggaaga 4200
gccccagtct gctgctgaac aggatgttgt tgttcaggaa acattcaaca aaaactttgt 4260
ttgcaacgtc tgtgaatcac cttttctttc cattaaagat ctaaccaaac atttatctat 4320
tcatgctgaa gaatggccct tcaaatgtga attttgtgtg cagcttttta aggataaaac 4380
ggacttgtca gaacatcgct ttttgcttca tggagttggg aatatctttg tgtgttctgt 4440
ttgtaaaaaa gaatttgctt ttttgtgcaa tttgcagcag caccagcgag atctccaccc 4500
agataaggtg tgcacacatc acgagtttga aagcgggact ctgaggcccc agaactttac 4560
agatcccagc aaggcccatg tagagcatat gcagagcttg ccagaagatc ctttagaaac 4620
ttctaaagaa gaagaggagt taaatgattc ctctgaagag ctttacacga ctataaaaat 4680
aatggcttct ggaataaaga caaaagatcc agatgttcga ttgggcctca atcagcatta 4740
cccaagcttt aaaccacctc catttcagta ccatcaccgt aaccccatgg ggattggtgt 4800
gacagccaca aatttcacta cacacaatat tccacagact ttcactaccg ccattcgctg 4860
cacaaagtgt ggaaaaggtg tcgacaatat gccggagttg cacaaacata tcctggcttg 4920
tgcttctgca agtgacaaga agaggtacac gcctaagaaa aacccagtac cattaaaaca 4980
aactgtgcaa cccaaaaatg gcgtggtggt tttagataac tctgggaaaa atgccttccg 5040
acgaatggga cagcccaaaa ggcttaactt tagtgttgag ctcagcaaaa tgtcgtcgaa 5100
taagctcaaa ttaaatgcat tgaagaaaaa aaatcagcta gtacagaaag caattcttca 5160
gaaaaacaaa tctgcaaagc agaaggccga cttgaaaaat gcttgtgagt catcctctca 5220
catctgccct tactgtaatc gagagttcac ttacattgga agcctgaata aacacgccgc 5280
cttcagctgt cccaaaaaac ccctttctcc tcccaaaaaa aaagtttctc attcatctaa 5340
gaaaggtgga cactcatcac ctgcaagtag tgacaaaaac agtaacagca accaccgcag 5400
acggacagcg gatgcggaga ttaaaatgca aagcatgcag actccgttgg gcaagaccag 5460
agcccgcagc tcaggcccca cccaagtccc acttccctcc tcatccttca ggtccaagca 5520
gaacgtcaag tttgcagctt cggtgaaatc caaaaaacca agctcctcct ctttaaggaa 5580
ctccagcccg ataagaatgg ccaaaataac tcatgttgag gggaaaaaac ctaaagctgt 5640
ggccaagaat cattctgctc agctttccag caaaacatca cggagcctgc acgtgagggt 5700
acagaaaagc aaagctgttt tacaaagcaa atccaccttg gcgagtaaga aaagaacaga 5760
ccggttcaat ataaaatcta gagagcggag tggggggcca gtcacccgga gccttcagct 5820
ggcagctgct gctgacttga gtgagaacaa gagagaggac ggcagcgcca agcaggagct 5880
gaaggacttc agctacagcc tccgcttggc gtcccgatgc tctccaccag cggccccgta 5940
catcaccagg cagtatagga aggtcaaagc tccagctgca gcccagttcc agggaccatt 6000
cttcaaagag tagacactct ggctgctccc tgacagcacc tgaagtgacc tggaatcagt 6060
gaagccaaag ggactggcag tctgccctgc agggagtacc gacctatccc agttgtgtga 6120
ggctgcgaga gaaagggagt gcatgtgcgc gcgtgcatgt gtgcgtgcgt gtgtgttcac 6180
gtgttctcgt gcgggcgcgt gagtggtctt caaacgaggg tcccgatccc cggggcggca 6240
ggaagggggc cgactccacg ctgtcctttg ggatgatact tggatgcagc tcttgggacc 6300
gtgttctgca gcccagcctt cctgttgggg tggggcctct cctactatgc aatttttcaa 6360
gagctccttg accctgcttt ttgcttcttg agttgtcttt tgccattatg gggactttgg 6420
tttgacccag gggtcagcct taggaaggcc ttcaggagga ggccgagttc cccttcagta 6480
ccacccctct ctccccacct tccctctccc ggcaacatct ctgggaatca acagcatatt 6540
gacacgttgg agccgagcct gaacatgccc ctcggcccca gcacatggaa aacccccttc 6600
cttgcctaag gtgtctgagt ttctggctct tgaggcattt ccagacttga aattctcatc 6660
agtccattgc tcttgagtct ttgcagagaa cctcagatca ggtgcacctg ggagaaagac 6720
tttgtcccca cttacagatc tatctcctcc cttgggaagg gcagggaatg gggacggtgt 6780
atggagggga gggatctcct gcgcccttca ttgccacact tggtgggacc atgaacatct 6840
ttagtgtctg agcttctcaa attagctgca ataggaaaaa aacaaattgg gaaatgaaaa 6900
aaaaatggga agattaaaaa gcacaggggg aagaagaaga gatttcggag gccatcctgc 6960
caggggcgga cggggctgac tcctgctctc tggaggacgg tcagtccatg tctcggagaa 7020
acgggtgagc tgagcttggc gtttggaccc agttcagtga ggttcttggg ttttgtgcct 7080
ttggggcaga ccccaggcaa ggatgtctga gaccacttgg gcgctgtttt ctcagctcca 7140
atttcaagag tgagctatca aacccagagc ggaaggaggg agctctgatg agcacggttt 7200
gtcacacgat aaagggattt tttttttcag ggctactacg gttgatcttg caactctgta 7260
aatatgtatg tagacacttt taaaagcacg tatttatgtc cctgactgta aatgctccat 7320
ttttaaagtt ttataacttg tgttatttaa tgagtcagtc aatcggctgc agtatgggat 7380
ctgataagga tctaggagaa gggtctcatg cggaccctca catgggcaga aaaatggtgg 7440
tcattggccg acatcacagt tttcctgttt cccacccagc taaaaaccgt tgtttgcttt 7500
aaattttcat aaactggaat cctttcaccc gctcctacag ctaaccctca caagcatgaa 7560
gtgctgtggc tgttccttat cctaatgatg cgcttttgtc ccgtaaatgt taacactcat 7620
gaagcatacc ccggcctctc agttcttgag ggcctcccca ccgcagcagc aaggaaagct 7680
cacgaacccc aaacctggca agtcacctgc agcccatggt gagctctggg aagtgtggtt 7740
gaggccttgg ggtcactcct tttttgcatg tgcaaatgtg ctggtcaccc ttcaacgctc 7800
ccagacggtc aggaaaactg ttccaatcat gaaaaggggg gatgattttg taaaagtggc 7860
atttcctggt cagtggtggt cttcaagacg acagctctgt atctgccatg tgaagagaat 7920
taacaataaa agtgtgaaga gcgattgtga ggaacaaaaa aaaaaaaaaa 7970
<210> 48
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide
<220>
<221> modified_base
<222> (3)..(31)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<400> 48
aannnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ntt 33
<210> 49
<211> 4526
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 49
acggctgcgc agatgccgac tttagaggag gcggagtttc ggccttcgcc tgctggaaaa 60
gcagtaggat cggccagtgg cgacagcagg agctgagcct aagccctggc ggggctttgg 120
gctgtagatt cctgtctgac taaagggacc tcaaaaagga gggaaaatgg cttctgagtc 180
tgaaactctg aatcccagtg ctaggataat gaccttttat ccaactatgg aagagttccg 240
aaacttcagt agatacattg cctacattga atcccaagga gctcatcggg cagggctagc 300
caaggttgtt cctccaaaag agtggaagcc acgagcatcc tatgatgaca ttgatgattt 360
ggtcattcct gcccccattc aacagctggt gacggggcag tctggcctct ttactcagta 420
caacatacag aagaaagcca tgactgttcg agagttccgc aagatagcca atagcgataa 480
gtactgtacc ccacgctata gtgagtttga agagctcgag cggaaatact ggaaaaatct 540
tacattcaat cctccaatct atggtgcaga tgtgaatggt accctctatg aaaagcatgt 600
tgatgagtgg aatattggcc ggctgagaac aatcctggac ttggtggaaa aggagagtgg 660
gatcaccatt gagggtgtga acaccccata cctgtacttt ggcatgtgga agacatcctt 720
tgcttggcac actgaagaca tggacctcta cagcatcaac tacctgcact ttggagaacc 780
aaagtcctgg tactctgttc cacctgagca tggaaagcgg ttggaacgcc tcgccaaagg 840
ctttttccca ggaagtgctc aaagctgtga ggcatttctc cgccacaaga tgaccctgat 900
ttccccgtta atgctgaaga aatatggaat tccctttgac aaggtgactc aagaggctgg 960
agagtttatg atcactttcc cttatggtta ccatgccggc tttaaccatg gttttaactg 1020
tgcggagtct accaattttg ctacccgtcg gtggattgag tacggcaagc aagctgtgct 1080
gtgctcctgt agaaaggaca tggtgaagat ctccatggat gtgtttgtga gaaagttcca 1140
gccagaaagg tacaaacttt ggaaagctgg gaaggacaac acagttattg accatactct 1200
gcccacgcca gaagcagctg agtttcttaa ggagagtgaa ctgcctccaa gagctggcaa 1260
cgaggaggag tgcccagagg aggacatgga aggggtggag gatggagagg aaggagacct 1320
gaagacaagc ctggccaagc accgaatagg gacaaagagg caccgagttt gtcttgaaat 1380
accacaggag gtgagtcaga gtgagctctt ccccaaggag gatctgagtt ctgagcagta 1440
tgagatgacg gagtgcccgg cagccctcgc ccctgtgagg cccacccata gctctgtgcg 1500
gcaagttgag gatggtctta ccttcccaga ttattctgac tccactgaag tcaaatttga 1560
agagcttaaa aatgtcaaac tagaagagga ggatgaggag gaagaacaag cagcagctgc 1620
cttggatctt tctgtgaatc ctgcgtctgt agggggacgc cttgtcttct caggctccaa 1680
aaagaaatca tcttctagcc tgggctctgg ctcttcacgg gattctatct cttctgattc 1740
agaaactagt gagcctctct cctgccgagc ccaagggcaa acgggagttc tcactgtgca 1800
cagttatgcc aaaggggatg gcagggtcac tgtgggagag ccatgcacga ggaagaaagg 1860
aagcgccgct agaagtttca gtgagcggga gctggcagag gttgcagatg aatacatgtt 1920
ttccctagaa gagaataaga agtccaaggg acgccgtcag cctttaagca agctcccccg 1980
ccatcaccca cttgtgctgc aggagtgtgt cagtgatgat gagacatctg aacagctgac 2040
ccctgaggaa gaggctgagg agacagaggc ctgggccaag cctctgagcc aactgtggca 2100
gaaccgacct ccaaactttg aggctgagaa ggaattcaat gagaccatgg cccaacaggc 2160
ccctcactgc gctgtctgta tgatcttcca gacttatcat caggttgaat ttggaggctt 2220
taatcagaac tgtggaaatg cttcagattt agccccccag aagcagagga ccaagccatt 2280
gattccagaa atgtgcttca cttcgactgg ctgcagcacg gacatcaacc tttctactcc 2340
ttatcttgag gaggatggca ccagcatact cgtttcctgc aagaagtgca gcgtccgggt 2400
ccatgccagt tgctatgggg tcccccctgc aaaggcttct gaagactgga tgtgttctcg 2460
gtgttcagcc aatgccctag aggaggactg ctgtttatgc tcattacgag gaggggccct 2520
gcagagagca aatgatgaca ggtgggtcca cgtttcatgt gctgtggcaa ttctggaagc 2580
aaggtttgtc aacattgcag aaagaagtcc ggtggatgtg agcaaaatcc ccctgccccg 2640
cttcaaactg aaatgtatct tctgtaagaa gcggaggaaa agaactgctg gctgctgtgt 2700
gcagtgttct cacggccgct gcccaactgc cttccatgtg agctgcgccc aggctgccgg 2760
tgtgatgatg cagcctgacg actggccttt tgtggtcttc attacctgct ttcggcacaa 2820
gattcctaat ttggagcgtg ccaagggggc cttgcaaagc atcactgcag gccagaaagt 2880
cattagcaag cataagaacg ggcgcttcta ccagtgtgaa gtggtcaggc tcaccaccga 2940
gaccttctat gaagtcaact ttgatgatgg ctccttcagc gacaatcttt atcctgagga 3000
catagtgagc caggactgtc tccagtttgg tcctcctgct gaaggggaag tggtccaagt 3060
gagatggaca gacggccaag tctatggagc caagtttgtg gcctcccacc ctatccaaat 3120
gtaccaggtg gagtttgagg atggctcaca acttgtggtt aagagagatg atgtatacac 3180
actggatgaa gagcttccca agagagtcaa atctagactg tcagtagcct cagacatgcg 3240
cttcaatgag attttcacag agaaagaggt taagcaagaa aagaaacggc aacgagttat 3300
caactcaaga taccgggaag attatattga gcctgcacta taccgggcca tcatggagta 3360
ggtgcttcca gggtccaagg gattctcagc catccaggca agagcactct gggttccaca 3420
gcacagcaga catggaacgc tgaagtctct gaaagtgaag ttgtaaaaag aaaaggaatg 3480
aaataaccga cccatcatct tctcacccac cctcattgca ttccgctgta gtgaaaggac 3540
gagccatttc tgggcacgtg gcagcagtcg ctgatctccc agctgagggg ctgagcactg 3600
gaatgctgtg gctgcactgg ccccagtcca tagaggggtc aactatgctg gctggactgg 3660
ctgccttgtt cctggcctag gacttagctt cataactatc acctgcaccg actaggctga 3720
ggtgctggta cttgccccaa cccctacttt tgtatttata tgtgtgtgtg tgtgtgcgtg 3780
cgtgcgtgcg tgcgtgtatg tttggtctgg accagcttct gccagcccct ggcctttact 3840
ttcttccttg cctatgcagg gcaaacaaaa tgtgaaattc tgccctcagc tgagctgagt 3900
aagggctcct gggggttggc tggagatggg tgtggcatct gtccaggcct ggaaccgtct 3960
caagacagtg ctggcaaagc tgcagtattg agatgctaag gagctgatgc cacctctttg 4020
tcttccccta aaggagaaca tggggataac atgggtgtgt gcccacaaca ctctaggtgc 4080
agagcccctg tggcaaagta ttacagggtg tgggtgggga ttaccctgaa tcggggattt 4140
taatgatgga agcaggcaga gcctggtggg tgattctgtc aacagaaaat tgcaatcatg 4200
caggggctgg gagggttagg atgaaaaaac tggggccatt ggaggcccac tgtaggtggg 4260
agggagctga ttttggggtg gggggtggga ctagagggca atactgaagg ggttaaacag 4320
gtttttgctc ctcaagaatt tgtttgcctg ggcccaggat tggagggctt cacaccaata 4380
ccctgtgtat acaagaatca gatttataat acttcccctt ttttgttacg tatgaacact 4440
ataaaccaaa ttattttgaa aactggtgca tcaccttgtc cttagcaata aaatgtgttg 4500
agcagaggaa aaaaaaaaaa aaaaaa 4526
<210> 50
<211> 1064
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 50
Met Ala Ser Glu Ser Glu Thr Leu Asn Pro Ser Ala Arg Ile Met Thr
1 5 10 15
Phe Tyr Pro Thr Met Glu Glu Phe Arg Asn Phe Ser Arg Tyr Ile Ala
20 25 30
Tyr Ile Glu Ser Gln Gly Ala His Arg Ala Gly Leu Ala Lys Val Val
35 40 45
Pro Pro Lys Glu Trp Lys Pro Arg Ala Ser Tyr Asp Asp Ile Asp Asp
50 55 60
Leu Val Ile Pro Ala Pro Ile Gln Gln Leu Val Thr Gly Gln Ser Gly
65 70 75 80
Leu Phe Thr Gln Tyr Asn Ile Gln Lys Lys Ala Met Thr Val Arg Glu
85 90 95
Phe Arg Lys Ile Ala Asn Ser Asp Lys Tyr Cys Thr Pro Arg Tyr Ser
100 105 110
Glu Phe Glu Glu Leu Glu Arg Lys Tyr Trp Lys Asn Leu Thr Phe Asn
115 120 125
Pro Pro Ile Tyr Gly Ala Asp Val Asn Gly Thr Leu Tyr Glu Lys His
130 135 140
Val Asp Glu Trp Asn Ile Gly Arg Leu Arg Thr Ile Leu Asp Leu Val
145 150 155 160
Glu Lys Glu Ser Gly Ile Thr Ile Glu Gly Val Asn Thr Pro Tyr Leu
165 170 175
Tyr Phe Gly Met Trp Lys Thr Ser Phe Ala Trp His Thr Glu Asp Met
180 185 190
Asp Leu Tyr Ser Ile Asn Tyr Leu His Phe Gly Glu Pro Lys Ser Trp
195 200 205
Tyr Ser Val Pro Pro Glu His Gly Lys Arg Leu Glu Arg Leu Ala Lys
210 215 220
Gly Phe Phe Pro Gly Ser Ala Gln Ser Cys Glu Ala Phe Leu Arg His
225 230 235 240
Lys Met Thr Leu Ile Ser Pro Leu Met Leu Lys Lys Tyr Gly Ile Pro
245 250 255
Phe Asp Lys Val Thr Gln Glu Ala Gly Glu Phe Met Ile Thr Phe Pro
260 265 270
Tyr Gly Tyr His Ala Gly Phe Asn His Gly Phe Asn Cys Ala Glu Ser
275 280 285
Thr Asn Phe Ala Thr Arg Arg Trp Ile Glu Tyr Gly Lys Gln Ala Val
290 295 300
Leu Cys Ser Cys Arg Lys Asp Met Val Lys Ile Ser Met Asp Val Phe
305 310 315 320
Val Arg Lys Phe Gln Pro Glu Arg Tyr Lys Leu Trp Lys Ala Gly Lys
325 330 335
Asp Asn Thr Val Ile Asp His Thr Leu Pro Thr Pro Glu Ala Ala Glu
340 345 350
Phe Leu Lys Glu Ser Glu Leu Pro Pro Arg Ala Gly Asn Glu Glu Glu
355 360 365
Cys Pro Glu Glu Asp Met Glu Gly Val Glu Asp Gly Glu Glu Gly Asp
370 375 380
Leu Lys Thr Ser Leu Ala Lys His Arg Ile Gly Thr Lys Arg His Arg
385 390 395 400
Val Cys Leu Glu Ile Pro Gln Glu Val Ser Gln Ser Glu Leu Phe Pro
405 410 415
Lys Glu Asp Leu Ser Ser Glu Gln Tyr Glu Met Thr Glu Cys Pro Ala
420 425 430
Ala Leu Ala Pro Val Arg Pro Thr His Ser Ser Val Arg Gln Val Glu
435 440 445
Asp Gly Leu Thr Phe Pro Asp Tyr Ser Asp Ser Thr Glu Val Lys Phe
450 455 460
Glu Glu Leu Lys Asn Val Lys Leu Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu
465 470 475 480
Gln Ala Ala Ala Ala Leu Asp Leu Ser Val Asn Pro Ala Ser Val Gly
485 490 495
Gly Arg Leu Val Phe Ser Gly Ser Lys Lys Lys Ser Ser Ser Ser Leu
500 505 510
Gly Ser Gly Ser Ser Arg Asp Ser Ile Ser Ser Asp Ser Glu Thr Ser
515 520 525
Glu Pro Leu Ser Cys Arg Ala Gln Gly Gln Thr Gly Val Leu Thr Val
530 535 540
His Ser Tyr Ala Lys Gly Asp Gly Arg Val Thr Val Gly Glu Pro Cys
545 550 555 560
Thr Arg Lys Lys Gly Ser Ala Ala Arg Ser Phe Ser Glu Arg Glu Leu
565 570 575
Ala Glu Val Ala Asp Glu Tyr Met Phe Ser Leu Glu Glu Asn Lys Lys
580 585 590
Ser Lys Gly Arg Arg Gln Pro Leu Ser Lys Leu Pro Arg His His Pro
595 600 605
Leu Val Leu Gln Glu Cys Val Ser Asp Asp Glu Thr Ser Glu Gln Leu
610 615 620
Thr Pro Glu Glu Glu Ala Glu Glu Thr Glu Ala Trp Ala Lys Pro Leu
625 630 635 640
Ser Gln Leu Trp Gln Asn Arg Pro Pro Asn Phe Glu Ala Glu Lys Glu
645 650 655
Phe Asn Glu Thr Met Ala Gln Gln Ala Pro His Cys Ala Val Cys Met
660 665 670
Ile Phe Gln Thr Tyr His Gln Val Glu Phe Gly Gly Phe Asn Gln Asn
675 680 685
Cys Gly Asn Ala Ser Asp Leu Ala Pro Gln Lys Gln Arg Thr Lys Pro
690 695 700
Leu Ile Pro Glu Met Cys Phe Thr Ser Thr Gly Cys Ser Thr Asp Ile
705 710 715 720
Asn Leu Ser Thr Pro Tyr Leu Glu Glu Asp Gly Thr Ser Ile Leu Val
725 730 735
Ser Cys Lys Lys Cys Ser Val Arg Val His Ala Ser Cys Tyr Gly Val
740 745 750
Pro Pro Ala Lys Ala Ser Glu Asp Trp Met Cys Ser Arg Cys Ser Ala
755 760 765
Asn Ala Leu Glu Glu Asp Cys Cys Leu Cys Ser Leu Arg Gly Gly Ala
770 775 780
Leu Gln Arg Ala Asn Asp Asp Arg Trp Val His Val Ser Cys Ala Val
785 790 795 800
Ala Ile Leu Glu Ala Arg Phe Val Asn Ile Ala Glu Arg Ser Pro Val
805 810 815
Asp Val Ser Lys Ile Pro Leu Pro Arg Phe Lys Leu Lys Cys Ile Phe
820 825 830
Cys Lys Lys Arg Arg Lys Arg Thr Ala Gly Cys Cys Val Gln Cys Ser
835 840 845
His Gly Arg Cys Pro Thr Ala Phe His Val Ser Cys Ala Gln Ala Ala
850 855 860
Gly Val Met Met Gln Pro Asp Asp Trp Pro Phe Val Val Phe Ile Thr
865 870 875 880
Cys Phe Arg His Lys Ile Pro Asn Leu Glu Arg Ala Lys Gly Ala Leu
885 890 895
Gln Ser Ile Thr Ala Gly Gln Lys Val Ile Ser Lys His Lys Asn Gly
900 905 910
Arg Phe Tyr Gln Cys Glu Val Val Arg Leu Thr Thr Glu Thr Phe Tyr
915 920 925
Glu Val Asn Phe Asp Asp Gly Ser Phe Ser Asp Asn Leu Tyr Pro Glu
930 935 940
Asp Ile Val Ser Gln Asp Cys Leu Gln Phe Gly Pro Pro Ala Glu Gly
945 950 955 960
Glu Val Val Gln Val Arg Trp Thr Asp Gly Gln Val Tyr Gly Ala Lys
965 970 975
Phe Val Ala Ser His Pro Ile Gln Met Tyr Gln Val Glu Phe Glu Asp
980 985 990
Gly Ser Gln Leu Val Val Lys Arg Asp Asp Val Tyr Thr Leu Asp Glu
995 1000 1005
Glu Leu Pro Lys Arg Val Lys Ser Arg Leu Ser Val Ala Ser Asp
1010 1015 1020
Met Arg Phe Asn Glu Ile Phe Thr Glu Lys Glu Val Lys Gln Glu
1025 1030 1035
Lys Lys Arg Gln Arg Val Ile Asn Ser Arg Tyr Arg Glu Asp Tyr
1040 1045 1050
Ile Glu Pro Ala Leu Tyr Arg Ala Ile Met Glu
1055 1060
<210> 51
<211> 5675
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 51
agggctcggt cgccagcaac cgagcggggc ccggcccgag cggggcctgg gggtgcgacg 60
ccgagggcgg gggagagcgc gccgctgctc ccggaccggg ccgcgcacgc cgcctcagga 120
accatcactg ttgctggagg cacctgacaa atcctagcga atttttggag catctccacc 180
caggaacctc gccatccaga agtgtgcttc ccgcacagct gcagccatgg ggtctgagga 240
ccacggcgcc cagaacccca gctgtaaaat catgacgttt cgcccaacca tggaagaatt 300
taaagacttc aacaaatacg tggcctacat agagtcgcag ggagcccacc gggcgggcct 360
ggccaagatc atccccccga aggagtggaa gccgcggcag acgtatgatg acatcgacga 420
cgtggtgatc ccggcgccca tccagcaggt ggtgacgggc cagtcgggcc tcttcacgca 480
gtacaatatc cagaagaagg ccatgacagt gggcgagtac cgccgcctgg ccaacagcga 540
gaagtactgt accccgcggc accaggactt tgatgacctt gaacgcaaat actggaagaa 600
cctcaccttt gtctccccga tctacggggc tgacatcagc ggctctttgt atgatgacga 660
cgtggcccag tggaacatcg ggagcctccg gaccatcctg gacatggtgg agcgcgagtg 720
cggcaccatc atcgagggcg tgaacacgcc ctacctgtac ttcggcatgt ggaagaccac 780
cttcgcctgg cacaccgagg acatggacct gtacagcatc aactacctgc actttgggga 840
gcctaagtcc tggtacgcca tcccaccaga gcacggcaag cgcctggagc ggctggccat 900
cggcttcttc cccgggagct cgcagggctg cgacgccttc ctgcggcata agatgaccct 960
catctcgccc atcatcctga agaagtacgg gatccccttc agccggatca cgcaggaggc 1020
cggggaattc atgatcacat ttccctacgg ctaccacgcc ggcttcaatc acgggttcaa 1080
ctgcgcagaa tctaccaact tcgccaccct gcggtggatt gactacggca aagtggccac 1140
tcagtgcacg tgccggaagg acatggtcaa gatctccatg gacgtgttcg tgcgcatcct 1200
gcagcccgag cgctacgagc tgtggaagca gggcaaggac ctcacggtgc tggaccacac 1260
gcggcccacg gcgctcacca gccccgagct gagctcctgg agtgcatccc gggcctcgct 1320
gaaggccaag ctcctccgca ggtctcaccg gaaacggagc cagcccaaga agccgaagcc 1380
cgaagacccc aagttccctg gggagggtac ggctggggca gcgctcctag aggaggctgg 1440
gggcagcgtg aaggaggagg ctgggccgga ggttgacccc gaggaggagg aggaggagcc 1500
gcagccactg ccacacggcc gggaggccga gggcgcagaa gaggacggga ggggcaagct 1560
gcggccaacc aaggccaaga gcgagcggaa gaagaagagc ttcggcctgc tgcccccaca 1620
gctgccgccc ccgcctgctc acttcccctc agaggaggcg ctgtggctgc catccccact 1680
ggagcccccg gtgctgggcc caggccctgc agccatggag gagagccccc tgccggcacc 1740
ccttaatgtc gtgccccctg aggtgcccag tgaggagcta gaggccaagc ctcggcccat 1800
catccccatg ctgtacgtgg tgccgcggcc gggcaaggca gccttcaacc aggagcacgt 1860
gtcctgccag caggcctttg agcactttgc ccagaagggt ccgacctgga aggaaccagt 1920
ttcccccatg gagctgacgg ggccagagga cggtgcagcc agcagtgggg caggtcgcat 1980
ggagaccaaa gcccgggccg gagaggggca ggcaccgtcc acattttcca aattgaagat 2040
ggagatcaag aagagccggc gccatcccct gggccggccg cccacccggt ccccactgtc 2100
ggtggtgaag caggaggcct caagtgacga ggaggcatcc cctttctccg gggaggaaga 2160
tgtgagtgac ccggacgcct tgaggccgct gctgtctctg cagtggaaga acagggcggc 2220
cagcttccag gccgagagga agttcaacgc agcggctgcg cgcacggagc cctactgcgc 2280
catctgcacg ctcttctacc cctactgcca ggccctacag actgagaagg aggcacccat 2340
agcctccctc ggagagggct gcccggccac attaccctcc aaaagccgtc agaagacccg 2400
accgctcatc cctgagatgt gcttcacctc tggcggtgag aacacggagc cgctgcctgc 2460
caactcctac atcggcgacg acgggaccag ccccctgatc gcctgcggca agtgctgcct 2520
gcaggtccat gccagttgct atggcatccg tcccgagctg gtcaatgaag gctggacgtg 2580
ttcccggtgc gcggcccacg cctggactgc ggagtgctgc ctgtgcaacc tgcgaggagg 2640
tgcgctgcag atgaccaccg ataggaggtg gatccacgtg atctgtgcca tcgcagtccc 2700
cgaggcgcgc ttcctgaacg tgattgagcg ccaccctgtg gacatcagcg ccatccccga 2760
gcagcggtgg aagctgaaat gcgtgtactg ccggaagcgg atgaagaagg tgtcaggtgc 2820
ctgtatccag tgctcctacg agcactgctc cacgtccttc cacgtgacct gcgcccacgc 2880
cgcaggcgtg ctcatggagc cggacgactg gccctatgtg gtctccatca cctgcctcaa 2940
gcacaagtcg gggggtcacg ctgtccaact cctgagggcc gtgtccctag gccaggtggt 3000
catcaccaag aaccgcaacg ggctgtacta ccgctgtcgc gtcatcggtg ccgcctcgca 3060
gacctgctac gaagtgaact tcgacgatgg ctcctacagc gacaacctgt accctgagag 3120
catcacgagt agggactgtg tccagctggg acccccttcc gagggggagc tggtggagct 3180
ccggtggact gacggcaacc tctacaaggc caagttcatc tcctccgtca ccagccacat 3240
ctaccaggtg gagtttgagg acgggtccca gctgacggtg aagcgtgggg acatcttcac 3300
cctggaggag gagctgccca agagggtccg ctctcggctg tcactgagca cgggggcacc 3360
gcaggagccc gccttctcgg gggaggaggc caaggccgcc aagcgcccgc gtgtgggcac 3420
cccgcttgcc acggaggact ccgggcggag ccaggactac gtggccttcg tggagagcct 3480
cctgcaggtg cagggccggc ccggagcccc cttctaggac agctggccgc tcaggcgacc 3540
ctcagcccgg cggggaggcc atggcatgcc ccgggcgttc gcttgctgtg aattcctgtc 3600
ctcgtgtccc cgacccccga gaggccacct ccaagccgcg ggtgccccct agggcgacag 3660
gagccagcgg gacgccgcac gcggccccag actcagggag cagggccagg cgggctcggg 3720
ggccggccag gggagcaccc cactcaacta ctcagaattt taaaccatgt aagctctctt 3780
cttctcgaaa aggtgctact gcaatgccct actgagcaac ctttgagatt gtcacttctg 3840
tacataaacc acctttgtga ggctctttct ataaatacat attgtttaaa aaaaagcaag 3900
aaaaaaagga aaacaaagga aaatatcccc aaagttgttt tctagatttg tggctttaag 3960
aaaaacaaaa caaaacaaac acattgtttt tctcagaacc aggattctct gagaggtcag 4020
agcatctcgc tgtttttttg ttgttgtttt aaaatattat gatttggcta cagaccaggc 4080
agggaaagag acccggtaat tggagggtga gcctcggggg gggggcagga cgccccggtt 4140
tcggcacagc ccggtcactc acggcctcgc tctcgcctca ccccggctcc tgggctttga 4200
tggtctggtg ccagtgcctg tgcccactct gtgcctgctg ggaggaggcc caggctctct 4260
ggtggccgcc cctgtgcacc tggccagggg aagcccgggg gtctggggcc tccctccgtc 4320
tgcgcccacc tttgcagaat aaactctctc ctggggtttg tctatctttg tttctctcac 4380
ctgagagaaa cgcaggtgtt ccagaggctt ccttgcagac aaagcacccc tgcacctcct 4440
atggctcagg atgagggagg cccccaggcc cttctggttg gtagtgagtg tggacagctt 4500
cccagctctt cgggtacaac cctgagcagg tcgggggaca cagggccgag gcaggccttc 4560
ggggcccctt tcgcctgctt ccgggcaggg acgaggcctg gtgtcctcgc tccacccacc 4620
cacgctgctg tcacctgagg ggaatctgct tcttaggagt gggttgagct gatagagaaa 4680
aaacggcctt cagcccaggc tgggaagcgc cttctccagg tgcctctccc tcaccagctc 4740
tgcacccctc tggggagcct tccccacctt agctgtctcc tgccccaggg agggatggag 4800
gagataattt gcttatatta aaaacaaaaa atggctgagg caggagtttg ggaccagcct 4860
gggctatata gcaagacccc atcactacaa attttttaca aattagctag gtgtggtggt 4920
gcgcacctgt ggtcccagct actcgggagg ctgtggtggg aggattgctt gagtccagga 4980
ggttgaggct gcagtcagct cagattgcac cactgcactc cagcctgggc aacagagcga 5040
gaccctgtct ccaaaaaaaa aaaaaagcaa tgtttatatt ataaaagagt gtcctaacag 5100
tccccgggct agagaggact aaggaaaaca gagagagtgt tacgcaggag caagcctttc 5160
atttccttgg tgggggaggg gggcggttgc cctggagagg gccggggtcg gggaggttgg 5220
ggggtgtcag ccaaaacgtg gaggtgtccc tctgcacgca gccctcgccc ggcgtggcgc 5280
tgacactgta ttcttatgtt gtttgaaaat gctatttata ttgtaaagaa gcgggcgggt 5340
gcccctgctg cccttgtccc ttgggggtca cacccatccc ctggtgggct cctgggcggc 5400
ctgcgcagat gggccacaga agggcaggcc ggagctgcac actctcccca cgaaggtatc 5460
tctgtgtctt actctgtgca aagacgcggc aaaacccagt gccctggttt ttccccaccc 5520
gagatgaagg atacgctgta ttttttgcct aatgtccctg cctctaggtt cataatgaat 5580
taaaggttca tgaacgctgc gaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 5640
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa 5675
<210> 52
<211> 1096
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 52
Met Gly Ser Glu Asp His Gly Ala Gln Asn Pro Ser Cys Lys Ile Met
1 5 10 15
Thr Phe Arg Pro Thr Met Glu Glu Phe Lys Asp Phe Asn Lys Tyr Val
20 25 30
Ala Tyr Ile Glu Ser Gln Gly Ala His Arg Ala Gly Leu Ala Lys Ile
35 40 45
Ile Pro Pro Lys Glu Trp Lys Pro Arg Gln Thr Tyr Asp Asp Ile Asp
50 55 60
Asp Val Val Ile Pro Ala Pro Ile Gln Gln Val Val Thr Gly Gln Ser
65 70 75 80
Gly Leu Phe Thr Gln Tyr Asn Ile Gln Lys Lys Ala Met Thr Val Gly
85 90 95
Glu Tyr Arg Arg Leu Ala Asn Ser Glu Lys Tyr Cys Thr Pro Arg His
100 105 110
Gln Asp Phe Asp Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Trp Lys Asn Leu Thr Phe
115 120 125
Val Ser Pro Ile Tyr Gly Ala Asp Ile Ser Gly Ser Leu Tyr Asp Asp
130 135 140
Asp Val Ala Gln Trp Asn Ile Gly Ser Leu Arg Thr Ile Leu Asp Met
145 150 155 160
Val Glu Arg Glu Cys Gly Thr Ile Ile Glu Gly Val Asn Thr Pro Tyr
165 170 175
Leu Tyr Phe Gly Met Trp Lys Thr Thr Phe Ala Trp His Thr Glu Asp
180 185 190
Met Asp Leu Tyr Ser Ile Asn Tyr Leu His Phe Gly Glu Pro Lys Ser
195 200 205
Trp Tyr Ala Ile Pro Pro Glu His Gly Lys Arg Leu Glu Arg Leu Ala
210 215 220
Ile Gly Phe Phe Pro Gly Ser Ser Gln Gly Cys Asp Ala Phe Leu Arg
225 230 235 240
His Lys Met Thr Leu Ile Ser Pro Ile Ile Leu Lys Lys Tyr Gly Ile
245 250 255
Pro Phe Ser Arg Ile Thr Gln Glu Ala Gly Glu Phe Met Ile Thr Phe
260 265 270
Pro Tyr Gly Tyr His Ala Gly Phe Asn His Gly Phe Asn Cys Ala Glu
275 280 285
Ser Thr Asn Phe Ala Thr Leu Arg Trp Ile Asp Tyr Gly Lys Val Ala
290 295 300
Thr Gln Cys Thr Cys Arg Lys Asp Met Val Lys Ile Ser Met Asp Val
305 310 315 320
Phe Val Arg Ile Leu Gln Pro Glu Arg Tyr Glu Leu Trp Lys Gln Gly
325 330 335
Lys Asp Leu Thr Val Leu Asp His Thr Arg Pro Thr Ala Leu Thr Ser
340 345 350
Pro Glu Leu Ser Ser Trp Ser Ala Ser Arg Ala Ser Leu Lys Ala Lys
355 360 365
Leu Leu Arg Arg Ser His Arg Lys Arg Ser Gln Pro Lys Lys Pro Lys
370 375 380
Pro Glu Asp Pro Lys Phe Pro Gly Glu Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu
385 390 395 400
Leu Glu Glu Ala Gly Gly Ser Val Lys Glu Glu Ala Gly Pro Glu Val
405 410 415
Asp Pro Glu Glu Glu Glu Glu Glu Pro Gln Pro Leu Pro His Gly Arg
420 425 430
Glu Ala Glu Gly Ala Glu Glu Asp Gly Arg Gly Lys Leu Arg Pro Thr
435 440 445
Lys Ala Lys Ser Glu Arg Lys Lys Lys Ser Phe Gly Leu Leu Pro Pro
450 455 460
Gln Leu Pro Pro Pro Pro Ala His Phe Pro Ser Glu Glu Ala Leu Trp
465 470 475 480
Leu Pro Ser Pro Leu Glu Pro Pro Val Leu Gly Pro Gly Pro Ala Ala
485 490 495
Met Glu Glu Ser Pro Leu Pro Ala Pro Leu Asn Val Val Pro Pro Glu
500 505 510
Val Pro Ser Glu Glu Leu Glu Ala Lys Pro Arg Pro Ile Ile Pro Met
515 520 525
Leu Tyr Val Val Pro Arg Pro Gly Lys Ala Ala Phe Asn Gln Glu His
530 535 540
Val Ser Cys Gln Gln Ala Phe Glu His Phe Ala Gln Lys Gly Pro Thr
545 550 555 560
Trp Lys Glu Pro Val Ser Pro Met Glu Leu Thr Gly Pro Glu Asp Gly
565 570 575
Ala Ala Ser Ser Gly Ala Gly Arg Met Glu Thr Lys Ala Arg Ala Gly
580 585 590
Glu Gly Gln Ala Pro Ser Thr Phe Ser Lys Leu Lys Met Glu Ile Lys
595 600 605
Lys Ser Arg Arg His Pro Leu Gly Arg Pro Pro Thr Arg Ser Pro Leu
610 615 620
Ser Val Val Lys Gln Glu Ala Ser Ser Asp Glu Glu Ala Ser Pro Phe
625 630 635 640
Ser Gly Glu Glu Asp Val Ser Asp Pro Asp Ala Leu Arg Pro Leu Leu
645 650 655
Ser Leu Gln Trp Lys Asn Arg Ala Ala Ser Phe Gln Ala Glu Arg Lys
660 665 670
Phe Asn Ala Ala Ala Ala Arg Thr Glu Pro Tyr Cys Ala Ile Cys Thr
675 680 685
Leu Phe Tyr Pro Tyr Cys Gln Ala Leu Gln Thr Glu Lys Glu Ala Pro
690 695 700
Ile Ala Ser Leu Gly Glu Gly Cys Pro Ala Thr Leu Pro Ser Lys Ser
705 710 715 720
Arg Gln Lys Thr Arg Pro Leu Ile Pro Glu Met Cys Phe Thr Ser Gly
725 730 735
Gly Glu Asn Thr Glu Pro Leu Pro Ala Asn Ser Tyr Ile Gly Asp Asp
740 745 750
Gly Thr Ser Pro Leu Ile Ala Cys Gly Lys Cys Cys Leu Gln Val His
755 760 765
Ala Ser Cys Tyr Gly Ile Arg Pro Glu Leu Val Asn Glu Gly Trp Thr
770 775 780
Cys Ser Arg Cys Ala Ala His Ala Trp Thr Ala Glu Cys Cys Leu Cys
785 790 795 800
Asn Leu Arg Gly Gly Ala Leu Gln Met Thr Thr Asp Arg Arg Trp Ile
805 810 815
His Val Ile Cys Ala Ile Ala Val Pro Glu Ala Arg Phe Leu Asn Val
820 825 830
Ile Glu Arg His Pro Val Asp Ile Ser Ala Ile Pro Glu Gln Arg Trp
835 840 845
Lys Leu Lys Cys Val Tyr Cys Arg Lys Arg Met Lys Lys Val Ser Gly
850 855 860
Ala Cys Ile Gln Cys Ser Tyr Glu His Cys Ser Thr Ser Phe His Val
865 870 875 880
Thr Cys Ala His Ala Ala Gly Val Leu Met Glu Pro Asp Asp Trp Pro
885 890 895
Tyr Val Val Ser Ile Thr Cys Leu Lys His Lys Ser Gly Gly His Ala
900 905 910
Val Gln Leu Leu Arg Ala Val Ser Leu Gly Gln Val Val Ile Thr Lys
915 920 925
Asn Arg Asn Gly Leu Tyr Tyr Arg Cys Arg Val Ile Gly Ala Ala Ser
930 935 940
Gln Thr Cys Tyr Glu Val Asn Phe Asp Asp Gly Ser Tyr Ser Asp Asn
945 950 955 960
Leu Tyr Pro Glu Ser Ile Thr Ser Arg Asp Cys Val Gln Leu Gly Pro
965 970 975
Pro Ser Glu Gly Glu Leu Val Glu Leu Arg Trp Thr Asp Gly Asn Leu
980 985 990
Tyr Lys Ala Lys Phe Ile Ser Ser Val Thr Ser His Ile Tyr Gln Val
995 1000 1005
Glu Phe Glu Asp Gly Ser Gln Leu Thr Val Lys Arg Gly Asp Ile
1010 1015 1020
Phe Thr Leu Glu Glu Glu Leu Pro Lys Arg Val Arg Ser Arg Leu
1025 1030 1035
Ser Leu Ser Thr Gly Ala Pro Gln Glu Pro Ala Phe Ser Gly Glu
1040 1045 1050
Glu Ala Lys Ala Ala Lys Arg Pro Arg Val Gly Thr Pro Leu Ala
1055 1060 1065
Thr Glu Asp Ser Gly Arg Ser Gln Asp Tyr Val Ala Phe Val Glu
1070 1075 1080
Ser Leu Leu Gln Val Gln Gly Arg Pro Gly Ala Pro Phe
1085 1090 1095
<210> 53
<211> 4687
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 53
gccataggtg cgcgtcggcg cccaggagga cgtgtggcgc gtggactaca tcaggtccag 60
ccctgcggga ccccagccag cgcttccggg caaggttctg tgcacctgtt ttctccttct 120
acgcgagtat ctttcccctc cggaaagaat gggatatgcc tgtgtccaaa ggacaagaag 180
atgcgcgcca gcaagcctaa gttaaccaca gcgcggaagt tgagcccaaa gcaagagcgt 240
gccgggcacc tttaagctgt ttgtaagccc acgtgactca ccaagtgcgg gccccagcgg 300
tcacgtgacg gcgcgcgcgc cctcgcgcag ggagagccgg cggtgcgcgc gccttcgccg 360
ctgcctccca cccaccccct cgacgggagg gtgaggcgcg gcgcagtgat cgggcggccg 420
gggtcctgtg cgcgtgcgca gcgaacagct gtcacctagt gcggaacaag tctcccaaat 480
ttcccaaatc tccctgggcc ggaggccact gtcttctctt cctcctccac cgagtcgtgc 540
tctcgcccca acccgcgcgc cagacactgc cctaaccatc atggaggtgg ccgaggtgga 600
aagtcctctg aaccccagct gtaagataat gaccttcaga ccctccatgg aggagttccg 660
ggagttcaac aaataccttg catacatgga gtctaaagga gcccatcgtg cgggtcttgc 720
aaaggtgatt cctcctaagg agtggaagcc aagacagtgc tatgatgaca ttgataattt 780
gctcattcca gcaccaattc agcagatggt cacagggcag tcaggactgt tcactcagta 840
caacatccag aaaaaagcga tgactgtgaa ggagttcagg cagctggcca acagtggcaa 900
atattgtact ccaagatact tggattacga agatttggag cgcaagtact ggaagaactt 960
aacttttgtg gcacctatct atggtgcaga tattaatggg agcatatatg atgagggtgt 1020
ggatgaatgg aacatagctc gcctcaatac agtcttggat gtggttgaag aagagtgtgg 1080
catttctatt gagggtgtaa ataccccata tctctatttt ggcatgtgga agaccacgtt 1140
tgcatggcac accgaagaca tggacctcta tagcattaat tatctccact ttggagagcc 1200
caagtcttgg tatgctatac ctccggagca tggaaaacga cttgaaagac tagctcaagg 1260
ttttttccca agcagctccc aagggtgtga tgcatttctt cgccacaaga tgacattgat 1320
ttctccatca gtattgaaga aatatggtat tccctttgac aagataaccc aggaggctgg 1380
agaattcatg atcactttcc catatggcta ccatgctggt tttaatcatg gtttcaactg 1440
tgcagaatct acaaattttg ctactgtcag atggattgac tatggaaaag ttgccaaatt 1500
gtgcacttgc aggaaagaca tggtgaagat ttcaatggat atctttgtga ggaaatttca 1560
gccagacaga tatcagcttt ggaaacaagg aaaggatata tacaccattg atcacacgaa 1620
gcctactcca gcatccaccc ctgaagtaaa agcatggctg cagaggagga ggaaagtaag 1680
aaaagcatcc cgaagcttcc agtgtgctag gtctacctct aaaaggccta aggctgatga 1740
ggaagaggaa gtgtcagatg aagtcgatgg ggcagaggtc cctaaccccg actcagtcac 1800
agatgacctc aaggtcagtg aaaagtcaga agcagcagtg aagctgagga acacagaagc 1860
atcttcagaa gaagagtcat ctgctagcag gatgcaggtg gagcagaatt tatcagatca 1920
tatcaaactc tcaggaaaca gctgcttaag tacatctgta acagaagaca taaaaactga 1980
ggatgacaaa gcttatgcat atagaagtgt accttctata tccagtgagg ctgatgattc 2040
cattccattg tctagtggct atgagaagcc cgagaaatca gacccatccg agctttcatg 2100
gccaaagtca cctgagtcat gctcatcagt ggcagagagt aatggtgtgt taacagaggg 2160
agaagagagt gatgtggaga gccatgggaa tggccttgaa cctggggaaa tcccagcggt 2220
ccccagtgga gagagaaata gcttcaaagt ccccagtata gcagagggag agaacaaaac 2280
ctctaagagt tggcgccatc cacttagcag gcctccagca agatctccga tgactcttgt 2340
gaagcagcag gcgccaagtg atgaagaatt gcctgaggtt ctgtccattg aggaggaagt 2400
ggaagaaaca gagtcttggg cgaaacctct catccacctt tggcagacga agtcccctaa 2460
cttcgcagct gagcaagagt ataatgcaac agtggccagg atgaagccac actgtgccat 2520
ctgcactctg ctcatgccgt accacaagcc agatagcagc aatgaagaaa atgatgctag 2580
atgggagaca aaattagatg aagtcgttac atcggaggga aagactaagc ccctcatacc 2640
agagatgtgt tttatttata gtgaagaaaa tatagaatat tctccaccca atgccttcct 2700
tgaagaggat ggaacaagtc tccttatttc ctgtgcaaag tgctgcgtac gggttcatgc 2760
aagttgttat ggtattcctt ctcatgagat ctgtgatgga tggctgtgtg cccggtgcaa 2820
aagaaatgcg tggacagcag aatgctgtct ctgcaatttg agaggaggtg ctcttaagca 2880
aacgaagaac aataagtggg cccatgtcat gtgcgccgtt gcggtcccag aagttcgatt 2940
cactaatgtc ccagaaagga cacaaataga tgtaggcaga atacctttac agaggttaaa 3000
attgaaatgc atcttctgca gacaccgggt taagagggtc tctggagcct gcatccagtg 3060
ttcctacggt cgctgcccgg cctccttcca tgtcacttgt gcccatgctg ctggggtact 3120
gatggagcct gatgactggc cttatgtggt gaacattaca tgctttcgac ataaggtcaa 3180
ccccaacgtg aagtccaagg cttgcgagaa ggtcatttcc gtgggtcaaa cggtcatcac 3240
gaagcatcgg aacacccggt attacagttg cagagtgatg gctgtgacat cgcagacctt 3300
ctatgaggtc atgtttgatg atggctcctt tagcagagac acatttcctg aggatatcgt 3360
gagccgagac tgtctgaagc tgggcccacc tgctgaggga gaagtcgtcc aagtcaagtg 3420
gcccgatggc aaactctatg gagcaaaata ttttggatca aatattgccc acatgtacca 3480
ggttgagttt gaagatggat cccagatagc aatgaagaga gaggacatct acactttaga 3540
tgaagagtta cccaagagag tgaaagctcg attttccaca gcctctgaca tgcgatttga 3600
agacacgttt tatggagcag acattatcca aggggagaga aagagacaaa gagtgctgag 3660
ctccaggttt aagaatgaat atgtggccga ccctgtatac cgcacttttt tgaagagctc 3720
tttccagaag aagtgccaga agagacagta gtctgcatac atcgctgcag gccacagagc 3780
agcttgggtt ggaagagaga agatgaaggg acatccttgg ggctgtgccg tgagttttgc 3840
tggcataggt gacagggtgt gtctctgaca gtggtaaatc gggtttccag agtttggtca 3900
ccaaaaatac aaaatacacc caatgaattg gacgcagcaa tctgaaatca tctctagtct 3960
tgctttcact tgtgagcagt tgtcttctat gatcccaaag aagttttcta agtgaaagga 4020
aatactagtg aatcacccac aaggaaaagc cactgccaca gaggaggcgg gtccccttgt 4080
gcggcttagg gccctgtcag gaaacacacg gggacctctc tctctagctc cagcaggtgg 4140
cacctcggta cccagcgggt agggcgataa tttatatatt ttccacagtc agggaaggac 4200
tctcacttat ttgtttcaaa ttgcagtttt tataaaacat ttttaaaaca caaatggcat 4260
gtatgctaat gagatttacc cgtgtgctat ctgtatttcc cttgtacaga acttttacat 4320
ttttgaatat tcctattact tttgattgtg tctgatggga actgagttgt tggcctttgt 4380
gaaatgaaat ttttggctct tgagaaagaa ttcttatgaa ttgttatgcg aattttatat 4440
atttaaagag ggagatctgg ggctgttatt tttaaacact ttttttcata atacatattc 4500
cgagtagata tttataaaat atatgtttct ttcattatgt gtttgtaaaa ttagagttta 4560
aataaatatg ctttgatgca tagttttgaa ctaatgtaac atgatttttc ttttttaaaa 4620
cagcctgaaa atgtactagt gtttaaaaat aaagatttcc attttctcca aaaaaaaaaa 4680
aaaaaaa 4687
<210> 54
<211> 1056
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 54
Met Glu Val Ala Glu Val Glu Ser Pro Leu Asn Pro Ser Cys Lys Ile
1 5 10 15
Met Thr Phe Arg Pro Ser Met Glu Glu Phe Arg Glu Phe Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Ala Tyr Met Glu Ser Lys Gly Ala His Arg Ala Gly Leu Ala Lys
35 40 45
Val Ile Pro Pro Lys Glu Trp Lys Pro Arg Gln Cys Tyr Asp Asp Ile
50 55 60
Asp Asn Leu Leu Ile Pro Ala Pro Ile Gln Gln Met Val Thr Gly Gln
65 70 75 80
Ser Gly Leu Phe Thr Gln Tyr Asn Ile Gln Lys Lys Ala Met Thr Val
85 90 95
Lys Glu Phe Arg Gln Leu Ala Asn Ser Gly Lys Tyr Cys Thr Pro Arg
100 105 110
Tyr Leu Asp Tyr Glu Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Trp Lys Asn Leu Thr
115 120 125
Phe Val Ala Pro Ile Tyr Gly Ala Asp Ile Asn Gly Ser Ile Tyr Asp
130 135 140
Glu Gly Val Asp Glu Trp Asn Ile Ala Arg Leu Asn Thr Val Leu Asp
145 150 155 160
Val Val Glu Glu Glu Cys Gly Ile Ser Ile Glu Gly Val Asn Thr Pro
165 170 175
Tyr Leu Tyr Phe Gly Met Trp Lys Thr Thr Phe Ala Trp His Thr Glu
180 185 190
Asp Met Asp Leu Tyr Ser Ile Asn Tyr Leu His Phe Gly Glu Pro Lys
195 200 205
Ser Trp Tyr Ala Ile Pro Pro Glu His Gly Lys Arg Leu Glu Arg Leu
210 215 220
Ala Gln Gly Phe Phe Pro Ser Ser Ser Gln Gly Cys Asp Ala Phe Leu
225 230 235 240
Arg His Lys Met Thr Leu Ile Ser Pro Ser Val Leu Lys Lys Tyr Gly
245 250 255
Ile Pro Phe Asp Lys Ile Thr Gln Glu Ala Gly Glu Phe Met Ile Thr
260 265 270
Phe Pro Tyr Gly Tyr His Ala Gly Phe Asn His Gly Phe Asn Cys Ala
275 280 285
Glu Ser Thr Asn Phe Ala Thr Val Arg Trp Ile Asp Tyr Gly Lys Val
290 295 300
Ala Lys Leu Cys Thr Cys Arg Lys Asp Met Val Lys Ile Ser Met Asp
305 310 315 320
Ile Phe Val Arg Lys Phe Gln Pro Asp Arg Tyr Gln Leu Trp Lys Gln
325 330 335
Gly Lys Asp Ile Tyr Thr Ile Asp His Thr Lys Pro Thr Pro Ala Ser
340 345 350
Thr Pro Glu Val Lys Ala Trp Leu Gln Arg Arg Arg Lys Val Arg Lys
355 360 365
Ala Ser Arg Ser Phe Gln Cys Ala Arg Ser Thr Ser Lys Arg Pro Lys
370 375 380
Ala Asp Glu Glu Glu Glu Val Ser Asp Glu Val Asp Gly Ala Glu Val
385 390 395 400
Pro Asn Pro Asp Ser Val Thr Asp Asp Leu Lys Val Ser Glu Lys Ser
405 410 415
Glu Ala Ala Val Lys Leu Arg Asn Thr Glu Ala Ser Ser Glu Glu Glu
420 425 430
Ser Ser Ala Ser Arg Met Gln Val Glu Gln Asn Leu Ser Asp His Ile
435 440 445
Lys Leu Ser Gly Asn Ser Cys Leu Ser Thr Ser Val Thr Glu Asp Ile
450 455 460
Lys Thr Glu Asp Asp Lys Ala Tyr Ala Tyr Arg Ser Val Pro Ser Ile
465 470 475 480
Ser Ser Glu Ala Asp Asp Ser Ile Pro Leu Ser Ser Gly Tyr Glu Lys
485 490 495
Pro Glu Lys Ser Asp Pro Ser Glu Leu Ser Trp Pro Lys Ser Pro Glu
500 505 510
Ser Cys Ser Ser Val Ala Glu Ser Asn Gly Val Leu Thr Glu Gly Glu
515 520 525
Glu Ser Asp Val Glu Ser His Gly Asn Gly Leu Glu Pro Gly Glu Ile
530 535 540
Pro Ala Val Pro Ser Gly Glu Arg Asn Ser Phe Lys Val Pro Ser Ile
545 550 555 560
Ala Glu Gly Glu Asn Lys Thr Ser Lys Ser Trp Arg His Pro Leu Ser
565 570 575
Arg Pro Pro Ala Arg Ser Pro Met Thr Leu Val Lys Gln Gln Ala Pro
580 585 590
Ser Asp Glu Glu Leu Pro Glu Val Leu Ser Ile Glu Glu Glu Val Glu
595 600 605
Glu Thr Glu Ser Trp Ala Lys Pro Leu Ile His Leu Trp Gln Thr Lys
610 615 620
Ser Pro Asn Phe Ala Ala Glu Gln Glu Tyr Asn Ala Thr Val Ala Arg
625 630 635 640
Met Lys Pro His Cys Ala Ile Cys Thr Leu Leu Met Pro Tyr His Lys
645 650 655
Pro Asp Ser Ser Asn Glu Glu Asn Asp Ala Arg Trp Glu Thr Lys Leu
660 665 670
Asp Glu Val Val Thr Ser Glu Gly Lys Thr Lys Pro Leu Ile Pro Glu
675 680 685
Met Cys Phe Ile Tyr Ser Glu Glu Asn Ile Glu Tyr Ser Pro Pro Asn
690 695 700
Ala Phe Leu Glu Glu Asp Gly Thr Ser Leu Leu Ile Ser Cys Ala Lys
705 710 715 720
Cys Cys Val Arg Val His Ala Ser Cys Tyr Gly Ile Pro Ser His Glu
725 730 735
Ile Cys Asp Gly Trp Leu Cys Ala Arg Cys Lys Arg Asn Ala Trp Thr
740 745 750
Ala Glu Cys Cys Leu Cys Asn Leu Arg Gly Gly Ala Leu Lys Gln Thr
755 760 765
Lys Asn Asn Lys Trp Ala His Val Met Cys Ala Val Ala Val Pro Glu
770 775 780
Val Arg Phe Thr Asn Val Pro Glu Arg Thr Gln Ile Asp Val Gly Arg
785 790 795 800
Ile Pro Leu Gln Arg Leu Lys Leu Lys Cys Ile Phe Cys Arg His Arg
805 810 815
Val Lys Arg Val Ser Gly Ala Cys Ile Gln Cys Ser Tyr Gly Arg Cys
820 825 830
Pro Ala Ser Phe His Val Thr Cys Ala His Ala Ala Gly Val Leu Met
835 840 845
Glu Pro Asp Asp Trp Pro Tyr Val Val Asn Ile Thr Cys Phe Arg His
850 855 860
Lys Val Asn Pro Asn Val Lys Ser Lys Ala Cys Glu Lys Val Ile Ser
865 870 875 880
Val Gly Gln Thr Val Ile Thr Lys His Arg Asn Thr Arg Tyr Tyr Ser
885 890 895
Cys Arg Val Met Ala Val Thr Ser Gln Thr Phe Tyr Glu Val Met Phe
900 905 910
Asp Asp Gly Ser Phe Ser Arg Asp Thr Phe Pro Glu Asp Ile Val Ser
915 920 925
Arg Asp Cys Leu Lys Leu Gly Pro Pro Ala Glu Gly Glu Val Val Gln
930 935 940
Val Lys Trp Pro Asp Gly Lys Leu Tyr Gly Ala Lys Tyr Phe Gly Ser
945 950 955 960
Asn Ile Ala His Met Tyr Gln Val Glu Phe Glu Asp Gly Ser Gln Ile
965 970 975
Ala Met Lys Arg Glu Asp Ile Tyr Thr Leu Asp Glu Glu Leu Pro Lys
980 985 990
Arg Val Lys Ala Arg Phe Ser Thr Ala Ser Asp Met Arg Phe Glu Asp
995 1000 1005
Thr Phe Tyr Gly Ala Asp Ile Ile Gln Gly Glu Arg Lys Arg Gln
1010 1015 1020
Arg Val Leu Ser Ser Arg Phe Lys Asn Glu Tyr Val Ala Asp Pro
1025 1030 1035
Val Tyr Arg Thr Phe Leu Lys Ser Ser Phe Gln Lys Lys Cys Gln
1040 1045 1050
Lys Arg Gln
1055
<210> 55
<211> 523
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 55
Met Glu Thr Met Lys Ser Lys Ala Asn Cys Ala Gln Asn Pro Asn Cys
1 5 10 15
Asn Ile Met Ile Phe His Pro Thr Lys Glu Glu Phe Asn Asp Phe Asp
20 25 30
Lys Tyr Ile Ala Tyr Met Glu Ser Gln Gly Ala His Arg Ala Gly Leu
35 40 45
Ala Lys Ile Ile Pro Pro Lys Glu Trp Lys Ala Arg Glu Thr Tyr Asp
50 55 60
Asn Ile Ser Glu Ile Leu Ile Ala Thr Pro Leu Gln Gln Val Ala Ser
65 70 75 80
Gly Arg Ala Gly Val Phe Thr Gln Tyr His Lys Lys Lys Lys Ala Met
85 90 95
Thr Val Gly Glu Tyr Arg His Leu Ala Asn Ser Lys Lys Tyr Gln Thr
100 105 110
Pro Pro His Gln Asn Phe Glu Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Trp Lys Asn
115 120 125
Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Ile Tyr Gly Ala Asp Ile Ser Gly Ser Leu
130 135 140
Phe Asp Glu Asn Thr Lys Gln Trp Asn Leu Gly His Leu Gly Thr Ile
145 150 155 160
Gln Asp Leu Leu Glu Lys Glu Cys Gly Val Val Ile Glu Gly Val Asn
165 170 175
Thr Pro Tyr Leu Tyr Phe Gly Met Trp Lys Thr Thr Phe Ala Trp His
180 185 190
Thr Glu Asp Met Asp Leu Tyr Ser Ile Asn Tyr Leu His Leu Gly Glu
195 200 205
Pro Lys Thr Trp Tyr Val Val Pro Pro Glu His Gly Gln Arg Leu Glu
210 215 220
Arg Leu Ala Arg Glu Leu Phe Pro Gly Ser Ser Arg Gly Cys Gly Ala
225 230 235 240
Phe Leu Arg His Lys Val Ala Leu Ile Ser Pro Thr Val Leu Lys Glu
245 250 255
Asn Gly Ile Pro Phe Asn Arg Ile Thr Gln Glu Ala Gly Glu Phe Met
260 265 270
Val Thr Phe Pro Tyr Gly Tyr His Ala Gly Phe Asn His Gly Phe Asn
275 280 285
Cys Ala Glu Ala Ile Asn Phe Ala Thr Pro Arg Trp Ile Asp Tyr Gly
290 295 300
Lys Met Ala Ser Gln Cys Ser Cys Gly Glu Ala Arg Val Thr Phe Ser
305 310 315 320
Met Asp Ala Phe Val Arg Ile Leu Gln Pro Glu Arg Tyr Asp Leu Trp
325 330 335
Lys Arg Gly Gln Asp Arg Ala Val Val Asp His Met Glu Pro Arg Val
340 345 350
Pro Ala Ser Gln Glu Leu Ser Thr Gln Lys Glu Val Gln Leu Pro Arg
355 360 365
Arg Ala Ala Leu Gly Leu Arg Gln Leu Pro Ser His Trp Ala Arg His
370 375 380
Ser Pro Trp Pro Met Ala Ala Arg Ser Gly Thr Arg Cys His Thr Leu
385 390 395 400
Val Cys Ser Ser Leu Pro Arg Arg Ser Ala Val Ser Gly Thr Ala Thr
405 410 415
Gln Pro Arg Ala Ala Ala Val His Ser Ser Lys Lys Pro Ser Ser Thr
420 425 430
Pro Ser Ser Thr Pro Gly Pro Ser Ala Gln Ile Ile His Pro Ser Asn
435 440 445
Gly Arg Arg Gly Arg Gly Arg Pro Pro Gln Lys Leu Arg Ala Gln Glu
450 455 460
Leu Thr Leu Gln Thr Pro Ala Lys Arg Pro Leu Leu Ala Gly Thr Thr
465 470 475 480
Cys Thr Ala Ser Gly Pro Glu Pro Glu Pro Leu Pro Glu Asp Gly Ala
485 490 495
Leu Met Asp Lys Pro Val Pro Leu Ser Pro Gly Leu Gln His Pro Val
500 505 510
Lys Ala Ser Gly Cys Ser Trp Ala Pro Val Pro
515 520
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 56
catggccttc cgtgttccta 20
<210> 57
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 57
gcctgcttca ccaccttctt 20
<210> 58
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 58
tgtgatgcca ggcacttggt 20
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 59
tgggctccac ctttgtggtt 20
<210> 60
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 60
ttggagtcca ggcagagtg 19
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 61
cactgtcatc ggggcttgtg 20
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 62
tttctggttg gctgtgactg 20
<210> 63
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
primer
<400> 63
gagttagggt tgacttggcc 20
<210> 64
<211> 423
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 64
Met Glu Thr Met Lys Ser Lys Ala Asn Cys Ala Gln Asn Pro Asn Cys
1 5 10 15
Asn Ile Met Ile Phe His Pro Thr Lys Glu Glu Phe Asn Asp Phe Asp
20 25 30
Lys Tyr Ile Ala Tyr Met Glu Ser Gln Gly Ala His Arg Ala Gly Leu
35 40 45
Ala Lys Ile Ile Pro Pro Lys Glu Trp Lys Ala Arg Glu Thr Tyr Asp
50 55 60
Asn Ile Ser Glu Ile Leu Ile Ala Thr Pro Leu Gln Gln Val Ala Ser
65 70 75 80
Gly Arg Ala Gly Val Phe Thr Gln Tyr His Lys Lys Lys Lys Ala Met
85 90 95
Thr Val Gly Glu Tyr Arg His Leu Ala Asn Ser Lys Lys Tyr Gln Thr
100 105 110
Pro Pro His Gln Asn Phe Glu Asp Leu Glu Arg Lys Tyr Trp Lys Asn
115 120 125
Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Ile Tyr Gly Ala Asp Ile Ser Gly Ser Leu
130 135 140
Phe Asp Glu Asn Thr Lys Gln Trp Asn Leu Gly His Leu Gly Thr Ile
145 150 155 160
Gln Asp Leu Leu Glu Lys Glu Cys Gly Val Val Ile Glu Gly Val Asn
165 170 175
Thr Pro Tyr Leu Tyr Phe Gly Met Trp Lys Thr Thr Phe Ala Trp His
180 185 190
Thr Glu Asp Met Asp Leu Tyr Ser Ile Asn Tyr Leu His Leu Gly Glu
195 200 205
Pro Lys Thr Trp Tyr Val Val Pro Pro Glu His Gly Gln Arg Leu Glu
210 215 220
Arg Leu Ala Arg Glu Leu Phe Pro Gly Ser Ser Arg Gly Cys Gly Ala
225 230 235 240
Phe Leu Arg His Lys Val Ala Leu Ile Ser Pro Thr Val Leu Lys Glu
245 250 255
Asn Gly Ile Pro Phe Asn Arg Ile Thr Gln Glu Ala Gly Glu Phe Met
260 265 270
Val Thr Phe Pro Tyr Gly Tyr His Ala Gly Phe Asn His Gly Phe Asn
275 280 285
Cys Ala Glu Ala Ile Asn Phe Ala Thr Pro Arg Trp Ile Asp Tyr Gly
290 295 300
Lys Met Ala Ser Gln Cys Ser Cys Gly Glu Ala Arg Val Thr Phe Ser
305 310 315 320
Met Asp Ala Phe Val Arg Ile Leu Gln Pro Glu Arg Tyr Asp Leu Trp
325 330 335
Lys Arg Gly Gln Asp Arg Ala Val Val Asp His Met Glu Pro Arg Val
340 345 350
Pro Ala Ser Gln Glu Leu Ser Thr Gln Lys Glu Val Gln Leu Pro Arg
355 360 365
Arg Ala Ala Leu Gly Leu Arg Gln Leu Pro Ser His Trp Ala Arg His
370 375 380
Ser Pro Trp Pro Met Ala Ala Arg Ser Gly Thr Arg Cys His Thr Leu
385 390 395 400
Val Cys Ser Ser Leu Pro Arg Arg Ser Ala Val Ser Gly Thr Ala Thr
405 410 415
Gln Pro Arg Ala Ala Ala Val
420
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic
peptide
<400> 65
Gly Gly Gly Gly Cys
1 5
Claims (1)
- この出願の明細書に記載された発明。
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201462050308P | 2014-09-15 | 2014-09-15 | |
US62/050,308 | 2014-09-15 | ||
US201462053514P | 2014-09-22 | 2014-09-22 | |
US62/053,514 | 2014-09-22 | ||
JP2021023834A JP7277494B2 (ja) | 2014-09-15 | 2021-02-18 | ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021023834A Division JP7277494B2 (ja) | 2014-09-15 | 2021-02-18 | ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023026679A true JP2023026679A (ja) | 2023-02-24 |
JP2023026679A5 JP2023026679A5 (ja) | 2023-03-09 |
Family
ID=55534004
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017514421A Active JP6841753B2 (ja) | 2014-09-15 | 2015-09-15 | ヒストンh3−リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
JP2021023834A Active JP7277494B2 (ja) | 2014-09-15 | 2021-02-18 | ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
JP2023001284A Pending JP2023026679A (ja) | 2014-09-15 | 2023-01-06 | ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2017514421A Active JP6841753B2 (ja) | 2014-09-15 | 2015-09-15 | ヒストンh3−リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
JP2021023834A Active JP7277494B2 (ja) | 2014-09-15 | 2021-02-18 | ヒストンh3-リジントリメチル化を除去することによって体細胞核移入(scnt)効率を増加させるための方法および組成物 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US11390885B2 (ja) |
EP (1) | EP3194581A4 (ja) |
JP (3) | JP6841753B2 (ja) |
KR (2) | KR102473092B1 (ja) |
WO (1) | WO2016044271A2 (ja) |
Families Citing this family (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2016044271A2 (en) | 2014-09-15 | 2016-03-24 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions to increase somatic cell nuclear transfer (scnt) efficiency by removing histone h3-lysine trimethylation |
CN106591374B (zh) * | 2016-12-30 | 2019-08-09 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种提高猪体细胞核移植胚胎发育效率的方法 |
CN106676136B (zh) * | 2016-12-30 | 2019-11-29 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种提高猪体细胞核移植效率的方法 |
CN107299113A (zh) * | 2017-06-12 | 2017-10-27 | 内蒙古大学 | H3K27me3及其去甲基化酶KDM6A/B在小鼠核移植重构胚中的应用方法 |
CN108285906B (zh) * | 2017-12-29 | 2021-07-09 | 温氏食品集团股份有限公司 | 一种定点整合外源dna转基因猪的构建方法 |
CN108624621B (zh) * | 2018-01-17 | 2019-04-12 | 中国科学院上海生命科学研究院 | 非人灵长类的体细胞克隆动物的制备方法 |
WO2019147026A1 (ko) * | 2018-01-23 | 2019-08-01 | 차의과학대학교 산학협력단 | 멜라토닌을 포함하는, 배아 발달용 조성물 및 이를 이용하여 배아 발달의 효율을 향상시키는 방법 |
WO2019147025A1 (ko) * | 2018-01-23 | 2019-08-01 | 차의과학대학교 산학협력단 | Rad51 활성화제를 포함하는, 배아 발달용 조성물 및 이를 이용하여 배아 발달률을 향상시키는 방법 |
CA3096274A1 (en) * | 2018-04-06 | 2019-10-10 | Children's Medical Center Corporation | Compositions and methods for somatic cell reprogramming and modulating imprinting |
CN110547291A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-10 | 安徽医科大学 | 一种高效抗氧化的人卵母细胞冷冻保护剂 |
CN111466367B (zh) * | 2020-02-17 | 2022-03-01 | 天津大学 | 用于保存细胞的组合物 |
KR102520268B1 (ko) * | 2020-12-04 | 2023-04-12 | 대한민국 | microRNA-148a 직접 주입을 통한 돼지 체세포 핵치환란의 발달율 향상 방법 |
CN113186152B (zh) * | 2021-05-19 | 2023-05-26 | 南方医科大学 | Dna甲基转移酶抑制剂在提高动物圆形精子注射胚胎发育效率中的应用 |
Family Cites Families (121)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3687808A (en) | 1969-08-14 | 1972-08-29 | Univ Leland Stanford Junior | Synthetic polynucleotides |
US4469863A (en) | 1980-11-12 | 1984-09-04 | Ts O Paul O P | Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof |
US5023243A (en) | 1981-10-23 | 1991-06-11 | Molecular Biosystems, Inc. | Oligonucleotide therapeutic agent and method of making same |
US4441972A (en) | 1983-04-08 | 1984-04-10 | D.E.P. Systems, Inc. | Apparatus for electrofusion of biological particles |
US4664097A (en) | 1984-05-09 | 1987-05-12 | The Wistar Institute Of Anatomy & Biology | Nuclear transplantation in the mammalian embryo by microsurgery and cell fusion |
US4578168A (en) | 1984-07-27 | 1986-03-25 | Biotronics | Apparatus for fusing live cells with electric fields |
IL73883A (en) | 1984-12-20 | 1990-12-23 | Yeda Res & Dev | Monoclonal antibodies against tnf-alpha,hybridomas producing them and method for the purification of tnf-alpha |
DE3687030T2 (de) | 1985-03-15 | 1993-03-11 | James Summerton | Stereoregulare polynukleotiden bindende polymere. |
US5235033A (en) | 1985-03-15 | 1993-08-10 | Anti-Gene Development Group | Alpha-morpholino ribonucleoside derivatives and polymers thereof |
US4994384A (en) | 1986-12-31 | 1991-02-19 | W. R. Grace & Co.-Conn. | Multiplying bovine embryos |
US5057420A (en) | 1987-06-05 | 1991-10-15 | Granada Biosciences, Inc. | Bovine nuclear transplantation |
US5213979A (en) | 1987-12-30 | 1993-05-25 | W. R. Grace & Co.-Conn. | In vitro culture of bovine embryos |
US6436701B1 (en) | 1988-09-21 | 2002-08-20 | Babraham Institute | Derivation of pluripotential embryonic cell lines from ungulate species |
US4944384A (en) | 1989-01-30 | 1990-07-31 | Hay & Forage Industries | Trash discharge apparatus for crop transferring conveyor mechanism |
US5256775A (en) | 1989-06-05 | 1993-10-26 | Gilead Sciences, Inc. | Exonuclease-resistant oligonucleotides |
US5580774A (en) | 1989-07-31 | 1996-12-03 | Eli Lilly And Company | Chimeric antibodies directed against a human glycoprotein antigen |
US5264562A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
EP0942000B1 (en) | 1989-10-24 | 2004-06-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 2'-Modified oligonucleotides |
US5264564A (en) | 1989-10-24 | 1993-11-23 | Gilead Sciences | Oligonucleotide analogs with novel linkages |
DK0747485T3 (da) | 1989-11-06 | 1999-08-16 | Cell Genesys Inc | Fremstilling af proteiner ved anvendelse af homolog rekombination |
US5177198A (en) | 1989-11-30 | 1993-01-05 | University Of N.C. At Chapel Hill | Process for preparing oligoribonucleoside and oligodeoxyribonucleoside boranophosphates |
US5223168A (en) | 1989-12-12 | 1993-06-29 | Gary Holt | Surface cleaner and treatment |
US5130302A (en) | 1989-12-20 | 1992-07-14 | Boron Bilogicals, Inc. | Boronated nucleoside, nucleotide and oligonucleotide compounds, compositions and methods for using same |
EP0779362B2 (en) | 1989-12-22 | 2012-06-13 | Laboratoires Serono SA | DNA constructs for endogenous gene activation and expression modification |
US5272071A (en) | 1989-12-22 | 1993-12-21 | Applied Research Systems Ars Holding N.V. | Method for the modification of the expression characteristics of an endogenous gene of a given cell line |
US5212295A (en) | 1990-01-11 | 1993-05-18 | Isis Pharmaceuticals | Monomers for preparation of oligonucleotides having chiral phosphorus linkages |
US5506351A (en) | 1992-07-23 | 1996-04-09 | Isis Pharmaceuticals | Process for the preparation of 2'-O-alkyl guanosine and related compounds |
US5459255A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | N-2 substituted purines |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5457191A (en) | 1990-01-11 | 1995-10-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5587470A (en) | 1990-01-11 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 3-deazapurines |
US5578718A (en) | 1990-01-11 | 1996-11-26 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Thiol-derivatized nucleosides |
US5149797A (en) | 1990-02-15 | 1992-09-22 | The Worcester Foundation For Experimental Biology | Method of site-specific alteration of rna and production of encoded polypeptides |
WO1992001040A1 (en) | 1990-07-09 | 1992-01-23 | Amrad Corporation Limited | Enhanced implantation, development and maintenance of embryos using leukaemia inhibitory factor |
US5096822A (en) | 1990-07-26 | 1992-03-17 | W. R. Grace & Co.- Conn. | Bovine embryo medium |
US5608046A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Conjugated 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5610289A (en) | 1990-07-27 | 1997-03-11 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogues |
US5218105A (en) | 1990-07-27 | 1993-06-08 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5223618A (en) | 1990-08-13 | 1993-06-29 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | 4'-desmethyl nucleoside analog compounds |
US5378825A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5623070A (en) | 1990-07-27 | 1997-04-22 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Heteroatomic oligonucleoside linkages |
ATE154246T1 (de) | 1990-07-27 | 1997-06-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Nuklease resistente, pyrimidin modifizierte oligonukleotide, die die gen-expression detektieren und modulieren |
US5541307A (en) | 1990-07-27 | 1996-07-30 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs and solid phase synthesis thereof |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
US5386023A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-31 | Isis Pharmaceuticals | Backbone modified oligonucleotide analogs and preparation thereof through reductive coupling |
US5138045A (en) | 1990-07-27 | 1992-08-11 | Isis Pharmaceuticals | Polyamine conjugated oligonucleotides |
US5602240A (en) | 1990-07-27 | 1997-02-11 | Ciba Geigy Ag. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US6262241B1 (en) | 1990-08-13 | 2001-07-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Compound for detecting and modulating RNA activity and gene expression |
US5177196A (en) | 1990-08-16 | 1993-01-05 | Microprobe Corporation | Oligo (α-arabinofuranosyl nucleotides) and α-arabinofuranosyl precursors thereof |
JP3104995B2 (ja) | 1991-01-31 | 2000-10-30 | ワーナー−ランバート・コンパニー | 抗炎症剤として有用な4,6−ジ−第三ブチル−5−ヒドロキシ−1,3−ピリミジンの置換されたヘテロアリール類似体 |
US5672697A (en) | 1991-02-08 | 1997-09-30 | Gilead Sciences, Inc. | Nucleoside 5'-methylene phosphonates |
ES2289997T3 (es) | 1991-03-18 | 2008-02-16 | New York University | Anticuerpos monoclonales y quimericos especificos para el factor de necrosis tumoral humano. |
EP0539573A4 (en) | 1991-05-15 | 1993-12-29 | Cell Genesys, Inc. | Genomic modifications with homologous dna targeting |
US5539082A (en) | 1993-04-26 | 1996-07-23 | Nielsen; Peter E. | Peptide nucleic acids |
US5173158A (en) | 1991-07-22 | 1992-12-22 | Schmukler Robert E | Apparatus and methods for electroporation and electrofusion |
US5599797A (en) | 1991-10-15 | 1997-02-04 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
PT101031B (pt) | 1991-11-05 | 2002-07-31 | Transkaryotic Therapies Inc | Processo para o fornecimento de proteinas por terapia genetica |
US5484908A (en) | 1991-11-26 | 1996-01-16 | Gilead Sciences, Inc. | Oligonucleotides containing 5-propynyl pyrimidines |
US5359044A (en) | 1991-12-13 | 1994-10-25 | Isis Pharmaceuticals | Cyclobutyl oligonucleotide surrogates |
EP1251170A3 (en) | 1992-07-17 | 2002-10-30 | Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. | Method and reagent for treatment of NF-kappaB dependent animal diseases |
US6107543A (en) | 1992-08-20 | 2000-08-22 | Infigen, Inc. | Culture of totipotent embryonic inner cells mass cells and production of bovine animals |
TW402639B (en) | 1992-12-03 | 2000-08-21 | Transkaryotic Therapies Inc | Protein production and protein delivery |
US5476925A (en) | 1993-02-01 | 1995-12-19 | Northwestern University | Oligodeoxyribonucleotides including 3'-aminonucleoside-phosphoramidate linkages and terminal 3'-amino groups |
US5858988A (en) | 1993-02-24 | 1999-01-12 | Wang; Jui H. | Poly-substituted-phenyl-oligoribo nucleotides having enhanced stability and membrane permeability and methods of use |
GB9304620D0 (en) | 1993-03-06 | 1993-04-21 | Ciba Geigy Ag | Compounds |
GB9308271D0 (en) | 1993-04-21 | 1993-06-02 | Univ Edinburgh | Method of isolating and/or enriching and/or selectively propagating pluripotential animal cells and animals for use in said method |
US5523226A (en) | 1993-05-14 | 1996-06-04 | Biotechnology Research And Development Corp. | Transgenic swine compositions and methods |
US5571902A (en) | 1993-07-29 | 1996-11-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Synthesis of oligonucleotides |
US5519134A (en) | 1994-01-11 | 1996-05-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Pyrrolidine-containing monomers and oligomers |
US5539083A (en) | 1994-02-23 | 1996-07-23 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Peptide nucleic acid combinatorial libraries and improved methods of synthesis |
US5554746A (en) | 1994-05-16 | 1996-09-10 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Lactam nucleic acids |
US5843780A (en) | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
US5705629A (en) | 1995-10-20 | 1998-01-06 | Hybridon, Inc. | Methods for H-phosphonate synthesis of mono- and oligonucleotides |
US5994619A (en) | 1996-04-01 | 1999-11-30 | University Of Massachusetts, A Public Institution Of Higher Education Of The Commonwealth Of Massachusetts, As Represented By Its Amherst Campus | Production of chimeric bovine or porcine animals using cultured inner cell mass cells |
US5945577A (en) | 1997-01-10 | 1999-08-31 | University Of Massachusetts As Represented By Its Amherst Campus | Cloning using donor nuclei from proliferating somatic cells |
US6011197A (en) | 1997-03-06 | 2000-01-04 | Infigen, Inc. | Method of cloning bovines using reprogrammed non-embryonic bovine cells |
US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
US6566131B1 (en) | 2000-10-04 | 2003-05-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of Smad6 expression |
US6410323B1 (en) | 1999-08-31 | 2002-06-25 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of human Rho family gene expression |
US6107091A (en) | 1998-12-03 | 2000-08-22 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense inhibition of G-alpha-16 expression |
US5981732A (en) | 1998-12-04 | 1999-11-09 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of G-alpha-13 expression |
DE19956568A1 (de) | 1999-01-30 | 2000-08-17 | Roland Kreutzer | Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens |
US8173592B1 (en) | 1999-03-31 | 2012-05-08 | Zentaris Ivf Gmbh | Method for a programmed controlled ovarian stimulation protocol |
US6046321A (en) | 1999-04-09 | 2000-04-04 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Antisense modulation of G-alpha-i1 expression |
IL151781A0 (en) | 2000-03-16 | 2003-04-10 | Genetica Inc | Methods and compositions for rna interference |
EP2345742B1 (en) | 2000-03-30 | 2014-06-11 | The Whitehead Institute for Biomedical Research | RNA sequence-specific mediators of RNA interference |
US6365354B1 (en) | 2000-07-31 | 2002-04-02 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of lysophospholipase I expression |
US6566135B1 (en) | 2000-10-04 | 2003-05-20 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense modulation of caspase 6 expression |
CZ308053B6 (cs) | 2000-12-01 | 2019-11-27 | Max Planck Gesellschaft | Izolovaná molekula dvouřetězcové RNA, způsob její výroby a její použití |
US7612250B2 (en) | 2002-07-29 | 2009-11-03 | Trustees Of Tufts College | Nuclear transfer embryo formation method |
CA2501415A1 (en) | 2002-08-01 | 2004-02-12 | Gtc Biotherapeutics, Inc. | Method of selecting cells for somatic cell nuclear transfer |
CN1735338A (zh) | 2002-12-10 | 2006-02-15 | Gtc生物治疗学公司 | 利用体细胞核转移胚胎作为细胞供体进行附加核转移的方法和系统 |
WO2004091288A2 (en) | 2003-04-09 | 2004-10-28 | Magee-Womens Health Corporation | Correcting mitotic spindle defects in somatic cell nuclear transfer |
US8807129B2 (en) | 2004-08-10 | 2014-08-19 | Kevin Keith Mackamul | Tracker drive system and solar energy collection system |
CA3015835A1 (en) | 2004-11-04 | 2006-05-18 | Astellas Institute For Regenerative Medicine | Derivation of embryonic stem cells |
AU2006243810B2 (en) * | 2005-04-29 | 2012-06-07 | Monash University | A method for producing stem cells or stem cell-like cells from mammalian embryos |
LT2578685T (lt) | 2005-08-23 | 2019-06-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Rnr, apimančios modifikuotus nukleozidus ir jų panaudojimo būdai |
JP2007117081A (ja) | 2005-09-30 | 2007-05-17 | Institute Of Physical & Chemical Research | 核移植卵子の作製方法 |
CA2597840A1 (en) | 2006-09-01 | 2008-03-01 | Government Of The United States Of America, As Represented By The Secret Ary, Department Of Health And Human Services | Methods and compositions for the treatment and prevention of cancer |
US20110172107A1 (en) | 2008-04-30 | 2011-07-14 | Fox Chase Cancer Center | Assay for identifying agents that modulate epigenetic silencing, and agents identified thereby |
US20110136145A1 (en) | 2008-05-22 | 2011-06-09 | The Johns Hopkins University | Methods for promoting fusion and reprogramming of somatic cells |
WO2010033920A2 (en) | 2008-09-19 | 2010-03-25 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Compositions and methods for enhancing cell reprogramming |
DE102009039097B3 (de) | 2009-08-27 | 2010-11-25 | Siemens Aktiengesellschaft | Verfahren zum Übertragen von Daten in einem Sensornetzwerk, Sensorknoten und Zentral-Rechner |
WO2011082038A2 (en) | 2009-12-31 | 2011-07-07 | Fate Therapeutics, Inc. | Improved reprogramming compositions |
EP2558571A4 (en) | 2010-04-16 | 2014-09-24 | Immune Disease Inst Inc | DELAYED POLYPEPTIDE EXPRESSION FROM MODIFIED SYNTHETIC RNAS AND USES THEREOF |
US8315599B2 (en) | 2010-07-09 | 2012-11-20 | Telecommunication Systems, Inc. | Location privacy selector |
JP5934213B2 (ja) | 2010-08-25 | 2016-06-15 | アクセス ビジネス グループ インターナショナル リミテッド ライアビリティ カンパニー | 無線電源システム及び多層シムアセンブリ |
WO2012029957A1 (ja) | 2010-09-03 | 2012-03-08 | 独立行政法人理化学研究所 | クローン動物の作出方法 |
KR101290029B1 (ko) | 2011-01-20 | 2013-07-30 | 에스티팜 주식회사 | 시타글립틴의 중간체 제조방법 |
WO2012164936A1 (en) | 2011-06-03 | 2012-12-06 | Oncotherapy Science, Inc. | Suv39h2 as a target gene for cancer therapy and diagnosis |
US20150038496A1 (en) | 2011-10-03 | 2015-02-05 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) | Methods and pharmaceutical compositions for the treatment of th2 mediated diseases |
US20140161785A1 (en) | 2012-12-10 | 2014-06-12 | Feiyan Liu | Verticillin A Inhibition of Histone Methyltransferases |
CN109797134A (zh) | 2013-02-15 | 2019-05-24 | 圣光医疗财团 | 使用体细胞核转移产生单性生殖干细胞和患者特异性人胚胎干细胞 |
EP3004396B1 (en) | 2013-06-06 | 2019-10-16 | The General Hospital Corporation | Compositions for the treatment of cancer |
WO2016044271A2 (en) | 2014-09-15 | 2016-03-24 | Children's Medical Center Corporation | Methods and compositions to increase somatic cell nuclear transfer (scnt) efficiency by removing histone h3-lysine trimethylation |
KR20210143952A (ko) | 2015-10-09 | 2021-11-30 | 의료법인 성광의료재단 | 히스톤 h3-리신 트리메틸레이션 제거에 의한 인간 체세포 핵 이식 (scnt) 효율을 증가시키는 방법 및 조성물, 및 인간 nt-esc의 유도 |
WO2018073787A2 (en) | 2016-10-19 | 2018-04-26 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Compositions and methods for reprogramming cells and for somatic cell nuclear transfer using duxc expression |
CN107299113A (zh) | 2017-06-12 | 2017-10-27 | 内蒙古大学 | H3K27me3及其去甲基化酶KDM6A/B在小鼠核移植重构胚中的应用方法 |
MA49651A (fr) | 2017-07-19 | 2021-04-28 | Childrens Medical Center | Compositions et procédés pour traiter des maladies associées à un défaut d'empreinte |
CA3096274A1 (en) | 2018-04-06 | 2019-10-10 | Children's Medical Center Corporation | Compositions and methods for somatic cell reprogramming and modulating imprinting |
CN113316457A (zh) | 2018-07-19 | 2021-08-27 | 儿童医疗中心有限公司 | 用于生成生理性x染色体失活的组合物和方法 |
-
2015
- 2015-09-15 WO PCT/US2015/050178 patent/WO2016044271A2/en active Application Filing
- 2015-09-15 JP JP2017514421A patent/JP6841753B2/ja active Active
- 2015-09-15 US US15/511,348 patent/US11390885B2/en active Active
- 2015-09-15 KR KR1020177010127A patent/KR102473092B1/ko active IP Right Grant
- 2015-09-15 EP EP15841324.5A patent/EP3194581A4/en active Pending
- 2015-09-15 KR KR1020227041766A patent/KR102617137B1/ko active IP Right Grant
-
2018
- 2018-06-25 US US16/017,157 patent/US10266848B2/en active Active
-
2021
- 2021-02-18 JP JP2021023834A patent/JP7277494B2/ja active Active
-
2022
- 2022-06-14 US US17/840,348 patent/US20230015276A1/en active Pending
-
2023
- 2023-01-06 JP JP2023001284A patent/JP2023026679A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6841753B2 (ja) | 2021-03-10 |
US11390885B2 (en) | 2022-07-19 |
US10266848B2 (en) | 2019-04-23 |
EP3194581A4 (en) | 2018-04-25 |
US20180363008A1 (en) | 2018-12-20 |
KR20220165807A (ko) | 2022-12-15 |
WO2016044271A3 (en) | 2016-05-19 |
WO2016044271A2 (en) | 2016-03-24 |
US20170327846A1 (en) | 2017-11-16 |
JP2017528142A (ja) | 2017-09-28 |
JP2021074023A (ja) | 2021-05-20 |
KR102617137B1 (ko) | 2023-12-27 |
JP7277494B2 (ja) | 2023-05-19 |
KR102473092B1 (ko) | 2022-12-01 |
KR20170120089A (ko) | 2017-10-30 |
EP3194581A2 (en) | 2017-07-26 |
US20230015276A1 (en) | 2023-01-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230015276A1 (en) | Methods and compositions to increase somatic cell nuclear transfer (scnt) efficiency by removing histone h3-lysine trimethylation | |
KR20210143952A (ko) | 히스톤 h3-리신 트리메틸레이션 제거에 의한 인간 체세포 핵 이식 (scnt) 효율을 증가시키는 방법 및 조성물, 및 인간 nt-esc의 유도 | |
CN115651927B (zh) | 编辑rna的方法和组合物 | |
CN113939591A (zh) | 编辑rna的方法和组合物 | |
CN114007655A (zh) | 用于细胞疗法的环状rna | |
JP2015500637A (ja) | 一倍体細胞 | |
CN112272516B (zh) | 用于体细胞重新编程和调整印记的组合物和方法 | |
JP2022525193A (ja) | Prpf31遺伝子発現ノックダウンによる、インビトロで分化したヒト細胞の生存の改善 | |
WO2018073787A2 (en) | Compositions and methods for reprogramming cells and for somatic cell nuclear transfer using duxc expression | |
WO2020028617A1 (en) | Compositions and methods for improving embryo development | |
WO2023150503A2 (en) | Gene-editing methods for embryonic stem cells | |
WO2024059824A2 (en) | Immune cells with combination gene perturbations | |
Oh | Reprogramming Pluripotent Stem Cell Towards Totipotency | |
KR20240011831A (ko) | 만능 줄기 세포에서 유전자의 신속한 사일런싱을 방지하기 위한 방법 | |
Wilson | MicroRNA-mediated silencing of bovine NANOG and MBD3 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230206 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230228 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20230817 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231207 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240307 |