JP2023002670A - 認知障害を治療または予防するためのヒト化抗体、その製造プロセス、及びそれを用いた認知障害を治療または予防するための薬剤 - Google Patents

認知障害を治療または予防するためのヒト化抗体、その製造プロセス、及びそれを用いた認知障害を治療または予防するための薬剤 Download PDF

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Abstract

【課題】リン酸化タウに対して高い結合親和性を有するだけでなく、ヒトの体に対する抗原性を低下させたヒト化抗リン酸化タウ抗体を提供する。【解決手段】ａ）特定の配列からなる重鎖可変ドメイン；ならびにｂ）別の特定の配列からなる軽鎖可変ドメイン、を含む抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を提供する。【選択図】なし

Description

Ｉ．関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年２月２７日に出願された日本出願特願２０１７－０３５５９４の
利益を主張し、その内容の全体を参照により本明細書に明示的に援用する。
ＩＩ．配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、その全体を参
照により本明細書に援用する。２０１８年２月２７日に作成された前記ＡＳＣＩＩコピー
は、名称が０６３７８５－０６－５００２－ＷＯ－ＳｅｑＬｓｔｇ－＿ＳＴ２５．ｔｘｔ
であり、サイズが３２３，５８４バイトである。
ＩＩＩ．技術分野
本開示は、認知障害の治療的または予防的処置において使用するためのヒト化抗体、そ
のヒト化抗体の製造プロセス、その抗体を使用する認知障害治療薬または予防薬、ならび
に本明細書に開示する治療薬を用いた認知障害の治療方法または予防方法に関する。より
詳細には、本開示は、認知機能の改善に優れた効果を有する新規ヒト化抗リン酸化タウ抗
体、そのヒト化抗体の製造プロセス、そのヒト化抗体を含有する認知障害治療薬もしくは
予防薬、およびヒト化抗リン酸化タウ抗体を用いた認知障害の治療方法または予防方法に
関する。
ＩＶ．発明の背景
認知障害、すなわち認知症は、発達した知能が何らかの後天的原因により悪化し、その
結果、社会的適応に支障をきたす病態である。認知障害は、神経変性疾患、血管性認知疾
患、プリオン病、感染症、代謝性／内分泌疾患、精神的外傷及び脳外科疾患、中毒性疾患
に分類される（Ｔｏｓｈｉｆｕｍｉ Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ ＆ Ｓｈｉｇｅｋｉ Ｔａｋ
ａｈａｓｈｉ（Ｅｄｉｔ．），“ＳＴＥＰ Ｓｅｒｉｅｓ Ｓｅｉｓｈｉｎｋａ”（Ｊａ
ｐａｎｅｓｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ），２ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｋａｉｂａｓｈｏｂｏ，
２００８，ｐｐ．１０３－１０４参照）。２０１０年の時点で日本には約２１０万人の認
知症患者がおり、罹患率は約８～１０％、または６５歳超の高齢者の間で１０％超である
。このことは、世界的な高齢化社会における深刻な問題として認識されている（Ｔａｋａ
ｓｈｉ Ａｓａｄａ，“Ｉｇａｋｕ ｎｏ Ａｙｕｍｉ”（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｄｏｃｕ
ｍｅｎｔ），ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ ｖｏｌｕｍｅ，“Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ ｄｉ
ｓｏｒｄｅｒｓ”，Ｉｓｈｉｙａｋｕ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，２０１１，ｐｐ．５－１
０）。認知障害の基礎疾患に関するデータは、大多数がアルツハイマー病（ＡＤ）及び前
頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ）などの神経変性疾患であり、約３５％がＡＤであり、約１５
％がＡＤと脳血管疾患の併発であり、５％がＦＴＬＤ（同上）であることを示す。神経変
性疾患に関連する認知障害は、少なくとも６ヶ月以上の期間にわたって進行する記憶障害
及び／または人格の変化の潜行性の発症を特徴とする。神経変性プロセスは、認知機能の
障害の程度と高度に相関し、そしてそれに含まれる一貫した特徴は、神経原線維変化（Ｎ
ＦＴ）の存在である（Ａｌｉｓｔａｉｒ Ｂｕｒｎｓ ｅｔ ａｌ．（Ｅｄｉｔ．），Ｄ
ｅｍｅｎｔｉａ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００５，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｐｐ．４０
８－４６４）。
タウタンパク質は、ヒトゲノムの第１７染色体（１７ｑ２１）に位置するＭＡＰＴ遺伝
子によってコードされるタンパク質である。タウタンパク質は、中枢神経系において豊富
に発現する微小管結合タンパク質の１つである。タウは、最も顕著な神経変性疾患の１つ
であるＡＤにおいてＮＦＴを形成する対らせん状細線維及び直線状細線維における主要構
成タンパク質であることが見出されており、様々な神経病理学的病態においてその細胞内
蓄積が示されている。
タウは、当初、ＭＡＰＴ遺伝子における突然変異と、第１７番染色体に連鎖しパーキン
ソニズムを伴う家族性前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）におけるタウの蓄積との間の
関連性に基づいて、神経変性疾患に関係付けられた。ＦＴＤＰ－１７に関してＭＡＰＴ遺
伝子に４０を超える遺伝子変異が報告されている（Ｔｅｔｓｕａｋｉ Ａｒａｉ，“Ｓｈ
ｉｎｋｅｉ Ｎａｉｋａ”（Ｊａｐａｎｅｓｅ ｄｏｃｕｍｅｎｔ），Ｖｏｌ．７２，ｓ
ｐｅｃｉａｌ ｎｕｍｂｅｒ，（Ｓｕｐｐｌ．６），２０１０，ｐｐ．４６－５１）。こ
れらの遺伝子変異は、タウアイソフォームの割合を変化させ、または構造を変化させ、及
び変異タウと微小管との間の相互作用を変化させ、したがって病理の発達に寄与するもの
として示唆される。しかしながら、家族性神経変性疾患とは異なり、ＭＡＰＴの変異はＡ
Ｄなどの散発性神経変性疾患ではめったに観察されることはない。さらに、神経変性疾患
において蓄積するタウは、リン酸化を介して高度に修飾されていることを特徴とする。さ
らに、軽度認知障害（ＭＣＩ）を示す患者では、脊髄液中のリン酸化タウのレベルと下垂
体萎縮の程度との間に相関が観察され、このことはリン酸化タウがタウオパチー患者にお
ける神経変性の信頼性の高いバイオマーカーであることを示唆している（Ｗｅｎｄｙ Ｎ
ｏｂｌｅ ｅｔ ａｌ．，Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏ
ｖｅｒｙ，２０１１，Ｖｏｌ．６，Ｎｏ．８，ｐｐ．７９７－８１０）。これらの知見に
基づいて、タウの過剰なリン酸化を阻害するために、リン酸化に関与する酵素であるキナ
ーゼに対する阻害剤、特にＧＳＫ－３βに対する阻害剤を使用する治療法を開発する試み
がなされてきた（同上）。しかしながら、ＧＳＫ－３βのようなキナーゼは、病的状態だ
けでなく正常な生理学的プロセスにおける機能制御にも関与しているため、起こり得る副
作用についての懸念がある。実際、タウがＧＳＫ－３βによってリン酸化される部位のい
くつかは、胎児及び正常なヒトの脳において認められるタウリン酸化の部位と一致してお
り（Ｂｕｒｎｅｓら、前出）、この戦略が正常なタウ機能に影響を及ぼし得る可能性を示
唆している。
細胞外タウは細胞死の結果としての変性神経細胞からの漏出に由来すると考えられてい
たが、最近の研究により、過剰な細胞内リン酸化の後にタウが処理され、次いで活発に細
胞外に分泌されることが示唆されている。細胞から分泌されたリン酸化タウは、特定のリ
ン酸化部位で脱リン酸化され、続いて周囲の細胞のムスカリン受容体Ｍ１及びＭ３に作用
し、細胞内タウリン酸化の促進及び細胞死への寄与などの様々な効果をもたらすと考えら
れる（Ｍｉｇｕｅｌ Ｄｉａｚ－Ｈｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１０，Ｖｏｌ．２８５，Ｎｏ．
４２，ｐｐ．３２５３９－３２５４８及びＶｅｎｅｓｓａ Ｐｌｏｕｆｆｅ ｅｔ ａｌ
．，ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１２，Ｖｏｌ．７，ｐ．３６８７３）。タウに対する特定の
作用を実行することを目的とした試みとして、タウタンパク質を標的とするタウオパチー
に対する免疫療法に関する実験が報告されている（Ｎｏｂｌｅ（前出）、Ｋｉｓｈｉｍｏ
ｔｏ（前出）、Ａｓａｄａ（前出）及びＢｕｒｎｓ（前出）参照）。
ヒトの認知障害における主な症状は、記憶障害及び認知機能障害であり、認知機能障害
は、記憶に基づく判断、コミュニケーション及びパフォーマンスにおける認知機能の役割
を考えると、特に重要である。一方、運動機能は、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニ
ズムを伴う家族性前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）及び末期アルツハイマー病におい
て認められる症状であるが、認知障害では必ずしも認められる主要な症状ではない。した
がって、認知障害を治療するために考慮すべき主な問題は、認知機能の改善である。しか
しながら、現在では、タウオパチー関連認知機能障害を試験するための適切な動物モデル
が存在し、それによって認知障害を治療するための治療薬または予防薬の同定が可能とな
るであろう。さらに、認知障害に対して特異的で優れた効果を示すそのような薬剤は存在
しない。
ヒト対象における認知障害に対する治療的及び予防的適用の観点から、リン酸化タウに
対して高い結合親和性を有するだけでなく、ヒトの体に対する抗原性を低下させたヒト化
抗リン酸化タウ抗体が必要とされている。
Ｖ．発明の概要
この背景に対して、本発明者らは、アルツハイマー病の状態において異常なリン酸化を
受け得るタウタンパク質中の多数のリン酸化部位のうち、４１３位のセリン残基のリン酸
化部位（Ｓｅｒ４１３）に注目し、Ｓｅｒ４１３リン酸化タウに特異的なポリクローナル
ウサギ抗体及びモノクローナルマウス抗体の作製に成功した。本発明者らはまた、リン酸
化タウタンパク質の異常発現を示した認知障害のモデルマウスにモノクローナルマウス抗
体を投与し、認知機能の改善が観察されたことを確認した（ＷＯ２０１３／１８０２３８
Ａ）。
いくつかの実施形態では、本開示は、セリン残基４１３でリン酸化されているタウタン
パク質（ｐＳ４１３－タウ）に特異的に結合する抗原結合部分を含む、抗体などのタンパ
ク質を提供する。いくつかの実施形態では、本開示はそれらのタンパク質をコードする核
酸を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、それらのタンパク質をコードするそ
のような核酸を含む細胞を提供する。いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に開
示するタンパク質、核酸、または細胞を、それを必要とする患者に投与することによる、
タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の治療方法を提供する。
したがって、いくつかの態様では、本発明は、少なくとも配列番号１のＳｅｒ４１３に
対応するアミノ酸残基においてリン酸化されたタウタンパク質またはタウペプチドと抗原
－抗体反応を引き起こすヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体を提供する。いくつか
の場合では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、タウタンパク質またはタウペ
プチドに対して１．８６×１０－８Ｍ以下の平衡解離定数を有する。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、非リン酸化タウタン
パク質（またはタウペプチド、例えば、配列番号６９）に比べて、リン酸化タウタンパク
質（またはタウペプチド、例えば配列番号８）に対してより高い選択的親和性を有する。
さらなる態様では、本明細書に記載のヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、血
中に投与した場合に、脳に進入する能力がより高い。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、以下のようなＣＤＲ
を含む：配列１Ｍに対して８０％以上の相同性を有するアミノ酸配列であるＣＤＲ－Ｈ１
配列；ＣＤＲ－Ｈ２配列として、配列２Ｍまたは２Ｈ１に対して８４％以上の相同性を有
するアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ３配列として、配列３Ｍに対して８０％以上の相同性を有
するアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ１配列として、配列４Ｌ１または４Ｍに対して８７％以上
の相同性を有するアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ２配列として、配列５Ｍに対して８５％以上
の相同性を有するアミノ酸配列；及びＣＤＲ－Ｌ３配列として、配列６Ｍに対して７７％
以上の相同性を有するアミノ酸配列。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、以下のようなＣＤＲ
を含む：ＣＤＲ－Ｈ１配列として、配列１Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ２配列として、
配列２Ｈ１のアミノ酸配列か、または１５位のＡｌａがＡｓｐで置換されているという点
で配列２Ｈ１と異なるアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ３配列として、配列３Ｍのアミノ酸配列
；ＣＤＲ－Ｌ１配列として、配列４Ｌ１のアミノ酸配列、または５位のＳｅｒがＡｓｎで
置換されている点で配列４Ｌ１と異なるアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ２配列として、配列５
Ｍのアミノ酸配列；及びＣＤＲ－Ｌ３配列として、配列６Ｍのアミノ酸配列。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、以下のようなＣＤＲ
を有する：（１）ＣＤＲ－Ｈ１配列として、１Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ２配列とし
て、２Ｈ１のアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ３配列として、３Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ
１配列として、４Ｌ１のアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ２配列として、５Ｍのアミノ酸配列；
及びＣＤＲ－Ｌ３配列として、６Ｍのアミノ酸配列；または（２）ＣＤＲ－Ｈ１配列とし
て、１Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ２配列として、２Ｈ１のアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ
３配列として、３Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ１配列として、４Ｍのアミノ酸配列；Ｃ
ＤＲ－Ｌ２配列として、５Ｍのアミノ酸配列；及びＣＤＲ－Ｌ３配列として、６Ｍのアミ
ノ酸配列；または（３）ＣＤＲ－Ｈ１配列として、１Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ２配
列として、２Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｈ３配列として、３Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ
－Ｌ１配列として、４Ｍのアミノ酸配列；ＣＤＲ－Ｌ２配列として、５Ｍのアミノ酸配列
；及びＣＤＲ－Ｌ３配列として、６Ｍのアミノ酸配列。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は：重鎖可変領域として
、配列ＶＨ１１、ＶＨ１２、ＶＨ４７、ＶＨ６１、ＶＨ６２、ＶＨ６４、及びＶＨ６５か
ら選択される配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列；ならびに軽鎖可変領域と
して、配列ＶＬ１５、ＶＬ３６、ＶＬ４６、ＶＬ４７、ＶＬ４８、及びＶＬ５０から選択
される配列と９０％以上の相同性を有するアミノ酸配列を有する。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は：重鎖可変領域として
、配列ＶＨ６５のアミノ酸配列、または２８位のＡｌａからＴｈｒへの置換（Ｋａｂａｔ
ナンバリング：Ｈ２８）、３０位のＡｓｎからＳｅｒへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング
：Ｈ３０）、４９位のＶａｌからＧｌｙへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング：Ｈ４９）、
６４位のＡｌａからＡｓｐへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング：Ｈ６１）、及び７８位の
ＧｌｎからＬｙｓへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング：Ｈ７５）からなる群から選択され
る１つ以上の置換を含む点で配列ＶＨ６５とは異なるアミノ酸配列を；ならびに軽鎖可変
領域として、配列ＶＬ４７のアミノ酸配列、または１７位のＡｓｐからＧｌｕへの置換（
Ｋａｂａｔナンバリング：Ｌ１７）、２８位のＳｅｒからＡｓｎへの置換（Ｋａｂａｔナ
ンバリング：Ｌ２７Ａ）、４２位のＧｌｎからＬｅｕへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング
：Ｌ３７）、５０位のＧｌｎからＡｒｇへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング：Ｌ４５）、
及び５１位のＡｒｇからＬｅｕへの置換（Ｋａｂａｔナンバリング：Ｌ４６）からなる群
から選択される１つ以上の置換を含む点で配列ＶＬ４７とは異なるアミノ酸配列を有する
。
さらなる態様では、ヒト化抗体またはその断片もしくは誘導体は、以下の配列の組み合
わせのいずれかを含む：（ａ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域とし
ての配列ＶＬ１５；（ｂ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域としての
配列ＶＬ３６；（ｃ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域としての配列
ＶＬ４６；（ｄ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ
４７；（ｅ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４８
；（ｆ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１１及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ５０；（
ｇ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ１２及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４８；（ｈ）
重鎖可変領域としての配列ＶＨ４７及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４８；（ｉ）重鎖
可変領域としての配列ＶＨ６１及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４８；（ｊ）重鎖可変
領域としての配列ＶＨ６２及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４８；（ｋ）重鎖可変領域
としての配列ＶＨ６４及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４７；（ｌ）重鎖可変領域とし
ての配列ＶＨ６４及び配列ＶＬ４８、ならびに（ｍ）重鎖可変領域としての配列ＶＨ６５
及び軽鎖可変領域としての配列ＶＬ４７。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載のヒト化抗体またはその断片もしくは誘
導体を含む、認知症を治療または予防するための薬剤を提供する。
さらなる態様では、本発明は、アルツハイマー病、皮質基底核変性症、進行性核上性麻
痺、ピック病、嗜銀顆粒性認知症（嗜銀顆粒病）、初老性認知症を伴う多系統タウオパチ
ー（ＭＳＴＤ）、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う家族性前頭側頭型認知
症（ＦＴＤＰ－１７）、神経原線維変化を伴う認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維
変化病（ＤＮＴＣ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＷＭＴ－ＧＧＩ）、タ
ウ病理学を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ－タウ）を含む、認知症またはタウオパチー
を治療または予防するための方法及び薬剤を提供する。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載のヒト化抗体またはその断片もしくは誘
導体と薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。
さらなる態様では、本発明は：ａ）配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ１、配列番号１１
５を有するｖｈＣＤＲ２、及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイ
ン；ならびにｂ）：ｉ）配列番号１０２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖ
ｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｉｉ）配列番号９１を有するｖｌ
ＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３
；ｉｉｉ）配列番号９２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｉｖ）配列番号９３を有するｖｌＣＤＲ１、配列
番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｖ）配列番号
９４を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有
するｖｌＣＤＲ３；ｖｉ）配列番号９５を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖ
ｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｖｉｉ）配列番号９６を有するｖ
ｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ
３；ｖｉｉｉ）配列番号９７を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２
、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｉｘ）配列番号９８を有するｖｌＣＤＲ１、
配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｘ）配列
番号９９を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３
を有するｖｌＣＤＲ３；ｘｉ）配列番号１００を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有
するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ｘｉｉ）配列番号１０１を
有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配列番号８３を有するｖ
ｌＣＤＲ３からなる群から選択されるｖｌＣＤＲのセットを含む軽鎖可変ドメインを含む
抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を提供する。いくつかの場合では、抗体は、配列番号６９の非
リン酸化ペプチドに結合する抗体に対する、配列番号８のリン酸化ペプチドに結合する抗
体の比が少なくとも約４０である。
さらなる態様では、本発明は：ａ）配列番号１１６及び配列番号１１７から選択される
重鎖可変ドメイン、及びｂ）配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番
号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番
号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４から選択される軽鎖可変
ドメインを含む抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を提供する。いくつかの場合では、抗体は、配
列番号６９の非リン酸化ペプチドに結合する抗体に対する、配列番号８のリン酸化ペプチ
ドに結合する抗体の比が少なくとも約４０である。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３
７、配列番号１３８、配列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４
２及び配列番号１４４から選択される重鎖定常ドメインを含む。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号７９及び配列番号８０から選択される軽
鎖定常ドメインを含む。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号１１６及び配列番号１１７から選択され
る重鎖可変ドメインを含む。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号１０３、配列番号１０４、配列番号１０
５、配列番号１０６、配列番号１０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１
０、配列番号１１１、配列番号１１２、配列番号１１３及び配列番号１１４から選択され
る軽鎖可変ドメインを含む。
さらなる態様では、抗体は、配列番号１８４のＬＣと配列番号１４４のＨＣ；配列番号
１８４のＬＣと配列番号１４５のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１４６のＨＣ；
配列番号１８４のＬＣと配列番号１４７のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１４８
のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１４９のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番
号１５０のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１５１のＨＣ；配列番号１８４のＬＣ
と配列番号１５２のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１５３のＨＣ；配列番号１８
４のＬＣと配列番号１５４のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１５５のＨＣ；配列
番号１８４のＬＣと配列番号１５６のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１５７のＨ
Ｃ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１５８のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１
５９のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配列番号１６０のＨＣ；配列番号１８４のＬＣと配
列番号１６１のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１４４のＨＣ；配列番号１８５の
ＬＣと配列番号１４５のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１４６のＨＣ；配列番号
１８５のＬＣと配列番号１４７のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１４８のＨＣ；
配列番号１８５のＬＣと配列番号１４９のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５０
のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５１のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番
号１５２のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５３のＨＣ；配列番号１８５のＬＣ
と配列番号１５４のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５５のＨＣ；配列番号１８
５のＬＣと配列番号１５６のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５７のＨＣ；配列
番号１８５のＬＣと配列番号１５８のＨＣ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１５９のＨ
Ｃ；配列番号１８５のＬＣと配列番号１６０のＨＣ；及び配列番号１８５のＬＣと配列番
号１６１のＨＣのペアから選択される重鎖と軽鎖を含む。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号１８４を有するかまたはそれからなる軽
鎖、及び配列番号１４４を有するかまたはそれからなる重鎖を含む。
さらなる態様では、本発明の抗体は、配列番号１８４を有するかまたはそれからなる軽
鎖、及び配列番号１５２を有するかまたはそれからなる重鎖を含む。
さらなる態様では、本発明は：ａ）配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４
、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９
、配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４
、配列番号１７５、配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９
、配列番号１８０、配列番号１８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４
及び配列番号１８５から選択される軽鎖をコードする第１の核酸；ならびにｂ）配列番号
１４４；配列番号１４５；配列番号１４６；配列番号１４７；配列番号１４８；配列番号
１４９；配列番号１５０；配列番号１５１；配列番号１５２；配列番号１５３；配列番号
１５４；配列番号１５５；配列番号１５６；配列番号１５７；配列番号１５８；配列番号
１５９；配列番号１６０及び配列番号１６１から選択される重鎖をコードする第２の核酸
を含む核酸組成物を提供する。
さらなる態様では、本発明は、第１及び第２の核酸を含む発現ベクター組成物を提供し
、第１の核酸は第１の発現ベクターに含まれ、第２の核酸は第２の発現ベクターに含まれ
る。
さらなる態様では、本発明は、第１の核酸及び第２の核酸が単一の発現ベクターに含ま
れる発現ベクター組成物を提供する。
さらなる態様では、本発明は、発現ベクター組成物を含む宿主細胞、及び前記抗体が発
現する条件下で宿主細胞を培養し、前記抗体を回収することを含む抗ｐＳｅｒ４１３タウ
抗体の作製方法を提供する。
さらなる態様では、本発明は、本発明の抗体を投与することを含む、対象のタウオパチ
ーの治療方法を提供する。
ＶＩ．図面の簡単な説明
本発明は、添付の図面と併せて通読する場合に、以下の詳細な説明から最もよく理解さ
れ得る。図面には以下の図が含まれる。
ＣｌｕｓｔａｌＷを用いて作成した、タウタンパク質の様々なヒトアイソフォームのアラインメントをまとめて示す。 ＣｌｕｓｔａｌＷを用いて作成した、タウタンパク質の様々なヒトアイソフォームのアラインメントをまとめて示す。
本開示のいくつかの実施形態による軽鎖可変領域配列のアラインメントを示し、Ｋａｂａｔナンバリングシステムにより、いくつかの抗ｐＳ４１３－タウ結合タンパク質のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を強調している。
本開示のいくつかの実施形態による重鎖可変領域配列のアラインメントを示し、Ｋａｂａｔナンバリングシステムにより、いくつかの抗ｐＳ４１３－タウ結合タンパク質のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を強調している。
本開示のいくつかの実施形態による、非リン酸化ペプチドＰＤ１７と比較した、リン酸化ペプチドＰＤ１７Ｐに対する、いくつかの抗ｐＳ４１３－タウ抗体の選択的結合親和性を示す。
本開示のいくつかの実施形態による、アルツハイマー病患者由来の脳ホモジネート中のリン酸化タウに対する、いくつかの抗ｐＳ４１３－タウ抗体の結合親和性を示す。
マウス血漿中のヒト化抗体変異体の経時的な薬物動態を示す。５つの初期ヒト化抗体変異体２、５、６、９、及び１０が、マウス血漿からの迅速な排出を示したことを示す。 マウス血漿中のヒト化抗体変異体の経時的な薬物動態を示す。後に開発された３つのヒト化抗体変異体Ｌ１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５が、キメラ抗体に匹敵する薬物動態特性を示したことを示す。
異なるヒト化抗体変異体が異なる脳内移動を有することを示す。脳ホモジネート中の様々なヒト化抗体の濃度を示す。 異なるヒト化抗体変異体が異なる脳内移動を有することを示す。脳中の代表的なヒト化抗体のレベルと血漿中の対応する抗体のレベルとの比を示す。
代表的なヒト化抗体変異体の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と親マウス抗体とのアラインメントを示す。 代表的なヒト化抗体変異体の重鎖可変領域のアミノ酸配列と親マウス抗体とのアラインメントを示す。
Ａ～Ｄは、親マウス抗体（図８Ａ及び８Ｂ）及びキメラ抗体（図８Ｃ及び８Ｄ）がリン酸化ペプチド（図８Ａ及び８Ｃ）に結合するが、非リン酸化ペプチド（図８Ｂ及び８Ｄ）には結合しないことを示す。
Ａ～Ｃは、ｐＳ４１３ペプチドに対する代表的なヒト化抗体変異体の結合を示す。
Ａ～Ｅは、アルツハイマー病患者由来の脳ホモジネートにおける、Ｓ４１３リン酸化タウタンパク質への、親マウス抗体（図１０Ａ）、キメラ抗体（図１０Ｂ）、及び選択されたヒト化抗体変異体（図１０Ｃ～１０Ｅ）の結合特性が同等であることを示す。
本発明のいくつかの抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を示す。 本発明のいくつかの抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を示す。 本発明のいくつかの抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を示す。 本発明のいくつかの抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を示す。 本発明のいくつかの抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質ヒト化抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を示す。
抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の可変重鎖及び可変軽鎖の組み合わせに利用可能な多くの異なるヒトＩｇＧ定常ドメインを示す。「ヒト＿ＩｇＧ１＿」は、ヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「ヒトＩｇＧ１＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ」は、エフェクター機能を低減／消去する２つのアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（場合により「ＬＡＬＡ」変異と呼ばれる）を有するヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「ヒトＩｇＧ１＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ」は、エフェクター機能を低減／消去する３つのアミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ及びＤ２６５Ｓを有するヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「ヒトＩｇＧ１＿ＹＴＥ＿」または「ヒトＩｇＧ１＿ＹＴＥ（Ｍ２５２Ｙ＿Ｓ２５４Ｔ＿Ｔ２５６Ｅ）」は、血清中の抗体の半減期を延ばす３つのアミノ酸置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅを有するヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「ヒトＩｇＧ１＿Ｎ２９７Ａ＿」は、アミノ酸置換Ｎ２９７Ａを有するヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）であり、この置換はグリコシル化部位を排除し、エフェクター機能を低減／消去する。「ヒトＩｇＧ１＿Ｎ２９７Ｑ＿」は、アミノ酸置換Ｎ２９７Ｑを有するヒト野生型ＩｇＧ１の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）であり、この置換はグリコシル化部位を排除し、エフェクター機能を低減／消去する。「＿ヒトＩｇＧ２」は、ヒト野生型ＩｇＧ２の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「＿ヒトＩｇＧ４」は、ヒト野生型ＩｇＧ４の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。「ヒトＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ＿」は、アーム交換を防ぐためのアミノ酸置換Ｓ２２８Ｐを有するヒト野生型ＩｇＧ４の定常ドメイン（ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）である。
図１２の主鎖と共に、Ｈ１１及びＨ６５可変領域の全長重鎖を示す。「スラッシュ」（「／」）は、可変ドメインと定常ドメインとの接合部を示し、ＣＤＲには下線が引かれている。
１２種類の異なる可変軽鎖ドメインについて、ヒトκまたはλ軽鎖定常ドメインのいずれかを含む全長軽鎖を示す。「スラッシュ」（「／」）は、可変ドメインと定常ドメインとの接合部を示し、ＣＤＲには下線が引かれている。
本発明の重鎖及び軽鎖の可能な組み合わせのマトリックスを示す。ボックス内の「Ａ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿」が使用されていることを示す。ボックス内の「Ｂ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ」が使用されていることを示す。ボックス内の「Ｃ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿＿Ｌ２３４Ａ＿Ｌ２３５Ａ＿Ｄ２６５Ｓ」が使用されていることを示す。ボックス内の「Ｄ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿ＹＴＥ＿」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｅ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿Ｎ２９７Ａ＿」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｆ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ１＿Ｎ２９７Ｑ＿」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｇ」は、重鎖定常ドメイン「＿ヒト＿ＩｇＧ２」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｈ」は、重鎖定常ドメイン「＿ヒト＿ＩｇＧ４」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｉ」は、重鎖定常ドメイン「ヒト＿ＩｇＧ４＿Ｓ２２８Ｐ＿」が使用されていることを意味する。ボックス内の「Ｊ」は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１定常ドメインが使用されていることを意味する。
ＶＩＩ．詳細な説明
Ａ．概説
本開示は、セリン残基４１３でリン酸化されているタウタンパク質（ｐＳｅｒ４１３－
タウ）に特異的に結合する抗原結合部分を含む抗体を提供する。そのタンパク質をコード
する核酸、及びそのような核酸を含む細胞もまた提供する。いくつかの実施形態では、提
供する方法及び組成物を、タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の治療に使用する
。
タウをコードするＭＡＰＴ遺伝子は、ゲノム上に配置された１３個のエキソンからなる
ものとして同定されており、選択的スプライシングを介して複数の異なるタンパク質アイ
ソフォームとして発現可能である（前出のＡｒａｉ参照）。タウタンパク質は、エキソン
２及びエキソン３の選択的スプライシングに応じて２９個のアミノ酸からなる０～２個の
反復配列（Ｎ）（Ｎ０～Ｎ２）を含むＮ末端酸性ドメイン、プロリンに富む中間ドメイン
、ならびに微小管結合に寄与する３個（３Ｒ）または４個（４Ｒ）の反復配列（Ｒ）を含
むＣ末端微小管結合ドメイン（エキソン９～１２によりコードされる）（Ｂｕｒｎｓ（前
出）及びＡｒａｉ（前出））を含む。したがって、ヒトタウは、ヒトタウが含む２９個の
アミノ酸反復配列（Ｎ）及び微小管結合反復配列（Ｒ）の数に応じて、６つの代表的なア
イソフォームを有する：３Ｒ０Ｎ（３５２アミノ酸）、３Ｒ１Ｎ（３８１アミノ酸）、３
Ｒ２Ｎ（４１０アミノ酸）、４Ｒ０Ｎ（３８３アミノ酸）、４Ｒ１Ｎ（４１２アミノ酸）
、及び４Ｒ２Ｎ（４４１アミノ酸）。これらのアイソフォームのうち、３Ｒ０Ｎのみが胎
児脳に存在し、一方、成人のヒトの脳には６個全てのアイソフォームが存在し、４Ｒが最
も豊富である（Ｂｕｒｎｓ、前出）。３Ｒアイソフォームと４Ｒアイソフォームとの間の
相違は、エキソン１０が選択的スプライシングを介して除去される（３Ｒ）かまたは存在
する（４Ｒ）かによって生じる。これらのタウアイソフォームのいずれにおいてもアミノ
酸残基の位置を明確に同定するために、最も長いアイソフォーム、すなわち４Ｒ２Ｎ（配
列番号１に定義される）のアミノ酸番号（１～４４１）を、参照として用いる。例えば、
「Ｓｅｒ４１３」は、４Ｒ２Ｎ（配列番号１に定義される）の４１３番目のアミノ酸位置
のセリン残基を指し、これは４Ｒ１Ｎ（配列番号２に定義される）の３８４番目、４Ｒ０
Ｎ（配列番号３に定義される）の３５５番目、３Ｒ２Ｎ（配列番号４に定義される）の３
８２番目、３Ｒ１Ｎ（配列番号５に定義される）の３５３番目、３Ｒ０Ｎ（配列番号６に
定義される）の３２４番目のセリンに対応する。
タウは、配列番号１に定義されるアミノ酸配列の４１３位のセリン残基（Ｓｅｒ４１３
、リン酸化されている場合は本明細書中で「ｐＳｅｒ４１３」と呼ばれる）に対応する位
置にリン酸化されたアミノ酸残基を有し（したがって、Ｓｅｒ４１３でリン酸化されたタ
ウタンパク質は、「ｐＳｅｒ４１３タウ」または「ｐＳｅｒ４１３－タウ」である）、こ
れはＡＤにおいて特異的にリン酸化される部位である。ＷＯ２０１３／１８０２３８にお
いて以前に示されたように、ＰＳｅｒ４１３－タウとの特異的抗原－抗体反応に関与する
抗体を、成熟中に認知機能障害を発症するトランスジェニックマウスに投与した結果、対
照群とほぼ同じレベルまで認知機能が回復した。興味深いことに、配列番号１に定義され
るアミノ酸配列のＳｅｒ３９６に対応する位置にリン酸化アミノ酸残基を有するタウタン
パク質に、同等の抗原に対して上記抗体に比べてより強い親和性を有するモノクローナル
抗体を同様の濃度で投与しても、認知機能の十分な改善は得られなかった。タウの構造及
び機能に関して、配列番号１に定義されるアミノ酸配列のＳｅｒ４１３に対応する位置の
アミノ酸残基を含む領域に関する具体的な情報がなかったため、この領域に結合する抗体
がそのような強力な認知機能改善効果を有していたことは全く予想外の結果であった。
したがって、本発明は、ヒト対象におけるタウオパチーなどの認知障害を治療するため
の治療薬または予防薬として有用な、ヒト化及び最適化された抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体
に関する。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、リン酸化タウに対して高い結合親和性を示
す一方で、ヒトの体に対する抗原性が有意に低下しており、ヒト対象におけるタウオパチ
ーなどの認知障害の治療薬または予防薬として有効に使用することができる。さらに、Ｃ
ＤＲ内のアミノ酸修飾は、マウスＣＤＲに比べて、アミド分解を低減し、安定性を高める
；実施例８、９及び１０参照。
Ｂ．定義
本明細書中で使用する場合、以下の用語のそれぞれは、本節においてその用語に関連付
ける意味を有するものとする。
冠詞「ａ」及び「ａｎ」は、冠詞の文法上の目的語の１つまたは複数（すなわち、少な
くとも１つ）を指すために本明細書中で使用される。例えば、「ａｎ ｅｌｅｍｅｎｔ」
は、１つの要素または複数の要素を意味する。
本明細書中で使用する「約」は、それが量、持続時間などの測定可能な値を指す場合、
指定する値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらに好ましくは±１
％、さらにより好ましくは±０．１％の変動を包含することを意味するが、そのような変
動は開示された方法を実施するのに適切である。
本明細書における「消去」とは、活性の減少または除去を意味する。したがって、例え
ば、「ＦｃγＲ結合の消去」とは、特定の変異体を含まないＦｃ領域に比べて、Ｆｃ領域
アミノ酸変異体が５０％未満の開始結合を有し、７０～８０～９０～９５～９８％未満の
活性の喪失が好ましく、一般的には、活性がＢｉａｃｏｒｅアッセイにおける検出可能な
結合のレベル未満であることを意味する。
本明細書中で使用する「ＡＤＣＣ」または「抗体依存性細胞介在性細胞傷害」とは、Ｆ
ｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的
細胞の溶解を引き起こす細胞介在性の反応を意味する。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａへ
の結合と相関しており；ＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増加はＡＤＣＣ活性の増加をもたら
す。本明細書中で論じるように、本発明の多くの実施形態はＡＤＣＣ活性を完全に消去す
る。
本明細書中で用いられる「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞介在性食作用とは、Ｆｃγ
Ｒを発現する非特異的細胞傷害性細胞が標的細胞上の結合抗体を認識し、続いて標的細胞
の食作用を引き起こす細胞介在性の反応を意味する。
本明細書における「抗原結合ドメイン」または「ＡＢＤ」とは、ポリペプチド配列の一
部として存在する場合、本明細書中で論じるように標的抗原に特異的に結合する６つの相
補性決定領域（ＣＤＲ）のセットを意味する。したがって、「抗原結合ドメイン」は、本
明細書中に概説するように標的抗原に結合する。当技術分野で公知のように、これらのＣ
ＤＲは、通常、可変重鎖ＣＤＲ（ｖｈＣＤＲまたはＶＨＣＤＲまたはＣＤＲ－ＨＣ）の第
１のセット及び可変軽鎖ＣＤＲ（ｖｌＣＤＲまたはＶＬＣＤＲまたはＣＤＲ－ＬＣ）の第
２のセットとして存在し、それぞれのセットは、３つのＣＤＲ：重鎖についてはｖｈＣＤ
Ｒ１、ｖｈＣＤＲ２、ｖｈＣＤＲ３、軽鎖についてはｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖ
ｌＣＤＲ３を含む。ＣＤＲは、それぞれ可変重鎖及び可変軽鎖ドメインに存在し、一緒に
なってＦｖ領域を形成する。したがって、いくつかの場合では、抗原結合ドメインの６つ
のＣＤＲに可変重鎖と可変軽鎖が寄与する。「Ｆａｂ」形態では、６つのＣＤＲのセット
に、２つの異なるポリペプチド配列、可変重鎖ドメイン（ｖｈまたはＶＨ；ｖｈＣＤＲ１
、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３を含む）及び可変軽鎖ドメイン（ｖlまたはＶＬ；ｖｌ
ＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２及びｖｌＣＤＲ３を含む）が寄与し、ｖｈドメインのＣ末端は重
鎖のＣＨ１ドメインのＮ末端に結合し、ｖｌドメインのＣ末端は定常軽鎖ドメインのＮ末
端に結合する（したがって軽鎖を形成する）。ｓｃＦｖ形態では、ｖｈ及びｖｌドメイン
は、通常、本明細書中に概説するようなリンカーの使用を介して、単一のポリペプチド配
列に共有結合し、それは（Ｎ末端から開始して）ｖｈ－リンカー－ｖｌまたはｖｌ－リン
カー－ｖｈのいずれかであり得るが、一般的には前者が好ましい（使用する形態に応じて
、各々の側にオプションのドメインリンカーを含む。当技術分野において理解されるよう
に、ＣＤＲは可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインのそれぞれにおいて、フレームワー
ク領域によって分離されており：軽鎖可変ドメインに関しては、これらはＦＲ１－ｖｌＣ
ＤＲ１－ＦＲ２－ｖｌＣＤＲ２－ＦＲ３－ｖｌＣＤＲ３－ＦＲ４であり、重鎖可変ドメイ
ンに関しては、これらはＦＲ１－ｖｈＣＤＲ１－ＦＲ２－ｖｈＣＤＲ２－ＦＲ３－ｖｈＣ
ＤＲ３－ＦＲ４であり、これらのフレームワーク領域は、ヒト生殖系列の配列に高い同一
性を示す。本発明の抗原結合ドメインには、Ｆａｂ、Ｆｖ及びｓｃＦｖが含まれる。
本明細書における「修飾」とは、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、及び／
または欠失、あるいはタンパク質に化学的に結合している部分への改変を意味する。例え
ば、修飾は、タンパク質に結合した改変炭水化物またはＰＥＧ構造であってもよい。本明
細書における「アミノ酸修飾」とは、ポリペプチド配列中のアミノ酸の置換、挿入、及び
／または欠失を意味する。明確にするために、特に明記しない限り、アミノ酸修飾は常に
、ＤＮＡによってコードされるアミノ酸、例えば、ＤＮＡとＲＮＡにコドンを有する２０
個のアミノ酸に対するものとする。
本明細書における「アミノ酸置換」または「置換」とは、親ポリペプチド配列中の特定
の位置にあるアミノ酸を異なるアミノ酸で置き換えることを意味する。特に、いくつかの
実施形態では、置換は、特定の位置に天然には存在せず、その生物内または任意の生物内
に天然には存在しないアミノ酸に対するものである。例えば、置換Ｍ２５２Ｙは、変異体
ポリペプチド、この場合はＦｃ変異体を指し、２５２位のメチオニンがチロシンで置換さ
れている。明確にするために、核酸コード配列を変更するが最初のアミノ酸から変えない
ように操作されたタンパク質（例えば、ＣＧＧ（アルギニンをコードする）をＣＧＡ（依
然としてアルギニンをコードする）に変換して宿主生物での発現レベルを高める）は「ア
ミノ酸置換」ではない；すなわち、同じタンパク質をコードする新規遺伝子を作成するに
もかかわらず、そのタンパク質が特定の位置に最初と同じアミノ酸を有する場合、それは
アミノ酸置換ではない。
本明細書中で使用する「変異型タンパク質」または「タンパク質変異体」、または「変
異体」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾により、親タンパク質のタンパク質とは異な
るタンパク質を意味する。タンパク質変異体は、タンパク質自体、タンパク質を含む組成
物、またはそれをコードするアミノ配列を指す場合がある。好ましくは、タンパク質変異
体は、親タンパク質と比較して少なくとも１つのアミノ酸修飾、例えば、親と比較して、
約１～約７０個のアミノ酸修飾、好ましくは約１～約５個のアミノ酸修飾を有する。以下
に記載するように、いくつかの実施形態では、親ポリペプチド、例えばＦｃ親ポリペプチ
ドは、ヒト野生型配列、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４由来のＦ
ｃ領域などである。本明細書中のタンパク質変異体配列は、好ましくは、親タンパク質配
列に対して少なくとも約８０％の同一性、最も好ましくは少なくとも約９０％の同一性、
より好ましくは少なくとも約９５％～９８％～９９％の同一性を有する。変異体タンパク
質は、変異体タンパク質自体、タンパク質変異体を含む組成物、またはそれをコードする
ＤＮＡ配列を指し得る。
したがって、本明細書中で使用する「抗体変異体」または「変異型抗体」とは、少なく
とも１つのアミノ酸修飾により親抗体と異なる抗体を意味し、本明細書中で使用する「Ｉ
ｇＧ変異体」または「変異型ＩｇＧ」とは、少なくとも１つのアミノ酸修飾により親Ｉｇ
Ｇと異なる抗体を意味し（ここでも、多くの場合、ヒトＩｇＧ配列由来である）、本明細
書中で使用する「免疫グロブリン変異体」または「変異型免疫グロブリン」とは、少なく
とも１つのアミノ酸修飾により親免疫グロブリン配列の配列と異なる免疫グロブリン配列
を意味する。本明細書中で使用する「Ｆｃ変異体」または「変異型Ｆｃ」とは、Ｆｃドメ
イン中にアミノ酸修飾を含むタンパク質を意味する。本発明のＦｃ変異体は、それらを構
成するアミノ酸修飾に従って定義される。したがって、例えばＭ２５２Ｙまたは２５２Ｙ
は、親Ｆｃポリペプチドと比較して２５２位に置換チロシンを有するＦｃ変異体であり、
その場合のナンバリングはＥＵインデックスに従う。同様に、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／
Ｔ２５６Ｅは、親Ｆｃポリペプチドと比較して置換Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ及びＴ２５６
Ｅを有するＦｃ変異体を定義する。ＷＴアミノ酸の同一性は特定されていなくてもよく、
その場合、前述の変異体は２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅと呼ばれる。置換を示す順序は
任意であることに留意されたく、すなわち、例えば、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅは、
２５４Ｔ／２５２Ｙ／２５６Ｅと同じＦｃ変異体であり、以下同様である。抗体に関して
本発明で考察する全ての位置について、特に明記しない限り、アミノ酸位置のナンバリン
グは、可変ドメインのナンバリングについてはＫａｂａｔに従い、Ｆｃドメインを含む定
常ドメインについてはＥＵインデックスに従うものとする。ＥＵインデックスまたはＫａ
ｂａｔに記載のＥＵインデックスまたはＥＵナンバリングスキームとは、ＥＵ抗体のナン
バリングを指す（Ｅｄｅｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９６９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃ
ａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８－８５、全体を参照により本明細書に援用する）。修
飾は、付加、欠失、または置換である。置換は、天然アミノ酸、及びいくつかの場合では
、合成アミノ酸を含み得る。
本明細書中で使用する場合、本明細書中の「タンパク質」とは、タンパク質、ポリペプ
チド、オリゴペプチド及びペプチドを含む、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸を意
味する。ペプチジル基は、天然アミノ酸及びペプチド結合を含み得る。
本明細書中で使用する「Ｆａｂ」または「Ｆａｂ領域」とは、ＶＨ、ＣＨ１、ＶＬ、及
びＣＬ免疫グロブリンドメインを含むポリペプチドを意味する。Ｆａｂは、単独でのこの
領域を、または全長抗体、抗体断片もしくはＦａｂ融合タンパク質に関してのこの領域を
指す場合がある。
本明細書中で使用する「Ｆｖ」または「Ｆｖフラグメント」または「Ｆｖ領域」とは、
単一の抗原結合ドメイン（ＡＢＤ）のＶＬドメイン及びＶＨドメインを含むポリペプチド
を意味する。当業者には理解されるように、これらは通常、２本の鎖で構成されているか
、または（一般的に本明細書中で論じるようなリンカーを用いて）組み合わせてｓｃＦｖ
を形成することができる。
本明細書中で使用する「アミノ酸」及び「アミノ酸同一性」とは、ＤＮＡ及びＲＮＡに
よってコードされる２０種の天然アミノ酸のうちの１つを意味する。
本明細書中で使用する「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域とＦｃ受容体または
リガンドとの相互作用から生じる生化学的事象を意味する。エフェクター機能には、ＡＤ
ＣＣ、ＡＤＣＰ、及びＣＤＣが含まれるがこれらに限定されない。
本明細書で使用する「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」または「ＦｃガンマＲ」は、
ＩｇＧ抗体のＦｃ領域に結合し、ＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミ
リーの任意のメンバーを意味する。ヒトにおいて、このファミリーには、アイソフォーム
ＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含むＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソ
フォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（
ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃを含むＦｃγ
ＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及
びＦ１５８を含む）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃ
γＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含むＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅ
ｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５、全体を参照によ
り援用する）、ならびに、任意の未発見のヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームま
たはアロタイプが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの場合では、本明細書中
に概説するように、１つ以上のＦｃγＲ受容体への結合を低減または消去する。例えば、
ＦｃγＲＩＩＩａへの結合を低下させるとＡＤＣＣが低下し、いくつかの場合では、Ｆｃ
γＲＩＩＩａ及びＦｃγＲＩＩｂへの結合を低下させることが望ましい。
本明細書中で使用する「ＦｃＲｎ」または「新生児Ｆｃ受容体」とは、ＩｇＧ抗体のＦ
ｃ領域に結合し、少なくとも部分的にＦｃＲｎ遺伝子によってコードされるタンパク質を
意味する。ＦｃＲｎは、ヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含むがこれらに限定
されない任意の生物由来であり得る。当技術分野において公知のように、機能的ＦｃＲｎ
タンパク質は、多くの場合に重鎖及び軽鎖と呼ばれる２つのポリペプチドを含む。軽鎖は
β－２－ミクログロブリンであり、重鎖はＦｃＲｎ遺伝子によってコードされる。本明細
書において特段の記載がない限り、ＦｃＲｎまたはＦｃＲｎタンパク質とは、ＦｃＲｎ重
鎖とβ－２－ミクログロブリンとの複合体を指す。
本明細書中で使用する「親ポリペプチド」とは、その後に修飾を加えて変異体を生成す
る出発ポリペプチドを意味する。親ポリペプチドは、天然ポリペプチド、または天然ポリ
ペプチドの変異体もしくは改変型であってもよい。親ポリペプチドは、ポリペプチド自体
、親ポリペプチドを含む組成物、またはそれをコードするアミノ酸配列を指す場合がある
。したがって、本明細書中で使用する「親免疫グロブリン」とは、変異体を生成するよう
に修飾される未修飾免疫グロブリンポリペプチドを意味し、本明細書中で使用する「親抗
体」とは、変異抗体を生成するように修飾される未修飾抗体を意味する。「親抗体」には
、以下に概説するように、公知の市販の組換え産生抗体が含まれることに留意されたい。
本明細書における「重鎖定常領域」とは、通常、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ
４由来の、抗体のＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３部分を意味する。
本明細書中で使用する「標的抗原」とは、所与の抗体の可変領域によって特異的に結合
される分子を意味する。この場合、標的抗原は、Ｓｅｒ４１３位でリン酸化されているタ
ウタンパク質（「ｐＳｅｒ４１３－タウ」）である。
本明細書中で使用する「標的細胞」とは、標的抗原を発現する細胞を意味する。
本明細書中で使用する「可変領域」とは、それぞれ、κ、λ、及び重鎖免疫グロブリン
遺伝子座を構成する、Ｖκ、Ｖλ、及び／またはＶＨ遺伝子のいずれかによって実質的に
コードされる１つ以上のＩｇドメインを含む免疫グロブリンの領域を意味する。
本明細書における「野生型またはＷＴ」とは、対立遺伝子変異を含む、天然に見出され
るアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。ＷＴタンパク質は、意図的に修飾さ
れていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
本明細書中で使用する用語「タウタンパク質」とは、配列番号１～６に定義されるアミ
ノ酸配列、すなわち、４Ｒ２Ｎ（配列番号１に定義される）、４Ｒ１Ｎ（配列番号２に定
義される）、４Ｒ０Ｎ（配列番号３に定義される）、３Ｒ２Ｎ（配列番号４に定義される
）、３Ｒ１Ｎ（配列番号５に定義される）、及び３Ｒ０Ｎ（配列番号６に定義される）を
有する、ヒトタウタンパク質の６つのアイソフォームのいずれか１つ、ならびにその遺伝
子変異体を意味する。上記の「発明の背景」の節で説明したように、認知障害に関連する
家族性神経変性疾患であるＦＴＤＰ－１７には４０を超える突然変異が関与しているとさ
れてきた。しかしながら、タウタンパク質における突然変異の部位を、ＦＴＤＰ－１７と
関係がある部位に限定すべきではない。配列番号１～６のアミノ酸配列に導入するアミノ
酸変異の数は限定すべきでないが、１～５０、特に１～３０、さらに特に１～１０であっ
てもよい。しかしながら、配列番号１の４１３位のセリン残基（Ｓｅｒ４１３）に定義さ
れるアミノ酸配列に対応するアミノ酸残基は、好ましくは保存されるべきである。本発明
によるタウタンパク質はまた、ＢＬＡＳＴ法（ＰＢＬＡＳＴのデフォルト条件はＮＣＢＩ
によって提供される）に従って、配列番号１で定義されるヒトタウタンパク質のアミノ酸
配列に対して８０％以上の類似性または同一性を有するタンパク質、及びそれらのアイソ
フォームを包含する。そのようなタウタンパク質は、チンパンジー、マカク、ウマ、ブタ
、イヌ、マウス、ウサギ、及びラットなどの非ヒト種に由来するタウを含む。標的動物の
認知機能を改善する目的で、そのような非ヒト動物由来のタウを標的とする治療薬または
予防薬を製造することが可能である。
本明細書中で使用する用語「タウペプチド」とは、タウタンパク質のアミノ酸配列の一
部を含むペプチドを意味する。タウタンパク質に由来するタウペプチドのアミノ酸配列の
位置及び長さは限定すべきでないが、好ましくは、少なくともＳｅｒ４１３に対応するア
ミノ酸を含む、配列番号１のアミノ酸番号４１０～４２１に対応するアミノ酸残基に由来
する、例えば一連の少なくとも３つの連続アミノ酸、特に少なくとも５つの連続アミノ酸
、より特別には少なくとも８つの連続アミノ酸を有するべきである。タウペプチドの長さ
もまた限定すべきでないが、好ましくは４以上、特に６以上、より特別には８以上のアミ
ノ酸長を有するべきである。
本明細書中で使用する用語「タウ」は、総じて、タウタンパク質またはタウペプチドを
意味する。
用語「抗ｐＳｅｒ４１３タウタンパク質」とは、本明細書中に記載するように、４１３
位でセリンがリン酸化されていないタウタンパク質の結合と比較して、４１３位でセリン
がリン酸化されているタウタンパク質に優先的に結合する抗体を意味する。Ｓｅｒ４１３
でリン酸化されたタウタンパク質は、ヒト及び／またはマウスのものであり得る。
本明細書中で使用する「位置」とは、タンパク質の配列中の位置を意味する。位置は、
連続的に、または確立されたフォーマット、例えば抗体ナンバリングのためのＥＵインデ
ックスに従ってナンバリングしてもよい。
本明細書中で使用する「残基」とは、タンパク質中の位置及びそれに関連するアミノ酸
同一性を意味する。例えば、アスパラギン２９７（Ａｓｎ２９７またはＮ２９７とも呼ば
れる）は、ヒト抗体ＩｇＧ１の２９７位の残基である。
本発明に関して、タウタンパク質またはタウペプチド中のアミノ酸残基の位置は、明確
にするために、配列番号１に定義されるアミノ酸配列に基づいて識別されるアミノ酸番号
によって示される。例えば、配列番号１のＳｅｒ４１３に対応するアミノ酸残基は、配列
番号１（４Ｒ２Ｎ）の４１３位、配列番号２（４Ｒ１Ｎ）の３８４位、配列番号３（４Ｒ
０Ｎ）の３５５位、配列番号４（３Ｒ２Ｎ）の３８２位、配列番号５（３Ｒ１Ｎ）の３５
３位、または配列番号６（３Ｒ０Ｎ）の３２４位のセリン残基を意味する。タウアイソフ
ォーム間のアミノ酸残基の位置の対応を、以下の表１に示す。
表１．ヒトタウタンパク質のアイソフォーム
Figure 2023002670000001
表１が、配列番号１で定義されるアミノ酸配列の４１０～４２１位に対応する、これら
のアイソフォームのアミノ酸残基の位置を示す一方で、例えば、図１Ａ及び図１Ｂに基づ
いて、他の領域におけるアミノ酸残基の位置の対応も容易に認識することができる。当業
者であれば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ－Ｗｕｎｓｃｈ法またはＳｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎ
法などのペアワイズ配列アラインメント、またはＣｌｕｓｔａｌＷ法またはＰＲＲＰ法な
どの多重配列アラインメントを使用して、アイソフォームまたは相同体におけるアミノ酸
の対応する位置を決定することができよう。対応位置の解析の一例として、図１Ａ及び１
Ｂは、ＣｌｕｓｔａｌＷに基づく６つのヒトアイソフォームのアミノ酸配列のアラインメ
ント（１文字コードで示す）を示す。これらの図は、配列番号１に定義されるアミノ酸配
列のＳｅｒ４１３に対応するアミノ酸残基を囲む構造が６つのアイソフォーム間で保存さ
れていることを示している。
本発明の抗体は一般的に単離されているかまたは組換え体である。「単離された」とは
、本明細書中に開示する様々なポリペプチドを記載するために使用する場合、それを発現
していた細胞または細胞培養物から同定及び分離及び／または回収したポリペプチドを意
味する。通常、単離されたポリペプチドは、少なくとも１つの精製工程によって調製され
るであろう。「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含
まない抗体を指す。「組換え」とは、外来性宿主細胞において組換え核酸技術を用いて抗
体を生成することを意味する。
タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」とは、配列をアライ
ンメントし、さらに最大の配列同一性パーセントを達成するために必要であればギャップ
を導入した後の、そしていかなる保存的置換も配列同一性の一部とみなさない場合の、特
定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基の百分率として
定義される。アミノ酸配列同一性パーセントの決定を目的としたアラインメントは、例え
ばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）
ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピューターソフトウェアを使用して、当技術分
野の範囲内にある様々な方法で達成することができる。当業者であれば、比較しようとす
る配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアル
ゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することがで
きる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に援用される米国公開第２０１６
０２４４５２５号の段落［０２７９］～［０２８０］に概説されているＡＬＩＧＮ－２プ
ログラムである。核酸配列についての別の近似的アラインメントは、Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ
Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃ
ｓ，２：４８２－４８９（１９８１）の局所相同性アルゴリズムによって提供される。こ
のアルゴリズムは、Ｄａｙｈｏｆｆ，Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｅｓ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｄ．，５ ｓｕｐｐ
ｌ．３：３５３－３５８，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，Ｄ．Ｃ．，ＵＳＡによって開発され、
Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４（６）：６７４５－６７６３（
１９８６）によって正規化されたスコアリングマトリックスを使用することによって、ア
ミノ酸配列に適用することができる。
配列同一性パーセントを決定するためのこのアルゴリズムの実施の例は、「ＢｅｓｔＦ
ｉｔ」実用新案出願のＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（Ｍａｄｉｓｏ
ｎ，ＷＩ）によって提供されている。この方法のデフォルトパラメータは、Ｗｉｓｃｏｎ
ｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ Ｐｒｏｇｒａｍ Ｍａ
ｎｕａｌ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８（１９９５）（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇ
ｒｏｕｐ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩから入手可能）に記載されている。本発明に関して同一
性パーセントを確立する別の方法は、Ｊｏｈｎ Ｆ．Ｃｏｌｌｉｎｓ及びＳｈａｎｅ Ｓ
．Ｓｔｕｒｒｏｋによって開発され、ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．（Ｍｏ
ｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）によって配布されている、エジンバラ大学によって著作
権で保護されているＭＰＳＲＣＨプログラムパッケージを使用することである。この一連
のパッケージのうち、スコアリングテーブルにデフォルトパラメータを使用する場合では
Ｓｍｉｔｈ－Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムを使用することができる（例えば、ギャップ
オープンペナルティ１２、ギャップ拡張ペナルティ１、及びギャップ６）。生成されたデ
ータの「一致」値は「配列同一性」を反映するものである。配列間の同一性パーセントま
たは類似性を計算するための他の適切なプログラムは、当技術分野で一般的に公知であり
、例えば、別のアラインメントプログラムは、デフォルトパラメータを用いるＢＬＡＳＴ
である。例えば、ＢＬＡＳＴＮ及びＢＬＡＳＴＰは、以下のデフォルトパラメータを用い
て使用することができる：遺伝子コード＝標準；フィルター＝なし；ストランド＝両鎖；
カットオフ＝６０；期待値＝１０；マトリックス＝ＢＬＯＳＵＭ６２；記述＝５０配列；
ソート順＝ＨＩＧＨ ＳＣＯＲＥ；データベース＝非冗長、ＧｅｎＢａｎｋ＋ＥＭＢＬ＋
ＤＤＢＪ＋ＰＤＢ＋ＧｅｎＢａｎｋ ＣＤＳ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ＋Ｓｗｉｓｓ ｐ
ｒｏｔｅｉｎ＋Ｓｐｕｐｄａｔｅ＋ＰＩＲ。これらのプログラムの詳細は、ｂｌａｓｔ．
ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／Ｂｌａｓｔ．ｃｇｉの前にｈｔｔｐ：／／を配置す
ることによって位置するインターネットアドレスにおいて見出すことができる。
本発明のアミノ酸配列（「本発明の配列」）と親アミノ酸配列との間の同一性の程度は
、２つの配列のアラインメントにおける正確な一致の数を、「本発明の配列」の長さか、
または親配列の長さのうちのどちらか短い方の長さで割った数として計算される。結果は
同一性パーセントで表される。
いくつかの実施形態では、２つ以上のアミノ酸配列は、少なくとも５０％、６０％、７
０％、８０％または９０％同一である。いくつかの実施形態では、２つ以上のアミノ酸配
列は、少なくとも９５％、９７％、９８％、９９％、さらには１００％同一である。
「特異的結合」または特定の抗原もしくはエピトープに「特異的に結合する」もしくは
「特異的な」とは、非特異的相互作用とは測定可能な程度に異なる結合を意味する。特異
的結合は、例えば、分子の結合を、一般的に類似の構造の分子であるが結合活性を有さな
い対照分子の結合と比較して決定することによって測定することができる。例えば、特異
的結合は、標的に類似している対照分子との競合によって決定することができる。
本明細書中で使用する用語「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」は、特定の抗体－抗原相互
作用の会合速度を指すことを意図し、一方、本明細書中で使用する用語「Ｋｄｉｓ」また
は「Ｋｄ」は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことを意図する。本明細書中
で使用する用語「ＫＤ」は、Ｋｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル
濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことを意図する。抗体のＫＤ値は、当技術分野
において十分に確立されている方法を用いて決定することができる。いくつかの実施形態
では、抗体のＫＤを決定する方法は、表面プラズモン共鳴の使用による、例えばＢＩＡＣ
ＯＲＥ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムの使用によるものである。特
定の実施形態では、リン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を測定する。いくつかの実施
形態では、リン酸化ペプチドを用いてＫＤ値を測定する。いくつかの実施形態では、固定
化した抗原（例えば、リン酸化タウタンパク質またはリン酸化ペプチド）を用いてＫＤ値
を測定する。他の実施形態では、固定化した抗体（例えば、親マウス抗体、キメラ抗体、
またはヒト化抗体変異体）を用いてＫＤ値を測定する。さらに他の実施形態では、分析物
としてリン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を測定する。さらに他の実施形態では、分
析物としてリン酸化ペプチドを用いてＫＤ値を測定する。特定の実施形態では、二価結合
様式でＫＤ値を測定する。他の実施形態では、一価結合様式でＫＤ値を測定する。
「疾患」は、ヒトを含む動物の健康状態を含み、その場合、動物は恒常性を維持するこ
とができず、疾患が改善されない場合、動物の健康は悪化し続ける。
対照的に、ヒトを含む動物における「障害」は、その動物が恒常性を維持することがで
きるが、その動物の健康状態は、障害を有さない場合のその動物の健康状態に比べて好ま
しくない健康状態を含む。未治療のままにしておいた場合に、障害は必ずしも動物の健康
状態をさらに低下させるわけではない。
用語「治療」、「治療すること」、「治療する」などは、所望の薬理学的及び／または
生理学的効果を得ることを指す。その効果は、疾患もしくはその症状を完全にもしくは部
分的に予防するか、または疾患もしくはその症状の可能性を低減するという点で予防的で
あってもよく、及び／または疾患及び／または疾患に起因する有害作用を部分的にもしく
は完全に治療するという点で治療的であってもよい。本明細書中で使用する場合、「治療
」は、哺乳類、特にヒトにおける疾患の任意の治療を含み：（ａ）疾患にかかりやすいが
まだ疾患を有すると診断されていない対象における疾患の発生を予防し；（ｂ）疾患を抑
制、すなわちその発症または進行を阻止し；（ｃ）疾患を軽減、すなわち、疾患の後退を
引き起こし、及び／または１つ以上の疾患の症状を軽減することを含む。「治療」はまた
、疾患または病態の非存在下で薬理学的効果をもたらすために薬剤を送達することを包含
することを意味する。例えば、「治療」は、例えばワクチンの場合のように、疾患状態の
非存在下で免疫応答を誘発するかまたは免疫を付与することができる組成物を送達するこ
とを包含する。
本明細書中で使用する場合、用語「哺乳類」とは、マウス及びハムスターなどのＲｏｄ
ｅｎｔｉａ目の哺乳類、及びウサギなどのＬｏｇｏｍｏｒｐｈａ目の哺乳類を含むがこれ
らに限定されない、任意の哺乳類を指す。いくつかの実施形態では、哺乳類は、ネコ科（
ネコ）及びイヌ科（イヌ）を含むＣａｒｎｉｖｏｒａ目に由来する。いくつかの実施形態
では、哺乳類は、ウシ属（ウシ）及びブタ類（ブタ）を含むＡｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ目
に由来するか、またはウマ科（ウマ）を含むＰｅｒｓｓｏｄａｃｔｙｌａ目の哺乳類であ
る。哺乳類が、霊長目、広鼻下目、もしくはシモイド目（サル）、または類人猿目（ヒト
及び類人猿）の哺乳類であることが最も好ましい。いくつかの実施形態では、哺乳類はヒ
トである。
本明細書中で使用する場合、用語「退行」、及びそれに由来する用語は、必ずしも１０
０％または完全な退行を意味するわけではない。むしろ、当業者が潜在的な利益または治
療効果を有すると認識する様々な程度の退行がある。これに関して、開示する方法は、哺
乳類におけるタウオパチーの任意の量の任意のレベルの退行を提供することができる。さ
らに、本発明の方法によって提供する退行は、疾患、例えばタウオパチーの１つ以上の病
態または症状の退行を含み得る。また、本明細書の目的のために、「退行」は、疾患の発
症を遅らせ、症状の発症を遅らせ、及び／またはその病態の発症を遅らせることを包含し
得る。進行性の疾患及び障害に関して、「退行」は、疾患もしくは障害の進行を遅らせ、
疾患もしくは障害の症状の進行を遅らせ、及び／またはその病態の進行を遅らせることを
包含し得る。
組成物の「有効量」または「治療有効量」は、組成物を投与する対象に有益な効果を提
供するのに十分な組成物の量を含む。送達ビヒクルの「有効量」は、組成物を効果的に結
合または送達するのに十分な量を含む。
「個体」または「宿主」または「対象」または「患者」とは、診断、治療、または療法
が望まれる任意の哺乳類対象、特にヒトを意味する。他の対象として、ウシ、イヌ、ネコ
、モルモット、ウサギ、ラット、マウス、ウマなどが挙げられ得る。
本明細書中で使用する用語「～と併用して」とは、例えば、第２の療法の投与の全過程
の間に第１の療法を投与する場合の使用を指し；その場合、第１の療法を第２の療法の投
与と重複する期間にわたって投与し、例えば、第２の療法の投与の前に第１の療法の投与
が始まり、第２の療法の投与が終わる前に第１の療法の投与が終わり；第１の療法の投与
の前に第２の療法の投与が始まり、第１の療法の投与が終わる前に第２の療法の投与が終
わり；第２の療法の投与が始まる前に第１の療法の投与が始まり、第１の療法の投与が終
わる前に第２の療法の投与が終わり；第１の療法の投与が始まる前に第２の療法の投与が
始まり、第２の療法の投与が終わる前に第１の療法の投与が終わる。そのように、「併用
して」はまた、２つ以上の療法の投与を含むレジメンを指し得る。本明細書中で使用する
「～と併用して」とは、同じまたは異なる製剤で、同じまたは異なる経路で、ならびに同
じまたは異なる剤形タイプで投与してもよい２つ以上の療法の投与も指す。
「コードする」は、定義されたヌクレオチド配列（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及び
ｍＲＮＡ）または定義されたアミノ酸配列のいずれか、及びそれから生じる生物学的特性
を有し、生物学的プロセスにおいて他のポリマー及び高分子を合成するための鋳型として
機能する、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチド
の特定の配列の固有の性質を含む。したがって、例えば、遺伝子に対応するｍＲＮＡの転
写及び翻訳が細胞または他の生物系においてタンパク質を産生する場合、その遺伝子はタ
ンパク質をコードする。コード鎖（そのヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、
多くの場合、配列表に提供されているコード鎖）、及び非コード鎖（遺伝子またはｃＤＮ
Ａを転写するための鋳型として使用される非コード鎖）のいずれも、その遺伝子またはｃ
ＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると呼ぶことができる。
用語「核酸」は、一本鎖、二本鎖、オリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む
任意の形態の複数のヌクレオチドを有するＲＮＡまたはＤＮＡ分子を含む。用語「ヌクレ
オチド配列」は、一本鎖形態の核酸中のオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドにお
けるヌクレオチドの順序を含む。
「核酸構築物」とは、天然においては一緒に見出されることのない１つ以上の機能単位
を含むように構築された核酸配列を意味する。例として、環状、直鎖状、二本鎖、染色体
外ＤＮＡ分子（プラスミド）、コスミド（ラムダファージ由来のＣＯＳ配列を含むプラス
ミド）、非天然核酸配列を含むウイルスゲノムなどが挙げられる。
本明細書中で使用する用語「作動可能に連結された」とは、第２のポリヌクレオチドと
機能的な関係にあるポリヌクレオチド、例えば、２つのポリヌクレオチドのうちの少なく
とも一方が、それによって特徴付けられる生理学的効果を他方に対して発揮することがで
きるような様式で核酸部分内に配置された２つのポリヌクレオチドを含む一本鎖または二
本鎖核酸部分を含む。例として、遺伝子のコード領域に作動可能に連結されたプロモータ
ーは、コード領域の転写を促進することができる。作動可能な連結を示すときに特定され
る順序は重要ではない。例えば、語句：「プロモーターはヌクレオチド配列に作動可能に
連結される」及び「ヌクレオチド配列はプロモーターに作動可能に連結される」は、本明
細書中では同じ意味で使用され、同等とみなされる。いくつかの場合では、所望のタンパ
ク質をコードする核酸がプロモーター／調節配列をさらに含む場合、そのプロモーター／
調節配列は、細胞内で所望のタンパク質の発現を駆動するように所望のタンパク質コード
配列の５’末端に位置する。
本明細書中で同じ意味で使用する用語「オリゴヌクレオチド」、「ポリヌクレオチド」
、及び「核酸分子」は、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドのいずれかの
、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態を指す。したがって、この用語には、一本鎖
、二本鎖、もしくは多重鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－
ＲＮＡハイブリッド、またはプリン及びピリミジン塩基を含むポリマー、あるいは他の天
然の、化学的または生化学的に修飾された、非天然の、または誘導体化されたヌクレオチ
ド塩基が含まれるが、これらに限定されない。ポリヌクレオチドの骨格は、糖及びリン酸
基（一般的にＲＮＡまたはＤＮＡに見出され得るような）、または修飾もしくは置換され
た糖もしくはリン酸基を含み得る。
ポリヌクレオチドに適用される用語「組換え」とは、そのポリヌクレオチドが、天然に
見出されるポリヌクレオチドとは区別される及び／または異なる構築物をもたらすような
、クローニング、制限またはライゲーション工程、及び他の手順の様々な組み合わせの産
物であることを意味する。この用語には、元のポリヌクレオチド構築物の複製物及び元の
ウイルス構築物の子孫がそれぞれ含まれる。
本明細書中で使用する用語「プロモーター」は、転写される核酸配列、例えば所望の分
子をコードする核酸配列に作動可能に連結されたＤＮＡ配列を含む。プロモーターは一般
的に、転写される核酸配列の上流に位置し、ＲＮＡポリメラーゼ及び他の転写因子による
特異的結合のための部位を提供する。
「ベクター」は、遺伝子配列を標的細胞に導入することができる。一般的には、「ベク
ター構築物」、「発現ベクター」、及び「遺伝子導入ベクター」とは、目的の遺伝子の発
現を指示することができ、遺伝子配列を標的細胞に導入することができる任意の核酸構築
物を意味し、導入は、ベクターの全部もしくは一部をゲノムへ組み込むか、または染色体
外エレメントとしてベクターを一過性にもしくは遺伝性に維持することによって達成する
ことができる。したがって、この用語には、クローニング、及び発現ビヒクル、ならびに
組込みベクターが含まれる。
本明細書中で使用する用語「調節エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を
制御するヌクレオチド配列を含む。調節エレメントの例として、例えば、核酸配列の複製
、転写、及び／または転写後プロセシングに寄与する、エンハンサー、配列内リボソーム
進入部位（ＩＲＥＳ）、イントロン、複製起点、ポリアデニル化シグナル（ｐＡ）、プロ
モーター、エンハンサー、転写終結配列、及び上流調節ドメインが挙げられる。場合によ
っては、調節エレメントはまた、シス調節ＤＮＡエレメントならびに転位因子（ＴＥ）を
含み得る。当業者であれば、日常的な実験だけで、発現構築物中のこれら及び他の調節エ
レメントを選択し、使用することができる。発現構築物は、遺伝子組換えアプローチを用
いて、または周知の方法論を使用して合成的に生成することができる。
「制御エレメント」または「制御配列」は、ポリヌクレオチドの複製、複製、転写、ス
プライシング、翻訳、または分解を含む、ポリヌクレオチドの機能的調節に寄与する分子
の相互作用に関与するヌクレオチド配列である。調節は、プロセスの頻度、速度、または
特異性に影響を及ぼす場合があり、本質的に促進性または抑制性であり得る。当技術分野
において公知の制御エレメントとして、例えば、プロモーター及びエンハンサーなどの転
写調節配列が挙げられる。プロモーターは、特定の条件下でＲＮＡポリメラーゼと結合し
、多くの場合プロモーターの下流（３’方向）に位置するコード領域の転写を開始するこ
とができるＤＮＡ領域である。
本明細書中で使用する記述、アミノ酸残基が「リン酸化される」とは、リン酸基がアミ
ノ酸残基の側鎖にエステル結合することを意味する。リン酸化され得る一般的なアミノ酸
残基として、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、及びチロシン（Ｔｙｒ）が挙げ
られる。
ＶＩＩＩ．抗体
本発明は、４１３位でリン酸化されたヒトタウタンパク質に結合する抗体及び抗原結合
断片に関する。
伝統的な抗体構造単位は、一般的に四量体を含む。各四量体は、通常、２つの同一のペ
アのポリペプチド鎖からなり、各ペアは１つの「軽」鎖（通常、約２５ｋＤａの分子量を
有する）及び１つの「重」鎖（通常、約５０～７０ｋＤａの分子量を有する）を有する。
ヒト軽鎖は、κ及びλ軽鎖として分類される。本発明は、通常ＩｇＧクラスに基づく抗体
に関し、これは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を含むがこれらに限定さ
れない、いくつかのサブクラスを有する。一般的に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、及びＩｇＧ４
は、ＩｇＧ３よりも高頻度で使用される。ＩｇＧ１は、３５６（ＤまたはＥ）及び３５８
（ＬまたはＭ）に多型を有する異なるアロタイプを有することに留意すべきである。本明
細書中に示す配列は３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプを使用するが、他のアロタイプも本明
細書中に含まれる。すなわち、本明細書に含まれるＩｇＧ１ Ｆｃドメインを含む任意の
配列は、３５６Ｄ／３５８Ｌアロタイプの代わりに３５６Ｅ／３５８Ｍを有することがで
きる。
当業者には理解されるように、ＣＤＲの正確なナンバリング及び配置は、異なるナンバ
リングシステム間で異なり得る。しかしながら、可変重鎖及び／または可変軽鎖配列の開
示は、関連する（固有の）ＣＤＲの開示を含むことを理解すべきである。したがって、各
可変重鎖領域の開示はｖｈＣＤＲ（例えばｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３
）の開示であり、各可変軽鎖領域の開示はｖｌＣＤＲ（例えばｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ
２及びｖｌＣＤＲ３）の開示である。
抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３、ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及
びＣＤＲ－Ｌ３のそれぞれの配列の同定方法として：Ｋａｂａｔの方法（Ｋａｂａｔ ｅ
ｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１９９１，Ｖｏｌ
．１４７，Ｎｏ．５，ｐｐ．１７０９－１７１９）及びＣｈｏｔｈｉａの方法（Ａｌ－Ｌ
ａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ，１９９７，Ｖｏｌ．２７３，Ｎｏ．４，ｐｐ．９２７－９４８）が挙げられる。
これらの方法は、当業者にとって技術的な常識の範囲内であり、その概要は、例えば、Ａ
ｎｄｒｅｗ Ｃ．Ｒ．Ｍａｒｔｉｎ博士のグループのウェブサイト（ｈｔｔｐ：／／ｗｗ
ｗ．ｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／）で入手可能である。
ＣＤＲナンバリングの有用な比較は以下の通りである（Ｌａｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．
，Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：５５－７７（２００３）参照）：
表１
Figure 2023002670000002
本明細書を通して、可変ドメイン中の残基（おおよそ、軽鎖可変領域の残基１～１０７
及び重鎖可変領域の残基１～１１３）を指す場合にはＫａｂａｔナンバリングシステムを
、Ｆｃ領域などの定常領域に対してはＥＵナンバリングシステムを、通常用いる（例えば
、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．、前出（１９９１））。
本発明は多くの異なるＣＤＲセットを提供する。この場合、「完全ＣＤＲセット」は、
３つの可変軽鎖ＣＤＲと３つの可変重鎖ＣＤＲ、例えば、ｖｌＣＤＲ１、ｖｌＣＤＲ２、
ｖｌＣＤＲ３、ｖｈＣＤＲ１、ｖｈＣＤＲ２及びｖｈＣＤＲ３を含む。これらは、それぞ
れ、より大きい可変軽鎖または可変重鎖ドメインの一部であり得る。さらに、本明細書に
おいてより十分に概説するように、可変重鎖及び可変軽鎖ドメインは、重鎖及び軽鎖を使
用する場合（例えば、Ｆａｂを使用する場合）、別々のポリペプチド鎖上に、またはｓｃ
Ｆｖ配列の場合、単一のポリペプチド鎖上にあり得る。
ＣＤＲは、抗原結合、またはより具体的には抗体のエピトープ結合部位の形成に寄与す
る。「エピトープ」とは、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域中の特異的抗原
結合部位と相互作用する決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子
のグループであり、通常、特定の構造的特徴及び特定の電荷特性を有する。単一の抗原が
複数のエピトープを有していてもよい。
この場合、エピトープは、本発明の抗体の結合に直接関与するアミノ酸残基だけでなく
、Ｓｅｒ４１３でのリン酸化も含む。
各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を規定する。
Ｋａｂａｔらは、重鎖及び軽鎖の可変領域の多数の一次配列を収集した。それらの配列の
保存度に基づいて、個々の一次配列をＣＤＲとフレームワークとに分類し、そのリストを
作成した（全体を参照により援用する、ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧ
ＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ，５ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏ
ｎ，Ｎｏ．９１－３２４２，Ｅ．Ａ．Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．参照）。
免疫グロブリンのＩｇＧサブクラスにおいて、重鎖にはいくつかの免疫グロブリンドメ
インが存在する。本明細書における「免疫グロブリン（Ｉｇ）ドメイン」とは、異なる三
次構造を有する免疫グロブリンの領域を意味する。本発明において興味深いのは、定常重
鎖（ＣＨ）ドメイン及びヒンジドメインを含む重鎖ドメインである。ＩｇＧ抗体に関して
は、ＩｇＧアイソタイプはそれぞれ３つのＣＨ領域を有する。したがって、ＩｇＧに関す
る「ＣＨ」ドメインは、以下の通りである：「ＣＨ１」は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵイン
デックスよる１１８～２２０位を指す。「ＣＨ２」は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデッ
クスによる２３７～３４０位を指し、「ＣＨ３」は、Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデック
スによる３４１～４４７位を指す。
重鎖の別の種類のＩｇドメインはヒンジ領域である。本明細書における「ヒンジ」また
は「ヒンジ領域」または「抗体ヒンジ領域」または「免疫グロブリンヒンジ領域」とは、
抗体の第１の定常ドメインと第２の定常ドメインとの間のアミノ酸を含む柔軟なポリペプ
チドを意味する。構造的には、ＩｇＧ ＣＨ１ドメインはＥＵ２２０位で終わり、ＩｇＧ
ＣＨ２ドメインはＥＵ２３７位の残基で始まる。したがって、ＩｇＧに関して抗体ヒン
ジは、本明細書では２２１位（ＩｇＧ１ではＤ２２１）～２３６位（ＩｇＧ１ではＧ２３
６）を含むものと定義され、その場合、ナンバリングはＫａｂａｔに記載のＥＵインデッ
クスに従う。いくつかの実施形態では、例えばＦｃ領域に関して、下側ヒンジが含まれ、
「下側ヒンジ」は通常、２２６位または２３０位を指す。本明細書に記載するように、ヒ
ンジ領域においてもｐＩ変異体を作製することができる。
軽鎖は一般的に、２つのドメイン、可変軽鎖ドメイン（軽鎖ＣＤＲを含み、可変重鎖ド
メインと共にＦｖ領域を形成する）、及び定常軽鎖領域（しばしばＣＬまたはＣκと呼ば
れる）を含む。
下記に概説するさらなる置換についての別の関心のある領域は、Ｆｃ領域である。
したがって、本発明は異なる抗体ドメインを提供する。本明細書中に記載され、当技術
分野において公知であるように、本発明の抗体は、重鎖及び軽鎖内に異なるドメインを含
み、それらもまた重複し得る。これらのドメインとして、Ｆｃドメイン、ＣＨ１ドメイン
、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、ヒンジドメイン、重鎖定常ドメイン（ＣＨ１－ヒン
ジ－ＦｃドメインまたはＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）、可変重鎖ドメイン、可変軽
鎖ドメイン、軽鎖定常ドメイン、Ｆａｂドメイン及びｓｃＦｖドメインが挙げられるが、
これらに限定されない。
したがって、「Ｆｃドメイン」には、－ＣＨ２－ＣＨ３ドメイン、及び場合によりヒン
ジドメインが含まれる。重鎖は、可変重鎖ドメイン及び定常ドメインを含み、定常ドメイ
ンは、ＣＨ２－ＣＨ３を含むＣＨ１－ヒンジ－Ｆｃドメインを含む。軽鎖は、可変軽鎖及
び軽鎖定常ドメインを含む。ｓｃＦｖは、可変重鎖、ｓｃＦｖリンカー、及び可変軽鎖ド
メインを含む。本発明のいくつかの実施形態は、少なくとも１つのｓｃＦｖドメインを含
み、それは天然には存在しないが、一般的にｓｃＦｖリンカーによって連結された可変重
鎖ドメインと可変軽鎖ドメインを含む。本明細書に概説するように、ｓｃＦｖドメインは
、通常、Ｎ末端からＣ末端にかけてｖｈ－ｓｃＦｖリンカー－ｖｌという向きになるが、
任意のｓｃＦｖドメイン（またはＦａｂ由来のｖｈ及びｖｌ配列を用いて構築されるもの
）について、これを逆向きにｖｌ－ｓｃＦｖリンカー－ｖｈとすることができる。
本明細書中に示すように、組換え技術によって生成される、伝統的なペプチド結合を含
む、使用可能な多くの適切なｓｃＦｖリンカーがある。リンカーペプチドは、主に以下の
アミノ酸残基：Ｇｌｙ、Ｓｅｒ、Ａｌａ、またはＴｈｒを含み得る。リンカーペプチドは
、それらが所望の活性を保持するように、それらが互いに対して正しい立体配座をとるよ
うに２つの分子を連結するのに十分な長さを有するべきである。一実施形態では、リンカ
ーは、約１～５０アミノ酸長、好ましくは約１～３０アミノ酸長である。一実施形態では
、１～２０アミノ酸長のリンカーを使用してもよく、いくつかの実施形態では、約５～約
１０アミノ酸を使用する。有用なリンカーとして、例えば（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ
、（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン－セリンポリマー（式中、ｎは
、少なくとも１（そして一般的には３～４）の整数である）、グリシン－アラニンポリマ
ー、アラニン－セリンポリマー、及び他の柔軟なリンカーが挙げられる。あるいは、ポリ
エチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、ま
たはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールとの共重合体が挙げられるがこ
れらに限定されない様々な非タンパク質性ポリマーをリンカーとして利用してもよく、す
なわちリンカーとして利用し得る。
他のリンカー配列は、任意の長さのＣＬ／ＣＨ１ドメインの任意の配列；例えば、ＣＬ
／ＣＨ１ドメインの最初の５～１２アミノ酸残基を含み得るが、ＣＬ／ＣＨ１ドメインの
全ての残基を含むことはできない。リンカーは、免疫グロブリン軽鎖、例えばＣκまたは
Ｃλに由来し得る。リンカーは、例えばＣγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃα１、Ｃα
２、Ｃδ、Ｃε、及びＣμを含む任意のアイソタイプの免疫グロブリン重鎖に由来し得る
。リンカー配列はまた、Ｉｇ様タンパク質（例えば、ＴＣＲ、ＦｃＲ、ＫＩＲ）などの他
のタンパク質、ヒンジ領域由来の配列、及び他のタンパク質由来の他の天然配列に由来し
得る。
いくつかの実施形態では、リンカーは、本明細書に概説するように任意の２つのドメイ
ンを共に連結するために使用される「ドメインリンカー」である。任意の適切なリンカー
を使用することができるが、多くの実施形態は、例えば（ＧＳ）ｎ、（ＧＳＧＧＳ）ｎ、
（ＧＧＧＧＳ）ｎ、及び（ＧＧＧＳ）ｎを含むグリシン－セリンポリマー（式中、ｎは少
なくとも１（そして一般的には３～４～５）の整数である）ならびに十分な長さと柔軟性
を有して２つのドメインの組換え結合を可能にする任意のペプチド配列を利用して、各ド
メインがその生物学的機能を保持できるようにする。
Ａ．キメラ抗体及びヒト化抗体
いくつかの実施形態では、本明細書の抗体は、異なる種由来の混合物に由来するもの、
例えば、キメラ抗体及び／またはヒト化抗体であり得る。一般的に、「キメラ抗体」及び
「ヒト化抗体」はいずれも、複数の種由来の領域を組み合わせた抗体を指す。例えば、「
キメラ抗体」は、伝統的にマウス（またはいくつかの場合ではラット）由来の可変領域（
複数可）とヒト由来の定常領域（複数可）を含む。「ヒト化抗体」は、一般的に、可変ド
メインフレームワーク領域をヒト抗体に見出される配列と交換した非ヒト抗体を指す。一
般的に、ヒト化抗体において、ＣＤＲを除く抗体全体は、ヒト起源のポリヌクレオチドに
よってコードされているか、またはそのＣＤＲ内を除いてそのような抗体と同一である。
その一部または全部が非ヒト生物由来の核酸によってコードされているＣＤＲを、ヒト抗
体可変領域のβシートフレームワークに移植して抗体を作製する（その特異性は移植され
たＣＤＲによって決定される）。そのような抗体の作製は、例えば、ＷＯ９２／１１０１
８，Ｊｏｎｅｓ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－５２５、Ｖｅｒｈｏｅｙｅ
ｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：１５３４－１５３６に記載され
ており、これらはいずれも全体を参照により本明細書に援用する。初期の移植構築物にお
いて失われる親和性を取り戻すために、選択したアクセプターフレームワーク残基の対応
するドナー残基への「逆突然変異」が多くの場合に必要とされる（ＵＳ５５３０１０１；
ＵＳ５５８５０８９；ＵＳ５６９３７６１；ＵＳ５６９３７６２；ＵＳ６１８０３７０；
ＵＳ５８５９２０５；ＵＳ５８２１３３７；ＵＳ６０５４２９７；ＵＳ６４０７２１３、
いずれもその全体を参照により本明細書に援用する）。ヒト化抗体はまた、最適には、免
疫グロブリン定常領域の少なくとも一部、一般的にはヒト免疫グロブリンの定常領域の少
なくとも一部を含み、したがって一般的にはヒトＦｃ領域を含む。ヒト化抗体はまた、遺
伝子改変した免疫系を有するマウスを用いて作製することもできる。Ｒｏｑｕｅ ｅｔ
ａｌ．，２００４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｐｒｏｇ．２０：６３９－６５４、その全体
を参照により援用する。非ヒト抗体をヒト化及び再形成するための様々な技術及び方法が
当技術分野において周知である（いずれも全体を参照により本明細書に援用するＴｓｕｒ
ｕｓｈｉｔａ ＆ Ｖａｓｑｕｅｚ，２００４，Ｈｕｍａｎｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｏ
ｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ
Ｂ Ｃｅｌｌｓ，５３３－５４５，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ）、及
び前記文献中に引用されている参考文献参照）。ヒト化方法として、いずれも全体を参照
により援用するＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２－
５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８；Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３
－３２９；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１
５３４－１５３６；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａ
ｄ Ｓｃｉ，ＵＳＡ ８６：１００２９－３３；Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９－１０３５；Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，
Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９：４２８５－９，Ｐｒｅｓｔａ
ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７（２０）：４５９３－９；Ｇｏｒ
ｍａｎ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８
８：４１８１－４１８５；Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｅｎｇ １１：３２１－８に記載されている方法が挙げられるが、これらに限定されな
い。非ヒト抗体可変領域の免疫原性を低下させるヒト化または他の方法として、例えば、
全体を参照により援用するＲｏｇｕｓｋａ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：９６９－９７３に記載されているような表面再構
成法が挙げられ得る。
特定の実施形態では、本発明の抗体は、特定の生殖系列重鎖免疫グロブリン遺伝子由来
の重鎖可変領域及び／または特定の生殖系列軽鎖免疫グロブリン遺伝子由来の軽鎖可変領
域を含む。例えば、そのような抗体は、特定の生殖系列配列「の産物」または「由来」で
ある重鎖または軽鎖可変領域を含むヒト抗体を含むかまたはそれからなっていてもよい。
ヒト生殖系列免疫グロブリン配列「の産物」または「由来」であるヒト抗体は、ヒト抗体
のアミノ酸配列をヒト生殖系列免疫グロブリンのアミノ酸配列と比較し、ヒト抗体の配列
に最も近い配列（すなわち、最大の同一性％）であるヒト生殖系列免疫グロブリン配列を
選択することによって、それ自体同定することができる。特定のヒト生殖系列免疫グロブ
リン配列「の産物」または「由来」であるヒト抗体は、生殖系列配列と比較して、例えば
、自然発生的な体細胞変異または意図的な部位特異的突然変異導入に起因するアミノ酸の
差異を含み得る。しかしながら、ヒト化抗体は、一般的には、アミノ酸配列において、ヒ
ト生殖系列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも
８０％同一であり、他の種の生殖系列免疫グロブリンアミノ酸配列（例えば、マウス生殖
系列配列）と比較した場合、抗体がヒト配列由来のものであると同定させるアミノ酸残基
を含む。特定の場合では、ヒト化抗体は、アミノ酸配列において、生殖系列免疫グロブリ
ン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも９５、９６、９７、９８
もしくは９９％、またはさらに少なくとも９６％、９７％、９８％、もしくは９９％同一
であり得る。一般的には、特定のヒト生殖系列配列に由来するヒト化抗体は、ヒト生殖系
列免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と１０～２０アミノ酸以下の
差異しか示さないであろう。特定の場合では、ヒト化抗体は、生殖系列免疫グロブリン遺
伝子によってコードされるアミノ酸配列と、５以下、またはさらには４、３、２、もしく
は１以下のアミノ酸の差異を示し得る。
一実施形態では、当技術分野で公知のように、親抗体は親和性成熟している。例えば米
国特許第７，６５７，３８０号に記載されているように、構造に基づく方法をヒト化及び
親和性成熟のために使用してもよい。選択に基づく方法を用いて、抗体可変領域をヒト化
及び／または親和性成熟させてもよく、その方法として、いずれもその全体を参照により
本明細書に援用するＷｕ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９４：１
５１－１６２；Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２（
１６）：１０６７８－１０６８４；Ｒｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．２７１（３７）：２２６１１－２２６１８；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，１
９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５；
Ｋｒａｕｓｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １
６（１０）：７５３－７５９に記載されている方法が挙げられるが、これらに限定されな
い。他のヒト化方法は、いずれも全体を参照により本明細書に援用するＴａｎ ｅｔ ａ
ｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：１１１９－１１２５；Ｄｅ Ｐａｓｃａ
ｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６－３０８４に
記載されている方法を含むがこれらに限定されない、ＣＤＲの一部分のみを移植すること
を含み得る。
用語「抗体」は、最も広い意味で使用し、例えば、インタクトな免疫グロブリンまたは
抗原結合部分を含む。抗原結合部分は、組換えＤＮＡ技術によって、またはインタクトな
抗体の酵素的もしくは化学的切断によって産生し得る。したがって、抗体という用語には
、伝統的な２つの重鎖と２つの軽鎖の四量体抗体、ならびにＦｖ、Ｆａｂ及びｓｃＦｖな
どの抗原結合断片が含まれる。いくつかの場合では、本発明は、本明細書に概説するよう
に少なくとも１つの抗原結合ドメインを含む二重特異性抗体を提供する。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、好ましくは血漿中動態の向上を示すべきで
ある。本明細書におけるヒト化抗体の血漿中動態の向上とは、血漿中のヒト化抗体の動態
を表すパラメータが、ヒト化抗体に対応する非ヒト化抗体に比べて改変されていることを
意味する。血漿中動態を表すパラメータの例として：血漿内半減期、血漿中の平均滞留時
間、及び血漿クリアランスが挙げられる。そのようなパラメータが「改変された」とは、
そのパラメータが増加または減少したことを意味する。ヒト化抗体に「対応する」非ヒト
化抗体とは、ヒト化抗体を産生するための基礎として用いられる非ヒト化抗体、例えばマ
ウス抗体またはキメラ抗体を意味する。
用語「キメラ抗体」とは、１つの抗体由来の１つ以上の領域と１つ以上の他の抗体由来
の１つ以上の領域とを含む抗体を指す。「ＣＤＲ移植抗体」とは、特定の種またはアイソ
タイプの抗体に由来する１つ以上のＣＤＲ、及び同じまたは異なる種またはアイソタイプ
の別の抗体のフレームワークを含む抗体である。
ＩＸ．組成物
本発明は、「抗原－抗体反応」において、Ｓｅｒ４１３でリン酸化された（ｐＳｅｒ４
１３）ヒトタウタンパク質に結合する多くの異なる抗原結合ドメイン（通常、抗体に組み
込まれる）を提供する。
「抗原－抗体反応」は、リン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチドに対する
抗体の親和性、すなわち平衡解離定数（ＫＤ）によって測定される。特定の実施形態では
、リン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を測定する。いくつかの実施形態では、リン酸
化タウペプチドを用いてＫＤ値を測定する。一実施形態では、リン酸化タウペプチドは１
残基のみでリン酸化されている（例えば、配列番号７５）。別の実施形態では、リン酸化
ペプチドは複数の残基でリン酸化されている（例えば、配列番号７６または配列番号７８
）。いくつかの実施形態では、固定化した抗原（例えば、リン酸化タウタンパク質または
リン酸化タウペプチド）を用いてＫＤ値を測定し、その場合、親和性測定は、結合活性成
分を含む、すなわち二価結合様式である。他の実施形態では、固定化した抗体（例えば、
マウス親抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体変異体）を用いてＫＤ値を測定し、その場
合、親和性測定は結合活性成分を含まない、すなわち一価結合様式である。さらに他の実
施形態では、固定化した抗体及び分析物としてリン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を
測定する。さらに他の実施形態では、固定化した抗体及び分析物としてリン酸化ペプチド
を用いてＫＤ値を測定する。特定の実施形態では、二価結合様式でＫＤ値を測定する。他
の実施形態では、一価結合様式でＫＤ値を測定する。
したがって、特定の実施形態では、ＫＤ値は５×１０－８Ｍ以下であり；いくつかの実
施形態では、ＫＤ値は５×１０－９Ｍ以下であり；他の実施形態では、ＫＤ値は５×１０
－１０Ｍ以下であり；さらに他の実施形態では、ＫＤ値は１．８６×１０－８Ｍ以下であ
り；さらに他の実施形態では、ＫＤ値は２×１０－９Ｍ以下であり；さらに他の実施形態
では、ＫＤ値は２×１０－１０Ｍ以下である。特定の実施形態では、本明細書に開示する
抗体は、固定化した抗体及び分析物としてリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペ
プチドを用いて測定される５×１０－８Ｍ以下のＫＤでリン酸化タウタンパク質またはリ
ン酸化タウペプチドに結合する。別の特定の実施形態では、本明細書に開示する抗体は、
固定化したリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチド及び分析物として抗体を
用いて測定される５×１０－９Ｍ以下のＫＤでリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タ
ウペプチドに結合する。さらに別の特定の実施形態では、本明細書に開示する抗体は、固
定化したリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチド及び分析物として抗体を用
いて測定される２×１０－９Ｍ以下のＫＤでリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウ
ペプチドに結合する。別の特定の一実施形態では、本明細書に開示する抗体は、固定化し
たリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチド及び分析物として抗体を用いて測
定される５×１０－１０Ｍ以下のＫＤでリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプ
チドに結合する。別の特定の実施形態では、本明細書に開示する抗体は、固定化したリン
酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチド及び分析物として抗体を用いて測定され
る２×１０－１０Ｍ以下のＫＤでリン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチドに
結合する。
さらに、本明細書に概説するように、本発明の抗体は、４１３位にリン酸を含まないタ
ンパク質またはペプチドよりも、Ｓ４１３位でリン酸化されているタウペプチドまたはタ
ンパク質に優先的に結合する。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、本発明によるリン酸化タウタンパク質また
はリン酸化タウペプチドと抗原－抗体反応を引き起こすことができる抗体である。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体が抗原－抗体反応を引き起こすことができるリ
ン酸化タウタンパク質及びタウペプチドは、ＡＤなどの神経変性疾患において特異的にリ
ン酸化されるアミノ酸残基においてリン酸化されているタウタンパク質及びタウペプチド
である。具体的には、そのようなタウタンパク質及びタウペプチドは、配列番号１に定義
されるアミノ酸配列の少なくとも４１３位のセリン残基（Ｓｅｒ４１３）においてリン酸
化されており、またアミノ酸番号４１０～４２１に対応する１つ以上のアミノ酸残基、す
なわち、配列番号１に定義されるアミノ酸配列のうち、４１２位のセリン残基（Ｓｅｒ４
１２）、４１４位のトレオニン残基（Ｔｈｒ４１４）、及び４１６位のセリン残基（Ｓｅ
ｒ４１６）に対応する１つ以上のアミノ酸残基においてリン酸化されていてもよい。一般
的なそのようなリン酸化ペプチドとして：配列番号７に定義されるアミノ酸配列を有する
ｐＳｅｒ４１２／ｐＳｅｒ４１３（Ｃｙｓ－）；配列番号８に定義されるアミノ酸配列を
有するｐＳｅｒ４１３（Ｃｙｓ－）、及び配列番号９に定義されるアミノ酸配列を有する
ｐＳｅｒ４０９／ｐＳｅｒ４１２／ｐＳｅｒ４１３（Ｃｙｓ－）が挙げられるが、これら
に限定されない。
本発明によるリン酸化タウペプチドは、本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体の製造
に、または反応性を研究するための抗原として使用することができる。
本発明によるリン酸化タウペプチドは、当業者が適切な合成方法または遺伝子工学的方
法を用いることによって製造することができる。合成によりリン酸化ペプチドを製造する
方法として、Ｂｏｃ法（Ｗａｋａｍｉｙａ Ｔ．，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ
，Ｖｏｌ．２２，ｐ．１４０１，１９９３）、Ｆｍｏｃ法（Ｐｅｒｉｃｈ，Ｊ．Ｗ．，Ｉ
ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｖｏｌ．４０，ｐｐ．１３４－１４０，１９９２）及びＪＰ
３５８７３９０Ｂ及びＷＯ２０１３／１８０２３８が挙げられるが、当業者であれば、必
要に応じて他の任意の方法を使用することができる。遺伝子工学的にリン酸化ペプチドを
製造する方法の例として、製造しようとするペプチドまたはその前駆体をコードする核酸
配列を有する遺伝物質（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を調製し、発現ベクターへの導入及びプロ
モーター配列の付加などの任意の工程の後に、発現のために適切な宿主に導入するか、ま
たは無細胞タンパク質合成系に供する方法が挙げられる。この場合、宿主固有のものでも
遺伝子工学的に発現させるものでもよいキナーゼなどの酵素を用いて宿主内でリン酸化反
応を引き起こすことにより、または目的とするペプチドを宿主から回収し、キナーゼなど
の酵素を用いてリン酸化反応を引き起こすことにより、所望の部位でペプチドをリン酸化
することができる。後者の場合、グリコーゲンシンターゼキナーゼ３（ＧＳＫ３）または
サイクリン依存性プロテインキナーゼ５（ＣＤＫ５）などの、タウのリン酸化反応におい
て役割を果たすことが知られている酵素に標的ペプチドを供することにより、ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏでリン酸化反応を引き起こすことができる。上記の方法に従って宿主内またはｉｎ
ｖｉｔｒｏでリン酸化したペプチドの中から、例えば抗体－抗原反応を介して上記の抗
リン酸化タウ抗体に特異的に結合するものを選択することによって、所望のアミノ酸残基
でリン酸化されたペプチドを回収することができる。
本発明によるリン酸化タウペプチドは、そのＮ末端配列及び／またはＣ末端配列におい
て、所望の目的に適した他の機能を有する物質で修飾することができる。例えば、本発明
によるリン酸化タウペプチドは、そのＮ末端及び／またはＣ末端に、例えばメチオニン残
基、アセチル基またはピログルタミン酸を付加するか、またはそのＮ末端及び／またはＣ
末端を、例えば蛍光物質で修飾することができる。あるいは、本発明によるリン酸化タウ
ペプチドのＮ末端及び／またはＣ末端を、例えばペプチドまたはタンパク質で修飾しても
よい。そのような修飾に使用可能なペプチドの例として、適切なタグ配列（一般的にはヒ
スチジンタグまたはＦＬＡＧタグ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）または主要組織適合遺伝子
複合体（ＭＨＣ）によって認識され得るアミノ酸配列を有するペプチド、そのようなタン
パク質に由来する配列を有するウイルスまたは細菌またはペプチド由来のタンパク質が挙
げられる。さらに、本発明によるリン酸化タウペプチドには、Ｎ末端及びＣ末端以外のア
ミノ酸残基が他の任意の化合物またはペプチドで修飾された少なくとも１つのアミノ酸残
基を有するものが含まれる。当業者であれば、リン酸化タウペプチドへのそのような修飾
を、任意の公知の方法、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｂｉｏｃｏｎｊ
ｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ”，（ＵＳ），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９
９６に記載されている方法を用いて実施することができよう。
当業者であれば、固相または液相の系において適切な結合アッセイを選択することによ
り、抗原－抗体反応の測定を実行することができよう。そのようなアッセイの例として、
酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫アッセイ（ＥＩＡ）、表面プラズモン
共鳴（ＳＰＲ）、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、及び発光共鳴エネルギー移動（
ＬＲＥＴ）が挙げられるが、これらに限定されない。抗原－抗体結合親和性の測定は、例
えば、抗体及び／または抗原を、例えば、酵素、蛍光物質、発光物質、または放射性同位
元素で標識し、使用する標識に特徴的な物理的及び／または化学的特性を測定するのに適
した方法を用いて抗原－抗体反応を検出することによって行うことができる。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、好ましくは、非リン酸化タウタンパク質ま
たはタウペプチドに対するその結合親和性に比べて、リン酸化タウタンパク質またはタウ
ペプチドに対してより高い選択的結合親和性を有するべきである。これに関して、リン酸
化タウタンパク質またはタウペプチドへの抗体の選択的結合親和性の向上とは、リン酸化
タウタンパク質またはタウペプチドへの抗体の結合親和性の、対応する非リン酸化タウタ
ンパク質またはタウペプチドへのその結合親和性に対する比が増加することを意味する。
そのような選択的結合親和性は、例えば、リン酸化タウタンパク質またはタウペプチドを
固定化したプレート及び対応する非リン酸化タウタンパク質またはタウペプチドを固定化
したプレートを用いて、例えば、ＥＬＩＳＡ（例えば、発光波長の吸光度ＯＤ値として）
によりこれらのタンパク質またはペプチドの各々に対する抗体の結合親和性を測定するこ
とにより、及びリン酸化タウタンパク質またはタウペプチドについて得られた結合親和性
の値（例えば、吸光度ＯＤ値）を、対応する非リン酸化タウタンパク質またはタウペプチ
ドについて得られた値で割ることにより、分析できる。ＥＬＩＳＡのための特定の条件は
、以下の実施例の節に記載するものであってもよい。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、以下の実施例２に記載の方法に従って選択
的結合親和性を求める限りにおいて、好ましくは、リン酸化タウタンパク質またはタウペ
プチドへの選択的結合親和性の、非リン酸化タウタンパク質またはタウペプチドへの結合
親和性に対する比が、少なくとも約４０以上、特に少なくとも約５０以上、より特に少な
くとも約６０以上であるべきである。一実施形態では、配列番号８などのリン酸化ペプチ
ドへの抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の結合親和性と、配列番号６９の非リン酸化ペプチドへ
の結合親和性とを比較することによって比を計算する。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、好ましくは、血中に投与した場合に、脳へ
の進入能力の向上を示すべきである。これに関連して、血中に投与した場合の抗体の脳へ
の進入能力の向上とは、抗体をヒトまたは他の任意の哺乳類（例えば、マウスまたはラッ
ト）の血中に投与した場合に、血漿中の抗体濃度に対する脳内の抗体濃度の比が増加する
ことを意味する。抗体の脳への進入能力は、例えば、血液を介して抗体を動物（例えば、
マウスまたはラット）に投与し、所定の期間（例えば、１週間）後に、血液を採取し、脳
ホモジネートを調製し、得られた血漿試料及び得られた脳ホモジネート試料それぞれの抗
体濃度を公知の方法（例えば、抗ヒトポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳ
Ａ）を用いて測定し、脳内の抗体濃度を血漿中の抗体濃度で割ることにより分析できる。
ＥＬＩＳＡのための特定の条件は、以下の実施例の節に記載されているものであってもよ
い。脳へ進入する抗体の濃度は、一般的には血漿中の濃度の約０．１～０．３％であるこ
とが知られている。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、以下の実施例の「［７］実施例７：脳内移
行の分析」の節に記載する方法に従ってその比を求める限りにおいて、好ましくは、脳内
の抗体濃度が血漿中の抗体濃度に対して、０．３０％以上、特に０．３５％以上、より特
別には０．４０％以上、さらにより特別には０．４５％以上の比を有するべきである。
Ａ．本発明の抗原結合ドメイン
本発明は、本明細書中に記載するように、Ｓｅｒ４１３でリン酸化されていないタウタ
ンパク質への結合よりもヒトｐＳｅｒ４１３タウタンパク質に優先的に結合する抗原結合
ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９３を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９４を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９５を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９６を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９７を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９８を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号９９を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有す
るｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ
１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含
む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１００を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有
するｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤ
Ｒ１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を
含む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１０１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有
するｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤ
Ｒ１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を
含む抗原結合ドメインを提供する。
一実施形態では、本発明は、配列番号１０２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有
するｖｌＣＤＲ２；配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；配列番号８６を有するｖｈＣＤ
Ｒ１；配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２；及び配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を
含む抗原結合ドメインを提供する。
本発明は、ヒトｐＳｅｒ４１３タウタンパク質に対する抗原結合ドメインを提供する。
実施例に示すように、多くのヒト化可変重鎖及び可変軽鎖ドメインを提供し、これらは、
任意の組み合わせで組み合わせることができ、任意の組み合わせでヒトＩｇＧ定常ドメイ
ンに付加することができる。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６（配列番号８４）を可変重
鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせて、ｐＳｅｒ４１３
タウに結合するＦｖドメインを形成する。この実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、
配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１
２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６（配列番号８４）を可変重
鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。この実施形態で
は、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、１
２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配列番号５２か
ら選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４７（配列番号１０４）を可変
重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。この実施形態
では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、
１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配列番号５２
から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４７（配列番号１０４）を可変
重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。この実施形態
では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１、１２２、
１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配列番号５２
から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ａ（配列番号１０
５）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ａ（配列番号１０
５）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ｓ（配列番号１０
６）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ｓ（配列番号１０
６）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ｔ（配列番号１０
７）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ｔ（配列番号１０
７）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｑ（配列番号１０
８）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｑ（配列番号１０
８）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｑ＿Ｇ３４Ａ（配
列番号１０９）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合
わせる。この実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２
０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ド
メイン、配列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｑ＿Ｇ３４Ａ（配
列番号１０９）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合
わせる。この実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２
０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ド
メイン、配列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｄ（配列番号１１
０）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｄ（配列番号１１
０）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｓ（配列番号１１
１）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｓ（配列番号１１
１）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｔ（配列番号１１
２）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｎ３３Ｔ（配列番号１１
２）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｓ２８Ｎ（配列番号１１
３）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｓ２８Ｎ（配列番号１１
３）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合わせる。こ
の実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２０、１２１
、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ドメイン、配
列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ａ＿Ｓ２８Ｎ（配
列番号１１４）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ１１（配列番号１１６）と組み合
わせる。この実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２
０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ド
メイン、配列番号５２から選択される。
一実施形態では、可変軽鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＬ４６＿Ｇ３４Ａ＿Ｓ２８Ｎ（配
列番号１１４）を可変重鎖ドメインＴａ１５０５－ＶＨ６５（配列番号１１７）と組み合
わせる。この実施形態では、ヒト重鎖定常ドメインは、配列番号ｓ１１８、１１９、１２
０、１２１、１２２、１２３、１２４、１２５、及び１２６、ならびにヒト軽鎖κ定常ド
メイン、配列番号５２から選択される。
本発明のヒト化抗リン酸化タウ抗体はまた、具体的に後述するように、好ましくは特定
のアミノ酸配列を有する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有するべきである。
重鎖可変領域として、本発明の抗体は、配列ＶＨ１１（配列番号１８に定義される）、
配列ＶＨ１２（配列番号２０に定義される）、配列ＶＨ４７（配列番号２２に定義される
）、ＶＨ６１（配列番号２４に定義される）、配列ＶＨ６２（配列番号２６に定義される
）、配列ＶＨ６４（配列番号２８に定義される）、及び配列ＶＨ６５（配列番号３０に定
義される）から選択される配列と、好ましくは、８０％以上、特に８５％以上、より特別
には９０％以上、さらにより特別には９５％以上、さらにより特別には１００％の同一性
を有するアミノ酸配列を有するべきである。一実施形態では、本発明の抗体は、重鎖可変
領域として、配列ＶＨ６５のアミノ酸配列、または：２８位のＡｌａ（Ｋａｂａｔ番号：
Ｈ２８）からＴｈｒへの置換；３０位のＡｓｎ（Ｋａｂａｔ番号：Ｈ３０）からＳｅｒへ
の置換；４９位のＶａｌ（Ｋａｂａｔ番号：Ｈ４９）からＧｌｙへの置換；６４位のＡｌ
ａ（Ｋａｂａｔ番号：Ｈ６１）からＡｓｐへの置換；及び７８位のＧｌｎ（Ｋａｂａｔ番
号：Ｈ７５）からＬｙｓへの置換からなる群から選択される１つ以上の置換による配列Ｖ
Ｈ６５に由来するアミノ酸配列を含み得る。
軽鎖可変領域として、本発明の抗体は、配列ＶＬ１５（配列番号３２に定義される）、
配列ＶＬ３６（配列番号３４に定義される）、配列ＶＬ４６（配列番号３６に定義される
）、ＶＬ４７（配列番号３８に定義される）、配列ＶＬ４８（配列番号４０に定義される
）、及び配列ＶＬ５０（配列番号４２に定義される）から選択される配列と、好ましくは
、８０％以上、特に８５％以上、より特別には９０％以上、さらにより特別には９５％以
上、さらにより特別には１００％の同一性を有するアミノ酸配列を有するべきである。一
実施形態では、本発明の抗体は、軽鎖可変領域として、配列ＶＬ４７のアミノ酸配列、ま
たは：１７位のＡｓｐ（Ｋａｂａｔ番号：Ｌ１７）からＧｌｕへの置換；２８位のＳｅｒ
（Ｋａｂａｔ番号：Ｌ２７Ａ）からＡｓｎへの置換；４２位のＧｌｎ（Ｋａｂａｔ番号：
Ｌ３７）からＬｅｕへの置換；５０位のＧｌｎ（Ｋａｂａｔ番号：Ｌ４５）からＡｒｇへ
の置換；及び５１位のＡｒｇ（Ｋａｂａｔ番号：Ｌ４６）からＬｅｕへの置換からなる群
から選択される１つ以上の置換による配列ＶＬ４７に由来するアミノ酸配列を含み得る。
別の実施形態では、本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体は、以下から選択される任
意の組み合わせを含み得る：
（１）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ１５（配列番号３２）；
（２）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ３６（配列番号３４）；
（３）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４６（配列番号３６）；
（４）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４７（配列番号３８）；
（５）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４８（配列番号４０）；
（６）重鎖可変領域として配列ＶＨ１１（配列番号１１６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ５０（配列番号４２）；
（７）重鎖可変領域として配列ＶＨ１２（配列番号２０）及び軽鎖可変領域として配列
ＶＬ４８（配列番号４０）；
（８）重鎖可変領域として配列ＶＨ４７（配列番号２２）及び軽鎖可変領域として配列
ＶＬ４８（配列番号４０）；
（９）重鎖可変領域として配列ＶＨ６１（配列番号２４）及び軽鎖可変領域として配列
ＶＬ４８（配列番号４０）；
（１０）重鎖可変領域として配列ＶＨ６２（配列番号２６）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４８（配列番号４０）；
（１１）重鎖可変領域として配列ＶＨ６４（配列番号２８）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４７（配列番号３８）；
（１２）重鎖可変領域として配列ＶＨ６４（配列番号２８）及び軽鎖可変領域として配
列ＶＬ４８（配列番号４０）；
（１３）重鎖可変領域として配列ＶＨ６５（配列番号１１７）及び軽鎖可変領域として
配列ＶＬ４７（配列番号３７）；
上記のものから重鎖及び軽鎖のＣＤＲ及び／または可変領域のアミノ酸配列を選択し、
それらを必要に応じてヒト抗体の重鎖及び軽鎖のフレームワーク領域及び／または定常領
域のアミノ酸配列と組み合わせることによって、当業者であれば本発明によるヒト化抗リ
ン酸化タウ抗体を設計することができよう。ヒト抗体の重鎖及び軽鎖のフレームワーク領
域及び／または定常領域のアミノ酸配列は、例えば、ヒトＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、Ｉｇ
Ｅ、及びＩｇＤサブタイプまたはそれらの変異体のアミノ酸配列から選択することができ
る。
Ｂ．特異的抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体
本発明は、以下のような一対の配列、すなわち重鎖及び軽鎖を含む多くの特異的抗体を
提供する：
ｍＡｂ－ａＰＴ１：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４４のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４５のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４６のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ４：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４７のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ５：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４８のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ６：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１４９のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ７：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５０のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ８：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５１のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ９：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５２のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１０：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５３のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１１：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５４のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１２：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５５のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１３：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５６のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１４：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５７のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１５：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５８のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１６：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１５９のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１７：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１６０のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１８：配列番号１８４のＬＣ及び配列番号１６１のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ１９：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４４のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２０：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４５のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２１：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４６のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２２：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４７のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２３：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４８のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２４：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１４９のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２５：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５０のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２６：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５１のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２７：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５２のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２８：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５３のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ２９：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５４のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３０：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５５のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３１：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５６のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３２：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５７のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３３：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５８のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３４：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１５９のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３５：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１６０のＨＣ
ｍＡｂ－ａＰＴ３６：配列番号１８５のＬＣ及び配列番号１６１のＨＣ
Ｃ．結合を競合する抗体
４１３位でリン酸化された（ｐＳｅｒ４１３）ヒトタウタンパク質に結合する抗原結合
ドメイン及びそれらを含む抗体に加えて、本発明は、本明細書中に記載の抗体と結合につ
いて競合する抗体を提供する。
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体と、ｐＳｅｒ４１３タウへの競合的結合を引き
起こすヒト化抗体も本発明の範囲内に含まれる。本明細書中で使用する用語「競合的結合
」とは、抗原と共に２つ以上のモノクローナル抗体が存在する場合に、一方の抗体の抗原
への結合がそれ以外の抗体の抗原への結合によって阻害されることを意味する。競合的結
合は通常、例えば一定量（濃度）のモノクローナル抗体に対し、別のモノクローナル抗体
をその量（濃度）を変動させて添加し、一定量存在する前者のモノクローナル抗体の結合
量が減少する場合の、後者のモノクローナル抗体の量（濃度）を決定することによって測
定することができる。その阻害の程度は、ＩＣ５０またはＫｉの単位で表すことができる
。本発明のヒト化抗リン酸化タウ抗体に対して競合的結合を引き起こすヒト化抗体とは、
本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗体を１０ｎＭで用いて本発明の抗原－抗体結合を測
定した場合に、ＩＣ５０が１μＭ以下、特に１００ｎＭ以下、より特別には１０ｎＭ以下
である抗体を意味する。
当技術分野で公知のように、一般的にＳＰＲ／Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）またはＯｃ
ｔｅｔ（登録商標）結合アッセイ、ならびにＥＬＩＳＡ及び細胞ベースのアッセイを用い
て競合的結合研究を行うことができる。
いくつかの実施形態では、競合的結合抗体の可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインは
、本明細書に概説する可変領域の少なくとも１つに対して少なくとも８５％、９０％、９
５％、９８％または９９％の同一性を有し、定常ドメインにおいては、図１３に概説する
ヒトＩｇＧ配列に対して少なくとも９９または１００％の同一性を有する。
Ｄ．アミノ酸置換
本明細書に概説する配列に加えて、本発明は、親の出発配列と比較して１つ以上のアミ
ノ酸置換を有し得る抗原結合ドメイン及びそれらを含む抗体を提供する。
したがって、例えば、本明細書に列挙する可変重鎖及び軽鎖ドメインの全てについて、
さらなる変異体を作製することができる。本明細書に概説するように、いくつかの実施形
態では、６個のＣＤＲのセットは、０、１、２、３、４または５個のアミノ酸修飾を有す
ることができる（特定の用途に利用可能なアミノ酸置換を有する）。これらの実施形態で
は、一般的に、単一のＣＤＲは１または２以下のアミノ酸置換を有し、変異配列はｐＳｅ
ｒ４１３タウタンパク質への結合を保持する。しかしながら、本明細書に概説する配列の
ＣＤＲにアミノ酸変異体を作製する場合、得られるＣＤＲは、ＰＣＴ／ＪＰ１３／６５０
９０に概説された、配列番号８１、８２及び８３（可変軽鎖ＣＤＲ）ならびに配列番号８
６、８７及び８８（可変重鎖ＣＤＲ）に示されるマウスＣＤＲとは異なる。
いくつかの場合では、可変重鎖及び／または軽鎖ドメインのフレームワーク領域（複数
可）に変化を生じさせることができる。この実施形態では、フレームワーク領域（例えば
ＣＤＲを除く）中の好ましい変異体は、ヒト生殖系列配列に対して少なくとも約８０、８
５、９０または９５％の同一性を保持している。したがって、例えば、フレームワーク領
域がヒト生殖系列配列に対して少なくとも８０、８５、９０または９５％の同一性を保持
する限り、本明細書に記載の同一のＣＤＲを、ヒト生殖系列配列由来の異なるフレームワ
ーク配列と組み合わせることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書で概説するヒト化軽鎖について、最も近いヒト軽鎖
生殖系列は、本明細書の配列に対して８１％の同一性を有するＩＧＫＶ２－３０である。
したがって、同一性がＩＧＫＶ２－３０に対して少なくとも８０％、８５％、９０％また
は９５％の同一性である限り、軽鎖フレームワーク領域においてさらなる変異体を作製す
ることができる。
本明細書のヒト化重鎖について、重鎖について最も近いヒト生殖系列は、本明細書中の
配列に対して８５％の同一性を有するＩＧＨＶ３－７３である。したがって、同一性がＩ
ＧＨＶ３－７３に対して少なくとも８０％、８５％、９０％または９５％の同一性である
限り、軽鎖フレームワーク領域においてさらなる変異体を作製することができる。
あるいは、ＣＤＲは、アミノ酸修飾（例えば、ＣＤＲのセット中の１、２、３、４また
は５個のアミノ酸修飾）を有し得る（すなわち、ＣＤＲは、６つのＣＤＲセット内の変化
の総数が６個未満のアミノ酸修飾である限り、ＣＤＲの任意の組み合わせを変化させてＣ
ＤＲを改変することができ；例えば、ｖｌＣＤＲ１に１個、ｖｈＣＤＲ２に２個、ｖｈＣ
ＤＲ３に０個、など））、ならびにフレームワーク領域がヒト生殖系列配列に対して少な
くとも８０、８５または９０％の同一性を保持する限り、フレームワーク領域を変化させ
ることができ、得られるＣＤＲはＰＣＴ／ＪＰ１３／６５０９０に概説された、配列番号
８１、８２及び８３（可変軽鎖ＣＤＲ）及び配列番号８６、８７及び８８（可変重鎖ＣＤ
Ｒ）に示されるマウスＣＤＲとは異なる。
一般的に、抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体間の比較のための同一性パーセントは、少なくと
も７５％、少なくとも８０％、少なくとも９０％であり、少なくとも約９５、９６、９７
、９８または９９％の同一性パーセントが好ましい。同一性パーセントは、全アミノ酸配
列、例えば全重鎖もしくは軽鎖にわたって、または鎖の一部にわたってのものであっても
よい。例えば、本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の定義内に含まれるのは、可変領域全
体にわたって（例えば、可変領域にわたって同一性が９５％もしくは９８％同一である場
合）、または定常領域全体にわたって同一性を共有する抗体である。
Ｘ．本発明の核酸
本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体をコードする核酸組成物、ならびにその核酸を含む
発現ベクター及びその核酸で形質転換した宿主細胞及び／または発現ベクター組成物も提
供する。当業者には理解されるように、本明細書中に示すタンパク質配列を、遺伝暗号の
縮重により、任意の数の可能な核酸配列によってコードすることができる。
したがって、本発明はさらに、抗原結合ドメインをコードする核酸組成物及びそれらを
含有する抗体を提供する。当業者には理解されるように、抗原結合ドメインの場合、核酸
組成物は一般的に、可変重鎖ドメインをコードする第１の核酸及び可変軽鎖ドメインをコ
ードする第２の核酸を含む。ｓｃＦｖの場合、タンパク質様リンカーによって分離された
、可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインをコードする単一の核酸を作製することができ
る。伝統的な抗体の場合、核酸組成物は一般的に、重鎖をコードする第１の核酸及び軽鎖
をコードする第２の核酸を含み、これらは細胞内で発現すると自発的に２本の重鎖と２本
の軽鎖の「伝統的」な四量体形態になる。
当技術分野で公知のように、本発明の成分をコードする核酸を、当技術分野で公知のよ
うに、及び本発明のヘテロ二量体抗体を産生するために使用する宿主細胞に応じて、発現
ベクターに組み込むことができる。当業者には理解されるように、これら２つの核酸を、
単一の発現ベクターまたは２つの異なる発現ベクターに組み込むことができる。一般的に
、核酸を、任意の数の調節エレメント（プロモーター、複製起点、選択マーカー、リボソ
ーム結合部位、インデューサーなど）に作動可能に連結させる。発現ベクターは、染色体
外ベクターまたは組込みベクターであり得る。
次いで、本発明の核酸及び／または発現ベクターを、多くの実施形態に利用できる哺乳
類細胞（例えばＣＨＯ細胞）とともに、哺乳類細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆虫細胞及び
／または真菌細胞を含む当技術分野で周知の任意の数の異なる種類の宿主細胞に形質転換
する。
本発明の抗体は、当技術分野において周知であるように、発現ベクター（複数可）を含
む宿主細胞を培養することによって作製する。一旦製造した後は、伝統的な抗体精製工程
を行う。
ＸＩ．生物学的及び生化学的アッセイ
本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を、その有効性についていくつかの方法でアッセイ
することができる。予備的事項として、ＥＬＩＳＡ技術（例えば実施例２（１）参照）、
Ｏｃｔｅｔ、ＢｉａｃｏｒｅまたはＦＡＣＳなどの当技術分野で公知の技術を使用して、
Ｓ４１３位でリン酸化されているヒトタウタンパク質またはペプチドへの結合について、
抗体を試験することができ、その場合、本明細書に概説するように、リン酸化ペプチド（
例えば配列番号８）への結合と非リン酸化ペプチド（例えば配列番号６９）への結合とを
比較する。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する抗体の結合効率をＢｉａｃｏｒｅアッセ
イによって測定する。特定の実施形態では、リン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を測
定する。いくつかの実施形態では、リン酸化タウペプチドを用いてＫＤ値を測定する。一
実施形態では、リン酸化タウペプチドは１残基のみでリン酸化されている（例えば、配列
番号７５）。別の実施形態では、リン酸化ペプチドは複数の残基でリン酸化されている（
例えば、配列番号７６または配列番号７８）。いくつかの実施形態では、固定化した抗原
（例えば、リン酸化タウタンパク質またはリン酸化タウペプチド）を用いてＫＤ値を測定
し、その場合、親和性測定は、結合活性成分を含む、すなわち二価結合様式である。他の
実施形態では、固定化した抗体（例えば、マウス親抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体
変異体）を用いてＫＤ値を測定し、その場合、親和性測定は、結合活性成分を含まない、
すなわち一価結合様式である。さらに他の実施形態では、固定化した抗体及び分析物とし
てリン酸化タウタンパク質を用いてＫＤ値を測定する。さらに他の実施形態では、固定化
した抗体及び分析物としてリン酸化ペプチドを用いてＫＤ値を測定する。特定の実施形態
では、二価結合様式でＫＤ値を測定する。他の実施形態では、一価結合様式でＫＤ値を測
定する。
さらに、本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体はまた、ヒトＡＤ脳ホモジネートにおける
結合親和性についてアッセイすることもでき、ならびにＨＥＣ２９３ タウＰ３０１Ｌ凝
集アッセイにおけるＡＤ由来ａｕ種子の中和試験において、及び／またはマイクロ流体チ
ャンバーにおけるヒトｉＰＳＣニューロンを用いたＡＤ由来タウ接種及び伝播モデルにお
いてアッセイすることができる。
さらに、本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体はまた、ＡＤ患者の脳試料の免疫組織化学
的アッセイにおいても使用することができる。
さらに、本発明の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を、アルツハイマー病（ＡＤ）を含む認知
障害の動物モデルにおけるその有効性についてアッセイすることができる。本発明の認知
障害のための治療薬または予防薬を研究するための動物には、認知障害のための動物モデ
ル、特にタウオパチーの動物モデルが含まれる。タウオパチーの動物モデルは、脳内に正
常型または変異型タウを発現する動物、特に認知機能の障害を示す動物モデルである。脳
内で正常型または変異型タウを発現するそのような動物は、遺伝子工学によって調製する
ことができ、典型的な例はトランスジェニックマウス（Ｔｇマウス）である。変異型タウ
を発現するＴｇマウスなどの動物モデルは、遺伝性家族性タウオパチーのモデルとして有
用であるが、ヒトの大多数の症例を構成する散発性タウオパチーに対する治療薬または予
防薬の薬効試験については、正常型タウを発現するＴｇマウスにおいて効果を示すのが好
ましい。正常型タウを発現するＴｇマウスとして最も適しているのは、本発明の製造例で
調製するマウスであるが、特にトランスジェニックマウスの作製及び使用についていずれ
も全体を参照により本明細書に援用するＫａｍｂｅ ｅｔ ａｌ．（Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｖｏｌ．４２，Ｐ．４０４－４１４，２０１１）及びＫ
ｉｍｕｒａ ｅｔ ａｌ．（Ｔｈｅ ＥＭＢＯ Ｊ．ｖｏｌ．２６．Ｐ．５１４３－５１
５２，２００７）によって報告されたＴｇマウスを使用してもよい。しかしながら、認知
機能障害はＫａｍｂｅら及びＫｉｍｕｒａらのマウスに認められるが、それはそれぞれ１
４ヶ月齢及び２０ヶ月齢後に出現するため、発症時にはかなり老齢に達しており、加齢効
果もまた一因となる可能性があるが、一方で長期繁殖の影響や労力も課題である。
動物モデルにおいて本発明による認知障害に対する治療薬または予防薬の効果を試験す
る好ましい方法は、認知機能を試験する記憶学習試験などの方法である。そのような方法
は、モリス水迷路試験、ステップスルー学習試験または新奇物質認識試験であってもよい
が、好ましくは、行動量と動物の不安の条件を考慮するために、オープンフィールド試験
などの行動測定試験の組み合わせである。
本発明による認知障害の治療薬または予防薬の効果を調べる方法としては、認知障害の
動物モデルへの投与中に、脳組織中のタウタンパク質またはリン酸化タウのレベルを調べ
る方法を使用することができる。ＡＤ及び他の神経変性疾患において、タウタンパク質の
発現レベルまたは異常なリン酸化タウの増加は病理と関連している（Ｋｈａｌｉｄ Ｉｑ
ｂａｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ Ｒｅｓ．，Ｖｏｌ．７，ｐ６５
４－６６４，２０１０）。いくつかの病理学的モデル動物においてタウ発現及び異常なリ
ン酸化タウレベルを低下させることが認知機能及び運動機能の改善をもたらすこともまた
よく知られている（Ｋ．Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０，
Ｖｏｌ．９，ｐ．４７６－４８１，２００５；Ｓｙｌｖｉｅ Ｌｅ Ｃｏｒｒｅ ｅｔ
ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，Ｖｏｌ．１０３，ｐ．９６７３
－９６７８，２００６）。タウタンパク質またはリン酸化タウの変化を調べる方法として
は、実施例に記載のように脳組織ホモジネートを用いたウエスタンブロッティングなどの
方法によって達成することができるが、当業者であれば、ＥＬＩＳＡ（Ｘｉｙｕｎ Ｃｈ
ａｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．２８６，ｐ．３４４５７－３
４４６７，２０１１）または免疫組織化学的方法（Ｄａｖｉｄ Ｊ．Ｉｒｗｉｎ ｅｔ
ａｌ．，ＢＲＡＩＮ，Ｖｏｌ．１３５，ｐ．８０７－８１８，２０１２）などの他の適切
な方法を選択することができる。
ＸＩＩ．製剤
本発明に従って使用する抗体の製剤は、所望の純度の抗体を任意の薬学的に許容される
担体、賦形剤または安定化剤と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態
で保存用に調製される（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃ
ｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．［１９８０］において
一般的に概説されているように）。
本発明による認知障害の治療薬または予防薬は、本発明によるヒト化抗リン酸化タウ抗
体に加えて、薬学的に許容される担体及び／または他の賦形剤を含有する医薬組成物の形
態で製剤化してもよい。薬学的に許容される担体及び／または他の賦形剤を用いた製剤化
は、例えばＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｈｉｌａ
ｄｅｌｐｈｉａ，“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔ
ｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ＥＤＩＴＩＯＮ”，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ
Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２０００に記載される方法を用いて実施する
ことができる。そのような治療薬または予防薬は、成分を滅菌水性媒体もしくは油性媒体
に溶解、懸濁、もしくは乳化することによって調製される液体製剤として、またはそれら
の凍結乾燥製剤として提供してもよい。そのような製剤を調製するための媒体または溶媒
は、水性媒体であってもよく、その例として、注射用蒸留水及び生理食塩水溶液が挙げら
れ、これらを、場合により浸透圧調節剤（例えば、Ｄ－グルコース、Ｄ－ソルビトール、
Ｄ－マンニトール、及び塩化ナトリウム）を添加して使用してもよく、及び／または適切
な溶解助剤、例えば、アルコール（例えば、エタノール）、ポリアルコール（例えば、プ
ロピレングリコールまたはポリエチレングリコール）、または非イオン性界面活性剤（例
えば、ポリソルベート８０またはポリオキシエチレン水添ヒマシ油５０）と併用してもよ
い。そのような製剤を、油性媒体または油性溶媒を用いて調製することもでき、その例と
して、ゴマ油及びダイズ油が挙げられ、これらを、場合により溶解助剤、例えば安息香酸
ベンジル及びベンジルアルコールと併用することができる。そのような液体薬物は、多く
の場合、緩衝剤（例えば、リン酸緩衝剤及び酢酸緩衝剤）、無痛化剤（例えば、塩化ベン
ザルコニウム及び塩酸プロカイン）、安定化剤（例えば、ヒト血清アルブミン及びポリエ
チレングリコール）、保存剤（例えば、アスコルビン酸、エリソルビン酸、及びそれらの
塩）、着色剤（例えば、銅クロロフィルβ－カロチン、赤＃２及び青＃１）、防腐剤（例
えば、パラオキシ安息香酸エステル、フェノール、塩化ベンゼトニウム、及び塩化ベンザ
ルコニウム）、増粘剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボキシメチルセル
ロース、及びそれらの塩）、安定化剤（例えば、ヒト血清アルブミンマンニトール及びソ
ルビトール）、及び矯味矯臭剤（例えば、メントール及び柑橘系香料）などの適切な添加
剤を用いて調製され得る。様々な形態の治療薬または予防薬として、散剤、錠剤、顆粒剤
、カプセル剤、丸剤、坐剤、及びロゼンジ剤などの固形製剤が挙げられる。経口剤形で投
与するための固体製剤については、賦形剤（例えば結晶セルロース、ラクトース及びデン
プン）、滑沢剤（例えばステアリン酸マグネシウム及びタルク）、結合剤（ヒドロキシプ
ロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴールなど）、及び崩
壊剤（例えば、デンプン及びカルボキシメチルセルロースカルシウム）などの添加剤を使
用してもよい。必要に応じて、防腐剤（例えば、ベンジルアルコール、クロロブタノール
、パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プロピル）、酸化防止剤、着色剤、甘
味料などの添加剤を使用してもよい。他の代替形態として、粘膜上に塗布するための治療
薬または予防薬が挙げられ、そのような製剤は、多くの場合、主に粘膜吸着または保持特
性を付与する目的のために、感圧接着剤、感圧性増強剤、粘度調整剤、増粘剤などの添加
剤を含む（例えば、ムチン、寒天、ゼラチン、ペクチン、カラギーナン、アルギン酸ナト
リウム、ローカストビーンガム、キサンタンガム、トラガカントガム、アラビアゴム、キ
トサン、プルラン、ワキシーデンプン、スクラルファート、セルロース及びその誘導体（
ヒドロキシプロピルメチルセルロースなど）、ポリグリセリン脂肪酸エステル、アクリル
酸アルキル（メタ）アクリレート共重合体、またはそれらの塩及びポリグリセリン脂肪酸
エステル）。しかしながら、体に投与する治療薬または予防薬の形態、溶媒及び添加剤は
これらに限定されるものではなく、当業者が適宜選択してもよい。
本発明の認知障害治療薬または予防薬は、本発明のヒト化抗リン酸化タウ抗体に加えて
、認知障害の治療または予防の効果を有する他の公知の薬物、特に認知障害の進行を抑制
する効果を有する特定の薬物を含有していてもよい。あるいは、本発明のヒト化抗リン酸
化タウ抗体を含有する本発明の認知障害治療薬または予防薬を、認知障害の治療または予
防効果を有する公知の薬物、特に認知障害の進行を抑制する効果を有する薬物を含有する
他の治療薬または予防薬と組み合わせて、キットの形態で製造してもよい。認知障害の進
行を抑制する効果を有する成分として、ドネペジル、ガランタミン、メマンチン、及びリ
バスチグミンが挙げられるが、これらに限定されない。認知障害の進行を抑制する効果を
有する成分の用量及び認知障害の進行を抑制する効果を有する成分を含む治療薬または予
防薬の用量は、通常の治療に用いる用量の範囲内であってもよいが、条件に応じて増減さ
せることができる。
本発明者らは、ＷＯ２０１３／１８０２３８Ａ（特許文献４）において、腹腔内投与に
より末梢投与した場合でも抗体が血液脳関門を介して脳に作用して薬効を発揮することを
示す実験結果を示したが、本発明の認知障害治療薬または予防薬に含まれる本発明のヒト
化抗リン酸化タウ抗体を脳組織に効率よく供給する製剤を調製することも可能である。そ
のような製剤はまた、本発明による認知障害のための治療薬または予防薬に包含される。
血液脳関門を介して脳組織に抗体またはペプチドを効率的に供給する方法、例えば、標的
物質を添加する方法またはリポソームもしくはナノ粒子に封入する方法が公知である。標
的化に使用する物質として、抗体、または特定の受容体もしくは輸送体と結合する性質を
有するペプチド、タンパク質もしくは他の化合物との結合によって電荷特性が全体的また
は部分的に変化する物質が挙げられる。特定の受容体または膜タンパク質と結合する性質
を有するペプチド、タンパク質または他の化合物の例として、受容体リガンドまたは膜タ
ンパク質と結合するリガンド、及びそれらの類似体、ならびに受容体リガンドまたは膜タ
ンパク質と結合する抗体、アゴニスト化合物／アンタゴニスト化合物／アロステリック調
節薬、及びそれらの類似化合物が挙げられる。特定の受容体または輸送体に結合する性質
を有するペプチド、タンパク質または他の化合物の標的としての受容体リガンドまたは膜
タンパク質の例として、トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）、インスリン受容体（ＩＲ）
、インスリン様増殖因子受容体（ＩＧＦＲ）、ＬＤＬ受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）及
びジフテリア毒素受容体（ＨＢ－ＥＧＦ）が挙げられるが、これらに限定されない（Ａｎ
ｇｅｌａ Ｒ．Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，２００７，Ｖｏｌ．
２４，Ｎｏ．９，ｐｐ．１７５９－１７７１）。本発明の認知障害治療薬または予防薬に
用いる抗体に標的物質を化学的に添加してもよく、その方法は当業者であれば公知の方法
、例えば、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅｓ，ＵＳＡ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９６に記載されている方法を
適宜参照して実施することができる。標的物質はまた、抗体またはペプチドを封入してい
るリポソームまたはナノ粒子に結合させてもよい（Ｓｏｎｕ Ｂｈａｓｋａｒ ｅｔ ａ
ｌ．，Ｐａｒｔｉｃｌｅ ａｎｄ Ｆｉｂｒｅ Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１０，７：
３）。さらに、標的物質がペプチドまたはタンパク質である場合は、当業者が遺伝子工学
技術を用いて、ペプチド化学合成により融合ペプチドを製造するか、またはペプチドもし
くはタンパク質のアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸と、使用する抗
体もしくはペプチドのアミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列を含む核酸を組み合わ
せるかのいずれかにより、適切な融合タンパク質として製造することができる。
本発明による治療薬または予防薬は、症状の改善を目的として、それを必要とする患者
に経口的または非経口的に投与してもよい。経口投与の場合、顆粒剤、散剤、錠剤、カプ
セル剤、液剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤またはエリキシル剤などの剤形を選択してもよ
い。非経口投与の場合、経鼻剤を調製してもよく、また、液剤、懸濁剤または固体製剤を
選択してもよい。異なる形態の非経口投与として注射剤を調製してもよく、注射は、皮下
注射、静脈内注射、注入、筋肉内注射、脳室内注射または腹腔内注射として選択される。
非経口投与に使用する他の製剤として、坐剤、舌下剤、経皮剤及び経鼻剤以外の経粘膜投
与剤が挙げられる。さらに、ステントまたは血管内閉塞具へ添加するかまたはコーティン
グする方式での血管内局所投与が可能である。
本発明による治療または予防のための薬剤の用量は、患者の年齢、性別、体重及び症状
、治療効果、投与方法、治療時間、または医薬組成物中に含まれる有効成分の種類に応じ
て異なるであろうが、通常、成人への投与あたり０．１ｍｇ～１ｇ、好ましくは０．５ｍ
ｇ～２００ｍｇの活性化合物の範囲で投与してもよい。しかしながら、用量は様々な条件
によって変化するため、上記の用量より少ない用量で十分であるか、またはこれらの範囲
を超える用量が必要な場合もある。本発明の治療薬または予防薬は、短い投与期間のうち
に効果を発揮することができる。
ＸＩＩＩ．抗体の投与
一旦作製すると、本発明の抗体は、タウオパチーなどの認知障害の治療に利用すること
ができる。本明細書中で考察するように、タウタンパク質の細胞内蓄積が様々な神経病理
学的病態において示されている。そのようなタウの細胞内蓄積によって引き起こされる疾
患は、まとめて「タウオパチー」と呼ばれる（全体を参照により本明細書に援用するとと
もに、障害について概説している前出のＡｒａｉ参照）。タウオパチーとして、神経変性
疾患、例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）、皮質基底核変性症（ＣＢＤ）または皮質基底
核症候群（ＣＢＳ）、進行性核上性麻痺、ピック病、嗜銀顆粒性認知症（嗜銀顆粒病）、
認知症を伴う多系統タウオパチー（ＭＳＴＤ）、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズ
ムを伴う家族性前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ－１７）、神経原線維変化認知症、石灰化を
伴うびまん性神経原線維変化病（ＤＮＴＣ）、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー
（ＷＭＴ－ＧＧＩ）、タウ病理学を伴う前頭側頭葉変性症（ＦＴＬＤ－タウ）などが挙げ
られる。タウオパチーには：嗜眠性脳炎後遺症、亜急性硬化性全脳炎などの感染症；ボク
サー病などの外傷による病態を含む、非神経変性疾患も含まれる。
認知障害は、一旦発達したまたは獲得した知的機能が低下した状態を含む一種の知的障
害として定義されるが（“Ｎｅｗ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ（Ｎａｎｋｏｄｏ’ｓ Ｅｓｓ
ｅｎｔｉａｌ Ｗｅｌｌ－Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｓｅｒｉｅｓ）”（日本語文献），Ｋｕｎ
ｉｔｏｓｈｉ Ｋａｍｉｊｉｍａ ａｎｄ Ｓｈｉｎ－ｉｃｈｉ Ｎｉｗａ（編），Ｎａ
ｎｋｏｄｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．，２００８，ｐｐ．６９－７０）、広義には、知的障害及
び／または記憶障害を示す疾患であると考えられている。ＡＤなどの神経変性疾患の診断
において、病態が「神経変性」であるかどうかは、例えば、死後の組織学的分析によって
神経原線維変化（ＮＦＴ）が存在するかどうかについて分析することによって判定するが
、その一方で、医師は、様々な手段、例えば：改訂長谷川式簡易知能評価スケール（ＨＤ
Ｓ－Ｒ）及びミニメンタルステート検査（ＭＭＳＥ）などの問診による神経心理学的検査
；臨床認知症評価（ＣＤＲ）または機能的評価病期分類（ＦＡＳＴ）などの観察による神
経心理学的検査；例えば、タウ及びリン酸化タウのレベルの増加、または脳脊髄液中のＡ
βのレベルの増加に基づく生化学的検査；ならびに、例えば頭部ＣＴ、頭部ＭＲＩ、ＳＰ
ＥＣＴ、またはＰＥＴを介して得られた情報に基づく画像検査を用いて、認知障害、特に
神経変性疾患であると診断する。本発明の認知障害治療薬または予防薬は、神経変性疾患
の診断指標の少なくとも１つに基づいて、医師が認知障害を患っていると診断した患者に
対して投与され、投与前の病態に比べて患者の病態を改善するか、投与を介して病態の進
行を制御するか、または投与前の病態を維持するか、または投与前の病態に回復させる効
果を有する。
本発明による認知障害の治療薬または予防薬は、ヒトまたはヒト以外の動物において、
認知機能を改善するか、または認知機能の低下を阻害するか、または認知機能を維持する
効果も有し得る。そのような非ヒト動物の例は、好ましくは、ヒトタウと高い相同性を有
するタウを発現する動物であるべきであり：チンパンジー、マカク、ウマ、ブタ、イヌ、
マウス、ウサギ、ラット及びネコが挙げられるが、これらに限定されない。
ＸＩＶ．実施例
Ａ．実施例１：抗体の産生
１．マウス抗体（親抗体）
キメラ抗体及びヒト化抗体の親抗体としてマウス抗体Ｔａ１５０５を使用した。マウス
抗体Ｔａ１５０５の詳細は、国際公開第ＷＯ２０１３／１８０２３８Ａ号の実施例に記載
されている。マウス抗体Ｔａ１５０５の軽鎖（Ｌ鎖）のアミノ酸配列は配列番号４４に定
義され、それをコードするヌクレオチド配列は配列番号４５に定義される。マウス抗体Ｔ
ａ１５０５の重鎖（Ｈ鎖）のアミノ酸配列は配列番号４６に定義され、それをコードする
ヌクレオチド配列は配列番号４７に定義される。
２．キメラ抗体
マウス抗体Ｔａ１５０５の軽鎖（Ｌ鎖）及び重鎖（Ｈ鎖）の可変領域を、それぞれヒト
免疫グロブリン（Ｉｇ）Ｇ１（κ）のＬ鎖及びＨ鎖の定常領域と組み合わせることにより
、キメラ抗体を産生した。キメラ抗体の軽鎖（Ｌ鎖）のアミノ酸配列は配列番号４８に定
義され、それをコードするヌクレオチド配列は配列番号４９に定義される。キメラ抗体の
重鎖（Ｈ鎖）のアミノ酸配列は配列番号５０に定義され、それをコードするヌクレオチド
配列は配列番号５１に定義される。本明細書を通して、このキメラ抗体は、「キメラ抗体
」または「キメラ抗体Ｔａ１５０５」と呼ばれる。
３. ヒト化抗体
ａ．ＶＬ及びＶＨの設計
ヒト生殖系列から高い相同性を有する一次配列を選択し、相補性決定領域（ＣＤＲ）の
移植によってヒト化を実施し、様々なヒト化抗体を設計した。
詳細には、高い相同性を有するヒトフレームワークをデータベースから選択し；マウス
抗体Ｔａ１５０５のＣＤＲ領域を各フレームワークに挿入し；例えば活性を維持しながら
免疫原性を低下させるために、アミノ酸置換を行った。それにより、様々な軽鎖可変領域
（ＶＬ）及び重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列を設計した。ＶＬのアミノ酸配列の配
列番号及びそれらをコードする遺伝子のヌクレオチド配列の配列番号を表２Ａに示し、Ｖ
Ｈのアミノ酸配列及びそれらをコードする遺伝子のヌクレオチド配列の配列番号を表２Ｂ
に示す。ＶＬ及びＶＨのアミノ酸配列のアラインメントをそれぞれ図２Ａ及び図２Ｂに示
す。
表２Ａ：軽鎖可変領域（ＶＬ）
Figure 2023002670000003
 表２Ｂ：重鎖可変領域（ＶＨ）
Figure 2023002670000004
ｂ．免疫原性スコアに基づくＶＬとＶＨの組み合わせの選択
上記の手順によって設計したＶＬ及びＶＨを任意に組み合わせ、各組み合わせの免疫原
性スコア（ＤＲＢ１スコア）をｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイソフトウェアＥｐｉｂａｓｅ（
Ｌｏｎｚａ）によって計算した。以降の実験で使用するＶＬとＶＨの組み合わせは、免疫
原性スコアが所定値以下（ＤＲＢ１スコア：１５００）の低免疫原性を示す組み合わせか
ら選択した。選択したＶＬとＶＨの組み合わせを表３Ａに示し、これらの組み合わせの免
疫原性スコア（ＤＲＢ１スコア）を表３Ｂに示す。
表３Ａ：選択したＶＬとＶＨの組み合わせ
Figure 2023002670000005
 表３Ｂ：免疫原性スコア（ＤＲＢ１スコア）
Figure 2023002670000006
ｃ．ヒト化抗体の発現培養及び精製
上記の手順によって選択したＶＬ及びＶＨの各組み合わせについて、ＶＬ及びＶＨのア
ミノ酸配列をコードする遺伝子を調製した。ＶＬ遺伝子をヒト免疫グロブリンκＬ鎖定常
領域（ＣＬ）遺伝子にインフレームで融合させ（そのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列
はそれぞれ配列番号５２及び配列番号５３に定義される）、ＶＨ遺伝子をヒト免疫グロブ
リンγ－１Ｈ鎖定常領域（ＣＨ）遺伝子にインフレームで融合させ（そのアミノ酸配列及
びヌクレオチド配列は、配列番号５４及び配列番号５５に定義される）、それにより、各
結合部位に突然変異または欠失は生じないはずである。ＶＬ遺伝子及びＶＨ遺伝子の５’
末端を、それぞれヒト免疫グロブリンκＬ鎖遺伝子由来のシグナル配列（そのアミノ酸配
列及びヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号５６及び配列番号５７に定義される）及び
ヒト免疫グロブリンγ－１Ｈ鎖遺伝子由来のシグナル配列（そのアミノ酸配列及びヌクレ
オチド配列は、それぞれ配列番号５８及び配列番号５９に定義される）にインフレームで
融合させ、それにより、各結合部位に突然変異または欠失は生じないはずである。
上記手順で設計したシグナル配列融合Ｌ鎖及びＨ鎖をそれぞれコードする核酸構築物を
動物細胞発現用の発現ベクターに組み込み、ＥｘｐｉＣＨＯ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅ
ｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｋ．Ｋ．製）を用いて、抗体を発現させるための標準的なプ
ロトコルに従って培養した。各培養物を遠心分離により清澄化し、得られた培養上清をプ
ロテインＡアフィニティーカラムに供してヒト化抗体を精製した。ｐＨ２．８～３．５の
酸性溶液で溶出した画分を速やかに中和し、濃縮し、ゲルろ過カラムにかけて凝集物を除
去した。緩衝液をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に変えて主要画分を集め、これを溶媒
で適切な濃度に希釈した後、以下の試験に用いた。
以下の記載において、上記の手順によって産生した各ヒト化抗体は、そのＶＬ及びＶＨ
のコード名の組み合わせを使用して略記され得る。例えば、ＶＬとしてＬ１５及びＶＨと
してＨ１１を使用して産生したヒト化抗体は、Ｌ１５Ｈ１１と呼ばれる。
以下の試験では、特に指定しない限り、３％ＢＳＡ／ＰＢＳを抗体濃度を調整するため
の溶媒として使用した。
Ｂ．実施例２：抗原ペプチド結合親和性のＥＬＩＳＡ分析
１．抗原ペプチドに対する結合親和性のＥＬＩＳＡ分析
表３Ａに示すＶＬとＶＨの組み合わせを有するいくつかのヒト化抗体を、酵素結合免疫
吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって抗原ペプチドに対する結合親和性について分析した。
非リン酸化タウペプチドＰＤ１７（Ｓｅｒ４１３）、及びＳｅｒ４１３がリン酸化され
ているリン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐ（ｐＳｅｒ４１３）をそれぞれ冷ＰＢＳで１μｇ
／ｍＬに希釈し、得られた溶液を、それぞれプレートに５０μＬ／ウェルで分注し、４℃
で一晩静置した。溶液を除去した後、ブロッキング緩衝液（３％ウシ血清アルブミン（Ｂ
ＳＡ）－ＰＢＳ）を２７０μＬ／ウェルで分注し、プレートを４℃で一晩静置した。溶液
を除去した後、抗体溶液を３％ＢＳＡ－ＰＢＳで段階的に希釈し、次いで５０μＬ／ウェ
ルでプレートに添加し、室温で９０分間反応させた。非リン酸化タウペプチドＰＤ１７（
Ｓｅｒ４１３）及びリン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐ（ｐＳｅｒ４１３）のアミノ酸配列
は、それぞれ配列番号６０及び配列番号８に定義される。
０．０５％のＴｗｅｅｎ２０を含有するＴｗｅｅｎ２０含有トリス緩衝食塩水（ＴＢＳ
－Ｔ）で各ウェルを洗浄した。希釈緩衝液（３％ＢＳＡ－ＰＢＳ）で２０００倍に希釈し
たヤギ抗ヒトＩｇＧ－アルカリホスファターゼ標識（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ
．ＬＬＣ製）を、５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で６０分間反応させた。Ｔ
ＢＳ－Ｔで洗浄した後、発色溶液（１ｍｇ／ｍＬのｐ－ニトロフェニルリン酸（ｐＮＰＰ
）溶液）を１００μＬ／ウェルでプレートに添加して４０分間発色させた。４０５ｎｍの
波長で吸光度（光学濃度（ＯＤ）値）を測定した。
各抗体のＯＤ値と０．２５ｎＭキメラ抗体のＯＤ値との比を決定し、得られた比を以下
の３点尺度で評価することにより、反応性を評価した。
＋：十分な反応性（０．６≦ＯＤ比）、
±：非常にわずかな反応性（０．１５＜ＯＤ比＜０．６）、及び
－：反応性なし（ＯＤ比≦０．１５）。
表４Ａは、抗体とリン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐとの反応性の評価結果を示す。表４
Ｂは、抗体と非リン酸化タウペプチドＰＤ１７との反応性の評価結果を示す。キメラ抗体
に比べて、全てのヒト化抗体はリン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐとより高い反応性を示し
たが、非リン酸化タウペプチドＰＤ１７とはより低い反応性を示した。これらの結果は、
ヒト化抗体がリン酸化タウペプチドと選択的反応性を有することを示している。
表４Ａ：リン酸化ペプチドＰＤ１７Ｐとの反応性のＥＬＩＳＡ分析
Figure 2023002670000007
 表４Ｂ：非リン酸化ペプチドＰＤ１７との反応性のＥＬＩＳＡ分析
Figure 2023002670000008
２．リン酸化タウペプチドへの選択的結合親和性のＥＬＩＳＡ分析
表３Ａに示すＶＬ及びＶＨの組み合わせを有するヒト化抗体のいくつかを、キメラ抗体
Ｔａ１５０５を参照抗体として用いて、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）によって
、抗タウヒト化抗体のリン酸化タウペプチドに対する選択的結合親和性について分析した
。
１μｇ／ｍＬの非リン酸化ペプチドＰＤ１７またはリン酸化ペプチドＰＤ１７Ｐを含有
する溶液を５０μＬ／ウェルでプレートに分注し、４℃で一晩静置した。溶液を除去した
後、ブロッキング緩衝液（３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）－ＰＢＳ）を２７０μＬ／
ウェルで分注し、プレートを４℃で一晩静置し、それにより各ウェルに非リン酸化ペプチ
ドＰＤ１７またはリン酸化ペプチドＰＤ１７Ｐを固定化したプレートを調製した。
一連の５つの濃度の各抗体を、０．６μｇ／ｍＬ（４ｎＭ）の初期濃度から始めて、４
倍連続希釈によって調製した。各溶液を５０μＬ／ウェルでプレートのウェルに添加して
、室温で１時間反応させた。洗浄工程後、ヤギ抗ヒトＩｇＧアルカリホスファターゼ標識
（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．製）を２０００倍に希釈した後、５０μ
Ｌ／ウェルで各ウェルに添加してさらに一時間反応させた。
洗浄工程後、１ｍｇ／ｍＬのｐ－ニトロフェニルリン酸（ｐＮＰＰ）溶液を各ウェルに
１００μＬ／ウェルずつ添加して２０分間反応させた。４０５ｎｍの波長で吸光度（ＯＤ
）を測定した。
調製した各抗体の各濃度における吸光度ＯＤのデータを、ＳｏｆｔＭａｘ Ｐｒｏソフ
トウェアＶｅｒ．６．５（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏ
ｎ）を用いて分析し、下記の４つのパラメータロジスティック回帰曲線に割り当てられた
以下の数値Ａ～Ｄを決定した：
Figure 2023002670000009
 式中、
ｘは抗体の濃度を表し、及び
ｙは吸光度（ＯＤ値）を表す。
１ｎＭの濃度の非リン酸化ペプチドＰＤ１７の吸光度ＯＤ値を発現に入力して、ＯＤ値
に対応する各抗体の濃度ｘを計算した。ＰＤ１７の濃度は１ｎＭであったため、各ペプチ
ドについてのＰＤ１７への結合親和性に基づくリン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐへの結合
親和性のスケールファクターを１／ｘで計算し、リン酸化タウペプチドへの選択的結合親
和性の指標として使用した。
結果を図３のグラフに示す。リン酸化タウペプチドＰＤ１７Ｐに対するキメラ抗体Ｔａ
１５０５の結合親和性は、非リン酸化ペプチドＰＤ１７に対する親和性の３０倍であった
。対照的に、ヒト化抗体における選択的結合親和性は、高い選択性を示し、スケールファ
クターは４０～２１０倍であった。この結果は、ヒト化抗体がリン酸化ペプチドに対して
特異的結合親和性を有することを示している。
３．リン酸化タウペプチドを用いたＳｅｒ４１３リン酸化部位への選択的結合親和性の
ＥＬＩＳＡ分析
表３Ａに示すＶＬとＶＨの組み合わせを有するヒト化抗体を、様々なリン酸化ペプチド
を用いたＥＬＩＳＡにより、タンパク質の主要リン酸化部位のうちＳｅｒ４１３リン酸化
部位に選択的に結合する能力について、それぞれ分析した。
表５に示すように、１２個のリン酸化ペプチドを使用した。「エピトープ」と命名され
た列は、４Ｒ２Ｎ型タウタンパク質のリン酸化部位（複数可）を示しており（例えば、ペ
プチド番号１の「ｐＳ４６」は、Ｓｅｒ４６の部位がリン酸化エピトープであることを示
し、複数のエピトープの記載は、１つのペプチドが２つまたは３つのリン酸化部位を有す
ることを示す）、例外として、ペプチド番号１２は、Ｓｅｒ４１３部位を含むエピトープ
を有するがリン酸化されていない（ＰＤ１７）。
表５：タウタンパク質Ｓｅｒ４１３リン酸化部位への特異的結合を分析するためのペプチ
ド
Figure 2023002670000010
表５に示した１２個のペプチド、すなわちペプチド番号１～１２、またはこれらのペプ
チドとウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）もしくはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬ
Ｈ）との複合体を、４℃に冷却したＰＢＳでそれぞれ希釈して１μｇ／ｍＬとし、得られ
た溶液を５０μＬ／ウェルでプレートに分注し、４℃で一晩静置した。溶液を除去した後
、ブロッキング緩衝液（３％ＢＳＡ－ＰＢＳ）を２７０μＬ／ウェルで分注し、プレート
を４℃で一晩静置した。溶液を除去した後、精製抗体を３％ＢＳＡ－ＰＢＳで１５０ｎｇ
／ｍＬに希釈し、次いで５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で９０分間反応させ
た。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むトリス緩衝食塩水（ＴＢＳ－Ｔ）で各ウェルを洗浄
した。希釈緩衝液（３％ＢＳＡ－ＰＢＳ）で２０００倍希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋
Ｌ）－アルカリホスファターゼ標識（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．製）
を５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で６０分間反応させた。ＴＢＳ－Ｔで洗浄
した後、発色溶液（１ｍｇ／ｍＬ ｐＮＰＰ溶液）を１００μＬ／ウェルでプレートに添
加し、４０分間発色させた。測定波長４０５ｎｍ、基準波長５５０ｎｍで吸光度（ＯＤ値
）を測定した。
反応性は、以下の３点尺度で評価した。
＋：十分な反応性（１．０≦ＯＤ値）、
±：非常にわずかな反応性（０．５≦ＯＤ値＜１．０）、及び
－：反応性なし（ＯＤ値＜０．５）。
結果を表６に示す。全てのヒト化抗体は、ペプチド番号９（ｐＳｅｒ４１２／ｐＳｅｒ
４１３：ＰＲＨＬＳＮＶ（ｐＳ）（ｐＳ）ＴＧＳＩＤＭＶＤ）、ペプチド番号１０（ｐＳ
ｅｒ４１３：ＰＲＨＬＳＮＶＳ（ｐＳ）ＴＧＳＩＤＭＶＤ）、及びペプチド番号１１（ｐ
Ｓｅｒ４０９／ｐＳｅｒ４１２／ｐＳｅｒ４１３：ＰＲＨＬ（ｐＳ）ＮＶ（ｐＳ）（ｐＳ
）ＴＧＳＩＤＭＶＤ）に対してのみ強い結合親和性を示したが、タウタンパク質のＳｅｒ
４１３に対応する部位がリン酸化されていなかった他のペプチドには結合しなかった。結
合のパターン及び強度は、キメラ（キメラ抗体Ｔａ１５０５）と実質的に同じであった。
これらの結果は、ヒト化抗体がリン酸化Ｓｅｒ４１３部位を有するタウタンパク質に特異
的な結合親和性を有することを示している。
表６：様々なリン酸化タウペプチドとの反応性のＥＬＩＳＡ分析の結果
Figure 2023002670000011
Ｃ．実施例３：抗原タンパク質に対する結合親和性のＥＬＩＳＡ分析
表３Ａに示すＶＬとＶＨの組み合わせを有するいくつかのヒト化抗体を、ＥＬＩＳＡに
より、抗原タンパク質に対する結合親和性について分析した。
リン酸化タウタンパク質ｐＴａｕを調製するために、バキュロウイルス系を用いて昆虫
細胞中でタウタンパク質４Ｒ２Ｎを発現させた。また、高リン酸化タウタンパク質ｈｐＴ
ａｕを作製するために、タウタンパク質とＧＳＫ３βを同時に発現することが可能な組換
えバキュロウイルスを作製した。
組換えバキュロウイルスの製造において、ｐＦａｓｔＢａｃ１及びｐＦａｓｔＢａｃ
Ｄｕａｌベクターを使用した。リン酸化タウタンパク質ｐＴａｕについては、Ｈｉｓタグ
付加Ｃ末端を有するタウタンパク質４Ｒ２ＮをコードするｃＤＮＡをｐＦａｓｔＢａｃ１
に挿入した。高リン酸化タウタンパク質ｈｐＴａｕについては、Ｈｉｓタグ付加Ｃ末端を
有するタウタンパク質４Ｒ２ＮをコードするｃＤＮＡ及びＧＳＫ３βをコードするｃＤＮ
ＡをｐＦａｓｔＢａｃ Ｄｕａｌに挿入した。Ｈｉｓタグ付加タウタンパク質４Ｒ２Ｎの
アミノ酸配列及びヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号７０及び７１に定義される。Ｇ
ＳＫ３βのアミノ酸配列及びヌクレオチド配列は、それぞれ配列番号７２及び７３に定義
される。
得られたベクターを、それぞれリポフェクションにより細胞株Ｓｆ９に導入し、細胞を
培養して組換えバキュロウイルスを調製した。次いで、得られた組換えバキュロウイルス
を用いて細胞株Ｓｆ９またはＴｎ５を感染させ、それによってリン酸化タウタンパク質（
ｐＴａｕ）及び高リン酸化タウタンパク質（ｈｐＴａｕ）を発現させた。
所望のタンパク質を発現する細胞を収集し、超音波処理及び遠心分離にかけて細胞溶解
物を得て、次いでこれをＮｉ－ＮＴＡカラムにかけてタウタンパク質を精製した。精製タ
ウタンパク質の濃度は、標準試料としてウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を用いて、ビシン
コニン酸（ＢＣＡ）アッセイにより決定した。
得られた高リン酸化タウタンパク質（ｈｐＴａｕ）及びリン酸化タウタンパク質（ｐＴ
ａｕ）を、冷却したＰＢＳを用いて１μｇ／ｍＬに希釈し、希釈液を５０μＬ／ウェルで
プレートに分注し、４℃で一晩静置した。溶液を除去した後、ブロッキング緩衝液（３％
ＢＳＡ－ＰＢＳ）を２７０μＬ／ウェルで分注し、プレートを４℃で一晩静置した。緩衝
液を除去した後、３％ＢＳＡ－ＰＢＳで段階希釈して調製した一連の抗体溶液を５０μＬ
／ウェルでプレートに添加し、室温で９０分間反応させた。
その後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むトリス緩衝食塩水（ＴＢＳ－Ｔ）でウェルを
洗浄した。希釈緩衝液（３％ＢＳＡ－ＰＢＳ）で２０００倍希釈したヤギ抗ヒトＩｇＧ－
アルカリホスファターゼ標識（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．製）を５０
μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で６０分間反応させた。ＴＢＳ－Ｔで洗浄した後
、発色溶液（１ｍｇ／ｍＬ ｐＮＰＰ溶液）を１００μＬ／ウェルでプレートに添加し、
４０分間発色させた。４０５ｎｍの波長で吸光度（ＯＤ値）を測定した。
各抗体のＯＤ値と０．２５ｎＭキメラ抗体のＯＤ値との比を決定し、得られた比を以下
の３点尺度で評価することによって反応性を評価した。
＋：十分な反応性（０．６≦ＯＤ比）、
±：非常にわずかな反応性（０．１５＜ＯＤ比＜０．６）、及び
－：反応性なし（ＯＤ比≦０．１５）。
表７Ａは、ヒト化抗体と高リン酸化タウタンパク質ｈｐＴａｕとの反応性を評価した結
果を示す。表７Ｂは、ヒト化抗体とリン酸化タウタンパク質ｐＴａｕとの反応性を評価し
た結果を示す。結果は、全てのヒト化抗体が、キメラ抗体の反応性に比べて、高リン酸化
タウタンパク質ｈｐＴａｕ及びリン酸化タウタンパク質ｐＴａｕの両方に対して高い反応
性を有することを示している。
表７Ａ：高リン酸化タウタンパク質ｈｐＴａｕとの反応性のＥＬＩＳＡ分析の結果
Figure 2023002670000012
 表７Ｂ：リン酸化タウタンパク質ｐＴａｕとの反応性のＥＬＩＳＡ分析の結果
Figure 2023002670000013
Ｄ．実施例４：ＳＰＲによる結合親和性の分析
表３Ａに示すＶＬとＶＨの組み合わせを有するいくつかのヒト化抗体を、参照抗体とし
てキメラ抗体Ｔａ１５０５を用いて、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）による結合親和性分
析に供した。
抗原タンパク質として高リン酸化タウタンパク質４Ｒ２Ｎ（ｈｐＴａｕ：実施例３参照
）を用い、陰性対照としてＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉにより産生した非リン酸化
タウタンパク質（Ｔａｕ：Ｈｉｓタグ付加非リン酸化タウタンパク質４Ｒ０Ｎ：ＡＴＧｅ
ｎ Ｃｏ．Ｌｔｄ．、カタログ番号：ＡＴＧＰ０７９５）を用いた。使用した抗原ペプチ
ドは、Ｓｅｒ４１３のみがリン酸化されたモノリン酸化タウペプチド（１×Ｐ）、及びＳ
ｅｒ４１３に加えてＳｅｒ４０９及びＳｅｒ４１２がさらにリン酸化されたトリリン酸化
タウペプチド（３×Ｐ）であった。これらのペプチドのアミノ酸配列を表８に示す。使用
した陰性対照ペプチドは非リン酸化タウペプチド（Ｎｏｎ Ｐ）であり、そのアミノ酸配
列も表８に示す。Ｈｉｓタグ付加非リン酸化タウタンパク質４Ｒ０Ｎのアミノ酸配列は、
配列番号７４に定義される。モノリン酸化タウペプチド１×Ｐ、トリリン酸化タウペプチ
ド３×Ｐ、及び非リン酸化タウペプチドＮｏｎ Ｐのアミノ酸配列は、それぞれ配列番号
７５、７６、及び７７に定義される。
表８：ＳＰＲに使用する抗原ペプチド
Figure 2023002670000014
高リン酸化タウタンパク質４Ｒ２Ｎ（ｈｐＴａｕ）、非リン酸化タウタンパク質４Ｒ０
Ｎ、モノリン酸化タウペプチド１×Ｐ、トリリン酸化タウペプチド３×Ｐ、及び非リン酸
化タウペプチドＮｏｎ Ｐと、各抗体との結合親和性を、ＳＰＲシステムＢｉａｃｏｒｅ
Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ）を用いて、そのシステムに添付
された評価用の取扱説明書に従って測定した。
結合親和性を：ＮＴＡセンサーチップ（ニトリロ三酢酸（ＮＴＡ）が既に固定化されて
いるカルボキシメチルデキストラン層を含む：コード番号ＢＲ－１００５－３２）を調製
し；アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｊａｐａｎ、コード番号
ＢＲ－１００６－３３）を用いたアミンカップリング反応を介して、Ｈｉｓ－ｔａｇと融
合した上記各ペプチド及び表８に示す各抗原ペプチドを共有結合によりセンサーチップ上
に固定化し；及び固定化したタンパク質及びペプチドに対する抗体の結合速度を測定する
ことを含む方法により測定した。
固定化反応溶液としてＨＢＳ－Ｎ緩衝液（コード番号ＢＲ－１００３－６９）を用い、
塩化ニッケル溶液と、ＮｉをＮＴＡに結合させるためのＮＴＡセンサーチップとを反応さ
せることにより、Ｈｉｓタグ付加ｈｐＴａｕまたはＴａｕタンパク質をそれぞれセンサー
チップ上に固定化した。続いて、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－
カルボジイミド塩酸塩（１－エチル－３－（３－ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ド塩酸塩：ＥＤＣ）とＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合溶液でセンサーチ
ップを活性化した。４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸（
ＨＥＰＥＳ）緩衝液（０．０１Ｍ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＤＴＴ、
１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ７．２）で１００～５００ｎｇ／ｍＬの濃度に調整した、各Ｈｉ
ｓタグ付加タンパク質の溶液をセンサーチップに塗布し、それによってタンパク質をＮｉ
－ＮＴＡとの共有結合によりセンサーチップ上に固定化した。残りの活性ＮＨＳをエタノ
ールアミンでブロックし、ＮｉイオンをＥＤＴＡ溶液で除去した（Ｎｉ－親和性アミンカ
ップリング：国際公開第ＷＯ２００５／０２２１５６号参照）。ＮＴＡセンサーチップを
Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド（ＥＤＣ）塩酸塩
とＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の混合溶液で活性化することにより、抗原ペ
プチド（１×Ｐ、３×Ｐ、及びＮｏｎ Ｐ）をそれぞれセンサーチップ上に固定化し、そ
の後、１０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４～４．５）で１～１０μＭに希釈した抗原
ペプチドの溶液をセンサーチップに塗布し、それにより、ペプチドをセンサーチップ上に
共有結合させた。残りの活性ＮＨＳをエタノールアミンでブロックした。このようにして
、上記のタンパク質及びペプチドをそれぞれ固定化したセンサーチップを作製した。
ＣＡＰＳ緩衝液（ｐＨ １０．５）をこれらのセンサーチップに３７℃で塗布して、タ
ンパク質またはペプチドで固定化したセンサーチップ表面を安定化させた。特異的結合反
応溶液としてＨＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．２）を用いて調製した各抗体の溶液を、反応さ
せるために１５０秒間（同じ評価では一様）、センサーチップ表面に０．２～１ｎＭの範
囲（推定結合解離定数［ＫＤ］付近）の濃度で塗布し、結合速度を測定した。得られたデ
ータを、Ｂｉａｃｏｒｅ分析ソフトウェア（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェア
、バージョン３．０）を用いて分析した。
各抗体の結合速度は、抗原タンパク質４Ｒ２Ｎ（ｈｐＴａｕ）のセンサーチップへの結
合速度から陰性対照としての非リン酸化タンパク質４Ｒ０Ｎのセンサーチップへの結合速
度を差し引くことによって補正した。各抗原ペプチドの結合速度は、抗原ペプチド１×Ｐ
及び３×Ｐのそれぞれの結合速度から陰性対照としての非リン酸化ペプチドＮｏｎ Ｐの
センサーチップへの結合速度を差し引くことによって補正した。測定に供した試料濃度の
範囲内で、非リン酸化タウタンパク質４Ｒ０Ｎまたは非リン酸化ペプチドＮｏｎ Ｐへの
各抗体の結合は観察されなかった。
表９Ａは、リン酸化タウタンパク質４Ｒ２Ｎ（ｈｐＴａｕ）に対するヒト化抗体の結合
活性を示す。表９Ｂは、モノリン酸化タウペプチド１×Ｐ及びトリリン酸化タウペプチド
３×Ｐに対するヒト化抗体の結合活性の結果を示す。結果は、各ヒト化抗体が、高リン酸
化タウタンパク質ｈｐＴａｕ、モノリン酸化タウペプチド１×Ｐ、及びトリリン酸化タウ
ペプチド３×Ｐの全てに対して高い結合活性を示したことを示している。
表９Ａ：リン酸化タウタンパク質（ｈｐＴａｕ）に対するヒト化抗体の結合活性（１：１
結合モデル）
Figure 2023002670000015
 表９Ｂ：リン酸化ペプチド（１×Ｐ、３×Ｐ）に対するヒト化抗体の結合活性（１：１結
合モデル）
Figure 2023002670000016
Ｅ．実施例５：ＡＤ患者脳ホモジネート中のｐＳｅｒ４１３－タウの結合親和性分析
参照抗体としてマウス抗体Ｔａ１５０５及びキメラ抗体を用いて、表３Ａに示すＶＬ及
びＶＨの組み合わせを有するヒト化抗体のうち、Ｌ１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４
７Ｈ６５を、液相中のアルツハイマー病（ＡＤ）患者臨床試料由来のＳｅｒ４１３リン酸
化タウタンパク質（ｐＳｅｒ４１３－タウ）への結合親和性について評価した。
ヒト化抗体、マウス抗体、及びキメラ抗体を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド－ＬＣ－
ビオチン（ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆ
ｉｃ Ｋ．Ｋ．）を用いてそれぞれビオチン化し、続いてＰＢＳで透析した。
Ｂｒａａｋ病期Ｖ／ＶＩのＡＤ患者の脳由来の凍結海馬組織（１６０ｍｇ）を０．８ｍ
ＬのＴＢＳ－Ｉ（トリス緩衝食塩水、プロテアーゼ阻害剤カクテル、ホスファターゼ阻害
剤カクテル）に添加し、氷水中で超音波処理した。超音波処理した溶液を４℃、３０００
×ｇで１０分間遠心し、上清を回収し、さらに４℃、１０００００×ｇで１５分間超遠心
して脳ホモジネートを取得した。Ｉｎｎｏｔｅｓｔ ｐＴａｕ（ｐＴ１８１）キット（Ｆ
ｉｊｉｒｅｂｉｏ Ｉｎｃ．）をＳｅｒ４１３リン酸化タウタンパク質（ｐＳｅｒ４１３
－タウ）のＥＬＩＳＡシステムとして使用したが、キットに含まれるビオチン化抗体（Ｃ
ＯＮＪ１と表示）を上記で生成したビオチン化抗体で置換した。
上記で作製したビオチン化抗体のそれぞれを０．１ｎＭの濃度で溶液にし、１０００倍
希釈の脳ホモジネートと共にＨＴ７抗体固定化ＭＴプレート（キットに含まれる）に添加
した。得られた試料を混合し、４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを洗浄し
、ＨＲＰ標識ストレプトアビジン（キットにＣＯＮＪ２として含まれる）をプレートに添
加し、続いて１時間インキュベートした。洗浄後、発色試薬ＴＭＢを加え、遮光下室温で
３０分間インキュベートした。次いで反応停止剤溶液（キット中にＳＴＯＰ溶液として含
まれる）を用いて反応を停止させ、４５０ｎｍの波長での吸光度を測定した。
結果を図４に示す。図４のグラフに示すように、ヒト化抗体Ｌ１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１
１、及びＬ４７Ｈ６５は全て、ＡＤ患者の臨床試料由来のＳｅｒ４１３リン酸化タウタン
パク質（ｐＳｅｒ４１３－タウ）に対して高い結合親和性を示した。
Ｆ．実施例６：血中速度試験
５つの初期ヒト化抗体変異体を、正常マウスにおけるその薬物動態について、市販の抗
体ハーセプチン（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ
）及びキメラＴａ１５０５抗体と比較して試験した。各ヒト化抗体変異体の軽鎖及び重鎖
を以下の表１０にまとめる。
表１０．いくつかの初期ヒト化抗体変異体の軽鎖及び重鎖
Figure 2023002670000017
１１週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．）に１０ｍｇ／ｋｇの用量で抗体を腹腔内注射し
た。投与後１、３、８、２４、及び７２時間に収集した血液から血漿を得た。試料サイズ
は、抗体あたり動物２匹であった。
抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体によるサンドイッチＥＬＩＳＡを用いて血漿抗体濃度
を決定した。マウス血漿を用いて各抗体を段階希釈することにより検量線をプロットした
。
血漿を１，０００倍に希釈し、抗体濃度を測定した。
ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリクローナル抗体の１μｇ／ｍＬのＰＢＳ溶液を９６ウェ
ルプレート（ＭａｘＳｏｒｐ（ＮＵＮＣ））にピペットで移し、４℃で一晩静置した。そ
の後、３％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロッキングを行い、固定化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリ
クローナル抗体を含むプレートを調製した。マウス血漿を用いて抗体を段階希釈し、標準
物質を得た。血漿及び標準物質を３％ＢＳＡ／ＰＢＳで希釈し、固定化ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ）ポリクローナル抗体を含むプレートに５０μＬ／ウェルで、ピペットで移した。
混合物を室温で１．５時間反応させ、次いでプレートをＴＢＳ－Ｔ（ＴＢＳ、０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄した。その後、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋
Ｌ）ポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０８７－
０４）を３％ＢＳＡ／ＰＢＳで２０００倍に希釈した溶液を５０μＬ／ウェルで、ピペッ
トで移し、反応を室温で１時間進行させた。次にプレートをＴＢＳ－Ｔで洗浄し、発色試
薬を１００μＬ／ウェルで添加し、プレートを室温で１時間インキュベートした。その後
、プレートリーダーを用いて４０５ｎｍと５５０ｎｍの吸光度を測定した。
検量線を標準物質でプロットし、これを用いて血漿抗体濃度を計算した。結果を図５Ａ
に示す。
試験した最初のヒト化変異体（変異体２、５、６、９、及び１０）は、投与後８時間で
、ハーセプチン及びキメラ抗体のレベルに比べて血漿濃度の急速な減少を示し、これは注
射後最大３日間、高く安定していた。これらの初期ヒト化抗体は、キメラ抗体に比べてよ
り短い半減期及び低いＰＫ特性を示したが、これは、これらの変異体の高いｐＩ値に起因
する可能性が高い。キメラ抗体のＰＫに達するためにはさらなる改良が必要であった。
表３Ａに示すＶＬとＶＨの組み合わせを有するヒト化抗体のうち、Ｌ１５Ｈ１１、Ｌ４
６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５を血中動態の試験に供した。使用した参照抗体は、特許情報
またはデータベース情報に開示されているアミノ酸配列情報に基づく組換え発現により作
製した、ＡＤ治療の臨床試験に使用するキメラ抗体Ｔａ１５０５及び公知のヒト化抗体で
ある。具体的には、ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎ
ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）（ＩＭＧＴ）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｉｍｇｔ．ｏｒｇ）のデータベースをソラネズマブ（抗Ａ□抗体、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ
ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ）について参照し；ＩＰＮ００７（抗タウＮ末端抗体、Ｂｒｉｓ
ｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ ｉＰｉｅｒｉａｎ）には、ＷＯ２０１４／２００９
２１Ａ１に開示されているＶＨ２Ｖｋ３のアミノ酸配列を使用し；また、ＭＡｂ３２２１
（抗タウ－ｐＳ４２２抗体、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｋ．Ｋ．）には、Ｗ
Ｏ２０１５／０９１６５６Ａ１に開示されているＶＨ３２ＶＬ２１のアミノ酸配列を使用
した。
各抗体を１１週齢のオスのＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｊａｐａｎ，Ｉｎｃ．）にそれぞれ１０ｍｇ／ｋｇの濃度で腹
腔内投与した。投与後１、３、８、及び２４時間時点、さらには３日目及び７日目に血液
を採取して血漿を収集した。各抗体を３回試験した（Ｎ＝３）。
血漿中の抗体濃度は、抗ヒトポリクローナル抗体を用いたサンドイッチＥＬＩＳＡによ
り測定した。具体的には、９６ウェルプレート（Ｍａｘ Ｓｏｒｐ（ＮＵＮＣ））に１μ
ｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔ
ｅｃｈ）を含むＰＢＳ溶液を加え、４℃で一晩固定化し、３％ＢＳＡ－ＰＢＳでブロッキ
ングし、これによりヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリクローナル抗体固定化プレートを作製
した。
これとは別に、既知濃度の一連の標準抗体試料を、抗体を投与しなかったマウスから採
取した血漿で各抗体を段階希釈することにより調製し、検量線の作成のために測定した。
測定対象の血漿試料及び標準試料をそれぞれ１００００倍に希釈し、ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ）ポリクローナル抗体固定化プレートに５０μＬ／ウェルで添加し、室温で１時間
３０分反応させ、その後、プレートをＴＢＳ－Ｔ（トリス緩衝食塩水、０．０５％Ｔｗｅ
ｅｎ２０）で洗浄した。その後、３％ＢＳＡ－ＰＢＳで２０００倍に希釈したアルカリホ
スファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ポリクローナル抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉ
ｏｔｅｃｈ）の溶液を５０μＬ／ウェルでプレートに添加して室温で１時間反応させた。
ＴＢＳ－Ｔで洗浄後、発色溶液（１ｍｇ／ｍＬ ｐＮＰＰ溶液）を１００μＬ／ウェルで
プレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。次いで、プレートリーダーを用い
て４０５ｎｍの測定波長及び５５０ｎｍの基準波長で吸光度を測定した。標準試料の測定
結果に基づいて検量線を作成し、この検量線を用いて各血漿試料中の抗体濃度を算出した
。
図５Ｂは、血漿中の抗体濃度の経時変化を示すグラフである。グラフから明らかなよう
に、ヒト化抗体Ｌ１５Ｈ１１（ＬＣ配列番号３２ ＨＣ配列番号１８）、Ｌ４６Ｈ１１（
ＬＣ配列番号３６、ＨＣ配列番号１８）、及びＬ４７Ｈ６５（ＬＣ配列番号３８、ＨＣ配
列番号３０）（全てヒトＩｇＧ１（配列番号１３５）及びヒトκ（配列番号７９）を使用
）は、キメラ抗体Ｔａ１５０５と実質的に同じ血中動態を示した。これらのヒト化抗体Ｌ
１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５の血中動態は、公知のヒト化抗体ＩＰＮ０
０７及びＭＡｂ３２２１の血中動態に匹敵し、公知のヒト化抗体ソラネズマブの血中動態
より有意に優れていた。
Ｇ．実施例７：脳内移行の分析
血漿中薬物動態を向上させたヒト化変異体の脳内濃度を分析する試験を実施した。
抗体の注射の１週間後に、親マウス抗体、キメラ抗体、またはヒト化抗体変異体（Ｌ１
５Ｈ１１、Ｌ３６Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、Ｌ４８Ｈ１２、Ｌ４８Ｈ４７、Ｌ４８Ｈ６４、
Ｌ４７Ｈ６５、またはＬ４８Ｈ１１）を注射したマウスから血液を採取した。次に、動物
を３種麻酔カクテルで麻酔し、開腹し、そして腹部大動脈を介して放血させた。その後、
脳組織を採取した。この採取した脳組織を左右の半球に分け、ドライアイス／エタノール
で凍結させ、－８０℃で保存した。凍結させた各半球を秤量し、２ｍＬチューブに移した
。次に、０．８ｍＬのＴＢＳ－Ｉ（トリス緩衝食塩水、プロテアーゼ阻害剤カクテル及び
ホスファターゼ阻害剤カクテル）を加え、混合物を氷水中で超音波処理した。超音波処理
した混合物を３０００×ｇ、４℃で１０分間遠心分離し、上清を集めた。上清をさらに１
００，０００×ｇ、４℃で１５分間遠心して脳ホモジネートを得た。
ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリクローナル抗体の１０μｇ／ｍＬのＰＢＳ溶液を９６ウ
ェルプレート（ＭａｘＳｏｒｐ（ＮＵＮＣ））にピペットで移し、４℃で一晩静置した。
その後、３％ＢＳＡ／ＰＢＳでブロッキングを行い、固定化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポ
リクローナル抗体を含むプレートを作製した。抗体を注射していないマウスから得た脳ホ
モジネートを用いて抗体を段階希釈し、標準物質を得た。
脳ホモジネート及び標準物質を１０倍に希釈し、固定化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）ポリ
クローナル抗体を含むプレートに５０μＬ／ウェルで、ピペットで移した。混合物を室温
で２時間反応させ、次いでプレートをＴＢＳ－Ｔ（ＴＢＳ、０．０２５％Ｔｗｅｅｎ２０
）で洗浄した。次に、アルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ポリクローナ
ル抗体（Ｓｉｇｍａ、カタログ番号ＳＡＢ３７０１３３７－１ＭＧ）を３％ＢＳＡ／ＰＢ
Ｓで２０００倍に希釈した溶液を５０μＬ／ウェルで、ピペットで移し、反応を室温で１
時間進行させた。次に、プレートをＴＢＳ－Ｔで洗浄し、発色試薬ｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ
、カタログ番号Ｐ７９９８）を１００μＬ／ウェルで加え、プレートを室温で１時間イン
キュベートした。その後、プレートリーダーを用いて４０５ｎｍと５５０ｎｍの吸光度を
測定した。
標準物質を用いて検量線をプロットし、これを用いて脳ホモジネート中の抗体濃度を計
算した。脳重量（全脳容積）あたりの抗体濃度を決定し、血漿濃度に対する比を計算した
。
図６Ａは、良好な薬物動態を有するヒト化抗体変異体（例えば、図５ＢによるＬ１５Ｈ
１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５）の脳内濃度が向上していたことを示す。
ＡＤ治療のための臨床試験に使用したキメラ抗体Ｔａ１５０５及び公知のヒト化抗体ソ
ラネズマブ、ＩＰＮ００７、及びＭＡｂ３２２１を参照抗体として用いて、ヒト化抗体Ｌ
１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５のそれぞれの脳内移行を分析した。
実施例６における各抗体の投与の１週間後、マウスから血液を採取し、次いでマウスを
３種類の混合麻酔薬による麻酔下で開腹術に供した。腹部大静脈からの放血による死亡後
、脳組織を採取した。収集した脳組織を左右の半球に分け、それらをドライアイスエタノ
ール中で凍結させ、－８０℃で保存した。凍結させた半球のそれぞれを秤量し、２ｍＬの
チューブに移し、そこに０．８ｍＬのＴＢＳ－Ｉ（トリス緩衝食塩水、プロテアーゼ阻害
剤カクテル、及びホスファターゼ阻害剤カクテル）を加えた。次いで各半球を氷水中で超
音波処理した。超音波処理した溶液を４℃、３０００×ｇで１０分間遠心し、上清を回収
し、さらに４℃、１０００００×ｇで１５分間超遠心して脳ホモジネートを得た。
脳ホモジネート中の抗体レベルを、抗ヒトポリクローナル抗体を用いた抗原ＥＬＩＳＡ
によって測定した。具体的には、１０μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃを含むＰＢＳ
溶液を９６ウェルプレート（Ｍａｘ Ｓｏｒｐ（ＮＵＮＣ））に添加し、４℃で一晩固定
化した後、３％ＢＳＡ－ＰＢＳでブロッキングし、それによって固定化プレートを製造し
た。
これとは別に、既知濃度の一連の抗体標準試料を、抗体を投与していないマウスから採
取した脳ホモジネートで各抗体を段階希釈することによって調製し、検量線の作成のため
に測定した。
脳ホモジネート及び測定する標準試料をそれぞれ０．１％スキムミルク－３％ＢＳＡ－
ＰＢＳで１０倍希釈し、５０μＬ／ウェルでＰＤ１７（Ｐ）固定プレートに添加し、室温
で２時間反応させた。次にプレートをＴＢＳ－Ｔ（ＴＢＳ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）
で洗浄した。続いて、０．１％スキムミルク－３％ＢＳＡ－ＰＢＳで２０００倍に希釈し
たアルカリホスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ポリクローナル抗体（Ｓｉｇｍａ
－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．、カタログ番号ＳＡＢ３７０１３３７：１ｍｇ）の溶
液を５０μＬ／ウェルでプレートに添加し、室温で１時間反応させた。プレートをＴＢＳ
－Ｔで洗浄した後、ｐＮＰＰ（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｏ．ＬＬＣ．、カタログ
番号Ｐ７９９８：１００ｍＬ）を発色基質として１００μＬ／ウェルで添加し、続いて室
温で１時間インキュベートした。次いで、プレートリーダーを用いて４０５ｎｍの測定波
長及び５５０ｎｍの参照波長で吸光度を測定した。標準試料の測定結果に基づいて検量線
を作成し、その検量線を用いて各脳ホモジネート試料中の抗体レベルを求め、脳内抗体レ
ベルとして評価した。
さらに、開腹前に採取した血液を用いて実施例６と同様にして血漿中の抗体レベルを測
定し、血漿中の抗体レベルに対する脳内の抗体レベルの比を算出した。
図６Ｂは、脳内の各抗体のレベルの、血漿中の対応する抗体のレベルに対する比を示す
グラフである。ヒト化抗体Ｌ１５Ｈ１１、Ｌ４６Ｈ１１、及びＬ４７Ｈ６５の血漿中の抗
体濃度に対する脳内の抗体濃度の比は、キメラ抗体Ｔａ１５０５及び公知のヒト化抗体Ｉ
ＰＮ００７、ＭＡｂ３２２１、及びソラネズマブの抗体濃度比に比べて高かった。この結
果は、これらのヒト化抗体が脳への高い移行性を有することを示している。
実施例８：選択的ヒト化抗体のさらなる開発
ＶＬ４６のＣＤＲ１配列にさらなる変異を導入し、脱アミド化ホットスポットを除去し
、及び／またはＣＤＲ配列を親マウス配列に戻した。表１１は、ＶＬ４６ ＣＤＲ１に導
入した変異をまとめたものである。
表１１．ＶＬ４６ ＣＤＲ１に導入した変異
Figure 2023002670000018
さらに、新たに生成されたヒト化抗体変異体において、Ｓ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ
１及びＩｇＧ４を含む異なるＩｇＧアイソタイプを試験した。表１２は、親マウス抗体及
びキメラ抗体とともに、新たに生成されたヒト化抗体変異体の軽鎖及び重鎖をまとめたも
のである。
表１２．特異的抗体の軽鎖及び重鎖
Figure 2023002670000019
Ｈ．実施例９：新たに生成されたヒト化抗体変異体のＢｉａｃｏｒｅ（商標）結合分析
新たに生成されたヒト化抗体変異体の結合親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００
及び４０００のバイオセンサー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｃｈｉｃａｇｏ、ＩＬ）
を用いて測定した。以下のランニング緩衝液：１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ＧＥ Ｈｅａｌｔ
ｈｃａｒｅ、ＢＲ１００６７１）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
、ＢＲ１００６７１）、０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒ
ｅ、ＢＲ１００６７１）、２ｍＭ ＤＴＴ（Ｓｉｇｍａ、１０７０８９８４００１、Ｓｔ
．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）、及び１ｍＭ ＥＤＴＡ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２８９９
５０４３）を、以下に特に記載のない限り、固定化、試料希釈及びデータ収集に使用した
。
固定化したタンパク質とは、チップ上に固定化した組換えヒトリン酸化タウタンパク質
を指し；固定化した１×Ｐペプチドとは、チップ上に固定化したリン酸化ペプチド（ＴＳ
ＰＲＨＬＳＮＶＳ（ｐＳ）ＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＣ、配列番号７５）を指す。これらの方
法は両方とも、親和性測定に対する結合活性成分を有する。４×Ｐペプチド分析物は、チ
ップ上に捕捉された抗体及び溶液中の４×リン酸化ペプチド（ＧＡＥＩＶＹＫ（ｐＳ）Ｐ
ＶＶＳＧＤＴ（ｐＳ）ＰＲＨＬＳＮＶＳ（ｐＳ）ＴＧＳＩＤＭＶＤ（ｐＳ）ＰＱＬＡＴＬ
ＡＤＥＶＳＡＳＬＡＫＱＧＬ、配列番号７８）を有する。
固定化したリン酸化タウタンパク質への抗体の結合を、シリーズＳセンサーチップＮＴ
Ａ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ１０００３４）を用いて測定した。固定化のため
のランニング緩衝液は、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ２、０．０５％ｖ
／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ１００６７１）
であり、流速は１０μＬ／分であった。３５０ｍＭのＥＤＴＡを１分間注入してチップを
洗浄し、続いて０．５ｍＭのＮｉＣｌ２（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＮＴＡ試薬キッ
ト）を２分間注入して、ｈｉｓタグ付加タンパク質を捕捉するためのチップを調製した。
アミンカップリングキット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ１００６３３）を使用し
て製造元の指示に従ってチップを活性化し、次に３００ｎＭのリン酸化タウタンパク質（
８０ＡＷＢ）を所望の量のタンパク質が固定化されるまで注入した。アミンカップリング
キットのエタノールアミンでチップをブロックした。各実験は、複数レベルの固定化リン
酸化タウタンパク質を使用した。最低レベルは５４レゾナンスユニット（ＲＵ）～４５２
ＲＵの範囲で様々であり、最高レベルは４６３ＲＵ～１０２０ＲＵの範囲で様々であった
。固定化リン酸化タウタンパク質に結合するＴａ１５０５抗体の親和性を測定するために
、０．３７ｎＭ～３０ｎＭの濃度が得られる、各抗体の５点構成の３倍希釈系列を調製し
た。各濃度及びいくつかの緩衝液のブランクを流速４５μｌ／分で３分間注入した。抗体
の解離を１５分間モニタリングした後、１００ｍＭ ＣＡＰＳ（Ｓｉｇｍａ、Ｃ６０７０
）、１Ｍ ＫＣｌ（Ｓｉｇｍａ、Ｐ９５４１）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＤＴＴ、ｐ
Ｈ１０．５を３０秒～１分注入して表面を再生させた。
固定化したリン酸化タウペプチドへの抗体結合を、シリーズＳセンサーチップＣＭ３（
ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ１００５３６）を用いて測定した。アミンカップリン
グキットを使用してチップを活性化し、次いで、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０中
の３０μｇ／ｍＬリン酸化タウペプチド（配列番号７５）を、５１ＲＵが固定化されるま
で注入した。チップをエタノールアミンでブロックした。非リン酸化タウペプチド（ＴＳ
ＰＲＨＬＳＮＶＳＳＴＧＳＩＤＭＶＤＳＰＣ、配列番号７７）を用いて、陰性対照の参照
表面を同様に調製した。固定化リン酸化タウペプチドに結合するＴａ１５０５抗体の親和
性を測定するために、０．３７ｎＭ～３０ｎＭの濃度が得られる、各抗体の５点構成の３
倍希釈系列を調製した。各濃度及び数種類の緩衝液ブランクを流速４５μＬ／分で３分間
注入した。抗体の解離を１５分間モニタリングした。１００ｍＭ塩酸（Ｆｉｓｈｅｒ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ＳＡ５６－１、Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）の３０秒間の注入により、
表面を再生させた。
固定化抗体へのリン酸化タウペプチドの結合を、シリーズＳセンサーチップＣＭ５（Ｇ
Ｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２９１４９６０３）を用いて測定した。アミンカップリング
キットを用いてチップを活性化し、次いで、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．０中の１
～３μｇ／ｍｌの抗体（Ｇｅ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、ＢＲ１００３５１）を、２８０～
９１００ＲＵの抗体が固定化されるまで注入した。チップをエタノールアミンでブロック
した。固定化Ｔａ１５０５抗体に結合するリン酸化タウペプチド（配列番号７８）の親和
性を測定するために、５．１ｎＭ～５００ｎＭの濃度が得られる、ペプチドの６点構成の
２．５倍希釈系列を調製した。試料と数種類の緩衝液ブランクを３０～５０μＬ／分で３
分間注入し、解離を１５分間モニタリングした。調整をせずに、または塩酸でｐＨを３．
５に調整して、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．５を３０秒間注入して表面を再生させ
た。
Ｂｉａｃｏｒｅ（商標）Ｔ２００評価ソフトウェアバージョン２．０またはＢｉａｃｏ
ｒｅ（商標）４０００評価ソフトウェアバージョン１．１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ
）を使用して、データを処理し、フィッティングした。陰性対照フローセルから反応を差
し引き、及び緩衝液注入から反応を差し引くかまたは２回の緩衝液の注入結果から反応の
平均を差し引くことによって、データを「二重参照」した。次いで、データを「１：１結
合」モデルに当てはめて、会合速度定数ｋａ（Ｍ－１ｓ－１、式中「Ｍ」はモル濃度に等
しく、「ｓ」は秒に等しい）及び解離速度定数ｋｄ（ｓ－１）を決定した。これらの速度
定数を用いて平衡解離定数、ＫＤ（Ｍ）＝ｋｄ／ｋａを計算した。表１３は、新たに生成
されたヒト化抗体変異体のＫＤ値を、親マウス抗体及びキメラ抗体のＫＤ値と比較してま
とめたものである。
表１３．リン酸化タウタンパク質またはペプチドに対する抗体のＫＤ（ｎＭ）値
Figure 2023002670000020
Ｉ．実施例１０：親マウス抗体、キメラ抗体、及びいくつかのヒト化抗体変異体のＥＬ
ＩＳＡ結合分析
親マウス抗体、キメラ抗体、及び新たに生成されたヒト化抗体変異体の、リン酸化ペプ
チド（ＰＲＨＬＳＮＶＳ（ｐＳ）ＴＧＳＩＤＭＶＤ、配列番号７９）及び対応する非リン
酸化ペプチド（ＰＲＨＬＳＮＶＳＴＧＳＩＤＭＶＤ、配列番号８０）への結合をＥＬＩＳ
Ａによって分析した。
ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌのリン酸化または非リン酸化ペプチド５０μＬをＥＬＩＳＡプ
レートの各ウェルに添加し、プレートを４℃で一晩インキュベートした。翌日、プレート
を３回洗浄し、４℃で一晩、２００μＬのｓｕｐｅｒｂｌｏｃｋでブロッキングした。３
日目に、プレートを３回洗浄した。次に、１０μｇ／ｍＬから開始して１：３で段階希釈
したＥＬＩＳＡ緩衝液中の５０μＬの抗体をプレートの各ウェルに加え、室温で１時間イ
ンキュベートし、次いで３回洗浄した。親マウス抗体の測定については、１：３０００希
釈した５０μＬのヤギ抗マウスＨＲＰ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、１０３０－
０５）を添加した。キメラ抗体及びヒト化抗体の測定については、１：３０００希釈した
５０μＬのヤギ抗ヒトＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃｓ、１０９－０
３６－０９８）を添加した。ＥＬＩＳＡプレートを室温で４５分間インキュベートし、３
回洗浄し、次いで室温で５分間、ＡＢＴＳで発色させた。その後、プレートリーダーを用
いて４０５ｎｍの吸光度を測定した。
図８Ａ及び８Ｂは、ハイブリドーマまたは組換え法によって生成した親抗体は、リン酸
化ペプチドに結合したが（図８Ａ）、非リン酸化ペプチドには結合しなかった（図８Ｂ）
ことを示す。同様に、キメラ抗体（ＩｇＧ１またはＩｇＧ４骨格のいずれかを有する）は
、リン酸化ペプチドに結合したが（図８Ｃ）、非リン酸化ペプチドには結合しなかった（
図８Ｄ）。
図９Ａ～９Ｃは、新たに生成されたヒト化抗体変異体のほとんどが、キメラＩｇＧ４抗
体に匹敵する親和性でリン酸化ペプチドに結合したが、その一方でいくつかの変異体はリ
ン酸化ペプチドに対する結合親和性を失ったことを示す。特に図９Ｂでは、アミノ酸Ｎ３
３からＤへの完全な脱アミド化を模倣するヒトＶＬ４６／ＶＨ１１＿Ｎ３３Ｄ＿ＩｇＧ４
変異体が、リン酸化ペプチドへの結合を大幅に減少させ、完全に脱アミド化された抗体が
リン酸化タウタンパク質への結合親和性を劇的に失わせるであろうことを示唆する。した
がって、ヒト化抗体変異体におけるＮ３３での脱アミド化の減少は不可欠である。
ＸＶ．実施例１１：アルツハイマー病患者の脳ホモジネート中の新たに生成されたヒト
化抗体変異体の抗原結合分析
親マウス抗体、キメラ抗体、及び選択したヒト化抗体変異体を、液相中のアルツハイマ
ー病（ＡＤ）患者臨床試料由来のＳｅｒ４１３リン酸化タウタンパク質（ｐＳｅｒ４１３
－タウ）へのそれらの結合力について評価した。
図１０Ａ～１０Ｅに記載するように、それぞれ、濃度を増大させた対照ヒトＩｇＧ（Ｓ
ｉｇｍａ、カタログ番号Ｉ２５１１）及び選択した抗体変異体と共にＡＤ脳試料をインキ
ュベートした後に、マウスビオチン化Ｔａ１５０５ ＩｇＧ２ａ抗体を用いて検出した全
抗原結合と遊離抗原結合との差によって、ｐＳｅｒ４１３－タウ上の抗体占有率を決定し
た。
同じマウスビオチン化Ｔａ１５０５ ＩｇＧ２ａ抗体を用いた検出により、抗体変異体
間の結合力価の直接比較が可能である。Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド－ＬＣ－ビオチン
（ＮＨＳ－ＬＣ－ビオチン）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｋ
．Ｋ．）を用いてマウスＴａ１５０５ ＩｇＧ２ａ抗体をビオチン化し、続いてＰＢＳで
透析した。
ＡＤ患者の脳由来の凍結前頭前皮質組織（１００ｍｇ）を、プロテアーゼ及びホスファ
ターゼ阻害剤カクテル（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ
番号１８６１２８１）を含有する１ｍＬのＴＢＳ－Ｉ（Ｔｒｉｓ緩衝食塩水、カタログ番
号ＢＰ２４７１－１、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に添加し、
Ｑｉａｇｅｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｌｙｚｅｒ ＩＩを使用して氷水上で溶解させた。ホモジ
ナイズした試料をＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｏｐｔｉｍａ Ｍａｘ－ＸＰ超遠心
機で２７，０００ｇ（ＴＬＡ－５５ローター）、４℃で２０分間遠心分離し、上清を回収
し、さらにＢｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｏｐｔｉｍａ Ｍａｘ－ＸＰ 超遠心機で
１５０，０００×ｇ（ＴＬＡ－５５ローター）、４℃で２０分間遠心分離し、Ｐ２画分と
呼ばれるペレットを得た。超音波処理によってＰ２画分を均質化緩衝液ＴＢＳ－Ｉに再懸
濁した。Ｐ２画分のタンパク質濃度は、Ｐｉｅｒｃｅ（商標）ＢＣＡタンパク質アッセイ
キット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号２３２２５
）を製造元の指示に従って使用して決定した。タンパク質濃度は４μｇ／ｍＬに調整した
。
ＩＮＮＯＴＥＳＴ（登録商標）ｐＴａｕ（ｐＴ１８１）キット（Ｆｉｊｉｒｅｂｉｏ
Ｉｎｃ．、カタログ番号８１５８１）を、Ｓｅｒ４１３リン酸化タウタンパク質（ｐＳｅ
ｒ４１３－タウ）のためのＥＬＩＳＡシステムとして使用したが、キットに含まれるビオ
チン化抗体（ＣＯＮＪ１と表示）を上記で作製したビオチン化マウスＴａ１５０５ Ｉｇ
Ｇ２ａ抗体に置き換えた。
親マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体変異体、または対照ヒトＩｇＧを、試料希釈緩
衝液（ＩＮＮＯＴＥＳＴ（登録商標）キットにより提供される）中でストックから２００
ｎＭに希釈した。抗体溶液を次いで段階希釈し、アッセイプレート中で１／１０００に予
め希釈したＡＤ脳Ｐ２画分と共に室温で４時間インキュベートした。次いで、抗体－抗原
混合物を、希釈したビオチン化抗体マウスＴａ１５０５ ＩｇＧ２ａ（ＩＮＮＯＴＥＳＴ
（登録商標）キットにより提供されるＣＯＮＪ ＤＩＬ１中１／１０）と共にＨＴ７抗体
固定化ＭＴプレート（キットに含まれる）に加えた。得られた試料を混合し、４℃で一晩
インキュベートした。翌日、プレートを洗浄し、ＨＲＰ標識ストレプトアビジン（ＣＯＮ
Ｊ２としてキットに含まれる）をプレートに添加し、続いて１時間インキュベートした。
洗浄後、発色試薬ＴＭＢを加え、遮光下室温で３０分間インキュベートした。次いで反応
停止剤溶液（ＳＴＯＰ溶液としてキットに含まれる）を用いて反応を停止させ、４５０ｎ
ｍの波長での吸光度を測定した。
図１０Ａ～１０Ｅに示す濃度反応曲線の非線形分析により、ＡＤ脳ホモジネート中のタ
ウ ｐＳｅｒ４１３の５０％占有率に必要な各抗体の濃度、及び各抗体の最大占有率の割
合を決定することができる。図１０Ａ～１０Ｅは、ＡＤ患者の脳ホモジネートにおける親
マウス抗体、キメラ抗体、及び選択したヒト化抗体変異体について、ｉｎ ｖｉｔｒｏで
の占有率レベル及びｐＳｅｒ４１３タウ抗原の最大結合などの結合特性が同等であること
を示す。
ＸＶＩ．実施例１２：新たに生成されたヒト化抗体変異体の安定性及び純度分析
ナノＤＳＦを介して融解温度（Ｔｍｌ）及び凝集温度（Ｔａｇｇ）を測定することによ
って、様々な抗体の安定性を決定した。各抗体の純度は、ＳＥＣ及び非還元キャピラリー
ＳＤＳ（ＮＲ－ｃＳＤＳ）によって測定した。
Ｔｍ及びＴａｇｇの決定：ＰＲ．ＴｈｅｒｍＣｏｎｔｒｏｌ ｖ２．０．４ソフトウェ
アによって制御されるＰｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８示差走査蛍光光度計（Ｎａｎｏ
ｔｅｍｐｅｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を使用してナノＤＳＦによってＴｍ及びＴａ
ｇｇを決定した。励起電力は４０％であり、温度は１℃／分の速度で２０℃から９５℃に
上昇させた。ＴｍとＴａｇｇは自動的に測定した。試料を、２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐ
Ｈ５．５の緩衝液中で１ｍｇ／ｍＬに希釈することによって調製し、毛管現象によってＰ
ｒｏｍｅｔｈｅｕｓガラス毛細管（ＰＲ－Ｌ００２）中に引き入れた。
ＳＥＣによる純度の決定：ＡＣＱＵＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｈ－Ｃｌａｓｓシステム上でＳ
ＥＣを実施した。使用したカラムは、Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＡＣＱＵ
ＩＴＹ ＵＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎ ＢＥＨ ＳＥＣカラム（部品番号１８６００５２２
５、１．７μｍ、２００Ａ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）であった。カラム温度は２５℃で
、１ｍｇ／ｍＬの試料１０μＬを０．５ｍＬ／分のシステム流量で注入した。移動相は１
００ｍＭリン酸ナトリウム、２００ｍＭ塩化ナトリウム、及び０．０２％アジ化ナトリウ
ム、ｐＨ７．０であった。データを２１４及び２８０ｎｍの両方で定量し、Ｅｍｐｏｗｅ
ｒ３ソフトウェアを使用して分析した。Ｗａｔｅｒｓ（Ｍｉｌｆｏｒｄ，ＭＡ）のＢＥＨ
２００ ＳＥＣタンパク質標準混合物（部品番号１８６００６５１８）を１０μｇで注入
し、ＵＳＰ分解能、理論段、及びテーリングを測定した。
ＮＲ－ｃＳＤＳによる純度の決定：ＮＲ－ｃＳＤＳによる純度の評価のために、１ｍｇ
／ｍＬの各試料５μＬを、５０ｍＭのヨードアセトアミドを含むローディングバッファー
（ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｓａｍｐｌｅ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ
Ｅｌｍｅｒ））３５μＬと９６ウェルプレートで混合した。プレートを７０℃で２０分
間インキュベートし、７５μＬの水を各ウェルに加えた。各試料を、ＨＴ Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ Ｅｘｐｒｅｓｓ Ｃｈｉｐ（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を用いてＬａｂＣｈｉｐ
ＧＸＩＩシステム（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上で分析した。試料の蛍光を経時的に測
定することによってエレクトロフェログラムを収集し、ＬａｂＣｈｉｐ ＧＸソフトウェ
アＶ４．１．１６１９．０ ＳＰ１（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して統合した。
表１４は、試験した抗体の安定性及び純度をまとめたものである。
表１４．様々な抗体の安定性と純度
Figure 2023002670000021
新たに生成されたヒト化抗体変異体は全て、親マウス抗体またはキメラ抗体に比べて安
定性及び純度が維持されるかまたは向上していた。元のヒト化変異体であるヒトＶＬ４７
／ＶＨ６５＿ＩｇＧ１のうちの１つは、Ｔｍｌ／Ｔａｇｇによって測定されるように安定
性の低下が際立っていた。
ＸＶＩＩ．実施例１３：新たに生成されたヒト化抗体変異体の脱アミド化分析
様々な抗体の軽鎖ＣＤＲ１中のアミノ酸Ｎ３３の脱アミド化レベルを測定した。５０℃
またはｐＨ１０でのインキュベーションなどのストレス条件を試験した。対照として４℃
でのインキュベーションを行った。
４℃及び５０℃でのインキュベーション：２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５中に配
合した２ｍｇ／ｍｌの試料を、温度制御下の安定チャンバー内に５０℃で１週間保持した
。比較用の４℃対照については、試料を４℃に保持した。
ｐＨ１０でのインキュベーション：２０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５．５中に配合した
２ｍｇ／ｍＬの試料を、０．５Ｍ ＮａＯＨを用いてｐＨ１０に調整し、温度制御下の安
定チャンバー内に２５℃で１週間保持した。その後、Ｚｅｂａ Ｓｐｉｎ脱塩カラム（７
Ｋ ＭＷＣＯ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ ２ｍＬ、８９８９０）を用いて、試料を２
０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ ５．５の緩衝液中にバッファー交換した。
ペプチドマッピングによる脱アミド化分析：質量分析によるペプチドマッピングのため
に、１００μｇの各試料を３０μＬの８Ｍグアニジン／１Ｍトリス塩酸塩溶液（１５：１
）で変性させ、１Ｍ ＤＴＴ ２μＬで６０℃で、３０分間還元し、１Ｍヨードアセトア
ミド５μＬで、暗所において４５分間アルキル化した。消化の前に、７キロダルトンの分
子量カットオフのＺＥＢＡカートリッジを用いて試料を５０ｍＭ重炭酸アンモニウムにバ
ッファー交換した。試料を異なるチューブに分け、２μｇのトリプシンとキモトリプシン
で並行して３７℃で２時間消化した。各試料に３μＬの５Ｍ塩酸塩を添加することによっ
て消化を停止させた。４０℃に維持したＰｅｐｔｉｄｅ ＢＥＨ－Ｃ１８－１ｘ５０ｍｍ
Ｗａｔｅｒｓ ＵＰＬＣカラム（部品番号１８６００５５９２）に２μＬの試料を注入
した。Ｄｉｏｎｅｘ／ＱＥ ｐｌｕｓ ＭＳにおいて、０．１％ギ酸中２％～３６％のア
セトニトリルの５０分間にわたる線形勾配を用いてデータを取得した。データベース検索
についてはＰＥＡＫＳ ＤＢ（Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ Ｉ
ｎｃ．）、ならびにパーセント変化評価についてはＰｅｐＦｉｎｄｅｒ（Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）及び手動検証を用いて試料を分析した。表１５は
、試験した抗体の軽鎖ＣＤＲ１中のアミノ酸Ｎ３３の脱アミド化の割合をまとめたもので
ある。
表１５．様々な条件下での軽鎖ＣＤＲ１中のＮ３３の脱アミド化割合（％）
Figure 2023002670000022
親マウス抗体及び元のヒト化変異体（ＶＬ４６／ＶＨ１１）ＩｇＧ１またはＩｇＧ４抗
体に比べて、新たに生成されたヒト化抗体変異体は、軽鎖ＣＤＲ１中のＮ３３の脱アミド
化レベルの有意な減少を示した。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
（態様１）
ａ）配列番号１１６及び配列番号１１７から選択される重鎖可変ドメイン；及び
ｂ）配列番号１１４、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１
０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１
１２、配列番号１１３及び配列番号１０３から選択される軽鎖可変ドメイン、を含む抗ｐ
Ｓｅｒ４１３タウ抗体。
（態様２）
ａ）配列番号１１６及び配列番号１１７から選択される重鎖可変ドメイン；及び
ｂ）配列番号１１４、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１
０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１
１２、配列番号１１３及び配列番号１０３から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗ｐＳ
ｅｒ４１３タウ抗体であって、配列番号８のリン酸化ペプチドへの前記抗体の結合親和性
の、配列番号６９の非リン酸化ペプチドへの前記抗体の結合親和性に対する比が少なくと
も約４０である、前記抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様３）
前記抗体が、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配
列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２及び配列番号１４４か
ら選択される重鎖定常ドメインを含む、態様１又は２に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体
。
（態様４）
前記抗体が、配列番号７９及び配列番号８０から選択される軽鎖定常ドメインを含む、
態様１～３のいずれか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様５）
前記可変軽鎖ドメインが配列番号１１４を有し、前記可変重鎖ドメインが配列番号１１
６を有する、態様１～４のいずれか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様６）
前記抗体の軽鎖が配列番号１８４を有し、前記抗体の重鎖が配列番号１４４を有する、
態様５に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様７）
前記軽鎖が配列番号１８４を有し、前記抗体の重鎖が配列番号１５２を有する、態様５
に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様８）
前記重鎖及び前記軽鎖が、ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４４；ＬＣ配列番号
１８４及びＨＣ配列番号１４５；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４６；ＬＣ配列
番号１８４及びＨＣ配列番号１４７；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４８；ＬＣ
配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４９；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５０；
ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５１；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５
２；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５３；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号
１５４；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５５；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列
番号１５６；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５７；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ
配列番号１５８；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５９；ＬＣ配列番号１８４及び
ＨＣ配列番号１６０；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１６１；ＬＣ配列番号１８５
及びＨＣ配列番号１４４；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４５；ＬＣ配列番号１
８５及びＨＣ配列番号１４６；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４７；ＬＣ配列番
号１８５及びＨＣ配列番号１４８；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４９；ＬＣ配
列番号１８５及びＨＣ配列番号１５０；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５１；Ｌ
Ｃ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５２；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５３
；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５４；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１
５５；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５６；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番
号１５７；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５８；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配
列番号１５９；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１６０、ならびにＬＣ配列番号１８
５及びＨＣ配列番号１６１のペアから選択される、態様１～７のいずれか一項に記載の抗
ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
（態様９）
ａ）配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１
６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１
７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１
７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１
８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、及び配列番号１８５から選択
される軽鎖をコードする第１の核酸；ならびに
ｂ）配列番号１４４、配列番号１４５；配列番号１４６；配列番号１４７；配列番号１
４８；配列番号１４９；配列番号１５０；配列番号１５１；配列番号１５２；配列番号１
５３；配列番号１５４；配列番号１５５；配列番号１５６；配列番号１５７；配列番号１
５８；配列番号１５９；配列番号１６０及び配列番号１６１から選択される重鎖をコード
する第２の核酸を含む、核酸組成物。
（態様１０）
前記第１の核酸が第１の発現ベクターに含まれ、前記第２の核酸が第２の発現ベクター
に含まれる、態様９に記載の核酸組成物を含む発現ベクター組成物。
（態様１１）
前記第１の核酸及び前記第２の核酸が発現ベクターに含まれる、態様９に記載の核酸組
成物を含む発現ベクター組成物。
（態様１２）
態様１０または１１に記載の発現ベクター組成物を含む宿主細胞。
（態様１３）
前記抗体を発現させ、前記抗体を回収する条件下で態様１２に記載の宿主細胞を培養す
ることを含む、抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の作製方法。
（態様１４）
態様１～８のいずれか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を対象に投与することを
含む、前記対象におけるタウオパチーの治療方法。
（態様１５）
ａ）配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ１、配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２、及び
配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｂ）
ｉ）配列番号１０２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号９１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｉｉ）配列番号９２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｖ）配列番号９３を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖ）配列番号９４を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配
列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉ）配列番号９５を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉｉ）配列番号９６を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉｉｉ）配列番号９７を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、
及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｘ）配列番号９８を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｘ）配列番号９９を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配
列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｘｉ）配列番号１００を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ならびに
ｘｉｉ）配列番号１０１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、
及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３
からなる群から選択される一組のｖｌＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン、を含む抗ｐＳｅｒ
４１３タウ抗体。
（態様１６）
ａ）配列番号８６を有するｖｈＣＤＲ１、配列番号１１５を有するｖｈＣＤＲ２、及び
配列番号８８を有するｖｈＣＤＲ３を含む重鎖可変ドメイン；ならびに
ｂ）
ｉ）配列番号１０２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｉ）配列番号９１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｉｉ）配列番号９２を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｖ）配列番号９３を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖ）配列番号９４を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配
列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉ）配列番号９５を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉｉ）配列番号９６を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｖｉｉｉ）配列番号９７を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、
及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｉｘ）配列番号９８を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び
配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｘ）配列番号９９を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及び配
列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；
ｘｉ）配列番号１００を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、及
び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３；ならびに
ｘｉｉ）配列番号１０１を有するｖｌＣＤＲ１、配列番号８２を有するｖｌＣＤＲ２、
及び配列番号８３を有するｖｌＣＤＲ３
からなる群から選択される一組のｖｌＣＤＲを含む軽鎖可変ドメイン、を含む抗ｐＳｅｒ
４１３タウ抗体であって、
配列番号８のリン酸化ペプチドへの前記抗体の結合親和性の、配列番号６９の非リン酸化
ペプチドへの前記抗体の結合親和性に対する比が少なくとも約４０である、前記抗ｐＳｅ
ｒ４１３タウ抗体。

Claims (17)

  1. ａ）配列番号１１６及び配列番号１１７から選択される重鎖可変ドメイン；ならびに
    ｂ）配列番号１１４、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１
    ０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１
    １２、配列番号１１３及び配列番号１０３から選択される軽鎖可変ドメイン、を含む抗ｐ
    Ｓｅｒ４１３タウ抗体。
  2. ａ）配列番号１１６及び配列番号１１７から選択される重鎖可変ドメイン；ならびに
    ｂ）配列番号１１４、配列番号１０４、配列番号１０５、配列番号１０６、配列番号１
    ０７、配列番号１０８、配列番号１０９、配列番号１１０、配列番号１１１、配列番号１
    １２、配列番号１１３及び配列番号１０３から選択される軽鎖可変ドメインを含む抗ｐＳ
    ｅｒ４１３タウ抗体であって、配列番号８のリン酸化ペプチドへの前記抗体の結合親和性
    の、配列番号６９の非リン酸化ペプチドへの前記抗体の結合親和性に対する比が少なくと
    も約４０である、前記抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  3. 前記抗体が、配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号１３７、配列番号１３８、配
    列番号１３９、配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２及び配列番号１４３か
    ら選択される重鎖定常ドメインを含む、請求項１又は２に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗
    体。
  4. 前記抗体が、配列番号７９及び配列番号８０から選択される軽鎖定常ドメインを含む、
    請求項１～３のいずれか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  5. 前記軽鎖可変ドメインが配列番号１１４を有し、前記重鎖可変ドメインが配列番号１１
    ６を有する、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  6. 前記抗体の軽鎖が配列番号１８４を有し、前記抗体の重鎖が配列番号１４４を有する、
    請求項５に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  7. 前記抗体の軽鎖が配列番号１８４を有し、前記抗体の重鎖が配列番号１５２を有する、
    請求項５に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  8. 前記重鎖及び前記軽鎖が、ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４４；ＬＣ配列番号
    １８４及びＨＣ配列番号１４５；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４６；ＬＣ配列
    番号１８４及びＨＣ配列番号１４７；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４８；ＬＣ
    配列番号１８４及びＨＣ配列番号１４９；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５０；
    ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５１；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５
    ２；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５３；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号
    １５４；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５５；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列
    番号１５６；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５７；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ
    配列番号１５８；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１５９；ＬＣ配列番号１８４及び
    ＨＣ配列番号１６０；ＬＣ配列番号１８４及びＨＣ配列番号１６１；ＬＣ配列番号１８５
    及びＨＣ配列番号１４４；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４５；ＬＣ配列番号１
    ８５及びＨＣ配列番号１４６；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４７；ＬＣ配列番
    号１８５及びＨＣ配列番号１４８；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１４９；ＬＣ配
    列番号１８５及びＨＣ配列番号１５０；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５１；Ｌ
    Ｃ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５２；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５３
    ；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５４；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１
    ５５；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５６；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番
    号１５７；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１５８；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配
    列番号１５９；ＬＣ配列番号１８５及びＨＣ配列番号１６０、ならびにＬＣ配列番号１８
    ５及びＨＣ配列番号１６１のペアから選択される、請求項１～７のいずれか一項に記載の
    抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体。
  9. ａ）配列番号１６２、配列番号１６３、配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１
    ６６、配列番号１６７、配列番号１６８、配列番号１６９、配列番号１７０、配列番号１
    ７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４、配列番号１７５、配列番号１
    ７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０、配列番号１
    ８１、配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、及び配列番号１８５から選択
    される軽鎖をコードする第１の核酸；ならびに
    ｂ）配列番号１４４、配列番号１４５；配列番号１４６；配列番号１４７；配列番号１
    ４８；配列番号１４９；配列番号１５０；配列番号１５１；配列番号１５２；配列番号１
    ５３；配列番号１５４；配列番号１５５；配列番号１５６；配列番号１５７；配列番号１
    ５８；配列番号１５９；配列番号１６０及び配列番号１６１から選択される重鎖をコード
    する第２の核酸を含む、核酸組成物。
  10. 前記第１の核酸が第１の発現ベクターに含まれ、前記第２の核酸が第２の発現ベクター
    に含まれる、請求項９に記載の核酸組成物を含む発現ベクター組成物。
  11. 前記第１の核酸及び前記第２の核酸が発現ベクターに含まれる、請求項９に記載の核酸
    組成物を含む発現ベクター組成物。
  12. 請求項１０または１１に記載の発現ベクター組成物を含む宿主細胞。
  13. 前記抗体を発現させる条件下で請求項１２に記載の宿主細胞を培養すること、及び前記
    抗体を回収することを含む、抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の作製方法。
  14. 対象におけるタウオパチーを治療するための医薬組成物であって、請求項１～８のいず
    れか一項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体を含む、前記医薬組成物。
  15. 前記タウオパチーが、アルツハイマー病、皮質基底核変性症、進行性核上性麻痺、ピッ
    ク病、嗜銀顆粒性認知症（嗜銀顆粒病）、初老期の認知症を伴う多系統タウオパチー（Ｍ
    ＳＴＤ）、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ
    －１７）、神経原線維変化認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病（ＤＮＴＣ）
    、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＷＭＴ－ＧＧＩ）、タウ病理学を伴う前頭
    側頭葉変性症（ＦＴＬＤ－タウ）、嗜眠性脳炎後遺症、亜急性硬化性全脳炎、及びボクサ
    ー病からなる群から選択される、請求項１４記載の医薬組成物。
  16. 対象のタウオパチーを治療するための医薬の製造における、請求項１～８のいずれか一
    項に記載の抗ｐＳｅｒ４１３タウ抗体の使用。
  17. 前記タウオパチーが、アルツハイマー病、皮質基底核変性症、進行性核上性麻痺、ピッ
    ク病、嗜銀顆粒性認知症（嗜銀顆粒病）、初老期の認知症を伴う多系統タウオパチー（Ｍ
    ＳＴＤ）、第１７番染色体に連鎖しパーキンソニズムを伴う前頭側頭型認知症（ＦＴＤＰ
    －１７）、神経原線維変化認知症、石灰化を伴うびまん性神経原線維変化病（ＤＮＴＣ）
    、球状グリア封入体を伴う白質タウオパチー（ＷＭＴ－ＧＧＩ）、タウ病理学を伴う前頭
    側頭葉変性症（ＦＴＬＤ－タウ）、嗜眠性脳炎後遺症、亜急性硬化性全脳炎、及びボクサ
    ー病からなる群から選択される、請求項１６記載の使用。
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