JP2022554259A - 長鎖組成物、長鎖組成物の組合せ、ならびにその製造方法および応用 - Google Patents

長鎖組成物、長鎖組成物の組合せ、ならびにその製造方法および応用 Download PDF

Info

Publication number
JP2022554259A
JP2022554259A JP2022525052A JP2022525052A JP2022554259A JP 2022554259 A JP2022554259 A JP 2022554259A JP 2022525052 A JP2022525052 A JP 2022525052A JP 2022525052 A JP2022525052 A JP 2022525052A JP 2022554259 A JP2022554259 A JP 2022554259A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
long
chain
fermentation
hours
acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022525052A
Other languages
English (en)
Inventor
張霖
樊亜超
師文静
Original Assignee
中国石油化工股▲ふん▼有限公司
中国石油化工股▲ふん▼有限公司大連石油化工研究院
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 中国石油化工股▲ふん▼有限公司, 中国石油化工股▲ふん▼有限公司大連石油化工研究院 filed Critical 中国石油化工股▲ふん▼有限公司
Publication of JP2022554259A publication Critical patent/JP2022554259A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P39/00—Processes involving microorganisms of different genera in the same process, simultaneously
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C51/00—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides
    • C07C51/347—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides by reactions not involving formation of carboxyl groups
    • C07C51/353—Preparation of carboxylic acids or their salts, halides or anhydrides by reactions not involving formation of carboxyl groups by isomerisation; by change of size of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/145—Fungal isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P5/00—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons
    • C12P5/02—Preparation of hydrocarbons or halogenated hydrocarbons acyclic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
    • C12P7/6409—Fatty acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/72—Candida
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/72—Candida
    • C12R2001/74—Candida tropicalis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

長鎖組成物または長鎖組成物の組合せ、その製造方法、および発酵による長鎖二塩基酸の製造におけるその利用を開示する。長鎖組成物は、１つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる。１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であるアルカンからなる群より選択される。１つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり、飽和または不飽和である脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択される。長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比は、（１：１）～（４０：１）である。この長鎖組成物の利点は、発酵による長鎖二塩基酸の製造の開始物質に使用したときに、発酵度または基質利用率が高い点などにある。

Description

本出願は、生化学工学の分野に属している。具体的には、長鎖組成物または長鎖組成物の組合せに関する。本出願はまた、長鎖組成物または長鎖組成物の組合せの製造方法と、長鎖二塩基酸の製造におけるその応用にも関する。
ドデカン二酸（略称：ＤＤＤＡ）は、脂肪族ジカルボン酸の一種であり、炭素鎖には１２個の炭素原子が含まれている。ＤＤＤＡは、重要かつ産業上広く応用されているファインケミカル製品である。加えて、ＤＤＤＡは、化学工業において高品質な香料、高性能なナイロン系エンジニアリングプラスチック、高品質なナイロン系ホットメルト接着剤、高温誘電体、高品質な塗料およびコーティング剤、高品質な潤滑油、耐寒性可塑剤、樹脂、医薬、農薬などを合成する際の重要な開始物質でもある。
長鎖二塩基酸の発酵による製造方法においては、長鎖ｎ－アルカンの２箇所の末端メチル基を、それぞれα，ω酸化によりカルボキシル基に転化させる。この酸化は、微生物の細胞内酵素の特異的な酸化能および酸化作用を利用して、常温・常圧で行う。その結果、対応する鎖の長さを有している様々な長鎖二塩基酸が合成される。多種多様な細菌、カビおよび放線菌が、発酵により長鎖二塩基酸を製造できる。その中でも、Candida属の酵母は、ｎ－アルカンを発酵させて二塩基酸を製造する生産性の非常に高い微生物である。
先行技術においては、一般的な酵母を発酵株に使用し、ｎ－アルカンを基質に使用して、対応する炭素数の長鎖二塩基酸を製造している。例えば、CN102115767A、CN102115768Aなどは、ウンデカ二酸およびヘキサデカン二酸の製造スキームをそれぞれ開示している。また、CN103805643Aが開示している長鎖二塩基酸の製造方法は、二塩基酸株を増殖培養して種培養液を得る工程、種培養液を増殖発酵させる工程、発酵プロセスの間に乳化させたアルカンを加える工程、反応の完了後に微生物タンパク質を除去する工程、得られた長鎖二塩基酸生成物を結晶化させる工程、を含む。
本出願の発明者らが見出したところによると、先行技術には、依然として問題があった。その問題とは、ｎ－アルカンを基質に使用して長鎖二塩基酸を製造する際に、発酵度および基質利用率が低くなるという問題である。本出願は、この知見に基づいて完成されたものである。
具体的に、本出願は、下記態様の解決手段に向けられている。
［態様１］
１つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる、長鎖組成物（好ましくは、発酵における使用のための長鎖組成物）であって、
上記１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝である（好ましくは直鎖である）アルカンからなる群より選択され、
好ましくは、ｎ－ドデカン、ｎ－テトラデカンおよびｎ－ヘキサデカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンであり、特にｎ－ドデカンであり、
１つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択され、
好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸であり、特にラウリン酸であり、
上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比は、（１：１）～（４０：１）である（好ましくは、（２：１）～（２０：１）または（５：１）～（１０：１）である）、
長鎖組成物。
［態様２］
水をさらに含んでおり、
上記水の質量は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸の合計質量の０．５～１０倍である（好ましくは、１～５倍または１～３倍である）、
上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物。
［態様３］
下記(i)～(iii)のうち１つ以上を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物：
(i)上記組成物のｐＨが５～１２である（好ましくは、７～１０、７．５～９または７．５～８．０である）；
(ii)３２℃において液体または固液混合物の形態で存在する（好ましくは液体の形態で存在し、特に水性液体である）；
(iii)上記長鎖アルカンの炭素原子数と、上記長鎖カルボン酸の炭素原子数が同数である。
［態様４］
ｎ種類の上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物が互いに独立して存在している（例えば、互いに独立して梱包または区分けされている）、長鎖組成物の組合せであって、
上記ｎは、２～４０の正の整数であり（好ましくは、４～２０または５～１０であり）、
第ｉ長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｉとし（ｉは、２～ｎの任意の正の整数である）、第１長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲ１とし、第ｎ長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｎとすると、
Ｒｉ－１／Ｒｉ≧１であり（好ましくは、Ｒｉ－１／Ｒｉの値は、１～２０、１．０００１～１０、１．００１～１０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２であり）、
Ｒ１／Ｒｎ＞１である（好ましくは、Ｒ１／Ｒｎの値は、１．０００１～３０、１．００１～２０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２である）、
長鎖組成物の組合せ。
［態様５］
下記(i)～(iii)のうち１つ以上を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物の組合せ：
(i)ｎ種類の上記長鎖組成物は、別々に製造されたものである；
(ii)長鎖組成物の量に基づいて計算した、ｎ種類の上記長鎖組成物のうち任意の２つの重量比は同一または異なっており、好ましくは同一または実質的に同一である；
(iii)長鎖アルカンの量に基づいて計算した、ｎ種類の上記長鎖組成物のうち任意の２つの重量比は、同一または実質的に同一である。
［態様６］
１つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる長鎖組成物（好ましくは、発酵における使用のための長鎖組成物）の製造方法であって、
上記１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝である（好ましくは直鎖である）アルカンからなる群より選択され、
好ましくは、ｎ－ドデカン、ｎ－テトラデカンおよびｎ－ヘキサデカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンであり、特にｎ－ドデカンであり、
上記１つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択され、
好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸であり、特にラウリン酸であり、
上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比は、（１：１）～（４０：１）であり（好ましくは、（２：１）～（２０：１）または（５：１）～（１０：１）であり）、
上記製造方法は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸を上記質量比にて混合して（好ましくは、均一になるまで混合して）上記長鎖組成物を得る、混合工程を少なくとも含み、
任意構成で、上記混合工程を、加熱（好ましくは、４５～７０℃または５０～６０℃に加熱）および攪拌（好ましくは、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍで攪拌）しながら行う、
製造方法。
［態様７］
下記(i)および／または(ii)を満たしており、
(i)上記混合工程において、水およびｐＨ調整剤（アルカリなど、特に水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上）をさらに加える；
(ii)水およびｐＨ調整剤（アルカリなど、特に水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上）を上記長鎖組成物に加える工程を含み、任意構成で、当該工程を、加熱（好ましくは、４５～７０℃または５０～６０℃に加熱）および攪拌（好ましくは、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍで攪拌）しながら行う；
上記水の質量は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸の合計質量の０．５～１０倍（好ましくは、１～５倍または１～３倍）であり、
上記ｐＨ調整剤の使用量は、上記長鎖組成物のｐＨを５～１２（好ましくは、７～１０、７．５～９または７．５～８．０）に調整する量である、
上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
［態様８］
長鎖二塩基酸の製造方法であって、
上記長鎖二塩基酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族ジカルボン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸であり、
好ましくは、ドデカン二酸、テトラデカン二酸およびヘキサデカン二酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸であり、特にドデカン二酸であり、
上記製造方法は、下記工程（１）および（２）を含む、製造方法：
（１）上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法によって長鎖組成物を製造して、上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物または長鎖組成物の組合せ（これらを長鎖組成物と総称する）を提供する工程；
（２）発酵菌および発酵培地の存在下において上記長鎖組成物を発酵させて、上記長鎖組成物を長鎖二塩基酸に転化させる工程。
［態様９］
下記(i)および／または(ii)を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)上記発酵菌は、完全α，ω酸化経路を有している酵母であり、
好ましくは、Candida属、Cryptococcus属、Endomyces属、Hansenula属、Pichia属、Rhodotorula属、Torulopsis属およびTrichosporon属からなる群より選択される１種類以上の酵母であり、
より好ましくは、Candida属から選択される１種類以上の酵母であり、
特にCandida tropicalisであり、
より特にCandida tropicalisの変異株PF-UV-56（China General Microbiological Culture Collection Centerに寄託、寄託番号：CGMCC No. 0356）である；
(ii)上記発酵培地は、下記を含んでいる：
２０～２８ｇ／Ｌのスクロース；
０．８～１．５ｇ／Ｌのコーンスティープリカー；
２．０～４．０ｇ／Ｌの酵母抽出物；
０．８～１．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；
３．０～３．５ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウム；
１．２～１．８ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム；
１．２～４．８ｇ／Ｌの尿素；
１．５～２ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム；および、
１．５～１．８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム。
［態様１０］
上記発酵は、下記工程(i)および(ii)を含む、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)上記発酵菌および上記発酵培地を混合し、５～６０時間（好ましくは１０～４０時間、より好ましくは２０～３０時間または２４時間）発酵させて、発酵原料溶液を得る予備工程；
(ii)上記発酵原料溶液に上記長鎖組成物を加えて６０～４００時間（好ましくは１００～３００時間、より好ましくは１００～１６０時間または１００～１４０時間）発酵させることにより、上記長鎖組成物を上記長鎖二塩基酸に転化させる転化工程。
［態様１１］
下記(i)～(vii)のうち１つ以上を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)上記発酵菌の種培養液を、総液体保持体積の２～３０体積％（好ましくは５～２０体積％または１０～１５体積％）加える；
(ii)上記発酵反応の反応温度は、２５～３７℃（好ましくは、２８～３２℃）である；
(iii)上記発酵反応を、１００～１０００ｒｐｍ（好ましくは、１２０～５００ｒｐｍまたは１５０～３００ｒｐｍ）にて攪拌しながら行う；
(iv)上記発酵反応の通気速度は、０．２～１０．０ＶＶＭ（好ましくは、０．２～２．０ＶＶＭまたは０．５～１．０ＶＶＭ）である；
(v)上記発酵反応の反応時間は、６５時間以上（好ましくは１２０時間超、より好ましくは１３０～４００時間、１３０～３００時間、１３０～２００時間または１３８～１６０時間）である；
(vi)上記長鎖組成物の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり１００～１０００ｇ（好ましくは、総液体保持体積１Ｌあたり１００～５００ｇまたは１５０～２５０ｇ）である；
(vii)上記発酵培地の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり１２～８０ｇ（好ましくは、総液体保持体積１Ｌあたり３２～５０ｇ、３５～４５ｇまたは３７～４２ｇ）である。
［態様１２］
下記(i)および／または(ii)を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)上記予備工程において（好ましくは、上記予備工程の開始から２４時間以内において）、上記長鎖組成物を加えず、上記発酵反応のｐＨを自己調整させる（すなわち、ｐＨを調整しない）；
(ii)上記転化工程の開始時点において（好ましくは、上記予備工程の開始から２４時間後において）、上記発酵反応のｐＨを６．０～７．５（好ましくは、６．８～７．０）に調整し、その後、発酵反応の終了まで５～６０時間（好ましくは、１０～４０時間、２０～３０時間または２４時間）間隔で、発酵反応のｐＨを０．０５～０．４（好ましくは、０．１～０．３）ずつ増加させる。
［態様１３］
下記(i)または(ii)を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)上記転化工程において、上記長鎖組成物をｎ個のバッチで加え、
２つの隣接するバッチの時間間隔は、同じであっても異なっていてもよく、
好ましくは、５～６０時間、１０～４０時間、２０～３０時間、または２４時間であり、
上記ｎは、２～４０（好ましくは、４～２０または５～１０）の正の整数である；
(ii)上記転化工程において、上記長鎖組成物を、反応時間に応じて連続的に加える。
［態様１４］
上述または後述のいずれかの態様に記載の長鎖組成物の組合せを使用し、下記(i)または(ii)を満たしている、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
(i)ｎ種類の上記長鎖組成物を、ｎ個のバッチに分けて加える（好ましくは、第１長鎖組成物から第ｎ長鎖組成物の順番になるように加える）；
(ii)上記長鎖組成物を、Ｒ＝ｆ（ｔ）の関数に従って連続的に加える；
式中、
Ｒは、上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比であり、
ｔは、上記転化工程の反応時間であり、
ｆ（）は、任意の非増加関数（好ましくは、任意の減少関数、任意の単調減少関数または任意の線形減少関数）を表す。
［態様１５］
上記発酵反応の反応産物から、上記長鎖二塩基酸を分離する工程をさらに含む、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
本出願はまた、下記態様の解決手段にも向けられている。
＜態様１＞
下記工程（１）～（３）を含むことを特徴とする、ドデカン二酸の製造方法：
（１）ドデカンおよびラウリン酸を所定の比率で混合し、加熱および攪拌して上記ラウリン酸を完全に溶解させた後、混合物に水を加え、均一に混合し、アルカリを加えてｐＨを７～９に調整して、混合基質を得る工程；
（２）発酵菌および発酵培地を発酵用の発酵タンクに投入し、発酵プロセスにおいて発酵が終了するまでの間、工程（１）で得られた混合基質を加える工程；
（３）上記発酵の完了後に得られた反応物を、解乳化、膜濾過、酸析、濾過および乾燥に教師、上記長鎖二塩基酸生成物を得る工程。
＜態様２＞
上記工程（１）において、
上記ドデカンの上記ラウリン酸に対する質量比は、（２：１）～（１０：１）であり、好ましくは（５：１）～（１０：１）である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様３＞
上記工程（１）において、
上記加熱の温度は、４５～７０℃であり、好ましくは５０～６０℃であり、
上記攪拌の速度は、５０～２５０ｒｐｍであり、好ましくは１５０～２５０ｒｐｍである、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様４＞
上記工程（１）において、
上記混合物の質量の１～３倍の量の水を加える、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様５＞
上記工程（１）において、
均一に混合した後に上記アルカリを加えて、ｐＨを７～９に調整し、好ましくは７．５～８．０に調整し、
上記アルカリは、水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムの１つ以上である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様６＞
上記工程工程（２）において使用する上記発酵菌は、完全α，ω酸化経路を有している酵母であり、
好ましくは、Candida属、Cryptococcus属、Endomyces属、Hansenula属、Pichia属、Rhodotorula属、Torulopsis属またはTrichosporon属の１つ以上である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様７＞
上記工程（２）において使用する上記発酵培地の組成は、下記であることを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
２０～２８ｇ／Ｌのサッカロース；
０．８～１．５ｇ／Ｌのコーンスティープリカー；
２．０～４．０ｇ／Ｌの酵母抽出物；
０．８～１．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；
３．０～３．５ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウム；
１．２～１．８ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム；
１．２～４．８ｇ／Ｌの尿素；
１．５～２ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム；および、
１．５～１．８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム。
＜態様８＞
上記工程（２）において、
上記発酵菌の種培養液の投入量は、発酵液の体積に対して５～２０％であり、好ましくは１０～１５％である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様９＞
上記工程（２）において、
発酵温度は、２５～３７℃であり、好ましくは２８～３２℃であり、
攪拌速度は、１２０～５００ｒｐｍであり、好ましくは１５０～３００ｒｐｍであり、
通気速度は、０．２～１．０ＶＶＭであり、好ましくは０．５～１．０ＶＶＭであり、
発酵時間は、１３８～１４４時間である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様１０＞
上記工程（２）において、ｐＨを下記のように調整することを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
発酵から０～２４時間：ｐＨを調整しない；
２４時間後：ｐＨ６．８～７．０の中性域に調整する；
その後：反応の終了時まで、２４時間間隔で、ｐＨを０．１～０．３ずつ増加させる。
＜態様１１＞
上記工程（２）において、
発酵プロセスの間、上記工程（１）で得られた上記混合基質を、断続供給モードまたは連続供給モードにより加える、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様１２＞
上記工程（２）において、下記(i)または(ii)を満たしていることを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法：
断続供給モードを採用し、５～１０回のバッチにより供給を完了させる；
連続供給モードを採用し、発酵時間に応じて供給速度を計算する。
＜態様１３＞
上記工程（３）における解乳化では、
発酵液のｐＨを８．５～１０に調整し、好ましくは９～９．５に調整し、
発酵液を７５～９０℃に加熱して２０～４０分間保持する、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様１４＞
上記工程（３）における膜濾過では、
解乳化した培養液を膜によって濾過し、固液分離して清澄な発酵液を得、
濾過温度は、３０～５０℃であり、好ましくは４０～５０℃であり、
上記膜の孔径は、１０～５０ｎｍであり、好ましくは２０～２５ｎｍである、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様１５＞
上記工程（３）における酸析では、
上記清澄な発酵液のｐＨを酸性ｐＨ調整剤により調整し、
ｐＨを３～５に調整し、好ましくは３～４に調整して、上記長鎖二塩基酸を沈澱させる、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
＜態様１６＞
上記工程（３）における濾過では、
板枠式濾過により濾過を行い、
濾過圧力は、０．５～１．０ＭＰａであり、
濾過温度は、２０～３０℃であり、
乾燥温度は、８０～１０５℃であり、
乾燥時間は、５～２０時間である、
ことを特徴とする、上述または後述のいずれかの態様に記載の製造方法。
先行技術と比較すると、本出願は、下記の技術的効果のうち１つ以上を実現し、好ましくは全てを実現する。
（１）本出願の長鎖組成物においては、長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比が、本出願に記載の要求を満たしている。長鎖組成物を発酵プロセスに使用すると、発酵度を向上させられる。また、長鎖カルボン酸は水溶性が低く発酵システムにおいて利用しにくいという問題も解決できる。
（２）本出願の長鎖組成物においては、好ましい態様において、物理的溶解および化学的解離という２つの工程が採用されている。そのため、長鎖カルボン酸の溶解効果が向上し、長鎖アルカンおよび長鎖カルボン酸による極性かつ可溶性のミセルの形成を促進でき、発酵度をさらに向上させられる。
（３）本出願の長鎖組成物の製造方法においては、好ましい態様において、アルカリ調整スキームが採用されている。そのため、材料供給に起因する発酵プロセスにおけるｐＨの変動を低減できる。また、連続供給モードにおいては材料がさらに供給されるので、基質利用率および発酵度を向上させられる。
（４）本出願の発酵方法においては、長鎖カルボン酸は、炭素源としての機能も果たす。また、一部の長鎖カルボン酸を、脂肪酸代謝によって直接、重要な中間体代謝産物（アセチル補酵素Ａ）に転化させられる。そのため、バイオマスを迅速に蓄積でき、発酵時間を短縮でき、長鎖ジカルボン酸の生産強度を高められる。
（５）本出願の発酵方法においては、好ましい態様において、発酵の際に加える長鎖脂肪酸の量を増加させることにより、長鎖ジカルボン酸の発酵度および生産強度をさらに向上させられる。
以下、実施形態を参照しながら本出願を詳細に説明する。しかし、留意されたいことには、本出願の範囲は、下記実施形態には限定されない。そうではなく、本出願の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。
本明細書において言及されている全ての出版物、特許出願、特許および他の参照文献は、その全体が参照により組み込まれる。別途定義のない限り、本明細書で使用されている全ての技術用語および科学用語は、当業者により通常に理解される意味と同じ意味を有している。もしも齟齬が生じる場合は、定義も含め本明細書に記載の内容が優先する。
本明細書に記載の物質、方法、成分、機器または装置が、「当業者に知られた」「本技術分野で周知の」などの表現で修飾されているとき、当該物質、方法、成分、機器または装置には、本出願の出願時において当該技術分野で従前使用されていたもののみならず、現在のところは通常に使用されていないが後に本技術分野で周知となる、同様の目的のために好適なものも含まれると理解される。
本出願に関連して、用語「実質的に」とは、許容できる偏差または当業者にとって合理的と考えられる偏差を意味している。例えば、±１０％以内、±５％以内、±１％以内、±０．５％以内または±０．１％以内は、存在が許容される。
本出願に関連して、用語「総液体保持体積」とは、発酵容器中における液相の総体積を意味する。通常は、発酵容器の容量の７０～８０％である。
本出願に関連して、そうではないと具体的に明示がない限り、百分率、部、比率などは全て、重量に基づいて表す。また、圧力は全て、ゲージ圧で表す。
本出願に関連して、本出願の２つ以上の任意の実施形態は、組合せてもよい。組合せによって生じる技術的解決手段も、本出願の当初開示の一部を形成しており、本出願の範囲に含まれる。
実施形態によると、本出願は、長鎖組成物に関する。長鎖組成物は、好ましくは、発酵における使用のための長鎖組成物である。とりわけ、長鎖組成物は、発酵による長鎖二塩基酸の製造における開始物質としての使用に適している。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物は、１つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる。１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であるアルカンからなる群より選択される。１つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり、飽和または不飽和である脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択される。長鎖アルカンは、好ましくは、Ｃ９～１８である直鎖アルカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンである。長鎖アルカンは、より好ましくは、ｎ－ドデカン、ｎ－テトラデカンおよびｎ－ヘキサデカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンである。長鎖アルカンは、特に好ましくは、ｎ－ドデカンである。長鎖カルボン酸は、好ましくは、Ｃ９～１８の直鎖飽和脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸である。長鎖カルボン酸は、特に好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸である。とりわけ、長鎖カルボン酸は、ラウリン酸である。
本出願の実施形態によると、長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比は、一般的には（１：１）～（４０：１）であり、好ましくは（２：１）～（２０：１）または（５：１）～（１０：１）である。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物は水をさらに含んでいる。水の質量は、長鎖アルカンおよび長鎖カルボン酸の合計質量に対して、一般的には０．５～１０倍であり、好ましくは１～５倍または１～３倍である。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物のｐＨは、一般的には５～１２であり、好ましくは７～１０、７．５～９または７．５～８．０である。本出願に関連して、長鎖組成物のｐＨの測定方法は、ｐＨ試験紙法またはガラス電極法であってもよい。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物は、３２℃において、液体または固液混合物の状態で存在しており、好ましくは液体で存在しており、とりわけ水性液体でそんざいしている。本出願に関連して、用語「液体」には、均質な液体および均質でない液体の両方が含まれる。後者の例としては、２種類以上の液体による多相の液体様混合物が挙げられる。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物において、長鎖アルカンおよび長鎖カルボン酸は、同数個の炭素原子を有している（ｎ－ドデカンおよびラウリン酸の組合せなど）。
本出願の実施形態によると、本出願はまた、長鎖組成物の組合せにも関する。長鎖組成物の組合せは、本出願の実施形態に係る複数の長鎖組成物を含んでいる。具体的に、長鎖組成物の組合せは、本出願の任意の実施形態に係るｎ種類の長鎖組成物を、互いに独立して含んでいる。ここで、ｎは、一般的には２～４０の正の整数であり、好ましくは４～２０または５～１０の正の整数である。また、「互いに独立して」との表現が具体的に意味しているのは、例えば、組成物が互いに独立して梱包されていることや、互いに独立して分離されていること（すなわち、同じパッケージの中で複数の分画に分けられていること）である。
この実施形態によると、第ｉ長鎖組成物における長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｉとし、第１長鎖組成物における長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比をＲ１とし、第ｎ長鎖組成物における長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｎとすると、Ｒｉ－１／Ｒｉは、一般的には１以上であり、好ましくは１～２０、１．０００１～１０、１．００１～１０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２である。ここで、ｉは、２～ｎの任意の正の整数である。
本出願のこの実施形態によると、好適には、Ｒ１／Ｒｎは１超であり、好ましくは１．０００１～３０、１．００１～２０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２である。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物の組合せにおいて、ｎ種類の長鎖組成物は、それぞれ別々に製造されたものである。長鎖組成物の製造方法は、本明細書において後述する。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物の組合せにおいて、ｎ種類の長鎖組成物のうち任意の２種類の重量比（長鎖組成物の量に基づいて計算する）は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。好ましくは、同一または実質的に同一である。
本出願の他の実施形態によると、長鎖組成物の組合せに含まれているｎ種類の長鎖組成物のうち任意の２種類の重量比（長鎖アルカンの量に基づいて計算する）は、同一または実質的に同一であってもよい。
本出願の実施形態によると、長鎖組成物を１種類の方法により製造してもよい。具体例を挙げると、この製造方法は、下記の混合工程を少なくとも含む。
混合工程：長鎖アルカンおよび長鎖カルボン酸を上述の質量比で混合して、長鎖組成物を得る工程。任意構成で、加熱および攪拌しながら混合する。加熱について、加熱温度としては、４５～７０℃または５０～６０℃が挙げられる。また、攪拌について、攪拌速度としては、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍが挙げられる。さらに、均一になるまで混合することが好ましく、このとき均一な液体混合物が得られる。
本出願の実施形態によると、製造方法の混合工程において、水およびｐＨ調整剤をさらに加える。ｐＨ調整剤は、例えばアルカリであり、とりわけ水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上である。
本出願の実施形態によると、製造方法は、長鎖組成物に対して水およびｐＨ調整剤を加える工程をさらに含む。任意構成で、この工程は、加熱および攪拌しながら行う。加熱について、加熱温度としては、４５～７０℃または５０～６０℃が挙げられる。さらに、攪拌について、攪拌速度としては、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍが挙げられる。ｐＨ調整剤は、例えばアルカリであり、とりわけ水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上である。
本出願の実施形態によると、加える水の質量は、長鎖アルカンおよび長鎖カルボン酸の合計質量に対して、一般的には０．５～１０倍であり、好ましくは１～５倍または１～３倍である。
本出願の実施形態によると、加えるｐＨ調整剤の量は、一般的には長鎖組成物のｐＨが５～１２となる量であり、好ましくはｐＨが７～１０、７．５～９または７．５～８．０となる量である。
本出願の実施形態によると、本出願はまた、長鎖二塩基酸の製造方法にも関する。この長鎖二塩基酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり、飽和または不飽和である脂肪族ジカルボン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸である。長鎖二塩基酸は、好ましくは、Ｃ９～１８の直鎖飽和脂肪族ジカルボン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸である。長鎖二塩基酸は、好ましくは、ドデカン二酸、テトラデカン二酸およびヘキサデカン二酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸である。とりわけ、長鎖二塩基酸は、ドデカン二酸である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法は、下記工程を含む。
（１）本出願のいずれか１つの実施形態に係る長鎖組成物または長鎖組成物の組合せ（総称して長鎖組成物と呼ぶ）を提供する工程。
（２）発酵菌および発酵培地の存在下で長鎖組成物を発酵させて、長鎖組成物を長鎖二塩基酸に転化させる工程。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵菌は、完全α，ω酸化経路を有している酵母である。好ましくは、発酵菌は、Candida属、Cryptococcus属、Endomyces属、Hansenula属、Pichia属、Rhodotorula属、Torulopsis属およびTrichosporon属からなる群より選択される１種類以上の酵母である。より好ましくは、発酵菌は、Candida属から選択される１種類以上の酵母である。とりわけ、発酵菌は、Candida tropicalisである。さらにとりわけ、発酵菌は、Candida tropicalisの変異株PF-UV-56である（China General Microbiological Culture Collection Centerに寄託、寄託番号：CGMCC No. 0356、１９９８年８月３１日）。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵培地は、本技術分野において発酵により長鎖二塩基酸を製造する際に用いられる、従来の発酵培地であってよい。発酵培地は、一般的に、１０～６０ｇ／Ｌの炭素源、１～１０ｇ／Ｌの窒素源、１～１０ｇ／Ｌのリン源、０．１～５０ｐｐｍの微量金属元素源などを含んでいる。炭素源の例としては、グルコース、スクロース、マルトース、フルクトース、糖蜜、グリセロール、ソルビトール、アラビノース、ラムノース、メタノールおよびエタノールからなる群より選択される１つ以上が挙げられる。窒素源の例としては、酵母抽出物、ペプトン、コーンスティープリカー、尿素、アンモニウム塩および硝酸塩からなる群より選択される１つ以上が挙げられる。リン源の例としては、オルトリン酸塩、リン酸一水素塩およびリン酸二水素塩からなる群より選択される１つ以上が挙げられる。好ましくは、リン源は、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸二水素アンモニウム、リン酸水素二アンモニウム、リン酸二水素ナトリウムおよびリン酸水素二ナトリウムからなる群より選択される１つ以上である。微量金属元素源の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、鉄、銅、亜鉛およびマンガンの、硫酸塩、塩酸塩、酢酸塩および硝酸塩からなる群より選択される１つ以上が挙げられる。微量金属元素源は、好ましくは、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、塩化鉄および硫酸銅からなる群より選択される１つ以上である。特に好ましくは、発酵培地は、次の成分を含んでいる：２０～２８ｇ／Ｌのスクロース、０．８～１．５ｇ／Ｌのコーンスティープリカー、２．０～４．０ｇ／Ｌの酵母抽出物、０．８～１．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム、３．０～３．５ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウム、１．２～１．８ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム、１．２～４．８ｇ／Ｌの尿素、１．５～２ｇ／Ｌの硫酸アンモニウムおよび１．５～１．８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵反応は、下記２つの工程を少なくとも含む。
予備工程：発酵菌および発酵培地を混合し、５～６０時間発酵させて、発酵原料溶液を得る工程。予備工程の反応時間は、好ましくは１０～４０時間であり、より好ましくは２０～３０時間または２４時間である。
転化工程：長鎖組成物を発酵原料溶液に加え、６０～４００時間発酵させて、長鎖組成物を長鎖二塩基酸に転化させる工程。転化工程の反応時間は、好ましくは１００～３００時間であり、より好ましくは１００～１６０時間または１００～１４０時間である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵菌の種培養液の投入量は、総液体保持体積に対して、一般的には２～３０体積％であり、好ましくは５～２０体積％または１０～１５体積％である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵反応の反応温度は、一般的には２５～３７℃であり、好ましくは２８～３２℃である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵反応の攪拌速度は、一般的には１００～１０００ｒｐｍであり、好ましくは１２０～５００ｒｐｍまたは１５０～３００ｒｐｍである。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵反応における通気速度は、一般的には０．２～１０．０ＶＶＭであり、好ましくは０．２～２．０ＶＶＭまたは０．５～１．０ＶＶＭである。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵反応の反応時間は、一般的には６５時間以上であり、好ましくは１２０時間超であり、より好ましくは１３０～４００時間、１３０～３００時間、１３０～２００時間または１３８～１６０時間である。ここで、反応時間には、予備工程の反応時間および転化工程の反応時間が含まれる。
本出願の実施形態によると、上記の製造方法において、長鎖組成物の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり、一般的には１００～１０００ｇであり、好ましくは１００～５００ｇまたは１５０～２５０ｇである。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法において、発酵培地の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり、通常は１２～８０ｇであり、好ましくは３２～５０ｇ、３５～４５ｇまたは３７～４２ｇである。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法においては、予備工程において（好ましくは、予備工程の開始から２４時間以内において）長鎖組成物を加えず、発酵反応のｐＨを自己調整状態とする。すなわち、この工程または期間においては、ｐＨを調整しない。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法においては、転化工程の開始時において（好ましくは、予備工程の開始から２４時間後において）、発酵反応のｐＨを６．０～７．５に調整し、好ましくは６．８～７．０に調整する。より好ましくは、その後、発酵反応のｐＨを０．０５～０．４ずつ増加させ、好ましくは０．１～０．３ずつ増加させる。ｐＨを増加させる時間間隔は、発酵反応の終了時までの間、５～６０時間であり、好ましくは１０～４０時間、２０～３０時間または２４時間である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法においては、転化工程において、長鎖組成物をｎ個のバッチで加える（このことを、断続供給とも称する）。隣接するバッチの間の時間間隔は、同じであってもよいし、異なっていてもよい。好ましくは、時間間隔は、同じである。時間間隔の例としては、５～６０時間、１０～４０時間、２０～３０時間、２４時間が挙げられる。ｎは、２～４０の正の整数であり、好ましくは４～２０または５～１０の正の整数である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法においては、転化工程において、本出願の実施形態のいずれか１つの長鎖組成物の組合せを使用し、ｎ種類の長鎖組成物をｎ個のバッチにて加える。好ましくは、ｎ種類の長鎖組成物を、第１長鎖組成物から第ｎ長鎖組成物の順に加える。
本出願の実施形態によると、上述の方法においては、転化工程において、長鎖組成物を反応時間に応じて連続的に加える（このことを、連続供給とも称する）。連続供給は、一定流速であってもよいし、そうでなくてもよい。好ましくは、連続供給は、一定流速である。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法においては、転化工程において、長鎖組成物を関数Ｒ＝ｆ（ｔ）に従って連続的に加える。式中、Ｒは、長鎖アルカンの長鎖カルボン酸に対する質量比を表す。ｔは、転化工程の反応時間を表す。ｆ（）は、任意の非増加関数を表す。好ましくは、ｆ（）は、任意の減少関数、任意の単調減少関数または任意の線形減少関数を表す。
本出願の実施形態によると、上述の製造方法は、発酵反応の反応産物（発酵液と称する）から長鎖二塩基酸を分離する工程をさらに含む。例えば、発酵反応の完了後において、得られた反応物を解乳化、膜濾過、酸析、濾過および乾燥に供して、長鎖二塩基酸生成物を得る。
本出願の実施形態によると、本技術分野で周知の任意の従来の方法により解乳化を行ってよく、その方法は特に限定されない。例えば、発酵液のｐＨを８．５～１０（好ましくは９～９．５）に調整し、温度を７５～９０℃に上昇させ、２０～４０分間保持することにより、解乳化を行ってもよい。
本出願の実施形態によると、本技術分野で周知の任意の従来の方法により膜濾過を行ってよく、その方法は特に限定されない。例えば、発酵液を解乳化させて膜濾過した後、固液分離して清澄な発酵液を得ることにより、膜濾過を行ってもよい。濾過温度は、一般的には３０～５０℃であり、好ましくは４０～５０℃である。膜の孔径は、一般的には１０～５０ｎｍであり、好ましくは２０～２５ｎｍである。
本出願の実施形態によると、本技術分野で周知の任意の従来の方法により酸析を行ってよく、その方法は特に限定されない。例えば、酸性ｐＨ調整剤を使用して清澄な発酵液のｐＨを３～５（好ましくは３～４）に調整し、長鎖二塩基酸を沈澱させることにより、酸析を行ってもよい。酸性ｐＨ調整剤は、一般的には強酸であり、硫酸、塩酸、硝酸などの１つ以上であってもよい。
本出願の実施形態によると、本技術分野で周知の任意の従来の方法により濾過を行ってもよく、その方法は特に限定されない。例えば、板枠式濾過により濾過を行ってもよい。濾過圧力は、一般的には、０．５～１．０ＭＰａである。濾過温度は、一般的には室温である（例えば２０～３０℃）。
本出願の実施形態によると、本技術分野で周知の任意の従来の方法により感想を行ってもよく、その方法は特に限定されない。例えば、乾燥温度は、８０～１０５℃であってよい。乾燥時間は、５～２０時間であってよい。
以下、実施例により、本出願をさらに詳細に説明する。しかし、本出願は、下記の実施例には限定されない。
下記の実施例および比較例で採用している実験手順は、別途記載のない限り、本技術分野において従来採用されている物である。下記の実施例および比較例で使用している実験材料は、別途記載のない限り、生化学関係の販売者により市販されているものである。
長鎖二塩基酸の総抽出率Ｔは、下記式により計算する。式中、Ｖは、長鎖二塩基酸の発酵液を膜濾過して未反応のアルカンを除去した後の、清澄な発酵液の体積（Ｌ）を表す。Ｍは、抽出した長鎖二塩基酸の乾燥重量（ｇ）を表す。Ｃは、長鎖二塩基酸の下部タンクにおける濃度（ｇ／Ｌ）を表す。
Figure 2022554259000001
混合基質のモル転化率Ｋは、下記式により計算する。式中、Ｍは、抽出した長鎖二塩基酸の乾燥重量（ｇ）を表す。Ｍ１は、アルカンの質量を表す。Ｍ２は、ラウリン酸の質量（ｇ）を表す。ｍは、長鎖二塩基酸の分子量を表す。ｍ１は、アルカンの分子量を表す。ｍ２は、ラウリン酸の分子量を表す。
Figure 2022554259000002
長鎖ジカルボン酸の生産強度Ｑは、下記式により計算する。式中、Ｃは、長鎖二塩基酸の下部タンクにおける濃度（ｇ／Ｌ）を表す。Ｈは、発酵時間（ｈ）を表す。
Figure 2022554259000003
本出願の実施例においては、発酵菌の株としてCandida tropicalisの変異体PF-UV-56を選択し、長鎖アルカンを発酵させて長鎖二塩基酸を製造した。この変異体は、China General Microbiological Culture Collection Centerに寄託されており、寄託番号はCGMCC No. 0356である。
［発酵種培養液の調製］
斜面培養で維持されている株を、４個の５Ｌ入り振盪フラスコに播種し、株を活性化させた（振盪フラスコの液体保持体積は、３００ｍＬとした）。培養温度：３２℃、振盪インキュベーターの回転数：２００ｒｐｍにて、株を培養した。４８時間の培養後、１．２の活性化させた種培養液を、発酵種培養液とした。
［発酵培地の組成］
・スクロース ：２０ｇ／Ｌ
・コーンスティープリカー：０．８ｇ／Ｌ
・酵母抽出物 ：２．０ｇ／Ｌ
・塩化ナトリウム ：０．８ｇ／Ｌ
・リン酸二水素カリウム ：３．０ｇ／Ｌ
・硫酸マグネシウム ：１．２ｇ／Ｌ
・尿素 ：１．２ｇ／Ｌ
・硫酸アンモニウム ：１．５ｇ／Ｌ
・酢酸ナトリウム ：１．５ｇ／Ｌ
〔実施例１〕
（１）１６５０ｇのドデカンを準備し、３３０ｇのラウリン酸を加えた。得られた混合物を６０℃に加熱し、１５０ｒｐｍで攪拌しながら混合および溶解させた。次に、１９８０の水を加えた。次に、混合を続けながら固体の水酸化ナトリウムを加えて、系のｐＨを８に調整し、混合基質を得た。
（２）１５Ｌの発酵タンクで、長鎖二塩基酸へと発酵させた。総液体保持体積は、１２Ｌであった。発酵菌の種培養液の体積は、１．２Ｌであった。発酵温度は、３２℃であった。通気速度は、１．０ＶＶＭであった。攪拌速度は、２５０ｒｐｍであった。発酵の開始から０～２４時間は、ｐＨを調整しなかった。発酵の開始から２４時間後にｐＨを７．０に調整し、その後、２４時間ごとにｐＨを０．１５ずつ増加させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質を、５個のバッチに分けて発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵の開始から、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後の時点であった。
（３）発酵時間は、合計で１４５時間であった。発酵の完了後、発酵液のｐＨを９．５に調整し、９０℃に加熱して、２０分間保持した。解乳化させた発酵液を膜濾過により固液分離して、清澄な水性発酵液を得た。濾過条件は、膜の孔径：２０ｎｍ、濾過温度：４０℃とした。清澄な水性発酵液に濃硫酸を加えて、ｐＨを３に調整した。これにより、清澄な水性発酵液に含まれている長鎖二塩基酸を結晶化させて分離させた。分離させた長鎖二塩基酸を板枠式濾過して乾燥させ、長鎖二塩基酸の粗生成物を得た。濾過条件は、濾過圧力：０．５ＭＰａ、濾過温度：３０℃とした。乾燥条件は、温度：８０℃、乾燥時間：２０時間とした。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５２．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．４Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１９１４．５ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６２．４％であった。
〔実施例２〕
（１）１９００ｇのドデカンを準備し、１９０ｇのラウリン酸を加えた。得られた混合物を６０℃に加熱し、２５０ｒｐｍで攪拌しながら混合および溶解させた。次に、２０９０の水を加えた。次に、混合を続けながら固体の水酸化ナトリウムを加えて、系のｐＨを７．５に調整し、混合基質を得た。
（２）１５Ｌの発酵タンクで、長鎖二塩基酸へと発酵させた。総液体保持体積は、１２Ｌであった。発酵菌の種培養液の体積は、１．２Ｌであった。発酵温度は、３２℃であった。通気速度は、１．０ＶＶＭであった。攪拌速度は、２５０ｒｐｍであった。発酵の開始から０～２４時間は、ｐＨを調整しなかった。発酵の開始から２４時間後にｐＨを７．０に調整し、その後、２４時間ごとにｐＨを０．２ずつ増加させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質を、５個のバッチに分けて発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵の開始から、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後であった。
（３）発酵時間は、合計で１５０時間であった。発酵の完了後、発酵液のｐＨを９に調整し、７５℃に加熱して、４０分間保持した。解乳化させた発酵液を膜濾過により固液分離して、清澄な水性発酵液を得た。濾過条件は、膜の孔径：２５ｎｍ、濾過温度：５０℃とした。清澄な水性発酵液に濃硫酸を加えて、ｐＨを４に調整した。これにより、清澄な水性発酵液に含まれている長鎖二塩基酸を結晶化させて分離させた。分離させた長鎖二塩基酸を、板枠式濾過して乾燥させ、二塩基酸の粗生成物を得た。濾過条件は、濾過圧力：１．０ＭＰａ、濾過温度：２０℃とした。乾燥条件は、温度：１０５℃、乾燥時間：５時間とした。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５６．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．６Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１９７３．０ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９３％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６０．２％であった。
〔実施例３〕
（１）の１６５０ｇのドデカンを準備し、３３０ｇのラウリン酸を加えた。得られた混合物を６０℃に加熱し、１５０ｒｐｍで攪拌しながら混合および溶解させた。次に、５９４０の水を加えた。次に、混合を続けながら固体の水酸化ナトリウムを加えて、系のｐＨを８に調整し、混合基質を得た。
（２）１５Ｌの発酵タンクで、長鎖二塩基酸へと発酵させた。総液体保持体積は、１２Ｌであった。発酵菌の種培養液の体積は、１．２Ｌであった。発酵温度は、３２℃であった。通気速度は、１．０ＶＶＭであった。攪拌速度は、２５０ｒｐｍであった。発酵開始から０～２４時間は、ｐＨを調整しなかった。発酵の開始から２４時間後にｐＨを７．０に調整し、その後、２４時間ごとにｐＨを０．１５ずつ増加させた。発酵開始から２４時間後以降、工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質を連続供給モードで発酵系に加えた。流速は、６６ｇ／時間とした。
（３）発酵時間は、合計で１４４であった。発酵の完了後、発酵液のｐＨを９．５に調整し、９０℃に加熱して、２０分間保持した。解乳化させた発酵液を、膜濾過により固液分離して、清澄な水性発酵液を得た。濾過条件は、膜の孔径：２０ｎｍ、濾過温度：４０℃とした。清澄な水性発酵液に濃硫酸を加えて、ｐＨを３に調整した。これにより、清澄な水性発酵液に含まれている長鎖二塩基酸を結晶化させて分離させた。分離させた長鎖二塩基酸を、板枠式濾過して乾燥させ、長鎖二塩基酸の粗生成物を得た。濾過条件は、濾過圧力：０．５ＭＰａ、濾過温度：３０℃とした。乾燥条件は、温度：８０℃、乾燥時間：２０時間とした。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５３．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．５Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１９４１．６ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６３．３％であった。
〔比較例１〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）においてアルカンおよびラウリン酸の混合基質を使用せず、工程（２）の発酵の際にアルカンのみをバッチで加えた（合計質量：１９８０ｇ）。発酵時間は、合計で１５８時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５０．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１８３３ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５８．２％であった。
〔比較例２〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）においてアルカンおよびラウリン酸の混合基質を使用せず、工程（２）においてラウリン酸のみをバッチで加えた（合計質量：１９８０ｇ）。発酵時間は、合計で１５５時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１２．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１６９．２ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６．３％であった。
〔比較例３〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）においてアルカンおよびラウリン酸の混合基質を使用せず、工程（２）の発酵の際にアルカンのみをバッチで加えた（合計質量：１８４８ｇ）。発酵時間は、合計で１５０時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１４１．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１２．９Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１７０９．８ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５８．２％であった。
〔実施例４〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）において、アルカンおよびラウリン酸を室温にて攪拌しながら混合し、１９８０ｇの水を加えた後、混合しながら固体の水酸化ナトリウムを加えて系のｐＨを８に調整し、混合基質を得た。発酵時間は、合計で１４４時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。測定および計算の結果、工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１４２．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．２Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１７６２ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５７．４％であった。
〔実施例５〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）において、アルカンおよびラウリン酸を６０℃にて攪拌しながら溶解させ、水を加えて水溶液とすることなく、得られた混合物をアルカリでｐＨ調整せずに、直接工程（２）における発酵プロセスで使用した。発酵時間は、合計で１４４時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１３５．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１６５０ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５３．８％であった。
〔実施例６〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）において、アルカンおよびラウリン酸を６０℃にて攪拌しながら溶解させ、水を加えて水溶液とし、この水溶液をアルカリでｐＨ調整せずに、直接工程（２）における発酵プロセスで使用した。発酵時間は、合計で１４５時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１４２．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．５Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１８０２ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５８．７％であった。
〔実施例７〕
（１）１８００ｇのドデカンを準備し、３００ｇのラウリン酸を加えた。得られた混合物を６０℃に加熱し、１５０ｒｐｍで攪拌しながら混合および溶解させた。次に、４２００ｇの水を加えた。次に、混合を続けながら固体の水酸化ナトリウムを加えて、系のｐＨを７．５に調整し、混合基質を得た。
（２）１５Ｌの発酵タンクで、長鎖二塩基酸へと発酵させた。総液体保持体積は、１２Ｌであった。発酵菌の種培養液の体積は、１．２Ｌであった。発酵温度は、３２℃であった。通気速度は、１．０ＶＶＭであった。攪拌速度は、２５０ｒｐｍであった。発酵の開始から０～２４時間は、ｐＨを調整しなかった。発酵の開始から２４時間後にｐＨを７．０に調整し、その後、２４時間ごとにｐＨを０．２ずつ増加させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質を、５個のバッチに分けて発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵の開始から、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後の時点であった。
（３）発酵時間は、合計で１５３時間であった。発酵の完了後、実施例１の工程（１）と同じ方法により、長鎖二塩基酸を抽出した。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１６０．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．６Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、２０３０．４ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６２．２％であった。
〔実施例８〕
（１）１６５０ｇのドデカンを準備し、１９８ｇのラウリン酸を加えた。得られた混合物を６０℃に加熱し、１５０ｒｐｍで攪拌しながら混合および溶解させた。次に、１８４８ｇの水を加えた。次に、混合を続けながら固体の水酸化ナトリウムを加えて、系のｐＨを８に調整し、混合基質を得た。
（２）１５Ｌの発酵タンクで、長鎖二塩基酸へと発酵させた。総液体保持体積は、１２Ｌであった。発酵菌の種培養液の体積は、１．２Ｌであった。発酵温度は、３２℃であった。通気速度は、１．０ＶＶＭであった。攪拌速度は、２５０ｒｐｍであった。発酵の開始から０～２４時間は、ｐＨを調整しなかった。発酵の開始から２４時間後に、ｐＨを７．０に調整した。その後、２４時間ごとにｐＨを０．２ずつ増加させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質を、５個のバッチに分けて発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵開始から２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後であった。
（３）発酵時間は、合計で１４２時間であった。発酵の完了後、実施例１の工程（１）と同じ方法により、長鎖二塩基酸を抽出した。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１４８．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１２．９Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、２０４８．９ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６２．１％であった。
〔実施例９〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）において、アルカンおよびラウリン酸の組合せに代えて、テトラデカンおよびミリスチン酸の組合せを使用した。発酵時間は、合計で１４４時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１１５．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１４０５．３ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５３．２％であった。
〔実施例１０〕
次の点を変更した以外は、実施例１に記載の通りに実験を行った：工程（１）において、アルカンおよびラウリン酸の組合せに代えて、ヘキサデカンおよびパルミチン酸の組合せを使用した。発酵時間は、合計で１４４時間であった。発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、９８．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１１９７．６ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、５１．６％であった。
〔実施例１１〕
（１）１６５０ｇのドデカンを準備し、３３０ｇずつに５分割した。５分割したそれぞれに対して、３３．０ｇ、３６．３ｇ、３９．６ｇ、４２．９ｇおよび４６．２ｇのラウリン酸を加えて、組成比が異なるアルカンおよびラウリン酸の混合物を調製した（この混合物を、番号１～５と称する）。実施例１の工程（１）と同じ方法により、アルカンおよびラウリン酸の混合物を下処理した。
（２）実施例１の工程（２）と同じ方法により、長鎖二塩基酸へと発酵させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質は、番号１～５の順番で発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵の開始から、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後であった。
（３）発酵時間は、合計で１４０時間であった。発酵の完了後、実施例１の工程（３）と同じ方法により、長鎖二塩基酸の粗生成物を抽出した。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１４９．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．０Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１８２０．８ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６３．０％であった。
〔実施例１２〕
（１）１６５０ｇのドデカンを準備し、３３０ｇずつに５分割した。５分割したそれぞれに対して、５２．８ｇ、５６．１ｇ、５９．４ｇ、６２．７ｇおよび６６．０ｇのラウリン酸を加えて、組成比の異なるアルカンおよびラウリン酸の混合物を調製した（この混合物を、番号１～５と称する）。実施例１の工程（１）と同じ方法により、アルカンおよびラウリン酸の混合物を下処理した。
（２）実施例１の工程（２）と同じ方法により、長鎖二塩基酸へと発酵させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質は、番号１～５の順番で発酵系に加えた。混合基質を加えた時刻は、発酵の開始から、２４時間後、４８時間後、７２時間後、９６時間後および１２０時間後であった。
（３）発酵時間は、合計で１４０時間であった。発酵の完了後、実施例１の工程（３）と同じ方法により、長鎖二塩基酸の粗生成物を抽出した。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５４．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．４Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１９３９．８ｇであった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６４．２％であった。
〔実施例１３〕
（１）１６５０ｇのドデカンを準備し、３３０ずつに５分割した。５分割したそれぞれに対して、３３．０ｇ、３６．３ｇ、３９．６ｇ、４２．９ｇおよび４６．２ｇのラウリン酸を加えた。実施例１の工程（１）と同じ方法により加熱して溶解させた。次に、それぞれに水を加えて、合計質量が７６８ｇになるようにした。固体の水酸化ナトリウムをさらに加えて、系のｐＨを７．５に調整し、組成比の異なるアルカンおよびラウリン酸の混合物を得た（この混合物を、番号１～５と称する）。
（２）実施例１の工程（２）に記載の通り、長鎖二塩基酸へと発酵させた。工程（１）で調製したアルカン／ラウリン酸混合基質は、番号１～５の順番で、一定の流速にて発酵系に連続供給した。番号１は発酵開始から２４～４８時間後に、番号２は発酵開始から４８～７２時間後に、番号３は発酵開始から７２～９６時間後に、番号４は発酵開始から９６～１２０時間後に、番号５は発酵開始から１２０～１４４時間後に、それぞれ供給した。流速は、３２ｇ／時間とした。
（３）発酵時間は、合計で１４４時間であった。発酵の完了後、実施例１の工程（３）と同じ方法により、長鎖二塩基酸の粗生成物を抽出した。
発酵の結果は、次の通りであった。工程（２）における長鎖二塩基酸の発酵濃度は、１５２．０ｇ／Ｌであった。工程（３）における膜濾過の後で得られた清澄な発酵液は、１３．２Ｌであった。酸析の後で得られた長鎖二塩基酸の粗生成物の質量は、１８８６．０であった。酸の粗生成物の抽出率は、９４％であった。アルカンおよびラウリン酸の混合基質のモル転化率は、６５．３％であった。

Claims (15)

  1. １つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる、長鎖組成物（好ましくは、発酵における使用のための長鎖組成物）であって、
    上記１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝である（好ましくは直鎖である）アルカンからなる群より選択され、
    好ましくは、ｎ－ドデカン、ｎ－テトラデカンおよびｎ－ヘキサデカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンであり、特にｎ－ドデカンであり、
    １つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択され、
    好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸であり、特にラウリン酸であり、
    上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比は、（１：１）～（４０：１）である（好ましくは、（２：１）～（２０：１）または（５：１）～（１０：１）である）、
    長鎖組成物。
  2. 水をさらに含んでおり、
    上記水の質量は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸の合計質量の０．５～１０倍である（好ましくは、１～５倍または１～３倍である）、
    請求項１に記載の長鎖組成物。
  3. 下記(i)～(iii)のうち１つ以上を満たしている、請求項１に記載の長鎖組成物：
    (i)ｐＨが５～１２である（好ましくは、７～１０、７．５～９または７．５～８．０である）；
    (ii)３２℃において液体または固液混合物の形態で存在する（好ましくは液体の形態で存在し、特に水性液体である）；
    (iii)上記長鎖アルカンの炭素原子数と、上記長鎖カルボン酸の炭素原子数が同数である。
  4. ｎ種類の請求項１～３のいずれか１項に記載の長鎖組成物が互いに独立して存在している（例えば、互いに独立して梱包または区分けされている）、長鎖組成物の組合せであって、
    上記ｎは、２～４０の正の整数であり（好ましくは、４～２０または５～１０であり）、
    第ｉ長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｉとし（ｉは、２～ｎの任意の正の整数である）、第１長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲ１とし、第ｎ長鎖組成物における上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比をＲｎとすると、
    Ｒｉ－１／Ｒｉ≧１であり（好ましくは、Ｒｉ－１／Ｒｉの値は、１～２０、１．０００１～１０、１．００１～１０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２であり）、
    Ｒ１／Ｒｎ＞１である（好ましくは、Ｒ１／Ｒｎの値は、１．０００１～３０、１．００１～２０、１．０１～１０、１．１～５または１．５～２である）、
    長鎖組成物の組合せ。
  5. 下記(i)～(iii)のうち１つ以上を満たしている、請求項４に記載の長鎖組成物の組合せ：
    (i)ｎ種類の上記長鎖組成物は、別々に製造されたものである；
    (ii)長鎖組成物の量に基づいて計算した、ｎ種類の上記長鎖組成物のうち任意の２つの重量比は同一または異なっており、好ましくは同一または実質的に同一である；
    (iii)長鎖アルカンの量に基づいて計算した、ｎ種類の上記長鎖組成物のうち任意の２つの重量比は、同一または実質的に同一である。
  6. １つ以上の長鎖アルカンおよび１つ以上の長鎖カルボン酸を含んでいる長鎖組成物（好ましくは、発酵における使用のための長鎖組成物）の製造方法であって、
    上記１つ以上の長鎖アルカンは、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝である（好ましくは直鎖である）アルカンからなる群より選択され、
    好ましくは、ｎ－ドデカン、ｎ－テトラデカンおよびｎ－ヘキサデカンからなる群より選択される１つ以上の長鎖アルカンであり、特にｎ－ドデカンであり、
    上記１つ以上の長鎖カルボン酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族モノカルボン酸からなる群より選択され、
    好ましくは、ラウリン酸、ミリスチン酸およびパルミチン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖カルボン酸であり、特にラウリン酸であり、
    上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比は、（１：１）～（４０：１）であり（好ましくは、（２：１）～（２０：１）または（５：１）～（１０：１）であり）、
    上記製造方法は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸を上記質量比にて混合して（好ましくは、均一になるまで混合して）上記長鎖組成物を得る、混合工程を少なくとも含み、
    任意構成で、上記混合工程を、加熱（好ましくは、４５～７０℃または５０～６０℃に加熱）および攪拌（好ましくは、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍで攪拌）しながら行う、
    製造方法。
  7. 下記(i)および／または(ii)を満たしており、
    (i)上記混合工程において、水およびｐＨ調整剤（塩基など、特に水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上）をさらに加える；
    (ii)水およびｐＨ調整剤（塩基など、特に水酸化ナトリウムおよび水酸化カリウムから選択される１つ以上）を上記長鎖組成物に加える工程を含み、任意構成で、当該工程を、加熱（好ましくは、４５～７０℃または５０～６０℃に加熱）および攪拌（好ましくは、５０～２５０ｒｐｍまたは１５０～２５０ｒｐｍで攪拌）しながら行う；
    上記水の質量は、上記長鎖アルカンおよび上記長鎖カルボン酸の合計質量の０．５～１０倍（好ましくは、１～５倍または１～３倍）であり、
    上記ｐＨ調整剤の使用量は、上記長鎖組成物のｐＨを５～１２（好ましくは、７～１０、７．５～９または７．５～８．０）に調整する量である、
    請求項６に記載の製造方法。
  8. 長鎖二塩基酸の製造方法であって、
    上記長鎖二塩基酸は、Ｃ９～１８であり、直鎖または分枝であり（好ましくは直鎖であり）、飽和または不飽和である（好ましくは飽和である）脂肪族ジカルボン酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸であり、
    好ましくは、ドデカン二酸、テトラデカン二酸およびヘキサデカン二酸からなる群より選択される１つ以上の長鎖二塩基酸であり、特にドデカン二酸であり、
    上記製造方法は、下記工程（１）および（２）を含む、製造方法：
    （１）請求項６に記載の製造方法によって長鎖組成物を製造して、請求項１に記載の長鎖組成物または請求項４に記載の長鎖組成物の組合せ（これらを長鎖組成物と総称する）を提供する工程；
    （２）発酵菌および発酵培地の存在下において上記長鎖組成物を発酵させて、上記長鎖組成物を長鎖二塩基酸に転化させる工程。
  9. 下記(i)および／または(ii)を満たしている、請求項８に記載の製造方法：
    (i)上記発酵菌は、完全α，ω酸化経路を有している酵母であり、
    好ましくは、Candida属、Cryptococcus属、Neurospora属、Hansenula属、Pichia属、Rhodotorula属、Torulopsis属およびTrichosporon属からなる群より選択される１種類以上の酵母であり、
    より好ましくは、Candida属から選択される１種類以上の酵母であり、
    特にCandida tropicalisであり、
    より特にCandida tropicalisの変異株PF-UV-56（China General Microbiological Culture Collection Centerに寄託、寄託番号：CGMCC No. 0356）である；
    (ii)上記発酵培地は、下記を含んでいる：
    ２０～２８ｇ／Ｌのスクロース；
    ０．８～１．５ｇ／Ｌのコーンスティープリカー；
    ２．０～４．０ｇ／Ｌの酵母抽出物；
    ０．８～１．２ｇ／Ｌの塩化ナトリウム；
    ３．０～３．５ｇ／Ｌのリン酸二水素カリウム；
    １．２～１．８ｇ／Ｌの硫酸マグネシウム；
    １．２～４．８ｇ／Ｌの尿素；
    １．５～２ｇ／Ｌの硫酸アンモニウム；および、
    １．５～１．８ｇ／Ｌの酢酸ナトリウム。
  10. 上記発酵は、下記工程(i)および(ii)を含む、請求項８に記載の製造方法：
    (i)上記発酵菌および上記発酵培地を混合し、５～６０時間（好ましくは１０～４０時間、より好ましくは２０～３０時間または２４時間）発酵させて、発酵原料溶液を得る予備工程；
    (ii)上記発酵原料溶液に上記長鎖組成物を加えて６０～４００時間（好ましくは１００～３００時間、より好ましくは１００～１６０時間または１００～１４０時間）発酵させることにより、上記長鎖組成物を上記長鎖二塩基酸に転化させる転化工程。
  11. 下記(i)～(vii)のうち１つ以上を満たしている、請求項８に記載の製造方法：
    (i)上記発酵菌の種培養液を、総液体保持体積の２～３０体積％（好ましくは５～２０体積％または１０～１５体積％）加える；
    (ii)上記発酵反応の反応温度は、２５～３７℃（好ましくは、２８～３２℃）である；
    (iii)上記発酵反応を、１００～１０００ｒｐｍ（好ましくは、１２０～５００ｒｐｍまたは１５０～３００ｒｐｍ）にて攪拌しながら行う；
    (iv)上記発酵反応の通気速度は、０．２～１０．０ＶＶＭ（好ましくは、０．２～２．０ＶＶＭまたは０．５～１．０ＶＶＭ）である；
    (v)上記発酵反応の反応時間は、６５時間以上（好ましくは１２０時間超、より好ましくは１３０～４００時間、１３０～３００時間、１３０～２００時間または１３８～１６０時間）である；
    (vi)上記長鎖組成物の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり１００～１０００ｇ（好ましくは、総液体保持体積１Ｌあたり１００～５００ｇまたは１５０～２５０ｇ）である；
    (vii)上記発酵培地の投入量は、総液体保持体積１Ｌあたり１２～８０ｇ（好ましくは、総液体保持体積１Ｌあたり３２～５０ｇ、３５～４５ｇまたは３７～４２ｇ）である。
  12. 下記(i)および／または(ii)を満たしている、請求項１０に記載の製造方法：
    (i)上記予備工程において（好ましくは、上記予備工程の開始から２４時間以内において）、上記長鎖組成物を加えず、上記発酵反応のｐＨを自己調整させる（すなわち、ｐＨを調整しない）；
    (ii)上記転化工程の開始時点において（好ましくは、上記予備工程の開始から２４時間後において）、上記発酵反応のｐＨを６．０～７．５（好ましくは、６．８～７．０）に調整し、その後、発酵反応の終了まで５～６０時間（好ましくは、１０～４０時間、２０～３０時間または２４時間）間隔で、ｐＨを０．０５～０．４（好ましくは、０．１～０．３）ずつ増加させる。
  13. 下記(i)または(ii)を満たしている、請求項１０に記載の製造方法：
    (i)上記転化工程において、上記長鎖組成物をｎ個のバッチで加え、
    ２つの隣接するバッチの時間間隔は、同じであっても異なっていてもよく、
    好ましくは、５～６０時間、１０～４０時間、２０～３０時間、または２４時間であり、
    上記ｎは、２～４０（好ましくは、４～２０または５～１０）の正の整数である；
    (ii)上記転化工程において、上記長鎖組成物を、反応時間に応じて連続的に加える。
  14. 請求項４に記載の長鎖組成物の組合せを使用し、下記(i)または(ii)を満たしている、請求項１３に記載の製造方法：
    (i)ｎ種類の上記長鎖組成物を、ｎ個のバッチに分けて加える（好ましくは、第１長鎖組成物から第ｎ長鎖組成物の順番になるように加える）；
    (ii)ｎ種類の上記長鎖組成物を、Ｒ＝ｆ（ｔ）の関数に従って連続的に加える；
    式中、
    Ｒは、上記長鎖アルカンの上記長鎖カルボン酸に対する質量比であり、
    ｔは、上記転化工程の反応時間であり、
    ｆ（）は、任意の非増加関数（好ましくは、任意の減少関数、任意の単調減少関数または任意の線形減少関数）を表す。
  15. 上記発酵反応の反応産物から、上記長鎖二塩基酸を分離する工程をさらに含む、請求項８に記載の製造方法。
JP2022525052A 2019-10-28 2020-10-26 長鎖組成物、長鎖組成物の組合せ、ならびにその製造方法および応用 Pending JP2022554259A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911033697 2019-10-28
CN201911033697.1 2019-10-28
PCT/CN2020/123700 WO2021083079A1 (zh) 2019-10-28 2020-10-26 一种长链组合物、长链组合物套组、其制造方法及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2022554259A true JP2022554259A (ja) 2022-12-28

Family

ID=75597284

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022525052A Pending JP2022554259A (ja) 2019-10-28 2020-10-26 長鎖組成物、長鎖組成物の組合せ、ならびにその製造方法および応用

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220372529A1 (ja)
EP (1) EP4036218A4 (ja)
JP (1) JP2022554259A (ja)
KR (1) KR20220088933A (ja)
CN (1) CN112725400B (ja)
WO (1) WO2021083079A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114686531B (zh) * 2020-12-31 2023-07-04 中国石油化工股份有限公司 一种生物转化制备1,3-丙二醇的方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6004784A (en) * 1998-09-14 1999-12-21 General Electric Co. Fermentation medium and method for producing α, ω -alkanedicarboxylic acids
CN1259424C (zh) * 2003-10-31 2006-06-14 中国石油化工股份有限公司 一种提高长链二元酸发酵产率的方法
KR20110101198A (ko) * 2008-12-12 2011-09-15 이 아이 듀폰 디 네모아 앤드 캄파니 재생 가능 자원으로부터의 선형 다이카르복실산의 제조 방법
CN102115767B (zh) 2009-12-30 2013-04-17 张艾琳 微生物同步发酵正十一烷生产十一碳二羧酸方法
CN102115768B (zh) 2009-12-30 2013-07-03 张艾琳 微生物同步发酵正十六烷生产十六碳二元酸的方法
CN102994402B (zh) * 2012-03-09 2014-04-02 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 一种生产二元酸的菌株及其发酵方法
CN103805643B (zh) 2012-11-07 2016-04-27 中国石油化工股份有限公司 一种生产长链二元酸的方法
US9156760B2 (en) * 2013-03-15 2015-10-13 Butamax Advanced Biofuels Llc Method for production of butanol using extractive fermentation
CN109868296A (zh) * 2017-12-05 2019-06-11 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 一种连续发酵生产长链二元酸的方法
CN110218745A (zh) * 2018-03-01 2019-09-10 上海凯赛生物技术研发中心有限公司 发酵生产长链二元酸的方法及其得到的长链二元酸
CN109706192B (zh) * 2019-02-01 2022-05-10 上海凯赛生物技术股份有限公司 一种c19～c21长链二元酸的发酵生产方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20220372529A1 (en) 2022-11-24
WO2021083079A1 (zh) 2021-05-06
EP4036218A4 (en) 2022-12-21
KR20220088933A (ko) 2022-06-28
EP4036218A1 (en) 2022-08-03
CN112725400B (zh) 2023-02-03
CN112725400A (zh) 2021-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107326051B (zh) 一种微生物发酵法生产的癸二酸及其制备方法
US11319561B2 (en) Method for producing a long chain dicarboxylic acid by fermentation, fermentation broth, treated fermentation broth and wastewater
CN110272341B (zh) 一种长链二元酸的提纯方法
CN117210343A (zh) 一种热带假丝酵母菌及其应用、以及一种长链二元酸的生产方法
US8501444B2 (en) Fermentation process for higher yield coefficient of lipase-inhibitor with respect to consumed fatty acid
EP4047081A1 (en) Strain for producing long-chain dicarboxylic acids and fermentation method therefor
JP2022554259A (ja) 長鎖組成物、長鎖組成物の組合せ、ならびにその製造方法および応用
CN109706192B (zh) 一种c19～c21长链二元酸的发酵生产方法
CN111748480B (zh) 一种维斯假丝酵母及其应用
WO2001090395A1 (en) A method for manufacturing highly-concentrated polyglutamic acid with additional supply of saccharides
CN116426577A (zh) 一种以氢氧化钙为中和剂结合co2脉冲反馈补料发酵生产丁二酸的方法
CN103805643B (zh) 一种生产长链二元酸的方法
CN110272924A (zh) 一种发酵生产长链二元酸的方法
CN107177508B (zh) 一种生物法合成生产长链十二碳二元酸的方法
CN114525311B (zh) 一种发酵制备长链二元酸的方法及装置
CN114249645A (zh) 一种癸二酸的提取方法及癸二酸产品
CN111172212A (zh) 一种高含量聚谷氨酸的发酵方法
CN110541006A (zh) 含二元酸戊二胺盐的发酵液及方法及制得的二元酸戊二胺
CN111349660B (zh) 一种长链二元酸的制备方法
CN114438139B (zh) 一种制备长链二元酸的方法及装置
US20220289659A1 (en) Method for the production of a dicarboxylic acid
JP2828729B2 (ja) 光学活性１，３―ブタンジオールの製造法
CN111850060A (zh) 一种发酵生产十六碳二元酸的方法、十六碳二元酸及其制备方法
CN110541009A (zh) 含二元酸戊二胺盐的发酵液及方法及制得的二元酸戊二胺
CN105884611B (zh) 循环反应的水相有机酸酯化装置及其酯化有机酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20230816