JP2022553129A - ポリオウイルス受容体（ｐｖｒ）に対する抗体およびその使用 - Google Patents

ポリオウイルス受容体（ｐｖｒ）に対する抗体およびその使用 Download PDF

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Abstract

【解決手段】本発明は、ヒトポリオウイルス（ＰＶＲ）に結合するヒト化抗体およびその抗原結合断片を提供する。この抗体は、腫瘍または癌の治療に有用である。【選択図】なし

Description

本発明は、免疫療法の分野におけるものであり、ヒトポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）に特異的に結合する特定のＣＤＲおよびフレームワーク配列の組を含むヒト化抗体に関する。これらヒト化抗体を含む医薬組成物、およびその使用も含まれる。
ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）は、ＣＤ１５５とも呼ばれ、細胞外マトリクス分子への細胞接着の媒介に関与する膜貫通糖タンパク質である。この受容体は、多形神経膠芽腫、髄芽腫、および大腸癌を含む神経外胚葉癌（Ｓｏｌｅｃｋｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００２，２７７：２５６９７－７００）のほか、膵臓癌（Ｎｉｓｈｉｗａｄａ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１５，３５（４）：２２８７－９７）において、その発現が上方調節されることから、腫瘍抗原として、および治療介入の標的候補として以前に記載されていた。ＰＶＲは、Ｒａｓ－Ｒａｆ－ＭＥＫ－ＥＲＫシグナル伝達の血清誘導活性化、サイクリンＤ２およびＥの上方調節、ならびにｐ２７Ｋｉｐ１の下方調節を増強し、最終的に細胞周期のＧ０／Ｇ１期の期間を短縮するとも知られている（Ｋａｋｕｎａｇａ ２００４，Ｊ．Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２７９，３６４１９－３６４２５）。そのために、腫瘍細胞上でのＰＶＲの遮断は、その生存率を低下させると予想されている。ＰＶＲは血管新生においても重要な役割を有しており、血管内皮増殖因子受容体２（ＶＥＧＦＲ２）とインテグリンα（ｖ）β（３）との相互作用、およびＶＥＧＦＲ２媒介型Ｒａｐ１－Ａｋｔシグナル伝達経路を調節することが示唆されている（Ｋｉｎｕｇａｓａ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｉｒｃ Ｒｅｓ．２０１２，１１０（５），７１６－２６）。加えて、ＰＶＲは、ＩＧＦ１Ｒと複合体を形成し、チロシンータンパク質キナーゼＭｅｔ（ｃＭｅｔ）シグナル伝達に関与し、細胞生存率および血管新生が低下した複合体形成を遮断する（Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ２０１４，２０，４，７１３９）。
近年、ＰＶＲは重要な免疫チェックポイントリガンドであることが明らかになった（Ｂｒｉｌｃ Ｐ．Ｋ．ｅｔ ａｌ ２０１９ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）。ＰＶＲ発現は、ヒトおよびマウスにおける悪性細胞と腫瘍浸潤性骨髄系細胞の両方において上方調節される。ＰＶＲ－／－マウスは、ＤＮＡＭ－１（ＣＤ２２６）上方調節を介した腫瘍の増殖および転移の減少、ならびにＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞それぞれのエフェクター機能の増強を示す。プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１）またはＰＤ－１と細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４（ＣＴＬＡ４）の両方に対する遮断は、ＰＶＲが制限されている環境でより有効であり、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＰＶＲ遮断を用いる併用療法の臨床的可能性を示唆している（ＬＩ Ｘ．Ｙ ｅｔ．ａｌ ＪＣＩ ２０１８）。さらに、臨床環境では、ＰＤ－Ｌ１およびＰＶＲの発現は、独立して調節され、これにより、抗ＰＤ－１抗体で処置された患者を、ＰＤ－Ｌ１およびＰＶＲの発現レベルに応じて４群に層別化することが可能になった。ＰＤ－Ｌ１低発現患者における高ＰＶＲ発現により、非応答者が増えた（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）。このことは、遺伝子操作された癌モデルを用いてさらに検証された。これら所見は、腫瘍免疫療法における重要な免疫チェックポイントとしてのＰＶＲの意義を支えている（Ｌｅｅ Ｂ．Ｒ ｅｔ ａｌ ＪＣＩ．Ｉｎｓｉｇｈｔ ２０２０）。マウスの尾部に癌細胞を注射し、肺への転移を測定することにより、転移におけるＰＶＲの関与が実証された。癌細胞中の上方調節されたＰＶＲが血小板中のその対抗受容体と相互作用し、この相互作用が肺への癌細胞転移を増強させることが認められている（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００８）２７，２６４－２７３）。
本発明者の１人に対するＷＯ２０１７１４９５３８は、ＰＶＲに結合するほか、これら抗体を産生するポリヌクレオチド配列およびハイブリドーマ細胞をコードするマウス抗体およびその断片を開示している。
米国特許出願第２００７００４１９８５号は、ＰＶＲの少なくとも１つの細胞内または細胞外ドメインに特異的に結合する分子を開示しており、この分子は、ＰＶＲまたはその任意の誘導体を発現する細胞の受容体媒介型接着、輸送、および／または浸潤挙動を調節する能力を有している。
米国特許出願第２００９０２１５１７５号は、細胞に起こり得る接着、輸送、浸潤、および／または転移に必要なＰＶＲ機能を調節する分子（例えば、小分子化合物、オリゴヌクレオチド、ポリペプチド、抗体、および抗体断片）を提供する。これら分子は、転移の可能性、転移、および癌を有する細胞の処置に使用することができる。
より安全かつ強力であり、ＰＶＲ発現に関与する疾患において診断上および治療上使用可能な、ヒトＰＶＲを認識するヒト化抗体を提供する必要性は、まだ満たされない。
本明細書には、いくつかの実施形態により、ヒトポリオウイルス受容体（ＰＶＲ、ＣＤ１５５）に特異的に結合するとともに、リガンド、ＩｇおよびＩＴＩＭドメイン（ＴＩＧＩＴ）を持つＴ細胞免疫受容体、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）のうち少なくとも１つへのＰＶＲの結合を妨げるヒト化抗体が記載される。より大きなの抗体クローンの集合体から選択される本発明のヒト化抗体は、他の既知の抗ＰＶＲ抗体と比較して特性が改善されている。これらの特性の改善として、免疫原性の可能性の低下、結合親和性および活性の改善、生物物理学的特性の改善、発現の改善が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ＰＶＲがＣＤ２２６に結合すると、Ｔ細胞およびＮＫ細胞上でのＣＤ２２６の表面発現が下方調節されて、Ｔ細胞およびＮＫ細胞の死滅を刺激するため、本発明の抗体は、これら細胞上でのＣＤ２６６の発現および／または活性を回復させることができる。ＣＤ２２６の適切な発現および機能化により、免疫細胞、特にＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞による腫瘍死滅の増大が可能となる。
大きなヒト化抗体の集合体は、特定組のＣＤＲ配列およびヒトフレームワーク配列を組み合わせ、これら配列に特定の突然変異を導入して、修飾された可変領域を有する改善された抗体を産生することにより産生される。新たに設計されたヒト化可変領域は、抗体の立体構造と結合親和性の維持に重要な残基を保ちながら、起こり得るＴ細胞エピトープの発生率が最低であるため、抗体に対する有害免疫反応のリスクを最小限にする。本明細書に開示される抗体は、相同性、Ｔ細胞エピトープ、重要な残基、および予測された構造を含む因子に基づき設計された。
予想外にも、軽鎖可変領域のＣＤＲ２の最後の残基（Ｋａｂａｔナンバリングによる５６位）におけるグルタミン酸のアスパラギンへの点突然変異を特異的なヒトフレームワークと組み合わせた変異体は、ヒトＰＶＲに対する強力な親和性、および免疫活性の改善を示す。
本発明による様々なヒト化抗体変異体は、その親和性が低いことに起因して、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）への用途に特に適していることが見出されており、正常組織を標的とすることなく、高度に発現されたＰＶＲ腫瘍細胞を標的とするのに有用な場合がある。
有利なことに、本発明による様々なヒト化抗体変異体は、生産性が改善されており、他の変異体と比較して例外的に高い収率で産生することができる。
ここでは、本明細書に記載のヒト化抗体は、細胞傷害性Ｔ細胞およびＮＫ細胞刺激、ならびに膵臓癌および肺癌のｉｎ ｖｉｖｏモデルを含むヒト化マウスモデルの癌の処置において高い有効性を呈することが開示される。
このため、本発明は、いくつかの実施形態では、親和性、活性、および／または再現性が改善された、ヒトＰＶＲに対する高度に特異的な非免疫原性のヒト化抗体を提供する。
本発明は、一態様により、ヒトポリウイルス受容体（ＰＶＲ、ＣＤ１５５）に特異的に結合するヒト化抗体、または少なくとも抗原結合部位を含むその断片を提供し、抗体またはその断片は重鎖および軽鎖を含み、重鎖は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を有する可変領域を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を有する可変領域を含む。
いくつかの実施形態により、抗体は、配列番号１０、配列番号１１、および配列番号１２に記載のＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域アミノ酸配列と、配列番号１３、配列番号１４、および配列番号１５に記載のＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域アミノ酸配列とを含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその断片は、ＩｇＧモノクローナル抗体である。いくつかの実施形態により、ヒト化モノクローナル抗体は、ＩｇＧ４およびＩｇＧ１から選択される重鎖定常領域を有する。ある実施形態では、ヒト化抗体またはその断片は、ＩｇＧ４サブクラスである。ある実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ＩｇＧ１サブクラスである。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその断片は、ヒンジ領域中にＳ２２８Ｐ（Ｓ２４１Ｐとも呼ばれる）置換を有するヒトＩｇＧ４定常領域を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその断片は、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ（Ｌ／Ｖ）ＫＫＰＧＡＳＶＫ（Ｉ／Ｖ）ＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥＷ（Ｉ／Ｖ）（Ｋ／Ｒ）ＱＡＰＧＱＧＬＥＷ（Ｉ／Ｍ）ＧＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧＲ（Ａ／Ｖ）ＴＦＴＡＤＴＳＩ（Ｄ／Ｓ）Ｔ（Ｔ／Ａ）ＹＭ（Ｑ／Ｅ）ＬＳ（Ｓ／Ｒ）Ｌ（Ｔ／Ｒ）ＳＤＤ（Ｓ／Ｔ）ＡＶＹＹＣＡＲＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹＷＧＱＧＴ（Ｔ／Ｌ）ＶＴＶＳＳ（配列番号４７）を含む重鎖可変領域と、アミノ酸配列ＤＩ（Ｍ／Ｑ）ＭＴＱＳＰＳ（Ｆ／Ｓ）ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（Ｋ／Ｒ）ＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（Ｖ／Ａ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫ（Ｌ／Ｓ）ＬＩＹＷＡＳＳＲＨＥＧＶＰ（Ｄ／Ｓ）ＲＦ（Ｔ／Ｓ）ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳ ＬＱ（Ｓ／Ｐ）ＥＤＦＡ（Ｄ／Ｔ）ＹＦＣＱＱＹＳＲＹＰＬＴＦＧＱＧＴ ＫＬＥＩＫ（配列番号４８）を含む軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその断片は、
ｉ．配列番号１０～１２に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
ｉｉ．４つ一組の重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列、すなわち（Ａ）配列番号１８、２２、および２６からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ１、（Ｂ）配列番号１９、２３、および２８からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ２、（Ｃ）配列番号２０、２４、２７、および２９からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ３、ならびに（Ｄ）配列番号２１および２５からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ４と
を含む鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、
ｉ．配列番号１３～１５に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
ｉｉ．４つ一組の軽鎖フレームワーク配列、すなわち（Ａ）配列番号３０および３４からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ１、（Ｂ）配列番号３１および３７からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ２、（Ｃ）配列番号３２、３５、および３６からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ３、ならびに（Ｄ）配列番号３３であるＦＲ－Ｌ４と
を含む軽鎖可変領域を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含み、重鎖可変領域は、
ｉ．配列番号１０～１２に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
ｉｉ．４つ一組の重鎖（ＨＣ）フレームワーク（ＦＲ）配列、すなわち（Ａ）配列番号１８、２２、および２６からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ１、（Ｂ）配列番号１９、２３、および２８からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ２、（Ｃ）配列番号２０、２４、２７、および２９からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ３、（Ｄ）配列番号２１および２５からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ４と
を含み、軽鎖可変領域は、
ｉ．配列番号１３～１５に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
ｉｉ．４つ一組の軽鎖（ＬＣ）フレームワーク配列（ＦＲ）、すなわち（Ａ）配列番号３０および３４からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ１、（Ｂ）配列番号３１および３７からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ２、（Ｃ）配列番号３２、３５、および３６からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ３、ならびに（Ｄ）配列番号３３であるＦＲ－Ｌ４と
を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態により、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９７％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９７％同一のアミノ酸配列を含む。ある実施形態では、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域との組合せを含み、この組合せは、
ｉ．配列番号１に記載の重鎖可変領域配列および配列番号２に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉ．配列番号４に記載の重鎖可変領域配列および配列番号８に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉｉ．配列番号５に記載の重鎖可変領域配列および配列番号２に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｖ．配列番号５に記載の重鎖可変領域配列および配列番号８に記載の軽鎖可変領域配列、
ｖ．配列番号４に記載の重鎖可変領域配列および配列番号２に記載の軽鎖可変領域配列、
ｖｉ．配列番号１に記載の重鎖可変領域配列および配列番号８に記載の軽鎖可変領域配列、
ｖｉｉ．配列番号６に記載の重鎖可変領域配列および配列番号２に記載の軽鎖配列、ならびに
ｖｉｉｉ．配列番号６に記載の重鎖可変領域配列および配列番号８に記載の軽鎖可変領域配列
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態により、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化モノクローナル抗体の重鎖可変領域は、配列番号１に記載のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６のうち少なくとも１つへのＰＶＲの結合を阻害する。
いくつかの実施形態により、抗体は、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６へのＰＶＲの結合を阻害する。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号４９に記載の重鎖配列、または少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号５０に記載の重鎖配列、または少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＩｇＧ１である。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号４９に記載の軽鎖配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、他の既知の抗体と比較して改善された抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を呈する。
ヒト化抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチド配列は、本発明の別の態様により提供される。
いくつかの実施形態により、上述のような重鎖可変領域、軽鎖可変領域、またはその両方のアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列が、提供される。
いくつかの実施形態により、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、提供される。
いくつかの実施形態により、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドが、提供される。
いくつかの実施形態により、ポリヌクレオチドは、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体またはその抗体断片をコードする。重鎖可変領域と軽鎖可変領域との組合せは、それぞれ本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号３８～４２からなる群から選択される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号４３～４６からなる群から選択される配列、または少なくとも９０％の配列同一性を有するその変異体を含む。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
さらなる態様では、本発明は、本明細書に記載の少なくとも１つのヒト化抗体鎖またはその断片をコードする核酸分子を含む核酸構築物を提供する。いくつかの実施形態により、核酸構築物はプラスミドである。
また、本発明の抗体をコードする核酸を含む細胞株も記載される。細胞株は、本明細書に記載のヒト化抗体またはその断片の発現のためのものである。ある実施形態では、細胞株は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株などの哺乳動物細胞株である。
いくつかの実施形態により、細胞株は、細菌、植物、マウス（例えばＮＳ０およびＳｐ２／０）、ラット（例えばＹＢ２／０）、ハムスター（例えばＢＨＫおよびＣＨＯ）、またはヒト（例えばＰＥＲ．Ｃ６）である。
一態様により、本発明は、細胞外部分（結合ドメイン）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を提供し、本明細書に記載のヒト化抗体またはその断片のいずれかを含有している。いくつかの実施形態により、ＣＤＲとフレームワーク配列との固有の組合せを有し、結合および他の特性が改善された、上述の重鎖および軽鎖可変領域配列の組合せを含むＣＡＲが、提供される。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組合せを含み、重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ヒト化抗体重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組合せを含み、この組合せは、
ｉ．配列番号１に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉ．配列番号３に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉｉ．配列番号４に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｖ．配列番号５に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、ならびに
ｖ．配列番号６に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、配列番号１、３、４、５、および６からなる群から選択される重鎖可変領域配列と、配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列と、膜貫通ドメインと、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとを含む。
本明細書に記載の抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域を含む単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）も、本発明により提供される。ある実施形態により、可変領域間にはヒンジ領域が存在する。
いくつかの実施形態により、ｓｃＦｖのアミノ酸配列は、配列番号５６、配列番号５７、およびこれら配列のいずれかに対して少なくとも９０％の配列類似性を有するそれらのアナログから選択される配列に記載される。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、配列番号５６または配列番号５７のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ｓｃＦｖ配列と、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζ（ＣＤ３Ｚ、Ｚｅｔｔａ）ドメインからなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ドメインとを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ２８ＴＭドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ３Ｚドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、４１ＢＢドメインを含む。特定の実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、上記で開示される任意の抗体のＰＶＲ結合部位を含むｓｃＦｖ配列と、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインからなる群から選択される少なくとも１つのドメインとを含む。特定の実施形態により、ＣＡＲは、上記で開示される任意の抗体のＰＶＲ結合部位を含むｓｃＦｖ配列と、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインとを含む。
いくつかの実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたリンパ球が、提供される。いくつかの実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたＴ細胞が、提供される。さらなる実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたＮＫ細胞が、提供される。
特定の実施形態により、配列番号５６、配列番号５７、またはこれら配列のいずれかに対して少なくとも９０％の配列類似性を有するそれらのアナログからなる群から選択されるｓｃＦｖ配列、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインを発現する操作されたＴ細胞が、提供される。
一態様により、本発明は、対象の癌を処置する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のＣＡＲを含む少なくとも１つのリンパ球を治療上有効量で対象に投与する工程を含む。
本発明は、別の態様により、本明細書に記載のヒト化抗体または抗原結合断片と、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物を提供する。
非経口および経腸投与形態を含む任意の投与形態を使用して、本発明の組成物を必要とする対象に送達することができる。
いくつかの実施形態により、医薬組成物は、注射または注入のために製剤化される。いくつかの実施形態により、医薬組成物は、静脈内投与のために製剤化される。ある実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内投与のために製剤化される。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは医薬組成物は、ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞上でのＣＤ２２６の表面発現および／またはシグナル伝達の増大に使用するためのものである。
複数の実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは医薬組成物は、個体の癌の処置に使用するためのものである。ある実施形態では、癌は固形腫瘍を含む。ある実施形態では、癌は、肺癌、結腸癌、神経膠芽腫、副腎癌、子宮癌、頭頸部癌、膵臓癌、および乳癌からなる群から選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、癌は血液癌である。
いくつかの実施形態により、血液癌は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、および慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を含む白血病、ホジキン病および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、ならびに多発性骨髄腫から選択される。
いくつかの実施形態により、個体はヒトである。
本発明のいくつかの実施形態により、使用は、免疫共阻害受容体の活性または発現を下方調節する薬剤の使用をさらに含む。
いくつかの実施形態により、免疫共阻害受容体は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ３、ＴＩＭ３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、Ｂ７Ｈ４、ＣＤ９６、ＢＹ５５（ＣＤ１６０）、ＬＡＩＲ１、ＳＩＧＬＥＣ１０、ＣＤ１１２Ｒ、ＣＤ１１２、ＩＬＴ－４、および２Ｂ４からなる群から選択される。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
本発明のいくつかの実施形態により、使用は、抗内皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）抗体との併用をさらに含む。
別の態様により、本発明は、個体のＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＣＤ２２６の表面発現および／またはシグナル伝達を増加させる方法を提供し、該方法は、本明細書に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは医薬組成物を治療上有効量で個体に投与する工程を含む。ある実施形態では、ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞である。
別の態様により、本発明は、処置を必要とする個体の癌を処置する方法を提供し、該方法は、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは医薬組成物を治療上有効量で個体に投与する工程を含む。ある実施形態では、癌は固形腫瘍を含む。さらなる実施形態により、癌は非固形腫瘍である。ある実施形態では、癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、および肺癌からなる群から選択される。ある実施形態では、癌を処置する方法は、対象における転移の形成、増殖、または拡散を予防または低下させる工程を含む。
別の態様により、本発明は、癌に罹患した個体の癌を処置する方法を提供し、該方法は、ヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは医薬組成物、およびＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはＣＤ１１２Ｒシグナル伝達の阻害剤を治療上有効量で個体に投与する工程を含む。ある実施形態では、癌は固形腫瘍を含む。ある実施形態では、癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、または肺癌からなる群から選択される。ある実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体またはその断片である。ある実施形態では、ＰＤ－１に結合する抗体またはその断片は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、ティスレリズマブ、スパルタリズマブ、またはそのＰＤ－１結合断片である。ある実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－Ｌ－１またはＰＤ－Ｌ－２に特異的に結合する抗体である。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、またはＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２に結合するＦｃ融合タンパク質を含む。ある実施形態では、Ｆｃ融合タンパク質は、ＡＭＰ－２２４またはそのＰＤ－１結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１シグナル伝達の阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２の小分子阻害剤を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２シグナル伝達の小分子阻害剤は、Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）、（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリンヒドロクロリド、（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール、Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル、（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸、グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環式（１→１４）－チオエーテル、あるいはこれらの誘導体またはアナログのうち１つ以上を含む。
本明細書にはまた、癌に罹患した個体の癌を処置するための組成物の製造方法も記載され、該方法は、ヒト化抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを混合する工程を含む。ある実施形態では、癌は固形腫瘍を含む。ある実施形態では、癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、および肺癌からなる群から選択される。本明細書にはまた、ヒト化抗体またはその抗原結合断片を産生する方法が記載され、該方法は、ヒト化抗体またはその抗原結合断片の発現および分泌を可能にするのに十分な条件下、細胞培養培地において、本明細書に記載の細胞株をインキュベートする工程を含む。
一態様により、本発明はさらに、対象の癌を診断または予後診断する方法を提供し、該方法は、本明細書に記載の少なくとも１つのヒト化抗体、断片、またはｓｃＦｖを用いて対象の生物学的試料中のＰＶＲの発現レベルを求める工程を含む。
別の態様により、本発明はさらに、ＰＶＲの発現を判定または定量する方法を提供し、該方法は、生物学的試料を本明細書に記載の抗体または抗体断片と接触させる工程、および複合体形成のレベルを測定する工程を含む。
いくつかの実施形態により、ＰＶＲの発現を検出または定量するための方法は、
ｉ．少なくとも抗原結合部分を含む、ＰＶＲに特異的な抗体またはその抗体断片で試料をインキュベートする工程と、
ｉｉ．検出可能なプローブを用いて結合したＰＶＲを検出する工程と
を含む。
いくつかの実施形態により、この方法は、
ｉｉｉ．（ｉｉ）の量を、既知量のＰＶＲを含有する基準試料から得た標準曲線と比較する工程と、
ｉｖ．標準曲線から試料中のＰＶＲの量を算出する工程と
をさらに含む。
いくつかの実施形態により、この方法は、ＰＶＲ量が対照または所与の基準よりも高い場合、対象にＰＶＲ陽性癌があることを示す工程を含む。
いくつかの特定の実施形態により、試料は、体液または固形組織である。いくつかの実施形態では、この方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで実施される。
生物学的試料中のＰＶＲの発現を測定するためのキットも提供され、該キットは、本明細書に記載の少なくとも１つの抗体または抗体断片と、ＰＶＲ発現を測定するための手段とを含む。いくつかの実施形態では、このキットは、 キットの使用を指示する説明資料をさらに含む。
本発明のさらなる実施形態および適用可能な全範囲は、以下に示す詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明と特異的な例は、本発明の好ましい実施形態を示すものであるが、単なる例示により提供されるものであり、その理由として、本発明の趣旨および範囲内での様々な変更と改変が、この詳細な説明から当業者に明白となるからであることを理解されたい。
本明細書に記載の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲における特殊性をもって記載される。本明細書に記載の特徴の特性と利点は、例示的な例を記載する以下の詳細な説明、および添付図面を参照することによってより良く理解されるであろう。例示的な例では、本明細書に記載の特徴の原理が利用される。
Ｎ５６置換の親和性および競合アッセイの図である。図１Ａは、Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体によるＰＶＲ結合に対する親和性の改善を示す。Ｂｉａｃｏｒｅアッセイでは、ＰＶＲ－ＨＩＳタグを付けたもの（Ｓｉｎｏ Ｃａｔ．ｎｏ．１０１０９－Ｈ０８Ｈ）に対するＮ５６置換（ｈＩｇＧ４変異体）の相対的および絶対的親和性が示される。２５％超の親和性シフトが有意であると見なした。（＊）各変異体に対する相対的ＫＤは、置換のＫＤを、親のＮ５６変異体（ＶＨ０ＶＫ０）のＫＤで割ることにより確立された。 Ｎ５６置換の親和性および競合アッセイの図である。図１Ｂでは、キメラ抗体（ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）ＨＣを有する５Ｂ９野生型－ＷＴ）の効力を、（脱アミド化部位を除去するために）単一アミノ酸置換を伴うＬＣ ＣＤＲ２配列を保因する可変領域と比較する。効力は、親の５Ｂ９を使用した競合アッセイにおいて測定した。各変異体の相対的ＩＣ５０は、そのＩＣ５０を、並行して試験を行ったキメラＷＴ抗体のＩＣ５０で割ることにより求めた。 Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体によるサルＰＶＲ結合に対する交差反応性の改善を示す図である。最大結合を評価するために、Ｎ５６変異体モノクローナル抗体（Ｘ軸に示す）の飽和用量（１０μｇ／ｍｌ）を使用して、ＰＶＲ発現細胞を染色し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）値をＦＡＣＳ解析により求めた。倍率変化は、各変異体のＭＦＩを、親抗体（Ｋ０）のＭＦＩで割ることにより算出した（（図２Ａ）ＮＣＩ－Ｈ１９７５（ヒト肺）細胞）。２５％超の親和性シフトが有意であると見なした。 Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体によるサルＰＶＲ結合に対する交差反応性の改善を示す図である。最大結合を評価するために、Ｎ５６変異体モノクローナル抗体（Ｘ軸に示す）の飽和用量（１０μｇ／ｍｌ）を使用して、ＰＶＲ発現細胞を染色し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）値をＦＡＣＳ解析により求めた。倍率変化は、各変異体のＭＦＩを、親抗体（Ｋ０）のＭＦＩで割ることにより算出した（（図２Ｂ）Ｖｅｒｏ（アフリカミドリザルの腎臓）細胞）。２５％超の親和性シフトが有意であると見なした。 Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体によるＮＫ活性化の改善を示す図である。Ｎ５６置換変異体を特徴付けるために、ＣＤ１０７ａ誘導アッセイを、健康なドナー由来のヒトＮＫ細胞およびＭＤＡ－ＭＢ－２３１を標的細胞として２：１の比で用いて実施した。Ａｂｓを６００ｐｍで追加した。Ｋ０が親クローン（Ｎ５６）である。すべての変異体が、有意なＣＤ１０７ａ誘導をもたらした（アイソタイプＩｇＧ１の２４０％超）。さらに、Ｎ５６置換Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔは、Ｋ０と比較してＣＤ１０７ａ誘導を大幅に改善した（＊ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０１）。 Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体によるＣＤ８Ｔ細胞増殖の改善を示す図である。Ｎ５６変異体の特徴解析を行うために、Ｔ細胞増殖アッセイを行った。２．５μｌ／ｍｌのＰＨ Ａ－Ｌの存在下、ＣＦＳＥで標識した新鮮なヒトＰＢＭＣを使用して、Ａ５４９癌細胞を、エフェクターと標的との比４：１で使用した。Ｎ５６変異体モノクローナル抗体（Ｘ軸）をすべて４ｕｇ／ｍｌで追加し、共培養物を９６時間インキュベートした。ＣＤ８＋Ｔ細胞上でゲートされた（ｇａｔｅｄ）ＦＡＣＳ解析の結果が提示される。ＣＦＳＥ標識化の相対的ＭＦＩは、ＩｇＧ処置群のＭＦＩを各変異体のＭＦＩで割ることにより算出した。増殖の増加の結果、ＣＦＳＥシグナルが減少したため、Ｙ軸は、この比の逆数値を表す。Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体は、＃によりマークされた親クローン（Ｋ０）よりもＣＤ８Ｔ細胞増殖を大幅に増加させた（＊ｐ＜０．０５、＃＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０１）。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）により測定されたヒトＰＶＲに対するヒト化変異体の親和性を例示する図である。キメラＮ５６Ｅ変異親抗体（Ｎ５６Ｅ ＶＨ０／Ｖｋ０）をベースラインとして使用した、絶対的結果と相対的結果が示される。 フローサイトメトリーにより測定されたそれらのＰＶＲ発現ＨＥＫ２９３細胞への表面結合を例示する図である。キメラＮ５６Ｅ変異親抗体（Ｎ５６Ｅ ＶＨ０／Ｖｋ０）をベースラインとして使用した、絶対的結果と相対的結果が示される。 ヒト化変異体の発現レベルを示す図である。ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞における一過的な発現後の個々の変異体の力価を示す。 ヒト可変ドメイン生殖系列配列に対するヒト化変異体の類似性（図６Ｂ）を示す図である。ヒト生殖系列配列に対するヒト化重鎖および軽鎖変異体の可変ドメイン配列同一性を示す。 ヒト化リード（ｌｅａｄ）変異体ＮＢ１０８８の生物物理学的特性（右列）を、ＬＣ ＣＤＲ２ ５Ｂ９ ＷＴ配列を保因するヒト化変異体ＮＢ９４１（左列）と比較する図である。図７Ａは、低ｐＨでストレス試験を行った後の、ＮＢ１０８８における酸性種の生成の経時的な減少を示す。 ヒト化リード（ｌｅａｄ）変異体ＮＢ１０８８の生物物理学的特性（右列）を、ＬＣ ＣＤＲ２ ５Ｂ９ ＷＴ配列を保因するヒト化変異体ＮＢ９４１（左列）と比較する図である。図７Ｂは、高濃度４０℃でストレス試験を行った後の、ＮＢ１０８８における酸性種の生成の経時的な減少を示す。 ＰＶＲに結合するＮＢ１０８８のＥＣ５０（図８Ａ）、ＰＶＲ－ＴＩＧＩＴ結合のＮＢ１０８８阻害のＩＣ５０（図８Ｂ）、ＰＶＲ－ＣＤ９６結合のＮＢ１０８８阻害のＩＣ５０（図８Ｃ）、ＰＶＲ－ＣＤ２２６結合のＮＢ１０８８阻害のＩＣ５０（図８Ｄ）を例示する図である。 ＮＢ１０８８が単独で（図９Ａと９Ｂ）、およびペンブロリズマブによるＰＤ１阻害と組み合わせて（図９Ｂ）、抗原特異的Ｔ細胞アッセイ（ヒトパピローマウイルス、ＨＰＶ）（図９Ａ）または非特異的同種Ｔ細胞アッセイ（図９Ｂ）を用いて腫瘍／Ｔ細胞共培養系においてインターフェロンγ放出を増加させることを例示する図である。＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析。 ＮＢ１０８８が、内皮増殖因子受容体（ＥＧＦＲ）発現乳癌細胞株Ａ５４９においてＥＧＦＲ結合抗体と組み合わせたときに抗体依存性細胞細胞傷害性を増加させること（図１０Ａ）、および、このことが増加したインターフェロンγ放出と一致すること（図１０Ｂ）を例示する図である。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１、一元配置分散分析。 ＰＶＲ発現腫瘍細胞株（Ａ５４９またはＣａＳｋｉ）が、ＮＢ１０８８により復元できるが抗ＴＩＧＩＴでは復元できない（図１１Ａと１１Ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞（図１１Ａ）およびＮＫ細胞（図１１Ｂ）上で発現されたＣＤ２２６の下方調節を誘導できることを例示する図である。図１１Ａは、抗原特異的Ｔ細胞アッセイ（ヒトパピローマウイルス、ＨＰＶ）、または非特異的同種異系Ｔ細胞アッセイを使用して共培養系において得た結果を示す。 同種または抗原応答性ＣＤ８＋Ｔ細胞によるインターフェロンγ放出におけるＮＢ１０８８依存型増加（図１２Ａ）、あるいはＥＧＦＲ遮断の存在下で抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）応答性ＮＫ細胞の誘導（図１２Ｂ）が、ＣＤ２２６活性に依存し、両方の場合に、ＮＢ１０８８はＴＩＧＩＴ阻害よりも優れた活性を示す（両Ａｂｓは１０ｕｇ／ｍｌである）ことを例示する図である。 ＮＢ１０８８が、ペンブロリズマブ（抗ＰＤ－１、これらのモデルに確立された標準用量で投与）（図１３Ｂ）に匹敵する膵臓癌のヒト化マウスモデル（図１３Ａ）、および肺腺癌のヒト化マウスモデル（図１３Ｃ、ヒト化マウス）における単独療法としての有効性を有していること、この肺腺癌モデルにおいて、有効性が、ヒト免疫細胞の存在に依存し（図１３Ｄ、非ヒト化マウス）、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現の増加と相関する（図１３Ｅ）ことを例示する図である（＊ｐ＜０．０５、＊＊＊ｐ＜０．００１、二元配置分散分析による）。 図１３Ｃと図１３Ｅのモデルに関連する図であり、ＮＢ１０８８がインターフェロンγ陽性（図１４Ａ）およびインターフェロンγ／ＣＤ１０７ａ二重陽性（図１４Ｂ）ＣＤ８ ＴＩＬ細胞の頻度を増加させること、ＮＢ１０８８が、インターフェロンγ＋／ＣＤ２２６＋二重陽性ＣＤ８ Ｔ細胞（図１４Ｄ）の頻度を増加させるが、インターフェロンγ＋／ＣＤ２２６－単一陽性ＣＤ８ Ｔ細胞（図１４Ｃ）の頻度は増加させないことを例示する。＊ｐ＝０．０２１０、＊＊＊＜０．０００１、独立ＴＴＥＳＴ。 １回（２０ｍｇ／ｋｇおよび５０ｍｇ／ｋｇの用量）、または１週間間隔で４回（２００ｍｇ／ｋｇの用量）、様々な用量の抗体を投与したカニクイザルの循環ＣＤ４ Ｔ細胞におけるＮＢ１０８８の薬物動態（図１５Ａ）、およびＣＤ２２６表面発現における対応する薬力学的変化（図１５Ｂ）を例示する図である。 免疫組織化学により測定され、Ｈ－スコアにより評価された様々な種類の癌の生検におけるヒトＰＶＲの発現を示す図である。 ＣＡＲ－Ｔ構築物の全体的な概略図である。ｓｃＦｖは、本発明によるヒト化抗体の重鎖および軽鎖（それぞれＶＨおよびＶＬ）を含む。 親ジャーカット細胞上でαＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔ構築物を過剰発現するジャーカット細胞の強固なインターロイキン２（ＩＬ２）分泌を示す図である。親ジャーカット細胞、またはαＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔ構築物Ｈ４Ｋ２－ＮＴＸ１０８８ＣもしくはＨ３Ｋ４－ＮＴＸ１０３４Ｃ（４０Ｋ細胞／ウェル）を過剰発現するジャーカット細胞は、Ａ５４９またはＭＤＡ－２３１細胞と１：１のＥ：Ｔ比で２４時間インキュベートされ、ＩＬ２分泌は、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ｈＩＬ－２（ｃａｔ４３１８０４）を用いて定量される。両方のＣＡＲ－Ｔドライバは、示された標的の存在下でＩＬ２分泌を親ジャーカット細胞の１００倍増加させた。 抗ＰＶＲ（αＰＶＲ）ＣＡＲ－Ｔによる標的細胞死滅の増加を示す図である。Ａ５４９細胞（図１９Ａ）またはＭＤＡ－２３１細胞（図１９Ｂ）（ともに２００Ｋの細胞）は、ＮＫ培地において７２時間、それぞれ０．４および０．８対１のＥ：Ｔ比（ＧＦＰ陽性に基づく）で、ＣＡＲ－Ｔ－ＰＶＲ変異体ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＮＴＸ－１０３４Ｃとともに１２ウェルプレートに蒔いた。腫瘍細胞死滅は、標準ＣＴＧプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９２４１）を使用して評価した。 抗ＰＶＲ（αＰＶＲ）ＣＡＲ－Ｔによる標的細胞死滅の増加を示す図である。Ａ５４９細胞（図１９Ａ）またはＭＤＡ－２３１細胞（図１９Ｂ）（ともに２００Ｋの細胞）は、ＮＫ培地において７２時間、それぞれ０．４および０．８対１のＥ：Ｔ比（ＧＦＰ陽性に基づく）で、ＣＡＲ－Ｔ－ＰＶＲ変異体ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＮＴＸ－１０３４Ｃとともに１２ウェルプレートに蒔いた。腫瘍細胞死滅は、標準ＣＴＧプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９２４１）を使用して評価した。 抗ＰＶＲ（αＰＶＲ）ＣＡＲ－Ｔによる標的細胞死滅の増加を示す図である。Ａ５４９細胞（図１９Ａ）またはＭＤＡ－２３１細胞（図１９Ｂ）（ともに２００Ｋの細胞）は、ＮＫ培地において７２時間、それぞれ０．４および０．８対１のＥ：Ｔ比（ＧＦＰ陽性に基づく）で、ＣＡＲ－Ｔ－ＰＶＲ変異体ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＮＴＸ－１０３４Ｃとともに１２ウェルプレートに蒔いた。腫瘍細胞死滅は、標準ＣＴＧプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９２４１）を使用して評価した。 αＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔによる効率的な血液学的標的細胞死滅を示す図である。Ｋ５６２（ＡＭＬモデル）細胞は、αＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔ変異体ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＮＴＸ－１０３４Ｃとともに、ＲＰＭＩ＋ＩＬ－２培地において１８時間、Ｘ軸に示されるＥ：Ｔ比でインキュベートされた。腫瘍細胞死滅は、フローサイトメトリーを用いて評価された。顕著な標的細胞死滅は、両方のＣＡＲ－Ｔドライバに認めた。
本発明は、ポリオウイルス受容体（ＰＶＲ）を認識するヒト化モノクローナル抗体を提供する。有利なことに、本発明の抗体は、ほぼ完全にヒト化されており、このため、抗体に対する有害な免疫応答のリスクが回避されるので、ヒトを対象としたｉｎ ｖｉｖｏでの使用に安全である。本発明の抗体は、固有のＣＤＲ配列、ならびに新規なヒト化フレームワーク配列および設計を有することを特徴とする。より具体的には、本発明により提供されるモノクローナル抗体は、ＣＤＲと非完全ヒト化フレームワーク配列との特定の組合せを有しており、固有の特性、および既知の抗ＰＶＲ抗体に比べて改善された安全性と効力を持つ。
本明細書に記載の変異体の一部は、同じＣＤＲ領域を含む他のヒト化ＰＶＲ抗体と比較して生産性が増加されており、高いレベルで発現される。また本明細書には、個体の癌を処置するためにこれら抗体を使用する方法も開示される。
以下の説明では、様々な実施形態の完全な理解を提供するために、特定の具体的な詳細が記述される。しかし、当業者は、提供される実施形態が、これらの詳細がなくとも実施可能であることを理解するであろう。文脈上他の意味に解すべき場合を除き、以下の明細書および特許請求の範囲全体において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」や「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などの変形といった用語は、開放的で包括的な意味、つまり「～を含むが、これらに限定されない」と解釈されるべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、別段の明確な指示がない限り、複数の指示対象を含む。「または」という用語は、別段の明確な指示がない限り、全体として「および／または」を含む意味で使用されることにも留意されたい。さらに、本明細書に提供される見出しは、便宜上のためだけのものであり、請求された実施形態の範囲または意味を解釈するものではない。
本明細書で使用される「ＰＶＲ」という用語は、いくつかの実施形態により、ＣＤ１５５（分化１５５のクラスタ）、タンパク質ＩＤ：Ｑ９２６９２としても知られるポリオウイルス受容体を指す。ＰＶＲは、Ｎ末端シグナル配列、３つの細胞外免疫グロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、膜貫通ドメイン、および細胞質尾部を持つ膜貫通糖タンパク質である。ＰＶＲの分子サイズは約８０ｋＤａであり、３つのＩｇ様ドメイン、具体的には最も外側のＶ様ドメインとその後の２つのＣ２様ドメインで構成される構造を有している。本明細書に記載のヒト化抗体は、ヒトＰＶＲ（ｈＰＶＲ）に対する親和性を有する。いくつかの実施形態では、抗体は、他の動物、特に霊長類由来のＰＶＲタンパク質に対して幾分の親和性を有する。有利なことに、アフリカミドリザルなどの他の霊長類に対する親和性は、非臨床試験における安全性と効率のためにヒト化抗体に対するさらなる試験を可能にする。げっ歯類などの進化上さらに遠い動物由来のＰＶＲに対する親和性は、認められなかった。
本明細書で使用するとき、「約」という用語は、明示した量の１０％以下に近い量を指す。
本明細書中で使用するとき、「個体」、「患者」、または「対象」という用語は、記載された組成物および方法が処置に有用である少なくとも１つの疾患と診断されるか、疾患に罹患した疑いがあるか、または疾患を進行させるリスクのある個体を指す。いくつかの実施形態により、個体は哺乳動物である。いくつかの実施形態により、哺乳動物は、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ラマ、アルパカ、またはヤクである。いくつかの実施形態により、個体はヒトである。
本明細書で使用するとき、「組合せ」または「併用処置」という用語は、組み合わされるべき物質の同時投与、または組み合わされるべき物質の連続投与を指す場合がある。本明細書に記載されるように、その組合せが物質の連続投与を指すとき、その物質は、あらゆる時間的順序で投与可能である。
「癌」および「腫瘍」という用語は、調節解除された細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態に関する。癌は、細胞の一群が未調節の成長または不要な成長を呈する疾患のクラスである。癌細胞は他の場所に広がることもあり、転移の形成を引き起こす可能性がある。体内での癌細胞の拡散は、例えば、リンパまたは血液を介して生じる場合がある。未調節の成長、侵入、および転移形成も、癌の悪性特性と称される。これら悪性特性は良性腫瘍由来の癌と区別され、この癌は一般的に侵入も転移もしない。
本明細書で使用するとき、「有効量」という用語は、哺乳動物に投与したときに生物学的効果を引き起こす治療薬の量を指す。生物学的効果として、受容体リガンド相互作用（例えば、ＰＶＲ－ＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１－ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ－２）の阻害または遮断、シグナル伝達経路の阻害、腫瘍増殖の低下、腫瘍転移の低下、あるいは腫瘍のある動物の生存期間延長が挙げられるが、これらに限定されるものではない。「治療量」は、治療効果を発揮するために算出された薬物の協奏量（ｃｏｎｃｅｒｔａｔｉｏｎ）である。治療量は、個体集団において治療応答を誘導可能な投与量の範囲を包含している。哺乳動物はヒト個体の場合がある。ヒト個体は、腫瘍に罹患しているか、または腫瘍に罹患している疑いがあり得る。
本明細書で使用するとき、「チェックポイント阻害剤」とは、生物体中のＴ細胞の抗腫瘍／抗癌活性を負に調節する、生物体により産生される生物学的分子（「チェックポイント分子」）を阻害する薬物を指す。チェックポイント分子として、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ－１、ＰＤ－Ｌ－２、ＣＴＬＡ４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＶＩＳＴＡ、ＳＩＧＬＥＣ７、ＰＶＲ、ＴＩＧＩＴ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、Ａ２ＡＲ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７Ｈ４、ＣＥＡＣＡＭ１、ＮＯＸ２、ＣＤ１１２Ｒ、およびＣＤ１１２が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
提供される抗体の中には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および多反応性抗体）、および抗体断片がある。抗体は、抗体コンジュゲート、およびキメラ分子などの抗体を含む分子を含む。このため、抗体として、完全長のほか、その結合特異性を保持する断片および部分、例えば、任意数の免疫グロブリンクラスおよび／またはアイソタイプ（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭ）、ならびにＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、およびｓｃＦｖ（単鎖または関連実体）を含むがこれらに限らない生物学的に関連する（抗原結合）断片またはその特異的結合部分が挙げられるが、これらに限定されるものではない。モノクローナル抗体は、一般的に、実質的に均質な抗体の組成内にあるものである。このため、モノクローナル抗体組成物内に含まれる個々の抗体は、微量で存在し得る突然変異を自然に生じさせる可能性を除いて、同一である。ポリクローナル抗体は、一般的に２つ以上の異なる決定基（エピトープ）に対して配向される様々な配列からなる異なる抗体を含む調製物である。モノクローナル抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む場合がある。モノクローナル抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む場合がある。
「抗体」という用語は、本明細書で広い意味で使用され、無傷の抗体およびその機能的（抗原結合）抗体断片を含むポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を含んでおり、この抗体断片には、抗原結合（Ｆａｂ）断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆａｂ’断片、Ｆｖ断片、組換えＩｇＧ（ｒＩｇＧ）断片、単鎖可変断片（ｓＦｖまたはｓｃＦｖ）を含む単鎖抗体断片、および単一ドメイン抗体（例えば、ｓｄＡｂ、ｓｄＦｖ、ナノボディ）断片が含まれる。この用語は、イントラボディ（ｉｎｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ペプチボディ（ｐｅｐｔｉｂｏｄｉｅｓ）、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロ共役抗体、多重特異性、例えば二重特異性抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｏｒａｂｏｄｉｅｓ）、タンデムｄｉ－ｓｃＦｖ、タンデムｔｒｉ－ｓｃＦｖなど、免疫グロブリンの遺伝子操作またはその他の方法により修飾された形態を包含する。別段の記載がない限り、「抗体」という用語は、その機能的抗体断片を包含すると解されたい。この用語はさらに、ＩｇＧおよびそのサブクラス、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、およびＩｇＤを含む任意のクラスまたはサブクラスの抗体を含む、無傷あるいは完全長の抗体を包含する。抗体は、ヒトＩｇＧ１定常領域を含む場合がある。抗体は、ヒトＩｇＧ４定常領域を含む場合がある。
「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」という用語は、「超可変領域」または「ＨＶＲ」と同義であり、当該技術分野において抗体可変領域内のアミノ酸の非連続配列を指すと知られており、抗原特異性および／または結合親和性を付与する。一般に、各重鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）があり、各軽鎖可変領域には３つのＣＤＲ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）がある。「フレームワーク領域」および「ＦＲ」は、重鎖および軽鎖の可変領域の非ＣＤＲ部分を指すことが当技術分野で知られている。一般に、各完全長重鎖可変領域には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｈ１、ＦＲ－Ｈ２、ＦＲ－Ｈ３、およびＦＲ－Ｈ４）があり、各完全長軽鎖可変領域には４つのＦＲ（ＦＲ－Ｌ１、ＦＲ－Ｌ２、ＦＲ－Ｌ３、およびＦＲ－Ｌ４）がある。所与のＣＤＲまたはＦＲの正確なアミノ酸配列の境界は、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．（１９９１），“Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，”５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）ＪＭＢ ２７３，９２７－９４８（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）、ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２－７４５（１９９６），“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－ａｎｔｉｇｅｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ：Ｃｏｎｔａｃｔ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ ｔｏｐｏｇｒａｐｈｙ，”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２，７３２－７４５．”（「Ｃｏｎｔａｃｔ」ナンバリングスキーム）、Ｌｅｆｒａｎｃ ＭＰ ｅｔ ａｌ．，“ＩＭＧＴ ｕｎｉｑｕｅ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ ａｎｄ Ｉｇ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｖ－ｌｉｋｅ ｄｏｍａｉｎｓ，”Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００３ Ｊａｎ；２７（１）：５５－７７（「ＩＭＧＴ」ナンバリングスキーム）、Ｈｏｎｅｇｇｅｒ Ａ ａｎｄ Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ Ａ，“Ｙｅｔ ａｎｏｔｈｅｒ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ ｓｃｈｅｍｅ ｆｏｒ ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎｓ：ａｎ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｍｏｄｅｌｉｎｇ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｔｏｏｌ，”Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ，２００１ Ｊｕｎ ８；３０９（３）：６５７－７０，（「Ａｈｏ」ナンバリングスキーム）、およびＷｈｉｔｅｌｅｇｇ ＮＲ ａｎｄ Ｒｅｅｓ ＡＲ，“ＷＡＭ：ａｎ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｆｏｒ ｍｏｄｅｌｌｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ＷＥＢ，”Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．２０００ Ｄｅｃ；１３（１２）：８１９－２４（「ＡｂＭ」ナンバリングスキーム）に記載されるものを含む多数の周知のスキームのうちいずれかを用いて容易に求めることができる。ある実施形態では、本明細書に記載の抗体のＣＤＲは、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、Ａｈｏ、ＡｂＭ、またはそれらの組合せから選択される方法により定義することができる。
所与のＣＤＲまたはＦＲの境界は、識別のために使用されるスキームに応じて変動し得る。例えば、Ｋａｂａｔスキームは構造アライメントに基づく一方、Ｃｈｏｔｈｉａスキームは構造情報に基づくものである。ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａ両方のナンバリングスキームは、最も一般的な抗体領域配列長に基づくものであり、挿入は挿入文字、例えば「３０ａ」により順応され、欠失は一部の抗体に現れる。この２つのスキームは、異なる位置に特定の挿入と欠失（「インデル」）を配するものであり、その結果ナンバリングが異なる。Ｃｏｎｔａｃｔスキームは、複雑な結晶構造の解析に基づくものであり、多くの点でＣｈｏｔｈｉａナンバリングスキームに類似している。
「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合させるのに必要な抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。自然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、全体として同様の構造を有しており、各ドメインは４つの保存フレームワーク領域（ＦＲ）および３つのＣＤＲを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照）。単一のＶＨまたはＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分なものであり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、それぞれ相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリをスクリー二ングするために抗原に結合する抗体由来のＶＨまたはＶＬドメインを用いて単離することができる（例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０－８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）を参照）。
提供される抗体の中には、抗体断片がある。「抗体断片」は、無傷の抗体以外の分子のうち、無傷の抗体が結合する抗原に結合する無傷の抗体の一部を含むものを指す。抗体断片の例として、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、ダイアボディ、線形抗体、単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖまたはｓＦｖ）、および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されるものではない。特定の実施形態では、抗体は、ｓｃＦｖなどの可変重鎖領域および／または可変軽鎖領域を含む単鎖抗体断片である。
本明細書で使用される「抗原」という用語は、抗体形成を誘発可能であり、かつ抗体に特異的に結合可能な分子またはその一部を指す。抗原は、１つ以上のエピトープを有する場合がある。上記で言及される特異的結合は、抗原が、他の抗原により誘発され得る他の多数の抗体ではなく、その対応する抗体と高度に選択的な形で反応することを示す。本発明のいくつかの実施形態による抗原は、ヒトＰＶＲである。
抗体断片は、無傷の抗体のタンパク質分解消化のほか、組換え宿主細胞による産生を含むがこれらに限定されない様々な技法により作製することができる。いくつかの実施形態では、抗体は、自然に生じない配置を含む断片、合成リンカー、例えばポリペプチドリンカーにより結合される２つ以上の抗体領域または鎖を持つもの、および／または自然に生じる無傷の抗体の酵素消化により産生されないものなど、組換えにより産生された断片である。いくつかの実施形態により、抗体断片はｓｃＦｖである。
「ヒト化」抗体は、すべてまたはほぼすべてのＣＤＲアミノ酸残基が非ヒトＣＤＲに由来し、すべてまたはほぼすべてのＦＲアミノ酸残基がヒトＦＲに由来する抗体である。ヒト化抗体は、任意選択で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含む場合がある。非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、一般的にはヒトに対する免疫原性を低下させるためにヒト化を受けながら、親の非ヒト抗体の特異性と親和性を保持する非ヒト抗体の変異体を指す。いくつかの実施形態により、ヒト化抗体における一部のＦＲ残基は、例えば抗体の特異性または親和性を回復あるいは改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＣＤＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基と置き換えられる。
「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞、あるいは、ヒト抗体ライブラリを含むヒト抗体レパートリまたは他のヒト抗体コード化配列を活用する非ヒト源により産生される抗体のアミノ酸配列に相当するアミノ酸配列を持つ抗体である。この用語は、すべてまたはほぼすべてのＣＤＲが非ヒトであるものなど、非ヒト抗原結合領域を含む非ヒト抗体のヒト化形態を除外する。
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すように互換的に使用され、最小長に限定されるものではない。提供された抗体および抗体鎖、ならびに他のペプチド、例えばリンカーおよび結合ペプチドを含むポリペプチドは、天然および／または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含む場合がある。この用語はまた、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。いくつかの実施形態により、ポリペプチドは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、自然配列または天然配列に対する修飾を包含する場合がある。これらの修飾は、部位特異的変異導入を介する場合は計画的であり、あるいはＰＣＲ増幅に起因してタンパク質またはエラーを産生する宿主の突然変異を介する場合は偶発的であり得る。
基準ポリペプチド配列に対する配列同一性のパーセント（％）は、配列をアライメントし、必要な場合にギャップを導入して最大パーセントの配列同一性を達成した後、基準ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基の割合であるが、あらゆる保存的置換は配列同一性の一部として考慮されない。アミノ酸配列同一性のパーセントを求める目的のアライメントは、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用する、様々な公知の方法で達成することができる。比較対象の配列の全長にわたり最大アライメントを達成するのに必要なアルゴリズムを含む、配列をアライメントするための適切なパラメータを求めることができる。しかし、本明細書中の目的では、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．が著したものであり、ソースコードは、米国著作権局、ワシントンＤ．Ｃ．、２０５５９に利用者文書とともに提出されており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆ．から公的に利用可能であるか、またはソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ（登録商標）Ｖ４．０Ｄを含むＵＮＩＸ（登録商標）オペレーティングシステムで使用するためにコンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムにより設定され、変動しない。
ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列の比較に利用される状況では、所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（これは、所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａの特定の％を有するか含んでいる所与のアミノ酸配列Ａとして代替的に言い表すことができる）は、１００×分数Ｘ／Ｙとして算出される。この式中、Ｘは、ＡおよびＢのプログラムアライメントにおける配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ－２により完全一致としてスコアを付けられるアミノ酸残基の数であり、Ｙは、アミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合、ＡとＢとのアミノ酸配列同一性％は、ＢとＡとのアミノ酸配列同一性％に等しくないことが認識される。別段の定めのない限り、本明細書で使用されるアミノ酸配列同一性％値はすべて、直前の段落に記述されるようにＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを用いて得られる。
「相同性の」、「相同性」、または「相同性パーセント」という用語は、基準配列に対してアミノ酸配列または核酸配列を記述するために本明細書で使用するとき、Ｋａｒｌｉｎ ａｎｄ Ａｌｔｓｃｈｕｌに記載の式を用いて求めることができる（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：２２６４－２２６８，１９９０、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：５８７３－５８７７，１９９３において改訂）。かかる式は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．のベーシック・ローカル・アライメント・サーチツール（ＢＬＡＳＴ）に組み込まれる（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０，１９９０）。配列の相同性パーセントは、本出願の出願日時点のＢＬＡＳＴの最新版を使用して求めることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。変異体は、一般的に１つ以上の置換、欠失、付加、および／または挿入において、本明細書に特異的に開示されるポリペプチドとは異なる。このような変異体は、自然に生じるか、あるいは、例えば本発明の上記ポリペプチド配列のうち１つ以上を修飾し、本明細書に記載のポリペプチドの１つ以上の生物学的活性を評価し、および／または多数の既知の技法のうちいずれかを使用することで、合成により作製することができる。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善させることが望ましい場合があり、抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適宜修飾を導入することにより、またはペプチド合成により調製することができる。このような修飾として、例えば、抗体のアミノ酸配列内での残基からの欠失、残基への挿入、および／または残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換のあらゆる組合せは、最終構築物に到達するように行うことができるが、最終構築物が所望の特徴、例えば抗原結合を有することを条件とする。
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異体が、提供される。置換による突然変異誘発のための目的部位には、ＣＤＲやＦＲが挙げられる。アミノ酸置換は、目的の抗体、および、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、あるいは抗体依存性細胞性細胞傷害（ＡＤＣＣ）または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の改善についてスクリーニングされた産物に導入することができる。
いくつかの実施形態では、置換、挿入、または欠失は、１つ以上のＣＤＲ内に生じる場合があり、ここでは置換、挿入、または欠失は、抗原への抗体結合を実質的に低下させない。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的置換が、ＣＤＲ中で行われる場合がある。このような改質は、ＣＤＲ「ホットスポット」の外部で行われる場合がある。変異体ＶＨとＶＬ配列のいくつかの実施形態では、各ＣＤＲは改質されない。
改質（例えば置換）は、例えば、抗体親和性を改善するために、ＣＤＲ中で行われてよい。かかる改質は、体細胞成熟中に突然変異率の高いコドンをコードするＣＤＲにおいて行われ（例えば Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照）、得られた変異体は、結合親和性について試験を行うことができる。（例えば、エラーの生じやすいＰＣＲ、鎖シャッフリング、ＣＤＲの無作為化、またはオリゴヌクレオチド指向突然変異誘発を用いる）親和性成熟を使用して、抗体親和性を改善することができる（例えばＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（２００１）を参照）。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えばアラニン走査突然変異誘発またはモデリングを用いて、特異的に識別することができる（例えばＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５（１９８９）を参照）。特にＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３が、しばしば標的とされる。代替的または付加的に、抗体と抗原の間の接触点を識別するための抗原－抗体複合体の結晶構造が標的とされる。このような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的化または排除されてもよい。変異体は、所望の特性を包含するかどうかを判定するためにスクリーニングされる場合がある。
アミノ酸配列の挿入および欠失は、１つの残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さであるアミノおよび／またはカルボキシル末端融合のほか、単一もしくは複数のアミノ酸残基の配列内挿入および欠失を含む。末端挿入の例として、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を延ばす酵素（例えば、ＡＤＥＰＴにおける）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合を含む。抗体分子の配列内挿入変異体の例として、軽鎖中の３個のアミノ酸の挿入が挙げられる。末端欠失の例として、軽鎖の末端に７個以下のアミノ酸の欠失を有する抗体が挙げられる。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体の解離定数（ＫＤ）は、抗体標的であるヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）では約１μＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、４０ｎＭ、３０ｎＭ、２０ｎＭ、１０ｎＭ、５ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、０．０１ｎＭ、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）である。ＫＤは、任意の適切なアッセイにより測定可能である。ある実施形態では、ＫＤは、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）アッセイを使用して（例えばＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００またはＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００を使用して）測定可能である。
いくつかの実施形態では、１つ以上のアミノ酸修飾は、本明細書に提供される抗体のＦｃ領域に導入され、それによりＦｃ領域変異体を生成することができる。本明細書中のＦｃ領域は、定常領域の少なくとも一部を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域である。Ｆｃ領域は、天然配列Ｆｃ領域および変異体Ｆｃ領域を含む。Ｆｃ領域変異体は、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のＦｃ領域）を含む場合がある。
いくつかの実施形態では、本開示の抗体は、エフェクター機能のすべてではないが一部を持つ変異体であり、このため、ｉｎ ｖｉｖｏでの抗体の半減期が重要であるが特定のエフェクター機能（補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害となる用途において、望ましい候補となる。ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｉｎ ｖｉｖｏでの細胞傷害性アッセイは、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低下／枯渇を確認するために実施可能である。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実施して、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがってＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能を保持することを確認することができる。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号と５，８２１，３３７号に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法が利用されてもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）およびＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）の非放射性細胞傷害性アッセイ）。かかるアッセイに有用なエフェクター細胞として、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、単球、マクロファージ、およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。
抗体は、半減期が延ばされ、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善される場合がある（例えば、ＵＳ２００５／００１４９３４を参照）。かかる抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ以上の置換を中に有するＦｃ領域を含み、かつ、ＥＵナンバリングシステムによりＦｃ領域残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、または４３４のうち１つ以上に置換を有するＦｃ領域を含む場合がある（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号を参照）。他のＦｃ領域変異体の例も企図される（例えば、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号と５，６２４，８２１号、およびＷＯ９４／２９３５１を参照）。
いくつかの実施形態では、システイン操作された抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作製することが望ましい場合があり、そこでは抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されている。いくつかの実施形態により、置換された残基は、抗体の接近可能な部位にて生じる。反応性チオール基は、免疫複合体を作製するために、薬物部分またはリンカー薬物部分などの他の部分へのコンジュゲーション用の部位に位置付けることができる。いくつかの実施形態では、以下の残基：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）、重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）、および重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵナンバリング）のうちいずれか１つ以上が、システインで置換されてもよい。
いくつかの実施形態では、本明細書に提供される抗体は、公知であるとともに利用可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分として水溶性ポリマーが挙げられるが、これに限定されるものではない。水溶性ポリマーの非限定的な例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物のコポリマー、ポリアミド酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマー）、およびデキストランまたはポリ（ｎビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、ならびにそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中での安定性に起因して製造面での利点を有する場合がある。ポリマーは任意の分子量のものであってよく、分枝状でも非分枝状でもよい。抗体に付けられるポリマーの数は変動する場合があり、２つ以上のポリマーが付く場合、これらは同じまたは異なる分子の場合がある。
本明細書に記載の抗体は、核酸によりコードすることができる。核酸は、２つ以上のヌクレオチド塩基を含むポリヌクレオチドの一種である。ある実施形態では、核酸は、ポリヌクレオチドをコードするポリペプチドを細胞に転写させるために使用可能なベクターの成分である。本明細書で使用するとき、「ベクター」という用語は、連結されている別の核酸を輸送可能な核酸分子を指す。ベクターの一種は、宿主細胞の染色体ＤＮＡに統合することができるゲノム統合ベクター、すなわち「統合ベクター」である。別の種類のベクターは、「エピソーム」ベクター、例えば染色体外での複製が可能な核酸である。それらが作動可能に連結される遺伝子の発現を導くことが可能なベクターは、本明細書中で「発現ベクター」と称される。好適なベクターは、プラスミド、細菌人工染色体、酵母菌人工染色体、ウイルスベクターなどを含む。発現ベクターでは、転写の制御に使用されるプロモータ、エンハンサ、ポリアデニル化シグナルなどの調節要素は、哺乳動物、微生物、ウイルス、または昆虫の遺伝子に由来する場合がある。形質転換体の認識を容易にするために、通常は複製の起点により付与される宿主中、および選択遺伝子中での複製能を、さらに組み込むことができる。レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルスなどのウイルス由来のベクターが、利用されてもよい。プラスミドベクターは、染色体位置への統合のために線形化されてもよい。ベクターは、ゲノム中の規定位置または制限された一組の部位への部位特異的統合（例えばＡｔｔＰ－ＡｔｔＢの組換え）を誘導する配列を含む場合がある。さらに、ベクターは、転置可能な要素に由来する配列を含んでもよい。
本明細書に記載の抗体をコードする核酸は、核酸に適切な細胞を感染させる、トランスフェクトする、形質転換する、またはそれ以外の方法で遺伝子導入させるために使用可能であり、これにより、商業的または治療的用途のための抗体の産生を可能にする。大規模な細胞培養から抗体を産生するための標準の細胞株および方法は、当該技術分野で公知である。ある実施形態では、細胞は真核細胞である。ある実施形態では、真核細胞は哺乳動物細胞である。ある実施形態では、哺乳動物細胞は、抗体を産生するのに有用な細胞株であり、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０マウス骨髄腫細胞、またはＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞である。ある実施形態では、抗体をコードする核酸は、抗体を産生するのに有用な細胞のゲノム座位に統合される。ある実施形態では、本明細書には抗体を作製する方法が記載され、該方法は、前記抗体の産生および分泌を可能にするのに十分なｉｎ ｖｉｔｒｏ条件下で、抗体をコードする核酸を含む細胞を培養する工程を含む。
ある実施形態では、本明細書には、（ａ）ゲノム位置にて統合された本明細書に記載の抗体をコードする核酸を含む哺乳動物細胞株と、（ｂ）凍結保護物質とを含むマスター細胞バンクが記載される。ある実施形態では、凍結保護物質はグリセロールを含む。ある実施形態では、マスター細胞バンクは、（ａ）（ｉ）配列番号１、３、４、５、または６のうちいずれか１つにより記載される重鎖アミノ酸配列および（ｉｉ）配列番号２、７、８、または９のうちいずれか１つにより記載される軽鎖アミノ酸配列を持つ抗体をコードする核酸を含むＣＨＯ細胞株と、（ｂ）凍結保護物質とを含む。ある実施形態では、凍結保護物質はグリセロールを含む。ある実施形態では、マスター細胞バンクは、液体窒素による凍結に耐えることができる適切なバイアルまたは容器に入れられる。
本明細書にはまた、本明細書に記載の抗体を作製する方法も記載される。かかる方法は、抗体をコードする核酸を含む細胞または細胞株を、抗体の発現および分泌を可能にするのに十分な条件下、細胞培養培地中でインキュベートし、さらに細胞培養培地から抗体を採取する工程を含む。採取する工程は、生細胞、細胞デブリ、非抗体タンパク質、またはポリペプチド、不要な塩、緩衝液、および培地成分を除去するための１つ以上の精製工程をさらに含んでもよい。ある実施形態では、追加の精製工程は、遠心分離、超遠心分離、タンパク質Ａ、タンパク質Ｇ、タンパク質Ａ／Ｇ、またはタンパク質Ｌ精製、および／あるいはイオン交換クロマトグラフィーを含む。
本明細書に記載の抗体
本明細書中のある態様では、抗ヒトＰＶＲ（抗ｈＰＶＲ）抗体またはその抗原結合断片が記載される。ある実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、ＰＶＲ－ＴＩＧＩＴ界面にてヒトＰＶＲに結合する。ある実施形態では、抗ｈＰＶＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６のうちのいずれか１つ以上と競合可能である。
ある実施形態では、ヒト化抗体またはその抗原結合断片のＥＣ５０は、約１０ｎＭ、９ｎＭ、８ｎＭ、７ｎｍ、６ｎＭ、５ｎＭ、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０５ｎＭ、または０．０１ｎＭ未満である。ある実施形態では、ＰＶＲに結合するためのｈＰＶＲ抗体のＥＣ５０は、約５ｎＭ～１ｎＭ、約５ｎＭ～約２ｎＭ、約４ｎＭ～約２ｎＭ、約４ｎＭ～約３ｎＭ、または約３ｎＭ～約２ｎＭである。
半数効果濃度（ＥＣ５０）は、特定された曝露時間後にベースラインと最大の中間で応答を誘導する抗体の濃度を指す。
いくつかの実施形態により、抗体は組換え抗体である。特定の実施形態により、抗体は、組換えヒト化モノクローナル抗体である。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される重鎖配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される軽鎖配列を含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ＮＢ１０８８（配列番号１および配列番号２）である。
本明細書中の一態様では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
本明細書中の別の態様では、重鎖と免疫グロブリン軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
ある実施形態では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
ある実施形態では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％、または９９％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
ある実施形態では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９８％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
ある実施形態では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９９％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも約９９％同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
ある実施形態では、本明細書には、重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片が記載され、重鎖は、配列番号１に記載のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２に記載のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含み、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、ヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する。
いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に記載の重鎖配列と、配列番号７に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に記載の重鎖配列と、配列番号８に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号１に記載の重鎖配列と、配列番号９に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３に記載の重鎖配列と、配列番号２に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３に記載の重鎖配列と、配列番号７に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３に記載の重鎖配列と、配列番号８に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号３に記載の重鎖配列と、配列番号９に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４に記載の重鎖配列と、配列番号２に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４に記載の重鎖配列と、配列番号７に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４に記載の重鎖配列と、配列番号８に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号４に記載の重鎖配列と、配列番号９に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５に記載の重鎖配列と、配列番号２に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５に記載の重鎖配列と、配列番号７に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５に記載の重鎖配列と、配列番号８に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号５に記載の重鎖配列と、配列番号９に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６に記載の重鎖配列と、配列番号２に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６に記載の重鎖配列と、配列番号７に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６に記載の重鎖配列と、配列番号８に記載の軽鎖配列とを含む。いくつかの実施形態により、抗体またはその抗原結合断片は、配列番号６に記載の重鎖配列と、配列番号９に記載の軽鎖配列とを含む。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、アミノ酸配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥ（Ｌ／Ｖ）ＫＫＰＧＡＳＶＫ（Ｉ／Ｖ）ＳＣＫＡＴＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥＷ（Ｉ／Ｖ）（Ｋ／Ｒ）ＱＡＰＧＱＧＬＥＷ（Ｉ／Ｍ）ＧＥＩＦＰＧＳＧＲＩＮＦＮＥＫＦＫＧＲ（Ａ／Ｖ）ＴＦＴＡＤＴＳＩ（Ｄ／Ｓ）Ｔ（Ｔ／Ａ）ＹＭ（Ｑ／Ｅ）ＬＳ（Ｓ／Ｒ）Ｌ（Ｔ／Ｒ）ＳＤＤ（Ｓ／Ｔ）ＡＶＹＹＣＡＲＴＫＩＹＧＮＳＦＤＹＷＧＱＧＴ（Ｔ／Ｌ）ＶＴＶＳＳ（配列番号４７）を含む重鎖と、アミノ酸配列ＤＩ（Ｍ／Ｑ）ＭＴＱＳＰＳ（Ｆ／Ｓ）ＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（Ｋ／Ｒ）ＡＳＱＤＶＧＴＡＶ（Ｖ／Ａ）ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫ（Ｌ／Ｓ）ＬＩＹＷＡＳＳＲＨＥＧＶＰ（Ｄ／Ｓ）ＲＦ（Ｔ／Ｓ）ＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳ ＬＱ（Ｓ／Ｐ）ＥＤＦＡ（Ｄ／Ｔ）ＹＦＣＱＱＹＳＲＹＰＬＴＦＧＱＧＴ ＫＬＥＩＫ（配列番号４８）を含む軽鎖領域とを含む。
いくつかの実施形態により、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＬであり、２０位はＩであり、３７位はＩであり、３８位はＫであり、４８位はＩであり、６８位はＡであり、７７位はＤであり、７９位はＴであり、８２位はＱであり、８５位はＳであり、８７位はＴであり、９１位はＳであり、または１１４位はＴであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＶであり、２０位はＩであり、３７位はＩであり、３８位はＫであり、４８位はＩであり、６８位はＡであり、７７位はＤであり、７９位はＴであり、８２位はＥであり、８５位はＲであり、８７位はＲであり、９１位はＴであり、または１１４位はＬであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＶであり、２０位はＶであり、３７位はＶであり、３８位はＲであり、４８位はＭであり、６８位はＶであり、７７位はＳであり、７９位はＡであり、８２位はＥであり、８５位はＲであり、８７位はＲであり、９１位はＴであり、または１１４位はＬであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＶであり、２０位はＶであり、３７位はＩであり、３８位はＫであり、４８位はＩであり、６８位はＶであり、７７位はＳであり、７９位はＴであり、８２位はＥであり、８５位はＲであり、８７位はＲであり、９１位はＴであり、または１１４位はＬであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＶであり、２０位はＶであり、３７位はＶであり、３８位はＲであり、４８位はＩであり、６８位はＶであり、７７位はＳであり、７９位はＴであり、８２位はＥであり、８５位はＲであり、８７位はＲであり、９１位はＴであり、または１１４位はＬであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、軽鎖は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、３位はＭであり、１０位はＦであり、２４位はＫであり、３４位はＶであり、４６位はＬであり、６０位はＤであり、６３位はＴであり、８０位はＳであり、または８５位はＤであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、軽鎖は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、３位はＱであり、１０位はＳであり、２４位はＫであり、３４位はＶであり、４６位はＬであり、６０位はＤであり、６３位はＳであり、８０位はＰであり、または８５位はＤであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、軽鎖は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、３位はＱであり、１０位はＳであり、２４位はＲであり、３４位はＶであり、４６位はＬであり、６０位はＳであり、６３位はＳであり、８０位はＰであり、または８５位はＴであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、軽鎖は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、３位はＱであり、１０位はＳであり、２４位はＲであり、３４位はＡであり、４６位はＬであり、６０位はＳであり、６３位はＳであり、８０位はＰであり、または８５位はＴであり、あるいはこれらの任意の組合せである。それぞれの可能性は、本発明の別個の実施形態を表す。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体またはその抗原結合断片は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域とを含み、重鎖は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、１１位はＶであり、２０位はＶであり、３７位はＶであり、３８位はＲであり、４８位はＩであり、６８位はＶであり、７７位はＳであり、７９位はＴであり、８２位はＥであり、８５位はＲであり、８７位はＲであり、９１位はＴであり、または１１４位はＬであり、あるいはこれらの任意の組合せであり、軽鎖は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含み、ここで、３位はＱであり、１０位はＳであり、２４位はＫであり、３４位はＶであり、４６位はＬであり、６０位はＤであり、６３位はＳであり、８０位はＰであり、または８５位はＤであり、あるいはこれらの任意の組合せである。
さらなる実施形態により、重鎖ＣＤＲ１配列は、ＧＹＴＦＳＮＹＷＩＥ（配列番号５８）である。
いくつかの実施形態により、抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２、ヒトＩｇＧ３、およびヒトＩｇＧ４からなる群から選択される。
いくつかの実施形態により、抗体のヒト定常領域は、ヒトＩｇＧ１およびヒトＩｇＧ４からなる群から選択される。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号４９に記載の重鎖配列、または少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＩｇＧ４抗体である。いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号５０に記載の重鎖配列、または少なくとも９０％の同一性を有する配列を含むＩｇＧ１である。
いくつかの実施形態により、ヒト化抗体は、配列番号４９に記載の軽鎖配列を含む。
治療方法
ある実施形態では、本明細書に開示される抗ｈＰＶＲ抗体は、癌または腫瘍の処置に有用である。処置とは、処置される疾病を改善または回復させることに努める方法を指す。癌に関して、処置として、腫瘍体積の減少、腫瘍体積の成長低下、無増悪生存期間の増加、または全体的な平均余命が挙げられるが、これらに限定されるものではない。ある実施形態では、処置は、処置される癌の寛解に影響を及ぼす。ある実施形態では、処置は、以前に処置された癌または腫瘍の再発あるいは進行を予防することを意図した、予防または維持用量としての使用を包含している。すべての個体が、施される処置に対して均等にまたは全く反応するわけではないが、それでもこれらの個体は処置されると見なされると、当業者は理解する。
ある実施形態では、本明細書に記載の抗ｈＰＶＲ抗体および抗原結合断片は、ＰＶＲ陽性癌用の薬剤の製造における使用のため、またはＰＶＲ陽性癌を処置する方法に使用するためのものである。
ある実施形態では、本明細書に記載の抗ｈＰＶＲ抗体または抗原結合断片は、単剤療法としてチェックポイント阻害剤による処置に対して難治性である癌または腫瘍を処置するためのものである。難治性癌とは、チェックポイント阻害剤単独での治療にもかかわらず進行性疾患を発症する癌／腫瘍を指す。ある実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤である。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）に特異的に結合する抗体または抗原結合断片であり、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、スパルタリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、またはそれらのＰＤ－１（ＣＤ２７９）結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合タンパク質（例えばＡＭＰ－２２４）である。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ１結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４３７６）、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、またはＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤ－Ｌ１（ＣＤ２７４）結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２（ＣＤ２７３）に特異的に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ２結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’‐ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）、（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリンヒドロクロリド、（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール、Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル、（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸、グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環式（１→１４）－チオエーテル、あるいはこれらの誘導体またはアナログなどの１つ以上の少分子阻害剤を含む。
ある実施形態では、抗ｈＰＶＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤と併用するためのものである。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－１（ＣＤ２７９）に特異的に結合する抗体または抗原結合断片であり、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、スパルタリズマブ、ティスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、またはそれらのＰＤ－１（ＣＤ２７９）結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２ Ｆｃ融合タンパク質（例えばＡＭＰ－２２４）である。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ－１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ－１結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－Ｌ－１（ＣＤ２７４）に特異的に結合する抗体または抗原結合断片は、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ４３７６）、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、またはＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤ－Ｌ－１（ＣＤ２７４）結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、ＰＤ－Ｌ２（ＣＤ２７３）に特異的に結合する抗体またはＰＤ－Ｌ２結合断片を含む。ある実施形態では、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２阻害剤は、Ｎ－｛２－［（｛２－メトキシ－６－［（２－メチル［１，１’‐ビフェニル］－３－イル）メトキシ］ピリジン－３－イル｝メチル）アミノ］エチル｝アセトアミド（ＢＭＳ２０２）、（２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）－５－メチルベンジル）－Ｄ－セリンヒドロクロリド、（２Ｒ，４Ｒ）－１－（５－クロロ－２－（（３－シアノベンジル）オキシ）－４－（（３－（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）－２－メチルベンジル）オキシ）ベンジル）－４－ヒドロキシピロリジン－２－カルボン酸、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニルインドール、３－（４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イル）－１－フェニル－１ｈ－インドール、Ｌ－α－グルタミン、Ｎ２，Ｎ６－ビス（Ｌ－セリル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－セリル－Ｌ－α－グルタミル－Ｌ－セリル－Ｌ－フェニルアラニル）－Ｌ－リシル－Ｌ－フェニルアラニル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－バリル－Ｌ－トレオニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－ロイシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－リシル－Ｌ－アラニル－Ｌ－グルタミニル－Ｌ－イソロイシル－Ｌ－リシル、（２Ｓ）－１－［［２，６－ジメトキシ－４－［（２－メチル［１，１’－ビフェニル］－３－イル）メトキシ］フェニル］メチル］－２－ピペリジンカルボン酸、グリシンアミド、Ｎ－（２－メルカプトアセチル）－Ｌ－フェニルアラニル－Ｎ－メチル－Ｌ－アラニル－Ｌ－アスパラギニル－Ｌ－プロリル－Ｌ－ヒスチジル－Ｌ－ロイシル－Ｎ－メチルグリシル－Ｌ－トリプトフィル－Ｌ－セリル－Ｌ－トリプトフィル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｎ－メチル－Ｌ－ノルロイシル－Ｌ－アルギニル－Ｌ－システイニル－、環式（１→１４）－チオエーテル、あるいはこれらの誘導体またはアナログなどの１つ以上の少分子阻害剤を含む。
ある実施形態では、抗ｈＰＶＲ抗体またはその抗原結合断片は、ＥＧＦＲ阻害剤またはＥＧＦＲ結合抗体と組み合わせて使用するためのものである。
ある実施形態では、抗ｈＰＶＲ抗体またはその抗原結合断片は、癌または腫瘍の処置に使用するためのものである。ある実施形態では、癌または腫瘍は、固形の癌または腫瘍である。ある実施形態では、癌または腫瘍は、血液の癌または腫瘍である。ある実施形態では、癌または腫瘍は、乳房、心臓、肺、小腸、結腸、脾臓、腎臓、膀胱、頭部、頸部、卵巣、前立腺、脳、膵臓、皮膚、骨、骨髄、血液、胸腺、子宮、精巣、および／または肝臓の腫瘍である。ある実施形態では、本発明の抗体により処置可能な腫瘍は、腺腫、腺癌、血管肉腫、星細胞腫、上皮癌腫、胚腫、神経膠芽腫、神経膠腫、血管内皮腫、血管肉腫、血腫、肝芽腫、白血病、リンパ腫、髄芽腫、黒色腫、神経芽腫、骨肉腫、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、および／または奇形腫を含む。ある実施形態では、腫瘍／癌は、末端黒子型黒色腫、日光角化症、腺癌、腺様嚢胞癌、腺腫、腺肉腫、腺扁平上皮癌、星細胞腫、バルトリン腺癌、基底細胞癌、気管支腺癌、毛細血管カルチノイド、癌腫、癌肉腫、胆管癌、軟骨肉腫、嚢胞腺腫、内胚葉性洞腫瘍、子宮内膜増殖症、子宮内膜間質性肉腫、子宮内膜腺癌、上衣肉腫、ユーイング肉腫（Ｓｗｉｎｇ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、巣状結節性過形成、胃腺腫、胚線腫瘍、膠芽腫、グルカゴノーマ、血管芽球腫、血管内皮腫、血管腫、肝腺腫、肝細胞腺腫症、肝細胞癌、インスリナイト、上皮内新生物、上皮内扁平細胞新生物、浸潤性扁平細胞癌、大細胞癌、脂肪肉腫、肺癌腫、リンパ芽球性白血病、リンパ球性白血病、平滑筋肉腫、黒色腫、悪性黒色腫、悪性中皮腫、神経鞘腫、髄芽腫、髄上皮腫、中皮腫、粘表皮癌、骨髄性白血病、神経芽腫、神経上皮性腺癌、結節性黒色腫、骨肉腫、卵巣癌、乳頭状漿液性腺癌、下垂体腫瘍、形質細胞腫、偽肉腫、前立腺癌、肺芽腫、腎細胞癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、肉腫、漿液性癌、扁平上皮癌、小細胞癌、軟部組織癌、ソマトスタチン分泌腫瘍、扁平上皮癌、扁平細胞癌、未分化癌、ぶどう膜黒色腫、疣贅癌、膣／外陰癌、ＶＩＰｐｏｍａ、およびウィルムス腫瘍からなる群から選択される。ある実施形態では、本発明の１つ以上の抗体で治療される腫瘍／癌は、脳腫瘍、頭頸部癌、大腸癌、急性骨髄性白血病、前Ｂ細胞性急性リンパ芽球性白血病、膀胱癌、星細胞腫、好ましくはグレードＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの星細胞腫、神経膠芽腫、多形神経膠芽腫、小細胞癌、および非小細胞癌、好ましくは非小細胞肺癌、肺腺癌、転移性黒色腫、アンドロゲン非依存性転移性前立腺癌、アンドロゲン依存性転移性前立腺癌、前立腺腺癌、ならびに乳癌、好ましくは乳管癌および／または乳癌腫を含む。ある実施形態では、本開示の抗体で処置される癌は、神経膠芽腫を含む。ある実施形態では、本開示の１つ以上の抗体で処置される癌は、膵臓癌を含む。ある実施形態では、本開示の１つ以上の抗体で処置される癌は、卵巣癌を含む。ある実施形態では、本開示の１つ以上の抗体で処置される癌は、肺癌を含む。ある実施形態では、本開示の１つ以上の抗体で処置される癌は、前立腺癌を含む。ある実施形態では、本開示の１つ以上の抗体で処置される癌は、結腸癌を含む。ある実施形態では、処置される癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、または肺癌を含む。ある実施形態では、癌は、他の処置に対して難治性である。ある実施形態では、処置される癌は、再発性である。ある実施形態では、癌は、再発性／難治性の神経膠芽腫、膵臓癌、卵巣癌、結腸癌、前立腺癌、または肺癌である。
本発明による分子の治療上有効量は、特に投与スケジュール、投与される分子の単位用量、分子が他の治療剤と併用して投与されるかどうか、患者の免疫状態と健康状態、投与される分子の治療活性、血液循環におけるその持続性、および処置を行う医師の判断に依存することが、当業者に明白である。
ある実施形態では、抗体は、例えば皮下、腹腔内、静脈内、筋肉内、腫瘍内、または脳内など、抗体含有医薬組成物の投与に適したあらゆる経路により、必要とする対象に投与することができる。ある実施形態では、抗体は静脈内投与される。ある実施形態では、抗体は皮下投与される。ある実施形態では、抗体は腫瘍内投与される。ある実施形態では、抗体は、適切な投与スケジュール、例えば、毎週、週２回、毎月、月２回、２週に１回、３週に１回、または月１回で投与される。ある実施形態では、抗体は、３週に１回投与される。抗体は、あらゆる治療上有効量で投与可能である。ある実施形態では、治療上許容可能な量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇである。ある実施形態では、治療上許容可能な量は、約１ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇである。ある実施形態では、治療上許容可能な量は、約５ｍｇ／ｋｇ～約３０ｍｇ／ｋｇである。治療上有効な量は、処置対象の疾患または苦痛に関連する１つ以上の症状を緩和するのに十分な量を含む。
本発明の抗体は、癌を処置するためにＣＡＲを含む操作されたリンパ球を利用するＣＡＲ系の養子免疫療法に使用可能である。ＣＡＲ－Ｔシステムが、非限定的な例として本明細書に記載される。
Ｔ細胞療法は、癌または腫瘍の処置においてキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を利用する（すなわちＣＡＲ－Ｔ細胞療法）。ＣＡＲ－Ｔ細胞療法は、腫瘍細胞に作用するとともに腫瘍細胞のアポトーシスを引き起こす遺伝子操作Ｔ細胞を癌患者に投与することを含む細胞免疫療法である。遺伝子操作されたＴ細胞は、ＣＤ３ζ鎖配列の断片などの細胞内ドメインと組み合わされた抗体（ＶＬおよびＶＨ）の可変領域を有するＣＡＲを、遺伝子導入技術を用いてＴ細胞上に発現させることにより調製される。ＣＡＲは、腫瘍抗原に特異的なモノクローナル抗体の可変領域の軽鎖と重鎖が互いに連結し、次いでＣ末端側でＴ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖に連結する、キメラタンパク質の総称である。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζドメインからなる群から選択される少なくとも１つのタンパク質ドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ２８ＴＭドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ３ζシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、４１ＢＢドメインを含む。特定の実施形態により、ＣＡＲは、ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３ζドメインを含む。
いくつかの実施形態により、本発明による重鎖可変領域（ＶＨ）および軽鎖可変領域（ＶＬ）を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）が、提供される。ある実施形態により、その表面上にＣＡＲが発現される遺伝子修飾リンパ球が、提供される。いくつかの特定の実施形態により、その表面上にＣＡＲが発現される遺伝子修飾Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）が、提供される。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組合せを含み、重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９６％、または９８％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９６％、または９８％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域と、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域とを含む。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、ヒト化抗体重鎖可変領域と軽鎖可変領域の組合せを含み、この組合せは、
ｉ．配列番号１に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉ．配列番号３に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｉｉ．配列番号４に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、
ｉｖ．配列番号５に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列、ならびに
ｖ．配列番号６に記載の重鎖可変領域配列および配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列
からなる群から選択される。
いくつかの実施形態により、ＣＡＲは、配列番号１、３、４、５、および６からなる群から選択される重鎖可変領域配列と、配列番号９に記載の軽鎖可変領域配列と、膜貫通ドメインと、細胞内Ｔ細胞シグナル伝達ドメインとを含む。
いくつかの実施形態により、配列番号５６または配列番号５７に記載されるｓｃＦｖ配列、あるいはこれら配列のいずれかに対して少なくとも９０％、９２％、９４％、９６％、または９８％の配列類似性を有するそれらのアナログを含むＣＡＲが、提供される。ある態様により、本発明は、本明細書に記載のＣＡＲを含む細胞を提供する。いくつかの実施形態により、細胞は、本発明のＣＡＲを発現するか、または発現することができる。いくつかの実施形態により、細胞はリンパ球である。いくつかの実施形態により、細胞は、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞から選択される。
いくつかの実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたリンパ球が、提供される。いくつかの実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたＴ細胞が、提供される。
さらなる実施形態により、本明細書に記載のＣＡＲを発現するよう操作されたＮＫ細胞が、提供される。
本発明は、癌を診断および予後診断するための方法をさらに開示する。
一態様により、本発明は、対象の癌または感染症の診断および／または予後診断の方法を提供し、該方法は、本明細書に記載の少なくとも１つの抗体を用いて対象の生物学的試料中のＰＶＲの発現レベルを求める工程を含む。
薬学的に許容可能な賦形剤、担体、および希釈剤
ある実施形態では、本開示の抗ＰＶＲ抗体は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体、および希釈剤を含む医薬組成物に含まれる。担体は、製剤の他の成分と適合可能であり、その受容者に対して過度に有害ではないという意味で、薬学的に許容可能である必要がある。活性薬剤は、上述のように所望の薬理学的効果を達成するのに有効な量で、かつ所望の曝露を達成するのに適切な量で提供される。
ある実施形態では、本開示の抗体は、滅菌溶液中に懸濁して投与される。ある実施形態では、この溶液は、約０．９％ＮａＣｌを含む。ある実施形態では、溶液は、約５．０％デキストロースを含む。ある実施形態では、溶液は、緩衝液、例えばアセテート、シトラート、ヒスチジン、スクシネート、ホスフェート、ビカーボネート、およびヒドロキシメチルアミノメタン（Ｔｒｉｓ）、界面活性剤、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）、およびポロキサマー１８８、ポリオール／ジサッカライド／ポリサッカライド、例えばグルコース、デキストロース、マンノース、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、およびデキストラン４０、アミノ酸、例えばグリシンまたはアルギニン、抗酸化剤、例えばアスコルビン酸、メチオニン、あるいはキレート化剤、例えばＥＤＴＡまたはＥＧＴＡのうち１つ以上をさらに含む。
一般的に、抗体の抗原結合部分を含む、またはペプチド模倣物を含む別のポリペプチドを含む、本発明の抗体、ならびにその断片およびコンジュゲートは、治療用の滅菌生理食塩水溶液中で懸濁される。あるいは、医薬組成物は、活性成分（抗体の抗原結合部分を含む分子）の放出を制御する、または患者の系においてその存在を延長するために製剤化されてもよい。多数の適切な薬物送達システムが知られており、例えば、埋込み型薬物放出システム、ヒドロゲル、ヒドロキシメチルセルロース、マイクロカプセル，リポソーム、マイクロエマルジョン、ミクロスフェアなどが挙げられる。放出制御製剤は、本発明による分子を複合化または吸着させるためにポリマーを使用することにより調製可能である。例えば、生体適合性ポリマーは、ポリ（エチレン－ｃｏ－ビニルアセテート）のマトリクス、ならびにステアリン酸二量体およびセバル酸のポリ酸無水物コポリマーのマトリクスを含む。本発明による分子、すなわち抗体または抗体断片が、かかるマトリクスから放出される速度は、分子の分子量、マトリクス内の分子の量、および分散された粒子の大きさに左右される。
ある実施形態では、本開示の抗体は、凍結乾燥されて輸送／保管され、投与前に再構築される。ある実施形態では、凍結乾燥抗体の製剤は、マンニトール、ソルビトール、スクロース、トレハロース、デキストラン４０、またはこれらの組合せなどの増量剤を含む。凍結乾燥製剤は、ガラス、または他の適切な非反応性材料で出来たバイアルに入れることができる。抗体は、製剤化されると、再構成の有無にかかわらず、特定のｐＨ、一般的に７．０未満で緩衝化することができる。ある実施形態では、ｐＨは４．５～６．５、４．５～６．０、４．５～５．５、４．５～５．０、または５．０～６．０であってよい。
ある実施形態では、本明細書に記載のＣＡＲを担持するリンパ球は、使用前に輸送／保管される。細胞は通常、すぐに使用されないときは凍結保存される。ＣＡＲを担持する細胞に適した凍結保存方法および保管媒体は、当該技術分野で公知である（例えば、Ｗａｎｇ，ｅｔ ａｌ．２０１９ Ｍａｙ；２１（５）：５６６－５７８を参照）。
また本明細書には、適切な容器にある本明細書に記載の抗体のうち１つ以上と、使用説明書、希釈剤、賦形剤、担体、および投与デバイスから選択される１つ以上の追加の構成要素とを含むキットが記載される。いくつかの実施形態では、キットは、ヒトＰＶＲの発現を測定するための手段を含む。
ある実施形態では、本明細書には、癌治療薬（ｃａｎｃｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）を調製する方法が記載され、該方法は、１つ以上の薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤と、本開示の抗体とを混合する工程を含む。ある実施形態では、本明細書には、保管または輸送のために癌治療薬を調製する方法が記載され、該方法は、本開示の１つ以上の抗体を凍結乾燥する工程を含む。
以下の例示的な実施例は、本明細書に記載の組成物および方法の実施形態を表すものであり、あらゆる方法で限定されることを意図したものではない。
実施例１ － Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体によるＰＶＲ結合の親和性の改善
ＷＯ２０１７／１４９５３８に開示されるキメラ抗ＰＶＲ抗体５Ｂ９の可変領域は、軽鎖のＣＤＲ２中に脱アミド化配列（アスパラギンーグリシン）を担持する（ＷＡＳＳＲＨＮＧ、配列番号１７）。残基アスパラギンＮ５６に点変異を導入することにより、７個のキメラ変異体を生成した。Ｎ５６置換変異体の結合親和性を評価するために、野生型（ＷＴ）および置換変異体ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）モノクローナル抗体を、タンパク質Ａ捕捉チップ上に固定した。ヒスチジンタグ（ＰＶＲ－ＨＩＳ、Ｓｉｎｏ Ｃａｔ．ｎｏ．１０１０９－Ｈ０８Ｈ）にコンジュゲートさせた分析物ＰＶＲを対象に結合の試験を行った。希釈範囲：５０ｎＭ～３．１２５ｎＭの５点２倍希釈。使用条件：計測器：Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアＶ２．０．１を実行するＢｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（シリアル番号１９０９９１３）。泳動用緩衝液：ＨＢＳ－Ｐ＋、３００ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ。流速：３０μｌ／ｍｉｎ。会合：３５０ｓ、解離：８００ｓ。再生：１０ｍＭグリシンｐＨ１．５。解析：１：１の結合。置換のＫＤ Ｋを親Ｎ５６変異体（ＶＨ０ＶＫ０）のＫＤに分割することにより、各置換の相対的ＫＤを確立させた。親和性の有意な（２５％超）改善は、Ｎ５６Ｅ（Ａｓｐ）およびＮ５６Ｄ（Ｇｌｕ）変異体で顕著であった（図１Ａ）。親５Ｂ９抗体を用いた競合アッセイにおいてフローサイトメトリーにより、ＨＥＫ２９３ ＥＢＮＡ細胞上で発現されたヒトＰＶＲへのキメラ変異体の結合を評価した（ＷＴ、図１Ｂ）。
実施例２ － Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体によるサルＰＶＲ結合に対する交差反応性の改善
ヒト（タンパク質ｉｄ：Ｑ９２６９２）およびミドリザル（アフリカミドリザル、タンパク質ｉｄ：ＵｎｉＰｒｏｔｋＢ－Ｐ３２５０６）の細胞結合ＰＶＲに対するＮ５６置換変異抗体の結合を調べた。図２Ａは、ヒトＰＶＲを発現するＮＣＩ－Ｈ１９７５細胞に対する、飽和濃度（１０μｇ／ｍｌ）で添加された全変異体の相対的結合を表す。図２Ｂは、ミドリザルＰＶＲを発現するＶｅｒｏ細胞に対する、飽和濃度（１０μｇ／ｍｌ）で添加された全変異体の相対的結合を表す。検出において、ヤギ抗ヒト６４７抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ １０９－６０６－０８８）を１：２５０希釈で使用した。Ａｂｓの細胞結合をＦＡＣＳにより解析した。各変異体のＭＦＩを親抗体（Ｋ０）のＭＦＩで割ることにより、倍率変化を算出した。交差反応性の顕著な（２５％超）増加を、Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｄ変異体に認めた。
実施例３ － Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体によるＮＫ活性化の改善
健康なドナー由来のＮＫ細胞を、選択されたＮ５ ６置換変異体、および標的乳癌細胞株（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）の存在下、２：１のＥ：Ｔ比、３７℃で２時間インキュベートした。ＣＤ１０７ａの表面発現誘導によりＮＫ細胞活性化を測定し、対照ＩｇＧの倍率変化を各変異体に対して算出した（Ｙ軸）。すべてのモノクローナル抗体は、６００ｐＭ（０．０９ｕｇ／ｍｌ）で使用した（両側スチューデントｔ検定により＊ｐ＜０．０４、＊＊ｐ＜０．０１）。図３に示すように、Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体では、ＣＤ１０７ａ発現の上昇により証明されるように、Ｋ０と比較してＮＫ活性化の改善を認めた。
実施例４ － Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔ変異体によるＣＤ８Ｔ細胞増殖の改善
ヒトＰＢＭＣをＣＦＳＥ（Ｃ３４５５４ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｃｈｅｒ）で蛍光標識し、２．５ｕｌ／ｍｌのＰＨＡ－Ｌ（Ｒｏｃｈｅ）の存在下にあるＡ５４９標的乳癌細胞、および４ｕｇ／ｍｌで示された抗体変異体によりインキュベートした。９６時間の培養後、免疫細胞を回収し、抗ヒトＣＤ８により染色し、ＦＡＣＳにより解析した。ＣＤ８＋Ｔ細胞の細胞増殖を、ＣＦＳＥシグナル強度により評価した。ＩｇＧで処置した細胞のＣＦＳＥレベルを１とした。結果は、この対照に比べて増殖が増大した倍数として提示する。増殖の増加の結果、ＣＦＳＥシグナルが減少したため、Ｙ軸は、この比の逆数値を表す。実験は４通り行った。単一ＰＢＭＣドナーについての結果を示す。このデータより、変異体Ｎ５６ＥおよびＮ５６Ｔは、親抗体と比較して、腫瘍細胞の存在下でのＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に対し顕著に強力な効果があることが認められる（図４、両側スチューデントｔ検定により＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）。
実施例５ － 生産性が改善されたヒト化５Ｂ９変異体の識別
Ｎ５６Ｅ抗体変異体は、競合アッセイにおいて最良のパフォーマンスを示し、ヒト化におけるリード変異体として選択された。構造解析に基づき、５Ｂ９ヒト化変異体を作製するために使用された大規模な一組の予備的配列セグメントを識別した。これらセグメントを選択し、ヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子へのペプチド結合のｉｎ ｓｉｌｉｃｏ解析においてｉＴｏｐｅ（商標）技術（Ｐｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ ２００８）、および既知の抗体配列関連のＴ細胞エピトープ（Ｂｒｙｓｏｎ ｅｔ ａｌ ２０１０）のＴＣＥＴ（商標）を使用して解析した。配列セグメントのうち、ヒトＭＨＣクラスＩＩに対する顕著な非ヒト生殖系列バインダとして識別されたもの、またはＴＣＥＤ（商標）に対して顕著なヒットを記録したものは、廃棄した。この結果として一組のセグメントが減少し、上記のように、これらの組合せをさらに解析して、セグメント間の接合部は起こり得るＴ細胞エピトープを含有しないことを確認した。選択された配列セグメントは、顕著なＴ細胞エピトープを欠いた完全なＶ領域配列にアセンブルした。その後、５本の重鎖（ＶＨ１～ＶＨ５）および４本の軽鎖（Ｎ５６Ｅ置換を含有）（Ｖκ１～Ｖκ４）の配列を選択した。
Figure 2022553129000001
Figure 2022553129000002
Figure 2022553129000003
ＳＰＲによりすべての変異体の結合を試験し（図５Ａ）、親抗体由来の２倍の親和性を持つ変異体を、フローサイトメトリーにより細胞表面ＰＶＲ結合について試験した（図５Ｂ）。Ｖｋ４を含有する変異体を除くすべての変異体において、Ｎ５６Ｅ置換を担持する親マウス／ヒトキメラ分子（ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）Ｎ５６Ｅ＿ＶＨ０／Ｖκ０）と比較して非常に同様の結合を認めた。ヒト化により、Ｎ２０ＦＲ１位の軽鎖にてＮ結合グリコシル化が除去されたことに留意されたい。
リード候補を選択するために、ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞における一過的な発現後の発現レベル、およびヒト生殖系列配列との類似性を検討した（図６）。図６Ａでは、一過的なトランスフェクション後の全変異体の力価を要約する。変異体ＶＨ４／Ｖｋ２は、最高の発現力価を呈し、ヒト生殖系列遺伝子との配列同一性を高い割合で有していた（図６Ｂ）。最後に、ＮＢ１０８８と同一の変異体と比較してＶＨ４／Ｖｋ２変異体（ＮＢ１０８８）の生産性評価を行ったが、５Ｂ９（ＷＡＳＳＲＨＮＧ）の元の脱アミド化コンピテントＬＣ ＣＤＲ２をＮＢ０９４１と称した。ＮＢ０９４１およびＮＢ１０８８の生物物理学的特性を判定した。図７Ａと７Ｂに示すように、４０℃での高ｐＨストレスおよびインキュベーションにより、おそらくは脱アミド化に起因して、毛管等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）の変化、特に酸種の割合の増加が明らかとなった。これらの変化は、ＮＢ１０８８よりＮＢ０９４１の方が顕著であった。このため、最適化された免疫原性、発現、および結合プロファイルのほか、所望の生物物理学的特性を持つＮＢ１０８８を、機能解析におけるリードヒト化変異体として選択した。
変異体の一部で観察された親和性の減少は、正常組織が最小レベルでＰＶＲを発現するという事実を考慮すると、ＣＡＲドライバを設計する上で特に有利である。結果（図１６）が示すところでは、ＰＶＲは様々な腫瘍において過剰発現され、ＰＶＲにより駆動されるＣＡＲ－Ｔによってこれら腫瘍の効率的な標的化が可能となった。起こり得る安全性の懸念は、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．（Ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１５；Ｖｏｌｕｍｅ７５，Ｉｓｓｕｅ１７）に記載されるように親和性を「下方調整した」抗ＰＶＲ変異体により容易に対処可能である。
実施例６ － ＮＢ１０８８は、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６へのＰＶＲの結合を阻害する
ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６がＰＶＲに結合するのを遮断する能力についてＮＢ１０８８を試験した。ヒトＰＶＲを安定して発現する解離ＣＨＯ細胞（チャイニーズハムスター卵巣）を、氷上で２０分間、示された濃度でＮＢ１０８８でインキュベートし、続いて、ビオチン化組換えＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、またはＣＤ２２６－Ｆｃを、それぞれ氷上でさらに１２０分間、１０ｕｇ／ｍｌで添加した。洗浄後、表面結合ＮＢ１０８８は抗ヒトＡｌｅｘａ－４８８コンジュゲート二次抗体により検出し、ビオチン化タンパク質はＡｌｅｘａ６４７コンジュゲートストレプトアビジンにより検出して、フローサイトメトリーにより解析した。図８Ａは、ＮＢ１０８８は約３．３ナノモルのＥＣ５０をもってＰＶＲに結合することを示す。ＰＶＲ結合においてＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、またはＣＤ２２６と競合するためのＮＢ１０８８のＩＣ５０は、図８Ｂ～８Ｄに示すようにそれぞれ１．１、１．１、および１．９である。
実施例７ － ＮＢ１０８８は細胞傷害性ＴおよびＮＫ細胞を刺激する
ＮＢ１０８８がｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞およびＮＫ細胞の活性を刺激する能力を判定した。抗原特異的ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）アッセイを使用して、３０，０００のＨＰＶ＋ヒト頚部類表皮癌細胞株（ＣａＳｋｉ細胞）、および３０，０００のＨＰＶ特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を、対照ＩｇＧまたはＮＢ１０８８とともに１０ｕｇ／ｍｌで一晩共培養させた。上清へのインターフェロンγの放出を、ヒトインターフェロンγ特異的ＭＳＤシステムを用いて検出した。図９Ａに示すように、ＮＢ１０８８は、ＨＰＶ＋ＣａＳｋｉ細胞でインキュベートしたときに、ヒトＨＰＶ特異的ＣＤ８＋（細胞傷害性）Ｔ細胞からのインターフェロンγ放出を増加させた。同種系におけるＣＤ８Ｔ細胞活性を試験するために、ＰＢＭＣは、フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ）およびインターロイキン２（ＩＬ２）で事前に３日間活性化させ、ＰＨＡ／ＩＬ２の不在下で一晩静置させてから、磁気による陰性単離手順を使用してＣＤ８Ｔ細胞を単離した。１０，０００個のＡ５４９腫瘍細胞および１００，０００個の健常ドナーＣＤ８＋Ｔ細胞を、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ２および１ｕｇ／ｍｌの抗ＣＤ２８抗体の存在下で一晩共培養させた。図９Ｂに示すように、ＮＢ１０８８は、ＣＤ８＋Ｔ細胞からのインターフェロンγ放出を、抗ＰＤ－１（ペンブロリズマブ）よりも大きく増加させ、この放出は、ＮＢ１０８８と抗ＰＤ－１抗体を組み合わせるとさらに増加した。
抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）に対するＮＢ１０８８の効果も判定した。健康なドナーのＮＫ細胞をＰＢＭＣから単離し、磁気による陰性単離手順を使用して一晩静置させた。１０，０００個のＰＶＲ＋およびＥＧＦＲ＋Ａ５４９腫瘍細胞、ならびに５０，０００個のＮＫ細胞を、対照ＩｇＧ、対照ＩｇＧと抗ＥＧＦＲ抗体セツキシマブ（５μｇ／ｍｌ）、またはセツキシマブとＮＢ１０８８のいずれかでインキュベートした。抗体依存性細胞傷害性またはインターフェロンγ放出を媒介するＮＫ細胞の活性は、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏｗを用いて、ＮＫ細胞の共培養および除去後の付着Ａ５４９の生存率を解析するか、または上述のように上清のＭＳＤ解析を行うことにより判定した。図１０Ａと図１０Ｂに示すように、ＮＢ１０８８はセツキシマブでインキュベートすると、Ａ５４９細胞のＮＫ細胞媒介性死滅のほか、インターフェロンγ放出を増加させることが可能であった。
実施例８ － ＮＢ１０８８は、ＣＤ８ＴおよびＮＫ細胞上でのＣＤ２２６の発現および活性を回復させる
ＮＢ１０８８がＣＤ２２６の機能に影響を及ぼす能力を判定した。ＣＤ２２６（ＤＮＡＭ－１）は、ＮＫ細胞およびＴ細胞により発現される細胞表面糖タンパク質受容体であり、ＰＶＲのリガンドとして機能しＣＤ８＋ＴおよびＮＫ細胞による腫瘍死滅を助ける。その機能において、ＣＤ２２６はＴＩＧＩＴおよびＣＤ９６とは反対であり、これらはＴ細胞およびＮＫ細胞上で発現される阻害分子である。そのため、ＮＢ１０８８に起因したＣＤ２２６機能の増加より、ＮＢ１０８８はＴ細胞およびＮＫ細胞の活性を増強させ、広範な抗腫瘍活性を有することが認められる。ＣＤ２２６の発現および機能に対するＮＢ１０８８の影響を、上記のように抗原特異的および同種異系の共培養系を対象に試験した。図１１Ａと図１１Ｂに示すように、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞とＰＶＲ＋標的細胞との共培養により、ＣＤ８ Ｔ細胞およびＮＫ細胞上でのＣＤ２２６表面発現に大きな低下が生じた。ＮＢ１０８８は、共培養系に関係なくＣＤ８ Ｔ細胞またはＮＫ細胞上でのＣＤ２２６の細胞表面発現を回復させたが（図１１Ａと１１Ｂ）、抗ＴＩＧＩＴは回復しなかった。ＮＢ１０８８処置後のＴ細胞およびＮＫ細胞上でのＣＤ２２６発現の増加の機能的結果を、上記の抗原特異的および同種異系の共培養系に僅かな修正を加えたものを用いて評価した（図１２Ａと１２Ｂ）。ＣＤ２２６発現の増加は、対照ＩｇＧまたは抗ＴＩＧＩＴ処置と比較して顕著に高いレベルの、ＮＢ１０８８処置後のインターフェロンγ放出と相関していた（図１２Ａと１２Ｂ）。ＮＢ１０８８処置を行った優れたＴおよびＮＫ細胞活性は、少なくとも部分的にＣＤ２２６活性を介して媒介された。抗ＣＤ２２６（ＤＸ１１、２０ｕｇ／ｍｌ）は、同種刺激および抗原刺激を行ったＣＤ８ Ｔ細胞（図１２Ａ）ならびにＡ５４９共培養後のＮＫ細胞（図１２Ｂ）の両方により、ＮＢ１０８８依存性インターフェロンγ放出を抗ＴＩＧＩＴで観察したレベルにまで低下させた。これらのデータが実証するところでは、ＮＢ１０８８は、ＣＤ２２６の発現および／または機能を増加させることにより、ＴＩＧＩＴ遮断よりもＴ細胞およびＮＫ細胞の活性を改善させる。
実施例９ － ヒト化マウス腫瘍異種移植モデルにおけるＮＢ１０８８単独療法の有効性
ＮＢ１０８８がヒト化マウスモデルの腫瘍Ａ５４９（肺腺癌）またはＨＰＡＦ（膵臓）のいずれかを死滅させる能力を判定した。簡単に説明すると、５×１０６の腫瘍細胞（Ａ５４９またはＨＰＡＦ）を、マトリゲル中１：１の比で活性化ヒト末梢血単核細胞と混合させ、免疫不全ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウス（１条件につき動物１２匹）の脇腹に皮下移植した。図１３Ａと１３Ｂに示すように、ＮＢ１０８８は、抗ＰＤ－１抗体ペンブロリズマブと同様、少なくとも腫瘍体積を減少させることができた。ＮＢ１０８８はさらに、Ａ５４９／ＰＢＭＣモデルの腫瘍体積を減少させることができたが（図１３Ｃ）、Ａ５４９細胞単独では減少できなかった（図１３Ｄ）。Ａ５４９／ＰＢＭＣモデルでは、腫瘍体積の減少は、ＮＢ１０８８で処置した腫瘍から単離されたＣＤ８Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現の増加と相関していた（図１３Ｅ）。ｅｘ ｖｉｖｏでのＣＤ８ Ｔ細胞エフェクタ機能に対するＮＢ１０８８の効果も評価した（図１４Ａと１４Ｂ）。腫瘍から消化された単細胞懸濁液を、ブレフェルジンＡおよび抗ＣＤ１０７ａの存在下で５時間、３７℃で抗ＣＤ２８／抗ＣＤ３により刺激した。刺激後、細胞を染色し、標準の表面／細胞内染色法によるフローサイトメトリーを用いてＣＤ８＋Ｔ細胞によるインターフェロンγの産生を検出した。図１４Ａと図１４Ｂに示すように、ＮＢ１０８８は、全体的なインターフェロンγ陽性（図１４Ａ）および多機能性インターフェロンγ／ＣＤ１０７ａ二重陽性（図１４Ｂ）の腫瘍に由来するＣＤ８ Ｔ細胞の頻度を増加させた。さらに、ＮＢ１０８８で処置した腫瘍におけるインターフェロンγ陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞の頻度の増加は、ＣＤ２２６陽性ＣＤ８＋Ｔ細胞のみから導かれるものであり（図１４Ｃと１４Ｄ）、ＮＢ１０８８の抗腫瘍活性に対するＣＤ２２６機能のｉｎ ｖｉｖｏでの重要な寄与が示唆される。
実施例１０ － カニクイザルのＣＤ４ Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現におけるＮＢ１０８８の薬物動態および薬力学的変化
カニクイザル（１用量群につきメス２匹）を対象に、単回または４×１週間のＩＶボーラス注射を２、５０、または２００ｍｇ／ｋｇの用量で行った後、ＮＢ１０８８の薬物動態特性を測定した。さらに、循環末梢ＣＤ４ Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現の変化を評価した。図１５は、時間（時）および用量の関数としてのＮＢ１０８８の血漿濃度（ｕｇ／ｍｌ）を示す。カニクイザルＰＢＭＣアッセイを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ効力アッセイに基づき、ＩＣ９０および１０×ＩＣ９０を算出した。ＮＢ１０８８は典型的なＰＫプロファイルを示し、２００ｍｇ／ｋｇの用量での反復投与後の試験期間中、１０×ＩＣ９０を超える濃度に達した。図１５Ｂは、特異的抗体を用いたフローサイトメトリーにより測定したときの、投与前に正規化された循環ＣＤ４ Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現レベルを示す。ＮＢ１０８８は、５０ｍｇ／ｋｇ投与群および２００ｍｇ／ｋｇ反復投与群においてＣＤ２２６表面発現レベルを最大１．５倍増加させ、２００ｍｇ／ｋｇ反復投与群では依然として上昇し続けた。これらのデータが示すところでは、ＮＢ１０８８は、カニクイザルのＣＤ４ Ｔ細胞上でのＣＤ２２６発現に関与し、これを調節することができる。
実施例１１ － 異なる種類の腫瘍間でのヒトＰＶＲの発現
異なる起源のヒト癌におけるＰＶＲの発現レベルを評価した。市販のウサギモノクローナル抗体クローンＤ３Ｇ７Ｈおよび癌組織マイクロアレイを用いた標準の免疫組織化学手順により、ＰＶＲ発現を検出した。染色をデジタル化し、強度を定量化して、適応症内および適応症間のＨスコアを算出した。図１６は、様々な頻度で解析された大半の適応症におけるＰＶＲの発現レベルの上昇を示す。ＰＶＲの発現上昇は、肝臓癌、結腸癌、副腎癌、子宮癌、精巣癌、扁平上皮肺癌、胃癌、食道癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、胆管癌、皮膚癌、ＨＮＳＣＣ癌、乳癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および黒色腫に認めた。これらのデータは、ヒト癌の複数の適応症における腫瘍進行にＰＶＲが寄与することを示唆している。
実施例１２ － ヒト化抗体の設計
重鎖ＶＨ４および軽鎖ＶＫ２それぞれを有する変異体のうち１つに基づき、ヒト化ＩｇＧ抗体を設計した。例示されたＶＫ２配列は配列番号４９に記載する。例示されたｈＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）のＶＨ４配列は配列番号５０に、ｈＩｇＧ１の配列は配列番号５１に記載する。さらに、ＣＨＯ細胞にアミノ酸配列を発現させるように最適化された例示的なヌクレオチド配列を、次のように設計した。ＶＫ２では、ヌクレオチド配列は配列番号５２または配列番号５３に記載する。ＩｇＧ４のＶＨ４では、ヌクレオチド配列は配列番号５４または配列番号５５に記載する。
実施例１２ － ヒト化抗ＰＶＲ抗体変異体に由来するｓｃＦｖを発現するＣＡＲ－Ｔ細胞は、腫瘍細胞の存在下で特異的に活性化される
変異体Ｈ４Ｋ２－ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＨ３Ｋ４－ＮＴＸ－１０３４Ｃに基づき、ＣＡＲ－Ｔ構築物を設計した。ＳｃＦｖ分子のアミノ酸配列は、それぞれ配列番号５６と５７に記載する。親ジャーカット細胞、または抗ｈＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔを過剰発現するジャーカット細胞（４０Ｋ／ウェル）を、Ａ５４９またはＭＤＡ－２３１乳癌細胞（ＰＶＲ陽性）とともに、１：１のＥ：Ｔで２４時間インキュベートした。図１８に示すように、両ＣＡＲ－Ｔドライバは、示された標的の存在下で、数百ｐｇのＩＬ２の分泌を生じさせたが、親ジャーカット細胞ではＩＬ２の分泌を検出できなかった。Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ｈＩＬ２（ｃａｔ４３１８０４）を用いてＩＬ２分泌を定量した。これらの結果が示すところでは、αＰＶＲ系のＣＡＲ－Ｔドライバは、ＰＶＲを発現する標的細胞の存在下でのＴ細胞活性化の誘導において高度に機能的である。
ＣＡＲ－Ｔ腫瘍細胞死滅を調べるために、２００ＫのＡ５４９またはＭＤＡ－２３１細胞を、ＮＫ培地の中７２時間、それぞれ０．４と０．８～１のＥ：Ｔ（ＧＦＰ陽性に基づく）で、ＣＡＲ－Ｔ－ＰＶＲ変異体（ＮＴＸ－１０８８ＣまたはＮＴＸ１０３４Ｃ）とともに１２ウェルのプレートに蒔いた。腫瘍細胞死滅は、標準ＣＴＧプロトコル（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｇ９２４１）を使用して評価した。図１９Ａ～１９Ｃに示すように、両ＰＶＲ変異体は、活性化ＰＢＭＣと比較して２倍超のＭＤＡ－２３１細胞の死滅の増加、および８倍のＡ５４９細胞の死滅の増加を呈した。これらの所見が強く示すところでは、αＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔ構築物は、ＰＶＲを発現する標的の死滅を大幅に増加させる。
実施例１３ － αＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔによる効率的な血液学的標的細胞の死滅
変異体Ｈ４Ｋ２－ＮＴＸ－１０８８ＣおよびＨ３Ｋ４－ＮＴＸ－１０３４Ｃに基づき、ＣＡＲ－Ｔ構築物を設計した。ｓｃＦｖ配列は、それぞれ配列番号５６と５７に記載する。
ＣＡＲ－Ｔ血液学的腫瘍細胞死滅を調べるために、２０Ｋ／ウェルのＫ５６２細胞を、１００ＩＵ／ＩＬ－２／ｍｌを補足したＲＰＭＩにおいて１８時間、３．４～０．２２対１のＥ：Ｔで、９６ウェルプレート単独に、またはＣＡＲ－Ｔ－ＰＶＲ変異体（ＮＴＸ－１０８８ＣまたはＮＴＸ１０３４Ｃ）とともに蒔いた。腫瘍細胞死滅をフローサイトメトリーにより評価した。ＮＴＸ－１０３４ＣとＮＴＸ－１０８８Ｃの両方は、より高いＥ：Ｔで標的を排除するのに極めて有効であった。より低いＥ：ＴにおいてＮＴＸ－１０３４Ｃに比べＮＴＸ－１０８８Ｃに明確な利点を認めたのは、おそらくＫ５６２上で発現される適度なＰＶＲのレベルに起因するものである。これらの結果が示すところでは、αＰＶＲ ＣＡＲ－Ｔは、ＰＶＲを発現する血液学的腫瘍に対して有効な可能性がある。

Claims (50)

  1. 重鎖と軽鎖とを含むヒト化抗体またはその抗原結合断片であって、重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも約９０％同一のアミノ酸配列を含み、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片はヒトポリオウイルス受容体（ＣＤ１５５）に結合する、ヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  2. 前記重鎖可変領域は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  3. 前記軽鎖可変領域は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  4. 前記重鎖可変領域は、配列番号４７に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号４８に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  5. 前記重鎖可変領域が、
    ｉ．配列番号１０～１２に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
    ｉｉ．４つ一組の重鎖フレームワーク（ＦＲ）配列、すなわち（Ａ）配列番号１８、２２、および２６からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ１、（Ｂ）配列番号１９、２３、および２８からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ２、（Ｃ）配列番号２０、２４、２７、および２９からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ３、ならびに（Ｄ）配列番号２１および２５からなる群から選択されるＦＲ－Ｈ４と
    を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  6. 前記軽鎖可変領域が、
    ｉ．配列番号１３～１５に記載される配列を含む３つ一組のＣＤＲ配列と、
    ｉｉ．４つ一組の軽鎖フレームワーク配列、すなわち（Ａ）配列番号３０および３４からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ１、（Ｂ）配列番号３１および３７からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ２、（Ｃ）配列番号３２、３５、および３６からなる群から選択されるＦＲ－Ｌ３、ならびに（Ｄ）配列番号３３であるＦＲ－Ｌ４と
    を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  7. 前記重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  8. 前記重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９７％同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも９７％同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  9. 前記重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列と同一のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列と同一のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  10. 前記重鎖可変領域は、配列番号１に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  11. ＩｇＧ抗体である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  12. ＩｇＧ４またはＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項１１に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  13. 前記ＩｇＧ４重鎖定常領域の２２８位にてプロリンに置換されたセリン残基の改質を有するＩｇＧ４重鎖定常領域を含む、請求項１２に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  14. Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、単一ドメイン抗体、または単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）である、請求項１から１０のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  15. 請求項１から１４のいずれか一項に記載のヒト化抗体の単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）であって、配列番号５６、配列番号５７、および前記配列のいずれかに対し少なくとも９０％の配列類似性を有するそれらのアナログから選択されるアミノ酸配列を含む単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）。
  16. 前記ヒト化抗体は、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ９６、およびＣＤ２２６のうち少なくとも１つへのＰＶＲの結合を阻害する、請求項１から１５のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片。
  17. 請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片の少なくとも１つの鎖もしくは領域をコードする核酸。
  18. 請求項１７に記載の核酸を含む細胞株。
  19. チャイニーズハムスター卵巣細胞株である、請求項１８に記載の細胞株。
  20. 請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体の重鎖可変領域配列と軽鎖可変領域配列との組合せを含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）。
  21. 前記重鎖可変領域は、配列番号１、配列番号３、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含み、前記軽鎖可変領域は、配列番号２、配列番号７、配列番号８、および配列番号９からなる群から選択される配列に対して少なくとも９０％の配列同一性を持つアミノ酸配列を含む、請求項２０に記載のＣＡＲ。
  22. 配列番号５６、配列番号５７、および前記配列のいずれかに対して少なくとも９０％の配列類似性を有するそれらのアナログから選択されるアミノ酸配列を含むＳｃＦｖを含む、請求項２１に記載のＣＡＲ。
  23. ＣＤ８ストークドメイン、ＣＤ２８ＴＭドメイン、４１ＢＢドメイン、およびＣＤ３Ｚドメインからなる群から選択される少なくとも１つのドメインを含む、請求項２０から２２のいずれか一項に記載のＣＡＲ。
  24. 請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、あるいは請求項２０および２３のいずれか一項に記載のＣＡＲと、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを含む医薬組成物。
  25. 静脈内投与のために製剤化される、請求項２４に記載の医薬組成物。
  26. 腫瘍内投与のために製剤化される、請求項２４に記載の医薬組成物。
  27. ＣＤ８＋Ｔ細胞上でのＣＤ２２６の表面発現および／またはシグナル伝達の増加に使用される、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、請求項２０または２３に記載のＣＡＲ、あるいは請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  28. 個体の癌の処置に使用される、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、請求項２０または２３に記載のＣＡＲ、あるいは請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  29. 前記癌は固形腫瘍を含む、請求項２８に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、ＣＡＲ、あるいは医薬組成物。
  30. 前記癌は、肺癌、結腸癌、副腎癌、子宮癌、頭頸部癌、膵臓癌、および乳癌からなる群から選択される、請求項２８に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、ＣＡＲ、あるいは医薬組成物。
  31. 個体のＣＤ８＋Ｔ細胞においてＣＤ２２６の表面発現および／またはシグナル伝達を増加させる方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、請求項２０または２３に記載のＣＡＲ、あるいは請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を治療上有効量で前記個体に投与する工程を含む方法。
  32. 前記ＣＤ８＋Ｔ細胞は、腫瘍浸潤性ＣＤ８＋Ｔ細胞である、請求項３１に記載の方法。
  33. 癌に罹患した個体の癌を処置する方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、請求項２０または２３に記載のＣＡＲ、あるいは請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物を治療上有効量で前記個体に投与する工程を含む方法。
  34. 必要とする個体の癌を処置する方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片、請求項２０または２３に記載のＣＡＲ、あるいは請求項２４から２６のいずれか一項に記載の医薬組成物、およびＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、またはＣＤ１１２Ｒシグナル伝達の阻害剤を治療上有効量で前記個体に投与する工程を含む方法。
  35. 前記癌は固形腫瘍を含む、請求項３３または３４のいずれか一項に記載の方法。
  36. 前記癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、および肺癌からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
  37. 前記癌は血液癌を含む、請求項３３または３４のいずれか一項に記載の方法。
  38. ＰＤ－１シグナル伝達の前記阻害剤は、ＰＤ－１に結合する抗体またはその断片である、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
  39. ＰＤ－１に結合する前記抗体またはその断片は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ＡＭＰ－５１４、ティスレリズマブ、スパルタリズマブ、およびそのＰＤ－１結合断片から選択される、請求項３８に記載の方法。
  40. ＰＤ－１シグナル伝達の前記阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する抗体である、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
  41. ＰＤ－Ｌ１またはＰＤ－Ｌ２に特異的に結合する前記抗体は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＢＭＳ－９３６５５９、またはＦＡＺ０５３、あるいはそれらのＰＤ－Ｌ１およびＰＤ－Ｌ２結合断片から選択される、請求項４０に記載の方法。
  42. ＰＤ－１シグナル伝達の前記阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＰＤ－Ｌ２の小分子阻害剤を含む、請求項３４から３７のいずれか一項に記載の方法。
  43. 必要とする個体の癌を処置するための組成物を調製する方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容可能な賦形剤、担体、または希釈剤とを混合する工程を含む方法。
  44. 前記癌は固形腫瘍を含む、請求項４３に記載の方法。
  45. 前記癌は、神経膠芽腫、膵臓癌、乳癌、膀胱癌、腎臓癌、頭頸部癌、卵巣癌、結腸癌、子宮頸癌、前立腺癌、および肺癌からなる群から選択される、請求項４４に記載の方法。
  46. 前記癌は血液癌である、請求項４３に記載の方法。
  47. 請求項１から１６のいずれか一項に記載のヒト化抗体またはその抗原結合断片を産生する方法であって、ヒト化抗体またはその抗原結合断片の発現および分泌を可能にするのに十分な条件下、細胞培養培地において、前記ヒト化抗体またはその抗原結合断片をコードする核酸を含有する細胞株をインキュベートする工程を含む方法。
  48. 対象の癌を診断または予後診断する方法であって、請求項１から１６のいずれか一項に記載の少なくとも１つのヒト化抗体またはその断片を用いて、前記対象の生物学的試料中のＰＶＲの発現レベルを求める工程を含む方法。
  49. ＰＶＲの発現が対照または基準値より高い場合、対象の癌を診断または予後診断する工程を含む、請求項４８に記載の方法。
  50. 請求項１から１６のいずれか一項に記載の少なくとも１つの抗体または抗体断片と、ＰＶＲ発現を測定するための手段とを含むキット。
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