JP2022542546A - ニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法 - Google Patents
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- アセトニトリル、ジクロロメタン、1,2-ジクロロエタンまたは液体二酸化硫黄溶媒において、トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルまたは四塩化スズでニコチンアミドとテトラアセチルリボフラノースに対して20~40℃で触媒反応を行え、第一の反応液を得るステップ1)と、
第一の反応液に重曹、炭酸ナトリウムまたは水酸化ナトリウムを加え、pHを3~5に調整し、第二の反応液を得るステップ2)と、
第二の反応液にナトリウムメトキシド溶液を加え、-15~5℃で反応を行え、第三の反応液を得るステップ3)と、
第三の反応液に塩酸を加え、pHを3~5に調整し、第四の反応液を得るステップ4)と、
膜濃縮装置で第四の反応液に対して順に精密濾過とナノ濾過処理を行え、ニコチンアミドリボシド溶液を得るステップ5)と、
Mgイオン、ATPおよび緩衝液の存在下で、35~39℃で、ニコチンアミドリボシドキナーゼを用いてステップ5)で得られたニコチンアミドリボシド溶液に対して触媒反応を行え、反応過程におけるpHを7.5~8.0に制御し、反応終了後にニコチンアミドモノヌクレオチドを得るステップ6)と
を含むことを特徴とする、ニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。 - 前記ステップ1)の反応が25~35℃で行われることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ1)において、前記トリフルオロメタンスルホン酸トリメチルシリルと、前記ニコチンアミドと、前記テトラアセチルリボフラノースとのモル比は1.2~5:1.2~2:1であることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ3)の反応が-10~-5℃で行われることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ3)において、前記ナトリウムメトキシドと前記テトラアセチルリボフラノースとのモル比は1~5:1であることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ4)の過程において反応液の温度が-10~-5℃に保たれることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ5)において、前記精密濾過過程の採用した精密濾過膜の孔径は0.2~1μmであり、前記ナノ濾過過程は分画分子量が150~250の中空繊維膜を採用することを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ6)において、酵素触媒反応系全体における各物質の添加量は、10~50mMのMgイオン、10~30mMのATP、20~100mMの緩衝液、9~27mMのニコチンアミドリボシド、および0.2~1g/Lのニコチンアミドリボシドキナーゼであることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ6)において、前記MgイオンはMgCl2であることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
- 前記ステップ6)において、前記緩衝液はK2HPO4緩衝液であることを特徴とする、請求項1に記載のニコチンアミドを原料としてニコチンアミドモノヌクレオチドを調製する方法。
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