JP2022537162A - 活性化リンパ球細胞ならびにそれを使用してがん及び感染状態を治療する方法 - Google Patents

Abstract

本明細書で提供されるのは、有効量の活性化リンパ球細胞組成物を投与することを含む、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための方法である。活性化リンパ球細胞組成物を使用して免疫系を調節するための関連する組成物、キット、及び方法もまた提供される。【選択図】図１

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年６月１４日に出願された、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国仮特許出願第６２／８６１，４８７号の利益を主張する。

本明細書で提供されるのは、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などの活性化リンパ球細胞を含む細胞組成物を投与することを含む、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための方法である。そのような活性化細胞を使用して免疫系を調節するための関連する組成物、キット、及び方法も提供される。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、サイトカイン及びケモカインの分泌を通じて、ならびに細胞毒性顆粒の放出を通じて抗ウイルス及び抗がん免疫を媒介するために重要な生得的なリンパ球である（非特許文献１、非特許文献２、非特許文献３）。したがって、ＮＫ細胞は、体の防御システムの一部であり、ウイルス及び感染症などの侵入物から保護するための軍隊として機能する。同様に、ＮＫ細胞は、がんと戦うための重要な免疫エフェクター細胞である。

自家ＮＫ細胞を使用した初期の臨床試験では、有意な臨床的利益を示すことができなかった。がん患者のＮＫ細胞は高度に機能不全であり、数が減少しているため、細胞溶解性ＮＫ細胞数を回復または増加させ、それらの抗腫瘍、抗ウイルス、及び／または抗菌作用を増大するための方法及び組成物が大いに必要である。

Ｖｉｖｉｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３１（６０１３）：４４－４９（２０１１） Ｃａｌｉｇｉｕｒｉ，Ｂｌｏｏｄ １１２（３）：４６１－４６９（２００８） Ｒｏｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６（１）：５１７－５２６（２００６）

いくつかの実施形態では、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療する方法であって、活性化ＮＫ細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、活性化ＮＫ細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む、免疫応答の増大を必要とする患者においてそれを行う方法が提供される。

いくつかの実施形態では、患者におけるＨＩＶ複製を阻害する方法であって、ＨＩＶを有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、患者の腫瘍増殖を阻害する方法であって、腫瘍を有する患者に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、ウイルスまたは細菌感染を有する対象におけるウイルスまたは細菌の複製または再生を阻害する方法であって、ウイルスまたは細菌感染を有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞を活性化する方法であって、インビトロでＮＫ細胞を含む細胞組成物を、少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）と接触させることを含む方法が提供される。

いくつかの実施形態では、サイトカイン、及び任意選択で、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、この組成物は、薬学的組成物である。

いくつかの実施形態では、サイトカイン、及び任意選択で、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、この組成物は、薬学的組成物である。

いくつかの実施形態では、サイトカイン、及び任意選択でＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための医薬の調製のための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、この組成物は、薬学的組成物である。

特定の実施形態では、細胞組成物は、活性化されたガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）をさらに含む。いくつかの実施形態では、細胞組成物は、インバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）をさらに含む。いくつかの実施形態では、この細胞組成物はさらにＣＤ３ Ｔ細胞を含む。

いくつかの実施形態では、患者に投与する前に、このリンパ球細胞組成物は、細胞と、少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）とを、混合／インキュベート／接触させることによって活性化される。

いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。

いくつかの実施形態では、サイトカインは、細胞組成物と、約６～２４時間インキュベート／混合／接触させられる。

いくつかの実施形態では、細胞組成物と共にインキュベートされるサイトカインの量は、約１００～１０００ＩＵ／ｍｌである。

いくつかの実施形態では、この方法は、リンパ球細胞組成物を投与する前に、少なくとも１つのリンパ抑制剤、化学療法剤、または免疫抑制剤を３～５日間投与することによって、活性化ＮＫ細胞を投与する前に患者をプレコンディショニングすることをさらに含む。

さらに追加の実施形態では、リンパ抑制剤または化学療法剤は、６ＴＧと、６－ＭＭＰと、クロファラビン、フルダラビン、及びシタラビンからなる群より選択される１つ以上のプリン類似体とを含む薬剤の任意の１つまたは組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、リンパ抑制剤または化学療法剤の用量は、約５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲である。

いくつかの実施形態では、化学療法剤または免疫抑制剤は、シクロホスファミド、リツキシマブ及び任意選択でステロイドのうちいずれか１つまたはそれらの組み合わせを含む。

いくつかの実施形態では、このステロイドは、グルココルチコイドステロイドである。

いくつかの実施形態では、このステロイドは、プレドニゾンである。

いくつかの実施形態では、化学療法剤または免疫抑制剤の用量は、約２０ｍｇ／ｍ^２～約１０００ｍｇ／ｍ^２（可能な最低及び最高の投与量を確認する）の範囲である。

いくつかの実施形態では、この方法はさらに、インターフェロン－α（ＩＦＮ－α）、またはその生物学的同等物を、活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物を投与する２日前及び１日前に、１×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日～約１０×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日の用量で患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、この方法は、患者に対する活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物を投与する、同じ日に、ただし少なくとも約２～６時間前に、１つまたは２つの抗ヒスタミン薬を患者に投与することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、この方法は、活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物の投与日及び投与後の初日に患者にＩＬ－２を投与することと、用量あたり３～６×１０^６ＩＵの用量で、活性化ＮＫ細胞を投与した後さらに３～１４日間継続することとをさらに含む。

いくつかの実施形態では、この方法は、活性化ＮＫ細胞の投与日に、ＣＯＸ－２阻害剤または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはそれらの組み合わせを患者に投与することと、活性化ＮＫ細胞の投与後少なくとも１４日～６０日継続することとをさらに含む。

いくつかの実施形態では、ＣＯＸ－２阻害剤は、セレコキシブまたはロフェコキシブであり、非ステロイド性抗炎症薬は、アスピリン、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ）、及びナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）からなる群より選択される。

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、患者に対して同種異系である。

いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、患者とＨＬＡ適合していない。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、意図的にＨＬＡ不適合であるか、またはＫＩＲ阻害性リガンド／ＨＬＡ不一致である。

いくつかの実施形態では、活性化された細胞の投与量は、約３～５０×１０^６の範囲である。

いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、レトロウイルス（例えば、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）タイプＩ及びＩＩならびにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タイプＩ及びＩＩ、エプスタインバーウイルス及びサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルスウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、及びニューモウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コロナウイルス、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、及び日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルソミオウイルス（例えば、センダイウイルス及びインフルエンザウイルスＡ、Ｂ及びＣ）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス及びＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、ルベラウイルス）、及びラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、及びそれらの任意の組み合わせによって引き起こされるウイルス感染症からなる群より選択される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、ＨＩＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、ＨＣＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、ＨＢＶである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染はコロナウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルス感染は、ＣＯＶＩＤ－１９である。

いくつかの実施形態では、がんは、急性白血病、急性骨髄細胞性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄細胞性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤血球性白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（または顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性赤血球血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度）、多発性骨髄腫、ウォルデンストロムマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、毛様細胞白血病及び骨髄異形成、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される血液がんまたは造血性のがんである。

いくつかの実施形態では、がんは、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄質甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、絨毛腫、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、及びＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫など）など）、神経芽細胞腫（多形性神経芽腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移からなる群より選択される固形腫瘍である。

いくつかの実施形態では、細菌感染は、病原性細菌種であるバクテロイデス属、クロストリジウム属、連鎖球菌、ブドウ球菌属、シュードモナス属、ヘモフィルス属、レジオネラ菌、マイコバクテリウム属、エシェリキア属、サルモネラ属、シゲラ属（赤痢菌）、またはリステリア属のうちの１つによって引き起こされる。

いくつかの実施形態では、移植片対腫瘍（ＧＶＴ）または移植片対ウイルス（ＧＶＶ）が患者で増加する一方で、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）は、減少または排除される。

いくつかの実施形態では、ＩＬ－２の投与が禁忌であり、患者がリンパ球性またはリンパ芽球性白血病またはリンパ腫を有する場合、活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物の投与後に投与されない。

いくつかの実施形態では、この方法は、活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物の投与後４～１４日の時間枠で、患者に免疫チェックポイント阻害剤、例としては、任意の１つまたは２つのチェックポイント阻害剤の組み合わせ、例としては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例としては、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂのニボルマブ）、ペムブロリズマブ／ラムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５（ＭｅｒｃｋのＫｅｙｔｒｕｄａ）としても公知）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例としては、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ－００１０７１８ Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体、例としては、抗ＣＴＬＡ４抗体Ｙｅｒｖｏｙ（商標）（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ－２２４（Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、または乳癌の場合は腫瘍特異的抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、リンパ腫の場合はリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、またはセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）を投与することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、治療または免疫応答の増大は、患者が改善または安定／非進行性疾患を示す限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回という時間枠で、定期的に繰り返される。

さまざまな患者集団に対する治療前のコンディショニング、細胞注入治療、及び細胞注入後の治療の選択肢（「ポストコンディショニング」）を含む例示的な治療レジメンを示す表である。 本明細書に記載の方法に従って治療されたＨＩＶ患者からの非限定的な治療レジメン及びＨＩＶウイルス負荷カウントを示している。 本明細書に記載の方法に従って治療されたＨＩＶ患者由来の非限定的な治療レジメン及びＨＩＶウイルス負荷カウントを示している。 患者数及び腫瘍タイプを要約した表を示す。 治療レジメン／プロトコルを要約した概略図を示す。 ＮＫ細胞の特性評価を要約した概略図を示す。 観察された治療毒性を要約した表を示す。 生存データを要約した表を示す。 ｓＦＧＦＲ１の細胞外成分及び発現ベクターの配列を示すプラスミドマップを示す。 図４－１の続き。 図４－２の続き。 がん免疫サイクルを示す図である。 活性化因子を使用しない（図６Ａ）、活性化因子としてＩＬ－２を使用（図６Ｂ）、活性化因子としてＦＧＦＲ１を使用（図６Ｃ）、及び活性化因子としてＩＬ－２及びＦＧＦＲ１の組み合わせを使用（図６Ｄ）した、７２時間の活性化の終了時のＮＫ細胞調製物のフローサイトメトリー画像である。

ＮＫ細胞は、ウイルス及び腫瘍に対する防御の第一線を形成する自然免疫細胞である。がん抗原に対する抗体を使用することによりがん治療に大きな進歩が見られたが、そのような抗体に対する患者の反応性はさまざまである。このような可変的な応答の調査は、通常、腫瘍細胞に対するこれらの抗体の直接的な阻害効果（例えば、成長因子受容体の阻害及びその後のアポトーシスの誘導）に焦点を合わせてきたが、これらの抗体のインビボにおける効果はより複雑であり得、宿主免疫系に関与し得る。例えば、そのような抗がん抗体の作用機序は、以下のうちの１つ以上を含み得る：抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性サイトカイン／ケモカイン生産、及び補体依存性細胞毒性（ＣＭＣ）。（総説、Ｖｅｌｕｃｈａｍｙ，Ｊｏｈｎ，ｅｔ ａｌ．Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１７；８：６３１を参照のこと）。

抗体依存性細胞傷害及び抗体依存性のサイトカイン／ケモカイン産生は主に、リンパ球の特殊なサブセットであるナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によって媒介される。ＮＫ細胞は、リンパ球の３番目に大きな集団を構成するエフェクター細胞であり、腫瘍及び病原体に感染した細胞に対する宿主の免疫監視に重要である。

ＮＫ細胞ならびにその活性化及び阻害性受容体
ヒトＮＫ細胞は、一般的に２つのサブセットへのＣＤ５６及びＣＤ１６の発現のレベルによって分類される：ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＣＤ１６^ｄｉｍ及びＣＤ５６^ｄｉｍＣＤ１６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞。末梢血及び脾臓におけるほとんどのＮＫ細胞は、ＣＤ５６^ｄｉｍＣＤ１６^{ｂｒｉｇｈｔ}であり、かつ種々の腫瘍細胞に対して細胞毒性であるが、ＣＤ５６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＣＤ１６^ｄｉｍＮＫ細胞は、免疫調節性の機能であり、二次的なリンパ系組織の大部分を構成し、大量のサイトカインを産生するが、ＣＤ５６^ｄｉｍＣＤ１６^{ｂｒｉｇｈｔ}ＮＫ細胞と比較して発揮する細胞毒性が弱い（Ｃｏｏｐｅｒ，Ｍ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００１）２２（１１）：６３３－４０を参照のこと）。がん細胞と健康な細胞との間を区別するＮＫ細胞の能力は、その活性化と阻害性受容体との間のバランスによって少なくとも部分的に調節される。ＮＫ活性化受容体、例えば、ＤＮＡＭ－１及びＮＫＧ２Ｄ；天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）、例えば、ＮＫｐ３０、ＮＫｐ４４、ＮＫｐ４６、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅ、及びＣＤ１６ａ；ならびにキラー細胞免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）の活性化は、ＮＫ細胞の活性化に寄与し、ＮＫ細胞からの細胞毒性顆粒及び炎症誘発性サイトカイン、例えば、インターフェロンガンマ（ＩＦＮγ）の放出を誘発して、がん細胞を溶解する。ＮＫ細胞活性化受容体ＮＫＧ２Ｄ（ＣＤ３１４）は、ＭＨＣクラスＩ鎖関連タンパク質Ａ及びＢ（ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢ）及びＵＬＢＰを認識し、一方で、ＤＮＡＭ－１はストレスを受けた細胞、感染細胞、及びがん細胞上の、ＣＤ１１２（ネクチン－２）及びＣＤ１５５（ポリオウイルス受容体）に結合する。ＮＣＲのリガンドは、ウイルスまたは細胞内細菌に感染した細胞や腫瘍細胞で広く発現されているが、ＮＫ細胞毒性における役割を定義するための、それらの正確な作用機序はまだ特徴付けられていない。ＣＤ１５９（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ（分化抗原群）１５９）としても公知のＮＫＧ２は、ナチュラルキラー細胞の受容体である。ＮＫＧ２には、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、及びＨの７種類がある。ＮＫＧ２Ｄは、ＮＫ細胞表面の活性化受容体である。ＮＫＧ２Ａは、ＣＤ９４と二量体化し、阻害性受容体（ＣＤ９４／ＮＫＧ２）を作る。ＮＫＧ２ファミリーのヘテロ二量体；ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｃ及びＣＤ９４／ＮＫＧ２Ｅは、非古典的ＭＨＣクラスＩ分子ＨＬＡ－Ｅを認識し、ＤＡＰ－１２分子と会合して、ＮＫ活性化シグナルを誘発する（Ｂｏｒｒｅｇｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ（１９９８）１８７（５）：８１３－８、及びＰｅｇｒａｍ，Ｈ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ（２０１１）８９（２）：２１６－２４を参照のこと）。ＮＫ細胞の別の重要な活性化機構は、ＣＤ１６ａ（ＦｃγＲＩＩＩａ、低親和性Ｆｃ受容体）とＩｇＧ１抗体のＦｃ部分との相互作用によるものであり、免疫シナプスを形成して、ＮＫ細胞媒介性抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の抗体オプソニン化標的に関与する（Ｌｅｉｂｓｏｎ，Ｐ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（１９９７）６（６）：６５５－６１）。ＮＫ細胞は、受容体活性化に関与するだけでなく、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ－α）、Ｆａｓリガンド、及びＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）を用いて標的細胞死を誘導もする。最も顕著なＮＫ細胞阻害性受容体には、健康な組織で普遍的に発現されるＭＨＣクラスＩ（ＨＬＡ－ＡＢＣ）分子を認識する阻害性ＫＩＲが含まれる。同様に、ＮＫＧ２ファミリーの阻害性受容体であるＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａは、ＨＬＡ－Ｅに結合し、細胞内免疫受容体チロシンベースの阻害性モチーフ（ＩＴＩＭ）の活性化を通じてＮＫ細胞耐性を誘導する。したがって、ＮＫ細胞の機能は、腫瘍細胞とのさまざまなリガンド相互作用に応じて、活性化または阻害性シグナルのいずれかを増強し得る一連の受容体によって決定されることは公知であり、治療環境のバランスを活性化ＮＫ表現型にシフトして、強化されたＮＫ腫瘍殺傷機構を促進することが重要である。

がんにおけるＮＫ細胞の機能不全
ナチュラルキラー細胞は、循環腫瘍細胞を制御し、腫瘍転移の形成を防ぎ得る。ただし、腫瘍は、ＮＫ細胞による殺滅を回避するために異なる戦略を採用している。ＭＨＣクラスＩ分子（ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＨＬＡ－Ｇ、及びＨＬＡ－Ｅ）などの阻害性リガンドのアップレギュレーションは、ＮＫ細胞へのより強い阻害性シグナルと関連している。さらに、腎細胞癌で報告された阻害性ＮＫＧ２Ａ受容体の発現の増大は、腫瘍浸潤ＮＫ細胞の機能の低下をもたらした。一方で、ＭＩＣＡ及びＭＩＣＢなどのＮＫＧ２ＤのＮＫ活性化リガンドのダウンレギュレーション、ならびに腫瘍由来の可溶性ＭＩＣの脱落の増大も、ＮＫＧ２Ｄ媒介性のＮＫ細胞腫瘍の認識を損なう。最適なＮＫ細胞機能のための別の重要な特徴は、腫瘍部位にホーミングして遊走する能力である。いくつかの研究は、ＮＫ細胞の腫瘍組織へのホーミングの増大を固形腫瘍の治療結果の改善と相関させている。ただし、制御性Ｔ細胞（Ｔ－ｒｅｇ）、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、Ｍ２マクロファージ、及び未成熟樹状細胞を含む免疫抑制性腫瘍間質は、ＮＫ細胞の機能及び固形腫瘍へのそれらの侵入を厳しく制限する。ヒト免疫不全ウイルス及びサイトメガロウイルス感染症に関連する疾患などの慢性疾患では、主に、サイトカイン産生の低下と細胞溶解活性の低下を伴う、枯渇したＮＫ細胞が観察される。乳癌患者を対象とした研究では、活性化受容体（ＮＫＧ２Ｄ、ＤＮＡＭ、ＣＤ１６、及びＮＫｐ３０）のＮＫ細胞発現レベルが低下したが、阻害性受容体（ＮＫＧ２Ａ）の発現レベルが上昇し、ＮＫ細胞のこの明らかな機能障害が直接ＮＫ細胞の細胞毒性に影響を与えることが見出された。同様に、頭頸部癌及び乳癌の患者由来のＮＫ細胞のエフェクターサブセット（ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋）は、インビトロで試験した場合、アポトーシスを極めて起こしやすいので、これらの患者のＮＫ細胞活性が低いことが示されている。ＮＫ細胞の機能障害は、腫瘍による抑制メカニズムに起因する可能性があり、ＮＫ細胞を標的とした免疫療法の大きな障害となる。したがって、障害のあるＮＫ細胞の細胞毒性を回復または置き換えるアプローチは、がん、ならびに細菌及びＨＩＶなどのウイルスの感染に対する宿主防御の調節を高めるための効果的な治療法として役立つ。

自家ＮＫ細胞とは異なり、同種異系ＮＫ細胞は、患者の腫瘍のＨＬＡ発現によって制限されず、これは、改善された抗腫瘍効果を実装するための追加の利点である。

活性化の際、ＮＫ細胞はサイトカイン及びケモカインを豊富に産生し、同時に強力な細胞溶解活性を示す。このＮＫ活性化の利点は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）に依存しないことである。ＮＫ細胞の活性化は、腫瘍細胞の直接殺滅でわかるとおり、ＮＫ細胞受容体が標的細胞上のリガンドに直接結合することによって、または抗原保有細胞に結合する抗体のＦｃ部分に結合することによって、Ｆｃ受容体（ＣＤ１６、ＦｃγＲＩＩＩ）が架橋することによって生じ得る。このＣＤ１６の関与（ＣＤ１６架橋）は、ＣＤ１６関連アダプター鎖の一方または両方、ＦｃＲγまたはＣＤ３ζを通じて生成される細胞内シグナルを介してＮＫ細胞応答を開始する。ＣＤ１６の誘発は、ガンマ鎖またはゼータ鎖のリン酸化を引き起こし、それが次にチロシンキナーゼ、ｓｙｋ及びＺＡＰ－７０を動員し、シグナル伝達のカスケードを開始して、迅速かつ強力なエフェクター機能をもたらす。最も周知のエフェクター機能は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のプロセスを通じて、近くの標的細胞を殺すための毒性タンパク質を運ぶ細胞質顆粒の放出である。ＣＤ１６の架橋によりまた、サイトカイン及びケモカインも生成され、次に、一連の免疫応答が活性化及び調整される。

サイトカイン及びケモカインのこの放出は、インビボでの活性化ＮＫ細胞の抗がん活性において、ある役割を果たしている可能性が高い。ＮＫ細胞はまた、細胞質にパーフォリン及びプロテアーゼ（グランザイム）を含む小さな顆粒を有する。活性化されたＮＫ細胞から放出されると、パーフォリンは標的細胞の細胞膜に細孔を形成し、そこからグランザイム及び関連分子が入り、アポトーシスを誘導する。活性化されたＮＫ細胞が標的細胞の壊死ではなくアポトーシスを誘導するという事実は重要である－ウイルス感染細胞の壊死は、ビリオンを放出するが、アポトーシスは細胞内のウイルスの破壊につながる。

いくつかのＮＫ細胞活性化受容体の発現及びシグナル伝達活性には、免疫受容体チロシンベースの活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を通じてシグナルを伝達する、物理的に関連するアダプターが必要である。これらのアダプターの中で、ＦｃＲγ及びＣＤ３ζ鎖は、ジスルフィド結合ホモ二量体またはヘテロ二量体のいずれかとしてＣＤ１６及びナチュラルキラー細胞毒性受容体（ＮＣＲ）と会合し得、これらの鎖は全ての成熟ＮＫ細胞によって発現されると考えられている。

したがって、理論に拘束されることを望まないが、本発明の態様は、有効量の活性化ＮＫ細胞、または有効量の以下：活性化ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、活性化されたＧＤＴ細胞及びｉＮＫＴ細胞、またはＣＤ３ Ｔ細胞のいずれかと組み合わせた活性化ＮＫ細胞の組み合わせを含むリンパ球細胞組成物を、特定のプレコンディショニング及び細胞注入後コンディショニングステップを組み合わせたレジメン（図１を参照のこと）で患者に提供して、がんまたは感染症に対する（ＨＩＶに対するものを含む）免疫応答の改善をその患者に提供する。本明細書に記載の方法及び組成物は、以前の方法に比べて多くの利点を有しており、この利点としては、支持細胞での共培養の欠如、及び不要なＴ調節効果を軽減する能力、ならびに細胞組成物の汚染のリスクを最小限に抑える能力、ならびに活性化された細胞組成物を調製して患者に送達する容易さ及び速度、あわせて、細胞組成物からのごく最小限の副作用（通常はグレード１以下の副作用のみ）が挙げられる（図３Ｄを参照のこと）。これらの方法はまた、「ワクチン効果」トレーニング宿主である患者の免疫細胞を提供して、がん、細菌、またはウイルスの標的を同様に認識して殺滅するのにも役立つ。

略記：
抗体依存性細胞傷害：ＡＤＣＣ
分化抗原群３：ＣＤ３
移植片対腫瘍効果：ＧＶＴ
移植片対宿主病：ＧＶＨＤ
移植片対ウイルス：ＧＶＶ
ガンマデルタＴ細胞：ＧＤＴ細胞、またγδＴ細胞。

ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）：後天性免疫不全症候群を引き起こすレンチウイルス。

インバリアントナチュラルキラーＴ細胞：Ｉ型または古典的ＮＫＴ細胞としても公知のｉＮＫ Ｔ細胞は、インバリアントのａβＴ細胞受容体（ＴＣＲ）及び多くの細胞表面分子をナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と共通して発現するＴ細胞の別個の集団である。

ナチュラルキラー細胞：ＮＫ細胞
本発明をより容易に理解できるように、特定の技術的及び科学的用語を以下に具体的に定義する。本文書において特に定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術的及び科学的用語は、本発明が属する当業者によって通常理解されるのと同じ意味を有する。

本明細書で使用され、特に明記されていない限り、「約」という用語は、それが修飾する値の±５％を意味することを意図している。したがって、約１００とは９５～１０５を意味する。さらに、「約」という用語は、「約１、２、３、４、または５」などの一連の用語において、ある用語を修飾する。「約」という用語は、リストの各メンバーを修飾することを理解するべきであり、その結果、「約１、２、３、４、または５」とは、「約１、約２、約３、約４、または約５」を意味すると理解され得る。「少なくとも」という用語または「より小さい」、「より大きい」などであるがこれらに限定されない他の定量する修飾子によって修飾されるリストについても同じことが当てはまる。

本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が別に指示しない限り複数の言及を含む。

本明細書で使用する場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「有する（ｈａｖｅ）」、「有する（ｈａｓ）」及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」ならびにそれらの活用形とは、本明細書において用いる場合、「を含むがこれに限定されるものではない」を意味する。さまざまな組成物及び方法は、さまざまな構成要素またはステップを「含んでいる」という観点で説明されるが（「含むが、これらに限定されない」を意味すると解釈される）、この組成物、方法、及びデバイスはまた、さまざまな構成要素及びステップ「から本質的に構成され」てもよいし、または「からなって」もよく、そのような用語は、本質的にメンバーが制限されているグループを定義するものとして解釈されるべきである。

本明細書で使用される「可溶性ＦＧＦＲ１」という用語は、脊椎動物の線維芽細胞成長因子受容体１、特にホモサピエンス由来のタンパク質を指す（ＵＮＩＰＲＯＴＫＢ：Ｐ１１３６２－７、完全な情報は、ワールドワイドウェブ（ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ｃａｒｄｄｉｓｐ．ｐｌ？ｇｅｎｅ＝ＦＧＦＲ１で見出され得る）。脊椎動物の線維芽細胞成長因子受容体（ＦＧＦＲ）ファミリーは、胚の発達ならびに成体細胞の成長及び増殖に関与するタンパク質の重要なグループである。ＦＧＦＲタンパク質の変異は、骨または四肢の欠陥及びさまざまな形態のがんなどの病状を引き起こし得る。ＦＧＦＲタンパク質は、受容体型チロシンキナーゼであり、リガンドが結合すると二量体化し、ＭＡＰＫ及びＰＬＣγ経路を通じてシグナルを伝達する。ＦＧＦＲ１は、細胞外領域、シングルパス膜貫通ドメイン、及び細胞内チロシンキナーゼドメインからなるこのタンパク質ファミリーのよく特徴付けられたメンバーである。細胞外領域には、細胞外マトリックスとの相互作用を担うヘパリン結合ドメインが含まれ、一方で、細胞内ドメインは、受容体の二量体化後に下流のエフェクターと相互作用してシグナルを伝播する（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２００２；４６（４）：３９３－４００）。ＦＧＦＲ１は、膜貫通ドメイン及びキナーゼドメインを欠く可溶性の分泌型アイソフォームを含む、多くの選択的スプライシングされたアイソフォームに存在する。それらの機能は不明であるが、可溶性ＦＧＦＲ１アイソフォームは、発生中にＦＧＦリガンドに結合し、その活性を調節し得る（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．２００２；４６（４）：３９３－４００）。典型的なＦＧＦＲ１シグナル伝達は、リガンド結合、受容体の二量体化、及び下流のエフェクタータンパク質のリン酸化の後に生じる。しかし、最近の研究では、内在化されたＦＧＦＲ１が核に輸送され、そこでがん細胞の標的遺伝子発現及び細胞増殖を調節することが示されている（Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２０１２ Ｊｕｎ １１；１９７（６）：８０１－１７）。（例えば、Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ａｕｇ３；１４（４）：Ｒ１１５も参照のこと）。

本明細書に記載されるように、ＮＫ細胞、特にＧＤＴ細胞の活性化または事前処置に使用するためのヒトＦＧＦＲ１には多数の供給源が利用可能であるが、選択肢は、図４に示すような発現構築物を使用して、プラスミドからヒトＦＧＦＲ１の細胞外部分を発現及び精製することである。これは非限定的な例であり、ＦＧＦＲ１の任意の供給源を使用し得る。

「同時投与（ｃｏ－ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」などの用語は、単独の患者への選択した治療薬の投与を包含することを意味し、薬剤を、同一のもしくは異なる投与経路によって、または同一のもしくは異なる時点で投与するという治療レジメンを含むものとする。

本明細書で使用される場合、「アゴニスト」という用語は、その存在がタンパク質の天然に存在するリガンドの存在から生じる生物学的活性と同じであるタンパク質の生物学的活性をもたらす化合物を指す。

本明細書で使用される場合、「部分アゴニスト」という用語は、その存在がタンパク質の天然に存在するリガンドの存在から生じるものと同じタイプだが、その程度がより低い、タンパク質の生物学的活性を生じる化合物を指す。

本明細書で使用される場合、「アンタゴニスト」という用語は、その存在がタンパク質の生物学的活性の程度の減少をもたらす化合物を指す。特定の実施形態では、アンタゴニストの存在は、タンパク質の生物学的活性の完全な阻害をもたらす。特定の実施形態では、アンタゴニストは阻害剤である。

治療組成物（例えば、活性化されたＮＫ細胞、または活性化された細胞の組み合わせ）と組み合わせて使用される場合、「投与する」とは、治療剤を直接標的組織に投与するか、または治療剤を患者に投与して、それによって標的となる組織に治療上プラスの影響を与えることを意味する。

ＣＤ３タンパク質は、免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）（合計１０個）のリン酸化によって開始される細胞内シグナル伝達を担う３対の二量体（εγ、εδ、ζζ）で構成されている。ＣＤ３は最初、胸腺でＴ細胞が発生する幹細胞である前胸腺細胞の細胞質で発現される。前胸腺細胞は、一般的な胸腺細胞に分化し、次に髄質胸腺細胞に分化し、ＣＤ３抗原が細胞膜に移動し始めるのはこの後者の段階である。抗原は全ての成熟Ｔ細胞の膜に結合していることが見出され、プルキンエ細胞には少量存在しているように見えるが、他の細胞型には事実上存在しない。この高い特異性は、Ｔ細胞発達の全ての段階でのＣＤ３の存在と相まって、組織切片のＴ細胞の有用な免疫組織化学的マーカーとなる。抗原はほとんど全てのＴ細胞リンパ腫及び白血病に存在し続けるため、表面的に類似したＢ細胞及び骨髄性腫瘍と区別するために使用され得る。

本明細書で使用される「対象」または「患者」という用語は、限定するものではないが、ヒト及び非ヒト脊椎動物、例えば、野生動物、家畜、及び農場動物を含む。これらの用語は交換可能に使用され得る。特定の実施形態では、本明細書に記載の対象または患者は動物である。特定の実施形態では、対象または患者は哺乳動物である。特定の実施形態では、対象はヒトである。特定の実施形態では、対象または患者は非ヒト動物である。特定の実施形態では、対象または患者は非ヒト哺乳動物である。特定の実施形態では、対象または患者は、イヌ、ネコ、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、またはヤギなどの家畜である。特定の実施形態では、対象または患者は、犬または猫などのコンパニオンアニマルである。特定の実施形態では、対象または患者は、ウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、またはヤギなどの家畜である。特定の実施形態では、対象または患者は動物園の動物である。別の実施形態では、対象または患者は、げっ歯類、イヌ、または非ヒト霊長類などの研究動物である。特定の実施形態では、対象または患者は、トランスジェニックマウスまたはトランスジェニックブタなどの非ヒトトランスジェニック動物である。

「阻害する」という用語は、症状の発症を予防する、症状を軽減する、または疾患、状態、もしくは障害を排除するための、本明細書の実施形態の治療薬の投与を含む。

「薬学的に許容される」とは、担体、希釈剤、または賦形剤が、治療剤の他の成分と適合しなければならず、かつそのレシピエントにとって有害ではないことを意味する。

本明細書で使用される「治療する」、「治療される」、または「治療すること」という用語は、治療的な処置及び予防的または防止的措置の両方を指し、この目的は、望ましくない生理学的状態、障害もしくは疾患を阻害、予防もしくは減速（軽減）すること、または改善、阻害、もしくはその他の方法で有益なもしくは望ましい臨床結果を取得することである。本発明の目的に関して、有益または所望の臨床結果としては、限定するものではないが、症状の改善または軽減、状態、障害もしくは疾患の程度の減少、状態、障害、もしくは疾患の状態の安定化（すなわち、悪化しないこと）、状態、障害、もしくは疾患の発現の遅延もしくは進行の減速、状態、障害、もしくは疾患状態の改善、ならびに検出可能または検出不可能にかかわらず、状態、障害、または疾患の寛解（部分的または完全）、または向上もしくは改善が挙げられる。治療には、過剰なレベルの副作用なしに臨床的に有意な反応を引き出すことを含む。治療とはまた、治療を受けない場合の予測生存期間と比較して、生存期間を延長することも含む。

本明細書で使用される「活性化ＮＫ細胞」とは、調節性細胞に対して、細胞傷害性細胞と見なされるように十分に刺激されたＮＫ細胞の状態を指す。活性化はまた、誘導されたサイトカイン産生、及び検出可能なエフェクター機能とも関連し得る。「活性化ＮＫ細胞」という用語は、とりわけ、ＮＫ細胞であって、ＣＤ５６ｄｉｍＣＤ１６＋、ＣＤ５６ｉｎｔ／ｌｏｗＣＤ１６－、ＣＤ５６＋ＣＤ１６＋細胞傷害性細胞及び／またはＡＤＣＣであるＮＫ細胞を指す。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、本明細書に提供されるように活性化される。

化学療法剤またはリンパ抑制剤及び免疫抑制剤
プレコンディショニングステップで本明細書で使用されるリンパ抑制剤（ｌｙｍｐｈｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ）またはリンパ抑制剤（ｌｙｍｐｈｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ａｇｅｎｔ）は、ステロイドまたは他の免疫抑制剤、例えば、プレドニゾンもしくはＣＤ２０に対するモノクローナル抗体、例えばリツキシマブを含み得る。免疫抑制剤の典型的な用量は、表１～５に概説されている、所望のプレコンディショニング時間枠に関して、２５～１０００ｍｇ／ｍ^２である。

プレコンディショニング剤としてはまた、有効量（通常は低用量）のチオグアニン（６ＴＧ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）などの化学療法剤または抗腫瘍剤、及びクロファラビン、フルダラビン、シタラビンなどのプリン類似体のうちいずれか１つまたは組み合わせが挙げられ得る。これらの薬剤の典型的な用量は、活性化された細胞組成物を投与する前の３、４、または５日という所望の時間枠に関して、２５～１０００ｍｇ／ｍ^２である。

特定の実施形態では、患者は、フルダラビンを含むかまたは含まないシクロホスファミドなどのリンパ抑制剤または化学療法剤でプレコンディショニングされ得る。そのようなプレコンディショニング処置の例は、例えば、米国特許第９，８５５，２９８号に見出され得る。非限定的な例は、フルダラビンの投与である（毎日４日間３０ｍｇ／ｍ^２静脈内投与）及びシクロホスファミド（フルダラビンの初回投与から開始して、２日間毎日５００ｍｇ／ｍ^２静脈内投与）を投与されている。投与後、活性化リンパ球組成物は、フルダラビンの完了２～５日後に（すなわち、プレコンディショニング処理後に）投与され得る。特定の実施形態では、シクロホスファミドは、約５００～約６００ｍｇ／ｍ^２の用量で２～３日間投与される。

ＮＫ細胞ならびにＧＤＴ細胞及びｉＮＫ細胞の活性化に適している活性化サイトカイン
適切なＮＫ活性化サイトカインは、以下のうちの１つ以上の有効量を含み得る：ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせ。これらの活性化サイトカインはまた、単剤として、または組み合わせてもＮＫ細胞、ｉＮＫＴ細胞、及びＧＤＴ細胞を活性化するために有効である。

注入後、ポストコンディショニング剤用の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）
ＮＳＡＩＤは、炎症、疼痛、及び発熱を促進する化学物質であるプロスタグランジンの産生を減らすことによって作用する。本明細書に記載の方法において免疫応答の負の側面を制御するための適切なＮＳＡＩＤとしては、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）などの特異的ＣＯＸ－２阻害剤、ならびにアスピリンなどの非特異的阻害剤、ならびに非特異的ＣＯＸ－２阻害剤、例えば：インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ）、及びナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）が挙げられる。

プロスタグランジンは、シクロオキシゲナーゼ－１（ＣＯＸ－１）及びシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）という２つの異なる酵素によって作られる。２つの異なる酵素によって作られたプロスタグランジンは、体にわずかに異なる影響を及ぼす。プロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）は、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）経路の末端プロスタグランジンである。ＰＧＥ２産生の阻害は、発熱、関節炎、及び炎症性疼痛などの炎症症状を緩和し得る。ＣＯＸ－２阻害剤は、ＣＯＸ－１酵素ではなくＣＯＸ－２酵素を選択的にブロックするＮＳＡＩＤのサブクラスである。この酵素をブロックすると、ＣＯＸ－２によるプロスタグランジンの生成が妨げられ、これは、炎症の疼痛及び腫れならびに他の痛みを伴う状態の原因となることがよくある。ＣＯＸ－１酵素ではなくＣＯＸ－２酵素を選択的にブロックするため、これらの薬物は、通常ＣＯＸ－１酵素とＣＯＸ－２酵素の両方をブロックする従来のＮＳＡＩＤとは独自に異なる。ＣＯＸ－１は、炎症部位及び胃など、体内のさまざまな組織に通常存在する酵素である。ＣＯＸ－１によって作られたプロスタグランジンのいくつかは、胃の内壁を保護する。

アスピリンなどの一般的なＮＳＡＩＤは、ＣＯＸ－１とＣＯＸ－２の両方をブロックする。ＣＯＸ－１酵素がブロックされると、炎症は軽減されるが、胃の内壁の保護も失われる。これは、胃の不調だけでなく、胃及びさらには腸からの潰瘍及び出血も引き起こし得る。

ＣＯＸ－２酵素は、一般的に炎症に関与している体の領域に特異的に存在するが、胃には存在しない。ＣＯＸ－２酵素がブロックされると、炎症が軽減される。ただし、ＣＯＸ－２酵素は、胃または腸を保護する役割を果たさないので、ＣＯＸ－２特異的なＮＳＡＩＤには、胃または腸を損傷する同じリスクはない。

古いＮＳＡＩＤ（例えば、アスピリン、イブプロフェン、ナプロキセンなど）は全て、ＣＯＸ－１酵素及びＣＯＸ－２酵素の両方の作用をブロックすることによって作用する。ＣＯＸ－２阻害剤は、ＣＯＸ－２酵素を選択的にブロックし、したがって、胃または腸の潰瘍を引き起こすリスクが低い。

本明細書で使用される「抗体」という用語は、抗原と特異的に結合する免疫グロブリン分子を指す。抗体は、天然源または組換え源に由来するインタクトな免疫グロブリンであってもよく、インタクトな免疫グロブリンの免疫反応性部分であってもよい。抗体は、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、Ｆｖ、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ）２、ならびに単鎖抗体及びヒト化抗体を含むさまざまな形態で存在し得る。

「抗体フラグメント」という用語は、インタクトな抗体の一部を指し、インタクトな抗体の抗原決定可変領域を指す。抗体断片の例としては、限定するものではないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２及びＦｖフラグメント、線状抗体（ｌｉｎｅａｒ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ）、ｓｃＦｖ抗体、及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。

本明細書で使用される「抗原」という用語は、免疫応答を誘発する分子として定義される。この免疫応答には、抗体産生、もしくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化のいずれか、またはその両方が含まれ得る。当業者は、事実上全てのタンパク質またはペプチドを含む任意の高分子が抗原として機能し得ることを理解するであろう。さらに、抗原は、組換えＤＮＡまたはゲノムＤＮＡに由来し得る。当業者は、免疫応答を誘発するタンパク質をコードするヌクレオチド配列または部分ヌクレオチド配列を含む任意のＤＮＡが、したがって、その用語が本明細書で使用される場合、ある「抗原」をコードすることを理解するであろう。さらに、当業者は、抗原が遺伝子の全長ヌクレオチド配列によってのみコードされる必要はないことを理解する。この実施形態が２つ以上の遺伝子の部分的ヌクレオチド配列の使用を含むがこれに限定されないこと、及びこれらのヌクレオチド配列が所望の免疫応答を誘発するためにさまざまな組み合わせで配置されることは容易に明らかである。さらに、当業者は、抗原が「遺伝子」によってコード化される必要が全くないことを理解する。抗原は合成して生成されてもよいし、または生物学的試料から誘導されてもよいことは容易に明らかである。そのような生物学的試料としては、限定するものではないが、組織試料、腫瘍試料、細胞、または生体液が挙げられ得る。

本明細書で使用される「がん」という用語は、異常な細胞の急速で制御されていない増殖を特徴とする疾患として定義される。がん細胞は、局所的に、または血流及びリンパ系を介して体の他の部分に広がり得る。さまざまながんの例としては、限定するものではないが、乳癌、前立腺癌、卵巣癌、子宮頸癌、皮膚癌、膵臓癌、結腸直腸癌、腎癌、肝臓癌、脳癌、リンパ腫、白血病、肺癌などが挙げられる。

治療され得るがんとして、血管新生されていない腫瘍、またはまだ実質的に血管新生されていない腫瘍、ならびに血管新生された腫瘍が挙げられる。がんは、非固形腫瘍（例えば、白血病及びリンパ腫などの血液腫瘍）を含んでもよいし、または固形腫瘍を含んでもよい。本明細書に記載の活性化ＮＫ細胞で治療されるがんの種類としては、限定するものではないが、がん腫、芽細胞腫、及び肉腫、ならびに特定の白血病またはリンパ性悪性腫瘍、良性及び悪性の腫瘍、ならびに肉腫、がん腫、及び黒色腫などの悪性腫瘍が挙げられる。成体の腫瘍／がん及び小児の腫瘍／がんも含まれている。

血液がんは、血液または骨髄のがんである。血液（または血行性）がんの例としては、白血病、例としては、急性白血病（例えば、急性リンパ性白血病、急性骨髄細胞性白血病、急性骨髄性白血病及び骨髄芽球性、前骨髄細胞性、骨髄単球性、単球性及び赤芽球性）、慢性白血病（例えば、慢性骨髄性（顆粒球）白血病、慢性骨髄性白血病、及び慢性リンパ性白血病）、真性赤血球増加症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度）、多発性骨髄腫、ウォルデンストロムマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、毛状細胞白血病及び骨髄が挙げられる。

固形腫瘍とは、嚢胞も液状領域も通常は含まない組織の異常な塊である。固形腫瘍は、良性であっても、または悪性であってもよい。さまざまな種類の固形腫瘍は、それらを形成する細胞の種類（肉腫、がん腫、及びリンパ腫など）にちなんで名付けられている。固形腫瘍、例えば、肉腫及び癌腫の例としては、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄質甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、脈絡膜癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、及びＣＮＳ腫瘍（例えば、神経膠腫（脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫など）、神経芽細胞腫（多形性神経芽腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移）が挙げられる。

本明細書で使用される「抗腫瘍効果」という用語は、腫瘍体積の減少、腫瘍細胞の数の減少、転移の数の減少、寿命の延長、または癌性状態に関連するさまざまな生理学的症状の改善によって顕在化され得る生物学的効果を指す。「抗腫瘍効果」は、ペプチド、ポリヌクレオチド、細胞、及び抗体が最初に腫瘍の発生を防ぐ能力によっても顕在化され得る。

「自己抗原」という用語は、免疫系によって異物であると誤って認識される任意の自己抗原を意味する。自己抗原は、細胞タンパク質、リン酸化タンパク質、細胞表面タンパク質、細胞脂質、核酸、糖タンパク質、例としては、細胞表面受容体を含むが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「自己、自家（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）」という用語は、後に個体に再導入される、同じ個体に由来する任意の材料を指すことを意味する。

「同種異系」とは、同じ種の異なる動物に由来する移植片を指す。現在の治療の目的では、ＨＬＡ－Ａ、－Ｂ、及び－ＤＲの一致が移植片の生存に有益である腎臓及び骨髄の移植の状況とは異なり、活性化ＮＫ細胞は完全にＨＬＡ不一致である。がん、ＨＩＶを含む感染状態を治療するための現在の方法では、活性化されたＮＫ細胞は、がん細胞を標的にしてそれらに結合し、それらを殺して腫瘍細胞抗原を放出する。このサイクルは、同種異系の活性化ＮＫ細胞で、約４～７日以内に（場合によっては４～１５日の延長範囲で）宿主細胞の免疫応答によって死滅するまでそれ自体繰り返される。したがって、同種異系細胞の寿命がこのように短いＧＶＨＤには危険性はない。しかし、腫瘍細胞を認識して殺し、その約４～７日間の抗原を放出する過程で、同種異系細胞は、腫瘍細胞を認識して殺すために宿主ＮＫ及び他の免疫細胞にワクチン接種するのに有用であり得る。さらに総説記事Ｃａｎｃｅｒ Ｓｃｉ．２０１９ Ｊａｎ；１１０（１）：１６－２２を参照のこと。図５は、がん免疫サイクルを示す図である。がん免疫サイクル（Ｃａｎｃｅｒ－ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｃｙｃｌｅ）。抗腫瘍免疫の誘導は、自己伝播し得る循環プロセスである。がん細胞に対するＴ細胞応答を増幅及び拡張し得る。また、標的細胞（がん細胞）が根絶されたときにサイクルを停止するためのいくつかの阻害因子自体も含まれている。このサイクルは、図５に示すように、がん細胞からのがん抗原の放出から始まり、がん細胞の死滅で終わる７つのステップに分けられ得る。ＡＰＣ、抗原－提示細胞、ＤＣ、樹状細胞。

「異種」とは、異なる種の動物に由来する移植片を指す。

本発明は、サイトカインの存在下で活性化される本質的に純粋な活性化ナチュラルキラー細胞、及び任意選択で可溶性ＦＧＦＲ１を含む活性化リンパ球細胞を投与することを含む、がん及びＨＩＶを含む感染状態を治療するための方法に関する。

したがって、本発明の一態様によれば、末梢血単核細胞を含むさまざまな供給源から単離された、活性化ナチュラルキラー細胞を、サイトカインの存在下で、本明細書に記載されたプレコンディショニング及びポストコンディショニングレジメンと組み合わせて、活性化する方法が提供される。

「末梢血単核細胞」、「ＰＢＭＣ」または「単核細胞」とは、抗がん免疫療法に通常使用される末梢血から分離された単核細胞を指す。末梢血単核細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配法などの公知の方法を使用して収集されたヒト血液から取得され得る。

本発明の１つの例示的な実施形態によれば、「末梢血単核細胞」は、任意の適切な人から得られ得る。本明細書で使用される末梢血単核細胞などの供給源を含むドナーリンパ球細胞の供給源は、本発明による抗がん、抗ウイルス、及び／または抗菌免疫療法における使用のために、ＮＫ細胞、γδＴ細胞、ｉＮＫＴ細胞、及びＣＤ３ Ｔ細胞を含む所望のリンパ球細胞を単離するためのレシピエント患者に対して同種異系である必要がある。したがって、ドナー阻害性リガンドは患者（例えば、宿主）ＨＬＡと不適合である。

例示的な活性化サイトカイン及びリンパ球細胞及びＮＫ活性化
本発明において、「サイトカイン」という用語は、本質的に純粋なＮＫ細胞を含み、そして末梢血単核細胞から単離された細胞を含む、本発明の方法における使用のための、本明細書に記載のいずれかの治療用リンパ球を活性化するために使用され得る免疫活性化サイトカインを指す。本発明の１つの例示的な実施形態によれば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、ＳＣＦ、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、またはＩＬ１８は、そのようなサイトカインとして単独で使用されてもよく、または組み合わせて使用されてもよい。特に、ＩＬ－２、ＩＬ－１５またはＩＬ－２１は、末梢血単核細胞のＮＫ細胞への分化及びＮＫ細胞の増殖に優れた効果を有するサイトカインとして公知であるので、これらのサイトカインの１つまたは組み合わせを使用することが望ましい。本発明の例示的な一実施形態によれば、ＩＬ－２が使用されるが、本発明はそれに限定されない。本発明の方法の実施形態にさらに含まれるのは、ＩＬ－２アゴニスト、ＩＬ－２ホモログ、または他の合成の最適化されたＩＬ－２組成物である。（免疫増強のための低用量ＩＬ－２を記載している米国特許第６，９２１，５３０号を参照のこと）。

ＩＬ－１５は、ＮＫ細胞への分化にある役割を果たしている。これは、ＩＬ－１５産生に必要な転写因子インターフェロン（ＩＦＮ）調節因子１を欠くマウスではＮＫ細胞が不足しているという事実（Ｋｏｕｅｔｓｕ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３９１，７００－７０３，１９９８）及びＮＫ細胞が、ＩＬ－１５またはＩＬ－１５Ｒａを欠如しているマウスでは見られないという事実から見出される。その結果、ＩＬ－１５は、ＮＫ細胞で発現するＩＬ－１５受容体を介してＮＫ細胞の増殖及び分化を直接促進することが報告されている（ＭｒｏｚｅｋＥ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ ８７，２６３２－２６４０，１９９６）。

ＩＬ－２１は、活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞から分泌されるサイトカインであり（Ｎａｔｕｒｅ，５：６８８－６９７，２００５）、ＩＬ－２１受容体（ＩＬ－２１Ｒ）は、樹状細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、及びＢ細胞などのリンパ球で発現される（Ｒａｙｎａ Ｔａｋａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｏｎｏｌ １７５：２１６７－２１７３，２００５）。ＩＬ－２１は、構造的にＩＬ－２及びＩＬ－１５と非常に類似しており、ＩＬ－２１Ｒは、ＩＬ－２Ｒ、ＩＬ－１５、ＩＬ－７Ｒ、及びＩＬ－４Ｒと鎖を共有している（Ａｓａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，１６７：１－５，２００１）。ＩＬ－２１は、骨髄からのＮＫ細胞前駆細胞の成熟を誘導し（Ｐａｒｒｉｓｈ－Ｎｏｖａｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ、４０８：５７－６３，２０００）、特にＮＫ細胞がサイトカインを産生し、細胞を殺滅する能力などのエフェクター機能を促進し（Ｍ．Ｓｔｒｅｎｇｅｌｌ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７０，５４６４－５４６９，２００３、Ｊ．Ｂｒａｄｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７２，２０４８－２０５８，２００４）、ＣＤ８＋Ｔ細胞のエフェクター機能を増強することによる先天性及び適応性免疫系の抗がん反応を促進する（Ｒａｙｎａ Ｔａｋａｋｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １７５，２１６７－２１７３，２００５、Ａ．Ｍｏｒｏｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７３，９００－９０９，２００４）ことが報告されている。また、ＩＬ－２１は、ヒト末梢血から分離されたＮＫ細胞を活性化し（Ｐａｒｒｉｓｈ－Ｎｏｖａｋ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４０８，５７，２０００）、臍帯血から分離された造血幹細胞から成熟ＮＫ細胞を誘導する（Ｊ．Ｂｒａｄｙ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７２，２０４８，２００４）ことが報告されている。

本発明の実施形態は、これらの「活性化サイトカイン」のうちの１つ以上を５０Ｕ／ｍｌ～１，０００Ｕ／ｍｌ、例えば、２００Ｕ／ｍｌ～８００Ｕ／ｍｌ、または４００Ｕ／ｍｌ～６００Ｕ／ｍｌの濃度で使用して、本発明の免疫調節法で使用するために、本明細書に記載のＮＫ細胞、ガンマデルタＴ細胞、またはｉＮＫＴ細胞などのリンパ球細胞のいずれかを活性化することを含む。

「疾患」とは、対象が恒常性を維持することができず、疾患が改善されない場合、動物の健康が悪化し続けるという、対象の健康状態である。対照的に、対象における「障害」とは、その対象が恒常性を維持し得るが、対象の健康状態が、その障害がない場合よりも不利である健康状態である。治療せずに放置すると、障害は必ずしも対象の健康状態をさらに低下させるとは限らない。

本明細書で使用される「有効量」とは、治療的または予防的利益を提供する量を意味する。

「エンコーディング」とは、遺伝子、ｃＤＮＡ、またはｍＲＮＡなどのポリヌクレオチド中のヌクレオチドの特定の配列の固有の特性を指し、定義されたヌクレオチド（すなわち、ｒＲＮＡ、ｔＲＮＡ及びｍＲＮＡ）の配列または定義されたアミノ酸配列及びそれから生じる生物学的特性のいずれかを有する生物学的プロセスにおける他のポリマー及び高分子の合成のためのテンプレートとして機能する。したがって、その遺伝子に対応するｍＲＮＡの転写及び翻訳が、細胞または他の生物学的システムにおいてタンパク質を産生する場合、その遺伝子はそのタンパク質をコードする。ヌクレオチド配列がｍＲＮＡ配列と同一であり、通常は配列リストに記載されているコード鎖と、遺伝子またはｃＤＮＡの転写のテンプレートとして使用される非コード鎖との両方とも、その遺伝子またはｃＤＮＡのタンパク質または他の産物をコードすると言ってもよい。

本明細書で使用される場合、「内因性」とは、生物、細胞、組織もしくは系からの、またはその内部で生成される、任意の物質を指す。

本明細書で使用される場合、「外因性」という用語は、生物、細胞、組織もしくは系から導入されるか、またはその外部で生成された任意の物質を指す。

本明細書で使用される「発現」という用語は、特定のヌクレオチド配列の、そのプロモーターによって駆動される転写及び／または翻訳として定義される。

「発現ベクター」とは、発現されるヌクレオチド配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む組換えポリヌクレオチドを含むベクターを指す。発現ベクターは、発現に十分なシス作用性エレメントを含み、発現のための他のエレメントは、宿主細胞によって、またはインビトロ発現系において供給され得る。発現ベクターとしては、組換えポリヌクレオチドを組み込んだ、コスミド、プラスミド（例えば、裸またはリポソームに含まれる）、及びウイルス（例えば、レンチウイルス、レトロウイルス、アデノウイルス、及びアデノ随伴ウイルス）などの当該分野で公知の全てのベクターが挙げられる。

「相同」とは、２つのポリペプチド間または２つの核酸分子間の配列類似性または配列同一性を指す。２つの比較された配列の両方の位置が同じ塩基またはアミノ酸モノマーサブユニットによって占められている場合、例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれの位置がアデニンによって占められている場合、分子はその位置で相同である。２つの配列間の相同性のパーセントとは、２つの配列によって共有される一致するまたは相同な位置の数を比較した位置の数で割り、１００でかけた関数である。例えば、２つの配列の１０個の位置のうち６個が一致または相同であるならば、その２つの配列は６０％相同である。例として、ＤＮＡ配列ＡＴＴＧＣＣとＴＡＴＧＧＣは、５０％の相同性を共有している。一般に、比較は、最大の相同性を与えるように２つの配列が整列されているときに行われる。

本明細書で使用される「免疫グロブリン」または「Ｉｇ」という用語は、抗体として機能するタンパク質のクラスとして定義される。Ｂ細胞によって発現される抗体は、ＢＣＲ（Ｂ細胞受容体）または抗原受容体と呼ばれることもある。このクラスのタンパク質に含まれる５つのメンバーは、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、及びＩｇＥである。

「単離された」とは、自然の状態から変化または取り出されたことを意味する。例えば、生きている動物に自然に存在する核酸またはペプチドは、「単離」されていないが、その天然状態の共存物質から部分的または完全に分離された同じ核酸またはペプチドは「単離」されている。単離された核酸またはタンパク質は、実質的に精製された形で存在してもよく、または、例えば、宿主細胞などの非天然環境に存在してもよい。「単離された」生物学的構成要素（核酸、タンパク質または細胞など）は、他の生物学的構成要素（細胞破片、他のタンパク質、核酸または細胞型など）から実質的に分離または精製して取り出されている。「単離された」生物学的構成要素としては、標準的な精製方法によって精製された構成要素が挙げられる。

疾患の予防、治療、または改善：疾患の「予防」とは、疾患の完全な発症を阻害することを指す。「治療すること」とは、疾患または病的状態の徴候または症状をそれが発症し始めた後に改善する治療的介入を指す。「改善する」とは、疾患の徴候または症状の数または重症度の低減を指す。

化学療法としては、腫瘍、新生物、がん、及び乾癬などの異常な細胞増殖を特徴とする疾患を治療するための治療的有用性を備えた化学剤（細胞毒性剤など）による治療が挙げられる。

本明細書で使用される場合、組換え体は一般に以下を指す：組換え核酸またはタンパク質とは、天然に存在しない配列を有するか、または配列の２つの他の方法で分離されたセグメントの人工的な組み合わせによって作製される配列を有するものである。この人工的な組み合わせは、化学合成によって、または核酸の単離されたセグメントの人工的な操作によって、例えば、遺伝子工学技術によってしばしば達成される。

本明細書で使用される場合、一般的に存在する核酸塩基の以下の略語を使用する。「Ａ」はアデノシン、「Ｃ」はシトシン、「Ｇ」はグアノシン、「Ｔ」はチミジン、「Ｕ」はウリジンを指す。

本明細書で使用される「白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）」または「白血球（ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌ）」という用語は、単球、好中球、好酸球、好塩基球、及びリンパ球を含む任意の免疫細胞を指す。本明細書で使用される「リンパ球」という用語は、リンパ球に一般的に見られる細胞を指し、ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）、Ｔ細胞、及びＢ細胞を含む。上記の免疫細胞型をさらなるサブセットに分割することができることは、当業者によって理解されるであろう。

本明細書で使用される「腫瘍浸潤性白血球」という用語は、固形腫瘍に存在する白血球を指す。

本明細書で使用される「血液試料」という用語は、血漿、血液から単離された血球などの血液から調製された任意の試料を指す。

本明細書で使用される「精製された試料」という用語は、１つ以上の細胞サブセットが濃縮されている任意の試料を指す。試料は、サイズ、タンパク質発現などの特性に基づいて細胞を除去または単離することによって精製され得る。

薬学的に許容されるビヒクル：本開示において有用な薬学的に許容される担体（ビヒクル）は従来のものである。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７５）は、１つ以上の治療用組成物、及び追加の薬剤の医薬送達に適した組成物及び製剤について説明している。

一般に、送達に適した担体またはビヒクルの性質は、使用される特定の投与様式に依存する。例えば、非経口製剤は、通常、ビヒクルとして、水、生理食塩水、平衡塩類溶液、デキストロース水溶液、グリセロールなどのような薬学的及び生理学的に許容される流体を含む注射可能な流体を含む。固体組成物（例えば、粉末、丸剤、錠剤、またはカプセル形態）の場合、従来の非毒性固体担体としては、例えば、医薬品グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、またはステアリン酸マグネシウムが挙げられる。生物学的に中性の担体に加えて、投与される医薬組成物は、湿潤剤または乳化剤、防腐剤、及びｐＨ緩衝剤など、例えば酢酸ナトリウムまたはソルビタンモノラウレートなどの少量の非毒性補助物質を含んでもよい。

いくつかの実施形態では、組成物は、溶液、懸濁液またはその他の形態のいずれかで、以下のうちの１つ以上を含み得る：ＤＭＳＯ、滅菌希釈液、例えば、注射用水、生理溶液、好ましくは生理食塩水、リンゲル液、等張性塩化ナトリウム、不揮発性油、例えば、合成のモノまたはジグリセリド（溶媒または懸濁媒体として機能し得る）、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、または他の溶媒等、抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン、抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム、キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸、緩衝液、例えば、酢酸塩、クエン酸塩、またはリン酸塩、ならびに等張性調節のための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。

本明細書に記載の組成物及び方法が治療し得る疾患としては、ウイルス感染、酵母感染、真菌感染、原虫感染及び／または細菌感染などの微生物感染が挙げられる。

例示的な細菌感染としては、病原性細菌種であるバクテロイデス属、クロストリジウム属、連鎖球菌、ブドウ球菌属、シュードモナス属、ヘモフィルス属、レジオネラ菌、マイコバクテリウム属、エシェリキア属、サルモネラ属、シゲラ属（赤痢菌）、またはリステリア属のうちの１つ以上によって引き起こされる感染が挙げられる。

「ウイルス感染症」とは、体内にウイルスが存在することによって引き起こされる感染症を意味する。ウイルス感染症としては、慢性または持続性のウイルス感染症が挙げられ、これは、宿主に感染し得、致命的となる前に、通常は数週間、数か月、または数年という長期間にわたって宿主の細胞内で増殖し得るウイルス感染症である。本発明に従って治療され得る慢性感染症を引き起こすウイルスとしては、例えば、ヒト乳頭腫ウイルス（ＨＰＶ）、単純ヘルペス、及び他のヘルペスウイルス、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎のウイルス、ならびに他の肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、及びはしかウイルス（全てが重要な臨床疾患を生じ得る）が挙げられる。感染が長引くと、最終的には疾患の誘発につながる場合があり、例えば、Ｃ型肝炎ウイルスの肝臓癌の場合、患者にとって致命的となり得る。本発明に従って治療され得る他の慢性ウイルス感染症としては、エプスタインバーウイルス（ＥＢＶ）、ならびに腫瘍に関連し得るウイルスなどの他のウイルスが挙げられる。

本明細書に記載の活性化ＮＫ細胞組成物及び方法で治療または予防され得るウイルス感染の例としては、限定するものではないが、レトロウイルス（例えば、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）タイプＩ及びＩＩならびにヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タイプＩ及びＩＩ、エプスタインバーウイルス及びサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルスウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、及びニューモウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コロナウイルス、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、及び日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルソミオウイルス（例えば、センダイウイルス及びインフルエンザウイルスＡ、Ｂ及びＣ）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス及びＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、ルベラウイルス）、及びラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、によって引き起こされるウイルス感染症が挙げられる。ウイルス感染の治療及び／または予防には、限定するものではないが、当該感染に関連する１つ以上の症状の緩和、ウイルス複製及び／もしくはウイルス負荷の阻害、減少もしくは抑制、及び／または免疫応答の強化が挙げられる。

本明細書で使用される場合、免疫不全とは、免疫系の少なくとも１つの本質的な機能を欠いていることを意味する。本明細書で使用される場合、「免疫不全」対象（ヒトなど）とは、免疫系の特定の構成要素を欠くか、または免疫系の特定の構成要素（例えば、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞またはマクロファージなど）の機能を欠く対象である。場合によっては、免疫不全の対象は、機能的な免疫細胞（Ｂ細胞、Ｔ細胞またはＮＫ細胞など）の発達を防止または阻害する１つ以上の遺伝的変化を含む。いくつかの例では、遺伝的変化はＩＬ１７またはＩＬ１７受容体にある。

本明細書で使用される場合、免疫抑制とは、免疫系の活性または機能の低下を指す。対象は、例えば、免疫抑制剤化合物による治療に起因して、または疾患もしくは障害の結果として、免疫抑制され得る（例えば、ＨＩＶ感染または遺伝的欠陥に起因する免疫抑制）。場合によっては、免疫抑制は、Ｔ細胞などの機能的な免疫細胞の発達を防止または阻害する遺伝子変異の結果として発生する。

本明細書で使用される場合、インターロイキン８（ＩＬ８）は、炎症反応の主要なメディエーターであるＣＸＣケモカインファミリーのメンバーである。ＩＬ８はいくつかの細胞型から分泌され、走化性因子及び強力な血管新生因子として機能する。ヒトＩＬ８は、マウスＣＸＣＬ１及びＣＸＣＬ２と機能的に等価である。ＩＬ８のヌクレオチド及びアミノ酸配列は公的に入手可能である。例えば、ヒトＩＬ８配列は、ＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ ３５７６として見出され得る。

本明細書で使用される場合、インターロイキン１７Ａ（ＩＬ１７Ａ）は、活性化されたＴ細胞によって産生される炎症性サイトカインである。ＩＬ１７のヌクレオチド及びアミノ酸配列は、公的に入手可能である。例えば、ヒト及びマウスのＩＬ１７Ａ配列は、それぞれＮＣＢＩ Ｇｅｎｅ ＩＤ ３６０５及びＧｅｎｅ ＩＤ １６１７１として見出され得る。

本発明のいくつかの実施形態では、「治療有効量」とは、本発明の組成物を投与されていない動物または動物のグループ（例えば、２、３、５、１０またはそれ以上の動物）におけるウイルス力価または微生物力価と比較して、活性化細胞組成物を投与され、本明細書に記載の関連する方法で治療された、対象／患者／動物において、ウイルス力価または微生物力価の少なくとも２．５％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２５％、少なくとも３５％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の減少をもたらす、本明細書に記載の活性化細胞組成物の量である。

有効量の活性化リンパ球細胞組成物及び本明細書に記載の関連する方法で治療され得るがん及び増殖性障害の種類の例としては、限定するものではないが、白血病（例えば、骨髄芽球性、前骨髄細胞性、骨髄単球性、単球性、赤白血病、慢性骨髄細胞性（顆粒球性）白血病、及び慢性リンパ球性白血病）、リンパ腫（例えば、ホジキン病及び非ホジキン病）、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨形成性肉腫、血管肉腫、内皮肉腫、ユーイング腫瘍、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、腎細胞癌、肝細胞腫、ウィルムス腫瘍、頸部癌、子宮癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌腫、神経膠腫、星状細胞腫、乏突起膠腫、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、異形成及び過形成が挙げられる。がんの治療及び／または予防としては、限定するものではないが、がんに関連する１つ以上の症状の緩和、がんの進行の阻害または低減、がんの退行の促進、及び／または免疫応答の促進が挙げられる。

特定の他の実施形態では、「治療的に有効な量」とは、本発明の組成物を投与されていない患者（または動物）または患者（または動物）のグループにおけるがんの増殖または広がりに関して、本明細書に記載の組成物を投与された患者または動物において、少なくとも２．５％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２５％、少なくとも３５％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％、がんの増殖または広がりの低減をもたらす活性化されたリンパ球細胞組成物の量である。

いくつかの実施形態では、活性化されたリンパ球細胞組成物は、酵母または細菌感染を治療する方法において使用される。例えば、本明細書に記載の組成物及び方法は、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｚａｅｎａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍｏｔｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（Ｖｉｂｒｉｏ）ｆｅｔｕｓ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ ｊｅｊｕｎｉ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ ｔａｒｄａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ ｓｏｎｎｅｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ ｃａｒａｔｅｎｅｕｍ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｖｉｎｃｅｎｔｉｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ ｉｃｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ａｂｏｒｔｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｓｕｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｐｒｏｗａｚｅｋｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ ｔｓｕｔｓｕｇｕｍｕｓｈｉ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｓｐｐ．、Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、またはそれらの任意の組み合わせに関する感染を治療し得る。

特定の実施形態では、活性化されたリンパ球細胞組成物は、抗菌剤、抗ウイルス剤及び他の治療薬と同時に投与され得る。あるいは、活性化されたリンパ球細胞組成物は、抗菌剤、抗ウイルス剤、及び他の治療剤が投与される時間よりも前の選択された時間に投与され得る。

いくつかの実施形態では、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療する方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者はＨＩＶを有する。いくつかの実施形態では、患者はがんを有する。いくつかの実施形態では、患者は、ウイルス感染を有する。いくつかの実施形態では、患者は、細菌感染を有する。がん、ウイルス感染症及び細菌感染症の非限定的な例が本明細書に提供されている。

いくつかの実施形態では、免疫応答の増大を必要とする患者においてそれを行うための方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、活性化ＮＫ細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、患者におけるＨＩＶ複製または再生を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、ＨＩＶを有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む。本明細書で使用される場合、「ＨＩＶ複製または再生を阻害する」という用語は、ウイルスが検出可能なウイルス負荷を維持するために対象において複製または再生することができないことを指し得る。いくつかの実施形態では、この方法は、ＨＩＶに感染した対象のＨＩＶウイルス負荷を低減することを含み、これは、ＨＩＶを有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む。ウイルス負荷は、検出できないレベルまで、または治療前レベルと比較して少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９６、９７、９８、または９９％低減され得る。

いくつかの実施形態では、患者の腫瘍増殖を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、腫瘍を有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む。腫瘍の増殖は遅らせられるか、なくされ得る。いくつかの実施形態では、腫瘍は、もはや検出できないという点で寛解状態に置かれる。いくつかの実施形態では、腫瘍の転移は阻害される。

いくつかの実施形態では、ウイルスまたは細菌感染を有する対象における、ウイルスまたは細菌の複製または再生を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、この方法は、ウイルスまたは細菌の感染を有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、患者におけるウイルスまたは細菌の負荷は減少するか、または検出できない。ウイルスまたは細菌の負荷は、検出できないレベルまで、または治療前レベルと比較して少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９６、９７、９８、もしくは９９％低減され得る。

本明細書で提供されるように、いくつかの実施形態では、細胞組成物はまた、活性化されたガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）も含み得る。ＧＤＴ細胞はまた、ＮＫ細胞とは別の組成物で投与されてもよい。

本明細書で提供されるように、いくつかの実施形態では、細胞組成物はまた、インバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）も含み得る。ｉＮＫＴ細胞はまた、ＮＫ細胞及び／またはＧＤＴ細胞とは別の組成物で投与されてもよい。

本明細書で提供されるように、いくつかの実施形態では、細胞組成物はまた、インバリアントのＣＤ３^＋Ｔ細胞も含み得る。ＣＤ３^＋Ｔ細胞はまた、ＮＫ細胞、ＧＤＴ細胞及び／またはｉＮＫＴ細胞とは別の組成物で投与されてもよい。

いくつかの実施形態では、細胞は、細胞を、少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）と混合／インキュベート／接触させることによって活性化される。この混合／インキュベート／接触は、インビトロでまたは患者の外部で行ってもよく、これはエキソビボとも呼ばれる。いくつかの実施形態では、細胞は、活性化されないか、または対象への活性化剤の投与によって最初に活性化される。いくつかの実施形態では、細胞の活性化は、活性化された細胞が対象に投与された後、対象へのサイトカインの外因性投与によって維持または増強され得る。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ－１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１５である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２１である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、Ｆｌｔ３－Ｌである。いくつかの実施形態では、サイトカインは、幹細胞因子（ＳＣＦ）である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－７である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１２である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－１８である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、細胞組成物とエキソビボで、約６～２４時間インキュベート／混合／接触させられる。いくつかの実施形態では、細胞組成物とエキソビボでインキュベート／混合／接触させられるサイトカインの量は約１００～１０００ＩＵ／ｍｌである。

いくつかの実施形態では、対象は、リンパ球細胞組成物をその対象に投与する前に、プレコンディショニングされる。特定の理論に拘束されることなく、いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、対象自身の免疫細胞をリンパ球枯渇させ、その後患者に投与される新しい免疫細胞のための場所または空間を作り出す。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、リンパ球細胞組成物を投与する前に、少なくとも１つのリンパ抑制剤、化学療法剤、または免疫抑制剤を約１～約１０日間、３～約７日間、約１～約２日間投与することを含む。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、フルダラビン、シクロホスファミド、及び／またはインターフェロンアルファを投与することを含む。リンパ抑制剤または化学療法剤が、６ＴＧと、６－ＭＭＰと、クロファラビン、フルダラビン、及びシタラビンからなる群より選択される１つ以上のプリン類似体とのうちいずれか１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３に記載の方法。いくつかの実施形態では、リンパ抑制剤または化学療法剤の用量は、約５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲である。いくつかの実施形態では、化学療法剤または免疫抑制剤は、任意のシクロホスファミド、リツキシマブ、ステロイドまたはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、ステロイドは、グルココルチコイドステロイドである。いくつかの実施形態では、ステロイドは、プレドニゾンである。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、－７日目から－３日目までフルダラビンを投与することを含む。いくつかの実施形態では、フルダラビンは、約１５ｍｇ／ｍ^２／日の用量で投与される。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、－２日目及び－１日目にシクロホスファミドを投与することを含む。いくつかの実施形態では、シクロホスファミドの用量は、本明細書に提供されるとおりである。いくつかの実施形態では、プレコンディショニングは、－２日目及び－１日目にインターフェロンアルファを投与することを含む。いくつかの実施形態では、インターフェロンアルファの用量は、３×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日である。本明細書で使用される場合、「－１日目」という用語は、活性化された細胞組成物の投与の前の日数を指す。例えば、０日目は、ＮＫ細胞を含む細胞組成物が対象に投与される日と見なされる。したがって、「－１日目」とは、投与の前日を指す。「－２日目」とは、投与の２日前を指すなどである。いくつかの実施形態では、この方法は、細胞組成物の一部であり得る活性化ＮＫ細胞を０日目に投与することを含む。いくつかの実施形態では、活性化されたＧＤＴ細胞もまた投与される。それらは、同じ組成物の一部として、または別々に投与されてもよい。さらに、いくつかの実施形態では、患者はまた、０日目にＩＬ－２を投与される。ＩＬ－２は、例えば、静脈内または皮下に投与され得る。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、活性化された細胞組成物の投与後１日から約５日間、例えば、＋１日目、＋２日目、＋３日目、＋４日目及び＋５日目に投与される。ＩＬ－２はより長く投与されてもよい。「＋１日目」という用語等は、活性化された細胞組成物の投与後の日数を指す。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、約６×１０^６ＩＵ／ｍ^２の用量で投与される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２は、０日目以降、対象に投与されない。

いくつかの実施形態では、対象は、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）などの抗炎症薬を投与される。これらは、０日目の後、約１～約６０日間与えられてもよい。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤは、本明細書で提供されるものなどのＣｏｘ－２阻害剤である。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤはセレコキシブである。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤはイブプロフェンまたはナプロキセンである。いくつかの実施形態では、ＮＳＡＩＤは、リンパ球細胞組成物の投与後、約１４日～約６０日間投与される。

また本明細書では、ＮＫ細胞を活性化する方法であって、インビトロでＮＫ細胞を含む細胞組成物を、少なくとも１つのサイトカイン及び／または可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）と接触させることを含む方法も提供される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２である。いくつかの実施形態では、サイトカインは、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される。いくつかの実施形態では、サイトカインは、約６から約２４時間、細胞組成物と接触させられる。いくつかの実施形態では、細胞組成物と接触するサイトカインの量は、約１００Ｕ／ｍｌ～約１０００ＩＵ／ｍｌである。いくつかの実施形態では、この組成物はまた、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞も含み得る。細胞は、任意の供給源に由来し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞は末梢血から分離される。それらは、例えば、白血球アフェレーシスによって分離され得る。

また、本明細書では、サイトカイン、及び／または活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物が提供される。いくつかの実施形態では、活性化された組成物は、ＩＬ－２活性化組成物である。いくつかの実施形態では、サイトカイン活性化組成物は、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせ活性化組成物である。いくつかの実施形態では、この活性化組成物は、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＮＫ細胞は、末梢血ＮＫ細胞である。いくつかの実施形態では、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、ＣＤ３^＋Ｔ細胞は、末梢血ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞である。

抗体との組み合わせ
例えば、活性化されたリンパ球細胞組成物は、選択されたがんの種類に特異的な抗体と同時に投与され得る。あるいは、活性化されたリンパ球細胞組成物は、選択された癌タイプに特異的な抗体が投与される時間よりも前の選択された時間で投与されてもよい。選択された癌の種類に特異的な抗体としては、がんの治療のために承認された任意の抗体が挙げられる。例としては、乳癌に関してはトラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、リンパ腫に関してはリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、頭頸部扁平上皮癌に関してはセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）が挙げられる。

このような抗体剤の追加の例としては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例としては、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮｉｖｏｌｕｍａｂ）及びペムブロリズマブ／ラムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５（ＭｅｒｃｋのＫｅｙｔｒｕｄａ）として公知）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例としては、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）が挙げられる。他のチェックポイント阻害剤としては、抗ＣＴＬＡ－４抗体などのＣＴＬＡ－４のアンタゴニストが挙げられる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって販売されているＹｅｒｖｏｙ（商標）（イピリムマブ）である。他の例示的なＣＴＬＡ－４抗体としては、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＡＭＧＰ－２２４（Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）が挙げられる。免疫療法抗体を使用する例示的な治療レジメンは、実施例３に見出され得る。これらの抗体のいずれか２つとの組み合わせもまた、特定の事例において示され得る。図１に示すように、プレコンディショニング及びポストコンディショニングレジメンは、さまざまな細胞注入の選択肢とともに、この抗体治療に適用可能である（すなわち、抗体は細胞注入後ある時点で、注入後４～１４日、好ましくは注入後４～６日で投与される）。

治療用リンパ球組成物に使用される同種異系ＮＫ細胞の供給源
一般的に使用される同種異系ＮＫ細胞は、ハプロタイプ一致及び無関係のドナーＰＢＭＣから収集されたアフェレーシス産物である（Ｋｏｅｐｓｅｌｌ ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ（２０１３）５３（２）：４０４－１０）。

別の供給源は臍帯血（ＵＣＢ）であり、ＮＫ細胞は、ＣＤ３４＋前駆細胞から生成され、サイトカイン及び成長因子を使用して増殖及び分化を経て、それによって細胞溶解性ＮＫ細胞に成熟する（Ｓｐａｎｈｏｌｔｚ Ｊ．ｅｔ ａｌ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ（２０１１）６（６）：ｅ２０７４０、及びＡｒａｉ Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ（２００８）１０（６）：６２５－３２。）

ＣＤ３細胞
「ＣＤ３」という表現は、多分子Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の一部としてＴ細胞に発現され、ＣＤ３－イプシロン、ＣＤ３－デルタ、ＣＤ３－ゼータ、及びＣＤ３－ガンマという４つの異なる鎖で構成される抗原を指す。哺乳動物では、複合体は、ＣＤ３γ鎖、ＣＤ３δ鎖、及び２つのＣＤ３ε鎖を含む。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）及びζ鎖（ゼータ鎖）と会合して、Ｔリンパ球に活性化シグナルを生じる。ＴＣＲ、ζ鎖、及びＣＤ３分子が一緒になってＴＣＲ複合体を構成する。ヒトＣＤ３－イプシロン（ｈＣＤ３ε）は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ０７７６６．２に記載されるようなアミノ酸配列を含む。ヒトＣＤ３－デルタ（ｈＣＤ３δ）は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｐ０４２３４．１に記載されるようなアミノ酸配列を含む。ＣＤ３ Ｔ細胞共受容体は、細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＤ８＋ナイーブＴ細胞）及びＴヘルパー細胞（ＣＤ４＋ナイーブＴ細胞）の両方を活性化するのに役立つ。

ＣＤ３γ、ＣＤ３δ、及びＣＤ３ε鎖は、単一の細胞外免疫グロブリンドメインを含む免疫グロブリンスーパーファミリーの関連性の高い細胞表面タンパク質である。ＣＤ３鎖の膜貫通領域は、アスパラギン酸残基を含んでいるため、負に帯電しており、これは、これらの鎖が正に帯電したＴＣＲ鎖と会合することを可能にする特性である。

ＣＤ３分子の細胞内尾部は、ＴＣＲのシグナル伝達能力に不可欠な免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）として公知の単一保存モチーフを含む。ζ鎖の細胞内尾部には３つのＩＴＡＭモチーフが含まれている。

がん及びＮＫ細胞、同種異系ＮＫ細胞の活性化
理論に拘束されることを望まないが、本明細書に記載の多面的アプローチ及び治療レジメンは、Ｔ制御性細胞誘導の免疫抑制効果を克服すると考えられ、及び特定の他の免疫応答性細胞と組み合わせた、活性化リンパ球細胞、例えば活性化ＮＫ細胞との組み合わせは、特定の実施形態では、以下でさらに説明するように、増強された治療効果を提供すると考えられている。活性化されたリンパ球細胞、例えば、活性化ＮＫ細胞を通じた活性化及び免疫トレーニングは、患者においてインビボで生じ、及びインビトロで培養する必要はないことに注意のこと。

ガンマデルタＴ細胞及び活性化ガンマデルタＴ細胞
ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）は、表面に別個のＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を保有するＴ細胞の小さなサブセットを表している。Ｔ細胞の大部分は、α（アルファ）及びβ（ベータ）－ＴＣＲ鎖と呼ばれる２つの糖タンパク質鎖で構成されるＴＣＲを有する。ただし、γδＴ細胞では、ＴＣＲは１つのγ鎖及び１つのδ鎖で構成されている。このグループのＴ細胞はαβＴ細胞よりもかなり一般的ではないが（総Ｔ細胞の５％）、上皮内リンパ球（ＩＥＬ）として公知のリンパ球の集団内の腸粘膜に最も豊富に見られる。γδＴ細胞を活性化する抗原分子はまだ広く知られていない。ただし、γδＴ細胞はＭＨＣに制限されておらず、抗原提示細胞上のＭＨＣ分子によってペプチドが提示される必要はなく、タンパク質全体を認識可能であると思われる。しかし、ＭＨＣクラスＩＢ分子を認識する場合もある。末梢血の主要なγδＴ細胞集団を構成する、ヒトＶ．ガンマ．９／Ｖ．デルタ．２Ｔ細胞は、イソペンテニルピロリン酸前駆体である小さな非ペプチド性微生物代謝物であるＨＭＢ－ＰＰに特異的かつ迅速に応答するという点で独特である。

ガンマデルタＴ細胞を活性化するための方法は、例えば、Ｄｅｎｉｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１４ Ｎｏｖ １５；２０（２２）：５７０８－５７１９に記載されている。本明細書に記載されている方法はいずれも支持細胞系を利用しないが、代わりにサイトカイン及び／または細胞のビーズ活性化に依存し、これは、汚染のリスクの低下、活性化の容易さ、及び患者に対する活性化細胞の送達速度の向上という点で利点を提供する。

ガンマデルタＴ細胞を活性化するための活性化カクテルの例としては、以下が挙げられる：
５００ＩＵ／ｍｌ ＩＬ－２
２０ｎｇ／ｍｌ ＨＭ－ＢＰＰ
ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔ細胞活性化ビーズ（１：２というビーズと細胞の比率）
２４時間のインキュベーション。

細胞供給源
末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、廃棄された非特定化白血球減少フィルター（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ）から得られた試料のＦｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離、またはインフォームドコンセントを得た健康なボランティアからの献血によって分離され得る。細胞集団、供給源、及び所望の細胞型を選択または濃縮するための方法の説明は、例えば、米国特許第９，３４７，０４４号に見出され得る。哺乳動物を治療するための本明細書に記載の方法における使用のための細胞の集団は、ヒト細胞のように、適合した種でなければならない。細胞は、動物、例えば、ヒトの患者から得てもよい。細胞が動物から得られた場合、それらは最初に培養で、例えば形質転換によって樹立された場合があり、またはより好ましくは、それらは予備精製法に供された場合がある。例えば、細胞集団は、細胞表面マーカーの発現に基づく正または負の選択によって操作されてもよく、インビトロもしくはインビボで１つ以上の抗原で刺激されてもよく、インビトロもしくはインビボで１つ以上の生物学的修飾因子で処理されてもよく、またはこれらのいずれかまたは全ての組み合わせであってもよい。例示的な実施形態では、細胞集団を、非Ｔ細胞及び／または特定のＴ細胞サブセットの枯渇のために陰性選択に供する。陰性選択は、ＣＤ１９及びＣＤ２０、単球マーカーＣＤ１４、ＮＫ細胞マーカーＣＤ５６などのＢ細胞マーカーを含むさまざまな分子の細胞表面発現に基づいて実行され得る。あるいは、細胞集団を、非ＣＤ３４＋造血細胞及び／または特定の造血細胞サブセットの枯渇のために陰性選択に供してもよい。陰性選択は、例えば、ＭＡＣＳまたはカラム分離などを通して他の細胞型の分離に使用され得る、抗体のカクテル（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１６、ＣＤ１９、ＣＤ５６、ＣＤ１２３、及びＣＤ２３５ａ）など、さまざまな分子の細胞表面発現に基づいて実行され得る。

細胞の集団としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、混合集団を含む全血またはその画分、脾臓細胞、骨髄細胞、腫瘍浸潤リンパ球、白血球アフェレーシスによって得られた細胞、生検組織、リンパ節、例えば、腫瘍から流入するリンパ節が挙げられる。適切なドナーとしては、免疫化されたドナー、免疫化されていない（ナイーブ）ドナー、治療されたまたは未治療のドナーが挙げられる。「治療された」ドナーとは、１つ以上の生物学的修飾剤に曝露されたドナーである。「未治療」のドナーとは、１つ以上の生物学的修飾剤に曝露されていない。

Ｔ細胞を含む細胞の集団を取得する方法は、当該技術分野で周知である。例えば、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、当該技術分野で公知の方法に従って記載されるように得ることができる。そのような方法の例は、実施例に記載されており、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）、Ｂｉｓｗａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９０）、Ｂｉｓｗａｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）によって考察されている。

対象から細胞試料を取得し、それを所望の細胞型について濃縮することも可能である。例えば、ＰＢＭＣは、本明細書に記載されるように血液から単離され得る。向流遠心分離（水簸）を使用して、ＰＢＭＣからＴ細胞を濃縮し得る。細胞は、所望の細胞型の細胞表面のエピトープに結合する抗体による分離及び／または活性化などのさまざまな技術を使用して他の細胞から分離され得、例えば、一部のＴ細胞分離キットでは、抗体結合ビーズを使用して細胞を活性化し、次いで同じビーズでカラム分離を行う。使用され得る別の方法としては、細胞表面マーカーに対する抗体を使用して、受容体の関与によって細胞を活性化することなく特定の細胞型を選択的に濃縮する陰性選択が挙げられる。

骨髄細胞は、腸骨稜、大腿骨、脛骨、脊椎、肋骨、または他の骨髄腔から得てもよい。骨髄は患者から取り出して、さまざまな分離と洗浄手順によって分離し得る。骨髄細胞を分離するための公知の手順は、以下のステップを含む：ａ）骨髄懸濁液を３つの画分に遠心分離し、中間画分、すなわちバフィーコートを収集すること、ｂ）ステップ（ａ）のバフィーコート画分を、分離液、通常はＦｉｃｏｌｌ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｆｉｎｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ ＡＢの商標））でもう一度遠心分離し、骨髄細胞を含む中間画分を収集する、ｃ）再輸血可能な骨髄細胞の回収のために、ステップ（ｂ）から収集された画分を洗浄すること。

Ｔ細胞が豊富な細胞の集団を使用したい場合、そのような細胞の集団は、連続フローセルセパレーターを使用する白血球アフェレーシス及び機械的アフェレーシスによって、細胞の混合集団から得てもよい。例えば、Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ－Ｈｙｐａｑｕｅ（商標）勾配での分離、Ｐｅｒｃｏｌｌ勾配での分離、または水簸など、任意の公知の方法でバフィーコートから分離され得る。

ＮＫ細胞の表現型分析。ＰＢＭＣは、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ １０５（８）：３０５３－３０５８（２００８））によって以前に説明されたように、蛍光色素結合抗体を使用したフローサイトメトリー分析のために染色され得る。Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒからの次のタンパク質を検出するための抗体を利用してもよい：（ＣＤ５６（Ｎ９０１）、ＮＫＧ２Ａ（Ｚ１９９）、ＮＫｐ４４（Ｚ２３１））、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＣＤ３ゼータ（ＵＣＨＴ１）、ＣＤ１６（３Ｇ８）、ＫＩＲ２ＤＬ２／３（ＣＨ－Ｌ）、ＫＩＲ３ＤＬ１（ＤＸ９）、ＮＫｐ４６（９Ｅ２）、ＮＫｐ３０（ｐ３０－１５）、ＣＤ１１ａ（Ｇ４３－２５Ｂ）、ＣＤ１１ｂ（ＩＣＲＦ４４）、ＣＤ１１ｃ（Ｂ－ｌｙ６）、ＮＫＧ２Ｄ（１Ｄ１１）、ＣＤ１６１（ＤＸ１２）、ＤＮＡＭ－１（ＤＸ１１）、ＣＤ５７（ＮＫ－１）、ＣＤ２５（Ｍ－Ａ２５１）、ＩＦＮ－γ（Ｂ２７）、ＴＮＦ－α（Ｍａｂ１１）、ＣＤ１０７ａ（Ｈ４Ａ３）、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ａ（ＣＢ９）、Ｇｒａｎｚｙｍｅ Ｂ（ＧＢ１１））、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ（ＣＤ１４（ＨＣＤ１４）、ＣＤ１９（ＨＩＢ１９）、ＣＤ２（ＲＰＡ－２．１０）、２Ｂ４（Ｃ１．７）、ＮＴＢ－Ａ（ＮＴ－７）、ＣＲＡＣＣ（１６２．１）、ＣＤ６９（ＦＮ５０））、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（ＫＩＲ２ＤＬ１（ＨＰ－ＭＡ４）、Ｐｅｒｆｏｒｉｎ（ｄＧ９））、及びＲ＆Ｄ（ＮＫＧ２Ｃ（１３４５９１））。

いくつかの実施形態では、以下の実施形態が提供される：
１．ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療する方法であって、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。

２．活性化ＮＫ細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む、免疫応答の増大を必要とする前記患者においてそれを行うための方法。

３．患者においてＨＩＶ複製を阻害する方法であって、ＨＩＶを有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む、前記方法。

４．患者の腫瘍増殖を阻害する方法であって、前記腫瘍を有する前記患者に対して、前記患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む前記方法。

５．ウイルスまたは細菌感染を有する対象におけるウイルスまたは細菌の複製または再生を阻害する方法であって、前記ウイルスまたは細菌感染を有する前記対象に対して、前記患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む、前記方法。

６．前記細胞組成物が、活性化ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）をさらに含む、実施形態１～５のいずれか１項に記載の方法。

７．前記細胞組成物がインバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）をさらに含む、実施形態１～５のいずれか１項に記載の方法。

８．前記細胞組成物がＣＤ３^＋Ｔ細胞をさらに含む、実施形態１～５のいずれか１項に記載の方法。

９．前記患者に投与する前に、前記リンパ球細胞組成物が、前記細胞と、少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）とを、混合／インキュベート／接触させることによって活性化される、実施形態１～８のいずれかに記載の方法。

１０．前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、実施形態９に記載の方法。

１１．前記サイトカインが、前記細胞組成物と約６～２４時間インキュベート／混合／接触させられる、実施形態１０に記載の方法。

１２．前記細胞組成物と共にインキュベートされるサイトカインの量が、約１００～１０００ＩＵ／ｍｌである、実施形態１０に記載の方法。

１３．実施形態１～１２のいずれかに記載の方法であって、リンパ球細胞組成物を投与する前に、少なくとも１つのリンパ抑制剤、化学療法剤、または免疫抑制剤を３～５日間投与することによって、前記リンパ球細胞組成物を投与する前に前記患者をプレコンディショニングすることをさらに含む、前記方法。

１４．前記リンパ抑制剤または化学療法剤が、６ＴＧと、６－ＭＭＰと、クロファラビン、フルダラビン、及びシタラビンからなる群より選択される１つ以上のプリン類似体とのうちいずれか１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１３に記載の方法。

１５．前記リンパ抑制剤または化学療法剤の用量が、約５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲である、実施形態１４に記載の方法。

１６．前記化学療法剤または免疫抑制剤が、任意のシクロホスファミド、リツキシマブ、ステロイドのいずれかまたはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１３に記載の方法。

１７．前記ステロイドが糖質コルチコイドステロイドである、実施形態１６に記載の方法。

１８．前記ステロイドがプレドニゾンである、実施形態１７に記載の方法。

１９．前記化学療法剤または免疫抑制剤の用量が約２０ｍｇ／ｍ２～約１０００ｍｇ／ｍ２の範囲である、実施形態１６に記載の方法。

２０．前記リンパ球細胞組成物を投与する２日前及び／または１日前に、約１×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日～約１０×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日の用量でインターフェロンアルファ（ＩＦＮ－α）、またはその生物学的等価物を前記患者に投与することをさらに含む、実施形態１３に記載の方法。

２１．前記リンパ球細胞組成物の投与日及び前記リンパ球細胞組成物の投与後の初日に前記患者にＩＬ－２を投与すること、ならびに任意選択で、１用量あたり約３～６×１０^６ＩＵ／ｍ^２の投薬量で、前記リンパ球細胞組成物の投与後３～１４日の追加日数の間、継続することをさらに含む、実施形態１～２０のいずれかに記載の方法。

２２．前記リンパ球細胞組成物の投与日に、及びリンパ球性細胞組成物の投与後少なくとも１４日～６０日の間継続して、ＣＯＸ－２阻害剤または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはそれらの組み合わせを前記患者に投与することをさらに含む、実施形態１～２１のいずれかに記載の方法。

２３．前記ＣＯＸ－２阻害剤がセレコキシブまたはロフェコキシブであり、及び非ステロイド性抗炎症薬が、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム及びナブメトンからなる群より選択される、実施形態２２に記載の方法。

２４．前記活性化されたＮＫ細胞が前記患者に対して同種異系である、実施形態１～２３のいずれかに記載の方法。

２５．前記ＮＫ細胞が前記患者とＨＬＡ適合されていない、実施形態１～２４のいずれかに記載の方法。

２６．活性化された細胞の投与量が、約３～５０×１０^６の範囲である、実施態様１～２５のいずれかに記載の方法。

２７．実施形態１～２６のいずれかに記載の方法であって、前記ウイルス感染が、レトロウイルス（例えば、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）タイプＩ及びＩＩ及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タイプＩ及びＩＩ、エプスタインバーウイルス及びサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルスウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、及びニューモウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コロナウイルス、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、及び日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルソミオウイルス（例えば、センダイウイルス及びインフルエンザウイルスＡ、Ｂ及びＣ）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス及びＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、ルベラウイルス）、及びラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、及びそれらの任意の組み合わせによって引き起こされるウイルス感染症からなる群より選択される、前記方法。

２８．前記がんが、急性白血病、急性骨髄細胞性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄細胞性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤血球性白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（または顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性赤血球血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度）、多発性骨髄腫、ウォルデンストロムマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、毛様細胞白血病及び骨髄異形成、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される血液がんまたは造血性のがんである、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。

２９．前記がんが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄質甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、脈絡膜癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、及びＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫など）など）、神経芽細胞腫（多形性神経芽腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移からなる群より選択される固形腫瘍である、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。

３０．前記細菌感染が、病原性細菌種であるバクテロイデス属、クロストリジウム属、連鎖球菌、ブドウ球菌属、シュードモナス属、ヘモフィルス属、レジオネラ菌、マイコバクテリウム属、エシェリキア属、サルモネラ属、シゲラ属（赤痢菌）、またはリステリア属のうちの１つによって引き起こされる、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。

３１．移植片対腫瘍（ＧＶＴ）または移植片対ウイルス（ＧＶＶ）が患者で増加する一方で、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が、減少または排除される、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。

３２．前記患者がリンパ球性またはリンパ芽球性の白血病またはリンパ腫を有する場合、活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物の投与後には、ＩＬ－２の投与が、禁忌であり、投与されない、実施形態１～２０のいずれか１項に記載の方法。

３３．実施形態１～２６のいずれかに記載の方法であって、活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物の投与後４～１４日の時間枠で、前記患者に免疫チェックポイント阻害剤、例としては、任意の１つまたは２つのチェックポイント阻害剤の組み合わせ、例としては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例としては、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂのニボルマブ）、ペムブロリズマブ／ラムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５（ＭｅｒｃｋのＫｅｙｔｒｕｄａ）としても公知）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例としては、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ－００１０７１８ Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体、例としては、抗ＣＴＬＡ４抗体Ｙｅｒｖｏｙ^ＴＭ（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ－２２４（Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、または乳癌の場合は腫瘍特異的抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、リンパ腫の場合はリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、またはセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）がさらに投与される、前記方法。

３４．実施形態１～２２のいずれかに記載の方法であって、前記治療または免疫応答の増大が、前記患者が改善または安定／非進行性の疾患を示す限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回という時間枠で、定期的に繰り返される、前記方法。

３５．前記患者に対する活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物を投与する前に、同じ日に、ただし少なくとも約２～６時間前に、１つまたは２つの抗ヒスタミン薬を前記患者に投与することをさらに含む、実施形態１～２６のいずれかに記載の方法。

３６．ＮＫ細胞を活性化する方法であって、前記ＮＫ細胞を含む細胞組成物を、インビトロで少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）と接触させることを含む、前記方法。

３７．前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、実施形態３６に記載の方法。

３８．前記サイトカインが約６時間～約２４時間、前記細胞組成物と接触される、実施形態３６に記載の方法。

３９．前記細胞組成物と接触するサイトカインの量が、約１００Ｕ／ｍｌ～約１０００ＩＵ／ｍｌである、実施形態３６に記載の方法。

４０．前記組成物が、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）をさらに含む、実施形態３６～３９のいずれか１項に記載の方法。

４１．前記細胞組成物がインバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）をさらに含む、実施形態３６～４０のいずれか１項に記載の方法。

４２．前記細胞組成物がＣＤ３＋Ｔ細胞をさらに含む、実施形態３６～４１のいずれか１項に記載の方法。

４３．前記ＮＫ細胞、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞が末梢血から分離される、実施形態３６～４２のいずれか１項に記載の方法。

４４．サイトカイン、及び任意選択で、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。

４５．実施形態４４に記載の組成物であって、前記サイトカイン活性化組成物が、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせ活性化組成物である、前記組成物。

４６．前記組成物がガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞をさらに含む、実施形態４４及び４５に記載の組成物。

４７．前記ＮＫ細胞が末梢血ＮＫ細胞である、実施形態４４～４６のいずれか１項に記載の組成物。

４８．前記ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、ＣＤ３^＋Ｔ細胞が、末梢血ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞である、実施形態４４～４７のいずれか１項に記載の組成物。

４９．サイトカイン、及び任意選択で、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。

５０．サイトカイン、及び任意選択で、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための医薬の調製のための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。

以下の実施例は、本明細書に記載の化合物、組成物、及び方法の例示であるが、これらに限定されない。当業者に公知の他の適切な改変及び適合は、本明細書で提供される実施形態の範囲内である。

実施例１
がん患者、及びＨＩＶを含むウイルス感染症を治療するための選択肢
最初のステップとして、ＮＫ細胞は、任意の適切な商業的供給源から取得または精製され、本明細書及び上記のセクションで説明されているように、細胞は同種異系である。

本明細書に記載されるように、治療的細胞組成物を患者に投与するための４つの異なる注入の選択肢が存在する。これらの治療用細胞組成物には、以下の細胞成分が含まれる。

活性化されたＮＫ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋活性化されたＧＤＴ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋活性化されたＧＤＴ細胞＋ｉＮＫＴ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋ＣＤ３Ｔ細胞。

ステージ１：患者のプレコンディショニングの選択肢
図１に示すように、患者の状態及び病期に応じて、患者は、表１～５に列挙されている次のプレコンディショニングプロトコルの１つを使用して事前処置される。０日目という言及は注入日である（例えば、活性化されたリンパ球細胞組成物の注入）。

特定の実施形態では、表１～５のいずれかの前治療レジメンに続いて、次に、患者は、－２日目及び－１日目にインターフェロンアルファ（ＩＦＮ－α）３ｘ１０^６ＩＵ／ｍ^２／日 皮下（ＳＣ）注射で治療される。ＩＦＮ－αの量は、ＳＣ注射による約１×１０^６～約５×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日の範囲であり得る。

いくつかの実施形態では、この方法は、患者に対する活性化ＮＫ細胞を含むリンパ球細胞組成物を投与する、同じ日に、ただし少なくとも約２～６時間前に、１つまたは２つの抗ヒスタミン薬（標準用量では、２５ｍｇのプロメタジン及び２５ｍｇのジフェンヒドラミン）を患者に投与することをさらに含む。

リンパ球治療細胞のインビトロ活性化
特定の実施形態では、活性化カクテルは、ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８及びＩＬ－２１を単独で、または任意の組み合わせで含んでもよい。活性化プロセスは通常一晩で、最低１２時間、通常２４時間以内である。

特定の実施形態では、可溶性ＦＧＦ１受容体は、活性化剤（ＦＧＦＲ１、具体的にはＦＧＦ１受容体の細胞外ドメイン、図４に示されるように構築物から精製される）として、１リットルあたり３３．３３ナノモル（すなわち１ｍｌあたり３３．３３ピコモル）という例示的な濃度で用いられる。リンパ球細胞を、ＦＧＦ１受容体の細胞外ドメインに曝露すると、ＣＤ５６＋ＮＫ細胞集団を活性化するように機能し、それらがほぼ純粋な細胞毒性ＮＫ細胞組成物（例えば、少なくとも８０％の細胞毒性ＮＫ細胞）になるように駆動する（細胞毒性及び調節性ＮＫ細胞の混合集団とは対照的に）。活性化カクテルは、細胞が単離された後に保持される緩衝液（または培地）に簡単に加えられ得る。特定の実施形態では、新鮮な白血球アフェレーシス物質から新たに単離された細胞は、ＮＫ細胞の供給源として利用される。しかしながら、特定の実施形態では、他の細胞収集／分離及び／または保存シナリオは、細胞供給源として利用され得る。例えば、細胞は、活性化ステップの前またはより好ましくは後に凍結保存されてもよい。ＦＧＦ１受容体の細胞外ドメインを使用する活性化は、ＮＫ細胞、ＧＤＴ細胞、及びｉＮＫ細胞を含む、本明細書に記載のリンパ球細胞のいずれかを活性化するために使用され得る。

新鮮な細胞材料を利用する例示的な方法：
〇新たに動員された白血球アフェレーシス材料は、「標的細胞集団」の分離のために処理される（上記の４つの選択肢のいずれか）。
〇単離された細胞は、活性化カクテルを含む緩衝液または培地に懸濁される。５～２０％のＨＳＡ（ヒト血清アルブミン）を含むＰＢＳが典型的な緩衝液であるが、他の同様の選択肢も利用され得る。
〇細胞は１２時間以上後に洗浄され、注射可能な溶液に再び懸濁される。通常、この緩衝液は、５～２０％ＨＳＡを含むＰＢＳであるが、任意の適切な溶液であってもよい。特定の実施形態では、患者自身の血清または血漿を、注入媒体として利用し得る。
〇表１～５に記載されているプレコンディショニングプロセスの後、任意の－２日目及び－１日目のインターフェロンアルファ治療とともに、細胞が患者に注入される。

リンパ球（ＮＫまたは他）がＩＬ－２またはＩＬ－２を含む他の組み合わせカクテルでインビトロで一旦、活性化されると、それらの細胞毒性効力は、ＩＬ－２に依存するようになることに留意されたい。これは、患者の血液中に特定のレベルのＩＬ－２がないと、活性化されたリンパ球（ＮＫまたはその他）がその効力を失い始めることを意味する。したがって、ＩＬ－２がインビトロで活性化カクテルで利用される場合、患者は細胞注入の日にＩＬ－２注射を受け、細胞注入後少なくとも４日間（最大１４日間）継続すべきである。典型的なＩＬ－２の投与量は、皮下注射として１日あたり約３００万～６００万ＩＵ／ｍ^２である。

さらに、ＩＬ－２活性化は、リンパ球性またはリンパ芽球性白血病またはリンパ腫の患者のＮＫ細胞または他の治療用組成物を活性化するためには利用されない（図１、リンパ芽球性白血病またはリンパ腫患者の選択肢を参照のこと）。これらのリンパ球性またはリンパ芽球性白血病またはリンパ腫患者の治療用細胞組成物の活性化にＩＬ－２を使用しないというこの異なる経過は、これらのがんをオーバードライブに陥らせることを回避し、治療用細胞組成物の効力を含む。したがって、図１に示すように、これらの患者にはＩＬ－２の活性化は利用されない。

ステージ２：病期または状態に応じた、患者への注入のためのリンパ球細胞集団の選択肢。

図１に示すように、４つの異なる細胞集団、すなわち「細胞カクテル」があり、疾患と病期に応じて、「活性化リンパ球組成物」として注入に利用される。これらの組成物及びバリエーションのさまざまな構成を以下に説明する。

さらに、これらの活性化リンパ球組成物の特定の成分または実施形態は、キットで提供され得る。例えば、４つのリンパ球組成物のいずれかを、凍結組成物として提供してもよく、キットとして、単独で、またはプレコンディショニングまたはポストコンディショニングステップからの他の薬剤の個別の容器、及び任意の使用説明書と一緒にパッケージングしてもよい。

いくつかの実施形態はまた、キット内の前述の細胞組成物のいずれかに向けられている。いくつかの実施形態では、このキットは、アンプル、使い捨て注射器、カプセル、バイアル、チューブなどを含み得る。いくつかの実施形態では、このキットは、本明細書の実施形態の局所製剤を含む単回投与容器または複数回投与容器を含み得る。いくつかの実施形態では、各剤形容器は、１つ以上の単位用量を含み得る。いくつかの実施形態では、このキットは、アプリケータを含み得る。いくつかの実施形態では、このキットは、コンディショニング／治療の３つの段階に必要な全ての構成要素を含む。いくつかの実施形態では、細胞組成物は、防腐剤を有してもよいし、または防腐剤を含まなくてもよい（例えば、使い捨て容器内）

リンパ球細胞注入
リンパ球細胞注入の場合、例えばＮＫ細胞を使用して、０日目に、患者にインビトロで活性化された同種ＮＫ注入（１～５０×１０^６細胞／ｋｇ）を投与する。細胞の投与量は、１ｋｇあたり約１～５０００万細胞と大きく異なり得る。以下に記載されるように、リンパ球細胞注入混合物は、以下の組み合わせのいずれかを含み得る：
活性化されたＮＫ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋活性化されたＧＤＴ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋活性化されたＧＤＴ細胞＋ｉＮＫＴ細胞、または
活性化されたＮＫ細胞＋ＣＤ３Ｔ細胞。

１．「実質的に」純粋なＮＫ細胞の細胞集団
特定の実施形態では、実質的に純粋なＮＫ細胞集団（少なくとも約７５％のＮＫ細胞から約９８％のＮＫ細胞までの範囲の「ドナー同種異系ＮＫ細胞」）が、特定のがん患者における微小残存病変の治療に使用される。本質的に純粋なＮＫ細胞の分離は、ＣＤ１６^＋ＣＤ５６^＋ＮＫ細胞の陰性選択または陽性選択を介して、手動でまたはｃｌｉｎｉＭＡＣＳを使用して行ってもよい。ＮＫ細胞は一般に増殖できないため（または他のリンパ球ほど増殖しないため）、その効果は限られており、その寿命も非常に限られている。これらの活性化されたＮＫ同種異系細胞は、宿主／レシピエントの身体で、約５～１５日のどれかの間生存する。これにより、腫瘍崩壊症候群、腫瘍の腫脹／炎症など、腫瘍死に関連する副作用のレベルを軽減し得る。重要なことには、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の合併症は、ＮＫ細胞の抗原非依存性と、それらの増殖不能性及び短い寿命との組み合わせという原因で排除される。

本質的に純粋なＮＫ細胞の分離は、ＣＤ１６^＋ＣＤ５６^＋ＮＫ細胞の陰性選択または陽性選択を介して、手動で、またはｃｌｉｎｉＭＡＣＳを使用して、ならびに上記及び本明細書に記載のように行ってもよい（Ｓｌａｖｉｎの方法、Ｓ．ｅｔ ａｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｔｈｅｒ．（２０１０）５９：１５１１－１５１９も参照のこと）。

２．純粋なＮＫ細胞とＧＤＴ細胞との混合物を含むリンパ球細胞組成物（好ましくは、両方の細胞型が一緒にまたは別々に活性化される）。

ドナーのガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞、またはＧＤＴ細胞）は、ＭＨＣに依存せず、標的細胞のストレスシグナルを介して死滅するという点で、ドナーＮＫ細胞と本質的に同じように機能するため、特定の患者を治療するための本質的に純粋なドナーＮＫ細胞と組み合わせて使用されてもよい。ドナーＮＫ細胞とドナーＧＤＴ細胞との間の相違は、ドナーＧＤＴ細胞がインビボで増殖するということである）。注入されたＮＫ細胞は増殖できない。ＧＤＴ細胞は、Ｔ細胞のように振る舞い得、増殖し得るので、ドナーＮＫ細胞よりも患者での寿命がはるかに長い。ドナーＧＤＴ細胞の使用は、一過性のドナーマイクロキメリズムが望まれる場合に有益であり、これにより、はるかに強力で長続きする移植片対腫瘍（ＧＶＴ）（または移植片対白血病または移植片対ウイルス）効果が可能になる。細胞の「生成物」混合物は、白血球アフェレーシス材料からＮＫ細胞とＧＤＴ細胞を一緒に分離することによって調製され得る。あるいは、それらを別々に分離し、別々に活性化してから、ケースバイケースで各集団の用量を制御する目的で、所望の比率で一緒に混合してもよい。

３．ＮＫ＋ＧＤＴ＋ｉＮＫＴ細胞性組成物カクテル（好ましくは、ＮＫ細胞型とＧＤＴ細胞型の両方が一緒にまたは別々に活性化される）。

ＮＫ＋ＧＤＴ＋ｉＮＫＴ細胞を含む組成物は、ＮＫ細胞とＧＤＴ細胞を含む組成に似ており、これは、ｉＮＫＴ集団がＰＢＭＣで非常に少ない割合であるためである。ただし、分離プロセスは少し異なる。したがって、特定の実施形態では、ＮＫ＋ＧＤＴ＋ｉＮＫＴ細胞のこの混合物を単離するプロセスは、好中球、単球、ＡＢ Ｔ細胞及びＢ細胞の枯渇、ならびに残りの成分の収集によるものである。例えば、白血球アフェレーシス材料を、ＣＤ１４、ＣＤ１５、ＣＤ１９、ＣＤ４、及びＣＤ８の枯渇の組み合わせに供する。残った細胞は、ＮＫ＋ＧＤＴ＋ｉＮＫＴ細胞の混合物である。これは分離プロセスが非常に実用的であるが、細胞型の各集団の用量を個別に制御することはできない。

ｉＮＫＴ細胞は、転写因子ＰＬＺＦを発現するＣＤ１ｄ制限脂質感知の自然Ｔ細胞であることに注意のこと。（Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１５ Ｊａｎ；１６（１）：８５－９５）。ｉＮＫＴ細胞は、セミインバリアントのαβＴＣＲを有し、ＣＤ１ｄが提示する脂質抗原を認識する。適応型ＭＨＣ制限Ｔ細胞とは異なり、それらは、定常状態ではエフェクター及び記憶の表現型を示し、エフェクター機能を即座に発揮できるようにする。それらの迅速な応答及びＮＫ受容体の基礎発現のために、それらは「自然」Ｔ細胞と見なされる。ｉＮＫＴ細胞は、Ｚｂｔｂ１６によってコードされる高レベルのＢＴＢ－ＰＯＺ転写因子ＰＬＺＦを特徴的に発現し、この転写因子は、ｉＮＫＴ細胞系統を定義するために提案された。ＰＬＺＦは、ヒトＭＡＩＴ細胞、セミインバリアントＴ細胞の別の集団、及びγδＴ細胞の先天性サブセットによっても発現される。したがって、ＰＬＺＦの発現は、ＴＣＲの多様性が制限されたＴ細胞に関連しており、これらの細胞の生来の表現型及び迅速なサイトカイン応答の原因であると考えられている。（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１８ Ｊｕｌ；３８（７）：４２３３－４２３９を参照のこと）。

４．ＮＫ＋ＣＤ３細胞性組成物カクテル（ＣＤ３細胞と組み合わせた活性化ＮＫ細胞）
同種異系移植で同種異系リンパ球を使用した以前の治療は、これらの患者にＧＶＨＤを引き起こした。したがって、臨床家はＣＤ３混合物の使用に慎重であった。この治療レジメンでは、ＧＶＨＤの可能性は、一時的に患者の免疫系を効果的に抑制するプレコンディショニングステップによって軽減される（例えば、約５～７日間のリンパ球抑制）。理論に縛られることを望まないが、注入されるＣＤ３細胞の数が、プレコンディショニングステップの結果である５～７日のリンパ抑制期間の終わりに宿主の免疫系を上回るのに十分な数でない限り、患者にＧＶＨＤの危険はないと考えられる。ＧＶＨＤの危険性がないもう１つの理由は、ＧＶＴ（移植片対腫瘍）（またはＧＶＬまたはＧＶＶ（移植片対ウイルス））が常にＧＶＨＤの前に来るためである。すなわち、患者がＣＤ３同種異系細胞の標的として機能する腫瘍抗原である程度の腫瘍負荷を抱えている限り、同種異系細胞が侵入細胞、例えば、がん／ウイルス／細菌細胞を攻撃するのに忙しいので、「ＧＶＨＤが発生する時間はない」ということである。標的のがんまたはウイルスもしくは細菌に感染した細胞を（単回の治療で）完全に一掃する可能性がある場合、ＧＶＨＤのリスクがごくわずかにある。例えば、患者が微小残存病変にあり、ＮＫ＋ＣＤ３細胞の組み合わせで治療されていて、及び同種異系細胞が、患者の免疫系がプレコンディショニングの効果から回復する前の最初の数日以内に全てのがん細胞を殺滅する場合である。ＣＤ３細胞は長生きして増殖し、異物を攻撃するため、攻撃するがん細胞がなくなると、健康な宿主細胞を攻撃し始め、増殖し続けると予想されると考えられている。これは、急性でおそらく低悪性度のＧＶＨＤを引き起こす可能性がある。ただし、避けるべき状況とは、より高用量のＣＤ３細胞が最初に注入され、プレコンディショニングがなくなるまでに、宿主の免疫系がそれらを拒絶できない程度にまで拡大し、その後、より深刻なＧＨＶＤが発生し得るという状況である。したがって、活性化ＮＫ細胞とＣＤ３細胞治療とのこの組み合わせは、転移性固形腫瘍患者及び進行性または転移性血液がん患者など、腫瘍負荷が非常に多い患者にのみ使用される（図１を参照のこと）。治療へのＣＤ３細胞の追加は、実際には、より長く続くドナーのマイクロキメリズム及び同種異系細胞のより良い腫瘍浸潤を生み出す。同種異系細胞の同種反応性は、宿主の免疫系が腫瘍の微小環境に浸透しやすくするのに間接的に役立つ。この手順は、かなり強力な宿主の抗腫瘍免疫原性を誘導する。

ステージ３：注入後の選択肢。図１に示すように、注入後の治療（または注入後のコンディショニング）には３つの選択肢がある。注入後のレジメンは、患者／免疫疲弊及び／または免疫寛容を予防または低減するように機能する。

１．注入後のインビボのＩＬ－２活性化。

特定の患者では、０日目（細胞注入日）から注入後約５日目まで、活性化ＮＫ細胞の注入後の患者にＩＬ－２を投与することにより、インビボでＩＬ－２活性化が達成される。注入後のインビボでのＩＬ－２の投与は、ＮＫ細胞が、インビトロでＩＬ－２を含むカクテルで活性化されるときだけその必要が示される。ＩＬ－２の量は変化し得るが、典型的には、ＳＣ注射として約６×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日である。患者に投与されるＩＬ－２の量は、約１×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日～約６×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日に変化し得、典型的には皮下（ＳＣ）投与される。この注入後のステップは、リンパ球性またはリンパ芽球性白血病またはリンパ腫患者など、ＩＬ－２の患者への注射が推奨されないがんには投与されない。これらの患者の場合、ＩＬ－２は注入後インビボ投与されない。患者が注入後にインビボでＩＬ－２を投与される最長の時間は７日であると予想される。

２．ＣＯＸ－２阻害剤の注入後投与
理論に縛られることを望まないが、患者へのＣＯＸ－２阻害剤（特異的または非特異的）の投与に関連する注入後治療の選択肢は、ＰＧＥ２及びＦＯＸＰ３経路を遮断するのに役立ち、したがって免疫疲弊及び免疫寛容（多くの細胞ベースの治療、特にＩＬ－２活性化を伴う治療に関連する２つの複雑な要因）を回避するためにＴｒｅｇの分化及び産生を妨げる。さらに、注入後の治療は、注入に関連する発熱、及び活性化されたリンパ球細胞注入に関連する疼痛の管理に役立つ。これらの特異的または非特異的ＣＯＸ－２阻害剤は、０日目（細胞注入日）から約３～４週間の範囲の任意の期間という範囲の注入後またはポストコンディショニングレジメンで、約２００～４００ｍｇ／日の量で、３～４週間の時間枠で経口投与され得る。

３．ＰＧＥ２阻害剤の注入後投与
同様に、アスピリン、インドメタシン（Ｉｎｄｏｃｉｎ）、イブプロフェン（Ａｄｖｉｌ、Ｍｏｔｒｉｎ）、ナプロキセン（Ｎａｐｒｏｓｙｎ）、ピロキシカム（Ｆｅｌｄｅｎｅ）、及びナブメトン（Ｒｅｌａｆｅｎ）などの非特異的ＣＯＸ－２阻害剤を含む他のＰＧＥ２阻害剤も、図１に従って、活性化リンパ球細胞注入後に患者に投与されてもよい。これらの化合物は、ＣＯＸ－２阻害剤と同様の効果を有する。これらの薬剤は、０日目（細胞注入日）から約３～４週間までの範囲の任意の期間にわたる期間、約８０～３００ｍｇ／日の量で、注入後またはコンディショニング後のレジメンで経口投与され得る。

さらに、特定の患者では、この治療レジメンを定期的に繰り返して、腫瘍または感染性因子に対する免疫系の反応をブーストすることが期待される。このような定期的な治療は、患者が必要とする限り、維持療法として、月に１回、２か月に１回、３か月に１回、４か月に１回、５か月に１回、６か月に１回、または７か月に１回、または８か月に１回、または９か月に１回、または１０か月に１回、または１１か月に１回、または毎年１回まで異なっていてもよい。

実施例２
活性化リンパ球治療後に投与された免疫チェックポイント阻害剤
特定の実施形態では、患者は、本明細書に記載の活性化リンパ球細胞レジメンの１つで治療され、次いで、活性化リンパ球細胞組成物の後４～１４日の時間枠で免疫チェックポイント阻害剤をさらに投与される。理論に縛られることを望まないが、ドナー活性化リンパ球細胞は、レシピエント患者では約４／５～１５日の寿命を有すると考えられているので、それらが死に始めたとき、腫瘍抗原を提示するように機能し、患者においてワクチンのように作用する。この時点で（活性化リンパ球細胞投与の約４～１４日後）、患者は免疫細胞チェックポイント阻害剤のいずれか１つまたは２つの組み合わせ、例えば免疫系に阻害シグナルを送る分子を投与され得る。免疫細胞チェックポイント阻害剤の投与に続いて、本明細書に記載のポストコンディショニングの治療の選択肢が続く。免疫細胞チェックポイント阻害剤の投与が標準的な投与となる。さらに、特定の患者では、この治療を定期的に繰り返して、腫瘍に対する免疫系の反応をブーストすることが期待される。このような定期的な治療は、患者が必要である限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回まで異なっていてもよい。

このような剤の例としては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例としては、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ ＳｑｕｉｂｂのＮｉｖｏｌｕｍａｂ）及びペムブロリズマブ／ラムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５（ＭｅｒｃｋのＫｅｙｔｒｕｄａ）として公知）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、及び抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例としては、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ－００１０７１８Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）が挙げられる。他のチェックポイント阻害剤としては、抗ＣＴＬＡ－４抗体などのＣＴＬＡ－４のアンタゴニストが挙げられる。例示的な抗ＣＴＬＡ４抗体は、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂによって販売されているＹｅｒｖｏｙ（商標）（イピリムマブ）である。他の例示的なＣＴＬＡ－４抗体としては、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＡＭＧＰ－２２４（グラクソスミスクライン）が挙げられる。

活性化ＮＫ細胞とそれに続くニボルマブで治療された転移性乳癌患者
転移性乳癌の患者は、本明細書に記載の活性化リンパ球細胞レジメンで治療され、その後、活性化リンパ球細胞組成物の投与後約８日からの時間枠で免疫チェックポイント阻害剤をさらに投与された（チェックポイント阻害剤の投与のタイミングは、活性化リンパ球細胞組成物の投与後約４～１５日でどこであってもよい）。治療は忍容性が高く、グレード１の副作用しか生じなかった。さらに、初期の結果は、全ての転移がほとんど検出できないレベルに縮小したことを示している。このデータの要約、ならびに追加の結果及びレジメンを図３Ａ～図３Ｅに示す。

実施例３ ＨＩＶ治療の選択肢
処方されたとおりに医薬抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）を服用し、検出できないウイルス負荷を維持しているＨＩＶの個体は、長く健康的な生活を送ることができ、ＨＩＶをパートナーに性的に感染させるリスクは事実上ない。しかし、ＨＩＶ患者のかなりのサブセットが、併用治療前の次善の治療及び／または順守不良による薬剤耐性の証拠を有する。これは、１９８０年代及び１９９０年代に単剤療法とデュオ（二重）療法が広く使用されていた米国カリフォルニア、ニューヨーク、イリノイ、フロリダの主要都市及びブラジル及びタイなどの特定の国で特に問題になっている^１。かなりの数のＨＩＶ患者が、有害な副作用、毒性、薬剤耐性、薬物乱用、精神障害、社会経済的地位、識字能力、及び社会的不名誉など、さまざまな理由で順守できない^[４]。そのような患者はウイルス複製が進行中であり、しばしばかなりのレベルの血漿ウイルス血症を伴い、したがって、免疫系をひどく損ない、選択肢は限られ、そして重大な病的状態及び最終的には死への容赦のない経路が待っている。

多大な努力にもかかわらず、抑制されていない血漿ウイルス血症の患者を改善するための進歩はほとんどなかった。

現在、ＨＩＶ疾患の進行の前臨床及び臨床モデルは、ＨＩＶに関連する消化管の破壊が、機能不全の腸のバリアを越えた微生物の転座と、それに続く慢性免疫活性化、疾患の進行、及びＨＩＶ疾患の死亡率の増加をもたらすことを示唆している。ガンマデルタ（γδ）Ｔ細胞は、セミインバリアントのＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する「自然（ｉｎｎａｔｅ）」Ｔ細胞型である。再構成されたＴＣＲにおけるＶδ１またはＶδ２遺伝子の異なる使用法は、ヒトγδＴ細胞の２つの主要なサブセットを区別する^［７］。微生物産物とストレスを受けた宿主細胞との両方の認識により、γδＴ細胞は一般に感染に対する及び具体的にはウイルスに対する免疫応答において重要な役割を果たすことが可能になる^{［８－１０］}。Ｖδ２＋細胞は主に血液中を循環するが、Ｖδ１＋細胞は主に腸の粘膜内に上皮内リンパ球（ＩＥＬ）として局在し、上皮機能の維持を助ける^［９］。γδＴ細胞は、自然免疫細胞と獲得免疫細胞の両方の性質を兼ね備えているため、潜在的な免疫療法のアプローチにとって魅力的になっている^{［１１－１３］}。それらは炎症性サイトカインを産生し、感染細胞または悪性細胞を直接溶解し、再曝露時に病原体を攻撃するための記憶反応を確立し得る。γδＴ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）鎖のγ及びδヘテロダイマー（ＴＣＲγ／ＴＣＲδ）の発現によって定義され、これは、関連するＣＤ３／ＴＣＲ複合体を通じて細胞内シグナル伝達を指示する^［１４］。γδＴ細胞系統（循環Ｔ細胞の１～５％）は、ＴＣＲα／ＴＣＲβヘテロダイマーを発現し、及びまた関連するＣＤ３／ＴＣＲ複合体を通じてシグナル伝達する、末梢血中のさらに優勢なαβＴ細胞系統（約９０％）と対比され得る^{［１５、１６］}。αβＴ細胞上のＣＤ４及びＣＤ８補助受容体は、ＴＣＲαβ鎖の主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）への結合を支援し、形成されたＣＤ３／ＴＣＲ複合体上にさまざまなペプチドを提示する^{［１７－１９］}。対照的に、ＴＣＲγδは、ＭＨＣ／ペプチド複合体とは無関係に抗原の上部構造に直接結合し、結果として、ＣＤ４及びＣＤ８は、γδＴ細胞ではまれである^{［２０、２１］}。抗原認識がＭＨＣ／ペプチド制限の外側で達成されることを考えると、γδＴ細胞は、ＴＣＲを媒介して予測可能な免疫エフェクター機能を有し、普遍的な同種異系養子細胞療法としての潜在的な用途がある^［２２］。

γδＴ細胞は、有意なアロ反応性を引き起こさず、したがって、重度の移植片対宿主病を誘発しないことが実証されている。

ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、抗原認識がない場合に腫瘍形質転換細胞またはウイルス感染細胞に対する拡張監視を提供する自然リンパ球である。それらは、ウイルス感染の根絶及び除去に重要な役割を果たす自然免疫の重要なエフェクターである。さらに、ＮＫ細胞は自然免疫系細胞と適応免疫系細胞との間の架け橋であると考えられている。近年、いくつかの研究により、ＨＩＶ－１はＮＫ細胞の恒常性を病理学的に変化させ、それらの抗ウイルスエフェクター機能を阻害することが示されている。さらに、高レベルの慢性ＨＩＶ－１ウイルス血症は、通常、自然免疫応答と適応免疫応答の間のクロストークを調節する、ＮＫ細胞調節機能を著しく損なう。ＮＫ細胞受容体の特定のハプロタイプの存在、及びＮＫ細胞抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の関与は、ＨＩＶ－１感染を制御することが報告されている。

キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）を含む、ＮＫ細胞上の遺伝的にコード化された阻害性受容体は、活性化シグナルと抑制性シグナルとの間のバランスによって支配されるＮＫ細胞の活性化に大きく影響する。ＫＩＲとそれらの同族ＨＬＡリガンドとの間の相互作用は、ＮＫ細胞の細胞毒性活性の閾値を設定する。さらに、Ｃ型肝炎感染の解消に関連して、ウイルス感染の経過に重大な影響を与えることが示されている^［３０］。ＨＩＶでは、ＨＬＡ／ＫＩＲの組み合わせは、病気の進行のペース^{［３１、３２］}及び病気の獲得に対する防御と関連されている^{［３３、３４］}。この防御を与える機構は、阻害性リガンド活性化^［３５］によるＮＫ細胞教育または「ライセンシング」、及びＨＬＡ分子上に提示されたＨＩＶ－１由来ペプチドモチーフとのＫＩＲの直接相互作用の両方を含み得る。特定のウイルスタンパク質／ＫＩＲの組み合わせは、インビトロでのＮＫ細胞ウイルス阻害の違いに関連しており^［３６］ＨＬＡ／ＫＩＲの組み合わせは、ＨＩＶの制御に相違をもたらす^［３７］。特定のＨＩＶ由来ペプチドによって指示されるＨＬＡ／ＫＩＲ相互作用は、インビトロでのＮＫ細胞機能の測定及び集団研究におけるウイルス逃避のパターンにさらに関連している^{［３８，３９］}。これは、阻害性受容体リガンドの遺伝子バリアントによって部分的に決定されるＮＫ細胞活性化閾値、及びＮＫ細胞の細胞毒性活性の保護効果を定義するために宿主ＨＬＡ構造に提示するのに利用可能なウイルス関連ペプチドを示唆している。

現在提案されている方法は、ＨＩＶ感染細胞に由来するストレスシグナルの存在、及び宿主ＨＬＡ／ドナーＫＩＲプロファイルのミスマッチに基づいて、有意な移植片対宿主反応のリスクなしで、移植片対ウイルス効果として同定された、同種異系ＮＫ細胞及びγδＴ細胞のＨＩＶ特異的細胞毒性機能を利用するためにこれらの機構を利用することに少なくとも部分的に基づいている。

治療の例示的な全体的な流れは次のとおりである（必要に応じて繰り返してもよい）：
・－７日目から－１日目までのプレコンディジョニング
・０日目の細胞注入
・１日目から３０日目までのポストコンディショニング

ＨＩＶ患者の例示的な治療の概要は以下のとおりである：
プレコンディショニング
－７日目から－４日目
フルダラビン ２５ｍｇ／ｍ^２／日（ＩＶ）３０分超
－３日目及び－２日目
シクロホスファミド ３００ｍｇ／ｍ^２／日（ＩＶ）３０分超
－２日目及び－１日目
インターフェロンアルファ３×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日（ＳＣ）

養子細胞療法
０日目
前投薬：プロメタジン２５ｍｇ及びジフェンヒドラミン２５ｍｇ（ＩＶ）３０分超
ＮＫ細胞２０～２５×１０^６／ｋｇ及びγδＴ細胞５～１０×１０^６／ｋｇ（ＩＶ）６０分超
インターロイキン－２ ６×１０^６ＩＵ／ｍ^２（ＳＣ）

ポストコンディショニング
１～４日目
インターロイキン－２ ６×１０^６ ＩＵ／ｍ^２／日（ＳＣ）
１～３０日目
セレコキシブ ２００ｍｇ／日（ＰＯ）
アスピリン １２０～３００ｍｇ／日（ＰＯ）（反対の指示がない限り）

実施例３Ａ
ＨＩＶ患者で活性化ＮＫ細胞活性化リンパ球レジメンを使用してＨＩＶ患者の免疫応答を誘発する

図２Ａ～図２Ｂに示すように、ウイルス血症が制御されておらず、忍容性及び／または毒性の問題に起因して抗レトロウイルス療法（ＡＲＴ）薬をもはや服用していない患者は、活性化ＮＫ細胞レジメンを使用して次のように治療された：

プレコンディショニングレジメン：
フルダラビン１５ｍｇ／ｍ^２／日（－７日目から－３日目まで）
シクロホスファミド ５００ｍｇ／ｍ^２／日（－２日目及び－１日目）
インターフェロンアルファ３×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日（－２日目及び－１日目）

０日目（活性化されたＮＫ注入日）：
２０×１０^６個の細胞／活性化されたＮＫ細胞１ｋｇあたり
５×１０^６個の細胞／活性化されたＧＤＴ細胞１ｋｇあたり
６×１０^６ＩＵ／ｍ^２ ＩＬ－２（ＳＣ）注射

１日目から５日目：
６×１０^６ＩＵ／ｍ^２ＩＬ－２（ＳＣ）注射

１日目から４０日目：
２００ｍｇ／日 セレコキシブ（ＰＯ）

患者は、３日目から６日目までの間にセレコキシブによって緩和された自己限定的な発熱、悪寒及び関節痛を経験した。他の有害反応は観察されなかった。活性化ＮＫ治療後４９日目に、ＨＩＶウイルス負荷は、＜２０ ＨＩＶ ＲＮＡコピー／ｍｌであることが確認され、これはほぼ検出不能である（図２Ａ及び図２Ｂを参照のこと）。

患者のＨＬＡプロファイルは、ＮＫ＋ＧＤＴドナー細胞のＨＬＡプロファイルに適合しなかった。

本明細書で提供されるこれらの例は、ＨＩＶ及び／またはがんの患者を治療するための活性化細胞組成物の驚くべき予想外の能力を実証している。

理論に拘束されることを望まないが、ウイルス感染細胞は本質的にがん細胞（すなわち、制御不能に分裂または複製する外来細胞）のようなものであるため、本明細書に記載の活性化リンパ球組成物及び方法による患者の治療は結果としてＨＩＶ感染細胞の殺滅を生じ、その後、活性化リンパ球、この場合は活性化ＮＫと活性化ガンマデルタＴ細胞処理の「ワクチン効果」で免疫応答を誘発し続け、活性化されたＮＫ細胞の貪食能力によってウイルス血症を制御し得ると考えられる。ＮＫ細胞はＨＩＶビリオンが患者の末梢血を循環するにつれて、ＨＩＶビリオンを破壊／排除すると期待される。

図２に示すように治療後、ＨＩＶウイルス負荷は劇的に減少し、患者のＣＤ４及びＣＤ８細胞数は、患者の総リンパ数とともにリバウンドしている。この患者はまた、注入日に投与されたＣＯＸ－２阻害剤の注入後治療を受け、注入後４０日まで毎日投与された。

さらに、この治療は定期的に繰り返され、残りのウイルス／ビリオンに対する免疫系の反応をブーストすることが期待される。このような定期的な治療は、患者が必要である限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回まで異なっていてもよい。

実施例３Ｂ
ＨＩＶリザーバーを排除する
図２及び実施例２Ａに記載されているＨＩＶウイルス負荷の劇的な減少という観点では、現在の同種異系活性化リンパ球治療は、標準的なＡＲＴでは本質的に触れられない潜在的なＨＩＶリザーバーを排除するのにも効果的であると考えられる。ＨＩＶに感染した後、潜在的なリザーバーがあり、これは「不完全なＡＲＴ」に起因して活性化されたリンパ球細胞（「アロ細胞」）に「見える」ように刺激され得る。潜在的なＨＩＶリザーバーを活性化する大きなイベントはないが、代わりに、リザーバー内のＨＩＶはある程度遅い速度で自然に複製され、「不完全なＡＲＴ」で同時に処理された場合、新しいＴ細胞を融合または感染させることはできず、これには、抗ＨＩＶ ｍＡｂまたは感染プロセスを妨害する融合または侵入阻害剤である任意の他の抗レトロウイルスが含まれる（これらは不完全な治療を提供し、ウイルスの発現及び生成を防ぐ薬剤とは対照的に、別の薬剤と組み合わせる必要がある）。そのような小分子ＨＩＶ融合または侵入阻害剤の例には以下が含まれる：ベビリマット（ＤＳＢ、ＰＡ－４５７）、ビクリビロク、マラビロック（ケモカイン受容体拮抗薬または「ＣＣＲ５阻害剤」）、Ｔ－２０（エンフビルタイド、Ｆｕｚｅｏｎ、Ｒｏｃｈｅ及びＴｒｉｍｅｒｉｓが開発）、ＴＲＩ－１１４４、及びＴＲＩ－９９９（Ｑｉａｎ，Ｋ ｅｔ ａｌ，Ｍｅｄ Ｒｅｓ Ｒｅｖ．２００９ Ｍａｒ；２９（２）：３６９－３９３、ならびにＨａｇｇａｎｉ及びＴｉｌｔｏｎ，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．２０１３ Ｍａｙ；９８（２）：１５８－７０を参照のこと）。同様に、抗ＨＩＶ ｍＡｂの例としては、ＣＣＲ５及びＣＤ４に対するものが挙げられ、具体的には次のとおりである：イバリズマブ（Ｉｂａｌｉｚｕｍａｂ）（商品名Ｔｒｏｇａｒｚｏ）は、ＣＤ４に結合する非免疫抑制性のヒト化モノクローナル抗体である。ＰＲＯ １４０は、ＣＣＲ５を標的とするヒト化モノクローナル抗体である。ウイルスバースト後、宿主ＣＤ４ Ｔ細胞に融合する前の短い期間に、本発明の治療法（さまざまなプレコンディショニング及びポストコンディショニングの選択肢を含む）で説明されているように、活性化リンパ球細胞（「アロ細胞」））は、ＨＩＶウイルスを殺滅するように機能し、新しい細胞に感染するのを防ぐ。この活性化リンパ球細胞治療及びレジメンを、本明細書に記載のように、「不完全なＡＲＴ」レジメンと組み合わせて使用すると、潜在的に感染した細胞がウイルスを発現可能になり、その結果、このウイルスは活性化リンパ球細胞による殺滅にさらされ得る。この結果上述したように、「不完全ＡＲＴ」のｍＡｂまたは低分子阻害剤の存在のおかげで、感染されることから新しいＴ細胞を保護しながら、積極的に、活性化リンパ球細胞で全てのウイルス産生細胞を殺滅させる。

さらに、特定の患者では、この治療は定期的に繰り返され、残りのウイルス／ビリオンに対する免疫系の反応をブーストすることが期待される。このような定期的な治療は、患者が必要である限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回まで異なっていてもよい。

方法
Ａ．新たに採取したＮＫ細胞での活性化／分化
●健康なドナー由来の休止期末梢血ＮＫ細胞は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＮＫ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（陰性選択）を使用して、健康なドナー白血球アフェレーシス材料から分離された。
●細胞を、１０^６／ｍｌの細胞濃度で播種した。
●１２ウェルプレート、３×１０^６細胞／ウェル
●基礎培地：Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＧＭＰグレードＮＫ培地
●実験条件：
１．基礎培地
２．基礎培地＋ＩＬ－２（５００ＩＵ／ｍｌ）
３．基礎培地＋ＦＧＦＲ１（３３ｎＭ）
４．基礎培地＋ＩＬ－２（５００ＩＵ／ｍｌ）＋ＦＧＦＲ１（３３ｎＭ）
●各条件を３連で試験した。
●０日目（播種）細胞数：１ミリリットルあたり１０^６総生存細胞

これらのデータは、本明細書の方法に記載されているように、治療用組成物及び用途のための細胞の供給源（商業的に拡大縮小可能である）としての新たに採取されたＮＫ細胞の安定性及び生存率を示している。

図６Ｃに示すように、７２時間の経過にわたる生存率及び総細胞数を評価するとき、ＦＧＦＲ１の活性化は、ＩＬ－２単独の活性化よりも優れている。上記の表６～８に示すように、ＦＧＦＲ１群の細胞はわずかに増殖している（３行目の結果を参照のこと）。ＦＧＦＲ１へのＩＬ－２の添加は、ＦＧＦＲ１単独の増殖効果を減少させる。これは、図６Ａ～図６Ｄにさらに反映され、これは、細胞傷害性細胞数を、活性化の７２時間の終わりに調節性／非細胞毒性のＮＫ細胞分布と比較している。この分析では、３つの主要な母集団がゲートされている。
調節性サブセットであるＣＤ１６－ＣＤ５６＋ＮＫ集団。
調節性／休止期サブセットである、ＣＤ１６－ＣＤ５６ｄｉｍＮＫ集団、
活性化／細胞毒性サブセットである、ＣＤ１６＋ＮＫ集団。

したがって、「細胞毒性対非細胞毒性／調節性集団を比較すれば、フローサイトメトリーデータによって、ＦＧＦＲ１活性化サブセット（図６Ｃ）が細胞毒性ＮＫ細胞（ＣＤ１６＋、またはＣＤ１６＋ＣＤ５６ｄｉｍも、またはＣＤ１６－ＣＤ５６ｄｉｍ）の最大の増加、及び最も少ない調節性ＮＫ細胞を示すことが示される。ＩＬ－２のみの活性化サブセット（図６Ｂ）には、かなり多くの調節性ＮＫ細胞（ＣＤ１６－ＣＤ５６＋）があり、これは養子細胞療法の設定で免疫寛容または免疫疲弊に寄与し得る。したがって、ＦＧＦＲ１または組み合わせのＩＬ－２＋ＦＧＦＲ１活性化ＮＫ集団は、本発明の方法にとって最も望ましい。

Ｂ 凍結保存されたＮＫ細胞の活性化／分化
●健康なドナー由来の休止期末梢血ＮＫ細胞は、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＮＫ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（陰性選択、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ Ｉｎｃ．）を使用して、健康なドナー白血球アフェレーシス材料から分離された。
●実験前に細胞を－８０℃で１４日間保存した。これらは、１．８ｍｌクライオチューブ中で５×１０^６／ｍｌの濃度で、Ｃｒｙｏｓｔｏｒ ＣＳ１０凍結保存溶液中で保存した。
●細胞を３７℃のウォーターバスで解凍し、直ちに培養プレートに播種した。
●細胞を、１２ウェルプレート中に、３×１０^６細胞／ウェルで、１０^６／ｍｌ細胞の濃度で播種した。
●基礎培地：Ｍｉｌｔｅｎｙｉ ＧＭＰグレードＮＫ培地
●実験条件
１．基礎培地
２．基礎培地＋ＩＬ－２（５００ＩＵ／ｍｌ）
３．基礎培地＋ＦＧＦＲ１（３３ｎＭ）
４．基礎培地＋ＩＬ－２（５００ＩＵ／ｍｌ）＋ＦＧＦＲ１（３３ｎＭ）
●各条件を３連で試験した。
●０日目（播種）細胞数：１ミリリットルあたり１０^６総生存細胞

これらのデータは、本明細書の方法に記載されているように、治療用組成物及び用途のための細胞の別の供給源（商業的に拡大縮小可能である）としての凍結保存されたＮＫ細胞の安定性及び生存率を示している。

有害事象の特徴付け
ＡＥの重大度は、有害事象の共通用語基準（Ｃｏｍｍｏｎ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ Ｃｒｉｔｅｒｉａ ｆｏｒ Ａｄｖｅｒｓｅ Ｅｖｅｎｔｓ）（ＣＴＣＡＥ）ｖ５．０グレード１～５を使用して評価される。ある事象がＣＴＣＡＥによって分類されていない場合、その事象の重大性は、以下のスケールに従って治験責任医師がグレード分類して、重症度を推定する。

標準的な方法
分子生物学の標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈ ａｎｄ Ｍａｎｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２^ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３^ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３^ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に記載されている。標準的な方法は、Ａｕｓｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ（細菌細胞におけるクローニングを記載（Ｖｏｌ．１））、（哺乳細胞及び酵母におけるクローニングを記載（Ｖｏｌ．２））、（複合多糖及びタンパク質発現を記載（Ｖｏｌ．３））、及び（バイオインフォマティクスを記載（Ｖｏｌ．４））にもみられる。

免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、及び結晶化を含むタンパク質精製の方法は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合タンパク質の生成、タンパク質のグリコシル化は説明されている（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ａｕｓｕｂｅｌ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７、Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５－８９、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照のこと）。ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体の産生、精製、及び断片化は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ、Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，上記）。リガンド／受容体相互作用を特徴付けるための標準的な技術が利用可能である（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ，ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒを参照のこと）。

本明細書に記述される全ての参照は、あたかも各々の個々の刊行物、データベース入力（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋｈ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリ）、特許出願または特許が明確かつ個別に参照により組み込まれることが示されているのと同程度まで、参照により組み込まれる。参照によるこの組み込みの声明は、米国特許法第１．５７条（ｂ）（１）に従って、出願人が各々のかつあらゆる個々の刊行物、データベースエントリ（例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ配列またはＧｅｎｅＩＤエントリ）、特許出願、または特許に関連することを意図しており、そのような引用が参照による特化した組み込みの声明に直接隣接していなくても、そのそれぞれが米国特許法第１．５７条（ｂ）（２）に準拠して明確に識別されている。参照による組み込みの特化した声明を含めることは、本明細書内にもしあっても、参照によるこの一般的な組み込み声明を決して弱めるものではない。本明細書での参考文献の引用は、この参考文献が関連する先行技術であることを認めることを意図するものではなく、これらの出版物または文書の内容または日付に関するいかなる承認を構成するものでもない。

本発明の実施形態は、本明細書に記載の特定の実施形態によって範囲を限定されるものではない。実際には、本明細書中に記載される改変に加えて実施形態のさまざまな改変が、上記の説明及び添付の図面から当業者に明らかとなるだろう。かかる改変は、実施形態及び添付の特許請求の範囲内に含まれることを意図する。

Claims (50)

1. ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療する方法であって、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。
2. 活性化ＮＫ細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を患者に投与することを含む、免疫応答の増大を必要とする前記患者においてそれを行うための方法。
3. 患者においてＨＩＶ複製を阻害する方法であって、ＨＩＶを有する対象に対して、患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む、前記方法。
4. 患者の腫瘍増殖を阻害する方法であって、前記腫瘍を有する前記患者に対して、前記患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む、前記方法。
5. ウイルスまたは細菌感染を有する対象におけるウイルスまたは細菌の複製または再生を阻害する方法であって、前記ウイルスまたは細菌感染を有する前記対象に対して、前記患者に対する活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む有効量のリンパ球細胞組成物を投与することを含む、前記方法。
6. 前記細胞組成物が、活性化ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
7. 前記細胞組成物がインバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記細胞組成物がＣＤ３^＋Ｔ細胞をさらに含む、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
9. 前記患者に投与する前に、前記リンパ球細胞組成物が、前記細胞と、少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）とを、混合／インキュベート／接触させることによって活性化される、請求項１～８のいずれかに記載の方法。
10. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項９に記載の方法。
11. 前記サイトカインが、前記細胞組成物と約６～２４時間インキュベート／混合／接触させられる、請求項１０に記載の方法。
12. 前記細胞組成物と共にインキュベートされるサイトカインの量が、約１００～１０００ＩＵ／ｍｌである、請求項１０に記載の方法。
13. 請求項１～１２のいずれかに記載の方法であって、リンパ球細胞組成物を投与する前に、少なくとも１つのリンパ抑制剤、化学療法剤、または免疫抑制剤を３～５日間投与することによって、前記リンパ球細胞組成物を投与する前に前記患者をプレコンディショニングすることをさらに含む、前記方法。
14. 前記リンパ抑制剤または化学療法剤が、６ＴＧと、６－ＭＭＰと、クロファラビン、フルダラビン、及びシタラビンからなる群より選択される１つ以上のプリン類似体とのうちいずれか１つ、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３に記載の方法。
15. 前記リンパ抑制剤または化学療法剤の用量が、約５ｍｇ／ｍ^２～約５０ｍｇ／ｍ^２の範囲である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記化学療法剤または免疫抑制剤が、任意のシクロホスファミド、リツキシマブ、ステロイドまたはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１３に記載の方法。
17. 前記ステロイドが糖質コルチコイドステロイドである、請求項１６に記載の方法。
18. 前記ステロイドがプレドニゾンである、請求項１７に記載の方法。
19. 前記化学療法剤または免疫抑制剤の用量が約２０ｍｇ／ｍ２～約１０００ｍｇ／ｍ２の範囲である、請求項１６に記載の方法。
20. 前記リンパ球細胞組成物を投与する２日前及び／または１日前に、約１×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日～約１０×１０^６ＩＵ／ｍ^２／日の用量でインターフェロンアルファ（ＩＦＮ－α）、またはその生物学的等価物を前記患者に投与することをさらに含む、請求項１３に記載の方法。
21. 前記リンパ球細胞組成物の投与日及び前記リンパ球細胞組成物の投与後の初日に前記患者にＩＬ－２を投与すること、ならびに任意選択で、１用量あたり約３～６×１０^６ＩＵ／ｍ^２の投薬量で、前記リンパ球細胞組成物の投与後３～１４日の追加日数の間、継続することをさらに含む、請求項１～２０のいずれかに記載の方法。
22. 前記リンパ球細胞組成物の投与日に、及び前記リンパ球性細胞組成物の投与後少なくとも１４日～６０日の間継続して、ＣＯＸ－２阻害剤または非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、またはそれらの組み合わせを前記患者に投与することをさらに含む、請求項１～２１のいずれかに記載の方法。
23. 前記ＣＯＸ－２阻害剤がセレコキシブまたはロフェコキシブであり、及び非ステロイド性抗炎症薬が、アスピリン、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、ピロキシカム及びナブメトンからなる群より選択される、請求項２２に記載の方法。
24. 前記活性化されたＮＫ細胞が前記患者に対して同種異系である、請求項１～２３のいずれかに記載の方法。
25. 前記ＮＫ細胞が前記患者とＨＬＡ適合されていない、請求項１～２４のいずれかに記載の方法。
26. 活性化された細胞の投与量が、約３～５０×１０^６の範囲である、請求項１～２５のいずれかに記載の方法。
27. 請求項１～２６のいずれかに記載の方法であって、前記ウイルス感染が、レトロウイルス（例えば、ヒトＴ細胞リンパ球向性ウイルス（ＨＴＬＶ）タイプＩ及びＩＩ及びヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ））、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）タイプＩ及びＩＩ、エプスタインバーウイルス及びサイトメガロウイルス）、アレナウイルス（例えば、ラッサ熱ウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、モルビリウイルスウイルス、ヒト呼吸器合胞体ウイルス、及びニューモウイルス）、アデノウイルス、ブニヤウイルス（例えば、ハンタウイルス）、コロナウイルス、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス）、フラビウイルス（例えば、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、黄熱病ウイルス、及び日本脳炎ウイルス）、ヘパドナウイルス（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ））、オルソミオウイルス（例えば、センダイウイルス及びインフルエンザウイルスＡ、Ｂ及びＣ）、パポバウイルス（例えば、パピローマウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ライノウイルス、エンテロウイルス及びＡ型肝炎ウイルス）、ポックスウイルス、レオウイルス（例えば、ロタウイルス）、トガウイルス（例えば、ルベラウイルス）、及びラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、及びそれらの任意の組み合わせによって引き起こされるウイルス感染症からなる群より選択される、前記方法。
28. 前記がんが、急性白血病、急性骨髄細胞性白血病、急性骨髄性白血病、骨髄芽球性白血病、前骨髄細胞性白血病、骨髄単球性白血病、単球性白血病、赤血球性白血病、慢性白血病、慢性骨髄性（または顆粒球性）白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性赤血球血症、リンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫（無痛性及び高悪性度）、多発性骨髄腫、ウォルデンストロムマクログロブリン血症、重鎖疾患、骨髄異形成症候群、毛様細胞白血病及び骨髄異形成、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される血液がんまたは造血性のがんである、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
29. 前記がんが、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、及び他の肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、リンパ系悪性腫瘍、膵臓癌、乳癌、肺癌、卵巣癌、前立腺癌、肝細胞癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、髄質甲状腺癌、乳頭状甲状腺癌、褐色細胞腫脂腺癌、乳頭状癌、乳頭状腺癌、髄質癌、気管支原性癌、腎細胞癌、肝細胞腫、胆管癌、脈絡膜癌、ウィルムス腫瘍、頸部癌、精巣腫瘍、セミノーマ、膀胱癌、黒色腫、及びＣＮＳ腫瘍（神経膠腫（脳幹神経膠腫及び混合神経膠腫など）など）、神経芽細胞腫（多形性神経芽腫としても公知）星状細胞腫、ＣＮＳリンパ腫、胚細胞腫、髄芽腫、神経鞘腫頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫瘍、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫及び脳転移からなる群より選択される固形腫瘍である、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
30. 前記細菌感染が、病原性細菌種であるバクテロイデス属、クロストリジウム属、連鎖球菌、ブドウ球菌属、シュードモナス属、ヘモフィルス属、レジオネラ菌、マイコバクテリウム属、エシェリキア属、サルモネラ属、シゲラ属（赤痢菌）、またはリステリア属のうちの１つによって引き起こされる、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
31. 移植片対腫瘍（ＧＶＴ）または移植片対ウイルス（ＧＶＶ）が患者で増加する一方で、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）が、減少または排除される、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
32. 前記患者がリンパ球性またはリンパ芽球性の白血病またはリンパ腫を有する場合、活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物の投与後には、ＩＬ－２の投与が、禁忌であり、投与されない、請求項１～２０のいずれか１項に記載の方法。
33. 請求項１～２６のいずれかに記載の方法であって、活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物の投与後４～１４日の時間枠で、前記患者に免疫チェックポイント阻害剤、例としては、任意の１つまたは２つのチェックポイント阻害剤の組み合わせ、例としては、ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１（Ｂ７－Ｈ１）の阻害剤、例えば、抗ＰＤ－１抗体、例としては、ニボルマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂのニボルマブ）、ペムブロリズマブ／ラムブロリズマブ（ＭＫ－３４７５（ＭｅｒｃｋのＫｅｙｔｒｕｄａ）としても公知）、ピジリズマブ（Ｃｕｒｅｔｅｃｈ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ）、または抗ＰＤ－Ｌ１抗体、例としては、ＭＰＤＬ３２８０Ａ（Ｒｏｃｈｅ）、ＭＤＸ－１１０５（Ｂｒｉｓｔｏｌ Ｍｙｅｒ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＭＥＤＩ－４７３６（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）及びＭＳＢ－００１０７１８ Ｃ（Ｍｅｒｃｋ）、ＣＴＬＡ－４のアンタゴニスト、例えば、抗ＣＴＬＡ４抗体、例としては、抗ＣＴＬＡ４抗体Ｙｅｒｖｏｙ^ＴＭ（イピリムマブ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｔｉｃｉｌｉｍｕｍａｂ（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）またはＡＭＧＰ－２２４（Ｇｌａｘｏ Ｓｍｉｔｈ Ｋｌｉｎｅ）、または乳癌の場合は腫瘍特異的抗体トラスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）、リンパ腫の場合はリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ）、またはセツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ）がさらに投与される、前記方法。
34. 請求項１～２２のいずれかに記載の方法であって、前記治療または免疫応答の増大が、前記患者が改善または安定／非進行性の疾患を示す限り、維持療法として、毎月１回から、２か月毎に１回、３か月毎に１回、４か月毎に１回、５か月毎に１回、６か月毎に１回、または７か月毎に１回、または８か月毎に１回、または９か月毎に１回、または１０か月毎に１回、または１１か月毎に１回、または毎年１回という時間枠で、定期的に繰り返される、前記方法。
35. 前記患者に対する活性化ＮＫ細胞を含む前記リンパ球細胞組成物を投与する前に、同じ日に、ただし少なくとも約２～６時間前に、１つまたは２つの抗ヒスタミン薬を前記患者に投与することをさらに含む、請求項１～２６のいずれかに記載の方法。
36. ＮＫ細胞を活性化する方法であって、前記ＮＫ細胞を含む細胞組成物を、インビトロで少なくとも１つのサイトカイン及び任意選択で可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）と接触させることを含む、前記方法。
37. 前記サイトカインが、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせからなる群より選択される、請求項３６に記載の方法。
38. 前記サイトカインが約６時間～約２４時間、前記細胞組成物と接触される、請求項３６に記載の方法。
39. 前記細胞組成物と接触するサイトカインの量が、約１００Ｕ／ｍｌ～約１０００ＩＵ／ｍｌである、請求項３６に記載の方法。
40. 前記組成物が、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）をさらに含む、請求項３６～３９のいずれか１項に記載の方法。
41. 前記細胞組成物がインバリアントのナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）をさらに含む、請求項３６～４０のいずれか１項に記載の方法。
42. 前記細胞組成物がＣＤ３^＋Ｔ細胞をさらに含む、請求項３６～４１のいずれか１項に記載の方法。
43. 前記ＮＫ細胞、ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞が末梢血から分離される、請求項３６～４２のいずれか１項に記載の方法。
44. サイトカイン、及び任意選択で、活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。
45. 請求項４４に記載の組成物であって、前記サイトカイン活性化組成物が、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－２１、Ｆｌｔ３－Ｌ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、及びＩＬ１８、ならびにそれらの任意の組み合わせ活性化組成物である、前記組成物。
46. 前記組成物がガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）及び／またはＣＤ３^＋Ｔ細胞をさらに含む、請求項４４及び４５に記載の組成物。
47. 前記ＮＫ細胞が末梢血ＮＫ細胞である、請求項４４～４６のいずれか１項に記載の組成物。
48. 前記ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、ＣＤ３^＋Ｔ細胞が、末梢血ガンマデルタＴ細胞（ＧＤＴ細胞）、インバリアントナチュラルキラーＴ細胞（ｉＮＫＴ細胞）、及びＣＤ３^＋Ｔ細胞である、請求項４４～４７のいずれか１項に記載の組成物。
49. サイトカイン、及び任意選択で、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。
50. サイトカイン、及び任意選択で、ＨＩＶ、がん、ウイルス感染、または細菌感染を有する患者を治療するための医薬の調製のための活性化ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む可溶性線維芽細胞成長因子受容体１（ｓＦＧＦＲ１）活性化リンパ球細胞組成物。

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