KR20220054282A - 활성화 림프구성 세포 및 암 및 감염 질환을 치료하기 위해 그를 사용하는 방법 - Google Patents

활성화 림프구성 세포 및 암 및 감염 질환을 치료하기 위해 그를 사용하는 방법 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증을 가진 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다. 활성화 림프구성 세포 조성물을 사용하여 면역계를 조절하기 위한 관련 조성물, 키트, 및 방법 또한 제공된다.

Description

활성화 림프구성 세포 및 암 및 감염 질환을 치료하기 위해 그를 사용하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 6월 14일에 출원된 미국 가출원 제62/861,487호에 대한 우선권을 주장하며, 이는 그의 전체 내용이 참조로서 본 명세서에 포함된다.
기술분야
본 명세서에는 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증이 있는 환자를 치료하기 위한 방법이 제공되고, 상기 방법은 자연살해(NK) 세포와 같은 활성화 림프구성 세포를 포함하는 세포 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 그러한 활성화 세포를 사용하여 면역계를 조절하기 위한 관련 조성물, 키트, 및 방법 또한 제공된다.
자연살해(NK) 세포는 사이토카인 및 케모카인 분비를 통하여, 그리고 세포독성 과립(granules)의 방출을 통한 항바이러스 및 항암 면역을 매개하는 데에 중요한 선천(innate) 림프구이다(Vivier et al. Science 331(6013):44-49 (2011); Caligiuri, Blood 112(3):461-469 (2008); Roda et al., Cancer Res. 66(1):517-526 (2006)). 따라서 NK 세포는 신체의 방어 체계의 일부이고 그리고 바이러스 및 감염과 같은 침입자로부터 보호하는 군대 역할을 한다. 유사하게 NK 세포는 암을 퇴치하는 데에 중요한 면역 이펙터이다.
자가 NK 세포를 사용하는 초기 임상 시험들은 유의한 임상적 이점을 입증하는 것에 실패했다. 암 환자에서는 NK 세포가 기능 장애가 매우 많고(highly dysfunctional) 그리고 수가 감소되어 있기 때문에, 세포용해 NK 세포 수를 회복 및 증가시키고 그리고 그의 항종양, 항바이러스, 및/또는 항균 활성을 증가시키는 방법 및 조성물이 절실하게 필요하다.
일부 구체예에서는 HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증이 있는 환자를 치료하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 환자에게 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 필요로 하는 환자에서 면역 반응을 증가시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 환자에게 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 환자에서 HIV 복제를 억제하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 HIV를 가진 대상체(subject)에게 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 환자에서 종양 성장을 억제하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 종양이 있는 환자에게 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 바이러스 감염증 또는 세균 감염증이 있는 대상체에서 바이러스 또는 세균의 복제 또는 번식을 억제하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 바이러스 감염증 또는 세균 감염증이 있는 대상체에게 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 효과적인 양으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 NK 세포를 활성화시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은 시험관 내에서 NK 세포를 포함하는 세포 조성물에 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)를 접촉시키는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는, 사이토카인 및 선택적 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1) 활성화 림프구성 세포 조성물이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 조성물은 약학적 조성물이다.
일부 구체예에서는 HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증이 있는 환자를 치료하기 위한, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는, 사이토카인 및 선택적 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1) 활성화 림프구성 세포 조성물이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 조성물은 약학적 조성물이다.
일부 구체예에서는 HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증이 있는 환자를 치료하기 위한 약을 조제하기 위한, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는, 사이토카인 및 선택적 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1) 활성화 림프구성 세포 조성물이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 조성물은 약학적 조성물이다.
특정 구체예에서 상기 세포 조성물은 활성화 감마 델타 T 세포(GDT 세포)를 더 포함한다. 일부 구체예에서 상기 세포 조성물은 불변(invariant) 자연살해 T 세포(iNKT 세포)를 더 포함한다. 일부 구체예에서 상기 세포 조성물은 CD3 T 세포를 더 포함한다.
일부 구체예에서는 환자에게 투여하기 전에 상기 림프구성 세포 조성물이 세포에 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)를 혼합/배양/접촉시키는 것으로 활성화된다.
일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포 인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서 상기 사이토카인은 약 6 내지 24시간 동안 상기 세포 조성물과 배양/혼합/접촉된다.
일부 구체예에서 상기 세포 조성물과 함께 배양되는 사이토카인의 양은 약 100 내지 1000IU/ml이다.
일부 구체예에서 상기 방법은 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 3 내지 5일 전에 적어도 하나의 림프억제제(lympho-suppressive agent), 화학요법제, 또는 면역억제제를 투여하는 것으로 활성화 NK 세포 투여 전에 환자가 사전 조건화(pre-conditioning)되는 단계를 더 포함한다.
다른 추가적인 구체예에서 상기 림프억제제 또는 화학요법제는 6TG, 6-MMP, 그리고 클로파라빈, 플루다라빈, 및 시타라빈으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 퓨린 유사체(analogues)를 포함하는 제제 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서 상기 림프억제제 또는 화학요법제의 투여량의 범위는 약 5mg/m2에서 약 50mg/m2이다.
일부 구체예에서 상기 화학요법제 또는 면역억제제는 사이클로포스파미드, 리툭시맙, 그리고 선택적으로 스테로이드 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함한다.
일부 구체예에서 상기 스테로이드는 당질 코르티코이드 스테로이드이다.
일부 구체예에서 상기 스테로이드는 프레드니손이다.
일부 구체예에서 상기 화학요법제 또는 면역억제제의 투여량의 범위는 약 20mg/m2에서 약 1000mg/m2이다(가능한 최저 및 최고 투여량 확인).
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하기 이틀 전 그리고 하루 전에 환자에게 인터페론-알파(IFN-α), 또는 그의 생물학적 균등물을 약 1 X 106IU/m2/d 내지 약 10 x 106IU/m2/d의 투여량으로 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하는 같은 날에, 하지만 최소 약 2 내지 6시간 전에 환자에게 하나 또는 두 개의 항히스타민제를 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날 그리고 투여 후 첫 날, 그리고 활성화 NK 세포의 투여 후 추가적으로 3 내지 14일 동안 지속적으로 환자에게 IL-2를 한 투여량 당 약 3-6 X 106 IU의 투여량으로 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날, 그리고 활성화 NK 세포의 투여 후 최소 14 내지 60일 동안 지속적으로 환자에게 COX-2 억제제 또는 비스테로이드성 소염제(NSAID), 또는 이들의 조합을 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서 상기 COX-2 억제제는 세레콕시브 또는 로페콕시브이고, 그리고 상기 비스테로이드성 소염제는 아스피린, 인도메타신(인도신), 이부프로펜(애드빌, 모트린), 나프록센(나프로신), 피록시캄(펠덴), 및 나부메톤(렐라펜)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 구체예에서 상기 NK 세포는 환자에 대해 동종이형(allogeneic)이다.
일부 구체예에서 상기 NK 세포는 환자와 HLA 불일치(not HLA-matched)하다. 일부 구체예에서 상기 NK 세포는 의도적으로 HLA 불일치, 또는 KIR-저해성 리간드/HLA 불일치이다.
일부 구체예에서 활성화 세포의 투여량의 범위는 약 3-50 x 106이다.
일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 레트로바이러스(예: 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV) I형 및 II형 그리고 인간 면역결핍 바이러스(HIV)), 헤르페스 바이러스(예: 단순 헤르페스 바이러스(HSV) I형 및 II형, 엡스타인바 바이러스 및 거대세포 바이러스), 아레나바이러스(예: 라사열 바이러스), 파라믹소바이러스(예: 홍역 바이러스, 인간 호흡기 세포융합 바이러스, 및 폐렴 바이러스), 아데노바이러스, 부니아바이러스(bunyaviruses)(예: 한타바이러스), 코로나바이러스, 필로바이러스(예: 에볼라 바이러스), 플라비바이러스(예: C형 간염 바이러스(HCV), 황열병 바이러스, 및 일본 뇌염 바이러스), 헤파드나바이러스(예: B형 간염 바이러스(HBV)), 오르소믹소바이러스(orthomyxovirus)(예: 센다이 바이러스 및 A형, B형 그리고 C형 인플루엔자 바이러스), 파포바바이러스(예: 유두종 바이러스), 피코르나바이러스(예: 리노바이러스, 엔테로바이러스 및 A형 간염 바이러스), 폭스바이러스, 레오바이러스(예: 로타바이러스), 토가바이러스(예: 풍진 바이러스), 및 랍도바이러스(예: 광견병 바이러스), 그리고 이들의 어느 조합에 의해 야기된 바이러스 감염증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 HIV이다. 일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 HCV이다. 일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 HBV이다. 일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 코로나바이러스이다. 일부 구체예에서 상기 바이러스 감염증은 COVID-19이다.
일부 구체예에서 상기 암은 급성 백혈병, 급성 골수세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수모구 백혈병, 전골수성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수세포(또는 과립세포) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 진성적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종(무통성 및 고등급 형태), 다발골수종, 발덴스트롬 고분자글로불린혈증, 중쇄 질병, 골수형성이상증후군, 털세포 백혈병 및 골수형성이상증, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액작용 또는 혈행성 암이다.
일부 구체예에서 상기 암은 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종 및 다른 육종, 활막종(synovioma), 중피종, 유잉 육종, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 림프구성 악성종양(lymphoid malignancy), 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 감세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 샘암종(adenocarcinoma), 땀샘암종, 갑상선 수질암, 갑상선 유두암, 크롬친화세포 피지샘 암종(pheochromocytomas sebaceous gland carcinoma), 유두암종, 유두상 선암종, 수질암종, 기관지원성 암종, 신세포암종, 간암, 담관암종, 융모막암종, 윌름즈 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 고환종, 방광 암종, 흑색종, 그리고 신경교종(예를 들어 뇌줄기신경아교종 및 혼합성 신경교종), 교모세포종(다형교모세포종으로도 알려짐) 별아교세포종, CNS 림프종, 배아종, 수모세포종, 신경집종 두개인두종(Schwannoma craniopharyogioma), 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 뇌수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 및 뇌전이와 같은 CNS 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 고형종양이다.
일부 구체예에서 상기 세균 감염증은 병원성 균종 박테로이데스, 클로스트리듐, 연쇄상구균, 포도상구균, 녹농균, 헤모필루스, 레기오넬라, 미코박테륨, 대장균, 살모넬라, 시겔라, 또는 리스테리아 중 하나에 의해 야기된다.
일부 구체예에서는 환자에게서 이식편대숙주병(GVHD)이 감소되거나 제거된 반면, 이식편대종양(GVT) 또는 이식편대바이러스(GVV)가 증가되었다.
일부 구체예에서 환자에게 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종이 있을 때는 IL-2의 투여는 적합하지 않고(counter-indicated) 그리고 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여 후 투여되지 않는다.
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여로부터 4-14일의 기간 동안 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb의 니볼루맙), MK-3475(Merck의 키트루다)로도 알려진 펨브롤리주맙/램브롤리주맙, 피딜리주맙(Curetec), AMP-224(Amplimmune)를 포함하는 항PD-1 항체, 또는 MPDL3280A(Roche), MDX-1105(Bristol Myer Squibb), MEDI-4736(AstraZeneca) 및 MSB-0010718 C(Merck)를 포함하는 항PD-L1 항체와 같은 PD-1 또는 PD-L1(B7-H1)의 억제제를 포함하는 두 가지 체크포인트 억제제 중 어느 하나 또는 둘의 조합을 포함하는 면역 체크포인트(check-point) 억제제, 항CTLA-4 항체 YervoyTM(이필리무맙, Bristol-Myers Squibb), 트레멜리무맙(Pfizer), 티실리무맙(AstraZeneca) 또는 AMGP-224(Glaxo Smith Kline)를 포함하는 항CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4의 작용제, 또는 유방암을 위한 트라스트주맙(Herceptin), 림프종을 위한 리툭시맙(Rituxan), 또는 세툭시맙(Erbitux) 종양 특이적 항체를 환자에게 투여하는 단계를 더 포함한다.
일부 구체예에서 치료 또는 면역 반응 증가는 유지요법(maintenance treatment)으로서 환자가 호전 또는 안정적/비진행(non-progressing) 질병을 보이는 한, 매달 1회에서 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회의 기간 동안 주기적으로 반복된다.
도 1은 다양한 환자 집단에 대한 치료 사전 조건화, 세포 주입 치료, 및 세포 주입 후 치료 선택권(options)("후 조건화(post-conditioning)")를 포함하는 예시적인 치료 요법을 나타내는 표이다.
도 2a는 비제한적인 치료 요법 및 본 명세서에 기술된 방법에 따라 치료된 HIV 환자로부터의 HIV 바이러스 부하 수(viral load counts)를 도시한다.
도 2b는 비제한적인 치료 요법 및 본 명세서에 기술된 방법에 따라 치료된 HIV 환자로부터의 HIV 바이러스 부하 수(viral load counts)를 도시한다.
도 3a, 도 3b, 도 3c, 도 3d, 및 도 3e는 환자 수 및 종양 유형(도 3a), 치료 요법/프로토콜(도 3b), 관찰된 NK 세포 특성화(characterizations)(도 3c) 처리 독성(도 3d) 및 생존 데이터(도 3e)를 요약하는 표 및 도면을 도시한다.
도 4는 sFGFR1의 세포외 구성요소 및 발현 벡터를 나타내는 플라스미드 맵(map)을 도시한다.
도 5는 암-면역 주기를 보여주는 도면이다.
도 6a, 도 6b, 도 6c, 및 도 6d는 활성제가 사용되지 않은(도 6a), IL-2를 활성제로 사용한(도 6b), FGFR1을 활성제를 사용한(도 6c), 그리고 IL-2 및 FGFR1의 조합을 활성제로 사용한(도 6d) 활성화의 72시간 후의 NK 세포 제제의 유동 세포 분석법의 이미지들이다.
NK 세포는 바이러스 및 종양에 맞서는 첫 방어선(first line of defense)를 형성하는 선천 면역세포이다. 암 항원에 대항하는 항체를 사용하는 것으로 암 치료에 상당한 발전이 있었지만, 그러한 항체에 대한 환자의 반응이 각기 다르다. 그러한 다른 반응의 연구는 일반적으로 이 항체들이 종양 세포에 미치는 직접적인 억제 효과(예를 들어 성장 인자 수용체의 억제 및 그 후의 세포자멸사의 유도)에 집중되었지만, 이 항체들의 생체 내 효과는 더 복잡할 수 있고 그리고 숙주 면연계를 관련시킬 수 있다. 예를 들어 그러한 항암 항체의 작용의 메커니즘은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: 항체 의존성 세포독성(ADCC), 항체 의존성 사이토카인/케모카인 생산, 및 보체 의존성 세포독성(CMC). (Veluchamy, John, et al. Front Immunol. 2017; 8:631 참조.)
항체 의존성 세포독성 및 항체 의존성 사이토카인/케모카인 생산은 주로 림프구의 특수 아형(subset)인 자연살해(NK) 세포에 의해 매개된다. NK 세포는 림프구에서 세 번째로 큰 집단을 이루는 이펙터 세포이고 그리고 종양 및 병원체 감염된 세포에 대항하는 숙주 면역감시(host immuno-surveillance)에 중요하다.
NK 세포 및 그의 활성화 및 억제 수용체
인간 NK 세포는 일반적으로 그의 CD56 및 CD16 발현의 수준에 따라 다음의 두 아형으로 분류된다: CD56brightCD16dim 및 CD56dimCD16bright NK 세포. 말초혈액 및 비장에 있는 대부분의 NK 세포는 CD56dimCD16bright이고 그리고 다양한 종양 세포에 대해 세포독성인 반면, CD56brightCD16dim NK 세포는 기능적으로 면역 조절성이고 그리고 제2 림프구 조직의 대다수를 이루어 풍부한 사이토카인을 생산하지만 CD56dimCD16bright NK 세포에 비해 약한 세포독성을 제공한다(Cooper, M.A., et al. Trends Immunol (2001) 22(11):633-40 참조). NK 세포가 암 세포와 건강한 세포를 구분 짓는 능력은, 적어도 부분적으로는, 그의 활성화 및 억제 수용체 사이의 균형에 의해 조절된다. DNAM-1 및 NKG2D와 같은 NK 활성화 수용체; NKp30, NKp44, NKp46, CD94/NKG2C, CD94/NKG2E, 및 CD16a와 같은 천연 세포독성 수용체(NCR); 및 활성화 살해 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR)가 NK 세포 활성화에 기여하여, 암 세포를 용해하기 위해 NK 세포로부터 세포독성 과립 및 인터페론 감마(IFNγ)와 같은 전염증성(proinflammatory) 사이토카인의 방출을 유발한다. NK 세포 활성화 수용체 NKG2D(CD314)는 MHC 클래스 I 사슬 관련 단백질 A 및 B(MICA 및 MICB)를 인식하고, DNAM-1은 스트레스를 받은(stressed), 감염된, 그리고 암 세포 상에 있는 CD112(Nectin-2) 및 CD155(폴리오바이러스 수용체)에 결합한다. NCR에 대한 리간드는 바이러스 또는 세포내 세균에 의해 감염된 세포 또는 종양 세포 상에 널리 발현되지만, NK 세포독성에 있어서 그의 역할을 정의하기에는 그의 정확한 작용 방식이 아직 특징 지어지지 않았다. CD159(Cluster of Differentiation 159)로도 알려진 NKG2는 자연살해 세포를 위한 수용체이다. NKG2에는 7개의 유형이 있다: A, B, C, D, E, F 및 H. NKG2D는 NK 세포 표면 상에 있는 활성화 수용체이다. NKG2A는 억제수용체(CD94/NKG2)를 만들기 위해 CD94와 이합체화(dimerize)된다. NKG2군의 이종이합체인 CD94/NKG2C 및 CD94/NKG2E는 비표준(non-classical) MHC 클래스 I 분자 HLA-E를 인식하고 그리고 NK 활성화 신호를 유발하기 위해 DAP-12분자와 회합(associate)한다(Borrego, F. et al, J Exp Med (1998) 187(5):813-8; 및 Pegram, H.J. et al. Immunol Cell Biol (2011) 89(2):216-24 참조). NK 세포의 다른 중요한 활성화 메커니즘은 IgG1 항체의 Fc 부분과 CD16a(FcγRIIIa, 저친화성 Fc 수용체)의 상호작용을 통해 NK 세포매개 항체 의존성 세포매개 세포독성(ADCC)을 위한 항체 옵소닌화된(opsonized) 표적에 관여(engage)하기 위한 면역 시냅스를 형성하는 것이다(Leibson, P.J. Immunity (1997) 6(6):655-61). 활성화 수용체에 관여하는 것 외에도, NK 세포는 종양 괴사 인자 α(TNF-α), Fas 리간드, 및 TNF 관련 세포자멸 유발 리간드(TRAIL)를 사용하여 표적 세포사 또한 유발한다. 가장 유명한 NK 세포 억제 수용체는 MHC 클래스 I(HLA-ABC) 분자를 인식하는 억제성 KIR을 포함하고, 이는 보편적으로 건강한 조직 상에 발현된다. 유사하게 NKG2군의 억제 수용체인 CD94/NKG2A는 HLA-E에 결합하고 그리고 세포내 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif: ITIM)의 활성화를 통해 NK 세포 내성을 유발한다. 따라서 NK 세포 기능이 종양 세포와의 상이한 리간드 상호작용에 따라 활성화 또는 억제 신호를 증가시킬 수 있는 수용체의 배열에 의해 결정된다는 것을 알기 때문에, 치료 환경에서는 향상된 NK 종양 사멸 메커니즘을 촉진하기 위해 NK 표현형을 활성화시키는 쪽으로 균형을 조정하는 것이 중요하다.
암에서의 NK 세포 기능 장애(dysfunctionality)
자연살해 세포는 순환하는 종양 세포를 제어할 수 있고 그리고 종양 전이의 형성을 방지할 수 있다. 그러나 종양은 NK 세포에 의한 사멸을 피하기 위해 상이한 전략들을 이용한다. MHC 클래스 I 분자(HLA-ABC, HLA-G 및 HLA-E)와 같은 억제 리간드의 상향조절(upregulation)은 NK 세포로의 더 강한 억제 신호와 연관되어 왔다. 또한 신세포암종에서 보고된 억제 NKG2A 수용체의 증가된 발현은 결과적으로 NK 세포에 침윤하는 종양의 기능성 감소를 야기했다. 다른 한편으로는, MICA 및 MICB와 같은 NKG2D에 대한 NK 활성화 리간드의 하향조절 및 종양 유래 가용성 MIC의 박리(shedding) 증가 또한 NKG2D 매개 NK 세포 종양 인식을 손상시킨다. 최적의 NK 세포 기능을 위한 또 다른 중요한 특징은 종양 부위로 귀소(home) 및 이동(migrate)하는 능력이다. 여러 연구가 종양 조직으로의 NK 세포의 귀소 증가와 고형 종양에서의 향상된 치료 결과의 연관성을 보여주었다. 그러나 조절 T 세포(T-regs), 골수 유래 면역 억제 세포(MDSC), M2 대식세포, 및 미성숙 수지상 세포를 포함하는 면역 억제 종양 기질(stroma)이 NK 세포 기능 및 고형 종양 내로의 그의 진입을 심하게 제한한다. 인간 면역결핍 바이러스 및 거대세포바이러스 감염과 관련된 것들과 같은 만성 질환에서는 주로 감소된 사이토카인 생산 및 감소된 세포용해 활성을 갖는 고갈된(exhausted) NK 세포가 관찰된다. 유방암 환자 연구에서는 활성화 수용체(NKG2D, DNAM, CD16, 및 NKp30)의 NK 세포 발현 수준은 감소된 반면, 억제 수용체(NKG2A) 발현 수준은 증가되었고 그리고 이 외견적 NK 세포의 기능 장애는 NK 세포 세포독성에 직접적으로 영향을 미치는 것으로 밝혀졌다. 유사하게 두경부암 및 유방암 환자의 NK 세포의 이펙터 아형(CD56dimCD16+)이 시험관 내에서 시험되었을 때 세포자멸사에 굉장히 취약했고, 따라서 이 환자들에서 낮은 NK 세포 활성을 나타냈다. 손상된 NK 세포 기능성은 종양에 의해 시행되는 억제 메커니즘으로부터 야기될 수 있고 그리고 NK 세포 표적 면역 요법에 심각한 장애물이 될 수 있다. 그러므로 손상된 NK 세포를 회복하거나 대체하는 접근법이 암 뿐만 아니라 세균 감염증 및 HIV와 같은 바이러스 감염증에 대항하는 숙주 방어 조절을 증가시키는 데에 효과적인 치료법이 될 것이다.
자가(autologous) NK 세포와는 달리, 동종이형(allogeneic) NK 세포는 환자의 종양의 HLA 발현에 의해 제한되지 않고, 이는 향상된 항종양 효과에 더해지는 추가적 이점이다.
활성화되었을 때 NK 세포는 사이토카인 및 케모카인을 풍부하게 생산하고 그리고 그와 동시에 강한 세포독성 활성을 보인다. 이 NK 활성화의 이점은 이가 주조직 적합 복합체(MHC) 비의존성이라는 것이다. NK 세포의 활성화는 직접적 종양 세포 사멸에서 볼 수 있는 바와 같이, 표적 세포 상의 리간드로의 NK 세포 수용체의 직접적 결합을 통해서, 또는 항원 함유(bearing) 세포에 결합된 항체의 Fc 부분과의 결합에 의한 Fc 수용체(CD16; FcγRIII)의 교차결합(crosslinking)을 통해 발생할 수 있다. 이 CD16 결합(CD16 교차결합)은 CD16 회합 어댑터(adaptor) 사슬 FcRγ 또는 CD3ζ 중 하나 또는 둘 다를 통해 생성된 세포내 신호를 통해 NK 세포 반응을 개시한다. CD16의 유발은 감마 또는 제타 사슬의 인산화를 야기하고, 뒤이어 이는 티로신 키나아제, syk 및 ZAP-70을 동원하여 신속하고 강한 이펙터 기능을 야기하는 신호 혈질도입의 연쇄반응(cascade)를 개시한다. 가장 잘 알려진 이펙터 기능은 항체 의존성 세포독성(ADCC) 과정을 통해 근처의 표적 세포를 사멸하기 위해 독성 단백질을 가진 세포질 과립의 방출이다. CD16 교차연결은 사이토카인 및 케모카인의 생산 또한 야기하고, 결과적으로 일련의 면역 반응을 활성화 및 지휘(orchestrate)한다.
이 사이토카인 및 케모카인의 방출은 생체 내에서 활성화 NK 세포의 항암 활성에서 한 역할을 할 것으로 예상된다. NK 세포는 그의 세포질에 퍼포린 및 단백질 분해 효소(그랜자임)를 함유하는 작은 과립 또한 갖는다. 활성화 NK 세포로부터 방출되었을 때, 퍼포린은 표적 세포의 세포막에 구멍(pores)을 형성하고, 이를 통해 그랜자임 및 관련 분자가 진입하여 세포자멸사를 유발한다. 활성화 NK 세포가 괴사가 아닌 세포자멸사를 유발한다는 사실이 중요한데, 바이러스 감염된 세포의 괴사는 비리온을 방출하지만 세포자멸사는 세포 내에 있는 바이러스의 파괴를 야기하기 때문이다.
여러 NK 세포 활성화 수용체의 발현 및 신호 형질도입 활성은 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 통해 신호를 변환하는 물리적으로 회합된 어댑터를 필요로 한다. 이 어댑터들 중에서 FcRγ 및 CD3ζ 사슬은 이황화결합된 동종이합체 또는 이종이합체로서 CD16 및 천연 세포독성 수용체(NCR)와 회합할 수 있고, 그리고 이 사슬들은 모든 성숙 NK 세포에 의해 발현되는 것으로 여겨진다.
따라서 이론에 얽매이지 않길 바라며, 본 발명의 관점은 유효량의 활성화 NK 세포, 또는 활성화 NK 세포와 유효량의 활성화 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 활성화 GDT 세포 및 iNKT 세포 또는 CD3 T 세포 중 어느 하나의 조합을 포함하는 림프구성 세포 조성물을 환자에게 암 또는 HIV를 포함하는 전염병에 대해 향상된 면역 반응을 제공하기 위해 구체적인 전 조건화 및 세포 주입 후 조건화 단계를 조합하는 요법(도 1 참조)에서 환자에게 제공하는 것에 관한 것이다. 본 명세서에 기술된 방법 및 조성물은 기존의 방법들에 비교하여, 공급자 세포에서 공동배양을 하지 않고, 원하지 않는 T 조절 효과를 완화시키는 능력 뿐만 아니라, 활성화 세포 조성물 제조 및 환자에게 전달함에 있어 용이함과 빠른 속도, 그리고 일반적으로 1등급(Grade 1) 또는 그 이하의 부작용일 뿐인 상기 세포 조성물로부터의 아주 적은 부작용만 있는 점(도 3d 참조)을 포함하는 많은 이점을 가질 수 있다. 이 방법들은 숙주, 환자 면역 세포가 암, 세균, 또는 바이러스 표적을 유사하게 인식 및 사멸하도록 훈련시키는 "백식 효과" 또한 제공하는 역할도 한다.
약어:
세포 의존성 세포독성(Antibody-dependent cellular cytotoxicity): ADCC
클러스터 분화 3(Cluster differentiation 3): CD3
이식편대종양 효과(Graft-versus-tumor effects): GVT
이식편대숙주병(Graft versus host disease): GVHD
이식편대바이러스(Graft versus virus): GVV
감마 델타 T 세포(Gamma delta T cells): GDT 세포, 또한 γδT 세포.
인간 면역결핍 바이러스(Human immunodeficiency virus: HIV): 후천 면역결핍 증후군을 야기하는 렌티바이러스.
불변 자연살해 T 세포(Invariant natural killer T cells): iNK T 세포, I형 또는 전형적 NKT 세포로도 알려졌으며, 불변 aβ T 세포 수용체(TCR) 및 자연살해(NK) 세포와 공통적인 다수의 세포 표면 분자를 발현하는 T 세포의 특유 집단이다.
자연살해 세포(Natural Killer cells): NK 세포
본 발명을 더 쉽게 이해할 수 있도록 특정 기술적 그리고 과학적 용어들이 하기에 명확하게 정의되었다. 본 명세서의 다른 부분에서 달리 명확하게 정의되지 않은 한, 본 명세서에서 사용된 모든 다른 기술적 그리고 과확적 용어들은 본 발명의 당업계의 통상의 기술자가 흔히 이해하는 의미를 갖는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 그리고 달리 표시되지 않은 한, 용어 "약(about)"은 그가 수식하는 값의 ±5%를 의미하도록 의도되었다. 따라서 약 100은 95 내지 105를 의미한다. 또한 용어 "약"은 일련의 용어에 있는 용어를 수식한다. 예를 들어 "약 1, 2, 3, 4, 또는 5"에서는 용어 "약"이 목록의 각 구성원을 수식하는 것으로 이해되어, "약 1, 2, 3, 4, 또는 5"가 "약 1, 약 2, 약 3, 약 4, 또는 약 5"를 의미하는 것으로 이해될 수 있다. 용어 "최소" 또는 "이하", "이상" 등과 같은, 하지만 이들에 제한되지는 않는, 다른 수량화 수식어에 의해 수식되는 목록에도 동일하게 적용된다.
본 명세서 및 첨부된 추가항에서 사용된 바와 같이 단수 형태의 부정관사 및 정관사("a", "an" 및 "the")는 문맥이 달리 명확하게 명시하고 있지 않는 한 복수의 대상을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "포함(comprise)", "갖는(have)", 그리고 "포함(include)" 및 이들의 다른 형태들은 "포함하지만 이에 제한되지는 않는"을 의미한다. 다양한 조성물 및 방법들이 다양한 구성요소 또는 단계를 "포함"하는("포함하지만, 이에 제한되지는 않는" 것으로 해석) 것에 관하여 기술되지만, 상기 조성물, 방법, 및 장치는 다양한 구성요소 및 단계들로 "필수적으로 이루어진(consist essentially of)" 또는 "이들만으로 이루어지는(consist of)" 수도 있고, 그리고 그러항 용어는 본질적으로 폐쇄형의 구성원(closed-member groups)을 정의하는 것으로 해석되어야 한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "가용성 FGFR1"은 척추동물 섬유모세포 성장 인자 수용체 1을 지칭하고, 그리고 특히 호모 사피엔으로부터의 단백질을 나타낸다(UNIPROTKB:P11362-7, 완전한 정보는 다음의 월드 와이드 웹 주소에서 찾을 수 있다: genecards.org/cgi-bin/carddisp.pl?gene=FGFR1). 척추동물 섬유모세포 성장 인자 수용체(FGFR) 군(family)은 배아 발달 및 성체 세포(adult cells)의 성장 및 증식에 관련된 중요한 군의 단백질이다. FGFR 단백질에서의 돌연변이는 뼈 또는 팔다리(limb) 결함 및 다양한 형태의 암으로 이어질 수 있다. FGFR 단백질은 리간드 결합이 이루어졌을 때 이합체화하고 그리고 MAPK 및 PLCγ 경로를 통해 신호를 보내는 수용체 티로신 키나아제이다. FGFR1은 세포외 영역, 일회 통과(single-pass) 막관통(transmembrane) 도메인, 및 세포내 티로신 키나아제 도메인으로 이루어지는 이 단백질군의 잘 특성화된(well-characterized) 구성원이다. 상기 세포외 영역은 신호를 전파하기 위한 수용체 이합화 후 세포내 도메인이 하류(downstream) 이펙터와 상호작용하는 동안 세포외 매트릭스와의 상호작용을 책임지는 헤파린 결합 도메인을 함유한다(Int. J. Dev. Biol. 2002;46(4):393-400). FGFR1은 가용성, 막관통 및 키나아제 도메인이 결여된 분비된 아이소형(secreted isoform)을 포함하는 많은 대안적인 스플라이스된(spliced) 아이소형으로 존재한다. 기능은 불명확하지만 가용성 FGFR1 아이소형은 발달 중에 FGF 리간드에 결합할 수 있고 그리고 그의 활성을 조절할 수 있다(Int. J. Dev. Biol. 2002;46(4):393-400). 일반적인 FGFR1 신호 전달(signaling)은 리간드 결합, 수용체 이합체화, 및 하류 이펙터 단백질의 인산화 후에 일어난다. 그러나 최근 연구들은 내재화된 FGFR1이 핵으로 이동되어 거기에서 표적 유전자 발현 및 암세포의 세포 증식을 조절하는 것을 보여줬다(J. Cell Biol. 2012 Jun 11;197(6):801-17). (또한 예를 들어 Breast Cancer Res. 2012 Aug 3;14(4):R115 참조.)
본 명세서에 기술된 바와 강티 NK 세포, 또는 더 구체적으로는 GDT 세포를 활성화시키거나 또는 전처리하는 데에 사용하기 위한 인간 FGFR1을 위한 원천들(sources)이 있지만, 한 선택지는 도 4에 보여진 바와 같이 발현 구성체(construct)를 사용하여 플라스미드의 인간 FGFR1의 세포외 부분을 발현 및 정제하는 것이다. 이는 비제한적인 예시이고 어느 원천의 FGFR1이라도 사용될 수 있다.
용어 "병용투여(co-administration)" 또는 그와 같은 용어는 단일 환자에게 산택된 치료제의 투여를 아우르는 의미를 갖고, 그리고 제제(agents)가 투여와 동일한 또는 상이한 경로로 투여되거나 또는 동일한 또는 다른 시간에 투여되는 치료 요법을 포함하도록 의도되었다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "작용제(agonist)"는 그의 존재가 단백질에 대해 자연적으로 발생하는 리간드의 존재로부터 야기되는 생물학적 활성과 동일한 단백질의 생물학적 활성을 야기하는 화합물을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "부분 작용제(partial agonist)"는 그의 존재가 단백질에 대해 자연적으로 발생하는 리간드의 존재로부터 야기되는 생물학적 활성과 동일한 유형의 단백질의 생물학적 활성을 야기하지만 더 낮은 규모로 야기하는 화합물을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "길항제(antagonist)"는 그의 존재가 단백질의 생물학적 활성의 규모의 감소를 야기하는 화합물을 지칭한다. 특정 구체예에서는 길항제의 존재가 단백질의 생물학적 활성의 완전한 억제를 야기한다. 특정 구체예에서는 길항제가 억제제이다.
치료 조성물(예: 활성화 NK 세포, 또는 활성화 세포의 조합)과 함께 사용될 때 "투여(administering)"는 투여에 의해 치료제가 그가 표적하는 조직에 긍정적인 영향을 미치는, 치료제를 직접적으로 표적 조직 내에 또는 표적 조직 상에 투여하는 것 또는 환자에게 치료제를 투여하는 것을 의미한다.
상기 CD3 단백질은 면역수용체 티로신 활성화 모티프(ITAM)의 인산화에 의해 개시되는 세포내 신호전달을 책임지는 세 쌍의 이합체(εγ, εδ, ζζ)로 구성된다(총 10개). CD3은 처음에 전흉선세포(pro-thymocytes)의 세포질에서 발현되고, 상기 전흉선세포의 줄기세포로부터 흉선에서 T 세포가 발생한다. 상기 전흉선세포는 보통 흉선세포로 분화된 다음에 수질 흉성세포로 분화되고, 그리고 이 후자의 단계에서 CD3 항원이 세포막으로 이동하기 시작한다. 상기 항원은 모든 성숙 T 세포의 막에 결합된 것으로 발견되고, 그리고 사실상 다른 세포 유형 세포에서는 발견되지 않지만 소량의 퍼킨지(Purkinje) 세포에 존재하는 것으로 보인다. T 세포 발달의 모든 단계에서의 CD3의 존재에 더하여 이 높은 특이성은 이를 조직 절편(sections)에서 유용한 T 세포의 면역조직화학(immunohistochemical) 마커로 만든다. 상기 항원은 거의 모든 T 세포 림프종 및 백혈병에서 남아있고, 그리고 따라서 그를 표면적으로 유사한 B 세포 및 골수성 신생물(myeloid neoplasms)로부터 구별하는 데에 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "대상(subject)" 또는 "환자(patient)"는 인간 그리고 야생 동물, 길들여진 동물, 및 가축과 같은 비인간 척추동물을 포함한다. 상기 용어들은 상호교환적으로 사용될 수 있다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 기술된 대상 또는 환자가 동물이다. 특정 구체예에서는 본 명세서에 기술된 대상 또는 환자가 포유동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상이 인간이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 비인간 동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 비인간 포유동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 개, 고양이, 소, 돼지, 말, 양, 또는 염소와 같은 길들여진 동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 개 또는 고양이와 같은 반려동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 소, 돼지, 말, 양, 또는 염소와 같은 가축이다. 특정 구체예에서 상기 대상 또는 환자는 동물원의 동물이다. 다른 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 설치류, 개, 또는 비인간 영장류와 같은 실험 동물이다. 특정 구체예에서는 상기 대상 또는 환자가 유전자 도입(transgenic) 마우스 또는 유전자 도입 돼지와 같은 비인간 유전자 도입 동물이다.
용어 "억제(inhibit)"는 증상 발현(onset) 예방, 증상 완화, 또는 질병(disease), 질환(condition) 또는 장애(disorder)의 제거를 위한 본 명세서의 구체예들의 치료제의 투여를 포함한다.
"약학적으로 허용가능한(pharmaceutically acceptable)" 것은 운반체(carrier), 희석제 또는 부형제가 상기 치료제의 다른 성분에 적합하고 그리고 그의 수용자(recipient)에게 유해하지 않다는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "치료(treat)", "치료된(treated)", 또는 "치료하는(treating)"은 치료법(therapeutic treatment) 및 예방(prophylactic) 또는 방지(preventative) 수단 모두 지칭하고, 여기서 목적은 원하지 않는 생리적 질환, 장애 또는 질병을 억제, 예방 또는 감속(완화)하거나, 또는 호전, 억제, 또는 유익한 또는 원하는 임상적 결과를 달리 얻는 것이다. 본 발명의 목적을 위하여 유익한 또는 원하는 임상적 결과는 호전 또는 증상의 완화; 질환, 장애 또는 질병의 정도 감소; 질환, 장애 또는 질병의 상태의 안정화(즉 악화되지 않음); 질환, 장애 또는 질병의 발현 지연 또는 그의 진행 감속; 질환, 장애 또는 질병 상태의 개선; 및 질환, 장애 또는 질병의, 검출이 가능하든 아니든, 관해(부분적이든 완전히든), 또는 증강 또는 개선을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 치료는 과한 수준의 부작용 없이 임상적으로 유의한 반응을 유발하는 것을 포함한다. 치료는 치료를 받지 않았을 때 예상되는 생존에 비해 생존을 지속시키는 것 또한 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "활성화 NK 세포(activiated NK cell)"는 조절 세포에 비해 세포독성 세포로 고려되도록 충분히 자극된 NK 세포의 상태를 지칭한다. 활성화는 유발된 사이토카인 생산 및 검출가능한 이펙터 기능과도 연관될 수 있다. 용어 "활성화 NK 세포는" 특히 CD56dimCD16+, CD56int/lowCD16-, CD56+CD16+ 세포독성 세포 및/또는 ADCC인 NK 세포를 지칭한다. 일부 구체예에서 NK 세포는 본 명세서에 제공된 바와 같이 활성화된다.
화학요법제 또는 림프억제제(Lymphosuppressive agents) 및 면역억제제
본 명세서에서 사용된 바와 같이 사전 조건화 단계에서 사용되는 림프억제제는 스테로이드 또는 프레드니손 또는 CD20에 대항하는 단클론 항체, 예를 들어 리툭시맙과 같은 다른 면역억제제를 포함할 수 있다. 표 1 내지 표 5에 간략하게 나타낸 바람직한 사전 조건화 기간에서 면역억제제의 일반적인 투여량은 25-1000mg/m2 사이이다.
사전 조건화 제제(pre-conditioning agents)는 티오구아닌(6TG), 6-메르캅토퓨린(6-MP), 그리고 클로파라빈, 플루다라빈, 시타라빈과 같은 퓨린 유사체와 같은 화학요법제 또는 항신생물제 중 어느 하나 또는 이들의 조합의 유효량(일반적으로 낮은 용량) 또한 포함할 수 있다. 활성화 세포 조성물을 투여하기 3, 또는 4, 또는 5일 전의 바람직한 기간에서 이 제제들의 일반적인 투여량은 25-1000mg/m2 사이이다.
특정 구체예에서는 환자가 플루다라빈과 함께 또는 이 없이 림프억제제 또는 시클로포스파미드와 같은 화학요법제로 사전 조건화될 수 있다. 그러한 사전 조건화 처리의 예시는 예를 들어 미국 특허번호 제9,855,298호에서 찾을 수 있다. 비제한적인 예시는 플루다라빈(4일 동안 매일 30mg/m2 정맥내 투여) 및 시클로포스파미드(플루다라빈의 첫 투여와 함께 시작하여 2일 동안 매일 500mg/m2 정맥내 투여)를 투여하는 것이다. 투여 후, 플루다라빈 완료(completion)로부터 2 내지 5일 후(즉 사전 조건화 처리 후)에 활성화 림프구성 조성물이 투여될 수 있다. 특정 구체예에서는 시클로포스파미드가 2 내지 3일 동안 약 500 내지 약 600mg/m2의 투여량으로 투여된다.
NK 세포 뿐만 아니라 GDT 세포 및 iNK 세포를 활성화시키는 데에 적합한 사이토카인 활성화
적합한 NK 활성화 사이토카인은 다음 중 하나 이상의 유효량을 포함할 수 있다: IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, SCF, IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합. 이 활성화 사이토카인들은 NK 세포, iNK 세포, 및 GDT 세포를 활성화 시키는 데에 단일 제제(single agents), 또는 조합으로서도 효과적이다.
주입 후, 후 조건화 제제를 위한 비스테로이드성 소염제(NSAID)
NSAID는 염증, 통증, 및 발열(fever)을 촉진시키는 화학 물질인 프로스타글란딘의 생산을 감소시키는 것으로 작용한다. 본 명세서에 기술된 방법에서 면역 반응의 부정적인 양상을 제어하기에 적합한 NSAID는 세레콕시브(셀레브렉스)와 같은 특이적 COX-2 억제제에 더하여 아스피린과 같은 비특이적 억제제, 그리고 다음과 같은 비특이적 COX-2 억제제 또한 포함한다: 인도메타신(인도신), 이부프로펜(애드빌, 모트린), 나프록센(나프로신), 피록시캄(펠덴), 및 나부메톤(렐라펜).
프로스타글란딘은 두 가지 다른 효소로 만들어진다: 시클로옥시게나제-1(cyclooxygenase-1: COX-1) 및 시클로옥시게나제-2(COX-2). 두 가지 다른 효소로 만들어진 프로스타글란딘은 신체에 약간 다른 효과를 갖는다. 프로스타글란딘 E2(PGE2)는 시클로옥시게나제(COX) 경로에 있는 말단(terminal) 프로스타글란딘이다. PGE2 생산의 억제는 발열, 관절염, 및 염증성 통증과 같은 염증성 증상을 완화시킬 수 있다. COX-2 억제제는 COX-2 효소는 특이적으로 차단시키고 그리고 COX-1 효소는 차단시키지 않는 NSAID의 아형이다. 이 효소를 차단시키는 것은 흔히 통증 및 염증의 부기(swelling) 및 다른 고통스러운 상태의 원인인 COX-2에 의한 프로스타글란딘의 생산을 방해한다. 이는 COX-1 효소는 차단하지 않고 COX-2 효소를 특이적으로 차단시키기 때문에, 이 약은 보통 COX-1 및 COX-2 효소 둘 다 차단시키는 통상적인 NSAID와는 특유하게 다르다. COX-1은 염증 부위 및 위를 포함하여 보통 신체의 여러 조직에 존재한다. COX-1로 만들어진 일부 프로스타글란딘은 위의 내층(linner lining)을 보호한다.
아스피린과 같은 흔한 NSAID는 COX-1 및 COX-2 둘 다 차단시킨다. COX-1이 차단되었을 때, 염증은 감소되지만, 위의 내층 보호 또한 잃는다. 이는 배탈 뿐만 아니라 궤양형성 및 위 그리고 심지어는 장으로부터의 출혈을 야기할 수 있다.
COX-2 효소는 구체적으로 보통 염증과 관련된 신체의 영역들에 위치하지만 위에는 위치하지 않는다. COX-2 효소가 차단되었을 때는 염증이 감소되고, COX-2 효소는 위 또는 장을 보호하는 역할을 하지 않기 때문에, COX-2 특이적 NSAID는 위 또는 장을 손상시키는 동일한 위험을 갖지 않는다.
더 오랫동안 사용되어 온 NSAID(예를 들어 아스피린, 이부프로펜, 나프록센 등)는 모두 COX-1 및 COX-2 효소 둘 다의 활성을 차단하는 것으로 작용한다. COX-2 억제제는 COX-2 효소를 선택적으로 차단시키고 그리고 따라서 위 또는 장의 궤양을 야기할 위험이 적다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "항체(antibody)"는 항원과 특이적으로 결합하는 면역글로불린 분자를 지칭한다. 항체는 천연 원천 또는 재조합 원천으로부터 유래된 무손상(intact) 면역글로불린일 수 있고 그리고 무손상 면역글로불린의 면역반응성 부분일 수 있다. 상기 항체는, 예를 들어, 다클론 항체, 단클론 항체, Fv, Fab 및 F(ab)2에 더하여 단쇄 항체 및 인간화(humanized) 항체를 포함하는 다양한 형태로 존재할 수 있다.
용어 "항체 단편(antibody fragment)"은 무손상 항체의 일부분을 지칭하고 그리고 무손상 항체의 항원 결정 가변 영역(antigenic determining variable regions)을 지칭한다. 항체 단편의 예시는 Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편, 선형(linear) 항체, scFv 항체, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적(multispecific) 항체를 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "항원(antigen)"은 면역 반응을 일으키는 분자로 정의된다. 이 면역 반응은 항체 생산, 또는 면역적격(immunologically-competent) 세포 중 하나 또는 둘 다와 관련될 수 있다. 숙련자라면 사실상 모든 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 어느 거대분자(macromolecule)라도 항원 역할을 할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 또한 항원은 재조합 또는 유전체(genomic) DNA로부터 유래될 수 있다. 숙련자라면 어느 DNA라도 변역 반응을 유발하는 단백질을 인코딩(encoding)하는 뉴클레오타이드 서열 또는 부분 뉴클레오타이드 서열을 포함하고, 그러므로 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "항원"을 인코딩한다는 것을 이해할 것이다. 또한 당업계의 숙련자라면 항원이 오직 유전자의 전장(full length) 뉴클레오타이드 서열로만 인코딩될 필요가 없다는 것을 이해할 것이다. 본 발명의 구체예들이 하나 이상의 유전자의 부분 뉴클레오타이드 서열의 사용을 포함하고 그리고 이 뉴클레오타이드 서열들이 원하는 면역 반응을 유발하기 위해 다양한 조합으로 배열되는 것이 명백하다. 그리고 숙련자라면 항원이 아예 "유전자"에 의해 인코딩될 필요가 없다는 것을 이해할 것이다. 항원이 합성(synthesized)으로 생성되거나 또는 생물학적 샘플로부터 유래될 수 있는 것이 명백하다. 그러한 생물학적 샘플은 조직 샘플, 종양 샘플, 세포 또는 생물학적 액체(fluid)를 포함할 수 있지만 이들에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "암(cancer)"은 이상 세포의 빠른 그리고 억제되지 않는 성장을 특징으로 하는 질병으로 정의된다. 암세포는 국소적(locally)으로 또는 혈류 및 림프계를 통해서 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다. 다양한 암의 예시는 유방암, 전립선암, 난소암, 자궁경부암, 피부암, 췌장암, 대장암, 신장암, 간암, 뇌종양, 림프종, 백혈병, 폐암 등을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다.
치료될 수 있는 암은 혈관이 분포되지 않은, 또는 아직 실질적으로 혈관이 분포되지 않은, 그리고 혈관이 분포된 종양을 포함한다. 상기 암은 비고형 종양(예를 들어 백혈병 및 림프종과 같은 혈액 종양) 또는 고형 종양을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기술된 활성화 NK 세포로 치료될 암의 유형은 암종, 모세포종, 및 육종, 그리고 특정 백혈병 또는 악성 림프종, 양성 및 악성 종양, 및 예를 들어 육종, 암종 및 흑색종과 같은 악성질환(malignancies)을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 성인 종양/암 및 소아 종양/암 또한 포함된다.
혈액암(hematologic cancers)은 혈액 또는 골수의 암이다. 혈액(또는 혈행) 암의 예시는 급성 백혈병(예를 들어 급성 림프구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 골수성 백혈병 그리고 골수모구, 전골수성, 골수단구성, 단핵구 및 적백혈병), 만성 백혈병(예를 들어 만성 골수세포(또는 과립세포) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 및 만성 림프구 백혈병)을 포함하는 백혈병, 진성적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종(무통성 및 고등급 형태), 다발골수종, 발덴스트롬 고분자글로불린혈증, 중쇄 질병, 골수형성이상증후군, 털세포 백혈병 및 골수형성이상증을 포함한다.
고형 종양(solid tumors)은 보통 낭포(cyst) 또는 액체 영역(liquid area)를 함유하지 않는 비정상 조직 덩어리이다. 고형 종양은 양성 또는 악성일 수 있다. 상이한 유형의 고형 종양은 그를 형성하는 세포의 유형(예를 들어 육종, 암종, 및 림프종)에 대해 이름이 지어진다. 육종 및 암종과 같은 고형 종양의 예시는 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종 및 다른 육종, 활막종, 중피종, 유잉 육종, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 림프구성 악성종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 감세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 샘암종, 땀샘암종, 갑상선 수질암, 갑상선 유두암, 크롬친화세포 피지샘 암종, 유두암종, 유두상 선암종, 수질암종, 기관지원성 암종, 신세포암종, 간암, 담관암종, 융모막암종, 윌름즈 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 고환종, 방광 암종, 흑색종, 및 CNS 종양(예를 들어 신경교종(예를 들어 뇌줄기신경아교종 및 혼합성 신경교종), 교모세포종(다형교모세포종으로도 알려짐) 별아교세포종, CNS 림프종, 배아종, 수모세포종, 신경집종 두개인두종, 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 뇌수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 및 뇌전이)을 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "항종양 효과(anti-tumor effect)"는 종양 용적 감소, 종양 세포 수 감소, 전이 수 감소, 기대 수명(life expectancy) 증가, 또는 암성 질환과 연관된 다양한 생리적 증상의 개선에 의해 발현될 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. "항종양 효과"는 애초에 종양의 발생을 방지하기 위한 펩타이드, 폴리뉴클레오타이드, 세포 및 항체의 능력에 의해서도 발현될 수 있다.
용어 "자가항원(auto-antigen)"은 면역계에 의해 이물질(being foreign)로 잘못 인식되는 어느 항원을 의미한다. 자가항원은 세포 단백질(cellular proteins), 인단백질, 세포표면 단백질, 세포 지질(cellular lipids), 핵산, 세포표면 수용체를 포함하는 당단백질을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "자가(autologous)"는 동일한 개체(individual)로부터 유래되고 나중에 그를 통해 상기 개체 내로 재도입(re-introduced)되는 어느 물질을 의미한다.
"동종이형(allogenic)"은 동일한 종의 상이한 동물로부터 유래된 이식편을 지칭한다. 본 발명의 치료 목적을 위하여, 이식편의 생존을 위해 HLA-A, HLA-B, 및 HLA-DR의 일치가 유익한 신장 및 골수 이식의 경우와는 달리, 활성화 NK 세포는 완전히 HLA 불일치한다. 암, HIV를 포함하는 전염성 질환을 치료하기 위한 본 발명의 방법에서 활성화 NK 세포는 암세포를 표적하고, 그에 결합하고, 그리고 그를 사멸시켜 종양 세포 항원을 방출시킨다. 이 주기(cycle)는 약 4-7일(그리고 어쩌면 연장된 범위의 4-16일 동안) 내에 숙주 세포 면역 반응에 의해 사멸될 때까지 동종이형 활성화 NK 세포로 그를 반복한다. 따라서 동종이형 세포에 대한 이러한 짧은 수명에서는 GVHD의 위험이 없다. 그러나 약 4-7일의 기간 동안 종양 세포를 인식 및 사멸하고 그리고 항원을 방출시키는 과정에서 상기 동종이형 세포는 종양 세포를 인식 및 사멸시킬 수 있도록 숙주 NK 및 다른 면역 세포에 백신 접종(vaccinate)을 하는 역할을 할 수 있다. 추가적으로 Cancer Sci. 2019 Jan; 110(1):16-22 참조. 도 5는 암 면역 주기를 도시하는 도면이다. 암-면역 주기. 항종양 면역의 유도는 자기 전파(self-propagating)될 수 있는 순환 과정이다. 이는 암세포에 대항하는 T 세포 반응을 증폭 및 연장시킬 수 있다. 이는 표적 세포(암세포)가 근절되었을 때 주기를 중단시키도록 여러 억제성 인자 또한 자체적으로 함유한다. 도 5에 도시된 바와 같이 상기 주기는 7단계로 나눠질 수 있고, 암세포로부터 암 항원의 방출로 시작하여 암세포의 사멸로 끝난다. APC, 항원 제시 세포; DC, 수지상 세포.
"이종 발생성(xenogeneic)"은 상이한 종의 동물로부터 유래된 이식편을 지칭한다.
본 발명은 사이토카인이 있는 데서 활성화되는 본질적으로 순수한 활성화 자연살해 세포를 포함하는 활성화 림프구성 세포, 그리고 선택적으로 가용성 FGFR1을 투여하는 단계를 포함하는 암 및 HIV를 포함하는 전염성 질환을 치료하기 위한 방법에 관한 것이다.
그러므로 본 발명의 한 관점에 따라서, 말초혈액 단핵세포를 포함하는 다양한 원천으로부터 분리된 자연살해 세포를 사이토카인이 있는 데서 활성화시키는 방법이 본 명세서에 기술된 사전 조건화 및 후 조건화 요법과 함께 제공된다.
"말초혈액 단핵세포(Peripheral blood mononuclear cells)", "PBMC" 또는 "단핵세포"는 일반적으로 항암 면역요법에 사용되는 말초혈액으로부터 분리된 단핵세포를 지칭한다. 말초혈액 단핵세포는 피콜-하이파크 밀도 구배(Ficoll-Hypaque density gradient) 방법과 같은 알려진 방법을 사용하여 채취된 인간 혈액으로부터 얻을 수 있다.
본 발명의 한 예시적인 구체예에 따르면, "말초혈액 단핵 세포"는 어느 적합한 사람으로라도부터 획득될 수 있다. 본 명세서에서 사용된 것과 같이, 말초혈액 단핵 세포와 같은 원천을 포함하는 공여자 림프구성 세포의 원천은 다음을 포함하는 원하는 림프구성 세포의 분리를 위해 수용 환자에 대해 동종이형이여야만 한다: 본 발명에 따른 항암, 항바이러스, 및/또는 항균 면역요법 방법에서 사용하기 위한 NK 세포, γδT 세포, iNKT 세포, 및 CD3 T 세포. 따라서 공여자 억제성 리간드는 환자(예: 숙주) HLA와 불일치한다.
예시적인 활성화 사이토카인 그리고 림프구성 세포 및 NK 활성화
본 발명에서 용어 "사이토카인(cytokine)"은 본 발명의 방법에서 사용하기 위해 본 명세서에 기술된 어느 치료적 림프구성 세포를 활성화시키기 위해 사용될 수 있는 면역 활성화 사이토카인을 지칭하고, 본질적으로 순수한 NK 세포, 그리고 말초혈액 단핵 세포로부터 분리된 것을 포함한다. 본 발명의 한 예시적인 구체예에 따라, IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, SCF, IL-7, IL-12, 또는 IL18이 단독으로 또는 조합으로 그러한 사이토카인으로서 사용될 수 있다. 특히 IL-2, IL-15 또는 IL-21은 NK 세포로의 말초혈액 단핵 세포의 분화 및 NK 세포의 증식에 훌륭한 효과를 갖는 사이토카인으로 알려져 있기 때문에, 이 사이토카인들 중 하나 또는 이들의 조합을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명의 한 예시적인 구체예에 따르면 IL-2가 사용되만 본 발명이 이에 제한되지는 않는다. 본 발명의 방법의 구체예에는 IL-2 작용제, IL-2 동족체(homologs), 또는 다른 합성, 최적화 IL-2 조성물 또한 포함된다. (면역의 강화작용(potentiation)을 위한 소량의 IL-2를 기술하는 미국 특허번호 제6,921,530호 참조.)
IL-15는 NK 세포로의 분화에 일조한다. 이는 IL-15 생산을 위해 필요한 전사 인자 인터페론(IFN) 조절 인자 1이 결여된 마우스에서 NK 세포가 결여되어있고(Kouetsu et al., Nature 391,700-703, 1998), 그리고 IL-15 또는 IL-15Ra가 결여되어 있는 마우스에서는 NK 세포가 발견되지 않는다는 사실로부터 알 수 있다. 결과적으로 NK 세포에 발현된 IL-15 수용체를 사용하여 IL-15가 직접적으로 NK 세포의 성장 및 분화를 촉진시키는 것으로 보고되었다(MrozekE et al., Blood 87, 2632-2640, 1996).
IL-21은 활성화 CD4+ T 세포에 의해 분비되는 사이토카인이고(Nature, 5:688-697, 2005), 그리고 IL-21 수용체(IL-21R)는 수지상 세포, NK 세포, T 세포, 및 B 세포와 같은 림프구에서 발현된다(Rayna Takaki, et al., J. Immonol 175: 2167-2173, 2005). IL-21은 IL-2 및 IL-15와 구조적으로 아주 유사하고 그리고 IL-21R은 IL-2R, IL-15, IL-7R, 및 IL-4R과 사슬을 공유한다(Asao et al., J. Immunol, 167: 1-5, 2001). IL-21은 골수로부터의 NK 세포 전구체(precursor)의 성숙을 유도하고(Parrish-Novak, et al., Nature, 408: 57-63, 2000), 특히 사이토카인을 생산하고 그리고 세포를 사멸시키는 NK 세포의 능력과 같은 이펙터 기능을 촉진시키고(M. Strengell, et al., J Immunol, 170, 5464-5469, 2003; J. Brady, et al., J Immunol, 172, 2048-2058, 2004), 그리고 CD8+ T 세포의 이펙터 기능을 향상시키는 것으로 선천 및 적응(adaptive) 면역계의 항암 반응을 촉진시키는 것으로 보고되었다(Rayna Takaki, et al., J Immunol 175, 2167-2173, 2005; A. Moroz, et al., J Immunol, 173, 900-909, 2004). 또한 IL-21은 인간 말초혈액으로부터 분리된 NK 세포를 활성화시키고(Parrish-Novak, et al., Nature, 408, 57, 2000), 그리고 제대혈로부터 분리된 조혈 줄기세포의 성숙 NK 세포를 유도하는 것으로 보고되었다(J. Brady, et al., J Immunol, 172, 2048, 2004).
본 발명의 구체예는 본 발명의 면역조절 방법에서 사용하기 위해 본 명세서에 기술된 NK 세포, 감마 델타 T 세포, 또는 iNKT 세포와 같은 어느 림프구성 세포를 활성화시키기 위해 50U/ml 내지 1,000U/ml의 농도, 예를 들어 200U/ml 내지 800U/ml, 또는 400U/ml 내지 600U/ml의 농도로 하나 이상의 이 "활성화 사이토카인"을 사용하는 것을 포함한다.
"질병(disease)"은 대상의 건강 상태로서 상기 대상이 항상성을 유지할 수 없고, 그리고 만약 질병이 개선되지 않으면 동물의 건강이 계속 나빠지는 것이다. 반면에 대상의 "장애(disorder)"는 건강 상태로서 상기 대상이 항상성은 유지할 수 있지만, 상기 대상의 건강 상태가 장애가 없을 때에 비해 덜 건강한(less favorable) 것이다. 치료되지 않고 방치될 경우, 장애는 대상의 건강 상태를 반드시 더 악화시키지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "유효량(effective amount)"은 치료적 또는 예방적 이점을 제공하는 양을 의미한다.
"인코딩(encoding)"은 뉴클레오타이드의 정의된 서열(즉 rRNA, tRNA 및 mRNA) 또는 아미노산의 정의된 서열을 갖고 그리고 그로 인해 야기되는 생물학적 성질을 갖는, 생물학적 과정에서 다른 폴리머 및 거대분자의 합성을 위한 틀(template) 역할을 하기 위한, 유전자, cDNA, 또는 mRNA와 같은 폴리뉴클레오타이드 내의 뉴클레오타이드의 특정한 서열의 고유 성질이다. 따라서 유전자는
그 유전자와 일치하는 mRNA의 전사 및 번역(translation)이 세포에서 또는 다른 생물학적 시스템에서 단백질을 생산할 경우에 단백질을 인코딩한다. 뉴클레오타이드의 서열이 mRNA 서열과 동일하고 그리고 보통 서열목록에 제공되는 코딩 가닥(coding strand) 및 유전자 또는 cDNA의 전사를 위한 틀로 사용되는 논코딩(non-coding) 가닥 둘 다 단백질 또는 그 유전자 또는 cDNA의 다른 생성물을 인코딩하는 것으로 언급될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "내인성(endogenous)"은 유기체, 세포, 조직 또는 계통의 또는 그 내에서 생산된 어느 물질을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "외인성(exogenous)"은 유기체, 세포, 조직 또는 계통으로부터 도입된 또는 그 외부에서 생산된 어느 물질을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "발현(expression)"은 그의 촉진자로 유도(driven)되는 특정 뉴클레오타이드 서열의 전사 및/또는 번역으로 정의된다.
"발현 벡터(expression vector)"는 발현될 뉴클레오타이드에 작동가능하게(operatively) 연결된 발현 제어 서열을 포함하는 재조합 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 벡터는 발현을 위해 충분한 cis 작용(cis-acting) 요소를 포함한다. 발현을 위한 다른 요소들은 숙주 세포에 의해서 또는 시험관 내 발현 시스템에서 공급될 수 있다. 발현 벡터는 재조합 폴리뉴클레오타이드를 편입하는 코스미드, 플라스미드(예: 맨난(naked) 또는 리포솜 내에 함유된 것) 및 바이러스(예: 렌티바이러스, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 및 아데노 연관 바이러스)와 같이 당업계에 공지된 모든 것을 포함한다.
"상동(homologous)"은 두 개에 폴리펩타이드 사이에 또는 두 개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성(sequence identity)을 지칭한다. 비교되는 두 서열 모두에서의 위치를 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 아형이 점유했을 때, 즉 두 개의 DNA 분자 각각의 한 위치에 아데닌이 있다면 상기 분자들은 그 위치에서 상동성인 것이다. 두 서열 사이의 상동성의 퍼센트는 두 서열에서 일치하는 또는 공유되는 상동 위치의 수를 비교된 위치의 수로 나눈 뒤 100을 곱하는 함수이다. 예를 들어 만약 두 서열에서 10개의 위치 중 6개가 일치하거나 상동성이면 두 서열은 60% 상동성인 것이다. 예시로서 DNA 서열 ATTGCC 및 TATGGC는 50% 상동성을 갖는다. 일반적으로 최대 상동성을 제공하기 위해 두 서열이 정렬되었을 때 비교된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "면역글로불린(immunoglobulin)" 또는 "Ig"는 항체로서 기능하는 단백질류(class of proteins)로 정의된다. B 세포에 의해 발현되는 항체는 때때로 BCR(B cell receptor) 또는 항원 수용체로 지칭된다. 이 단백질류에 포함된 다섯 구성원은 IgA, IgG, IgM, IgD, 및 IgE이다.
"분리된(isolated)"은 자연 상태로부터 변경 또는 제거되었단 의미이다. 예를 들어 살아있는 동물에 자연적으로 존재하는 핵산 또는 펩타이드는 "분리된" 것이 아니지만, 그의 자연 상태의 공존성 물질로부터 부분적으로 또는 완전히 분리된 동일한 핵산 또는 펩타이드는 "분리된" 것이다. 분리된 핵산 또는 단백질은 실질적으로 정제된(purified) 형태로 존재하거나, 또는 예를 들어 숙주 세포와 같은 비천연(non-native) 환경에서 존재할 수 있다. "분리된" 생물학적 구성요소(예를 들어 핵산, 단백질 또는 세포)는 다른 생물학적 구성요소들(예를 들어 세포 조직파편(debris), 다른 단백질, 핵산 또는 세포 유형)로부터 실질적으로 분리되었거나 또는 그로부터 정제된다. "분리된" 생물학적 구성요소는 표준 정제 방법으로 정제된 그 구성요소들을 포함한다.
질병 예방, 치료 또는 개선: 질병을 "예방(preventing)"하는 것은 질병의 완전한 발달을 억제하는 것이다. "치료(treating)"는 그가 발달되기 시작한 후 질병 또는 병리적 상태의 징조 또는 증상을 개선하는 치료적 중재(therapeutic intervention)를 의미한다. "개선(ameliorating)"은 질병의 징조 또는 질환의 수 또는 중증도의 감소를 지칭한다.
화학요법은 종양, 신생물, 암 및 건선과 같은 비정상 세포 성장을 특징으로 하는 질병을 치료하기 위한 치료 유용성을 갖는 화학 작용제(예를 들어 세포독성제)를 사용하는 치료를 포함한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 재조합(recombinant)은 보통 다음을 지칭한다: 재조합 핵산 또는 단백질은 자연적으로 발생하는 서열이 아니거나 또는 본래 서열의 분리된 두 세그먼트(segments)의 인공적인 조합으로 만들어진 서열을 핵산 또는 단백질이다. 이 인공 조합(artificial combination)은 흔히 화학 합성 또는, 예를 들어 유전자 조작 기법과 같은, 핵산의 분리된 세그먼트의 인공적인 조작에 의해 달성된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 다음의 일반적으로 발생하는 핵산염기의 약어가 사용된다. "A"는 아데노신을 지칭하고, "C"는 사이토신을 지칭하고, "G"는 구아노신을 지칭하고, "T"는 티미딘을 지칭하고, 그리고 "U"는 유리딘을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "백혈구(leukocytes or white blood cell)"는 단핵구, 중성구, 호산구, 호염기구(basophils), 및 림프구를 포함하는 어느 면역 세포를 지칭한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "림프구(lymphocytes)"는 흔히 림프에서 발견되고, 그리고 자연살해 세포(NK 세포), T 세포, 및 B 세포를 포함하는 세포를 지칭한다. 당업계의 숙련자라면 상기에 나열된 면역세포 유형들이 아형으로 더 나눠질 수 있음을 이해할 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "종양 침윤성 백혈구(tumor infiltrating leukocytes)"는 고형 종양에 존재하는 백혈구를 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 "혈액 샘플(blood sample)"은 혈액으로부터 분리된 혈장, 혈구 등과 같이 혈액으로부터 준비된 어느 샘플을 지칭한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "정제된 샘플(purified sample)"은 하나 이상의 세포 아형이 강화된(enriched) 어느 샘플을 지칭한다. 샘플은 크기, 단백질 발현 등과 같은 특징에 따라 제거 또는 분리에 의해 정제될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 매개체(Pharmaceutically acceptable vehicles): 본 명세서에서 용이한 약학적으로 허용가능한 운반체(매개체)는 통상적인 것이다. Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 15th Edition (1975)은 하나 이상의 치료 조성물, 및 부가적인 약학적 제제(pharmaceutical agent)의 약물 전달에 적합한 조성물 및 제제를 기술한다.
보통 전달에 적합한 운반체 또는 매개체는 사용되는 특정한 투여 방법에 따라 결정될 것이다. 예를 들어 비경구 제제는 보통 매개체로서 물, 생리 식염수, 평형염액, 수성 덱스트로오스(aqueous dextrose), 글리세롤 등과 같은 약학적으로 그리고 생리적으로 허용가능한 액체를 포함하는 주사가능한 액체를 포함한다. 고형 조성물(예를 들어 분말, 알약, 정제, 또는 캡슐 형태)에 있어서, 통상적인 비독성 고형 운반체는, 예를 들어, 의약품 등급의 만니톨, 락토스, 녹말, 또는 스테아린산 마그네슘을 포함할 수 있다. 생물학적으로 중성(biologically-neutral)의 운반체에 더하여, 투여될 약학적 조성물은, 예를 들어 초산나트륨 또는 솔비탄 모노라우레이트(sorbitan monolaurate)와 같은, 습윤제 또는 에멀젼화제, 보존제, 및 pH 완충제 등과 같은 비독성 보조물질을 소량 함유할 수 있다.
일부 구체예에서 용액이든 현탁액이든 또는 그와 같은 다른 형태이든 조성물은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다: DMSO, 주사용 물, 식염수, 바람직하게는 생리식염수, 링거액, 등장성 식염수(isotonic sodium chloride)와 같은 멸균 희석제, 용매 또는 현탁 배지 역할을 할 수 있는 합성 모노글리세라이드 또는 디글리세라이드와 같은 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 용매; 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤과 같은 항균제; 아스코르브산 또는 아황산수소나트륨과 같은 항산화제; 에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid)과 같은 킬레이트제; 아세트산염, 구연산염 또는 인산염과 같은 완충제 및 염화나트륨 또는 덱스트로오스와 같은 긴장성(tonicity)을 조절하기 위한 제제.
본 명세서에 기술된 조성물 및 방법이 치료할 수 있는 질병은 바이러스 감염증, 효모균 감염증(yeast infection), 진균 감염증, 원충 감염증 및/또는 세균 감염증과 같은 미생물 감염증을 포함할 수 있다.
예시적인 세균 감염증은 박테로이드, 클로스트리듐, 연쇄상구균, 포도상구균, 녹농균, 헤모필루스, 레기오넬라, 미코박테륨, 대장균, 살모넬라, 시겔라, 또는 리스테리아 병원성 세균속 중 하나 이상에 의해 야기되는 것을 포함한다.
"바이러스 감염증(viral infection)"은 신체에서 바이러스의 존재에 의해 야기되는 감염을 의미한다. 바이러스 감염증은 숙주를 감염시키고 그리고 치명적인 것으로 나타나기 전까지 일반적으로 몇 주, 몇 달 또는 몇 년에 걸친 장기간 동안 숙주의 세포 내에서 번식할 수 있는 만성 또는 지속 감염을 포함한다. 본 발명에 따라 치료될 수 있는 만성 감염을 유발하는 바이러스는, 예를 들어, 인간 유두종 바이러스(HPV), 단순 헤르페스 및 다른 헤르페스 바이러스, B형 및 C형 간염 및 다른 간염 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스, 및 홍역 바이러스를 포함하고, 이들은 모두 중요한 임상 질병을 생산할 수 있다. 장기간 감염은 궁극적으로 환자에게 치명적일 수 있는 질병의 유발로 이어질 수 있다(예를 들어 C형 간염 바이러스의 경우에는 간암). 본 발명에 따라 치료될 수 있는 다른 만성 바이러스 감염증은 엡스타인바 바이러스(EBV) 뿐만 아니라 종양과 연관될 수 있는 것들과 같은 다른 바이러스를 포함한다.
본 명세서에 기술된 활성화 NK 세포 조성물 및 방법으로 치료 또는 예방될 수 있는 바이러스 감염증의 예시는 레트로바이러스(예: 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV) I형 및 II형 그리고 인간 면역결핍 바이러스(HIV)), 헤르페스 바이러스(예: 단순 헤르페스 바이러스(HSV) I형 및 II형, 엡스타인바 바이러스 및 거대세포 바이러스), 아레나바이러스(예: 라사열 바이러스), 파라믹소바이러스(예: 홍역 바이러스, 인간 호흡기 세포융합 바이러스, 및 폐렴 바이러스), 아데노바이러스, 부니아바이러스(예: 한타바이러스), 코로나바이러스, 필로바이러스(예: 에볼라 바이러스), 플라비바이러스(예: C형 간염 바이러스(HCV), 황열병 바이러스, 및 일본 뇌염 바이러스), 헤파드나바이러스(예: B형 간염 바이러스(HBV)), 오르소믹소바이러스(orthomyxovirus)(예: 센다이 바이러스 및 A형, B형 그리고 C형 인플루엔자 바이러스), 파포바바이러스(예: 유두종 바이러스), 피코르나바이러스(예: 리노바이러스, 엔테로바이러스 및 A형 간염 바이러스), 폭스바이러스, 레오바이러스(예: 로타바이러스), 토가바이러스(예: 풍진 바이러스), 및 랍도바이러스(예: 광견병 바이러스)에 의해 야기된 바이러스 감염증을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 바이러스 감염증의 치료 및/또는 예방은 상기의 감염과 관련된 하나 이상의 증상 완화, 바이러스 복제 및/또는 바이러스 부하의 억제, 감소 또는 저해, 및/또는 면역 반응 향상을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 면역결핍(immunodeficient)은 면역계의 적어도 하나의 필수 기능이 결핍되었다는 의미이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 "면역결핍" 대상(예를 들어 인간)은 면역계의 구체적인 요소가 결핍되었거나 또는 면역계의 구체적인 요소(예를 들어 B 세포, T 세포, NK 세포 또는 대식세포)의 기능이 결핍된 대상이다. 일부 경우에서 면역결핍 대상은 기능성 면역세포(예를 들어 B 세포, T 세포 또는 NK 세포)의 발달을 방지 또는 억제하는 하나 이상의 유전자 변형을 포함한다. 일부 예시에서 상기 유전자 변형은 IL17 또는 IL17 수용체에 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 면역억제(immunosuppressed)는 면역계의 감소된 활성 또는 기능을 지칭한다. 예를 들어 대상은 면역억제 화합물을 사용하는 치료에 의하여 또는 질병 또는 장애의 결과로서(예를 들어 HIV 감염으로 야기되거나 또는 유전자 결함에 의한 면역결핍) 면역억제될 수 있다. 일부 경우에서 면역억제는 T 세포와 같은 기능성 면역세포의 발달을 방지 또는 억제하는 유전자 돌연변이의 결과로서 발생할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 인터류킨 8(IL8)은 염증 반응의 주요 매개체인 CXC 케모카인군의 구성원이다. IL8은 화학유인물질 및 혈관형성 인자로서 여러 세포 유형 및 기능에 의해 분비된다. 인간 IL8은 마우스 CXCL1 및 CXCL2의 기능성 균등물이다. IL8의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 공개되어 있다. 예를 들어 인간 IL8 서열은 NCBI Gene ID 3576에서 찾을 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같이 인터류킨 17A(IL17A)는 활성화 T 세포에 의해 생산되는 전염증성 사이토카인이다. IL17A의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열은 공개되어 있다. 예를 들어 인간 및 마우스 IL17A 서열은 NCBI 유전자 ID 3605 및 유전자 ID 16171에서 찾을 수 있다.
본 발명의 일부 구체예에서 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 본 발명의 조성물이 투여되지 않은 한 동물 또는 동물군(예를 들어 2, 3, 5, 10마리 이상의 동물)의 바이러스 역가(titer) 또는 미생물 역가에 비해, 본 명세서에 기술된 활성화 세포 조성물이 투여되고 그리고 관련 방법으로 치료된 대상/환자/동물에서 바이러스 역가 또는 미생물 역가의 최소 2.5%, 최소 5%, 최소 10%, 최소 15%, 최소 25%, 최소 35%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 85%, 최소 90%, 최소 95%, 또는 최소 99% 감소를 야기하는 본 명세서에 기술된 활성화 세포 조성물의 양이다.
본 발명에 기술된 활성화 림프구성 세포 조성물의 유효량 및 관련 방법으로 치료될 수 있는 암 및 증식성 장애의 유형의 예시는 백혈병(예: 골수모구, 전골수성, 단구성, 적백혈병, 만성 골수세포(또는 과립세포) 백혈병, 및 만성 골수성 백혈병), 림프종(예: 호지킨병 및 비호지킨병), 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종, 혈관육종, 상피육종(endotheliosarcoma), 유잉 육종, 결장암, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 편평세포암종, 기저세포암종, 샘암종, 신세포암종, 간세포암(hepatoma), 윌름즈 종양, 자궁경부암, 자궁암, 고환 종양, 폐암종, 소세포폐암종(small cell lung carcinoma), 방광암종, 상피암종, 신경교종, 별아교세포종, 희소돌기아교세포종, 흑색종, 신경모세포종, 망막모세포종, 형성이상 및 과다형성을 포함하지만 이들에 제한되지는 않는다. 암의 치료 및/또는 예방은 암과 연관된 하나 이상의 증상 완화, 암의 진행 억제 또는 감소, 암의 퇴화(regression) 촉진, 및/또는 면역반응 촉진을 포함하짐만 이들에 제한되지는 않는다.
다른 특정 구체예에서 "치료적 유효량"은 본 발명의 조성물이 투여되지 않은 한 환자(또는 동물) 또는 환자군(또는 동물군)에서의 암 성장 또는 확산에 비해, 본 명세서에 기술된 조성물이 투여된 환자 또는 동물에서 암의 성장 또는 확산의 최소 2.5%, 최소 5%, 최소 10%, 최소 15%, 최소 25%, 최소 35%, 최소 45%, 최소 50%, 최소 75%, 최소 85%, 최소 90%, 최소 95%, 또는 최소 99% 감소를 야기하는 활성화 림프구성 세포 조성물의 양이다.
일부 구체예에서 상기 활성화 림프구성 세포 조성물은 효모균 또는 세균 감염증의 치료 방법에서 사용된다. 예를 들어 본 명세서에 기술된 조성물 및 방법은 Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Neisseria gonorrhoea, Neisseria meningitidis, Corynebacterium diphtheriae, Clostridium botulinum, Clostridium perfringens, Clostridium tetani, Haemophilus influenzae, Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Klebsiella rhinoscleromotis, Staphylococcus aureus, Vibrio cholera, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Campylobacter (Vibrio) fetus, Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Edwardsiella tarda, Yersinia enterocolitica, Yersinia pestis, Yersinia pseudotuberculosis, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella sonnei, Salmonella typhimurium, Treponema pallidum, Treponema pertenue, Treponema carateneum, Borrelia vincentii, Borrelia burgdorferi, Leptospira icterohemorrhagiae, Mycobacterium tuberculosis, Toxoplasma gondii, Pneumocystis carinii, Francisella tularensis, Brucella aborts, Brucella suis, Brucella melitensis, Mycoplasma spp., Rickettsiaprowazeki, Rickettsia tsutsugumushi, Chlamydia spp., Helicobacter pylori 또는 이들의 어느 조합과 관련된 감염을 치료할 수 있다.
특정 구체예에서 상기 활성화 림프구성 세포 조성물은 항미생물제, 항바이러스제 및 다른 치료제와 함께 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로는 활성화 림프구성 세포 조성물이 항미생물제, 항바이러스제 및 다른 치료제가 투여되기 앞서 선택되는 시간에 먼저 투여될 수 있다.
일부 구체예에서는 HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증이 있는 환자를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 상기 환자는 HIV 환자이다. 일부 구체예에서 상기 환자는 암 환자이다. 일부 구체예에서 상기 환자는 바이러스 감염증 환자이다. 일부 구체예에서 상기 환자는 세균 감염증 환자이다. 암, 바이러스 감염증 및 세균 감염증의 비제한적인 예시는 본 명세서에서 제공된다.
일부 구체예에서는 면역 반응을 필요로하는 환자에서 면역 반응을 증가시키는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구체예에서는 환자에서 HIV 복제 또는 번식을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 HIV를 가진 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "HIV 복제 또는 번식 억제(inhibiting HIV replication or reproduction)"는 검출가능한 바이러스 부하를 유지하기 위해 바이러스가 대상에서 복제 또는 번식을 할 수 없는 것을 지칭할 수 있다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 HIV를 가진 대상에게 투여하는 것을 포함하는 HIV에 감염된 대상의 HIV 바이러스 부하 감소를 포함한다. 상기 바이러스 부하는 검출할 수 없는 수준(undetectable levels)으로 감소되거나 또는 치료전 수준에 비해 최소 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 96, 97, 98, 또는 99% 감소될 수 있다.
일부 구체예에서는 환자에서 종양 성장을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 종양이 있는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다. 종양 성장은 감속되거나 또는 제거될 수 있다. 일부 구체예에서 상기 종양은 그를 더이상 검출할 수 없는 관해 상태가 된다. 일부 구체예에서는 종양의 전이가 억제된다.
일부 구체예에서는 바이러스 또는 세균 감염증이 있는 대상에서 바이러스 또는 세균 복제 또는 번식을 억제하는 방법이 제공된다. 일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 바이러스 또는 세균 감염증이 있는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서는 환자에서 바이러스 또는 세균 부하가 감소되거나 또는 검출되지 않는다. 바이러스 또는 세균 부하는 검출할 수 없는 수준으로 감소되거나 또는 치료전 수준에 비해 최소 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 96, 97, 98, 또는 99% 감소될 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같이 일부 구체예에서 상기 세포 조성물은 활성화 감마 델타 T 세포(GDT 세포) 또한 포함할 수 있다. GDT 세포 또한 NK 세포와는 별도의 조성물로 투여될 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같이 일부 구체예에서 상기 세포 조성물은 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포) 또한 포함할 수 있다. iNKT 세포 또한 NK 세포 및/또는 GDT 세포와는 별도의 조성물로 투여될 수 있다.
본 명세서에 제공된 바와 같이 일부 구체예에서 상기 세포 조성물은 불변 CD3+ T 세포 또한 포함할 수 있다. CD3+ T 세포 또한 NK 세포, GDT 세포, 및/또는 iNK 세포와는 별도의 조성물로 투여될 수 있다.
일부 구체예에서 상기 세포는 세포를 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)와 혼합/배양/접촉시키는 것으로 활성화된다. 이 혼합/배양/접촉은 시험관 내 또는 생체 외(ex vivo)로도 지칭될 수 있는 환자 외부(outside the patient)에서 실행될 수 있다. 일부 구체예에서 상기 세포는 대상에게 활성화 제제를 투여하는 것으로 활성화되지 않거나 또는 처음부터 활성화되어 있지 않다. 일부 구체예에서 상기 세포의 활성화는 대상에게 활성화 세포가 투여된 후에 대상에게 사이토카인 외인성 투여를 하는 것으로 유지 또는 향상될 수 있다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL-18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-2이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-15이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-21이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 Flt3-L이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 줄기세포인자(SCF)이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-7이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-12이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-18이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 약 6-24시간 동안 생체 외에서 상기 세포 조성물과 배양/혼합/접촉된다. 일부 구체예에서 생체 외에서 상기 세포 조성물과 배양/혼합/접촉되는 사이토카인의 양은 약 100-1000IU/ml이다.
일부 구체예에서 상기 대상은 림프구서 세포 조성물이 대상에게 투여되기 전에 사전 조건화된다. 어느 특정한 이론에 얽매이지 않고, 일부 구체예에서는 상기 사전 조건화가 대상의 면역세포를 림프고갈(lymphodepletes)시키고 그리고 그 후 환자에게 투여될 새로운 면역세포들을 위한 공간을 만든다. 일부 구체예에서 상기 사전 조건화는 림프구성 세포 조성물을 투여하기 전에 약 1 내지 약 10일, 3 내지 약 7일, 약 1 내지 약 2일 동안 적어도 하나의 림프억제제, 화학요법제, 또는 면역억제제를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 상기 사전 조건화는 플루다라빈, 시클로포스파미드, 및/또는 인터페론 알파를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 청구항 제13항의 방법은 상기 림프억제제 또는 화학요법제가 6TG, 6-MMP, 및 클로파라빈, 플루다라빈, 및 시타라빈, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 퓨린 유사체 중 어느 하나를 포함한다. 일부 구체예에서 상기 림프억제제 또는 화합요법제의 투여량은 약 5mg/m2부터 약 50mg/m2의 범위이다. 일부 구체예에서 상기 화학요법제 또는 면역억제제는 어느 시클로포스파미드, 리툭시맙, 스테로이드, 또는 이들의 어느 조합을 포함한다. 일부 구체예에서 상기 스테로이드는 당질 코르티코이드 스테로이드이다. 일부 구체예에서 상기 스테로이드는 프레드니손이다. 일부 구체예에서 상기 사전 조건화는 -7일부터 -3일까지 플루다라빈을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 플루다라빈은 약 15mg/m2/d의 투여량으로 투여된다. 일부 구체예에서 상기 사전 조건화는 -2일부터 -1일까지 시클로포스파미드를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 시클로포스파미드의 투여량은 본 명세서에 제공된 바와 같다. 일부 구체예에서 상기 사전 조건화는 -2일부터 -1일까지 인터페론 알파를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 인터페론 알파의 투여량은 약 3x106IU/m2/d이다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 용어 "-1일(day -1)"은 활성화 세포 조성물의 투여 전 일수를 지칭한다. 예를 들어 0일(day 0)은 NK 세포를 포함하는 세포 조성물이 환자에게 투여되는 당일로 고려된다. 따라서 "-1일"은 투여 하루 전을 지칭한다. "-2일(day -2)"은 투여 전 2일 전을 지칭하는 식이다. 일부 구체예에서 상기 방법은 세포 조성물의 일부일 수 있는 활성화 NK 세포를 0일에 투여하는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서는 활성화 GDT 세포 또한 투여된다. 그는 동일한 조성물의 일부로서 또는 별도로 투여될 수 있다. 그리고 일부 구체예에서는 0일에 상기 환자에게 IL-2 또한 투여된다. IL-2는 예를 들어 정맥내 또는 피하 투여될 수 있다. 일부 구체예에서 IL-2는 활성화 세포 조성물 투여로부터 1일 내지 약 5일 동안, 예를 들어 +1일, +2일, +3일, +4일, 및 +5일에 투여된다. IL-2는 더 오랫동안 투여될 수도 있다. 용어 "+1일(Day +1)"과 그와 같은 용어들은 활성화 세포 조성물의 투여 후 일수를 지칭한다. 일부 구체예에서 IL-2는 약 6x106IU/m2의 투여량으로 투여된다. 일부 구체예에서 IL-2는 0일 후에는 대상에게 투여되지 않는다.
일부 구체예에서는 비스테로이드성 소염제(NSAID)와 같은 소염제가 대상에게 투여된다. 이는 0일 후 약 1 내지 약 60일 동안 주어질 수 있다. 일부 구체예에서 상기 NSAID는 본 명세서에 제공된 것과 같은 Cox-2 억제제이다. 일부 구체예에서 상기 NSAID는 셀레콕시브이다. 일부 구체예에서 상기 NSAID는 이부프로펜 또는 나프록센이다. 일부 구체예에서 NSAID는 림프구성 세포 조성물의 투여 후 약 14 내지 약 60일 동안 투여된다.
본 명세서에서는 NK 세포를 활성화시키는 방법 또한 제공되고, 상기 방법은 시험관 내에서 NK 세포를 포함하는 세포 조성물에 적어도 하나의 사이토카인 및/또는 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)를 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-2이다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서 상기 사이토카인은 약 6 내지 약 24시간 동안 세포 조성물과 접촉된다. 일부 구체예에서 상기 세포 조성물과 접촉된 사이토카인의 양은 약 100IU/ml 내지 약 1000IU/ml이다. 일부 구체예에서 상기 조성물은 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNK 세포), 및/또는 CD3+ T 세포 또한 포함할 수 있다. 세포는 어느 원천으로부터든 분리될 수 있다. 예를 들어 일부 구체예에서는 NK 세포, 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNK 세포), 및/또는 CD3+ T 세포가 말초혈액으로부터 분리된다. 이들은 예를 들어 백혈구 성분채집술(leukapheresis)을 통해 분리될 수 있다.
본 명세서에는 사이토카인 및/또는 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)로 활성화된, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물 또한 제공된다. 일부 구체예에서 상기 활성화 조성물은 IL-2 활성화 조성물이다. 일부 구체예에서 사이토카인 활성화 조성물은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 활성화된 조성물이다. 일부 구체예에서 상기 활성화 조성물은 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNK 세포), 및/또는 CD3+ T 세포를 포함한다. 일부 구체예에서 NK 세포는 말초혈액 NK 세포이다. 일부 구체예에서 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNK 세포), CD3+ T 세포는 말초혈액 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNK 세포), 및 CD3+ T 세포이다.
항체와의 조합
예를 들어 활성화 림프구성 세포 조성물은 선택된 암 유형에 대해 특이적인 항체와 동시에 투여될 수 있다. 대안적으로 활성화 림프구성 세포 조성물은 선택된 암 유형에 대해 특이적인 항체가 투여되기 전에 선택된 시간에 먼저 투여될 수 있다. 선택된 암 유형에 대해 특이적인 항체는 암의 치료를 위해 승인된 어느 항체라도 포함한다. 예시로는 유방암을 위한 트라스트주맙(Herceptin), 림프종을 위한 리툭시맙(Rituxan), 및 두경부 편평세포암종을 위한 세툭시맙(Erbitux)이 포함된다.
그러한 항체의 추가적인 예시는 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb의 니볼루맙), MK-3475(Merck의 키트루다)로도 알려진 펨브롤리주맙/램브롤리주맙, 피딜리주맙(Curetec), AMP-224(Amplimmune)를 포함하는 항PD-1 항체, 그리고 MPDL3280A(Roche), MDX-1105(Bristol Myer Squibb), MEDI-4736(AstraZeneca) 및 MSB-0010718 C(Merck)를 포함하는 항PD-L1 항체와 같은, PD-1 또는 PD-L1(B7-H1)의 억제제를 포함한다. 다른 체크포인트 억제제는 항CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4의 작용제를 포함한다. 예시적인 항CTLA-4 항체는 Bristol-Myers Squibb이 시판 중인 YervoyTM(이필리무맙)이다. 다른 예시적은 CTLA-4 항체는 트레멜리무맙(Pfizer), 티실리무맙(AstraZeneca) 및 AMGP-224(Glaxo Smith Kline)를 포함한다. 면역치료 항체를 사용하는 예시적인 치료 요법은 실시예 3에서 찾을 수 있다. 이 항체들 중 어느 두 가지를 갖는 조합 또한 특정 경우에 명시될 수 있다. 상이한 세포 주입 선택과 함께, 도 1에 기술된 바와 같은 사전 조건화 및 후 조건화가 이 항체 치료에 적용될 수 있다(즉 주입 후 4-14일, 바람직하게는 주입 후 4-6일에 항체가 투여된다).
치료 림프구성 조성물에 사용되는 동종이형 NK 세포의 원천
흔히 사용되는 동종이형 NK 세포는 일배수동종(haploidentical) 그리고 관계 없는(unrelated) 공여자 PBMC로부터 수집된 성분채집술 생성물이다(Koepsell et al. Transfusion (2013) 53(2):404-10).
다른 원천은 제대혈(UCB)이고, 여기서 NK 세포는 CD34+ 전구세포로부터 생성되어 사이토카인 및 성장인자를 사용하여 증식 및 분화를 거치고 그리고 그렇게 함으로써 세포용해 NK 세포로 성숙된다(Spanholtz J. et al. PLoS One (2011) 6(6):e20740; 및 Arai S. et al. Cytotherapy (2008) 10(6):625-32).
CD3 세포
"CD3"이란 표현은 다중분자 T 세포 수용체(TCR)의 일부로서 T 세포 상에 발현되는 항원이고 그리고 네 개의 뚜렷이 다른 사슬로 구성된다: CD3-엡실론, CD3-델타, CD3-제타, 및 CD3-감마. 포유동물에서 복합체(complex)는 하나의 CD3γ 사슬, 하나의 CD3δ 사슬, 및 두개의 CD3ε 사슬을 함유한다. 이 사슬들은 T 림프구에서 활성화 신호를 생성하기 위해 T-세포 수용체(TCR) 및 ζ 사슬(제타 사슬)과 회합된다. TCR, ζ 사슬, 및 CD3 분자는 함께 TCR 복합체를 구성한다. 인간 CD3-엡실론(hCD3ε)은 UniProtKB/Swiss-Prot: P07766.2에 개시된 아미노산 서열을 포함한다. 인간 CD3-델타(hCD3δ)는 UniProtKB/Swiss-Prot: P04234.1에 개시된 아미노산 서열을 포함한다. CD3 T 세포 공수용체(co-receptor)는 세포독성 T 세포(CD8+ 미접촉(naive) T 세포)와 T 보조세포(CD4+ 미접촉 T 세포) 둘 다 활성화시키는 것을 돕는다.
CD3γ, CD3δ, 및 CD3ε 사슬은 단일 세포외 면역글로불린 도메인을 함유하는 면역글로불린 상과의 높은 관련성을 갖는(highly related) 세포 표면 단백질이다. CD3 사슬의 막관통 영역은 아스파르트산염 잔기를 함유하기 때문에 음전하를 갖고, 이 특징은 이 사슬들이 양전하를 갖는 TCR 사슬과 회합할 수 있게 한다.
CD3 분자의 세포내 꼬리(intracellular tails)는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)로 알려진 단일 보존 모티프(conserved motif)를 함유하고, 이는 TCR의 신호전달 역량에 필수적이다. ζ 사슬의 세포내 꼬리는 3개의 ITAM 모티프를 함유한다.
암 및 NK 세포, 동종이형 NK 세포의 활성화
이론에 얽매이지 않길 바라며, 본 명세서에 기술된 다면적인 접근법 및 치료 요법은 T 조절 세포 유도의 면역억제 효과를 극복하는 것으로 여겨지고, 그리고 특정 구체예에서 다른 특정 면역반응 세포와 조합하여 활성화 림프구성 세포, 예를 들어 활성화 NK 세포를 갖는 조합이 향상된 치료 효능을 제공하는 것으로 여겨지고, 이는 하기에 더 기술된다. 활성화 림프구성 세포, 예를 들어 활성화 NK 세포를 통한 활성화 및 면역 훈련은 환자 내, 즉 생체 내에서 일어나고 그리고 시험관 내 배양을 필요로 하지 않는 것은 주목할 사항이다.
감마 델타 T 세포 및 감마 델타 T 세포 활성화
감마 델타 T 세포(γδT 세포)는 그의 표면에 뚜렷한 T 세포 수용체(TCR)를 갖는 T 세포의 작은 아형을 나타낸다. 대부분의 T 세포는 α(알파) 및 β(베타)-TCR 사슬로 불리는 두 개의 당단백질 사슬로 구성된 TCR을 갖는다. 그러나 γδT 세포에서는 TCR이 하나의 γ 사슬 및 하나의 δ 사슬로 만들어진다. 이 T 세포군은 αβT 세포보다 훨씬 덜 흔하지만(총 T 세포의 5%), 상피내 림프구(intraepithelial lymphocytes: IEL)로 알려진 림프구 집단 내에서, 소화관 점막에서 가장 많이 발견된다. γδT 세포를 활성화 시키는 항원 분자는 아직 많이 알려지지 않았다. 그러나 γδT 세포는 MHC 제한되지 않고 그리고 항원 제시 세포 상의 MHC 분자에 의한 펩타이드 제시를 필요로 하기 보다는 단백질 전체를 인식할 수 있는 것으로 보인다. 일부는 MHC 클래스 IB 분자를 인식하기도 한다. 말초혈액에서 주요 γδT 세포 집단을 이루는 인간 V.감마.9/V.델타.2(V.gamma.9/V.delta.2) T 세포는 아이소펜테닐 피로인산염(isopentenyl pyrophosphate) 전구체인 작은 비펩타이드(non-peptidic) 미생물 대사물, HMB-PP에 대해 특이적으로 그리고 빠르게 반응한다는 점에서 독특하다.
감마 델타 T 세포를 활성화시키기 위한 방법은 예를 들어 Deniger et al. Clin Cancer Res. 2014 Nov 15; 20(22): 5708-5719에 기술되었다. 본 명세서에 기술된 방법들은 공급자세포 시스템을 사용하지 않지만, 대신 사이토카인 및/또는 세포의 비드(bead) 활성화에 의존하고, 이는 오염 위험 감소, 활성화의 용이함, 및 환자에게로의 활성화 세포의 전달 속도 증가 면에서 이점을 제공한다.
감마 델타 T 세포를 활성화시키기 위한 활성화 혼합제(cocktail)의 예시는 다음을 포함한다:
500IU/ml IL-2
20ng/ml HM-BPP
CD3/CD28 T 세포 활성화 비드 (1:2 비드 대 세포 비율)
24시간 배양.
세포 원천
말초혈액 단핵세포는 폐기된, 비식별화된(de-identified) 백혈구 제거 필터(reduction filters)(미국 적십자), 또는 사전동의를 구한 건강한 자원자의 헌혈 혈액으로부터 얻은 샘플의 피콜-하이파크 밀도 구배 원심분리로 분리될 수 있다. 세포집단, 원천 및 원하는 세포 유형을 선택 또는 강화하기 위한 방법의 설명은 예를 들어 미국 특허번호 제9,347,044호에서 찾을 수 있다. 포유동물을 치료하기 위한 본 명세서에 기술된 방법에서 사용하기 위한 세포집단은 종이 일치해야 한다(예를 들어 인간 세포). 세포는 동물, 예를 들어 인간 환자로부터 얻을 수 있다. 만약 세포가 동물로부터 회득되었을 경우, 그는, 예를 들어 변환에 의해, 먼저 배지에서 수립(established)되었을 수 있고, 또는 더 바람직하게는 예비 정제 방법을 거쳤을 수 있다. 예를 들어 세포집단은 세포 표면 마커의 발현을 기반으로 하는 양성 또는 음성 선별(positive or negative selection)에 의해 조작되거나, 시험관 내 또는 생체 내에서 하나 이상의 항원으로 자극받거나, 시험관 내 또는 생체 내에서 하나 이상의 생물학적 조절제(modifier)로 치료되거나, 또는 이들의 어느 조합 또는 모두일 수 있다. 예시적인 구체예에서 세포집단은 비T 세포 및/또는 특정한 T 세포 아형의 고갈에 대한 음성 선별을 거친다. 음성 선별은 CD19 및 CD20과 같은 B 세포 마커, 단핵구 마커 CD14, NK 세포 마커 CD56을 포함하는 다양한 분자의 세포 표면 발현을 기반으로 실행될 수 있다. 대안적으로 세포집단은 비CD34.sup.+ 조혈 세포 및/또는 특정한 조혈 세포 아형의 고갈에 대한 음성 선별을 거칠 수 있다. 음성 선별은 다른 세포 유형의 분리, 예를 들어 MACS 또는 컬럼 분리에 사용될 수 있는 항체의 혼합제(예: CD2, CD3, CD11b, CD14, CD15, CD16, CD19, CD56, CD123, 및 CD235a)와 같은 다양한 분자의 세포 표면 발현을 기반으로 실행될 수 있다.
세포집단은 말초혈액 단핵세포(PBMC), 전혈 또는 혼합 군을 포함하는 그의 일부, 비장세포, 골수세포, 종양 침윤 림프구, 백혈구 성분채집술로 획득한 세포, 생검 조직, 림프절, 예를 들어 종양 배수 림프절(lymph nodes draining from a tumor)을 포함한다. 적합한 공여자는 면역화된 공여자, 비면역화(미접촉) 공여자, 치료된 또는 치료받지 않은 공여자를 포함한다. "치료된(treated)" 공여자는 하나 이상의 생물학적 조절제에 노출된 공여자이다. "치료받지 않은(untreated)" 공여자는 하나 이상의 생물학적 조절제에 노출되지 않은 공여자이다.
T 세포를 포함하는 세포집단을 획득하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어 말초혈액 단핵세포(PBMC)는 당업계에 알려진 방법에 따라 기술된 바와 같이 획득될 수 있다. 그러한 방법의 예시는 실시예에 개시되어 있고 그리고 Kim et al. (1992); Biswas et al. (1990); Biswas et al. (1991)에 논의되었다.
세포 샘플을 대상으로부터 획득하고, 그런 다음에 그를 원하는 세포 유형을 위해 강화시키는 것 또한 가능하다. 예를 들어 PBMC는 본 명세서에 기술된 바와 같이 혈액으로부터 분리될 수 있다. 말초혈액의 T 세포에 대해 강화시키기 위해 역류(counter-flow) 원심분리(정화(elutriation))가 사용될 수 있다. 세포는 원하는 세포 유형의 세포 표면 상의 에피토프에 결합하는 항체로 분리 및/또는 활성화와 같은, 예를 들어 항체 접합 비드를 사용하여 세포를 활성화시키고 그리고 나서 동일한 비드로 컬럼 분리를 가능하게 하는 일부 T 세포 분리 키트와 같은, 다양한 기법을 사용하여 다른 세포로부터 분리될 수도 있다. 사용될 수 있는 다른 방법은 수용체 결합으로 세포를 활성화시키지 않으면서 구체적인 세포 유형에 대해 특이적으로 강화시키기 위해 세포 표면 마커에 항체를 사용하는 음성 선별을 포함한다.
골수세포는 장골능선, 대퇴, 경골, 척추, 늑골 또는 다른 수질 공간으로부터 획들될 수 있다. 골수는 환자로부터 제거된 후 다양한 분리 및 세척 과정을 통해 분리될 수 있다. 골수세포의 분리를 위한 알려진 과정은 다음의 단계들을 포함한다: a) 원심 분리로 골수 현탁액을 세 분획으로 분리하고 그리고 중간 분획, 또는 백혈구연층(buffy coat) 수집; b) (a) 단계의 백혈구연층 분획이 별개의 액체, 보통 Ficoll(Pharmacia Fine Chemicals AB의 상표)에서 한 번 더 원심분리되고 그리고 골수세포를 함유하는 중간 분획을 수집; 그리고 c) 재주입 가능한(re-transfusable) 골수세포의 회수를 위해 (b) 단계에서 수집된 분획을 세척하는 단계.
만약 T 세포에서 강화된 세포집단을 사용하고 싶을 경우, 그러한 세포집단은 백혈구 성분채집술 및 연속 흐름(continuous flow) 세포 분리기를 사용하는 기계적 성분채집술에 의한 혼합된 집단으로부터 얻을 수 있다. 예를 들어 Ficoll-HypaqueTM 구배를 이용하는 분리, Percoll 구배를 이용하는 분리, 또는 정화를 포함하는 어느 알려진 방법으로 T 세포가 백혈구연층으로부터 분리될 수 있다.
NK 세포의 표현형 분석. PBMC는 이전에 Kim et al.에 의해 기술된 바와 같이 플루오로크롬 접합 항체를 사용하여 유동 세포 분석법을 위해 염색될 수 있다(Proc Natl Acad Sci USA 105(8):3053-3058 (2008)). Beckman Coulter의 다음의 단백질을 검출하기 위한 항체가 사용될 수 있다: (CD56(N901), NKG2A(Z199), NKp44(Z231)), BD Biosciences(CD3 제타(UCHT1), CD16(3G8), KIR2DL2/3(CH-L), KIR3DL1(DX9), NKp46(9E2), NKp30(p30-15), CD11a(G43-25B), CD11b(ICRF44), CD11c(B-ly6), NKG2D(1D11), CD161(DX12), DNAM-1(DX11), CD57(NK-1), CD25(M-A251), IFN-.감마.(B27), TNF-.알파.(Mab11), CD107a(H4A3), 그랜자임 A(CB9), 그랜자임 B(GB11)), Biolegend(CD14(HCD14), CD19(HIB19), CD2(RPA-2.10), 2B4(C1.7), NTB-A(NT-7), CRACC(162.1), CD69(FN50)), eBiosciences(KIR2DL1(HP-MA4), 퍼포린(dG9)), 및 R&D(NKG2C (134591)).
일부 구체예에서는 다음의 구체예가 제공된다:
1. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
2. 면역 반응을 필요로 하는 환자에서 면역 반응을 증가시키기 위한 방법으로서, 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
3. 환자에서 HIV 복제를 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 HIV를 가진 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
4. 환자에서 종양 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 종양을 가진 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
5. 바이러스 또는 세균 감염증 환자에서 바이러스 또는 세균 복제 또는 번식을 억제하는 방법으로서, 상기 방법은 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 바이러스 또는 세균 감염증을 가진 대상에게 투여하는 단계를 포함한다.
6. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물은 활성화 감마 델타 T 세포(GDT 세포)를 더 포함한다.
7. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물은 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포)를 더 포함한다.
8. 구체예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물은 CD3+ T 세포를 더 포함한다.
9. 구체예 1 내지 8 중 어느 하나의 방법에 있어서, 환자에게 투여하기 전에 상기 림프구성 세포 조성물은 세포를 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)과 혼합/배양/접촉되는 것으로 활성화된다.
10. 구체예 9의 방법에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
11. 구체예 10의 방법에 있어서, 상기 사이토카인은 약 6-24시간 동안 상기 세포 조성물과 배양/혼합/접촉된다.
12. 구체예 10의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물과 함께 배양되는 상기 사이토카인의 양은 약 100-1000IU/ml이다.
13. 구체예 1 내지 12 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 전에 3-5일 동안 적어도 하나의 림프억제제, 화학요법제, 또는 면역억제제를 투여하는 것으로 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 전에 환자가 사전 조건화되는 단계를 더 포함한다.
14. 구체예 13의 방법에 있어서, 상기 림프억제제 또는 화학요법제는 6TG, 6-MMP, 그리고 클로파라빈, 플루다라빈, 및 시타라빈으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 퓨린 유사체를 포함하는 제제 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함한다.
15. 구체예 14의 방법에 있어서, 상기 림프억제제 또는 화학요법제의 투여량의 범위는 약 5mg/m2 내지 약 50mg/m2이다.
16. 구체예 13의 방법에 있어서, 상기 화학요법제 또는 면역억제제는 사이클로포스파미드, 리툭시맙, 그리고 선택적으로 스테로이드 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함한다.
17. 구체예 16의 방법에 있어서, 상기 스테로이드는 당질 코르티코이드 스테로이드이다.
18. 구체예 17의 방법에 있어서, 상기 스테로이드는 프레드니손이다.
19. 구체예 16의 방법에 있어서, 상기 화학요법제 또는 면역억제제의 투여량의 범위는 약 20mg/m2 내지 약 1000mg/m2이다.
20. 구체예 13의 방법에 있어서, 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 이틀 전 그리고/또는 하루 전에 환자에게 인터페론-알파(IFN-α), 또는 그의 생물학적 균등물을 약 1 X 106IU/m2/d 내지 약 10 x 106IU/m2/d의 투여량으로 투여하는 단계를 더 포함한다.
21. 구체예 1 내지 20 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날 그리고 투여 후 첫 날, 그리고 선택적으로 상기 림프구성 세포 조성물의 투여 후 추가적으로 3 내지 14일 동안 지속적으로 환자에게 IL-2를 한 투여량 당 약 3-6 X 106 IU/m2의 투여량으로 투여하는 단계를 더 포함한다.
22. 구체예 1 내지 21 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 방법은 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날, 그리고 상기 림프구성 세포 조성물의 투여 후 최소 14 내지 60일 동안 지속적으로 환자에게 COX-2 억제제 또는 비스테로이드성 소염제(NSAID), 또는 이들의 조합을 투여하는 단계를 더 포함한다.
23. 구체예 22의 방법에 있어서, 상기 COX-2 억제제는 세레콕시브 또는 로페콕시브이고, 그리고 상기 비스테로이드성 소염제는 아스피린, 인도메타신, 이부프로펜, 나프록센, 피록시캄, 및 나부메톤으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
24. 구체예 1 내지 23 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 NK 세포는 환자에 대해 동종이형이다.
25. 구체예 1 내지 24 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 NK 세포는 환자와 HLA 불일치한다.
26. 구체예 1 내지 25 중 어느 하나의 방법에 있어서, 활성화 세포의 투여량의 범위는 약 3-50 x 106이다.
27. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 바이러스 감염증은 레트로바이러스(예: 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV) I형 및 II형 그리고 인간 면역결핍 바이러스(HIV)), 헤르페스 바이러스(예: 단순 헤르페스 바이러스(HSV) I형 및 II형, 엡스타인바 바이러스 및 거대세포 바이러스), 아레나바이러스(예: 라사열 바이러스), 파라믹소바이러스(예: 홍역 바이러스, 인간 호흡기 세포융합 바이러스, 및 폐렴 바이러스), 아데노바이러스, 부니아바이러스(예: 한타바이러스), 코로나바이러스, 필로바이러스(예: 에볼라 바이러스), 플라비바이러스(예: C형 간염 바이러스(HCV), 황열병 바이러스, 및 일본 뇌염 바이러스), 헤파드나바이러스(예: B형 간염 바이러스(HBV)), 오르소믹소바이러스(예: 센다이 바이러스 및 A형, B형 그리고 C형 인플루엔자 바이러스), 파포바바이러스(예: 유두종 바이러스), 피코르나바이러스(예: 리노바이러스, 엔테로바이러스 및 A형 간염 바이러스), 폭스바이러스, 레오바이러스(예: 로타바이러스), 토가바이러스(예: 풍진 바이러스), 및 랍도바이러스(예: 광견병 바이러스)에 의해 야기된 바이러스 감염증, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
28. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 암은 급성 백혈병, 급성 골수세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수모구 백혈병, 전골수성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수세포(또는 과립세포) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 진성적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종(무통성 및 고등급 형태), 다발골수종, 발덴스트롬 고분자글로불린혈증, 중쇄 질병, 골수형성이상증후군, 털세포 백혈병 및 골수형성이상증, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액작용 또는 혈행성 암이다.
29. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 암은 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종 및 다른 육종, 활막종, 중피종, 유잉 육종, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 림프구성 악성종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 감세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 샘암종, 땀샘암종, 갑상선 수질암, 갑상선 유두암, 크롬친화세포 피지샘 암종, 유두암종, 유두상 선암종, 수질암종, 기관지원성 암종, 신세포암종, 간암, 담관암종, 융모막암종, 윌름즈 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 고환종, 방광 암종, 흑색종, 그리고 신경교종(예를 들어 뇌줄기신경아교종 및 혼합성 신경교종), 교모세포종(다형교모세포종으로도 알려짐) 별아교세포종, CNS 림프종, 배아종, 수모세포종, 신경집종 두개인두종, 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 뇌수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 및 뇌전이와 같은 CNS 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 고형종양이다.
30. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세균 감염증은 병원성 균종 박테로이데스, 클로스트리듐, 연쇄상구균, 포도상구균, 녹농균, 헤모필루스, 레기오넬라, 미코박테륨, 대장균, 살모넬라, 시겔라, 또는 리스테리아 중 하나에 의해 야기된다.
31. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 환자에게서 이식편대숙주병(GVHD)이 감소되거나 제거된 반면, 이식편대종양(GVT) 또는 이식편대바이러스(GVV)가 증가된다.
32. 구체예 1 내지 20 중 어느 하나의 방법에 있어서, 환자에게 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종이 있을 때는 IL-2의 투여는 적합하지 않고 그리고 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여 후 투여되지 않는다.
33. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 NK 활성화 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여로부터 4-14일의 기간 동안 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb의 니볼루맙), MK-3475(Merck의 키트루다)로도 알려진 펨브롤리주맙/램브롤리주맙, 피딜리주맙(Curetec), AMP-224(Amplimmune)를 포함하는 항PD-1 항체, 또는 MPDL3280A(Roche), MDX-1105(Bristol Myer Squibb), MEDI-4736(AstraZeneca) 및 MSB-0010718 C(Merck)를 포함하는 항PD-L1 항체와 같은 PD-1 또는 PD-L1(B7-H1)의 억제제를 포함하는 두 가지 체크포인트 억제제 중 어느 하나 또는 둘의 조합을 포함하는 면역 체크포인트 억제제, 항CTLA-4 항체 YervoyTM(이필리무맙, Bristol-Myers Squibb), 트레멜리무맙(Pfizer), 티실리무맙(AstraZeneca) 또는 AMGP-224(Glaxo Smith Kline)를 포함하는 항CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4의 작용제, 또는 유방암을 위한 트라스트주맙(Herceptin), 림프종을 위한 리툭시맙(Rituxan), 또는 세툭시맙(Erbitux) 종양 특이적 항체가 환자에게 더 투여된다.
34. 구체예 1 내지 22 중 어느 하나의 방법에 있어서, 치료 또는 면역 반응 증가는 유지요법으로서 환자가 호전 또는 안정적/비진행 질병을 보이는 한, 매달 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회의 기간 동안 주기적으로 반복된다.
35. 구체예 1 내지 26 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하는 같은 날에, 하지만 최소 약 2 내지 6시간 전에 환자에게 하나 또는 두 개의 항히스타민제를 투여하는 단계를 더 포함한다.
36. NK 세포를 활성화시키는 방법으로서, 상기 방법은 시험관 내에서 NK 세포를 포함하는 세포 조성물에 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)를 접촉시키는 단계를 포함한다.
37. 구체예 36의 방법에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포 인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
38. 구체예 36의 방법에 있어서, 상기 사이토카인은 약 6 내지 24시간 동안 상기 세포 조성물과 접촉된다.
39. 구체예 36의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물로 접촉되는 사이토카인의 양은 약 100 내지 1000IU/ml이다.
40. 구체예 36 내지 39 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 조성물은 감마 델타 T 세포(GDT 세포)를 더 포함한다.
41. 구체예 36 내지 40 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물은 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포)를 더 포함한다.
42. 구체예 36 내지 41 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 세포 조성물은 CD3 T 세포를 더 포함한다.
43. 구체예 36 내지 42 중 어느 하나의 방법에 있어서, 상기 NK 세포, 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포) 및/또는 CD3+ T 세포는 말초혈액으로부터 분리된다.
44. 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
45. 구체예 44의 조성물에 있어서, 상기 사이토카인 활성화 조성물은 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 활성화된 조성물이다.
46. 구체예 44 및 45의 조성물에 있어서, 상기 조성물은 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포) 및/또는 CD3+ T 세포를 더 포함한다.
47. 구체예 44 내지 46 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 NK 세포는 말초혈액 NK 세포이다.
48. 구체예 44 내지 47 중 어느 하나의 조성물에 있어서, 상기 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포), CD3+ T 세포는 말초혈액 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포), 및 CD3+ T 세포이다.
49. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증 환자를 치료하기 위한, 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
50. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증 환자를 치료하기 위한 약을 조제하기 위한, 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된, 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
하기의 실시예들은 본 명세서에 기술된 화합물, 조성물 및 방법을 실례를 사용하여 설명하기 위한 것일 뿐, 제한적인 것이 아니다. 당업계의 숙련자에게 알려진 다른 적합한 변형 및 조정은 본 명세서에 제공된 구체예의 범위 내에 있다.
실시예 1
암환자와 HIV를 포함하는 바이러스 감염증을 치료하기 위한 선택
첫 단계로서 NK 세포를 어느 적합한 상업적 원천으로부터 획득 또는 그로부터 정화되고, 상기 세포는 본 명세서의 이전 부분에서도 기술된 바와 같이 동종이형이다.
본 명세서에 기술된 바와 같이, 환자에게 치료적 세포 조성물을 투여하기 위한 네 개의 주입 선택이 있다. 이 치료적 세포 조성물은 다음의 세포 구성요소를 포함한다:
활성화 NK 세포; 또는
활성화 NK 세포 + 활성화 GDT 세포; 또는
활성화 NK 세포 + 활성화 GDT 세포 + iNKT 세포; 또는
활성화 NK 세포 + CD3+ T 세포.
1단계: 환자 사전 조건화 선택
도 1에 기술된 바와 같이, 환자의 상태, 그리고 질병의 시기(stage)에 따라 환자는 표 1 내지 표 5에 나열된 사전 조건화 프로토콜을 사용하여 사전 조건화된다. 0일은 주입 날(예를 들어 활성화 림프구성 세포 조성물의 주입)을 의미한다.
-7일에서 -3일 플루다라빈 25mg/m2/day IV
-4일 시클로포스파미드 1000mg/m2 IV
-5일에서 -1일 플루다라빈 15mg/m2/day IV
-2일 시클로포스파미드 1000mg/m2 IV
-3일에서 -2일 시클로포스파미드 1000mg/m2 IV
-5일에서 -2일 플루다라빈 25mg/m2/day IV
-5일에서 -1 시클로포스파미드 200mg/d PO
표 1 내지 표 5의 어느 치료 전 요법을 따르는 특정 구체예에서, 그 후 환자는 -2일 및 -1일에 피하(SC) 주사로 인터페론 알파(IFN-α) 3x106IU/m2/d로 치료된다. IFN-α의 양은 SC 주사로 약 1x106 내지 약 5x106IU/m2/d일 수 있다.
일부 구체예에서 상기 방법은 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 환자에게 투여하는 같은 날에, 하지만 최소 약 2 내지 6시간 전에, 환자에게 하나 또는 두 개의 항히스타민제(25mg 프로메타진 및 25mg 디펜히드라민과 같은 표준량)를 투여하는 단계를 더 포함한다.
림프구성 치료적 세포의 시험관 내 활성화
특정 구체예에서 활성화 혼합제는 IL-2, IL-12, IL-15, IL-18 및 IL-21 개별적으로, 또는 어느 조합으로 포함할 수 있다. 활성화 과정은 주로 하룻밤 동안, 최소 12시간이고, 일반적으로 24시간 이하이다.
득정 구체예에서는 가용성 FGF1 수용체가 리터당 33.33나노몰(또는 ml당 33.33피코몰)의 예시적인 농도로 활성화제(FGFR1, 구체적으로는 도 4에 도시된 바와 같이 구성체로부터 정화된 FGF1 수용체의 세포외 도메인)로서 사용된다. FGF1 수용체의 세포외 도메인에 림프구성 세포를 노출시키는 것은 CD56+ NK 세포집단을 활성화시키고 그리고 그가 거의 순수한 세포독성 NK 세포 조성물(예를 들어 최소 80% 세포독성 NK 세포)이 되도록 유도(세포독성 및 조절 NK 세포의 혼합 집단과 대조적)하는 기능을 한다. 활설화 혼합제는 분리 후 세포가 보관되는 완충제(또는 배지)에 간단하게 첨가될 수 있다. 특정 구체예에서는 신선(fresh) 백혈구성분채집술 물로부터 신선하게 분리된 세포가 NK 세포의 원천으로서 사용된다. 그러나 특정 구체예에서는 다른 세포 수집/분리/및/또는 보존 시나리오가 세포 원천으로서 사용될 수 있다. 예를 들어 세포는 활성화 단계 전 또는 더 바람직하게는 그 후에 냉동보존될 수 있다. FGF1 수용체의 세포외 도메인을 사용하는 활성화는 NK 세포, GDT 세포, 및 iNK 세포를 포함하여 본 명세서에 기술된 어느 림프구성 세포라도 활성화시키는 데에 사용될 수 있다.
신선한 세포 물질을 활용하는 예시적인 방법:
o 신선하게 동원된(mobilized) 백혈구성분채집술 물질은 "표적세포 집단"(상기에 기술된 4 선택 중 어느 것)의 분리를 위해 처리된다.
o 분리된 세포는 활성화 혼합제와 함께 완충액 또는 배지에 현탁된다. 5-20% HSA(인간 혈청 알부민)를 갖는 PBS가 일반적인 완충액이지만 다른 유사한 선택 또한 활용될 수 있다.
o 세포는 12+시간 후에 세척되고 그리고 주사가능 용액에 다시 현탁된다. 일반적으로 이 완충액은 5-20% HSA(인간 혈청 알부민)를 갖는 PBS이지만, 어느 적합한 용액이라도 될 수 있다. 특정 구체예에서는 환자의 혈청 또는 혈장이 주입 배지로서 활용될 수 있다.
o 표 1 내지 표 5에 기술된 사전 조건화 과정과 선택적인 -2일 및 -1일 인터페론 알파 치료 후에 환자에게 세포가 주입된다.
림프구(NK 또는 다른 것)가 IL-2 또는 IL-2를 포함하는 어느 다른 조합의 혼합제로 시험관 내에서 활성화되면 그 때부터 그의 세포독성 역가는 IL-2에 의존하게 되는 것이 주목할 사항이다. 이는 환자의 혈액에 특정 수준의 IL-2이 없다면 활성화 림프구(NK 또는 다른 것)가 그의 역가를 잃기 시작한다는 것을 의미한다. 따라서 시험관 내 활성화 혼합제에 IL-2가 활용되는 경우에는 세포 주입 당일과 세포 주입 후 최소 4일(14일까지) 동안 환자에게 지속적으로 IL-2 주사를 주어야한다. 일반적인 IL-2 투여량은 피하 주사로 일당 약 3-6백만 IU/m2이다.
또한 IL-2 활성화는 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종 환자에서 NK 세포 또는 다른 치료 조성물을 활성화시키는 데에 활용되지 않는다(림프모구 백혈병 또는 림프종 환자를 위한 선택은 도 1을 참조). 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종 환자에서 치료 세포 조성물의 활성화를 위해 IL-2를 사용하지 않는 이 상이한 과정은 이 암을 오버드라이브(overdrive) 상태로 만드는 것을 피하고, 그리고 치료적 세포 조성물의 역가를 포함한다. 따라서 도 1에 도시된 바와 같이 이 환자들에게는 IL-2 활성화가 사용되지 않을 것이다.
2단계: 질병 시기 또는 상태에 따른 환자 내로의 주입을 위한 림프구성 세포집단에 대한 선택
도 1에 도시된 바와 같이, 질병 및 시기에 따라 "활성화 림프구성 조성물"로서 주입에 활용될 수 있는 네 가지 상이한 세포 집단, 또는 "세포 혼합제(cell cocktails)"가 있다. 이 조성물들 및 변이들의 다양한 구성은 하기에 기술된다.
또한 이 활성화 림프구성 조성물의 특정 구성요소 또는 구체예가 키트에 제공될 수 있다. 예를 들어 네 림프구성 조성물의 어느 조성물이라도 동결 조성물로 제공될 수 있고 그리고 단독으로 또는 사전 조건화 또는 후 조건화 단계의 다른 제제 중 어느 것의 별도의 용기 그리고 선택적으로 사용 설명서와 함께 키트로서 포장될 수 있다.
일부 구체예는 키트에 있는 상기의 어느 세포 조성물에 대한 것이다. 일부 구체예에서 상기 키트는 앰플, 일회용 주사기, 캡슐, 바이알, 튜브 등을 포함할 수 있다. 일부 구체예에서 상기 키트는 본 명세서의 구체예의 국소제제(topical formulation)를 포함하는 일회량(single dose) 용기 또는 다회량(multiple dose) 용기를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서 각 투여량 용기는 하나 이상의 단일 투여량(unit dose)을 수용할 수 있다. 일부 구체예에서 상기 키트는 애플리케이터(applicator)를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서 상기 키트는 조건화/치료의 세 단계에 필요한 모든 구성요소를 포함한다. 일부 구체예에서 세포 조성물은 보존제를 갖거나 또는 무보존제일 수 있다(예를 들어 일회용 용기의 경우).
림프구성 세포 주입
예를 들어 NK 세포를 사용하는 림프구성 세포 주입에 있어서, 0일에 환자에게 시험관 내 활성화 동종이형-NK 주입(1-50x106cells/kg)이 투여된다. 세포 투여량은 kg 당 약 1백만-5천만 세포로 광범위하게 다를 수 있다. 하기에 기술된 바와 같이 림프구성 세포 주입 혼합물은 다음의 어느 조합이라도 포함할 수 있다:
활성화 NK 세포; 또는
활성화 NK 세포 + 활성화 GDT 세포; 또는
활성화 NK 세포 + 활성화 GDT 세포 + iNKT 세포; 또는
활성화 NK 세포 + CD3+ T 세포.
1. "실질적으로" 순수한 NK 세포의 세포집단
특정 구체예에서는 실질적으로 순수한 NK 세포집단(최소 약 75% NK 세포 내지 약 98% NK 세포의 범위의 "공여자 동종이형 NK 세포")이 특정 암환자에서 미세 잔존 질병(minimal residual disease)의 치료를 위해 사용된다. 본질적으로 순수한 NK 세포의 분리는 CD16+CD56+ NK 세포의 음성 또는 양성 선별을 통해 수동으로 또는 cliniMACS를 사용하여 실행될 수 있다. NK 세포는 보통 증식할 수 없기 때문에(또는 다른 림프구만큼 증식하지 않기 때문에) 그의 효과는 제한적이고 그리고 그의 수명 또한 굉장히 제한된다. 이 활성화 NK 동종이형 세포는 숙주/수용자의 신체에서 약 5-15일 정도 생존할 수 있다. 이는 종양 용해 증후군(tumor lysis syndrome), 종양의 종창/염증 등과 같은 종양 사멸과 연관된 유해반응의 수준을 완화시키는 능력을 제공한다. 중요한 것은, NK 세포 비의존 항원과 그의 성장이 불가함과 그의 짧은 수명의 조합에 의해 이식편대숙주병(GVHD)의 합병증이 제거된다.
본질적으로 순수한 NK 세포의 분리는 CD16+CD56+ NK 세포의 음성 또는 양성 선별을 통해 수동으로 또는 cliniMACS를 사용하여, 그리고 본 명세서에서 기술된 바와 같이 실행될 수 있다(Slavin, S. et al. Cancer Immunol. Immunther. (2010) 59:1511-1519의 방법 또한 참조).
2. 순수 NK 세포 및 GDT 세포의 혼합물(바람직하게는 두 세포 유형 다, 함께 또는 따로, 활성화됨)을 포함하는 림프구성 세포 조성물
공여자 감마 델타 T 세포(γδ T 세포, 또는 GDT 세포)는 MHC 비의존성이고 그리고 표적세포의 스트레스 신호를 통해 사멸시키는 면에 있어서 본질적으로 공여자 NK 세포처럼 기능하기 때문에, 그는 특정 환자를 치료하기 위해 본질적으로 순수한 공여자 NK 세포와 함께 조합으로도 사용될 수 있다. 공여자 NK 세포 및 공여자 GDT 세포의 차이는 공여자 GDT 세포는 생체 내에서 증식한다는 것이다. 주입된 NK 세포는 증식할 수 없다. GDT 세포가 T 세포처럼 행동할 수 있고, 그리고 증식할 수 있기 때문에, 그는 공여자 NK 세포에 비해 환자에서 더 긴 수명을 갖는다. 공여자 GDT 세포를 사용하는 것은 더 강력하고 그리도 더 오래 지속되는 이식편대종양(GVT)(또는 이식편대백혈병 또는 이식편대바이러스)을 가능하게 하는 일과성 공여자 미세키메라현상(microchimerism)이 바람직한 경우에 유용하다. 세포 "생성물(product)" 혼합물은 백혈구성분수집술 물질로부터 NK 및 GDT 세포를 함께 분리시키는 것으로 조제될 수 있다. 대안적으로 그는 사례별 기준으로 각 집단의 투여량을 제어하기 위해 별도로 분리되고 그리고 별도로 활성화된 후에 함께 혼합될 수 있다.
3. NK + GDT + iNKT 세포 조성물 혼합제(바람직하게는 NK 및 GDT 세포 유형 다, 함께 또는 따로, 활성화됨)
iNKT 집단이 PBMC의 굉장히 작은 퍼센트를 이루기 때문에 NK + GDT + iNKT 세포를 포함하는 조성물은 NK 및 GDT 세포를 포함하는 조성물과 유사하다. 그러나 분리 과정은 약간 다르다. 따라서 특정 구체예에서 이 NK + GDT + iNKT 세포 혼합물의 분리 과정은 중성구, 단핵구, AB T 세포 및 B 세포의 고갈, 그리고 남은 구성요소를 수집하는 것이다. 예를 들어 백혈구성분채집술 물질은 조합된 CD14, CD15, CD19, CD4 및 CD8 고갈을 거친다. 남은 세포는 NK + GDT + iNKT 세포의 혼합물이다. 이 분리 과정은 굉장히 실용적이지만 각 세포 유형의 집단의 투여량을 개별적으로 제어할 수는 없다.
iNKT 세포가 전사인자 PLZF를 발현하는 CD1d 제한 지질 감지 선천 T 세포(CD1d-restricted lipid-sensing innate T cells)라는 점이 중요하다(Nat Immunol. 2015 Jan; 16(1):85-95). iNKT 세포는 반불변(semi-invariant) αβTCR을 갖고 그리고 CD1d 제시 지질 항원을 인식한다. 적응 MHC 제한 T 세포와는 달리, 그는 이펙터 및 기억 표현형을 항정상태로 전시하고, 이는 즉각 이펙터 기능을 바로 실행할 수 있는 준비를 시킨다. 그의 빠른 반응 및 NK 수용체의 기저 발현(basal expression) 때문에 그는 "선천(innate)" T 세포로 고려된다. iNKT 세포는 Zbtb16으로 인코딩되는 BTB-POZ 전사인자 PLZF를 높은 수준으로 발현하는 것을 특징으로 하고, 이 전사인자는 iNKT 세포계통을 정의하는 것으로 제시되었다. PLZF는 반불변 T 세포의 다른 집단인 인간 MAIT 세포, 그리고 γδ T 세포의 선천 아형으로도 발현된다. 따라서 PLZF 발현은 제한된 TCR 다양성을 가진 T 세포와 연관이 있고 그리고 선천 표현형 및 이 세포들의 빠른 사이토카인 반응을 책임지는 것으로 고려된다(Anticancer Res. 2018 Jul;38(7):4233-4239 참조).
4. NK + CD3 세포 조성물 혼합제(CD3 세포와 함께 조합으로 활성화된 NK 세포)
동종이형 이식물에 동종이형 림프구를 사용하는 이전의 치료들은 이 환자들에서 GVHD를 야기했다. 따라서 임상의들은 CD3 혼합물의 사용에 대해 조심스러웠다. 이 치료 요법에서는 GVHD의 가능성이 환자의 면역계를 일시적으로 효과적으로 억제하는(예를 들어 약 5-7일의 림프억제) 사전 조건화 단계에 의해 완화된다. 이론에 얽매이지 않길 바라며, 사전 조건화 단계의 결과인 5-7일의 림프억제 기간의 끝에서 주입되는 CD3 세포의 수가 숙주 면역계를 압도할 정도로 높지 않은 한, 환자에서 GVHD의 위험은 없다. GVHD의 위헙이 없는 다른 이유는 GVT(이식편대종양)(또는 GVL 또는 GVV(이식편대바이러스))가 항상 GVHD보다 먼저 생기기 때문이다. 이는 환자가 CD3 동종이형 세포의 표적 역할을 하는 종양 항원을 갖는 종양 부하(tumor burden)을 조금이라도 갖는 한 , 동종이형 세포가 침입 세포, 예를 들어 암/바이러스/세균 세포를 공격하기 바빠 "GVHD가 발달할 틈"이 없을 것이란 의미이다. 만약 표적 암 또는 바이러스 또는 세균 감염된 세포를 한 단일 치료로 완전히 제거할 가능성이 있다면 GVHD의 위험이 아주 작게 있다. 예를 들어, 만약 환자가 미세 잔존 질병 단계에 있고 그리고 NK+CD3 세포의 조합으로 치료받고, 그리고 환자의 면역계가 사전 조건화의 효과로부터 반동(rebound)하기 전에 첫 며칠 안에 동종이형 세포가 모든 암세포를 사멸시킬 경우. CD3 세포가 더 오래 생존하고, 증식하고, 그리고 어느 이물질이라도 공격하는 것으로 여겨지기 때문에, 공격할 암 세포가 더이상 없다면 그가 건강한 숙주세포를 공격하기 시작하고 그리고 계속 증식할 것으로 예상된다.이는 급성 그리고 아마도 낮은 등급의 GVHD를 야기할 수 있다. 그러나 피해야 할 상황은 높은 투여량의 CD3 세포의 초기 주입이 있고, 그리고 사전 조건화 효과가 없어졌을 때 그가 숙주 면역계가 그를 거부할 수 없을 정도로 증식해버린 상황이다. 이 때는 더 심각한 GHVD가 야기될 수 있다. 따라서 이 활성화 NK 세포 및 CD3 세포 조합의 치료는 전이 고형종양 환자 및 진행 또는 전이 혈액암 환자와 같은 굉장히 무거운 종양 부하를 가진 환자에게만 사용된다(도 1 참조). 치료에 CD3 세포를 추가하는 것은 더 오래 지속되는 공여자 미세키메라현상 및 동종이형 세포의 더 나은 종양 침윤을 가능하게 한다. 동종이형 세포의 동종반응(alloreactivity)은 숙주 면역계가 종양 미세환경 내로 더 쉽게 침윤하는 것을 간접적으로 돕는다. 이 과정은 더 강한 숙주 항종양 면역원성을 유발한다.
3단계: 주입 후 선택. 도 1에 도시된 바와 같이 주입 후 치료(또는 주입후 조건화)에 세 가지 선택이 있다. 주입 후 요법은 환자의 면역 탈진 및/또는 면역 관용을 방지하는 기능을 한다.
1. 주입 후 생체 내 IL-2 활성화.
특정 환자에서는 활성화 NK 세포의 주입 후 환자에게 0일(세포 주입 당일)부터 주입 후 약 5일까지 IL-2를 투여하는 것으로 생체 내 IL-2 활성화가 달성될 것이다. 주입 후 생체 내 IL-2 투여는 상기 NK 세포가 IL-2를 포함하는 혼합제로 시험관 내 활성화된 경우에만 표시된다. IL-2의 양은 다를 수 있지만 일반적으로 SC 주사로서 약 6x106IU/m2/day이다. 환자에게 투여되는 IL-2의 양은 약 1x106IU/m2/day 내지 약 6x106IU/m2/day으로 다를 수 있고 그리고 일반적으로 피하(SC) 투여된다. 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종 환자와 같이 IL-2를 주사하는 것이 권장되지 않는 암환자에게는 이 주입 후 단계가 투여되지 않는다. 이 환자들에게는 생체 내 주입 후 IL-2가 투여되지 않는다. 환자가 주입 후 IL-2 생체 내 투여받는 최장 기간은 7일일 것으로 예상된다.
2. COX-2 억제제의 주입 후 투여
이론에 얽매이지 않길 바라며, 환자에게 COX-2 억제제(특이적 또는 비특이적)를 투여하는 것과 관련된 주입 후 치료 선택은 PGE2 및 FOXP3 경로를 차단하는 역할을 하고 그리고 따라서 면역 탈진 및 면역 관용을 방지하기 위해 많은 세포기반 치료법, 특히 IL-2 활성화가 수반되는 것들과 연관된 두 개의 악화 요인들인 Treg 분화 및 생산을 방해한다. 또한 주입 후 치료는 주입 관련 열병, 및 활성화 림프구성 세포 주입과 연관된 통증을 관리하는 데에 유용하다. 이 특이적 또는 비특이적 COX-2 억제제는 주입 후 또는 후 조건화 요법에서 0일(세포 주입 당일)에서 약 3-4주의 범위의 어느 기간까지, 3-4주의 기간 동안 약 200-400mg/day의 양으로 경구 투여될 수 있다.
3. PGE2 억제제의 주입 후 투여
도 1에 따라, 유사하게, 아스피린, 인도메타신(인도신), 이부프로펜(애드빌, 모트린), 나프록센(나프로신), 피록시캄(펠덴), 및 나부메톤(렐라펜)과 같은 비특이적 COX-2 억제제를 포함하는 다른 PGE2 억제제 또한 활성화 림프구성 세포 주입 후에 환자에게 투여될 수 있다. 이 화합물은 COX-2 억제제와 유사한 효과를 갖는다. 이 제제는 주입 후 또는 후 조건화 요법에서 0일(세포 주입 당일)에서 약 3-4주의 범위의 어느 기간까지, 약 80-300mg/day의 양으로 경구 투여될 수 있다.
또한 특정 환자에서는 종양 또는 감염체에 대한 면역계 반응을 증가시키기 위해 이 치료 요법이 주기적으로 반복될 것으로 예상된다. 그러한 주기적인 치료는 유지요법으로서 환자가 필요로 하는 한, 매달 1회에서 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회로 다를 수 있다.
실시예 2
활성화 림프구성 치료 후 투여되는 면역 체크포인트 억제제
특정 구체예에서는 환자가 본 명세서에 기술된 활성화 림프구성 세포 요법 중 하나로 치료되고, 그리고 활성화 림프구성 세포 조성물 투여 후 4-14일의 기간 동안 면역 체크포인트 억제제가 더 투여된다. 이론에 얽매이질 않길 바라며, 공여자 활성화 림프구성 세포가 수용 환자에서 약 4/5-15일의 수명을 갖기 때문에 그가 죽기 시작하면서 종원 항원을 제시하는 기능을 하고 그리고 환자에게 백식과 같은 역할을 하는 것으로 여겨진다. 이 때(활성화 림프구성 세포 투여 후 약 4-14일) 상기 환자에게 두 면역세포 체크포인트 억제제, 예를 들어 면역계에 억제 신호를 보내는 분자 중 어느 하나 또는 이들의 조합, 가 투여될 수 있다. 면역세포 체크포인트 억제제의 투여 후, 본 명세서에 기술된 후 조건화 치료가 뒤따를 것이다. 면역세포 체크포인트 억제제의 투여량은 표준 투여량일 것이다. 또한 특정 환자에서는 종양에 대한 면역계 반응을 증가시키기 위해 이 치료가 주기적으로 반복될 것으로 예상된다. 그러한 주기적인 치료는 유지요법으로서 환자가 필요로 하는 한, 매달 1회에서 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회로 다를 수 있다.
그러한 제제의 예시는 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb의 니볼루맙), MK-3475(Merck의 키트루다)로도 알려진 펨브롤리주맙/램브롤리주맙, 피딜리주맙(Curetec), AMP-224(Amplimmune)를 포함하는 항PD-1 항체, 또는 MPDL3280A(Roche), MDX-1105(Bristol Myer Squibb), MEDI-4736(AstraZeneca) 및 MSB-0010718 C(Merck)를 포함하는 항PD-L1 항체와 같은 PD-1 또는 PD-L1(B7-H1)의 억제제를 포함한다. 다른 체크포인트 억제제는 항CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4의 작용제를 포함한다. 예시적인 항CTLA-4 항체는 Bristol-Myers Squibb이 시판 중인 YervoyTM(이필리무맙)이다. 다른 예시적은 CTLA-4 항체는 트레멜리무맙(Pfizer), 티실리무맙(AstraZeneca) 및 AMGP-224(Glaxo Smith Kline)를 포함한다.
활성화 NK 세포에 뒤이어 니볼루맙으로 치료된 전이 유방암 환자
전이 유방암 환자가 본 명세서에 기술된 활성화 림프구성 세포 요법으로 치료되었고, 그리고 상기 활성화 림프구성 세포 조성물의 투여 후 약 8일 후의 기간부터 면역 체크포인트 억제제가 더 투여되었다(면역 체크포인트 억제제의 투여 시기는 활성화 림프구성 세포 조성물의 투여 후 약 4-15일 내에서 언제라도 될 수 있다). 상기의 치료는 1등급 부작용만을 겪었고 내약성이 양호(well-tolerated)했다. 또한 초기 결과는 모든 전이가 거의 검출할 수 없는 수준으로 줄어든 것을 보여주었다. 이 데이터와 추가적인 결과 및 요법은 도 3a 내지 도 3e에 도시되었다.
실시예 3 HIV 치료 선택
그들에게 처방된 대로 약-항레트로바이러스 치료(ART)를 받고 그리고 검출할 수 없는 바이러스 부하를 유지하는 HIV를 가진 사람들은 건강하게 오래 살 수 있고 그리고 그들의 동반자에게 HIV를 성적 접촉으로로 전염할 위험이 사실상 없다. 그러나 HIV 환자의 상당수가 조합 치료 전 불충분(suboptimal)한 치료 및/또는 낮은 순응도(poor adherence)에 의한 약물 내성을 갖는다는 증거가 있다. 이는 1980년대 및 1990년대에 단일요법(monotherapy) 및 이중요법(duo-therapy)이 널리 사용된 미국의 캘리포니아, 뉴욕, 일리노이, 플로리다 주 그리고 특정 나라들, 예를 들어 브라질 및 태국의 대도시들에서 특히 문제이다. HIV 환자의 상당수가 유해한 부작용, 독성, 약물 내성, 약물 남용, 정신 질환, 사회 경제적 지휘, 글을 읽고 쓰는 능력(literacy), 및 사회적 낙인(social stigma)을 포함하는 다양한 이유 때문에 순응에 실패한다[4]. 그러한 환자는 흔히 상당한 수준의 혈장 바이러스 혈증과 함께 계속 진행되는 바이러스 복제를 갖고, 그리고 그렇기 때문에 제한된 선택만이 남은 심하게 손상된 면역계를 갖고 그리고 상당한 이환(significant morbidity) 그리고 궁극적으로는 사망에 이르게 된다.
많은 노력에도 불구하고 억제되지 않은 혈장 바이러스 혈증을 갖는 환자를 완화시키기 위한 진전은 미미했다.
현재 HIV 질병 진행의 임상전 그리고 임상 모델은 위장관의 HIV 연관 파열이 손상된 창자 장벽 전체에 걸친 미생물 전위(translocation) 그리고 그 후 만성 면역 활성화, 질병 진행, 및 HIV 질병의 증가된 이환을 야기하는 것을 암시한다. 감마 델타(γδ) T 세포는 반불변 T 세포 수용체(TCR)를 발현하는 '선천' T 세포 유형이다. 재배열된 TCR의 Vδ1 또는 Vδ2 유전자의 분화 사용은 인간 γδ T 세포의 두 주 아형을 분화시킨다[7]. 미생물 생성물 및 스트레스 받은 숙주 세포 둘 다의 인식은 γδ T 세포가 전반적인 감염증 그리고 특히 바이러스에 대항하는 면역 반응에서 중요한 역할을 맡는 것을 허용한다[8-10]. Vδ2+ 세포는 주로 혈액에서 순환하는 반면, Vδ1+ 세포는 주로 상피내 림프구(IEL)로서 소화관 점막 내에 국한되고 그리고 상피 기능을 유지하는 것을 돕는다[9]. γδ T 세포는 선천 및 적응 면역세포 둘 다의 특성의 조합을 가져 잠재적인 면역요법 접근법에 매력적이게 만든다[11-13]. 이는 염증성 사이토카인을 생산할 수 있고, 감염된 또는 악성 세포를 직접적으로 용해시킬 수 있고, 그리고 재노출되었을 때 병원체를 공격하도록 기억을 형성할 수 있다. γδ T 세포는 회합된 CD3/TCR 복합체를 통해 세포내 신호전달을 유도하는 T 세포 수용체(TCR) 사슬(TCRγ/TCRδ)의 γ 및 δ 이종이합체의 발현으로 정의된다[14]. γδ T 세포 계통(순환 T 세포의 1-5%)은 TCRα/TCRβ 이종이합체를 발현하고 그리고 마찬가지로 회합된 CD3/TCR 복합체를 통해 신호전달을 하는 말초혈액에 있는 더 일반적인 αβ T 세포 계통(~90%)과 비교될 수 있다[15,16]. αβ T 세포 상의 CD4 및 CD8 공수용체는 주조직 적합 복합체(MHC)로의 TCRαβ 사슬의 결합을 도와 형성된 CD3/TCR 복합체 상에 다양한 펩타이드가 제시될 수 있게 한다[17-19]. 반면에 TCRγδ는 MHC/펩타이드 복합체의 독립적인 항원의 상부구조(superstructure)에 직접적으로 결합하고, 결과적으로 CD4 및 CD8은 γδ T 세포 상에서 흔하지 않다[20,21]. 항원 인식이 MHC/펩타이드 제한 밖에서 달성되는 것을 고려했을 때, γδ T 세포는 그의 TCR을 통해 매개되는 예측가능한 면역 이펙터 기능을 갖고 그리고 만능 동종이형 적응 세포 치료요법으로 사용될 수 있는 잠재력을 갖는다[22].
γδ T 세포는 상당한 동종이식편반응을 야기하지 않는 것이 입증되었고, 그리고 따라서 심한 이식편대숙주병을 유발하지 않는다.
자연살해(NK) 세포는 항원 인식이 결여되어 있을 때 종양 변형된 또는 바이러스 감염된 세포에 대항하는 연장된 감시를 제공하는 선천 림프계 세포이다. 이는 바이러스 감염증의 근절 및 제거에 핵심적인 역할을 하는 선천 면역의 중요한 이펙터이다. 또한 NK 세포는 선천 및 적응 면역계 세포 사이의 다리인 것으로 고려된다. 최근 몇 년간 여러 연구가 HIV-1이 병적으로 NK 세포 항상성을 변화시키고 그리고 그의 항바이러스 이펙터 기능을 방해하는 것을 보여주었다. 또한 높은 수준의 만성 HIV-1 바이러스혈증은 보통 선천 및 적응 면역 반응 사이의 혼선(cross-talks)을 조절하는 NK 세포 조절 기능을 현저하게 손상시킨다. NK 세포 수용체에 대한 특정한 일배체형(haplotype)의 존재에 더하여 NK 세포 항체 의존성 세포독성(ADCC)의 결합은 HIV-1 감염증을 제어하는 것으로 보고되었다.
살해 면역글로불린 유사 수용체(KIR)를 포함하는 NK 세포 상의 유전자 인코딩된 억제 수용체는 활성화 및 억제 신호 사이의 균형으로 조절되는 NK 세포 활성화에 큰 영향을 미친다. KIR 및 그의 동족(cognate) HLA 리간드는 NK 세포 세포독성 활성에 대한 역치를 설정한다. 또한 이는 C형 간염의 해소(resoluation)과 연관하여 바이러스 감염증의 경과에 대단이 중요한 영향을 미치는 것으로 나타났다[30]. HIV에서 HLA/KIR 조합은 질병의 진행 속도[31,32] 및 질병 획득(disease acquisition)에 대한 보호[33,34]와 연관되어 왔다. 이 보호를 부여하는 메커니즘은 억제 리간드 활성화[35] 및 KIR과 HLA 분자 상에 제시된 HIV-1 유래 펩타이드 모티프의 직접적인 상호작용을 통한 NK 세포 교육(education), 또는 "라이센싱(licensing)" 둘 다 포함할 수 있다. 특정한 바이러스 단백질/KIR 조합은 시험관 내 NK 세포 바이러스 억제[36]에서의 차이점과 연관되고 그리고 HLA/KIR 조합은 HIV 제어에서의 차이점을 부여한다[37]. 특정한 HIV 유래 펩타이드에 의해 유도되는 HLA/KIR 상호작용은 시험관 내 NK 세포 기능의 측정값 및 집단 연구에서 바이러스 탈출(viral escape)의 패턴과 더 연결된다[38,39]. 이는 부분적으로는 억제 수용체 리간드의 유전자 변종에 의해 결정되는 NK 세포 활성화 역치 및 숙주 HLA 구조 상에 제시될 수 있는 바이러스 연관 펩타이드가 NK 세포 세포독성 활성의 보호 역가를 정의하는 것을 시사한다.
본 발명이 제안하는 방법은 HIV 감염된 세포로부터 발생한 스트레스 신호의 존재 및 숙주 HLA/공여자 KIR 프로파일의 불일치에 근거하여 이식편대바이러스 효과로 밝혀진, 동종이형 NK 및 γδ T 세포의 HIV 특이적 세포독성 기능을 유의한 이식편대숙주 반응의 위험 없이 활용하기 위한 이 메커니즘들을 이용하는 것을 적어도 부분적으로는 기반으로 한다.
치료의 예시적인 전체적인 흐름은 다음과 같다(이는 필요한 만큼 반복될 수 있다):
● -7일부터 -1일까지 사전 조건화
● 0일에 세포 주입
● 1일부터 30일까지 후 조건화
HIV 환자를 위한 예시적인 치료의 개요는 다음과 같다:
사전 조건화
-7일부터 -4일
30분 동안 플루다라빈 25mg/m2/d IV
-3일 및 -2일
30분 동안 시클로포스파미드 300mg/m2/d IV
-2일 및 -1일
인터페론 알파 3x106IU/m2/d SC
적응 세포 치료법
0일
예비 투약(pre-medication): 30분 동안 프로메타진 25mg 및 디펜히드라민 25mg IV
60분 동안 NK 세포 20-25x106/kg 및 γδ T 세포 5-10x106/kg IV
인터류킨-2 6x106IU/m2 SC
후 조건화
1-4일
인터류킨-2 6x106IU/m2 SC
1-30일
셀레콕시브 200mg/d PO
아스피린 120-300mg/d PO(부적절하지 않을 경우)
실시예 3A
HIV 환자에게 활성화 NK 세포 활성화 림프구성 요법을 사용하여 HIV 환자에서 면역 반응 유도
도 2a 내지 도 2b에 도시된 바와 같이, 제어되지 않는 바이러스혈증을 갖고 그리고 내성 및/또는 독성 문제로 더 이상 항레트로바이러스 치료(ART)를 받고 있지 않는 환자는 다음과 같이 활성화 NK 세포 요법을 사용하여 치료되었다:
사전 조건화 요법:
-7일부터 -3일까지 플루다라빈 15mg/m2/d
-2일 및 -1일에 시클로포스파미드 500mg/m2/d
-2일 및 -1일에 인터페론 알파 3x106IU/m2/d
0일(활성화 NK 주입 당일):
20x106세포/kg 활성화 NK 세포
5x106세포/kg 활성화 GDT 세포
6x106IU/m2 IL-2 SC 주사
1일부터 5일까지:
6x106IU/m2 IL-2 SC 주사
1일부터 40일까지:
200mg/d 셀레콕시브 PO
상기 환자는 자기한정(self-limited) 열병, 오한 및 관절통을 경험했으나 이는 3일 및 6일 사이에 셀레콕시브에 의해 완화되었다. 다른 유해한 반응은 관찰되지 않았다. 활성화 NK 치료 후 49일에 HIV 바이러스 부하는 <20 HIV RNA copy/ml인 것으로 측정되었고, 이는 거의 검출되지 않는 수준이다(도 2a 및 도 2b 참조).
상기 환자의 HLA 프로파일은 NK+GDT 공여자 세포의 HLA 프로파일과 불일치했다.
본 명세서에 제공되는 이 실시예들은 활성화 세포 조성물의 HIV 및/또는 암을 가진 환자를 치료하는 놀랍고 예상하지 못 한 능력을 입증한다.
이론에 얽매이지 않길 바라며, 바이러스에 감염된 세포가 본질적으로 암세포와 유사하기 때문에(즉 외래 세포의 제어되지 않는 분열 또는 복제), 본 명세서이 기술된 바와 같이 활성화 림프구성 조성물 및 방법으로 환자를 치료하는 것으로 HIV 감염된 세포의 사멸이 야기될 것이고, 그리고 활성화 림프구의 "백신 효과"로 지속적으로 면역 반응을 유발시키고, 그리고 이 활성화 NK + 활성화 감마 델타 T 세포 치료의 경우, 활성성화 NK 세포의 식세포능(phagocytic capabilites)으로 바이러스 혈증을 지속적으로 제어할 것으로 고려된다. NK 세포가 환자의 말초혈액을 순환하면서 HIV 비리온을 파괴/제거할 것으로 예상된다.
도 2에 도시된 바와 같이 치료 후 HIV 바이러스 부하가 극적으로 감소되었고, 그리고 환자의 총 림프 수와 함께 환자의 CD4 및 CD8 세포 수가 반동하였다. 이 환자에게는 주입 당일, 그리고 주입 후 40일까지 매일 주입 후 치료로서 COX-2 억제제 또한 투여되었다.
또한 어느 잔여 바이러스/비리온에 대해 면역계 반응을 증가시키기 위해 이 치료법이 주기적으로 반복될 것으로 예상된다. 그러한 주기적인 치료는 유지요법으로서 환자가 필요로 하는 한, 매달 1회에서 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회로 다를 수 있다.
실시예 3B
HIV 병원소(reservoir) 제거
도 2 및 실시예 2A에 기술된 HIV 바이러스 부하의 대폭적인 감소를 고려하여, 본 발명의 동종이형 활성화 림프구성 치료법은 표준 ART로는 실질적으로 접근할 수 없는 잠복 HIV 병원소를 제거하는 데에도 효과적일 것으로 고려된다. HIV로 감염된 후에는 "불완전 ART" 때문에 활성화 림프구성 세포("동종 세포(allo-cells)")에게 "보이게(visible)" 자극될 수 있는 잠복 병원소가 있다. 잠복 HIV 병원소를 활성화시키는 하나의 큰 이벤트는 없지만, 대신에 상기 병원소에 있는 HIV는 자연적으로 느린 속도로 복제할 것이고, 감염 과정을 방해하는 융합 또는 진입 억제제인 항HIV mAb 또는 어느 다른 항레트로바이러스를 포함할 "불완전 ART"로 동시에 치료될 경우 새로운 T 세포와 융합하거나 또는 그를 감염시킬 수 없을 것이다(이는 불완전한 치료를 제공하고 그리고 바이러스 발현 및 생산을 방지하는 제제와는 대조적으로 다른 제제와 함께 조합되어야만 한다). 그러한 소분자 HIV 융합 또는 진입 억제제는 다음을 포함한다: 베비리매트(bevirimat)(DSB;PA-457); 비크리바이록(Vicriviroc), 마라바이록(Maraviroc)(케모카인 수용체 작용제 또는 "CCR5 억제제"), T-20(엔푸비르타이드(enfuvirtide), 푸제온(Fuzeon), Roche and Trimeris가 개발), TRI-1144, 및 TRI-999(Qian, K et al, Med Res Rev. 2009 Mar; 29(2):369-393, 및 Haggani and Tilton, Antiviral Res. 2013 May; 98(2):158-70 참조). 유사하게 항HIV mAb는 CCR5 및 CD4에 대항하는 것들, 그리고 구체적으로는 CD4를 결합시키는 비면역억제 인간화 단클론 항체인 이발리주맙(상품명 트로가조(Trogarzo)), CCR5에 대항하여 표적되는 인간화 단클론 항체인 PRO 140을 포함한다. 바이러스 파열(viral burst) 후 그리고 숙구 CD4 T 세포 내로 융합되기 전 짧은 기간 동안, 본 명세서에 기술된 활성화 림프구성 세포("동종 세포") 치료 방법(다양한 사전 조건화 및 후 조건화 선택 포함)은 HIV 바이러스를 사멸시키고 그리고 그가 새로운 세포를 감염시키는 것을 방지하는 기능을 할 것이다. 본 명세서에 기술된 바와 같이 이 활성화 림프구성 세포 치료 및 요법을 "불완전 ART"와 함께 사용하는 함으로써, 바이러스가 활성화 림프구성 세포에 의한 사멸에 노출될 수 있도록 잠복성으로 감염된 세포가 바이러스를 발현할 수 있게 한다. 결과적으로 상기에 기술된 바와 같이 "불완전 ART" mAb 또는 소분자 억제제의 존재 때문에 새로운 T 세포를 감염되는 것으로부터 보호하면서, 활성화 림프구성 세포로 모든 바이러스 생산 세포를 활발하게 사멸하게 될 것이다.
또한 특정 환자에게는 어느 잔여 바이러스/비리온에 대해 면역계 반응을 증가시키기 위해 이 치료법이 주기적으로 반복될 것으로 예상된다. 그러한 주기적인 치료는 유지요법으로서 환자가 필요로 하는 한, 매달 1회에서 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회로 다를 수 있다.
방법
A. 신선한 수집된 NK 세포로 활성화/분화
● 건강한 공여자 유래 휴지(resting) 말초혈액 NK 세포는 Miltenyi NK 분리 키트(음성 선별)를 사용하여 건강한 공여자 백혈구성분채집술 물질로부터 분리되었다
● 세포는 106/ml 세포 농도로 시딩되었다(seeded)
● 12 웰 플레이트(well plate), 3x106세포/웰
● 기초 배지: Miltenyi GMP Grade NK 배지
● 실험 조건:
1. 기초 배지
2. 기초 배지 + IL-2(500IU/ml)
3. 기초 배지 + FGFR1(33nM)
4. 기초 배지 + IL-2(500IU/ml) + FGFR1(33nM)
● 각 조건은 3회(triplicate) 시험되었다
● 0일(시딩) 세포 수: ml당 106 총 생세포
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 9.98x105 97 9.68x105
2 9.01x105 98.5 8.88x105
3 1.02x106 98.9 106
4 9.26x105 97.2 9x105
표 6: 24시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 9.27x105 95 8.88x105
2 8.99x105 97.2 8.73x105
3 1.04x106 98.4 1.02x106
4 9.19x105 95.9 8.81x105
표 7: 48시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 8.13x105 91 7.39x105
2 8.98x105 97.0 8.71x105
3 1.19x105 98.1 1.16x106
4 9.42x105 94.9 8.93x105
표 8: 72시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
이 데이터는 본 명세서에서 기술된 치료 조성물 및 적용을 위한 세포의 원천(상업적으로 확장 가능한(commercially scalable) 것)으로서 신선한 수집 NK 세포의 안정성 및 생존력을 보여준다.
도 6c에 도시된 바와 같이, 72시간에 걸쳐 생존력 및 총 세포 수를 평가했을 때 FGFR1 활성화가 IL-2 단독의 것보다 더 뛰어났다. 상기의 표 6 내지 표 8에 보여진 바와 같이 FGFR1 그룹의 세포에서는 약간의 증식이 있었다(3열의 결과 참조). FGFR1에 IL-2의 추가는 FGFR1 단독의 증식 효과를 감소시킨다. 이는 72시간의 활성화 끝에서 세포독성 세포 수를 조절성/비세포독성 NK NK 세포 분포를 비교하는 도 6a 내지 도 6d에세도 나타난다. 이 분석에서는 세 개의 주 집단이 게이팅되었다(gated):
조절성 아형인 CD16-CD56+ NK 집단;
조절성/휴지 아형인 CD16-CD56dim NK 집단;
활성화/세포독성 아형인 CD16+ NK 집단.
따라서 "세포독성 대 비세포독성/조절성 집단을 비교했을 때, 유동 세포 분석법 데이터는 FGFR1 활성화 아형(도 6c)이 세포독성 NK 세포(CD16+, 또는 또한 CD16+CD56dim, 또는 CD16-CD56dim)에서 가장 큰 증가를 보였고, 그리고 가장 적은 조절 NK 세포를 보였다는 것을 나타낸다. IL-2 단독 활성화 아형(도 6b)에서는 훨씬 더 많은 수의 조절 NK 세포(CD16-CD56+)가 있었고, 이는 적응 세포 치료 환경에서 면역 관용 또는 면역 고갈의 원인이 될 수 있다. 따라서 FGFR1 또는 IL-2 + FGFR1 활성화 조합 NK 집단이 본 발명의 방법에 가장 바람직하다.
B. 냉동보존된 NK 세포의 활성화/분화
● 건강한 공여자 유래 휴지 말초혈액 NK 세포는 Miltenyi NK 분리 키트(음성 선별, Miltenyi Biotec Inc.)를 사용하여 건강한 공여자 백혈구성분채집술 물질로부터 분리되었다.
● 세포는 실험 전 14일 동안 -80℃에서 보관되었다. 이는 1.8ml 동결튜브(cryotube)에 5x106/ml의 농도로 Cryostor CS10 냉동보존 용액에 보관되었다.
● 세포는 37℃ 수조에서 해동되고 그리고 바로 배양 플레이트에 시딩되었다.
● 세포는 106/ml 세포 농도로 12 웰 플레이트에 3x106세포/웰로 시딩되었다.
● 기초 배지: Miltenyi GMP Grade NK 배지
● 실험 조건:
1. 기초 배지
2. 기초 배지 + IL-2(500IU/ml)
3. 기초 배지 + FGFR1(33nM)
4. 기초 배지 + IL-2(500IU/ml) + FGFR1(33nM)
● 각 조건은 3회 시험되었다
● 0일(시딩) 세포 수: ml당 106 총 생세포
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 8.71x105 91 7.92x105
2 8.16x105 90.5 7.38x105
3 8.11x105 93 7.54x105
4 8.44x105 92.7 7.82x105
표 9: 24시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 8.10x105 92 7.45x105
2 7.99x105 94.2 7.52x105
3 8.01x105 94.4 7.56x105
4 7.91x105 94 7.43x105
표 10: 48시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
총 세포 수/ml 생존력 % 생세포 수/ml
1 6.73x105 91 6.13x105
2 7.87x105 90.5 7.12x105
3 8.97x105 92.3 8.27x105
4 9.51x105 93.7 8.91x105
표 11: 72시간 세포 수 결과(각 그룹 3개의 평균)
이 데이터는 본 명세서에서 기술된 치료 조성물 및 적용을 위한 세포의 또 다른 원천(상업적으로 확장 가능한 것)으로서 냉동보존된 NK 세포의 안정성 및 생존력을 보여준다.
유해 사례 특징 부여
AE(Adverse Event)의 중증도는 유해 사례 공통 용어 기준(Common Terminology Criteria for Adverse Events: CTCAE) v5.0을 사용하여 1등급에서 5등급으로 평가된다. CTCAE에 의해 분류되지 않은 사례의 경우, 상기 사례의 중증도는 중증도를 추정하기 위해 하기의 척도에 따라 조사관에 의해 등급이 매겨진다.
Figure pct00001
표준 방법
분자 생물학의 표준 방법들은 Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3 rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA)에 기술된다. 표준 방법은 Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY에서도 언급되고, 이는 세균 세포에서의 클로닝 및 DNA 돌연변이 유발(Vol. 1), 포유동물 세포 및 효모균에서의 클로닝(Vol. 2), 당포합체 및 단백질 발현(Vol. 3), 및 생물 정보학(Vol. 4)을 기술한다.
면역침전, 크로마토그래피, 전기영동, 원심분리, 및 결정화를 포함하는 단백질 정제를 위한 방법이 기술된다(Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). 화학 분석, 화학적 변형, 번역 후 변형, 융합단백질의 생산, 단백질의 글리코실화가 기술된다(예를 들어 Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. 3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; pp. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., pp. 384-391). 다클론 및 단클론 항체의 생산, 정제, 및 분절(fragmentation)이 기술된다(상기의 Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane). 리간드/수용체 상호작용의 특징 부여를 위한 표준 기법이 사용 가능하다(예를 들어 Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 4, John Wiley, Inc., New York 참조).
본 명세서에서 인용된 모든 참조문헌은 개별적인 출판물, 데이터베이스 항목(예를 들어 Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원, 또는 특허 각각이 참조로서 포함되도록 구체적으로 그리고 개별적으로 명시된 것과 동일한 정도로 참조로서 포함된다. 이 참조에 의한 포함 서술은 37 C.F.R. §1.57(b)(1)에 따라 인용이 참조에 의한 포함을 나타내는 문구 바로 옆에 없더라도, 각각이 37 C.F.R. §1.57(b)(2)에 따라 명확하게 명시된 각각의 그리고 모든 개별적인 출원물, 데이터베이스 항목(예를 들어 Genbank 서열 또는 GeneID 항목), 특허 출원, 또는 특허에 관련되도록 출원자가 의도한 것이다. 명세서 내에서 참조에 의한 포함을 명시하는 문구의 포함은, 존재할 경우, 참조에 의한 포함의 이 전반적인 서술을 어느 방식으로도 약화시키지 않는다. 본 명세서에서 참조문헌 인용은 참조문헌이 선행기술과 관련되었다는 것을 인정하는 의도가 없으며, 이 출판물 또는 문서들의 내용 또는 날짜에 관한 어느 인정을 하는 것도 아니다.
본 명세서의 구체예는 본 명세서에 기술된 특정 구체예에 의해 범위가 제한되지 않는다. 당업계의 숙련자에게는 본 명세서에 기술된 것에 더하여 본 명세서의 설명 및 첨부된 도면으로부터 구체예들의 다양한 변형이 명백할 것이다. 그러한 변형은 본 발명의 구체예 및 청구항의 범위 내에 해당된다.
SEQUENCE LISTING <110> Gumrukcu, Serhat <120> ACTIVATED LYMPHOCYTIC CELLS AND METHODS OF USING THE SAME TO TREAT CANCER AND INFECTIOUS CONDITIONS <130> 147144.00102 <150> US 62/861,487 <151> 2016-06-14 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 7133 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic sequence <400> 1 taatacgact cactataggg gaattgtgag cggataacaa ttcccctcta gaaataattt 60 tgtttaactt taagaaggag atataccatg catcaccatc accatcactc ccctatacta 120 ggttattgga aaattaaggg ccttgtgcaa cccactcgac ttcttttgga atatcttgaa 180 gaaaaatatg aggagcattt gtatgagcgc gatgaaggtg ataaatggcg aaacaaaaag 240 tttgaattgg gtttggagtt tcccaatctt ccttattata ttgatggtga tgttaaatta 300 acacagtcta tggccatcat acgttatata gctgacaagc acaacatgtt gggtggttgt 360 ccaaaagagc gtgcagagat ttcaatgctt gaaggagcgg ttttggatat tagatacggt 420 gtttcgagaa ttgcatatag taaagacttt gaaactctca aagttgattt tcttagcaag 480 ctacctgaaa tgctgaaaat gttcgaagat cgtttatgtc ataaaacata tttaaatggt 540 gatcatgtaa cccatcctga cttcatgttg 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Claims (50)

  1. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증을 가진 환자를 치료하는 방법으로서, 상기 방법이 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 면역 반응을 필요로 하는 환자에서 면역 반응을 증가시키기 위한 방법으로서, 상기 방법이 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 환자에서 HIV 복제를 억제하는 방법으로서, 상기 방법이 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 HIV를 가진 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 환자에서 종양 성장을 억제하는 방법으로서, 상기 방법이 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 종양을 가진 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 바이러스 또는 세균 감염증이 있는 환자에서 바이러스 또는 세균 복제 또는 번식을 억제하는 방법으로서, 상기 방법이 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 유효량을 바이러스 또는 세균 감염증을 가진 대상에게 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물이 활성화 감마 델타 T 세포(GDT 세포)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물이 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물이 CD3+ T 세포를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 투여하기 전에 상기 림프구성 세포 조성물이 세포를 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)과 혼합/배양/접촉되는 것으로 활성화된 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 사이토카인이 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 사이토카인이 약 6-24시간 동안 상기 세포 조성물과 배양/혼합/접촉되는 것을 특징으로 하는 방법.
  12. 제10항에 있어서, 상기 세포 조성물과 함께 배양되는 상기 사이토카인의 양이 약 100-1000IU/ml인 것을 특징으로 하는 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 전에 3-5일 동안 적어도 하나의 림프억제제, 화학요법제, 또는 면역억제제를 투여하는 것으로 환자가 상기 림프구성 세포 조성물이 투여되기 전에 사전 조건화(pre-conditioning)되는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 림프억제제 또는 화학요법제가 6TG, 6-MMP, 그리고 클로파라빈, 플루다라빈, 및 시타라빈으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 퓨린 유사체를 포함하는 제제 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 림프억제제 또는 화학요법제의 투여량의 범위가 약 5mg/m2 내지 약 50mg/m2인 것을 특징으로 하는 방법.
  16. 제13항에 있어서, 상기 화학요법제 또는 면역억제제가 사이클로포스파미드, 리툭시맙, 그리고 선택적으로 스테로이드 중 어느 하나 또는 이들의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 스테로이드가 당질 코르티코이드 스테로이드인 것을 특징으로 하는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 상기 스테로이드가 프레드니손인 것을 특징으로 하는 방법.
  19. 제16항에 있어서, 상기 화학요법제 또는 면역억제제의 투여량의 범위가 약 20mg/m2 내지 약 1000mg/m2인 것을 특징으로 하는 방법.
  20. 제13항에 있어서, 상기 방법이 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하기 이틀 전 그리고/또는 하루 전에 인터페론-알파(IFN-α), 또는 그의 생물학적 균등물을 약 1X106IU/m2/d 내지 약 10x106IU/m2/d의 투여량으로 환자에게 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날 그리고 투여 후 첫 날, 그리고 선택적으로 상기 림프구성 세포 조성물의 투여 후 추가적으로 3 내지 14일 동안 지속적으로 환자에게 IL-2를 한 투여량 당 약 3-6X106IU/m2의 투여량으로 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 상기 림프구성 세포 조성물을 투여하는 날, 그리고 상기 림프구성 세포 조성물의 투여 후 최소 14 내지 60일 동안 지속적으로 환자에게 COX-2 억제제 또는 비스테로이드성 소염제(NSAID), 또는 이들의 조합을 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 상기 COX-2 억제제는 세레콕시브 또는 로페콕시브이고, 그리고 상기 비스테로이드성 소염제는 아스피린, 인도메타신, 이부프로펜, 나프록센, 피록시캄, 및 나부메톤으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NK 세포가 환자에 대해 동종이형(allogenic)인 것을 특징으로 하는 방법.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NK 세포가 환자와 HLA 불일치하는 것을 특징으로 하는 방법.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 활성화 세포의 투여량의 범위가 약 3-50x106인 것을 특징으로 하는 방법.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 바이러스 감염증이 레트로바이러스(예: 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV) I형 및 II형 그리고 인간 면역결핍 바이러스(HIV)), 헤르페스 바이러스(예: 단순 헤르페스 바이러스(HSV) I형 및 II형, 엡스타인바 바이러스 및 거대세포 바이러스), 아레나바이러스(예: 라사열 바이러스), 파라믹소바이러스(예: 홍역 바이러스, 인간 호흡기 세포융합 바이러스, 및 폐렴 바이러스), 아데노바이러스, 부니아바이러스(예: 한타바이러스), 코로나바이러스, 필로바이러스(예: 에볼라 바이러스), 플라비바이러스(예: C형 간염 바이러스(HCV), 황열병 바이러스, 및 일본 뇌염 바이러스), 헤파드나바이러스(예: B형 간염 바이러스(HBV)), 오르소믹소바이러스(예: 센다이 바이러스 및 A형, B형 그리고 C형 인플루엔자 바이러스), 파포바바이러스(예: 유두종 바이러스), 피코르나바이러스(예: 리노바이러스, 엔테로바이러스 및 A형 간염 바이러스), 폭스바이러스, 레오바이러스(예: 로타바이러스), 토가바이러스(예: 풍진 바이러스), 및 랍도바이러스(예: 광견병 바이러스), 그리고 이들의 어느 조합에 의해 야기된 바이러스 감염증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  28. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 급성 백혈병, 급성 골수세포 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 골수모구 백혈병, 전골수성 백혈병, 골수단구성 백혈병, 적백혈병, 만성 백혈병, 만성 골수세포(또는 과립세포) 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 진성적혈구증가증, 림프종, 호지킨병, 비호지킨 림프종(무통성 및 고등급 형태), 다발골수종, 발덴스트롬 고분자글로불린혈증, 중쇄 질병, 골수형성이상증후군, 털세포 백혈병 및 골수형성이상증, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혈액작용 또는 혈행성 암인 것을 특징으로 하는 방법.
  29. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골육종 및 다른 육종, 활막종, 중피종, 유잉 육종, 평활근육종, 횡문근육종, 결장암, 림프구성 악성종양, 췌장암, 유방암, 폐암, 난소암, 전립선암, 감세포암종, 편평세포암종, 기저세포암종, 샘암종, 땀샘암종, 갑상선 수질암, 갑상선 유두암, 크롬친화세포 피지샘 암종, 유두암종, 유두상 선암종, 수질암종, 기관지원성 암종, 신세포암종, 간암, 담관암종, 융모막암종, 윌름즈 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 고환종, 방광 암종, 흑색종, 그리고 신경교종(예를 들어 뇌줄기신경아교종 및 혼합성 신경교종), 교모세포종(다형교모세포종으로도 알려짐) 별아교세포종, CNS 림프종, 배아종, 수모세포종, 신경집종 두개인두종, 뇌실막세포종, 솔방울샘종, 혈관모세포종, 청신경종, 희소돌기아교세포종, 뇌수막종, 신경모세포종, 망막모세포종 및 뇌전이와 같은 CNS 종양으로 이루어진 군으로부터 선택되는 고형종양인 것을 특징으로 하는 방법.
  30. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세균 감염증이 병원성 균종 박테로이데스, 클로스트리듐, 연쇄상구균, 포도상구균, 녹농균, 헤모필루스, 레기오넬라, 미코박테륨, 대장균, 살모넬라, 시겔라, 또는 리스테리아 중 하나에 의해 야기되는 것을 특징으로 하는 방법.
  31. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게서 이식편대숙주병(GVHD)이 감소되거나 제거된 반면, 이식편대종양(GVT) 또는 이식편대바이러스(GVV)가 증가되는 것을 특징으로 하는 방법.
  32. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 환자에게 림프구성 또는 림프모구 백혈병 또는 림프종이 있을 때는 IL-2의 투여가 적합하지 않고 그리고 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여 후 투여되지 않는 것을 특징으로 하는 방법.
  33. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NK 활성화 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물의 투여로부터 4-14일의 기간 동안 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb의 니볼루맙), MK-3475(Merck의 키트루다)로도 알려진 펨브롤리주맙/램브롤리주맙, 피딜리주맙(Curetec), AMP-224(Amplimmune)를 포함하는 항PD-1 항체, 또는 MPDL3280A(Roche), MDX-1105(Bristol Myer Squibb), MEDI-4736(AstraZeneca) 및 MSB-0010718 C(Merck)를 포함하는 항PD-L1 항체와 같은 PD-1 또는 PD-L1(B7-H1)의 억제제를 포함하는 두 가지 체크포인트 억제제 중 어느 하나 또는 둘의 조합을 포함하는 면역 체크포인트 억제제, 항CTLA-4 항체 YervoyTM(이필리무맙, Bristol-Myers Squibb), 트레멜리무맙(Pfizer), 티실리무맙(AstraZeneca) 또는 AMGP-224(Glaxo Smith Kline)를 포함하는 항CTLA-4 항체와 같은 CTLA-4의 작용제, 또는 유방암을 위한 트라스트주맙(Herceptin), 림프종을 위한 리툭시맙(Rituxan), 또는 세툭시맙(Erbitux) 종양 특이적 항체가 환자에게 더 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 치료 또는 면역 반응 증가는 유지요법으로서 환자가 호전 또는 안정적/비진행 질병을 보이는 한, 매달 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회, 4개월에 1회, 5개월에 1회, 6개월에 1회, 또는 7개월에 1회, 또는 8개월에 1회, 또는 9개월에 1회, 또는 10개월에 1회, 또는 11개월에 1회, 또는 매년 1회의 기간 동안 주기적으로 반복되는 것을 특징으로 하는 방법.
  35. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 활성화 NK 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물을 투여하는 같은 날에, 하지만 최소 약 2 내지 6시간 전에 환자에게 하나 또는 두 개의 항히스타민제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  36. NK 세포를 활성화시키는 방법으로서, 상기 방법이 시험관 내에서 NK 세포를 포함하는 세포 조성물에 적어도 하나의 사이토카인 그리고 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체(sFGFR1)를 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 상기 사이토카인이 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포 인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제36항에 있어서, 상기 사이토카인이 약 6 내지 24시간 동안 상기 세포 조성물과 접촉되는 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 제36항에 있어서, 상기 세포 조성물로 접촉되는 사이토카인의 양이 약 100 내지 1000IU/ml인 것을 특징으로 하는 방법.
  40. 제36항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 감마 델타 T 세포(GDT 세포)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  41. 제36항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물이 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포)를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  42. 제36항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물이 CD3+ T 세포를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  43. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NK 세포, 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포) 및/또는 CD3+ T 세포가 말초혈액으로부터 분리되는 것을 특징으로 하는 방법.
  44. 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된 것을 특징으로 하는 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
  45. 제44항에 있어서, 사이토카인 활성화 조성물이 IL-2, IL-15, IL-21, Flt3-L, 줄기세포인자(SCF), IL-7, IL-12, 및 IL18, 그리고 이들의 어느 조합으로 활성화된 것을 특징으로 하는 조성물.
  46. 제44항 및 제45항에 있어서, 상기 조성물이 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포) 및/또는 CD3+ T 세포를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 NK 세포가 말초혈액 NK 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포), CD3+ T 세포가 말초혈액 감마 델타 T 세포(GDT 세포), 불변 자연살해 T 세포(iNKT 세포), 및 CD3+ T 세포인 것을 특징으로 하는 조성물.
  49. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증 환자를 치료하기 위해 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된 것을 특징으로 하는 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
  50. HIV, 암, 바이러스 감염증, 또는 세균 감염증 환자를 치료하기 위한 약을 조제하기 위해 사이토카인 및 선택적으로 가용성 섬유모세포 성장인자 수용체 1(sFGFR1)로 활성화된 것을 특징으로 하는 활성화 자연살해(NK) 세포를 포함하는 림프구성 세포 조성물.
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