JP2022512593A - 抗原提示細胞の機能を増強するための生体分子の細胞内送達 - Google Patents
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Abstract
本発明は、例えば、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年１０月４日に出願された米国仮出願第６２／７４１，４９１号、２０１９年１月１８日に出願された米国仮出願第６２／７９４，５１８号、および２０１９年９月１１日に出願された米国仮出願第６２／８９８，９３５号に対する優先権を主張する。そのそれぞれの内容は、参照によりその全体として本明細書に組み込まれる。
本出願は、２０１９年１０月４日に出願された米国仮出願第６２／７４１，４９１号、２０１９年１月１８日に出願された米国仮出願第６２／７９４，５１８号、および２０１９年９月１１日に出願された米国仮出願第６２／８９８，９３５号に対する優先権を主張する。そのそれぞれの内容は、参照によりその全体として本明細書に組み込まれる。
本開示は、一般的に、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む抗原提示細胞、このような増強された抗原提示細胞を製造する方法、ならびに個体における免疫応答をモジュレートするためなどに、このような増強された抗原提示細胞を使用する方法に関する。
免疫療法は、受動的または能動的という２つの主要なタイプの介入に分割することができる。受動的プロトコールには、予め活性化されたおよび／もしくは操作された細胞、疾患特異的治療抗体、ならびに／またはサイトカインの投与が含まれる。能動的免疫療法戦略は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫系エフェクター機能を刺激することを対象とする。いくつかの現在の能動的プロトコールには、疾患関連ペプチド、ライセート、または同種異系全細胞によるワクチン接種戦略、腫瘍抗原送達のためのビヒクルとしての自己ＤＣの注入、および免疫チェックポイントモジュレーターの注入が含まれる。Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）を参照されたい。
特許出願および特許公報を含む本明細書で引用されるすべての参照文献は、参照によりその全体として組み込まれる。
特許出願および特許公報を含む本明細書で引用されるすべての参照文献は、参照によりその全体として組み込まれる。
Ｐａｐａｉｏａｎｎｏｕ， Ｎｉｋｏｓ Ｅ．， ｅｔ ａｌ． Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ４．１４ （２０１６）
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞を侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の免疫活性をモジュレートするための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロンベータの発現を下方調節する。一部の実施形態では、インターフェロンベータの発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の生存能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、セルピンの発現を上方調節する。一部の実施形態では、セルピンの発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）形成を促進するための方法であって、ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ｐＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２の発現を上方調節する。一部の実施形態では、Ｅ２－２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
一部の態様では、本発明は、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害するための方法であって、
ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含む遺伝子編集複合体である。
上記態様の一部の実施形態では、抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法によって、抗原提示細胞に送達される。
上記態様および実施形態の一部の実施形態では、抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法によって、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。
上記態様の一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径より小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約６０％である。
一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原は疾患関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、抗原提示細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団中にある。一部の実施形態では、細胞の混合集団は、ＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび／または樹状細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、抗原を提示するように操作されている。
上記態様および実施形態の一部の実施形態では、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと含む、方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
上記態様および実施形態の一部の実施形態では、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、および／またはＤＣ形成を促進する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。
一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径より小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約６０％である。
一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原は疾患関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の態様では、本発明は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製される、改変された抗原提示細胞を提供する。一部の態様では、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製される、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを提供する。
一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、抗原提示細胞が本明細書に記載の方法のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される、方法を提供する。一部の態様では、本発明は、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、樹状細胞を個体に投与するステップを含み、樹状細胞が本明細書に記載の方法のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される、方法を提供する。
抗原提示細胞（ＡＰＣ）は、ＣＴＬの内因性活性化を誘導する際に重要な役割を果たす。この研究では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するＣｅｌｌＳｑｕｅｅｚｅ（登録商標）プラットフォームのインプリメンテーションについて説明される。がんおよび感染性疾患を含む様々な兆候に対する免疫活性をモジュレートするために、操作された抗原提示細胞を使用することができる。抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の効率的なサイトゾル送達を可能にすることによって、このプラットフォームは、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する能力を実証した。一部の実施形態では、抗原提示細胞の増強された生存能および／または機能としては、以下に限定されないが、増加した持続性、循環時間またはｉｎ ｖｉｖｏでの寿命が挙げられる。
本出願は、一部の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法を提供する。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞を、抗原提示細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏでの維持および／または機能をモジュレートするさらなる薬剤とさらに接触させる。
他の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中の抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原の生存能および／または機能を増強する薬剤が通過するのに十分大きなインプット抗原提示細胞を摂動させて、摂動したインプット抗原提示細胞を形成するステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原の生存能および／または機能を増強する薬剤と、抗原および薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。
さらに他の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと、ｃ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップとを含む、方法が提供される。
一般的技法
一般的技法
本明細書に記載のまたは本明細書において言及される技法および手順は、概して、よく理解されており、当業者によって、例えば、以下に記載の幅広く利用される方法論などの従来の方法論を使用して一般的に用いられる：Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， ４ｔｈ ｅｄ．， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ， Ｎ．Ｙ．， ２０１２）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ｆ．Ｍ． Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．， ２００３）；ｔｈｅ ｓｅｒｉｅｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ （Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．）； ＰＣＲ ２： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｍ．Ｊ． ＭａｃＰｈｅｒｓｏｎ， Ｂ．Ｄ． Ｈａｍｅｓ ａｎｄ Ｇ．Ｒ． Ｔａｙｌｏｒ ｅｄｓ．， １９９５）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， ｅｄｓ．， １９８８）；Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌｓ： Ａ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉａｌｉｚｅｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ （Ｒ．Ｉ． Ｆｒｅｓｈｎｅｙ， ６ｔｈ ｅｄ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２０１０）；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ （Ｍ．Ｊ． Ｇａｉｔ， ｅｄ．， １９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ； Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｎｏｔｅｂｏｏｋ （Ｊ．Ｅ． Ｃｅｌｌｉｓ， ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ （Ｊ．Ｐ． Ｍａｔｈｅｒ ａｎｄ Ｐ．Ｅ． Ｒｏｂｅｒｔｓ， Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ， １９９８）；Ｃｅｌｌ ａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ： Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ （Ａ． Ｄｏｙｌｅ， Ｊ．Ｂ． Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ， ａｎｄ Ｄ．Ｇ． Ｎｅｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， １９９３－８）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｄ．Ｍ． Ｗｅｉｒ ａｎｄ Ｃ．Ｃ． Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ， ｅｄｓ．， １９９６）；Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｆｅｒ Ｖｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｃｅｌｌｓ （Ｊ．Ｍ． Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｍ．Ｐ． Ｃａｌｏｓ， ｅｄｓ．， １９８７）；ＰＣＲ： Ｔｈｅ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ， （Ｍｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ （Ｊ．Ｅ． Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， １９９１）；Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ （Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ． Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， ２００２）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ （Ｃ．Ａ． Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．， ２００４）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｐ． Ｆｉｎｃｈ， １９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｄ． Ｃａｔｔｙ．， ｅｄ．， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， １９８８－１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ （Ｐ． Ｓｈｅｐｈｅｒｄ ａｎｄ Ｃ． Ｄｅａｎ， ｅｄｓ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， ２０００）；Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｅ． Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄ． Ｌａｎｅ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ， １９９９）；Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ （Ｍ． Ｚａｎｅｔｔｉ ａｎｄ Ｊ． Ｄ． Ｃａｐｒａ， ｅｄｓ．， Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ， １９９５）；およびＣａｎｃｅｒ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ （Ｖ．Ｔ． ＤｅＶｉｔａ ｅｔ ａｌ．， ｅｄｓ．， Ｊ．Ｂ． Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏｍｐａｎｙ， ２０１１）。
定義
定義
本明細書を解釈するために、以下の定義が適用され、適切な場合はいつでも、単数で使用される用語は複数も含み、逆もまた同様である。以下に示される定義のいずれかが参照により本明細書に組み込まれる文書のいずれかと矛盾する場合には、下記の定義が優先されるものとする。
本明細書で使用される場合、単数形「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、および「その（ｔｈｅ）」は、別段に示されていなければ、複数の参照物も含む。
本明細書に記載の発明の態様および実施形態は、態様および実施形態を「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「からなること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」、および「から本質的になること（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」を含むことが理解される。
用語「約」は、本明細書で使用される場合、本技術分野において当業者に容易に知られる各値に対する通常の誤差範囲を指す。本明細書において、値またはパラメーターについての「約（ａｂｏｕｔ）」への言及は、その値またはパラメーター自体を対象とする実施形態を含む（および記載する）。
用語「抗原提示細胞」または「ＡＰＣ」は、本明細書で使用される場合、抗原特異的Ｔ細胞応答を誘発することができるＭＨＣ複合体上に抗原を提示する細胞を指す。抗原提示細胞は、古典的な抗原提示細胞であってもよいが、一部の実施形態では、抗原提示細胞は、抗原を提示するように操作された任意の細胞であってもよい。非限定的な例では、ＭＨＣ複合体上に抗原を提示するように操作されたＴ細胞は、抗原提示細胞である。
一部の実施形態では、抗原提示細胞は、個体から単離される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、個体に対して自己であり、ここで、細胞は特定の個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、かつ特定の個体に戻される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は同種異系であり、ここで、集団は１つの個体に由来し、本明細書に記載の方法のいずれかによって操作され、かつ第２の個体に投与される。
本明細書で使用される場合、「末梢血単核細胞」または「ＰＢＭＣ」は、丸い核を有する血液細胞の不均一な集団を指す。ＰＢＭＣの集団において見出すことができる細胞の例としては、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび樹状細胞などのリンパ球が挙げられる。「ＰＢＭＣの集団」または「複数のＰＢＭＣ」は、本明細書で使用される場合、少なくとも２つのタイプの血液細胞の細胞を含むＰＢＭＣの調製物を指す。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの２つまたはそれより多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの３つまたはそれより多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの４つまたはそれより多くを含む。一部の実施形態では、複数のＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび樹状細胞を含む。
ＰＢＭＣは、当技術分野で公知の手段によって単離することができる。例えば、ＰＢＭＣは、他の血液細胞と比較したＰＢＭＣの密度に基づいて、個体の末梢血に由来してもよい。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｆｉｃｏｌｌ（例えば、フィコールグラジエント）を使用する個体の末梢血に由来する。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、ＥＬＵＴＲＡ（登録商標）細胞分離システムを使用する個体の末梢血に由来する。
用語「小孔」は、本明細書で使用される場合、限定されないが、物質内のホール、裂孔、腔、穴、割れ目、溝、または穿孔を含む開口を指す。一部の例では（示される場合）、この用語は、本開示の表面内の小孔を指す。他の例では（示される場合）、小孔は、細胞膜における小孔を指してもよい。
用語「膜」は、本明細書で使用される場合、小孔を含有する選択的障壁またはシートを指す。この用語は、境界または内層として作用する柔軟なシート様構造を含む。一部の例では、この用語は、小孔を含有する表面またはフィルターを指す。この用語は、用語「細胞膜」とは別のものである。
用語「フィルター」は、本明細書で使用される場合、小孔への選択的通過を可能にする多孔体を指す。一部の例では、この用語は、小孔を含有する表面または膜を指す。
用語「不均一な」は、本明細書で使用される場合、構造または組成において、混合されているかまたは均一ではないものを指す。一部の例では、この用語は、所与の表面内に様々なサイズ、形状または分布を有する小孔を指す。
用語「均一な」は、本明細書で使用される場合、全体として、構造または組成が一致するかまたは均一であるものを指す。一部の例では、この用語は、所与の表面内に一致したサイズ、形状、または分布を有する小孔を指す。
用語「異種の」は、それがコード配列および制御配列などの核酸配列に関する場合、通常は一緒に接合しない配列、および／または通常は特定の細胞と会合しない配列を示す。よって、核酸構築物またはベクターの「異種」領域は、天然では他の分子と会合して見られない別の核酸分子内またはそれに結合した核酸のセグメントである。例えば、核酸構築物の異種領域は、天然ではコード配列と会合して見られない配列に隣接するコード配列を含み得る。異種コード配列の別の例は、コード配列自体が天然では見られない構築物（例えば、ネイティブ遺伝子と異なるコドンを有する合成配列）である。同様に、細胞内に通常存在しない構築物で形質転換した細胞は、本発明のための異種であると考えられる。対立遺伝子変異または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ＤＮＡを生じない。
用語「異種の」は、それがペプチド配列およびポリペプチド配列などのアミノ酸配列に関する場合、通常は一緒に接合しない、および／または通常は特定の細胞と会合しない配列を示す。よって、ペプチド配列の「異種」領域は、天然では他の分子と会合して見られない別のアミノ酸分子内またはそれに結合したアミノ酸のセグメントである。例えば、ペプチド構築物の異種領域は、天然ではペプチドのアミノ酸配列と会合して見られない配列に隣接したペプチドのアミノ酸配列を含み得る。異種ペプチド配列の別の例は、ペプチド配列それ自体が天然に見られない構築物（例えば、ネイティブ遺伝子からコードされたものと異なるアミノ酸を有する合成配列）である。同様に、通常は細胞内に存在しないアミノ酸構築物を発現するベクターで形質転換された細胞は、本発明のための異種であると考えられる。対立遺伝子変異または天然に存在する変異事象は、本明細書で使用される場合、異種ペプチドを生じない。
用語「外因性」は、細胞に関連して、抗原またはアジュバントなどの薬剤に言及して使用される場合、細胞の外側から送達される（すなわち、細胞の外側に由来する）薬剤を指す。細胞は、既に存在する薬剤を有していても有していなくてもよく、外因性薬剤が送達された後に薬剤を生成しても生成しなくてもよい。
本明細書で使用される場合、用語「阻害する」は、特定の標的の存在、またはその活性を遮断する、低減する、排除する、または他の形でそれと拮抗する作用を指し得る。阻害は、部分的阻害または完全阻害を指し得る。例えば、免疫応答を阻害することは、免疫応答の遮断、低減、排除、または任意の他の拮抗を導く任意の作用を指し得る。他の例では、核酸発現の阻害としては、以下に限定されないが、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などを挙げることができる。
本明細書で使用される場合、用語「抑制する」は、特定の標的の存在、またはその活性を低下させる、低減する、妨害する、制限する、減弱する、または他の形で減少させる作用を指し得る。一部の例では、用語「抑制する」は、一般的免疫応答を低下させる、低減する、妨害する、制限する、減弱させる、または他の形で減少させる作用を指し得る。抑制は、部分的抑制または完全抑制を指し得る。例えば、免疫応答を抑制することは、免疫応答の低下、低減、妨害、制限、減弱、または他の形で減少を導く任意の作用を指し得る。他の例では、核酸発現の抑制としては、以下に限定されないが、核酸の転写の低減、ｍＲＮＡ存在量の低減（例えば、ｍＲＮＡ転写のサイレンシング）、ｍＲＮＡの分解、ｍＲＮＡ翻訳の阻害などを挙げることができる。
本明細書で使用される場合、用語「増強する」は、特定の標的の存在、またはその活性を改善する、ブーストする、強化する、または他の形で増加させる作用を指し得る。一部の例では、用語「増強する」は、一般的免疫応答を改善する、ブーストする、強化する、または他の形で増加させる作用を指し得る。例えば、免疫応答を増強することは、免疫応答の改善、ブースト、強化、または他の形で増加を導く任意の作用を指し得る。他の例示的な例では、免疫応答を増強することは、免疫応答を改善する、ブーストする、強化する、または他の形で増加させる抗原および／またはアジュバントを用いることを指し得る。他の例では、核酸の発現を増強することとしては、以下に限定されないが、核酸の転写の増加、ｍＲＮＡ存在量の増加（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の低下、ｍＲＮＡ翻訳の増加などを挙げることができる。
本明細書で使用される場合、用語「モジュレートする」は、特定の標的の存在、またはその活性を変化させる、変更する、多様化する、または他の形で改変する作用を指し得る。例えば、免疫応答をモジュレートすることは、免疫応答の変化、変更、多様化、または他の形で改変を導く任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現をモジュレートすることとしては、以下に限定されないが、核酸の転写の変化、ｍＲＮＡ存在量の変化（例えば、ｍＲＮＡ転写の増加）、ｍＲＮＡの分解の対応する変化、ｍＲＮＡ翻訳の変化などを挙げることができる。
本明細書で使用される場合、用語「誘導する」は、結果を開始する、誘発する、刺激する、確立する、または他の形で創出する作用を指し得る。例えば、免疫応答を誘導することは、所望の免疫応答の開始、誘発、刺激、確立、または他の形で創出を導く任意の作用を指し得る。他の例では、核酸の発現を誘導することとしては、以下に限定されないが、核酸の転写の開始、ｍＲＮＡ翻訳の開始などを挙げることができる。
用語「相同な」は、本明細書で使用される場合、同じ生物に由来する分子を指す。一部の例では、この用語は、通常、所与の生物内に見られるかまたは発現される核酸またはタンパク質を指す。
用語「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、本明細書で使用される場合、任意の長さのヌクレオチドのポリマー形態、リボヌクレオチドまたはデオキシリボヌクレオチドを指す。よって、この用語としては、以下に限定されないが、一本鎖、二本鎖もしくは多重鎖のＤＮＡもしくはＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、またはプリンおよびピリミジン塩基を含むポリマー、または他の天然の、化学的もしくは生化学的に改変された、非天然の、もしくは誘導体化されたヌクレオチド塩基が挙げられる。ポリヌクレオチドの骨格は、糖およびリン酸基を含むか（典型的には、ＲＮＡまたはＤＮＡで見ることができるように）、または改変もしくは置換された糖もしくはリン酸基を含んでもよい。あるいは、ポリヌクレオチドの骨格は、ホスホロアミデートおよびホスホロチオエートなどの合成サブユニットのポリマーを含んでもよく、よって、オリゴデオキシヌクレオシドホスホロアミデート（Ｐ－ＮＨ２）または混成ホスホロアミデート－リン酸ジエステルオリゴマーであってもよい。さらに、二本鎖ポリヌクレオチドは、相補鎖を合成して、適切な条件下で鎖をアニーリングすること、または適切なプライマーと共にＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖をｄｅ ｎｏｖｏで合成することのいずれかによって、化学合成の一本鎖ポリヌクレオチド産物から得ることができる。
用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、アミノ酸残基のポリマーを指すために互換的に使用され、最小長に限定されない。アミノ酸残基のこのようなポリマーは、天然または非天然のアミノ酸残基を含有してもよく、以下に限定されないが、ペプチド、オリゴペプチド、アミノ酸残基の二量体、三量体、および多量体を含む。全長タンパク質とその断片の両方は、この定義に包含される。この用語は、ポリペプチドの発現後の改変、例えば、グリコシル化、シアル化、アセチル化、リン酸化なども含む。さらに、本発明の目的としては、「ポリペプチド」は、タンパク質が所望の活性を維持する限り、ネイティブ配列に対する、欠失、付加、および置換（一般的には、保存的性質を有するもの）などの改変を含むタンパク質を指す。これらの改変は、部位特異的変異誘発を介してなど、計画的であってもよく、または例えば、タンパク質を産生する宿主の変異もしくはＰＣＲ増幅によるエラーなど、偶発的であってもよい。
本明細書で使用される場合、用語「アジュバント」は、免疫応答をモジュレートするおよび／または発生させる物質を指す。一般的には、アジュバントは、抗原単独と比較して、抗原に対する免疫応答の増強をもたらす抗原と併せて投与される。様々なアジュバントが本明細書に記載されている。
用語「ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド」および「ＣｐＧ ＯＤＮ」は、ホスフェートによって分離されたシトシンとグアニンのジヌクレオチドを含有するＤＮＡ分子を指す（本明細書において、「ＣｐＧ」ジヌクレオチド、または「ＣｐＧ」とも称される）。本開示のＣｐＧ ＯＤＮは、少なくとも１つのメチル化されていないＣｐＧジヌクレオチドを含有する。すなわち、ＣｐＧジヌクレオチドのシトシンはメチル化されていない（すなわち、５－メチルシトシンではない）。ＣｐＧ ＯＤＮは、部分的または完全なホスホロチオエート（ＰＳ）骨格を有してもよい。
本明細書で使用される場合、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子、および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の抗原結合部分または断片、すなわち、抗原に特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子を指す。用語抗体は、インタクトポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけではなく、その断片（例えば、ｄＡｂ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）、一本鎖（ｓｃＦｖ）または単一ドメイン抗体（ｓｄＡｂ）を包含する。典型的には、「抗原結合断片」は、目的の抗原の少なくとも１つのエピトープに結合する免疫グロブリン重鎖および／または軽鎖の少なくとも１つのＣＤＲを含有する。この点について、抗原結合断片は、抗原に結合する抗体由来の可変重鎖（ＶＨ）および可変軽鎖（ＶＬ）配列の１、２、３、４、５、または６つすべてのＣＤＲ、例えば、一般的には、ＶＨおよびＶＬを含有する抗体に対する６つのＣＤＲ（重鎖と軽鎖のそれぞれに対する「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」および「ＣＤＲ３」）、または単一の可変ドメインを含有する抗体に対する３つのＣＤＲを含んでもよい。抗体断片または抗原結合断片は、例えば、ラクダ化抗体（ＶＨＨ）、サメ抗体（ＶＮＡＲ）、ナノボディまたは操作されたＶＨもしくはＶＫドメインを含む、ＶＨのみを含有するかまたはＶＬのみを含有するものなどの単一ドメイン抗体を含む。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」または「薬理学的に適合する」によって、生物学的にまたはその他の点で望ましくなくはない材料が意味され、例えば、この材料は、望ましくない生物学的作用をほとんど引き起こさずにまたはそれが含有される組成物の他の構成成分のいずれとも有害に相互作用せずに、患者に投与される医薬組成物中に組み込むことができる。薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、毒性および製造試験の必要基準に適合し、かつ／または米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ． Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）によって作成された不活性成分ガイド（Ｉｎａｃｔｉｖｅ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ Ｇｕｉｄｅ）に収録されている。
本明細書に記載の構造的および機能的特徴のいずれかに関して、これらの特徴を決定する方法は当技術分野で公知である。
抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法
抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中の抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。
本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによる一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドである。一部の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、治療用タンパク質、抗体、融合タンパク質、抗原、合成タンパク質、レポーターマーカー、または選択可能なマーカーである。一部の実施形態では、タンパク質は、遺伝子編集タンパク質またはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、もしくはＣＲＥリコンビナーゼなどのヌクレアーゼである。一部の実施形態では、遺伝子編集タンパク質またはヌクレアーゼは、Ｃａｓ９である。さらなる実施形態では、薬剤は、相同組換えまたは相同組換え修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まないＣａｓ９を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質としては、限定されないが、抗体薬物コンジュゲートなどのキメラタンパク質薬物またはＯＳＴもしくはストレプトアビジンでタグ付けされたタンパク質などの組換え融合タンパク質を挙げることができる。一部の実施形態では、薬剤は転写因子である。一部の実施形態では、薬剤は核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は核酸である。例示的な核酸としては、限定されないが、組換え核酸、ＤＮＡ、組換えＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓａＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸に対して相同である。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸に対して異種である。一部の実施形態では、薬剤はプラスミドである。一部の実施形態では、薬剤は核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えまたは相同組換え修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、Ｃａｓ９およびガイドＲＮＡを含む。
本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによる一部の実施形態では、抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、ＰＢＭＣ内に含有される細胞の混合集団である。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は免疫活性をモジュレートする。さらなる実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、またはＩＬ－１５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、例えばＩＲＦ３またはＩＲＦ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）、例えばＴＬＲ－４のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）、例えばＴＬＲ－４および／またはＴＬＲ－９のうちの１つまたは複数の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ－Ｉ、ＡＩＭ２、ＬＲＲＦ１Ｐ１またはＮＬＰＲ３のうちの１つまたは複数の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示を増強する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、ＭＨＣ－Ｉおよび／またはＭＨＣ－ＩＩの発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を上方調節する。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示細胞の活性化を増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２５、ＫＬＲＧ１、ＣＤ８０、またはＣＤ８６のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示細胞のホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－３、またはＢｃｌ－ｘＬのうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は細胞の運命または表現型における変更を誘導する。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型の変更を誘導する薬剤は、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、Ｋｌｆ－４、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｌｉｎ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、またはＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。
本明細書に記載の方法のいずれかと組み合わせることができる一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞のリンパ節へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、または約１０００倍のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、または約１０００倍のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された生存能および／または機能を有する抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。いずれかの他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、内因性ヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変されたヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変された抗原提示細胞の膜に結合しているなど、膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩアンカーによって膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩ－アンカーシグナル配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメインおよびマウスＢ７－１の細胞質側末端（Ｂ７ＴＭ）を含む。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＩＬ－２Ｒα鎖（ＣＤ２５）に結合しないおよび／またはＩＬ－１５Ｒα（ＣＤ２１５）に結合しない。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの天然カウンターパートよりも高い親和性、例えば以下に限定されないが、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍またはそれより高い倍率で、天然カウンターパートよりも高い親和性で、ＩＬ－２Ｒβγｃに結合する。一部の実施形態では、改変されたアミノ酸配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型アミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約または９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、改変されたヌクレオチド配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型ヌクレオチド配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の模倣体を含み、模倣体は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のそれぞれの野生型配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示すヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２模倣体を含む。一部の実施形態では、薬剤は、Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ－２／１５（Ｎｅｏ２／１５）を含む。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞を侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された腫瘍ホーミングを有する抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／または負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の免疫活性をモジュレートするための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する。さらなる実施形態では、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞におけるホーミング受容体の発現を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、セルピンの発現を上方調節する。さらなる実施形態では、セルピンの発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、１つまたは複数のセルピンをコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、薬剤は、増強された抗原提示細胞のリンパ節へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞におけるホーミング受容体の発現を増強する薬剤は、ＣＣＬ２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＣＬ２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＣＬ２、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞におけるホーミング受容体の発現は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞におけるホーミング受容体の発現は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤は、ＣＣＬ２をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を増強する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示Ｔ細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の抗体またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、または約１０００分の１倍のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示Ｔ細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の抗体またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の機能は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の機能は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、または約１０００分の１倍のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。
ある特定の態様では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）形成を促進するための方法であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｅ２－２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣ形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｅ２－２の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、Ｅ２－２の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ形成を促進するための方法であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害するための方法であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１を標的化する１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、または約１０００分の１倍のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２分の１、約３分の１、約５分の１、約１０分の１、約５０分の１、約１００分の１、約５００分の１、または約１０００分の１のいずれか１つに低下する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強し、抗原提示細胞に送達される、２つまたはそれよりも多い薬剤を含む。さらなる実施形態では、上記改変された抗原提示細胞によれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する２つまたはそれより多い薬剤は、腫瘍ホーミング剤、抗アポトーシス剤、Ｔ細胞活性化剤、抗原プロセシング剤、免疫活性をモジュレートする薬剤、ホーミング受容体、またはＴ細胞の阻害を下方調節する薬剤のうちの１つまたは複数から選択される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、細胞の運命または細胞の表現型を変更する薬剤である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、体細胞リプログラミング因子である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、脱分化因子である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、分化転換因子（ｔｒａｎｓ－ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ）である。一部の実施形態では、細胞表現型を変更する薬剤は、分化因子である。さらなる実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８またはＬＩＮ２８Ｂのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、またはＨＯＸＡ９のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後にならびに／または抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む、方法によって、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、本明細書に記載されている抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強するいずれかの薬剤が、細胞を狭窄部に通すことによる以外の手段で細胞に送達されるか、または細胞外から細胞に送達される、方法を提供する。一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、本明細書に記載されている抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するいずれかの薬剤が、細胞を狭窄部に通すことによる以外の手段で細胞に送達されるか、または細胞外から細胞に送達され、抗原が、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって抗原提示細胞に送達される、方法を提供する。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、本明細書に記載されている抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するいずれかの薬剤が、細胞を狭窄部に通すことによる以外の手段で細胞に送達されるか、または細胞外から細胞に送達され、抗原提示細胞がアジュバントを含み、アジュバントが、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって抗原提示細胞に送達される、方法を提供する。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、本明細書に記載されている抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するいずれかの薬剤が、細胞を狭窄部に通すことによる以外の手段で細胞に送達されるか、または細胞外から細胞に送達され、抗原およびアジュバントが、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原およびアジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原およびアジュバントと、抗原およびアジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって抗原提示細胞に送達される、方法を提供する。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、抗原提示細胞が、抗原および／またはアジュバントを含み、薬剤が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原およびアジュバントと、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって抗原提示細胞に送達される、方法を提供する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、細胞を狭窄部に通すことによる以外の手段で細胞に送達されるか、または細胞外から細胞に送達される。
本明細書に記載の実施形態のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、抗原の生存能および／または機能を増強する抗原、アジュバントおよび／または薬剤は、インプット抗原提示細胞をエネルギー場に通すステップを含む方法において、抗原提示細胞中に送達される。一部の実施形態では、エネルギー場は、光学場、音場、磁場または電場のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、抗原の生存能および／または機能を増強する抗原、アジュバントおよび／または薬剤は、インプット抗原提示細胞を電場に通すステップを含む方法において、抗原提示細胞中に送達される。一部の実施形態では、電場は、約０．１ｋＶ／ｍから約１００ＭＶ／ｍの間、またはそれらの間の数のうちの任意の数もしくは範囲である。本明細書に記載の実施形態のいずれか１つに記載の一部の実施形態では、抗原の生存能および／または機能を増強する抗原、アジュバントおよび／または薬剤は、電気穿孔によって抗原提示細胞中に送達される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞に対して外因性であり、免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する。外因性抗原は、改変される細胞中に導入された抗原提示細胞の外側の供給源由来の１つまたは複数の抗原である。外因性抗原は、外因性抗原の導入前または後のいずれかに、抗原提示細胞中に存在することができ（すなわち、内因性供給源に由来して存在することもでき）、よって、抗原提示細胞によって産生され得る（例えば、抗原提示細胞のゲノムにコードされる）ような抗原を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は２つの抗原プールをさらに含み、第１のプールは抗原の内因性供給源を含み、第２のプールは、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入される抗原の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、個体における疾患細胞中で異所的に発現されるかまたは過剰発現され、改変された抗原提示細胞は、その個体に由来し、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入される、抗原、またはその中に含有される免疫原性エピトープの外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含むネオ抗原（例えば、変更された自己タンパク質またはその部分）であり、改変された抗原提示細胞は、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入されるネオエピトープを含む抗原、またはその断片の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞に対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原もしくは免疫原性エピトープ、および／またはアジュバントは、抗原提示細胞の表面に結合している。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、抗原は、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、アジュバントは、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号に開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、抗原は疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染している個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。よって、一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞中で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は抗原をさらに含み、抗原は免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成ロングペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、それが送達される細胞に対して異種性である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は抗原をさらに含み、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変された抗原提示細胞の個体への投与後に、複数の免疫原性エピトープはいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対しても、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度のアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞におけるアジュバントの濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞におけるアジュバントの濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における抗原の濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における抗原の濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭから約１０ｐＭの間、約１０ｐＭから約１００ｐＭの間、約１００ｐＭから約１ｎＭの間、約１ｎＭから約１０ｎＭの間、約１０ｎＭから約１００ｎＭの間、約１００ｎＭから約１μＭの間、約１μＭから約１０μＭの間、約１０μＭから約１００μＭの間、約１００μＭから約１ｍＭの間、または約１ｍＭから約１０ｍＭの間のいずれかである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１から約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１から約１０００：１の間、約１０００：１から約１００：１の間、約１００：１から約１０：１の間、約１０：１から約１：１の間、約１：１から約１：１０の間、約１：１０から約１：１００の間、約１：１００から約１：１０００の間、約１：１０００から約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１から約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１から約１０００：１の間、約１０００：１から約１００：１の間、約１００：１から約１０：１の間、約１０：１から約１：１の間、約１：１から約１：１０の間、約１：１０から約１：１００の間、約１：１００から約１：１０００の間、約１：１０００から約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ａ）改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ｂ）該薬剤と少なくとも別の薬剤、ｃ）該薬剤と抗原、ｄ）該薬剤とアジュバント、ならびに／またはｅ）該薬剤、抗原およびアジュバントを含む複合体を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる薬剤を含まない対応する改変された抗原提示細胞と比較して、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するさらなる薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、安定化剤または補因子である。一部の実施形態では、薬剤はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトのアルブミンである。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、二価の金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、同種異系の文脈で、改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始された自然免疫応答は、同種異系の文脈で、さらなる改変を含まない対応する改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始された自然免疫応答と比較して低減される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞が投与された個体における改変された抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、対応する改変されたＴ細胞が投与された個体におけるさらなる改変を含まない対応する改変されたＴ細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性と比較して増加する。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原およびアジュバントが通過するのに十分大きなインプット抗原提示細胞を摂動させて、摂動したインプット抗原提示細胞を形成するステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原およびアジュバントと、薬剤、抗原およびアジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原およびアジュバントを含む改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントの濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、薬剤の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原に対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。一部の実施形態では、薬剤の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントに対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。一部の実施形態では、抗原の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントに対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法は、インプット抗原提示細胞が通過する細胞変形狭窄部を用いるプロセスを含む。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径より小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有されている。マイクロ流体チャネルは、以下のマイクロ流体デバイスという表題の項に記載されたものなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有されていてもよい。よって、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞が通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製される、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、プロセスは、インプット抗原提示細胞を、本明細書に記載のマイクロ流体系のいずれかに含有される細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット抗原提示細胞が狭窄部を通過し、それによって、インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすように、インプット抗原提示細胞に適用される。
インプット抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むいくつかの供給源から得ることができる。一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび／または樹状細胞である。本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞系またはＢ細胞系などの、当技術分野において利用可能なＰＢＭＣサブタイプ集団の任意の数の細胞系を使用することができる。本発明の一部の実施形態では、ＰＢＭＣの様々なサブタイプ集団は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に公知の任意の数の技法を使用して、対象から採取した血液単位から得ることができる。一部の実施形態では、個体の循環血由来の細胞は、アフェレシスによって得られる。アフェレシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球、および血小板を含有する。一部の実施形態では、アフェレシスによって採取された細胞を洗浄し、血漿画分を除去し、次の処理ステップのために、適切な緩衝液または培地中に細胞を配置してもよい。一部の実施形態では、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠如し、マグネシウムを欠如してもよく、またはすべてではないにしても多くの二価のカチオンを欠如してもよい。当業者であれば、洗浄ステップが、当業者に公知の方法、例えば、製造業者の使用説明書に従って、半自動化された「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅ、またはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによって、達成され得ることを容易に認識するであろう。洗浄後に、Ｃａ２＋を含まないＰＢＳ、Ｍｇ２＋を含まないＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液を含むかもしくは含まない他の生理食塩水溶液などの、種々の生体適合性緩衝液中に、細胞を再懸濁させてもよい。あるいは、アフェレシス試料の望ましくない構成成分を除去し、細胞を培養培地中に直接再懸濁させてもよい。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）グラジエントによる遠心分離または向流遠心水簸によって、単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ＋Ｔ細胞、およびγδ－Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的亜集団は、ポジティブまたはネガティブ選択技法によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞のポジティブ選択に十分な期間の、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標） Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）にコンジュゲートしたビーズを用いるインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は、約３０分である。一部の実施形態では、期間は、３０分から３６時間またはそれより長い時間およびその間のすべての整数値の範囲である。一部の実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。一部の実施形態では、期間は、１０から２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は２４時間である。白血病を有する患者由来のＴ細胞の単離では、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用によって細胞収率が増加し得る。腫瘍組織または免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する際などの、他の細胞型と比較してＴ細胞の数が少ないいずれかの状況では、Ｔ細胞を単離するためにより長いインキュベーション時間が使用されてもよい。さらに、より長いインキュベーション時間の使用によって、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の捕捉効率が増加し得る。よって、Ｔ細胞がＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合することが可能となる時間を単に短くするかもしくは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加もしくは低下させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、プロセス中の培養開始時かまたは他の時点かにそれについてまたはそれと対抗するものについて優先的に選択され得る。さらに、ビーズ上または他の表面の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または低下させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時かまたは他の所望の時点かにそれについてまたはそれと対抗するものについて優先的に選択され得る。当業者であれば、本発明の文脈で複数回の選択も使用することができることを認識するであろう。一部の実施形態では、選択手順を実施し、活性化および増殖プロセスにおいて「未選択」細胞を使用する（ネガティブ選択）ことが望ましい場合がある。「未選択」細胞は、さらなる回数の選択に供されてもよい。
ネガティブ選択によるＴ細胞集団の富化は、ネガティブ選択細胞に対して固有の表面マーカーを対象とする抗体の組合せにより達成され得る。１つの方法は、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーを対象とするモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブ磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ１４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、典型的には、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化するかまたはポジティブ選択することが望ましい場合がある。あるいは、一部の実施形態では、調節性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５にコンジュゲートしたビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇される。
ポジティブまたはネガティブ選択による所望の細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は変更され得る。一部の実施形態では、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく低下させて（すなわち、細胞の濃度を増加させて）、細胞とビーズの最大接触を確保することが望ましい場合がある。例えば、一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約２０億個の細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１０億個の細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１億個より多くの細胞が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３０００万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞のいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約７５００万個、８０００万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞のいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１億２５００万個または約１億５０００万個の細胞の濃度が使用される。高濃度を使用することによって、細胞収率、細胞活性化、および細胞増殖の増加がもたらされ得る。さらに、高濃度の細胞の使用により、ＣＤ２８ネガティブＴ細胞などの、目的の標的抗原をわずかに発現し得る、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの、細胞のより効率的な捕捉が可能となる。このような細胞集団は治療的価値を有する場合があり、得ることが望ましい。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、通常は、より弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞は末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび／または樹状細胞である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、抗原を提示するように操作されている。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞活性化を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングおよびＭＨＣ－１への負荷を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、免疫活性をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、ホーミング受容体である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞の阻害を下方調節する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または単球もしくは単球－樹状細胞前駆体もしくはＤＣのＤＣ形成を促進もしくは阻害する薬剤が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性であり、免疫原性エピトープを含み、かつアジュバントは、細胞内に存在する。外因性抗原は、改変される細胞中に導入される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側の供給源由来の１つまたは複数の抗原である。外因性抗原は、外因性抗原の導入前または後のいずれかに、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣ中に存在することができ（すなわち、内因性供給源に由来して存在することもでき）、よって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣによって産生され得る（例えば、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのゲノムにコードされる）ような抗原を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、２つの抗原プールをさらに含み、第１のプールは抗原の内因性供給源を含み、第２のプールは、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入される抗原の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、個体における疾患細胞中で異所的に発現されるかまたは過剰発現され、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、その個体に由来し、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入される、抗原、またはその中に含有される免疫原性エピトープの外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含むネオ抗原（例えば、変更された自己タンパク質またはその部分）であり、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入されるネオエピトープを含む抗原、またはその断片の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原もしくは免疫原性エピトープ、および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号に開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染している個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。よって、一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞中で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは抗原をさらに含み、抗原は、免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成ロングペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは抗原をさらに含み、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの生存能および／または機能を増強するための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの個体への投与後に、複数の免疫原性エピトープはいずれも、他の免疫原性エピトープのすべてに対して、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能のモジュレートを増強するための方法は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する細胞変形狭窄部を用いるプロセスを含む。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径よりも小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有されている。マイクロ流体チャネルは、以下のマイクロ流体デバイスという表題の項に記載されたものなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有されていてもよい。よって、一部の実施形態では、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製される、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、プロセスは、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、本明細書に記載のマイクロ流体系のいずれかに含有される細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが狭窄部を通過し、それによって、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすように、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに適用される。
一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の方法のいずれかによって調製される、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが提供される。
一部の実施形態では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、抗原提示細胞が、本明細書に記載の方法のいずれかによるプロセスによって調製される、方法が提供される。
一部の実施形態では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、樹状細胞を個体に投与するステップを含み、樹状細胞が、本明細書に記載の方法のいずれかによるプロセスによって調製される、方法が提供される。
改変された抗原提示細胞
改変された抗原提示細胞
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中の抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原の生存能および／または機能を増強する薬剤が通過するのに十分大きなインプット抗原提示細胞を摂動させて、摂動したインプット抗原提示細胞を形成するステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原の生存能および／または機能を増強する薬剤と、抗原および薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。
本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによる一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドである。一部の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、治療用タンパク質、抗体、融合タンパク質、抗原、合成タンパク質、レポーターマーカー、または選択可能なマーカーである。一部の実施形態では、タンパク質は、遺伝子編集タンパク質またはジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼ、またはＣＲＥリコンビナーゼなどのヌクレアーゼである。一部の実施形態では、遺伝子編集タンパク質またはヌクレアーゼは、Ｃａｓ９である。さらなる実施形態では、薬剤は、相同組換えまたは相同組換え修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まないＣａｓ９を含む。一部の実施形態では、融合タンパク質としては、限定されないが、抗体薬物コンジュゲートなどのキメラタンパク質薬物またはＯＳＴもしくはストレプトアビジンでタグ付けされたタンパク質などの組換え融合タンパク質を挙げることができる。一部の実施形態では、薬剤は転写因子である。一部の実施形態では、薬剤は核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は核酸である。例示的な核酸としては、限定されないが、組換え核酸、ＤＮＡ、組換えＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓａＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡが挙げられる。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸に対して相同である。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸に対して異種性である。一部の実施形態では、薬剤はプラスミドである。一部の実施形態では、薬剤は、核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えまたは相同組換え修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、Ｃａｓ９およびガイドＲＮＡを含む。
本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによる一部の実施形態では、抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、ＰＢＭＣ内に含有される細胞の混合集団である。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は免疫活性をモジュレートする。さらなる実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、またはＩＬ－１５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）、例えばＩＲＦ３またはＩＲＦ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）、例えばＴＬＲ－４のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、トール様受容体（ＴＬＲ）、例えばＴＬＲ－４および／またはＴＬＲ－９のうちの１つまたは複数の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ－Ｉ、ＡＩＭ２、ＬＲＲＦ１Ｐ１またはＮＬＰＲ３のうちの１つまたは複数の発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示を増強する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、ＭＨＣ－Ｉおよび／またはＭＨＣ－ＩＩの発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を上方調節する。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示細胞の活性化を増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２５、ＫＬＲＧ１、ＣＤ８０、またはＣＤ８６のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗原提示細胞のホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－３、またはＢｃｌ－ｘＬのうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、増強された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞はＰＢＭＣであり、薬剤は細胞の運命または表現型における変更を誘導する。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型の変更を誘導する薬剤は、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、Ｋｌｆ－４、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｌｉｎ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、またはＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸はｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えまたは相同組換え修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。
本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによる一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞のリンパ節へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸はｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、または約１０００倍のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む改変された抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む改変された抗原提示細胞のＴ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、または約１０００倍のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された生存能および／または機能を有する抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。いずれかの他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、内因性ヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変されたヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変された抗原提示細胞の膜に結合しているなど、膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩアンカーによって膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩ－アンカーシグナル配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメインおよびマウスＢ７－１の細胞質側末端（Ｂ７ＴＭ）を含む。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＩＬ－２Ｒα鎖（ＣＤ２５）に結合しないおよび／またはＩＬ－１５Ｒα（ＣＤ２１５）に結合しない。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの天然カウンターパートよりも高い親和性、例えば以下に限定されないが、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍またはそれより高い倍率で、天然カウンターパートよりも高い親和性で、ＩＬ－２Ｒβγｃに結合する。一部の実施形態では、改変されたアミノ酸配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型アミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、改変されたヌクレオチド配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型ヌクレオチド配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の模倣体を含み、模倣体は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のそれぞれの野生型配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示すヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８もしくはＩＬ－２１、またはＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８もしくはＩＬ－２１のうちの１つもしくは複数の模倣体のうちの１つまたは複数は、各野生型カウンターパートと比較して、構造上の改変を示す。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２模倣体を含む。一部の実施形態では、薬剤は、Ｎｅｏｌｅｕｋｉｎ－２／１５（Ｎｅｏ－２／１５）を含む。
ある特定の態様では、腫瘍ホーミングを増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗アポトーシス剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原プロセシングを増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／または負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞における抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、免疫活性をモジュレートする薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロンおよびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する。さらなる実施形態では、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、核酸－タンパク質複合体、または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞におけるホーミング受容体の発現を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２、またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増強される。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、セルピンの発現を上方調節する。さらなる実施形態では、セルピンの発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、１つまたは複数のセルピンをコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤は、ＣＣＬ２をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞のホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、Ｔ細胞を活性化する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、Ｔ細胞を活性化する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を増強する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、Ｔ細胞を活性化する薬剤を含む改変された抗原提示Ｔ細胞であって、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞などの改変された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤を含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の抗体またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞によるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。
ある特定の態様では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤を含む改変された抗原提示Ｔ細胞であって、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞などの改変された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示Ｔ細胞が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡ ＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する１つまたは複数の抗体またはその断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞によって誘導されるＴ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。
ある特定の態様では、ＤＣの形成を促進する薬剤を含む改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が提供される。一部の実施形態では、ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）の形成を促進する薬剤を含む改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｅ２－２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
ある特定の態様では、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤を含む改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞であって、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ ＤＣ形成は、薬剤を含まない各単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤を含む改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞であって、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
ある特定の態様では、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤を含む改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞であって、ａ）単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強し、抗原提示細胞に送達される、２つまたはそれよりも多い薬剤を含む。さらなる実施形態では、上記改変された抗原提示細胞によれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する２つまたはそれより多い薬剤は、腫瘍ホーミング剤、抗アポトーシス剤、Ｔ細胞活性化剤、抗原プロセシング剤、免疫活性をモジュレートする薬剤、ホーミング受容体、またはＴ細胞の阻害を下方調節する薬剤のうちの１つまたは複数から選択される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、細胞の運命または細胞の表現型を変更する薬剤である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、体細胞リプログラミング因子である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、脱分化因子である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、分化転換因子である。一部の実施形態では、細胞表現型を変更する薬剤は、分化因子である。さらなる実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８またはＬＩＮ２８Ｂのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、またはＨＯＸＡ９のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または表現型を変更する薬剤は、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞の運命または細胞の表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数をコードする１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦ、またはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍、またはそれより高い倍率のいずれか１つに増加する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後にならびに／または抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、抗原提示細胞に送達される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞に対して外因性であり、免疫原性エピトープを含み、アジュバントは細胞内に存在する。外因性抗原は、改変される細胞中に導入された抗原提示細胞の外側の供給源由来の１つまたは複数の抗原である。外因性抗原は、外因性抗原の導入前または後のいずれかに、抗原提示細胞中に存在することができ（すなわち、内因性供給源に由来して存在することもでき）、よって、抗原提示細胞によって産生され得る（例えば、抗原提示細胞のゲノムにコードされる）ような抗原を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は２つの抗原プールをさらに含み、第１のプールは抗原の内因性供給源を含み、第２のプールは、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入される抗原の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、個体における疾患細胞中で異所的に発現されるかまたは過剰発現され、改変された抗原提示細胞は、その個体に由来し、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入される、抗原、またはその中に含有される免疫原性エピトープの外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含むネオ抗原（例えば、変更された自己タンパク質またはその部分）であり、改変された抗原提示細胞は、改変される抗原提示細胞の外側で産生され、その中に導入されるネオエピトープを含む抗原、またはその断片の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞に対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変されたＴ細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原もしくは免疫原性エピトープ、および／またはアジュバントは、改変されたＴ細胞の表面に結合している。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、抗原は、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、アジュバントは、改変された抗原提示細胞のマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞はＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージまたは樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号に開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、抗原は疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染している個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。よって、一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞中で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は抗原をさらに含み、抗原は、免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成ロングペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は抗原をさらに含み、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変された抗原提示細胞の個体への投与後に、複数の免疫原性エピトープはいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対しても、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約１ｐＭから約１０ｍＭの間の濃度のアジュバントを含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度の抗原を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、約０．１μＭから約１０ｍＭの間の濃度のアジュバントを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞におけるアジュバントの濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞におけるアジュバントの濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における抗原の濃度は、約１ｐＭ未満、約１０ｐＭ未満、約１００ｐＭ未満、約１ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、約１００ｎＭ未満、約１μＭ未満、約１０μＭ未満、約１００μＭ未満、約１ｍＭ未満または約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における抗原の濃度は、約１０ｍＭを超える。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞における改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭから約１０ｐＭの間、約１０ｐＭから約１００ｐＭの間、約１００ｐＭから約１ｎＭの間、約１ｎＭから約１０ｎＭの間、約１０ｎＭから約１００ｎＭの間、約１００ｎＭから約１μＭの間、約１μＭから約１０μＭの間、約１０μＭから約１００μＭの間、約１００μＭから約１ｍＭの間、または１ｍＭから約１０ｍＭの間のいずれかである。
一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１から約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞における抗原に対するモル比は、約１００００：１から約１０００：１の間、約１０００：１から約１００：１の間、約１００：１から約１０：１の間、約１０：１から約１：１の間、約１：１から約１：１０の間、約１：１０から約１：１００の間、約１：１００から約１：１０００の間、約１：１０００から約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１から約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００、または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞におけるアジュバントに対するモル比は、約１００００：１から約１０００：１の間、約１０００：１から約１００：１の間、約１００：１から約１０：１の間、約１０：１から約１：１の間、約１：１から約１：１０の間、約１：１０から約１：１００の間、約１：１００から約１：１０００の間、約１：１０００から約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ａ）改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、ｂ）該薬剤と少なくとも別の薬剤、ｃ）該薬剤と抗原、ｄ）該薬剤とアジュバント、および／またはｅ）該薬剤と抗原とアジュバントを含む複合体を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる薬剤を含まない対応する改変された抗原提示細胞と比較して、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するさらなる薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、安定化剤または補因子である。一部の実施形態では、薬剤はアルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシ、またはヒトのアルブミンである。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、二価の金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミン、またはＥＤＴＡである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩ発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、同種異系の文脈で、改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始された自然免疫応答は、同種異系の文脈で、さらなる改変を含まない対応する改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始された自然免疫応答と比較して低減される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞が投与された個体における改変された抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、改変されたＴ細胞が投与された個体における、さらなる改変を含まない対応する改変されたＴ細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性と比較して、増加する。
ある特定の態様では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原およびアジュバントを含む改変された抗原提示細胞であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原ならびにアジュバントが通過するのに十分大きなインプット抗原提示細胞を摂動させて、摂動したインプット抗原提示細胞を形成するステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原ならびにアジュバントと、抗原およびアジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原ならびにアジュバントを含む改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスによって調製される、改変された抗原提示細胞が提供される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントの濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントの濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、薬剤の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートした抗原に対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。一部の実施形態では、薬剤の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントに対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。一部の実施形態では、抗原の摂動したインプット抗原提示細胞とインキュベートしたアジュバントに対する比は、約１００００：１から約１：１００００の間である。
本明細書に記載の改変された抗原提示細胞は、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞が通過する細胞変形狭窄部を用いるプロセスによって調製される。一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径より小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有されている。マイクロ流体チャネルは、以下のマイクロ流体デバイスという表題の項に記載されたものなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有されていてもよい。よって、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞が通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製される本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、このプロセスは、インプット抗原提示細胞を、本明細書に記載のマイクロ流体系のいずれかに含有される細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット抗原提示細胞が狭窄部を通過し、それによって、インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすように、インプット抗原提示細胞に適用される。
インプット抗原提示細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織、および腫瘍を含むいくつかの供給源から得ることができる。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球である。本発明の一部の実施形態では、Ｔ細胞系またはＢ細胞系などの、当技術分野において利用可能なＰＢＭＣサブタイプ集団の任意の数の細胞系を使用することができる。本発明の一部の実施形態では、ＰＢＭＣの様々なサブタイプ集団を、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に公知の任意の数の技法を使用して、対象から採取した血液単位から得ることができる。一部の実施形態では、個体の循環血由来の細胞は、アフェレシスによって得られる。アフェレシス産物は、典型的には、Ｔ細胞、単球、顆粒球、Ｂ細胞、他の有核白血球を含むリンパ球、赤血球、および血小板を含有する。一部の実施形態では、アフェレシスによって採取された細胞を洗浄し、血漿画分を除去し、次の処理ステップのために、適切な緩衝液または培地中に細胞を配置してもよい。一部の実施形態では、細胞をリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で洗浄する。一部の実施形態では、洗浄溶液はカルシウムを欠如し、マグネシウムを欠如してもよく、またはすべてではないにしても多くの二価のカチオンを欠如してもよい。当業者であれば、洗浄ステップが、当業者に公知の方法、例えば、製造業者の使用説明書に従って、半自動化された「フロースルー」遠心分離機（例えば、Ｃｏｂｅ ２９９１細胞プロセッサー、Ｂａｘｔｅｒ ＣｙｔｏＭａｔｅまたはＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｅｌｌ Ｓａｖｅｒ ５）を使用することによって、達成され得ることを容易に認識するであろう。洗浄後に、Ｃａ２＋を含まないＰＢＳ、Ｍｇ２＋を含まないＰＢＳ、ＰｌａｓｍａＬｙｔｅ Ａ、または緩衝液を含むかもしくは含まない他の生理食塩水溶液などの、種々の生体適合性緩衝液中に、細胞を再懸濁させてもよい。あるいは、アフェレシス試料の望ましくない構成成分を除去し、細胞を培養培地中に直接再懸濁させてもよい。
一部の実施形態では、Ｔ細胞は、赤血球を溶解し、例えば、ＰＥＲＣＯＬＬ（商標）グラジエントによる遠心分離または向流遠心水簸によって、単球を枯渇させることによって、末梢血リンパ球から単離される。ＣＤ３＋、ＣＤ２８＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ４５ＲＡ＋、ＣＤ４５ＲＯ＋ Ｔ細胞、およびγδ－Ｔ細胞などのＴ細胞の特異的亜集団は、ポジティブまたはネガティブ選択技法によってさらに単離され得る。例えば、一部の実施形態では、Ｔ細胞は、所望のＴ細胞のポジティブ選択に十分な期間の、ＤＹＮＡＢＥＡＤＳ（登録商標） Ｍ－４５０ ＣＤ３／ＣＤ２８ Ｔなどの抗ＣＤ３／抗ＣＤ２８（すなわち、３×２８）にコンジュゲートしたビーズを用いるインキュベーションによって単離される。一部の実施形態では、期間は、約３０分である。一部の実施形態では、期間は、３０分から３６時間またはそれより長い時間およびその間のすべての整数値の範囲である。一部の実施形態では、期間は、少なくとも１、２、３、４、５、または６時間である。一部の実施形態では、期間は、１０から２４時間である。一部の実施形態では、インキュベーション期間は２４時間である。白血病を有する患者由来のＴ細胞の単離では、２４時間などのより長いインキュベーション時間の使用によって細胞収率が増加し得る。腫瘍組織または免疫無防備状態の個体から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離する際などの、他の細胞型と比較してＴ細胞の数が少ないいずれかの状況では、Ｔ細胞を単離するためにより長いインキュベーション時間が使用されてもよい。さらに、より長いインキュベーション時間の使用によって、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の捕捉効率が増加し得る。よって、Ｔ細胞がＣＤ３／ＣＤ２８ビーズに結合することが可能となる時間を単に短くするかもしくは長くすることによって、および／またはビーズのＴ細胞に対する比率を増加もしくは低下させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、プロセス中の培養開始時かまたは他の時点かにそれについてまたはそれと対抗するものについて優先的に選択され得る。さらに、ビーズ上または他の表面の抗ＣＤ３および／または抗ＣＤ２８抗体の比率を増加または低下させることによって、Ｔ細胞の亜集団は、培養開始時かまたは他の所望の時点かにそれについてまたはそれと対抗するものについて優先的に選択され得る。当業者であれば、本発明の文脈で複数回の選択も使用することができることを認識するであろう。一部の実施形態では、選択手順を実施し、活性化および増殖プロセス（ネガティブ選択）において「未選択」細胞を使用することが望ましい場合がある。「未選択」細胞は、さらなる回数の選択に供されてもよい。
ネガティブ選択によるＴ細胞集団の富化は、ネガティブ選択細胞に対して固有の表面マーカーを対象とする抗体の組合せにより達成され得る。１つの方法は、ネガティブ選択された細胞上に存在する細胞表面マーカーを対象とするモノクローナル抗体のカクテルを使用するネガティブ磁気免疫付着またはフローサイトメトリーによる細胞選別および／または選択である。例えば、ネガティブ選択によってＣＤ４＋細胞を富化するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、ＣＤ １４、ＣＤ２０、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ １６、ＨＬＡ－ＤＲ、およびＣＤ８に対する抗体を含む。一部の実施形態では、典型的には、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＣＤ６２Ｌｈｉ、ＧＩＴＲ＋、およびＦｏｘＰ３＋を発現する調節性Ｔ細胞を富化するかまたはポジティブ選択することが望ましい場合がある。あるいは、一部の実施形態では、調節性Ｔ細胞は、抗ＣＤ２５にコンジュゲートしたビーズまたは他の類似の選択方法によって枯渇される。
ポジティブまたはネガティブ選択による所望の細胞集団の単離のために、細胞および表面（例えば、ビーズなどの粒子）の濃度は変更され得る。一部の実施形態では、ビーズと細胞が一緒に混合される体積を著しく低下させて（すなわち、細胞の濃度を増加させて）、細胞とビーズの最大接触を確保することが望ましい場合がある。例えば、一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約２０億個の細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１０億個の細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１億個より多くの細胞が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１０００万個、１５００万個、２０００万個、２５００万個、３０００万個、３５００万個、４０００万個、４５００万個、または５０００万個の細胞のいずれかの濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約７５００万個、８０００万個、８５００万個、９０００万個、９５００万個、または１億個の細胞のいずれかの細胞の濃度が使用される。一部の実施形態では、１ｍＬ当たり約１億２５００万個または約１億５０００万個の細胞の濃度が使用される。高濃度を使用することによって、細胞収率、細胞活性化、および細胞増殖の増加がもたらされ得る。さらに、高濃度の細胞の使用により、ＣＤ２８ネガティブＴ細胞などの、目的の標的抗原をわずかに発現し得る、または多くの腫瘍細胞が存在する試料（すなわち、白血病血液、腫瘍組織など）からの、細胞のより効率的な捕捉が可能となる。このような細胞集団は治療的価値を有する場合があり、得ることが望ましい。例えば、高濃度の細胞を使用することにより、通常は、より弱いＣＤ２８発現を有するＣＤ８＋Ｔ細胞のより効率的な選択が可能になる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞または単球である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、抗原を提示するように操作されている。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞活性化を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングおよびＭＨＣ－１への負荷を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、免疫活性をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、ホーミング受容体である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞の阻害を下方調節する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または単球もしくは単球－樹状細胞前駆体もしくはＤＣのＤＣ形成を促進もしくは阻害する薬剤が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性であり、免疫原性エピトープを含み、かつアジュバントは、細胞内に存在する。外因性抗原は、改変される細胞中に導入された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側の供給源由来の１つまたは複数の抗原である。外因性抗原は、外因性抗原の導入前または後のいずれかに、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣ中に存在することができ（すなわち、内因性供給源に由来して存在することもでき）、よって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣによって産生され得る（例えば、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのゲノムにコードされる）ような抗原を含んでもよい。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、２つの抗原プールをさらに含み、第１のプールは抗原の内因性供給源を含み、第２のプールは、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入される抗原の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、個体における疾患細胞中で異所的に発現されるかまたは過剰発現され、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、その個体に由来し、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入される抗原、またはその中に含有される免疫原性エピトープの外因性供給源を含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含むネオ抗原（例えば、変更された自己タンパク質またはその部分）であり、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、その中に導入されるネオエピトープを含む抗原、またはその断片の外因性供給源を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原もしくは免疫原性エピトープ、および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原またはその中に含有される免疫原性エピトープは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのマルチコンパートメント中に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルはエンドソームである。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮ、またはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号に開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、抗原は疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原はライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染している個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。よって、一部の実施形態では、ライセートは腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞中で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは抗原をさらに含み、抗原は、免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原はポリペプチドであり、免疫原性エピトープは免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成ロングペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは抗原をさらに含み、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいくつかは、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの個体への投与後に、複数の免疫原性エピトープはいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれに対しても、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのいずれかによれば、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの機能をモジュレートするための方法は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する細胞変形狭窄部を用いるプロセスを含む。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径よりも小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの約２０％から約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネルに含有されている。マイクロ流体チャネルは、以下のマイクロ流体デバイスという表題の項に記載されたものなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有されていてもよい。よって、一部の実施形態では、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製される、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、プロセスは、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、本明細書に記載のマイクロ流体系のいずれかに含有される細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが狭窄部を通過し、それによって、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすように、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに適用される。
一部の実施形態では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかを個体に投与するステップを含む、方法が提供される。
一部の実施形態では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、本明細書に記載の改変された樹状細胞のいずれかに投与するステップを含む、方法が提供される。
組成物
組成物
ある特定の態様では、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む、改変された抗原提示細胞を含む組成物（例えば、医薬組成物）が提供される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、組成物は、改変された抗原提示細胞と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物である。
免疫応答をモジュレートするための方法
免疫応答をモジュレートするための方法
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる、改変された抗原提示細胞、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる組成物、または本明細書に記載の実施形態のいずれかによる医薬組成物を個体に投与するステップを含む、方法が提供される。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップと、ｃ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップとを含む、方法が提供される。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップと、ｃ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、抗原は、ナノ粒子内に封入される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、薬剤は、ナノ粒子内に封入される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、アジュバントの濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、アジュバントは、ナノ粒子内に封入される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドを含む。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質またはポリペプチドである。一部の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドは、治療用タンパク質、抗体、融合タンパク質、抗原、合成タンパク質、レポーターマーカー、または選択可能なマーカーである。一部の実施形態では、タンパク質は、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、メガヌクレアーゼまたはＣＲＥリコンビナーゼなどの、遺伝子編集タンパク質またはヌクレアーゼである。一部の実施形態では、遺伝子編集タンパク質またはヌクレアーゼは、ＣＲＩＳＰＲである。さらなる実施形態では、薬剤は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まないＣＲＩＳＰＲを含む。一部の実施形態では、融合タンパク質は、限定されないが、抗体薬物コンジュゲートなどのキメラタンパク質薬またはＯＳＴもしくはストレプトアビジンでタグ付けされたタンパク質などの組換え融合タンパク質を含み得る。一部の実施形態では、薬剤は、転写因子である。一部の実施形態では、薬剤は、核酸を含む。一部の実施形態では、薬剤は、核酸である。例示的な核酸は、限定されないが、組換え核酸、ＤＮＡ、組換えＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓａＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｌｎｃＲＮＡ、ｔＲＮＡ、およびｓｈＲＮＡを含む。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸と相同である。一部の実施形態では、核酸は、細胞内の核酸と異種である。一部の実施形態では、薬剤は、プラスミドである。一部の実施形態では、薬剤は、核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。改変された抗原提示細胞または増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、免疫活性をモジュレートする。さらなる実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂまたはＩＬ－１５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＩＲＦ３またはＩＲＦ５など、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＴＬＲ－４などのｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＴＬＲ－４および／またはＴＬＲ－９などのｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）のうちの１つまたは複数の、発現および／または活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）のうちの１つまたは複数の活性をモジュレートする。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、ＳＴＩＮＧ、ＲＩＧ－Ｉ、ＡＩＭ２、ＬＲＲＦ１Ｐ１またはＮＬＰＲ３のうちの１つまたは複数の、発現および／または活性をモジュレートする。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示を増強する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、ＭＨＣ－Ｉおよび／またはＭＨＣ－ＩＩの発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示を増強する薬剤は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）の発現を上方調節する。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の活性化を増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２５、ＫＬＲＧ１、ＣＤ８０またはＣＤ８６のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６の発現をモジュレートする。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の活性化を増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２５、ＫＬＲＧ１、ＣＤ８０またはＣＤ８６のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞のホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、Ｂｃｌ－２、Ｂｃｌ－３またはＢｃｌ－ｘＬのうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。増強された抗原提示細胞が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含み、インプット抗原提示細胞が、ＰＢＭＣである、一部の実施形態では、薬剤は、細胞運命または表現型の変更を誘導する。一部の実施形態では、細胞運命または表現型の変更を誘導する薬剤は、Ｏｃｔ４、Ｓｏｘ２、ｃ－Ｍｙｃ、Ｋｌｆ－４、Ｎａｎｏｇ、Ｌｉｎ２８、Ｌｉｎ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔまたはＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えまたは相同性指向修復のためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、Ｃａｓ９およびガイドＲＮＡを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、薬剤は、抗原提示細胞の、Ｔ細胞活性化のための部位へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の、リンパ節へのホーミングを増強する。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、タンパク質、核酸または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡまたはｍＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミングを増強する薬剤は、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む改変された抗原提示細胞の、Ｔ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む改変された抗原提示細胞の、Ｔ細胞活性化のための部位へのホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、生存能および／または機能が増強された、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は樹状細胞である。いずれかの他の実施形態と組み合わせることができる一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、内因性ヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変されたヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、改変された抗原提示細胞の膜に結合しているなど、膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩアンカーによって膜に結合している。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメイン配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＧＰＩ－アンカーシグナル配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、膜貫通ドメインおよびマウスＢ７－１の細胞質側末端（Ｂ７ＴＭ）を含む。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、ＩＬ－２Ｒα鎖（ＣＤ２５）に結合しないおよび／またはＩＬ－１５Ｒα（ＣＤ２１５）に結合しない。一部の実施形態では、改変された配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの天然カウンターパートよりも高い親和性、例えば以下に限定されないが、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１０００倍またはそれより高い倍率で、天然カウンターパートよりも高い親和性で、ＩＬ－２Ｒβγｃに結合する。一部の実施形態では、改変されたアミノ酸配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型アミノ酸配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、改変されたヌクレオチド配列を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型ヌクレオチド配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示す。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の模倣体を含み、模倣体は、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のそれぞれの野生型配列と約８０％、約８１％、約８２％、約８３％、約８４％、約８５％、約８６％、約８７％、約８８％、約８９％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、または約９９％のいずれか１つの類似性を示すヌクレオチドまたはタンパク質配列を含む。一部の実施形態では、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数の改変された配列または模倣体を含むＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１２ａ、ＩＬ－１２ｂ、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８またはＩＬ－２１のうちの１つまたは複数は、それぞれの野生型カウンターパートと比較して、構造的改変を示す。一部の実施形態では、薬剤は、ＩＬ－２模倣体を含む。一部の実施形態では、薬剤は、ネオロイキン－２／１５（Ｎｅｏ－２／１５）を含む。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、腫瘍ホーミングが増強された、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤は、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の腫瘍ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗アポトーシス剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングを増強する薬剤は、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞内の、抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞内の、抗原プロセシングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原プロセシングおよび／または負荷を増強する薬剤は、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞内の、抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞内の、抗原プロセシングおよび／または負荷は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、およびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＩＩ型インターフェロン、およびＳｈｐ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロンまたはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロンまたはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、免疫活性をモジュレートする薬剤は、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する。さらなる実施形態では、インターフェロン－ベータの発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロンまたはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の機能および／または成熟を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。一部の実施形態では、抗原提示細胞内の、ホーミング受容体の発現を増強する薬剤は、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＦＮ－α２、ＩＦＮ－β、ＩＦＮ－γ、ＩＦＮ－λ１、ＩＦＮ－λ２またはＩＦＮ－λ３のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増強される。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の成熟は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増強される。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、セルピンの発現を上方調節する。さらなる実施形態では、セルピンの発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤は、１つまたは複数のセルピンをコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、１つまたは複数のセルピンの発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤は、ＣＣＬ２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、ホーミングを増強し、かつ／または選択的ホーミングを誘発する薬剤は、ＣＣＬ２をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＣＬ２の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の、ホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞の、ホーミングおよび／または選択的ホーミングは、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞による、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞による、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞による、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞による、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示Ｔ細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示Ｔ細胞が、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞を活性化する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の活性化を増強する薬剤は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞により誘導される、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞により誘導される、Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞の活性化は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡのＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数の抗体またはそれらの断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞により誘導される、Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示細胞により誘導される、Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、樹状細胞である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示Ｔ細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示Ｔ細胞が、ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示Ｔ細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示Ｔ細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示Ｔ細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示Ｔ細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡのＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数の小分子を含む。一部の実施形態では、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤は、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数を標的化する、１つまたは複数の抗体またはそれらの断片を含む。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡ、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の活性は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の活性は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞により誘導される、Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞により誘導される、Ｔ細胞の阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞による阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む抗原提示Ｔ細胞による阻害は、薬剤を含まない抗原提示Ｔ細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、約１０００分の１倍、またはそれより低い倍率のいずれか１つに低下する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を個体に投与するステップを含み、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆体を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分に大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣの形成を促進する薬剤は、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣの形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣの形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を個体に投与するステップを含み、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分に大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｅ２－２の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣ形成を促進する薬剤は、Ｅ２－２をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｅ２－２の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、Ｅ２－２の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ｐＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ｐＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を個体に投与するステップを含み、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分に大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を個体に投与するステップを含み、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分に大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する。さらなる実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤は、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤は、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を個体に投与するステップを含み、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分に大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された単球または単球－樹状細胞前駆細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する。さらなる実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する薬剤は、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である。一部の実施形態では、核酸は、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである。一部の実施形態では、核酸－タンパク質複合体は、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない、遺伝子編集複合体である。一部の実施形態では、単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤は、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１を標的化する、１つまたは複数のＣａｓ９－ｇＲＮＡのＲＮＰ複合体を含む。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現は、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、または約１０００分の１倍のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに低下する。一部の実施形態では、薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成は、薬剤を含まない、それぞれの単球または単球－樹状細胞前駆細胞と比較して、約２分の１倍、約３分の１倍、約５分の１倍、約１０分の１倍、約５０分の１倍、約１００分の１倍、約５００分の１倍、または約１０００分の１倍のいずれか１つに低下する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強し、抗原提示細胞に送達される、２つまたはそれよりも多い薬剤を含む。さらなる実施形態では、上記改変された抗原提示細胞によれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する２つまたはそれよりも多い薬剤は、腫瘍ホーミング剤、抗アポトーシス剤、Ｔ細胞活性化剤、抗原プロセシング剤、免疫活性をモジュレートする薬剤、ホーミング受容体、またはＴ細胞の阻害を下方調節する薬剤のうちの１つまたは複数から選択される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、細胞運命または細胞表現型を変更する薬剤である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、体細胞再プログラム化因子である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、脱分化因子である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、分化転換因子である。一部の実施形態では、細胞表現型を変更する薬剤は、分化因子である。さらなる実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８またはＬＩＮ２８Ｂのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５またはＨＯＸＡ９のうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞運命または表現型を変更する薬剤は、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦまたはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数である。一部の実施形態では、細胞運命または細胞表現型を変更する薬剤は、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦまたはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数をコードする、１つまたは複数のｍＲＮＡを含む。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦまたはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％または約１００％のいずれか１つに増加する。一部の実施形態では、ＯＣＴ４、ＳＯＸ２、Ｃ－ＭＹＣ、ＫＬＦ－４、ＮＡＮＯＧ、ＬＩＮ２８、ＬＩＮ２８Ｂ、Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＥＯＭＥＳ、ＲＵＮＸ１、ＥＲＧ、ＬＣＯＲ、ＨＯＸＡ５、ＨＯＸＡ９、ＧＭ－ＣＳＦ、Ｍ－ＣＳＦまたはＲＡＮＫＬのうちの１つまたは複数の発現は、約２倍、約３倍、約５倍、約１０倍、約５０倍、約１００倍、約５００倍、約１０００倍またはそれを超える倍数のいずれか１つに増加する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと、ｃ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ナノ粒子内に封入される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が、細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、改変された抗原提示細胞およびアジュバントを投与するステップを含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞と共時的にまたは同時に投与される。一部の実施形態では、アジュバントおよび改変された抗原提示細胞は、逐次的に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の投与の前に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の投与の後に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、全身的に、例えば、静脈内投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、局所的に、例えば、腫瘍内投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、細胞内に含有されない、例えば、アジュバントは、溶液中で遊離している。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原提示細胞などの細胞内に含有される。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載の細胞内送達の方法のいずれかに従い、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む、改変された抗原提示細胞は、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップとを含むプロセスにより調製される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、ナノ粒子内に封入される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。したがって、一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、ａ）抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原および／またはアジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原および／またはアジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原および／またはアジュバントを含む抗原提示細胞を生成するステップとを含む方法により、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内に含有されるアジュバントおよびステップｂ）のアジュバントは、同じ化合物である。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内に含有されるアジュバントおよびステップｂ）のアジュバントは、異なる化合物である。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞などの改変された抗原提示細胞を生成するステップと、ｃ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップと、ｄ）アジュバントを個体に投与するステップとを含む、方法が提供される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞と共時的にまたは同時に投与される。一部の実施形態では、アジュバントおよび改変された抗原提示細胞は、逐次的に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の投与の前に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の投与の後に投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、全身的に、例えば、静脈内投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、局所的に、例えば、腫瘍内投与される。一部の実施形態では、アジュバントは、細胞内に含有されない、例えば、アジュバントは、溶液中で遊離している。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原提示細胞などの細胞内に含有される。一部の実施形態では、アジュバントは、本明細書に記載の細胞内送達の方法のいずれかに従い、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、アジュバントの濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、アジュバントは、ナノ粒子内に封入される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、免疫応答は、増強される。一部の実施形態では、免疫応答の増強は、抗原へと方向付けられる。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、インプット抗原提示細胞が通過する、細胞変形狭窄部を用いる。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径よりも小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％～約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネル内に含有される。マイクロ流体チャネルは、下記の「マイクロ流体デバイス」と題された節で記載されるなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有され得る。したがって、一部の実施形態では、本明細書に記載の、改変された抗原提示細胞のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、インプット抗原提示細胞が通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製され、プロセスは、インプット抗原提示細胞を、本明細書に記載のマイクロ流体システムのいずれかに含有される細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット抗原提示細胞が狭窄部を通過し、それによって、インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすように、インプット抗原提示細胞に適用される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、改変された抗原提示細胞の、複数の区画内に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルは、エンドソームである。一部の実施形態では、その中に含有される、抗原または免疫原性エピトープは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、ＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージ、または樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、アジュバントをさらに含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、アジュバントは、改変された抗原提示細胞の、複数の区画内に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルは、エンドソームである。一部の実施形態では、その中に含有されるアジュバントは、改変された抗原提示細胞の表面に結合している。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、ＰＢＭＣである。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、または単球、マクロファージ、または樹状細胞のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、アジュバントを含む改変された抗原提示細胞を用いる。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮまたはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号において開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染した、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を保有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。したがって、一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、抗原をさらに含む改変された抗原提示細胞を用いる。一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、免疫原性エピトープを含む抗原を含む改変された抗原提示細胞を用いる。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患細胞内で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、突然変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、免疫原性エピトープを含み、抗原は、ポリペプチドであり、免疫原性エピトープは、免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。
一部の実施形態では、抗原をさらに含む改変された抗原提示細胞を用いる、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞を用いる、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を、約１ｐＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原を、約１ｐＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、アジュバントを、約１ｐＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を、約０．１μＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、抗原を、約０．１μＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を、約０．１μＭ～約１０ｍＭの間の濃度で含む。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭまたは約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、アジュバントの改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭまたは約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、アジュバントの改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、抗原の改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１ｐＭ、約１０ｐＭ、約１００ｐＭ、約１ｎＭ、約１０ｎＭ、約１００ｎＭ、約１μＭ、約１０μＭ、約１００μＭ、約１ｍＭまたは約１０ｍＭ未満のいずれかである。一部の実施形態では、抗原の改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１０ｍＭよりも高い。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の改変された抗原提示細胞内の濃度は、約１ｐＭ～約１０ｐＭの間、約１０ｐＭ～約１００ｐＭの間、約１００ｐＭ～約１ｎＭの間、約１ｎＭ～約１０ｎＭの間、約１０ｎＭ～約１００ｎＭの間、約１００ｎＭ～約１μＭの間、約１μＭ～約１０μＭの間、約１０μＭ～約１００μＭの間、約１００μＭ～約１ｍＭの間または１ｍＭ～約１０ｍＭの間のいずれかである。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞内の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の抗原に対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の抗原に対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の抗原に対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１の間、約１０００：１～約１００：１の間、約１００：１～約１０：１の間、約１０：１～約１：１の間、約１：１～約１：１０の間、約１：１０～約１：１００の間、約１：１００～約１：１０００の間、約１：１０００～約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１：１００００の間のいずれかである。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内の薬剤のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１、約１０００：１、約１００：１、約１０：１、約１：１、約１：１０、約１：１００、約１：１０００または約１：１００００のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤のアジュバントに対するモル比は、約１００００：１～約１０００：１の間、約１０００：１～約１００：１の間、約１００：１～約１０：１の間、約１０：１～約１：１の間、約１：１～約１：１０の間、約１：１０～約１：１００の間、約１：１００～約１：１０００の間、約１：１０００～約１：１００００の間のいずれかである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ａ）抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ｂ）抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ならびに少なくとも１つの、別の抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ｃ）抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ならびに少なくとも１つの抗原、ｄ）抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ならびに少なくとも１つのアジュバント、ならびに／またはｅ）抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、少なくとも１つの抗原、ならびに少なくとも１つのアジュバントを含む複合体を含む。
一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞を用いる、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる薬剤を含まない対応する改変された抗原提示細胞と比較して、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するさらなる薬剤をさらに含む。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、安定化剤または補因子である。一部の実施形態では、薬剤は、アルブミンである。一部の実施形態では、アルブミンは、マウス、ウシまたはヒトのアルブミンである。一部の実施形態では、さらなる薬剤は、二価の金属カチオン、グルコース、ＡＴＰ、カリウム、グリセロール、トレハロース、Ｄ－スクロース、ＰＥＧ１５００、Ｌ－アルギニン、Ｌ－グルタミンまたはＥＤＴＡである。
一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞を用いる、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された抗原提示細胞は、さらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩの発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩの発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩの発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変されたＴ細胞は、ＭＨＣクラスＩＩの発現をモジュレートするさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩの発現を低下させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＭＨＣクラスＩＩの発現を増加させるさらなる改変を含む。一部の実施形態では、同種異系の文脈で、改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始される自然免疫応答は、同種異系の文脈で、さらなる改変を含まない対応する改変された抗原提示細胞の投与に応答して個体において開始される自然免疫応答と比較して低減される。一部の実施形態では、それらが投与された個体における、改変された抗原提示細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性は、それらが投与された個体におけるさらなる改変を含まない対応する改変されたＴ細胞の循環半減期および／またはｉｎ ｖｉｖｏでの持続性と比較して増加する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、改変された抗原提示細胞を用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、個体に対して同種異系である。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、個体に対して、自家である。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答をモジュレートするように予め条件付けされる。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答を低下させるように予め条件付けされる。一部の実施形態では、個体は、炎症および／または免疫応答を増加させるように予め条件付けされる。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の、個体への投与は、抗原に特異的な、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化および／または拡大を結果としてもたらす。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の、個体への投与は、抗原に特異的な、ヘルパーＴ（Ｔｈ）細胞の活性化および／または拡大を結果としてもたらす。一部の実施形態では、個体に投与される、改変された抗原提示細胞の量は、約１×１０６～約１×１０１２個の細胞の間である。一部の実施形態では、個体に投与される、改変された抗原提示細胞の量は、約１×１０６、１×１０７、１×１０８、１×１０９、１×１０１０、１×１０１１および約１×１０１２個の細胞のいずれか未満である。一部の実施形態では、個体に投与される、改変された抗原提示細胞の量は、約１×１０６～１×１０７個、１×１０７～１×１０８個、１×１０８～１×１０９個、１×１０９～１×１０１０個、１×１０１０～１×１０１１個、および１×１０１１～１×１０１２個の細胞のいずれかの間である。一部の実施形態では、方法は、改変された抗原提示細胞の、複数回投与を含む。一部の実施形態では、方法は、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０回または約１０回を超える投与のいずれかを含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の、２回の連続投与の間の時間間隔は、約１日～約１カ月の間である。一部の実施形態では、投与は、毎日、２日ごと、３日ごと、４日ごと、５日ごと、６日ごと、毎週、隔週または毎月である。一部の実施形態では、連続投与は、最大で、１年またはそれよりも長く施される。
本明細書に記載の方法のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、抗原提示細胞は、同じ個体から単離される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、個体に対して、自家である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、第２の個体から単離される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、個体に対して同種異系である。本明細書に記載の方法のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、局所投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、腫瘍内またはリンパ節内投与される。本明細書に記載の方法のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、全身投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、静脈内、動脈内、皮下、筋内または腹腔内投与される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、改変された抗原提示細胞を用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、第２のアジュバントを個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、全身的に、例えば、静脈内投与される。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、局所的に、例えば、腫瘍内投与される。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、細胞内に含有されない、例えば、第２のアジュバントは、溶液中で遊離している。一部の実施形態では、第２のアジュバントは、ＩＦＮ－αまたはＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内に含有されるアジュバントおよび第２のアジュバントは、同じ化合物である。例えば、実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＣｐＧ ＯＤＮを含み、第２のアジュバントもまた、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞内に含有されるアジュバントおよび第２のアジュバントは、異なる化合物である。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＣｐＧ ＯＤＮを含み、第２のアジュバントは、ＩＦＮ－αである。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞および第２のアジュバントは、共時的にまたは同時に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞および第２のアジュバントは、逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、第２のアジュバントを投与する前に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、第２のアジュバントを投与した後に投与される。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、改変された抗原提示細胞を用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、方法は、免疫チェックポイント阻害剤を個体に投与するステップをさらに含む。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞および免疫チェックポイント阻害剤は、個体に共時的に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞および免疫チェックポイント阻害剤は、個体に同時に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞および免疫チェックポイント阻害剤は、個体に逐次的に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、免疫チェックポイント阻害剤の、個体への投与の後に、個体に投与される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、免疫チェックポイント阻害剤の、個体への投与の前に、個体に投与される。一部の実施形態では、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、およびＢＴＬＡのいずれか１つに標的化される。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、個体にさらに投与される免疫チェックポイント阻害剤と、同じであるかまたは類似である。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＰＤ－１を阻害する薬剤を含み、さらに投与される免疫チェックポイント阻害剤もまた、ＰＤ－１を阻害する。一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤は、個体にさらに投与される免疫チェックポイント阻害剤と同じではない。例えば、一部の実施形態では、改変された抗原提示細胞は、ＰＤ－１を阻害する薬剤を含み、さらに投与される免疫チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４を阻害する。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と会合させた、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を、ｉ）改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ｉｉ）改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ならびに抗原、ｉｉｉ）改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、ならびにアジュバントまたはｉｖ）改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、抗原、ならびにアジュバントと共に、改変された抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤、抗原、ならびに／またはアジュバントを、インプット抗原提示細胞の細胞表面と会合させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、改変された抗原提示細胞を生成するステップと、ｂ）改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。
ある特定の態様では、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と会合させた、改変された抗原提示細胞を個体に投与するステップを含み、改変された抗原提示細胞が、ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原、ならびにアジュバントが通過して、摂動したインプット抗原提示細胞を形成するのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤、抗原、ならびにアジュバントと、抗原およびアジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む、改変された抗原提示細胞、抗原、ならびにアジュバントを生成するステップとを含むプロセスにより調製される、方法が提供される。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原の濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、アジュバントの濃度は、約１ｐＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原の濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間であり、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、アジュバントの濃度は、約０．１μＭ～１０ｍＭの間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる薬剤の抗原に対する比は、約１００００：１～約１：１００００の間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる薬剤のアジュバントに対する比は、約１００００：１～約１：１００００の間である。一部の実施形態では、摂動したインプット抗原提示細胞と共にインキュベートされる、抗原の、アジュバントに対する比は、約１００００：１～約１：１００００の間である。
一部の実施形態では、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、改変された抗原提示細胞が、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む、方法のいずれかによれば、インプット抗原提示細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞の混合集団である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は細胞の混合集団中にあり、細胞の混合集団はＰＢＭＣの集団である。一部の実施形態では、ＰＢＭＣは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ、および／または樹状細胞である。
一部の実施形態では、改変されたＰＢＭＣを用いる、本明細書に記載の、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、ＰＢＭＣは、抗原を提示するように操作されている。一部の実施形態では、薬剤は、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗アポトーシス剤である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞の活性化を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングを増強する。一部の実施形態では、薬剤は、抗原プロセシングおよびＭＨＣ－１への負荷を増強する。一部の実施形態では、薬剤は、免疫活性をモジュレートする。一部の実施形態では、薬剤は、ホーミング受容体である。一部の実施形態では、薬剤は、Ｔ細胞の阻害を下方調節する。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が、細胞に送達される前、それと同時、またはその後に送達される。一部の実施形態では、抗原は、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が単球または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または単球もしくは単球－樹状細胞前駆体もしくはＤＣのＤＣ形成を促進もしくは阻害する薬剤が、細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップとを含む方法により、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される。
したがって、一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性であり、免疫原性エピトープを含み、アジュバントは、細胞内に存在する。外因性抗原は、改変される細胞に導入される、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側の供給源由来の、１つまたは複数の抗原である。外因性抗原は、外因性抗原の導入の前またはその後のいずれかに、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣ内に存在する（すなわち、内因性供給源に由来してもまた存在する）ことができるため、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣにより、それ自体として産生され（例えば、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのゲノムによりコードされ）得る抗原を含み得る。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原の２つのプールである、抗原の内因性供給源を含む第１のプールと、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、それらに導入される抗原の外因性供給源を含む第２のプールさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、個体における疾患細胞内で、異所的に発現されたかまたは過剰発現された、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、個体に由来し、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、それらに導入される、抗原の外因性供給源またはその中に含有される免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、ネオエピトープを含むネオ抗原（例えば、変更自己タンパク質またはその部分）であり、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、改変される単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの外側で産生され、それらに導入される、抗原の外因性供給源またはネオエピトープを含むその断片を含む。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに対して外因性である。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの、複数の区画内に存在する。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルは、エンドソームである。一部の実施形態では、抗原もしくは免疫原性エピトープ、および／またはアジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。
一部の実施形態では、本明細書における、抗原をさらに含む、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの、複数の区画内に存在する。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルは、エンドソームである。一部の実施形態では、抗原は、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、その中に含有される、抗原または免疫原性エピトープは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書における、アジュバントをさらに含む、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの、複数の区画内に存在する。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。一部の実施形態では、ベシクルは、エンドソームである。一部の実施形態では、アジュバントは、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原および／またはアジュバントは、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、アジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである。一部の実施形態では、アジュバントは、ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、長さが約５０（例えば、約４５、約４０、約３５、約３０、約２５、約２０のいずれか以下またはそれよりも短い）ヌクレオチド以下である。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、クラスＡ ＣｐＧ ＯＤＮ、クラスＢ ＣｐＧ ＯＤＮまたはクラスＣ ＣｐＧ ＯＤＮである。一部の実施形態では、ＣｐＧ ＯＤＮは、米国仮出願第ＵＳ６２／６４１，９８７号において開示されているヌクレオチド配列を含む。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。例えば、一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、クラスＡ、クラスＢ、およびクラスＣのＣｐＧ ＯＤＮの中から選択される、複数の異なるＣｐＧ ＯＤＮを含む。
一部の実施形態では、本明細書における、抗原をさらに含む、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、抗原は、疾患関連抗原である。さらなる実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原は、ライセートに由来する。一部の実施形態では、ライセートは、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、細菌またはウイルスなどの病原体に感染した、個体の生検に由来する。一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍を保有する個体の生検（すなわち、腫瘍生検ライセート）に由来する。したがって、一部の実施形態では、ライセートは、腫瘍ライセートである。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、免疫原性エピトープを含む抗原を含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、疾患関連抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞から単離されたペプチドまたはｍＲＮＡに由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、罹患細胞内で異所的に発現されたかまたは過剰発現されたタンパク質に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオ抗原、例えば、がん関連ネオ抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、ネオエピトープ、例えば、がん関連ネオエピトープを含む。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、非自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、突然変異したかまたは他の形で変更された自己抗原に由来する。一部の実施形態では、免疫原性エピトープは、腫瘍抗原、ウイルス抗原、細菌抗原または真菌抗原に由来する。一部の実施形態では、抗原は、異種ペプチド配列に融合した、免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じ供給源に由来する。例えば、一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じウイルス抗原に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。一部の実施形態では、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の異なる抗原を含む。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、免疫原性エピトープを含む抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ポリペプチドであり、免疫原性エピトープは、免疫原性ペプチドエピトープである。一部の実施形態では、免疫原性ペプチドエピトープは、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合している。一部の実施形態では、Ｎ末端に隣接するポリペプチドおよび／またはＣ末端に隣接するポリペプチドに融合した免疫原性ペプチドエピトープは、天然に存在しない配列である。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、免疫原性合成長鎖ペプチド（ＳＬＰ）に由来する。一部の実施形態では、Ｎ末端および／またはＣ末端に隣接するポリペプチドは、疾患関連免疫原性ＳＬＰに由来する。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である抗原をさらに含む。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、抗原は、複数の免疫原性エピトープを含み、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよびＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちの一部は、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのすべては、同じ供給源に由来する。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、同じ供給源に由来しない。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む。一部の実施形態では、複数の免疫原性エピトープを含む複数の抗原を含む改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの個体への投与の後に、複数の免疫原性エピトープのうちのいずれも、他の免疫原性エピトープのいずれかに対する、個体における免疫応答を低下させない。
一部の実施形態では、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを用いる、個体における免疫応答をモジュレートするための方法のいずれかによれば、本明細書における、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣは、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する、細胞変形狭窄部を用いるプロセスを含む方法により調製される。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径よりも小さい。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の約２０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の約２０％～約６０％である。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、本明細書に記載のマイクロ流体チャネルのいずれかなどのマイクロ流体チャネル内に含有される。マイクロ流体チャネルは、下記の「マイクロ流体デバイス」と題された節で記載されるなど、本明細書に記載のマイクロ流体デバイスのいずれかに含有され得る。したがって、一部の実施形態では、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが通過する細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルを用いるプロセスによって調製される、本明細書に記載の方法のいずれかによれば、プロセスは、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、本明細書に記載のマイクロ流体システムのいずれかの中に含有される、細胞変形狭窄部を含むマイクロ流体チャネルに通すステップを含む。一部の実施形態では、変形力は、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが狭窄部を通過し、それによって、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすように、それに適用される。
抗原
抗原
一部の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞への抗原の送達を用いて、免疫応答をモジュレートするが、この場合、抗原は、本明細書に記載の方法のいずれかにより、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、抗原提示細胞の生存能または機能を増強する、１つまたは複数の薬剤を含む。一部の実施形態では、抗原は、単一の抗原である。一部の実施形態では、抗原は、抗原の混合物である。抗原は、細胞または抗体媒介性免疫応答などの特異的免疫応答を刺激する物質である。抗原は、特定の抗原に特異的な、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）など、免疫細胞により発現される受容体に結合する。抗原－受容体間の結合は、その後、細胞の活性化、サイトカインの産生、細胞の遊走、細胞傷害性因子の分泌、および抗体の産生など、下流の免疫エフェクター経路をもたらす、細胞内シグナル伝達経路を誘発する。
一部の実施形態では、抗原は、ポリペプチド抗原である。一部の実施形態では、抗原は、疾患関連抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細菌、真菌、ウイルスまたはアレルゲンなどの外来供給源に由来する。一部の実施形態では、抗原は、自己タンパク質（すなわち、自己抗原）または自己タンパク質の部分などの内部供給源に由来する。一部の実施形態では、抗原は、突然変異したかまたは他の形で変更された自己抗原である。一部の実施形態では、抗原は、腫瘍抗原である。一部の実施形態では、抗原は、細胞ライセート中にある。自己抗原は、生物自体の細胞上または細胞内に存在する抗原である。自己抗原は、正常では、免疫応答を刺激しないが、Ｉ型糖尿病もしくは関節リウマチなど、自己免疫疾患の状況でまたは過剰発現されたか、もしくは異常に／異所的に発現された場合に、これを刺激する場合がある。
一部の実施形態では、抗原は、ウイルスと関連する。一部の実施形態では、抗原は、ウイルス抗原である。例示的なウイルス抗原は、ＨＰＶ抗原、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ抗原、およびインフルエンザ抗原を含む。
一部の実施形態では、抗原は、微生物、例えば、細菌と関連する。一部の実施形態では、免疫応答のモジュレーティングは、微生物、例えば、細菌に対する、病原性免疫応答の増加を含む。
ある特定の態様では、本発明は、抗原を、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む抗原提示細胞に、さらに送達するための方法であって、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、抗原が細胞に侵入するように、細胞の摂動を引き起こすステップを含み、前記細胞懸濁液が、抗原と接触する、方法を用いる。一部の実施形態では、抗原は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、抗原提示細胞に送達される。
一部の実施形態では、送達するための抗原が精製される。一部の実施形態では、抗原は、目的の抗原の少なくとも約６０重量％（乾燥重量）である。一部の実施形態では、精製抗原は、目的の抗原の、少なくとも約７５％、９０％または９９％である。一部の実施形態では、精製抗原は、目的の抗原の、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９８％、９９％または１００％（ｗ／ｗ）である。純度は、限定されないが、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法、質量分析またはＳＤＳ－ＰＡＧＥゲル電気泳動を含む、任意の公知の方法により決定される。精製されたＤＮＡまたはＲＮＡは、外因性核酸、炭水化物、および脂質を含まないＤＮＡまたはＲＮＡとして規定される。
アジュバント
アジュバント
アジュバントは、抗原に対する免疫応答などの免疫細胞応答（例えば、Ｔ細胞応答）をブーストするのに使用され得る。複数のアジュバントもまた、免疫応答を増強するのに使用される場合があり、例えば、抗原特異的免疫応答を、抗原単独に対する免疫応答と比較して増強するように、抗原と共に使用され得る。一部の実施形態では、本発明は、免疫応答を増強するのに、アジュバントの送達を用いるが、この場合、アジュバントは、本明細書に記載の方法のいずれかにより、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強する。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原提示細胞による、抗原の免疫原性提示を促進する。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原と同時に導入される。一部の実施形態では、アジュバントおよび抗原は、逐次的に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原を導入する前に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原の導入の後に導入される。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原提示細胞のホーミング（例えば、腫瘍など、標的組織への、抗原提示細胞のホーミング）を、アジュバントの非存在下における抗原提示細胞のホーミングと比較して変更する。一部の実施形態では、アジュバントは、抗原提示細胞の増殖を、アジュバントの非存在下における抗原提示細胞の増殖と比較して増加させる。
ある特定の態様では、本発明は、抗原をさらに含む、改変された抗原提示細胞を生成するための方法であって、インプット抗原提示細胞が、インプット抗原提示細胞を変形させる狭窄部を通過し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤ならびに抗原がインプット抗原提示細胞に侵入するように、細胞の摂動を引き起こし、それによって、抗原をさらに含む、増強された抗原提示細胞を生成する、方法を用いる。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、送達された抗原を提示するように操作されている。
ある特定の態様では、本発明は、アジュバントを、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む抗原提示細胞に、さらに送達するための方法であって、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、アジュバントが細胞に侵入するように、抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップを含み、前記細胞懸濁液が、アジュバントと接触する、方法を用いる。一部の実施形態では、アジュバントは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおいて、抗原提示細胞に送達される。一部の実施形態では、抗原は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、抗原提示細胞に送達される。
マイクロ流体システムおよびその構成要素
細胞変形狭窄部をもたらす、マイクロ流体チャネル
マイクロ流体システムおよびその構成要素
細胞変形狭窄部をもたらす、マイクロ流体チャネル
一部の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に侵入するように、抗原提示細胞の摂動を引き起こすことにより、免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄部が、マイクロ流体チャネル内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、複数の狭窄部は、マイクロ流体チャネル内に、直列に、かつ／または並列に置かれ得る。本明細書で開示される方法における使用のための細胞変形狭窄部を含有する、例示的なマイクロ流体チャネルについては、ＷＯ２０１３０５９３４３に記載されている。本明細書で開示される方法における使用のための小孔を有する、例示的な表面については、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネルは、管腔を含み、緩衝液中に懸濁したＰＢＭＣが通過し得るように構成され、この場合、マイクロ流体チャネルは、狭窄部を含む。マイクロ流体チャネルは、シリコン、金属（例えば、ステンレス鋼）、プラスチック（例えば、ポリスチレン）、セラミック、ガラス、結晶性物質、非晶性物質またはポリマー（例えば、ポリメタクリル酸メチル（ＰＭＭＡ）、ＰＤＭＳ、環状オレフィンコポリマー（ＣＯＣ）など）を含む、いくつかの材料のいずれか１つから作ることができる。マイクロ流体チャネルの作製は、乾式エッチング、湿式エッチング、フォトリソグラフィー、射出成形、レーザーアブレーションまたはＳＵ－８マスクを含む、当技術分野で公知の、任意の方法により実施され得る。
一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部は、流入部、中心点、および流出部を含む。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の、長さ、深さ、および幅は、変動し得る。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の直径は、抗原提示細胞の直径の関数である。一部の実施形態では、マイクロ流体チャネル内の狭窄部の直径は、抗原提示細胞の直径の約２０％～約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部のサイズは、抗原提示細胞の直径の、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である。一部の実施形態では、狭窄部のサイズは、抗原提示細胞の最小の断面距離の、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である。一部の実施形態では、チャネルは、約２μｍ～約１０μｍの間の幅またはそれらの間の任意の幅もしくは幅の範囲の狭窄部を含む。例えば、狭窄部の幅は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約６μｍまたは約７μｍのいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、チャネルは、約１０μｍの長さの狭窄部、および約４μｍの幅の狭窄部を含む。チャネル、流入部、中心点、および流出部の断面もまた変動し得る。例えば、断面は、円形、楕円形、長型スリット、正方形、六角形または三角形の形状であり得る。流入部は、チャネルの目詰まりを低減するために最適化され、抗原提示細胞への化合物の送達を増強するために最適化される、狭窄部の角度を規定する。流出部の角度も同様に変動し得る。例えば、流出部の角度は、非層流を結果としてもたらし得る、乱流の可能性を低減するように構成される。一部の実施形態では、流入部および／または流出部の壁は、直線形である。他の実施形態では、流入部および／または流出部の壁は、曲線状である。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約２μｍ～約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約３μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約３μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約３．５μｍ～約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４μｍ～約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．２μｍ～約６μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．２μｍ～約４．８μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約２μｍ～約１４μｍ、約４μｍ～約１２μｍ、約６μｍ～約９μｍ、約４μｍ～約６μｍ、約４μｍ～約５μｍ、約３．５μｍ～約７μｍ、約３．５μｍ～約６．３μｍ、約３．５μｍ～約５．６μｍ、約３．５μｍ～約４．９μｍ、約４．２μｍ～約６．３μｍ、約４．２μｍ～約５．６μｍまたは約４．２μｍ～約４．９μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約２μｍ、２．５μｍ、３μｍ、３．５μｍ、４μｍ、４．５μｍ、５μｍ、５．５μｍ、６μｍ、６．５μｍ、７μｍ、７．５μｍ、８μｍ、８．５μｍ、９μｍ、９．５μｍ、１０μｍ、１０．５μｍ、１１μｍ、１１．５μｍ、１２μｍ、１２．５μｍ、１３μｍ、１３．５μｍ、１４μｍ、１４．５μｍまたは１５μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．０μｍ、４．１μｍ、４．２μｍ、４．３μｍ、４．４μｍ、４．５μｍ、４．６μｍ、４．７μｍ、４．８μｍ、４．９μｍまたは５．０μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約３．０μｍ、３．１μｍ、３．２μｍ、３．３μｍ、３．４μｍ、３．５μｍ、３．６μｍ、３．７μｍ、３．８μｍ、３．９μｍまたは４．０μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約３．５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約４．０μｍである。
本明細書に記載の、方法または改変された抗原提示細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部は、長さを含み、狭窄部の長さは、約２μｍ～約５０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の直径は、約５μｍ～約４０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約１０μｍ～約３０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約８μｍ～約１２μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約１３μｍ～約１５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約１８μｍ～約２２μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約２３μｍ～約２７μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約２８μｍ～約３２μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約２μｍ、５μｍ、８μｍ、９μｍ、１０μｍ、１１μｍ、１２μｍ、１３μｍ、１４μｍ、１５μｍ、１６μｍ、１７μｍ、１８μｍ、１９μｍ、２０μｍ、２２μｍ、２４μｍ、２５μｍ、２６μｍ、２８μｍまたは３０μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約１０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約２０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の長さは、約３０μｍである。
本明細書に記載の、方法または改変された抗原提示細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部は、深さを含み、狭窄部の深さは、約１μｍ～約２００μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約２０μｍ～約１２０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約２０μｍ～約８０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約４０μｍ～約６０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約６０μｍ～約８０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約３５μｍ～約４５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約５５μｍ～約６５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約７５μｍ～約８５μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約１μｍ、５μｍ、１０μｍ、２０μｍ、３０μｍ、４０μｍ、５０μｍ、６０μｍ、７０μｍ、８０μｍ、９０μｍ、１００μｍ、１１０μｍ、１２０μｍ、１３０μｍ、１４０μｍ、１５０μｍ、１７５μｍまたは２００μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約４０μｍ、４５μｍ、５０μｍ、５５μｍ、６０μｍ、６５μｍ、７０μｍ、７５μｍ、８０μｍ、９０μｍまたは１００μｍのいずれか１つである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約４０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約８０μｍである。一部の実施形態では、狭窄部の深さは、約６０μｍである。
一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、円形、楕円形、丸形、正方形、長方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形からなる群から選択される。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、スリットである。一部の実施形態では、スリットは、約３μｍ～５μｍの幅、および／または約２０μｍ～１２０μｍの深さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約３．５μｍの幅、および／または約８０μｍの深さを含む。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、直列に、かつ／または並列に配置された、複数の狭窄部を通過する。一部の実施形態では、狭窄部は、流入部および流出部を含み、この場合、流入部は、流入角度を規定し、流入角度は、約０度～約９０度の間である。一部の実施形態では、流入角度は、約２０度～約２２度の間である。一部の実施形態では、流出部は、流出角度を規定し、流出角度は、約０度～約９０度の間である。一部の実施形態では、流出角度は、約２０度～約２２度の間である。
一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約１００ｍｍ／秒～約１０ｍ／秒の間の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２ｍ／秒～約１０ｍ／秒の間の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒～約２００Ｌ／ｃｍ２／秒の間の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約１００Ｌ／ｃｍ２／秒の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約０℃～約３７℃の範囲の温度で、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約０℃～約３７℃の範囲の温度で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約０℃～約１０℃の範囲の温度で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約２℃～約８℃の範囲の温度で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約２℃～約６℃、約５℃～約１０℃、約１０℃～約１５℃、約１５℃～約２０℃、約２０℃～約２５℃、約２５℃～約３０℃、約３０℃～約３５℃または約３５℃～約３７℃のいずれか１つの範囲の温度で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約０℃、１℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、９℃、１０℃、１５℃、２０℃、２５℃、３０℃または３７℃のいずれか１つの温度で、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部に通した後で、改変された抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、改変された細胞を３７℃へと正常化させるのに十分な時間、３７℃の温度でインキュベートされる。一部の実施形態では、狭窄部に通した後で、改変された抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、改変された細胞を２５℃へと正常化させるのに十分な時間、２５℃の温度でインキュベートされる。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約１００ｍｍ／秒～約１０ｍ／秒の間の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、流量は、約１００ｍｍ／秒～約１ｃｍ／秒、約１ｃｍ／秒～約１０ｃｍ／秒、約１０ｃｍ／秒～約１００ｃｍ／秒、約１００ｃｍ／秒～約１ｍ／秒の間または１ｍ／秒～約１０ｍ／秒の間である。一部の実施形態では、流量は、約２ｍ／秒～約５ｍ／秒の間である。一部の実施形態では、流量は、約０．１ｍ／秒～約０．５ｍ／秒、０．５ｍ／秒～約１ｍ／秒、約１ｍ／秒～約１．５ｍ／秒、約１．５ｍ／秒～約２ｍ／秒、約２ｍ／秒～約２．５ｍ／秒、約２．５ｍ／秒～約３ｍ／秒、約３ｍ／秒～約３．５ｍ／秒、約３．５ｍ／秒～約４ｍ／秒、約４ｍ／秒～約４．５ｍ／秒、約４．５ｍ／秒～約５ｍ／秒、約５ｍ／秒～約６ｍ／秒、約６ｍ／秒～約７ｍ／秒、約７ｍ／秒～約８ｍ／秒、約８ｍ／秒～約９ｍ／秒または約９ｍ／秒～約１０ｍ／秒の間である。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約１ｍ／秒、約２ｍ／秒、約３ｍ／秒、約４ｍ／秒、約５ｍ／秒、約６ｍ／秒、約７ｍ／秒、約８ｍ／秒、約９ｍ／秒または約１０ｍ／秒のいずれか１つの流量で、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約０．００１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分の間の流量またはそれらの間の任意の流量もしくは流量の範囲で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、流量は、約０．００１ｍＬ／分～約１７５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１００ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約５０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約２５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約７．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約５．０ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約２．５ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約１ｍＬ／分、約０．００１ｍＬ／分～約０．１ｍＬ／分または約０．００１ｍＬ／分～約０．０１ｍＬ／分の間である。一部の実施形態では、流量は、約０．００１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．０１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約５０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約７５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１５０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約０．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約２．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約７．５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分、約２５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分または約１７５ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分の間である。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約１ｍＬ／分、約１０ｍＬ／分、約２０ｍＬ／分、約３０ｍＬ／分、約４０ｍＬ／分、約５０ｍＬ／分、約６０ｍＬ／分、約７０ｍＬ／分、約８０ｍＬ／分、約９０ｍＬ／分、約１００ｍＬ／分、約１１０ｍＬ／分、約１２０ｍＬ／分、約１３０ｍＬ／分、約１４０ｍＬ／分、約１５０ｍＬ／分、約１６０ｍＬ／分、約１７０ｍＬ／分、約１８０ｍＬ／分、約１９０ｍＬ／分または約２００ｍＬ／分のいずれか１つの流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約１０ｍＬ／分～約２００ｍＬ／分の間の流量で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞は、約１００ｍＬ／分の流量で、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部は、当技術分野で公知の任意の形状；例えば、三次元形状または二次元形状を有し得る。狭窄部の断面形状などの二次元形状は、限定されないが、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形または八角形であり得る。狭窄部の三次元形状は、限定されないが、円筒形、円錐形または立方体状であり得る。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、長方形である。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、スリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約２μｍ～約１０μｍの幅、および／または約１μｍ～約２００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約２．５μｍ～約６μｍの幅、および／または約２０μｍ～約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３μｍ～約５μｍの幅、および／または約４０μｍ～約１００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３μｍ～約４μｍの幅、および／または約４０μｍ～約１００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３．５μｍ～約４．５μｍの幅、および／または約４０μｍ～約１００μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３．３μｍ～約３．７μｍの幅、および／または約２０μｍ～約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３．５μｍの幅、および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍ～約３０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ～約５０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約２μｍ～約５μｍ、約５μｍ～約１０μｍ、約１０μｍ～約１５μｍ、約１５μｍ～約２０μｍ、約２０μｍ～約２５μｍ、約２５μｍ～約３０μｍ、約３０μｍ～約３５μｍ、約３５μｍ～約４０μｍ、約４０μｍ～約４５μｍまたは約４５μｍ～約５０μｍのいずれか１つの長さを含む。一部の実施形態では、スリットは、約１０μｍの長さを含む。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３μｍ～約５μｍの幅、約１０μｍ～約３０μｍの長さ、および／または約２０μｍ～約１２０μｍの深さを含むスリットである。一部の実施形態では、狭窄部の断面形状は、約３．５μｍの幅、約３０μｍの長さ、および／または約８０μｍの深さを含むスリットである。
一部の実施形態では、狭窄部は、流入部および流出部を含む。狭窄部の流入口および流出口は、様々な角度を有し得る。一部の実施形態では、狭窄部は、同一な流入および流出角度を有する。一部の実施形態では、狭窄部は、異なる流入および流出角度を有する。狭窄部の角度は、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞が通過する間の狭窄部の目詰まりを最小化するように選択され得る。一部の実施形態では、表面を通る流量は、約１００ｍｍ／秒～約１０ｍ／秒の間である。一部の実施形態では、流量は、約２ｍ／秒～約５ｍ／秒の間である。一部の実施形態では、表面を通る流量は、約０．００１ｍＬ／分～約１００ｍＬ／分の間またはそれらの間の任意の流量もしくは流量の範囲である。一部の例では、流入部および／または流出部の角度は、約０～約９０度の間であり得る。一部の実施形態では、流入部および／または流出部は、９０度を超え得る。一部の実施形態では、流入部は、流入角度を規定し、流入角度は、約０度～約９０度の間である。一部の実施形態では、流入角度は、約１０度～約４０度、約１２度～約４５度のいずれか１つの間、約１５度～約３０度の間である。一部の実施形態では、流入角度は、約２０度～約２２度の間である。一部の実施形態では、流出部は、流出角度を規定し、流出角度は、約０度～約９０度の間である。一部の実施形態では、流出角度は、約１０度～約４０度、約１２度～約４５度のいずれか１つの間、約１５度～約３０度の間である。一部の実施形態では、流出角度は、約２０度～約２２度の間である。一部の実施形態では、流入部は、流入角度を規定し、流入角度は、約２０度～約２２度の間であり、流出部は、流出角度を規定し、流出角度は、約２０度～約２２度の間である。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、狭窄部縁辺は、滑らか、例えば、丸形状または曲線状である。滑らかな狭窄部縁辺は、突起、隆起または起伏部を伴わない、連続で、平坦で、一様な表面を有する。一部の実施形態では、狭窄部縁辺は、鋭利である。鋭利な狭窄部縁辺は、尖っているかまたは鋭角をなす、薄い縁辺を有する。一部の実施形態では、狭窄部流路は、直線状である。直線状の狭窄部流路は、湾曲部、屈曲部、曲がり角または他の凹凸を含有しない。一部の実施形態では、狭窄部流路は、曲線状である。曲線状の狭窄部流路は、屈曲しているかまたは直線から逸脱している。一部の実施形態では、狭窄部流路は、複数の湾曲部、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える湾曲部を有する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞、単球もしくは単球－樹状細胞前駆細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞、単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液は、直列にかつ／または並列に配置された複数の狭窄部を通過する。一部の実施形態では、複数の狭窄部は、直列に配置される。一部の実施形態では、複数の狭窄部は、並列に配置される。一部の実施形態では、複数の狭窄部は、直列にかつ／または並列に配置される。一部の実施形態では、直列に配置された複数の狭窄部は、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約５０、約７５、約１００、約５００、約１，０００個またはそれを超える数のいずれか１つの直列の狭窄部を含む。一部の実施形態では、並列に配置された複数の狭窄部は、約２、約５、約１０、約５０、約７５、約１００、約５００、約１，０００個またはそれを超える数のいずれか１つの直列の狭窄部を含み得る。
細胞変形狭窄部をもたらす、小孔を有する表面
細胞変形狭窄部をもたらす、小孔を有する表面
一部の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に侵入するように、抗原提示細胞の摂動を引き起こすことにより、免疫応答をモジュレートするための方法であって、狭窄部が、小孔であるかまたは小孔内に含有される、方法を提供する。一部の実施形態では、小孔は、表面内に含有される。本明細書で開示される方法における使用のための小孔を有する、例示的な表面については、ＷＯ２０１７０４１０５０に記載されている。
本明細書で開示される表面は、いくつかの材料のいずれか１つから作られ、いくつかの形態のいずれか１つを取り得る。一部の実施形態では、表面は、フィルターである。一部の実施形態では、表面は、膜である。一部の実施形態では、フィルターは、接線流フィルターである。一部の実施形態では、表面は、スポンジまたはスポンジ様マトリックスである。一部の実施形態では、表面は、マトリックスである。
一部の実施形態では、表面は、蛇行性経路表面である。一部の実施形態では、蛇行性経路表面は、酢酸セルロースを含む。一部の実施形態では、表面は、限定されないが、合成または天然ポリマー、ポリカーボネート、シリコン、ガラス、金属、合金、硝酸セルロース、銀、酢酸セルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリアクリロニトリル（ＰＡＮ）、ポリプロピレン、ＰＶＤＦ、ポリテトラフルオロエチレン（ｐｏｌｙｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｅｔｈｙｌｅｎｅ）、混合セルロースエステル、磁器、およびセラミックから選択される材料を含む。
本明細書で開示される表面は、当技術分野で公知の任意の形状；例えば、三次元形状を有し得る。表面の二次元形状は、限定されないが、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形または八角形であり得る。一部の実施形態では、表面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、表面の三次元形状は、円筒形、円錐形または立方体状である。
表面は、多様な断面幅および厚さを有し得る。一部の実施形態では、表面の断面幅は、約１ｍｍ～約１ｍの間またはそれらの間の任意の断面幅もしくは断面幅の範囲である。一部の実施形態では、表面は、規定された厚さを有する。一部の実施形態では、表面の厚さは、一様である。一部の実施形態では、表面の厚さは、可変的である。例えば、一部の実施形態では、表面の一部は、表面の他の部分より厚いかまたは薄い。一部の実施形態では、表面の厚さは、約１％～約９０％またはそれらの間の任意のパーセンテージもしくはパーセンテージの範囲で変動する。一部の実施形態では、表面は、約０．０１μｍ～約５ｍｍの間の厚さまたはそれらの間の任意の厚さもしくは厚さの範囲である。
一部の実施形態では、狭窄部は、小孔であるかまたは小孔内に含有される。小孔の断面形状の幅は、処理される抗原提示細胞の種類と関連する。一部の実施形態では、小孔サイズは、処理される、抗原提示細胞または抗原提示細胞のクラスターの直径の関数である。一部の実施形態では、小孔サイズは、抗原提示細胞が、小孔を通過するときに摂動するような小孔サイズである。一部の実施形態では、小孔サイズは、抗原提示細胞の直径よりも小さい。一部の実施形態では、小孔サイズは、抗原提示細胞の直径の、約１０％～約９９％である。一部の実施形態では、小孔サイズは、抗原提示細胞の直径の、約１０％、約１５％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％または約９９％である。最適の小孔サイズまたは小孔断面幅は、適用および／またはＰＢＭＣ細胞型に基づき変動し得る。一部の実施形態では、小孔サイズは、約２μｍ～約１４μｍである。一部の実施形態では、小孔サイズは、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである。一部の実施形態では、断面幅は、約２μｍ～約１４μｍである。一部の実施形態では、小孔断面は、約２μｍ、約３μｍ、約４μｍ、約５μｍ、約８μｍ、約１０μｍ、約１２μｍまたは約１４μｍである。
小孔流路の流入口および流出口は、様々な角度を有し得る。小孔の角度は、抗原提示細胞通過する間の小孔の目詰まりを最小化するように選択され得る。一部の実施形態では、表面を通る流量は、約０．００１ｍＬ／ｃｍ２／秒～約１００Ｌ／ｃｍ２／秒の間またはそれらの間の任意の流量もしくは流量の範囲である。例えば、流入部または流出部の角度は、約０～約９０度の間であり得る。一部の実施形態では、流入部または流出部の角度は、９０度を超え得る。一部の実施形態では、小孔は、同一な流入および流出角度を有する。一部の実施形態では、小孔は、異なる流入および流出角度を有する。一部の実施形態では、小孔縁辺は、滑らか、例えば、丸形状または曲線状である。滑らかな小孔縁辺は、突起、隆起または起伏部を伴わない、連続で、平坦で、一様な表面を有する。一部の実施形態では、小孔縁辺は、鋭利である。鋭利な小孔縁辺は、尖っているかまたは鋭角をなす、薄い縁辺を有する。一部の実施形態では、小孔流路は、直線状である。直線状の小孔流路は、湾曲部、屈曲部、曲がり角または他の凹凸を含有しない。一部の実施形態では、小孔流路は、曲線状である。曲線状の小孔流路は、屈曲しているかまたは直線から逸脱している。一部の実施形態では、小孔流路は、複数の湾曲部、例えば、約２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはそれを超える湾曲部を有する。
小孔は、二次元または三次元形状を含む、当技術分野で公知の任意の形状を有し得る。小孔の形状（例えば、断面形状）は、限定されないが、円形、楕円形、丸形、正方形、星形、三角形、多角形、五角形、六角形、七角形、および八角形であり得る。一部の実施形態では、小孔の断面は、丸形の形状である。一部の実施形態では、小孔の三次元形状は、円筒形または円錐形である。一部の実施形態では、小孔は、波形の流入口形状および流出口形状を有する。一部の実施形態では、小孔の形状は、所与の表面内の小孔間で、均一である（すなわち、一貫しているかまたは規則的）。一部の実施形態では、小孔の形状は、所与の表面内の小孔間で、不均一である（すなわち、混合されているかまたは変動する）。
本明細書に記載の表面は、ある範囲の全小孔数を有し得る。一部の実施形態では、小孔は、全表面積のうちの、約１０％～約８０％を包含する。一部の実施形態では、表面は、約１．０×１０５～約１．０×１０３０個の全小孔またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲を含有する。一部の実施形態では、表面は、約１０～約１．０×１０１５小孔／ｍｍ２表面積の間を含む。
小孔は、所与の表面内に、多数の方式で分布し得る。一部の実施形態では、小孔は、所与の表面内に、並列に分布する。１つのこのような例では、小孔は、所与の表面内で、同じ方向に、隣り合わせで分布し、同じ距離隔てられる。一部の実施形態では、小孔の分布は、規則正しいかまたは均一である。１つのこのような例では、小孔は、所与の表面内で、規則的で、体系的なパターンで分布するか、または同じ距離隔てられる。一部の実施形態では、小孔の分布は、ランダムであるかまたは不均一である。１つのこのような例では、小孔は、所与の表面内で、不規則的で、乱れたパターンで分布するか、または異なる距離隔てられる。一部の実施形態では、複数の表面は、直列に分布する。複数の表面は、表面のサイズ、形状、および／または粗さにおいて、均一な場合も、不均一の場合もある。複数の表面は、均一または不均一な小孔サイズ、形状、および／または数の小孔をさらに含有する場合もあり、それによって、ある範囲の化合物の異なる抗原提示細胞型への同時送達を可能とする。
一部の実施形態では、個々の小孔は、一様な幅の寸法（すなわち、小孔流路の長さに沿った、一定の幅）を有する。一部の実施形態では、個々の小孔は、可変的な幅（すなわち、小孔流路の長さに沿って、増加または減少する幅）を有する。一部の実施形態では、所与の表面内の小孔は、個々の小孔の、同じ深さを有する。一部の実施形態では、所与の表面内の小孔は、個々の小孔の、異なる深さを有する。一部の実施形態では、小孔は、互いに直接隣接する。一部の実施形態では、小孔は、互いから、距離を置いて分離される。一部の実施形態では、小孔は、互いから、約０．００１μｍ～約３０ｍｍの距離またはそれらの間の任意の距離もしくは距離の範囲を置いて分離される。
一部の実施形態では、表面は、材料でコーティングされる。材料は、限定されないが、テフロン（登録商標）、接着性コーティング、界面活性剤、タンパク質、接着分子、抗体、抗凝固剤、細胞機能をモジュレートする因子、核酸、脂質、炭水化物または膜貫通タンパク質を含む、当技術分野で公知の任意の材料から選択され得る。一部の実施形態では、表面は、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）でコーティングされる。一部の実施形態では、材料は、表面に、共有結合的に付着する。一部の実施形態では、材料は、表面に、非共有結合的に付着するかまたは吸着する。一部の実施形態では、表面分子は、抗原提示細胞が、小孔を通過するときに、放出される。
一部の実施形態では、表面は、改変された化学的特性を有する。一部の実施形態では、表面は、極性である。一部の実施形態では、表面は、親水性である。一部の実施形態では、表面は、非極性である。一部の実施形態では、表面は、疎水性である。一部の実施形態では、表面は、帯電している。一部の実施形態では、表面は、正に、および／または負に帯電している。一部の実施形態では、表面は、一部の領域では、正に帯電しており、他の領域では、負に帯電している場合がある。一部の実施形態では、表面は、全体的な正のまたは全体的な負の電荷を有する。一部の実施形態では、表面は、滑らかであるか、電解研磨されているか、起伏があるかまたはプラズマ処理された表面のいずれか１つであり得る。一部の実施形態では、表面は、双性イオンまたは二極性化合物を含む。一部の実施形態では、表面は、プラズマ処理されている。
一部の実施形態では、表面は、大型のモジュール内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチック製またはガラス製シリンジなどのシリンジ内に含有される。一部の実施形態では、表面は、プラスチック製フィルターホルダー内に含有される。一部の実施形態では、表面は、ピペットの先端部内に含有される。
細胞の摂動
細胞の摂動
一部の実施形態では、本発明は、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が抗原提示細胞に侵入するように、抗原提示細胞の摂動を引き起こすことにより、免疫応答をモジュレートするための方法であって、抗原提示細胞内の摂動が、材料を抗原提示細胞の外側から抗原提示細胞へと移入させる、抗原提示細胞内の破損である、方法を提供する（例えば、ホール、裂孔、腔、穴、小孔、割れ目、溝、または穿孔）。変形は、例えば、機械的歪みおよび／またはずり応力により引き起こされ得る。一部の実施形態では、摂動は、抗原提示細胞の膜内の摂動である。一部の実施形態では、摂動は、一過性である。一部の実施形態では、抗原提示細胞の摂動は、約１．０×１０－９秒間～約２時間またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲にわたり持続する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の摂動は、約１．０×１０－９秒間～約１秒間、約１秒間～約１分間または約１分間～約１時間にわたり持続する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の摂動は、約１．０×１０７～約１．０×１０－３、約１．０×１０６～約１．０×１０－２、約１．０×１０５～約１．０×１０－２、約１．０×１０４～約１．０×１０－２、約１．０×１０３～約１．０×１０－２、約１．０×１０２～約１．０×１０－２、約１．０×１０１～約１．０×１０－２または約１．０×１００～約１．０×１０－１秒間のいずれか１つの間にわたり持続する。一部の実施形態では、抗原提示細胞の摂動は、約１．０×１０７～約１．０×１０－１、約１．０×１０６～約１．０×１０－１、約１．０×１０５～約１．０×１０－１、約１．０×１０４～約１．０×１０－１、約１．０×１０３～約１．０×１０－１、約１．０×１０２～約１．０×１０－１または約１．０×１０１～約１．０×１０－１秒間のいずれか１つにわたり持続する。本明細書に記載の方法により創出される、抗原提示細胞の摂動（例えば、小孔またはホール）は、補体または細菌溶血素により創出されるなど、多量体による小孔構造を形成する、タンパク質サブユニットのアセンブリーの結果としては形成されない。
抗原提示細胞が、狭窄部を通過するときに、狭窄部は、一時的に、抗原提示細胞の膜に、摂動を介して材料の受動的拡散を可能とする傷害を付与する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、細胞シグナル伝達機構を介して、アポトーシス経路を活性化する可能性を最小化するように、約１００μｓの、短い時間だけ変形されるが、他の持続時間（例えば、数ナノ秒間～数時間の範囲）も可能である。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約１．０×１０－９秒間～約２時間またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲にわたり変形される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約１．０×１０－９秒間～約１秒間、約１秒間～約１分間または約１分間～約１時間にわたり変形される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約１．０×１０－９～約１．０×１０－１、約１．０×１０－９～約１．０×１０－２、約１．０×１０－９～約１．０×１０－３、約１．０×１０－９～約１．０×１０－４、約１．０×１０－９～約１．０×１０－５、約１．０×１０－９～約１．０×１０－６、約１．０×１０－９～約１．０×１０－７または約１．０×１０－９～約１．０×１０－８秒間のいずれか１つの間にわたり変形される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約１．０×１０－８～約１．０×１０－１、約１．０×１０－７～約１．０×１０－１、約１．０×１０－６～約１．０×１０－１、約１．０×１０－５～約１．０×１０－１、約１．０×１０－４～約１．０×１０－１、約１．０×１０－３～約１．０×１０－１または約１．０×１０－２～約１．０×１０－１秒間のいずれか１つにわたり変形される。一部の実施形態では、抗原提示細胞の変形は、限定されないが、約１μｓ～少なくとも約７５０μｓ、例えば、少なくとも約１μｓ、１０μｓ、５０μｓ、１００μｓ、５００μｓまたは７５０μｓの範囲の時間にわたる、抗原提示細胞の変形を含む。
一部の実施形態では、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞の狭窄部の通過、および／または抗原提示細胞の摂動と同時に生じる。一部の実施形態では、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した後に生じる。一部の実施形態では、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約数分間後に生じる。一部の実施形態では、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～少なくとも約３０分間後に生じる。例えば、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～約１秒間、約１秒間～約１分間または約１分間～約３０分間後に生じる。一部の実施形態では、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～約１０分間、約１．０×１０－２秒間～約５分間、約１．０×１０－２秒間～約１分間、約１．０×１０－２秒間～約３０秒間、約１．０×１０－２秒間～約１０秒間、約１．０×１０－２秒間～約１秒間または約１．０×１０－２秒間～約０．１秒間後に生じる。一部の実施形態では、化合物の抗原提示細胞への移行は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－１秒間～約１０分間、約１秒間～約１０分間、約１０秒間～約１０分間、約５０秒間～約１０分間、約１分間～約１０分間または約５分間～約１０分間後に生じる。一部の実施形態では、狭窄部を通過した後の抗原提示細胞内の摂動は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した後約５分間以内に是正される。
一部の実施形態では、狭窄部を通過した後における細胞の生存能は、約５％～約１００％である。一部の実施形態では、狭窄部を通過した後における細胞の生存能は、少なくとも約５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または９９％である。一部の実施形態では、細胞の生存能は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～少なくとも約１０日間後に測定される。例えば、細胞の生存能は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～約１秒間、約１秒間～約１分間、約１分間～約３０分間または約３０分間～約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞の生存能は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．０×１０－２秒間～約２時間、約１．０×１０－２秒間～約１時間、約１．０×１０－２秒間～約３０分間、約１．０×１０－２秒間～約１分間、約１．０×１０－２秒間～約３０秒間、約１．０×１０－２秒間～約１秒間または約１．０×１０－２秒間～約０．１秒間後に測定される。一部の実施形態では、細胞の生存能は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約１．５時間～約２時間、約１時間～約２時間、約３０分間～約２時間、約１５分間～約２時間、約１分間～約２時間、約３０秒間～約２時間または約１秒間～約２時間後に測定される。一部の実施形態では、細胞の生存能は、抗原提示細胞が狭窄部を通過した約２時間～約５時間、約５時間～約１２時間、約１２時間～約２４時間または約２４時間～約１０日間後に測定される。
送達パラメーター
送達パラメーター
いくつかのパラメーターが、本明細書に記載の方法により、免疫応答をモジュレートするための、薬剤の抗原提示細胞への送達に影響し得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、狭窄部を通過する前、それと共時的に、またはその後に、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤と接触する。抗原提示細胞は、送達するための化合物を含む溶液中に懸濁した狭窄部を通過し得るが、抗原提示細胞が狭窄部を通過した後に、化合物が細胞懸濁液に添加される場合がある。一部の実施形態では、送達される化合物で狭窄部をコーティングする。
抗原提示細胞への化合物の送達に影響し得るパラメーターの例は、狭窄部の寸法、狭窄部の流入角度、狭窄部の表面特性（例えば、粗さ、化学修飾、親水性、疎水性など）、作動流速（例えば、細胞の狭窄部の通過時間）、抗原提示細胞の濃度、細胞懸濁液中の化合物の濃度を含むがこれらに限定されず、狭窄部を通過した後で、抗原提示細胞が回収またはインキュベートされる時間の量も、送達される化合物の抗原提示細胞への移行に影響を及ぼし得る。抗原提示細胞への化合物の送達に影響するさらなるパラメーターは、狭窄部内の、抗原提示細胞の速度、狭窄部内のずり速度、細胞懸濁液の粘度、流速に対して垂直な速度成分、および狭窄部内の時間を含み得る。このようなパラメーターは、化合物の送達を制御するようにデザインされ得る。一部の実施形態では、抗原提示細胞の濃度は、約１０～少なくとも約１０１２細胞／ｍＬの範囲またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲である。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１０ｎｇ／ｍＬ～約１ｇ／ｍＬの範囲またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲であり得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｎｇ／ｍＬ～約１０ｇ／ｍＬの範囲またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲であり得る。一部の実施形態では、送達化合物の濃度は、約１ｐＭ～少なくとも約２Ｍの範囲またはそれらの間の任意の濃度もしくは濃度の範囲であり得る。
本開示の方法で使用される温度は、化合物の送達および細胞の生存能に影響を及ぼすように調整され得る。一部の実施形態では、方法は、約－５℃～約４５℃の間で実施される。例えば、方法は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い～４５℃またはそれよりも高い）または低温（例えば、約－５℃～約４℃）またはこれらの例示的な温度の間の温度で実行され得る。
抗原提示細胞を、狭窄部を通して駆動するのに、多様な方法が利用され得る。例えば、圧力は、流入口側のポンプ（例えば、圧縮機）により加えられる場合があり、真空は、流出口側の真空ポンプにより加えられる場合があり、毛細管作用は、チューブを介して加えられる場合があり、ならびに／またはシステムは、重力供給される場合がある。変位ベースの流動システム（例えば、シリンジポンプ、蠕動ポンプ、手動シリンジまたはピペット、ピストンなど）もまた、使用され得る。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、正の圧力または負の圧力により、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、一定の圧力または可変的な圧力により、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、圧力は、シリンジを使用して加えられる。一部の実施形態では、圧力は、ガス（例えば、ガスシリンダーから）を使用して加えられた、正の圧力である。一部の実施形態では、圧力は、ポンプを使用して加えられる。一部の実施形態では、ポンプは、蠕動ポンプまたは隔膜ポンプである。一部の実施形態では、圧力は、真空を使用して加えられる。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、重力加速度により、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、遠心力により、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、毛細管圧力により、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約１ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。本明細書に記載の方法のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約３０ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約４５ｐｓｉ～約１０５ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約６０ｐｓｉ～約１００ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約９０ｐｓｉの圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２ｐｓｉ～約１０ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２０ｐｓｉ～約２００ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２ｐｓｉ～約１０ｐｓｉ、約１０ｐｓｉ～約２０ｐｓｉ、約２０ｐｓｉ～約３０ｐｓｉ、約３０ｐｓｉ～約４０ｐｓｉ、約４０ｐｓｉ～約５０ｐｓｉ、約５０ｐｓｉ～約６０ｐｓｉ、約６０ｐｓｉ～約７０ｐｓｉ、約７０ｐｓｉ～約８０ｐｓｉ、約８０ｐｓｉ～約９０ｐｓｉ、約９０ｐｓｉ～約１００ｐｓｉ、約１００ｐｓｉ～約１１０ｐｓｉ、約１１０ｐｓｉ～約１２０ｐｓｉの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２ｐｓｉ、約５ｐｓｉ、約１０ｐｓｉ、約１５ｐｓｉ、約２０ｐｓｉ、約２５ｐｓｉ、約３０ｐｓｉ、約３５ｐｓｉ、約４０ｐｓｉ、約４５ｐｓｉ、約５０ｐｓｉ、約５５ｐｓｉ、約６０ｐｓｉ、約６５ｐｓｉ、約７０ｐｓｉ、約７５ｐｓｉ、約８０ｐｓｉ、約８５ｐｓｉ、約９０ｐｓｉ、約９５ｐｓｉ、約１００ｐｓｉ、約１０５ｐｓｉ、約１１０ｐｓｉ、約１１５ｐｓｉまたは約１２０ｐｓｉのいずれか１つの圧力下で、狭窄部を通過する。
本明細書に記載の方法、組成物または改変された抗原提示細胞のいずれか１つに従う、一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約１３０ｋＰａ～約２０００ｋＰａの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２００ｋＰａ～約８３０ｋＰａの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約３００ｋＰａ～約７３０ｋＰａの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約４１５ｋＰａ～約６９０ｋＰａの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約６２０ｋＰａの圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約１００ｋＰａ～約１５０ｋＰａ、約１５０ｋＰａ～約２００ｋＰａ、約２００ｋＰａ～約２５０ｋＰａ、約２５０ｋＰａ～約３００ｋＰａ、３００ｋＰａ～約３５０ｋＰａ、約３５０ｋＰａ～約４００ｋＰａ、４００ｋＰａ～約４５０ｋＰａ、約４５０ｋＰａ～約５００ｋＰａ、５００ｋＰａ～約５５０ｋＰａ、約５５０ｋＰａ～約６００ｋＰａ、６００ｋＰａ～約６５０ｋＰａ、約６５０ｋＰａ～約７００ｋＰａ、７００ｋＰａ～約７５０ｋＰａ、約７５０ｋＰａ～約８００ｋＰａ、８００ｋＰａ～約８５０ｋＰａ、約８５０ｋＰａ～約９００ｋＰａ、９００ｋＰａ～約９５０ｋＰａ、約９５０ｋＰａ～約１０００ｋＰａ、約１０００ｋＰａ～約１５００ｋＰａまたは約１５００ｋＰａ～約２０００ｋＰａのいずれか１つの範囲の圧力下で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、インプット抗原提示細胞は、約２００ｋＰａ、約２５０ｋＰａ、約３００ｋＰａ、約３５０ｋＰａ、約４００ｋＰａ、約４１５ｋＰａ、約４５０ｋＰａ、約５００ｋＰａ、約５５０ｋＰａ、約６００ｋＰａ、約６２０ｋＰａ、約６５０ｋＰａ、約７００ｋＰａ、約７５０ｋＰａ、約８００ｋＰａ、約８５０ｋＰａ、約９００ｋＰａまたは約１０００ｋＰａのいずれか１つの圧力下で、狭窄部を通過する。
一部の実施形態では、流体の流動は、狭窄部を通して、抗原提示細胞を方向付ける。一部の実施形態では、流体の流動は、抗原提示細胞が狭窄部を通る前、乱流である。乱流とは、所与の点における速度の大きさおよび方向が不規則に変動する、流体の流動である。一部の実施形態では、狭窄部を通る流体の流動は、層流である。層流は、あらゆる点における流動の方向が一定を維持する固体境界近傍の流体内で、絶え間のない流動を伴う。一部の実施形態では、流体の流動は、抗原提示細胞が狭窄部を通った後、乱流である。抗原提示細胞が狭窄部を通過するときの速度は、変動し得る。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、一様な細胞速度で、狭窄部を通過する。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、変動的な細胞速度で、狭窄部を通過する。
他の実施形態では、組合せ処理は、抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、抗原提示細胞を変形させる狭窄部に通し、それによって、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が、例えば、本明細書に記載の方法の抗原提示細胞に侵入するように、抗原提示細胞の摂動を引き起こすことに続く、狭窄部の下流における、電界への曝露により、免疫応答をモジュレートするのに使用される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、狭窄部を通過した後で、少なくとも１つの電極により発生する電界を通過する。一部の実施形態では、電界は、抗原提示細胞核など、抗原提示細胞内の第２の場所への、化合物の送達の一助となる。例えば、細胞変形狭窄部と電界との組合せは、転写因子をコードするプラスミドを、抗原提示細胞（例えば、細胞核）に送達する結果として、デノボにおける転写因子の産生をもたらす。一部の実施形態では、１つまたは複数の電極は、電界を発生させるように、細胞変形狭窄部に近接する。一部の実施形態では、電界は、約０．１ｋＶ／ｍ～約１００ＭＶ／ｍの間またはそれらの間の任意の数もしくは数の範囲である。一部の実施形態では、集積回路は、電気シグナルを与えて、電極を駆動するのに使用される。一部の実施形態では、抗原提示細胞は、約１ｎｓ～約１ｓの間のパルス幅、および約１００ｎｓ～約１０ｓの期間またはそれらの間の任意の時間もしくは時間の範囲にわたり、電界へと曝露される。
抗原提示細胞への送達のための細胞懸濁液
抗原提示細胞への送達のための細胞懸濁液
細胞懸濁液は、抗原提示細胞の、混合または精製集団であり得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、全血などの混合細胞集団である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、ＰＢＭＣなどの混合細胞集団である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージまたは樹状細胞のいずれか１つの精製集団などの精製細胞集団である。
細胞懸濁液の組成（例えば、オスモル濃度、塩濃度、血清含量、細胞濃度、ｐＨなど）は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の送達に影響を与え得る。一部の実施形態では、懸濁液は、全血を含む。一部の実施形態では、懸濁液は、ＰＢＭＣを含む。代替的に、細胞懸濁液は、生理食塩水中または血液以外の生理学的媒体中の、細胞の混合物である。一部の実施形態では、細胞懸濁液は、水溶液を含む。一部の実施形態では、水溶液は、細胞培養培地、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、塩、金属イオン、糖、増殖因子、動物由来の生成物、増量材、界面活性剤、潤滑剤、脂質、ビタミン、アミノ酸、タンパク質、細胞周期阻害剤、および／またはアクチンの重合化に影響を与える薬剤を含む。一部の実施形態では、細胞培養培地は、ＤＭＥＭ、Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）、ＩＭＤＭ、ＲＰＭＩ、Ｘ－Ｖｉｖｏ １０またはＸ－Ｖｉｖｏ １５である。加えて、緩衝液は、例えば、狭窄部または小孔の目詰まりを低減するかまたは消失させ、細胞の生存能を改善するようにデザインされ得る、１つまたは複数の潤滑剤（Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）または他の界面活性剤）を含み得る。例示的な界面活性剤は、限定されないが、ポロキサマー、ポリソルベート、糖またはマンニトール、ソルビトールなどの糖アルコール、動物由来の血清、およびアルブミンタンパク質を含む。
ある特定の種類の抗原提示細胞を伴う、一部の構成では、抗原提示細胞は、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤の抗原提示細胞の内部への送達の一助となる、１つまたは複数の溶液中でインキュベートされ得る。一部の実施形態では、水溶液は、アクチンの重合化に影響を与える薬剤を含む。一部の実施形態では、アクチンの重合化に影響を与える薬剤は、ラトランクリンＡ、サイトカラシン、および／またはコルヒチンである。例えば、抗原提示細胞は、アクチン細胞骨格を脱重合化するように、送達の前に、１時間にわたり、ラトランクリン（Ｌａｎｔｒｕｎｃｕｌｉｎ）Ａ（０．１μｇ／ｍＬ）などの脱重合化溶液中でインキュベートされ得る。さらなる例として、抗原提示細胞は、微小管ネットワークを脱重合化するように、送達の前に、２時間にわたり、１０μＭのコルヒチン（Ｓｉｇｍａ）中でインキュベートされ得る。
一部の実施形態では、細胞集団は、開示される方法における使用の前に富化される。例えば、細胞は、体液、例えば、末梢血から得られ、抗原提示細胞を濃縮するように、必要に応じて、富化または精製される。細胞は、限定されないが、磁気細胞分離、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）または密度勾配遠心分離を含む、当技術分野で公知の任意の方法により富化され得る。
細胞懸濁液の粘度もまた、本明細書で開示される方法に影響を与え得る。一部の実施形態では、細胞懸濁液の粘度は、約８．９×１０－４Ｐａ・ｓ～約４．０×１０－３Ｐａ・ｓの範囲またはそれらの間の任意の値もしくは値の範囲である。一部の実施形態では、粘度は、約８．９×１０－４Ｐａ・ｓ～約４．０×１０－３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０－４Ｐａ・ｓ～約３．０×１０－３Ｐａ・ｓ、約８．９×１０－４Ｐａ・ｓ～約２．０×１０－３Ｐａ・ｓまたは約８．９×１０－３Ｐａ・ｓ～約１．０×１０－３Ｐａ・ｓのいずれか１つの間の範囲である。一部の実施形態では、粘度は、約０．８９ｃＰ～約４．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ～約３．０ｃＰ、約０．８９ｃＰ～約２．０ｃＰまたは約０．８９ｃＰ～約１．０ｃＰのいずれか１つの間の範囲である。一部の実施形態では、ずり歪みの条件下で、細胞懸濁液の粘度が低下する、ずり流動化効果が観察される。粘度は、限定されないが、ガラス製毛細管粘度計などの粘度計またはレオメーターを含む、当技術分野で公知の任意の方法により測定され得る。粘度計が、１つの流動条件下における粘度を測定するのに対し、レオメーターは、流動条件と共に変動する粘度を測定するのに使用される。一部の実施形態では、粘度は、血液などのずり流動化溶液について測定される。一部の実施形態では、粘度は、約－５℃～約４５℃の間で測定される。例えば、粘度は、室温（例えば、約２０℃）、生理学的温度（例えば、約３７℃）、生理学的温度よりも高い（例えば、約３７℃よりも高い～４５℃またはそれよりも高い）、低温（例えば、約－５℃～約４℃）またはこれらの例示的な温度の間の温度で測定される。
システムおよびキット
システムおよびキット
一部の態様では、本発明は、本明細書に記載の方法のいずれかにおける使用のためなど、狭窄部、抗原提示細胞懸濁液、本明細書に記載の実施形態のいずれかによる１つもしくは複数の改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤のうちの１つまたは複数を含むシステムを提供する。一部の実施形態では、システムは、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。システムは、「マイクロ流体システムおよびその構成要素」と題された、上記の節において開示された実施形態を含む、本明細書で開示される組成物および方法について記載される、任意の実施形態を含み得る。一部の実施形態では、細胞変形狭窄部は、抗原提示細胞への送達のためにサイズ指定される。一部の実施形態では、作動流速、細胞および化合物の濃度、温度、狭窄部内の細胞の速度、ならびに細胞懸濁液の組成（例えば、オスモル濃度、塩濃度、血清含量、細胞濃度、ｐＨなど）などの送達パラメーターは、免疫応答をモジュレートするための化合物の最大の応答に最適化される。
また、個体における免疫応答のモジュレーティングにおける使用のための、キットまたは製品も提供される。一部の実施形態では、キットは、本明細書に記載の改変された抗原提示細胞のいずれかを含む、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された１つまたは複数の抗原提示細胞を含む。一部の実施形態では、システムは、抗原および／またはアジュバントをさらに含む。一部の実施形態では、キットは、個体における免疫応答のモジュレーティングにおける使用のための腫瘍ホーミングの増強、生存能の増強、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷の増強、免疫活性のモジュレーティング、ホーミング受容体の増強、Ｔ細胞活性化能の増強、Ｔ細胞の阻害の下方調節、ならびに分化の変更など、抗原提示細胞の生存能および／または機能が増強された、改変された抗原提示細胞の生成における使用のための、狭窄部、抗原提示細胞懸濁液、改変された抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤のうちの１つまたは複数を含む。一部の実施形態では、キットは、適切なパッケージング内に、本明細書に記載の構成要素（例えば、マイクロ流体チャネルもしくは小孔を含有する表面、細胞懸濁液、および／または化合物）を含む。当技術分野では、適切なパッケージング材料が公知であり、例えば、バイアル（例えば、密封されたバイアル）、容器、アンプル、ボトル、ジャー、可撓性パッケージング（例えば、密封されたＭｙｌａｒバッグまたはプラスチック製バッグ）などを含む。これらの製品は、さらに滅菌および／または密封され得る。
本発明はまた、本明細書に記載の方法の構成要素を含むキットも提供し、前記方法を実施して個体における免疫応答をモジュレートするための使用説明書、ならびに／または抗原および／もしくはアジュバントを抗原提示細胞に導入するための使用説明書をさらに含み得る。本明細書に記載のキットは、緩衝液、希釈剤、フィルター、注射針、シリンジを含む他の材料、ならびに本明細書に記載の方法のいずれかを実施するための使用説明書を伴う、添付文書；例えば、個体における免疫応答をモジュレートするための使用説明書または抗原および／もしくはアジュバントを含有するように、抗原提示細胞を改変するための使用説明書をさらに含み得る。
例示的な実施形態
例示的な実施形態
実施形態１．抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態２．抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態１に記載の方法。
実施形態３．ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態２に記載の方法。
実施形態４．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態３に記載の方法。
実施形態５．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態３に記載の方法。
実施形態６．抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗アポトーシス剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態７．抗アポトーシス剤が、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態６に記載の方法。
実施形態８．ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態７に記載の方法。
実施形態９．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態８に記載の方法。
実施形態１０．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態８に記載の方法。
実施形態１１．抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態１２．抗原プロセシングを増強する薬剤が、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態１１に記載の方法。
実施形態１３．ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態１２に記載の方法。
実施形態１４．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態１３に記載の方法。
実施形態１５．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態１３に記載の方法。
実施形態１６．抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態１７．抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態１６に記載の方法。
実施形態１８．ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態１７に記載の方法。
実施形態１９．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態１８に記載の方法。
実施形態２０．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態１８に記載の方法。
実施形態２１．抗原提示細胞の免疫活性をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態２２．免疫活性をモジュレートする薬剤が、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態２１に記載の方法。
実施形態２３．Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態２２に記載の方法。
実施形態２４．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２５．免疫活性をモジュレートする薬剤が、インターフェロンベータの発現を下方調節する、実施形態２１に記載の方法。
実施形態２６．インターフェロンベータの発現を下方調節する薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、実施形態２５に記載の方法。
実施形態２７．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２８．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態２３に記載の方法。
実施形態２９．抗原提示細胞の生存能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態３０．抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が、セルピンの発現を上方調節する、実施形態２９に記載の方法。
実施形態３１．セルピンの発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態３０に記載の方法。
実施形態３２．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３３．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態３１に記載の方法。
実施形態３４．抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分に大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態３５．抗原提示細胞のホーミング受容体を増強する薬剤が、ＣＣＬ２の発現を上方調節する、実施形態３４に記載の方法。
実施形態３６．ＣＣＬ２の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態３５に記載の方法。
実施形態３７．ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態３４に記載の方法。
実施形態３８．ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体のうちの１つまたは複数を含む、実施形態３７に記載の方法。
実施形態３９．薬剤が、増強された抗原提示細胞のリンパ節へのホーミングを増強する、実施形態３７または３８に記載の方法。
実施形態４０．抗原提示細胞が樹状細胞である、実施形態３９に記載の方法。
実施形態４１．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態３６および３８から４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４２．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態３６および３８から４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態４３．抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態４４．Ｔ細胞を活性化する薬剤が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態４３に記載の方法。
実施形態４５．ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態４４に記載の方法。
実施形態４６．Ｔ細胞を活性化する薬剤が、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態４３に記載の方法。
実施形態４７．ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態４６に記載の方法。
実施形態４８．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態４５または４７に記載の方法。
実施形態４９．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態４５または４７に記載の方法。
実施形態５０．抗原提示Ｔ細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップと
を含む、方法。
ａ）インプット抗原提示Ｔ細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤と、薬剤を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示Ｔ細胞を生成するステップと
を含む、方法。
実施形態５１．Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する、実施形態５０に記載の方法。
実施形態５２．ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、実施形態５１に記載の方法。
実施形態５３．核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５４．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態５２に記載の方法。
実施形態５５．単球からのＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球に入り込むのに十分に大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
ａ）インプット単球を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が単球に入り込むのに十分に大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球を、ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
実施形態５６．ＤＣの形成を促進する薬剤が、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態５５に記載の方法。
実施形態５７．ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態５６に記載の方法。
実施形態５８．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態５７に記載の方法。
実施形態５９．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態５７に記載の方法。
実施形態６０．単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
実施形態６１．ｐＤＣの形成を促進する薬剤が、Ｅ２－２の発現を上方調節する、実施形態６０に記載の方法。
実施形態６２．Ｅ２－２の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態６１に記載の方法。
実施形態６３．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６４．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態６２に記載の方法。
実施形態６５．単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
実施形態６６．ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態６５に記載の方法。
実施形態６７．Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態６６に記載の方法。
実施形態６８．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態６７に記載の方法。
実施形態６９．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態６７に記載の方法。
実施形態７０．単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
実施形態７１．ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、実施形態７０に記載の方法。
実施形態７２．ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、実施形態７１に記載の方法。
実施形態７３．核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態７２に記載の方法。
実施形態７４．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態７２に記載の方法。
実施形態７５．単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きなインプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤と、薬剤を摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。
実施形態７６．ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する、実施形態７５に記載の方法。
実施形態７７．ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、実施形態７６に記載の方法。
実施形態７８．核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、実施形態７７に記載の方法。
実施形態７９．核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、実施形態７７に記載の方法。
実施形態８０．薬剤を含む単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、樹状細胞（ＤＣ）に分化する、実施形態５５から７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８１．ＤＣが、ｐＤＣ、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ、および／またはＣＤ１１ｂ＋ＤＣである、実施形態８０に記載の方法。
実施形態８２．抗原提示細胞が抗原をさらに含む、実施形態１から５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８３．抗原が、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、送達される、実施形態８２に記載の方法。
実施形態８４．抗原が、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、抗原提示細胞に送達される、実施形態８３に記載の方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原と、抗原を摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、抗原提示細胞に送達される、実施形態８３に記載の方法。
実施形態８５．抗原提示細胞が、アジュバントをさらに含む、実施形態１から５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８６．アジュバントが、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、ならびに／または抗原提示細胞の生存能および／もしくは機能を増強する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される、実施形態８５に記載の方法。
実施形態８７．アジュバントが、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、抗原提示細胞に送達される、実施形態８６に記載の方法。
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが抗原提示細胞に入り込むのに十分大きなインプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット抗原提示細胞を、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、抗原提示細胞に送達される、実施形態８６に記載の方法。
実施形態８８．アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである、実施形態８５から８７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態８９．抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である、実施形態８２から８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９０．狭窄部の直径が、インプット抗原提示細胞の直径よりも小さい、実施形態１から５４および８２から８９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９１．狭窄部の直径が、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約９９％である、実施形態９０に記載の方法。
実施形態９２．狭窄部の直径が、インプット抗原提示細胞の直径の約２０％から約６０％である、実施形態９１に記載の方法。
実施形態９３．抗原および／またはアジュバントが、抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する、実施形態８６から９２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９４．抗原が、抗原提示細胞の表面に結合している、実施形態８２から９３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９５．抗原が疾患関連抗原である、実施形態８２から９４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９６．抗原が腫瘍抗原である、実施形態８２から９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９７．抗原がライセートに由来する、実施形態８２から９６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態９８．ライセートが腫瘍ライセートである、実施形態９７に記載の方法。
実施形態９９．抗原提示細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、実施形態１から３９および４１から５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１００．抗原提示細胞が細胞の混合集団中にある、実施形態１から３９および４１から５４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０１．細胞の混合集団がＰＢＭＣの集団である、実施形態１００に記載の方法。
実施形態１０２．ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび／または樹状細胞である、実施形態９９または１０１に記載の方法。
実施形態１０３．ＰＢＭＣが、抗原を提示するように操作されている、実施形態９９、１０１または１０２に記載の方法。
実施形態１０４．単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが、抗原をさらに含む、実施形態５５から８１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０５．抗原が、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、送達される、実施形態１０４に記載の方法。
実施形態１０６．抗原が、
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、実施形態１０５に記載の方法。
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原が単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、抗原と、抗原を摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、実施形態１０５に記載の方法。
実施形態１０７．単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが、アジュバントをさらに含む、実施形態５５から８１または１０４から１０６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１０８．アジュバントが、抗原が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、および／またはＤＣ形成を促進する薬剤が細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される、実施形態１０７に記載の方法。
実施形態１０９．アジュバントが、
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、実施形態１０８に記載の方法。
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が、懸濁液中のインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、アジュバントが単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きなインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、アジュバントと、アジュバントを摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、実施形態１０８に記載の方法。
実施形態１１０．アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである、実施形態１０７から１０９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１１．抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である、実施形態１０６から１１０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１２．狭窄部の直径が、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径よりも小さい、実施形態５５から８１および１０４から１１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１３．狭窄部の直径が、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の約２０％から約９９％である、実施形態１１２に記載の方法。
実施形態１１４．狭窄部の直径が、インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の約２０％から約６０％である、実施形態１１３に記載の方法。
実施形態１１５．抗原および／またはアジュバントが、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する、実施形態１０４から１１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１６．抗原が、単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している、実施形態１０４から１１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１７．抗原が疾患関連抗原である、実施形態１０４から１１６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１８．抗原が腫瘍抗原である、実施形態１０４から１１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１９．抗原がライセートに由来する、実施形態１０４から１１７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２０．ライセートが腫瘍ライセートである、実施形態１１９に記載の方法。
実施形態１２１．実施形態１から５４および８２から１０３のいずれか１つに記載の方法によって調製される、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞。
実施形態１２２．実施形態５５から８１および１０４から１２０のいずれか１つに記載の方法によって調製される、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣ。
実施形態１２３．個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
実施形態１から５４および８２から１０３のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される抗原提示細胞を個体に投与するステップを含む、方法。
実施形態１から５４および８２から１０３のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される抗原提示細胞を個体に投与するステップを含む、方法。
実施形態１２４．個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
実施形態５５から８１および１０４から１２０のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される樹状細胞を個体に投与するステップを含む、方法。
実施形態５５から８１および１０４から１２０のいずれか１つに記載のプロセスによって調製される樹状細胞を個体に投与するステップを含む、方法。
当業者は、いくつかの実施形態が、本発明の範囲および精神の中で可能であることを認識するであろう。ここで、本発明を、以下の非限定的な実施例を参照しながら、より詳細に記載する。以下の実施例は、本発明を、さらに例示するが、当然ながら、いかなる形であれ、その範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
（実施例１）
（実施例１）
抗原特異的Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、ある特定の共刺激分子の過剰発現（または上方調節）により増強され得るのかどうかを決定するために、初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団に、ＣＤ８０および／またはＣＤ８６を上方調節する薬剤を負荷し、レスポンダー細胞によるＩＦＮ－γの分泌を、ＥＬＩＳＡにより測定する。
初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離する（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。具体的には、ＯＶＡタンパク質、ならびにＣＤ８０およびＣＤ８６のｍＲＮＡの各々１０～５０μＭを、ＳＱＺにより、細胞内に送達し、ＥＬＩＳＡにより測定される、ＩＦＮ－γのレベルを、ＳＱＺ条件と対照との間で比較し、この場合、ＣＤ８０およびＣＤ８６のｍＲＮＡを、ＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下で、ＰＢＭＣＡＰＣと共にインキュベートする。ＣＤ８０およびＣＤ８６の上方調節は、フローサイトメトリーによりアッセイすることができる。次いで、ＰＢＭＣＡＰＣを、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共に、１：１の刺激因子：エフェクター比で共培養し、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）の非存在下または存在下で培養する。１８時間後、上清を、各条件から採取し、ＩＦＮ－γの産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）により評価することができる。
代替的実験では、ＣＤ８０およびＣＤ８６のｍＲＮＡの代わりに、上方調節は、ＳＱＺを使用する、ＣＤ８０およびＣＤ８６のプラスミドＤＮＡの負荷、ならびに／またはＣＤ８０およびＣＤ８６のための、一本鎖オリゴヌクレオチドドナー鋳型とカップリングした、遺伝子編集複合体の負荷による、ＣＲＩＳＰＲ相同性指向修復を使用することにより達成することができる。ＳＱＺを使用する、類似の方法、すなわち、ＩＬ－２のｍＲＮＡ、プラスミドＤＮＡの負荷を使用する、および／またはＩＬ－２のための、一本鎖オリゴヌクレオチドドナー鋳型とカップリングした、遺伝子編集複合体の負荷による、ＣＲＩＳＰＲ相同性指向修復を使用するさらなる実験を行って、抗原特異的Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、ＩＬ－２の上方調節によりさらに増強され得るのかどうかについて評価する。
（実施例２）
（実施例２）
混合ＰＢＭＣＡＰＣにより誘発される、抗原特異的免疫応答が、混合ＰＢＭＣ内の、単球の亜集団中の、Ｍ１マクロファージ表現型の促進により、さらに増強され得るのかどうかを決定するために、初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団に、ＴＬＲ４（ＬＰＳの標的）、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－１２の発現を上方調節する薬剤を負荷し、抗原特異的免疫応答を、抗原特異的Ｔ細胞の細胞傷害性について、ＩＦＮ－γの産生、四量体染色またはフローサイトメトリーにより測定することができる。
初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離する（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。具体的には、ＯＶＡタンパク質、ならびにＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、および／またはＩＬ－１２のｍＲＮＡの各々１０～５０μＭを、ＳＱＺにより、細胞内に送達し、ＩＦＮ－γ産生、四量体アッセイまたはＴ細胞媒介性細胞傷害性により測定される、抗原特異的免疫応答のレベルを、ＳＱＺ条件と対照との間で比較し、この場合、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、および／またはＩＬ－１２のｍＲＮＡを、ＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下で、ＰＢＭＣＡＰＣと共にインキュベートする。ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、および／またはＩＬ－１２の上方調節は、フローサイトメトリー（ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γの細胞内染色）またはＥＬＩＳＡ（ＩＦＮ－γ分泌、ＩＬ－１２）によりアッセイすることができる。次いで、ＰＢＭＣＡＰＣを、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共に、１：１の刺激因子：エフェクター比で共培養し、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）の非存在下または存在下で培養することができる。１８時間後、上清を、各条件から採取し、ＩＦＮ－γの産生のレベルを、ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡ（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）により評価することができる。
代替的実験では、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、および／またはＩＬ－１２のｍＲＮＡの代わりに、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、およびＩＬ－１２の上方調節は、ＳＱＺを直接使用する、ＴＬＲ４、ＩＦＮ－γ、および／またはＩＬ－１２のタンパク質の負荷により達成することができる。
（実施例３）
（実施例３）
抗原特異的Ｔ細胞を活性化し、抗原特異的Ｔ細胞の毒性を誘導する、抗原提示細胞の能力が、ある特定の免疫チェックポイント調節因子の阻害または下方調節により増強され得るのかどうかを決定するために、初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団に、ＰＤ－１を阻害または下方調節する薬剤を負荷し、抗原特異的Ｔ細胞の細胞傷害性を、共培養後に、フローサイトメトリーにより測定する。
初代ヒト混合ＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離する（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。具体的には、ＯＶＡタンパク質、およびＰＤ－１に対するｓｈＲＮＡの各々１０～５０μＭを、ＳＱＺにより、細胞内に送達し、フローサイトメトリーにより測定される、Ｔ細胞媒介性細胞傷害性のレベルを、ＳＱＺ条件と対照との間で比較し、この場合、ＰＤ－１ ｓｈＲＮＡを、ＳＱＺ化（Ｅｎｄｏ）の非存在下で、ＰＢＭＣＡＰＣと共にインキュベートする。ＰＤ－１の下方調節は、フローサイトメトリーによりアッセイすることができる。次いで、ＰＢＭＣＡＰＣを、ＯＶＡ特異的ＣＤ８＋レスポンダー細胞と共に、１：１の刺激因子：エフェクター比で共培養し、ＩＬ－２（１００Ｕ／ｍＬ）の非存在下または存在下で培養する。１８時間後、抗原特異的Ｔ細胞の活性化および抗原特異的Ｔ細胞の毒性における、ＰＢＭＣＡＰＣの効果を、四量体染色およびフローサイトメトリーによりアッセイすることができる。
代替的実験では、ＰＤ－１ ｓｈＲＮＡの代わりに、ＰＤ－１の阻害を、小分子阻害剤のＳＱＺ負荷により達成することができるか、またはＰＤ－１の下方調節を、ＳＱＺを使用する、ＰＤ－１ ｓｉＲＮＡもしくはＣＲＩＰＳＲ、ＺＦＮ、およびＴＡＬＥＮＳなどの遺伝子編集酵素もしくは複合体のうちの１つもしくは複数の負荷により達成することができる。
（実施例４）
（実施例４）
本実施例は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて、抗原特異的Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、ある特定の共刺激分子の過剰発現（または上方調節）により増強され得ることを、部分的に示す。
材料および方法
材料および方法
抗原特異的Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、共刺激分子の過剰発現により増強され得るのかどうかを決定するために、ＳＱＺを使用して、ＯＶＡ抗原を、ＩＬ－２のｍＲＮＡまたはＩＬ－１２のｍＲＮＡのいずれかと共に、樹状細胞に送達した後、ＯＶＡ特異的ＯＴ－Ｉ細胞と共に共培養し、引き続きＥＬＩＳＡを使用してＩＦＮ－γの分泌を測定した。具体的には、－８日目に、骨髄由来マウスＤＣ（ＢＭＤＣ）を、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウスから採取し、完全成長ＲＭＰＩ １６４０＋２－メルカプトエタノール（５５μＭ）、組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）、および組換えマウスＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍＬ）を含有する培養培地中で維持した。－５日目に、２倍濃度の２－メルカプトエタノール、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＩＬ－４を保有する、半容量のＲＰＭＩを添加することにより、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を補充した（補充）。－１日目に、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４の補充を繰り返した。０日目に、ＢＭＤＣを回収し、ＬＰＳ（１００ＥＵ／ｍＬ）およびＩＦＮ－γ（１００ｎｇ／ｍＬ）中、３７℃で、１５分間ごとに撹拌しながら、１時間成熟させた。その後、成熟ＢＭＤＣを、１０μｇ／ｍＬのＯｖａタンパク質と共にインキュベートする（Ｏｖａのエンドサイトーシス）か、Ｏｖａだけ（５μｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷するか、ＩＬ－２のｍＲＮＡだけ（５０μｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷するか、ＩＬ－１２のｍＲＮＡだけ（５０μｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷するかまたは（ｉ）ＯｖａおよびマウスＩＬ－２のｍＲＮＡ、もしくは（ｉｉ）ＯＶＡおよびマウスＩＬ－１２のｍＲＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）のいずれかをＳＱＺ負荷した。陽性対照として、ＢＭＤＣを、Ｏｖａ最小エピトープを含有するペプチドで、パルス処理した（ＳＩＩＮＦＥＫＬによるパルス）。次いで、上記の通りにプロセシングされたＢＭＤＣを、精製ＯＴ－Ｉ細胞と共に、１：１０の比において、三連で共培養した。共培養の１日後、上清を回収し、ＩＦＮ－γの分泌を、ＥＬＩＳＡにより測定したところ、その結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、共刺激分子の過剰発現を伴うかまたは伴わずに、抗原負荷ＢＭＤＣにより刺激された、抗原特異的Ｔ細胞応答の量を示す。
結果
結果
ＩＦＮ－γ ＥＬＩＳＡの結果は、ＳＱＺによりＯｖａを送達されたＢＭＤＣ（ＯｖａのＳＱＺ）により誘導されるＯｖａ特異的応答の増加が、Ｏｖａと共にインキュベートされたＢＭＤＣと比較して、小幅であったのに対し；ＳＱＺによりＯｖａおよびＩＬ－１２のｍＲＮＡを共送達されたＢＭＤＣ内の、Ｏｖａ特異的応答は、Ｏｖａだけを負荷されたＢＭＤＣと比較して、大幅に大きかった（約４倍）（＊＊＊ｐ＜０．００１）（図１Ｂ）ことを示した。まとめると、これらのデータは、抗原提示細胞により誘発される、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける、抗原特異的Ｔ細胞応答が、抗原（ＯＶＡなど）のＳＱＺ負荷に加えて、ある特定の共刺激分子（ＩＬ－１２など）のＳＱＺ負荷の場合、さらに増強され得ることを示す。驚くべきことに、Ｏｖａ特異的応答の増加は、ＯｖａおよびＩＬ－２のｍＲＮＡをＳＱＺ負荷されたＢＭＤＣと、Ｏｖａだけを負荷されたＢＭＤＣとの間では、大幅に異ならなかった（図１）。
（実施例５）
（実施例５）
本実施例は、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、共刺激分子の過剰発現（または上方調節）により増強され得ることを、部分的に示す。
材料および方法
材料および方法
ＣＤ８＋Ｔ細胞応答を活性化する抗原提示細胞の能力が、共刺激分子の過剰発現により増強され得るのかどうかを決定するために、ＳＱＺを使用して、ＯＶＡ抗原、およびＩＬ－１２をコードするｍＲＮＡを、樹状細胞に共送達した後、マウスへ注射し、引き続き細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）およびフローサイトメトリーを使用してＣＤ８＋Ｔ細胞応答について解析した。具体的には、－８日目に、骨髄由来マウスＤＣ（ＢＭＤＣ）を、Ｃ５６ＢＬ／６Ｊマウスから採取し、完全成長ＲＭＰＩ １６４０＋２－メルカプトエタノール（５５μＭ）、組換えマウスＧＭ－ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍＬ）、および組換えマウスＩＬ－４（１０ｎｇ／ｍＬ）を含有する培養培地中で維持した。－５日目に、２倍濃度の２－メルカプトエタノール、ＧＭ－ＣＳＦ、およびＩＬ－４を保有する、半容量のＲＰＭＩを添加することにより、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４を補充した（補充）。－１日目に、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４の補充を繰り返した。０日目に、ＢＭＤＣを回収し、ＬＰＳ（１００ＥＵ／ｍＬ）およびＩＦＮ－γ（１００ｎｇ／ｍＬ）中、３７℃で、１５分間ごとに撹拌しながら、１時間成熟させた。その後、成熟ＢＭＤＣを、１０μｇ／ｍＬのＯｖａタンパク質と共にインキュベートする（Ｏｖａのエンドサイトーシス）か、Ｏｖａだけ（５μｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷するかまたはＯｖａおよびマウスＩＬ－１２のｍＲＮＡ（５０μｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷した。陽性対照として、ＢＭＤＣを、Ｏｖａ最小エピトープを含有するペプチドで、パルス処理した（ＳＩＩＮＦＥＫＬによるパルス）。次いで、プロセシングされたＢＭＤＣを、それぞれのレシピエントマウス（マウス１匹当たりの３Ｅ７細胞／マウス；５匹のマウス／群）に注射した。７日間後、脾臓細胞を採取し、Ｏｖａ最小エピトープ（ＳＩＩＮＦＥＫＬ）により、再抗原投与し、ＩＦＮ－γを、細胞内サイトカイン染色（ＩＣＳ）により測定し、フローサイトメトリーを使用して定量した（図２Ａ）。ＩＦＮ－γ ＩＣＳの定量は、ｉｎ ｖｉｖｏにおける、共刺激分子の過剰発現を伴うかまたは伴わずに、抗原負荷ＢＭＤＣにより刺激された、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答の量を示す。
結果
結果
ＩＦＮ－γ ＩＣＳ解析は、ＯｖａをＳＱＺにより負荷されたＢＭＤＣ（ＯｖａだけのＳＱＺ）により誘導されるＣＤ８＋Ｔ細胞応答の増加が、Ｏｖａと共にインキュベートされたＢＭＤＣと比較して、小幅であったのに対し；ＯｖａおよびＩＬ－１２のｍＲＮＡをＳＱＺにより負荷されたＢＭＤＣ内の応答は、Ｏｖａだけを負荷されたＢＭＤＣと比較して大きかった（約２倍）（＃Ｐ＜０．００５）（図２Ｂ）ことを示した。まとめると、これらのデータは、抗原提示細胞により誘発される、ＣＤ８＋Ｔ細胞応答が、抗原（ＯＶＡなど）のＳＱＺ負荷に加えて、共刺激分子（ＩＬ－１２など）のＳＱＺ負荷の場合、さらに増強され得ることを示す。
（実施例６）
（実施例６）
樹状細胞（ＤＣ）は、ＤＣがそれらのコグネイトＴ細胞に遭遇する確率が最も高い、リンパ節（ＬＮ）内で、Ｔ細胞応答を、最も効率的にプライミングする。この理由で、抗原をＳＱＺ負荷されたＤＣは、ワクチン接種後において、ＤＣのＬＮへのトラフィッキングを改善した、より強力なＴ細胞応答をプライミングし得る。この仮説を査定するために、ＳＱＺ負荷ＤＣを、静脈内（ＩＶ）投与またはリンパ節内（ｉＬＮ）投与し、Ｔ細胞応答の大きさを、２つの投与経路の間で比較した。
材料および方法
材料および方法
ＤＣを、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４中で、８日間、マウス骨髄から分化させた。分化の８日目に、ＤＣを、ＬＰＳおよびＩＦＮｇ中で、１時間成熟させ、次いで、５ｕｇ／ｍＬのオボアルブミンタンパク質（ＯＶＡ）を、ＳＱＺ負荷した。次いで、これらの、ＳＱＺ負荷ＤＣを、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、ＩＶ注射またはｉＬＮ注射のいずれかにより、２つの異なる用量（１Ｍ／マウスまたは５００ｋ／マウス）で投与した。７日間後、脾臓を、ワクチン接種されたマウスから採取し、脾臓細胞の単一細胞懸濁液を生成した（図３Ａ）。次いで、これらの脾臓細胞を、ｅｘ ｖｉｖｏにおいて、ＯＶＡと関連する、公知のＨ－２ｋｂ拘束性ＣＤ８ Ｔ細胞エピトープである、１ｕｇ／ｍＬのＳＩＩＮＦＥＫＬで再刺激した。再刺激の１時間後、タンパク質輸送阻害剤（ＧＯＬＧＩＰＬＵＧ（商標）およびＧＯＬＧＩＳＴＯＰ（商標））を添加して、サイトカインの分泌を防止し、刺激後における、細胞内のそれらの蓄積を可能とした。次いで、培養のさらに４時間後、脾臓細胞を採取し、細胞内サイトカイン染色のためにプロセシングして、ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ８ Ｔ細胞の同定、およびこの細胞集団中のＩＦＮ－γ応答の検出を可能とした。
結果
結果
図３Ｂに示される通り、いずれの用量においても、ＳＱＺ負荷ＤＣのｉＬＮ投与は、ＩＶ投与よりも抗原特異的なＣＤ８ Ｔ細胞を結果としてもたらした。ｉＬＮ投与により達成された応答は、ＩＶ投与により達成される応答の３．６～４．７倍の範囲であった。これらの結果は、抗原をＳＱＺ負荷されたＤＣによる、ＤＣのＬＮへのトラフィッキングの改善が、より強力なＴ細胞応答がプライミングされることを可能としえたことを示唆する。
（実施例７）
（実施例７）
樹状細胞（ＤＣ）は、ＤＣがそれらのコグネイトＴ細胞に遭遇する確率が最も高い、リンパ節（ＬＮ）内で、Ｔ細胞応答を、最も効率的にプライミングする。この理由で、抗原を負荷されたＤＣは、ワクチン接種後において、ＤＣのＬＮへのトラフィッキングを改善した、より強力なＴ細胞応答をプライミングし得る。ＣＤ６２Ｌおよび／またはＣＣＲ７など、ある特定のホーミング分子の過剰発現は、ＬＮへのトラフィッキングを改善する一助となり得る。ＣＤ６２Ｌが、リンパ球を血液から高内皮細動脈を介して二次リンパ組織へと侵入させるのに対し、ＣＣＲ７は、リンパ球を脾臓およびＬＮのＴ細胞域へとトラフィッキングさせる。本研究では、ＤＣに、ＣＤ６２Ｌ ｍＲＮＡまたはＣＣＲ７ ｍＲＮＡのそれぞれを、ＳＱＺ負荷して、ＳＱＺ媒介性負荷が、これらのホーミング分子のより高い発現レベルを容易とし得るのかどうかについて調査した。
材料および方法
材料および方法
ＤＣを、ＧＭ－ＣＳＦおよびＩＬ－４中で、８日間、マウス骨髄から分化させた。分化の８日目に、ＤＣに、１００ｕｇ／ｍＬの、ＣＤ６２ＬコードｍＲＮＡまたはＣＣＲ７コードｍＲＮＡを、ＳＱＺ負荷した。フローサイトメトリーを使用して、ＳＱＺの４時間後および２４時間後に、ＣＤ６２ＬおよびＣＣＲ７の表面発現について査定した（図４Ａ）。
結果
結果
ＣＤ６２Ｌ ｍＲＮＡをＳＱＺ負荷されたＤＣは、非処理ＤＣ、および無関係のｍＲＮＡ構築物をＳＱＺ負荷されたＤＣよりも高いＣＤ６２Ｌの発現を示した（図４Ｂ）。ＳＱＺの４時間後、ＣＤ６２Ｌの発現は、ＣＤ６２Ｌ ｍＲＮＡ ＳＱＺ群では、他の陰性対照群と比較した場合、３倍となった。２４時間後、ＣＤ６２Ｌは、非処理、および無関係ｍＲＮＡ処理ＤＣ内の発現が、自然に増加していると考えられた。にもかかわらず、ＣＤ６２Ｌ ｍＲＮＡをＳＱＺ負荷されたＤＣは、対照と比較して、ＣＤ６２Ｌ発現の約１．５倍の増強を依然として示した。これらの結果は、ＳＱＺ媒介性負荷が、ｍＲＮＡ送達を介する、ホーミング分子の発現の増強を達成するのに使用され得ることを示す（図４Ｂ）。他方、ＣＣＲ７ ｍＲＮＡのＳＱＺ負荷によるＣＣＲ７発現の増強は、非処理対照、および無関係のｍＲＮＡ対照に対して、ＳＱＺの４時間後の時点だけにおいて観察された（図４Ｃ）。２４時間後までに、すべてのＳＱＺ群は、カーゴに関わらず、同様の、ＣＣＲ７の表面発現を示した（図４Ｃ）。
（実施例８）
（実施例８）
樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞の成熟は、Ｔリンパ球の活性化において、重要な役割を果たす共刺激分子である、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３などの表現型成熟リガンドを伴う。４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬまたはＣＤ１３７Ｌ）は、Ｔ細胞の活性化を媒介する、共刺激リガンドである。ＩＦＮ－α２などのインターフェロンは、樹状細胞など、抗原提示細胞の分化および成熟において、重要な役割を果たす。本研究では、ＰＢＭＣに、ＣＤ８６ ｍＲＮＡまたはＩＦＮ－α２ ｍＲＮＡのそれぞれをＳＱＺ負荷して、ＳＱＺ媒介性負荷が、ＰＢＭＣの異なるサブセット内で、これらの分子のより高い発現レベルを容易とし得るのかどうかについて調査した。
材料および方法
材料および方法
初代ヒトＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離した（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。ＰＢＭＣを、非処理のまま（ＮＣ）にするか；室温において、空のペイロードでＳＱＺプロセシングする（空のＳＱＺ）するか、またはＰＢＭＣにＣＤ８６をコードするｍＲＮＡ（１００ｕｇ／ｍＬ）もしくはＩＦＮα２をコードするｍＲＮＡ（１００ｕｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷した。ＳＱＺプロセシングの４時間後、負荷したＰＢＭＣを、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ８６＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）、および単球（ＣＤ１４＋）の組成、ならびにＣＤ８６のそれぞれの表面発現について、フローサイトメトリーを介して解析した。ＩＦＮ－α２の発現を測定するために、細胞を、４時間、ＧＯＬＧＩＰＬＵＧ（商標）またはＧＯＬＧＩＳＴＯＰ（商標）と共にインキュベートして、分泌を阻害した。次いで、蓄積されたＩＦＮ－α２について、細胞内染色により解析した。
結果
結果
図５Ａに示される通り、ＣＤ８６ ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ８６＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）内の、表面ＣＤ８６発現を提示する細胞の量を、非処理ＰＢＭＣ、および空のペイロードでＳＱＺプロセシングされたＰＢＭＣと比較して、大幅に増加させた。単球（ＣＤ１４＋）は、ＣＤ８６を固有に発現し、ＣＤ８６ ｍＲＮＡのＳＱＺ負荷は、表面発現を大幅にはモジュレートしなかった（図５Ａ）。図５Ｂに示される通り、ＣＤ８６ ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、Ｔ細胞（ＣＤ８６＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ５６＋）、および単球（ＣＤ１４＋）の、すべてのサブセット内の、細胞内ＩＦＮ－α２発現を提示する細胞の量を、非処理ＰＢＭＣおよび空のペイロードでＳＱＺプロセシングされたＰＢＭＣと比較して、大幅に増加させた。
（実施例９）
（実施例９）
樹状細胞（ＤＣ）などの抗原提示細胞の成熟は、Ｔリンパ球の活性化において、重要な役割を果たす共刺激分子である、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３などの表現型成熟リガンドを伴う。４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬまたはＣＤ１３７Ｌ）は、Ｔ細胞の活性化を媒介する、共刺激リガンドである。過剰発現させると、これらの共刺激分子（例えば、ＣＤ８６、４－１ＢＢＬ）は、抗原提示細胞の成熟および／または機能を改善し得る。本研究では、ＰＢＭＣに、ＣＤ８６および４－１ＢＢＬ ｍＲＮＡのそれぞれを、ＳＱＺ負荷して、これらの共刺激分子をコードするｍＲＮＡをＳＱＺプロセシングにより送達した後の経時的表面発現レベルについて調査した。
材料および方法
材料および方法
初代ヒトＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離した（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。ＰＢＭＣを、室温において、空のペイロードでＳＱＺプロセシングする（空のＳＱＺ負荷）するか、またはＰＢＭＣにＣＤ８６をコードするｍＲＮＡもしくは４－１ＢＢＬをコードするｍＲＮＡ（１００ｕｇ／ｍＬ）のいずれかをＳＱＺ負荷した。ＳＱＺプロセシングの後、ＰＢＭＣを、ＣＤ８６または４－１ＢＢＬの表面発現について、フローサイトメトリーを介して、経時的（４時間、２４時間、４８時間、および７２時間）に解析した。
結果
結果
図６Ａに示される通り、ＣＤ８６ ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、ＳＱＺプロセシングの４時間後および２４時間後において、表面ＣＤ８６発現を提示するＴ細胞サブセット（ＣＤ３＋）の量を、空のペイロードでＳＱＺプロセシングされたＰＢＭＣ（０％）と比較して大幅に増加させた（＞５０％）。ＳＱＺ負荷Ｔ細胞サブセット内の、ＣＤ８６＋細胞の量は、ＳＱＺプロセシングの２４時間後および７２時間後に、わずかに漸減したが、ＰＢＭＣのうちの約３０％は、依然として、表面ＣＤ８６発現を提示した。図６Ｂに示される通り、４－１ＢＢＬ ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、ＳＱＺプロセシングの４時間後において、表面ＣＤ８６発現を提示するＴ細胞サブセット（ＣＤ３＋）の量を、空のペイロードでＳＱＺプロセシングされたＰＢＭＣ（０％）と比較して増加させた（＞２０％）。しかし、ＳＱＺプロセシングの７２時間後、表面４－１ＢＢＬを提示したＰＢＭＣは、２％未満であった。これらの結果は、ｍＲＮＡのＳＱＺ負荷により誘導される、タンパク質発現の程度および持続時間が、異なる候補ｍＲＮＡにより変動したことを示す。
（実施例１０）
（実施例１０）
ｍＲＮＡの修飾が、ＳＱＺ負荷によるｍＲＮＡの送達の後における翻訳効率に影響を及ぼし得るかどうかを決定するために、ヒトＰＢＭＣに、未改変ｅＧＦＰまたは５－メトキシウリジン骨格（５ｍｏｕ）で改変されたｅＧＦＰを、ＳＱＺ負荷した。
材料および方法
材料および方法
初代ヒトＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離した（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。ＰＢＭＣを、室温において、多様なｍＲＮＡ濃度（０～２００ｕｇ／ｍＬ）で、未改変ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡまたは５ｍｏｕ改変ｅＧＦＰをコードするｍＲＮＡのいずれかで、ＳＱＺプロセシングした。ＳＱＺプロセシングの後、ＰＢＭＣを、フローサイトメトリーを使用する、平均蛍光強度（ＭＦＩ）を介して、ｅＧＦＰ発現について解析した。
結果
結果
図７に示される通り、ｅＧＦＰまたは５ｍｏｕ－ｅＧＦＰ ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、Ｔ細胞サブセット（ＣＤ３＋）内のＭＦＩを増加させた。ｅＧＦＰまたは５ｍｏｕ－ｅＧＦＰのいずれかについて、ＭＦＩは、ＳＱＺプロセシングで使用されるｍＲＮＡ濃度が増加するにつれて増加した。しかし、被験濃度では、ｅＧＦＰのＳＱＺ負荷によりもたらされるＭＦＩの増加は、５ｍｏｕ－ｅＧＦＰのＳＱＺ負荷による場合より大きいことから、ｍＲＮＡの５ｍｏｕ修飾は、ＳＱＺ媒介性送達の後における翻訳を増強しなかったことが示される。
（実施例１１）
（実施例１１）
サイトカインの、抗原提示細胞内のＳＱＺ負荷が、サイトカインの発現および／または分泌を増加させ得るのかどうかについて研究するために、ＰＢＭＣに、ＩＬ－２、ＩＦＮαまたはＩＬ－１２ａのｍＲＮＡをそれぞれＳＱＺ負荷した。
材料および方法
材料および方法
初代ヒトＰＢＭＣ集団を、複数のヒトドナーから単離した（１０Ｍ細胞／ｍＬ）。ＰＢＭＣを、室温において、非処理のまま（ＮＣ）にするか、空のペイロードでＳＱＺプロセシングする（空のＳＱＺ負荷）するかまたはＩＬ－１２をコードするｍＲＮＡ（５０ｕｇ／ｍＬのＩＬ－１２α ｍＲＮＡ＋５０ｕｇ／ｍＬのＩＬ－１２β）、ＩＦＮαをコードするｍＲＮＡ（１００ｕｇ／ｍＬ）またはＩＬ－２をコードするｍＲＮＡ（１００ｕｇ／ｍＬ）をＳＱＺ負荷した。ＳＱＺプロセシングの後、ＰＢＭＣを、３７℃で、４時間インキュベートした。上清を回収し、ＥＬＩＳＡにより、ＩＬ－１２、ＩＦＮαまたはＩＬ－２の発現を測定した。
結果
結果
図８Ａ、８Ｂ、および８Ｃに示される通り、ＩＬ－２、ＩＦＮαまたはＩＬ－１２ａのｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内のＳＱＺ負荷は、ＳＱＺプロセシングされたＰＢＭＣによる、ＩＬ－２、ＩＦＮαまたはＩＬ－１２ａの、それぞれの上清への分泌を大幅に増加させた。これらの結果は、ｍＲＮＡの、ＰＢＭＣ内の、ＳＱＺ媒介性送達が、サイトカインの発現および分泌を増加させるのに使用され得ることを示した。
Claims (124)
- 抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 前記抗原提示細胞の腫瘍ホーミングを増強する前記薬剤が、ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項１に記載の方法。
- ＣＸＣＲ３、ＣＣＲ５、ＶＬＡ－４またはＬＦＡ－１のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項２に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項３に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項３に記載の方法。
- 抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗アポトーシス剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記抗アポトーシス剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 前記抗アポトーシス剤が、ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２、またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項６に記載の方法。
- ＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１／２、サバイビン、リビン、ｃＦＬＩＰ、Ｈｓｐ７２またはＨｓｐ９０のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項７に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項８に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項８に記載の方法。
- 抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングを増強する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングを増強する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 抗原プロセシングを増強する前記薬剤が、ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項１１に記載の方法。
- ＬＭＰ２、ＬＭＰ７、ＭＥＣＬ－１またはβ５ｔのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項１２に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項１３に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項１３に記載の方法。
- 抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 抗原プロセシングおよび／またはＭＨＣ分子上への負荷を増強する前記薬剤が、ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項１６に記載の方法。
- ＴＡＰ、Ｔａｐａｓｉｎ、ＥＲＡＡＰ、Ｃａｌｒｅｔｉｃｕｌｉｎ、Ｅｒｐ５７またはＰＤＩのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項１７に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項１８に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項１８に記載の方法。
- 抗原提示細胞の免疫活性をモジュレートするための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、免疫活性をモジュレートする薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、免疫活性をモジュレートする前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 免疫活性をモジュレートする前記薬剤が、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項２１に記載の方法。
- Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、またはＩＩＩ型インターフェロンのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項２２に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項２３に記載の方法。
- 免疫活性をモジュレートする前記薬剤が、インターフェロンベータの発現を下方調節する、請求項２１に記載の方法。
- インターフェロンベータの発現を下方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、請求項２５に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項２３に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項２３に記載の方法。
- 抗原提示細胞の生存能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記抗原提示細胞の生存能を増強する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記抗原提示細胞の生存能を増強する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - 前記抗原提示細胞の生存能を増強する前記薬剤が、セルピンの発現を上方調節する、請求項２９に記載の方法。
- セルピンの発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項３０に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項３１に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項３１に記載の方法。
- 抗原提示細胞の機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する前記薬剤が、ＣＣＬ２の発現を上方調節する、請求項３４に記載の方法。
- ＣＣＬ２の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項３５に記載の方法。
- ホーミングを増強するおよび／または選択的ホーミングを誘発する前記薬剤が、ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項３４に記載の方法。
- ＣＤ６２Ｌ、ＣＣＲ２、ＣＣＲ７、ＣＸ３ＣＲ１、またはＣＸＣＲ５のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体のうちの１つまたは複数を含む、請求項３７に記載の方法。
- 前記薬剤が、前記増強された抗原提示細胞のリンパ節へのホーミングを増強する、請求項３７または３８に記載の方法。
- 前記抗原提示細胞が樹状細胞である、請求項３９に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項３６および３８から４０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項３６および３８から４０のいずれか一項に記載の方法。
- 抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞を活性化する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞を活性化する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - Ｔ細胞を活性化する前記薬剤が、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項４３に記載の方法。
- ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）、ＯＸ４０（ＣＤ１３４）／ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲまたはＩＣＯＳのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項４４に記載の方法。
- Ｔ細胞を活性化する前記薬剤が、ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項４３に記載の方法。
- ＣＤ７０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０Ｌ、４－１ＢＢＬ（ＣＤ１３７Ｌ）、ＯＸ４０Ｌ（ＣＤ２５２）、ＧＩＴＲＬまたはＩＣＯＳＬのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項４６に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項４５または４７に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項４５または４７に記載の方法。
- 抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強するための方法であって、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、Ｔ細胞の阻害を下方調節する薬剤が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、Ｔ細胞の阻害を下方調節する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートし、それによって、増強された抗原提示細胞を生成するステップと
を含む、方法。 - Ｔ細胞の阻害を下方調節する前記薬剤が、ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する、請求項５０に記載の方法。
- ＬＡＧ３、ＶＩＳＴＡ、ＴＩＭ１、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）またはＢＴＬＡのうちの１つまたは複数の発現を下方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、請求項５１に記載の方法。
- 前記核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項５２に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項５２に記載の方法。
- 単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＤＣの形成を促進する薬剤が前記単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球を、ＤＣの形成を促進する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。 - ＤＣの形成を促進する前記薬剤が、ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項５５に記載の方法。
- ＰＵ．１、Ｆｌｔ３、Ｆｌｔ３ＬまたはＧＭＣＳＦのうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項５６に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項５７に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項５７に記載の方法。
- 単球または単球－樹状細胞前駆細胞からの形質細胞様ＤＣ（ｐＤＣ）形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣの形成を促進する薬剤が前記単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣの形成を促進する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。 - ｐＤＣの形成を促進する前記薬剤が、Ｅ２－２の発現を上方調節する、請求項６０に記載の方法。
- Ｅ２－２の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項６１に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項６２に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項６２に記載の方法。
- 単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する薬剤が前記単球に入り込むのに十分大きな前記インプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。 - ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣの形成を促進する前記薬剤が、Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項６５に記載の方法。
- Ｂａｔｆ３、ＩＲＦ８またはＩｄ２のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項６６に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項６７に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項６７に記載の方法。
- 単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのＣＤ１１ｂ＋ＤＣ形成を促進するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する薬剤が前記単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。 - ＣＤ１１ｂ＋ＤＣの形成を促進する前記薬剤が、ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する、請求項７０に記載の方法。
- ＩＲＦ４、ＲＢＪ、ＭｇＩまたはＭｔｇ１６のうちの１つまたは複数の発現を上方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質または核酸－タンパク質複合体である、請求項７１に記載の方法。
- 前記核酸が、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項７２に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項７２に記載の方法。
- 単球または単球－樹状細胞前駆細胞からのｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害するための方法であって、
ａ）インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する薬剤が前記単球または単球－樹状細胞前駆細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット単球の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞を、ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する前記薬剤と、前記薬剤を前記摂動したインプット単球または単球－樹状細胞前駆細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む、方法。 - ｐＤＣおよび古典的ＤＣの形成を阻害する前記薬剤が、ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する、請求項７５に記載の方法。
- ＳＴＡＴ３および／またはＸｂｐ１の発現を下方調節する前記薬剤が、核酸、タンパク質、ペプチド、核酸－タンパク質複合体または小分子である、請求項７６に記載の方法。
- 前記核酸が、ｓｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、請求項７７に記載の方法。
- 前記核酸－タンパク質複合体が、相同組換えのためのｓｓＯＤＮを含むかまたは含まない遺伝子編集複合体である、請求項７７に記載の方法。
- 前記薬剤を含む前記単球または単球－樹状細胞前駆細胞が、樹状細胞（ＤＣ）に分化する、請求項５５から７９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＤＣが、ｐＤＣ、ＣＤ８ａ＋／ＣＤ１０＋ＤＣ、および／またはＣＤ１１ｂ＋ＤＣである、請求項８０に記載の方法。
- 前記抗原提示細胞が抗原をさらに含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、前記抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する前記薬剤が前記細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、送達される、請求項８２に記載の方法。
- 前記抗原が、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記抗原が前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記抗原と、前記抗原を前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、前記抗原提示細胞に送達される、請求項８３に記載の方法。 - 前記抗原提示細胞が、アジュバントをさらに含む、請求項１から５４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アジュバントが、前記抗原が前記細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、および／または前記抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する前記薬剤が前記細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される、請求項８５に記載の方法。
- 前記アジュバントが、
ａ）インプット抗原提示細胞を含む細胞懸濁液を、細胞変形狭窄部であって、その直径が前記懸濁液中の前記インプット抗原提示細胞の直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記アジュバントが前記抗原提示細胞に入り込むのに十分大きな前記インプット抗原提示細胞の摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット抗原提示細胞を、前記アジュバントと、前記アジュバントを前記摂動したインプット抗原提示細胞に侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、前記抗原提示細胞に送達される、請求項８６に記載の方法。 - 前記アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである、請求項８５から８７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である、請求項８２から８８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット抗原提示細胞の前記直径よりも小さい、請求項１から５２および８２から８９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット抗原提示細胞の前記直径の約２０％から約９９％である、請求項９０に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット抗原提示細胞の前記直径の約２０％から約６０％である、請求項９１に記載の方法。
- 前記抗原および／またはアジュバントが、前記抗原提示細胞のサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する、請求項８５から９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、前記抗原提示細胞の表面に結合している、請求項８２から９３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が疾患関連抗原である、請求項８２から９４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が腫瘍抗原である、請求項８２から９５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原がライセートに由来する、請求項８２から９６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ライセートが腫瘍ライセートである、請求項９７に記載の方法。
- 前記抗原提示細胞が末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）である、請求項１から３９および４１から５４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原提示細胞が細胞の混合集団中にある、請求項１から３９および４１から５４のいずれか一項に記載の方法。
- 細胞の前記混合集団がＰＢＭＣの集団である、請求項１００に記載の方法。
- 前記ＰＢＭＣが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、単球、マクロファージおよび／または樹状細胞である、請求項９９または１０１に記載の方法。
- 前記ＰＢＭＣが、抗原を提示するように操作されている、請求項９９、１０１または１０２に記載の方法。
- 前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが、抗原をさらに含む、請求項５５から８１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、ＤＣ形成を促進または阻害する薬剤が前記細胞に送達される前、それと同時、またはその後に、送達される、請求項１０４に記載の方法。
- 前記抗原が、
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記抗原が前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分大きな前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、前記抗原と、前記抗原を前記摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、請求項１０５に記載の方法。 - 前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣが、アジュバントをさらに含む、請求項５５から８１および１０４から１０６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記アジュバントが、前記抗原が前記細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、および／またはＤＣ形成を促進する前記薬剤が前記細胞に送達される前、それと同時、もしくはその後に、送達される、請求項１０７に記載の方法。
- 前記アジュバントが、
ａ）インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを含む細胞懸濁液を、その直径が前記懸濁液中の前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径の関数である細胞変形狭窄部に通し、それによって、前記アジュバントが前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに入り込むのに十分に大きな前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの摂動を引き起こすステップと、
ｂ）前記摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣを、前記アジュバントと、前記アジュバントを前記摂動したインプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに侵入させるのに十分な時間インキュベートするステップと
を含む方法によって、前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣに送達される、請求項１０８に記載の方法。 - 前記アジュバントが、ＣｐＧ ＯＤＮ、ＩＦＮ－α、ＳＴＩＮＧアゴニスト、ＲＩＧ－Ｉアゴニスト、ポリＩ：Ｃ、イミキモド、および／またはレシキモドである、請求項１０７から１０９のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、ＭＨＣクラスＩ拘束性ペプチドおよび／またはＭＨＣクラスＩＩ拘束性ペプチドにプロセシングすることが可能である、請求項１０６から１１０のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの直径よりも小さい、請求項５５から８１および１０４から１１１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの前記直径の約２０％から約９９％である、請求項１１２に記載の方法。
- 前記狭窄部の前記直径が、前記インプット単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの前記直径の約２０％から約６０％である、請求項１１３に記載の方法。
- 前記抗原および／またはアジュバントが、前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣのサイトゾルおよび／またはベシクル中に存在する、請求項１０４から１１４のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が、前記単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣの表面に結合している、請求項１０４から１１５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が疾患関連抗原である、請求項１０４から１１６のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原が腫瘍抗原である、請求項１０４から１１７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記抗原がライセートに由来する、請求項１０４から１１７のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ライセートが腫瘍ライセートである、請求項１１９に記載の方法。
- 請求項１から５４および８２から１０３のいずれか一項に記載の方法によって調製される、抗原提示細胞の生存能および／または機能を増強する薬剤を含む改変された抗原提示細胞。
- 請求項５５から８１および１０４から１２０のいずれか一項に記載の方法によって調製される、改変された単球、または単球－樹状細胞前駆体またはＤＣ。
- 個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
請求項１から５４および８２から１０３のいずれか一項に記載のプロセスによって調製される抗原提示細胞を前記個体に投与するステップを含む、方法。 - 個体における免疫応答をモジュレートするための方法であって、
請求項８０から８１および１０４から１２０のいずれか一項に記載のプロセスによって調製される樹状細胞を前記個体に投与するステップを含む、方法。
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