JP2022070946A - 抗garpタンパク質及びその使用 - Google Patents
抗garpタンパク質及びその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022070946A JP2022070946A JP2022019186A JP2022019186A JP2022070946A JP 2022070946 A JP2022070946 A JP 2022070946A JP 2022019186 A JP2022019186 A JP 2022019186A JP 2022019186 A JP2022019186 A JP 2022019186A JP 2022070946 A JP2022070946 A JP 2022070946A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- amino acid
- garp
- hgarp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 137
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 134
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims abstract description 187
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 186
- 101710169732 Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 claims abstract description 153
- 102100025946 Transforming growth factor beta activator LRRC32 Human genes 0.000 claims abstract description 153
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 claims abstract description 97
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 claims abstract description 97
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 claims abstract description 95
- 238000003881 globally optimized alternating phase rectangular pulse Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims abstract description 12
- 101710093674 Cyclic nucleotide-gated cation channel beta-1 Proteins 0.000 claims abstract 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 145
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 145
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 145
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 113
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 97
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 88
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 86
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 83
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 61
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 34
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 29
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 29
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 15
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 14
- 239000000539 dimer Substances 0.000 claims description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 13
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 11
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 229930193936 anticarin Natural products 0.000 claims description 7
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 7
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 101710088235 Envelope glycoprotein C homolog Proteins 0.000 claims description 4
- 208000026106 cerebrovascular disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 4
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037581 Persistent Infection Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 claims description 2
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 101001004924 Homo sapiens Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 description 192
- 102000052917 human LRRC32 Human genes 0.000 description 191
- 101000771075 Homo sapiens Cyclic nucleotide-gated cation channel beta-1 Proteins 0.000 description 187
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 146
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 138
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 125
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 119
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 115
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 102
- 238000000034 method Methods 0.000 description 68
- 102000046299 Transforming Growth Factor beta1 Human genes 0.000 description 57
- 101800002279 Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 57
- 101001004925 Mus musculus Transforming growth factor beta activator LRRC32 Proteins 0.000 description 38
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 38
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 37
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 32
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 32
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 31
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 31
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 31
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 31
- 230000006870 function Effects 0.000 description 25
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 24
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 24
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 23
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 21
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 21
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 21
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 21
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 18
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 18
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 16
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 16
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 15
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 14
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 14
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 14
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 14
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 13
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 13
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 13
- 230000023750 transforming growth factor beta production Effects 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 12
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 12
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 12
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 11
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 11
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 11
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 10
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 10
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 10
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 10
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 9
- 102100025751 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Human genes 0.000 description 9
- 101710143123 Mothers against decapentaplegic homolog 2 Proteins 0.000 description 9
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 8
- -1 aspartin Chemical compound 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 7
- 108091006013 HA-tagged proteins Proteins 0.000 description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 7
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 7
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 7
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 101000635938 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 proprotein Proteins 0.000 description 6
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 6
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 102100021833 Mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 6
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 6
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 6
- 102100030742 Transforming growth factor beta-1 proprotein Human genes 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 6
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 6
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 6
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 241000894007 species Species 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 6
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 5
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 5
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 5
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 5
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 5
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 5
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 5
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 5
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 102000036364 Cullin Ring E3 Ligases Human genes 0.000 description 4
- 108091007045 Cullin Ring E3 Ligases Proteins 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 101500025614 Homo sapiens Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 4
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 102100034256 Mucin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000011117 Transforming Growth Factor beta2 Human genes 0.000 description 4
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 4
- 101800000304 Transforming growth factor beta-2 Proteins 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 4
- 238000000749 co-immunoprecipitation Methods 0.000 description 4
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 4
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 4
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 4
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 4
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108010011170 Ala-Trp-Arg-His-Pro-Gln-Phe-Gly-Gly Proteins 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 229920003360 EVASIN® Polymers 0.000 description 3
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- 108010008707 Mucin-1 Proteins 0.000 description 3
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 3
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 3
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 3
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 3
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 3
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 3
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 3
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical class NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 2
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 2
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 2
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 102400000401 Latency-associated peptide Human genes 0.000 description 2
- 208000003445 Mouth Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 101500025613 Mus musculus Transforming growth factor beta-1 Proteins 0.000 description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 208000015634 Rectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 2
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 208000027585 T-cell non-Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 102000056172 Transforming growth factor beta-3 Human genes 0.000 description 2
- 108090000097 Transforming growth factor beta-3 Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 2
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 2
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 230000003305 autocrine Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 108010051081 dopachrome isomerase Proteins 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 210000002308 embryonic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 201000005206 focal segmental glomerulosclerosis Diseases 0.000 description 2
- 231100000854 focal segmental glomerulosclerosis Toxicity 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 231100000844 hepatocellular carcinoma Toxicity 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 208000012987 lip and oral cavity carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000004898 n-terminal fragment Anatomy 0.000 description 2
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N pyrene Chemical compound C1=CC=C2C=CC3=CC=CC4=CC=C1C2=C43 BBEAQIROQSPTKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010038038 rectal cancer Diseases 0.000 description 2
- 201000001275 rectum cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 2
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 2
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TUBQDCKAWGHZPF-UHFFFAOYSA-N 1,3-benzothiazol-2-ylsulfanylmethyl thiocyanate Chemical compound C1=CC=C2SC(SCSC#N)=NC2=C1 TUBQDCKAWGHZPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CDKIEBFIMCSCBB-UHFFFAOYSA-N 1-(6,7-dimethoxy-3,4-dihydro-1h-isoquinolin-2-yl)-3-(1-methyl-2-phenylpyrrolo[2,3-b]pyridin-3-yl)prop-2-en-1-one;hydrochloride Chemical compound Cl.C1C=2C=C(OC)C(OC)=CC=2CCN1C(=O)C=CC(C1=CC=CN=C1N1C)=C1C1=CC=CC=C1 CDKIEBFIMCSCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 3-[6-[4-(trifluoromethoxy)anilino]-4-pyrimidinyl]benzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC(C=2N=CN=C(NC=3C=CC(OC(F)(F)F)=CC=3)C=2)=C1 WEVYNIUIFUYDGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIIIJFZJKFXOGG-UHFFFAOYSA-N 3-methylchromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(C)=CC2=C1 VIIIJFZJKFXOGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 1
- 101710163573 5-hydroxyisourate hydrolase Proteins 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030840 AT-rich interactive domain-containing protein 4B Human genes 0.000 description 1
- 102100024322 Actin-related protein 8 Human genes 0.000 description 1
- 208000003200 Adenoma Diseases 0.000 description 1
- 206010001233 Adenoma benign Diseases 0.000 description 1
- 208000006468 Adrenal Cortex Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000012103 Alexa Fluor 488 Substances 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 1
- 206010061424 Anal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007860 Anus Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 1
- 102100035526 B melanoma antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 1
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- 101100438971 Caenorhabditis elegans mat-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100025570 Cancer/testis antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 102100027668 Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710134395 Carboxy-terminal domain RNA polymerase II polypeptide A small phosphatase 1 Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 102100026548 Caspase-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090000538 Caspase-8 Proteins 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 108010072210 Cyclophilin C Proteins 0.000 description 1
- LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N D-glyceraldehyde 3-phosphate Chemical compound O=C[C@H](O)COP(O)(O)=O LXJXRIRHZLFYRP-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000002699 Digestive System Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 206010014733 Endometrial cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010014759 Endometrial neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 1
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006168 Ewing Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102100028073 Fibroblast growth factor 5 Human genes 0.000 description 1
- 108090000380 Fibroblast growth factor 5 Proteins 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 102000001390 Fructose-Bisphosphate Aldolase Human genes 0.000 description 1
- 108010068561 Fructose-Bisphosphate Aldolase Proteins 0.000 description 1
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 1
- 101150111025 Furin gene Proteins 0.000 description 1
- 102100039717 G antigen 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710113436 GTPase KRas Proteins 0.000 description 1
- 102000000805 Galectin 4 Human genes 0.000 description 1
- 108010001515 Galectin 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100040510 Galectin-3-binding protein Human genes 0.000 description 1
- 101710197901 Galectin-3-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 101710121810 Galectin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102100031351 Galectin-9 Human genes 0.000 description 1
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 102100041003 Glutamate carboxypeptidase 2 Human genes 0.000 description 1
- 208000018565 Hemochromatosis Diseases 0.000 description 1
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000792935 Homo sapiens AT-rich interactive domain-containing protein 4B Proteins 0.000 description 1
- 101000688199 Homo sapiens Actin-related protein 8 Proteins 0.000 description 1
- 101000874316 Homo sapiens B melanoma antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000856237 Homo sapiens Cancer/testis antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000746783 Homo sapiens Cytochrome b-c1 complex subunit 6, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 101000964377 Homo sapiens DNA dC->dU-editing enzyme APOBEC-3F Proteins 0.000 description 1
- 101001057612 Homo sapiens Dual specificity protein phosphatase 5 Proteins 0.000 description 1
- 101000886137 Homo sapiens G antigen 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000892862 Homo sapiens Glutamate carboxypeptidase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 1
- 101001000302 Homo sapiens Max-interacting protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001134060 Homo sapiens Melanocyte-stimulating hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000957259 Homo sapiens Mitotic spindle assembly checkpoint protein MAD2A Proteins 0.000 description 1
- 101001131829 Homo sapiens P protein Proteins 0.000 description 1
- 101001136592 Homo sapiens Prostate stem cell antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000880770 Homo sapiens Protein SSX2 Proteins 0.000 description 1
- 101001062222 Homo sapiens Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Proteins 0.000 description 1
- 101000973629 Homo sapiens Ribosome quality control complex subunit NEMF Proteins 0.000 description 1
- 101000671653 Homo sapiens U3 small nucleolar RNA-associated protein 14 homolog A Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 108010052919 Hydroxyethylthiazole kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010027436 Hydroxymethylpyrimidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010021042 Hypopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010056305 Hypopharyngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010043496 Immunoglobulin Idiotypes Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 108010030506 Integrin alpha6beta4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 125000000393 L-methionino group Chemical group [H]OC(=O)[C@@]([H])(N([H])[*])C([H])([H])C(SC([H])([H])[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000174 L-prolyl group Chemical group [H]N1C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[C@@]1([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000000510 L-tryptophano group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2N([H])C([H])=C(C([H])([H])[C@@]([H])(C(O[H])=O)N([H])[*])C2=C1[H] 0.000 description 1
- 206010023825 Laryngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101800001155 Latency-associated peptide Proteins 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 108010006444 Leucine-Rich Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010062038 Lip neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000019298 Lipocalin Human genes 0.000 description 1
- 108050006654 Lipocalin Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 1
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 1
- 102100034216 Melanocyte-stimulating hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100038792 Mitotic spindle assembly checkpoint protein MAD2A Human genes 0.000 description 1
- 244000278455 Morus laevigata Species 0.000 description 1
- 235000013382 Morus laevigata Nutrition 0.000 description 1
- 102100025748 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710143111 Mothers against decapentaplegic homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010063954 Mucins Proteins 0.000 description 1
- 102000015728 Mucins Human genes 0.000 description 1
- 101100399890 Mus musculus Lrrc32 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000987582 Mus musculus Perforin-1 Proteins 0.000 description 1
- BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N N-acetylcarnosine Chemical compound CC(=O)NCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 BKAYIFDRRZZKNF-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 208000001894 Nasopharyngeal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010061306 Nasopharyngeal cancer Diseases 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 208000010505 Nose Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- RMINQIRDFIBNLE-NNRWGFCXSA-N O-[N-acetyl-alpha-neuraminyl-(2->6)-N-acetyl-alpha-D-galactosaminyl]-L-serine Chemical compound O1[C@H](OC[C@H](N)C(O)=O)[C@H](NC(=O)C)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]1CO[C@@]1(C(O)=O)O[C@@H]([C@H](O)[C@H](O)CO)[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C1 RMINQIRDFIBNLE-NNRWGFCXSA-N 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000036673 PRAME Human genes 0.000 description 1
- 108060006580 PRAME Proteins 0.000 description 1
- 241001282110 Pagrus major Species 0.000 description 1
- 208000000821 Parathyroid Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002471 Penile Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010034299 Penile cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100024968 Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase C Human genes 0.000 description 1
- 208000005228 Pericardial Effusion Diseases 0.000 description 1
- 208000007913 Pituitary Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000033014 Plasma cell tumor Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 241001600434 Plectroglyphidodon lacrymatus Species 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 102100036735 Prostate stem cell antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 102100037686 Protein SSX2 Human genes 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 102100029165 Receptor-binding cancer antigen expressed on SiSo cells Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100022213 Ribosome quality control complex subunit NEMF Human genes 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010088160 Staphylococcal Protein A Proteins 0.000 description 1
- 101000677856 Stenotrophomonas maltophilia (strain K279a) Actin-binding protein Smlt3054 Proteins 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101150031162 TM4SF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000024313 Testicular Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010057644 Testis cancer Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 208000024770 Thyroid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102100034902 Transmembrane 4 L6 family member 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102100040099 U3 small nucleolar RNA-associated protein 14 homolog A Human genes 0.000 description 1
- 208000006593 Urologic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000002495 Uterine Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 244000000188 Vaccinium ovalifolium Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 208000008383 Wilms tumor Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 201000002454 adrenal cortex cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000003314 affinity selection Methods 0.000 description 1
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 1
- YQMWQSMYVPLYDI-UHFFFAOYSA-N alpha-Isoaphyllin Natural products C12CCCCN2C(=O)C2C3CCCCN3CC1C2 YQMWQSMYVPLYDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 1
- 201000011165 anus cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 210000004900 c-terminal fragment Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 125000001314 canonical amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000005889 cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 239000008119 colloidal silica Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000009827 complement-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011424 computer programming method Methods 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 208000035250 cutaneous malignant susceptibility to 1 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000002254 cytotoxic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N dimagnesium;dioxido-bis[[oxido(oxo)silyl]oxy]silane Chemical compound [Mg+2].[Mg+2].[O-][Si](=O)O[Si]([O-])([O-])O[Si]([O-])=O GXGAKHNRMVGRPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000007247 enzymatic mechanism Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 description 1
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 description 1
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 description 1
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 201000008819 extrahepatic bile duct carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024519 eye neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012997 ficoll-paque Substances 0.000 description 1
- GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N fluoranthrene Natural products C1=CC(C2=CC=CC=C22)=C3C2=CC=CC3=C1 GVEPBJHOBDJJJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000002446 fucosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O1)C)* 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 1
- 210000004392 genitalia Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000043381 human DUSP5 Human genes 0.000 description 1
- 102000047119 human OCA2 Human genes 0.000 description 1
- 102000048638 human UQCRH Human genes 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 201000006866 hypopharynx cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 229940102213 injectable suspension Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 238000007919 intrasynovial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 229910052747 lanthanoid Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002602 lanthanoids Chemical class 0.000 description 1
- 206010023841 laryngeal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 210000004901 leucine-rich repeat Anatomy 0.000 description 1
- 201000006721 lip cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L lucifer yellow dye Chemical compound [Li+].[Li+].[O-]S(=O)(=O)C1=CC(C(N(C(=O)NN)C2=O)=O)=C3C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC3=C1N DLBFLQKQABVKGT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 239000000391 magnesium silicate Substances 0.000 description 1
- 229940099273 magnesium trisilicate Drugs 0.000 description 1
- 229910000386 magnesium trisilicate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019793 magnesium trisilicate Nutrition 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 208000025854 malignant tumor of adrenal cortex Diseases 0.000 description 1
- 208000026045 malignant tumor of parathyroid gland Diseases 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000013178 mathematical model Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 229940051875 mucins Drugs 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N n-(4-hydroxyphenyl)-2-(1,1,3-trioxo-1,2-benzothiazol-2-yl)acetamide Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1NC(=O)CN1S(=O)(=O)C2=CC=CC=C2C1=O PUPNJSIFIXXJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N n-tert-butyl-n-ethylnitrous amide Chemical compound CCN(N=O)C(C)(C)C AEMBWNDIEFEPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000037830 nasal cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008026 nephroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 231100000344 non-irritating Toxicity 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 201000008106 ocular cancer Diseases 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002530 pancreatic endocrine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004912 pericardial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 201000002511 pituitary cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 208000010626 plasma cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920001481 poly(stearyl methacrylate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 108020001580 protein domains Proteins 0.000 description 1
- 230000007026 protein scission Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000015347 renal cell adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000010187 selection method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 125000005630 sialyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 208000037968 sinus cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960000999 sodium citrate dihydrate Drugs 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008227 sterile water for injection Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 101150047061 tag-72 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000003120 testicular cancer Diseases 0.000 description 1
- WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine chloride Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O WGTODYJZXSJIAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940022511 therapeutic cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 201000002510 thyroid cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 108010020589 trehalose-6-phosphate synthase Proteins 0.000 description 1
- 230000002100 tumorsuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 108010014402 tyrosinase-related protein-1 Proteins 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 206010046766 uterine cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010046885 vaginal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000013139 vaginal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 210000002268 wool Anatomy 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/32—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency specific for a neo-epitope on a complex, e.g. antibody-antigen or ligand-receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/624—Disulfide-stabilized antibody (dsFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/626—Diabody or triabody
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Abstract
Description
本発明は、TGF-βシグナル伝達を阻害する、ヒト抗GARPタンパク質に関する。本発明は
また、免疫異常及び疾患、例えば癌などの治療に関する。
1990年代初期の、最初のヒト腫瘍抗原の分子同定以来、腫瘍特異的抗原が共有される癌
患者の治療的ワクチン接種の効果を評価するために、いくつかの臨床試験が遂行された(B
oon,T.らの文献、Annu.Rev.Immunol.2006、24:175-208)。腫瘍退縮の証拠は、患者の約20
%に認められ、客観的臨床応答は、5~10%に認められた。したがって、腫瘍特異的抗原の
ワクチン接種は、癌を治療するための新規の有望な治療法となる。
療用癌ワクチンの臨床有効性に対する主な制限因子は、ワクチン自体ではなく、抗腫瘍T
細胞が働かなければならない腫瘍微小環境を制御する局所因子であるように思われる。
ットである。Tregの機能不全は、自己免疫病態をもたらすのに対して、Treg機能過剰は、
癌患者における抗腫瘍免疫応答を阻害する可能性がある。Tregが免疫応答を阻害する厳密
な機構は、十分には理解されていない。
の潜在的阻害因子となる。マウスモデルでは、Tregの欠乏によって、実験腫瘍に対する免
疫応答を向上させることができる(Colomboらの文献、Nat.Rev.Cancer 2007、7:880-887)
。したがって、ヒトにおいてTregを標的にすることによって、癌に対する免疫療法の有効
性を向上させることができるであろう。
ンパ球によって産生されないこと(Stockis,J.らの文献、Eur.J.Immunol.2009、39:869-88
2)を以前に示した通り、TGF-βは、関心対象の標的となるであろう。
糸球体硬化症 (FSGS)、特発性肺線維症(IPF)、及び進行した悪性黒色腫又は腎細胞癌(RCC
)において、第1相臨床試験が実施されている(Lonning Sらの文献、Current Pharmaceuti
cal Biotechnology 2011、12:2176-2189)。治験によっては、いくらかの患者において、
有害事象が観察された。報告された主な有害反応は、メラノーマ患者における角化棘細胞
腫(KA)及び扁平上皮癌(SCC)の発生に存していた。メラノーマ患者におけるKA又はSCC病変
が、その増殖が内在性TGF-βによって阻害された前癌細胞から発生した可能性がある(Lon
ning Sらの文献、Current Pharmaceutical Biotechnology 2011、12:2176-2189)。したが
って、癌という状況では、抗TGF-β抗体の使用に関する主な関心事は、これが、内在性TG
F-βによって前癌細胞に対して発揮される腫瘍抑制効果の阻害が原因で、新しい腫瘍性病
変の出現を促進する可能性があるということである。
療を向上させるための新規戦略を提供することである。
た。pro-TGF-β1という名前の前駆体は、ホモ二量体化し、その後、プロタンパク質転換
酵素FURINによって切断される。得られた生成物は、潜在型TGF-β1と呼ばれ、ここで、C
端末断片、すなわち成熟TGF-β1は、潜在関連ペプチド(Latency Associated Peptide)す
なわちLAPとして公知であるN-末端断片と非共有的に結合されたままである。LAPは、成熟
TGF-β1がその受容体に結合するのを妨げるので、この潜在型複合体は、不活性である。
タンパク質A(glycoprotein A repetitions predominant))を介してTregの表面に結合する
ことを示す。
Tregを標的にするための新規戦略を提供することを目的とする。
本発明の一目的は、TGF-βの存在下において、反復優位糖タンパク質A(Glycoprotein A
repetitions predominant)(GARP)に結合する、タンパク質である。一実施態様では、前
記タンパク質は、TGF-βの存在下で、GARPのみと結合する。別の実施態様では、前記タン
パク質は、GARPがTGF-βと複合体形成される場合に、GARPと結合する。別の実施態様では
、前記タンパク質は、GARPとTGF-βとの複合体と結合する。
体、二量体単鎖抗体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、二量体
抗体、三量体抗体、四量体抗体からなる群から選択される抗体分子である。
ノボディからなる群から選択される抗体断片である。
チン(affitin)、アドネクチン、アトリマー、エバシン(evasin)、DARPin、アンチカリン
、アビマー、フィノマー、ヴァーサボディ(versabody)、及びデュオカリンからなる群か
ら選択される抗体模倣体である。
TGF-βシグナル伝達を阻害するタンパク質である。
プ、又はGARPが潜在型TGF-βと複合体形成されている結果として改変されたGARPのエピト
ープと結合する、抗体又はその抗原結合性断片である。
ノ酸とさらに結合する。別の実施態様では、前記抗体又はその抗原結合性断片は、配列番
号:1に示されるGARPの101残基から141残基までの1以上の残基を含むエピトープと結合す
る。
Rの少なくとも1つを含む重鎖の可変領域を有する、
又は、次のCDR:
とも1つを含む軽鎖の可変領域を有する、
又は、次のCDR:
くとも1つを含む重鎖の可変領域を有する、
前記タンパク質である、
或いはここでは、軽鎖の可変領域は、次のCDR:
5はQ又はKである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む。
次のCDR:
Rの少なくとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域は、
次のCDR:
とも1つを含む、
或いは、前記重鎖の可変領域は、次のCDR:
くとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域は、次のCDR:
5はQ又はKである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む。
む;
或いは、前記重鎖の可変領域は、次のCDR:
Rを含む;
或いは、前記重鎖の可変領域は、次のCDR:
5はQ又はKである);
又は前記配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRを
含む。
:50であり、前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号:9若しくは配列番号:51である
、又は、前記重鎖可変領域のアミノ酸配列は、配列番号:34であり、前記軽鎖可変領域の
アミノ酸配列は、配列番号:35~39;又は前記配列番号:8~9、50~51若しくは34~39と少
なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有する配列のうちの1つである。
域と、配列番号:9に若しくは配列番号:51に示される通りの軽鎖可変領域とを含む抗体に
よって、又は、配列番号:34に示される通りの重鎖可変領域と、配列番号:35~39に示され
る通りの軽鎖可変領域のうちの1つとを含む抗体によって認識される、アミノ酸配列・配
列番号:1を有するポリペプチド上のエピトープと結合する、本明細書で先に定義したタン
パク質である。
ーマによって産生された抗体又は抗原結合断片である。
るポリヌクレオチド配列である。
ドを含む発現ベクターである。
する抗体を産生するハイブリドーマ細胞株である。
得る賦形剤とを含む医薬組成物である。
ための、本明細書で先に記載した通りの医薬組成物である。一実施態様では、TGF-β関連
の障害は、炎症性疾患、慢性感染症、癌、線維症、循環器疾患、脳血管疾患(例えば虚血
発作)、及び神経変性疾患からなる群から選択される。
、又は腫瘍ワクチン若しくは免疫賦活性抗体などの別の免疫療法薬と組み合わせて投与さ
れることとなる。
の免疫賦活性抗体として投与されることとなる。
本発明では、次の用語は、次の意味を有する:「抗体」又は「免疫グロブリン」-本明細
書で使用する場合、用語「免疫グロブリン」は、関連のあるいずれかの特異的な免疫反応
性を有するかどうかに関わらず、2本の重鎖及び2本の軽鎖の組み合わせを有するポリペプ
チドを含む。「抗体」とは、関心対象の抗原(例えばヒトGARP)に対する有意な既知の特異
的免疫反応活性を有するこうした集成体をいう。用語「GARP抗体」は、ヒトGARPタンパク
質に関して免疫学的特異性を示す抗体を指すために本明細書において使用される。本明細
書の別所に説明する通り、ヒトGARPに関する「特異性」は、GARPの種相同体との交差反応
を除外しない。さらに、これは、GARPタンパク質残基及びTGF-βタンパク質残基にわたる
、エピトープを認識する抗体も除外しない。抗体及び免疫グロブリンは、軽鎖と重鎖の間
の鎖内共有結合を伴う又は伴わずに、軽鎖及び重鎖で構成される。脊椎動物系の基本の免
疫グロブリン構造は、比較的十分に分かっている。一般用語「免疫グロブリン」は、生化
学的に区別することができる5つの異なるクラスの抗体を含む。5つの異なるクラスの抗体
はすべて、本発明の範囲内であり、後の考察は概して、IgGクラスの免疫グロブリン分子
を対象にすることとする。IgGに関しては、免疫グロブリンは、分子量およそ23,000ダル
トンの2本の同一のポリペプチド軽鎖と、分子量53,000~70,000ダルトンの2本の同一の重
鎖を含む。これらの4本の鎖は、「Y字」配置でジスルフィド結合によって連結され、ここ
では軽鎖は、「Y字」の口で始まり且つ可変領域を通して続く重鎖を腕木で支えている(br
acket)。抗体の軽鎖は、カッパ又はラムダ(κ、λ)のいずれかとして分類される。各重鎖
クラスは、κ軽鎖又はλ軽鎖のいずれかと結合され得る。一般に、軽鎖と重鎖は、互いに
共有結合され、これらの2本の重鎖の「尾」部は、ジスルフィド共有結合により、又は免
疫グロブリンがハイブリドーマ、B細胞、若しくは遺伝子操作された宿主細胞のいずれか
によって作製される場合には非共有結合により、互いに結合されている。重鎖においては
、アミノ酸配列は、Y字配置の分岐端のN-末端から、各鎖の端のC-末端へと続く。当業者
は、重鎖が、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ又はイプシロン(γ、μ、α、δ、又は
ε)として分類され、その一部はサブクラス(例えばγ1~γ4)に分類されることを理解す
るであろう。この鎖の本質は、抗体の「クラス」を、それぞれ、IgG、IgM、IgA、IgG、又
はIgEと決定することである。免疫グロブリンサブクラス(アイソタイプ)、例えばIgG1、I
gG2、IgG3、IgG4、IgA1などは、十分に特徴付けられ、機能特性を与えることが公知であ
る。これらのクラス及びアイソタイプのそれぞれの改変型は、本開示を考慮して、当業者
には容易に認識可能であるので、これらは本発明の範囲内である。先に示した通り、抗体
の可変領域は、その抗体が、抗原上のエピトープを選択的に認識し、且つ特異的に結合す
ることを可能にする。すなわち、抗体のVLドメインとVHドメインは、組み合わせられて、
三次元的抗原結合部位を規定する可変領域を形成する。この四次抗体構造は、Y字の各ア
ームの端に存在する抗原結合部位を形成する。より詳細には、抗原結合部位は、VH鎖及び
VL鎖の各々の上の3つの相補性決定領域(CDR)によって規定される。
境の構成成分から分離及び/又は回収されているものである。その天然の環境の混入成分
は、抗体の診断的又は治療的使用の妨げになるであろう材料であり、酵素、ホルモン、及
び他のタンパク質性又は非タンパク質性成分が含まれ得る。好ましい実施態様では、抗体
は、(1)ローリー法によって決定される場合の抗体の95重量%超まで、最も好ましくは99重
量%超まで;(2)スピニングカップ(spinning cup)配列決定装置の使用によって少なくとも1
5残基のN-末端若しくは内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで;又は、(3)還元又は
非還元条件下での、且つクマシーブルー又は好ましくは銀染色を使用する、SDS-PAGEによ
って示される場合の均一性まで精製される。単離された抗体としては、組み換え細胞内の
インサイチューの抗体が挙げられる。抗体の天然の環境の少なくとも1つの構成要素が、
存在しないこととなるからである。しかし、通常、単離された抗体は、少なくとも1つの
精製ステップによって調製されることとなる。
照GARP抗体と比較した場合にアミノ酸配列の1以上の変化を示す「バリアント抗体」をい
い、ここでは該親和性バリアントは、ヒトGARPタンパク質又はGARP/TGF-β複合体につい
て、参照抗体と比較すると親和性の変更を示す。一般的に、親和性バリアントは、参照GA
RP抗体と比較すると、ヒトGARP又はヒトGARP/TGF-β複合体について、親和性の改善を示
すこととなる。この改善は、ヒトGARPについての、より低いKD、又はヒトGARPについての
、より早いオフレート(off-rate)、又は非ヒトGARPホモログとの交差反応性のパターンの
変更のいずれかであり得る。親和性バリアントは一般的に、参照GARP抗体と比較すると、
CDR内のアミノ酸配列の1以上の変化を示す。こうした置換は、CDRの所与の位置に存在す
る元々のアミノ酸の、天然に存在するアミノ酸残基又は天然に存在しないアミノ酸残基で
あり得る異なるアミノ酸残基との置き換えをもたらすことが可能である。このアミノ酸置
換は、保存的又は非保存的であり得る。
えばヒトGARP)への選択的結合を担うポリペプチドの領域を含む。結合ドメイン又は結合
領域は、少なくとも1つの結合部位を含む。結合ドメインの例としては、抗体可変ドメイ
ンが挙げられる。本発明の抗体分子は、1つの抗原結合部位又は複数(例えば、2、3、若し
くは4個)の抗原結合部位を含むことができる。
中のアミノ酸残基が、類似側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられているものである。
類似側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野で定義されており、塩基性
側鎖(例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、
グルタミン酸)、無電荷極性側鎖(例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン
、トレオニン、チロシン、システイン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシ
ン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン)、β分
岐側鎖(例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン)、及び芳香族側鎖(例えば、チロシ
ン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン)が含まれる。したがって、免疫グ
ロブリンポリペプチド内の非必須アミノ酸残基は、同じ側鎖ファミリーの別のアミノ酸残
基と置き換えることができる。別の実施態様では、一続きのアミノ酸を、側鎖ファミリー
メンバーの順序及び/又は組成が異なる構造的に類似した連続と置き換えることができる
。
結しない第二のアミノ酸配列に連結された第一のアミノ酸配列を含む。これらのアミノ酸
配列は、共に融合ポリペプチドとなる別のタンパク質内に普通に存在することもできるし
、同じタンパク質内に普通に存在して、融合ポリペプチド内では新たな並びで配置される
可能性もある。キメラタンパク質は、例えば、化学合成によって、又はペプチド領域が所
望の関係性でコードされているポリヌクレオチドを作製及び翻訳することによって、作製
することができる。キメラGARP抗体の例としては、ヒト抗体、例えばヒトIgG1、IgG2、Ig
G3、又はIgG4の定常ドメインに融合された、ラクダ科動物由来のVHドメイン及びVLドメイ
ン又はこれらのヒト化バリアントを含む、融合タンパク質が挙げられる。
軽鎖の両ポリペプチドの可変領域内に認められる、隣接していない抗原結合部位を意味す
る。これらの特定の領域は、Kabatらの文献、J.Biol.Chem.252:6609-6616(1977)、及びKa
batらの文献、「免疫学的関心のあるタンパク質の配列(Sequences of Protein of Immuno
logical Interest)」(1991)、及びChothiaらの文献、J.Mol.Biol.196:901-917(1987)、及
びMacCallumらの文献、J.Mol.Biol.262:732-745(1996)に記載されており、ここではこれ
らの定義には、互いに比較した場合のアミノ酸残基の重複又はサブセットが含まれている
。先に引用した参考文献のそれぞれによって定義されたCDRを包含しているアミノ酸残基
を、比較のために示す。好ましくは、用語「CDR」は、配列比較に基づいてKabatによって
定義されたCDRである。
表1:CDR定義
(2)残基番号付けは、Chothiaらの文献(前掲)の命名法に従う
(3)残基番号付けは、MacCallumらの文献(前掲)の命名法に従う
の番号付けスキームを使用する、抗体のおよそ残基244から残基360まで及ぶ重鎖分子の領
域が含まれる(残基244から360、Kabat番号付けシステム;及び、残基231~340、EU番号付
けシステム、Kabat EAらの文献、「免疫学的関心のあるタンパク質の配列(Sequences of
protein of immunological interest)」、Bethesda、US Department of Health and Huma
n Services, NIH.1991)。CH2ドメインは、別のドメインときっちり対形成しない点で独特
である。むしろ、完全なままの天然のIgG分子の2つのCH2ドメイン間に、2つのN-結合型分
岐糖鎖が差し挟まれる。また、CH3ドメインが、CH2ドメインからIgG分子のC-末端まで及
び、約108残基を含むことも十分に実証されている。
ARP抗原でのラクダ科動物の能動免疫化によって産生されたラクダ科動物の従来の抗体に
由来するフレームワークアミノ酸配列及び/又はCDRアミノ酸配列を含む。しかし、ラクダ
科動物由来のアミノ酸配列を含むGARP抗体は、ヒトアミノ酸配列又は他の非ラクダ科哺乳
動物種に由来するフレームワーク配列及び/又は定常領域配列を含むように操作すること
ができる。例えば、ヒト又は非ヒト霊長類フレームワーク領域、重鎖領域、及び/又はヒ
ンジ領域を、対象GARP抗体に含めることができる。一実施態様では、1以上の非ラクダ科
動物アミノ酸が、「ラクダ科動物由来の」GARP抗体のフレームワーク領域に存在すること
ができ、例えば、ラクダ科動物フレームワークアミノ酸配列は、対応するヒト又は非ヒト
霊長類アミノ酸残基がその中に存在する1以上のアミノ酸変異を含むことができる。更に
、ラクダ科動物由来のVHドメイン及びVLドメイン、又はそれらのヒト化されたバリアント
を、ヒト抗体の定常ドメインに連結させて、本明細書の別所に包括的に記載した通りのキ
メラ分子を生成することができる。
その抗原結合断片)「に由来する」という用語は、そのポリペプチドの起源をいう。一実
施態様では、ある特定の出発ポリペプチドに由来するポリペプチド又はアミノ酸配列は、
CDR配列又はそれに関連する配列である。一実施態様では、ある特定の出発ポリペプチド
に由来するアミノ酸配列は、隣接していない。例えば、一実施態様では、1、2、3、4、5
又は6のCDRが、出発抗体に由来する。一実施態様では、ある特定の出発ポリペプチド又は
アミノ酸配列に由来するポリペプチド又はアミノ酸配列は、出発配列のアミノ酸配列、又
はそれらの領域(ここでは、該領域は、少なくとも、少なくとも3~5個のアミノ酸、5~10
個のアミノ酸、少なくとも10~20個のアミノ酸、少なくとも20~30個のアミノ酸、若しく
は少なくとも30~50個のアミノ酸からなる)と本質的に同一であるアミノ酸配列、又は出
発配列を起源とするものであると当業者に別の方法で識別可能であるアミノ酸配列を有す
る。一実施態様では、出発抗体に由来する1以上のCDR配列は、GARP結合活性を維持するバ
リアントCDR配列、例えば親和性バリアントを生じるように変更される。
ドメインとの間に短いリンカー(約5~10残基)を伴うsFv断片(sFvの段落を参照)を構築す
る(その結果、Vドメインの鎖間であるが鎖内ではない対形成が実現し、二価の断片、すな
わち2つの抗原結合部位を有する断片がもたらされる)ことによって調製される、小さな抗
体断片をいう。二重特異性の二量体抗体は、2つの抗体のVH及びVLドメインが、異なるポ
リペプチド鎖上に存在する、2つの「交差」sFv断片のヘテロ二量体である。二量体抗体は
、例えば、EP 404,097;WO 93/11161;及びHolligerらの文献、Proc.Natl.Acad.Sci., 90:6
444-6448(1993)に、より十分に記載されている。
例えば、組み換え技術、インビトロペプチド合成、ペプチドの酵素的若しくは化学的カッ
プリング、又はこれらの技術のいくつかの組み合せによる)、核酸又はポリペプチド分子
の操作が含まれる。本発明の抗体は、例えば、ヒト化及び/又はキメラ抗体、並びに抗原
結合、安定性/半減期又はエフェクター機能などの1以上の特性を改良するように操作され
ている抗体を含めて、操作されていることが好ましい。
ペプチド又はタンパク質(1又は複数)に位置するアミノ酸の特定の配置をいう。エピトー
プは、しばしば、アミノ酸又は糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、特定
の3次元構造特性並びに特定の電荷特性を有する。エピトープは、直線状又は立体構造的
であり得る、すなわち、必ずしも隣接していなくともよい、抗原の様々な領域におけるア
ミノ酸の2以上の配列を含む。
用する場合、可変領域の一部であるがCDRの一部ではないアミノ酸残基が含まれる(例えば
、CDRのKabat定義を使用する)。したがって、可変領域フレームワークは、長さが約100~
120個のアミノ酸であるが、CDRの外側のアミノ酸のみを含む。重鎖可変領域の具体例につ
いて、及びKabatらにより定義されたCDRについて、フレームワーク領域1は、アミノ酸1~
30を包含する可変領域のドメインに相当し;フレームワーク領域2は、アミノ酸36~49を包
含する可変領域のドメインに相当し;フレームワーク領域3は、アミノ酸66-94を包含する
可変領域のドメインに相当し、且つフレームワーク領域4は、アミノ酸103から可変領域の
末端までの可変領域のドメインに相当する。軽鎖のフレームワーク領域は同様に、それぞ
れの軽鎖可変領域CDRによって隔てられている。同様に、Chothiaら又はMcCallumらによる
CDRの定義を使用すると、フレームワーク領域の境界は、先に記載した通り、それぞれのC
DR末端によって隔てられている。好ましい実施態様では、CDRは、Kabatにより定義されて
いる通りである。抗体は、水性環境ではその三次元立体配置をとるので、天然に存在する
抗体では、各モノマー抗体上に存在する6つのCDRは、抗原結合部位を形成するように特異
的に配置されているアミノ酸の、短い隣接していない配列である。重鎖及び軽鎖可変ドメ
インの残部は、アミノ酸配列において、より小さい分子間可変性を示し、フレームワーク
領域と称される。これらのフレームワーク領域は、おおむねβシート構造をとり、そのCD
Rは、ループを形成し、このループは、βシート構造とつながる、及び場合によってはβ
シート構造の一部を形成する。したがって、これらのフレームワーク領域は、スキャフォ
ールドを形成するように働き、このスキャフォールドは、鎖間の非共有相互作用による、
6つのCDRの正しい方向への配置をもたらす。配置されたCDRによって形成された抗原結合
部位は、免疫反応性抗原上のエピトープに対する表面相補性を定義する。この相補性表面
は、免疫反応性抗原エピトープへの抗体の非共有結合を促進する。CDRの配置は、当業者
によって容易に特定することができる。
体鎖よりも少ないアミノ酸残基を含む、抗体又は抗体鎖の部分又は領域をいう。用語「抗
原結合断片」とは、抗原に結合するか、或いは抗原結合(すなわち、ヒトGARPへの特異的
結合)について無傷抗体(すなわち、それらが由来する無傷抗体)と競合する、免疫グロブ
リン又は抗体のポリペプチド断片をいう。本明細書で使用する場合、抗体分子の「断片」
という用語には、抗体の抗原結合断片、例えば、抗体軽鎖可変ドメイン(VL)、抗体重鎖可
変ドメイン(VH)、単鎖抗体(scFv)、F(ab')2断片、Fab断片、Fd断片、Fv断片、単一ドメイ
ン抗体断片(DAb)、1アームの(一価の)抗体、二量体抗体、又は、こうした抗原結合断片の
組み合わせ、集成体、若しくは複合体によって形成される任意の抗原結合分子が含まれる
。断片は、例えば、無傷の又は完全な抗体又は抗体鎖の化学処理若しくは酵素処理を介し
て、又は組み換え手段によって得ることができる。
する最小の抗体断片である。この断片は、密接な非共有結合的会合での1つの重鎖可変領
域ドメインと1つの軽鎖可変領域ドメインとの二量体からなる。これらの2つのドメインの
フォールディングから、6つの高頻度可変性ループ(H鎖とL鎖からそれぞれ3つのループ)が
生じ、これらのループは、アミノ酸残基の抗原結合に寄与し、抗体に抗原結合特異性を付
与する。しかし、単一の可変ドメイン(又は、抗原に特異的な3つのCDRのみを含むFvの半
分)であっても、結合部位全体よりも親和性が低いとはいえ、抗原を認識して結合する能
力を有する。
の定常ドメインに由来するアミノ酸配列が含まれる。重鎖領域を含むポリペプチドは、以
下の少なくとも1つを含む:CH1ドメイン、ヒンジ(例えば、上部、中央、及び/又は下部ヒ
ンジ領域)ドメイン、CH2ドメイン、CH3ドメイン、又はそれらのバリアント若しくは断片
。一実施態様では、本発明の結合分子は、免疫グロブリン重鎖のFc領域(例えば、ヒンジ
部分、CH2ドメイン、及びCH3ドメイン)を含むことができる。別の実施態様では、本発明
の結合分子は、定常ドメインの少なくとも一領域(例えば、CH2ドメインのすべて又は一部
)を欠いている。ある種の実施態様では、少なくとも1つ、好ましくはすべての定常ドメイ
ンが、ヒト免疫グロブリン重鎖に由来する。例えば、ある好ましい実施態様では、重鎖領
域は、完全ヒトヒンジドメインを含む。他の好ましい実施態様では、重鎖領域は、完全ヒ
トFc領域(例えば、ヒト免疫グロブリン由来のヒンジ、CH2及びCH3ドメイン配列)を含む。
ある種の実施態様では、重鎖領域の構成的定常ドメインは、異なる免疫グロブリン分子由
来である。例えば、ポリペプチドの重鎖領域は、IgG1分子に由来するCH2ドメイン、及びI
gG3又はIgG4分子に由来するヒンジ領域を含むことができる。他の実施態様では、定常ド
メインは、異なる免疫グロブリン分子の領域を含むキメラドメインである。例えば、ヒン
ジは、IgG1分子由来の第一の領域と、IgG3又はIgG4分子由来の第二の領域を含むことがで
きる。先に示した通り、当業者には、重鎖領域の定常ドメインのアミノ酸配列が、天然に
存在する(野生型の)免疫グロブリン分子と異なるように改変され得ることが理解されるで
あろう。すなわち、本明細書に開示した本発明のポリペプチドは、1以上の重鎖定常ドメ
イン(CH1、ヒンジ、CH2、又はCH3)の、及び/又は軽鎖定常ドメイン(CL)の、変更又は改変
を含むことができる。改変の例としては、1以上のドメイン内の1以上のアミノ酸の付加、
欠失、又は置換が挙げられる。
2ドメインに連結する重鎖分子の領域が含まれる。このヒンジ領域は、およそ25残基を含
み、且つ柔軟性があるので、2つのN-末端抗原結合領域が独立して動くことを可能にして
いる。ヒンジ領域は、上部、中央、及び下部ヒンジドメインの3つの別のドメインに細区
画ことができる(Rouxらの文献、J.Immunol.1998 161:4083)。
は配列可変性に基づいて定義されるので(Kabatらの文献、「免疫学的関心のあるタンパク
質の配列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)」、第5版、Public Healt
h Service、米国国立衛生研究所(National Institutes of Health)、Bethesda,MD.、1983
)、用語「高頻度可変性ループ」と「相補性決定領域」は、厳密には同義ではなく、HVとC
DRの境界は、一部のVHドメイン及びVLドメインにおいて異なる可能性がある。VL及びVHド
メインのCDRは、一般的に、下記のアミノ酸を含むと定義することができる:軽鎖可変ドメ
イン中の残基24~34(CDRL1)、50~56(CDRL2)、及び89~97(CDRL3)、並びに重鎖可変ドメ
イン中の残基31~35又は31~35b(CDRH1)、50~65(CDRH2)、及び95~102(CDRH3);(Kabatら
の文献、「免疫学的関心のあるタンパク質の配列(Sequences of Proteins of Immunologi
cal Interest)」、第5版、Public Health Service、米国国立衛生研究所(National Insti
tutes of Health)、Bethesda,MD.(1991))。したがって、HVは、対応するCDR内に含まれ得
、別段の指示がない限り、VH及びVLドメインの「高頻度可変性ループ」に対する本明細書
での言及は、対応するCDRも包含すると解釈されるべきであり、その逆も同様である。可
変ドメインのより高度に保存された領域は、以下で定義した通り、フレームワーク領域(F
R)と呼ばれる。天然の重鎖及び軽鎖の可変ドメインはそれぞれ、3つの高頻度可変性ルー
プによって接続された、β-シート構造を主として採用している、4つのFR(それぞれ、FR1
、FR2、FR3及びFR4)を含む。各鎖内の高頻度可変性ループは、これらのFRによって、ごく
接近した状態でまとめられ、他の鎖由来の高頻度可変性ループと共に、抗体の抗原結合部
位の形成に寄与する。抗体の構造解析により、相補性決定領域によって形成された結合部
位の配列と形状との間の関係が明らかになった(Chothiaらの文献、J.Mol.Biol., 227:799
-817(1992));Tramontanoらの文献、J.Mol.Biol., 215:175-182(1990))。6つのループのう
ちの5つは、その高い配列可変性にもかかわらず、「カノニカル構造」と呼ばれる主鎖構
造のレパートリーが少しだけである。これらの構造は、まず第一に、ループの長さによっ
て決定され、第二に、構造を決定するループ内及びフレームワーク領域内の特定の位置で
の重要な残基の存在によって、そのパッキング、水素結合、又は普通でない主鎖構造を推
定できることを通して決定される。
ン抗体GARP抗体(例えば、ラクダ科動物由来のGARP抗体)中の特定の位置に存在するアミノ
酸残基が、参照ヒトVH又はVLドメイン中の同等の位置に存在するアミノ酸残基で置き換え
られる、アミノ酸置換をいう。参照ヒトVH又はVLドメインは、ヒト生殖細胞系列によって
コードされたVH又はVLドメインであり得、この場合、置換された残基は、「生殖細胞系列
化置換」と呼ぶことができる。ヒト化/生殖細胞系列化置換は、本明細書で定義された、G
ARP抗体のフレームワーク領域及び/又はCDRにおいて行うことができる。
のVHドメイン及びVLドメインが一緒になって、最も厳密にマッチするヒト生殖細胞系列VH
配列及びVL配列に対する少なくとも90%のアミノ酸配列同一性を示す場合に、高ヒト相同
性を有するとみなされるであろう。高ヒト相同性を有する抗体は、例えば、ラクダ科動物
の従来の抗体のVH及びVLドメインを含む抗体、並びにこうした抗体の操作された、特にヒ
ト化されたバリアント、また、「完全ヒト」抗体を含めた、十分に高い配列同一性(%)ヒ
ト生殖細胞系列配列を示す天然の非ヒト抗体のVH及びVLドメインを含む抗体を含むことが
できる。一実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体のVHドメインは、フレームワーク領域
FR1、FR2、FR3、及びFR4のすべてにわたって、1以上のヒトVHドメインとの80%以上のア
ミノ酸配列同一性又は配列相同性を示すことができる。他の実施態様では、本発明のポリ
ペプチドのVHドメインと、最も厳密にマッチするヒト生殖細胞系列VHドメイン配列とのア
ミノ酸配列同一性又は配列相同性は、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、又は最
大99%、さらには100%であり得る。一実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体のVHドメ
インは、フレームワーク領域FR1、FR2、FR3、及びFR4のすべてにわたって、最も厳密にマ
ッチしたヒトVH配列と比較して、1以上(例えば1から10)のアミノ酸配列ミスマッチを含有
することができる。別の実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体のVLドメインは、フレー
ムワーク領域FR1、FR2、FR3、及びFR4のすべてにわたって、1以上のヒトVLドメインとの8
0%以上の配列同一性又は配列相同性を示すことができる。他の実施態様では、本発明の
ポリペプチドのVLドメインと、最も厳密にマッチするヒト生殖細胞系列VLドメイン配列と
のアミノ酸配列同一性又は配列相同性は、85%以上、90%以上、95%以上、97%以上、又
は最大99%、さらには100%であり得る。
R2、FR3、及びFR4のすべてにわたって、最も厳密にマッチしたヒトVL配列と比較して、1
以上(例えば1~10)のアミノ酸配列ミスマッチを含むことができる。
前に、そのカノニカルフォールドを決定することができ、これによって、H1及びH2又はL1
及びL2(及びL3)に関して同一の組み合わせのカノニカルフォールドをもつヒト生殖細胞系
列セグメントのファミリーの同定が可能になる。続いて、関心対象の抗体の可変領域との
最高水準の配列相同性を有するヒト生殖細胞系列ファミリーメンバーが、配列相同性をス
コア化するために選択される。高頻度可変性ループL1、L2、L3、H1、及びH2のChothiaカ
ノニカルクラスの決定は、www.bioinf.org.uk/abs/chothia.htmlのウェブページ上で公に
利用可能なバイオインフォマティクスツールを用いて実施することができる。このプログ
ラムの出力は、データファイル中の重要残基条件を示す。これらのデータファイルでは、
重要残基の位置は、各位置での許容されるアミノ酸と共に示される。関心対象の抗体の可
変領域の配列は、インプットとして入力され、コンセンサス抗体配列と最初に並列されて
、Kabat番号付けスキームが割り当てられる。このカノニカルフォールドの解析は、Marti
n及びThorntonによって開発された自動化された方法によってもたらされた、重要残基鋳
型のセットを使用する(Martinらの文献、J.Mol.Biol.263:800-815(1996))。
する、公知の特定のヒト生殖細胞系列Vセグメントを用いて、配列相同性に関する最大に
マッチするファミリーメンバーを決定することができる。関心対象の抗体のVH及びVLドメ
インフレームワークアミノ酸配列と、ヒト生殖細胞系列によってコードされた対応する配
列との配列同一性(%)は、バイオインフォマティクスツールを用いて決定することができ
るが、実際には、これらの配列の手作業によるアラインメントも適用することができる。
ヒト免疫グロブリン配列は、VBase(http://vbase.mrc-cpe.cam.ac.uk/)又はPluckthun/Ho
neggerデータベース(http://www.bioc.unizh.ch/antibody/Sequences/Germlines)などの
、いくつかのタンパク質データベースから同定することができる。ヒト配列を、関心対象
の抗体におけるVH又はVLドメインのV領域と比較するために、配列アラインメントアルゴ
リズム、例えばウェブサイトwww.expasy.ch/tools/#alignを介して利用可能なものなどを
使用することができるが、限定された配列のセットとの手作業によるアラインメントも実
施することができる。同じ組み合わせのカノニカルフォールドをもち、且つ各鎖のフレー
ムワーク領域1、2、及び3との最高水準の相同性を伴う、これらのファミリーのヒト生殖
細胞系列軽鎖及び重鎖配列を選択し、関心対象の可変領域と比較し;また、FR4を、ヒト生
殖細胞系列JH及びJK又はJL領域について調べる。
ニカルフォールドのもつヒト生殖細胞系列ファミリーからの最も厳密なマッチ配列を使用
して評価されることに留意されたい。同じ組み合わせのカノニカルフォールドをもつ同じ
ファミリーの最も厳密なマッチ又は他のメンバーと異なる残基のみが、スコア化される(
注意-プライマーによってコードされるあらゆる差異を除く)。しかし、ヒト化の目的のた
めには、同じ組み合わせのカノニカルフォールドを有しない、他のヒト生殖細胞系列ファ
ミリーのメンバーと同一のフレームワーク領域内の残基は、これが、先に記載したストリ
ンジェントな条件に従って「ネガティブ」とスコア化されるという事実にもかかわらず、
「ヒト」とみなすことができる。この前提は、Quとその同僚(Quらの文献、Clin.Cancer R
es.5:3095-3100(1999))並びにOnoとその同僚(Onoらの文献、Mol.Immunol.36:387-395(199
9))によって行われたように、FR1、FR2、FR3及びFR4のそれぞれが、その最も厳密にマッ
チするヒト生殖細胞系列配列と、個別に比較される結果、ヒト化された分子が異なるFRの
組み合わせを含有するという、ヒト化のための「ミックス及びマッチ」手法に基づいてい
る。個々のフレームワーク領域の境界は、Chothiaの番号付けスキームの改変である、IMG
T番号付けスキームを使用して割り当てることができる(Lefrancらの文献、NAR, 27:209-2
12(1999);http://im.gt.cines.fr)。
ールドを有する高頻度可変性ループ又はCDRを含むことができる。一実施態様では、高ヒ
ト相同性をもつ抗体のVHドメイン又はVLドメインのいずれかの内の少なくとも1つの高頻
度可変性ループ又はCDRは、非ヒト抗体、例えばラクダ科動物の種由来の従来の抗体のVH
又はVLドメインから入手又は誘導することができ、さらには、ヒト抗体中に存在するカノ
ニカルフォールド構造と実質的に同一である予測される又は実際のカノニカルフォールド
構造を示す。
頻度可変性ループの一次アミノ酸配列が、定義上は、高度に可変性であるが、VHドメイン
のCDR H3以外のすべての高頻度可変性ループは、カノニカルフォールドと称されるわずか
数種の異なる構造の高次構造をとり(Chothiaらの文献、J.Mol.Biol.196:901-917(1987);T
ramontanoらの文献、Proteins, 6:382-94(1989))、これらが、高頻度可変性ループの長さ
と、いわゆるカノニカルアミノ酸残基の存在の両方によって決まる(Chothiaらの文献、J.
Mol.Biol.196:901-917(1987))ということは、当該技術分野において十分に確立されてい
る。無傷のVH又はVLドメイン中の高頻度可変性ループの実際のカノニカル構造は、構造解
析(例えばX線結晶解析)によって決定することができるが、特定の構造に特徴的である重
要なアミノ酸残基に基づいて、カノニカル構造を予測することも可能である(以下に更に
論じる)。本質的には、各カノニカル構造を決定する残基の特定のパターンは、そのカノ
ニカル構造を、未知の構造のVH又はVLドメインの高頻度可変性ループ中で認識できるよう
にする「特徴」を形成し;それによって、カノニカル構造は、一次アミノ酸配列のみに基
づいて予測することができる。
る予測されるカノニカルフォールド構造も、www.bioinf.org.uk/abs/chothia.html、www.
biochem.ucl.ac.uk/~martin/antibodies.html、及びwww.bioc.unizh.ch/antibody/Seque
nces/Germlines/Vbase_hVk.htmlから公に利用可能であるアルゴリズムを使用して解析す
ることができる。これらのツールは、クエリーVH又はVL配列を、公知のカノニカル構造の
ヒトVH又はVLドメイン配列に対して整列させることや、クエリー配列の高頻度可変性ルー
プについて行われるカノニカル構造の予測を可能にする。
しくは両方が満たされる場合、ヒト抗体中に存在することがわかっているカノニカルフォ
ールド構造と「実質的に同一の」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化
することができる:
1.残基の数によって決定される、最も厳密にマッチするヒトカノニカル構造クラスと同一
の長さ。
2.対応するヒトH1及びH2カノニカル構造クラスに関して説明される、重要なアミノ酸残基
との少なくとも33%の同一性、好ましくは少なくとも50%の同一性。(前述の解析を目的
として、H1及びH2ループは、別々に処理され、且つそれぞれがその最も厳密にマッチする
ヒトカノニカル構造クラスに対して比較されることに留意されたい)。
ある。例えばX線結晶解析に基づいて、関心対象の抗体のH1及びH2ループの実際の構造が
わかっている場合には、関心対象の抗体のH1及びH2ループはまた、そのループの長さが最
も厳密にマッチするヒトカノニカル構造クラスの長さと異なる(一般的に+1又は+2個の
アミノ酸)が、関心対象の抗体のH1及びH2ループの実際の構造はヒトカノニカルフォール
ドの構造とマッチする場合に、ヒト抗体中に存在することがわかっているカノニカルフォ
ールド構造と「実質的に同一の」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化
することができる。
カル構造クラスに見られる重要なアミノ酸残基は、Chothiaらの文献(J.Mol.Biol.227:799
-817(1992))に記載されており、この文献の内容全体を参照によって本明細書に組み込む
。特に、参照によって本明細書に具体的に組み込まれているChothiaらの文献の802頁の表
3は、ヒト生殖細胞系列に見られるH1カノニカル構造について、重要な位置での好ましい
アミノ酸残基を列記しているのに対し、同じく具体的に引用によりに組み込まれている80
3頁の表4は、ヒト生殖細胞系列に見られるCDR H2カノニカル構造について、重要な位置で
の好ましいアミノ酸残基を列記している。
体中に存在するカノニカルフォールド構造と実質的に同一である、予測される又は実際の
カノニカルフォールド構造を示す。
のヒト生殖細胞系列VHドメイン中に存在することがわかっているカノニカル構造の組み合
わせと同一であるカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成する、VHドメインを含む
ことができる。H1及びH2でのカノニカルフォールド構造のある種の組み合わせのみが、ヒ
ト生殖細胞系列によってコードされたVHドメイン中に実際に存在することが認められてい
る。一実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体のVHドメイン中のH1及びH2は、非ヒト種、
例えばラクダ科動物種のVHドメインから得ることができ、さらには、ヒト生殖細胞系列又
は体細胞変異されたVHドメイン中に存在することがわかっているカノニカルフォールド構
造の組み合わせと同一である、予測される又は実際のカノニカルフォールド構造の組み合
わせを形成する。非限定的実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体のVHドメイン中のH1及
びH2は、非ヒト種、例えばラクダ科動物種のVHドメインから得ることができ、且つ次のカ
ノニカルフォールド組み合わせ:1-1、1-2、1-3、1-6、1-4、2-1、3-1、及び3-5のうちの
一つを形成する。
つヒトVHと構造的相同性を示す高頻度可変性ループを含む、VHドメインを含むことができ
る。
並びにそれらの組み合わせが、一次アミノ酸配列同一性全体という観点から、高ヒト相同
性をもつ抗体のVHドメインとの最も厳密なマッチを示すヒトVH生殖細胞系列配列に「補正
」されることが好都合であり得る。例として、最も厳密な配列マッチがヒト生殖細胞系列
VH3ドメインとのものであるならば、H1及びH2は、ヒトVH3ドメインにおいても天然に存在
するカノニカルフォールドの組み合わせを形成することが好都合であり得る。非ヒト種に
由来する高ヒト相同性をもつ抗体、例えばラクダ科動物の従来の抗体に由来するVH及びVL
ドメインを含有する抗体、特にヒト化されたラクダ科動物VH及びVLドメインを含有する抗
体の場合、このことは特に重要であり得る。
ワーク領域FR1、FR2、FR3及びFR4のすべてにわたって、ヒトVHドメインとの80%以上、85
%以上、90%以上、95%以上、97%以上、又は最大99%、さらには100%の配列同一性又
は配列相同性を示すことができ、さらに、同じ抗体におけるH1及びH2は、(例えばラクダ
科動物種に由来する)非ヒトVHドメインから得られるが、同じヒトVHドメインにおいて天
然に存在することがわかっているカノニカルフォールド組み合わせと同じである、予測さ
れる又は実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成する。
れ、非ヒト種のVLドメイン(例えば、ラクダ科動物由来のVLドメイン)から得られ、且つそ
れぞれ、ヒト抗体中に存在するカノニカルフォールド構造と実質的に同一である、予測さ
れる又は実際のカノニカルフォールド構造を示す。
さによって、また、特定のカノニカル位置での重要なアミノ酸残基の存在によっても、あ
る程度決定される、限られた数の高次構造又はカノニカル構造をとることができる。
ンから得られたL1、L2、及びL3ループは、次の基準のうちの少なくとも最初のもの、好ま
しくは両方が満たされる場合、ヒト抗体中に存在することがわかっているカノニカルフォ
ールド構造と「実質的に同一の」カノニカルフォールド構造を有するものとしてスコア化
することができる:
1.残基の数によって決定される、最も厳密にマッチするヒト構造クラスと同一の長さ。
2.Vλ又はVκレパートリーのいずれかからの、対応するヒトL1又はL2カノニカル構造クラ
スに関して説明される、重要なアミノ酸残基との少なくとも33%の同一性、好ましくは少
なくとも50%の同一性。(前述の解析を目的として、L1及びL2ループは、別々に処理され
、且つそれぞれがその最も厳密にマッチするヒトカノニカル構造クラスに対して比較され
ることに留意されたい)
予測に頼るものである。例えばX線結晶解析に基づいて、L1、L2及びL3ループの実際の構
造がわかっている場合には、関心対象の抗体に由来するL1、L2又はL3ループはまた、その
ループの長さが最も厳密にマッチするヒトカノニカル構造クラスの長さと異なる(一般的
に+1又は+2個のアミノ酸)が、これらのラクダ科動物ループの実際の構造はヒトカノニ
カルフォールドとマッチする場合に、ヒト抗体中に存在することがわかっているカノニカ
ルフォールド構造と「実質的に同一の」カノニカルフォールド構造を有するものとしてス
コア化することができる。
アミノ酸残基は、Moreaらの文献、Methods, 20:267-279(2000)、及びMartinらの文献、J.
Mol.Biol., 263:800-815(1996)に記載されている。また、ヒトVκドメインの構造的レパ
ートリーは、Tomlinsonらの文献、EMBO J.14:4628-4638(1995)に、及びVλドメインの構
造的レパートリーは、Williamsらの文献、J.Mol.Biol., 264:220-232(1996)に記載されて
いる。これらのすべての文献の内容を、参照により本明細書に組み込む。
存在することがわかっているカノニカルフォールド構造の組み合わせと同一である、予測
される又は実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成することができる。非限
定的実施態様では、高ヒト相同性をもつ抗体(例えば、ラクダ科動物由来のVLドメインを
含有する抗体又はそのヒト化されたバリアント)のVλドメイン中のL1及びL2は、次のカノ
ニカルフォールド組み合わせ:11-7、13-7(A,B,C)、14-7(A,B)、12-11、14-11、及び12-12
(Williamsらの文献、J.Mol.Biol.264:220-32(1996)に定義されている通り、また、http:/
/www.bioc.uzh.ch/antibody/Sequences/Germlines/ VBase_hVL.htmlに示されている通り)
のうちの一つを形成することができる。非限定的実施態様では、Vκドメイン中のL1及びL
2は、カノニカルフォールド組み合わせ:2-1、3-1、4-1及び6-1のうちの一つ(Tomlinsonら
の文献、EMBO J.14:4628-38(1995)に定義されている通り、また、http://www.bioc.uzh.c
h/antibody/Sequences/Germlines/VBase_hVK.htmlに示されている通り)を形成することが
できる。
の3つはすべて、実質的にヒトの構造を示すことができる。高ヒト相同性をもつ抗体のVL
ドメインが、ヒトVLとの高い配列同一性/配列相同性の両方を示すこと、また、VLドメイ
ン中の高頻度可変性ループが、ヒトVLとの構造的相同性を示すことが好ましい。
1、FR2、FR3、及びFR4のすべてにわたって、ヒトVLドメインとの80%以上、85%以上、90
%以上、95%以上、97%以上、又は最大99%、さらには100%の配列同一性を示すことが
でき、さらに、高頻度可変性ループL1及び高頻度可変性ループL2は、同じヒトVLドメイン
において天然に存在することがわかっているカノニカルフォールド組み合わせと同じであ
る、予測される又は実際のカノニカルフォールド構造の組み合わせを形成することができ
る。
成(例えば、ラクダ科動物由来のVH/VL対形成)を含有する、高ヒト相同性をもつ抗体を提
供するために、ヒトVHとの高い配列同一性/配列相同性、またヒトVHの高頻度可変性ルー
プとの構造的相同性を示すVHドメインを、ヒトVLとの高い配列同一性/配列相同性、また
ヒトVLの高頻度可変性ループとの構造的相同性を示すVLドメインと組み合わせることが、
当然、構想される。
る場合、抗体は、抗原と、検出可能なレベルで、好ましくは約104M-1以上、又は約105M-1
以上、約106M-1以上、約107M-1以上、又は108M-1以上、又は109M-1以上、又は1010M-1以
上の結合定数Kaで反応するならば、その抗原に対して「免疫特異的」である、「に対して
特異的」である、又は「特異的に結合する」と言える。その同種抗原に対する抗体の親和
性はまた、通常、解離定数Kdとして表され、ある種の実施態様では、抗体は、10-4M以下
、約10-5M以下、約10-6M以下、10-7M以下、又は10-8M以下、又は5.10-9M以下、又は10-9M
以下、又は5.10-10M以下、又は10-10M以下のKdで結合するならば、抗原と特異的に結合す
る。抗体の親和性は、従来の技術、例えばScatchard Gらの文献(「小分子及びイオンに対
するタンパク質の誘引力(The attractions of proteins for small molecules and ions.
)」Ann NY Acad Sci 1949;51:660-672)によって記載されている技術を使用して、容易に
決定することができる。抗原、細胞、又はその組織に対する抗体の結合特性は、一般に、
例えば、免疫組織化学的検査(IHC)及び/又は蛍光標識細胞分取(FACS)などの免疫蛍光法に
基づく分析を含めた免疫検出方法を使用して決定及び評価することができる。
で天然の配列を伴うタンパク質又は複合体、例えばリボソーム及びポリメラーゼなどから
実質的に分離された核酸である。この用語は、その天然に存在する環境から取り出されて
いる核酸配列を包含し、この用語には、組み換え体若しくはクローン化されたDNA単離体
及び化学的に合成された類似体、又は異種系によって生物的に合成された類似体が含まれ
る。実質的に純粋な核酸としては、単離された形態の核酸が挙げられる。当然、これは、
最初の段階で単離された核酸を指し、単離された核酸に人の手で後に付加された遺伝子又
は配列を除外しない。
れる。ポリペプチドは、特定の長さの生成物に限定されるものではない。ポリペプチドの
定義には、ペプチド、オリゴペプチド、及びタンパク質が含まれ、こうした用語は、他に
特別な指示がない限り、本明細書では、互換的に使用することができる。この用語はまた
、ポリペプチドの発現後修飾、例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化など、並び
に当技術分野で公知の他の修飾(天然に存在するものと天然に存在しないもののどちらも)
を指すものではない、又は排除する。ポリペプチドは、タンパク質全体、又はその部分配
列であり得る。本発明の状況では、関心対象の特定のポリペプチドは、CDRを含み、且つ
抗原と結合する能力があるアミノ酸部分配列である。
収されているものである。好ましい実施態様では、単離されたポリペプチドは、(1)ロー
リー法によって決定される場合のポリペプチドの95重量%超まで、最も好ましくは99重量%
超まで;(2)スピニングカップ配列決定装置の使用によって少なくとも15残基のN-末端若し
くは内部アミノ酸配列を得るのに十分な程度まで;又は、(3)クーマシーブルー又は好まし
くは銀染色を使用する、還元又は非還元条件下での、SDS-PAGEによる均一性まで、精製さ
れることとなる。単離されたポリペプチドとしては、組み換え細胞内のインサイチューの
ポリペプチドが挙げられる。ポリペプチドの天然の環境の少なくとも1つの構成要素は、
存在しないこととなるからである。しかし、通常、単離されたポリペプチドは、少なくと
も1つの精製ステップによって調製されることとなる。
とは、2以上のポリペプチドの配列間の関係において使用される場合、2以上のアミノ酸残
基のストリング間のマッチの数によって決定されるポリペプチド間の配列関連性の程度を
いう。「同一性」は、特定の数理モデル又はコンピュータプログラム(すなわち、「アル
ゴリズム」)によって指定されるギャップアラインメント(もしあれば)をもつ、より小さ
い2以上の配列の間の同一のマッチの割合を測定する。関連するポリペプチドの同一性は
、公知の方法によって容易に計算することができる。こうした方法としては、限定はされ
ないが、「分子計算生物学(Computational Molecular Biology)」、Lesk,A.M.編、Oxford
University Press、New York、1988;「バイオコンピューティング:インフォマティクス
及びゲノムプロジェクト(Biocomputing:Informatics and Genome Projects)」、Smith,D.
W.編、Academic Press、New York、1993;「配列データのコンピュータ分析(Computer Ana
lysis of Sequence Data)」、Part 1、Griffin, A.M.及びGriffin,H.G.編、Humana Press
、New Jersey、1994;「分子生物学における配列分析(Sequence Analysis in Molecular B
iology)」、von Heinje,G.、Academic Press、1987;配列分析プライマー(Sequence Analy
sis Primer)、Gribskov,M.及びDevereux,J.編、M.Stockton Press、New York、1991;及び
Carilloらの文献、SIAM J.Applied Math.48,1073(1988)に記載されているものが挙げられ
る。同一性を決定するための好ましい方法は、試験される配列間の最大のマッチをもたら
すように設計される。同一性を決定するための方法は、公に入手できるコンピュータプロ
グラム内に記載されている。2つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュー
タプログラム方法としては、GAP(Devereuxらの文献、Nucl.Acid.Res.\2、387(1984);Gen
etics Computer Group、University of Wisconsin、Madison,Wis.)、BLASTP、BLASTN、及
びFASTA(Altschulらの文献、J.MoI.Biol.215、403-410(1990))を含めた、GCGプログラム
パッケージが挙げられる。BLASTXプログラムは、National Center for Biotechnology In
formation(NCBI)及び他の供給源から公に入手できる(Altschulらの文献、BLAST Manual、
NCB/NLM/NIH Bethesda,Md.20894;Altschulらの文献、前掲)。同一性を決定するために、
周知のSmith Watermanアルゴリズムを使用することもできる。
は存在しないものとなるように変更された、合成型の抗体、例えば、少なくとも2つの重
鎖領域を含むが2つの完全な重鎖は含まない抗体(ドメイン欠失された抗体又はミニボディ
(minibody)など);2つ以上の異なる抗原に又は単一の抗原上の異なるエピトープに結合す
るように変更された多重特異型(例えば、二重特異性、三重特異性など)の抗体;scFv分子
に連結された重鎖分子などが含まれる。scFv分子は、当該技術分野で公知であり、例えば
米国特許第5,892,019号に記載されている。さらに、用語「改変された抗体」には、多価
の形態の抗体(例えば、同じ抗原の3つ以上のコピーと結合する三価、四価などの抗体)が
含まれる。別の実施態様では、本発明の改変された抗体は、CH2ドメインを欠く少なくと
も1つの重鎖領域を含み、且つ受容体リガンド対の一員の結合領域を含むポリペプチドの
結合ドメインを含む、融合タンパク質である。
の動物、競技用動物、又は愛玩動物、例えばイヌ、ネコ、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤ
ギ、ウサギなどを含めた、あらゆる哺乳類をいう。好ましくは、哺乳類はヒトである。
、実質的に均一な抗体の集団から得られる抗体をいう。すなわち、集団に含まれる個々の
抗体は、わずかな量で存在可能である、天然に存在する可能性がある変異以外は同一であ
る。モノクローナル抗体は、非常に特異的であり、単一の抗原部位に方向付けられる。さ
らに、様々な決定因子(エピトープ)に方向付けられる様々な抗体を含むポリクローナル抗
体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定因子に方向付けら
れる。モノクローナル抗体は、その特異性に加えて、他の抗体による混入なしで合成する
ことができる点で好都合である。修飾語「モノクローナルの」は、特定の方法による抗体
の産生を必要とするとみなされるべきではない。例えば、本発明において有用であるモノ
クローナル抗体は、Kohlerらの文献、Nature、256:495(1975)によって初めて記載された
ハイブリドーマ方法論によって調製することもできるし、細菌性の、真核の、動物、又は
植物細胞において組み換えDNA方法を使用して作製することもできる(例えば、米国特許第
4,816,567号を参照のこと)。「モノクローナル抗体」は、例えば、Clacksonらの文献、Na
ture,352:624-628(1991)及びMarksらの文献、J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)に記載され
ている技術を使用して、ファージ抗体ライブラリから単離することもできる。
ドが、天然由来のポリヌクレオチドと同じヌクレオチド配列を有するものであることをい
う。「天然の配列」ポリペプチドは、天然由来の(例えば任意の種からの)ポリペプチド(
例えば抗体)と同じアミノ酸配列を有するものである。こうした天然の配列ポリヌクレオ
チド及びポリペプチドは、自然界から単離する、又は組み換え又は合成手段によって生成
することができる。
置換、欠失、付加、及び/又は挿入において、本明細書に具体的に開示されたポリヌクレ
オチドとは一般的に異なるポリヌクレオチドである。こうしたバリアントは、天然に存在
するものであってもよいし、例えば、本明細書に記載する通りに及び/又は当技術分野で
周知のいくつかの技術のいずれかを使用して、本発明の1以上のポリヌクレオチド配列を
改変し、コードされたポリペプチドの1以上の生体活性を評価することによって、合成に
よって産生することもできる。
、欠失、付加、及び/又は挿入において、本明細書に具体的に開示されたポリペプチドと
は一般的に異なるポリペプチドである。こうしたバリアントは、天然に存在するものであ
ってもよいし、例えば、本明細書に記載する通りに及び/又は当技術分野で周知のいくつ
かの技術のいずれかを使用して、本発明の1以上の先述のポリペプチド配列を改変し、ポ
リペプチドの1以上の生体活性を評価することによって、合成によって産生することもで
きる。
をもつバリアント又は誘導体ポリペプチドをコードする機能性分子をさらに得ることがで
きる。本発明のポリペプチドの同等の、さらには改良されたバリアント又は領域を作製す
るために、ポリペプチドのアミノ酸配列を変更することが所望される場合、当業者は一般
的に、コードするDNA配列の1以上のコドンを変化させることとなる。例えば、ある種のア
ミノ酸は、他のポリペプチド(例えば抗原)又は細胞と結合するその能力の認識可能な損失
を伴わずに、タンパク質構造内で、他のアミノ酸と置換することができる。タンパク質の
生体機能活性を定めるのは、タンパク質の結合能力及び性質であるので、タンパク質配列
、及び当然その基になるDNAコード配列において、ある種のアミノ酸配列の置換を施し、
それでも類似の特性をもつタンパク質を得ることができる。したがって、開示された組成
のペプチド配列、又は、前記ペプチドをコードする対応するDNA配列において、その生体
有用性又は活性の認識可能な損失を伴わずに、様々な変化を施すことができることが想定
される。多くの場合、ポリペプチドバリアントは、1以上の保存的置換を含有することと
なる。
の二次構造及び疎水性親水性(hydropathic nature)が実質的に変化しないことが予測され
るように、類似の特性を有する別のアミノ酸と置換されたものである。先に概要を述べた
通り、したがって、アミノ酸置換は一般に、アミノ酸側鎖置換基の相対的類似性、例えば
、その疎水性、親水性、電荷、大きさなどに基づいている。前述の特性のいくつかを考慮
に入れる置換の例は、当業者に周知であり、以下が挙げられる:アルギニン及びリシン;グ
ルタミン酸及びアスパラギン酸;セリン及びトレオニン;グルタミン及びアスパラギン;並
びにバリン、ロイシン、及びイソロイシン。アミノ酸置換は、残基の極性類似性、電荷、
溶解性、疎水性、親水性、及び/又は両親媒性に基づいて、さらに行うことができる。例
えば、負の電荷をもつアミノ酸としては、アスパラギン酸及びグルタミン酸が挙げられ;
正の電荷をもつアミノ酸としては、リジン及びアルギニンが挙げられ;類似の親水値を有
する非荷電の極性頭部基をもつアミノ酸としては、ロイシン、イソロイシン、及びバリン
;グリシン及びアラニン;アスパラギン及びグルタミン;並びにセリン、トレオニン、フェ
ニルアラニン、及びチロシンが挙げられる。保存的変化を表すことができる他の群のアミ
ノ酸としては、以下が挙げられる:(1)ala、pro、gly、glu、asp、gln、asn、ser、thr;(2
)cys、ser、tyr、thr;(3)val、ile、leu、met、ala、phe;(4)lys、arg、his;及び(5)phe
、tyr、trp、his。バリアントは、さらに又は代わりに、非保存的変化を含有することが
できる。好ましい実施態様では、バリアントポリペプチドは、5個又はそれより少ないア
ミノ酸の置換、欠失、又は付加により、天然の配列とは異なる。バリアントはさらに(又
は代わりに)、例えば、ポリペプチドの免疫原性、二次構造、及び疎水性親水性に対する
最小限の影響を有するアミノ酸の欠失又は付加によって改変することができる。
得る賦形剤」には、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌及び抗真菌剤、
等張剤、及び吸収遅延剤などが含まれる。前記賦形剤は、動物、好ましくはヒトに投与さ
れた場合に、副作用、アレルギー反応、又は他の有害反応をもたらさない。ヒト投与のた
めには、製剤は、FDA Office of Biologics基準によって必要とされる通り、無菌性、発
熱性、及び一般的な安全及び純度基準を満たすべきである。
と特異的に結合する(例えば免疫反応する)能力をいう。ポリペプチドは、単一特異性であ
り、標的に特異的に結合する1以上の結合部位を含有していてもよいし、多重特異性であ
り、同じ又は異なる標的に特異的に結合する2以上の結合部位を含有していてもよい。一
実施態様では、本発明の抗体は、2以上の標的に特異的である。例えば、一実施態様では
、本発明の多重特異性結合分子は、腫瘍細胞上に発現されたGARP及び第二の分子に結合す
る。腫瘍細胞上に発現された抗原に結合する抗原結合部位を含む抗体の例は、当該技術分
野において公知であり、こうした抗体由来の1以上のCDRを、本発明の抗体に含めることが
できる。
然には存在しないアミノ酸配列を含むポリペプチドが含まれる。例えば、天然には存在し
ないポリペプチドは、天然に存在するポリペプチドの改変形態である(例えば、付加、置
換、又は欠失などの変異を含む)、又は、自然界では自然に連結されない第二のアミノ酸
配列(これは天然に存在するものでも存在しないものでもよい)に、アミノ酸の直鎖配列で
連結された第一のアミノ酸配列(これは天然に存在するものでも存在しないものでもよい)
を含むポリペプチドである。
「単鎖Fv」、「sFv」、又は「scFv」は、単一のポリペプチド鎖に接続されたVH及びVL抗
体ドメインを含む抗体断片である。好ましくは、sFvポリペプチドは、sFvが抗原結合のた
めに所望される構造を形成するのを可能にする、VHドメインとVLドメインとの間のポリペ
プチドリンカーをさらに含む。sFvの概説については、Pluckthunの文献、「モノクローナ
ル抗体の薬理学(The Pharmacology of Monoclonal Antibodies)」、vol.113、Rosenburg
及びMoore編.、Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994);Borrebaeckの文献、1995(
下記)を参照のこと。
変ドメインVH及びVLの特定の領域の配列が、抗体間で大きく異なるという事実をいい、そ
れぞれ個々の抗体の、その標的抗原に対する結合及び特異性において使用される。しかし
、可変性は、抗体の可変ドメイン全体を通して均一に分布していない。可変性は、抗原結
合部位の一部を形成しているVLドメイン及びVHドメインのそれぞれにおける「高頻度可変
性ループ」と呼ばれる3つのセグメントに集中している。Vλ軽鎖ドメインの第一、第二、
及び第三の高頻度可変性ループは、本明細書では、L1(λ)、L2(λ)及びL3(λ)と称され、
且つVLドメイン中の残基24-33(L1(λ)、9、10、又は11個のアミノ酸残基からなる)、49-5
3(L2(λ)、3個の残基からなる、)、及び90-96(L3(λ)、6個の残基からなる)を含むと定義
することができる(Moreaらの文献、Methods, 20:267-279(2000))。Vκ軽鎖ドメインの第
一、第二及び、第三の高頻度可変性ループは、本明細書では、L1(κ)、L2(κ)及びL3(κ)
と称され、且つVLドメイン中の残基25-33(L1(κ)、6、7、8、11、12、又は13個の残基か
らなる)、49-53(L2(κ)、3個の残基からなる)、及び90-97(L3(κ)、6個の残基からなる)
を含むと定義することができる(Moreaらの文献、Methods, 20:267-279(2000))。VHドメイ
ンの第一、第二、及び第三の高頻度可変性ループは、本明細書では、H1、H2、及びH3と称
され、且つVHドメイン中の残基25-33(H1;7、8又は9個の残基からなる)、52-56(H2;3又は4
個の残基からなる)、及び91-105(H3;長さは非常にばらつきがある)を含むと定義すること
ができる(Moreaらの文献、Methods, 20:267-279(2000))。別段の指示がない限り、用語L1
、L2及びL3とは、それぞれ、VLドメインの第一、第二、及び第三の高頻度可変性ループを
いい、VκとVλの両アイソタイプから得られる高頻度可変性ループを包含している。用語
H1、H2及びH3とは、それぞれ、VHドメインの第一、第二、及び第三の高頻度可変性ループ
をいい、γ、ε、δ、α、又はμを含めた公知の重鎖アイソタイプのいずれかから得られ
る高頻度可変性ループを包含している。高頻度可変性ループL1、L2、L3、H1、H2、及びH3
はそれぞれ、下に定義する通り、「相補性決定領域」又は「CDR」の一部を含むことがで
きる。
標的結合部位の数をいう。各標的結合部位は、1つの標的分子、又はある標的分子上の特
異的部位に特異的に結合する。あるポリペプチドが、2つ以上の標的結合部位を含む場合
、各標的結合部位は、同じ又は異なる分子に特異的に結合することができる(例えば、異
なるリガンド若しくは異なる抗原、又は同じ抗原上の異なるエピトープに結合することが
できる)。対象の結合分子は、ヒトGARP分子に特異的な少なくとも1つの結合部位を有する
ことが好ましい。特定の実施態様では、本明細書で提供されるGARP抗体は、少なくとも二
価であり得る。
ること」又は「治療」又は「軽減」とは、治療的処置と予防又は防御手段との両方をいう
;ここでは、目的は、標的とされる状態又は障害を予防する又は失速させる(軽減する)こ
とである。治療を必要とする者としては、障害を既に患う者、並びに障害に罹患しやすい
者、又は障害が予防されるべき者が挙げられる。対象又は哺乳類は、本発明の方法に従っ
て、治療量の抗体を与えられた後に、患者が次のものの1以上の観察可能な及び/又は測定
可能な低下又は非存在を示すならば、感染症に関して成功裏に治療される:病原性細胞の
数の減少;病原性である全細胞の割合の低下;及び/又は特定の疾患又は状態に伴う1以上の
症状の、ある程度の軽減;罹患率及び死亡率の低下、及び生活の質の問題の向上。疾患の
成功裏の治療及び改善を評価するための先述のパラメータは、医師になじみの深い慣例的
手順によって容易に測定可能である。
β3と名付けられた3種のアイソフォームをいう。これらのTGF-βアイソフォームのペプチ
ド構造は、非常に類似している(70~80%の程度での相同性)。これらは、すべて、大きな
タンパク質前駆体;TGF-β1(GenBank Access No:NM_000660)(390アミノ酸を含有する)、及
びTGF-β2(GenBank Access No:NM_001135599及びNM_003238)及びTGF-β3(GenBank Access
No:XM_005268028)(それぞれ412アミノ酸を含有する)としてコードされる。これらはそれ
ぞれ、20~30アミノ酸のN-末端シグナルペプチド(これは、細胞からの分泌のために必要
とされる)、プロ領域(潜在関連ペプチドすなわちLAPと称される)、及び112~114アミノ酸
C-末端領域(これは、タンパク質切断によるプロ領域からの放出後に、成熟TGF-β分子と
なる)を有する。
本発明の一目的は、TGF-βの存在下でのGARPに対するタンパク質結合である。本発明の
別の目的は、抗原結合ドメインであって、TGF-βの存在下でGARPと特異的に結合する前記
抗原結合ドメインを含むタンパク質である。
チリピート(Leucin Rich Repeat)ファミリーに属する。本発明(配列番号:1)(GenBank受託
番号_001128922)のヒトGARPタンパク質転写産物バリアント2の完全なアミノ酸配列は、
RPと結合する。
合に、GARPと結合する。
;TGF-β2、アイソフォーム2;TGF-β3との複合体と結合する。好ましくは、本発明のタン
パク質は、GARPとTGF-β1との複合体と結合する。
。
1が、LAPとして公知であるN-末端断片と非共有的に結合されたままである複合体を含む。
平衡解離定数)で、GARPと潜在型TGF-βとの複合体と結合する。
体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、二量体抗体、三量体抗体
、四量体抗体からなる群から選択される抗体分子である。
らなる群から選択される抗体断片である。
ネクチン、アトリマー、エバシン、DARPin、アンチカリン、アビマー、フィノマー、ヴァ
ーサボディ、及びデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣体である。
可変領域に相当する、抗体の最も小さい機能性結合単位をいう。
造及び機能特性を含有する、抗体由来の治療用タンパク質をいう。これらの重鎖抗体は、
1つの可変ドメイン(VHH)と2つの定常ドメイン(CH2及びCH3)を含有する。
片をいう。ヒンジ領域の欠失によって、従来のIgG4抗体の大きさの本質的に半分であり、
且つIgG4抗体の二価の結合領域ではなく一価の結合領域を有する分子がもたらされる。
ドメインの1つに由来する58アミノ酸残基のタンパク質ドメインに基づく親和性タンパク
質をいう。
術分野で周知であり、これは、非抗体ポリペプチドの結合能力を活用するために開発され
た、抗体模倣体DRP(設計されたリピートタンパク質)技術をいう。
る、別の抗体模倣技術をいう。アンチカリンは、デュオカリンと呼ばれる二重標的タンパ
ク質として構成することもできる。
ディは、当技術分野で周知であり、これは、別の抗体模倣技術をいう。これらは、通常の
タンパク質が有する疎水性コアの代わりに高ジスルフィド密度のスキャフォールドを形成
する、>15%システインを有する3~5 kDaの小さなタンパク質である。
疫複合体である。
複合体である。前記タンパク質は、例えば、造影用途のために使用されるであろう。
。
結合する。
GARPと結合する。
体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱フコシル化抗体、二重特異性抗体、二量体抗体、三量体抗体
、四量体抗体からなる群から選択される抗体分子である。
らなる群から選択される抗体断片である。
ネクチン、アトリマー、エバシン、DARPin、アンチカリン、アビマー、フィノマー、ヴァ
ーサボディ、及びデュオカリンからなる群から選択される抗体模倣体である。
RP)抗体又はその抗原結合断片である。
阻害する、又は、Tregからの成熟TGF-βの放出を阻害する。
する又は妨げる。
伝達経路からの分子の活性化を阻害する。
又はTregからの成熟TGF-βの放出、又は成熟TGF-βのTGF-β受容体への結合、又はTGF-β
活性、及び/又はTGF-β受容体シグナル伝達経路からの分子の活性化を、阻止する、低下
させる、妨げる、又は中和する能力があることを意味する。
ている結果として改変されたGARPのエピトープを含む。別の実施態様では、前記立体構造
エピトープは、hGARPのアミノ酸及び潜在型TGF-βのアミノ酸を含む。
GARPとTGF-βの両方からのアミノ酸を含む。
り、GARPのみ由来のアミノ酸を含むが、TGF-βが存在する場合には、異なる高次構造をと
る。
酸配列(配列番号:1)のYSGを含む。
酸配列(配列番号:1)のYSGを含み、且つTGF-βの存在を必要とする。
酸配列(配列番号:1)のYSGと、残基137、138、及び139:配列番号:1のYSGのN-末端及び/又
はC-末端における1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、1
9、20の隣接する残基を含む。
酸配列(配列番号:1)のYSGと、残基137、138、及び139:配列番号:1のYSGのN-末端及び/又
はC-末端における1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、1
9、20の隣接する残基を含み、且つTGF-βの存在を必要とする。
のエピトープと結合して、GARPからの潜在型TGF-βの放出を阻害する。
よって、タンパク質がTGF-βシグナル伝達を阻害する能力を決定することができる。こう
した試験の一例は、一般的に、(本発明の実施例2に示す通り)SMAD2のリン酸化の測定であ
る。
5はQ又はKである);及び
の少なくとも1つを含む、抗hGARP抗体又はその抗原結合断片である。
R2、及び配列番号:15のVH-CDR3を含み、且つ、軽鎖の可変領域が、配列番号:19;配列番号
:22;配列番号:25;配列番号:28;又は配列番号:31に示した通りのVL-CDR1の少なくとも1つ;
配列番号:20;配列番号:23;配列番号:26;配列番号:29;又は配列番号:32に示した通りのVL-
CDR2の少なくとも1つ;及び配列番号:21;配列番号:24;配列番号:27;配列番号:30;又は配列
番号:33に示した通りのVL-CDR3の少なくとも1つを含む、抗hGARP抗体又はその抗原結合断
片である。
イン、ヒンジ領域、CH2ドメイン、及びCH3ドメイン、特に、IgG1、IgG2、IgG3、又はIgG4
を含むことができる。
のCDR:
5はQ又はKである);及び
を含む。
挙される特定のCDR又はCDRのセットと少なくとも60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、9
6%、97%、98%、99%の同一性を有するアミノ酸配列を有すると特徴付けることができる。
(i)配列番号:2、3、及び4に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH-CD
R3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:5、6、及び7に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL-CD
R2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を有する抗体からなる群から選択され、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:52、3、及び4に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH-C
DR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:5、6、及び7に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL-CD
R2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を有する抗体からなる群から選択され、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:16、17、及び18に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を有する抗体からなる群から選択され、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:19、20、及び21に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を含み、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:22、23、及び24に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を含み、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:25、26、及び27に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を含み、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:28、29、及び30に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を含み、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
(i)配列番号:13、14、及び15に示した通りの重鎖CDR 1、2、及び3(VH-CDR1、VH-CDR2、VH
-CDR3)アミノ酸配列;及び
(ii)それぞれ配列番号:31、32、及び33に示した通りの軽鎖CDR 1、2、及び3(VL-CDR1、VL
-CDR2、VL-CDR3)アミノ酸配列
を含み、
ここでは任意に、前記配列のいずれかにおける1、2、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、
別のアミノ酸によって置換され得る。
列バリアントは、列挙された配列における1、2、又は3個のアミノ酸置換を含む。
含む可変の重鎖CDR3、又はその配列バリアントを含み、ここでは、該配列バリアントは、
列挙された配列における1、2、又は3個のアミノ酸置換を含む。
可変領域を含む、抗hGARP抗体MHGARP8又はその抗原結合断片である。ここでは、配列番号
:50及び配列番号:51は、それぞれ、シグナルペプチド配列が除去された配列番号:8及び配
列番号:9に相当する。
、3個、又はそれ以上のアミノ酸は、別のアミノ酸によって置換され得る。
と相同であるアミノ酸配列を含む、重鎖及び軽鎖可変領域を含む。ここでは、これらの抗
体は、本発明のタンパク質の所望の機能特性を保持する。
、又は配列番号:50との60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%の同一
性を有する配列を包含する。
、又は配列番号:51との60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%の同一
性を有する配列を包含する。
相同であるアミノ酸配列を含む、重鎖及び軽鎖可変領域を含む。ここでは、これらの抗体
は、本発明のタンパク質の所望の機能特性を保持する。
60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%の同一性を有する配列を包含
する。
37;38、又は39との60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%の同一性を
有する配列を包含する。
は、保存的配列改変を含むことができる。保存的配列改変とは、そのアミノ酸配列を含有
する抗体の結合特性に有意に影響を与えない又は変化させないアミノ酸改変をいう。こう
した保存的改変としては、アミノ酸置換、付加、及び欠失が挙げられる。改変は、部位特
異的変異導入及びPCRが介在する変異導入などの当技術分野で公知の標準の技術によって
、本発明の抗体に導入することができる。保存的アミノ酸置換は、一般的に、アミノ酸残
基が、類似の物理化学特性をもつ側鎖を有するアミノ酸残基と置き換えられるものである
。特定の可変領域及びCDR配列は、1、2、3、4個、又はそれ以上のアミノ酸挿入、欠失、
又は置換を含むことができる。置換が行われる場合、好ましい置換は、保存的改変であろ
う。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野で定義されている。こ
れらのファミリーとしては、塩基性側鎖をもつアミノ酸(例えば、リジン、アルギニン、
ヒスチジン)、酸性側鎖(例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸)、無電荷極性側鎖(例え
ば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン
、トリプトファン)、非極性側鎖(例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、
プロリン、フェニルアラニン、メチオニン)、β分岐側鎖(例えば、トレオニン、バリン、
イソロイシン)、及び芳香族側鎖(例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン
、ヒスチジン)が挙げられる。したがって、本発明の抗体のCDR領域内の1以上のアミノ酸
残基は、同じ側鎖ファミリーからの他のアミノ酸残基と置き換えることができ、また、変
更された抗体を、本明細書に記載した分析を使用して、保持された機能(すなわち、本明
細書で示した性質について試験することができる。抗hGARP抗体は、CDRがラクダ科動物抗
体(例えば、hGARPでの能動免疫化によって産生されたラクダ科動物抗hGARP抗体)に由来す
る、CDR移植された抗体でもあり得る。
る抗体を提供する。
体は、CH1ドメイン及び/又はCLドメインを含むことができ、そのアミノ酸配列は、完全に
又は実質的にヒトである。本発明の抗原結合ポリペプチドが、ヒトへの治療的使用を目的
とする抗体である場合、該抗体の定常領域全体、又はその少なくとも一部分が、完全に又
は実質的にヒトのアミノ酸配列を有することが典型的である。したがって、CH1ドメイン
、ヒンジ領域、CH2ドメイン、CH3ドメイン、及びCLドメイン(及び存在するならばCH4ドメ
イン)の1つ以上又は任意の組み合わせは、そのアミノ酸配列に関して、完全に又は実質的
にヒトであり得る。好都合には、CH1ドメイン、ヒンジ領域、CH2ドメイン、CH3ドメイン
、及びCLドメイン(及び存在するならばCH4ドメイン)はすべて、完全に又は実質的にヒト
のアミノ酸配列を有することができる。ヒト化された抗体若しくはキメラ抗体、又は抗体
断片の定常領域という状況では、用語「実質的にヒトの」とは、ヒト定常領域との少なく
とも90%、又は少なくとも95%、又は少なくとも97%、又は少なくとも99%のアミノ酸配列同
一性をいう。
び体細胞変異した遺伝子を含めたヒト免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ
酸配列をいう。本発明はまた、「完全にヒトの」ヒンジ領域の存在が明確に必要とされる
実施態様を除いて、ヒト配列に関する1以上のアミノ酸付加、欠失、又は置換によって変
更されている「ヒト」配列の定常ドメインを含むポリペプチドを想定する。本発明の抗hG
ARP抗体中の「完全にヒトの」ヒンジ領域の存在は、免疫原性を最小限にすることと抗体
の安定性を最適化することの両方にとって有益であり得る。重鎖及び/又は軽鎖の定常領
域内、特にFc領域内に、1以上のアミノ酸置換、挿入、又は欠失を施すことができると考
えられる。アミノ酸置換は、置換されるアミノ酸の、異なる天然に存在するアミノ酸との
、又は非天然又は改変されたアミノ酸との置き換えをもたらすことができる。例えばグリ
コシル化パターンの変化(例えば、N-又はO結合型グリコシル化部位の付加又は欠失による
)などの、他の構造的改変も可能である。抗体の使用目的によっては、本発明の抗体を、F
c受容体に対するその結合特性に関して改変すること、例えば、エフェクター機能を調節
することが望ましい可能性がある。例えば、システイン残基(1つ又は複数)を、Fc領域に
導入し、それによって、この領域における鎖間ジスルフィド結合形成を可能にすることが
できる。このようにして産生したホモ二量体抗体は、改善されたエフェクター機能を有す
ることができる。Caronらの文献、J.Exp.Med.176:1191-1195(1992)、及びShopes,B.J.の
文献、Immunol.148:2918-2922(1992)を参照のこと。或いは、二重Fc領域を有するGARP抗
体を設計することができ、それによって、増強された補体溶解及びADCC能を有することが
できる。Stevensonらの文献、Anti-Cancer Drug Design 3:219-230(1989)を参照のこと。
本発明はまた、化学療法薬、毒素(例えば、細菌、真菌、植物又は動物起源の、酵素活性
のある毒素、若しくはその断片)、又は放射性同位元素(すなわち放射性複合体(radioconj
ugate))などの細胞毒と結合された、本明細書に記載した通りの抗体を含む、免疫複合体
を想定する。Fc領域はまた、参照により本明細書に組み込まれるChan及びCarterの文献、
2010、Nature Reviews:Immunology,10:301-316に記載されている通り、半減期延長のため
に操作することができる。Fc領域が本明細書に記載した通りのタンパク質操作によって改
変されたバリアント抗hGARP抗体はまた、Fc改変を伴わない同等の抗体(すなわち、同等の
抗原結合特性)と比較すると、(例えば治療学/診断学における)有効性の向上を示すことが
できる。
が抗体依存性細胞の細胞毒性(ADCC)を仲介する能力を増大させるように、及び/又はFcγ
受容体に対する抗体の親和性を増大させるように改変される。さらに別の実施態様では、
抗体のグリコシル化は、改変される。例えば、非グリコシル化(aglycoslated)抗体(すな
わち、抗体がグリコシル化されない)を作製することができる。グリコシル化は、例えば
、GARP標的抗原に対する抗体の親和性を増大させるために、変更することができる。こう
した炭水化物改変は、例えば、抗体配列内のグリコシル化の1つ以上の部位を変更するこ
とによって、実現することができる。例えば、1以上の可変領域フレームワークグリコシ
ル化部位の排除をもたらす1以上のアミノ酸置換を施し、それによって、その部位のグリ
コシル化を排除することができる。こうした非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和
性を増大させることができる。さらに想定されるのは、変化型のグリコシル化を有するバ
リアント抗hGARP抗体、例えば、低下した量のフコシル残基を有する低フコシル化抗体、
非フコシル化抗体(Natsumeらの文献、2009、Drug Design Development and Therapy,3:7-
16によって記載されている通り)、又はバイセクティングGlcNac構造が増加された抗体で
ある。こうしたグリコシル化パターンの変更は、抗体のADCC活性を増大させ、一般的に、
「天然の」ヒトFcドメインを含む同等の抗体に対して、10倍のADCC増強をもたらすことが
示されている。こうした炭水化物改変は、例えば、グリコシル化酵素機構が変更された宿
主細胞中で抗体を発現させること(Yamane-Ohnuki及びSatohの文献、2009、mAb 1(3):230-
236によって記載されている通り)によって実現することができる。
を天然に欠いているアイソタイプのものである、又はヒトIgG1、例えばヒトIgG2若しくは
ヒトIgG4よりも作用が有意に低いエフェクター機能を呈するアイソタイプのものであると
いう理由で、又は、抗体のFc領域が、Armour KLらの文献、Eur.J.Immunol., 1999, 29:26
13-2624に記載されている通りに、エフェクター機能を低下させる又は実質的に無くすよ
うに操作されているという理由で、エフェクター機能を欠いている可能性がある。
変ドメインを含む2つの抗体重鎖が対形成して二重特異性抗体のFc領域を形成する)の優先
的形成を促進するように操作することができる。こうした改変の例としては、Ridgway JB
、Presta LG、Carter P.の文献、1996、Protein Eng.Jul;9(7):617-21、及びMerchant AM
らの文献、1998、Nat Biotechnol.Jul;16(7):677-81によって記載されている「ノブを穴
に入れる(knobs-into-hole)」改変が挙げられる。
を発現する細胞に対する、抗体依存性細胞介在性細胞毒性(ADCC)、補体依存性細胞毒性(C
DC)、及び抗体依存性細胞介在性貪食性(ADCP)から選択された1以上のエフェクター機能を
示すことができる。該抗体は、GARP関連の機能不全細胞に対するADCCを示すことができる
。該抗体は、天然のヒトFcドメインを含む同等の抗体である参照抗体と比較して、増強さ
れたADCC作用を示すことができる。非限定的実施態様では、ADCC作用は、天然のヒトFcド
メインを含む参照抗体と比較して、少なくとも10×高められ得る。この文脈では、「同等
の」は、ADCC作用が増強された抗体が、(天然のヒトFcに対して)ADCCを増強する目的で施
されるあらゆる改変以外は、参照抗体と、実質的に同一の抗原結合特異性を示す及び/又
は同一のアミノ酸配列を有することを意味するために採用することができる。該抗体は、
ヒトIgG、最も好ましくはヒトIgG1の、ヒンジ領域、CH1ドメイン、CH2ドメイン、及びCH3
ドメインを含有することができる。該抗体は、例えば、置換、欠失、若しくは挿入、又は
Fc依存性の機能性を増強若しくは低下させるための他の構造的改変などの、Fc領域内の改
変を含むことができる。
に関し、また、これは、抗体エフェクター機能、すなわちADCC、CDC、ADCP、及び特に、
向上したエフェクター機能から恩恵を受ける治療用途に特に適している可能性がある。し
たがって、エフェクター機能(又は向上したエフェクター機能)を示す、且つTGF-βを阻害
する、本明細書に記載するGARP抗体は、抗体エフェクター機能から恩恵を受ける、ある種
の治療用途、例えば癌、慢性感染症、線維症治療に特に好都合であり得る。
である。一実施態様では、本発明の発現ベクターは、配列番号:10及び配列番号:11、又は
前記配列番号:10及び配列番号:11と少なくとも60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%
、97%、98%、99%の同一性を有する核酸配列を有する任意の配列、の少なくとも1つを含む
。
、本発明の抗体の組み換え体産生のために使用することができる。一実施態様では、宿主
細胞は、原核生物、酵母、又は真核生物細胞、好ましくは哺乳類の細胞、例えば、例を挙
げると:SV40によって形質転換されたサル腎臓CV1株(COS-7、ATCC CRL 1651);ヒト胎児腎
臓株(293、すなわち懸濁培地中で成長のためにサブクローニングした293細胞、Grahamら
の文献、J.Gen.Virol.36:59(1977));ベビーハムスター腎臓細胞(BHK、ATCC CCL 10);チャ
イニーズハムスター卵巣細胞/-DHFR(CHO、Urlaubらの文献、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:
4216(1980));マウスセルトリ細胞(TM4、Matherの文献、Biol.Reprod.23:243-251(1980));
マウス骨髄腫細胞SP2/0-AG14(ATCC CRL 1581;ATCC CRL 8287)若しくはNSO(HPA culture c
ollections no.85110503);サル腎臓細胞(CVl ATCC CCL 70);アフリカミドリザル腎臓細胞
(VERO-76、ATCC CRL-1587);ヒト子宮頸癌細胞(HELA、ATCC CCL 2);イヌ腎臓細胞(MDCK、A
TCC CCL 34);バッファローラット肝臓細胞(BRL 3A、ATCC CRL 1442);ヒト肺細胞(W138、A
TCC CCL 75);ヒト肝臓細胞(Hep G2、HB 8065);マウス乳房腫瘍(MMT 060562、ATCC CCL51)
;TRI細胞(Matherらの文献、Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982));MRC 5細胞;FS4細胞;
及びヒト肝細胞腫株(Hep G2)、並びにDSM's PERC-6細胞株であり得る。これらの宿主細胞
のそれぞれにおける使用に適した発現ベクターはまた、一般に、当技術分野で公知である
。用語「宿主細胞」とは、一般に、培養された細胞株をいうことに留意するべきである。
本発明によるポリペプチドと結合する抗原をコードする発現ベクターが導入されているヒ
トはすべて、「宿主細胞」の定義から明らかに除外される。
GARP抗体の発現に適した条件下で、抗hGARP抗体をコードする単離されたポリヌクレオチ
ド配列を含有する宿主細胞を培養することと、発現された抗hGARP抗体を回収することと
を含む前記方法である。この組み換えプロセスは、インビトロ、エクスビボ、インビボの
治療的、診断的使用を目的とする抗体モノクローナル抗体を含めた、本発明によるGARP抗
体の大規模産生のために使用することができる。これらのプロセスは、当技術分野で利用
可能であり、当業者には公知であろう。
rtment of Biomedical Molecular Biology、Ghent University、'Fiers-Schell-Van Mont
agu' building、Technologiepark 927、B-9052 Gent-Zwijnaarde BELGIUMに寄託した(表2
):
表2
否定されない限り、本願で使用される用語「抗体(1つ)」又は「抗体(複数)」によって包
含される)、好ましくはMHGARP8様抗体は、当技術分野で公知である技術によって産生する
ことができる。「断片」は、無傷抗体の、ある領域、一般に、抗原結合部位又は可変領域
を含む。抗体断片の例としては、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、及びFv断片;二量体
抗体;限定はされないが、例えば、(1)単鎖Fv分子、(2)1つの軽鎖可変ドメインのみを含有
する単鎖ポリペプチド、又はその軽鎖可変ドメインの3つのCDRを含有するその断片(結合
される重鎖部分を含まない)、及び(3)1つの重鎖可変ドメインのみを含有する単鎖ポリペ
プチド、又はその重鎖可変領域の3つのCDRを含有するその断片(結合される軽鎖部分を含
まない)を含めた、隣接するアミノ酸残基の1本の途切れない配列からなる一次構造を有す
るポリペプチドである任意の抗体断片(本明細書では「単鎖抗体断片」又は「単鎖ポリペ
プチド」という);並びに抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。本発明の
抗体の断片は、標準の方法を使用して得ることができる。例えば、Fab又はF(ab’)2断片
は、従来技術に従って、単離された抗体のプロテアーゼ消化によって産生することができ
る。例えばインビボでのクリアランスを遅らせて、より望ましい薬物動態プロフィールを
得るために、免疫反応性の断片を、公知の方法を使用して改変することができるというこ
とを理解されたい。断片は、ポリエチレングリコール(PEG)を用いて改変することができ
る。PEGをFab’断片とカップリングさせる及び部位特異的に結合するための方法は、例え
ば、Leongらの文献、Cytokines 16(3):106-119(2001)、及びDelgadoらの文献、Br.J.Canc
er 73(2):175- 182(1996)(これらの開示を、参照により本明細書に組み込む)に記載され
ている。
マのDNAを、本発明の断片をコードするように改変することができる。次いで、改変され
たDNAを、発現ベクターに挿入し、適切な細胞を形質転換又は形質移入する(その後これは
所望の断片を発現する)ために使用する。
インに対するコード配列で置き換えることによって(例えば、Morrisonらの文献、PNAS pp
.6851(1984))、又は非免疫グロブリンポリペプチドに対するコード配列のすべて又は一部
を、免疫グロブリンコード配列に共有結合的に連結することによって、本発明の抗体(好
ましくはMHGARP8様又はLHG10様抗体)を産生するハイブリドーマのDNAを、発現ベクターへ
の挿入の前に改変することができる。このようにして、元の抗体の結合特異性を有する「
キメラ」又は「ハイブリッド」抗体が調製される。一般的に、こうした非免疫グロブリン
ポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインと置き換えられる。
体は、ヒト化される。本発明による「ヒト化された」形態の抗体は、マウス免疫グロブリ
ンに由来する最小配列を含有する、特異的なキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、
又はそれらの断片(Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2、若しくは抗体の他の抗原結合部分配列な
ど)である。ヒト化抗体はほとんど、レシピエントの相補性決定領域(CDR)由来の残基が元
の抗体(ドナー抗体)のCDR由来の残基によって置き換えられつつも元の抗体の所望の特異
性、親和性、及び能力を維持している、ヒト免疫グロブリン(レシピエント抗体)である。
残基によって置き換えることができる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも移
入されたCDR又はフレームワーク配列にも見られない残基を含むことができる。これらの
改変を施して、抗体性能をさらに高める及び最適化することができる。一般に、ヒト化抗
体は、少なくとも1つ、一般的に2つの可変ドメインのうちの実質的にすべてを含むことと
なる。ここでは、元の抗体のCDR領域に対応するすべての又は実質的にすべてのCDR領域、
及びすべての又は実質的にすべてのFR領域は、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のCD
R領域である。ヒト化抗体はまた、最適には、免疫グロブリン定常領域(Fc)、一般的にヒ
ト免疫グロブリンの定常領域の、少なくともある領域を含むこととなる。さらなる詳細に
ついては、Jonesらの文献、Nature,321,pp.522(1986);Reichmannらの文献、Nature,332,p
p.323(1988);Prestaの文献、Curr.Op.Struct.Biol.,3,pp.394(1992);Verhoeyenらの文献
、Science,239,pp.1534;及び米国特許第4,816,567号(これらの開示の全体を参照により本
明細書に組み込む)を参照のこと。本発明の抗体をヒト化するための方法は、当技術分野
で周知である。
、抗原性の低下にとって非常に重要である。いわゆる「ベストフィット」法に従って、本
発明の抗体の可変ドメインの配列を、公知のヒト可変ドメイン配列のライブラリ全体に対
してスクリーニングする。次いで、マウス配列に近づけられたヒト配列を、ヒト化抗体の
ためのヒトフレームワーク(FR)として受け入れる(Simsらの文献、J.Immunol.151,pp.2296
(1993);Chothia及びLeskの文献、J.Mol.Biol.196,pp.901)。別の方法は、特定のサブグル
ープの軽鎖又は重鎖のすべてのヒト抗体のコンセンサス配列からの特定のフレームワーク
を使用する。いくつかの異なるヒト化抗体のために、同じフレームワークを使用すること
ができる(Carterらの文献、PNAS 89,pp.4285(1992);Prestaらの文献、J.Immunol.,151(19
93))。抗体が、GARPに対する高い親和性及び他の好都合な生物学的特性を保持したままヒ
ト化されることが、さらに重要である。好ましい方法に従ってこの目標を達成するために
、親配列及びヒト化配列の3次元モデルを使用する、親配列及び様々な概念上のヒト化生
成物の分析のプロセスによって、ヒト化抗体を調製する。3次元の免疫グロブリンモデル
は、一般に利用可能であり、当業者になじみが深い。選択された候補となる免疫グロブリ
ン配列の考えられる3次元構造を例示及び表示するコンピュータプログラムが利用可能で
ある。これらの表示の検証によって、候補となる免疫グロブリン配列の機能化における残
基の役割の可能性の分析、すなわち、候補となる免疫グロブリンがその抗原に結合する能
力に影響を与える残基の分析が可能になる。このようにして、コンセンサス及び移入配列
から、FR残基を選択及び組み合わせることができ、その結果、標的抗原(1又は複数)に対
する親和性の増大などの所望の抗体特性が実現する。一般に、CDR残基は、抗原結合に影
響を与えるのに、直接的に、且つ最大限十分に関与する。「ヒト化」モノクローナル抗体
を作製する別の方法は、免疫化のために使用するマウスとしてXenoMouse(Abgenix社、Fre
mont,CA)を使用することである。XenoMouseは、その免疫グロブリン遺伝子が機能性のヒ
ト免疫グロブリン遺伝子によって置き換えられた、本発明によるマウス宿主である。した
がって、このマウスによって、又はこのマウスのB細胞から作製されるハイブリドーマに
おいて産生される抗体は、既にヒト化されている。XenoMouseは、参照によってその全体
が本明細書に組み込まれる米国特許第6,162,963号に記載されている。
ように操作されている他のトランスジェニック動物を免疫化のために使用することによっ
て(Jakobovitzらの文献、Nature 362(1993)255)、又は、ファージディスプレイ法を使用
する抗体レパートリーの選択によって、産生することができる。こうした技術は、当業者
に公知であり、本出願に開示する通りのモノクローナル抗体から出発して実施することが
できる。
するある種のラクダ科動物の能動免疫化によって得ることができる。本明細書に詳細に論
じる及び例示する通り、標的抗原を有するラクダ科動物(ラクダ科動物種の免疫グロブリ
ンレパートリーを発現するように操作された天然の動物又はトランスジェニック動物のい
ずれか)の免疫化の後、所望の抗原に対する特異性を有する(従来のラクダ科動物)抗体を
産生するB細胞を特定することができる、また、公知の技術を使用して、こうした抗体のV
H及びVLドメインをコードするポリヌクレオチドを単離することができる。
あって、VHドメインとVLドメイン(ここでは、該VHドメイン又はVLドメイン中の少なくと
も1つの高頻度可変性ループ又は相補性決定領域は、ある種のラクダ科動物のVH又はVLド
メインから得られる)を含む前記ポリペプチドを提供する。この抗原結合ポリペプチドは
、以下のステップを含むプロセスによって得られる:
(a)ある種のラクダ科動物を、標的抗原で、又は前記標的抗原をコードするポリヌクレオ
チドで免疫し、前記標的抗原に対する抗体を産生するステップと;
(b)前記標的抗原と免疫反応性のラクダ科動物の従来の抗体のVH及び/又はVLドメイン中の
少なくとも1つの高頻度可変性ループ又は相補性決定領域(CDR)をコードするヌクレオチド
配列を決定するステップと;
(c)前記標的抗原と免疫反応性の抗原結合ポリペプチド(前記抗原結合ポリペプチドは、VH
及びVLドメインを含む)を発現させるステップ。ここでは、VHドメイン又はVLドメインの
少なくとも1つの高頻度可変性ループ又は相補性決定領域(CDR)は、パート(a)において決
定されるヌクレオチド配列によってコードされるアミノ酸配列を有する。
る抗原結合ポリペプチドを操作するための土台として使用することができる。無傷のラク
ダ科動物VH及びVLドメインから出発して、出発ラクダ科動物配列から外れた1以上のアミ
ノ酸置換、挿入、又は欠失を操作することが可能である。
のフレームワーク領域中に存在することができる。一次アミノ酸配列のこうした変化の目
的は、不都合な性質(例えば、ヒト宿主における免疫原性(いわゆるヒト化)、潜在的な産
物不均一性の部位、及び/又は不安定性(グリコシル化、脱アミド、異性化など)をおそら
く減じること、又は、その分子の何らかの他の好都合な性質(例えば、溶解性、安定性、
生体利用効率など)を増強することであり得る。
動物VH及び/又はVLドメインの1以上の高頻度可変性ループ(又はCDR)において操作するこ
とができる。こうした変化は、抗原結合親和性及び/又は特異性を増強するために、又は
不都合な性質(例えば、ヒト宿主における免疫原性(いわゆるヒト化)、潜在的な産物不均
一性の部位、及び/又は不安定性(グリコシル化、脱アミド、異性化など)、をおそらく減
じるために、又はその分子の何らかの他の好都合な性質(例えば、溶解性、安定性、生体
利用効率など)を増強するために導入することができる。
異性を示す限りは、重鎖/軽鎖(1又は複数)のある領域が、元の抗体中の対応する配列と同
一又は相同である一方で、これらの鎖(1又は複数)の残部が、別の種に由来する又は別の
抗体クラス又はサブクラスに属する抗体並びにこうした抗体の断片における対応する配列
と同一又は相同である、「キメラ」抗体(免疫グロブリン)に誘導体化することができる(C
abillyらの文献、前掲;Morrisonらの文献、Proc.Natl.Acad.Sci.,pp.6851(1984))。
ク質を含む組成物である。
パク質と、医薬として許容し得る賦形剤とを含む医薬組成物である。
定はされないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清
タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビ
ン酸、ソルビン酸カリウム、植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩、又は電
解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナト
リウム、亜鉛塩、コロイダルシリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セ
ルロースがベースの物質(例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム)、ポリエチレン
グリコール、ポリアクリラート、ワックス、ポリエチレン-ポリオキシプロピレン-ブロッ
クポリマー、ポリエチレングリコール、及び羊毛脂が挙げられる。
本発明のタンパク質である。
方法であって、前記対象に、有効量の本発明のタンパク質を投与することを含む前記方法
である。
めの、本明細書で先に定義した通りの本発明のタンパク質又は医薬組成物である。
めの方法であって、前記対象に、有効量の本発明のタンパク質を投与することを含む前記
方法である。
り得るすべての疾患が挙げられる。
症、循環器疾患、脳血管疾患(例えば虚血発作)、及び神経変性疾患が挙げられる。
こととなる。本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入スプレーによって、局所的
に、直腸内に、経鼻的に、口腔内に、経膣によって、又は埋め込み型リザーバーを介して
投与することができる。本明細書で使用される用語「投与」には、皮下、静脈内、筋肉内
、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、肝臓内、病巣内、及び頭蓋内注射又は注入
技術が含まれる。
懸濁液は、適切な分散剤又は湿潤剤及び懸濁化剤を使用する当技術分野で公知の技術に従
って調製することができる。無菌の注射可能調製物はまた、非毒性の非経口的に許容し得
る希釈剤又は溶媒中の、無菌の注射可能溶液又は懸濁液であり得る。用いることができる
、許容し得るビヒクル及び溶媒の一つは、水、リンゲル液、及び等張性の塩化ナトリウム
溶液である。さらに、無菌の不揮発性油が、溶媒又は懸濁媒として慣例的に用いられる。
この目的のために、合成のモノ又はジグリセリドを含めた、任意の無刺激性の不揮発性油
を用いることができる。注射液の調製においては、天然の医薬として許容し得る油、例え
ばオリーブ油又はヒマシ油(特にそのポリオキシエチル化された形態で)と同様に、脂肪酸
、例えばオレイン酸及びそのグリセリド誘導体が有用である。これらの油の溶液又は懸濁
液はまた、カルボキシメチルセルロースなどの長鎖アルコール希釈剤若しくは分散剤、又
はエマルジョン及び懸濁剤を含めた医薬として許容し得る剤形の製剤において一般に使用
される類似の分散剤を含有することができる。Tween、Span、及び他の乳化剤などの他の
一般に使用される界面活性剤、又は医薬として許容し得る固体、液体、若しくは他の剤形
の製造において一般に使用される生体利用効率エンハンサーも、製剤の目的で使用するこ
とができる。
関する公知の方法に従って、例えば、製造者の指示書を使用して決定することができる。
例えば、本発明の医薬組成物中に存在する抗体は、100mg(10mL)又は500mg(50mL)のいずれ
かの使い捨てバイアル中に10mg/mLの濃度で提供することができる。該生成物は、9.0mg/m
Lの塩化ナトリウム、7.35mg/mLのクエン酸ナトリウム二水和物、0.7mg/mLのポリソルベー
ト80、及び注射用滅菌水中で、静脈内(IV)投与のために製剤化することができる。pHは、
6.5に調整される。これらの計画は例示的であること、また、臨床試験において決定しな
ければならない医薬組成物中の特定の抗体の親和性及び許容性を考慮して、最適な計画及
びレジメンを適合させることができるということを理解されたい。
低下させるための方法であって、前記対象に、治療有効量の本発明のタンパク質を投与す
ることを含む前記方法である。
法であって、前記対象に、治療有効量の本発明のタンパク質を投与することを含む前記方
法である。
害するための方法であって、前記対象に、治療有効量の本発明のタンパク質を投与するこ
とを含む前記方法である。
って、前記対象に、治療有効量の本発明のタンパク質を投与することを含む前記方法であ
る。
って、本発明の医薬組成物が、癌患者の治療のための免疫賦活性抗体として投与されるこ
ととなる前記方法である。
って、前記対象に、癌に対する別の治療、又は免疫療法薬と組み合わせて、治療有効量の
本発明のタンパク質を投与することを含む前記方法である。
に使用するための、癌に対する別の治療、又は別の免疫療法薬との組み合わせである。
における免疫抑制を妨げ、それによって免疫療法薬の有効性を増大させることになること
を確信している。
、乳癌、カルチノイド腫瘍、子宮頸癌、結腸癌、子宮内膜癌、食道癌、肝外胆管癌、ユー
イング腫瘍、頭蓋外胚細胞腫瘍、眼癌、胆嚢癌、胃癌、胚細胞性腫瘍、妊娠性絨毛腫瘍、
頭頸部癌、下咽頭癌、膵島細胞癌、腎臓癌、喉頭癌、白血病、口唇癌及び口腔癌、肝臓癌
、肺癌、リンパ腫、メラノーマ、中皮腫、メルケル細胞癌、転移性頭頸部扁平上皮癌、骨
髄腫、新生物、上咽頭癌、神経芽細胞腫、口腔癌、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、
副鼻腔癌及び鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、褐色細胞腫、下垂体癌、形質細胞腫瘍、前立
腺癌、横紋筋肉腫、直腸癌、腎細胞癌、唾液腺癌、皮膚癌、カポジ肉腫、T-細胞リンパ腫
、軟部肉腫、胃癌、精巣癌、胸腺腫、甲状腺癌、尿道癌、子宮癌、膣癌、外陰癌、又はウ
ィルムス腫瘍などを治療することができる。
下が挙げられる:(a)癌-精巣抗原、例えば、NY-ESO-1、SSX2、SCP1、並びにRAGE、BAGE、G
AGE、及びMAGEファミリーポリペプチド、例えば、GAGE-1、GAGE-2、MAGE-1、MAGE-2、MAG
E-3、MAGE-4、MAGE-5、MAGE-6、及びMAGE-12(これらは、例えば、メラノーマ、肺、頭頸
部、NSCLC、乳房、胃腸、及び膀胱腫瘍に向けるために使用することができる)、(b)変異
した抗原、例えば、p53(様々な固形腫瘍、例えば、結腸直腸、肺、頭頸部癌に関連する)
、p21/Ras(例えば、メラノーマ、膵臓癌、及び結腸直腸癌に関連する)、CD 4(例えばメラ
ノーマに関連する)、MUM 1(例えばメラノーマに関連する)、カスパーゼ-8(例えば頭頸部
癌に関連する)、CIA 0205(例えば膀胱癌に関連する)、HLA-A2-R1701、βカテニン(例えば
メラノーマに関連する)、TCR(例えばT-細胞非ホジキンリンパ腫に関連する)、BCR-abl(例
えば慢性骨髄性白血病に関連する)、トリオースリン酸イソメラーゼ、IA 0205、CDC-27、
及びLDLR-FUT、(c)過剰発現抗原、例えば、ガレクチン4(例えば結腸直腸癌に関連する)、
ガレクチン9(例えば、ホジキン病に関連する)、プロテイナーゼ3(例えば慢性骨髄性白血
病に関連する)、WT 1(例えば様々な白血病に関連する)、炭酸脱水酵素(例えば腎癌に関連
する)、アルドラーゼA(例えば肺癌に関連する)、PRAME(例えばメラノーマに関連する)、H
ER-2/neu(例えば、乳房、結腸、肺、及び卵巣癌に関連する)、α-フェトプロテイン(例え
ば肝細胞腫に関連する)、SA(例えば結腸直腸癌に関連する)、ガストリン(例えば膵臓及び
胃癌に関連する)、テロメラーゼ触媒タンパク質、MUC-1(例えば、乳房及び卵巣癌に関連
する)、G-250(例えば腎細胞癌に関連する)、及び癌胎児抗原(例えば、乳癌、肺癌、及び
、結腸直腸癌などの消化管の癌に関連する)、(d)共通抗原、例えば、メラノーマ-メラノ
サイト分化抗原、例えば、MART-l/Melan A、gp100、MC1R、メラノサイト刺激ホルモン受
容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質-1/TRPl、及びチロシナーゼ関連タン
パク質-2/TRP2(例えばメラノーマに関連する)、(e)例えば前立腺癌に関連する、前立腺関
連抗原、例えば、PAP、PSA、PSMA、PSH-P1、PSM-P1、PSM-P2、(f)免疫グロブリンイディ
オタイプ(例えば骨髄腫及びB細胞リンパ腫に関連する)、並びに(g)ポリペプチド-及び糖-
含有抗原などの、以下を含めた他の腫瘍抗原:(i)糖タンパク質、例えば、シアリルTn及シ
アリルLe<x>(例えば乳癌、結腸直腸癌に関連する)、並びに種々のムチン;糖タンパク質
は、担体タンパク質とカップリングさせることができる(例えば、MUC-1は、LHとカップリ
ングさせることができる);(ii)リポポリペプチド(例えば、脂質部分に連結されたMUC-1);
(iii)多糖(これは担体タンパク質と(例えばKLHと)カップリングさせることができる)(例
えばGlobo H合成六糖)、(iv)ガングリオシド、例えば、GM2、GM12、GD2、GD3(例えば、脳
、肺癌、メラノーマに関連する)(これも担体タンパク質(例えばKLH)とカップリングさせ
ることができる)。他の腫瘍抗原としては、pi 5、Hom/Mel-40、H-Ras、E2A-PRL、H4-RET
、IGH- IGK、MYL-RAR、エプスタイン・バーウイルス抗原、EBNA、ヒトパピローマウイル
ス(HPV)抗原(E6及びE7を含めて)、B型及びC型肝炎ウイルス抗原、ヒトT-細胞リンパ球向
性ウイルス抗原、TSP-180、pl85erbB2、pl80erbB-3、c-met、mn-23H l、TAG-72-4、CA 19
-9、CA 72-4、CAM 17.1、NuMa、K-ras、p 16、TAGE、PSCA、CT7、43-9F、5T4、791 Tgp72
、beta-HCG、BCA225、BTAA、CA 125、CA 15-3(CA 27.29\BCAA)、CA 195、CA 242、CA-50
、CAM43、CD68\KP1、CO-029、FGF-5、Ga733(EpCAM)、HTgp-175、M344、MA-50、MG7-Ag、
MOV 18、NB/70K、NY-CO-1、RCAS1、SDCCAG16、TA-90(Mac-2結合タンパク質\シクロフィ
リンC結合タンパク質)、TAAL6、TAG72、TLP、TPSなどが挙げられる。
KIR抗体が挙げられる。
は、別の抗癌剤、又は化学療法処置などの癌治療の前に、並行して、及び/又は後に、前
記対象に本発明のタンパク質を投与することを含む。
これらの感染症に対するワクチン接種を改良するための方法であって、前記対象に治療有
効量の本発明のタンパク質を投与することを含む前記方法である。
現している試料、組織、器官、又は細胞を特定することができる。
ISA、サンドイッチELISA、RIA、FACS、免疫組織化学、ウエスタンブロット、及び免疫沈
降が挙げられる。
れないが、体液、好ましくは血液、より好ましくは血清、血漿、滑液、気管支肺胞洗浄液
、痰、リンパ、腹水(ascitic fluid)、尿、羊水、腹水(peritoneal fluid)、脳脊髄液、
胸水、心膜液、及び肺胞マクロファージ、組織ライセート及び抽出物(罹患組織から調製
されたもの)が挙げられる。
料を意味するものとする。
できる。「標識される」は、本明細書では、化合物が、該化合物の検出を可能にするため
に付着させた少なくとも1つの元素、同位元素、又は化合物を有することを意味する。標
識の例としては、限定はされないが、放射性同位元素又は重同位元素などの同位体標識;
磁力、電気、又は熱による標識、及び有色又は発光染料:例えばランタニド錯体、量子ド
ット、フルオレセイン、ローダミン、テトラメチルローダミン、エオシン、エリスロシン
、クマリン、メチル-クマリン、ピレン、マラカイトグリーン、スチルベン、ルシファー
イエロー、カスケードブルー、テキサスレッド、アレクサ(alexa)色素、cy色素が挙げら
れる。
を特定するための方法である。
された潜在型TGF-βを特定するための方法である。
ための抗体を含む、あらゆる製品(例えば、包装又は容器)を意図する。キットは、本発明
の方法を実施するための一単位として宣伝、配布、又は販売することができる。さらに、
キット試薬のいずれか又はすべては、これを外部環境から保護する容器に入れて、例えば
密封容器に入れて提供することができる。キットはまた、キット及びその使用方法を説明
している添付文書を含有することができる。
マイクロタイタープレート)に任意に固定化されている捕捉抗体と、例えばHRP、蛍光標識
、放射性同位元素、β-ガラクトシダーゼ、及びアルカリホスファターゼなどの検出可能
な物質とカップリングさせた顕色抗体を含む。
本発明を、次の実施例によって、さらに説明する。
抗体))
DBA/2又はBalb/cマウスを、ヒトGARPを用いて形質移入したマウスP1HTR細胞で免疫した
。免疫されたマウスからの血清を、FACSによって、hGARP発現BW細胞への結合についてス
クリーニングすることによって、>hGARP 抗体の存在について試験した。高い抗体価の>
hGARP抗体をもつマウスからの脾細胞を、SP2/neo細胞と融合させた。HAT培地中でハイブ
リドーマを選択し、限界希釈でクローン化した。+/-1600ハイブリドーマクローンの上清
を、FACSによって、hGARP発現BW細胞に結合する抗体の存在についてスクリーニングした
。本発明者らは、このスクリーニングにおいて、>hGARPモノクローナル抗体を産生する3
8のクローンを特定した。9のクローンを選択し、9種の新規の>hGARPモノクローナル抗体
(MHGARP1から9)の大規模産生及び精製のために増幅した。
するが、非形質移入細胞とは結合しない。MHGARP1から9はまた、hGARPを用いて形質移入
した293T細胞、及びhGARPをコードするレンチウイルスを用いて形質導入された2種のヒト
T細胞株(クローンTh A2及びJurkat)とも結合するが、対応する親細胞とは結合しない(図
示せず)。この認識パターンは、陽性対照としてここで使用される市販品として入手でき
る>hGARP mAb(クローンPlato-1)の認識パターンと同一である。これらの結果は、MHGARP
1から9が、細胞表面上のhGARPを認識することを示す。
から-14)は、クローンThA2(hGARPを発現しない、ヒトCD4+ヘルパーT細胞)とは結合しない
が、hGARPを用いて形質導入されたThA2と結合する。
hGARPモノクローナル抗体はいずれも阻害しない)
ヒトTregクローン(1E+06細胞/ml)を、無血清培地中で、20μg/mlの>hGARPモノクロー
ナル抗体の存在又は非存在下で、コーティングされた抗CD3(1μg/ml)及び可溶性の抗CD28
(1μg/ml)抗体で刺激した。この分析では、13種の>hGARP モノクローナル抗体を試験し
た:本発明者らの9種の新規モノクローナル抗体(MHGARP1から9)、及び市販品として入手で
きる抗体クローンPlato-1(Enzo Life Sciences社、catalog No.ALX-804-867)、272G6(Syn
aptic Systems社、catalog No.221 111)、50G10(Synaptic Systems社、catalog No.221 0
11)、及び7B11(BioLegend社、catalog No.352501)。24時間後に細胞を収集し、溶解し、
還元条件下でSDS-PAGEにかけた。iBlotシステム(Life Technologies社)を用いて、ニトロ
セルロース膜上にゲルをブロットした。ブロッキング後、膜を、リン酸化されたSMAD2(pS
MAD2、Cell Signaling Technologies社)又はβ-アクチン(SIGMA)に方向付けられる一次抗
体と、次いで二次HRPカップリング抗体と、ハイブリダイズさせ、Enhanced ChemiLumines
cent(ECL)基質(ThermoFisher Scientific社)を用いて顕在化させた。pSMAD2の存在は、刺
激されたTregクローンによる活性なTGF-β1の産生を示す。Image Jソフトウェアを使用し
て、オートラジオグラフ上の55 kDa pSMAD2及び40 kDa β-アクチンバンドの密度を測定
することによって、ECLシグナルを定量化した。
るために、本発明者らは、単独で又は>hGARP mAbの存在下で、そのT細胞受容体(TCR)を
介してヒトTregクローンを刺激した。刺激されたTregによって産生される活性なTGF-βは
、自己分泌シグナルを誘発し、これが、SMAD2及びSMAD3転写因子のリン酸化及び活性化を
もたらす。本発明者らは、刺激されたTregクローンによる活性なTGF-β産生についての読
み出しとして、ウエスタンブロット(WB)によって、リン酸化されたSMAD2(pSMAD2)の存在
を測定した。図2に示す通り、pSMAD2は、MHGARP8の存在下で、10倍超、減少した。この減
少は、陽性対照としてここで使用される抗TGF-β mAbの存在下で観察される減少と類似し
ている。12種の他の>hGARP mAb(8種は、他に自社で製造されたMHGARPであり、4種は、市
販品として入手できる抗GARP抗体である)はいずれも、Tregクローンによる活性なTGF-β
産生を阻害しなかった。まとめると、本発明者らのデータは、MHGARP8、すなわちhGARPに
方向付けられる抗体が、活性なTGF-β産生を妨げるので、GARPが、ヒトTregによる活性な
TGF-β産生に必要とされることを実証している。
>hGARP mAbは認識しない)
(>hGARPモノクローナル抗体によって認識される領域のマッピング)
マウスBW5147 T細胞を、hGARP、mGARP、又はmGARP/hGARPキメラに対応する、図3Aに配
列したHAタグ付きタンパク質をコードするプラスミドを用いて電気穿孔した。ネオマイシ
ン中で選択された安定なクローンを、ビオチン化抗hGARP抗体(>hGARP1から9)とストレプ
トアビジン-PEで、市販の抗hGARP抗体(クローンPlato-1)と二次抗mIgG2b-AF488で、又は
抗HA抗体と二次抗マウスIgG1-AF488で、染色した。ヒストグラムは、生細胞に対して選択
(gate)される。黒色ヒストグラムは、非形質移入BW細胞に対するシグナルを示し、白色ヒ
ストグラムは、HAタグ付きhGARPを発現しているBW細胞に対するシグナルを示し、灰色ヒ
ストグラムは、HAタグ付きmGARP又はmGARP/hGARPキメラを発現しているBW細胞に対するシ
グナルを示す。
入した親BW5147 T細胞(BW、非形質移入)又はクローンを、ビオチン化抗hGARP抗体(>hGAR
P1から9)とストレプトアビジン-PEで、市販の抗hGARP抗体(クローンPlato-1)と二次抗mIg
G2b-AF488で、又は>mLAP-AF647若しくは>hLAP-APC抗体で、染色した。
阻害しない機構を研究した。本発明者らは、MHGARP8が、他の>hGARP mAbによって認識さ
れるエピトープとは異なるhGARPにおけるエピトープを認識することができるという仮説
を立てた。
たがって、本発明者らは、HAタグ付きhGARP、mGARP、又はhGARP/mGARPキメラをコードす
るプラスミドを構築して、本発明者らのmAbによって認識されるhGARP領域をマッピングし
た。本発明者らは、マウスBW細胞を形質移入し、HAタグ付きタンパク質(図3に模式的に表
す)を発現する安定なクローンを得た。すべてのクローンは、>HA mAbでの染色後の類似
の蛍光強度によって示される通り、表面上に類似のレベルのHAタグ付きタンパク質を発現
した(図3A)。予想通り、すべてのMHGARP mAbが、HAタグ付きhGARPを発現するクローンと
結合したのに対し、MHGARP-1以外はいずれも、HAタグ付きmGARPを発現するクローンと結
合しなかった。HAタグ付きhGARP/mGARPキメラに対する結合の分析から、4つの群のmAbが
顕在化した(図3A)。第1の群(MHGARP-6、-7、及び-9)におけるモノクローナル抗体は、い
ずれのキメラにも結合せず、これは、これらのモノクローナル抗体が、hGARP(領域20~10
1)のaa 20と101との間に位置するエピトープを認識することを示している。第2の群(MHGA
RP-2、-3、及び-8)におけるmAbは、5つのキメラのうちの1つのみと結合し、したがって、
領域101~141内のエピトープを認識する。第3の群は、MHGARP-5を含み、これは、キメラ
のうちの2つと結合し、したがって、領域141-207を認識する。この群は、おそらくMHGARP
-1も含有し、これは交差反応性であるが、mGARP又は3つの他のキメラと結合するよりも効
率的にこれらの2つのキメラと結合する。最後に、第4の群(MHGARP-4及びPlato-1)におけ
るmAbは、5つのキメラのうちの4つと結合し、したがって、領域265~333を認識する。
る領域を認識する4つのファミリーの抗体に分類した。MHGARP-8は、中和活性を示し、領
域101~141と結合する。この領域はまた、中和抗体ではないMHGARP-2及び-3によって認識
される。したがって、領域101~141と結合する能力は、中和活性を付与するのには十分で
はない。
者らは、>hGARP抗体の、hGARP単独(BW+hGARP)、又はhGARPとhTGF-β1(BW+hGARP+hTGF-β
1)を発現するBW細胞のクローンに対する結合を比較した。MHGARP8という注目すべき例外
を除いて、すべての>hGARP抗体は、BW+hGARPと同じ強度でBW+hGARP+hTGF-β1を染色し、
これは、これらの2つのクローンが、細胞表面上で、同じレベルのhGARPを発現することを
示している。一方、MHGARP8抗体は、BW+hGARP+hTGF-β1を、BW+hGARPよりも強い強度で染
色した(図3B)。これは、hGARPレベルは、2つのクローンに対して類似であるが、MHGARP8
によって認識されるエピトープは、BW+hGARP細胞上よりもBW+hGARP+hTGF-β1上に豊富で
あることを示す。
GARPがマウス(m)又はヒト(h)TGF-β1と結合した時にのみ現れることである。これは、以
下の2つの機構のうちの1つに起因する可能性がある:該エピトープが、hGARPとTGF-β1と
の両方由来のアミノ酸を含む(混合型の立体構造エピトープ)、又は、該エピトープが、hG
ARPのみからのアミノ酸を含むが、これが、TGF-β1の存在下では、異なる高次構造をとる
(結合誘発型の立体構造エピトープ)。BW細胞は、マウスTGF-β1を発現し、マウスTGF-β1
は、hGARPと結合する(図3B)。したがって、MHGARP8のBW+hGARPへの(形質移入されたhTGF-
β1の非存在下での)結合は、hGARP/mTGF-β1複合体の認識に起因する可能性がある。
発明者らは、共免疫沈降実験を実施した。本発明者らは、異なる抗GARP抗体を使用して、
BW+hGARP+hTGF-β1細胞からGARPを免疫沈降させ、次いで、TGF-βがGARPで共免疫沈降さ
れたかどうかを確認した。図3Cに示す通り、すべての抗GARP抗体は、GARPを効率的に免疫
沈降させた(図3C、一番上のパネル)。TGF-β1の共免疫沈降は、MHGARP-6、-7、-8、及び-
9 mAbで観察され、これは、これらの抗体が、TGF-β1と結合されたGARPと結合することを
示している。一方、MHGARP-1、-2、-3、-4、及び-5は、GARPを、他の抗GARP mAbと同じぐ
らい効率的に免疫沈降させたが、TGF-βを共免疫沈降させなかった(図3C、一番下のパネ
ル)。これは、MHGARP-1、-2、-3、-4、及び-5が、遊離のGARPを認識するが、TGF-βと結
合されたGARPは認識しないことを示す。結合のためにGARP101-141領域を必要とするMHGAR
P-2及び-3が、遊離のGARPのみを認識するのに対して、やはりGARP101-141を必要とする中
和MHGARP8が、TGF-βと結合されたGARPを認識することに留意することが重要である。
細胞を使用して、漸増量のhTGFB1を用いてhGARPを共形質移入した(図3D)。MHGARP-1、-2
、-3、-4、及び-5の結合は、hTGFB1がhGARPを用いて共形質移入された場合に用量依存的
に低下した。これは、最高量のhTGFB1では、完全に撤廃された。これは、MHGARP-1から-5
が、遊離のGARPのみに結合することを裏付ける。MHGARP-6、-7、及び-9の結合は、hTGFB1
の共形質移入によって改変されず、これは、これらのmAbが、TGF-β1に結合されるかどう
かにかかわらず、hGARPと結合する(すなわち、これらは、遊離のGARPと、TGF-β1に結合
したGARPとの両方に結合する)ことを示している。著しい対比として、MHGARP8の結合は、
hTGFB1がhGARPを用いて共形質移入された場合に、用量依存的に増大した。これは、やは
り、すべての他の抗体とは対照的に、MHGARP8が、遊離のGARPとは結合しないが、TGF-β1
と結合されたGARPとのみ結合することを示唆している。
RNAを使用して、hGARPを用いて形質導入したJurkat細胞におけるTGFB1の発現を抑制した(
図3E)。TGFB1 mRNAに対するsiRNAは、Jurkat+hGARP細胞上で検出される表面LAPの減少に
よって示される通り、TGF-β1の発現を効率的に低下させた(図3E、右パネル)。Jurkat+hG
ARPにおけるTGF-β1の発現低下は、MHGARP8抗体の結合を低下させたが、他の抗GARP抗体
の結合は改変しなかった(図3E、最前面のヒストグラム)。これは、他の抗GARP抗体とは対
照的に、MHGARP8は、遊離のGARPとは結合しなかったが、TGF-β1の存在下でのみGARPと結
合することを裏付ける。
ARP8による結合にとって十分であるという、見込みのない仮説を排除しようとした。言い
換えれば、本発明者らは、本発明者らは、MHGARP8が、hGARPとTGF-βとの両方の発現を必
要とする混合型の又は結合誘発型の立体構造エピトープを認識することを実証しようとし
た。このために、本発明者らは、hTGF-β1をコードするコンストラクトを用いて又は用い
ずに、先に記載したhGARP、mGARP、又はhGARP/mGARPキメラをコードするコンストラクト
を用いて、293T細胞を形質移入した。形質移入された細胞を、FACSによって分析して、MH
GARP8抗体の結合、及び、>hLAP抗体を用いて細胞表面上のhTGF-B1の提示を測定した(図4
)。非形質移入細胞と比較すると、hGARP、mGARP、又はhGARP/mGARPコンストラクト単独(h
TGFB1なし)の形質移入は、低レベルの内在性hTGFB1発現が原因で、低レベルの表面LAPを
誘発した(図4A、左)。表面LAPレベルは、hGARP、mGARP、又は任意のhGARP/mGARPコンスト
ラクトを用いて形質移入された細胞におけるhTGFB1の形質移入時に、劇的に増大した(図4
B、左のヒストグラム)。これは、hTGF-β1が、hGARPによって、mGARPによって、また、す
べてのhGARP/mGARPキメラによって、細胞表面上に提示されることを示す。重要なことに
、MHGARP8は、hGARPを用いて、又は、hGARPのアミノ酸101から141をコードするhGARP/mGA
RPコンストラクトを用いて形質移入された細胞の表面にのみ結合した(図4A及び4B、右)。
MHGARP8は、hTGFB1及びmGARPを用いて形質移入された細胞とも、hGARP101-141をコードし
ないhTGFB1及びhGARP/mGARPコンストラクトを用いて形質移入された細胞とも結合しなか
った(図4B、右)が、これらの細胞は、その表面上に高レベルのLAPを提示した(図4B、左)
。これは、(mGARP又はhGARP/mGARPキメラによる)細胞表面上のTGF-β1の提示が、MHGARP8
による結合にとって十分ではないことを実証する。MHGARP8の結合は、hGARP(領域101-141
)と、細胞表面上のTGF-β1との両方の存在を必要とする。
01から141を含む領域を必要とする。MHGARP8によって認識されるエピトープをさらに定義
するために、本発明者らは、ヒト及びマウスGARPにおける領域101~141の配列を比較した
。この領域では、hGARPとmGARPとの間に、13アミノ酸の違いしかなかった(図5、灰色ボッ
クスによって強調されたアミノ酸)。本発明者らは、3つのHAタグ付き変異体型のhGARPを
構築した。各変異体(Mut I、Mut II、及びMut III)では、3つの連続したアミノ酸が、mGA
RPタンパク質の対応するアミノ酸によって置き換えられた(図5、黒色ボックス)。本発明
者らは、これらのHAタグ付き型の野生型(WT)又は変異体hGARPを用いて形質移入された、B
W細胞の安定なクローンを得た。すべてのクローンは、>HA抗体で染色することによって
実証される通り、表面上に、類似のレベルのHAタグ付きタンパク質を発現した(図5、右側
のヒストグラム)。次いで、本発明者らは、MHGARP-2、-3、及び-8、すなわち、結合のた
めのhGARPの領域101~141を必要とする抗体で染色した後に、クローンを分析した。この3
種の抗体は、WT、Mut I及びMut II型のhGARPを発現する細胞に結合した。一方、Mut III
型のhGARPを発現する細胞に対する結合は大きく低下し、これは、MHGARP-2、-3、及び-8
が、結合のためにhGARPのアミノ酸137-138-139を必要とすることを示している。
阻害する、唯一の利用可能な抗GARP抗体であることを示す。この中和活性は、他のすべて
の抗GARP抗体によって結合されるのとは異なるエピトープに対するMHGARP8の結合と関連
している:MHGARP8の結合は、hGARPの領域101~141と、hTGF-βの存在との両方を必要とす
るのに対して、非中和抗体の結合は、(MHGARP-1、-4、-5、-6、-7、及び-9については)hG
ARPの他の領域を必要とする、又は、(MHGARP-2及び-3については)TGF-β1の非存在下での
み生じる。領域hGARP101~141では、アミノ酸137から139が、MHGARP-2、-3、及び-8の結
合のために必要とされる。
した:前記抗体のKdは、0.2nMである。
MHGARP8がまた、インビボでヒトTregを阻害するかどうかを調べるために、本発明者ら
は、免疫無防備状態のNOD-Scid-IL2Rg-/-(NSG)マウスへのヒトPBMC(末梢血単核球)の導入
によって誘発される異種GvHDのモデルを使用した。NSGマウスは、機能性のT、B、及びNK
細胞を欠いている。これによって、レシピエントマウスにおける機能性のヒト免疫系を増
殖及び産生するヒト造血幹細胞(HSC)の効率的な生着が可能になる。HSCの代わりにヒトPB
MCが使用される場合、T細胞の効率的な生着が起こるが、それに伴って、間もなく異種間
の移植片対宿主病(GvHD)の発症が起こる。このモデルでは、GvHDは、レシピエントNSGマ
ウスの組織を外来物として認識するヒトドナーの細胞毒性Tリンパ球の活性に起因する(Sh
ultzらの文献、Nature 2012,12:786-798)。GvHDの重症度は、ヒトPBMCを用いた共導入ヒ
トTreg細胞によって低下することができる(Hannonらの文献、Transfusion 2014)。
ーの全血から単離し、その後の使用のために凍結した。自己Tregは、次の通りに産生した
:CD4+T細胞を、RosetteSep(商標)ヒトCD4+T細胞Enrichment Cocktail(StemCell Technolo
gies社)を使用して、同じドナーの血液から単離し、蛍光色素とカップリングさせた抗CD4
、抗CD25、及び抗CD127抗体で染色した。フローサイトメトリー(純度>99%)によってCD4+
CD25hiCD127lo細胞を選別し、次いで、IL-2(120IU/ml)の存在下で、抗CD3/CD28コーティ
ングビーズ(Dynabeads(登録商標)T-細胞増殖及び活性化のためのHuman T-Activator CD3/
CD28、Life Technologies社)で、14日間刺激した。これらの増殖されたTreg細胞を、その
後の使用のために凍結した。
ス)を、単独で、又は増殖されたヒトTreg(1.4×106/マウス)(第0日)と混合して注射した
。マウスはまた、週1回、MHGARP8抗体(第-1日(第マイナス1日)に400μg、その後の時点で
は200μg)、又は対照PBSの腹腔内注射を受けた。マウスを、本文で示した通り、隔週で、
GvHD発症について観察した。
のマウスを、MHGARP8抗体又は対照PBSの腹腔内注射を用いて治療した。導入に必要とされ
る多数のヒトTreg細胞は、ヒトPBMCからフローサイトメトリーによって選別されたCD4+CD
25+CD127lo細胞の短いインビトロ増幅を介して得た。レシピエントマウスにおけるGvHD発
症の客観的徴候を、隔週で観察した。本発明者らは、2つの独立した実験を実施し、類似
の結果がもたらされた。実験1(図6A)では、GvHD(平均スコア≧1)の徴候は、ヒトPBMCの注
射の29日後に現れた(第I群;n=2)。疾患重症度は、直ちに増大し、2匹のマウスのうちの1
匹は、倫理的理由で、第55日に安楽死させた。PBMC及びTregを注射したマウス(第II群;n=
3)では、PBMC単独と比較して、GvHDの出現が遅かった(58日後に平均スコア≧1に到達した
)。これは、Tregが、予想通り、NSGマウスをGvHDから、ある程度保護することを示す。重
要なことに、MHGARP8抗体と共にPBMC及びTregを与えられたマウス(第III群、n=6)の治療
は、疾患を悪化させた:GvHDの徴候は、第II群のマウスよりも(36日)早く現れた。PBMCの
み(第I群)、又はPBMC及びMHGARP8(第IV群;n=4)を与えられたマウス間に、疾患スコアの差
が認められなかったので、MHGARP8の効果は、Tregの存在に依存するように思われる。本
発明者らは、群あたりのマウスの数を増やして、この実験を繰り返した(図6B)。また、Tr
egとPBMCとの共注射は、PBMC単独と比較して、GvHDの出現を遅らせ(第I群における28日に
対して第II群における46日)、MHGARP8抗体での治療は、非治療マウス(第II群における46
日)と比較して、PBMC及びTregを与えられたマウス(第III群における28日)において、GvHD
を悪化させた。まとめると、これは、MHGARP8が、インビボで、ヒトTregの免疫抑制機能
を阻害することを示す。
(組み換え可溶性のGARP-TGFβ1複合体の産生)
ヒト及びマウスGARP-TGFβ1複合体を、切断されたGARP発現コンストラクトを使用して
、可溶性の複合体として産生した。ヒトGARPタンパク質配列を、ロイシン628、続いて切
断可能なTEV-3x strep tag
同じ切断可能なTEV-3x strep tagの後で切断した。HEK293E細胞における切断されたGARP
とTGFβ1の共発現によって、GARP-TGFβ1複合体を産生し、続いて、Strep-Tagを介して精
製を行った。
ラマの免疫化、及び末梢血リンパ球(PBL)の採取、並びにそれに続くRNAの抽出、及び抗
体断片の増幅を、De Haard及びその同僚によって記載されている通りに実施した(De Haar
d Hらの文献、J. Bact., 187: 4531-4541, 2005)。4頭のラマを、本特許出願に記載され
ているMHGARP8(MHG-8)モノクローナル抗体を使用するフローサイトメトリーによって確認
される通り、ヒトGARP及びTGF β1を過剰発現しているBW細胞で免疫化した(図7A)。これ
らのラマは、6週間にわたる週1回の頸部への筋肉内注射で免疫化した。約107個の細胞を
、頸筋に注射し、フロイントの不完全アジュバントを、細胞の注射部位から数センチメー
トルに位置する第2の領域に注射した。別の4頭のラマを、ヒトGARP cDNAとヒトTGFβ1 cD
NA発現ベクターとの混合物で、2週に1回、4回の反復注射で免疫化した。
3から4日後、400mlの血液を収集して、Ficoll-Paque勾配及びChomczynski Pらの文献(Ana
l. Biochem. 162: 156-159, 1987)に記載されている方法を使用して調製されたPBLから、
全RNAを抽出した。平均すると、450μgのRNA収量が実現し、これを使用して、De Haard H
らの文献(J Biol Chem.1999 Jun 25;274(26):18218-30)によって記載されている通りに、
Fab含有ファージミドライブラリの構築のために、重鎖及び軽鎖(Vλ及びVκ)のV-領域の
ランダムcDNA合成及びPCR増幅を行い、優れた多様性(1~7×108)の多様なライブラリを得
た。
-TGF β1複合体(1μg/ml)に対するELISAによって研究した。10%血清から出発する血清の5
倍段階希釈物を調製し、100μlの希釈された血清を、コーティングされたウェルに添加し
、室温で1時間インキュベートした。3×PBS/Tweenでの洗浄後、プレートを、1%カゼイン
を添加したPBSでブロッキングした(図8)。従来のラマIgG1の、その標的GARP-TGFβに対す
る結合を、マウス抗ラマIgG1抗体(クローン27E10、Daley LPらの文献、Clin.Diagn Lab I
mmunol.12,2005)と、検出のためのHRP結合ロバ抗マウス抗体(Jackson社)を使用するELISA
において測定した。
標準のプロトコルに従って、Fabを発現するファージを産生し、標準のファージディス
プレイプロトコルに従って、トリプシンを用いて、GARP-TGF β1結合ファージの全溶離液
を用いて、固定化された組み換え型の可溶性GARP-TGF β1に対して選択を実施した。
Fabについて濃縮した。hGARP及びhTGF β1(LAP)カウンターセレクションを使用して、hGA
RP-TGF β1複合体と結合するFabについて濃縮した。それぞれのコロニーを単離し、標準
のプロトコルに従って、すべてのライブラリからのIPTG誘導によって、96ウェルプレート
中に(周囲の)周辺質画分をもたらした。
を、マキシソーブ(maxisorb)プレート上に固定化した。1%カゼイン(PBS中)での1時間のブ
ロッキングの後、20μlの周辺質抽出物からのFabを、hGARP-TGF β1と結合させた。
GARP-TGFβ1/GARP特異的クローンを、VH及びVL領域において配列決定し、VHにおけるCD
R3の配列に基づいてVHファミリーに分けた。17ファミリーが特定された。特定された各VH
ファミリーのうち、本発明者らは、少なくとも1つの代表的なクローンを、完全ヒトIgG1(
LHG1-LHG17)にクローン化した。これらのモノクローナル抗体を、Biacore上で、可溶性ヒ
トGARP-TGFβ1複合体に対するその結合特性について分析した。組み換え型の可溶性のヒ
トGARP-TGFβ1を、CM5チップ(GE Healthcare社)上に約4,000 RUで固定化した。
複合体との結合を、FACSによって分析した。カニクイザルGARP及びカニクイザルTGFβ1コ
ード配列を、カニクイザル末梢血リンパ球(PBMC)由来のcDNA試料からクローン化した。プ
ライマーは、完全配列の重複部分の増幅による、カニクイザルGARP(XM_005579140.1; 配
列番号:41)及びカニクイザルTGF β1(XM_005589338.1;配列番号:42)の予測される配列を
基にした。カニクイザルGARPとカニクイザルTGFβ1との両方について、3つの別のPCR増幅
産物が、分析されるDNA配列であった。これらを、予測される配列と完全に整列させた。
カニクイザルGARP及びカニクイザルTGFβ1を、HEK293E細胞における一過性の過剰発現の
ためのpCDNA3.1にクローン化した。カニクイザルGARP-TGFβ1に対する結合を、ヒトGARP-
TGFβ1に対する結合と、FACS上で比較した。LHG-10及びシャッフルされたバリアント(LHG
-10.3からLHG-10.6)は、カニクイザルGARP-TGFβ1と交差反応性であるとみなすことがで
きる(図9)。
使用されるプライマー:
VK鎖シャッフリングを使用して、mAb LHG-10の親和性を向上させた(図10)。この方法で
は、親クローンの重鎖(LHG-10のVHCH1)を、ファージミド軽鎖ライブラリに再導入した。
重鎖を、ディスプレイに必要な、バクテリオファージ由来遺伝子3(bacteriophage derive
d gene 3)を欠く発現ベクターから抽出し、選択手順において、親の軽鎖の混入をさらに
回避した。重鎖を、ファージミド軽鎖ライブラリにクローン化し、連結されたDNAを、E.c
oli TG1 細胞に電気穿孔で導入し、軽鎖シャッフルされたライブラリを作製した。ライブ
ラリのサイズは、108超であった。
性が向上した鎖シャッフルされたFabについて選択した。設定を選択し、そこで、Fabを発
現しているファージを、microsorbプレートに直接コーティングされる異なる濃度の組み
換え型の可溶性のヒトGARP-TGFβ1と共にインキュベートした。
可溶性ヒトGARP-TGFβ1を添加することによって、より親和性の高いファージの結合が促
された。各回の洗浄時間を増加させて(表3)、より親和性が低いバリアントを洗い流すこ
とによって、より優れたオフレートを有するファージについて選択した。ファージをトリ
プシンで溶出し、E.coli TG1細胞の感染のために使用した。合計で5回の選択を行った。
さらに、その後の回では、インプットファージの量を低下させて、一方ではバックグラウ
ンドを低減し、他方ではmAb濃度を下げ、それによって選択の厳密性を増大させた。
表3:VKシャッフリングに対する各回の選択で変動させたパラメータ
これらのクローンを、ディープウェルプレート(1ml表記)中で成長させ、周辺質画分を調
製した。これらの周辺質抽出物を、オフレートの向上について、Biacore上で分析した。
オフレートが向上した上位4つのFabクローンを、hIgG1(LHG-10シリーズ)にクローン化し
、また、Fc領域内にN297Q置換を伴うエフェクター機能欠乏バリアントhIgG1(LHG-10-Dシ
リーズ)、及び生じたIgGを、Biacore上で、結合特性の向上について分析した(表4)。さら
に、LHG-10-D IgGを、cyno GARP/cyno TGFβ1又はヒトGARP/ヒトTGFβ1を用いて形質移入
されたHEK-293E細胞を使用するFACSベースの分析において、cyno GARP/cyno TGF-β1に対
する交差反応性についてチェックした。MHGARP8も、この交差反応性分析において試験し
た。すべてのLHG-10-D及びMHG-8は、cyno GARP/cyno TGFβ1に対して交差反応性である(
図9)。
表4:シャッフルされたクローンの結合特性
を阻害する)
刺激されたヒトTregは、その細胞表面の近くに活性なTGF-β1を産生する。自己分泌及
び傍分泌TGF-β1活性は、Tregそれ自体における、また、Tregと共に共培養されたTh細胞
における、SMAD2リン酸化を誘発する(Stockis,J.らの文献、Eur.J.Immunol.2009,39:869-
882)。GARPが、TregによるTGF-β1活性化に必要とされるかどうかを試験するために、本
発明者らは、抗hGARP mAbの存在又は非存在下で、ヒトTregを刺激し、ウエスタンブロッ
トによって、SMAD2のリン酸化を測定した。ヒトTregの供給源として、本発明者らは、PBM
Cから選別されたCD4+CD25hiCD127lo細胞を使用し、12~14日間、インビトロで増幅した(G
authy Eらの文献、PLoS One.2013 Sep 30;8(9):e76186)。メチル特異的qPCRによって決定
される通り、増幅された細胞集団は、脱メチル化されたFOXP3i1アレルを有する細胞を44
から82%含有し、これは、Tregが依然として増幅された細胞集団内で非常に濃縮されてい
ることを示している。
ていないTregにおいても、中和-抗TGF-β1抗体の存在下で刺激されたTregにおいても検出
されなかった(図11)。リン酸化されたSMAD2は、MHGARP8(図11AではMHG-8と称される)又は
LHG-10(図11B)の存在下で刺激されたTregにおいて、大きく減少し、これは、これらの2種
の抗hGARP mAbが、活性なTGF-β産生を阻止することを示している。29種の他の新規の抗h
GARP mAb、並びに4種の市販品として入手できる抗hGARP mAbは、TregによるTGF-β産生を
阻止しなかった(図11)。
されることを示す。
本発明者らは、ヒトTregが、他のT細胞を、活性なTGF-β1の産生を通して、少なくとも
ある程度抑制することを、以前に示した(Stockis,Jらの文献、Eur.J.Immunol.2009,39:86
9-882)。したがって、本発明者らは、インビトロ抑制分析において、MHGARP8(MHG-8)及び
LHG-10もヒトTreg機能を阻害するかどうかを試験した。本発明者らは、Tregの供給源とし
てTreg クローンを使用し、抑制のための標的としてのCD4+CD25-CD127hi細胞又はCD4+T細
胞クローン(Th細胞)を新たに単離した。Treg及びTh細胞を、様々な追加のmAbの存在又は
非存在下で、>CD3及び>CD28で刺激した。図12に示す通り、クローンTreg A1は、抗hGAR
P mAbの非存在下で、CD4+CD25-CD127hiTh細胞の増殖を66%阻害した。MHG-8又はLHG-10の
存在下では、抑制は、それぞれ36%及び32%に低下したが、6種の他の抗hGARP mAbの存在下
では低下しなかった。本発明者らはまた、MHGARP8、抗hTGF-β1 mAb、又はアイソタイプ
対照の存在下で、別のTh標的(クローンTh A2)に対する、クローンTreg A1による抑制を測
定した。MHGARP8(MHG-8)は、Treg A1のインビトロ抑制活性を、抗TGF-β1抗体のインビト
ロ抑制活性と類似の様式で阻害したのに対して、アイソタイプ対照は、効果を示さなかっ
た(図12)。
ほんの少数(2/35)の抗hGARP mAbのみが、Tregによる活性なTGF-β産生及び抑制を阻止
する。これは、非阻害性mAbによって結合されるのとは異なるエピトープ(1又は複数)と結
合するその能力に起因する可能性がある。したがって、本発明者らは、阻害性及び非阻害
性mAbによる結合に必要とされる領域をマッピングした。
合体を形成する(図13、及びStockisの文献、2009b Eur.J.Immunol.2009.39:3315-3322、
及びGauthy Eらの文献)。本発明者らは、第1に、hGARP及びhTGFB1を用いて形質移入され
たマウスBW細胞における共免疫沈降(IP)実験を使用して、抗hGARP mAbもGARP/TGF-β1複
合体と結合するかどうかをを決定しようとした。本発明者らは、32種の抗hGARP mAb:本発
明者らの31種の新規mAb及び市販品として入手できるPlato-1 mAbを試験した。すべてのmA
bは、GARPを効率的に免疫沈降させた(図14Aの一番上のパネル、12種の代表的なmAbについ
てのIPを示す)。Pro-TGF-β1、並びにLAP及び成熟TGF-β1(すなわち潜在型TGF-β1)は、2
4種のmAbで共免疫沈降し、これは、これらが、GARP/TGF-β1複合体と結合することを示し
ている(図14Aに示される6種のmAb、真ん中及び下のパネル)。一方、8種のmAb(図14Aにお
いて示される3種)は、pro-又は潜在型TGF-β1を共免疫沈降させず、これは、これらが、
遊離のGARPと結合するがGARP/TGF-β1複合体とは結合しないことを示唆している。
非形質移入 293T細胞は、GARPをまったく、内在性TGF-β1を非常に低レベルしか発現しな
い。潜在型TGF-βは、抗LAP抗体を伴うその表面上には検出されない。GARP又はTGFB1単独
の形質移入は、それぞれ、表面LAPをまったく又は少ししか誘発しないのに対して、GARP
とTGFB1との共形質移入は、潜在型TGF-β1結合とGARPによる提示の結果としての多くの表
面LAPを誘発する(図14B、左のヒストグラム)。形質移入された293T細胞の分析から、3つ
の群の抗hGARP mAbが顕在化し、これを図13B中の第3列に分類する。第1群(左列)は、pro-
又は潜在型TGF-β1を共免疫沈降させなかった8種のmAbを含む:これらは、hGARP単独を用
いて形質移入された293T細胞と結合したが、hGARP及びhTGFB1とは結合しなかった。これ
は、表面GARPに対する結合が、TGF-β1の存在下で失われるので、これらのmAbが、遊離の
GARPのみと結合することを裏付ける(図14Bは、この群の3種の代表的なmAbを示す)。第2群
は、他のほとんどのmAbを含む(19種のmAb、図13Bの中央列):これらは等しく、hGARP単独
を用いる、又はhGARP及びhTGFB1を用いる形質移入後の293T細胞と十分に結合し、これは
、これらが、遊離のGARPとGARP/TGF-β1複合体の両方と結合することを示している(図14B
は、この群の6種のmAbを示す)。興味深いことに、第3群の5種のmAbは、hGARP及びhTGFB1
を用いて形質移入された293T細胞と結合したが、hGARP単独を用いて形質移入された細胞
とは結合しなかった(図13Bの右列)。これらのmAbは、GARP/TGF-β1複合体と結合するが、
遊離のGARPとは結合せず、これには、阻害性MHGARP8(MHG-8)及びLHG-10が含まれる(図14B
は、この群の3種のmAbを示す)。
のGARP及びGARP/TF-β1複合体(19/32)と結合することを結論付けた。阻害性MHGARP8(MHG-
8)及びLHG-10、また3種の非阻害性mAbを含めた5種のmAbのみ、GARP/TGF-β1複合体と結合
し、且つ遊離のGARPとは結合しない。この認識のパターンからは、MHGARP8及びLHG-10の
みが阻害性である理由は説明できない。
した。圧倒的多数の抗hGARP mAbは、マウスGARP(mGARP)に対して交差反応しない。したが
って、本発明者らは、HAタグ付きmGARP/hGARPキメラをコードするプラスミドを構築し(図
15A、左パネル)、これらを、先に決定された結合要件に応じて、hTFGB1と共に又は伴わず
に、293T細胞において形質移入した。抗HA mAbでの染色によって明らかにされる通り、29
3T細胞の表面上では、すべてのキメラが、類似のレベルで発現された(図15A、右側のヒス
トグラム)。mGARP/hGARPキメラ(図15A、10種の代表的なmAb)に対する結合パターンによっ
て、各抗hGARP mAbによる結合に必要とされるhGARPの領域が特定された。これを、図15B
にまとめる。ここでは、mAbは、hGARPの種々の領域に対応する列に分配され:第1列におけ
るmAbは、アミノ酸20から101(hGARP20-101)を含む領域を必要とし、第2列におけるmAbは
、hGARP101-141を必要とし、第3列におけるmAbは、hGARP141-207を必要とし、第4列は、h
GARP265-332、そして最後に、第5の群は、hGARP332-628を必要とする。しかし、結合に必
要とされる領域と考えられる場合でも、阻害性MHGARP8(図ではMHG-8と称される)及びLHG-
10によって認識されるエピトープは、非阻害性mAbのものとは区別できないであろう:MHGA
RP8及びLHG-10は、LHG-3、-12、及び-13と同様に、hGARP101-141を含有するGARP/TGF-β
複合体と結合する。
ミノ酸(aa)位置で異なる(図15B、左パネル)。本発明者らは、3つの変異バージョンのhGAR
Pを構築した。各変異体において、領域101~141からの一連の3つの隣接するaaが、mGARP
において見られるaaによって置き換えられた。本発明者らは、試験されるmAbの結合要件
に応じてHAタグ付き変異体単独を用いて又はHAタグ付き変異体とともにhTGFB1を用いて、
293T細胞を形質移入した。変異体に対する結合パターンによって、結合のためのアミノ酸
hGARP111-113、hGARP126-127、又はhGARP137-139をそれぞれ必要とする、3種類のmAbが明
らかになった(図15B、右パネル)。MHGARP8(図ではMHG-8と称される)及びLHG-10を含めた6
種のmAbは、hGARP137-139を必要とする(図13B)。6種のうちの4種が遊離のhGARPと結合で
きるのに対し、MHG-8及びLHG-10は、GARP/TGF-β1複合体に関してhGARP137-139を必要と
する唯一のmAb群である。
すべての非阻害性抗hGARP mAbによって認識されるのとは異なるエピトープと結合する能
力と関係していることを結論付けた。
本発明者らは、次に、阻害性抗hGARP mAbが、インビボでヒトTreg機能を阻害する可能
性があるかどうかを評価しようとした。本発明者らは、免疫無防備状態のNOD/Scid/IL2Rg
-/-(NSG)マウスへのヒト末梢血単核球(PBMC)の導入によって誘発される、異種間の移植片
対宿主病(GVHD)のモデルを使用した。NSGマウスは、不完全なサイトカインシグナル伝達
を有し、且つ機能性のT、B、及びNK細胞を欠いており、PBMCの静脈注射後の、ヒトT細胞
の非常に効率的な生着が可能である。PBMC導入の30から40日後、レシピエントマウスは、
マウス組織に対するヒト細胞毒性Tリンパ球の活性が原因で、異種GVHDを発症する(Shultz
の文献、Nat Rev Immunol.2012 Nov;12(11):786-98)。このモデルでは、ヒトTregとヒトP
BMCとの共導入は、GVHDを減弱化し(Hannonらの文献、Transfusion.2014 Feb;54(2):353-6
3)、インビボでのヒトTregに対する抗hGARP mAbの阻害活性を試験するためのモデルが提
供される。
ヒトPBMC(3×106/マウス)を導入した(図16A)。本発明者らは、ヒトTregの供給源として、
先に記載する通り、インビトロで短時間増幅されている血液CD4+CD25hiCD127lo細胞を使
用した。さらに、マウスに、MHGARP8(図ではMHG-8と称される)、抗TGF-β1、アイソタイ
プ対照、又はPBSを、移植の1日前に、その後は週1回注射した。GVHDの客観的徴候を、隔
週で観察して、体重減少、運動性の低下、貧血又は黄疸、及び脱毛に基づいて、疾患スコ
アを確立した。本発明者らは、4つの独立した実験を実施し(図16B)、その詳細な結果を、
一例として示す(図16C)。実験に応じて、疾患の発症(平均GVHDスコア≧1)は、mAbなし又
はアイソタイプ対照を与えられたマウスの群において、PBMC導入の28から41日後に認めら
れた。Tregの共導入は、疾患を遅らせ、疾患は導入の46から72日後に発症し、これは、ヒ
トTregが、異種抗原に対するヒトT細胞応答を抑制することができたことを示している。P
BMCとTregを導入したマウスへのMHGARP8の投与は、Tregの予防効果を撤廃した:疾患は、P
BMCのみを与えられたマウスと同じぐらい早く(導入の28から44日後)発症した。MHGARP8に
よるTreg抑制機能の阻害は、中和-抗TGF-β1抗体を用いて観察されたものと類似であった
。アイソタイプ対照は、効果を有しなかった。
とを示す。
とを示す。
本件出願は、以下の態様の発明を提供する。
(態様1)
TGF-βの存在下で反復優位糖タンパク質A(GARP)と結合するタンパク質。
(態様2)
TGF-βの存在下でGARPのみと結合する、態様1記載のタンパク質。
(態様3)
GARPがTGF-βと複合体形成された場合にGARPと結合する、態様1又は2記載のタンパク質
。
(態様4)
GARPとTGF-βとの複合体と結合する、態様1から2のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様5)
TGF-βシグナル伝達を阻害する、態様1から4のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様6)
全長抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、二量体単鎖抗体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱フコシル
化抗体、二重特異性抗体、二量体抗体、三量体抗体、四量体抗体からなる群から選択され
る抗体分子;又は、ユニボディ、ドメイン抗体、及びナノボディからなる群から選択され
る抗体断片;又は、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー
、エバシン、DARPin、アンチカリン、アビマー、フィノマー、ヴァーサボディ、及びデュ
オカリンからなる群から選択される抗体模倣体である、態様1から5のいずれか1項記載の
タンパク質。
(態様7)
GARPの1以上のアミノ酸を含む立体構造エピトープ、又はGARPが潜在型TGF-βと複合体
形成されている結果として改変されたGARPのエピトープと結合する、抗体又はその抗原結
合断片である、態様1から6のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様8)
前記重鎖の可変領域が、
次のCDR:
(化1)
又は配列番号:2~4若しくは52と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCD
Rの少なくとも1つを含む、
又は、前記軽鎖の可変領域が、
次のCDR:
(化2)
又は配列番号:5~7と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少なく
とも1つを含む、
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
(化3)
又は配列番号:13~15と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む、
又は、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
(化4)
(ここでは、X 1 はS又はTであり、X 2 はS又はVであり、X 3 はY又はFである);
(化5)
(ここでは、X 1 はG又はRであり;X 2 はA又はTであり;X 3 はR又はIであり;X 4 はL又はPであり;
X 5 はQ又はKである);
(化6)
(ここでは、X 1 はD、A、Y、又はVであり;X 2 はA、L、又はVであり;X 3 はV又はPである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む、
態様1から7のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様9)
前記重鎖の可変領域が、
次のCDR:
(化7)
又は配列番号:2~4若しくは52と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCD
Rの少なくとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域が、
次のCDR:
(化8)
又は配列番号:5~7と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少なく
とも1つを含む、
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
(化9)
又は配列番号:13~15と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
(化10)
(ここでは、X 1 はS又はTであり、X 2 はS又はVであり、X 3 はY又はFである);
(化11)
(ここでは、X 1 はG又はRであり;X 2 はA又はTであり;X 3 はR又はIであり;X 4 はL又はPであり;
X 5 はQ又はKである);
(化12)
(ここでは、X 1 はD、A、Y、又はVであり;X 2 はA、L、又はVであり;X 3 はV又はPである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む、
態様1から8のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様10)
前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
(化13)
を含み、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
(化14)
又は前記配列番号:2~7と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRを含
む;
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
(化15)
を含み、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
(化16)
又は前記配列番号:52及び3~7と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCD
Rを含む;
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
(化17)
を含み、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
(化18)
(ここでは、X 1 はS又はTであり、X 2 はS又はVであり、X 3 はY又はFである);
(化19)
(ここでは、X 1 はG又はRであり;X 2 はA又はTであり;X 3 はR又はIであり;X 4 はL又はPであり;X
5 はQ又はKである);
(化20)
(ここでは、X 1 はD、A、Y、又はVであり;X 2 はA、L、又はVであり;X 3 はV又はPである);
又は前記配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRを
含む、
態様1から9のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様11)
前記重鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:8若しくは配列番号:50
であり、前記軽鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:9若しくは配列番
号:51である、又は、軽前記重鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:34
であり、前記軽鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:35~39;又は前記
配列番号:8~9、50~51若しくは34~39と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を
有する任意の配列のうちの1つである、態様1から10のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様12)
配列番号:8に若しくは配列番号:50に示される通りの重鎖可変領域と、配列番号:9に若
しくは配列番号:51に示される通りの軽鎖可変領域とを含む抗体によって、又は、配列番
号:34に示される通りの重鎖可変領域と、配列番号:35~39に示される通りの軽鎖可変領域
のうちの1つとを含む抗体によって認識される、アミノ酸配列・配列番号:1を有するポリ
ペプチド上のエピトープと結合する、態様1から11のいずれか1項記載のタンパク質。
(態様13)
2013年5月30日に受託番号LMBP 10246CBで登録されたハイブリドーマによって産生され
た抗体又は抗原結合断片。
(態様14)
2013年5月30日に受託番号LMBP 10246CBで登録された、GARPに対する抗体を産生するハ
イブリドーマ細胞株。
(態様15)
態様1から14のいずれか1項記載のタンパク質と、医薬として許容し得る賦形剤とを含む
医薬組成物。
(態様16)
治療を必要とする対象におけるTGF-β関連の障害を治療するための、態様15記載の医薬
組成物。
(態様17)
前記TGF-β関連の障害が、炎症性疾患、慢性感染症、癌、線維症、循環器疾患、脳血管
疾患(例えば虚血発作)、及び神経変性疾患からなる群から選択される、態様16記載の医薬
組成物。
(態様18)
前記医薬組成物が、癌のための別の治療、又は腫瘍ワクチン若しくは免疫賦活性抗体な
どの別の免疫療法薬と組み合わせて投与されることとなる、態様15から17のいずれか1項
記載の医薬組成物。
(態様19)
前記医薬組成物が、癌患者の治療のための免疫賦活性抗体として投与されることとなる
、態様15又は16記載の医薬組成物。
Claims (19)
- TGF-βの存在下で反復優位糖タンパク質A(GARP)と結合するタンパク質。
- TGF-βの存在下でGARPのみと結合する、請求項1記載のタンパク質。
- GARPがTGF-βと複合体形成された場合にGARPと結合する、請求項1又は2記載のタンパク
質。 - GARPとTGF-βとの複合体と結合する、請求項1から2のいずれか1項記載のタンパク質。
- TGF-βシグナル伝達を阻害する、請求項1から4のいずれか1項記載のタンパク質。
- 全長抗体、ヒト化抗体、単鎖抗体、二量体単鎖抗体、Fv、Fab、F(ab)’2、脱フコシル
化抗体、二重特異性抗体、二量体抗体、三量体抗体、四量体抗体からなる群から選択され
る抗体分子;又は、ユニボディ、ドメイン抗体、及びナノボディからなる群から選択され
る抗体断片;又は、アフィボディ、アフィリン、アフィチン、アドネクチン、アトリマー
、エバシン、DARPin、アンチカリン、アビマー、フィノマー、ヴァーサボディ、及びデュ
オカリンからなる群から選択される抗体模倣体である、請求項1から5のいずれか1項記載
のタンパク質。 - GARPの1以上のアミノ酸を含む立体構造エピトープ、又はGARPが潜在型TGF-βと複合体
形成されている結果として改変されたGARPのエピトープと結合する、抗体又はその抗原結
合断片である、請求項1から6のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記重鎖の可変領域が、
次のCDR:
Rの少なくとも1つを含む、
又は、前記軽鎖の可変領域が、
次のCDR:
とも1つを含む、
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
くとも1つを含む、
又は、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
X5はQ又はKである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む、
請求項1から7のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記重鎖の可変領域が、
次のCDR:
Rの少なくとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域が、
次のCDR:
とも1つを含む、
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
くとも1つを含み、
且つ、前記軽鎖の可変領域が、次のCDR:
X5はQ又はKである);
又は配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRの少な
くとも1つを含む、
請求項1から8のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
む;
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
Rを含む;
或いは、前記重鎖の可変領域が、次のCDR:
5はQ又はKである);
又は前記配列番号:16~18と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を有するCDRを
含む、
請求項1から9のいずれか1項記載のタンパク質。 - 前記重鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:8若しくは配列番号:50
であり、前記軽鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:9若しくは配列番
号:51である、又は、軽前記重鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:34
であり、前記軽鎖可変領域をコードする前記アミノ酸配列が、配列番号:35~39;又は前記
配列番号:8~9、50~51若しくは34~39と少なくとも60%の同一性を有するアミノ酸配列を
有する任意の配列のうちの1つである、請求項1から10のいずれか1項記載のタンパク質。 - 配列番号:8に若しくは配列番号:50に示される通りの重鎖可変領域と、配列番号:9に若
しくは配列番号:51に示される通りの軽鎖可変領域とを含む抗体によって、又は、配列番
号:34に示される通りの重鎖可変領域と、配列番号:35~39に示される通りの軽鎖可変領域
のうちの1つとを含む抗体によって認識される、アミノ酸配列・配列番号:1を有するポリ
ペプチド上のエピトープと結合する、請求項1から11のいずれか1項記載のタンパク質。 - 2013年5月30日に受託番号LMBP 10246CBで登録されたハイブリドーマによって産生され
た抗体又は抗原結合断片。 - 2013年5月30日に受託番号LMBP 10246CBで登録された、GARPに対する抗体を産生するハ
イブリドーマ細胞株。 - 請求項1から14のいずれか1項記載のタンパク質と、医薬として許容し得る賦形剤とを含
む医薬組成物。 - 治療を必要とする対象におけるTGF-β関連の障害を治療するための、請求項15記載の医
薬組成物。 - 前記TGF-β関連の障害が、炎症性疾患、慢性感染症、癌、線維症、循環器疾患、脳血管
疾患(例えば虚血発作)、及び神経変性疾患からなる群から選択される、請求項16記載の医
薬組成物。 - 前記医薬組成物が、癌のための別の治療、又は腫瘍ワクチン若しくは免疫賦活性抗体な
どの別の免疫療法薬と組み合わせて投与されることとなる、請求項15から17のいずれか1
項記載の医薬組成物。 - 前記医薬組成物が、癌患者の治療のための免疫賦活性抗体として投与されることとなる
、請求項15又は16記載の医薬組成物。
Applications Claiming Priority (7)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201361861008P | 2013-08-01 | 2013-08-01 | |
EP13178958.8A EP2832747A1 (en) | 2013-08-01 | 2013-08-01 | Anti-GARP protein and uses thereof |
EP13178958.8 | 2013-08-01 | ||
US61/861,008 | 2013-08-01 | ||
EP14167425 | 2014-05-07 | ||
EP14167425.9 | 2014-05-07 | ||
JP2019229640A JP2020073504A (ja) | 2013-08-01 | 2019-12-19 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2019229640A Division JP2020073504A (ja) | 2013-08-01 | 2019-12-19 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022070946A true JP2022070946A (ja) | 2022-05-13 |
Family
ID=52431038
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016530550A Withdrawn JP2016529892A (ja) | 2013-08-01 | 2014-08-01 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
JP2019229640A Pending JP2020073504A (ja) | 2013-08-01 | 2019-12-19 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
JP2022019186A Pending JP2022070946A (ja) | 2013-08-01 | 2022-02-10 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
Family Applications Before (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016530550A Withdrawn JP2016529892A (ja) | 2013-08-01 | 2014-08-01 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
JP2019229640A Pending JP2020073504A (ja) | 2013-08-01 | 2019-12-19 | 抗garpタンパク質及びその使用 |
Country Status (16)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US10000572B2 (ja) |
EP (2) | EP3027650B1 (ja) |
JP (3) | JP2016529892A (ja) |
KR (2) | KR20220025174A (ja) |
CN (2) | CN113583128A (ja) |
AU (3) | AU2014298373B2 (ja) |
BR (1) | BR112016002199B8 (ja) |
CA (1) | CA2919765C (ja) |
EA (1) | EA035550B1 (ja) |
ES (1) | ES2860952T3 (ja) |
IL (2) | IL243899B (ja) |
MX (2) | MX2016001356A (ja) |
NZ (1) | NZ717476A (ja) |
SG (2) | SG10201800889SA (ja) |
WO (1) | WO2015015003A1 (ja) |
ZA (1) | ZA201601085B (ja) |
Families Citing this family (45)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG10201913751RA (en) | 2013-05-06 | 2020-03-30 | Scholar Rock Inc | Compositions and methods for growth factor modulation |
ES2860952T3 (es) * | 2013-08-01 | 2021-10-05 | Univ Catholique Louvain | Proteína anti-garp y usos de la misma |
WO2016125017A1 (en) * | 2015-02-03 | 2016-08-11 | Universite Catholique De Louvain | Anti-garp protein and uses thereof |
JP2018529642A (ja) * | 2015-07-22 | 2018-10-11 | ホスピタル サント ジョアン デ デューHospital Sant Joan De Deu | Casrを発現する癌(例えば神経芽腫)のための免疫療法 |
IL288784B2 (en) * | 2015-09-24 | 2023-10-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Antibodies against GARP, nucleotides encoding them, and vectors, cells and preparations containing them, methods for their preparation and uses thereof |
AU2016365318B2 (en) * | 2015-12-02 | 2024-04-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Antibodies and molecules that immunospecifically bind to BTN1A1 and the therapeutic uses thereof |
PL3365368T3 (pl) * | 2016-03-11 | 2023-08-21 | Scholar Rock, Inc. | Immunoglobuliny wiążące tgfbeta1 i ich zastosowanie |
EP3436480A4 (en) * | 2016-03-30 | 2019-11-27 | Musc Foundation for Research Development | METHOD FOR THE TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER BY TARGETING GLYCOPROTEIN A REPETITION PREDOMINANT (GARP) AND FOR EFFECTIVE IMMUNOTHERAPY ALONE OR IN COMBINATION |
US11623958B2 (en) | 2016-05-20 | 2023-04-11 | Harpoon Therapeutics, Inc. | Single chain variable fragment CD3 binding proteins |
TWI784957B (zh) | 2016-06-20 | 2022-12-01 | 英商克馬伯有限公司 | 免疫細胞介素 |
SG11201900200XA (en) * | 2016-07-14 | 2019-02-27 | Scholar Rock Inc | Tgfb antibodies, methods, and uses |
CA3059444A1 (en) * | 2017-04-14 | 2018-10-18 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment |
GB201707561D0 (en) * | 2017-05-11 | 2017-06-28 | Argenx Bvba | GARP-TGF-beta antibodies |
KR102376863B1 (ko) | 2017-05-12 | 2022-03-21 | 하푼 테라퓨틱스, 인크. | 메소텔린 결합 단백질 |
WO2019157533A1 (en) * | 2018-02-12 | 2019-08-15 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptors targeting the tumor microenvironment |
JP7425049B2 (ja) | 2018-09-25 | 2024-01-30 | ハープーン セラピューティクス,インク. | Dll3結合タンパク質および使用方法 |
EP3902823A1 (en) | 2018-12-24 | 2021-11-03 | Sanofi | Multispecific binding proteins with mutant fab domains |
WO2021024020A1 (en) | 2019-08-06 | 2021-02-11 | Astellas Pharma Inc. | Combination therapy involving antibodies against claudin 18.2 and immune checkpoint inhibitors for treatment of cancer |
AR119594A1 (es) | 2019-08-09 | 2021-12-29 | Gilead Sciences Inc | Derivados de tienopirimidina como inhibidores acc y usos de los mismos |
EP4049675A4 (en) * | 2019-10-25 | 2023-11-22 | Daiichi Sankyo Company, Limited | COMBINATION OF ANTI-GARP ANTIBODY AND IMMUNOREGULATOR |
EP4058144A1 (en) | 2019-11-15 | 2022-09-21 | Gilead Sciences, Inc. | Triazole carbamate pyridyl sulfonamides as lpa receptor antagonists and uses thereof |
AU2021205440A1 (en) | 2020-01-11 | 2022-09-01 | Scholar Rock,Inc. | TGF-beta inhibitors and use thereof |
JP2021168619A (ja) * | 2020-04-16 | 2021-10-28 | デンカ株式会社 | アデノウイルスの免疫測定方法及び免疫測定器具 |
WO2021231732A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies to garp |
TW202344504A (zh) | 2020-06-03 | 2023-11-16 | 美商基利科學股份有限公司 | Lpa受體拮抗劑及其用途 |
KR20230019880A (ko) | 2020-06-03 | 2023-02-09 | 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 | Lpa 수용체 길항제 및 이의 용도 |
CA3182579A1 (en) | 2020-07-07 | 2022-01-13 | Ugur Sahin | Therapeutic rna for hpv-positive cancer |
JP2023553861A (ja) * | 2020-12-02 | 2023-12-26 | 上海復宏漢霖生物技術股▲フン▼有限公司 | 抗GARP/TGFβ抗体及び使用方法 |
WO2022135667A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Therapeutic rna for treating cancer |
TW202245808A (zh) | 2020-12-21 | 2022-12-01 | 德商拜恩迪克公司 | 用於治療癌症之治療性rna |
WO2022135666A1 (en) | 2020-12-21 | 2022-06-30 | BioNTech SE | Treatment schedule for cytokine proteins |
WO2022152285A1 (zh) * | 2021-01-18 | 2022-07-21 | 上海济煜医药科技有限公司 | Garp蛋白抗体及其应用 |
WO2022204581A2 (en) | 2021-03-26 | 2022-09-29 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and use thereof |
JP2024517016A (ja) | 2021-05-11 | 2024-04-18 | ギリアード サイエンシーズ, インコーポレイテッド | Lpa受容体アンタゴニスト及びそれらの使用 |
AU2022273702A1 (en) | 2021-05-13 | 2023-11-02 | Gilead Sciences, Inc. | Lpa receptor antagonists and uses thereof |
WO2022256723A2 (en) | 2021-06-03 | 2022-12-08 | Scholar Rock, Inc. | Tgf-beta inhibitors and therapeutic use thereof |
AU2022312698A1 (en) | 2021-07-13 | 2024-01-25 | BioNTech SE | Multispecific binding agents against cd40 and cd137 in combination therapy for cancer |
TW202333802A (zh) | 2021-10-11 | 2023-09-01 | 德商拜恩迪克公司 | 用於肺癌之治療性rna(二) |
US11939318B2 (en) | 2021-12-08 | 2024-03-26 | Gilead Sciences, Inc. | LPA receptor antagonists and uses thereof |
WO2023122615A1 (en) | 2021-12-22 | 2023-06-29 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
US20240124412A1 (en) | 2021-12-22 | 2024-04-18 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
GB202203269D0 (en) | 2022-03-09 | 2022-04-20 | Argenx Iip Bv | TGF-Beta antibodies |
WO2023178181A1 (en) | 2022-03-17 | 2023-09-21 | Gilead Sciences, Inc. | Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof |
WO2024018046A1 (en) | 2022-07-22 | 2024-01-25 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Garp as a biomarker and biotarget in t-cell malignancies |
WO2024023797A1 (en) | 2022-07-29 | 2024-02-01 | Abbvie Biotherapeutics Inc. | ANTI-GARP-TGF-β1/PD-1 COMBINATION THERAPY |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009028411A1 (ja) * | 2007-08-24 | 2009-03-05 | Keio University | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
JP2011510953A (ja) * | 2008-01-31 | 2011-04-07 | アンセルム(アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エト・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル) | 制御性t細胞活性を抑制するための、ヒトcd39に対する抗体およびその使用 |
Family Cites Families (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US5892019A (en) | 1987-07-15 | 1999-04-06 | The United States Of America, As Represented By The Department Of Health And Human Services | Production of a single-gene-encoded immunoglobulin |
DE3920358A1 (de) | 1989-06-22 | 1991-01-17 | Behringwerke Ag | Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung |
US6673986B1 (en) | 1990-01-12 | 2004-01-06 | Abgenix, Inc. | Generation of xenogeneic antibodies |
JPH07501451A (ja) | 1991-11-25 | 1995-02-16 | エンゾン・インコーポレイテッド | 多価抗原結合タンパク質 |
NZ298145A (en) * | 1994-12-29 | 1998-08-26 | Yamanouchi Pharma Co Ltd | Monoclonal antibodies having inhibitory effect on type ii phospholipase a2, proteins forming part thereof, cells producing them, dna encoding them, recombinant vector comprising the dna and medicament |
CN1333274A (zh) * | 2000-07-07 | 2002-01-30 | 上海博德基因开发有限公司 | 一种新的多肽——人garp蛋白12.98和编码这种多肽的多核苷酸 |
US7709610B2 (en) | 2003-05-08 | 2010-05-04 | Facet Biotech Corporation | Therapeutic use of anti-CS1 antibodies |
US20070048785A1 (en) * | 2004-06-09 | 2007-03-01 | Lin Laura L | Anti-IL-13 antibodies and complexes |
US8815526B2 (en) | 2005-03-31 | 2014-08-26 | Case Western Reserve University | Methods and reagents for identifying/isolating T regulatory (Treg) cells and for treating individuals |
WO2007113301A1 (en) | 2006-04-03 | 2007-10-11 | Medizinische Hochschule Hannover | Pharmaceuticals for influencing the reaction of the human immune system |
CN104211775A (zh) * | 2007-10-25 | 2014-12-17 | 斯克利普斯研究院 | 细菌群体感应的抗体介导性破坏 |
WO2009073163A1 (en) * | 2007-12-03 | 2009-06-11 | American Type Culture Collection (Atcc) | Avian influenza antibodies, compositions, and methods thereof |
GB2461546B (en) * | 2008-07-02 | 2010-07-07 | Argen X Bv | Antigen binding polypeptides |
WO2010022341A1 (en) | 2008-08-21 | 2010-02-25 | The United State Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Methods of enriching and using regulatory t cells |
EP2977386A1 (en) | 2012-08-31 | 2016-01-27 | Argen-X Nv | Method for producing antibody molecules having inter-species, intra-target cross-reactivity |
SG10201913751RA (en) * | 2013-05-06 | 2020-03-30 | Scholar Rock Inc | Compositions and methods for growth factor modulation |
EP2832747A1 (en) | 2013-08-01 | 2015-02-04 | Université Catholique de Louvain | Anti-GARP protein and uses thereof |
ES2860952T3 (es) | 2013-08-01 | 2021-10-05 | Univ Catholique Louvain | Proteína anti-garp y usos de la misma |
WO2016125017A1 (en) | 2015-02-03 | 2016-08-11 | Universite Catholique De Louvain | Anti-garp protein and uses thereof |
IL288784B2 (en) | 2015-09-24 | 2023-10-01 | Daiichi Sankyo Co Ltd | Antibodies against GARP, nucleotides encoding them, and vectors, cells and preparations containing them, methods for their preparation and uses thereof |
SG11201900200XA (en) | 2016-07-14 | 2019-02-27 | Scholar Rock Inc | Tgfb antibodies, methods, and uses |
-
2014
- 2014-08-01 ES ES14748185T patent/ES2860952T3/es active Active
- 2014-08-01 CN CN202110765205.9A patent/CN113583128A/zh active Pending
- 2014-08-01 US US14/908,368 patent/US10000572B2/en active Active
- 2014-08-01 EP EP14748185.7A patent/EP3027650B1/en active Active
- 2014-08-01 WO PCT/EP2014/066650 patent/WO2015015003A1/en active Application Filing
- 2014-08-01 KR KR1020227004383A patent/KR20220025174A/ko not_active Application Discontinuation
- 2014-08-01 EA EA201690314A patent/EA035550B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2014-08-01 NZ NZ717476A patent/NZ717476A/en unknown
- 2014-08-01 JP JP2016530550A patent/JP2016529892A/ja not_active Withdrawn
- 2014-08-01 CA CA2919765A patent/CA2919765C/en active Active
- 2014-08-01 SG SG10201800889SA patent/SG10201800889SA/en unknown
- 2014-08-01 MX MX2016001356A patent/MX2016001356A/es active IP Right Grant
- 2014-08-01 CN CN201480043607.6A patent/CN105658666B/zh active Active
- 2014-08-01 KR KR1020167005677A patent/KR102362609B1/ko active IP Right Grant
- 2014-08-01 AU AU2014298373A patent/AU2014298373B2/en active Active
- 2014-08-01 BR BR112016002199A patent/BR112016002199B8/pt active IP Right Grant
- 2014-08-01 EP EP20201515.2A patent/EP3786187A1/en not_active Withdrawn
- 2014-08-01 SG SG11201600741SA patent/SG11201600741SA/en unknown
-
2016
- 2016-01-29 MX MX2019011952A patent/MX2019011952A/es unknown
- 2016-02-01 IL IL243899A patent/IL243899B/en active IP Right Grant
- 2016-02-02 US US15/013,706 patent/US20160251438A1/en not_active Abandoned
- 2016-02-17 ZA ZA2016/01085A patent/ZA201601085B/en unknown
-
2018
- 2018-05-09 US US15/975,493 patent/US10604579B2/en active Active
-
2019
- 2019-03-29 US US16/370,822 patent/US10822424B2/en active Active
- 2019-11-18 AU AU2019268046A patent/AU2019268046A1/en not_active Abandoned
- 2019-12-19 JP JP2019229640A patent/JP2020073504A/ja active Pending
-
2020
- 2020-02-14 US US16/791,937 patent/US11230603B2/en active Active
- 2020-07-16 IL IL276106A patent/IL276106A/en unknown
-
2021
- 2021-12-03 AU AU2021277761A patent/AU2021277761A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-02-10 JP JP2022019186A patent/JP2022070946A/ja active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2009028411A1 (ja) * | 2007-08-24 | 2009-03-05 | Keio University | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
JP2011510953A (ja) * | 2008-01-31 | 2011-04-07 | アンセルム(アンスティチュート・ナシオナル・ドゥ・ラ・サンテ・エト・ドゥ・ラ・ルシェルシュ・メディカル) | 制御性t細胞活性を抑制するための、ヒトcd39に対する抗体およびその使用 |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
EUR. J. IMMUNOL., vol. 39, JPN6018011073, 2009, pages 3315 - 3322, ISSN: 0005170492 * |
J. IMMUNOL., vol. 190, JPN6018011077, pages 5057 - 5064, ISSN: 0005170495 * |
J. IMMUNOL., vol. 190, JPN6018011079, pages 5506 - 5515, ISSN: 0005170496 * |
MOL. BIOL. CELL, vol. 23, JPN6018011076, 2012, pages 1129 - 1139, ISSN: 0005170494 * |
PROC. NAT. ACAD. SCI., vol. 106, no. 32, JPN6018011074, 2009, pages 13445 - 13450, ISSN: 0005170493 * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2022070946A (ja) | 抗garpタンパク質及びその使用 | |
US11753473B2 (en) | Anti-PD-L1 antibodies | |
TWI723220B (zh) | 一種新的pd-1單株抗體 | |
EP3253796A1 (en) | Anti-garp protein and uses thereof | |
US20200347130A1 (en) | CD96 Antibody, Antigen-Binding Fragment and Pharmaceutical use Thereof | |
EP2832747A1 (en) | Anti-GARP protein and uses thereof | |
CN115812081A (zh) | 抗ctla-4抗体及其用途 | |
TW202304997A (zh) | 新型抗cd4抗體 | |
WO2022100613A1 (zh) | 针对密蛋白18a2和cd3的双特异性抗体及其应用 | |
CN114907479A (zh) | 抗cd112r抗体及其用途 | |
TW202144429A (zh) | 抗cd25抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
KR20220119393A (ko) | 약학 조성물, 이의 제조 방법 및 이의 용도 | |
WO2023186111A1 (zh) | 一种靶向cd40的抗原结合蛋白及其制备和应用 | |
TW202221038A (zh) | 抗trop-2抗體、其抗原結合片段或其突變體、及其醫藥用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220310 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220310 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230214 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230511 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230809 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20231010 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20240105 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240410 |