JP2022046656A - 抗凝固因子ｘｉ抗体 - Google Patents

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Abstract

【課題】凝固因子ＸＩに選択的に結合することが可能であり（抗ＦＸＩ抗体）、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制することが可能であり、好ましくは、検出可能な出血をほとんど又は全く誘発することなく血液凝固および関連血栓症の低減をもたらすことが可能であるヒト抗体および抗原結合性フラグメントを提供する。【解決手段】ヒト凝固因子ＸＩのアップル２ドメインに結合し、凝固因子ＸＩＩａによるＦＸＩの活性化を抑制する抗体を提供する。【選択図】図１Ａ

Description

関連出願に対する相互参照
本出願は２０１６年１月２２日付け出願の米国仮特許出願第６２／２８１，８４２号（
その全体を参照により本明細書に組み入れることとする）の利益を主張するものである。
電子的に提出された配列表に対する言及
本出願の配列表は、ファイル名「２３６１７ＷＯＰＣＴＳＥＱ」、２０１６年１２月１
日の作成日および１６０Ｋｂのサイズを有するＡＳＣＩＩ形式の配列表としてＥＦＳ－Ｗ
ｅｂを介して電子的に提出されている。ＥＦＳ－Ｗｅｂを介して提出されたこの配列表は
本明細書の一部であり、その全体を参照により本明細書に組み入れることとする。
（１）発明の分野
本発明は、ヒト凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル（ａｐｐｌｅ）２ドメインに結合し
、凝固因子ＸＩＩａによるＦＸＩの活性化を阻害する抗体に関する。
（２）関連技術の説明
静脈血栓症および動脈血栓症の両方を含む血栓塞栓性障害は、ビタミンＫアンタゴニス
ト（ＶＫＡ）、ヘパリンおよび直接トロンビンインヒビターのような多数のクラスの抗凝
固剤が利用可能であるにもかかわらず、依然として西欧諸国における罹患および死亡の主
要原因である（Ｗｅｉｔｚら，Ｃｈｅｓｔ ２００８，１３３：２３４Ｓ－２５６Ｓ；Ｈ
ａｗｋｉｎｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ２００４，２４：６２Ｓ－６５Ｓ）。
これらの薬物は、血栓症のリスクを低減するのに有効ではあるが、それらは多数の制約を
伴う。例えば、ＶＫＡ（例えば、ワルファリン）は経口抗凝固療法の主流であるが、その
重大な出血リスク、遅い作用発現および作用相殺ならびに食事と薬物との多数の相互作用
ゆえに、ＶＫＡ療法の管理は複雑である（Ｈａｗｋｉｎｓ，前掲；Ａｎｓｅｌｌ Ｊら，
Ｃｈｅｓｔ ２００８，１３３：１６０Ｓ－１９８Ｓ）。新しい経口抗凝固剤（リバロキ
サバン、アピキサバン、エドキサバンおよびダビガトランを含むＮＯＡＣ）は、ワルファ
リンと比較して少なくとも劣っていない有効性を示し、食物と薬物との相互作用が少なく
、モニタリングの必要もない。しかし、ＮＯＡＣは、心房細動における脳卒中予防に関す
るその登録治験において主要または非主要臨床関連出血の年間発生率が１８％に近いこと
によって示されるように、出血のリスクを尚も増加させる（Ｃｏｎｎｏｌｌｙら，Ｎ Ｅ
ｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２００９，３６１：１１３９－１１５１；Ｐａｔｅｌら，Ｎ Ｅｎ
ｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１１，３６５：８８３－８９１；Ｇｒａｎｇｅｒら，Ｎ Ｅｎｇ
ｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１１，３６５：９８１－９９２；Ｇｉｕｇｌｉａｎｏら，Ｎ Ｅｎ
ｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１３，３６９：２０９３－２１０４）。これは、ＮＯＡＣが、正
常な凝固（止血）に必須であるタンパク質（凝固因子Ｘａ（ＦＸａ）およびトロンビン）
を標的とするという事実に主に起因する。したがって、血栓性疾患または障害の予防およ
び治療におけるより良好な安全性プロファイルを有する新規療法が依然として必要とされ
ている。
血液凝固カスケードの古典的なウォーターフォールモデル（図１Ａ）においては、凝固
は外因性（組織因子（ＴＦ）活性化）経路または内因性（接触活性化）経路のいずれかに
よって始動され、両者は、トロンビン生成およびフィブリン形成を最終的にもたらす共通
の経路に入る（Ｆｕｒｉｅ ＆ Ｆｕｒｉｅ，Ｃｅｌｌ １９８８，５３：５０５－５１
８；Ｇａｉｌａｎｉ ＆ Ｒｅｎｎｅ，Ｊ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２００７，
５：１１０６－１１１２）。内皮下およびアテローム硬化性病変に存在するＴＦが流動血
液にさらされ、凝固因子ＶＩＩａ（ＦＶＩＩａ）との複合体を形成すると、外因性カスケ
ードが開始される。ついで、ＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体（外因性テナーゼ複合体）は共通経
路を始動させ、すなわち、ＦＸを活性化してＦＸａを形成し、今度はこれがプロトロンビ
ンをトロンビンに変換する。また、ＴＦ－ＦＶＩＩａ複合体は凝固因子ＩＸ（ＦＩＸ）を
活性化してＦＩＸａを形成しうる。凝固因子ＶＩＩＩ（ＦＶＩＩＩａ）（内因性テナーゼ
複合体）と複合体形成したＦＩＸａもＦＸ基質を切断しうる。内因性カスケードは、負荷
電表面（例えば、コラーゲンおよびグリコサミノグリカン）からの接触活性化によりＦＸ
ＩＩａが形成されると開始され、ＦＸＩ、ＦＩＸ、ＦＸおよびプロトロンビンの逐次的活
性化によりトロンビン生成を伝播する。凝固カスケードにおける最終プロテアーゼである
トロンビンは更に、フィードバックメカニズムにおけるＦＸＩの直接活性化によるＦＸＩ
ａ生成に寄与しうる。全血中のもう１つの重要な止血成分である血小板はトロンビンによ
り活性化されることが可能であり、ついでＦＸＩａ形成をも援助しうる。トロンビン生成
のＦＸＩ依存的増幅は、トロンビン活性化線溶抑制因子（ＴＡＦＩ）の活性化により、フ
ィブリン溶解（線溶）を間接的に調節しうる。したがって、ＦＸＩは止血系における幾つ
かの成分と相互作用し、血液凝固および血栓症において重要な役割を果たす（Ｇａｉｌａ
ｎｉ ＆ Ｒｅｎｎｅ，前掲；Ｅｍｓｌｅｙら，Ｂｌｏｏｄ ２０１０，１１５：２５６
９－２５７７）。
凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）は、８０ＫＤａの同一サブユニットから構成される二量体であ
り、Ｎ末端から始まる各サブユニットは４つのアップルドメイン（Ａ１、Ａ２、Ａ３およ
びＡ４）および触媒ドメインからなる（図１Ｂを参照されたい）。ＦＸＩは、高分子量キ
ニノーゲン（ＨＫ）と複合体形成して循環するチモーゲンである。ＨＫはＦＸＩにおける
Ａ２ドメインに結合し、ＦＸＩからＦＸＩａへのＦＸＩＩａ活性化のための生理学的補因
子である。ＦＸＩにおける残りのアップルドメインも重要な生理的機能をもたらす。例え
ば、ＦＩＸ結合エキソサイトはＡ３に位置し、ＦＸＩＩａ結合部位はＡ４に位置する。Ｆ
ＸＩ二量体化に決定的に重要な残基もＡ４に位置する（Ｅｍｓｌｅｙら，前掲）。
ＦＸＩは、止血に対する寄与が比較的小さい一方で、血栓形成の病理学的過程において
は重要な役割を果たしており、したがって、血栓症に対する有望な標的であることが、近
年、多種多様な努力によって実証されている。この見解を裏付ける重要なデータが以下の
ものにおいて要約されている。（１）Ｉｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｉ
ｎｃ．のＦＸＩアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のフェーズＩＩ治験（Ｂｕｌ
ｌｅｒら，Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ ２０１５，３７２：２３２－２４０）において、
ＦＸＩ ＡＳＯは、膝関節全置換術を受けている患者において、エノキサパリンと比較し
て、より低い出血傾向を伴って、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）の有意な軽減を示した。（２
）ヒトの遺伝学および疫学的研究（Ｄｕｇａら，Ｓｅｍｉｎ Ｔｈｒｏｍｂ Ｈｅｍｏｓ
ｔ ２０１３；Ｃｈｅｎら，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ２０１４；Ｋｅｙ，
Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ Ａｍ Ｓｏｃ Ｈｅｍａｔｏｌ Ｅｄｕｃ Ｐｒｏｇｒａｍ ２
０１４，２０１４：６６－７０）は、重度のＦＸＩ欠損（血友病Ｃ）は虚血性脳卒中およ
び深部静脈血栓症のリスクの低減をもたらし、逆に、ＦＸＩのレベルの上昇は、ＶＴＥお
よび虚血性脳卒中の、より高いリスクに関連していることを示した。（３）多種多様な前
臨床試験は、ＦＸＩ（ａ）阻害または機能喪失が、止血を損なうことなく、重大な血栓保
護をもたらすことを示した（Ｃｈｅｎら，前掲）。注目すべきことに、モノクローナル抗
体１４Ｅ１１および１Ａ６はヒヒＡＶシャント血栓症モデルにおいて有意な血栓減少をも
たらした（米国特許第８，３８８，９５９号；Ｔｕｃｋｅｒら，Ｂｌｏｏｄ ２００９，
１１３：９３６－９４４；Ｃｈｅｎｇら，Ｂｌｏｏｄ ２０１０，１１６：３９８１－３
９８９）。更に、１４Ｅ１１（マウスＦＸＩと交差反応するもの）は、マウスの急性虚血
性脳卒中の実験モデルにおいて保護をもたらした（Ｌｅｕｎｇら，Ｔｒａｎｓｌ Ｓｔｒ
ｏｋｅ Ｒｅｓ ２０１２，３：３８１－３８９）。最小の出血リスクを示す抗血栓標的
としてのＦＸＩを検証する前臨床モデルにおいて、追加的なＦＸＩ標的化ｍＡｂも報告さ
れている（ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｈａｅｍｏｓｔ ２０１３，
１１０；Ｔａｋａｈａｓｈｉら，Ｔｈｒｏｍｂ Ｒｅｓ ２０１０，１２５：４６４－４
７０；ｖａｎ Ｍｏｎｔｆｏｏｒｔ，Ｐｈ．Ｄ．Ｔｈｅｓｉｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ，１４ Ｎｏ
ｖｅｍｂｅｒ ２０１４）。したがって、ＦＸＩの阻害は、現在の標準治療の抗凝固剤と
比較して改善された利益－リスクプロファイルを有する新規抗血栓療法のための有望な戦
略である。
発明の簡潔な概要
本発明は、凝固因子ＸＩに選択的に結合することが可能であり（抗ＦＸＩ抗体）、止血
を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制することが可能であり、好ましくは、
検出可能な出血をほとんど又は全く誘発することなく血液凝固および関連血栓症の低減を
もたらすことが可能であるヒト抗体および抗原結合性フラグメントを提供する。組成物は
、凝固因子ＸＩのアップル（ａｐｐｌｅ）２ドメインの一定のエピトープに結合しうる抗
凝固因子ＸＩ抗体および抗原結合性フラグメントを含む。これらの抗体および抗原結合性
フラグメントは、凝固因子ＦＸＩＩａによる凝固因子ＸＩのチモーゲン形態からその活性
型凝固因子ＸＩａへの変換を阻害することにより、中和活性を示す。
該抗体および抗原結合性フラグメントは、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静
脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、
重度全身性炎症応答症候群、転移癌および感染症（これらに限定されるものではない）を
含む血栓性障害および疾患の治療および／または予防に有用である。該抗体および抗原結
合性フラグメントは心房細動における脳卒中の予防（ＳＰＡＦ）に特に有用である。
本発明は、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１
３７１６の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フ
ラグメント、あるいは６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、
欠失またはそれらの組合せを有する、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１
６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む
抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐは、
配列番号１８、２６、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）
と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含み、抗体αＦ
ＸＩ－１３７１６ｐは、配列番号２２、２７、３３または３４に示されているアミノ酸配
列を有するＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み、抗
体αＦＸＩ－１３７１６は、配列番号２５、２８、３５または３６に示されているアミノ
酸配列を有するＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み
、前記の６個のＣＤＲの１以上は、所望により、１、２または３個のアミノ酸置換、付加
、欠失またはそれらの組合せを有していてもよく、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の
抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメインに結
合し、ＦＸＩの活性化を阻害する。
本発明は、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１
３７１６の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フ
ラグメント、あるいは６個のＣＤＲの１以上がαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３
７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＣＤＲに対して１、２または３個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、ＡＤ－１３
７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも
含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ
は、配列番号１８または３１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列
番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含み、抗体αＦＸＩ－１
３７１６ｐは、配列番号２２または３３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣと、配
列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み、抗体αＦＸＩ－１３７１
６は、配列番号２５または３５に示されているアミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み、前記の６個のＣＤＲの１以上は、
所望により、１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有し
ていてもよく、（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）の抗体または抗原結合性フラグメント
は凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、前記の６個のＣＤＲは抗体αＦＸＩ－
１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣのＣＤＲ１、
ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびに抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６
ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＬＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。更な
る実施形態においては、前記の６個のＣＤＲは、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ
－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３
（ここで、前記の３個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを有する）、ならびに抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１
３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＬＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３（こ
こで、前記の３個のＣＤＲの１以上はαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐ
またはαＦＸＩ－１３７１６のＣＤＲに対して１、２または３個のアミノ酸置換、付加、
欠失またはそれらの組合せを有する）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメント
は、（ｉ）それぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１、配列
番号２および配列番号３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびに
それぞれＬＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号４、配列番号５およ
び配列番号６に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ（ここで、所望により
、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそ
れらの組合せを有していてもよい）、（ｉｉ）それぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２および
ＣＤＲ３に関して配列番号７、配列番号８および配列番号９に記載されているアミノ酸配
列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびにそれぞれＬＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に
関して配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を
有するＬＣ ＣＤＲ（ここで、所望により、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、または（
ｉｉｉ）それぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号７、配列番
号８および配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびに
それぞれＬＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１０、配列番号１１
および配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ（ここで、所望
により、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失ま
たはそれらの組合せを有していてもよい）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメント
は、（ｉ）それぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１、配列
番号２および配列番号３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびに
それぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号４、配列番号５およ
び配列番号６に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ（ここで、前記の６個
のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せ
を有する）、（ｉｉ）配列番号７、配列番号８および配列番号９に記載されているアミノ
酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびにそれぞれＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ
３に関して配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２に記載されているアミノ酸配
列を有するＬＣ ＣＤＲ（ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のア
ミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する）、または（ｉｉｉ）配列番号７
、配列番号８および配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、
ならびにそれぞれＬＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１０、配列
番号１１および配列番号１２に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ（ここ
で、前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失または
それらの組合せを有する）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメント
は、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐに関して配列番号１６、抗体αＦＸＩ－１３７１ｐに関
して配列番号２０またはαＦＸＩ－１３７１６に関して配列番号２４に示されているアミ
ノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインにおける抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１
３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、な
らびに抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐに関して配列番号１７または抗体αＦＸＩ－１３７１
６ｐもしくは抗体αＦＸＩ－１３７１６に関して配列番号２１に示されているアミノ酸配
列を有するＬＣ可変ドメインにおける抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１
６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＬＣのＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４または４０に
示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ド
メインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは１
、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを含む）を含む。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合
性フラグメントを提供し、ここで、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐは、配列番号１８、２６
、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号１９に
示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含み、抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐ
は、配列番号２２、２７、３３または３４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣと、
配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み、抗体αＦＸＩ－１３７
１６は、配列番号２５、２８、３５または３６に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ
と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを含み、前記の６個のＣＤ
Ｒの１以上は、所望により、１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれら
の組合せを有していてもよく、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（Ｆ
ＸＩ）のアップル２ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐのＨＣ
ＣＤＲは、配列番号１、配列番号２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有し
、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐのＬＣ ＣＤＲは、配列番号４、配列番号５および配列番
号６に示されているアミノ酸配列を有し、ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上は、所望
により、１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有してい
てもよく；抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐのＨＣ ＣＤＲは、配列番号７、配列番号８およ
び配列番号９に示されているアミノ酸配列を有し、抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐのＬＣ
ＣＤＲは、配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２に示されているアミノ酸配列
を有し、ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上は、所望により、１、２または３個のアミ
ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよく；ならびに抗体αＦＸＩ
－１３７１６のＨＣ ＣＤＲは、配列番号７、配列番号８および配列番号１３に示されて
いるアミノ酸配列を有し、抗体αＦＸＩ－１３７１６のＬＣ ＣＤＲは、配列番号１０、
配列番号１１および配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有し、ここで、前記の６
個のＣＤＲの１以上は、所望により、１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失また
はそれらの組合せを有していてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、αＦＸＩ－１３６５４ｐ抗体は、配列
番号１６に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインと、配列番号１７に示さ
れているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメインとを含み、ここで、所望により、該可変
ドメインの一方または両方は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ
酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んでいてもよいが、ただし、該可変ドメイ
ンにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失を有さず；αＦＸ
Ｉ－１３７１６ｐ抗体は、配列番号２０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ド
メインと、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメインとを含み
、ここで、所望により、該可変ドメインの一方または両方は１、２、３、４、５、６、７
、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んでいても
よいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換
、付加、欠失を有さず；およびαＦＸＩ－１３７１６抗体は、配列番号２４に示されてい
るアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメインと、配列番号２１に示されているアミノ酸配列
を有するＬＣ可変ドメインとを含み、ここで、所望により、該可変ドメインの一方または
両方は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失ま
たはそれらの組合せを含んでいてもよいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはい
ずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失を有さない。もう１つの実施形態におい
ては、前記のＨＣまたはＬＣ可変ドメインは該可変ドメインのフレームワーク領域内に１
、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
本発明の更なる態様または実施形態においては、αＦＸＩ－１３６５４ｐ抗体、αＦＸ
Ｉ－１３７１６ｐ抗体またはαＦＸＩ－１３７１６ｐ抗体のそれぞれは、配列番号１４ま
たは４０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ定常ドメインまたはその変異体（ここ
で、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、αＦＸＩ－１３６５４ｐ抗体、αＦＸ
Ｉ－１３７１６ｐ抗体またはαＦＸＩ－１３７１６ｐ抗体のそれぞれは、配列番号１５に
示されているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ド
メインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明は更に、（ａ）配列番号１６に示されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメ
インおよび配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ここで
、所望により、該可変ドメインの一方または両方は１、２、３、４、５、６、７、８、９
または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、
ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、
欠失またはそれらの組合せを有さない）、（ｂ）配列番号２０に示されているアミノ酸配
列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する軽
鎖可変ドメイン（ここで、所望により、該可変ドメインの一方または両方は１、２、３、
４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せ
を有していてもよいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超え
るアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さない）、または（ｃ）配列番号
２４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号２１に示され
ているアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン（ここで、所望により、該可変ドメインの
一方または両方は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメインにおける
ＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さ
ない）を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供する。もう１つの実施形態におい
ては、前記のＨＣまたはＬＣ可変ドメインは該可変ドメインのフレームワーク領域内に１
、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含みうる。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は更に、配列番号１４または４
０に示されているアミノ酸配列を含むＨＣ定常ドメインを含み、所望により、１、２、３
、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合
せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は更に、配列番号１５に示され
ているアミノ酸配列を含むＬＣ定常ドメインを含み、所望により、１、２、３、４、５、
６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んで
いてもよい。
特定の実施形態においては、ＨＣおよびＬＣ定常ドメインは１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んでいて
もよい。更なる態様においては、ＨＣ定常ドメインはＣ末端リジンを含んでいてもよく、
またはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
本発明は更に、（ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定
領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ
２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメ
インを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のア
ミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、（ｂ）配列番号７
に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号
８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号９に示されている
アミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望に
より、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを有していてもよい）、または（ｃ）配列番号７に示されているアミノ酸配列
を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配
列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ
－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以
上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していても
よい）を含む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該可変ドメインの一
方または両方は、所望により、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメ
インにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
組合せを有さず、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアッ
プル２ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、Ｉ
ｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。更なる態様においては、
該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含んでいてもよい。特定の態様においては、該定常ドメ
インはＣ末端リジンを含んでいてもよく、またはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４
アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメイ
ンはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基
の、プロリンによる置換を含み［これは、配列番号４１の１０８位（１０８位のセリン）
または配列番号１４の１０８位（１０８位のプロリン）に対応する］、所望により、１、
２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれら
の組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４または４０に
示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含み、所望により、１、２、３、４
、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを
含んでいてもよい。
本発明は更に、（ａ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定
領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ
２および配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメ
インを有する軽鎖（ここで、所望により、ＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のア
ミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、または（ｂ）配列
番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、
配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１２に
示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する軽鎖（こ
こで、所望により、ＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠
失またはそれらの組合せを有していてもよい）を含む抗体または抗原結合性フラグメント
を提供し、ここで、該可変ドメインの一方または両方は、所望により、１、２、３、４、
５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有
していてもよいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるア
ミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さず、該抗体または抗原結合性フラグ
メントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメインに結合し、ＦＸＩの活性化を阻害
する。もう１つの実施形態においては、前記のＨＣおよびＬＣ可変ドメインは該可変ドメ
インのフレームワーク領域内に１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖またはヒトラ
ムダ軽鎖を含む。特定の態様においては、軽鎖定常ドメインは１、２、３、４、５、６、
７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んでいて
もよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含む。本発明は更に、（ａ）配列番号１に示さ
れているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示
されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ
酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、
ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組
合せを有していてもよい）と、（ｂ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽
鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有する
ＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を
含む可変ドメインを有する軽鎖（ここで、所望により、ＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２ま
たは３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）とを含
む抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、所望により、該可変ドメインの
一方または両方は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメインにおける
ＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さ
ない。もう１つの実施形態においては、前記のＨＣおよびＬＣ可変ドメインは該可変ドメ
インのフレームワーク領域内に１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。特定の態様においては、該定
常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、
欠失またはそれらの組合せを含んでいてもよい。更なる態様においては、該定常ドメイン
はＣ末端リジンを含んでいてもよく、またはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１またはＩｇＧ４
アイソタイプの重鎖定常ドメインを含む。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメイ
ンはＩｇＧ４アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基
の、プロリンによる置換を含み［これは、配列番号４１の１０８位（１０８位のセリン）
または配列番号１４の１０８位（１０８位のプロリン）に対応する］、所望により、１、
２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれら
の組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４または４０に
示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインを含み、これは、特定の実施形態にお
いては、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖定常ドメイン
またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインを含み、これは、特定の実施形態においては、１、２
、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
組合せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインを含み、これは、特定の実施形態においては、１
、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを含んでいてもよい。
本発明は更に、（ａ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定
領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ
２および配列番号９または１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含
む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２また
は３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）と、（ｂ
）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ
）１、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号
１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する軽
鎖（ここで、所望により、ＨＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、
付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）とを含む抗体または抗原結合性フ
ラグメントを提供し、ここで、所望により、該可変ドメインの一方または両方は１、２、
３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組
合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも、３個を
超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さない。もう１つの実施形態
においては、前記のＨＣおよびＬＣ可変ドメインは該可変ドメインのフレームワーク領域
内に１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含んでいても
よい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３またはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインを含み、これは、特定の態様において
は、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失また
はそれらの組合せを含んでいてもよい。特定の態様においては、該定常ドメインはＣ末端
リジンを含んでいてもよく、またはＣ末端リジンを欠いていてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１もしくはＩｇＧ
４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（これは、１、２、３、４、５、６
、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する定
常ドメインを含む）を含む。もう１つの態様においては、該重鎖定常ドメインはＩｇＧ４
アイソタイプのものであり、更に、２２８位（ＥＵ番号付け）のセリン残基の、プロリン
による置換を含み［これは、配列番号４１の１０８位（１０８位のセリン）または配列番
号１４の１０８位（１０８位のプロリン）に対応する］、所望により、１、２、３、４、
５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含
んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４もしくは４０
に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたはその変異体（これは、１、２
、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
組合せを有する定常ドメインを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該軽鎖はヒトカッパ軽鎖定常ドメイン
またはヒトラムダ軽鎖定常ドメインを含み、これは、特定の態様においては、１、２、３
、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合
せを含んでいてもよい。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはその変異体（これは、１、２、３、４、５
、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有す
る定常ドメインを含む）を含む。
本発明は更に、配列番号１８、２６、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有
する重鎖と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖またはその変異体（
これは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを有する定常ドメインを含む）とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号２２、２５、２７、２８、３３、３４、３５または３６に示さ
れているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有す
る軽鎖またはその変異体（これは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の
アミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する定常ドメインを含む）とを含む
抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号２２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号２５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。
本発明は更に、配列番号２７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配
列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）とを含む抗体を提供する。
もう１つの実施形態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、
６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有して
いてもよいが、ただし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみの
アミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号２８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３５に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３６に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２
３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号１８、２６、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有
する重鎖と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供
する。もう１つの実施形態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４
、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを
有していてもよいが、ただし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個
のみのアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号１８に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１
９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号２６に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１
９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１
９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、配列番号３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１
９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む抗体を提供する。もう１つの実施形
態においては、前記のＨＣおよび／またはＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９ま
たは１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、た
だし、前記抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は１、２または３個のみのアミノ酸置換、付
加、欠失またはそれらの組合せを含むことが可能である。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの軽鎖可変ドメイン
または重鎖可変ドメインをコードする単離された核酸分子を提供する。
本発明は更に、アミノ酸配列ＹＡＴＲＱＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（配列番号３８）およ
びアミノ酸配列ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（配列番号３９）を含む、凝固因子ＸＩ（Ｆ
ＸＩ）上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ただし、
ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントはマウスまたはラットアミノ酸配列を含ま
ない。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは非ヒトアミノ
酸配列を含まない。もう１つの実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１定常ドメイン
もしくはＩｇＧ４定常ドメインまたはその修飾変異体を含む。もう１つの実施形態におい
て、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７
、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体で
ある。もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少な
くとも１、２、３または４個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変
異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番号付け
）または１０８位（配列番号１４に示されているもの）のセリンの、プロリン残基による
置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
もＣ末端におけるリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に
特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、アミノ酸配列ＹＡＴＲＱＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（配列番号３８）およ
びアミノ酸配列ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（配列番号３９）を含む、凝固因子ＸＩ（Ｆ
ＸＩ）上のエピトープに結合する抗体または抗原結合性フラグメントを提供し、ただし、
ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントはヒトＩｇＧ１定常ドメインもしくはＩｇ
Ｇ４定常ドメインまたはそれらの修飾誘導体を含む。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
も１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失または
それらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
も１、２、３または４個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体
である。もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番
号付け）または１０８位（配列番号１４に示されているもの）のセリンの、プロリン残基
による置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
もＣ末端におけるリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に
特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、凝固因子ＸＩへの参照抗体の結合を交差遮断し又は該結合と競合する抗
体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該参照抗体は、（ｉ）配列番号１８
、２６、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１９
に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖、あるいは（ｉｉ）配列番号２２、２５、２７
、２８、３３、３４、３５または３６に示されているアミノ酸配列を有する重鎖、および
配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ただし、該抗体または抗
原結合性フラグメントはマウスまたはラットアミノ酸配列を含まない。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは非ヒトアミノ
酸配列を含まない。もう１つの実施形態においては、該抗体はヒトＩｇＧ１定常ドメイン
もしくはＩｇＧ４定常ドメインまたはその修飾変異体を含む。もう１つの実施形態におい
て、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも１、２、３、４、５、６、７
、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体で
ある。もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少な
くとも１、２、３または４個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変
異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番号付け
）または１０８位（配列番号１４に示されているもの）のセリンの、プロリン残基による
置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
もＣ末端におけるリジンを欠く変異体である。もう１つの実施形態においては、該抗体ま
たは抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン
配列を含む。
本発明は更に、凝固因子ＸＩへの参照抗体の結合を交差遮断し又は該結合と競合する抗
体または抗原結合性フラグメントを提供し、ここで、該参照抗体は、（ｉ）配列番号１８
、２６、３１または３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖、および配列番号１９
に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖、あるいは（ｉｉ）配列番号２２、２５、２７
、２８、３３、（相補性）３４、３５または３６に示されているアミノ酸配列を有する重
鎖、および配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖を含み、ただし、該抗
体または抗原結合性フラグメントはヒトＩｇＧ１定常ドメインもしくはＩｇＧ４定常ドメ
インまたはそれらの修飾誘導体を含む。
もう１つの実施形態において、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくとも
１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそ
れらの組合せを含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
も１、２、３または４個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む変異体
である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインは、２２８位（ＥＵ番号付け
）または１０８位（配列番号１４に示されているもの）のセリンの、プロリン残基による
置換を少なくとも含む変異体である。
もう１つの実施形態においては、該ＩｇＧ１またはＩｇＧ４定常ドメインは、少なくと
もＣ末端におけるリジンを欠く変異体である。
もう１つの実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、ヒト抗体に
特徴的なフレームワークを含む可変ドメイン配列を含む。
本発明は更に、（ａ）（ｉ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補
性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－
ＣＤＲ２および配列番号９または１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ
３を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）と
、（ｉｉ）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ
－ＣＤＲ）１、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および
配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを
有する軽鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸
置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）とを含む抗体または抗原結
合性フラグメント、あるいは（ｂ）（ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有す
る重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有
するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ
３を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）と
、（ｉｉ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－
ＣＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列
番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する
軽鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、
付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）とを含む抗体または抗原結合性フ
ラグメントの製造方法を提供し、該製造方法は、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖を
コードする核酸分子とを含む宿主細胞を準備し、該抗体または抗原結合性フラグメントを
産生させるのに十分な条件下、それを産生させるのに十分な時間にわたって該宿主細胞を
培養することを含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常
ドメインは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖
定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少なくとも１、２、３、４、
５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含
む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４もしくは４０
に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常
ドメインは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖定常ドメイン
もしくはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少な
くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失ま
たはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少
なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵
巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞は酵母または糸状真菌細胞で
ある。
本発明は更に、（ａ）（ｉ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補
性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－
ＣＤＲ２および配列番号９または１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ
３を含む重鎖を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１
以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していて
もよい）、ならびに（ｉｉ）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補
性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ
－ＣＤＲ２および配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含
む可変ドメインを有する軽鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２また
は３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）を含む抗
体または抗原結合性フラグメント、または（ｂ）（ｉ）配列番号１に示されているアミノ
酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－ＣＤＲ）１、配列番号２に示されているアミ
ノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号３に示されているアミノ酸配列を有する
ＨＣ－ＣＤＲ３を含む重鎖を含む可変ドメインを有する重鎖（ここで、所望により、ＨＣ
－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せ
を有していてもよい）、ならびに（ｉｉ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有す
る軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－ＣＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有
するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ
３を含む可変ドメインを有する軽鎖（ここで、所望により、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）を
含む抗体または抗原結合性フラグメントを含む組成物を提供し、ここで、該抗体または抗
原結合性フラグメントは、該重鎖をコードする核酸分子と該軽鎖をコードする核酸分子と
を含む宿主細胞から得られる。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ
３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常
ドメインは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体はＩｇＧ４アイソタイプの重鎖
定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少なくとも１、２、３、４、
５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含
む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１４もしくは４０
に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常
ドメインは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換
、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、軽鎖は、ヒトカッパ軽鎖定常ドメイン
もしくはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少な
くとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失ま
たはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、該抗体は、配列番号１５に示されてい
るアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは少
なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失
またはそれらの組合せを含む）を含む。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞はチャイニーズハムスター卵
巣細胞またはヒト胎児腎２９３細胞である。
本発明の更なる態様または実施形態においては、宿主細胞は酵母または糸状真菌細胞で
ある。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結
合性フラグメントと医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物を提供する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結
合性フラグメントの治療的有効量、あるいは前記抗体または抗原結合性フラグメントのい
ずれかを含む組成物の治療的有効量を対象に投与することを含む、対象における血栓塞栓
性障害または疾患の治療方法を提供する。
更なる実施形態においては、対象は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血
栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度
全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患するリスクを有
する。
更なる実施形態においては、対象はＦＸＩの病的活性化を示す。
更なる実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメ
ントまたは組成物を非経口投与により対象に投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを対象の体重１ｋｇ
当たり該抗体または抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の治
療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０～２．０
ｍｇ／ｋｇの治療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０ｍｇ／ｋ
ｇの治療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０、１．１
、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０ｍｇ
／ｋｇの治療的有効量で投与する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体または抗原結
合性フラグメントの治療的有効量、あるいは前記抗体または抗原結合性フラグメントのい
ずれかを含む組成物の治療的有効量を、血栓塞栓性障害または疾患の治療を要する対象に
投与することを含む、対象における血栓塞栓性障害または疾患の治療方法を提供する。
更なる実施形態においては、治療を要する対象は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞
栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓
性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患す
るリスクを有する。
更なる実施形態においては、治療を要する対象はＦＸＩの病的活性化を示す。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントまたは組成物を非経
口投与により対象に投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを対象の体重１ｋｇ
当たり該抗体または抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の治
療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０～２．０
ｍｇ／ｋｇの治療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０ｍｇ／ｋ
ｇの治療的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０、１．１
、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０ｍｇ
／ｋｇの治療的有効量で投与する。
本発明は更に、血栓塞栓性障害または疾患を治療するための医薬の製造のための、前記
抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの抗体の使用、あるいは前記抗体または抗
原結合性フラグメントのいずれかを含む組成物の使用を提供する。
特定の実施形態においては、血栓塞栓性障害または疾患は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、
肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連
血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症である。
本発明は更に、血栓塞栓性障害または疾患の治療のための、前記抗体または抗原結合性
フラグメントのいずれかの抗体、あるいは前記抗体または抗原結合性フラグメントのいず
れかを含む組成物を提供する。
特定の実施形態においては、血栓塞栓性障害または疾患は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、
肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連
血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症である。
本発明は更に、（ａ）血栓症を有する又は血栓症の発生リスクを有する、治療を要する
対象を選択し、（ｂ）前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの阻害量、ある
いは前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含む組成物の阻害量を該対象に
投与し、それにより、ＦＸＩＩａによるＦＸＩの活性化を阻害することを含む、対象にお
ける因子ＸＩＩａ（ＦＸＩＩａ）によるＦＸＩの活性化を阻害する方法を提供する。
更なる実施形態においては、治療を要する対象は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞
栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓
性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患す
るリスクを有する対象である。
更なる実施形態においては、治療を要する対象は、ＦＸＩの病的活性化を示す対象であ
る。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントまたは組成物の阻害
量は、ＦＸＩの活性化を少なくとも５０％阻害するのに十分な量である。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントまたは組成物を非経
口投与により対象に投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを対象の体重１ｋｇ
当たり該抗体または抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の阻
害量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０～２．０
ｍｇ／ｋｇの阻害量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０ｍｇ／ｋ
ｇの阻害量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０、１．１
、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０ｍｇ
／ｋｇの阻害量で投与する。
本発明は更に、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかの治療的有効量、あ
るいは前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれかを含む組成物の治療的有効量を
対象に投与し、それにより、該対象において、止血を妨げることなく血液凝固および関連
血栓症を抑制するすることを含む、血液凝固および関連血栓症の抑制を要する対象におい
て、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための方法を提供する。
更なる実施形態においては、対象は、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血
栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度
全身性炎症応答症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患するリスクを有
する。
更なる実施形態においては、対象はＦＸＩの病的活性化を示す。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントまたは組成物を、Ｆ
ＸＩの活性化を少なくとも５０％阻害するのに十分な量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントまたは組成物を非経
口投与により対象に投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを対象の体重１ｋｇ
当たり該抗体または抗原結合性フラグメント約０．１～約１０ｍｇ（ｍｇ／ｋｇ）の治療
的有効量で投与する。
更なる実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０～２．０
ｍｇ／ｋｇの治療的有効量で投与する。更なる実施形態においては、該抗体または抗原結
合性フラグメントを約１．０ｍｇ／ｋｇの治療的有効量で投与する。更なる実施形態にお
いては、該抗体または抗原結合性フラグメントを約１．０、１．１、１．２、１．３、１
．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９または２．０ｍｇ／ｋｇの治療的有効量
で投与する。
本発明は更に、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための医薬
の製造のための、前記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか、あるいは前記抗体
または抗原結合性フラグメントのいずれかを含む組成物の使用を提供する。
本発明は更に、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための、前
記抗体または抗原結合性フラグメントのいずれか、あるいは前記抗体または抗原結合性フ
ラグメントのいずれかを含む組成物の使用を提供する。
定義
本明細書中で用いる「抗体」は、組換え製造形態を含む完全免疫グロブリンを意味し、
所望の生物活性を示す任意の形態の抗体を含む。したがって、それは最も広い意味で用い
られ、特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリクローナル
抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、バイパ
ラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体およびキメラ抗体を含むが
、これらに限定されるものではない。「親抗体」は、意図される使用のための抗体の修飾
（例えば、ヒト治療用抗体としての使用のための抗体のヒト化）の前の、抗体への免疫系
の暴露により得られる抗体である。
本明細書中で用いる「抗原結合性フラグメント」は、抗体のフラグメント、すなわち、
完全長抗体により結合される抗原に特異的に結合する能力を保有する抗体フラグメント、
例えば、１以上のＣＤＲ領域を保有するフラグメントを意味する。抗体結合性フラグメン
トの例には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント；ジアボディ；
一本鎖抗体分子、例えばｓｃ－Ｆｖ；ならびに抗体フラグメントから形成される多重特異
性抗体およびナノボディが含まれるが、これらに限定されるものではない。
本明細書中で用いる「Ｆａｂフラグメント」は１個の軽鎖ならびに１個の重鎖の可変領
域およびＣＨ１から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とはジスルフィド結合
を形成し得ない。「Ｆａｂフラグメント」は抗体のパパイン切断の産物でありうる。
本明細書中で用いる「Ｆａｂ’フラグメント」は１個の軽鎖、ならびにＶＨドメインお
よびＣＨ１ドメインを含有する１個の重鎖の部分または断片、そしてまた、ＣＨ１および
ＣＨ２ドメイン間の領域を含有し、その結果、２個のＦａｂ’フラグメントの、２個の重
鎖間で鎖間ジスルフィド結合が形成されてＦ（ａｂ’）２分子を形成しうる。
本明細書中で用いる「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２個の軽鎖、ならびにＣＨ１
およびＣＨ２ドメイン間の定常領域の部分を含有する２個の重鎖を含有し、その結果、そ
れらの２個の重鎖の間で鎖間ジスルフィド結合が形成される。したがって、Ｆ（ａｂ’）
２フラグメントは、それらの２個の重鎖の間のジスルフィド結合により連結された２個の
Ｆａｂ’フラグメントから構成される。「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は抗体のペプシ
ン切断の産物でありうる。
本明細書中で用いる「Ｆｖ領域」は重鎖および軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定
常領域を欠いている。
本明細書中で用いる「Ｆｃ」領域は、抗体のＣＨ１およびＣＨ２ドメインを含む２個の
重鎖フラグメントを含有する。それらの２個の重鎖フラグメントは２以上のジスルフィド
結合により、およびＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により結合している。
本明細書中で用いる「ジアボディ」は、２個の抗原結合部位を有する小さな抗体フラグ
メントを意味し、該フラグメントは、同一ポリペプチド鎖内で軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）
に連結された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＨ）を含む。同一鎖
上で２個のドメイン間のペア形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することによ
り、それらのドメインは別の鎖の相補的ドメインとペア形成することを強要され、２個の
抗原結合部位を生成する。ジアボディは、例えばＥＰ ４０４，０９７；ＷＯ ９３／１
１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８に、より詳細に記載されている。操作された抗
体変異体の総説としては、全般的には、ＨｏｌｌｉｇｅｒおよびＨｕｄｓｏｎ（２００５
）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６－１１３６を参照されたい。
本明細書中で用いる「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域または軽鎖の可変領域のみを
含有する免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメントである。幾つかの場合には、２
以上のＶＨ領域がペプチドリンカーにより共有結合されて２価ドメイン抗体を形成する。
２価ドメイン抗体の、２個のＶＨ領域は、同じまたは異なる抗原を標的化しうる。本発明
の１つの実施形態においては、ドメイン抗体は単一ドメイン抗体またはナノボディである
。本発明の１つの実施形態においては、ドメイン抗体は、開示されている抗体αＦＸＩ－
１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の重鎖ＣＤＲを少な
くとも含むナノボディであり、該重鎖ＣＤＲにおいて、該ＣＤＲの１以上は、所望により
、１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよ
い。
本明細書中で用いる「二価抗体」は２個の抗原結合部位を含む。幾つかの場合には、そ
れらの２個の結合部位は同じ抗原特異性を有する。しかし、二価抗体は二重特異性であり
うる（例えば、ＦＸＩおよび別の抗原に対するアフィニティを有する）。
本明細書中で用いる「二重特異性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖ペア、したがって
２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。例えば、二重特異性抗体は
、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐもしくはαＦＸＩ－１３７１６
の６個のＣＤＲを少なくとも含む第１抗体または変異体実施形態（ここで、前記の６個の
ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを
有する）の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第１重鎖／軽鎖ペアを、ＦＸＩ以外の関心抗
原に対する特異性を有する第２抗体の１つの重鎖と１つの軽鎖とを含む第２重鎖／軽鎖ペ
アと共に含みうる。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメン
トの連結を含む種々の方法により製造されうる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉら（１
９９０）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５－３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ
ら（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７－１５５３を参照されたい。また
、二重特異性抗体は「ジアボディ」（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ
９０：６４４４－６４４８）または「ジャヌシン（Ｊａｎｕｓｉｎ）」（Ｔｒａｕｎｅ
ｃｋｅｒら（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５－３６５９およびＴｒａｕｎｅｃ
ｋｅｒら（１９９２）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｓｕｐｐｌ．７：５１－５２）として
形成されうる。
本明細書中で用いる「バイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）
抗体」は、同一抗原上の異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。
「単離（された）」抗体またはその抗原結合性フラグメントは、それらが産生された細
胞または細胞培養からの他の生物学的分子を少なくとも部分的に含有しない。そのような
生物学的分子には、核酸、タンパク質、脂質、炭水化物、または細胞残渣および増殖培地
のような他の物質が含まれる。単離された抗体または抗原結合性フラグメントは更に、宿
主細胞からの又はその増殖培地の生物学的分子のような発現系成分を少なくとも部分的に
含有しないことが可能である。一般に、「単離（された）」なる語は、そのような生物学
的分子の完全な非存在、または水、バッファーもしくは塩の非存在、または該抗体もしく
はフラグメントを含む医薬製剤の成分を指すものではない。
本明細書中で用いる「モノクローナル抗体」は実質的に均一な抗体の集団を意味し、す
なわち、該集団を構成する抗体分子は、僅かな量で存在しうる考えられうる自然突然変異
以外は、アミノ酸配列において同一である。これとは対照的に、通常の（ポリクローナル
）抗体調製物は、典型的には、異なるエピトープに対して特異的であることが多い可変ド
メインに異なるアミノ酸配列を有する多数の異なる抗体を含む。修飾語「モノクローナル
」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという該抗体の特性を示しており、いずれか
の特定の方法による該抗体の製造を要するとは解釈されるべきではない。例えば、本発明
に従い使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２
５６，４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により製造可能であり、あるいは
組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）により製造
可能である。また、「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１
）Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．
Ｂｉｏｌ ２２２：５８１－５９７に記載されている技術を用いて、ファージ抗体ライブ
ラリーから単離されうる。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照されたい。
本明細書中で用いる「キメラ抗体」は、第１抗体からの可変ドメインと第２抗体からの
定常ドメインとを有する抗体であり、ここで、（ｉ）第１抗体および第２抗体は異なる種
からのものであり（米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎら，（１９
８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１－６８５５）、
または（ｉｉ）第１抗体および第２抗体は異なるアイソタイプからのものである（例えば
、ＩｇＧ１抗体からの可変ドメインおよびＩｇＧ４抗体からの定常ドメイン、例えば、α
ＦＸＩ－１３４６５ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ））。１つの実施形態においては、可変ド
メインはヒト抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配列は非ヒト抗体（例えば、
マウス、ラット、イヌ、サル、ゴリラ、ウマ）から得られる。もう１つの態様においては
、可変ドメインは非ヒト抗体（「親抗体」）（例えば、マウス、ラット、イヌ、サル、ゴ
リラ、ウマ）から得られ、定常ドメイン配列はヒト抗体から得られる。もう１つの態様に
おいては、可変ドメインはヒトＩｇＧ１抗体（「親抗体」）から得られ、定常ドメイン配
列はヒトＩｇＧ４抗体から得られる。
本明細書中で用いる「ヒト化抗体」は、ヒト抗体および非ヒト（例えば、マウスまたは
ラット）抗体の両方からの配列を含有する抗体の形態を意味する。一般に、ヒト化抗体は
、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの全部を含み、ここで、超可変ループ
は非ヒト免疫グロブリンのものに対応し、フレームワーク（ＦＲ）領域の全部または実質
的に全部はヒト免疫グロブリン配列のものである。ヒト化抗体は、所望により、ヒト免疫
グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部を含みうる。
本明細書中で用いる「完全ヒト抗体」は、ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列またはその
変異体配列（突然変異を欠く抗体と比較して修飾された機能または効力を有する完全ヒト
抗体を得るために組換え的に導入された該突然変異を含むもの）を含む抗体を意味する。
完全ヒト抗体は非ヒト免疫グロブリンアミノ酸配列を含まず、例えば、定常ドメインおよ
び可変ドメイン（ＣＤＲを含む）は、前記の突然変異から生じたもの以外のヒト配列を含
む。完全ヒト抗体は、インシリコでライブラリーにおける多様性が生じる完全ヒト抗体ラ
イブラリー（例えば、米国特許第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を
参照されたい）から得られる抗体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含みうる。完全
ヒト抗体は、非ヒト生物において産生されたそのような抗体を含み、例えば、完全ヒト抗
体は、マウスにおいて、マウス細胞において、あるいはマウス細胞に由来するハイブリド
ーマにおいて産生された場合には、マウス炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「マウス抗
体」は、マウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。あるいは、完全ヒト抗体
は、ラットにおいて、ラット細胞において、あるいはラット細胞に由来するハイブリドー
マにおいて産生された場合には、ラット炭水化物鎖を含有しうる。同様に、「ラット抗体
」は、ラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を意味する。
本明細書中で用いる、抗体または免疫グロブリンに関する「非ヒトアミノ酸配列」は、
非ヒト哺乳動物のアミノ酸配列に特徴的なアミノ酸配列を意味する。この語は、インシリ
コでライブラリーにおける多様性が生じる完全ヒト抗体ライブラリー（例えば、米国特許
第８，８７７，６８８号または第８，６９１，７３０号を参照されたい）から得られる抗
体または免疫グロブリンのアミノ酸配列を含まない。
一般に、基本的な抗体構造単位は四量体を含む。各四量体は、ポリペプチド鎖の、２つ
の同一ペアを含み、各ペアは１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１つの「重」鎖（約
５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識をもたらす約１０
０～１１０個またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。重鎖のカルボキシ末端部分は
、エフェクター機能を主にもたらす定常領域を定めうる。典型的には、ヒト軽鎖はカッパ
およびラムダ軽鎖として分類される。更に、ヒト重鎖は、典型的には、ミュー、デルタ、
ガンマ、アルファまたはイプシロンとして分類され、それぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、
ＩｇＡおよびＩｇＥとしての、抗体のアイソタイプを定める。軽鎖および重鎖においては
、可変領域および定常領域は約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により連結されており
、重鎖は約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域をも含む。全般的には、Ｆｕｎｄａｍｅｎ
ｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．編，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅ
ｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。
本明細書中で用いる「エフェクター機能」は、抗体イソタイプによって様々である、抗
体のＦｃ領域に起因する生物活性を意味する。抗体エフェクター機能の例には、Ｃｌｑ結
合および補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞性細胞傷害（
ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーショ
ン；ならびにＢ細胞活性化が含まれる。
各軽／重鎖ペアの可変領域は抗体結合部位を形成する。したがって、一般に、無傷抗体
は２つの結合部位を有する。二官能性または二重特異性抗体の場合を除き、それらの２つ
の結合部位は一般に同じである。
典型的には、重鎖および軽鎖の両方の可変ドメインは、比較的保存されたフレームワー
ク領域（ＦＲ）内に位置する、相補性決定領域（ＣＤＲ）とも称される３つの超可変領域
を含む。ＣＤＲは、通常、特定のエピトープへの結合が可能になるように、フレームワー
ク領域により整列されている。一般に、Ｎ末端からＣ末端方向に、軽鎖および重鎖可変ド
メインの両方はＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３およびＦＲ４を
含む。各ドメインへのアミノ酸の帰属は、一般に、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｋａｂａｔら；Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．
；５ｔｈ ｅｄ．；ＮＩＨ Ｐｕｂｌ．Ｎｏ．９１－３２４２（１９９１）；Ｋａｂａｔ
（１９７８）Ａｄｖ．Ｐｒｏｔ．Ｃｈｅｍ．３２：１－７５；Ｋａｂａｔら（１９７７）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２：６６０９－６６１６；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）
Ｊ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７またはＣｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎ
ａｔｕｒｅ ３４２：８７８－８８３の定義に基づいている。
本明細書中で用いる「超可変領域」は、抗原結合をもたらす、抗体のアミノ酸残基を意
味する。超可変領域は「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」（すなわち、軽鎖可変ドメイ
ン内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３ならびに重鎖可変ドメイン内のＣＤＲＨ
１、ＣＤＲＨ２およびＣＤＲＨ３）からのアミノ酸残基を含む。Ｋａｂａｔら（１９９１
）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．
（配列により抗体のＣＤＲ領域を定めている）を参照されたい。また、Ｃｈｏｔｈｉａお
よびＬｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（構造により
抗体のＣＤＲ領域を定めている）も参照されたい。
本明細書中で用いる「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、ＣＤＲ残基として本明
細書中で定義されている超可変領域残基以外の可変ドメイン残基を意味する。
本明細書中で用いる「保存的に修飾された変異体」または「保存的置換」は、アミノ酸
が、類似特性（例えば、電荷、側鎖サイズ、疎水性／親水性、バックボーンコンホメーシ
ョンおよび剛性など）を有する他のアミノ酸で置換されることを意味し、ここで、該変化
は、しばしば、タンパク質の生物活性を改変することなく施されうる。一般に、ポリペプ
チドの非必須領域における単一アミノ酸置換は生物活性を実質的に変化させない、と当業
者は認識している（例えば、Ｗａｔｓｏｎら（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌ
ｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕ
ｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ．）を参照されたい）。また、構造的または機能
的に類似したアミノ酸の置換は、生物活性を損なう可能性が低い。典型的な保存的置換を
以下の表に示す。
Figure 2022046656000002
本明細書中で用いる「エピトープ」なる語は、抗体（Ａｂ）のような「抗原結合性分子
」とその対応「抗原」（Ａｇ）との間の分子相互作用の文脈で定義される。一般に、「エ
ピトープ」は、Ａｂが特異的に結合するＡｇ上の領域または範囲、すなわちＡｂと物理的
に接触する領域または範囲を意味する。物理的接触はＡｂ分子およびＡｇ分子における原
子に関する距離基準（例えば、４オングストロームの距離カットオフ）により定められう
る。
与えられた抗体（Ａｂ）／抗原（Ａｇ）ペアに関するエピトープは、種々の実験的およ
び計算的エピトープマッピング法を用いて、種々の詳細なレベルで定められ、特徴づけら
れうる。該実験的方法には、突然変異誘発、Ｘ線結晶学、核磁気共鳴（ＮＭＲ）分光法お
よび水素重水素交換質量分析（ＨＸ－ＭＳ）が含まれ、これらの方法は当技術分野で公知
である。各方法は特有の原理に基づいているため、エピトープの記載は、それが決定され
た方法に密接に関連している。したがって、用いられるエピトープマッピング法に応じて
、与えられたＡｂ／Ａｇペアに関するエピトープは、異なった様態で記載される。
与えられた抗体（Ａｂ）／抗原（Ａｇ）ペアに関するエピトープは通常の方法により記
載されうる。例えば、エピトープの全体的な位置は、抗原の種々の断片または変異体に結
合する抗体の能力を評価することにより決定されうる。抗体と接触する抗原における特定
のアミノ酸（エピトープ）も、通常の方法を用いて決定されうる。例えば、Ａｂ分子とＡ
ｇ分子とを合体させることが可能であり、Ａｂ／Ａｇ複合体を結晶化させることが可能で
ある。該複合体の結晶構造を決定し、それを用いて、ＡｂとＡｇとの間の相互作用の特定
の部位を特定することが可能である。
本明細書中で用いる、ＦＸＩのような抗原に対して「特異的に結合する」は、抗体また
は他のリガンドが、全体的または部分的に、その抗原を含有する細胞または組織とは優先
的に会合し、その抗原を欠く細胞または組織とは会合しないことを意味する。分子と非標
的細胞または組織との間で、ある程度の非特異的相互作用が生じうると認識される。それ
でも、特異的結合は、抗原の特異的認識によってもたらされるものとして区別されうる。
選択的反応性抗体は抗原に結合するものの、それらは低いアフィニティで結合しうるに過
ぎない。一方、特異的結合は、結合抗体（または他のリガンド）と、抗原を欠く細胞との
間の会合より、遥かに強力な会合を、抗体（または他のリガンド）と、抗原を含有する細
胞との間でもたらす。特異的結合は、典型的には、ＦＸＩを欠く細胞または組織に対する
場合と比較して、ＦＸＩを含む細胞または組織に対する場合には、結合抗体または他のリ
ガンドの量（単位時間当たり）における、２倍を超える、例えば、５倍を超える、１０倍
を超える、または１００倍を超える増加をもたらす。そのような条件下のタンパク質への
特異的結合は、特定のタンパク質に対するその特異性に関して選択された抗体を要する。
特定のタンパク質に対して特異的に免疫反応性である抗体または他のリガンドを選択する
ためには、種々のイムノアッセイ形態が適している。例えば、タンパク質に対して特異的
に免疫反応性であるモノクローナル抗体を選択するためには、固相ＥＬＩＳＡイムノアッ
セイが常套的に使用される。特異的免疫反応性を決定するために用いられうるイムノアッ
セイ形態および条件の説明は、Ｈａｒｌｏｗ ＆ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｕ
ｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８８）を参照されたい。
本明細書中で用いる「単離された核酸分子」は、該単離ポリヌクレオチドが天然で見出
される場合のポリヌクレオチドの全部または一部を伴っておらず、あるいはそれが天然で
連結していないポリヌクレオチドに連結している、ゲノム、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡまたは合
成由来のＤＮＡまたはＲＮＡあるいはそれらの何らかの組合せを意味する。本開示の目的
においては、特定のヌクレオチド配列を「含む核酸分子」は無傷染色体を含まない、と理
解されるべきである。特定されている核酸配列を「含む」単離された核酸分子は、特定さ
れている配列に加えて、１０個まで又は更には２０個まで又はそれ以上の他のタンパク質
またはその一部もしくは断片のコード配列を含むことが可能であり、あるいは、挙げられ
ている核酸配列のコード領域の発現を制御する機能的に連結された調節配列を含むことが
可能であり、および／あるいは、ベクター配列を含むことが可能である。
本明細書中で用いる「治療する」または「治療」は、本発明の抗体または抗原結合性フ
ラグメントのいずれかを含有する組成物のような治療剤を、該治療剤が治療活性または予
防活性を示す疾患の症状の１以上を有する又は該疾患を有する疑いのある対象または患者
に内的または外的に投与することを意味する。典型的には、該治療剤は、いずれかの臨床
的に測定可能な度合によるそのような症状の退縮の誘導またはそのような症状の進行の抑
制により、治療対象または集団における１以上の疾患症状を軽減するのに有効な量で投与
される。いずれかの特定の疾患症状を軽減するのに有効な治療剤の量は患者の病態、年齢
および体重、ならびに対象において所望の応答を惹起する薬物の能力のような要因によっ
て変動しうる。疾患症状が軽減したかどうかは、その症状の重症度または進行状態を評価
するために医師または他の熟練した医療提供者によって典型的に用いられるいずれかの臨
床的尺度により評価されうる。この語は更に、障害に関連した症状の発生の遅延および／
またはそのような障害の症状の重症度の軽減を含む。この語は更に、既存の無制御の又は
望ましくない症状の改善、追加的な症状の予防、およびそのような症状の根本原因の改善
または予防を含む。したがって、この語は、障害、疾患もしくは症状を有するヒトまたは
動物対象、またはそのような障害、疾患もしくは症状を発生する可能性を有するヒトまた
は動物対象に、有益な結果がもたらされていることを示す。
本明細書中で用いる「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用される場合には、治
療的処置および診断的適用を意味する。「治療」は、それがヒトまたは獣医対象に適用さ
れる場合には、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントの、ヒトまたは動物対象との
接触を含む。
本明細書中で用いる「治療的有効量」は、治療されている対象において所望の効果を達
成するのに十分な特定の物質の量を意味する。例えば、これは、ａＰＴＴアッセイにおけ
る判定で少なくとも１９２～２８８時間にわたって凝固を抑制するのに必要な量、または
ＦＸＩの活性化を抑制するのに必要な量でありうる。対象に投与される場合、所望のイン
ビトロ効果を達成することが示されている目標組織濃度を達成する投与量が一般に用いら
れる。
本明細書で用いる「血栓症」は、循環系を通る血液の流れを妨げる、血管内の血餅（「
血栓」とも称される）の形成または存在を意味する。血栓症は、通常、血液組成、血管壁
の質および／または血流の性質の異常により引き起こされる。血餅の形成は、しばしば、
血管壁の損傷（外傷または感染などによるもの）および損傷点を過ぎた位置における血流
の減速または停滞により引き起こされる。幾つかの場合には、凝固異常が血栓症を引き起
こす。
本明細書中で用いる「止血を妨げることなく」は、本明細書に開示されている抗体また
は抗体フラグメントを対象または患者に投与した後、検出可能な出血が対象または患者に
おいてほとんど又は全く認められないことを意味する。因子ＸＩを標的化する場合には、
因子ＸＩから因子ＸＩａへの変換または因子Ｘｉａによる因子ＩＸの活性化の阻害は、出
血を伴うことなく凝固および関連血栓症を抑制する。これとは対照的に、因子ＸＩの変換
または活性の阻害は凝固を抑制するが、出血をも誘発し、または出血のリスクを増加させ
る。
発明の詳細な説明
本発明は、凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメインに結合する抗凝固因子ＸＩ抗
体および抗原結合性フラグメントを提供する。これらの抗ＦＸＩ抗体および抗原結合性フ
ラグメントは因子ＸＩＩａによるＦＸＩ活性化のインヒビターであり、止血を妨げること
なく血液凝固および関連血栓症（すなわち、抗血栓性適応症）を抑制するのに有用である
。例えば、該抗ＦＸＩ抗体および抗原結合性フラグメントは、心筋梗塞、虚血性脳卒中、
肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連
血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移癌および感染症（これらに限定される
ものではない）を含む血栓閉塞性障害または疾患の治療および／または予防に有用であり
うる。該抗体および抗原結合性フラグメントは心房細動における脳卒中の予防（ＳＰＡＦ
）に特に有用である。該抗体および抗原結合性フラグメントは、脚部静脈の疾患または損
傷、何らかの理由による不動状態、骨折、特定の薬物、肥満、遺伝性障害または遺伝性素
因、血液凝固しやすくする自己免疫障害、血液凝固のリスクを増大させる薬物、例えば特
定の避妊薬、および喫煙に関連した血栓症を治療または予防するためにも使用されうる。
したがって、本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体および抗原結合性フラグメントは、
血栓閉塞性障害または疾患を治療するための療法を、そのような療法を要する患者または
対象において行うのに有用である。
ＦＸＩは、図１Ｂに示されているドメイン構造および凝固カスケードの内因性経路の必
須成分を有するホモ二量体セリンプロテアーゼである。ＦＸＩチモーゲンは因子ＸＩＩａ
により、その活性化形態であるＦＸＩａへと切断されうる。ついでＦＸＩａは因子ＩＸを
活性化し、最終的にトロンビン生成および血餅形成を誘発する。本明細書に開示される抗
ＦＸＩ抗体および抗原結合性フラグメントはＦＸＩからＦＸＩａへの変換を阻害する（図
１Ａを参照されたい）。
操作された酵母株の表面に提示された完全ヒト合成ＩｇＧ１／カッパライブラリーから
、抗ＦＸＩ抗体分子を得た。ヒトおよび非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＦＸＩにはサブナノモル
のアフィニティで結合しうるが、ヒトおよびＮＨＰ血漿カリクレイン（ＦＸＩに対して５
６％のアミノ酸同一性を示すタンパク質）または他のヒト凝固カスケードタンパク質（Ｆ
ＩＩ／／ＩＩａ、ＦＶＩＩ／ＶＩＩａ、ＦＩＸ／ＩＸａ、ＦＸ／ＸａおよびＦＸＩＩ／Ｘ
ＩＩａ）に対しては結合を示さない抗体を特定するために、該ライブラリーをＦＸＩまた
はＦＸＩａでスクリーニングした。これらの特性を有する２つの抗体、すなわち、αＦＸ
Ｉ－１３６５４ｐおよびαＦＸＩ－１３７１６ｐが特定された。これらの抗体は、ヒトカ
ッパ（κ）軽鎖とヒトＩｇＧ１（γ１）アイソタイプ重鎖とを含む完全ヒト抗体である。
該抗体は、ＦＸＩのアップル２ドメイン内に位置する配列番号３７および３８を含むエピ
トープをＦＸＩチモーゲンに結合させる。また、これらの抗体は、比較しうるアフィニテ
ィで、ＦＸＩａをＦＸＩチモーゲンに結合させる。
抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐは、それぞれ配列番号１、配列番号２および配列番号３に
示されているアミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１，２および
３と、それぞれ配列番号４、配列番号５および配列番号６に示されているアミノ酸配列を
有する軽鎖（ＬＣ）ＣＤＲ１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１３６５４ｐは、配列番
号１６に示されているアミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号１７に
おけるアミノ酸配列を含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む。αＦＸＩ－１３６５４ｐ
は、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を含むＬＣと、配列番号３１に示されてい
るアミノ酸配列を含むＨＣとを含む。
抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐは、それぞれ配列番号７、配列番号８および配列番号９に
示されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、２および３と、それぞれ配列番号１
０、配列番号１１および配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ
１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１３７１６ｐは、配列番号２０に示されているアミ
ノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２１におけるアミノ酸配列を含む
軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む。αＦＸＩ－１３７１６ｐは、配列番号２３に示され
ているアミノ酸配列を含むＬＣと、配列番号３３におけるアミノ酸配列を含むＨＣとを含
む。
特定の実施形態においては、αＦＸＩ－１３７１６ｐのＨＣ ＣＤＲ３（配列番号９）
を修飾して、ＣＤＲ３内の第１メチオニン（Ｍｅｔ）残基をロイシン残基で置換して、抗
体αＦＸＩ－１３７１６（配列番号２０の１０３位または配列番号１３の５位がＭｅｔ）
を得た。抗体αＦＸＩ－１３７１６は、それぞれ配列番号７、配列番号８および配列番号
１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ１、２および３と、それぞれ配列
番号１０、配列番号１１および配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ
ＣＤＲ１、２および３とを含む。αＦＸＩ－１３７１６は、配列番号２４に示されている
アミノ酸配列を含む重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２１におけるアミノ酸配列を
含む軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとを含む。αＦＸＩ－１３７１６は、配列番号２３に示さ
れているアミノ酸配列を含むＬＣと、配列番号３５に示されているアミノ酸配列を含むＨ
Ｃとを含む。Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ａｓｎ、ＡｓｐまたはＧｌｕでの配列番号９の５位のＭｅ
ｔの置換はａＰＴＴアッセイにおける該抗体の効力を低下させた。
本発明は、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐもしくはα
ＦＸＩ－１３７１６の６個のＣＤＲを少なくとも含む可変領域を有する抗ＦＸＩ抗体およ
び抗原結合性フラグメントまたは変異体実施形態（ここで、前記の６個のＣＤＲの１以上
は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する）を提供
し、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル
２ドメインに結合する。本発明はまた、抗血栓性適応症、例えば血栓閉塞性障害または疾
患、例えば心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細
動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移
癌および感染症を治療するための、あるいは例えば心房細動における脳卒中の予防（ＳＰ
ＡＦ）のための、該抗体の使用方法を提供する。
本発明は、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐもしくはα
ＦＸＩ－１３７１６の３個のＨＣ ＣＤＲを少なくとも含む可変領域を有する抗ＦＸＩ抗
体および抗原結合性フラグメントまたは変異体実施形態（ここで、前記の３個のＣＤＲの
１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する）
を提供し、ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のア
ップル２ドメインに結合する。本発明はまた、抗血栓性適応症、例えば血栓閉塞性障害ま
たは疾患、例えば心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、
心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群
、転移癌および感染症を治療するための、あるいは例えば心房細動における脳卒中の予防
（ＳＰＡＦ）のための、該抗体の使用方法を提供する。
特定の態様においては、該抗ＦＸＩ抗体または抗原結合性フラグメントは、抗ＦＸＩ抗
体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣ
可変ドメイン、あるいはαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸ
Ｉ－１３７１６のＨＣのアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むＨＣ可変ドメインの変
異体を少なくとも含む。
特定の態様においては、該抗ＦＸＩ抗体または抗原結合性フラグメントは、抗ＦＸＩ抗
体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＬＣ
可変ドメイン、あるいはαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸ
Ｉ－１３７１６のＬＣのアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むＬＣ可変ドメインの変
異体を少なくとも含む。
特定の態様においては、該抗ＦＸＩ抗体または抗原結合性フラグメントは、抗ＦＸＩ抗
体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣ
可変ドメイン、あるいはαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸ
Ｉ－１３７１６のＨＣのアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、６、７、８、９また
は１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むＨＣ可変ドメインの変
異体と、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６のＬＣ可変ドメイン、あるいはαＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７
１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＬＣのアミノ酸配列に対する１、２、３、４、５、
６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むＬ
Ｃ可変ドメインの変異体とを少なくとも含む。
特定の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、本明細書におい
ては、少なくとも、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸ
Ｉ－１３７１６の、６個のＣＤＲを含み、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、６個のＣＤＲ
を含み、更に、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプのもので
ある重鎖（ＨＣ）を含み、軽鎖（ＬＣ）はカッパ型またはラムダ型のものでありうる。他
の実施形態においては、該抗体は、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６
ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲを含み、あるいは、前記の６個のＣＤＲ
の１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する
、６個のＣＤＲを含み、更に、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、またはＩｇＥクラスのものであ
りうる。特定の実施形態において、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４ア
イソタイプは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加
、欠失またはそれらの組合せを含んでいてもよい。
特定の実施形態においては、該抗体または抗原結合性フラグメントは、少なくとも、抗
体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の、６
個のＣＤＲを含み、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ
酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、６個のＣＤＲを含み、更に、ＩｇＧ
４アイソタイプのものである重鎖定常ドメインを含む。ＩｇＧ４フレームワークは、エフ
ェクター機能をほとんど又は全く有さない抗体をもたらす。本発明のもう１つの態様にお
いては、該抗体は、少なくとも、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐ
またはαＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲを含み、あるいは、前記の６個のＣＤＲの
１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する、
６個のＣＤＲを含み、更に、ＩｇＧ１アイソタイプのものであるＨＣ可変ドメインに融合
したＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメインを含む。本発明のもう１つの態
様においては、該抗体は、少なくとも、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７
１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣ可変ドメインおよびＬＣ可変ドメイン、あるい
は該ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインが、独立して、１、２、３、４、５、６、７、
８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む、それらの
変異体を含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ４アイソタイプのものであるＨＣ定常ドメ
インを含みうる。本発明のもう１つの態様においては、該抗体は、少なくとも、抗体αＦ
ＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６のＨＣ可変ド
メインおよびＬＣ、あるいは該ＨＣおよび／またはＬＣ可変ドメインが、独立して、１、
２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれら
の組合せを含む、それらの変異体を含むことが可能であり、更に、ＩｇＧ４アイソタイプ
のものであるＨＣ定常ドメインを含みうる。
本発明の抗体は更に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を含む）、ポリ
クローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、バイパラトピック（ｂｉ
ｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体、完全ヒト抗体およびキメラ抗体を含むが、
これらに限定されるものではない。
一般に、ＩｇＧ１またはＩｇＧ４のような抗体の重鎖のアミノ酸配列は重鎖定常ドメイ
ンのＣ末端にリジンを有する。幾つかの場合には、抗体産物の均一性を改善するために、
Ｃ末端リジンを欠いた抗体を産生させることが可能である。本発明の抗ＦＸＩ抗体は、Ｃ
末端リジンが存在する実施形態、およびＣ末端リジンが存在しない実施形態を含む。例え
ば、ＩｇＧ１ ＨＣ定常ドメインは、配列番号４０に示されているアミノ酸配列を有する
ことが可能であり、ＩｇＧ４ ＨＣ定常ドメインは、配列番号１４に示されているアミノ
酸配列を有することが可能であり、ここで、Ｘはリジンである、または存在しない。
特定の実施形態においては、ＨＣのＮ末端アミノ酸はグルタミン残基でありうる。特定
の実施形態では、ＨＣのＮ末端アミノ酸はグルタミン酸残基でありうる。特定の態様にお
いては、Ｎ末端アミノ酸は、グルタミン酸残基となるように修飾される。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ抗原結合性フラグメントを提供する。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆａｂフラグメントを提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む抗ＦＸＩ抗体、およびＦｃ領域を含むその抗原結合性フラグメントを提供し、また
、それらの使用方法を提供する。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆａｂ’フラグメントを提供する。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆ（ａｂ’）２を提供する。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ Ｆｖフラグメントを提供する。
本発明は更に、抗ＦＸＩ抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、
２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを
少なくとも含む抗ＦＸＩ ｓｃＦｖフラグメントを提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、３個のＨＣ ＣＤＲまたは３個のＬＣ ＣＤＲ、あるいは、前記のＨＣ
またはＬＣ ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれ
らの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくとも含む抗ＦＸＩドメイン抗体を提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む抗ＦＸＩ二価抗体を提供する。
本発明は更に、ＦＸＩおよび別の関心抗原に対する結合特異性を有する二重特異性抗体
および抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使用方法を提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む第１抗体の第１重／軽鎖ペアと、第１重／軽鎖ペアにより認識されるエピトープと
は異なるＦＸＩエピトープに対する特異性を有する第２抗体の第２重／軽鎖ペアとを有す
るバイパラトピック（ｂｉｐａｒａｔｏｐｉｃ；二重パラトープ）抗体を提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐの６個のＣＤＲ、あるいは該ＣＤＲの１以
上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個の
ＣＤＲを少なくとも含む抗体の第１重／軽鎖ペアと、抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐまたは
αＦＸＩ－１３７１６の６個のＣＤＲ、あるいは該ＣＤＲの１以上が１、２または３個の
アミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくとも含む
抗体の第２重／軽鎖ペアとを有する抗ＦＸＩ抗体およびその抗原結合性フラグメントを提
供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む抗ＦＸＩジアボディを提供する。
抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の
、６個のＣＤＲ、あるいは、該ＣＤＲの１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加
、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくとも含む抗体は何らかの方法
で修飾されることが可能であり、この場合、それは、活性がモル基準で表された場合、（
親抗体と比較した場合に）そのＦＸＩ結合活性の少なくとも１０％を保有する。好ましく
は、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは親抗体としてのＦＸＩ結合アフィニテ
ィの少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％または１００％または
それ以上を保有する。また、本発明の抗体または抗原結合性フラグメントは、その生物活
性を実質的に改変しない保存的または非保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」ま
たは「機能保存変異体」と称される）を含みうると意図される。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む単離された抗ＦＸＩ抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの
使用方法を提供し、また、その単離されたポリペプチド免疫グロブリン鎖、ならびにその
ような抗体、抗原結合性フラグメントおよび単離されたポリペプチド免疫グロブリン鎖を
コードする単離されたポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含む単
離されたベクターを提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含むモノクローナル抗ＦＸＩ抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびに複数
の単離されたモノクローナル抗体を含むモノクローナル組成物を提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む抗ＦＸＩキメラ抗体、およびその使用方法を提供する。
本発明は更に、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ
－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの１以上が１、２または
３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６個のＣＤＲを少なくと
も含む抗ＦＸＩ完全ヒト抗体、およびその抗原結合性フラグメント、ならびにそれらの使
用方法を提供する。
本発明の１つの実施形態においては、完全ヒト抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラ
グメントは、完全ヒト免疫グロブリン遺伝子を有するように遺伝的に修飾されたトランス
ジェニック動物、例えばマウス（例えば、ＨＵＭＡＢマウス、例えば、米国特許第５，５
４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４
２５号、第５，６６１，０１６号、第５，７７０，４２９号、第５，７８９，６５０号、
第５，８１４，３１８号、第５，８７４，２９９号および第５，８７７，３９７号、なら
びにＨａｒｄｉｎｇら，（１９９５）Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７６４：５３６
５４６を参照されたい；またはＸＥＮＯＭＯＵＳＥ、例えば、Ｇｒｅｅｎら，１９９９
，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１１－２３を参照されたい）からの単
離産物、または抗ＦＸＩ完全ヒト抗体もしくはその抗原結合性フラグメントの免疫グロブ
リン鎖を発現するファージもしくはウイルスからの単離産物である。
幾つかの実施形態においては、種々の定常ドメインが、本発明で提供されるＣＤＲに由
来するヒト化ＶＬおよびＶＨ領域に連結されうる。例えば、本発明の抗体（またはフラグ
メント）の個々の意図される使用がエフェクター機能の改変を求めるものである場合には
、ヒトＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインが使用可能であり、あるいは改変されたエフェク
ター機能を有するハイブリッドＩｇＧ１／ＩｇＧ４が使用可能である。
ヒトＩｇＧ１抗体は長い半減期およびエフェクター機能、例えば補体活性化および抗体
依存性細胞傷害性をもたらすが、そのような活性は該抗体の全ての用途に望ましいとは限
らない可能性がある。そのような場合、例えばヒトＩｇＧ４定常ドメインが使用されうる
。本発明は、ＩｇＧ４定常ドメインおよびその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２
、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
組合せを含む）を含む抗ＦＸＩ抗体を含む。
１つの実施形態においては、該ＩｇＧ４定常ドメインはＥＵ系における２２８位および
ＫＡＢＡＴ系における２４１位に対応する位置において天然ヒトＩｇＧ４定常ドメイン（
Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔアクセッション番号Ｐ０１８６１．１）とは異なることが可能であ
り、この場合、適切な鎖内ジスルフィド結合形成を妨げうる１０６位のシステイン（Ｃｙ
ｓ１０６）および１０９位のシステイン（Ｃｙｓ１０９）（ＥＵ系におけるＣｙｓ２２６
およびＣｙｓ２２９位ならびにＫＡＢＡＴ系におけるＣｙｓ２３９およびＣｙｓ２４２位
に対応する）間の潜在的鎖間ジスルフィド結合を妨げるために、例えば、配列番号１４に
示されているＨＣ定常ドメインの１０８位の天然セリン（Ｓｅｒ１０８）がプロリン（Ｐ
ｒｏ）で置換される。Ａｎｇａｌら，Ｍｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．３０：１０５（１９９３）
を参照されたい。Ｓｃｈｕｕｒｍａｎら，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３８：１－８，（２
００１）；配列番号１４および４１も参照されたい。
他の場合においては、エフェクター機能を低減するために修飾された修飾ＩｇＧ１定常
ドメインが使用されうる。例えば、ＡＤＣＣおよびＣＤＣを著しく低減するために、Ｉｇ
Ｇ１アイソタイプは２３３～２３６位のＩｇＧ２残基ならびに３２７、３３０および３３
１位のＩｇＧ４残基の置換を含みうる（Ａｒｍｏｕｒら，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．
２９（８）：２６１３－２４（１９９９）；Ｓｈｉｅｌｄｓら，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ
．２７６（９）：６５９１－６０４（２００１）に開示されているとおり）。特定の実施
形態においては、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個の
アミノ酸置換、付加、欠失およびそれらの組合せを含む。
もう１つの実施形態においては、ＩｇＧ ＨＣは、２９７位付近のアスパラギン（Ａｓ
ｎ）残基のＮ－グリコシル化を欠くように遺伝的に修飾される。Ｎ－グリコシル化のコン
センサス配列はＡｓｎ－Ｘａａ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（ここで、ＸａａはＰｒｏ以外の任意の
アミノ酸である）であり、ＩｇＧ１においては、Ｎ－グリコシル化コンセンサス配列はＡ
ｓｎ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒである。該修飾は、ＨＣをコードする核酸分子における２９７位の
Ａｓｎのコドンを別のアミノ酸、例えばＧｌｎのコドンで置換することにより達成されう
る。あるいは、ＳｅｒのコドンをＰｒｏのコドンで置換することが可能であり、Ｔｈｒの
コドンをＳｅｒのコドン以外の任意のコドンで置換することが可能である。そのような修
飾ＩｇＧ１分子は、検出可能なエフェクター機能をほとんど又は全く有さない。あるいは
、３つ全てのコドンが修飾される。
本発明の１つの実施形態においては、抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７
１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の、６個のＣＤＲ、あるいは、前記の６個のＣＤＲの
１以上が１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有する６
個のＣＤＲを少なくとも含む抗ＦＸＩ抗体は、２個の軽鎖および２個の重鎖（定常領域を
含む）を有する完全四量体構造を含む。各軽／重鎖ペアの可変領域が抗体結合部位を形成
する。したがって、一般に、無傷抗体は２つの結合部位を有する。二重特異性抗体の場合
を除き、それらの２つの結合部位は一般に同じである。
特定の実施形態においては、本発明は以下の抗ＦＸＩ抗体を提供する：
Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号３１に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ
１ ＨＣと、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦ
ＸＩ－１３６５４ｐ（Ｋ－）／カッパ。
Ｃ末端Ｋを有し、配列番号３２に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ１ ＨＣと
、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３
６５４ｐ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号１８に示されている
アミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有
するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カ
ッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号２６に示されている
アミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有
するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－＋）／
カッパ。
Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号３３に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ
１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦ
ＸＩ－１３７１６ｐ（Ｋ－）／カッパ。
Ｃ末端Ｋを有し、配列番号３４に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ１ ＨＣと
、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３
７１６ｐ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号２２に示されている
アミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有
するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カ
ッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐを有し、Ｃ末端Ｋを有し、配列番号２７に示されているアミノ酸配
列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパ
ＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号３５に示されている
アミノ酸配列を有するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有
するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｍ１０３ＬおよびＣ末端Ｋを有し、配列番号３６に示されているアミノ酸配列
を有するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬ
Ｃとを含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号５４に示されている
アミノ酸配列を有するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有
するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを有し、配列番号５５に示されているアミノ酸配
列を有するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパ
ＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｑ１Ｅを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番号６５に示されているアミ
ノ酸配列を有するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する
カッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｑ１Ｅ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｑ１ＥおよびＣ末端Ｋを有し、配列番号６６に示されているアミノ酸配列を有
するＩｇＧ１ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するカッパＬＣと
を含むαＦＸＩ－１３７１６ Ｑ１Ｅ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番
号２５に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されて
いるアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３ＬおよびＣ末端Ｋを有し、配列番号２８に示さ
れているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸
配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ
Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番
号６７に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されて
いるアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３ＬおよびＣ末端Ｋを有し、配列番号６８に示さ
れているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸
配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ
（Ｋ＋）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌを有し、Ｃ末端Ｋを欠き（Ｋ欠失）、配列番
号６９に示されているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されて
いるアミノ酸配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ。
突然変異Ｓ２２８Ｐ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３ＬおよびＣ末端Ｋを有し、配列番号７０に示さ
れているアミノ酸配列を有するＩｇＧ４ ＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸
配列を有するカッパＬＣとを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｍ１０
３Ｌ（Ｋ＋）／カッパ。
ＦＩＸは、ＦＸＩチモーゲンの活性プロテアーゼであるＦＸＩａの内因性タンパク質基
質である。ＦＸＩａはＦＩＸをＦＩＸａへと活性化し、それにより凝固カスケードを継続
させる。αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ
－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦ
ＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体はＨＭＷキニノゲン
の存在下ではＦＸＩに結合し、ＦＸＩのＦＸＩＩａ媒介性活性化を阻害するが、ＨＭＷキ
ニノーゲンの非存在下では、抗ＦＸＩ抗体はＦＸＩからＦＸＩａへのＦＸＩＩａ媒介性活
性化を阻害しないことを、実施例５に記載されているプロトコールと同様に行ったアッセ
イは示した。実施例６に記載されているアッセイと同様のアッセイにおいて行った、ＦＩ
Ｘ全長またはＦＩＸ配列特異的ペプチド基質を使用するＦＸＩａ酵素アッセイは、αＦＸ
Ｉ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－１３６５
４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体がＦＸＩａによるＦＩＸ活性化に対
する検出可能な阻害効果をもたらさないことを示した。該抗ＦＸＩ抗体は、ＦＸＩＩａに
よるＦＸＩ活性化を妨げることにより、ＦＸＩの下流作用を機能的に中和し、ＦＸＩａ触
媒活性には影響を及ぼさないことを、該結果は示唆している。
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ
抗体を使用する、実施例４に記載されている水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）
によるエピトープマッピングは、前記ＨＣおよびＬＣ ＣＤＲを含む抗ＦＸＩ抗体が、配
列番号３８および配列番号３９を含むアップル２ドメイン上の特定のエピトープに結合す
ることを示した。
したがって、本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントはＦＸＩの
アップル２ドメインに結合し、ＦＸＩＩａによるＦＸＩ活性化を阻害するが、ＦＸＩａ触
媒活性を阻害しない。これらの抗体はトロンビンによるＦＸＩの止血活性化を無傷なまま
にすることが可能であり、したがって、最低限度の出血リスクをもたらすに過ぎない。こ
れらの抗体はまた、凝固カスケードのスイッチがオンにならない限り、標的タンパク質（
ＦＸＩａ）が存在しないＦＸＩａ活性ブロッカーから区別されうる。
医薬組成物および投与
抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントの医薬組成物または無菌組成物を製造
するためには、該抗体またはその抗原結合性フラグメントを医薬上許容される担体または
賦形剤と混合する。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ＳｃｉｅｎｃｅｓおよびＵ．Ｓ． Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏ
ｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ
Ａ（１９８４）を参照されたい。
治療用および診断用物質の製剤は、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性溶液または懸
濁液の形態で、許容される担体、賦形剤または安定剤と混合することにより製造されうる
（例えば、Ｈａｒｄｍａｎら（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ
Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒ
ｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａ
ｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，ＷｉｌｌｉａｍｓおよびＷｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓら（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓ
ａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ
Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉ
ｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎ
Ｙ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎら（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａ
ｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，
ＮＹ；ＷｅｉｎｅｒおよびＫｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘ
ｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。１つの実施形態においては、本発明の抗ＦＸＩ抗体ま
たはその抗原結合性フラグメントを１～２０ｍＭの酢酸ナトリウム溶液（ｐＨ５～６）中
で適当な濃度まで希釈し、浸透圧のためにＮａＣｌまたはスクロースを加える。安定性を
増強するために、追加的物質、例えばポリソルベート２０またはポリソルベート８０が加
えられうる。
単独で又は別の治療剤と組合せて投与される該抗体または抗原結合性フラグメント組成
物の毒性および治療効力は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に致死的である用量）および
ＥＤ５０（集団の５０％において治療的に有効である用量）を決定するための、細胞培養
または実験動物における標準的な薬学的手法により決定されうる。毒性効果と治療効果と
の用量比は治療係数（ＬＤ５０／ＥＤ５０）である。特定の態様においては、高い治療係
数を示す抗体が望ましい。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータ
は、ヒトにおける使用のための投与量の範囲の決定において使用されうる。そのような化
合物の投与量は、好ましくは、毒性をほとんど又は全く伴わないＥＤ５０を含む循環濃度
の範囲内である。該投与量は、使用される剤形および投与経路に応じて、この範囲内で変
動しうる。
もう１つの実施形態においては、本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラ
グメントを含む組成物を、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ’ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ２
００３（Ｔｈｏｍｓｏｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ；５７ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２
年１１月１日））に従い、対象に投与する。
投与方法は様々でありうる。適切な投与経路は、好ましくは、非経口または皮下である
。他の投与経路には、経口、経粘膜、直接心室内、静脈内、腹腔内、吸入、吹送または動
脈内が含まれうる。
特定の実施形態においては、該抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、侵
襲的経路、例えば注射により投与されうる（前記を参照されたい）。本発明の更に詳細な
実施形態においては、抗ＦＸＩ抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬
組成物は静脈内、皮下、動脈内、または吸入、エアゾール運搬により投与されうる。非侵
襲性経路（例えば、経口的、例えば、丸剤、カプセル剤または錠剤）による投与も本発明
の範囲内である。
組成物は、当技術分野で公知の医療装置で投与されうる。例えば、本発明の医薬組成物
は、例えば予め充填されたシリンジまたは自動注入装置を含む、皮下針を使用する注射に
より投与されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は、例えば米国特許第６，６２０，１３５号、第
６，０９６，００２号、第５，３９９，１６３号、第５，３８３，８５１号、第５，３１
２，３３５号、第５，０６４，４１３号、第４，９４１，８８０号、第４，７９０，８２
４号または第４，５９６，５５６号に開示されている装置のような無針（ｎｅｅｄｌｅｌ
ｅｓｓ）皮下注射装置によっても投与されうる。
本明細書に開示されている医薬組成物は注入によっても投与されうる。医薬組成物を投
与するための良く知られたインプラントおよびモジュールの例には、米国特許第４，４８
７，６０３号（これは、制御された速度で医薬を分注するための移植可能な微量注入ポン
プを開示している）、米国特許第４，４４７，２３３号（これは、正確な注入速度で医薬
を運搬するための医薬注入ポンプを開示している）、米国特許第４，４４７，２２４号（
これは、連続的薬物運搬のための可変流量移植可能注入装置を開示している）、米国特許
第４，４３９，１９６号（これは、マルチチャンバ・コンパートメントを有する浸透性薬
物運搬系を開示している）に開示されているものが含まれる。多数の他のそのようなイン
プラント、運搬系およびモジュールは当業者によく知られている。
投与レジメンは、該治療用抗体の血清または組織代謝回転速度、症状の程度、治療用抗
体の免疫原性、および生物学的マトリックスにおける標的細胞の接近可能性を含む幾つか
の要因に左右される。好ましくは、投与レジメンは、望ましくない副作用を最小にすると
同時に標的罹患状態の改善をもたらす十分な治療用抗体を運搬する。したがって、運搬さ
れる生物学的物質の量は、部分的には、個々の治療用抗体および治療される状態の重症度
に左右される。治療量抗体の適当な用量を選択する際の指針が利用可能である（例えば、
Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓ
ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ
（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ
ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ
；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ
Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍ
ａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔら，２００３，Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１－６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍら，１９９９，Ｎｅ
ｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６－１９７３；Ｓｌａｍｏｎら，２００１，
Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３－７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ
ら，２０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３－６１９；Ｇｈｏｓｈら
，２００３，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４－３２；Ｌｉｐｓｋｙら，２
０００，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４－１６０２を参照されたい）
。
適当な用量の決定は、例えば、治療に影響を及ぼすことが当技術分野で知られている又
は疑われているパラメータまたは因子を用いて、臨床家によりなされる。一般に、用量は
、最適用量より幾分少ない量から開始し、ついで、負の副作用と比較して所望または最適
効果が得られるまで、少しずつ増量する。重要な診断尺度には、例えば炎症の症状の尺度
、または産生される炎症性サイトカインのレベルが含まれる。一般に、使用される抗体ま
たは抗原結合性フラグメントを、治療のために標的化される動物と同じ種から誘導し、そ
れにより該薬剤に対する免疫応答を最小にすることが望ましい。例えば、ヒト対象の場合
には、キメラ抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体が望ましいかもしれない。
本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体またはその抗原結合性フラグメントは、毎週投
与される用量によって投与されうる。投与は皮下に行われうる。毎週の全用量は、一般に
は、抗体または抗原結合性フラグメント約０．３ｍｇ／ｋｇ（すなわち、対象の体重１ｋ
ｇ当たり）～３．０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは、約１．０～２．０ｍｇ／ｋｇ、または
１．０ｍｇ／ｋｇ～３．０ｍｇ／ｋｇである（例えば、Ｙａｎｇら（２００３）Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７－４３４；Ｈｅｒｏｌｄら（２００２）Ｎｅｗ
Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２－１６９８；Ｌｉｕら（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕ
ｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１－４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ
ら（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３－
１４４を参照されたい）。
キット
更に、本明細書に記載されているもう１つの治療剤（これらに限定されるものではない
）を含む１以上の追加的成分と共に、本明細書に記載されている抗ＦＸＩ抗体または抗原
結合性フラグメント（これらに限定されるものではない）を含む１以上の成分を含むキッ
トを提供する。該抗体もしくはフラグメントおよび／または該治療剤は、純粋な組成物と
して、または医薬組成物において医薬上許容される担体と組合せて製剤化されうる。
１つの実施形態においては、該キットは、抗ＦＸＩ抗体もしくはその抗原結合性フラグ
メントまたはその医薬組成物を１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラスチックバイ
アル）内に、そしてもう１つの治療剤をもう１つの容器（例えば、無菌ガラスまたはプラ
スチックバイアル）内に含む。
もう１つの実施形態においては、該キットは、単一の共通の容器内に、所望により医薬
組成物において、一緒に製剤化される１以上の治療剤と組合された、本発明の抗ＦＸＩ抗
体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはその医薬組成物を含む、本発明の組合せを
含む。
該キットが対象への非経口投与のための医薬組成物を含む場合、該キットは、そのよう
な投与を行うための装置を含みうる。例えば、該キットは前記の１以上の皮下針または他
の注射装置を含みうる。したがって、本発明は、注射装置と該抗ＦＸＩ抗体またはその抗
原結合性フラグメントとを含むキットを含み、例えば、ここで、該注射装置は該抗体また
はフラグメントを含み、あるいは該抗体またはフラグメントは別個の容器内に存在する。
該キットは、該キットにおける医薬組成物および剤形に関する情報を含む添付文書を含
みうる。一般に、そのような情報は、封入されている医薬組成物および剤形を有効かつ安
全に使用することにおいて患者および医師を補助する。例えば、本発明の組合せに関する
以下の情報が添付文書（インサート）において供給されうる：薬物動態、薬力学、臨床試
験、有効性パラメータ、適応症および用法、禁忌、警告、予防策、有害反応、過剰投薬、
適切な投与量および投与、供給方法、適切な保存条件、参考資料、製造業者／流通業者情
報ならびに特許情報。
抗体およびその抗原結合性フラグメントの製造方法
本明細書に開示されている抗ＦＸＩ抗体およびその抗原結合性フラグメントは組換え法
によっても製造されうる。この実施形態においては、該抗体および抗原結合性フラグメン
ト分子をコードする核酸をベクター内に挿入し、組換え宿主細胞内で発現させることが可
能である。当技術分野で公知である組換え抗体および抗原結合性フラグメントを製造する
ための幾つかの方法が存在する。
本明細書に開示されている抗体または抗原結合性フラグメントの発現のための宿主とし
て利用可能な哺乳類細胞系は当技術分野でよく知られており、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐ
ｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手可能な多数の不死化細
胞系を包含する。これらは、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｎ
ＳＯ、ＳＰ２細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、サル腎細胞（Ｃ
ＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、ヒト
胎児腎２９３（ＨＥＫ－２９３）細胞および多数の他の細胞系を包含する。特に好ましい
細胞系は、どの細胞系が高い発現レベルを有するのかを決定することにより選択される。
使用されうる他の細胞系としては、昆虫細胞系、例えばＳｆ９細胞、両生類細胞、細菌細
胞、植物細胞、糸状真菌細胞［例えば、トリコデルマ・レーゼイ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍ
ａ ｒｅｅｓｅｉ）］および酵母細胞［例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃ
ｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはピチア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ
ｐａｓｔｏｒｉｓ）］が挙げられる。
重鎖またはその抗原結合性部分もしくはフラグメント、軽鎖および／またはその抗原結
合性フラグメントをコードする核酸分子を含む組換え発現ベクターを宿主細胞内に導入す
る場合、該宿主細胞における該抗体または抗原結合性フラグメントの発現、またはより好
ましくは、該宿主細胞が培養される培地内への分泌を可能にするのに十分な条件下および
時間にわたって、該宿主細胞を培養することにより、該抗体を製造する。該抗体およびそ
の抗原結合性フラグメントを培地から回収し、更に精製または加工して、本発明の抗体を
得ることが可能である。
特定の態様においては、核酸分子を含む発現ベクターで宿主細胞をトランスフェクトす
る。この場合、ＨＣおよびＬＣは融合タンパク質として発現され、該融合タンパク質にお
いては、ＨＣおよびＬＣのＮ末端は、分泌経路を介した該抗体の輸送を容易にするリーダ
ー配列に融合している。使用されうるリーダー配列の例には、ＭＳＶＰＴＱＶＬＧＬＬＬ
ＬＷＬＴＤＡＲＣ（配列番号５６）、ＭＥＷＳＷＶＦＬＦＦＬＳＶＴＴＧＶＨＳ（配列番
号５７）またはＭＥＬＧＬＣＷＶＦＬＶＡＩＬＥＧＶＱＣ（配列番号５８）が含まれる。
例示的な抗体であるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッ
パ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４
（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＨＣは、それぞれ、配列番号４２
、４７または５２に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされう
る。
例示的な抗体であるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッ
パ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＬＣは、それぞれ、配列
番号４４または４９に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされ
うる。
本発明は更に、配列番号４２、４７または５２のヌクレオチド配列を有する核酸分子を
含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。もう１つの実施形態においては、本
発明は、配列番号４２のヌクレオチド配列を有する第１核酸分子と、配列番号４４のヌク
レオチド配列を有する第２核酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供す
る。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号４７または５２のヌクレオチド
配列を有する第１核酸分子と、配列番号４９のヌクレオチド配列を有する第２核酸分子と
を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＨＣをコードする核酸分子と
、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、１３７１６ｐ－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ｖ／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ
１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＬＣをコードする核酸分子とを含むプラスミドまた
はウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＨＣをコードする核酸分子を
含むプラスミドまたはウイルスベクター、およびαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ
２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ
、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ
のＬＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＨＣをコードする核酸分子と
、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、１３７１６ｐ－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８
Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパのＬＣをコードする核酸分子とを含む１以上の
プラスミドまたはウイルスベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態において
は、宿主細胞はＣＨＯまたはＨＥＫ－２９３宿主細胞である。
例示的な抗体であるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッ
パ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４
（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＨＣは、それぞれ、配列番号４３
、４８または５３に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされう
る。
例示的な抗体であるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッ
パ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＬＣは、それぞれ、配列
番号４４または４９に示されているヌクレオチド配列を有する核酸分子によりコードされ
うる。
本発明は更に、配列番号４３、４８または５３のヌクレオチド配列を有する核酸分子を
含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。もう１つの実施形態においては、本
発明は、配列番号４３のヌクレオチド配列を有する第１核酸分子と、配列番号４４のヌク
レオチド配列を有する第２核酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供す
る。もう１つの実施形態においては、本発明は、配列番号４８または５３のヌクレオチド
配列を有する第１核酸分子と、配列番号４９のヌクレオチド配列を有する第２核酸分子と
を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＨＣをコードする核酸分子と
、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、１３７１６ｐ－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）ｖ／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ
１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＬＣをコードする核酸分子とを含むプラスミドまた
はウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＨＣをコードする核酸分子を
含むプラスミドまたはウイルスベクター、およびαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ
２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ
、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパ
のＬＣをコードする核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
本発明は更に、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、
１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＨＣをコードする核酸分子と
、αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、１３７１６ｐ－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ＋）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８
Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ＋）／カッパのＬＣをコードする核酸分子とを含む１以上の
プラスミドまたはウイルスベクターを含む宿主細胞を提供する。特定の実施形態において
は、宿主細胞はＣＨＯまたはＨＥＫ＋２９３宿主細胞である。
特定の実施形態においては、該抗体は、配列番号４５、４６、５０、５１、５４または
５５に記載されているヌクレオチド配列によりコードされる重鎖を含みうる。特定の実施
形態においては、配列番号４５、４６、５０、５１、５４または５５に記載されているヌ
クレオチド配列を含む核酸分子を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。も
う１つの実施形態においては、配列番号４５または４６に記載されているヌクレオチド配
列を含む第１核酸分子と、配列番号４４に記載されているヌクレオチド配列を含む第２核
酸分子とを含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。もう１つの実施形態にお
いては、配列番号５０、５１、５４または５５に記載されているヌクレオチド配列を含む
第１核酸分子と、配列番号４９に記載されているヌクレオチド配列を含む第２核酸分子と
を含むプラスミドまたはウイルスベクターを提供する。
抗体または抗原結合性フラグメントは、標準的なタンパク質精製方法を用いて培地から
回収されうる。更に、生産細胞系からの本発明の抗体（またはそれからの他の部分）の発
現は、幾つかの公知技術を用いて増強されうる。例えば、グルタミンシンテターゼ遺伝子
発現系（ＧＳ系）は、一定条件下で発現を増強するための一般的アプローチである。
一般に、個々の細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質
は、該細胞系またはトランスジェニック動物において産生される糖タンパク質に特徴的な
グリコシル化パターンを有する（例えば、Ｃｒｏｓｅｔら，Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．
１６１：３３６－３４８（２０１２）を参照されたい）。したがって、抗体または抗原結
合性フラグメントの個々のグリコシル化パターンは、該抗体または抗原結合性フラグメン
トを製造するために使用される個々の細胞系またはトランスジェニック動物に左右される
。しかし、本発明で提供される核酸分子によりコードされる、または本発明で提供される
アミノ酸配列を含む全ての抗体および抗原結合性フラグメントは、該抗体または抗原結合
性フラグメントが有しうるグリコシル化パターンには無関係に、本発明を構成する。
以下の実施例は本発明の更なる理解を促すことを意図したものである。
一般的方法
分子生物学における標準的な方法は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎ
ｉａｔｉｓ（１９８２ ＆ １９８９ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１ ３ｒｄ Ｅ
ｄｉｔｉｏｎ）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ
，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＳａｍｂｒｏｏｋおよびＲｕｓｓｅｌ
ｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，３ｒｄｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈ
ａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７
，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．に記載されている。標準
的な方法は、Ａｕｓｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ＶｏＩｓ．１－４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎ
ｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは、細菌細胞
におけるクローニングおよびＤＮＡ突然変異誘発（Ｖｏｌ．１）、哺乳類細胞および酵母
におけるクローニング（Ｖｏｌ．２）、複合糖質およびタンパク質発現（Ｖｏｌ．３）、
ならびにバイオインフォマティクス（Ｖｏｌ．４）を記載している。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離および結晶化を含むタンパク質精
製のための方法が記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒ
ｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳
後修飾、融合タンパク質の製造、タンパク質のグリコシル化が記載されている（例えば、
Ｃｏｌｉｇａｎら（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅ
ｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ
．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏ
ｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ
ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５－１６．２２．１７；
Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ；ｐｐ．４５－８９；Ａ
ｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔ
ｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，Ｎ．Ｊ．，ｐｐ．３８４－３９１を参照されたい）。ポ
リクローナルおよびモノクローナル抗体の製造、精製およびフラグメント化が記載されて
いる（Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄ
ｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ，前掲）。
リガンド／受容体相互作用を特徴づけるための標準的な技術が利用可能である（例えば、
Ｃｏｌｉｇａｎら（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照され
たい）。
モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体およびヒト化抗体は製造可能である（例えば
、ＳｈｅｐｅｒｄおよびＤｅａｎ（編）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｋｏｎｔ
ｅｒｍａｎｎおよびＤｕｂｅｌ（編）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒ
ｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；ＨａｒｌｏｗおよびＬａ
ｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃ
ｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９－２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒら（２
０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏ
ｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇら（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７
３７１－２７３７８；Ｂａｃａら（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６
７８－１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７－８８
３；ＦｏｏｔｅおよびＷｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７
－４９９；米国特許第６，３２９，５１１号を参照されたい）。
ヒト化に代わる手段は、ファージ上で提示されるヒト抗体ライブラリー、またはトラン
スジェニックマウスにおけるヒト抗体ライブラリーを使用することである（Ｖａｕｇｈａ
ｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９－３１４；Ｂａｒ
ｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７－８３９；Ｍｅｎｄｅ
ｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６－１５６；Ｈｏｏｇｅ
ｎｂｏｏｍおよびＣｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１
－３７７；Ｂａｒｂａｓら（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ：Ａ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｋａｙら
（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，
Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｄｅ Ｂｒｕｉｎら（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌ．１７：３９７－３９９）。
抗体は例えば小薬物分子、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコ
ンジュゲート化されうる。抗体は治療、診断、キットまたは他の目的に有用であり、例え
ば色素、放射性同位体、酵素または金属、例えばコロイド金に結合した抗体を包含する（
例えば、Ｌｅ Ｄｏｕｓｓａｌら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９－１
７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１－３８
９８；ＨｓｉｎｇおよびＢｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０
４－２８１１；Ｅｖｅｒｔｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３－８８
９を参照されたい）。
蛍光標識細胞分取検出系（ＦＡＣＳ）を含むフローサイトメトリーのための方法が利用
可能である（例えば、Ｏｗｅｎｓら（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉ
ｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ
，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２０
０１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，２ｎｄ ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ－Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂ
ｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏ
ｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照さ
れたい）。例えば診断試薬としての使用のための、核酸プライマーおよびプローブを含む
核酸、ポリペプチドおよび抗体を修飾するのに適した蛍光試薬が利用可能である（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐ
ｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）
Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
免疫系の標準的な組織学的方法が記載されている（例えば、Ｍｕｌｌｅｒ－Ｈａｒｍｅ
ｌｉｎｋ（編）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ：Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ
ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，
ＮＹ；Ｈｉａｔｔら（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，
Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ
；Ｌｏｕｉｓら（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔ
ｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照されたい）。
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、タンパク質フォールディング、機能的ドメイ
ン、グリコシル化部位および配列アライメントを決定するためのソフトウェアパッケージ
およびデータベースが利用可能である（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ
（登録商標）Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣ
Ｇ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉ
ｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃ
ｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ）；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍ
ａｔｉｃｓ １６：７４１－７４２；Ｍｅｎｎｅら（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔ
ｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１－７４２；Ｗｒｅｎら（２
００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７
７－１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：
１７－２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．
１４：４６８３－４６９０を参照されたい）。
図１Ａおよび図１Ｂは、凝固カスケード、ＦＸＩの構造、および４つ新経口抗凝固剤（ＮＯＡＣ）がそれらの阻害効果をもたらす部位を示す。図１Ａは、凝固カスケード（内因性経路および外因性経路から構成されるもの）におけるＦＸＩを示す図である。ＦＸＩ結合抗体（例えば、本明細書に開示されているもの）は、ＦＸＩＩａによるＦＸＩ活性化を遮断することにより機能的中和をもたらすことが可能であり、したがって、ＦＩＸからＦＩＸａへの後続の活性化の低減をもたらしうる。ＦＸａまたはトロンビンのいずれかを標的とする４つのＮＯＡＣ（リバロキサバン、アピキサバン、エドキサバン、ダビガトラン）が示されている。図１ＢはＦＸＩのドメイン構造を示す。ＦＸＩは、同一の８０ｋＤａサブユニットから構成される二量体であり、Ｎ末端から始まる各サブユニットは４つのアップルドメイン（１、２、３および４）および触媒ドメイン（ＣＡＴ）からなる。本明細書に開示されている抗体および抗原結合性フラグメントはアップル２ドメインに結合する。 図２はＦＸＩの構造を示し、αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパまたは１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパにより重水素化から保護されたドメインの部分が黒色に着色されている。重水素化の差異を示さないアップル２ドメインにおけるペプチドは薄灰色で示されている。データが入手できなかったペプチドは濃灰色で着色されている。 図３Ａは、ヒト血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）の活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイを示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている（ｙ軸はａＰＴＴ（増加率）であり、ｘ軸はＬｏｇ［Ｍ］抗体である）。図３Ｂは、ヒト血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）の、ａＰＴＴアッセイから決定された凝固時間を示す（ｙ軸はａＰＴＴ（秒）であり、ｘ軸はＬｏｇ［Ｍ］抗体である；ａＰＴＴ（秒）は凝固時間（秒）としても表されうる）。 図４Ａは、カニクイザル血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）のａＰＴＴアッセイを示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている（ｙ軸はａＰＴＴ（増加率）であり、ｘ軸はＬｏｇ［Ｍ］抗体である）。図４Ｂは、カニクイザル血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）の、ａＰＴＴアッセイから決定された凝固時間を示す（ｙ軸はａＰＴＴ（秒）であり、ｘ軸はＬｏｇ［Ｍ］抗体である；ａＰＴＴ（秒）は凝固時間（秒）としても表されうる）。 図５Ａは、アカゲザル血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）の活性化ａＰＴＴアッセイを示し、これはベースラインに対する増加率（％）として表されている。図５Ｂは、アカゲザル血漿におけるαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（▲）、α１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ（●）、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（○）の、ａＰＴＴアッセイから決定された凝固時間を示す（ｙ軸はａＰＴＴ（秒）であり、ｘ軸はＬｏｇ［Ｍ］抗体である；ａＰＴＴ（秒）は凝固時間（秒）としても表されうる）。 図６は、αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパまたはαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパにより結合されたＦＸＩ残基１３１～１６５の重水素標識差ヒートマップを示す。 図７は、配列番号１６に示されているアミノ酸を有するαＦＸＩ－１３６５４ｐ重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号１７に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとのアミノ酸配列を示す。可変領域のＣＤＲおよびそれぞれのＫＡＢＡＴ番号付けが示されている。 図８は、配列番号５９に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されており、重鎖定常ドメイン内のＳ２２８Ｐにおけるプロリン残基が下線付き太字で示されている。 図９は、配列番号２０に示されているアミノ酸を有するαＦＸＩ－１３７１６ｐ重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとのアミノ酸配列を示す。可変領域のＣＤＲおよびそれぞれのＫＡＢＡＴ番号付けが示されている。 図１０は、配列番号６０に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されており、重鎖定常ドメイン内のＳ２２８Ｐにおけるプロリン残基が下線付き太字で示されている。 図１１は、配列番号２４に示されているアミノ酸を有するαＦＸＩ－１３７１６重鎖（ＨＣ）可変ドメインと、配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）可変ドメインとのアミノ酸配列を示す。可変領域のＣＤＲおよびそれぞれのＫＡＢＡＴ番号付けが示されている。 図１２は、配列番号６１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されており、重鎖定常ドメイン内のＳ２２８Ｐにおけるプロリン残基が下線付き太字で示されている。 図１３は、配列番号６２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ１／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されている。 図１４は、配列番号６３に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ１／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されている。 図１５は、配列番号６４に示されているアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖とを含むαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４ Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ／カッパのアミノ酸配列を示す。可変ドメインがイタリック体で示されている。 図１６は、ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩならびに他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質へのαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパの結合の動力学を示すＢＩＡｃｏｒｅセンサグラムを示す。 図１７は、ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩおよび他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質へのαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの結合の動力学を示すＢＩＡｃｏｒｅセンサグラムを示す。 図１８はカニクイザルＡＶシャント試験法の概要図を示す。大腿動脈および静脈のカテーテルが予め取り付けられた麻酔されたサルにビヒクルまたはαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇ）を静脈内ボーラスにより投与した（試験物質投与）。本明細書に記載されているとおりにＡＶシャントを挿入した（ＡＶシャントの挿入）。ＡＶシャントを経由して血液を４０分間流した。チューブの内側に吊るされた絹糸と血液との接触は血餅を形成させた。本明細書に記載されているとおりに血餅を秤量した。αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ、ａＰＴＴおよびＰＴ（星印）の循環レベルを測定するために、血液サンプルを得た。 図１９Ａ～ＤはカニクイザルＡＶシャントモデルにおけるＡＶシャント血餅形成、ａＰＴＴおよびプロトロンビン時間（ＰＴ）に対するαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの効果を示す。図１９Ａは、同じ動物において２回の連続的ＡＶシャントの後で測定された血餅重量（ｍｇ）を示す。第１シャント（シャント＃１）中に動物にビヒクルを投与し、ついで、第２シャント（シャント＃２）中に、示されているとおりに、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ）／カッパ（
Figure 2022046656000003
の投与量）を投与した。図１９Ｂは血餅重量の抑制率（％）を示す。図１９Ｃは、αＦＸ
Ｉ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの血漿中
濃度の増加に伴うａＰＴＴの変化率（％）を示す。図１９Ｄは、αＦＸＩ－１３７１６－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの濃度の増加に伴うＰＴの
変化率（％）を示す。
図２０はカニクイザルのテンプレート出血時間法の概略図を示す。 図２１Ａ～Ｆは、カニクイザルにおいて測定されたテンプレート出血時間（ＢＴ）（秒）に対するαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの効果を示す。テンプレート出血時間は、頬粘膜（図２１Ａ、図２１Ｄ）、指肉趾（図２１Ｂ、図２１Ｅ）および遠位尾部（図２１Ｃ、図２１Ｆ）において測定した。片側対応スチューデントｔ検定を用いて、研究セッション１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパに関して、絶対出血時間（図２１Ａ～Ｃ）および出血時間の変化率（％）（図２１Ｄ～Ｆ）を比較することにより、出血時間に対する処理効果（αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ対ビヒクル）を評価した。これらの図において、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパはαＦＸＩ－１３７１６で示されている。 図２２はアカゲザルにおけるαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパＩＶ投与の後の濃度－時間プロファイルを示す。アカゲザルにおけるαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの血漿濃度－時間プロファイルが示されている。各投与量に関する個々の動物からのデータ点が示されている：
Figure 2022046656000004
は、それぞれ、各投与量に関する群平均を表す。各投与群には４頭の動物がいた。ｈｒ＝
時間；ｙ軸 αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－
）／カッパ薬物μｇ／ｍＬ。
図２３はアカゲザルにおけるａＰＴＴ－時間プロファイルを示す。αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパに関するａＰＴＴ－時間プロファイルは各用量群に関して別々に示されている。各投与群には４頭の動物がいた（ｙ軸はａＰＴＴ（秒）であり、Ｘ軸は時間（時間）である）。線は群平均を表す：
Figure 2022046656000005
各時点の個々の動物ａＰＴＴ時間プロファイルは以下のとおりに示されている：
Figure 2022046656000006
実施例１
ヒトおよび非ヒト霊長類（ＮＨＰ）ＦＸＩおよびＦＸＩａに対する抗ＦＸＩ抗体の結合
動力学、生物活性および遮断機序
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７
１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－１
３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパとヒトＦＸＩチモーゲンとの間の
タンパク質－タンパク質相互作用の結合動力学およびアフィニティを、ＳＰＲ（表面プラ
ズモン共鳴）に基づく光学バイオセンサーであるＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－
Ｒａｄ）を使用して測定した。
簡潔に説明すると、ＧＬＣ低密度センサーチップを、０．５％ ドデシル硫酸ナトリウ
ム、５０ｍＭ 水酸化ナトリウムおよび１００ｍＭ 塩酸で、３０μＬ／秒の流速で６０
秒間、全ての垂直および水平流路にわたって洗浄する。ついで６つ全ての垂直流路（Ｌ１
～Ｌ６）のアルギナートチップ表面を１×ＥＤＣ／ｓＮＨＳで３０μＬ／秒の流速で１５
０秒間活性化する。ついで、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で１．２５μｇ
／ｍＬに希釈されたマウスＦｃ指向性抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（捕捉抗体）を６
つ全ての垂直流路にわたって２５μＬ／秒の流速で３００秒間注入して、内因性リジンへ
のアミンカップリングにより、流路当たり約３００応答単位（ＲＵ）の捕捉抗体を該活性
化チップ表面に結合させる。ついで１Ｍ エタノールアミンＨＣｌを６つ全ての垂直流路
にわたって注入して、残りの反応性表面アミンを中和する。ついで約８０ＲＵの飽和捕捉
レベルを達成するために、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中の５μｇ／ｍＬの
濃度で、捕捉抗体（Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５またはＬ６）でコーティングされた別個の垂
直流路内に、該抗ＦＸＩ抗体をそれぞれ、２５μＬ／分で６０秒間注入する。垂直流路Ｌ
１には１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）（バッファーのみ）を基準対照として注
入する。抗ＦＸＩ抗体の捕捉の後、ランニングバッファー（１×ＨＢＳ－Ｎ、５ｍＭ Ｃ
ａＣｌ２、０．００５％ Ｐ２０、ｐＨ７．４）を全ての水平流路（Ａ１～Ａ６）に５分
間注入し、２５μＬ／分で２０分間解離させて、チップ表面から非特異的結合抗ＦＸＩ抗
体を除去させる。ついで、捕捉抗ＦＸＩ抗体に対するヒトＦＸＩのオン・レート（ｏｎ－
ｒａｔｅ）（ｋａ）を測定するために、６点滴定のヒトＦＸＩチモーゲン（ランニングバ
ッファー中で希釈された０、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０ｎＭ）を６つ全
ての垂直流路にわたって水平に８分間注入する。ついで結合チモーゲンをランニングバッ
ファー中で２５μＬ／分で６０分間解離させて、オフ・レート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋ
ｄ）を測定する。結合動力学およびアフィニティ（ＫＤ）は、装置に特有のソフトウェア
（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使用して決定されうる。
抗ＦＸＩヒトαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、α
ＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよ
びαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体と非ヒト霊長
類（ＮＨＰ）ＦＸＩチモーゲン（カニクイザルおよびアカゲザル）との間のタンパク質－
タンパク質相互作用の結合動力学およびアフィニティを、ＳＰＲ（表面プラズモン共鳴）
に基づく光学バイオセンサーであるＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を使
用して測定することが可能である。ＧＬＣ低密度センサーチップを、０．５％ ドデシル
硫酸ナトリウム、５０ｍＭ 水酸化ナトリウムおよび１００ｍＭ 塩酸で、３０μＬ／秒
の流速で６０秒間、全ての垂直および水平流路にわたって洗浄する。ついで６つ全ての垂
直流路（Ｌ１～Ｌ６）のアルギナートチップ表面を１×ＥＤＣ／ｓＮＨＳで３０μＬ／秒
の流速で１５０秒間活性化する。ついで、１０ｍＭ 酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で
３０μｇ／ｍＬに希釈されたマウスＦｃ指向性抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（捕捉抗
体）を６つ全ての垂直流路にわたって２５μＬ／秒の流速で１５０秒間注入して、内因性
リジンへのアミンカップリングにより、該活性化チップ表面への、流路当たり約４５００
応答単位（ＲＵ）の捕捉抗体の飽和結合を達成させる。ついで１Ｍ エタノールアミンＨ
Ｃｌを６つ全ての垂直流路にわたって注入して、残りの反応性表面アミンを中和する。つ
いで約４０ＲＵの捕捉レベルを達成するために、ランニングバッファー（１×ＨＢＳ－Ｎ
、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．００５％ Ｐ２０、ｐＨ７．４）中の０．４１５μｇ／ｍＬ
の濃度で、捕捉抗体（Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４、Ｌ５またはＬ６）でコーティングされた別個の
垂直流路内に、抗ＦＸＩ抗体をそれぞれ、２５μＬ／分で６０秒間注入する。垂直流路Ｌ
１にはランニングバッファーのみを基準対照として注入する。抗ＦＸＩ抗体の捕捉の後、
ランニングバッファーを全ての水平流路（Ａ１～Ａ６）に５分間注入し、２５μＬ／分で
２０分間解離させて、チップ表面から非特異的結合抗ＦＸＩ抗体を除去させる。ついで、
捕捉抗ＦＸＩ抗体に対するＮＨＰ ＦＸＩのオン・レート（ｏｎ－ｒａｔｅ）（ｋａ）を
測定するために、６点滴定のヒトＦＸＩチモーゲン（ランニングバッファー中で希釈され
た０、０．２５、０．５、１．０、２．０、４．０ｎＭ）を６つ全ての垂直流路にわたっ
て水平に８分間注入する。ついで結合チモーゲンをランニングバッファー中で２５μＬ／
分で６０分間解離させて、オフ・レート（ｏｆｆ－ｒａｔｅ）（ｋｄ）を測定する。結合
動力学およびアフィニティ（ＫＤ）は、装置に特有のソフトウェア（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）を
使用して決定されうる。
前記と実質的に同じ方法で測定された、ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩお
よびＦＸＩａへのαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパお
よびαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパの結合の動力学
を、表１に示す。ラングミュア１サイトモデル（Ｌａｎｇｍｕｉｒ １－ｓｉｔｅ ｍｏ
ｄｅｌ）を使用して該データをフィットさせた（解離定数（ＫＤ）決定のための平衡結合
ならびにｋｏｎおよびｋｏｆｆに関して）。両方の抗体はヒトＦＸＩ／ＸＩａに１桁のｐ
Ｍ ＫＤで結合した。両方の抗体の結合解離定数はＮＨＰ種のＦＸＩ／ＦＸＩａタンパク
質の２倍以内であった。
Figure 2022046656000007
実施例２
デキストラン硫酸上のＦＸＩからＦＸＩａへの自己活性化に対する抗ＦＸＩ抗体の効果
デキストラン硫酸上のＦＸＩからＦＸＩａへの自己活性化は以下のとおりに測定されう
る。３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１０点用量滴定のαＦＸＩ－１３７１６ｐ
－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（
Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプ
レート内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．
１％ ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎ
Ｍ）と共に２５℃で２時間プレインキュベートする。ついで、デキストラン硫酸（ＡＣＲ
ＯＳ，Ｃａｔ＃４３３２４０２５０，分子量約８００ｋＤａ，最終濃度１ｎＭ）の添加に
より、該自己活性化反応を開始させる。該反応を２５℃で１時間進行させ、このとき、Ｔ
ｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００／５０５ｎｍ
の蛍光を１０分間連続的にモニターすることにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活
性がＺ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１
５０μＭ）の切断の速度により検出されうる。各データ点に関する阻害率（％）をＲＦＵ
／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで、ｌｏｇ（イン
ヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析することが可能である。示されるＥ
Ｃ５０値は平均±ＳＤ（ｎ＝２）として与えられうる。結果を表２に示す。
Figure 2022046656000008
実施例３
抗ＦＸＩ抗体の活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイ
αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３
７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ抗体がインビトロ凝固を遮断す
る能力を、活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）アッセイを用いて評価した。
ａＰＴＴアッセイは内因性および共通の凝固経路の活性を測定する。
該試験はクエン酸ナトリウム血漿中で行う。簡潔に説明すると、ヒトおよびＮＨＰ（カ
ニクイザルまたはアカゲザル）血漿を、両性の健常ドナーからの血液をクエン酸Ｎａチュ
ーブ（Ｓａｒｓｔｅｄｔ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ９ＮＣ／１０ｍＬ）内に採取するこ
とにより調製する。血液を１５００×ｇで遠心分離し、血漿を収集する。ａＰＴＴを各ド
ナーに関して調べ、正常範囲（２８～４０秒）内のものをプールし、分注し、－８０℃で
保存する。他の種からの血漿は商業的に入手される（Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａ
ｒｃｈ）。インヒビターまたはビヒクルを血漿中に添加（スパイク）することにより試験
サンプルを調製する。これらの添加サンプルをインキュベート（６０分間、室温（ＲＴ）
）し、ついで凝固分析装置（ＳＴＡ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎ
ｏｓｔｉｃａ）にかける。一般に、該分析装置は次の工程を行う。エラグ酸（Ｐａｃｉｆ
ｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ）の添加により因子ＸＩＩを活性化し、ついで、サンプルの
カルシウム再添加の後、凝固までの時間を測定する。ＦＸＩの阻害はａＰＴＴ凝固時間を
延長させる。データはビヒクル対照の凝固時間に対する増加率（％）として表されており
、５０％（１．５×）の凝固時間増加率をもたらす濃度が示されている。
前記プロトコールに従い、凝固時間を５０％延長するのに必要な抗体の濃度（１．５×
濃度）は９７％ ヒト、カニクイザルおよびアカゲザル血漿において同等であった（図３
Ａ～３Ｂ、図４Ａ～４Ｂおよび図５Ａ～５Ｂ）。図３Ａ、図４Ａおよび図５Ａはベースラ
インに対する増加率（％）としてデータを表しており、一方、図３Ｂ、４Ｂおよび５Ｂは
生データ（凝固時間（秒））を示す。該抗体の１．５×濃度は全てのヒトおよびＮＨＰ血
漿にわたって同等であり（１６．８～２５ｎＭ）、血漿中に存在するＦＸＩチモーゲン（
３０～４０ｎＭ チモーゲン）の半分を滴定するのに必要な抗体濃度に相当すると思われ
る。該抗体の凝固時間における最大延長はカニクイザル血漿とアカゲザル血漿とで同等で
あった。結果を更に表３に示す。
Figure 2022046656000009
実施例４
水素重水素交換質量分析による抗ＦＸＩ抗体のエピトープマッピング
ヒトＦＸＩに対するαＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッ
パおよびαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体の接触
領域を、重水素交換質量分析（ＨＤＸ－ＭＳ）を用いて決定した。ＨＤＸ－ＭＳはタンパ
ク質のアミド骨格内への重水素の取り込みを測定し、この取り込みの変化は水素の溶媒暴
露の影響を受ける。抗原のみのサンプルおよび抗体結合サンプルにおける重水素交換レベ
ルの比較を行って、抗体と接触しうる抗原領域を特定した。ヒト因子ＸＩは、配列番号３
７に示されているアミノ酸配列を有する。
抗体により重水素化から保護されたヒト因子ＸＩ領域は、エピトープ－Ａ ＹＡＴＲＱ
ＦＰＳＬＥＨＲＮＩＣＬ（因子ＸＩの残基１３３～１４８；配列番号３８）およびエピト
ープ－Ｂ ＨＴＱＴＧＴＰＴＲＩＴＫＬ（因子ＸＩの残基１５１～１６３；配列番号３９
）である。これらのペプチドは因子ＸＩのアップル２ドメイン上に位置する（図２）。ア
ップル１、３、４または触媒ドメインにおいては有意な重水素変化は観察されなかった。
このことは、それらがαＦＸＩ－１３７１６結合に関与していないことを示している。図
６は、該抗体により結合された因子ＸＩ残基１３１～１６５の重水素標識差ヒートマップ
を示す。αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパおよびαＦ
ＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体は共に同じ領域を保
護した。
実施例５
ＨＭＷキニノーゲンおよびエラグ酸の存在下のＦＸＩＩａによるＦＸＩからＦＸＩａへ
の活性化に対する抗ＦＸＩ抗体の効果
ＦＸＩチモーゲン活性化に対する抗ＦＸＩ抗体の効果を測定するために、トリペプチド
発蛍光団（ＧＰＲ－ＡＦＣ）のＦＸＩａ媒介性タンパク質分解を測定する共役酵素アッセ
イを用いて、該抗体がＦＸＩ活性化自体を阻害するかどうかを決定することが可能である
。これらの実験のために、抗ＦＸＩ抗体をＦＸＩチモーゲンと共に１時間プレインキュベ
ートする。ＦＸＩａへのＦＸＩの活性化は、ＨＭＷキニノーゲンおよびエラグ酸の存在下
、ＦＸＩＩａの添加により誘導される。ついでトリペプチド発蛍光団基質に対するＦＸＩ
ａ触媒活性をチモーゲン活性化の読取結果として測定する。該共役アッセイは、対照とし
て、ＨＭＷキニノーゲンの非存在下においても行われる。
該アッセイは以下のとおりに行われうる。３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１
０点用量滴定の抗αＦＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレー
ト内で、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％
ＰＥＧ－８０００（ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎＭ）
およびＨＭＷキニノーゲン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＫ，最終濃度２８０ｎＭ）と共に２５℃で２時間プレインキュベート
する。
ついで、エラグ酸含有Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ ＡＰＴＴ－ＸＬ試薬（
Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃａｔ ＃ １００４０３，１００μＭ ストッ
ク濃度，最終濃度２μＭ）および新たに希釈された凝固因子ＸＩＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒ
ｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＦＸＩＩａ，最終濃度５０
ｐＭ）の添加により、活性化反応を開始させる。
該反応を２５℃で１時間進行させ、ついで、ＦＸＩＩａのインヒビターの添加により、
それをクエンチすることが可能である。ＦＸＩＩａのインヒビターには、例えば、コーン
トリプシンインヒビター（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃａｔ
＃ｓｃ－２０４３５８）（これは、ＦＸＩＩａを阻害するために約２００ｎＭの濃度で使
用されうる）、および公開出願ＷＯ２０１３１１３７７４に開示されているインヒビター
、例えばＨ－Ｄ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ＰＣＫ）（これは活性
化ＦＸＩＩ（ＦＸＩＩａ）のアミド分解活性を不可逆的に阻害する）が含まれる。
ついで、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００
／５０５ｎｍの蛍光を１５分間連続的にモニターすることにより、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基
質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１５０μＭ）の切断の速度を
測定することにより、新たに活性化されたＦＸＩａ酵素活性を検出する。各データ点に関
する阻害率（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフ
トウェアで、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析すること
が可能である。
αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３
７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－
１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体を、前記のとおりに行った
アッセにおいて評価した。これらのアッセイの結果は、該抗ＦＸＩ抗体がＨＭＷキニノー
ゲンの存在下ではＦＸＩＩａによるＦＸＩからＦＸＩａへの活性化を阻害するが、ＨＭＷ
キニノーゲンの非存在化ではＦＸＩＩａ活性化に対する検出可能な阻害効果をもたらさな
いことを示した。これらの結果は、抗ＦＸＩ抗体がＨＭＷキニノーゲンの存在下でＦＸＩ
からＦＸＩａへのＦＸＩＩａ活性化を阻害することを示唆している。
実施例６
ＦＸＩａ触媒活性に対する抗ＦＸＩ抗体の効果
抗ＦＸＩ抗体がＦＸＩａの活性を阻害するかどうかを決定するためのアッセイは以下の
とおりに行われうる。３倍希釈系列で１μＭの濃度から開始する１０点用量滴定の抗αＦ
ＸＩ抗体を、Ｃｏｒｎｉｎｇ ３５７５非結合表面マイクロプレート内で、５０ｍＭ Ｈ
ＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ２、０．１％ ＰＥＧ－８０００（
ｐＨ７．４）中、ヒトＦＸＩ（Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，
Ｉｎｃ．，Ｃａｔ ＃ ＨＣＸＩ－０１５０，最終濃度３０ｎＭ）と共に２５℃で２時間
プレインキュベートする。
ついで、新たに希釈された凝固因子ＸＩＩａ（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｃａｔ ＃ ＨＦＸＩＩａ，最終濃度５０ｎＭ）の添加により、
活性化反応を開始させる。該反応を２５℃で１時間進行させ、ついで、ＦＸＩＩａのイン
ヒビター、例えば、コーントリプシンインヒビター（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃａｔ＃ｓｃ－２０４３５８）（これは、ＦＸＩＩａを阻害するため
に約２００ｎＭの濃度で使用されうる）、またはＷＯ２０１３１１３７７４に開示されて
いるＨ－Ｄ－Ｐｒｏ－Ｐｈｅ－Ａｒｇ－クロロメチルケトン（ＰＣＫ）のようなＦＸＩＩ
ａのインヒビターの添加により、それをクエンチする。
ついで、Ｔｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００プレートリーダーを使用して４００
／５０５ｎｍの蛍光を１５分間連続的にモニターすることにより、Ｚ－ＧＰＲ－ＡＦＣ基
質（Ｓｉｇｍａ，Ｃａｔ＃Ｃ０９８０－１０ＭＧ，最終濃度１５０μＭ）の切断の速度を
測定することにより、または天然無傷ＦＩＸの切断の速度を測定することにより、新たに
活性化されたＦＸＩａ酵素活性を検出することが可能である。各データ点に関する阻害率
（％）をＲＦＵ／分データから再計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアで
、ｌｏｇ（インヒビター）対応答の４パラメーター式を使用して分析することが可能であ
る。
αＦＸＩ－１３７１６ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ、αＦＸＩ－１３
７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－
１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カッパ抗体を、前記のとおりに行った
アッセにおいて評価した。該結果は、該抗ＦＸＩ抗体がＦＸＩａの触媒活性を阻害しない
ことを示した。
この実施例の結果は、実施例５で得られた結果と共に評価すると、該抗ＦＸＩ抗体の作
用メカニズムがＨＭＷキニノーゲンの存在下のＦＸＩからＦＸＩＩａへの変換の阻害であ
り、ＦＩＸからＦＩＸａへのＦＸＩａ活性化の阻害ではないことを示唆している。
実施例７
ヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質への抗ＦＸＩモノクローナル抗体のオフタ
ーゲット結合の評価のための表面プラズモン共鳴アッセイ
抗因子ＦＸＩ ｍＡｂ αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／
カッパおよびαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－
）／カッパの、他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケードタンパク質への潜在的な非特異的相
互作用を決定するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）に基づくアッセイ（Ｂｉａｃｏ
ｒｅ Ｔ２００）を用いた（表４）。血漿由来タンパク質における同時精製Ｉｇからの潜
在的バックグラウンドを最小にするために、約５００ＲＵで抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）捕捉キ
ット（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を用いて固定化されたＣＭ５センサーチップ上に抗
ＦＸＩ ｍＡｂを捕捉した。陰性対照抗体である抗呼吸器合抱体ウイルス（ＲＳＶ）モノ
クローナル抗体（ｍＡｂ）（ロット２３ＡＦＥ）を、基準体として、そして血漿由来タン
パク質のバックグラウンド結合の低減を補助するために使用した。５ｎＭのＦＸＩのアナ
ライト濃度を用いて、結合動力学を測定した。全ての他の凝固カスケードタンパク質は５
００ｎＭのアナライト濃度で使用した。単一濃度注入（ｎ＝２）を３０μＬ／分、２５℃
、ＨＢＳ－ＥＰ＋、ｐＨ７．４で行った。
Figure 2022046656000010
Figure 2022046656000011
ヒト、カニクイザルおよびアカゲザルＦＸＩならびに他のヒトおよびＮＨＰ凝固カスケ
ードタンパク質への抗因子ＦＸＩ ｍＡｂ αＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）（Ｋ－）／カッパおよびαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ
Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの結合の動力学を前記のとおりに測定した。それを図１６お
よび図１７に示す。Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを使用して、１：１結合
モデルにデータをフィットさせて、会合速度定数ｋａ（Ｍ－１ｓ－１；ここで、「Ｍ」は
モル濃度であり、「ｓ」は秒である）および解離速度定数ｋｄ（ｓ－１）を決定した。こ
れらの速度定数を使用して平衡解離定数ＫＤ（Ｍ）を計算した。
チップ上に捕捉されたαＦＸＩ－１３６５４ｐ－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）（Ｋ－）／カ
ッパおよびαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）
／カッパは非ＦＸＩ凝固カスケードタンパク質に対して交差反応性を示さなかった（図１
６および図１７）。これらのモノクローナル抗体は、予想されたレベルの、ヒトおよびカ
ニクイザル（およびアカゲザル）ＦＸＩタンパク質への強力な結合を示した。
実施例８
カニクイザル大腿動静脈（ＡＶ）シャント血栓症モデル
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ
の抗血栓効力を、Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにおいて開
発されたカニクイザル大腿動静脈（ＡＶ）シャントモデルにおいてインビボで特徴づけし
た。
研究設計：これらの研究は反復法を用い、この場合、各動物は２回の連続的試験期間に
わたって２つのシャントを受けた（図１８を参照されたい）。それぞれ第１試験期間およ
び第２試験期間中に、化合物非含有ビヒクル（２０ｍＭ 酢酸ナトリウム、９％ スクロ
ース、ｐＨ５．５）またはαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１
０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（用量範囲０．０１～１．０ｍｇ／ｋｇ）を該サルに投与した。
第１（ビヒクル）試験セッションおよび第２（αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ）試験セッション中に測定された血餅重量の
差が抗血栓症効力を決定した。すなわち、ビヒクル暴露中と比較した場合のαＦＸＩ－１
３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ暴露中の、血餅
重量の、より大きな減少は、より大きな抗血栓症効果を示すであろう。前記の反復ペア法
の使用は抗血栓症効力の動物内の処理前対処理後の評価を可能にする。
ＡＶシャント配置操作の詳細：このモデルを実施するために、麻酔したカニクイザルに
大腿動脈および静脈カテーテルを取り付けた。これらのカテーテルはＡＶシャントの挿入
および除去を可能にした。ＡＶシャントはタイゴン（ｔｙｇｏｎ）管から構成され、該管
は、該管の開口部を貫通し該開口部にわたって吊るされた１本の絹縫合糸を有していた。
ＡＶシャントを配置するために、動脈カテーテルおよび静脈カテーテルの両方を閉じて血
流を止めた。ついで、それらの２つのカテーテルの間にＡＶシャントを配置した。カテー
テルの配置および除去の時機を図１８に示す。シャントを所定位置に配置したら、カテー
テルを開け、血液を、絹縫合糸と接触するシャント回路を通して流動させた。縫合糸と接
触する血液の作用は血餅形成を促進した。ＡＶシャントを４０分間、定位置に留めた。Ａ
Ｖシャントを取り出すために、動脈カテーテルおよび静脈カテーテルの両方を閉じて、Ａ
Ｖシャントを通る血流を止めた。ついでシャントを取り出し、切り開いて、絹縫合糸およ
び血餅を得た。血餅を秤量した。データは正味血餅重量として示されており、これは、全
血餅重量から絹縫合糸重量を差し引いたものとして定義される。
凝固バイオマーカーである活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）およびプロ
トロンビン時間（ＰＴ）、ならびにαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１
Ｅ Ｍ１０３Ｌｖ／カッパの循環血漿レベルを、図１８に示されている実験を通して収集
した血液サンプルから測定した。Ｓｔａ Ｃｏｍｐａｃｔ Ｍａｘ凝固分析装置（Ｓｔａ
ｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ）を使用してカニクイザルから採取した解凍（－８
０℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴおよびＰＴを測定した。Ｓｔａｇｏ分析装置は、
電磁機械的血餅検出システムを使用して血餅形成の時間を測定する。ａＰＴＴアッセイの
ために、５０マイクロリットルの血漿を５０μＬのエラグ酸混合物（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐ
ａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ
＃１０－０４０２）と３７℃で３分間混合した。５０μｌの０．０２５Ｍ 塩化カルシウ
ム（Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ、Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．
，ｃａｔ＃００３６７）を該混合物に加え、血餅形成までの時間を測定した。ＰＴアッセ
イのために、５０マイクロリットルの血漿を３７℃で４分間インキュベートした。１００
μＬのトロンボプラスチン試薬（Ｎｅｏｐｌａｓｔｉｎｅ Ｃｌ Ｐｌｕｓ １０，Ｓｔ
ａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００６６７）を加えることにより、
血餅形成のタイミングを開始させた。血漿［αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８
Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ／カッパ］は以下のとおりに測定した。電気化学発光に基づく一
般的なｈＩｇＧ４イムノアッセイを用いて、カニクイザル血漿中のαＦＸＩ－１３７１６
－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパを定量した。捕捉試薬と
してのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｂ）からのビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（
Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－
０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセ
イを確立した。このアッセイを定量し、該アッセイの定量下限は１００の最小必要希釈度
で４０ｎｇ／ｍＬであると決定された。
結果：図１９Ａ～Ｄは、血栓形成（図１９Ａ、図１９Ｂ）、ａＰＴＴ（図１９Ｃ）およ
びＰＴ（図１９Ｄ）に対するαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ
１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ投与の効果を要約している。αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４
（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパは血餅重量における用量依存的およ
び血漿濃度依存的減少を示し、完全な効力（９０～１００％の血餅減少）は、１．５μｇ
／ｍＬ（約１０ｎＭ）を超える血漿［αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ
１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ］において観察された。αＦＸＩ－１３７１６－Ｉｇ
Ｇ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパはａＰＴＴにおける用量依存的
および血漿濃度依存的増加を示した。２６μｇ／ｍＬ（～１８０ｎＭ）のαＦＸＩ－１３
７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの血漿濃度はａＰ
ＴＴにおける約１００％の増加をもたらし、一方、１．５μｇ／ｍＬ（～１０ｎＭ）のα
ＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパはａ
ＰＴＴにおける約６０％の増加をもたらした。ａＰＴＴとは異なり、ＰＴは、評価された
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの
濃度にわたって＜１０％変化し、これは内因性凝固経路に対するＦＸＩ阻害の選択的効果
に合致していた。
実施例９
カニクイザルテンプレート出血時間モデル
Ｍｅｒｃｋ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓにおいて開発されたカニク
イザルテンプレート出血時間モデルにおいて、抗ＦＸＩ ｍＡｂ αＦＸＩ－１３７１６
－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの出血傾向をインビボで
特徴づけした。このモデルは、三重（ｔｒｉｐｌｅ）抗血小板療法における複数の解剖学
的部位のテンプレート出血時間の有意な増加を示すために既に使用されている（Ｃａｉら
，Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ７５８：１０７－１１４（２０１５））。
このモデルを実施するために、種々の時点で頬粘膜（内唇）、指肉趾および遠位尾部に
おいてバネ式ランセットを使用して出血を誘発させて、テンプレート出血時間を決定した
。
出血時間試験：麻酔したカニクイザルにおいて出血時間試験を以下のとおりに行った。
出血誘発のための適切な切開部位を特定するために、各試験領域（頬粘膜、指肉趾または
遠位尾部）を注意深く検査した。出血を誘発するために、バネ式ランセットを、選択され
た試験部位にしっかりと配置し、作動させて、均一な直線切開を生じさせた。ランセット
の仕様が切開寸法を決定した。切開部位からの血液を自由流動させ、出血が連続的に３０
秒間停止するまでモニターした。これは出血時間（ＢＴ）を定めた。各ＢＴ部位に関して
ＢＴを記録した。ＢＴ測定中、遠位尾部切開部位を温かい滅菌乳酸リンゲル液で灌流し、
指肉趾部位を温かい滅菌乳酸リンゲル液に浸漬した。乳酸リンゲル液の適用は、これらの
部位の血流を観察する能力を改善した。
研究設計：各研究は、３つの試験領域における３回の３０分間のテンプレート出血時間
試験（ＢＴ）から構成されるものであった（図２０を参照されたい）。１回目のＢＴはベ
ースライン出血を決定した。２回目のＢＴは、化合物非含有ビヒクル（２０ｍＭ 酢酸ナ
トリウム、９％ スクロース、ｐＨ５．５）の３分間のＩＶ注射（２．８３ｍＬ／ｋｇ）
（処理１）の７０分後に行った。３回目のＢＴは、化合物非含有ビヒクルまたはαＦＸＩ
－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ（１７ｍｇ
／ｋｇ）の３分間のＩＶ注入（２．８３ｍＬ／ｋｇ）（処理２）の７０分後に行った。前
記のとおりに出血をモニターし、出血時間を記録した。出血が停止した時間を各部位に関
して記録した。定期的に血液サンプルを採取して、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ
２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ、ａＰＴＴおよびＰＴの循環血漿レベル
を決定した。
各試験動物を２つの研究セッションに付した。研究セッション１においては、ビヒクル
およびそれに続くビヒクルが、それぞれ、処理１および処理２を構成した。研究セッショ
ン２においては、ビヒクルおよびそれに続く１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶ αＦＸＩ－１３７１
６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパが、それぞれ、処理１
および処理２を構成した。
試験物質注入の終了と出血時間の評価の開始との間の７０分間は血栓質量測定のための
ＡＶシャントモデルにおけるタイミングを表していた（処理の３０分後のシャント配置＋
シャントを通る４０分間の血流）。既に記載されているＰＫ／ＰＤ霊長類モデリング研究
に基づけば、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－
）／カッパの１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶの試験用量は、予想されるヒトＣｍａｘ αＦＸＩ－
１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの１０倍を達
成すると推定された。
凝固バイオマーカーである活性化部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）およびプロ
トロンビン時間（ＰＴ）、ならびにαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１
Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの循環血漿レベルを、図２０に示されている実験を通し
て収集した血液サンプルから測定した。Ｓｔａ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ凝固分析装置（
Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ）を使用して動物から採取した解凍（－８０
℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴおよびＰＴを測定した。該凝固分析装置は、電磁機
械的血餅検出システムを使用して血餅形成まで時間を測定する。ａＰＴＴアッセイのため
に、該分析装置は５０μＬの血漿を５０μＬのエラグ酸（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐａｃｉｆｉ
ｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ＃１０－０
４０２）とキュベット内で混合し、ついでこれを３７℃で３分間インキュベートする。つ
いで５０μＬの０．０２５Ｍ 塩化カルシウム（Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ，Ｓ
ｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃａｔ＃００３６７）を該混合物に加えて
、凝固を開始させ、血餅形成までの時間を測定する。ＰＴアッセイのために、５０μＬの
血漿をキュベット内で３７℃で４分間インキュベートした。１００μＬの可溶化トロンボ
プラスチン試薬（Ｔｒｉｎｉｃｌｏｔ ＰＴ Ｅｘｃｅｌ，ＴＣｏａｇ，Ｉｎｃ．，ｃａ
ｔ＃ Ｔ１１０６）を加えることにより、血餅形成を開始させた。血漿［αＦＸＩ－１３
７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ］は以下のとおり
に測定した。電気化学発光に基づく一般的なｈＩｇＧ４イムノアッセイを用いて、カニク
イザル血漿中のαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ
－）／カッパを定量した。捕捉試薬としてのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３１９Ｂ）
からのビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈｅｒｎ
Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセイを確立した。このアッセイを定量し、該アッセイ
の定量下限は１００の最小必要希釈度で４０ｎｇ／ｍＬであると決定された。
結果：図２１は、頬粘膜（図２１Ａ、図２１Ｄ）、指肉趾（図２１Ｂ、図２１Ｅ）およ
び遠位尾部（図２１Ｃ、図２１Ｆ）テンプレート出血時間に対する４頭のカニクイザルに
おけるビヒクルおよび１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶ αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの投与の効果を要約している。研究セッショ
ン１における処理１および処理２としてのビヒクル－ビヒクル、ならびに研究セッション
２における処理１および２としてのビヒクル－αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパに関して、絶対出血時間（図２１Ａ～Ｃ）お
よび出血時間における変化率（％）（図２１Ｄ～Ｆ）を比較することにより、出血時間に
対する効果を評価した。ビヒクル対αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１
Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの絶対出血時間および出血時間におけるビヒクル－ビヒ
クル対ビヒクル－ αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ
（Ｋ－）／カッパの変化率の両方の比較は、各試験部位におけるそれぞれ１頭の動物によ
りもたらされた頬粘膜および遠位尾部出血における非有意な傾向が認められたものの、こ
の試験用量でのαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ
－）／カッパの投与では、試験部位のいずれにおいても出血時間における統計的に有意な
変化を検出しなかった。
カニクイザル出血時間試験において１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶ試験用量で得られたαＦＸＩ
－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの血漿濃度
４１９±４２．４（平均±ＳＥＭ）μｇ／ｍＬ（～２８０７ｎＭ）。血漿ａＰＴＴ値は
ベースラインにおいては３２．７±１．１秒であり、一方、１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶのαＦ
ＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの後で
は６８．６±３．２秒（２．１倍の増加）であった。血漿ＰＴ値はベースラインにおいて
は１２．４±０．２２秒であり、一方、１７ｍｇ／ｋｇ ＩＶのαＦＸＩ－１３７１６－
ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパの後では１２．８±０．２
４秒（明らかな増加は認められなかった）であった。
実施例１０
アカゲザルにおける複数の静脈内投与の後のαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２
８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ／カッパの薬物動態（ＰＫ）および薬力学（ＰＤ）評価
αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパ
のＰＫＰＤ特性をアカゲザルにおいてインビボで特徴づけした。その目的は、ＰＫ特性を
評価すること、および合計２回の毎週の投与の後のＰＫ／ＰＤ関係を確立することであっ
た。
研究設計：非化合物ビヒクル（１０ｍＭ 酢酸ナトリウム、９％ スクロース、ｐＨ５
．５）またはαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－
）／カッパを３および６ｍｇ／ｋｇの２つの用量レベルでアカゲザル（用量群当たり４頭
の動物）に投与（ＩＶ）した。この研究の期間は２２日であり、薬物レベルおよび活性化
部分トロンボプラスチン時間（ａＰＴＴ）の決定のために１．５ｍＬの血液を採取した。
表５に示されているとおり、該実験を通して収集した血液サンプルから凝固バイオマーカ
ー（ａＰＴＴ）およびαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３
Ｌ（Ｋ＋）／カッパの循環血漿レベルを測定した。
Figure 2022046656000012
Ｓｔａ－Ｒ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ凝固分析装置（Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，
Ｉｎｃ）を使用して動物から採取した解凍（－８０℃）クエン酸塩添加血漿からａＰＴＴ
を測定した。該凝固分析装置は、電磁機械的血餅検出システムを使用して血餅形成まで時
間を測定する。ａＰＴＴアッセイのために、該分析装置は５０μＬの血漿を５０μＬのエ
ラグ酸（ＡＰＴＴ－ＸＬ，Ｐａｃｉｆｉｃ Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ；Ｆｉｓｈｅｒ Ｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃｓ ｃａｔ＃１０－０４０２）とキュベット内で混合し、ついでこれを
３７℃で３分間インキュベートする。ついで５０μＬの０．０２５Ｍ 塩化カルシウム（
Ｓｔａ－ＣａＣｌ２ ０．０２５Ｍ，Ｓｔａｇｏ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ，Ｉｎｃ．，ｃ
ａｔ＃００３６７）を該混合物に加えて、凝固を開始させ、血餅形成までの時間を測定す
る。
電気化学発光に基づく一般的なヒトＩｇＧ４（ｈｕＩｇＧ４）イムノアッセイを用いて
、カニクイザル血漿中のαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０
３Ｌ（Ｋ－）／カッパを定量した。捕捉試薬としてのＢｅｔｈｙｌ（ｃａｔ＃Ａ８０－３
１９Ｂ）からのビオチン化ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）、および検出試薬用のＳｏｕｔｈ
ｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ｃａｔ＃９１９０－０１）からのスルホＴＡＧ標識マウス抗ヒ
トＩｇＧ（Ｆｃ特異的）を使用して、該アッセイを確立した。このアッセイを定量し、該
アッセイの定量下限は１００の最小必要希釈度で４０ｎｇ／ｍＬであると決定された。
非コンパートメント（ＮＣＡ）法（ＧａｂｒｉｅｌｓｓｏｎおよびＷｅｉｎｅｒ，２０
００）を用いて、αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（
Ｋ－）／カッパに関する個々の動物血漿濃度－時間データを分析した。Ｐｈｏｅｎｉｘ
３２ ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ ６．３（バージョン６．３．０．３９５，Ｃｅｒｔａｒａ
Ｌ．Ｐ．Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，２０１２）を使用して、全てのＰＫパラメータを推定
し、または計算した。非コンパートメント分析はＭｏｄｅｌ ２０１（ＩＶ）を使用した
。全ての濃度データおよびＰＫパラメータを３桁の有効数字に丸めた。定量下限未満（＜
ＬＬＯＱ）の濃度値を有するサンプルをＰＫ分析および平均データ計算から除外した。グ
ラフ化の目的には、ＬＬＯＱ未満の値を、個々の動物の濃度－時間プロットに関して、最
小報告可能濃度の１／２に設定した。
ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７．００（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａ
ｒｅ Ｉｎｃ）を使用して、暴露とａＰＴＴとの関係を特徴づけるために、Ｓ字状Ｅｍａ
ｘ応答（ＰＫ／ＰＤ）モデルを使用した。このモデルにおいては、Ｅｍａｘ値は、ベース
ラインから得られたａＰＴＴの最大増加に対応し、ＥＣ５０値は半数効果濃度に相当する
。変動性は、該ソフトウェアにより得られたＥＣ５０値に関する９５％信頼区間（ＣＩ）
として示された。
結果：αＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／
カッパに関する個々の濃度－時間プロファイルを図２２に示す。全てのＰＫパラメーター
に関して非線形性が認められた。平均クリアランス値は、試験した最低用量（０．１ｍｇ
／ｋｇ）に関する約４０ｍＬ／ｋｇ・日から、試験した最高用量（６ｍｇ／ｋｇ）に関す
る約３ｍＬ／ｋｇ・日へと減少した。ａＰＴＴの濃度－時間プロファイルを図２３に示す
。ａＰＴＴの用量依存的増加が認められた。Ｓ字状Ｅｍａｘモデルによって最も良く示さ
れるαＦＸＩ－１３７１６－ＩｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッ
パの血漿濃度とａＰＴＴとの関係はこの関係を適切に示した。αＦＸＩ－１３７１６－Ｉ
ｇＧ４（Ｓ２２８Ｐ）Ｑ１Ｅ Ｍ１０３Ｌ（Ｋ－）／カッパに関する推定ＥＣ５０値は約
１．７μｇ／ｍＬであった。この結果に基づけば、治療的有効量は約１．０～２．０ｍｇ
／ｋｇでありうる。
Figure 2022046656000013
Figure 2022046656000014
Figure 2022046656000015
Figure 2022046656000016
Figure 2022046656000017
Figure 2022046656000018
Figure 2022046656000019
Figure 2022046656000020
Figure 2022046656000021
Figure 2022046656000022
Figure 2022046656000023
Figure 2022046656000024
Figure 2022046656000025
Figure 2022046656000026
本発明は例示実施形態に関して本明細書に記載されているが、本発明はそれらに限定さ
れないと理解されるべきである。当業者および本教示を利用する者は本発明の範囲内の追
加的な修飾および実施形態を認識するであろう。したがって、本発明は本明細書における
特許請求の範囲のみにより限定される。

Claims (61)

  1. 抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐ、αＦＸＩ－１３７１６ｐまたはαＦＸＩ－１３７１６の
    、６個の相補性決定領域（ＣＤＲ）を少なくとも含む抗体または抗原結合性フラグメント
    であって、
    抗体αＦＸＩ－１３６５４ｐは、配列番号１８、２６、３１または３２に示されている
    アミノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）と、配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有す
    る軽鎖（ＬＣ）とを含み、
    抗体αＦＸＩ－１３７１６ｐは、配列番号２２、２７、３３または３４に示されている
    アミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣと
    を含み、
    抗体αＦＸＩ－１３７１６は、配列番号２５、２８、３５または３６に示されているア
    ミノ酸配列を有するＨＣと、配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有するＬＣとを
    含み、
    前記の６個のＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそ
    れらの組合せを有していてもよく、および
    該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメイン
    に結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する、抗体または抗原結合性フラグメント。
  2. 該抗体または抗原結合性フラグメントが、
    （ｉ）ＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１、配列番号２およ
    び配列番号３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびにＬＣ ＣＤ
    Ｒ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号４、配列番号５および配列番号６に記載
    されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ、
    （ｉｉ）ＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号７、配列番号８お
    よび配列番号９に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびにＬＣ Ｃ
    ＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１０、配列番号１１および配列番号１
    ２に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲ、または
    （ｉｉｉ）ＨＣ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号７、配列番号８
    および配列番号１３に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ ＣＤＲ、ならびにＬＣ
    ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に関して配列番号１０、配列番号１１および配列番
    号１２に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ ＣＤＲを含む、請求項１記載の抗体
    または抗原結合性フラグメント。
  3. 該抗体または抗原結合性フラグメントが、
    （ｉ）配列番号１６に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメイン、および配
    列番号１７に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメイン、または１、２もしく
    は３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体、
    （ｉｉ）配列番号２０に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメイン、および
    配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメイン、または１、２もし
    くは３個のアミノ酸置換、付加、欠失もしくはそれらの組合せを含むそれらの変異体、ま
    たは
    （ｉｉｉ）配列番号２４に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ可変ドメイン、およ
    び配列番号２１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ可変ドメイン（ここで、該可変
    ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠
    失またはそれらの組合せを含んでいてもよいが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲ
    はいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失を有さない）を含む、請求項２記載
    の抗体または抗原結合性フラグメント。
  4. 配列番号１４もしくは４０に記載されているアミノ酸配列を有するＨＣ定常ドメインま
    たはその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または
    １０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請
    求項１、２または３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  5. 配列番号１５に記載されているアミノ酸配列を有するＬＣ定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項１、３ま
    たは４記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  6. （ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重
    鎖（ＨＣ）、
    （ｂ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８に
    示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号９に示されているアミ
    ノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重鎖（ＨＣ）、または
    （ｃ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ１、配列番号８に
    示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番号１３に示されているア
    ミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重鎖（ＨＣ）
    を含む抗体または抗原結合性フラグメントであって、
    ここで、該可変ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメ
    インにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
    組合せを有さず、および
    該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメイン
    に結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する、抗体または抗原結合性フラグメント。
  7. ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメイン
    またはその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９また
    は１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、
    請求項６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  8. ヒトＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメ
    インは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失ま
    たはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項６記載の抗体または抗原結合性フ
    ラグメント。
  9. 配列番号１４もしくは４０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたは
    その変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０
    個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項
    ７記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  10. （ａ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する軽
    鎖（ＬＣ）、または
    （ｂ）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ１、配列番号１
    １に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番号１２に示されてい
    るアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを含むＬＣを含む可変ドメイ
    ンを有する軽鎖
    を含む抗体または抗原結合性フラグメントであって、
    ここで、該可変ドメインは、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメ
    インにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの
    組合せを有さず、および
    該抗体または抗原結合性フラグメントは凝固因子ＸＩ（ＦＸＩ）のアップル２ドメイン
    に結合し、ＦＸＩの活性化を阻害する、抗体または抗原結合性フラグメント。
  11. ＬＣがヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、抗体である、請求項１０記
    載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  12. ＬＣが、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を含む定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、抗体である、請求項１１記
    載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  13. （ａ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重
    鎖（ＨＣ）（ここで、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、
    欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）と、
    （ｂ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する軽
    鎖（ＬＣ）とを含む、抗体または抗原結合性フラグメントであって、
    ここで、該可変ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ
    酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメイ
    ンにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組
    合せを有さない、抗体または抗原結合性フラグメント。
  14. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまた
    はその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１
    ０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求
    項１３記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  15. ＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメイン
    は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失または
    それらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項１３記載の抗体または抗原結合性フラ
    グメント。
  16. 配列番号１４もしくは４０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたは
    その変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０
    個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項
    １４記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  17. 軽鎖がヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、抗体である、請求項１３、
    １４、１５または１６記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  18. 配列番号１５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはその変異体（
    ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸
    置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項１７記載の抗
    体または抗原結合性フラグメント。
  19. （ａ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号９または１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメイン
    を有する重鎖（ここで、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加
    、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）と、
    （ｂ）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－
    ＣＤＲ）１、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配
    列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有
    する軽鎖とを含む、抗体または抗原結合性フラグメントであって、
    ここで、該可変ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ
    酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよいが、ただし、該可変ドメイ
    ンにおけるＣＤＲはいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組
    合せを有さない、抗体または抗原結合性フラグメント。
  20. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまた
    はその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１
    ０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求
    項１９記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  21. ＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常ドメイン
    は１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失または
    それらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項１９記載の抗体または抗原結合性フラ
    グメント。
  22. 配列番号１４もしくは４０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメインまたは
    その変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０
    個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項
    ２０記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  23. 軽鎖がヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、抗体である、請求項１９、
    ２０、２１または２２記載の抗体または抗原結合性フラグメント。
  24. 配列番号１５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはその変異体（
    ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸
    置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む抗体である、請求項２３記載の抗
    体または抗原結合性フラグメント。
  25. 配列番号１８、２６、３１もしくは３２に示されているアミノ酸配列を有する重鎖（Ｈ
    Ｃ）またはその変異体（ここで、ＨＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０
    個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むが、ただし、該可変ドメイン
    における相補性決定領域（ＣＤＲ）はいずれも、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失
    またはそれらの組合せを有さない）と、
    配列番号１９に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）またはその変異体（こ
    こで、ＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、
    欠失またはそれらの組合せを含むが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも
    、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さない）とを含む抗
    体。
  26. 配列番号２２、２５、２７、２８、３３、３４、３５もしくは３６に示されているアミ
    ノ酸配列を有する重鎖（ＨＣ）またはその変異体（ここで、ＨＣは１、２、３、４、５、
    ６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含むが
    、ただし、該可変ドメインにおける相補性決定領域（ＣＤＲ）はいずれも、３個を超える
    アミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さない）と、
    配列番号２３に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖（ＬＣ）またはその変異体（こ
    こで、ＬＣは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、
    欠失またはそれらの組合せを含むが、ただし、該可変ドメインにおけるＣＤＲはいずれも
    、３個を超えるアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを有さない）とを含む抗
    体。
  27. 請求項１～２６のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントと医薬上許容
    される担体または希釈剤とを含む組成物。
  28. （ｉ）配列番号７に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号８に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号９または１３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメイン
    を有する重鎖（ＨＣ）（ここで、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置
    換、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、ならびに
    （ｉｉ）配列番号１０に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ
    －ＣＤＲ）１、配列番号１１に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および
    配列番号１２に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを
    有する軽鎖（ＬＣ）（ここで、ＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換
    、付加、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、または
    （ｉ）配列番号１に示されているアミノ酸配列を有する重鎖相補性決定領域（ＨＣ－Ｃ
    ＤＲ）１、配列番号２に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ２および配列番
    号３に示されているアミノ酸配列を有するＨＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する重
    鎖（ＨＣ）（ここで、ＨＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加、
    欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）、ならびに
    （ｉｉ）配列番号４に示されているアミノ酸配列を有する軽鎖相補性決定領域（ＬＣ－
    ＣＤＲ）１、配列番号５に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ２および配列
    番号６に示されているアミノ酸配列を有するＬＣ－ＣＤＲ３を含む可変ドメインを有する
    軽鎖（ＬＣ）（ここで、ＬＣ－ＣＤＲの１以上は１、２または３個のアミノ酸置換、付加
    、欠失またはそれらの組合せを有していてもよい）を含む抗体または抗原結合性フラグメ
    ントと、医薬上許容される担体または希釈剤とを含む組成物であって、
    ここで、該抗体または抗原結合性フラグメントは、該ＨＣをコードする核酸分子と該Ｌ
    Ｃをコードする核酸分子とを含む宿主細胞から得られる、組成物。
  29. 該抗体がＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメ
    インまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９
    または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、請求項
    ２８記載の組成物。
  30. 該抗体がＩｇＧ４アイソタイプの重鎖定常ドメインまたはその変異体（ここで、該定常
    ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミノ酸置換、付加、欠
    失またはそれらの組合せを含む）を含む、請求項２９記載の組成物。
  31. 該抗体が、配列番号１４もしくは４０に示されているアミノ酸配列を含む重鎖定常ドメ
    インまたはその変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９
    または１０個のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、請求項
    ２８記載の組成物。
  32. 軽鎖がヒトカッパ軽鎖定常ドメインまたはヒトラムダ軽鎖定常ドメインまたはその変異
    体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個のアミ
    ノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、請求項２８、２８、３０ま
    たは３１記載の組成物。
  33. 該抗体が、配列番号１５に示されているアミノ酸配列を含む軽鎖定常ドメインまたはそ
    の変異体（ここで、該定常ドメインは１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０個
    のアミノ酸置換、付加、欠失またはそれらの組合せを含む）を含む、請求項３２記載の組
    成物。
  34. 請求項１～２６のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効
    量を、血栓塞栓性障害または疾患の治療を要する対象に投与することを含む、対象におけ
    る血栓塞栓性障害または疾患の治療方法。
  35. 治療を要する対象が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴ
    Ｅ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答
    症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患するリスクを有する対象である
    、請求項３４記載の方法。
  36. 治療を要する対象が、ＦＸＩの病的活性化を示す対象である、請求項３４記載の方法。
  37. 該抗体または抗原結合性フラグメントを非経口投与により対象に投与する、請求項３４
    、３５または３６記載の方法。
  38. 該抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体
    または抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇを含む、請求項３４、３５、３６
    または３７記載の方法。
  39. 該抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体
    または抗原結合性フラグメント約１．０～２．０ｍｇを含む、請求項３８記載の方法。
  40. （ａ）血栓症を有する又は血栓症の発生リスクを有する、治療を要する対象を選択し、
    （ｂ）請求項１～２６のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントのいず
    れかの阻害量、あるいは請求項２７～３３のいずれか１項記載の組成物の阻害量を該対象
    に投与し、それにより、ＦＸＩＩａによるＦＸＩの活性化を阻害することを含む、対象に
    おける因子ＸＩＩａ（ＦＸＩＩａ）によるＦＸＩの活性化を阻害する方法。
  41. 治療を要する対象が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴ
    Ｅ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答
    症候群、転移癌または感染症に罹患している、または罹患するリスクを有する対象である
    、請求項４０記載の方法。
  42. 治療を要する対象が、ＦＸＩの病的活性化を示す対象である、請求項４０記載の方法。
  43. 該抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは該組成物の阻害量が、ＦＸＩの活性化を
    少なくとも５０％阻害するのに十分な量である、請求項４０、４１または４２記載の方法
    。
  44. 該抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは該組成物を非経口投与により対象に投与
    する、請求項４０、４１、４２または４３記載の方法。
  45. 該抗体または抗原結合性フラグメントの阻害量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体または
    抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇを含む、請求項４０、４１、４２、４３
    または４４記載の方法。
  46. 該抗体または抗原結合性フラグメントの阻害量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体または
    抗原結合性フラグメント約１．０～２．０ｍｇを含む、請求項４５記載の方法。
  47. 血栓塞栓性障害または疾患を治療するための医薬の製造のための、請求項１～２６のい
    ずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項２７～３３のいずれ
    か１項記載の組成物の使用。
  48. 血栓塞栓性障害または疾患が心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症
    （ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎
    症応答症候群、転移癌または感染症である、請求項４７記載の使用。
  49. 血栓塞栓性障害または疾患がＦＸＩの病的活性化である、請求項４７記載の使用。
  50. 血栓塞栓性障害または疾患の治療のための、請求項１～２６のいずれか１項記載の抗体
    もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求項２７～３３のいずれか１項記載の組成物。
  51. 血栓塞栓性障害または疾患が心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症
    （ＶＴＥ）、心房細動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎
    症応答症候群、転移癌または感染症である、請求項５０記載の抗体もしくは抗原結合性フ
    ラグメントまたは組成物。
  52. 血栓塞栓性障害または疾患がＦＸＩの病的活性化である、請求項５０記載の抗体もしく
    は抗原結合性フラグメントまたは組成物。
  53. 請求項１～２６のいずれか１項記載の抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効
    量を対象に投与し、それにより、対象において、止血を妨げることなく血液凝固および関
    連血栓症を抑制するすることを含む、血液凝固および関連血栓症の抑制を要する対象にお
    いて、止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための方法。
  54. 対象が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、肺血栓塞栓症、静脈血栓塞栓症（ＶＴＥ）、心房細
    動、播種性血管内凝固、医療装置関連血栓塞栓性障害、重度全身性炎症応答症候群、転移
    癌または感染症に罹患している、または罹患するリスクを有する、請求項５３記載の方法
    。
  55. 対象がＦＸＩの病的活性化を示す、請求項５３記載の方法。
  56. 該抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは該組成物の阻害量が、ＦＸＩの活性化を
    少なくとも５０％阻害するのに十分な量である、請求項５３、５４または５５記載の方法
    。
  57. 該抗体または抗原結合性フラグメントを非経口投与により対象に投与する、請求項５３
    、５４、５５または５６記載の方法。
  58. 該抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体
    または抗原結合性フラグメント約０．３～約３．０ｍｇを含む、請求項５３、５４、５５
    、５６または５７記載の方法。
  59. 該抗体または抗原結合性フラグメントの治療的有効量が対象の体重１ｋｇ当たり該抗体
    または抗原結合性フラグメント約１．０～２．０ｍｇを含む、請求項５３記載の方法。
  60. 止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための医薬の製造のための
    、請求項１～３６のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求
    項２７～３３のいずれか１項記載の組成物の使用。
  61. 止血を妨げることなく血液凝固および関連血栓症を抑制するための医薬の製造のための
    、請求項１～３６のいずれか１項記載の抗体もしくは抗原結合性フラグメントまたは請求
    項３３～３９のいずれか１項記載の組成物。
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