JP2022001062A - トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 - Google Patents
トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2022001062A JP2022001062A JP2021159781A JP2021159781A JP2022001062A JP 2022001062 A JP2022001062 A JP 2022001062A JP 2021159781 A JP2021159781 A JP 2021159781A JP 2021159781 A JP2021159781 A JP 2021159781A JP 2022001062 A JP2022001062 A JP 2022001062A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- host cell
- lipase
- oil
- polynucleotide sequence
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 15
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 title 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 title 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 86
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 57
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 57
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 57
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 41
- 235000020978 long-chain polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims abstract description 40
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims abstract description 17
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 17
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 claims description 23
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 claims description 22
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 claims description 22
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 claims description 19
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 claims description 18
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 12
- DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N (2e,4e,6e,8e,10e,12e)-docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N 0.000 claims description 6
- GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 6-Ketone, O18-Me-Ussuriedine Natural products CC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N docosahexaenoic acid (DHA) Natural products COC(=O)C(C)NOCC1=CC=CC=C1 KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 5
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 abstract description 62
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 abstract description 61
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 abstract description 61
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 abstract description 7
- 229940012843 omega-3 fatty acid Drugs 0.000 abstract description 6
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 abstract description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 3
- CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N delta1-THC Chemical compound C1=C(C)CC[C@H]2C(C)(C)OC3=CC(CCCCC)=CC(O)=C3[C@@H]21 CYQFCXCEBYINGO-IAGOWNOFSA-N 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 95
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 66
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 66
- 238000000034 method Methods 0.000 description 36
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 241000222175 Diutina rugosa Species 0.000 description 24
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 24
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 22
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 22
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 22
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerol Natural products OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 20
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 16
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 15
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 15
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 15
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 15
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 12
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 11
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000021588 free fatty acids Nutrition 0.000 description 9
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 9
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 9
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 9
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 241000159512 Geotrichum Species 0.000 description 8
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 8
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 8
- 101100005882 Mus musculus Cel gene Proteins 0.000 description 7
- 101100289046 Mus musculus Lias gene Proteins 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 101150091094 lipA gene Proteins 0.000 description 7
- YAFQFNOUYXZVPZ-UHFFFAOYSA-N liproxstatin-1 Chemical compound ClC1=CC=CC(CNC=2C3(CCNCC3)NC3=CC=CC=C3N=2)=C1 YAFQFNOUYXZVPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108700012830 rat Lip2 Proteins 0.000 description 6
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- 101710084373 Lipase 1 Proteins 0.000 description 5
- 101710084376 Lipase 3 Proteins 0.000 description 5
- 241001125048 Sardina Species 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 4
- UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N Tributyrin Chemical compound CCCC(=O)OCC(OC(=O)CCC)COC(=O)CCC UYXTWWCETRIEDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 4
- -1 glycerol ester Chemical class 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 4
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010046997 Geotrichum candidum lipase II Proteins 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010084455 Zeocin Proteins 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N p-nitrophenyl butyrate Chemical compound CCCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 DVDUMIQZEUTAGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N phleomycin D1 Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@H](C)[C@@H](O)[C@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCCC=1SC[C@@H](N=1)C=1SC=C(N=1)C(=O)NCCCCNC(N)=N)[C@@H](O[C@H]1[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)O[C@@H]1[C@H]([C@@H](OC(N)=O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C=1N=CNC=1)C(=O)C1=NC([C@H](CC(N)=O)NC[C@H](N)C(N)=O)=NC(N)=C1C CWCMIVBLVUHDHK-ZSNHEYEWSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 3
- YUFFSWGQGVEMMI-JLNKQSITSA-N (7Z,10Z,13Z,16Z,19Z)-docosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCC(O)=O YUFFSWGQGVEMMI-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021294 Docosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- OPGOLNDOMSBSCW-CLNHMMGSSA-N Fursultiamine hydrochloride Chemical compound Cl.C1CCOC1CSSC(\CCO)=C(/C)N(C=O)CC1=CN=C(C)N=C1N OPGOLNDOMSBSCW-CLNHMMGSSA-N 0.000 description 2
- 108010029660 Intrinsically Disordered Proteins Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 101710084378 Lipase 2 Proteins 0.000 description 2
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 102000001105 Phosphofructokinases Human genes 0.000 description 2
- 108010069341 Phosphofructokinases Proteins 0.000 description 2
- 102000011755 Phosphoglycerate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 2
- 102400001107 Secretory component Human genes 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001099217 Thermotoga maritima (strain ATCC 43589 / DSM 3109 / JCM 10099 / NBRC 100826 / MSB8) Triosephosphate isomerase Proteins 0.000 description 2
- 102000005924 Triose-Phosphate Isomerase Human genes 0.000 description 2
- 108700015934 Triose-phosphate isomerases Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 229940013317 fish oils Drugs 0.000 description 2
- HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N furfural Chemical compound O=CC1=CC=CO1 HYBBIBNJHNGZAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 2
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 2
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 2
- KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N phenolphthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 KJFMBFZCATUALV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- JIWBIWFOSCKQMA-UHFFFAOYSA-N stearidonic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCCC(O)=O JIWBIWFOSCKQMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N (2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoic acid;(2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 BEJKOYIMCGMNRB-GRHHLOCNSA-N 0.000 description 1
- RRNKCSIEGPOIKI-UHFFFAOYSA-N (4-nitrophenyl) decanoate Chemical compound CCCCCCCCCC(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 RRNKCSIEGPOIKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N (4r,7s,10s,13s,16r)-16-acetamido-13-(1h-imidazol-5-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15-tetraoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14-tetrazacycloheptadecane-4-carboxamide Chemical compound N1C(=O)[C@@H](NC(C)=O)CSSC[C@@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]1CC1=CN=CN1 FQVLRGLGWNWPSS-BXBUPLCLSA-N 0.000 description 1
- HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N (8Z,11Z,14Z)-8,11,14-eicosatrienoic acid Natural products CCCCCC=CCC=CCC=CCCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 5-hydroxymethylfurfural Chemical compound OCC1=CC=C(C=O)O1 NOEGNKMFWQHSLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000588986 Alcaligenes Species 0.000 description 1
- 241000588810 Alcaligenes sp. Species 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100034035 Alcohol dehydrogenase 1A Human genes 0.000 description 1
- 102100031795 All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Human genes 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000351920 Aspergillus nidulans Species 0.000 description 1
- 239000007992 BES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- 241000273930 Brevoortia tyrannus Species 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000238366 Cephalopoda Species 0.000 description 1
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000252203 Clupea harengus Species 0.000 description 1
- 241001454694 Clupeiformes Species 0.000 description 1
- 241000199912 Crypthecodinium cohnii Species 0.000 description 1
- 241000723298 Dicentrarchus labrax Species 0.000 description 1
- 101001091269 Escherichia coli Hygromycin-B 4-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- 101000892220 Geobacillus thermodenitrificans (strain NG80-2) Long-chain-alcohol dehydrogenase 1 Proteins 0.000 description 1
- 244000168141 Geotrichum candidum Species 0.000 description 1
- 235000017388 Geotrichum candidum Nutrition 0.000 description 1
- 108010060309 Glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 102000053187 Glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001149669 Hanseniaspora Species 0.000 description 1
- 101000780443 Homo sapiens Alcohol dehydrogenase 1A Proteins 0.000 description 1
- 101000775437 Homo sapiens All-trans-retinol dehydrogenase [NAD(+)] ADH4 Proteins 0.000 description 1
- 101000773364 Homo sapiens Beta-alanine-activating enzyme Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000907999 Mortierella alpina Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000238413 Octopus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 241000490567 Pinctada Species 0.000 description 1
- 208000020584 Polyploidy Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000002278 Ribosomal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000605 Ribosomal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100190361 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) PHO90 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000269851 Sarda sarda Species 0.000 description 1
- 241000233671 Schizochytrium Species 0.000 description 1
- 241001441745 Sepia esculenta Species 0.000 description 1
- LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001223864 Sphyraena barracuda Species 0.000 description 1
- 101001091268 Streptomyces hygroscopicus Hygromycin-B 7''-O-kinase Proteins 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150033985 TPI gene Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000235013 Yarrowia Species 0.000 description 1
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- 235000019513 anchovy Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 230000003293 cardioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000008133 cognitive development Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000007596 consolidation process Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N dihomo-γ-linolenic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCC(O)=O HOBAELRKJCKHQD-QNEBEIHSSA-N 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 1
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000020664 gamma-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Natural products O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 1
- 235000019514 herring Nutrition 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N hydroxymethylfurfural Natural products COC1=CC=C(C=O)O1 RJGBSYZFOCAGQY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 229940106134 krill oil Drugs 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 1
- 235000020667 long-chain omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001937 non-anti-biotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020665 omega-6 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940033080 omega-6 fatty acid Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 229940119224 salmon oil Drugs 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000010698 whale oil Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11C—FATTY ACIDS FROM FATS, OILS OR WAXES; CANDLES; FATS, OILS OR FATTY ACIDS BY CHEMICAL MODIFICATION OF FATS, OILS, OR FATTY ACIDS OBTAINED THEREFROM
- C11C1/00—Preparation of fatty acids from fats, fatty oils, or waxes; Refining the fatty acids
- C11C1/02—Preparation of fatty acids from fats, fatty oils, or waxes; Refining the fatty acids from fats or fatty oils
- C11C1/04—Preparation of fatty acids from fats, fatty oils, or waxes; Refining the fatty acids from fats or fatty oils by hydrolysis
- C11C1/045—Preparation of fatty acids from fats, fatty oils, or waxes; Refining the fatty acids from fats or fatty oils by hydrolysis using enzymes or microorganisms, living or dead
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
- C11B—PRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
- C11B3/00—Refining fats or fatty oils
- C11B3/003—Refining fats or fatty oils by enzymes or microorganisms, living or dead
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12N9/20—Triglyceride splitting, e.g. by means of lipase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/22—Ribonucleases RNAses, DNAses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6432—Eicosapentaenoic acids [EPA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6436—Fatty acid esters
- C12P7/6445—Glycerides
- C12P7/6472—Glycerides containing polyunsaturated fatty acid [PUFA] residues, i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01003—Triacylglycerol lipase (3.1.1.3)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
[0001]本出願は、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれる、2015年12月30日出願の米国仮特許出願第62/272,833号明細書の出願日の利益を主張する。
[0002]本発明は、リパーゼ遺伝子をコードする核酸配列で形質転換された宿主細胞、ならびにリパーゼ遺伝子をコードする核酸配列で形質転換された宿主細胞を使用する方法に関する。リパーゼ遺伝子はその宿主細胞において発現されて、少なくとも1種類の長鎖多価不飽和脂肪酸を含むオイル中のトリアシルグリセロールのエステル結合を加水分解する能力が付与される。その宿主細胞を用いて、長鎖多価不飽和脂肪酸が豊富なオイル組成物の商業生産に有用であるように、十分な量のリパーゼを製造する。本発明はさらに、リパーゼ遺伝子をコードする核酸配列に関する。
[0003]オメガ−3脂肪酸などの長鎖多価不飽和脂肪酸(LC−PUFA)は、日常の生活および機能に不可欠である。例えば、血清トリグリセリドの低下に関する、シス−5,8,11,14,17−エイコサペンタエン酸(EPA)およびシス−4,7,10,13,16,19−ドコサヘキサエン酸(DHA)などのオメガ−3脂肪酸の有益な効果は、現在、十分に確立されている。これらの化合物は、他の心臓保護的利点についても知られている。実際に、アメリカ心臓協会(American Heart Association)も、オメガ−3脂肪酸が心血管および心疾患リスクを下げ得ることを報告している。LC−PUFAの他の利点は、炎症、神経変性疾患の予防および/または治療、および認知発達に関連する利点である。オメガ−3脂肪酸などのLC−PUFAが豊富な食事は、心疾患、癌、関節炎、アレルギー、および他の慢性疾患に有益な作用を有することも示されている。
[0007]ポリヌクレオチド配列を含む核酸分子で形質転換された宿主細胞であって、そのポリヌクレオチド配列が、オイル中のトリアシルグリセロールのエステル結合を加水分解するポリペプチドをコードする、宿主細胞、かかる宿主細胞を使用する方法、およびかかる宿主細胞を用いてリパーゼを生成するプロセスが本明細書において開示される。
[0012]添付の配列表に挙げられる核酸配列および推定アミノ酸翻訳配列は、37C.F.R§1.822で定義されるように、ヌクレオチド塩基およびアミノ酸の標準的な文字省略形を用いて示されている。DNA配列の場合には、それぞれの核酸配列の1つの鎖のみが示されているが、示される鎖を参照することによって、相補鎖が含まれると理解される。
[0016]本発明の特徴および利点は、以下の詳細な説明を読めば、当業者によってより容易に理解され得る。本発明の特定の特徴は、明確にするために上記および下記に記述され、個々の実施形態の文脈において、そのサブコンビネーションを形成するように組み合わせてもよいことは理解されよう。
[0024]配列同一性は、本明細書において、配列を比較することによって決定される、2つ以上のアミノ酸(ポリペプチドまたはタンパク質)配列または2つ以上の核酸(ポリヌクレオチド)配列との関係性として定義される。当技術分野において、「同一性」とは、場合により、かかる配列のストリング(string)間のマッチによって決定される、アミノ酸または核酸配列間の配列関連性の程度も意味する。2つのアミノ酸配列間の「類似性」は、アミノ酸配列および第2ポリペプチドの配列と、一方のポリペプチドのアミノ酸配列およびその保存アミノ酸置換を比較することによって決定される。「同一性」および「類似性」は、限定されないが、Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.,ed.,Oxford University Press,New York,1988;Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith,D.W.,ed.,Academic Press,New York,1993;Computer Analysis of Sequence Data,Part I,Griffin,A.M.,and Griffin,H.G.,eds.,Humana Press,New Jersey,1994;Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heine,G.,Academic Press,1987;およびSequence Analysis Primer,Gribskov,M.and Devereux,J.,eds.,M Stockton Press,New York,1991;およびCarillo,H.,and Lipman,D.,SIAM J.Applied Math.,48:1073(1988)に記載の方法を含む既知の方法によって容易に計算することができる。
[試験方法]
[0052]分光光度的活性アッセイ:リパーゼの活性を決定するために、37℃での分光光度的アッセイを用い、そのアッセイではp−ニトロフェニルエステルが加水分解される。形成されたp−ニトロフェノールによって生じる410nmでの吸光度の増加が測定され、酵素活性と相関する。1活性単位(U)は、用いられる条件下にてp−ニトロフェノール1μmol/分を生成する酵素の量として定義される。したがって、適切な希釈液中に100mM MOPSバッファー、pH7.5、0.24mM p−ニトロフェニルエステルおよびCFE38μl/mlを含有する反応混合物、ならびにCFEの代わりにバッファーを含有するブランクを用い、吸光度の変化を5分間記録した。このΔabs/分に基づいて、容量活性(U/ml、等式1参照)およびタンパク質特異的活性(U/mg総タンパク質、等式2)を計算することができる。可溶性タンパク質画分を含有するCFE(可溶性(Soluble))および総タンパク質を含有するCFE(総(Total))を測定した。最初の事例では、酪酸p−ニトロフェニル(pNPB)を基質として使用した。
[0055]タンパク質−MSシーケンシングによって、2つの市販のカンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼ、Amano AYおよびBioCataysts Lipomod 034におけるアイソフォームを測定した。5CRアイソフォームを見つけ、両方のリパーゼにおいて同定された2つの主要なアイソフォームはCR Lip1およびCR Lip3であった。5つのアイソフォームすべての遺伝子を作成し、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)における発現に関してDNA2.0(カリフォルニア州メンローパーク(Menlo Park,CA))によってコドン最適化した。培養上清への組換えリパーゼの分泌を可能にするサッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerevisiae)のα接合因子遺伝子に、リパーゼ遺伝子を融合した。天然タンパク質のエクスポートでα接合因子が切断された。1つはAOXプロモーター(pD912)を有し、もう1つはGAPプロモーター(pD915)を有する2種類の発現ベクターを作成し、個々にそれぞれが、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)ヘクローニングされた。pD912において、対象の遺伝子は下流で、かつα因子と融合して、クローニングされ、強いメタノール誘導性AOXプロモーターの制御下にある。pD915において、対象の遺伝子は下流で、かつα因子と融合してクローニングされ、中程度に強い構成的GAPプロモーターの制御下にある。pD912およびpD915の両方に関して、zeocinが選択マーカーであり、ピキア(Pichia)ゲノムに組み込まれると、大腸菌(E.coli)における増殖に必要なpUC開始点は除去された。DNA構築物のうちの10をDNA2.0(カリフォルニア州メンローパーク)によって作成し、DNA2.0によって作成された2つのベクターそれぞれで使用した。ポジティブコントロールも使用した(DNA2.0からのpJ912_クチナーゼ)。
[0056]
ピキア・パストリス(P.pastoris)の形質転換のために、多量のプラスミドDNAが必要である。DNA2.0によって作成されたDNAは大腸菌(E.coli)において増殖された。コンピテントセルを作成した。得られたストックをグリセロールストックに変換し、残りの培養物を使用して、プラスミドDNAを抽出した。
[0057]キアゲン社(Qiagen)からの標準プロトコル(「Qiagen Plasmid Midi Kitを使用したプラスミドDNAの精製」)を用いて、残りの培養物からのプラスミド−DNAの抽出を達成した。得られたプラスミドDNAを0.8%アガロースゲル上で分析し、DNA濃度を測定した。その結果を表1に示す。
[0058]プラスミド直鎖化:増殖され、したがってより多い量で利用可能なプラスミドは、直鎖化しなければならなかった(直鎖状DNAは、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)の形質転換に必要である)。直鎖化のために、以下の制限酵素が使用された:pD912−構築物には、SacIが使用され(インキュベーション温度37℃)、pD915−構築物には、SwaIが使用された(インキュベーション温度25℃)。
[0060]白金耳を使用して、グリセロールストックからのピキア・パストリス(Pichia pastoris)PPS9010細胞をYPD培地5mlに接種し、30℃および180rpmにて一晩インキュベートした。この培養物を使用して、新鮮YPD培地100mlをOD6000.15〜0.2に接種し、次いで、これを30℃および120rpmにてインキュベートした。OD600が1.3〜1.5に達したら、培養物を2本の50ml Falconチューブに満たし、500*gにて4℃で10分間遠心した。上清をデカントし、廃棄した。氷冷の滅菌、超純水50mlにペレットを再懸濁し、500*gにて4℃で5分間遠心した。この上清もデカントし、廃棄した。再び、氷冷の滅菌、超純水50mlにペレットを再懸濁し、500*gにて4℃で5分間遠心した。この上清もデカントし、廃棄した。次いで、この細胞を氷冷の滅菌1Mソルビトール20mlに再懸濁し、500*gにて4℃で5分間遠心した。再び、上清をデカントし、廃棄した。次いで、細胞を最後に、1Mソルビトール250μlに再懸濁した。
[0061]作成されたピキア(Pichia)コンピテント細胞を直鎖化プラスミドで形質転換し、上述のように大腸菌(E.coli)を使用してその量を増大した。ピキア(Pichia)コンピテント細胞100μlに、直鎖化プラスミド(2〜4μg)10μlを添加し、ギャップ2mmの電気穿孔キュベットに懸濁液を移した。細胞を氷上で5分間インキュベートし、1500V、200Ω、25μFで電気穿孔処理した。この混合物に、氷冷の1Mソルビトール1mlを添加し、混合物を30℃で1時間インキュベートした。次いで、混合物を1000*gで21℃にて5分間遠心し、上清をデカントした。上清の残りの液滴中にペレットを再懸濁した。200μg/mlのゼオシン(zeocin)を有するYPD培地5mlにそれぞれのコロニーを白金耳で移し、28℃および180rpmにて一晩インキュベートした。長期間貯蔵するために、培養液1mlを50%グリセロール0.5mlと混合し、室温で15分間振とうし、−80℃で貯蔵した。
[0062]トリブチリン寒天平板アッセイおよびSDS−PAGE分析をすべての試料で行い、試験されたすべてのクローンがトリブチリンに対する活性を示すこと、および予想されるリパーゼバンドが確認されることを検証した。培養物の活性は、基質としてp−NPDを用いて分光光度的活性アッセイによって測定された。試料のタンパク質含有量は、標準手順に従ってブラッドフォード(Bradford)試薬によって分析された。この結果から、CR Lip1クローンがリパーゼの高レベルの発現を有することが分かった。CR Lip5クローンのいずれについても、活性は検出されず、いくつかのCR Lip3クローンおよびCR Lip4クローンについては、中程度の活性が測定された。CR Lip2クローンの活性は一般に非常に低い。振とうフラスコ発現には、より一定の成長条件を受け、したがってより信頼できるデータを得られるように行う必要があった。
[0063]AOX−構築物の振とうフラスコ発現に関して、バッフルを備えた300mlフラスコ中のBMGY培地25mlに、グリセロールストックを用いて接種した。この前培養物を28℃で110rpmにて24時間インキュベートした。細胞を遠心(3000*g、5分、室温)することによって収集し、BMMY培地50mlに再懸濁し、バッフルおよび気泡プラグ(foam plug)を備えた1000mlフラスコに満たした。発現のために、培養物を28℃および110rpmにて96時間インキュベートした。誘導を維持するため、メタノール250μlを1日に1回添加した。96時間後、培養物を遠心し(3000*g、5分、4℃)、上清を別のチューブに移し、それを−20℃で保存した。
[0065]上述の分光光度的活性アッセイによって、培養物の上清の活性を測定した。基質として、p−NPD(p−ニトロフェニルデカノエート)を使用した。
[0067]比較のために、大腸菌(Escherichia coli)におけるリパーゼアイソフォームの発現も実施した。遺伝子構築物をDNA2.0から合成DNAとしてオーダーし、ネオマイシン耐性遺伝子を保持する発現ベクターにおいてクローニングし;対象の遺伝子は、pBADプロモーターを介してL−アラビノースによって誘導される。その結果を表4に示す。
[0068]魚油の加水分解について、実施例1に従って作成されたカンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼアイソフォームを試験するために、pH−スタット装置で滴定なしで40mlスケールにて、35℃での反応をセットアップした。Amanoから市販のカンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼAY−30(CRL11と呼ばれる)を比較用リパーゼとして使用した。CR Lip2およびCR Lip5の活性が乏しいため、CR Lip1、CR Lip3およびCR Lip4のみを使用した。魚油濃度は50%(v/v)であった。CR Lip1およびCR Lip4については、市販のリパーゼの0.1%(w/w)E/Sに相当する、8.6U(p−NPD活性に基づく)/魚油(g)を用いた。バッファーとして、50mM KPi(pH7.5)を使用した。酵素の量が少ないために、CR Lip3の酵素濃度は、6.8U/魚油(g)に制限され、CR Lip2の酵素濃度は、0.9U(市販のリパーゼの0.01%(w/w)E/Sに相当する)に制限された。
[0071]これらの実施例において、ゲオトリクム・カンジドゥム(Geotrichum candidum)由来のリパーゼ遺伝子をコードするポリヌクレオチド配列が同定され、上記の実施例1に記載のようにピキア・パストリス(Pichia pastoris)において発現された。Amanoから市販のカンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼAY−30(CRL11と呼ばれる)を比較用リパーゼとして使用した。
[実施形態1]
配列番号1、配列番号2、または配列番号3と少なくとも75%の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む核酸分子で形質転換された宿主細胞であって、前記ポリヌクレオチド配列が、少なくとも1種類の長鎖多価不飽和脂肪酸(LC−PUFA)を含むオイル中のトリアシルグリセロールのエステル結合を加水分解するポリペプチドをコードする、宿主細胞。
[実施形態2]
前記宿主細胞が、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)である、実施形態1に記載の宿主細胞。
[実施形態3]
前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号1、配列番号2、または配列番号3と75〜99%の同一性を有する、実施形態1または2に記載の宿主細胞。
[実施形態4]
前記ポリヌクレオチド配列が、リパーゼ遺伝子をコードする、実施形態1〜3のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態5]
前記ポリヌクレオチド配列が、カンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼ1遺伝子をコードする、実施形態1〜4のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態6]
前記ポリヌクレオチド配列が、カンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼ3遺伝子をコードする、実施形態1〜4のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態7]
前記ポリヌクレオチド配列が、ゲオトリクム・カンジドゥム(Geotrichum candidum)リパーゼ2遺伝子をコードする、実施形態1〜4のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態8]
前記長鎖多価不飽和脂肪酸が、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびそれらの組み合わせを含む、実施形態1〜7のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態9]
前記オイルが粗製または未精製オイルである、実施形態1〜8のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態10]
前記オイルが海産オイルである、実施形態1〜9のいずれか一項に記載の宿主細胞。
[実施形態11]
配列番号1、配列番号2、または配列番号3と少なくとも75%の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む核酸分子で形質転換された宿主細胞を使用する方法であって、前記ポリヌクレオチド配列が、少なくとも1種類の長鎖多価不飽和脂肪酸を含むオイル中のトリアシルグリセロールのエステル結合を加水分解するポリペプチドをコードする、方法。
[実施形態12]
前記宿主細胞が、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)である、実施形態11に記載の方法。
[実施形態13]
前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号1、配列番号2、または配列番号3と75〜99%の同一性を有する、実施形態11または12に記載の方法。
[実施形態14]
前記ポリヌクレオチド配列が、リパーゼ遺伝子をコードする、実施形態11〜13のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態15]
前記ポリヌクレオチド配列が、カンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼ1遺伝子をコードする、実施形態11〜14のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態16]
前記ポリヌクレオチド配列が、カンジダ・ルゴサ(Candida rugosa)リパーゼ3遺伝子をコードする、実施形態11〜14のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態17]
前記ポリヌクレオチド配列が、ゲオトリクム・カンジドゥム(Geotrichum candidum)リパーゼ2遺伝子をコードする、実施形態11〜14のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態18]
前記長鎖多価不飽和脂肪酸が、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびそれらの組み合わせを含む、実施形態11〜17のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態19]
前記オイルが粗製または未精製オイルである、実施形態11〜18のいずれか一項に記載の方法。
[実施形態20]
前記オイルが海産オイルである、実施形態11〜19のいずれか一項に記載の方法。
Claims (7)
- 配列番号2と少なくとも90%の同一性を有するポリヌクレオチド配列を含む核酸分子で形質転換された宿主細胞であって、前記ポリヌクレオチド配列が、少なくとも1種類の長鎖多価不飽和脂肪酸(LC−PUFA)を含むオイル中のトリアシルグリセロールのエステル結合を加水分解するポリペプチドをコードする、宿主細胞。
- 前記宿主細胞が、ピキア・パストリス(Pichia pastoris)である、請求項1に記載の宿主細胞。
- 前記ポリヌクレオチド配列が、配列番号2と90〜99%の同一性を有する、請求項1または2に記載の宿主細胞。
- 前記ポリヌクレオチド配列が、リパーゼ遺伝子をコードする、請求項1〜3のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 前記長鎖多価不飽和脂肪酸が、エイコサペンタエン酸(EPA)、ドコサヘキサエン酸(DHA)、およびそれらの組み合わせを含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 前記オイルが粗製または未精製オイルである、請求項1〜5のいずれか一項に記載の宿主細胞。
- 前記オイルが海産オイルである、請求項1〜6のいずれか一項に記載の宿主細胞。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562272833P | 2015-12-30 | 2015-12-30 | |
US62/272,833 | 2015-12-30 | ||
JP2018534126A JP2019500041A (ja) | 2015-12-30 | 2016-12-29 | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018534126A Division JP2019500041A (ja) | 2015-12-30 | 2016-12-29 | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022001062A true JP2022001062A (ja) | 2022-01-06 |
Family
ID=57838437
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018534126A Pending JP2019500041A (ja) | 2015-12-30 | 2016-12-29 | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 |
JP2021159781A Pending JP2022001062A (ja) | 2015-12-30 | 2021-09-29 | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018534126A Pending JP2019500041A (ja) | 2015-12-30 | 2016-12-29 | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11441099B2 (ja) |
EP (1) | EP3397759A2 (ja) |
JP (2) | JP2019500041A (ja) |
KR (1) | KR20180097745A (ja) |
CN (1) | CN109153979A (ja) |
BR (1) | BR112018013376A2 (ja) |
CA (1) | CA3010288A1 (ja) |
WO (1) | WO2017115323A2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110982804B (zh) * | 2019-12-26 | 2020-10-02 | 中国海洋大学 | 一种脂肪酶及其在获得富集dha甘油酯中的应用 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001508758A (ja) * | 1996-02-01 | 2001-07-03 | ノース・アメリカン・バクシーン・インコーポレイテッド | グループbナイセリア・メニンギチジス外膜(mb3)タンパク質の酵母からの発現およびワクチン |
EP1130100A1 (en) * | 2000-02-14 | 2001-09-05 | Unilever N.V. | Modified lipolytic enzymes and their use |
CN1366056A (zh) * | 2001-01-15 | 2002-08-28 | 广州市绿巨人生物环保技术有限公司 | 脂肪酶基因序列及其在酵母中的应用 |
KR101464437B1 (ko) * | 2013-06-19 | 2014-11-27 | 한국생명공학연구원 | 재조합 단백질의 효율적인 분비를 위한 코돈 최적화 |
US20150118260A1 (en) * | 2012-03-29 | 2015-04-30 | The General Hospital Corporation | Recombinant Cytotoxic T-Lymphocyte-Associated Protein 4 (CTLA4) |
WO2015087833A1 (ja) * | 2013-12-10 | 2015-06-18 | 天野エンザイム株式会社 | 改変型リパーゼ及びその用途 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2679920A1 (fr) | 1991-08-02 | 1993-02-05 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Levures recombinantes hautement stables pour la production de proteines recombinantes, leur preparation et leur utilisation. |
DE69432543T2 (de) | 1993-07-23 | 2003-12-24 | Dsm N.V., Te Heerlen | Selektionmarker-genfreie rekombinante Stämme: Verfahren zur ihrer Herstellung und die Verwendung dieser Stämme |
AU7642298A (en) | 1997-04-11 | 1998-11-11 | Gist-Brocades B.V. | Gene conversion as a tool for the construction of recombinant industrial filamentous fungi |
KR100648480B1 (ko) | 1998-05-19 | 2006-11-24 | 디에스엠 아이피 어셋츠 비.브이. | 세팔로스포린의 개선된 생체내 생산 |
AU3042600A (en) | 1998-12-22 | 2000-07-12 | Dsm N.V. | Improved (in vivo) production of cephalosporins |
WO2013043641A1 (en) * | 2011-09-21 | 2013-03-28 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Method for enrichment of eicosapentaenoic acid and docosahexaenoic acid in source oils |
CN104726477B (zh) * | 2013-12-23 | 2018-02-13 | 中国农业大学 | 一种脂肪酶编码基因及其工程菌株 |
-
2016
- 2016-12-29 US US16/066,603 patent/US11441099B2/en active Active
- 2016-12-29 JP JP2018534126A patent/JP2019500041A/ja active Pending
- 2016-12-29 KR KR1020187021742A patent/KR20180097745A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-12-29 CA CA3010288A patent/CA3010288A1/en active Pending
- 2016-12-29 EP EP16828787.8A patent/EP3397759A2/en active Pending
- 2016-12-29 CN CN201680082799.0A patent/CN109153979A/zh active Pending
- 2016-12-29 BR BR112018013376A patent/BR112018013376A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2016-12-29 WO PCT/IB2016/058087 patent/WO2017115323A2/en active Application Filing
-
2021
- 2021-09-29 JP JP2021159781A patent/JP2022001062A/ja active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2001508758A (ja) * | 1996-02-01 | 2001-07-03 | ノース・アメリカン・バクシーン・インコーポレイテッド | グループbナイセリア・メニンギチジス外膜(mb3)タンパク質の酵母からの発現およびワクチン |
EP1130100A1 (en) * | 2000-02-14 | 2001-09-05 | Unilever N.V. | Modified lipolytic enzymes and their use |
CN1366056A (zh) * | 2001-01-15 | 2002-08-28 | 广州市绿巨人生物环保技术有限公司 | 脂肪酶基因序列及其在酵母中的应用 |
US20150118260A1 (en) * | 2012-03-29 | 2015-04-30 | The General Hospital Corporation | Recombinant Cytotoxic T-Lymphocyte-Associated Protein 4 (CTLA4) |
KR101464437B1 (ko) * | 2013-06-19 | 2014-11-27 | 한국생명공학연구원 | 재조합 단백질의 효율적인 분비를 위한 코돈 최적화 |
WO2015087833A1 (ja) * | 2013-12-10 | 2015-06-18 | 天野エンザイム株式会社 | 改変型リパーゼ及びその用途 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
GENE, vol. 124, JPN6022051034, 1993, pages 45 - 55, ISSN: 0005113855 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20210207060A1 (en) | 2021-07-08 |
US11441099B2 (en) | 2022-09-13 |
WO2017115323A2 (en) | 2017-07-06 |
CA3010288A1 (en) | 2017-07-06 |
KR20180097745A (ko) | 2018-08-31 |
JP2019500041A (ja) | 2019-01-10 |
WO2017115323A3 (en) | 2017-08-10 |
EP3397759A2 (en) | 2018-11-07 |
CN109153979A (zh) | 2019-01-04 |
BR112018013376A2 (pt) | 2018-12-18 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2022046487A (ja) | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 | |
Ahmad et al. | Altered lipid composition and enhanced lipid production in green microalga by introduction of brassica diacylglycerol acyltransferase 2 | |
DK1620543T3 (en) | PREPARATION OF POLYUM Saturated FAT ACIDS IN OIL Yeast | |
JP2007532104A (ja) | ウルケニア(Ulkenia)由来のPUFA−PKS遺伝子 | |
WO2011023009A1 (en) | Recombinant expression of carboxylesterases | |
JP2022001062A (ja) | トリアシルグリセロールの部分的酵素加水分解 | |
WO2008000277A2 (en) | Metabolically engineered fungal cells with increased content of polyunsaturated fatty acids | |
WO2019219903A2 (en) | Mutant lipase and use thereof | |
CN107384979B (zh) | 高渗透压甘油蛋白激酶基因RKHog1的用途 | |
US20230250406A1 (en) | Mutant lipase and use thereof | |
JP2003116566A (ja) | n−3系ドコサペンタエン酸の製造方法 | |
Farmani et al. | Cell surface display of Propionibacterium acnes linoleic acid isomerase by Pichia pastoris | |
US7892792B2 (en) | Cells expressing Pichia cytochrome C | |
Okuda | Biochemical analysis and molecular breeding of oleaginous microorganisms for ω3 polyunsaturated fatty acid production | |
Okuda | Biochemical analysis and molecular breeding of oleaginous | |
JP2017149662A (ja) | 藻類に貯蔵される油脂の蓄積量を増大させるペプチドおよびその使用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20211006 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221206 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230303 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230501 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20230725 |