JP2021522780A - 拮抗性ｃｄ７３抗体 - Google Patents

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Abstract

本発明は、ＣＤ７３に対する新規拮抗性抗体に関する。本発明は、また、斯かる抗体分子をコードする核酸；斯かる抗体分子を調製するための方法；斯かる抗体分子を発現するまたはこれを発現することができる宿主細胞；斯かる抗体分子を含む組成物；および特に、がん疾患の分野における治療目的のための、斯かる抗体分子または斯かる組成物の使用に関する。

Description

本発明は、新規ＣＤ７３結合ポリペプチドに関する。本発明は、また、斯かるポリペプチドをコードする核酸；斯かるポリペプチドを調製するための方法；斯かるポリペプチドを発現するまたはこれを発現することができる宿主細胞；斯かるポリペプチドを含む組成物；および特に、がん疾患の分野における治療目的のための、斯かるポリペプチドまたは斯かる組成物の使用にも関する。
がんは、体全体に拡散する潜在力を有する異常な細胞成長によって特徴付けられる疾患である。先進国の世界では、がんは、２番目に多い死因である。男性のがんの最も一般的な型は、肺がん、前立腺がん、結腸直腸がんおよび胃がんであり、女性では、最も一般的な型は、乳がん、結腸直腸がん、肺がんおよび子宮頸部がんである。生存の見込みは、主に、がんの型および同定時のステージに左右されるが、肺がんに関して、１０年全生存率は、５％前後である。
これまで、最も高頻度に用いられるがん処置手段は、外科手術、放射線処置、または化学療法薬の使用によるものであった。しかし、近年、がん免疫療法が、腫瘍学のための処置モダリティとして非常に有望であることを示した。
がん免疫療法は、がんを攻撃するように免疫系が活性化される、腫瘍学の一部門であり、これは、腫瘍が直接的に切除または処置される、現存する一般的な処置方法とは全く対照的である。この治療概念は、Ｔ細胞の免疫機能を阻害するように作用する、Ｔ細胞の表面における多数のタンパク質の同定に基づく。免疫療法は、斯かる阻害分子を遮断して免疫系の活性を増加させる、または免疫エフェクター細胞の活性化に関与する経路を刺激する。このようなタンパク質の中でも、ＣＤ７３およびＰＤ−１が収載されている。
エクト−５’−ヌクレオチダーゼ（エクト−５’ＮＴ、ＥＣ３．１．３．５）としても公知である、表面抗原分類７３（ＣＤ７３）は、大部分の組織に見出されるが、特に、内皮細胞および造血系細胞のサブセットにおいて発現される、グリコシル−ホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）連結細胞表面酵素である（Resta et al., Immunol Rev 1998; 161:95-109およびColgan et al., Purinergic Signal 2006; 2:351-60）。
ＣＤ７３は、ＡＭＰをアデノシンおよび無機リン酸塩に変換する、がん細胞、間質細胞、および腫瘍に存在する免疫細胞の表面に発現される細胞表面酵素である。アデノシンは、免疫抑制性であり、いくつかの免疫細胞型の機能に影響を与える能力を有する。アデノシンは、調節性Ｔ細胞、ＭＤＳＣおよびＭ２マクロファージ等の免疫抑制性細胞に活性化効果を有し、樹状細胞、エフェクターＴ細胞およびＮＫ細胞等のエフェクター細胞に阻害効果を有する。中和ＣＤ７３抗体は、酵素活性を遮断するおよび／またはＣＤ７３細胞表面レベルを低下させることにより、ＣＤ７３の機能を阻害することができる。これにより、免疫抑制性アデノシンの低下、よって、Ｔ細胞活性の増加がもたらされるであろう。
ＣＤ７３および免疫チェックポイント（ＰＤ１および潜在的にその他を含む）の二重遮断は、Ｔ細胞機能性をさらに回復し、ＰＤ１単独療法と比較して、がん患者における改善された客観的応答および全生存期間の延長をもたらすであろう。
ＣＤ７３は、結腸、肺、膵臓、卵巣、膀胱を含む多くの異なるがん、白血病、神経膠腫、神経膠芽腫、黒色腫、甲状腺、食道、前立腺および乳がんの表面に発現されることが報告された（Jin et al., Cancer Res 2010; 70:2245-55およびStagg et al., PNAS 2010; 107:1547-52）。さらに、がんにおけるＣＤ７３発現は、多数の腫瘍徴候、とりわけ、胃腸管、乳房およびＮＳＣＬＣ腫瘍におけるより短い全生存期間に相関した（Wang et al., Prognostic value of CD73-adenosinergic pathway in solid tumor: A meta-analysis and systematic review, Oncotarget 2017；Inoue et al., Prognostic impact of CD73 and A2A adenosine receptor expression in non-small-cell lung cancer, Oncotarget 2017）。ＣＤ７３活性もまた、乳頭状甲状腺癌における予後マーカーとして提唱された。免疫抑制性アデノシンを生成することにより、ＣＤ７３は、免疫細胞における広汎な機能を有し、腫瘍内に免疫抑制性微小環境を作成する。アデノシンは、増殖、細胞傷害性およびサイトカイン産生等のＴ細胞応答を強力に抑制する。加えて、アデノシンは、樹状細胞の分化を変更し、これにより、Ｔ細胞応答を損なう。アデノシンはまた、ＮＫ細胞にも作用し、その細胞傷害性機能の阻害をもたらす。さらに、アデノシンは、免疫抑制性細胞型に刺激性の役割を有する。アデノシンは、免疫抑制性ＭＤＳＣの増大化およびマクロファージから抑制性Ｍ２表現型への分化をもたらす（Antonioli et al., Immunity, inflammation and cancer: a leading role for adenosine. Nature Reviews Cancer 2013；Beavis et al., CD73: A potent suppressor of antitumor immune responses, Trends in Immunology, 2012）。免疫細胞におけるその効果に加えて、ＣＤ７３は、細胞−細胞および細胞−マトリックス相互作用ならびに血管新生の調節における役割を有することができる。アデノシンは、がん細胞に直接的に作用し、細胞成長と共にアポトーシスを調節することもでき、薬物抵抗性に関係付けられる（Hunsucker et al., Pharmacol Ther 2005; 1:1-30）。よって、ＣＤ７３は、直接的および間接的の両方でがん進行を調節することができ、このことは、新規治療標的としてのその潜在力に光を当てる。Ａｌｌａｒｄらは、ＣＤ７３の標的化が、抗ＰＤ−１および抗ＣＴＬＡ−４ ｍＡｂの抗腫瘍活性を増強することを報告した（Clin Cancer Res 2013; 19:5626）。
同じ経路を標的とする他の薬剤は、Ａ２ＡＲアンタゴニストを含む。しかし、アデノシン受容体冗長性のため、Ａ２ＡＲアンタゴニストは、ＣＤ７３阻害剤と比べてアデノシン媒介性活性を完全には防止できないことが予想され得る。
非加水分解性ＡＤＰ−アナログアデノシン５’−（アルファ，ベータ−メチレン）二リン酸塩（ＡＰＣＰ）は、ＣＤ７３酵素活性の阻害剤であり、市販されている。ＡＢ４２１は、Ａｒｃｕｓ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓによって開発された小分子ＣＤ７３阻害剤である。
国際公開第２０１６／０７５０９９号は、ＭＥＤＩ９４４７抗体を含む、抗ＣＤ７３結合分子、例えば、抗体およびその抗原結合断片を開示する。ＭＥＤＩ９４４７は、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を加水分解するＣＤ７３の酵素活性を阻害し、ＣＤ７３の内部移行を誘導することにより、ＣＤ７３機能を低下させる。
国際公開第２０１６／０８１７４８号は、ＢＭＳ９８６１７９抗体を含む、ヒトＣＤ７３の酵素活性を阻害する抗体、およびＣＤ７３を細胞に内部移行させる抗体を開示する。
本発明の目的は、いくつかのがん疾患の処置において使用することができる、改善された薬理学的に活性な薬剤を提供することである。
特に、本発明の目的は、現在使用されているおよび／または当技術分野で公知の薬剤、組成物および／または方法と比較してある特定の利点を提供する、斯かる薬理学的に活性な薬剤、組成物および／または処置方法を提供することである。このような利点は、特に、当技術分野で既に公知の候補薬物と比較して、ｉｎ ｖｉｖｏ有効性、改善された治療および薬理学的特性、より少ない副作用、ならびに改善された調製の容易さまたは低下された物品費用等、他の有利な特性を含む。
第１の態様において、抗ＣＤ７３抗体分子が提供される。本明細書にさらに記載されている通り、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、他の抗ＣＤ７３抗体を上回る、驚くべきかつ有利な特性を有する。例えば、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、ＡＭＰ媒介性Ｔ細胞抑制を復帰させる改善された能力を示す（例えば、より高いＴ細胞増殖レベルおよびより強いＩＦＮγ分泌誘導によって実証される通り）。ＩＦＮγは、Ｔ細胞によって媒介される抗腫瘍応答のための決定的な因子であることが公知である（Tannenbaum, C., and Hamilton, T. Immune-inflammatory mechanisms in IFNγ-mediated anti-tumor activity, Seminars in Cancer Biology, 2000）。さらに、本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体は、先行技術の抗ＣＤ７３抗体と比較して、ＣＤ７３の改善された阻害を示す。本発明の抗体は、細胞に結合したＣＤ７３と共に細胞に結合していないＣＤ７３を等しく十分に阻害する。本発明の抗ＣＤ７３抗体は、参照抗ＣＤ７３抗体と比較して、アデノシン生成の改善された阻害を示す。さらに、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、ヒトＣＤ７３に対する高い親和性を有する。
抗ＣＤ７３抗体分子をコードする核酸分子、発現ベクター、宿主細胞、および本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を作製する方法も提供される。本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を含む医薬組成物も提供される。本明細書に開示されている抗ＣＤ７３抗体分子を使用して、固形および軟部組織腫瘍を含むがん性障害を処置することができる。
より具体的には、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、
（ａ）配列番号２５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号２７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号２８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号２９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｂ）配列番号３１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号３４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号３５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｃ）配列番号３７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｄ）配列番号４３（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号４４（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号４５（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４６（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４７（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４８（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｅ）配列番号４９（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５０（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５１（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５２（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５３（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号５４（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｆ）配列番号５５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｇ）配列番号６１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号６４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号６５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｈ）配列番号６７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号７０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号７１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号７２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
を含む。
本発明のさらなる態様において、がんの処置のための方法も提供される。一実施形態では、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、ＰＤ−１アンタゴニスト等の第２の治療剤と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニスト等の前記第２の治療剤は、抗ＣＤ７３抗体分子と同時に、共に、逐次に、連続的に、代替的にまたは別々に投与されるべきである。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤＬ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である。
本発明のこれらの態様のさらなる実施形態は、本発明の抗体分子の前記使用を第３の治療剤と組み合わせることができる場合を含む。
本発明の抗体分子が関与するさらなる態様、実施形態、使用および方法は、本発明の次の詳細な説明、および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
本発明は、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、ＮＳＣＬＣ）、様々な胃腸管がん（例えば、結腸癌、胃がん、肝細胞癌）および腎臓がん（例えば、明細胞癌等の腎細胞がん）を含むいくつかのがん型のより効率的な処置を可能にする新規抗体分子を提供する。
樹状細胞／Ｔ細胞共培養。データ（実施例７にさらに記載されている通り）は、ＡＭＰが、樹状／Ｔ細胞共培養アッセイにおいて抗ＰＤ１応答を阻害し、抗ＣＤ７３抗体処置が、このＡＭＰ媒介性阻害の反転をもたらすことを説明する。 抗ＣＤ７３抗体およびＣＤ７３の複合体形成。ＣＤ７３および２種の抗ＣＤ７３抗体の複合体のオリゴマー状態の評価が描写されている（実施例９に記載されている通り）。本発明に係る抗ＣＤ７３抗体分子は、２：２オリゴマー等の定義されたサイズで可溶性ＣＤ７３と抗原−抗体複合体を形成する。これらの複合体は、「ＭＥＤＩ９４４７」等、当技術分野で公知の他のＣＤ７３抗体によって形成された複合体と比較してより小さい。 抗ＣＤ７３抗体−ＣＤ７３結晶の結晶構造：（Ａ）本発明の抗ＣＤ７３抗体のＦａｂ断片の、ＣＤ７３におけるその立体構造エピトープへの結合が描写されている。本発明に関する抗ＣＤ７３抗体のＦａｂ断片によって接触されるおよび／または特異的に結合される残基は、黒色で描写されている；Ｆａｂ断片のＶHは、暗灰色に着色されており、ＶLは薄灰色に着色されている。（Ｂ）本発明に関する抗体によって特異的に結合される、（Ａ）において黒色で示す立体構造エピトープの拡大；立体構造エピトープに含まれるＣＤ７３のアミノ酸残基は、３文字アミノ酸暗号を使用して標識されている；（Ｃ）（Ａ）に描写されている立体構造エピトープに接触および／または特異的に結合する、（Ａ）に示す本発明に関する抗体のＦａｂ断片のパラトープに寄与する、本発明に関する抗体の重（Ｈ）および軽（Ｌ）鎖のアミノ酸残基；ＣＤ７３における立体構造エピトープに接触および／または特異的に結合するアミノ酸残基は、３文字アミノ酸暗号を使用して標識されており、（Ｈ）および（Ｌ）は、重および軽鎖アミノ酸残基を示す。 ヒトＴ細胞アッセイにおけるＩＦＮγ放出：刺激された初代ヒトＴ細胞を、ある範囲のαＣＤ７３抗体濃度で処置し、続いて、ＡＭＰを添加した。増殖の誘導およびＩＦＮγの放出を測定した。実施例６に概要を述べる通りにアッセイを行った。
＜定義＞
本発明の上述および他の態様および実施形態は、本明細書におけるさらなる記載から明らかになるであろう。
他に指示または規定がなければ、使用されているあらゆる用語は、当業者には明らかとなるであろう、当技術分野におけるその通常の意義を有する。例えば、Sambrook et al, ”Molecular Cloning: A Laboratory Manual” (2nd Ed.), VoIs. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)；Lewin, ”Genes IV”, Oxford University Press, New York, (1990)およびRoitt et al., ”Immunology” (2nd Ed.), Gower Medical Publishing, London, New York (1989)等の標準ハンドブック、ならびに本明細書に引用されている一般的背景技術について参照が為される。さらに、他に指示がなければ、特に詳細に記載されていないあらゆる方法、ステップ、技法および操作は、当業者には明らかとなるであろうが、それ自体が公知である様式で行うことができ、行われてきた。例えば、重ねて記述するが、標準ハンドブック、上に参照されている一般的背景技術、およびその中で引用されているさらに別の参考文献について参照が為される。
本明細書において、冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、当該冠詞の文法上の目的語の１つまたは２つ以上（例えば、少なくとも１つ）を指す。本明細書で使用される場合、用語「を含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、ならびに「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」および「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」等のその変種は、それぞれ用語「を含有している（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ）」または「を含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」または「を有している（ｈａｖｉｎｇ）」または「を有する（ｈａｓ）」に置換することができ、その逆もまた同じである。
「抗体分子」または「抗体」（本明細書で同義に使用される）は、脊椎動物の血液または他の生体液中に見出すことができるガンマグロブリンタンパク質であり、免疫系によって、細菌およびウイルス等の異物を同定および中和するために使用される。これは、典型的に、基礎的構造単位（それぞれ、２本の大型の重鎖および２本の小型の軽鎖を有する）でできており、例えば、１単位による単量体、２単位による二量体または５単位による五量体を形成する。抗体分子は、非共有結合的相互作用によって、抗原として公知の他の分子または構造に結合することができる。この結合は、抗体分子が、高い親和性で特異的な構造のみに結合するであろうという意味で特異的である。抗体分子によって認識される抗原の特有の部分は、エピトープまたは抗原決定基と呼ばれる。エピトープに結合する抗体分子の部分は、パラトープと呼ばれる場合があり、これは、抗原との特異的相互作用をもたらす抗体構造内の分子決定基であり；ＣＤＲで構成されたいわゆる可変ドメイン、または抗体の可変領域（Ｆｖ）である。パラトープは、完全にまたは部分的に、所与の抗体の重鎖、軽鎖または重および軽鎖の両方のＣＤＲを含むことができる。可変ドメインは、フレームワーク領域（ＦＲ）によって隔てられた３個のいわゆる相補性（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙ）決定領域（ＣＤＲ）を含む。
用語「相補性決定領域」および「ＣＤＲ」は、抗原特異性および結合親和性を付与する、抗体可変領域内のアミノ酸の非近接配列を指すことが当技術分野で公知である。一般に、各重鎖可変領域における三（３）個のＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、ＣＤＲ−Ｈ３）および各軽鎖可変領域における三（３）個のＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３）が存在する。
所与のＣＤＲのアミノ酸配列境界は、Kabat et al. (1991), ”Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.（「Ｋａｂａｔ」ナンバリングスキーム）、Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273, 927-948（「Ｃｈｏｔｈｉａ」ナンバリングスキーム）、MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), ”Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745（「接触」ナンバリングスキーム）、Lefranc M P et al., ”IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 January; 27(1):55-77（「ＩＭＧＴ」または「ＣＣＧ」ナンバリングスキーム）およびHonegger A and Pltickthun A, ”Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun. 8; 309(3):657-70（ＡＨｏナンバリングスキーム）に記載されているスキームを含む、多数の公知スキームのいずれかを使用して決定することができる。
所与のＣＤＲの境界は、命名規則に応じて変動し得る。ＣＤＲおよびＦＲに割り当てられるアミノ酸位置は、例えば、Ｋａｂａｔのナンバリング方式に従って定義することができ、それによると、ＶＨフレームワーク領域（ＦＲ）およびＣＤＲは、次の通りに位置する：残基１〜３０（ＦＲ１）、３１〜３５（ＣＤＲ１）、３６〜４９（ＦＲ２）、５０〜６５（ＣＤＲ２）、６６〜９４（ＦＲ３）、９５〜１０２（ＣＤＲ３）および１０３〜１１３（ＦＲ４）。また、Ｋａｂａｔのナンバリング方式に従って、ＶＬ ＦＲおよびＣＤＲは、次の通りに位置する：残基１〜２３（ＦＲ１）、２４〜３４（ＣＤＲ１）、３５〜４９（ＦＲ２）、５０〜５６（ＣＤＲ２）、５７〜８８（ＦＲ３）、８９〜９７（ＣＤＲ３）および９８〜１０７（ＦＲ４）。
その代わりに、いかなる抗原受容体、鎖型または種であろうとも、可変ドメインを比較するために、ＩＭＧＴまたはＣＣＧ特有ナンバリングが定義された（Lefranc, M.-P., Pommie, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, G., ”IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains” Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)）。ＩＭＧＴ特有ナンバリングにおいて、保存されたアミノ酸は常に、同じ位置、例えば、システイン２３（第１のＣＹＳ）、トリプトファン４１（保存されたＴＲＰ）、疎水性アミノ酸８９、システイン１０４（第２のＣＹＳ）、フェニルアラニンまたはトリプトファン１１８（Ｊ−ＰＨＥまたはＪ−ＴＲＰ）を有する。ＩＭＧＴ特有ナンバリングは、フレームワーク領域（ＦＲ１−ＩＭＧＴ：位置１〜２６、ＦＲ２−ＩＭＧＴ：３９〜５５、ＦＲ３−ＩＭＧＴ：６６〜１０４およびＦＲ４−ＩＭＧＴ：１１８〜１２８）ならびに相補性決定領域：ＣＤＲ１−ＩＭＧＴ：２７〜３８、ＣＤＲ２−ＩＭＧＴ：５６〜６５およびＣＤＲ３−ＩＭＧＴ：１０５〜１１７の標準化された境界画定を提供する。
本発明の文脈内で、ＣＤＲの参照は、ＣＣＧ／ＩＭＧＴ規則の定義に基づくが、本開示は、いずれか１種のナンバリング方式によって定義されるＦＲおよびＣＤＲに限定されるものではなく、上に記述されている方式を含むあらゆるナンバリング方式を含む。
よって、他に指定がなければ、所与の抗体または可変領域等のその領域の「ＣＤＲ」および「相補性決定領域」という用語と共に、抗体またはその領域の個々のＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２）およびフレームワーク領域（ＦＲ）は、本明細書の上に記載されている公知スキームのいずれかによって定義されるそれぞれの領域（例えば、相補性決定領域）を包含すると理解するべきである。場合によっては、Ｋａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＩＭＧＴ、ＡＨＯまたは当技術分野で公知の他の方法によって定義されるＣＤＲ等、特定の１つまたは複数のＣＤＲの同定のためのスキームが指定される。他の事例では、ＣＤＲの特定のアミノ酸配列が示される。
一部の実施形態では、抗体分子は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥの重鎖定常領域から選ばれる；特に、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の（例えば、ヒト）重鎖定常領域から選ばれる重鎖定常領域を有する。別の実施形態では、抗体分子は、例えば、カッパーまたはラムダの（例えば、ヒト）軽鎖定常領域から選ばれる軽鎖定常領域を有する。定常領域は、抗体の特性を改変するように（例えば、Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能および／または補体機能のうち１種または複数を増加または減少させるように）変更、例えば、突然変異させることができる。一部の実施形態では、抗体は、エフェクター機能を有し、補体を固定することができる。他の実施形態では、抗体は、エフェクター細胞をリクルートしない、または補体を固定しない。ある特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ受容体に結合する能力が低下しているまたは能力が全くない。例えば、抗体は、Ｆｃ受容体への結合を支持しない、アイソタイプもしくはサブタイプ、断片または他の突然変異体となることができ、例えば、突然変異誘発または欠失されたＦｃ受容体結合領域を有する。
抗体定常領域は、一部の実施形態では、変更される。抗体定常領域を変更するための方法は、当技術分野で公知である。変更された機能、例えば、細胞表面のＦｃＲまたは補体のＣ１成分等のエフェクターリガンドに対する変更された親和性を有する抗体は、抗体の定常部分における少なくとも１個のアミノ酸残基を異なる残基に置き換えることにより産生することができる（例えば、これら全ての内容がこれにより参照により本明細書に組み込まれる、欧州特許出願公開第３８８，１５１号、米国特許第５，６２４，８２１号および米国特許第５，６４８，２６０号を参照）。マウスまたは他の種の免疫グロブリンに適用された場合に、これらの機能を低下または排除するであろう、同様の種類の変更が記載され得る。一実施形態では、抗体は、本明細書に記載されている例示的な抗体の実際のナンバリングにおける位置Ｌ２３２ＡおよびＬ２３３Ａに対応する、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異（Ｋａｂａｔ命名法）を含む。一実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１である。
本発明のポリペプチドは、改変されたＮ末端配列、例えば、Ｎ末端アミノ酸のうち１個もしくは複数の欠失、または例えば、最初のＮ末端アミノ酸の（例えば、グルタミン酸からアラニンへの）交換を為して、ある特定の発現系（特異的ベクターまたは宿主細胞等）を使用することにより発現されるように、または封入体としてもしくは可溶性形態で発現されるように、または培地もしくは細胞膜周辺腔へと分泌されるように、または細胞内に含有されるように、またはより均質な産物を得るように、分子を最適化することができる。本発明のポリペプチドは、例えば、斯かるポリペプチドの安定性をさらに増強するまたは免疫原性を低下させるために、例えば、国際公開第２０１２／１７５７４１号、国際公開第２０１１／０７５８６１号または国際公開第２０１３／０２４０５９号に説明される通り、Ｃ末端部分またはフレームワーク領域のいずれかの内の他の定義された位置における追加的なアラニンおよび／またはさらに別のアミノ酸交換もしくは欠失等、改変されたＣ末端配列を有することができる。
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、本明細書において、互換的に、それぞれ「フレームワーク領域１」または「ＦＲ１」；「フレームワーク領域２」または「ＦＲ２」；「フレームワーク領域３」または「ＦＲ３」；および「フレームワーク領域４」または「ＦＲ４」と当技術分野および下文において称される４個の「フレームワーク領域」から本質的になる抗体分子の領域を意味し；このフレームワーク領域は、それぞれ「相補性決定領域１」または「ＣＤＲ１」；「相補性決定領域２」または「ＣＤＲ２」；および「相補性決定領域３」または「ＣＤＲ３」と当技術分野および下文において称される３個の「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」によって中断される。よって、免疫グロブリン可変ドメインの一般構造または配列は、次の通りに示すことができる：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。これは、抗原結合部位を保有することにより、抗原に対し抗体に特異性を付与する免疫グロブリン可変ドメインである。
用語「可変重（またはＶＨ）」および「可変軽（またはＶＬ）」は、抗体分子のそれぞれ重または軽鎖由来の可変ドメインを指す。
したがって、それぞれ、重鎖（ＨＣ）のＣＤＲは、「ＨＣＤＲ」と名付けられ、軽鎖（ＬＣ）のＣＤＲは、「ＬＣＤＲ」と名付けられる。
当技術分野は、抗体分子をさらに開発し、これを医学および技術における多用途ツールにした。よって、本発明の文脈において、用語「抗体分子」または「抗体」は、例えば、２本の軽鎖および２本の重鎖を含む自然界に見出すことができるような抗体を含むだけではなく、さらに、抗原に対する結合特異性および抗体分子の可変ドメインに対する構造的類似性を有する少なくとも１個のパラトープを含むあらゆる分子を包含する。
よって、本発明に係る抗体分子は、モノクローナル抗体、ヒト抗体またはヒト化抗体を含む。
キメラ抗体、抗体の断片、特に、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）2断片、単鎖抗体、特に、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、小モジュラー免疫医薬（Ｓｍａｌｌ Ｍｏｄｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）（ＳＭＩＰ）、ドメイン抗体、ナノボディ、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）も考慮される。
モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、アミノ酸配列が同一である単一特異性抗体である。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術によって、特異的抗体産生Ｂ細胞と骨髄腫（Ｂ細胞がん）細胞との融合体のクローンを表すハイブリッド細胞株（ハイブリドーマと呼ばれる）から産生することができる（Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975;256:495-7.）。その代わりに、モノクローナル抗体は、宿主細胞における組換え発現によって産生することができる（Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). ”Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells”, J Immunol Methods 204 (1): 77-87）。「組換え抗体」は、組換えにより操作された宿主細胞によって産生された抗体である。組換え抗体は、単離または精製されていてもよい。
人間における適用のため、マウス等の他の種に本来由来する抗体の免疫原性を低下させることが望ましい場合が多い。これは、キメラ抗体の構築によって、または「ヒト化」と呼ばれるプロセスによって行うことができる。この文脈において、「キメラ抗体」は、ある１つの種（例えば、ヒト）に由来する配列部分（例えば、定常ドメイン）に融合された、異なる種（例えば、マウス）に由来する配列部分（例えば、可変ドメイン）を含む抗体であると理解される。「ヒト化抗体」は、非ヒト種に本来由来する可変ドメインを含む抗体であり、ある特定のアミノ酸は、可変ドメインの配列全体が、ヒト可変ドメインの配列に、より密接に似るようにするために突然変異されている。抗体のキメラ化およびヒト化の方法は、当技術分野で周知である（Billetta R, Lobuglio AF. “Chimeric antibodies”. Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76；Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). ”Reshaping human antibodies for therapy”. Nature: 332:323.）。
「ヒト化」抗体は、非ヒト高頻度可変領域（ＨＶＲ）由来のアミノ酸残基、およびヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含む抗体を指す。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１個、典型的には２個の可変ドメインのうち実質的に全てを含み、この場合、ＨＶＲ（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））の全てまたは実質的に全てが、非ヒト抗体のものに対応し、全てのまたは実質的に全体的なフレームワーク領域（ＦＲ）が、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部分を含んでいてもよい。抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を経た抗体を指す。
さらに、例えば、ファージディスプレイまたはトランスジェニック動物の使用によって、ヒトゲノムに由来する配列に基づき抗体を作成するための技術が開発された（国際公開第９０／０５１４４号；D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths and G. Winter (1991) ”By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage.” J.Mol.Biol., 222, 581-597；Knappik et al., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000；S. Carmen and L. Jermutus, ”Concepts in antibody phage display”. Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203；Lonberg N, Huszar D. ”Human antibodies from transgenic mice”. Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.；Bruggemann M, Taussig MJ. ”Production of human antibody repertoires in transgenic mice”. Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8.）。斯かる抗体は、本発明の文脈において「ヒト抗体」である。
Ｆａｂ、Ｆａｂ’またはＦ（ａｂ’）2断片等、抗原結合特性を保持する分子の断片も考慮される。斯かる断片は、例えば、タンパク質分解性消化による抗体分子の断片化によってまたは斯かる断片の組換え発現によって得ることができる。例えば、抗体分子消化は、例えば、パパインまたはペプシンを使用したルーチン技法を用いて達成することができる（国際公開第９４／２９３４８号）。抗体のパパイン消化は典型的に、単一の抗原結合部位をそれぞれ有する２個の同一抗原結合断片、いわゆるＦａｂ断片と、残留Ｆｃ断片とを産生する。ペプシン処置は、Ｆ（ａｂ’）2を生じる。Ｆａｂ分子において、可変ドメインはそれぞれ、好ましくはヒト起源の、免疫グロブリン定常ドメインに融合される。よって、重鎖可変ドメインは、ＣＨ1ドメインに融合することができ（いわゆるＦｄ断片）、軽鎖可変ドメインは、ＣＬドメインに融合することができる。Ｆａｂ分子は、宿主細胞におけるそれぞれの核酸の組換え発現によって産生することができ、これについては後述を参照されたい。
抗体分子の可変ドメインまたは斯かる可変ドメインに由来する分子を、異なる分子文脈で配置するための多数の技術が開発された。一般に、このような抗体分子は、天然抗体分子と比較して、サイズがより小さく、単一のアミノ酸鎖またはいくつかのアミノ酸鎖を含むことができる。例えば、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、短いリンカー、通常、セリン（Ｓ）またはグリシン（Ｇ）により一体に連結された、抗体分子の重および軽鎖の可変領域の融合体である（国際公開第８８／０１６４９号；国際公開第９１／１７２７１号；Huston et al; International Reviews of Immunology, Volume 10, 1993, 195-217）。「単一ドメイン抗体」または「ナノボディ」は、単一のＩｇ様ドメインに抗原結合部位を有する（国際公開第９４／０４６７８号；国際公開第０３／０５０５３１号、Ward et al., Nature. 1989 Oct 12;341(6242):544-6；Revets et al., Expert Opin Biol Ther. 5(1):111-24, 2005）。同じまたは異なる抗原に対し結合特異性を有する１個または複数の単一ドメイン抗体を一体に連結することができる。ダイアボディは、２個の可変ドメインを含む２本のアミノ酸鎖からなる二価抗体分子である（国際公開第９４／１３８０４号、Holliger et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8）。抗体様分子の他の例は、免疫グロブリンスーパーファミリー抗体である（ＩｇＳＦ；Srinivasan and Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96）。異なる概念が、単鎖ヒンジおよび定常ドメインＣＨ１を欠くエフェクタードメインに連結されたＦｖドメインを含む、いわゆる小モジュラー免疫医薬（ＳＭＩＰ）をもたらす（国際公開第０２／０５６９１０号）。
抗体分子は、抗体分子の特性に所望の影響を有する他の分子実体に融合することができる（融合タンパク質として）または他の仕方で連結することができる（共有結合または非共有結合によって）。例えば、特に、単鎖抗体またはドメイン抗体の場合、血液等の体液における、例えば、抗体分子の薬物動態学的特性、安定性を改善することが望ましくなり得る。これに関して、特に、ペグ化（国際公開第９８／２５９７１号；国際公開第９８／４８８３７号；国際公開第２００４０８１０２６号）、抗体分子の、アルブミン等の血清タンパク質に対し親和性を有する別の抗体分子への融合もしくは他の仕方での共有結合による取付け（国際公開第２００４０４１８６５号；国際公開第２００４００３０１９号）、またはアルブミンもしくはトランスフェリン等の血清タンパク質の全体もしくは一部との融合タンパク質としての抗体分子の発現（国際公開第０１／７９２５８号）等、循環における斯かる抗体分子の半減期を延長するための、多数の技術が開発された。
互換的に使用することができる、用語「エピトープ」および「抗原決定基」は、本発明の抗体分子等の抗原結合分子によって、より詳細には、前記分子の抗原結合部位によって認識される、ポリペプチド等の巨大分子の部分を指す。エピトープは、抗体分子のための最小結合部位を定義し、よって、抗体分子の特異性の標的を表す。エピトープは、構造的エピトープまたは機能的エピトープとしてさらに定義することができる。「構造的エピトープ」は、構造によって通常明らかになる、抗体と密接に接触した領域におけるアミノ酸または他の分子からなる。「機能的エピトープ」は、変化されると結合親和性の減少が生じるような、結合にエネルギー的な寄与を為す分子の部分として定義される。したがってパラトープと接触する残基、および親和性に寄与する残基は、近位であるか否かにかかわらず、エピトープを定義する際に重要な考察である。Ｘ線結晶学は、抗体およびその抗原の間の相互作用の的確な部位を決定する一方法である。結晶構造は、エピトープおよびパラトープの両方における側鎖および主鎖原子の両方に由来する個々のアミノ酸の間の鍵となる相互作用の正確な決定を可能にする。互いに４．５オングストローム以内にあるアミノ酸は一般に、接触残基と考慮される。
ある特定のエピトープ、抗原またはタンパク質（またはその少なくとも１種の部分、断片もしくはエピトープ）「を結合する」、「に結合する」、「を特異的に結合する」または「に特異的に結合する」ことができる、「に対し親和性を有する」および／または「に対し特異性を有する」抗体分子は、前記エピトープ、抗原もしくはタンパク質「に対する」もしくは「に対して作製される」と言われる、または斯かるエピトープ、抗原もしくはタンパク質に関して「結合」分子である。
一般に、用語「特異性」は、特定の抗原結合分子または抗原結合タンパク質（免疫グロブリン、抗体、免疫グロブリン単一可変ドメイン等）が結合することができる、異なる種類の抗原またはエピトープの数を指す。抗原結合タンパク質の特異性は、その親和性および／またはアビディティーに基づき決定することができる。抗原結合タンパク質と抗原との解離に関する平衡定数によって表される親和性（ＫD）は、エピトープと、抗原結合タンパク質における抗原結合部位との間の結合強度の尺度である：ＫDの値が少ないほど、エピトープおよび抗原結合分子の間の結合強度は強くなる（その代わりに、親和性は、１／ＫDである親和性定数（ＫA）として表現することもできる）。当業者には明らかになるであろうが（例えば、本明細書におけるさらなる開示に基づいて）、親和性は、目的の特異的抗原に応じて、それ自体が公知である様式で決定することができる。アビディティーは、抗原結合分子（本発明の抗体等）および関連する抗原の間の結合の強度の尺度である。アビディティーは、エピトープおよび抗原結合分子におけるその抗原結合部位の間の親和性、ならびに抗原結合分子に存在する関連する結合部位の数の両方に関係する。
典型的には、抗原結合タンパク質（本発明の抗体分子等）は、１０Ｅ−５〜１０Ｅ−１４モル／リットル（Ｍ）以下、好ましくは１０Ｅ−７〜１０Ｅ−１４モル／リットル（Ｍ）以下、より好ましくは１０Ｅ−８〜１０Ｅ−１４モル／リットル、さらにより好ましくは１０Ｅ−１１〜１０Ｅ−１３の解離定数（ＫD）で（例えば、Ｋｉｎｅｘａアッセイにおいて測定されると；当技術分野で公知）、および／または少なくとも１０Ｅ１１ ＭＥ−１等、少なくとも１０Ｅ７ ＭＥ−１、好ましくは少なくとも１０Ｅ８ ＭＥ−１、より好ましくは少なくとも１０Ｅ９ ＭＥ−１の会合定数（ＫA）で結合するであろう。１０Ｅ−４ Ｍを超えるいずれかのＫD値が一般に、非特異的結合を示すと考慮される。好ましくは、本発明の抗体は、５００ｐＭ未満等、５００ｎＭ未満、好ましくは２００ｎＭ未満、より好ましくは１０ｎＭ未満のＫDで所望の抗原に結合するであろう。抗原またはエピトープへの抗原結合タンパク質の特異的結合は、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）、スキャッチャード解析、および／またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）およびサンドイッチ競合アッセイ等の競合的結合アッセイ、ならびに当技術分野でそれ自体が公知であるこれらの異なるバリアント等の本明細書に記載されているアッセイを含む、それ自体が公知であるいずれか適した様式で決定することができる。
抗体分子の結合親和性は、親和性成熟として公知のプロセスによって増強することができる（Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783；Barbas, et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813；Shier et al., 1995, Gene 169:147-155）。したがって、親和性成熟された抗体も、本発明に包括される。
例えば、本発明に関する抗体の親和性成熟は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に導入された１個または複数のアミノ酸の変更をもたらすことができ、これは、そのエピトープに対する抗体の特異性を変化させることなく、抗原に対する結合親和性に改善をもたらすことができる。よって、本発明の実施形態は、例えば、配列番号７３、配列番号７５、配列番号７７；配列番号７９；配列番号８１；配列番号８３；配列番号８５；配列番号８７；配列番号８９；配列番号９１；配列番号９３；配列番号９５に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％アミノ酸配列同一性を有する重鎖可変領域、および配列番号７４、配列番号７６、配列番号７８、配列番号８０、配列番号８２、配列番号８４、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６に対し少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％アミノ酸配列同一性を有する軽鎖可変領域を含む、ＣＤ７３に特異的に結合する抗体を含む。例えば、本発明の親和性成熟された抗体は、それによってアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換もしくは非保存的アミノ酸置換となることができる、１、２、３、４、５、６、７、８、９もしくは１０個のアミノ酸置換を含む、上に開示されている軽鎖可変領域、および／またはそれによってアミノ酸置換が保存的アミノ酸置換もしくは非保存的アミノ酸置換となることができる、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０もしくは１１個のアミノ酸置換を含む、上に開示されている重鎖可変領域を含むことができる。
例えば、本発明は、アミノ酸配列内のおよび／またはこれに隣接するアミノ酸残基の置換、内部欠失を含む欠失、融合タンパク質を生じる付加を含む付加、または保存的置換を含むことができるが、機能的変化を生じない（「サイレント」）、斯かる変化が、機能的に均等な抗ＣＤ７３抗体を産生するという点において、本発明に係る抗体配列における突然変異も考慮する。斯かる変化は、例えば、関与する残基の極性、電荷、溶解性、疎水性、親水性および／または両親媒性性質における類似性に基づいて為すことができる、保存的アミノ酸置換を含むことができる。例えば、非極性（疎水性）アミノ酸は、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンを含み；極性中性アミノ酸は、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンを含み、正に荷電した（塩基性）アミノ酸は、アルギニン、リジンおよびヒスチジンを含み；負に荷電した（酸性）アミノ酸は、アスパラギン酸およびグルタミン酸を含む。加えて、グリシンおよびプロリンは、鎖の配向性に影響し得る残基である。非保存的置換は、これらのクラスのうち１つのメンバーの、別のクラスのメンバーに代えた交換を伴うであろう。
一例では、本発明は、変更された結合特徴；例えば、変更された会合定数ｋON、解離定数ｋＯＦＦおよび／または平衡定数もしくは結合親和性ＫDを示すものが挙げられるがこれらに限定されない、増強されたエフェクター機能を有する抗ＣＤ７３抗体と共に、その変更された／突然変異体の派生物に関する。
本明細書に開示されている組成物および方法は、指定される配列、またはそれと実質的に同一もしくは同様の配列、例えば、指定される配列と少なくとも８５％、９０％、９５％以上同一である配列を有するポリペプチドおよび核酸を包含する。アミノ酸配列の文脈において、用語「実質的に同一」は、第１および第２のアミノ酸配列が、共通構造的ドメインおよび／または共通機能的活性を有することができるような、第２のアミノ酸配列における整列されたアミノ酸残基ｉ）と同一である、またはｉｉ）その保存的置換である、十分なまたは最小の数のアミノ酸残基を含有する第１のアミノ酸を指すように本明細書で使用される。例えば、参照配列、例えば、本明細書に提供される配列に対し少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有する共通構造的ドメインを含有するアミノ酸配列。ヌクレオチド配列の文脈において、用語「実質的に同一」は、第１および第２のヌクレオチド配列が、共通機能的活性を有するポリペプチドをコードするような、または共通構造的ポリペプチドドメインもしくは共通機能的ポリペプチド活性をコードするような、第２の核酸配列における整列されたヌクレオチドと同一である十分なまたは最小の数のヌクレオチドを含有する第１の核酸配列を指すように本明細書で使用される。例えば、参照配列に対し少なくとも約８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一性を有するヌクレオチド配列。
２種以上の核酸またはポリペプチド配列の文脈における用語「同一」または「パーセント同一性」は、最大一致のために比較および整列した場合に、同じである、または同じである指定のパーセンテージのヌクレオチドもしくはアミノ酸残基を有する、２種以上の配列または部分列を指す。パーセント同一性を決定するために、配列は、最適な比較目的のために整列される（例えば、第２のアミノまたは核酸配列との最適な整列のために、第１のアミノ酸または核酸配列の配列にギャップを導入することができる）。次いで、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置におけるアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列における位置が、第２の配列における対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有される場合、分子は、当該位置において同一である。２種の配列の間のパーセント同一性は、当該配列によって共有される同一位置の数の関数である（すなわち、％同一性＝同一位置の数／位置の総数（例えば、重複する位置）×１００）。一部の実施形態では、比較される２種の配列は、適宜配列内にギャップが導入された後に、同じ長さとなる（例えば、比較されている配列を越えて延在する追加的な配列を除外する）。例えば、可変領域配列が比較される場合、リーダーおよび／または定常ドメイン配列は考慮されない。２種の配列の間の配列比較のため、「対応する」ＣＤＲは、両方の配列における同じ場所におけるＣＤＲを指す（例えば、各配列のＣＤＲ−Ｈ１）。
２種の配列の間のパーセント同一性またはパーセント類似性の決定は、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。２種の配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの好まれる非限定的な例は、Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877の通りに改変された、Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268のアルゴリズムである。斯かるアルゴリズムは、Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410のＮＢＬＡＳＴおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに取り込まれる。ＢＬＡＳＴヌクレオチド検索を、ＮＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝１００、ワード長さ＝１２により行って、目的のタンパク質をコードする核酸に相同なヌクレオチド配列を得ることができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索を、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長さ＝３により行って、目的のタンパク質に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップ入り整列を得るために、Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402に記載されている通り、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを利用することができる。その代わりに、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを使用して、分子間の遠い関係性を検出する反復検索を行うことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムを利用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。配列の比較に利用される数学的アルゴリズムの別の好まれる非限定的な例は、Myers and Miller, CABIOS (1989)のアルゴリズムである。斯かるアルゴリズムは、ＧＣＧ配列整列ソフトウェアパッケージの一部であるＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に取り込まれる。アミノ酸配列を比較するためにＡＬＩＧＮプログラムを利用する場合、ＰＡＭ１２０ウエイト残基表、ギャップ長さペナルティ１２およびギャップペナルティ４を使用することができる。配列解析のための追加的なアルゴリズムは、当技術分野で公知であり、Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5に記載されているＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ；ならびにPearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8に記載されているＦＡＳＴＡを含む。ＦＡＳＴＡ内で、ｋｔｕｐは、検索の感度およびスピードを設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２の場合、比較されている２種の配列における同様の領域は、整列された残基のペアに注目することにより見出される；ｋｔｕｐ＝１の場合、単一の整列されたアミノ酸が試験される。ｋｔｕｐは、タンパク質配列では２もしくは１に、またはＤＮＡ配列では１〜６に設定することができる。デフォルトは、ｋｔｕｐが指定されない場合、タンパク質では２、ＤＮＡでは６である。その代わりに、タンパク質配列整列は、Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402によって記載されている通り、ＣＬＵＳＴＡＬ Ｗアルゴリズムを使用して実行することができる。
アミノ酸残基は、当技術分野で一般に公知かつ同意される通り、標準３文字または１文字アミノ酸暗号に従って示されるであろう。２種のアミノ酸配列を比較する場合、用語「アミノ酸差」は、第２の配列と比較した、参照配列の位置における示されている数のアミノ酸残基の挿入、欠失または置換を指す。置換の場合、斯かる置換は、好ましくは、保存的アミノ酸置換となり、これは、アミノ酸残基が、同様の化学構造の別のアミノ酸残基に置き換えられることを意味し、ポリペプチドの機能、活性または他の生物学的特性に影響が殆どないまたは基本的にない。斯かる保存的アミノ酸置換は、例えば、国際公開第１９９８／４９１８５号から、当技術分野で周知であり、これによると、保存的アミノ酸置換は、好ましくは、次の群（ｉ）〜（ｖ）内のある１つのアミノ酸が、同じ群内の別のアミノ酸残基によって置換された、置換である：（ｉ）小型の脂肪族非極性または僅かに極性残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＰｒｏおよびＧｌｙ；（ｉｉ）極性の負に荷電した残基およびその（無電荷）アミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、ＧｌｕおよびＧｉｎ；（ｉｉｉ）極性の正に荷電した残基：Ｈｉｓ、ＡｒｇおよびＬｙｓ；（ｉｖ）大型の脂肪族非極性残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ＶａｌおよびＣｙｓ；ならびに（ｖ）芳香族残基：Ｐｈｅ、ＴｙｒおよびＴｒｐ。特に好まれる保存的アミノ酸置換を次に示す：ＡｌａからＧｌｙまたはＳｅｒ；ＡｒｇからＬｙｓ；ＡｓｎからＧｌｎまたはＨｉｓ；ＡｓｐからＧｌｕ；ＣｙｓからＳｅｒ；ＧｌｎからＡｓｎ；ＧｌｕからＡｓｐ；ＧｌｙからＡｌａまたはＰｒｏ；ＨｉｓからＡｓｎまたはＧｌｎ；ｌｌｅからＬｅｕまたはＶａｌ；ＬｅｕからｌｌｅまたはＶａｌ；ＬｙｓからＡｒｇ、ＧｌｎまたはＧｌｕ；ＭｅｔからＬｅｕ、Ｔｙｒまたはｌｌｅ；ＰｈｅからＭｅｔ、ＬｅｕまたはＴｙｒ；ＳｅｒからＴｈｒ；ＴｈｒからＳｅｒ；ＴｒｐからＴｙｒ；ＴｙｒからＴｒｐまたはＰｈｅ；ＶａｌからＩｌｅまたはＬｅｕ。
用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」（単鎖の場合）は、本明細書で互換的に使用されている。
用語「核酸」、「核酸配列」、「ヌクレオチド配列」または「ポリヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は、互換的に使用されている。
用語「単離された」は、本明細書において、その本来のまたはネイティブの環境（例えば、天然起源の場合は天然環境）から除去された材料を指す。例えば、生きている動物中に存在する天然起源のポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されていないが、天然の系における共存する材料の一部または全てからヒトの介入によって分離された同じポリヌクレオチドまたはポリペプチドは、単離されている。斯かるポリヌクレオチドは、ベクターの部分となることができる、および／または斯かるポリヌクレオチドもしくはポリペプチドは、組成物の部分となることができ、斯かるベクターまたは組成物が、それが自然界に見出される環境の部分でないという点において、依然として、単離されている。
好ましくは、核酸は、発現ベクターの部分となり、その場合、前記核酸分子は、少なくとも１個の調節配列に作動可能に連結され、斯かる調節配列は、プロモーター、エンハンサーまたはターミネーター配列、および最も好ましくは、異種プロモーター（ｐｒｏｍｏｔｏｒ）、エンハンサーまたはターミネーター配列となることができる。
用語「ＰＤ１」および「ＰＤ−１」は、本明細書で互換的に使用されている。用語「ＰＤＬ１」および「ＰＤＬ−１」は、同様に、本明細書で互換的に使用されている。本明細書の下に開示されているＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５は、それぞれ特異的抗ＰＤ−１抗体を指す。
「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」は、本明細書において、引用符（「」）の中に書かれている場合、それぞれ国際公開第２０１６／０７５０９９号（「ＭＥＤＩ９４４７」）および国際公開第２０１６／０８１７４８号（「ＢＭＳ９８６１７９」、この文献中でｍＡｂ−ＣＤ７３．４−Ｖｈ−ｈＨＣ−ＩｇＧ２−ＩｇＧ１．１ｆとも名付けられる）に開示されている情報に従って生成された参照抗体を指す。それぞれ国際公開第２０１６／０７５０９９号および国際公開第２０１６／０８１７４８号は、これによりそれらの全体を参照により本明細書に組み込む。
誤解を避けるために、本出願人らによる「表面抗原分類７３」または「ＣＤ７３」は、http://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_002517.1でアクセス可能なＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００２５１７．１（長いアイソフォーム、これは、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９に対応する）およびhttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/protein/NP_001191742.1でアクセス可能なＮＣＢＩ参照配列：ＮＰ＿００１１９１７４２．１（短いアイソフォーム）に提示される遺伝子「ＮＴ５Ｅ ５’−ヌクレオチダーゼエクト［Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ（ヒト）］」によってコードされるヒトタンパク質、ならびにこれらのタンパク質をコードするそれぞれの核酸配列を意味する。本明細書において、「ＣＤ７３」は、これらのタンパク質の単量体および／または二量体形態を指すことができる。一部の実施形態では、「ＣＤ７３」は、上に記載されているヒトＣＤ７３の長いアイソフォームを指す。本明細書に提供される結晶学的データに関して、アミノ酸ナンバリングは、シグナルペプチドを含むＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９に対応し、それによって、成熟タンパク質は、Ｐ２１５８９のアミノ酸残基１〜２６に対応するシグナルペプチドを欠くが、本願を通して用いられるナンバリングスキームは、Ｐ２１５８９の全長アミノ酸配列を指すであろう。マウスＣＤ７３は、本明細書において、Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ６１５０３を指す。
生きている細胞および生物において、ＣＤ７３は通常、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）膜連結（本明細書において「ＧＰＩアンカー」とも名付けられる）を介して細胞膜に繋留された二量体タンパク質として存在し、エクト−５’−ヌクレオチダーゼ活性を有する。
本明細書で互換的に使用されている用語「可溶性ＣＤ７３」および「ｓＣＤ７３」は、例えばＧＰＩアンカーを介して膜に取り付けられていないＣＤ７３分子を意味する。
用語「細胞に結合したＣＤ７３」は、例えばＧＰＩアンカーを介して細胞表面に取り付けられたＣＤ７３分子を意味する。
用語「細胞に結合していないＣＤ７３」は、細胞外空間に存在するＣＤ７３を指す。この用語は、可溶性ＣＤ７３および小胞に結合したＣＤ７３、すなわち、細胞外空間における小胞の表面に取り付けられたＣＤ７３分子の両方を含む。用語「細胞に結合していないＣＤ７３」は、あらゆる「細胞に結合したＣＤ７３」を除外する。「細胞に結合していないＣＤ７３」の活性は、実施例８に記載されている通り、細胞培養物上清におけるＣＤ７３活性を測定することにより決定することができる。
用語「ＩＦＮγ」、「ＩＦＮｇ」、「インターフェロンガンマ」、「インターフェロン−ガンマ」、「ＩＦＮ−ガンマ」、「ＩＦＮＧ」、「ＩＦＮガンマ」、「ＩＦＮ−ｙ」または同様の用語は、本明細書で互換的に使用されており、Ｔ細胞等、自然および適応免疫系の両方の細胞によって分泌される、当技術分野で公知のインターフェロンファミリーのサイトカインを表示する（ＮＣＢＩ遺伝子ＩＤ：３４５８）。
＜本発明の抗ＣＤ７３抗体＞
上に詳述されている通り、ＣＤ７３は、Ｔ細胞活性、したがって、免疫系活性の調節において重要な役割を果たす。ある範囲の異なるがん設定において、アンタゴニスト性抗ＣＤ７３抗体分子が、Ｔ細胞活性のアデノシン媒介性抑制を反転し、これにより、免疫系を活性化して、腫瘍を攻撃させることによりがんを処置することができることが示された。
本発明は、改善された抗ＣＤ７３抗体を提供する。Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４（表９を参照）と名付けられた、ＣＤ７３に対する前駆体マウス抗体から出発して、ヒト化バリアントを生成した。本発明の好まれる抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６（表９を参照）と名付けられ、これらは、ヒト化モノクローナル抗体である。本発明の抗ＣＤ７３抗体は、例えば、「アンタゴニスト性ＣＤ７３抗体（単数）」または「アンタゴニスト性ＣＤ７３抗体（複数）」と称される場合もあり、それによって、用語「アンタゴニスト性」またはそのいずれかの文法上（ｇｒａｍａｔｉｃａｌ）の均等は、本発明に関するＣＤ７３抗体によるＣＤ７３機能（例えば、可溶性および細胞表面結合型）の阻害を指す。
ｉｎ−ｖｉｔｒｏ Ｔ細胞活性化アッセイ（実施例６にさらに記載されている）を使用して、本発明者らは、本発明の代表的抗ＣＤ７３抗体の機能的特徴を試験した。実施例６ならびに表５および６から分かる通り、被験抗体は、ある特定のドナーにおいて、参照抗ＣＤ７３抗体と比較して、より高いレベルまでＴ細胞増殖を誘導することができた。加えて、被験抗体は、ある特定のドナーにおいて、参照抗ＣＤ７３抗体と比較して、Ｔ細胞においてより高いＩＦＮγレベルを誘導することができた。認めることができるように、先行技術の参照抗ＣＤ７３抗体よりも有効にＴ細胞活性化を誘導する、本発明の抗ＣＤ７３抗体のこの驚くべき能力は、これが、より有効ながん処置および／または改善された臨床成績をもたらし得ることを示唆する。
本発明者らは、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の様々な他の機能的特徴をさらに調査した。この評価には、抗ＣＤ７３抗体によるアデノシン形成を阻害する能力の決定が含まれた。これは、細胞に結合したＣＤ７３の阻害と共に、細胞培養物上清における細胞に結合していないＣＤ７３の阻害を測定することにより行われた。本発明の抗ＣＤ７３抗体は、参照抗ＣＤ７３抗体と比較して、細胞に結合していないＣＤ７３の阻害におけるより高い活性を示した。よって、このような抗体は、参照ＣＤ７３抗体と比較して、ＣＤ７３のより完全な阻害をもたらす能力を有する。
当技術分野で公知の抗ＣＤ７３抗体とは対照的に、本発明の抗ＣＤ７３抗体は、特に、アデノシン生成の阻害およびＴ細胞活性化の観点から、改善された特性を有する。添付の実施例から分かる通り、これは、公知の参照抗ＣＤ７３抗体分子「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」とは対照的である。認めることができるように、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子のこの優越性は、これが、他の抗ＣＤ７３抗体よりも高い有効性および／または優れた臨床成績を有し得、よって、より有効ながん治療法を可能にし得ることを示唆する。
したがって、よって、本発明の第１の態様は、
（１）配列番号１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（２）配列番号７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号１０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号１１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号１２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（３）配列番号１３（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号１４（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号１５（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号１６（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号１７（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号１８（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（４）配列番号１９（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２０（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号２１（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号２２（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号２３（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号２４（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（５）配列番号２５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号２７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号２８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号２９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（６）配列番号３１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号３４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号３５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（７）配列番号３７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（８）配列番号４３（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号４４（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号４５（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４６（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４７（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４８（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（９）配列番号４９（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５０（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５１（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５２（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５３（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号５４（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（１０）配列番号５５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（１１）配列番号６１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号６４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号６５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（１２）配列番号６７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号７０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号７１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号７２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
を含む抗ＣＤ７３抗体分子を提供する。
上に概要を述べる通り、本発明の好まれる抗ＣＤ７３抗体分子は、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６と名付けられる。本発明の特異的抗ＣＤ７３抗体分子に対する個々のアミノ酸配列の同定を容易に可能にする、配列表（表９）が本明細書に提供される。
本明細書に明示されているＣＤＲ配列に加えて、本発明の抗体分子は、免疫グロブリンフレームワーク領域（ＦＲ）配列を含む。このような配列は、好ましくは、ヒトにおいて免疫原性でなく、したがって、好ましくは、ヒトまたはヒト化ＦＲ配列である。適したヒトまたはヒト化ＦＲ配列は、当技術分野で公知である。特異的に好まれるＦＲ配列は、完全な抗体分子、よって、ＣＤＲ配列およびＦＲ配列を開示する、本明細書に示す実施形態から得ることができる。
本発明の第１の態様の抗体分子を調製する方法は、当技術分野で周知であり、当業者であれば、本発明の第１の態様の特徴を有する抗体分子を容易に調製することができるであろう。斯かる方法の例を下に提示する。
ＩｇＧ１またはＩｇＧ４型の抗体等、２本の完全な重鎖および２本の完全な軽鎖を含む抗体の産生については、Norderhaug et al., J Immunol Methods 1997, 204 (1): 77-87；Kipriyanow and Le Gall, Molecular Biotechnology 26: 39- 60, 2004；Shukla et al., 2007, J. Chromatography B, 848(1): 28-39を参照されたい。
機能的ｓｃＦｖ分子を生じる、宿主細胞（Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ／Ｋｏｍａｇａｔａｅｌｌａ ｐｈａｆｆｉｉまたは哺乳類細胞株、例えば、ＣＨＯもしくはＮＳ０等）においてｓｃＦｖ構築物をコードする核酸の組換え発現によってｓｃＦｖ抗体を製造するためのプロセスも公知である（Rippmann et al., Applied and Environmental Microbiology 1998, 64(12): 4862-4869；Yamawaki et al., J. Biosci. Bioeng. 2007, 104(5): 403-407；Sonoda et al., Protein Expr. Purif. 2010, 70(2): 248-253）。
誤解を避けるために、本発明の第１の態様のために本明細書に収載されている特異的実施形態のそれぞれは、本発明の独立した態様のために考慮することもできる。
本発明の第１の態様の好まれる実施形態は、前記抗体分子がヒト化抗体分子である実施形態である。
一実施形態では、前記抗体は、組換え抗体である。一実施形態では、前記抗体は、単離されている。一実施形態では、前記抗体は、精製されている。
本発明の第１の態様のさらに好まれる実施形態は、前記抗体分子が、モノクローナル抗体、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ＦｖまたはｓｃＦｖである実施形態である。
用語「ヒト化」、「Ｆａｂ」、「Ｆ（ａｂ’）2」、「Ｆｖ」および「ｓｃＦｖ」は、当技術分野で周知であり、本明細書の定義セクションにて本明細書でさらに記述されている。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＥ定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域を有する。好ましくは、重鎖定常領域は、ＩｇＧ１、より好ましくは、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異（Ｋａｂａｔナンバリング；実際のナンバリングにおける位置Ｌ２３２ＡおよびＬ２３３Ａに対応）を有するＩｇＧ１である。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、カッパーまたはラムダである軽鎖定常領域を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、上に開示されている配列番号７３、７５、７７または７９のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する。
一実施形態では、前記抗体分子は、配列番号７３、７５、７７または７９のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３または９５のいずれかと少なくとも８５％、９０％、９５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する。好ましくは、前記抗体分子は、配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３または９５のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する。より好ましくは、前記抗体は、ヒト化されている。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号７４、７６、７８または８０のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。
一実施形態では、前記抗体分子は、配列番号７４、７６、７８または８０のいずれかのアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。好ましくは、前記抗体分子は、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する。より好ましくは、前記抗体は、ヒト化されている。
アミノ酸配列同一性を計算する方法は、当技術分野で周知であり、本明細書の定義セクションにて本明細書でさらに記述されている。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号７５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号７７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号７８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号７９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号９８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号９９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１００のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０４のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
上述の実施形態の全てについて、用語「を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」を使用することにより、それぞれのドメインまたは分子が、示されているアミノ酸配列「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ）」実施形態も含むことが意図されることを理解されたい。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、１０ｎＭ未満、好ましくは、１ｎＭ未満、より好ましくは、１００ｐＭ未満の解離定数（ＫD）でヒトＣＤ７３に結合することができる。
一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、高い親和性でヒトＣＤ７３（長いアイソフォーム）およびカニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）ＣＤ７３に結合することができる。一部の実施形態では、高い親和性は、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定された場合に、１０ｎＭ未満の、例えば、９、８、７、６以下のＫDを指す。好まれる実施形態では、高い親和性は、ＳＰＲによって測定された場合に、１ｎＭ未満のＫDを指す。より好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、５００ｐＭ未満のＫDでヒトＣＤ７３に結合することができる。最も好まれる実施形態では、抗体は、１００ｐＭ未満のＫDでヒトＣＤ７３に結合する。ＳＰＲを使用してＫDを決定するためのプロトコールは、添付の実施例に提示されている。
好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ヒトＣＤ７３と比較して１０×、５０×、１００×または１１０×低い親和性等、ヒトＣＤ７３と比較して、より低い親和性でマウスＣＤ７３に結合する。マウスＣＤ７３の配列は、ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿０３５９８１．１（１形態のみ同定）によってアクセス可能である。カニクイザル（ｃｙｎｏｍｏｌｇｏｕｓ）ＣＤ７３の配列は、ＲｅｆＳｅｑ受託番号ＸＰ＿００５５５２４８８．１によってアクセス可能である。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ヒトＣＤ７３の活性を低下させることができる。一部の実施形態では、ヒトＣＤ７３の活性は、ＡＭＰをアデノシンへと加水分解する酵素機能を指す。したがって、ヒトＣＤ７３の活性の低下は、斯かる酵素機能の阻害を指す。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、実施例に記載されている通り、ｉｎ ｖｉｔｒｏでヒトＣＤ７３の酵素機能を阻害する。一部の実施形態では、ヒトＣＤ７３の活性の低下は、ＣＤ７３の細胞表面レベルの低下を指す。別の実施形態では、阻害（ＣＤ７３酵素機能を遮断することによる、またはＣＤ７３細胞表面レベルを低下させることによる）は、例えば、Ｃｏｌｏ２０１等のがん細胞株を使用した、細胞ベースアッセイにおいて決定される。
一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、実施例５に記載されている細胞ベースアッセイにおいて決定される場合、アデノシンの形成を少なくとも７０％、好ましくは８０％超阻害する。特に好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、細胞培養物上清におけるアデノシンの形成を少なくとも６０％、少なくとも７０％、好ましくは７５％超阻害する、すなわち、実施例８に記載されている通り、細胞に結合していないＣＤ７３の活性を阻害する。一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、細胞に結合していないＣＤ７３によるアデノシンの形成を少なくとも７０％阻害する。
またさらなる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ｉｎ ｖｉｖｏでヒトＣＤ７３の酵素機能を阻害する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおけるヒトＣＤ７３の酵素活性の阻害を決定するためのアッセイは、当技術分野で公知であり、添付の実施例にもさらに詳細に記載されている。
一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、５ｎＭ未満の、または４、３、２、１．５、１、０．５ｎＭ以下のＩＣ90でヒトＣＤ７３の酵素活性を阻害することができる。特に好まれる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、０．４ｎＭ未満のＩＣ90でヒトＣＤ７３の酵素活性を阻害する。ＩＣ90を決定するためのプロトコールは、添付の実施例に提示されている。一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、１ｎＭ未満のＩＣ90でヒトＣＤ７３を阻害するが、ＣＤ７３の細胞表面レベルを中程度にしか低下させない（すなわち、３０％未満、２５％未満または２０％未満）。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、Ｔ細胞機能のＡＭＰ依存性抑制を反転させることができる。好まれる実施形態では、Ｔ細胞機能は、Ｔ細胞増殖を指し、これは、ＣＤ７３によってアデノシン一リン酸（ＡＭＰ）から生成されるアデノシンによって抑制可能であることが公知である。本発明の抗体は、ＣＤ７３によるアデノシン産生を阻害することにより、好ましくは、対照レベル（アイソタイプ対照あり、ＡＭＰ添加なしで処置された、刺激されたＴ細胞）と実質的に同じレベルまで、この抑制を反転させることができる。好まれる実施形態では、本発明の抗体は、対照レベルの４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％、またはさらには、１１０％、１１５％、１２０％もしくは１２５％等、１００％超まで、Ｔ細胞の増殖を回復させることができる。Ｔ細胞機能のＡＭＰ依存性抑制を決定するためのアッセイは、実施例６に記載されている。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋である。
一部の実施形態では、Ｔ細胞機能は、Ｔ細胞によるインターフェロンガンマ放出を指す。いかなる理論に制約されることも望まないが、ＣＤ７３によって産生されたアデノシンが、Ｔ細胞による斯かるインターフェロンガンマ放出を抑制することが考えられる。したがって、本発明の抗体は、好ましくは、対照レベル（アイソタイプ対照あり、ＡＭＰ添加なしで処置された、刺激されたＴ細胞）と実質的に同じレベルまで、Ｔ細胞によるインターフェロンガンマ放出を回復させることができる。好まれる実施形態では、本発明の抗体は、最大で、対照レベル（アイソタイプ対照あり、ＡＭＰ添加ありで処置された、刺激されたＴ細胞）の２×（すなわち、２倍）、３×、５×、１０×、２０×、３０×、４０×、５０×または５０×超の値まで、ＡＭＰによって抑制されるＴ細胞のインターフェロンガンマ放出を誘導することができる。Ｔ細胞のインターフェロンガンマ放出を決定するためのアッセイは、実施例６に記載されている。一部の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ４＋である。他の実施形態では、Ｔ細胞は、ＣＤ８＋である。
特に好まれる実施形態では、Ｔ細胞機能は、上に記載されている通り、Ｔ細胞増殖およびインターフェロンガンマ放出の両方を指す、すなわち、抗ＣＤ７３抗体は、Ｔ細胞増殖およびＴ細胞のインターフェロンガンマ放出の両方を刺激することができる。
さらなる実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、２：２オリゴマー等、定義されたサイズで可溶性ＣＤ７３と抗原−抗体複合体を形成する。このような複合体は、当技術分野で公知の他のＣＤ７３抗体によって形成された複合体と比較して、より小さい（例えば、図２を参照）。抗原−抗体複合体のサイズは、Ｆｃγ受容体活性化に以前に関係付けられており、したがって、望まれない免疫原性において役割を果たし得る（Krayukhina et al., Analytical ultracentrifugation with fluorescence detection system reveals differences in complex formation between recombinant human TNF and different biological TNF antagonists in various environments (2017). mAbs）。
一部の実施形態では、本発明は、本明細書に記載されている抗体Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６（表９に参照されている通り）と同じエピトープに結合する抗ＣＤ７３抗体を提供する。一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６（表９に参照されている通り）と同じエピトープへの結合に関して競合する。一部の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６（表９に参照されている通り）のエピトープと重複するまたはこれと実質的に重複するエピトープに結合する。好ましくは、前記抗ＣＤ７３抗体は、モノクローナル抗体である。
一実施形態では、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３（Ｕｎｉｐｒｏｔ番号Ｐ２１５８９）における次のアミノ酸：Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｓ１５５、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｅ２０３およびＫ２０６のうち少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する軽鎖可変領域パラトープを含み、それによって、ＣＤ７３における前記アミノ酸残基への軽鎖可変領域の結合は、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体によるＣＤ７３機能の阻害に寄与する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体によって特異的に結合される、アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（アミノ酸ナンバリングは、シグナルペプチドを含むＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９に対応し、それによって、成熟タンパク質は、アミノ酸残基１〜２６を含むシグナルペプチドを欠くが、本願を通して用いられるナンバリングスキームは、Ｐ２１５８９の全長アミノ酸配列を指すであろう）を含むＣＤ７３における立体構造エピトープの部分である、例えば、上に開示されているアミノ酸残基、例えば、Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｓ１５５、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｅ２０３およびＫ２０６の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する軽鎖可変領域パラトープを含み、それによって、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の可変軽鎖は、配列番号７８、配列番号８６、配列番号８８、配列番号９０、配列番号９２、配列番号９４、配列番号９６に従った１種のアミノ酸配列を含む。本明細書に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体によって結合される本発明における用語「立体構造エピトープ」は、本発明に関する抗体によって認識および結合されるエピトープが、ポリペプチドまたはタンパク質の二次および／または三次構造によって形成され、ポリペプチドまたはタンパク質のフォールドされた三次元立体構造に特有のものである、非線形エピトープを指す。一般に、立体構造エピトープは、タンパク質のフォールドされた構造において一体となる、線形配列において非連続的なアミノ酸からなる。しかし、立体構造エピトープは、ポリペプチドのフォールドされた三次元立体構造に特有な立体構造を取り、前記ポリペプチドまたはタンパク質の変性された状態では存在しない、アミノ酸の線形配列からなることもできる。
一実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（アミノ酸ナンバリングは、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９に対応する）を含むＣＤ７３における立体構造エピトープの部分である次のアミノ酸残基Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｔ２０９、Ｌ２１０およびＮ２１１の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する重鎖可変領域パラトープを含み、それによって、ＣＤ７３における前記アミノ酸残基への重鎖可変領域の結合は、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体によるＣＤ７３機能の阻害に寄与する。
一実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号９１、配列番号９３、配列番号９５に従ったアミノ酸配列の１種を含み、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体によって特異的に結合されるヒトＣＤ７３のアミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９）によって形成される立体構造エピトープの部分であるＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｔ２０９、Ｌ２１０およびＮ２１１の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する、重鎖可変領域パラトープを含む。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０２、配列番号１１０、配列番号１１２、配列番号１１４、配列番号１１６、配列番号１１８、配列番号１２０の１種に従ったアミノ酸配列を含み、例えば、結合に寄与し、アミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（アミノ酸ナンバリングは、ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９に対応する）によって形成されるＣＤ７３における立体構造エピトープの部分である、上に開示されているアミノ酸残基、例えば、Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｓ１５５、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｔ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｅ２０３およびＫ２０６の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する、軽鎖を含む。アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１を含むＣＤ７３における立体構造エピトープへの上に開示されている本発明に関する軽鎖の結合は、ＣＤ７３への本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の特異的結合に寄与し、これにより、その機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０１、配列番号１１１、配列番号１１３、配列番号１１５、配列番号１１７、配列番号１１９の１種に従ったアミノ酸配列を含み、結合に寄与し、ヒトＣＤ７３のアミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９）によって形成される立体構造エピトープの部分であるＣＤ７３におけるアミノ酸Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｔ２０９、Ｌ２１０およびＮ２１１の少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てに結合する、重鎖を含む。アミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１によって形成されるＣＤ７３における立体構造エピトープへの上に開示されている本発明に関する重鎖の結合は、ＣＤ７３への本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の特異的結合に寄与し、これにより、ＣＤ７３機能を阻害する。
一実施形態において、ヒトＣＤ７３のアミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１（ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９）によって形成される立体構造エピトープへの上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３の結合は、Ｔ細胞におけるＩＦＮγ放出を誘導する（例えば、図４を参照）。例えば、配列番号５５（ＨＣＤＲ１）、５６（ＨＣＤＲ２）および配列番号５７（ＨＣＤＲ３）に従ったアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ１〜３、ならびに配列番号５８（ＬＣＤＲ１）、配列番号５９（ＬＣＤＲ２）および配列番号６０（ＬＣＤＲ３）に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ１〜３、または配列番号９１に従ったアミノ酸配列を含むＶHおよび配列番号９２に従ったアミノ酸配列を含むＶLを含む、または例えば、配列番号１１５に従ったアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号１１６に従ったアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の結合は、Ｔ細胞におけるＩＦＮγ放出を誘導する（例えば、図４を参照）、例えば、本発明に関する抗体によって誘導されるＩＦＮγ放出は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでアイソタイプ対照＋ＡＭＰと比較して、少なくとも５、６、７、８、９、１０、１１倍であり、それによって、例えば、ＩＦＮγレベルは、実施例６に開示される通りに決定することができる。したがって、本発明の抗体は、対照レベル（アイソタイプ対照あり、ＡＭＰ添加なしで処置された、刺激されたＴ細胞）と実質的に同じ、例えば、その７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のレベルまで、Ｔ細胞によるＩＦＮγ放出を回復させることができる。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０１に従った重鎖および配列番号１０２に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０９に従った重鎖および配列番号１１０に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１１に従った重鎖および配列番号１１２に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１３に従った重鎖および配列番号１１４に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１５に従った重鎖および配列番号１１６に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１７に従った重鎖および配列番号１１８に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１９に従った重鎖および配列番号１２０に従った軽鎖を含み、ＣＤ７３におけるアミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１で構成された立体構造エピトープの少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０個または全てのアミノ酸残基に結合することによりＣＤ７３の機能を阻害する。
好まれる実施形態において、本発明は、ヒトＣＤ７３のアミノ酸Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１によって形成される立体構造エピトープに結合し、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の立体構造エピトープへの結合と交差競合、例えば、配列番号１１５に従った重鎖および配列番号１１６に従った軽鎖を含む抗ＣＤ７３抗体の結合と交差競合する、抗ＣＤ７３抗体を提供する。抗体結合の交差競合は、例えば、Anal Biochem. 2009 Mar 15;386(2):172-80に記載されている方法等、当技術分野で公知の適した方法によって評価することができる。
好まれる実施形態において、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の重鎖可変領域のアミノ酸残基Ｔ２８、Ｔ３１、Ｙ３２、Ｗ３３、Ｙ５２、Ｌ５５、Ｄ５７、Ｌ９９、Ｌ１００、Ｄ１０１、Ｙ１０２、および本発明に関する抗ＣＤ７３抗体の軽鎖可変領域のアミノ酸残基Ｒ３０、Ｓ３１、Ｙ３２、Ｗ４９、Ｙ５０、Ｔ５１、Ｓ５２、Ｒ５３、Ｓ６５、Ｇ６６、Ｓ６７、Ｅ９２は、アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１を含むＣＤ７３における立体構造エピトープに接触および／または特異的に結合し、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１１５および配列番号１１６に従ったアミノ酸配列を含み、本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、５ｎＭ未満の、４ｎＭ、３ｎＭ、２ｎＭ、１．５ｎＭ、１ｎＭ、０．５ｎＭ以下のＩＣ90で、好ましくは、０．５ｎＭ未満のＩＣ90でＣＤ７３酵素活性を阻害する。例えば、上に開示されている本発明に関する抗体は、アデノシンの形成を少なくとも６０％、少なくとも７０％、好ましくは、７５％超阻害することができる。上に開示されている本発明に関する抗体によるｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるアデノシン形成の阻害は、例えば、実施例８に記載されている通り、細胞培養物上清において評価することができる。ｉｎ ｖｉｖｏにおける本発明に関する抗体によるアデノシン形成の阻害は、例えば、Lofgren L, Pehrsson S, Hagglund G, Tjellstrom H, Nylander S (2018) Accurate measurement of endogenous adenosine in human blood. PLoS ONE 13(10): e0205707. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0205707に記載されている方法によって、血液試料において、または腫瘍微小環境から採取された試料において評価することができる。
例えば、好まれる実施形態では、アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１を含む立体構造エピトープに結合することにより、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、ＡＭＰを加水分解するためのＣＤ７３の酵素活性に要求される、ＣＤ７３の「オープン（ｏｐｅｎ）」および「クローズド（ｃｌｏｓｅｄ）」な立体構造の採用を阻害することにより、ＣＤ７３の酵素活性を阻害する。
好まれる実施形態において、上に開示されている本発明に関する抗ＣＤ７３抗体は、アミノ酸残基Ｆ１３７、Ｐ１３８、Ｉ１３９、Ａ１５１、Ｓ１５２、Ｇ１５６、Ｌ１５７、Ｙ１５８、Ｌ１５９、Ｐ１６０、Ｙ１６１、Ｋ１６２、Ｖ１６３、Ｐ１６５、Ｇ１６７、Ｄ１６８、Ｅ１６９、Ｖ１７０、Ｅ２０３、Ｋ２０６、Ｔ２０９、Ｌ２１０、Ｎ２１１を含むＣＤ７３における立体構造エピトープに結合し、これにより、ＣＤ７３の細胞表面レベルを低下させることにより、ＣＤ７３酵素活性を阻害する（実施例４を参照）。
好ましくは、前記抗ＣＤ７３抗体は、ヒト化されている。斯かる抗体は、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば、免疫化のためにエピトープ配列、または組換えにより発現および精製されたＣＤ７３タンパク質を使用することにより、生成することができる。
抗体のエピトープは、当技術分野で公知の方法を使用して、例えば、水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）、ＮＭＲ、部位特異的突然変異誘発（例えば、アラニン−スキャニング）または抗体−抗原複合体のＸ線結晶学により、決定することができる。
水素−重水素交換質量分析（ＨＤＸ−ＭＳ）は、タンパク質骨格アミド水素原子の重水素交換の速度および程度をモニターすることにより、溶液におけるタンパク質立体構造および立体構造動力学を決定する。ＨＤＸの交換レベルは、タンパク質溶媒露出度および水素結合に左右され、ＨＤＸにおけるタンパク質の質量増加は、ＭＳによって的確に測定することができる。この技法を、酵素による消化と組ませると、ペプチドレベルでの構造特色を解像することができ、内側にフォールドされたペプチドからの表面露出されたペプチドの区別を可能にする。エピトープマッピング実験において、抗原および抗原／ｍＡｂ複合体についての重水素標識およびその後のクエンチング実験が並行して行われ、続いて、オンライン（ｏｎｌｉｎｅ）ペプシン消化、ペプチド分離およびＭＳ解析が行われる。
エピトープに関する結合競合は、当技術分野で公知の方法のいずれかを使用して決定することができる。例えば、標準ＥＬＩＳＡアッセイまたは競合的ＥＬＩＳＡアッセイを使用することができ、そのアッセイでは、組換えヒトＣＤ７３タンパク質がプレートに固定化され、様々な濃度の非標識の第１の抗体が添加され、プレートが洗浄され、標識された第２の抗体が添加され、洗浄され、結合された標識の量が測定される。増加する濃度の非標識の（第１の）抗体（「遮断抗体」とも称される）が、標識された（第２の）抗体の結合を阻害する場合、第１の抗体は、プレート上の標的への第２の抗体の結合を阻害すると言われる、または第２の抗体の結合と競合すると言われる。それに加えてまたはその代わりに、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）解析を使用して、競合する抗体の能力を評価することができる。ＣＤ７３への本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体（例えば、抗体Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５またはＣ６、表９）の結合を阻害する被験抗体の能力は、被験抗体が、ＣＤ７３への結合に関して抗体と競合し得ることを実証する。
上に記載されている、すなわち、本発明の第１の態様に係る抗ＣＤ７３抗体は、また、本明細書において、「本発明の抗体」、「本発明のＣＤ７３抗体」、「本発明の抗ＣＤ７３抗体」、「本明細書に記載されている抗体」または同様の用語とまとめて称される。
本発明のさらなる態様は、本発明の第１の態様のいずれかの抗ＣＤ７３抗体分子の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子を提供する。
本発明の核酸分子として、本明細書に提供される抗ＣＤ７３抗体アミノ酸配列をコードするＤＮＡ分子が挙げられるがこれに限定されない。また、本発明は、また、国際公開第２００７／０４２３０９号に定義される通り、高ストリンジェンシーの結合および洗浄条件下で、配列表に示すポリペプチド配列をコードするＤＮＡ分子にハイブリダイズする核酸分子にも関する。好まれる分子（ｍＲＮＡ展望から）は、本明細書に記載されているＤＮＡ分子の１種と少なくとも７５％または８０％（好ましくは、少なくとも８５％、より好ましくは、少なくとも９０％、最も好ましくは、少なくとも９５％）相同性または配列同一性を有する分子である。例として、真核細胞における抗体の発現を考慮して、配列表に示すＤＮＡ配列が、真核細胞におけるコドン使用にマッチするように設計された。Ｅ．ｃｏｌｉにおいて抗体を発現させることが所望される場合、これらの配列は、Ｅ．ｃｏｌｉコドン使用にマッチするように変化させることができる。本発明のＤＮＡ分子のバリアントは、例えば、国際公開第２００７／０４２３０９号に記載されている通り、いくつかの異なる仕方で構築することができる。
さらなる態様では、本発明は、本発明の第１の態様のいずれかの抗ＣＤ７３抗体分子の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を含有する発現ベクターを提供する。
好ましくは、核酸分子は、配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３および９５のいずれかの重鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。好ましくは、核酸分子は、配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のいずれかの軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を含む。
好ましくは、発現ベクターは、それに加えて、それぞれ重鎖可変ドメインおよび／または軽鎖可変ドメインをコードする核酸分子、好ましくは、ＤＮＡ分子に連結された、それぞれ重鎖の定常ドメインおよび／または軽鎖の定常ドメインをコードする核酸分子、好ましくは、ＤＮＡ分子を含む。
特異的に好まれる実施形態では、２種の発現ベクターを使用することができ、そのうち１種は、重鎖の発現のためのものであり、他の１種は、軽鎖の発現のためのものであり、次いで、この２種の発現ベクターは、両者共に、組換えタンパク質発現のために宿主細胞にトランスフェクトすることができる。
好ましくは、発現ベクターは、少なくとも１種の調節配列に作動可能に連結された前記核酸分子を含むベクターとなり、斯かる調節配列は、プロモーター、エンハンサーまたはターミネーター配列、最も好ましくは、異種プロモーター、エンハンサーまたはターミネーター配列となることができる。
本発明の核酸は、本明細書に示す本発明の抗体のアミノ酸配列に関する情報に基づき、それ自体が公知である様式で（例えば、自動ＤＮＡ合成および／または組換えＤＮＡ技術によって）調製することができるまたは得ることができる。
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の重鎖をコードする発現ベクター等、上に記載されている発現ベクター、および本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の軽鎖をコードする発現ベクターを有する宿主細胞に関する。一部の実施形態では、特に、抗体がｓｃＦｖ等の単鎖抗体である場合、宿主細胞は、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の軽鎖および重鎖の両方をコードするベクターを含む。
特に好まれる実施形態において、前記宿主細胞は、哺乳類細胞、特に、ヒト細胞（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）等、真核細胞である。別の実施形態では、斯かる宿主細胞は、細菌細胞である。他の有用な細胞は、酵母細胞または他の真菌細胞である。
発現のための宿主として利用できる哺乳類細胞株は、当技術分野で周知であり、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ、ＣＨＯ−ＤＧ４４）細胞、ＮＳＯ、ＳＰ２／０細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２）、Ａ５４９細胞、３Ｔ３細胞、またはいずれか斯かる細胞株の派生物／後代を含む。ヒト、マウス、ラット、サルおよび齧歯類細胞株が挙げられるがこれらに限定されない、他の哺乳類細胞、または酵母、昆虫および植物細胞が挙げられるがこれらに限定されない、他の真核細胞、または細菌等の原核細胞を使用することができる。本発明の抗体は、宿主細胞における抗体の発現を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより産生される。しかし、異種タンパク質の発現のために当技術分野で使用される、両生類細胞、昆虫細胞、植物細胞および他のいずれかの細胞を同様に使用することができる。
別の態様では、本発明は、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を製造する方法であって、
− 本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の形成を可能にする条件下で、上に記載されている宿主細胞を培養するステップと、
− 前記抗体分子を回収するステップと
を含む方法を提供する。
一実施形態では、製造方法は、さらに下に記載される通り、前記抗体をさらに精製するステップを追加的に含む。
一実施形態では、製造方法は、さらに本明細書に記載されている通り、前記抗体をさらに改変するステップを追加的に含む。
一実施形態では、製造方法は、さらに本明細書に記載されている通り、前記抗体分子を医薬組成物に製剤化するステップを追加的に含む。
例えば、本明細書に記載されている通り、抗体を産生するための当技術分野で公知のいずれかの方法を使用することができる。
別の態様では、本発明は、医学において使用するための、上に記載されている抗ＣＤ７３抗体を提供する。本発明の抗体の具体的な医学的使用について、さらに詳細を下に記載する。
別の態様では、本発明の抗ＣＤ７３抗体と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物が提供される。適した担体は、当技術分野で公知であり、さらに本明細書に後述する。この組成物は、ＰＤ−１アンタゴニスト等が挙げられるがこれに限定されない、本明細書により詳細に後述される追加的な治療剤を含むこともできる。
＜抗ＣＤ７３抗体およびＰＤ−１アンタゴニスト等の他の治療剤を含む医薬組成物；パーツキット（キットオブパーツ、部品キット、ｋｉｔ ｏｆ ｐａｒｔｓ）、方法ならびに使用＞
ＰＤ−１は、Ｔ細胞活性、したがって、免疫系活性の調節において重要な役割を果たす。
ある範囲の異なるがん設定において、アンタゴニスト性抗ＰＤ−１抗体分子が、Ｔ細胞活性を増加させ、これにより、腫瘍を攻撃するように免疫系を活性化して、それによりがんを処置することができることが示された。
ＰＤ−１受容体を遮断するモノクローナル抗体が、種々のがん型に対する耐久性のある臨床応答に関連付けられており、新規がん治療薬として大きい潜在力を保持することが公知である。ＣＤ７３の標的化が、抗ＰＤ−１抗体の抗腫瘍活性を増強することも示された。
このような背景に対し、本発明者らは、ＰＤ−１抗体と本発明の抗ＣＤ７３抗体との組合せを調査するように努めた。
樹状細胞／Ｔ細胞共培養アッセイ（実施例７にさらに概要を述べる）を使用して、本発明者らは、抗ＰＤ−１分子と組み合わせて、本発明の代表的な抗ＣＤ７３抗体分子の機能的特徴を試験した。実施例７および図１から分かる通り、抗ＰＤ−１抗体の効果は、ＡＭＰによって抑制され、この結果は、明らかに、ＰＤ１応答が、ＡＭＰに左右されることを示す。抗ＰＤ−１抗体等のＰＤ−１アンタゴニストと本発明の抗ＣＤ７３抗体分子との組合せは、ＡＭＰ依存性抑制を復帰させ、ＩＦＮγレベルを回復することができる。
よって、本発明のさらなる態様は、本発明の抗ＣＤ７３抗体と、ＰＤ−１アンタゴニストと、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物を提供する。適した担体は、当技術分野で公知であり、さらに本明細書に後述される。
適したＰＤ−１アンタゴニストは、本明細書に後述される。
一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤＬ−１抗体である。一部の実施形態では、この抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される。好ましくは、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載されているＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５から選択される。
一部の実施形態では、抗ＰＤＬ−１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブまたはデュルバルマブから選択される。
本発明の抗ＣＤ７３抗体の代わりに、ＭＥＤＩ９４４７、ＢＭＳ９８６１７９、ＣＰＸ−００６、ＣＰＸ−００１６、または国際公開第０８００７６４８号、国際公開第２０１６０７５０９９号、国際公開第２０１６０８１７４８号、国際公開第２０１６０５５６０９号、国際公開第２０１６１３１９５０号、国際公開第１７０６４０４３号、国際公開第２０１７１００６７０号、国際公開第１７１５２０８５号もしくは国際公開第２０１８０１３６１１号に記載されている抗体等、別の抗ＣＤ７３抗体を使用することもできる。
本発明のさらなる態様は、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子と、ＰＤ−１アンタゴニストとを含むパーツキットを提供する。本キットは、使用説明書をさらに含むことができる。
適したＰＤ−１アンタゴニストは、本明細書に後述される。
一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤＬ−１抗体である。一部の実施形態では、この抗ＰＤ−１抗体は、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される。好ましくは、抗ＰＤ−１抗体分子は、本明細書に記載されているＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５から選択される。
一部の実施形態では、抗ＰＤＬ−１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブまたはデュルバルマブから選択される。
本発明の抗ＣＤ７３抗体の代わりに、ＭＥＤＩ９４４７、ＢＭＳ９８６１７９、ＣＰＸ−００６、ＣＰＸ−００１６、または国際公開第０８００７６４８号、国際公開第２０１６０７５０９９号、国際公開第２０１６０８１７４８号、国際公開第２０１６０５５６０９号、国際公開第２０１６１３１９５０号、国際公開第１７０６４０４３号、国際公開第２０１７１００６７０号、国際公開第１７１５２０８５号もしくは国際公開第２０１８０１３６１１号に記載されている抗体等、別の抗ＣＤ７３抗体を使用することもできる。
当業者には、上述に基づき、上に明示されている本発明の抗体分子、例えば、本発明の抗ＣＤ７３抗体およびＰＤ−１アンタゴニストを使用した、疾患（下により詳細に指定される通り）の処置のための医薬組成物、ならびに本発明の斯かる医薬組成物または抗体分子を活用して、疾患（下により詳細に指定される通り）を処置する方法も本明細書に（ｈｅｒｅｗｉｔｈ）開示されていることが明らかになるであろう。
誤解を避けるために、本明細書に記載されている医薬組成物、キット、処置方法、医学的使用、投与方法および投薬量に関する実施形態の全てが、単独での、またはＰＤ−１アンタゴニスト等のさらに別の治療剤と組み合わせた、本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体のいずれかのために考慮される。本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４またはＰＤ１−５等、本明細書に記載されているＰＤ−１アンタゴニストのいずれかを使用することができる（ＰＤ−１およびＰＤＬ−１の阻害剤を含む）。
本発明の抗ＣＤ７３抗体分子および本発明の抗ＰＤ−１抗体分子は、同じ投与経路により同時に投与されるべきである場合、異なる医薬製剤もしくは組成物として、または組み合わせた医薬製剤もしくは組成物の部分として投与することができる。また、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子および本発明の抗ＰＤ−１抗体分子が、組み合わせた処置レジメンの部分として使用されるべきである場合、抗体のそれぞれは、抗体の一方がそれだけで使用される場合に使用されるものと同じ量で、同じレジメンに従って投与することができ、斯かる組み合わせた使用は、相乗効果をもたらしても、もたらさなくてもよい。しかし、抗体の組み合わせた使用が、相乗効果をもたらす場合、所望の治療作用を依然として達成しつつ、抗体の一方または両方の量を低下させることが可能となる場合もある。これは、例えば、それらの通常量で使用される場合、所望の薬理学または治療効果を依然として得ながら、抗体の一方または両方の使用に伴ういずれか望まれない副作用の回避、限定または低下に有用となり得る。
抗ＣＤ７３抗体およびＰＤ−１アンタゴニストに加えてさらに、上に記載されている組成物およびキットは、本明細書により詳細に後述される追加的な治療剤を含むこともできる。
＜医薬組成物、投与方法、投薬量＞
本発明は、さらに、疾患（下により詳細に指定される通り）の処置のための医薬組成物であって、本明細書に提供される少なくとも１種の抗ＣＤ７３抗体を含む斯かる組成物に関する。本発明は、さらに、前に明示されている少なくとも１種の抗ＣＤ７３抗体または医薬組成物を使用して、疾患（下により詳細に指定される通り）を処置する方法を包含し、さらに、本発明の斯かる抗ＣＤ７３抗体分子または医薬組成物を使用することによる、斯かる疾患の処置のための医薬の調製を包含する。
斯かる組成物は、単独での、またはＰＤ−１アンタゴニスト、例えば、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４もしくはＰＤ１−５等のさらに別の治療剤と組み合わせた、本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体のいずれかのために考慮される。
抗ＣＤ７３抗体および／またはこれを含む組成物は、使用されるべき特異的な医薬製剤または組成物に応じて、いずれか適した様式で、それを必要とする患者に投与することができる。よって、抗ＣＤ７３抗体および／またはこれを含む組成物は、例えば、静脈内に（ｉ．ｖ．）、皮下に（ｓ．ｃ．）、筋肉内に（ｉ．ｍ．）、腹腔内に（ｉ．ｐ．）、経皮に、経口に、舌下に（例えば、舌の下に配置され、舌の下の毛細血管網へと粘膜を通って吸着される、舌下錠剤、スプレーまたは液滴の形態で）、経鼻に（鼻腔内に）（例えば、経鼻スプレーの形態で、および／またはエアロゾルとして）、外用に、坐薬を用いて、吸入によって、または他のいずれかの適した様式で、有効量または用量において、投与することができる。
抗ＣＤ７３抗体および／またはこれを含む組成物は、処置または軽減されるべき疾患、障害または状態の処置および／または軽減に適した処置のレジメンに従って投与される。臨床医は、一般に、処置または軽減されるべき疾患、障害または状態、疾患の重症度、その症状の重症度、使用されるべき本発明の特異的な抗体分子、特異的な投与経路および使用されるべき医薬製剤または組成物、患者の年齢、性別、体重、食事、全身状態等の因子、ならびに臨床医にとって周知の同様の因子に応じて、適した処置レジメンを決定することができるであろう。一般に、処置レジメンは、１種もしくは複数の本発明の抗体分子、または１種もしくは複数のこれを含む組成物の、治療有効量または用量での投与を含むであろう。
一般に、本明細書に言及されている疾患、障害および状態の処置および／または軽減のため、また、処置されるべき特異的な疾患、障害または状態、使用されるべき本発明の特異的な抗体分子の効力、特異的な投与経路、および使用される特異的な医薬製剤または組成物に応じて、本発明の抗体分子は、一般に、継続的に（例えば、注入により）、またはより好ましくは単一用量として（例えば、１週間に２回、毎週または毎月の用量等；下を参照）、体重１キログラムおよび用量あたり０．０５〜５０．０ｍｇの間、好ましくは、５．０〜２０．０ｍｇ／ｋｇ／用量の間、より好ましくは、１０〜１５ｍｇ／ｋｇ／用量の間の量で投与されるであろうが、これは、特に、前述のパラメータに応じて著しく変動し得る。よって、一部の事例では、上に示す最小用量未満を使用することが十分となり得る一方、他の事例では、上限を越える必要がある場合がある。大量に投与する場合、その日のうちに散らばった数のより少ない用量へと分割することが賢明となり得る。
本発明の特異的な抗体分子ならびにその特異的な薬物動態学的および他の特性に応じて、抗体分子は、毎日、２、３、４、５または６日毎に、毎週、毎月、その他で投与することができる。投与レジメンは、長期の毎週処置を含むことができる。「長期」とは、少なくとも２週間、好ましくは、数カ月間または数年間の持続時間を意味するものである。
本発明の抗体分子およびこれを含む組成物の有効性は、関与する特異的な疾患に応じて、それ自体が公知であるいずれか適したｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ、細胞ベースアッセイ、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイおよび／または動物モデル、またはこれらのいずれかの組合せを使用して検査することができる。適したアッセイおよび動物モデルは、当業者には明らかとなり、例えば、後述する実施例において使用されるアッセイおよび動物モデルを含む。
＜製剤＞
医薬品使用のため、本発明の抗体分子は、（ｉ）少なくとも１種の本発明の抗ＣＤ７３抗体と、（ｉｉ）少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび／または安定剤と、（ｉｉｉ）任意に、ＰＤ−１アンタゴニスト等、１種または複数のさらに別の薬理学的に活性なポリペプチドおよび／または化合物とを含む医薬調製物として製剤化することができる。「薬学的に許容される」とは、それぞれの材料が、個体に投与されたときに、いかなる生物学的または他の面で望ましくない効果も示さず、有害な様式で、これが含有される医薬組成物の他の成分（例えば、薬学的に活性な成分等）のいずれとも相互作用しないことを意味する。具体例は、例えば、Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Company, USA (1990)等の標準ハンドブックに見出すことができる。例えば、本発明の抗体は、従来の抗体および抗体断片ならびに他の薬学的に活性なタンパク質のためのそれ自体が公知であるいずれかの様式で、製剤化および投与することができる。よって、さらなる実施形態において、本発明は、さらに本明細書に記載されている通り、少なくとも１種の本発明のＣＤ７３抗体と、少なくとも１種の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、アジュバントおよび／または安定剤と、任意に、ＰＤ−１アンタゴニスト等の１種または複数のさらに別の薬理学的に活性な物質とを含有する医薬組成物または調製物に関する。
静脈内、筋肉内、皮下注射または静脈内注入等、非経口的投与のための医薬調製物は、例えば、活性成分を含み、任意にさらなる溶解または希釈ステップ後に、注入または注射に適した、滅菌溶液、懸濁液、分散、エマルションまたは粉末となることができる。斯かる調製物に適した担体または希釈剤は、例えば、滅菌水、ならびに生理的リン酸緩衝食塩水、リンゲル溶液、デキストロース溶液およびハンクス溶液等の薬学的に許容される水性緩衝液および溶液；水・油；グリセロール；エタノール；プロピレングリコール等のグリコール、ならびに鉱物油、動物油および植物油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、ならびにこれらの適した混合物を限定することなく含む。
本発明の抗体分子の溶液は、抗細菌および抗真菌剤、例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸塩、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チオメルサール、エチレンジアミン四酢酸（そのアルカリ金属塩）、等、微生物の成長を防止するための保存料を含有することもできる。多くの事例では、等張剤、例えば、糖、緩衝液または塩化ナトリウムを含むことが好ましくなるであろう。乳化剤および／または分散剤が使用されてもよい。例えば、リポソームの形成により、分散の場合は要求される粒子径の維持により、または界面活性物質の使用により、適切な流動性を維持することができる。吸収を遅延させる他の薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンが添加されてもよい。溶液は、注射バイアル、アンプル、注入ボトル等に充填することができる。
全ての事例では、最終的剤形は、滅菌され、流動性があり、製造および貯蔵条件下で安定である必要がある。滅菌注射用溶液は、要求に応じて上に列挙されている様々な他の成分を有する適切な溶媒に、要求される量の活性化合物を取り込み、続いて、濾過滅菌することにより調製される。滅菌注射用溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好まれる調製方法は、以前に滅菌濾過された溶液中に存在する活性成分プラスいずれか追加的な所望の成分の粉末を生じる、真空乾燥および凍結乾燥技法である。
通常、水性の溶液または懸濁液が好まれるであろう。一般に、本発明の抗体等の治療タンパク質に適した製剤は、適した濃度（１．０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌまたは１００ｍｇ／ｍｌ等、０．００１〜４００ｍｇ／ｍｌ、好ましくは、０．００５〜２００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは、０．０１〜２００ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは、１．０〜１００ｍｇ／ｍｌ等）のタンパク質と、
− リン酸緩衝食塩水、ｐＨ７．４、
− 他のリン酸緩衝液、ｐＨ６．２〜８．２、
− 酢酸緩衝液、ｐＨ３．２〜７．５、好ましくは、ｐＨ４．８〜５．５、
− ヒスチジン緩衝液、ｐＨ５．０〜７．０、
− コハク酸緩衝液、ｐＨ３．２〜６．６、および
− クエン酸緩衝液、ｐＨ２．１〜６．２
等の水性緩衝液と、任意に、溶液の等張性をもたらすための、塩（例えば、ＮａＣｌ）および／または糖（例えば、スクロースおよびトレハロース等）および／または他の多価アルコール（例えば、マンニトールおよびグリセロール等）、および／または界面活性物質とを含む溶液等、緩衝タンパク質溶液である。
好まれる緩衝タンパク質溶液は、２４０ｍＭトレハロースを添加することにより等張性のために調整された、０．６７ｍＭメチオニンを含んでいてもよい２５ｍＭ酢酸緩衝液、ｐＨ５．５に溶解された、約５０ｍｇ／ｍｌの本発明の抗体を、単独で、またはＰＤ−１アンタゴニストと組み合わせて含む溶液である。他の界面活性物質、例えば、０．０４％Ｔｗｅｅｎ−２０、Ｔｗｅｅｎ−８０またはポリソルベート８０が、斯かる溶液に含まれていてもよい。皮下適用のための製剤は、最大で１００ｍｇ／ｍｌまたはさらには１００ｍｇ／ｍｌを上回る等、著しくより高い濃度の本発明の抗体を含むことができる。しかし、当業者であれば、上に示すその成分および量が、単に、ある１つの好まれるオプションを表すにすぎないことが明らかであろう。その代替および変種は、当業者には直ちに明らかとなるであろう、または上の開示から出発して容易に理解することができる。
本発明のさらなる態様において、本発明の抗体分子は、シリンジ、注射器ペン、マイクロポンプまたは他のデバイス等、抗体の投与に有用なデバイスと組み合わせて使用することができる。
＜治療使用／処置方法＞
本発明のさらなる態様は、がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を投与するステップを含む方法を提供する。好まれる実施形態では、本方法は、斯かる患者に、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体等のＰＤ−１アンタゴニストを投与するステップをさらに含む。好ましくは、前記抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される。好ましくは、前記抗ＰＤＬ−１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。
一部の実施形態では、がんは、腎臓がん、胃腸管がんまたは肺がんである。一部の実施形態では、前記胃腸管がんは、結腸癌、胃がんまたは肝細胞癌である。一部の実施形態では、前記腎臓がんは、腎がん、好ましくは、明細胞癌である。本発明の好まれる実施形態では、がんは、肺がん、好ましくは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、前記結腸癌は、ＣＲＣである。
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、任意に、上に記載されているＰＤ−１アンタゴニストと共に、１種または複数のさらに別の治療剤および／または手技と組み合わせて投与され、この薬剤および手技については、さらに詳細に本明細書に後述される。非限定的な例は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、外科的手技、放射線手技、ワクチンまたは細胞免疫療法から選択される治療剤または手技である。
一部の実施形態では、さらに別の治療剤は、Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＣＤ３９アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニストまたはＨＥＲ２アンタゴニストである。
本発明のさらなる態様は、がんを処置する方法において使用するための、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を提供する。好まれる実施形態では、本態様は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体等のＰＤ−１アンタゴニストの追加的な使用をさらに含む。好ましくは、前記抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される。好ましくは、前記抗ＰＤＬ−１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。
一部の実施形態では、がんは、腎臓がん、胃腸管がんまたは肺がんである。一部の実施形態では、前記胃腸管がんは、結腸癌、胃がんまたは肝細胞癌である。一部の実施形態では、前記腎臓がんは、腎がん、好ましくは、明細胞癌である。本発明の好まれる実施形態では、がんは、肺がん、好ましくは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、前記結腸癌は、ＣＲＣである。
一部の実施形態では、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子は、任意に、上に記載されているＰＤ−１アンタゴニストと共に、１種または複数のさらに別の治療剤および／または手技と組み合わせて投与され、この薬剤および手技については、さらに詳細に本明細書に後述される。非限定的な例は、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、外科的手技、放射線手技、ワクチンまたは細胞免疫療法から選択される治療剤または手技である。
当技術分野で公知の通り、「標的化抗がん療法」は、健康な組織における有害効果が最小化されながら、活性化または不活性化されると、悪性プロセスの退縮または破壊を引き起こし得る、十分に定義された標的または生物学的経路に特異的に作用する特定の機構を有する薬物の全身性投与を指す（Li et al, Target Oncol. 2012;7(1):69-85）。「免疫に基づく療法」または「免疫療法」は、免疫応答を誘導、増強または抑制することによる疾患の処置である。がんの文脈において、免疫に基づく療法は通常、例えば、本明細書に後述される免疫療法剤を使用して、免疫応答を誘導および／または増強する治療法を指す。
一部の実施形態では、さらに別の治療剤は、Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＣＤ３９アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニストまたはＨＥＲ２アンタゴニストである。
本発明およびそのあらゆる実施形態の意義の内のＰＤ−１アンタゴニストは、ＰＤ−１とその受容体との相互作用を阻害する化合物である。ＰＤ−１アンタゴニストは、当技術分野で周知である、例えば、Li et al., Int. J. Mol. Sci. 2016, 17, 1151（参照により本明細書に組み込む）によって総説されている。ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体等、ＰＤ−１の阻害剤またはＰＤＬ−１の阻害剤となることができる。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤ−１抗体である。一部の実施形態では、ＰＤ−１アンタゴニストは、抗ＰＤＬ−１抗体である。いずれかのＰＤ−１アンタゴニスト、特に、Li et al.によって開示されている抗体と共に、本明細書の下に開示されているさらに別の抗体等の抗体を、本発明に従って使用することができる。好ましくは、本発明およびそのあらゆる実施形態のＰＤ−１アンタゴニストは、次の抗体からなる群から選択される：
− ペムブロリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
− ニボルマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
− ピディリズマブ（抗ＰＤ−１抗体）；
− ＰＤＲ−００１（抗ＰＤ−１抗体）；
− アテゾリズマブ（抗ＰＤＬ−１抗体）；
− アベルマブ（抗ＰＤＬ−１抗体）；
− デュルバルマブ（抗ＰＤＬ−１抗体）
− 本明細書に記載されているＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５（抗ＰＤ−１抗体）。
例えば、Hamid, O. et al. (2013) New England Journal of Medicine 369(2):134-44に開示されているペムブロリズマブ（以前にランブロリズマブとしても公知；商品名Ｋｅｙｔｒｕｄａ；ＭＫ−３４７５としても公知）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体である；これは、Ｆｃ媒介性細胞傷害性を防止するように設計されたＣ２２８Ｐに突然変異を含有する。ペムブロリズマブは、例えば、米国特許第８，３５４，５０９号および国際公開第２００９／１１４３３５号に開示されている。これは、切除不能または転移性黒色腫を患う患者および転移性ＮＳＣＬＣ患者の処置に関してＦＤＡによって承認されている。
ニボルマブ（ＣＡＳ登録番号：９４６４１４−９４−４；ＢＭＳ−９３６５５８またはＭＤＸ１１０６ｂ）は、検出可能な抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を欠く、ＰＤ−１を特異的に遮断する完全にヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、例えば、米国特許８，００８，４４９号および国際公開第２００６／１２１１６８号に開示されている。これは、切除不能または転移性黒色腫、転移性ＮＳＣＬＣおよび進行型腎細胞癌を患う患者の処置に関してＦＤＡによって承認された。
ピディリズマブ（ＣＴ−０１１；Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ−１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピディリズマブは、例えば、国際公開第２００９／１０１６１１号に開示されている。
ＰＤＲ−００１またはＰＤＲ００１は、ＰＤ−１へのＰＤＬ−１およびＰＤ−Ｌ２の結合を遮断する、高親和性リガンド遮断性ヒト化抗ＰＤ−１ ＩｇＧ４抗体である。ＰＤＲ−００１は、国際公開第２０１５／１１２９００号および国際公開第２０１７／０１９８９６号に開示されている。
本発明の態様の上述および他のいずれかにおいて、抗体ＰＤ１−１〜ＰＤ１−５は、欧州特許出願公開第１６１７０１７４．３号に開示されている抗体分子であり、さらに下の表９に示す配列によって定義されている。
したがって、ＰＤ１−１は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；
ＰＤ１−２は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；
ＰＤ１−３は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；
ＰＤ１−４は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖を有し；
ＰＤ１−５は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する。
本発明のさらなる態様は、がんを処置するための医薬組成物を調製するための、本発明の抗ＣＤ７３抗体分子の使用である。好まれる実施形態では、本態様は、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体等のＰＤ−１アンタゴニストの追加的な使用をさらに含む。好ましくは、前記抗ＰＤ−１抗体は、本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５からなる群から選択される。好ましくは、前記抗ＰＤＬ−１抗体は、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される。
ある実施形態では、抗ＣＤ７３抗体分子は、ＰＤ−１アンタゴニストと同時に、共に、逐次に、連続的に、代替的にまたは別々に投与されるべきである。
本発明の医学的使用態様は、本発明の特異的抗ＣＤ７３抗体分子および／または本明細書に記載されているＰＤ−１アンタゴニストのいずれかを含むことができる。
その生物学的特性により、本発明の抗体は、がん等、過剰または異常な細胞増殖によって特徴付けられる疾患の処置に適する。
本明細書において、用語「がん」は、病理組織学的な型または侵襲性ステージとは無関係に、あらゆる型のがん性成長または発癌性プロセス、転移性組織または悪性に形質転換された細胞、組織もしくは臓器を含むことを意味するものである。がん性障害の例として、固形腫瘍、血液学的がん、軟部組織腫瘍および転移性病変が挙げられるがこれらに限定されない。
本明細書に開示されている抗体分子を使用してその成長が阻害され得る例示的ながんは、免疫療法に対し典型的に応答性であるがんを含む。
例えば、これらに制限されることはないが、次のがん、腫瘍および他の増殖性疾患は、本発明に係る抗体で処置することができる：
固形腫瘍の例として、肝臓、リンパ系、泌尿生殖器（例えば、腎、尿路上皮細胞）、咽頭に罹患するもの等、様々な臓器系の悪性病変、例えば、肉腫および癌腫（腺癌および扁平細胞癌を含む）が挙げられる。腺癌は、大部分の結腸がん、腎細胞癌、肝臓がん、肺、小腸の非小細胞癌等の悪性病変を含む。扁平細胞癌は、例えば、肺、食道、皮膚、ＨＮＳＣＣ、口腔、肛門および子宮頸部における悪性病変を含む。
処置することができるさらに別の徴候は、腎臓がん、例えば、明細胞癌等の腎がん、胃腸管がん、胃がん、ＣＲＣ、結腸癌、肛門領域のがん、膵がん、卵巣がん、黒色腫（例えば、皮膚性または眼内悪性黒色腫等の転移性悪性黒色腫）、乳がん、ＨＮＳＣＣ、ＨＣＣ、肺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非ＮＳＣＬＣ、神経膠腫、子宮内膜がん、前立腺がん（例えば、ホルモン不応性前立腺腺癌または去勢抵抗性前立腺がん（ＣＲＰＣ））、甲状腺がん、神経芽細胞腫、神経膠芽腫（多形神経膠芽腫）、子宮頸部がん、胃がん、膀胱がん、肝細胞腫、生殖細胞腫瘍、小児肉腫、副鼻腔ナチュラルキラーリンパ腫、骨がん、子宮がん、精巣がん、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頸部の癌腫、腟の癌腫、外陰部の癌腫、食道のがん、小腸のがん、内分泌系のがん、副甲状腺のがん、副腎のがん、軟部組織の肉腫、尿道のがん、陰茎のがん、小児期の固形腫瘍、尿管のがん、腎盂の癌腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮がん、Ｔ細胞リンパ腫、アスベストによって誘導されるがんを含む環境により誘導されるがん、ウイルス関連がん（例えば、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）関連腫瘍）、および２種の主要な血球細胞系列、すなわち、骨髄性細胞株（顆粒球、赤血球、血小板、マクロファージおよびマスト細胞を産生する）またはリンパ系細胞株（Ｂ、Ｔ、ＮＫおよび形質細胞を産生する）のいずれかに由来する血液学的悪性病変、例えば、あらゆる種類の白血病、リンパ腫および骨髄腫、例えば、急性、慢性、リンパ球性および／または骨髄性白血病、例えば、急性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性リンパ系白血病および慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、未分化ＡＭＬ（ＭＯ）、骨髄芽球性白血病（Ｍｌ）、骨髄芽球性白血病（Ｍ２；細胞成熟を伴う）、前骨髄球性白血病（Ｍ３またはＭ３バリアント［Ｍ３Ｖ］）、骨髄単球性白血病（Ｍ４またはＭ４バリアント、好酸球増加症を伴う［Ｍ４Ｅ］）、単球性白血病（Ｍ５）、赤白血病（Ｍ６）、巨核芽球性白血病（Ｍ７）、単離された顆粒球性肉腫および緑色腫；リンパ腫、例えば、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、Ｂ細胞リンパ腫、前駆リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、リンパ球性リンパ腫、急性骨髄性リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、粘膜関連リンパ系組織（ＭＡＬＴ）リンパ腫、低分化（例えば、Ｋｉｌ＋）大細胞リンパ腫、成人Ｔ細胞リンパ腫／白血病、マントル細胞リンパ腫、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫、血管中心性リンパ腫、腸管Ｔ細胞リンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、Ｔリンパ芽球性リンパ腫、末梢性Ｔ細胞リンパ腫、前駆Ｔリンパ芽球性リンパ腫、移植後リンパ増殖性障害、真性組織球性リンパ腫、原発性中枢神経系リンパ腫、原発性浸出液リンパ腫、リンパ芽球性リンパ腫（ＬＢＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性組織球性リンパ腫（ＤＨＬ）、免疫芽球性大細胞リンパ腫、前駆Ｂリンパ芽球性リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＬＣ）（菌状息肉症またはセザリー症候群とも呼ばれる）、低分化大細胞リンパ腫およびリンパ形質細胞性リンパ腫（ＬＰＬ）とワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症；骨髄腫、例えば、ＩｇＧ骨髄腫、軽鎖骨髄腫、非分泌性骨髄腫、くすぶり型骨髄腫（無痛性骨髄腫とも呼ばれる）、孤立性形質細胞腫および多発性骨髄腫、ヘアリー細胞リンパ腫；骨髄性系列の造血系腫瘍、線維肉腫および横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓｃａｒｃｏｍａ）を含む間葉系起源の腫瘍；セミノーマ、奇形癌腫、星状細胞腫、シュワン腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；線維肉腫、横紋筋肉腫（ｒｈａｂｄｏｍｙｏｓｃａｒｏｍａ）および骨肉腫を含む間葉系起源の腫瘍；ならびに色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、セミノーマ、甲状腺濾胞性がんおよび奇形癌腫、リンパ系系列の造血系腫瘍、例えば、小細胞および大脳様細胞型のものを含むＴ前リンパ球性白血病（ＴＰＬＬ）等のＴ細胞障害が挙げられるがこれらに限定されない、Ｔ細胞およびＢ細胞腫瘍を含む他の腫瘍；好ましくはＴ細胞型の大型顆粒リンパ球白血病（ＬＧＬ）；ａ／ｄ Ｔ−ＮＨＬ肝脾リンパ腫；末梢性／胸腺後（ｐｏｓｔｔｈｙｍｉｃ）Ｔ細胞リンパ腫（多形性および免疫芽球性サブタイプ）；血管中心性（鼻）Ｔ細胞リンパ腫；直腸がん；ならびに前記がんのいずれかの組合せを含む。本明細書に記載されている方法は、転移性がん、以前の処置に対し抵抗性または不応性であるがん（例えば、以前の免疫療法、例えば、遮断性ＣＴＬＡ−４またはＰＤ−１またはＰＤＬ−１抗体による以前の免疫療法に対し不応性であるがん）および反復性がんの処置に使用することもできる。
一部の実施形態では、がんは、腎臓がん、胃腸管がんまたは肺がんである。一部の実施形態では、前記胃腸管がんは、結腸癌、胃がんまたは肝細胞癌である。一部の実施形態では、前記腎臓がんは、腎がん、好ましくは、明細胞癌である。本発明の好まれる実施形態では、がんは、肺がん、好ましくは、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）である。一部の実施形態では、前記結腸癌は、ＣＲＣである。
身体におけるその特異的な場所／起源によって特徴付けられる、上に言及されているあらゆるがん、腫瘍、新生物等は、原発性腫瘍およびそれに由来する転移性腫瘍の両方を含むことを意味する。
患者が、ＣＤ７３の高い発現（がん細胞それ自体の表面における、または腫瘍内の間質もしくは免疫細胞の表面における）を有することによって特徴付けられるがんを有する場合；および／またはがんが、免疫細胞、例えば、腫瘍浸潤性リンパ球によって浸潤される場合、当該患者は、本発明の抗体分子（本明細書に記載されている）による処置に応答する可能性がより高くなることが可能である。ＣＤ７３のある程度の発現が要求され得ることが予想されるが、本発明の抗体分子による処置は、ＣＤ７３の高い発現を有するがんに必ずしも限定されない。したがって、本発明の実施形態は、処置されるべき患者が、ＣＤ７３の高い発現を有することによって特徴付けられるがんを有する、および／またはがんが、免疫細胞によって浸潤される、実施形態である。一部の実施形態では、患者は、腫瘍内のがん、間質または免疫細胞の表面にＰＤＬ−１および／またはＣＤ７３の高い発現を有することによって特徴付けられるがんを有し、本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体およびＰＤ−１アンタゴニストの両方で処置される。
斯かる発現は、例えば、フローサイトメトリーまたは免疫組織化学的検査等の当技術分野で公知の方法によって、がん細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋Ｔ細胞等の腫瘍浸潤性リンパ球、腫瘍脈管構造、腫瘍間質表面において決定することができる。
好まれる実施形態では、処置されるべき患者は、ＣＤ７３の発現増加に基づき選択される。
さらに、患者が、高い遺伝子突然変異数を有することによって特徴付けられるがんを有する場合、当該患者は、本発明の抗体分子（本明細書に記載されている）による処置に応答する可能性がより高い可能がある。高い遺伝子突然変異数を評価することができる仕方の例として、がんが、マイクロサテライト不安定性、または不十分なＤＮＡミスマッチ修復効率を有することによって特徴付けられるかについての決定が挙げられる。斯かるがんが、より免疫原性である、したがって、本発明の抗体分子等の免疫調節性治療管理体制による処置に応答する可能性がより高いことが考えられる。したがって、本発明の実施形態は、処置されるべき患者が、高い遺伝子突然変異数を有することによって特徴付けられるがんを有する実施形態である。
本発明の抗体分子は、第一選択、第二選択またはいずれかさらに高次の選択処置の文脈で、治療レジメンにおいて使用することができる。
一実施形態では、処置されるべき患者は、別の治療剤（処置剤）による処置を以前に受けたことがある。一部の実施形態では、斯かる治療剤は、本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブまたはＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５等、本明細書に記載されているＰＤ−１アンタゴニストとなることができる。
一実施形態では、処置されるべき患者は、前記治療剤による処置に対する不十分応答者である。例えば、患者は、前記治療剤による処置に対し非応答性、応答が最小、または十分に応答性でないことが公知であるがんを患う場合がある。一実施形態では、前記治療剤による処置に対する不十分応答者は、そのがん組織またはがん隣接組織が、不十分なまたは低いレベルの炎症（例えば、参照と比較して）によって特徴付けられる個体である。一実施形態では、前記治療剤による処置に対する不十分応答者は、前記治療剤による処置を受けて、そのがんが進行した個体である。一実施形態では、不十分応答者である、または不十分に応答性であるがんを有する個体は、前記治療剤による処置に対して不十分疾患予後を有する個体である。前記治療剤による処置に対し不十分応答を有する個体は、例えば、１種または複数の予測因子に基づき、がん進行の高いまたはより高いリスク（例えば、優れた疾患予後を有する個体と比較して）によって同定することができる。一実施形態では、予測因子は、腫瘍微小環境（腫瘍または腫瘍隣接組織）における上昇した数のＣＤ７３発現Ｔ細胞および／または上昇したレベルのＣＤ７３発現細胞またはアデノシンレベルの存在を含む。一実施形態では、予測因子は、１種または複数の遺伝子における突然変異の存在または非存在を含む。一実施形態では、突然変異は、Ｔ細胞によって認識されるネオエピトープを定義する。一実施形態では、予測因子は、腫瘍細胞における１種または複数遺伝子またはタンパク質の発現のレベル、例えば、腫瘍細胞表面におけるＰＤＬ−１、減少または上昇したレベルのＰＤＬ−１を含む。一実施形態では、予測因子は、循環または腫瘍環境におけるエフェクターＴ細胞における１種または複数の遺伝子またはタンパク質、例えば、ＰＤ−１の発現のレベルを含む。一実施形態では、予測因子は、上に記載されている高い遺伝子突然変異数を含む。
一部の実施形態では、前記治療剤は、本明細書に記載されているペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブまたはＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５等、本明細書に記載されているＰＤ−１アンタゴニストである。
本発明の抗体分子は、放射線療法、化学療法および／または外科手術とも任意に組み合わせて、上述の疾患の予防、短期または長期処置に使用することができる。したがって、別の実施形態では、処置されるべき患者は、放射線療法または化学療法（さらに後述する）による処置を以前に受けたことがある。一実施形態では、処置されるべき患者は、上に記載されている放射線療法または化学療法による処置に対する不十分応答者である。
当然ながら、上述は、それを必要とする患者に治療有効用量を投与することにより上述の疾患を処置する様々な方法における本発明の抗体分子の使用、ならびに斯かる疾患の処置のための医薬の製造のためのこのような抗体分子の使用、ならびに本発明の斯かる抗体分子を含む医薬組成物、ならびに本発明の斯かる抗体を含む医薬の調製および／または製造、その他も含む。
＜他の活性物質または処置との組合せ＞
本発明の抗ＣＤ７３抗体分子、または本発明の抗ＣＤ７３抗体およびＰＤ−１アンタゴニストの組合せは、それだけで、または特に、がん細胞における血管新生、シグナル伝達経路もしくは有糸分裂チェックポイントを阻害する、ＤＮＡ損傷剤等の化学療法剤もしくは治療活性化合物から選択される、１種もしくは複数のさらに別の治療剤もしくは手技と組み合わせて、使用することができる。
一部の実施形態では、斯かる組合せにおいて使用される抗ＣＤ７３抗体は、本発明の第１の態様における上に記載されている抗体のいずれかとなることができる。好まれる抗ＣＤ７３抗体は、Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６である（表９）。
一部の実施形態では、第１の態様の抗体の代わりに、またはそれに加えて、当技術分野で公知の他の抗ＣＤ７３抗体を使用することができることも考慮される。本発明の第１の態様の抗ＣＤ７３抗体の代わりに、ＭＥＤＩ９４４７、ＢＭＳ９８６１７９、ＣＰＸ−００６、ＣＰＸ−００１６、または国際公開第２００８００７６４８号、国際公開第２０１６０７５０９９号、国際公開第２０１６０８１７４８号、国際公開第２０１６０５５６０９号、国際公開第２０１６１３１９５０号、国際公開第１７０６４０４３号、国際公開第２０１７１００６７０号、国際公開第１７１５２０８５号もしくは国際公開第２０１８０１３６１１号に記載されている抗体等、別の抗ＣＤ７３抗体を使用することもできる。
追加的な治療剤は、抗体分子の投与と同時に、任意に同じ医薬調製物の成分として、またはその前もしくは後に、投与することができる。
ある特定の実施形態では、追加的な治療剤は、限定することなく、ＥＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＨＥＲ２−ｎｅｕ、Ｈｅｒ３、オーロラＡ、オーロラＢ、ＰＬＫおよびＰＩ３キナーゼ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、Ｒａｆ、Ｒａｓ、ＫＳＰ、ＩＡＰ（ＳＭＡＣミメティック）、Ｂｃｌ−２、Ｍｃｌ−１、ＨＤＡＣ（ヒストンデアセチラーゼ）、ＧＳＫ３β、ＰＤＫ１、ＰＴＫ２、ＩＧＦ−ＲまたはＩＲの阻害剤の群から選択される１種または複数の阻害剤となることができる。
追加的な治療剤のさらに別の例は、ＣＤＫ、Ａｋｔ、ｓｒｃ／ｂｃｒ ａｂｌ、ｃＫｉｔ、ｃＭｅｔ／ＨＧＦ、ｃ−Ｍｙｃ、Ｆｌｔ３、ＨＳＰ９０の阻害剤、ヘッジホッグアンタゴニスト、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ、Ｍｅｋ、ｍＴｏｒ、ＮＦカッパーＢ、プロテアソーム、Ｒｈｏの阻害剤、またはユビキチン化経路の阻害剤、またはＮｏｔｃｈシグナリング経路の別の阻害剤、またはｃ−ＦＬＩＰのモジュレーター（細胞性ＦＬＩＣＥ阻害タンパク質）である。
オーロラ阻害剤の例は、限定することなく、ＰＨＡ−７３９３５８、ＡＺＤ−１１５２、ＡＴ９２８３、ＣＹＣ−１１６、Ｒ−７６３、ＶＸ−６８０、ＶＸ−６６７、ＭＬＮ−８０４５、ＰＦ−３８１４７３５である。
ＰＬＫ阻害剤の例は、ＧＳＫ−４６１３６４である。
ｒａｆ阻害剤の例は、ＢＡＹ−７３−４５０６（ＶＥＧＦＲ阻害剤でもある）、ＰＬＸ４０３２、ＲＡＦ−２６５（加えて、ＶＥＧＦＲ阻害剤でもある）、ソラフェニブ（加えて、ＶＥＧＦＲ阻害剤でもある）およびＸＬ２８１である。
ＫＳＰ阻害剤の例は、イスピネシブ、ＡＲＲＹ−５２０、ＡＺＤ−４８７７、ＣＫ−１１２２６９７、ＧＳＫ２４６０５３Ａ、ＧＳＫ−９２３２９５、ＭＫ−０７３１およびＳＢ−７４３９２１である。
ＳＭＡＣミメティック（ＩＡＰアンタゴニスト）の例は、限定することなく、ＬＣＬ−１６１、Ｄｅｂｉｏ１１４３およびＡＳＴＸ−６６０である。
ｓｒｃおよび／またはｂｃｒ−ａｂｌ阻害剤の例は、ダサチニブ、ＡＺＤ−０５３０、ボスチニブ、ＸＬ２２８（ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤でもある）、ニロチニブ（ＰＤＧＦＲおよびｃＫｉｔ阻害剤でもある）、イマチニブ（ｃＫｉｔ阻害剤でもある）およびＮＳ−１８７である。
ＰＤＫ１阻害剤の例は、ＢＸ−５１７である。
Ｒｈｏ阻害剤の例は、ＢＡ−２１０である。
ＰＩ３キナーゼ阻害剤の例は、ＰＸ−８６６、ＢＥＺ−２３５（ｍＴｏｒ阻害剤でもある）、ＸＬ４１８（Ａｋｔ阻害剤でもある）、ＸＬ−１４７およびＸＬ７６５（ｍＴｏｒ阻害剤でもある）である。
ｃＭｅｔまたはＨＧＦの阻害剤の例は、ＸＬ−１８４（ＶＥＧＦＲ、ｃＫｉｔ、Ｆｌｔ３の阻害剤でもある）、ＰＦ−２３４１０６６、ＭＫ−２４６１、ＸＬ−８８０（ＶＥＧＦＲの阻害剤でもある）、ＭＧＣＤ−２６５（ＶＥＧＦＲ、Ｒｏｎ、Ｔｉｅ２の阻害剤でもある）、ＳＵ−１１２７４、ＰＨＡ−６６５７５２、ＡＭＧ−１０２およびＡＶ−２９９である。
ｃ−Ｍｙｃ阻害剤の例は、ＣＸ−３５４３である。
Ｆｌｔ３阻害剤の例は、ＡＣ−２２０（ｃＫｉｔおよびＰＤＧＦＲの阻害剤でもある）、ＫＷ２４４９、レスタウルチニブ（ＶＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＰＫＣの阻害剤でもある）、ＴＧ−１０１３４８（ＪＡＫ２の阻害剤でもある）、ＸＬ−９９９（ｃＫｉｔ、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲの阻害剤でもある）、スニチニブ（ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲおよびｃＫｉｔの阻害剤でもある）およびタンズチニブ（ｔａｎｄｕｔｉｎｉｂ）（ＰＤＧＦＲおよびｃＫｉｔの阻害剤でもある）である。
ＨＳＰ９０阻害剤の例は、タネスピマイシン、アルベスピマイシン（ａｌｖｅｓｐｉｍｙｃｉｎ）、ＩＰＩ−５０４およびＣＮＦ２０２４である。
ＪＡＫ／ＳＴＡＴ阻害剤の例は、ＣＹＴ−９９７（チューブリンとも相互作用する）、ＴＧ１０１３４８（Ｆｌｔ３の阻害剤でもある）およびＸＬ−０１９である。
Ｍｅｋ阻害剤の例は、ＡＲＲＹ−１４２８８６、ＰＤ−３２５９０１、ＡＺＤ−８３３０およびＸＬ５１８である。
ｍＴｏｒ阻害剤の例は、テムシロリムス、ＡＰ−２３５７３（ＶＥＧＦ阻害剤としても作用する）、エベロリムス（加えて、ＶＥＧＦ阻害剤）、ＸＬ−７６５（ＰＩ３キナーゼ阻害剤でもある）およびＢＥＺ−２３５（ＰＩ３キナーゼ阻害剤でもある）である。
Ａｋｔ阻害剤の例は、ペリフォシン、ＧＳＫ−６９０６９３、ＲＸ−０２０１およびトリシリビン（ｔｒｉｃｉｒｉｂｉｎｅ）である。
ｃＫｉｔ阻害剤の例は、ＡＢ−１０１０、ＯＳＩ−９３０（ＶＥＧＦＲ阻害剤としても作用する）、ＡＣ−２２０（Ｆｌｔ３およびＰＤＧＦＲの阻害剤でもある）、タンズチニブ（Ｆｌｔ３およびＰＤＧＦＲの阻害剤でもある）、アキシチニブ（ＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦＲの阻害剤でもある）、ＸＬ−９９９（Ｆｌｔ３、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲ、ＦＧＦＲの阻害剤でもある）、スニチニブ（Ｆｌｔ３、ＰＤＧＦＲ、ＶＥＧＦＲの阻害剤でもある）およびＸＬ−８２０（ＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦＲ阻害剤としても作用する）、イマチニブ（ｂｃｒ−ａｂｌ阻害剤でもある）、ニロチニブ（ｂｃｒ−ａｂｌおよびＰＤＧＦＲの阻害剤でもある）である。
ヘッジホッグアンタゴニストの例は、ＩＰＩ−６０９およびＣＵＲ−６１４１４である。
ＣＤＫ阻害剤の例は、セリシクリブ（ｓｅｌｉｃｉｃｌｉｂ）、ＡＴ−７５１９、Ｐ−２７６、ＺＫ−ＣＤＫ（ＶＥＧＦＲ２およびＰＤＧＦＲも阻害する）、ＰＤ−３３２９９１、Ｒ−５４７、ＳＮＳ−０３２、ＰＨＡ−６９０５０９およびＡＧ０２４３２２である。
プロテアソーム阻害剤の例は、ボルテゾミブ、カルフィルゾミブおよびＮＰＩ−００５２（ＮＦカッパーＢの阻害剤でもある）である。
ＮＦカッパーＢ経路阻害剤の例は、ＮＰＩ−００５２である。
ユビキチン化経路阻害剤の例は、ＨＢＸ−４１１０８である。
好まれる実施形態では、追加的な治療剤は、抗血管新生剤である。
抗血管新生剤の例は、ＦＧＦＲ、ＰＤＧＦＲおよびＶＥＧＦＲまたはそれぞれのリガンドの阻害剤（例えば、ペガプタニブ等のＶＥＧＦ阻害剤または抗ＶＥＧＦ抗体ベバシズマブ）、ならびにサリドマイドであり、斯かる薬剤は、ニンテダニブ、ベバシズマブ、モテサニブ、ＣＤＰ−７９１、ＳＵ−１４８１３、テラチニブ（ｔｅｌａｔｉｎｉｂ）、ＫＲＮ−９５１、ＺＫ−ＣＤＫ（ＣＤＫの阻害剤でもある）、ＡＢＴ−８６９、ＢＭＳ−６９０５１４、ＲＡＦ−２６５、ＩＭＣ−ＫＤＲ、ＩＭＣ−１８Ｆ１、ＩＭｉＤ（免疫調節薬）、サリドマイド誘導体ＣＣ−４０４７、レナリドミド、ＥＮＭＤ０９９５、ＩＭＣ−Ｄ１１、Ｋｉ２３０５７、ブリバニブ、セジラニブ、ＸＬ−９９９（ｃＫｉｔおよびＦｌｔ３の阻害剤でもある）、１Ｂ３、ＣＰ８６８５９６、ＩＭＣ３Ｇ３、Ｒ−１５３０（Ｆｌｔ３の阻害剤でもある）、スニチニブ（ｃＫｉｔおよびＦｌｔ３の阻害剤でもある）、アキシチニブ（ｃＫｉｔの阻害剤でもある）、レスタウルチニブ（Ｆｌｔ３およびＰＫＣの阻害剤でもある）、バタラニブ、タンズチニブ（Ｆｌｔ３およびｃＫｉｔの阻害剤でもある）、パゾパニブ、ＧＷ７８６０３４、ＰＦ−３３７２１０、ＩＭＣ−１１２１Ｂ、ＡＶＥ−０００５、ＡＧ−１３７３６、Ｅ−７０８０、ＣＨＩＲ２５８、ソラフェニブトシル酸塩（Ｒａｆの阻害剤でもある）、ＲＡＦ−２６５（Ｒａｆの阻害剤でもある）、バンデタニブ、ＣＰ−５４７６３２、ＯＳＩ−９３０、ＡＥＥ−７８８（ＥＧＦＲおよびＨｅｒ２の阻害剤でもある）、ＢＡＹ−５７−９３５２（Ｒａｆの阻害剤でもある）、ＢＡＹ−７３−４５０６（Ｒａｆの阻害剤でもある）、ＸＬ８８０（ｃＭｅｔの阻害剤でもある）、ＸＬ−６４７（ＥＧＦＲおよびＥｐｈＢ４の阻害剤でもある）、ＸＬ８２０（ｃＫｉｔの阻害剤でもある）およびニロチニブ（ｃＫｉｔおよびｂｒｃ−ａｂｌの阻害剤でもある）から限定することなく選択される。
追加的な治療剤は、ＥＧＦＲ阻害剤から選択することもでき、これは、小分子ＥＧＦＲ阻害剤または抗ＥＧＦＲ抗体となることができる。抗ＥＧＦＲ抗体の例は、限定することなく、セツキシマブ、パニツムマブ、マツズマブであり；小分子ＥＧＦＲ阻害剤の例は、限定することなく、ゲフィチニブ、アファチニブ、オシメルチニブおよびオルムチニブ（ｏｌｍｕｔｉｎｉｂ）である。ＥＧＦＲモジュレーターの別の例は、ＥＧＦ融合毒素である。
本発明の抗体分子との組合せに有用なＥＧＦＲおよびＨｅｒ２阻害剤のうち、ラパチニブ、ゲフィチニブ、エルロチニブ、アファチニブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、ニモツズマブ、ザルツムマブ、バンデタニブ（ＶＥＧＦＲの阻害剤でもある）、ペルツズマブ、ＸＬ−６４７、ＨＫＩ−２７２、ＢＭＳ−５９９６２６、ＡＲＲＹ−３３４５４３、ＡＶ４１２、ｍＡＢ−８０６、ＢＭＳ−６９０５１４、ＪＮＪ−２６４８３３２７、ＡＥＥ−７８８（ＶＥＧＦＲの阻害剤でもある）、ＡＲＲＹ−３３３７８６、ＩＭＣ−１１Ｆ８、Ｚｅｍａｂがとりわけ挙げられる。
本発明の抗体分子と治療法において有利に組み合わせることができる他の薬剤は、トシツムマブ（ｔｏｓｉｔｕｍｕｍａｂ）およびイブリツモマブチウキセタン（２種の放射標識された抗ＣＤ２０抗体）、アレムツズマブ（抗ＣＤ５２抗体）、デノスマブ（破骨細胞分化因子リガンド阻害剤）、ガリキシマブ（ＣＤ８０アンタゴニスト）、オファツムマブ（ＣＤ２０阻害剤）、ザノリムマブ（ＣＤ４アンタゴニスト）、ＳＧＮ４０（ＣＤ４０リガンド受容体モジュレーター）、リツキシマブ（ＣＤ２０阻害剤）、エプラツズマブ（ＣＤ２２抗体）またはマパツムマブ（ＴＲＡＩＬ−１受容体アゴニスト）である。
本発明の抗体分子と組み合わせて使用することができる他の化学療法薬は、ホルモン、ホルモンアナログおよび抗ホルモン薬（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、フルベストラント、メゲストロール酢酸塩、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、シプロテロン酢酸塩、フィナステリド、ブセレリン酢酸塩、フルドロコルチゾン、フルオキシメステロン、メドロキシプロゲステロン、オクトレオチド、アルゾキシフェン、パシレオチド、バプレオチド（ｖａｐｒｅｏｔｉｄｅ））、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、リアロゾール（ｌｉａｒｏｚｏｌｅ）、エキセメスタン、アタメスタン（ａｔａｍｅｓｔａｎｅ）、ホルメスタン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、ゴセレリン酢酸塩、リュープロリド、アバレリックス、セトロレリクス、デスロレリン（ｄｅｓｌｏｒｅｌｉｎ）、ヒストレリン、トリプトレリン）、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、ペメトレキセド等の葉酸代謝拮抗薬、５フルオロウラシル、カペシタビン、デシタビン、ネララビンおよびゲムシタビン等のピリミジンアナログ、メルカプトプリン、チオグアニン、クラドリビンおよびペントスタチン、シタラビン、フルダラビン等のプリンおよびアデノシンアナログ）；抗腫瘍抗生物質（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシンおよびイダルビシン等のアントラサイクリン、マイトマイシン−Ｃ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、ピクサントロン、ストレプトゾシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ロバプラチン、サトラプラチン）；アルキル化剤（例えば、エストラムスチン、メクロレタミン（ｍｅｃｌｏｒｅｔｈａｍｉｎｅ）、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、ダカルバジン、シクロホスファミド、イホスファミド、ヒドロキシウレア、テモゾロミド、カルムスチンおよびロムスチン等のニトロソウレア、チオテパ）；有糸分裂阻害剤（例えば、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン、ビンフルニンおよびビンクリスチン等のビンカアルカロイド；ならびにパクリタキセル、ドセタキセルおよびそれらの製剤、ラロタキセル（ｌａｒｏｔａｘｅｌ）等のタキサン；シモタキセル（ｓｉｍｏｔａｘｅｌ）、およびイクサベピロン、パツピロン（ｐａｔｕｐｉｌｏｎｅ）、ＺＫ−ＥＰＯ等のエポチロン）；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびエトポフォス（ｅｔｏｐｏｐｈｏｓ）等のエピポドフィロトキシン、テニポシド、アムサクリン、トポテカン、イリノテカン）、ならびにアミホスチン、アナグレリド、インターフェロンアルファ、プロカルバジン、ミトタンおよびポルフィマー、ベキサロテン、セレコキシブ等の種々の化学療法薬から選択されるが、これらに限定されない。
ドキソルビシンをＣＤ７３遮断と組み合わせることのプラスの効果が実証された（Loi, Proc Natl Acad Sci U S A. 2013;110(27):11091-6）、ＡＴＰ生成化学療法薬、例えば、ドキソルビシンが特に好まれる。
ある特定の実施形態では、追加的な治療剤は、ＴＩＭ−１、ＴＩＭ３、ＴＩＭ−４、ＰＤＬ−１（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブまたはデュルバルマブ）、ＰＤ−Ｌ２、ＬＡＧ３、ＣＴＬＡ−４、ガレクチン９、ガレクチン−１、ＣＤ６９、ＣＤ１１３、ＧＰＲ５６、ＣＤ４８、ＧＡＲＰ、ＣＡＥＣＡＭ−１、ＢＴＬＡ、ＴＩＧＩＴ、ＣＤ１６０、ＬＡＩＲ１、２Ｂ４、ＣＥＡＣＡＭ、ＣＤ３９、ＴＧＦβ、ＩＬ−１０、Ｆａｓリガンド、ＩＣＯＳ、ＩＤＯ、Ｔｏｌｌ様受容体、Ｂ７ファミリー（Ｂ７−１、Ｂ７−２、Ｂ７−Ｈ１（ＰＤＬ−１）、Ｂ７−ＤＣ（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ２（ＩＣＯＳ−Ｌ）、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、Ｂ７−Ｈ５（ＶＩＳＴＡ）およびＢ７−Ｈ６）のモジュレーター等、さらに別の免疫療法剤となることができる。
一部の実施形態では、追加的な免疫療法剤は、ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌ、ＯＸ−４０、ＯＸ−４０Ｌ、ＣＤ７０、ＣＤ２７Ｌ、ＣＤ３０、ＣＤ３０Ｌ、４−ｌＢＢＬ、ＣＤ１３７、ＧＩＴＲ、ＴＲＡＩＬ／Ａｐｏ２−Ｌ、ＴＲＡＩＬＲ１／ＤＲ４、ＴＲＡＩＬＲ２／ＤＲ５、ＴＲＡＩＬＲ３、ＴＲＡＩＬＲ４、ＯＰＧ、ＲＡＮＫ、ＲＡＮＫＬ、ＴＷＥＡＫＲ／Ｆｎ１４、ＴＷＥＡＫ、ＢＡＦＦＲ、ＥＤＡＲ、ＸＥＤＡＲ、ＴＡＣＩ、ＡＰＲＩＬ、ＢＣＭＡ、ＬＩＧＨＴ、ＤｃＲ３、ＨＶＥＭ、ＶＥＧＩ／ＴＬｌＡ、ＴＲＡＭＰ／ＤＲ３、ＥＤＡＲ、ＥＤＡｌ、ＸＥＤＡＲ、ＥＤＡ２、ＴＮＦＲｌ、リンホトキシンα／ＴＮＦβ、ＴＮＦＲ２、ＴＮＦα、ＬＴβＲ、リンホトキシンα１β２、ＦＡＳ、ＦＡＳＬ、ＲＥＬＴ、ＤＲ６、ＴＲＯＹ、ＮＧＦＲを含む、同族ＴＮＦ受容体ファミリーメンバーに結合する分子のＴＮＦファミリーのメンバーである。
一部の実施形態では、追加的な免疫療法剤は、例えば、がん等の増殖性疾患を処置するために免疫応答を刺激するための、（ｉ）Ｔ細胞活性化を阻害するサイトカインのアンタゴニスト（例えば、ＩＬ−６、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ；「免疫抑制性サイトカイン」）および／または（ｉｉ）Ｔ細胞活性化を刺激するサイトカインのアゴニスト、および／またはＩＬ２等のサイトカインから選択される。
一部の実施形態では、追加的な免疫療法剤は、ＣＤ２８、ＧＩＴＲＬ、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ２７およびＣＤ２８Ｈ等、Ｔ細胞活性化を刺激するタンパク質のアゴニストである。
本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体を使用して、ＦｃαまたはＦｃγ受容体発現エフェクター細胞を腫瘍細胞に標的化する二特異性抗体を設計することもできる（例えば、これにより参照により本明細書に組み込む、米国特許第５，９２２，８４５号および同第５，８３７，２４３号を参照）。二特異性抗体を使用して、２種の別々の抗原を標的化することができる。例えば、抗Ｆｃ受容体／抗腫瘍抗原（例えば、Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ）二特異性抗体が使用されて、マクロファージを腫瘍の部位に標的化した。この標的化は、腫瘍特異的応答をより有効に活性化することができる。その代わりに、抗原は、腫瘍抗原および樹状細胞特異的細胞表面マーカーに結合する二特異性抗体の使用によって、ＤＣに直接的に送達することができる。
他の実施形態では、免疫療法剤は、がんワクチンとなることができる。
ＣＤ７３抗体と組み合わせることができる他の分子は、ＮＫ細胞における阻害性受容体のアンタゴニストまたはＮＫ細胞における活性化受容体のアゴニスト、例えば、ＫＩＲのアンタゴニスト（例えば、リリルマブ（ｌｉｒｉｌｕｍａｂ））を含む。
一部の実施形態では、追加的な治療剤は、ＣＳＦ−１Ｒアンタゴニストが挙げられるがこれに限定されない、マクロファージまたは単球を阻害または枯渇させる薬剤となることができる。
他の実施形態では、追加的な治療剤は、Ｔｒｅｇ細胞を枯渇または遮断する薬剤、例えば、ＣＤ２５に特異的に結合する薬剤となることができる。
一部の実施形態では、追加的な治療剤は、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂ受容体の阻害剤となることができる。例として、ＡＴＬ−４４４、イストラデフィリン（ＫＷ−６００２）、ＭＳＸ−３、プレラデナント（Ｐｒｅｌａｄｅｎａｎｔ）（ＳＣＨ−４２０，８１４）、ＳＣＨ−５８２６１、ＳＣＨ−４１２３４８、ＳＣＨ−４４２４１６、ＳＴ−１５３５、カフェイン、ＶＥＲ−６６２３、ＶＥＲ−６９４７、ＶＥＲ−７８３５、ビパデナント（Ｖｉｐａｄｅｎａｎｔ）（ＢＩＩＢ−０１４）、ＰＤ１１６，９４８、ＺＭ２４１３８５、ＫＷ６００２、ＣＧＳ１５９４３、ＳＴ１５３５、ＳＹＮ−１１５、ＰＳＢ１１１５、ＰＳＢ６０３、ＭＲＳ１７５４、ＣＰＩ−４４４、ＰＢＦ−５０９、ＡＺＤ−４６３５またはＺＭ−２４１３８５が挙げられるがこれらに限定されない。
好まれる実施形態では、さらに別の治療剤は、Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＣＤ３９アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニストまたはＨＥＲ２アンタゴニストである。
２種以上の物質または原理は、組み合わせた処置レジメンの部分として使用されるべきである場合、同じ投与経路により、または異なる投与経路により、基本的に同じ時点で（すなわち、同時に、共に）、または異なる時点で（例えば、逐次に、連続的に、交互に、継続的に、または他のいずれかの種類の交互管理体制に従って）投与することができる。
物質または原理は、同じ投与経路により同時に投与されるべきである場合、異なる医薬製剤もしくは組成物として、または組み合わせた医薬製剤もしくは組成物の部分として投与することができる。また、２種以上の活性物質または原理が、組み合わせた処置レジメンの部分として使用されるべきである場合、物質または原理のそれぞれは、化合物または原理がそれだけで使用される場合に使用されるものと同じ量で、同じレジメンに従って投与することができ、斯かる組み合わせた使用は、相乗効果をもたらしても、もたらさなくてもよい。しかし、２種以上の活性物質または原理の組み合わせた使用が、相乗効果をもたらす場合、所望の治療作用を依然として達成しつつ、投与されるべき物質または原理の１種または全種の量を低下させることが可能となる場合もある。これは、例えば、所望の薬理学または治療効果を依然として得ながら、それらの通常量で使用された場合に物質または原理の１種または複数の使用に伴ういずれか望まれない副作用の回避、限定または低下に有用となり得る。
当然ながら、上述は、上述の組合せパートナーと組み合わせた使用のための本発明の抗体の、調製物および調製方法を含む。本発明の抗体との組み合わせた使用のための上述の組合せパートナーの、調製物および調製方法も含まれる。
本発明の抗体分子は、それだけで、または他の処置管理体制、例えば、外科手術および／または放射線治療法と組み合わせて使用することができる。
＜製造および精製のキットおよび方法＞
本発明は、本明細書に記載されている少なくとも抗ＣＤ７３抗体と、上に記載されている疾患および障害の処置に使用される他の薬物からなる群から選択される１種または複数の他の成分とを含むキットも包含する。
一実施形態では、本キットは、単位剤形における有効量の本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を含有する組成物を含む。さらなる実施形態では、本キットは、単位剤形における有効量の本発明の抗ＣＤ７３抗体分子を含有する組成物と、抗ＰＤ−１抗体、最も好ましくは、本明細書に記載されているＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５等、単位剤形における有効量のＰＤ−１アンタゴニストを含有する組成物の両方を含む。
一部の実施形態では、本キットは、斯かる組成物を含有する滅菌容器を含む；斯かる容器は、箱、アンプル、ボトル、バイアル、チューブ、バッグ、パウチ、ブリスター包装、または当技術分野で公知の他の適した容器形態となることができる。斯かる容器は、プラスチック、ガラス、ラミネート紙、金属箔、または医薬の保持に適した他の材料でできていてよい。
必要に応じて、単独での、またはＰＤ−１アンタゴニスト等の別の治療剤と組み合わせた抗ＣＤ７３抗体分子は、がんを有する対象に１種または複数の抗体を投与するための説明書と共に提供される。説明書は一般に、がんの処置または予防のための組成物の使用に関する情報を含むであろう。他の実施形態では、説明書は、次のうち少なくとも１種を含む：治療剤についての記載；がんまたはその症状の処置または予防のための投薬量スケジュールおよび投与；注意；警告；適応症；禁忌症（ｃｏｕｎｔｅｒ−ｉｎｄｉｃａｔｉｏｎ）；過量投与情報；有害反応；動物薬理学；臨床研究；および／または参考文献。説明書は、容器（存在する場合は）に直接的に、または容器に貼られたラベルとして、または容器内に供給されたもしくはそれに添えられた別々のシート、パンフレット、カードもしくはフォルダーとして、印刷することができる。
一部の実施形態では、本キットは、ＰＤ−１アンタゴニスト（さらに本明細書に記載されている）および任意に、本明細書に上述されているさらに別の治療剤と共に、本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体分子を含む。
本発明は、さらに、本発明の抗体分子を製造する方法を提供し、斯かる方法は一般に、
− 本発明の抗体の形成を可能にする条件下で、本発明の抗体分子をコードする核酸を含む発現ベクターを含む宿主細胞を培養するステップと、
− 宿主細胞によって発現された抗体分子を培養物から回収するステップと、
− 任意に、本発明の抗体分子をさらに精製および／または改変および／または製剤化するステップと
を含む。
本発明の核酸は、例えば、コード配列と共に、調節配列および任意に天然もしくは人工イントロンを含むＤＮＡ分子となることができる、またはｃＤＮＡ分子となることができる。これは、その本来のコドンを有することができる、または意図される宿主細胞もしくは宿主生物における発現に特異的に適応された最適化されたコドン使用を有することができる。本発明の一実施形態において、本発明の核酸は、上に定義される通り、基本的に単離された形態である。
本発明の核酸は、典型的に、発現ベクター、すなわち、適した宿主細胞または他の発現系にトランスフェクトされると、ポリペプチドの発現をもたらすことができるベクターに取り込まれるであろう。
本発明の抗体を製造するために、当業者は、当技術分野で周知の多種多様な発現系、例えば、Kipriyanow and Le Gall, 2004によって総説されている発現系から選ぶことができる。
発現ベクターは、プラスミド、レトロウイルス、コスミド、ＥＢＶ由来エピソームその他を含む。発現ベクターおよび発現制御配列は、宿主細胞と適合性となるように選択される。抗体軽鎖遺伝子および抗体重鎖遺伝子は、別々のベクターに挿入することができる。ある特定の実施形態では、両方のＤＮＡ配列が、同じ発現ベクターに挿入される。
簡便なベクターは、機能的に完全なヒトＣＨ（定常重）またはＣＬ（定常軽）免疫グロブリン配列をコードするベクターであり、いずれかのＶＨ（可変重）またはＶＬ（可変軽）配列が、上に記載されている通りに容易に挿入および発現され得るように、適切な制限部位が操作される。抗体重鎖のため、これは、限定することなく、アレルバリアントを含む、いずれかのＩｇＧアイソタイプ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）または他の免疫グロブリンとなることができる。
組換え発現ベクターは、宿主細胞からの抗体鎖の分泌を容易にするシグナルペプチドをコードすることもできる。シグナルペプチドが、成熟抗体鎖ＤＮＡのアミノ末端にインフレームで連結されるように、抗体鎖をコードするＤＮＡをベクターにクローニングすることができる。シグナルペプチドは、免疫グロブリンシグナルペプチドまたは非免疫グロブリンタンパク質由来の異種ペプチドとなることができる。その代わりに、抗体鎖をコードするＤＮＡ配列は、シグナルペプチド配列を既に含有していてよい。
抗体鎖ＤＮＡ配列に加えて、組換え発現ベクターは、典型的に、宿主細胞における抗体鎖の発現を制御する、プロモーター、エンハンサー、終結およびポリアデニル化シグナルならびに他の発現制御エレメントを含む、調節配列、任意に、異種調節配列を保有する。プロモーター配列の例（哺乳類細胞における発現のために例証される）は、ＣＭＶ（ＣＭＶサルウイルス４０（ＳＶ４０）プロモーター／エンハンサー等）、アデノウイルス（例えば、アデノウイルス主要後期プロモーター（ＡｄＭＬＰ））ポリオーマに由来するプロモーターおよび／またはエンハンサー、ならびにネイティブ免疫グロブリンおよびアクチンプロモーター等の強い哺乳類プロモーターである。ポリアデニル化シグナルの例は、ＢＧＨポリＡ、ＳＶ４０後期または初期ポリＡである；その代わりに、免疫グロブリン遺伝子等の３’ＵＴＲを使用することができる。
組換え発現ベクターは、宿主細胞におけるベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）、および選択可能マーカー遺伝子を保有することもできる。本発明の抗体の重鎖もしくはその抗原結合部分および／または軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードする核酸分子、ならびにこのようなＤＮＡ分子を含むベクターは、リポソーム媒介性トランスフェクション、ポリカチオン媒介性トランスフェクション、プロトプラスト融合、マイクロインジェクション、リン酸カルシウム沈殿、エレクトロポレーションまたはウイルスベクターによる移入を含む当技術分野で周知のトランスフェクション方法に従って、宿主細胞、例えば、細菌細胞または高等真核細胞、例えば、哺乳類細胞に導入することができる。
好ましくは、重鎖および軽鎖をコードするＤＮＡ分子は、宿主細胞、好ましくは、哺乳類細胞にコトランスフェクトされる２種の発現ベクターに存在する。
発現のための宿主として利用できる哺乳類細胞株は、当技術分野で周知であり、とりわけ、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＮＳ０、ＳＰ２／０細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト癌細胞（例えば、Ｈｅｐ Ｇ２およびＡ−５４９細胞）、３Ｔ３細胞、またはいずれか斯かる細胞株の派生物／後代を含む。ヒト、マウス、ラット、サルおよび齧歯類細胞株が挙げられるがこれらに限定されない他の哺乳類細胞、または酵母、昆虫および植物細胞が挙げられるがこれらに限定されない他の真核細胞、または細菌等の原核細胞を使用することができる。
本発明の抗体分子は、宿主細胞における抗体分子の発現を可能にするのに十分な期間、宿主細胞を培養することにより産生される。抗体分子は、好ましくは、分泌されたポリペプチドとして培養培地から回収される、または例えば、分泌シグナルなしで発現される場合は、宿主細胞ライセートから回収することができる。抗体の実質的に均質な調製物が得られる仕方で、組換えタンパク質および宿主細胞タンパク質に使用される標準タンパク質精製方法を使用して、抗体分子を精製する必要がある。例として、本発明の抗体分子を得るのに有用な最先端の精製方法は、第１のステップとして、培養培地またはライセートからの細胞および／または粒子状細胞デブリの除去を含む。次いで、抗体は、例えば、免疫親和性またはイオン交換カラム、エタノール沈殿、逆相ＨＰＬＣ、セファデックスクロマトグラフィー、シリカまたはカチオン交換レジン上のクロマトグラフィーにおける分画により、夾雑物の可溶性タンパク質、ポリペプチドおよび核酸から精製される。抗体分子調製物を得るためのプロセスにおける最終ステップとして、治療適用について後述する通り、精製された抗体分子は、乾燥、例えば、凍結乾燥することができる。
本発明は、次の実施例によってさらに説明されるが、必ずしも本発明のこれらの実施形態に限定されるものではない。化合物、用量および投与経路と共に処置組合せを含む、実施例またはその部分はそれぞれ、それ自体でまたは上述の詳細な説明と組み合わせて、本発明の部分を形成する。
（実施例１）
ＣＤ７３に対する抗体の生成および最適化
ＣＤ７３ノックアウトマウスを、Ｃ末端６×Ｈｉｓタグを有するヒトＣＤ７３（ＵｎｉＰｒｏｔ受託番号Ｐ２１５８９）の完全な細胞外ドメイン、およびＣ末端ヒトＦｃタグ（配列番号１３１）を有するマウスＣＤ７３（Ｕｎｉｐｒｏｔ受託番号Ｑ６１５０３）の完全な細胞外ドメインで免疫化した。単一Ｂ細胞抗体生成プラットフォームを使用することにより、ヒットを同定および回収した。これを、ヒト、カニクイザル、マウスおよびラットＣＤ７３への結合に関してスクリーニングし、実施例２〜６に記載されている通り、機能アッセイにおいてＣＤ７３の阻害に関して検査した。これらのアッセイに従って最良の特性セットを有する抗体分子を、さらに最適化されたバリアントのための基盤として使用した。
ファージスクリーニング方法（Singh et al MAbs. 2015 Jul-Aug; 7(4): 778-791によって記載されている通り）を使用して、これらの抗ＣＤ７３マウス抗体由来のＣＤＲを、重および軽鎖の密接にマッチする生殖系列由来のヒトフレームワークにおいて配列最適化した。バリアントの結合活性をＥＬＩＳＡによって評価した。高い比のヒト残基および低い予測される免疫原性（低いＥｐｉｖａｘスコア）を有する、ヒトＣＤ７３に対し高い親和性を有するバリアントを選択した。
（実施例２）
標的結合および細胞選択性
アビディティーフォーマットのため、Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６装置において実験を行った。プロテインＡ／Ｇを介して抗体を捕捉し、捕捉表面の上に非共有結合二量体抗原を流動させた。本実験のランニング緩衝液および全ての希釈物は、ＰＢＳ−Ｔ−ＥＤＴＡにおいて調製した。製造業者の推奨に従って、ＧＬＭセンサーチップを正規化およびプレコンディショニングした。流速３０μＬ／分にて３００秒間水平方向において、ＥＤＣ／ｓ−ＮＨＳの等しい混合物でセンサーチップを活性化し、流速３０μＬ／分にて３００秒間水平方向において、組換えプロテインＡ／Ｇ（１０ｍＭ酢酸塩ｐＨ４．５における５０μｇ／ｍｌ）で固定化し、表面に約５０００ＲＵのプロテインＡ／Ｇをもたらした。流速３０μＬ／分にて３００秒間水平方向において、１Ｍエタノールアミン−ＨＣｌでセンサーチップを非活性化した。水平に２回、垂直に２回、流速１００μＬ／分における１８秒間の０．８５％リン酸でセンサーチップを再生した。
流速３０μＬ／分にて６０秒間垂直に、プロテインＡ／Ｇ表面に約３００ＲＵの抗体を捕捉した。水平に流速１００μＬ／分にて６０秒間ＰＢＳ−Ｔ−ＥＤＴＡを注射することにより、捕捉表面を安定化した。流速３０μＬ／分にて６００秒間、捕捉された抗体の上に分析物（ヒトＣＤ７３−Ｈｉｓ）を水平に注射し、１２００秒間の解離を行った。ヒトＣＤ７３−Ｈｉｓの濃度は、０ｎＭ、３．１２５ｎＭ、６．２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、２５ｎＭおよび５０ｎＭであった。水平に１回、垂直に１回、流速１００μＬ／分にて１８秒間０．８５％リン酸を注射することにより、表面を再生した。
スポット間（ｉｎｔｅｒｓｐｏｔ）（センサー表面との相互作用）およびブランク（ＰＢＳ−Ｔ−ＥＤＴＡまたは０ｎＭ分析物）を、生データから減算した。Ｂｉｏ−Ｒａｄ ＰｒｏｔｅＯｎ Ｍａｎａｇｅｒソフトウェアを使用して、センサーグラムを、１：１ラングミュア結合に網羅的にフィットさせて、会合速度定数（ｋａ）、解離速度定数（ｋｄ）および平衡解離定数（ＫＤ）値を得た。
Figure 2021522780
ＦＡＣＳに基づくアッセイにおいてＣＤ７３を内在性に発現する細胞株と共にＣＤ７３陰性細胞株を使用して、細胞選択性を決定した。ＣＤ７３陽性細胞において、結合は容易に検出された一方、ＣＤ７３が陰性の細胞において、１０００ｎＭの最大濃度まで検出可能な結合は観察されなかった。
ＳＰＲによりマウスＣＤ７３に対する抗ＣＤ７３の結合も決定し、ヒトＣＤ７３（Ｐ２１５８９、「長いアイソフォーム」）への結合と比較した。
被験抗体は、マウスＣＤ７３よりも高い親和性でヒトＣＤ７３に結合された（マウスＣＤ７３よりもＣ１：９６倍；Ｃ２：１３８倍；Ｃ３：１１７倍；Ｃ４：１２０倍；Ｃ５：１６３倍、Ｃ６：５８倍高い、ヒトＣＤ７３への結合）。
（実施例３）
ＣＤ７３酵素機能の阻害
ルシフェラーゼ−に基づくアッセイを使用して、ＣＤ７３酵素機能を測定した。ＣＤ７３基質ＡＭＰは、ルシフェラーゼ反応の産物であり、ルシフェラーゼに対する阻害活性を示す。プレートをブロッキングし、続いて組換えヒトＣＤ７３タンパク質を添加した。次に、ＣＤ７３抗体を異なる濃度で添加した。プレートを混合し、１０分間３７℃でインキュベートした。基質ＡＭＰを添加し、プレートを混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏ試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒＧｌｏルミネセンス細胞生存率アッセイキット、Ｐｒｏｍｅｇａ、カタログ番号＃Ｇ７５７１）を試薬緩衝液に溶解し、各ウェルに添加した。プレートを混合し、１０分間ＲＴで暗所にてインキュベートした。ＥｎＶｉｓｉｏｎ ２１０４マルチラベルリーダーを使用して、ルミネセンスシグナルを測定した。
表２に示す通り、本明細書に記載されているＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３の酵素機能の阻害に対し、低ナノモル濃度ＩＣ90値を示す。示されているデータは、２回の独立した実験から得られる。
Figure 2021522780
（実施例４）
ＣＤ７３タンパク質表面レベルの低下
ＣＤ７３タンパク質表面レベルの低下をフローサイトメトリーによって決定した。Ｃｏｌｏ２０１細胞株をＣＤ７３抗体と共に１時間および２４時間インキュベートし、二次抗体を使用して、細胞表面におけるＣＤ７３結合抗体レベルを測定した。
ＴｒｉｐＬＥ溶液（Ｇｉｂｃｏ、Ｎｏ．１２６０４−０１３）を添加することにより、Ｃｏｌｏ２０１細胞を剥離し、９６ウェルプレートに播種した。２４時間後に、ＣＤ７３抗体を添加した。標識された二次抗体を使用したフローサイトメトリーによって１時間および２４時間後に試料を解析した。試料解析は、ＦｌｏｗＪｏ Ｘソフトウェアバージョン１０．０．７ｒ２を使用して実行した。ゲーティング集団の平均蛍光強度（ＦＩ）は、０時点におけるその対応する平均ＦＩ（ＣＤ７３抗体との１時間インキュベーション）に対して正規化した。次に、データを正規化し、それによって、ＣＤ７３表面レベル低下を誘導しないＣＤ７３抗体（「０６７−２１３抗体」として米国特許出願公開第２００９０２０３５３８号に開示）とインキュベートした細胞の蛍光値を１００％に設定した（最大ＣＤ７３レベル）。
本明細書に記載されているＣＤ７３抗体は、ＣＤ７３表面レベルの低下の誘導において中程度活性を示す。示されているデータは、少なくとも２回の独立した実験から得られる。
Figure 2021522780
（実施例５）
細胞株におけるアデノシン形成の阻害
細胞ベースアッセイを使用して、ＣＤ７３阻害によるアデノシンレベルの低下を決定した。Ｃｏｌｏ−２０１細胞へのＡＭＰの添加は、細胞表面に発現されたＣＤ７３による、ＡＭＰからアデノシンへの変換をもたらす。ＡＭＰの変換は、本明細書に提供される本発明の抗ＣＤ７３抗体によって阻害される。ＣＤ７３抗体の存在下、Ｃｏｌｏ−２０１細胞を３７℃で２４時間培養した。次に、アデノシンデアミナーゼを遮断するためのエリスロ−９−（２−ヒドロキシ−３−ノニル）アデニン、アデノシンキナーゼを遮断するための５−ヨードツベルシジン、アルカリホスファターゼを遮断するためのβ−グリセロリン酸塩、およびＥＮＴ１−４を遮断するためのジピリダモールを含有する遮断溶液を添加した（Ramakers 2008)。２０分間のインキュベーション後に、３００μＭ ＡＭＰを３０分間添加し、１５ｍＭ ＨＣｌ溶液の添加により反応を停止した。ｍＡｂ濃度毎にインキュベーションから採取した細胞上清の５０μｌアリコートを、９６ウェルプレートフォーマットにおける、内部標準としての０．５ｍＭ同位元素標識13Ｃ5−アデノシンを含有する５００μｌアセトニトリル＋５０μｌの遮断溶液に添加した。１２段階の系列希釈によって較正標準を調製した。較正および品質管理試料は、ブランクマトリックスとしての５０μｌ細胞インキュベーション培地、プラス、５０μｌのそれぞれの標準またはＱＣ溶液を、内部標準としての０．５ｍＭ同位元素標識13Ｃ5−アデノシンを含有する５００μｌアセトニトリルに添加することにより調製した。遠心分離後に、５０μｌの上清を別の９６ウェルプレートに移し、Ｎ2下で蒸発乾固させ、２５％メタノール＋０．０１％ギ酸に再溶解した。ＥＳＩ＋イオン化により単位質量分解能でＨＰＬＣ−ＭＳ／ＭＳによりアデノシン濃度を決定した。ＣＴＣ ＰＡＬ ＨＴＳ−ｘｔオートサンプラーによりＨＰＬＣ／ＭＳシステムに試料を注射した（注射容量５μＬ）。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｓｙｎｅｒｇｙ Ｈｙｄｒｏ−ＲＰ Ｃ１８逆相ＨＰＬＣカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１２００ ＨＰＬＣシステムにより定量的解析を室温で行い（粒子径２．５μｍ、カラム寸法２×５０ｍｍ）、流速７００μｌ／分、試料あたり５分間のサイクル時間で、溶媒Ａとしての５ｍｍｏｌ／Ｌ酢酸アンモニウム（ｐＨ４．０）および溶媒Ｂとしてのアセトニトリルと０．１％ギ酸によるＨＰＬＣ勾配を適用した。０〜３．０分目に２〜１５％へと溶媒Ｂを増加させ、３．０〜３．１分目に９５％Ｂに増加させ、３．１〜４．０分目に９５％Ｂで一定に維持し、その後、４．０〜４．１分目に２％Ｂに戻り、４．１〜５．０分目にカラム再平衡化を行った。ＨＰＬＣシステムを、ＭＲＭモードで操作されるＡＢＳＣＩＥＸ ＡＰＩ５０００三連四重極型質量分析計にカップルした。ＡＢＳＣＩＥＸ ＤｉｓｃｏｖｅｒｙＱｕａｎｔ（商標） ２．１ソフトウェアを使用して、クラスタ分離潜在力（ＤＰ）および衝突エネルギー（ＣＥ）設定を自動化により最適化した。アデノシンに関する２６８．２から１３６．１への（ＤＰ：６２、ＣＥ：２７）および13Ｃ5−アデノシンに関する２７３．３から１３６．２への（ＤＰ：６４、ＣＥ：２７）ＭＲＭ移行を定量化に使用した（滞留時間：７０ｍ秒）。Ｔｕｒｂｏイオンスプレーソースのソース温度は、６５０℃に設定した。Ａｎａｌｙｓｔ（登録商標）１．５．１（ＡＢＳＣＩＥＸ）によりクロマトグラムを積分し、ピーク面積を決定した。測定されたアデノシン濃度およびインキュベーション容量から、形成されたアデノシンの絶対量を計算した。可変的ヒルスロープによる対称的シグモイド曲線解析プログラム（Ｇｒａｐｈ Ｐａｄ ＰＲＩＳＭ）を使用して、反復計算によりデータをフィットさせた。ＡＭＰ添加なしのアイソタイプ処置細胞に関して得られたアデノシンレベルは、１００％阻害に設定する；ＡＭＰ添加ありのアイソタイプ処置細胞に関して得られたアデノシンレベルは、０％阻害に設定する。
本明細書に記載されているＣＤ７３抗体は、アイソタイプ処置細胞＋／−ＡＭＰ添加と比較して、Ｃｏｌｏ２０１細胞におけるアデノシンレベルを＞７５％低下させた。
本明細書に記載されている抗ＣＤ７３抗体は、表４に実証される通り、参照抗ＣＤ７３抗体「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」（本明細書の上述に定義）と比較して、Ｃｏｌｏ２０１細胞におけるアデノシンレベルの低下における優れた活性を示した。
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（実施例６）
Ｔ細胞増殖およびＩＦＮγ放出の誘導
初代ヒトＴ細胞アッセイを使用して、Ｔ細胞におけるＣＤ７３阻害の効果を調査した。ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓから得たヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を解凍し、負の選択によってＴ細胞を濃縮した（Ｔ細胞濃縮キット、Ｅａｓｙ Ｓｅｐ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ；Ｓｔｅｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ＃１９０５１）。ドナーは内部標識したドナーＡ〜Ｆであった。製造業者のプロトコールに従ってＣｅｌｌ Ｔｒａｃｅ Ｖｉｏｌｅｔ（ＣｅｌｌＴｒａｃｅ（商標）Ｖｉｏｌｅｔ増殖キット、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、＃Ｃ３４５５７）によりＴ細胞を標識した。一晩４℃で抗ＣＤ３（Ｕｌｔｒａ−ＬＥＡＦ（商標）精製抗ＣＤ３抗体、クローンＨＩＴ３ａ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃３００３３２）で予めコーティングした９６ウェル丸底プレートにおいてアッセイを行った。ＣＴＶ標識Ｔ細胞を蒔き、異なる濃度の抗ＣＤ２８（Ｕｌｔｒａ−ＬＥＡＦ（商標）精製抗ＣＤ２８抗体、クローンＣＤ２８．２；Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ、＃３０２９３４）および抗ｈｕＣＤ７３または抗ＴＮＰ ＨｕＩｇＧ１ＫＯ対照と共にインキュベートした。３７℃および５％ＣＯ2における２２時間インキュベーション後に、ＡＭＰ（アデノシン５’−一リン酸二ナトリウム塩；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ｃａｔ＃０１９３０）を最終濃度２００μＭで添加した。３７℃および５％ＣＯ2で細胞をさらに５日間インキュベートした。上清を採取し、製造業者の説明書に従ってＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｖ−ＰＬＥＸヒトＩＦＮ−ｙキットによってＩＦＮガンマ分泌に関して解析した。値をＡＭＰ添加ありの刺激されたアイソタイプ処置細胞に対して正規化した。ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターおよびＢＤ ＦＡＣＳＤｉｖａソフトウェア（バージョン８．０．１）を使用して、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞におけるＣＴＶ標識の解析により細胞の増殖を決定した。ＡＭＰ添加なしの刺激されたアイソタイプ処置細胞の増殖を１００％に設定し、ＡＭＰ添加ありの刺激されたアイソタイプ処置細胞の増殖を０％に設定した。
本明細書に記載されているＣＤ７３抗体は、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン放出を回復する。
本明細書に記載されている抗体は、「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」と比較して、ある特定のドナーの初代ヒトＴ細胞におけるＴ細胞増殖およびＩＦＮγ放出の誘導において優れた活性を示す（表５および６）。よって、生成されたＣＤ７３抗体は、ある特定のドナーにおいて両方の競合用分子と比較して、ＡＭＰによって抑制されたＴ細胞の機能を、より高いレベルまで回復する能力を有する。
Figure 2021522780
Figure 2021522780
上の表５および６は、検査された抗ＣＤ７３抗体が、「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」と比較して、ある特定のドナーにおいてＴ細胞増殖およびＩＦＮγ放出の誘導において優れた活性を示すことを実証する。データは、１ｎＭのＣＤ７３抗体濃度における直接の比較から得られる；ドナーあたり４回の生物学的複製。
（実施例７）
樹状細胞／Ｔ細胞共培養
さらに、樹状細胞／Ｔ細胞共培養系を確立した。Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ密度勾配遠心分離により、健康なドナーのヘパリン処置した血液からヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を単離し、−１５０℃で凍結貯蔵した。ＰＢＭＣを解凍し、負の選択（磁気ビーズ）によって単球を濃縮した。３ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−４および５０ｎｇ／ｍｌヒトＧＭ−ＣＳＦを有する培地において単球を３７℃および５％ＣＯ2で培養して、樹状細胞（ＤＣ）に分化させた。５日目に、成熟のために１０ｎｇ／ｍｌ ＴＮＦアルファを添加し、細胞を一晩培養した。異なるドナーから得たＰＢＭＣを解凍し、免疫磁気負選択によりＴ細胞を単離し、５ｎｇ／ｍｌヒトＩＬ−２を有する培地において一晩培養した。異なる濃度の抗ＰＤ−１抗体ペムブロリズマブ（さらに本明細書ならびに例えば国際公開第２００９／１１４３３５号および国際公開第２０１５／０８８８４７号に記載されている）および本発明の様々な抗ＣＤ７３抗体の存在下、９６ウェルプレートにおいて、ウェルあたり２０００００個の細胞のＴ細胞を、ウェルあたり５００００個の細胞の同種異系間成熟ＤＣと共培養した。ヒトＩｇＧ４ＰｒｏおよびヒトＩｇＧ１ＫＯアイソタイプ対照を陰性対照として使用した。３７℃および５％ＣＯ2における２２時間後に、アデノシン５’−一リン酸二ナトリウム塩（ＡＭＰ）を添加した。共培養物を５日間３７℃でインキュベートし、次いで上清を採取し、製造業者の説明書に従ってＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｖ−ＰＬＥＸヒトＩＦＮ−ｙキットによってＩＦＮガンマ分泌を解析した。
ＰＤ１、ＣＤ７３またはその両方の阻害の効果は、本システムにおいて調査することができる。ＡＭＰの添加は、抗ＰＤ１応答を阻害することが判明し、本明細書に提供される抗体を使用した抗ＣＤ７３処置は、このＡＭＰ媒介性阻害の反転をもたらした（図１を参照）。示されているデータは、１μｇ／ｍｌのＣＤ７３抗体濃度における直接の比較から得られる；ドナーおよび抗体あたり５回の生物学的複製。
（実施例８）
細胞に結合した対細胞に結合していないＣＤ７３の阻害
Ｃｏｌｏ−２０１細胞をＣＤ７３抗体と共に３７℃で２４時間インキュベートし、次いで遮断溶液（「細胞株におけるアデノシン形成の阻害」を参照）を２０分間添加した。遠心分離によって細胞をペレットにし、上清を新たな低結合プレートに移した。細胞を洗浄し、３００μＭ ＡＭＰを細胞および上清に添加した。３０分間のインキュベーション時間の後に、１５ｍＭ ＨＣｌ溶液の添加により反応を停止した。上清を採取し、アセトニトリル／遮断溶液混合物と混合して、可能な酵素反応を停止した。液体クロマトグラフィー質量分析によりアデノシンレベルに関して試料を解析した。これは、細胞に結合したＣＤ７３の阻害、対、細胞培養物上清におけるＣＤ７３（細胞に結合していないＣＤ７３）の阻害の調査を可能にする。ＡＭＰ添加なしのアイソタイプ処置に関して得られたアデノシンレベルを１００％阻害に設定し；ＡＭＰ添加ありのアイソタイプ処置に関して得られたアデノシンレベルを０％阻害に設定した。表７および８において実証される通り、本発明に係るＣＤ７３抗体、特に、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６は、細胞に結合したＣＤ７３と共に細胞培養物上清中に存在するＣＤ７３（細胞に結合していないＣＤ７３）を７０〜８０％阻害した。「ＭＥＤＩ９４４７」は、細胞に結合したＣＤ７３におけるおよそ２０％低い阻害活性を呈した。「ＭＥＤＩ９４４７」および「ＢＭＳ９８６１７９」の両方は、細胞培養物上清中に存在するＣＤ７３の阻害においてより低い活性を示した。よって、本発明に係るＣＤ７３抗体は、両方の競合用分子と比較して、ＣＤ７３のより完全な阻害をもたらした。
Figure 2021522780
表７は、本発明の抗体が、細胞に結合したＣＤ７３の阻害において、比較用の先行技術抗体「ＭＥＤＩ９４４７」よりも優れていることを実証する。示されているデータは、抗体Ｃ２（ｎ＝１）は別として、少なくとも２回の独立した実験から得られる。
Figure 2021522780
表８は、本発明の抗体が、細胞培養物上清におけるＣＤ７３の阻害において、比較用の先行技術抗体「ＭＥＤＩ９４４７」および／または「ＢＭＳ９８６１７９」よりも優れていることを実証する。示されているデータは、抗体Ｃ２（ｎ＝１）は別として、少なくとも２回の独立した実験から得られる。
（実施例９）
抗ＣＤ７３抗体およびＣＤ７３の複合体形成
単一の成分として、および１：１モル濃度ＣＤ７３：抗体比での混合物として、沈降速度解析的超遠心分離（「ＳＶ−ＡＵＣ」）実験によりＣＤ７３および２種の異なる抗体の試料を使用して、ＣＤ７３および２種の抗ＣＤ７３抗体の複合体のオリゴマー状態を調査した。２８０ｎｍにおける最適なシグナル対ノイズ比のため、２．４μＭの濃度で混合物を試験した。２．４μモル濃度の濃度でＣＤ−７３タンパク質および本発明に関する抗体の個々のアリコートも試験して、ｇ（ｓ）比較を容易にした。混合および遠心分離に先立ち、ＣＤ７３タンパク質および本発明に関する抗体をＰＢＳ緩衝液へと透析した。
生データの転換によりｇ（ｓ）分布曲線を作成することにより、ＳＶ−ＡＵＣ実験を定性的に解析し、様々な曲線フィッティングアルゴリズムにより、より定量的に解析した。全相互作用ＫD値を２桁以上上回る濃度による小分散的非可逆的な系または可逆的な系のため、ｃ（ｓ）分布関数は、各種のパーセンテージおよび分子量の正確な推定を返すであろう、頑強な曲線フィッティング方法である。個々の成分（ＣＤ７３および会合した抗ＣＤ７３抗体（発明に関する抗ＣＤ７３抗体Ｃ４；「ＭＥＤＩ９４４７」））は、ｃ（ｓ）アルゴリズムによる曲線フィットに十分な純度のものであり、予想される分子量を返した。ＣＤ７３タンパク質と抗ＣＤ７３抗体の混合物は、ｃ（ｓ）アルゴリズムによるデコンボリューションに適さない幅広い分布を生じたため、ｇ（ｓ）、見かけ上の沈降分布プロットを作成して、ＣＤ７３および抗ＣＤ７３抗体によって形成された種の分布を定性的に比較した。
材料
ＣＤ７３ ＨｕＣＤ７３＿Ｈｉｓ＿タグ付き、二量体の分子量（ダルトン）：１１８，０３２、部分比容 ０．７３７４４、Ａ２８０／ｍｇ／ｍｌ／ｃｍ ０．９５４、貯蔵緩衝液 １×ＰＢＳ、０．２Ｍスクロース、０．０１％ＣＨＡＰＳ、５％グリセロール、１ｍＭ ＴＣＥＰ、ｐＨ−７．２。
抗ＣＤ７３抗体Ｃ０４、計算される分子量は１４８，２３２Ｄａであり、グリコシル化の３０００Ｄａを含む。抗ＣＤ７３抗体「ＭＥＤＩ９４４７」、グリコシル化の推定３０００Ｄａを含む計算される分子量は、１５０，６６９Ｄａである。
方法
Ｂｅｃｋｍａｎ ＸＬ−Ｉ解析的超遠心分離機（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ、Ｂｒｅａ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）によりＳＶ−ＡＵＣ実験のためのデータ収集を行った。各実験の当日に、必要であれば、適切な貯蔵温度で貯蔵された試料を解凍し、室温で、ピペットによって穏やかに混合し、検出器の線形範囲内の吸光度シグナルをもたらす濃度に希釈した。サファイアまたは石英窓を有するチャコール充填エポンセルの試料セクターに試料をロードした。試料セクターに、４００μＬの希釈試料をロードした。セルの参照セクターに４０６μＬのマッチした緩衝液を使用した。解析的４ホールチタンＡｎ−６０ Ｔｉローター（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して実験を実行した。較正カウンターウェイトをホール４に配置した。３０００ＲＰＭにおける初期スキャンを行って、セル統合性を検証し、装置のための半径方向較正を行った。また、３０００ＲＰＭにおいて各セルで波長スキャンを行って、吸光度を検証した。高速、４０，０００ＲＰＭでの遠心分離開始前に、試料を、少なくとも２時間、２０℃における温度平衡に達するようにした。半径方向ステップサイズ０．００３ｃｍ、継続的スキャニング、チャネルあたり１フラッシュにより、２８０ｎｍにおける吸光度スキャニングにより、半径方向位置の関数として濃度を報告する各セルのデータスキャンを収集した。
ｃ（ｓ）アルゴリズムを使用したＳＶ−ＡＵＣのデータ解析
試料をペレットにした後に、最初のスキャンから約１０回目のスキャンまでのスキャンを選んだ。試料をペレットにした後の過剰スキャンは、情報を含有せず、ベースライン寄与に過度に重みを加える。緩衝液特性およびタンパク質配列によって計算された部分比容の推定を、曲線フィットに対するパラメータとして入力した。ソフトウェアパッケージＳＥＤＦＩＴバージョン１５．０１ｂ（Schuck Biophys J. 2000 Mar;78(3):1606-19）を使用して、データを解析し、継続的ｃ（ｓ）分布を産生した。
見かけ上の沈降係数分布関数、ｇ（ｓ）曲線、および全体境界曲線フィッティングをプログラムＳＥＤＡＮＡＬ（www.sedanal.org; Biophysical Chemistry 108 (2004) 231-243）により行った。全ｃ（ｒ）データファイルを試験し、メニスカス位置、フィットまでの範囲、セルベースおよび必要であれば光学補正等のメタデータを、チャネルデータファイル（ＳＥＤＡＮＡＬのための＊．ａｂｒファイル）に書き出した。ｇ（ｓ）プロットは、見かけ上の沈降分布関数プロットであり、見かけ上の沈降係数のｘ軸（またはスピード軸）における、または、ｇ（ｓ）関数（ｃ（ｒ）データの導関数の形態）のｙ軸における生データの転換を表す。これは、モデルフリー転換であり、ピークの位置は、境界のスピードを表す一方、境界の幅は、単一種の拡散または複数種の拡散および増えつつある分離のいずれかを表す（複数種が存在する場合）。少数のｃ（ｒ）ペアが使用されて、各ｇ（ｓ）プロットを生成する。ｇ（ｓ）プロットの正確な形状は、プロットの生成に使用されるデータの回転開始からの期間および経過時間に左右される。ｘ軸において、さらに単一の理想的種のｇ（ｓ）は、沈降開始からのスキャンの経過時間に比例して、より狭くより背が高くなるであろう。ｇ（ｓ）プロットの期間にマッチしたセットのオーバーレイを使用して、同じ試料の希釈系列の可逆的自己会合を実証するまたは無効にすることができる。
ＳＥＤＡＮＡＬは、ｄｃ／ｄｔ（時間変化で割った濃度変化）演算によって転換された生データへの直接的曲線フィットも行うであろう。使用者によって指定されたモデルを使用して、ＳＥＤＡＮＡＬは、データチャネルのサブセットのｄｃ／ｄｔ曲線の非線形最小二乗曲線フィットを行って、データへのモデルの最良のフィットパラメータを得る。ＳＶ−ＡＵＣは、多数のモデルの適合度にランクを付けることができる数少ない生物物理学的方法の１つであり、分析者が、データのフィットに最良のモデルを選ぶのに役立つ。
結果
ＣＤ７３の試料をランし、ＳＥＤＡＮＡＬおよびＳＥＤＦＩＴにより曲線フィットさせた。
Figure 2021522780
Ｃ０４の試料をランし、ＳＥＤＡＮＡＬおよびＳＥＤＦＩＴにより曲線フィットさせた。
Figure 2021522780
試料「ＭＥＤＩ９４４７」をランし、ＳＥＤＡＮＡＬおよびＳＥＤＦＩＴにより曲線フィットさせた。
Figure 2021522780
ｃ（ｓ）およびＳＥＤＡＮＡＬにより混合物にフィッティングする曲線は、信頼できる結果を返さず、結論として、デコンボリューションするには多過ぎる種が存在した。定性的比較のため、ｇ（ｓ）オーバーレイグラフを作成した（図２を参照）。
スベドベルグおよび分子量の間の相関：
Figure 2021522780
（実施例１０）
結晶学
ＣＤ７３タンパク質：
ＣＤ７３タンパク質構築物は、Knapp,K. Et al. (2012) Structure 20: 2161-2173 (10.1016/j.str.2012.10.001）に基づき、タンパク質産生および結晶化挙動を支持する突然変異を含む。それぞれの突然変異は、ＡＳＮ５３ＡＳＰ、ＬＹＳ１４５ＳＥＲ、ＬＹＳ１４７ＳＥＲ、ＡＳＮ３１１ＡＳＰ、ＡＳＮ３３３ＡＳＰ、ＡＳＮ４０３ＡＳＰ、ＬＹＳ４７８ＳＥＲであり、加えて、これは、エンテロキナーゼによる切断後にＮ末端にＳＥＲ、ＰＲＯ、ＡＳＰ、ＰＲＯを含有する。これは、Knapp,K. Et al. (2012) Structure 20: 2161-2173に記載されている通りに発現され、リフォールディングされ、精製された。
ＦＡＢ：
本発明に係る抗ＣＤ７３抗体のＦａｂ断片をエンテロキナーゼ切断により得た。
結晶構造決定
タンパク質（Ｆａｂ断片およびＣＤ７３）を複合体形成させ、ゲル濾過によって精製し、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ＝８において２１ｍｇ／ｍｌに濃縮した。１２％ＰＥＧ８０００、０．１Ｍ ＭＯＰＳ ｐＨ７．６および０．１Ｍ酢酸マグネシウムを含有する溶液０．２μｌを、０．２μＬタンパク質溶液と混合することにより２０℃で結晶を得た。３日後に板状結晶が成長した。２５％ＰＥＧ４００を補充したリザーバー溶液に結晶を移し、液体窒素中で瞬間（ｆｌａｓｈ）凍結した。Ｓｗｉｓｓ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅにおいて回折データを収集し、分子置換えにより構造を解析した。モデル構築および精密化は、図３に描写されるＣＤ７３：抗ＣＤ７３ Ｆａｂ複合体の結晶構造をもたらした。
（実施例１１）
ｉ．ｖ．投与のための医薬製剤
本発明の上述の抗体分子のいずれかを、次に示す組成を有する静脈内適用のための医薬製剤の製造に選択することができる：
原薬： ５０ｍｇ／ｍｌ
ヒスチジン緩衝液： １０ｍＭ、ｐＨ６．０
スクロース： ２２０ｍＭ
ポリソルベート２０： ０．０２％
上述の組成は、上述の組成を有する注射用の水（ＷＦＩ）において溶液に製剤化され、滅菌され、１０ｍｌバイアルにおいて２〜８℃で貯蔵される。
上述の組成は、使用前にＷＦＩに再構成されるべき凍結乾燥製剤として提供されてもよい。
（実施例１２）
ヒトにおける医薬品使用
上述の実施例９に概要を述べる溶液は、２〜４週間毎の静脈内注入（体重１キログラムおよび用量あたり０．０５〜５０．０ｍｇの投薬量）により、がんを患う人間等、それを必要とする患者に適用される。
実施例において、本発明の多数の異なる抗ＣＤ７３抗体が調製された。次表において、これらの抗体の配列を提示する。Ａ１、Ａ２、Ａ３およびＡ４は、それぞれマウス抗体である。Ｂ１、Ｂ２、Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ４、Ｃ５およびＣ６は、それぞれヒト化抗体である。本明細書に記載されているＩＭＧＴ定義に従ってＣＤＲ配列を提示する。
さらに、それぞれＰＤ１−１、ＰＤ１−２、ＰＤ１−３、ＰＤ１−４およびＰＤ１−５と名付けられた本発明の抗ＰＤ−１抗体の配列を提示する。
Figure 2021522780
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本発明のこれらの態様のさらなる実施形態は、本発明の抗体分子の前記使用を第３の治療剤と組み合わせることができる場合を含む。
本発明の抗体分子が関与するさらなる態様、実施形態、使用および方法は、本発明の次の詳細な説明、および添付の特許請求の範囲から明らかになるであろう。
本発明は、肺がん（例えば、非小細胞肺がん、ＮＳＣＬＣ）、様々な胃腸管がん（例えば、結腸癌、胃がん、肝細胞癌）および腎臓がん（例えば、明細胞癌等の腎細胞がん）を含むいくつかのがん型のより効率的な処置を可能にする新規抗体分子を提供する。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕（ａ）配列番号２５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号２７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号２８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号２９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｂ）配列番号３１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号３４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号３５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｃ）配列番号３７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｄ）配列番号４３（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号４４（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号４５（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４６（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４７（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４８（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｅ）配列番号４９（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５０（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５１（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５２（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５３（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号５４（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｆ）配列番号５５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｇ）配列番号６１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号６４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号６５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
（ｈ）配列番号６７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号７０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号７１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号７２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
を含む、ＣＤ７３に特異的に結合する抗体。
〔２〕ヒト化抗体分子である、前記〔１〕に記載の抗体分子。
〔３〕モノクローナル抗体分子、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’） 2 、ＦｖまたはｓｃＦｖである、前記〔１〕または〔２〕に記載の抗体分子。
〔４〕ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＥ定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域を含む、前記〔１〕、〔２〕または〔３〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔５〕重鎖定常領域が、ＩｇＧ１、好ましくは、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を有するＩｇＧ１である、前記〔４〕に記載の抗体分子。
〔６〕軽鎖定常領域が、カッパーまたはラムダである、前記〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔７〕配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３および９５のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する、前記〔１〕〜〔６〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔８〕配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３および９５のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する、前記〔１〕〜〔７〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔９〕配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する、前記〔１〕〜〔８〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１０〕配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、前記〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１１〕配列番号１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７または１１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、前記〔１〕〜〔１０〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１２〕配列番号１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８または１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、前記〔１〕〜〔１１〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１３〕配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
を含む、前記〔１〕〜〔１２〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１４〕配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む、前記〔１〕〜〔１３〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔１５〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含む単離された核酸分子。
〔１６〕前記〔１５〕に記載のヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクター。
〔１７〕前記〔１６〕に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
〔１８〕哺乳類細胞である、前記〔１７〕に記載の宿主細胞。
〔１９〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子を製造する方法であって、
− 前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子の形成を可能にする条件下で、前記〔１７〕または〔１８〕に記載の宿主細胞を培養するステップと、
− 前記抗体分子を回収するステップと
を含む方法。
〔２０〕前記抗体分子をさらに精製および／または改変および／または製剤化するステップを追加的に含む、前記〔１９〕に記載の方法。
〔２１〕前記抗体分子を医薬組成物に製剤化するステップを追加的に含む、前記〔１９〕または〔２０〕に記載の方法。
〔２２〕医学において使用するための、前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔２３〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗ＣＤ７３抗体分子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
〔２４〕ＰＤ−１アンタゴニストをさらに含む、前記〔２３〕に記載の医薬組成物。
〔２５〕前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体と、ＰＤ−１アンタゴニストとを含むパーツキット。
〔２６〕ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である、前記〔２４〕に記載の組成物または前記〔２５〕に記載のキット。
〔２７〕ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、前記〔２６〕に記載の組成物またはキット。
〔２８〕ＰＤ−１アンタゴニストが、アテゾリズマブ、アベルマブまたはデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤＬ−１抗体である、前記〔２６〕に記載の組成物またはキット。
〔２９〕ＰＤ−１アンタゴニストが、
（ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＰＤ−１抗体である、前記〔２６〕に記載の組成物またはキット。
〔３０〕１種または複数の追加的な治療剤をさらに含む、前記〔２３〕〜〔２９〕のいずれかに記載の組成物またはキット。
〔３１〕がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子を投与するステップを含む方法。
〔３２〕がんを処置する方法において使用するための、前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子。
〔３３〕がんを処置するための医薬組成物を調製するための、前記〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の抗体分子の使用。
〔３４〕ＰＤ−１アンタゴニストをさらに含む、前記〔３１〕もしくは〔３３〕に記載の方法もしくは抗体分子の使用、または前記〔３２〕に記載の使用するための抗体分子。
〔３５〕抗体分子が、ＰＤ−１アンタゴニストと同時に、共に、逐次に、連続的に、代替的にまたは別々に投与されるべき、前記〔３４〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔３６〕ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である、前記〔３４〕または〔３５〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔３７〕ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、前記〔３６〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔３８〕ＰＤ−１アンタゴニストが、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤＬ−１抗体である、前記〔３６〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔３９〕ＰＤ−１アンタゴニストが、
（ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗ＰＤ−１抗体分子である、前記〔３６〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４０〕前記がんが、腎臓がん、胃腸管がんおよび肺がん、好ましくは、非小細胞肺がんからなる群から選択される、前記〔３１〕〜〔３９〕のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４１〕抗体分子が、１種または複数のさらに別の治療剤または手技と組み合わせて投与される、前記〔３１〕〜〔４０〕のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４２〕１種または複数のさらに別の治療剤または手技が、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、外科的手技、放射線手技または細胞免疫療法から選択される、前記〔４１〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４３〕さらに別の治療剤が、Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＣＤ３９アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニストまたはＨＥＲ２アンタゴニストである、前記〔４１〕に記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４４〕処置されるべき患者が、ＣＤ７３の発現増加に基づき選択される、前記〔３１〕〜〔４３〕のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
〔４５〕処置されるべき患者が、別の治療剤による処置を以前に受けたことがあり、前記治療剤が、好ましくは、ＰＤ−１アンタゴニスト、特に、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ならびに
（ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
（ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
を含む抗体からなる群から選択されるＰＤ−１アンタゴニストである、前記〔３１〕〜〔４４〕のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。

Claims (45)

  1. （ａ）配列番号２５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号２６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号２７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号２８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号２９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｂ）配列番号３１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号３４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号３５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号３６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｃ）配列番号３７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号３８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号３９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｄ）配列番号４３（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号４４（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号４５（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号４６（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号４７（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号４８（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｅ）配列番号４９（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５０（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５１（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５２（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５３（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号５４（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｆ）配列番号５５（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号５６（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号５７（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号５８（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号５９（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６０（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｇ）配列番号６１（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６２（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６３（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号６４（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号６５（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号６６（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ；または
    （ｈ）配列番号６７（ｈｃＣＤＲ１）、配列番号６８（ｈｃＣＤＲ２）および配列番号６９（ｈｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む重鎖ＣＤＲ、ならびに配列番号７０（ｌｃＣＤＲ１）、配列番号７１（ｌｃＣＤＲ２）および配列番号７２（ｌｃＣＤＲ３）のアミノ酸配列を含む軽鎖ＣＤＲ
    を含む、ＣＤ７３に特異的に結合する抗体。
  2. ヒト化抗体分子である、請求項１に記載の抗体分子。
  3. モノクローナル抗体分子、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）2、ＦｖまたはｓｃＦｖである、請求項１または２に記載の抗体分子。
  4. ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡおよびＩｇＥ定常領域からなる群から選択される重鎖定常領域を含む、請求項１、２または３のいずれかに記載の抗体分子。
  5. 重鎖定常領域が、ＩｇＧ１、好ましくは、Ｌ２３４Ａおよび／またはＬ２３５Ａ突然変異を有するＩｇＧ１である、請求項４に記載の抗体分子。
  6. 軽鎖定常領域が、カッパーまたはラムダである、請求項１〜５のいずれかに記載の抗体分子。
  7. 配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３および９５のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する、請求項１〜６のいずれかに記載の抗体分子。
  8. 配列番号８１、８３、８５、８７、８９、９１、９３および９５のいずれかのアミノ酸配列を含む重鎖可変領域を有する、請求項１〜７のいずれかに記載の抗体分子。
  9. 配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のいずれかと少なくとも８５％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を有する、請求項１〜８のいずれかに記載の抗体分子。
  10. 配列番号８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４または９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域を含む、請求項１〜９のいずれかに記載の抗体分子。
  11. 配列番号１０５、１０７、１０９、１１１、１１３、１１５、１１７または１１９のアミノ酸配列を含む重鎖を含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の抗体分子。
  12. 配列番号１０６、１０８、１１０、１１２、１１４、１１６、１１８または１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む、請求項１〜１１のいずれかに記載の抗体分子。
  13. 配列番号８１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号８３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号８５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号８７のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号８８のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号８９のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９０のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号９１のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９２のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号９３のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９４のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域、または
    配列番号９５のアミノ酸配列を含む重鎖可変領域、および配列番号９６のアミノ酸配列を含む軽鎖可変領域
    を含む、請求項１〜１２のいずれかに記載の抗体分子。
  14. 配列番号１０５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１０７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１０８のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１０９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１０のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１１１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１２のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１１３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１４のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１１５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１６のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１１７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１１８のアミノ酸配列を含む軽鎖、または
    配列番号１１９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２０のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の抗体分子。
  15. 請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子の重鎖可変領域および／または軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含む単離された核酸分子。
  16. 請求項１５に記載のヌクレオチド配列を含む核酸分子を含む発現ベクター。
  17. 請求項１６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
  18. 哺乳類細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
  19. 請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子を製造する方法であって、
    − 請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子の形成を可能にする条件下で、請求項１７または１８に記載の宿主細胞を培養するステップと、
    − 前記抗体分子を回収するステップと
    を含む方法。
  20. 前記抗体分子をさらに精製および／または改変および／または製剤化するステップを追加的に含む、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記抗体分子を医薬組成物に製剤化するステップを追加的に含む、請求項１９または２０に記載の方法。
  22. 医学において使用するための、請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子。
  23. 請求項１〜１４のいずれかに記載の抗ＣＤ７３抗体分子と、薬学的に許容される担体とを含む医薬組成物。
  24. ＰＤ−１アンタゴニストをさらに含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体と、ＰＤ−１アンタゴニストとを含むパーツキット。
  26. ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である、請求項２４に記載の組成物または請求項２５に記載のキット。
  27. ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、請求項２６に記載の組成物またはキット。
  28. ＰＤ−１アンタゴニストが、アテゾリズマブ、アベルマブまたはデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤＬ−１抗体である、請求項２６に記載の組成物またはキット。
  29. ＰＤ−１アンタゴニストが、
    （ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む抗ＰＤ−１抗体である、請求項２６に記載の組成物またはキット。
  30. １種または複数の追加的な治療剤をさらに含む、請求項２３〜２９のいずれかに記載の組成物またはキット。
  31. がんを処置する方法であって、それを必要とする患者に、治療有効量の請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子を投与するステップを含む方法。
  32. がんを処置する方法において使用するための、請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子。
  33. がんを処置するための医薬組成物を調製するための、請求項１〜１４のいずれかに記載の抗体分子の使用。
  34. ＰＤ−１アンタゴニストをさらに含む、請求項３１もしくは３３に記載の方法もしくは抗体分子の使用、または請求項３２に記載の使用するための抗体分子。
  35. 抗体分子が、ＰＤ−１アンタゴニストと同時に、共に、逐次に、連続的に、代替的にまたは別々に投与されるべき、請求項３４に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  36. ＰＤ−１アンタゴニストが、抗ＰＤ−１抗体または抗ＰＤＬ−１抗体である、請求項３４または３５に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  37. ＰＤ−１アンタゴニストが、ＰＤＲ−００１、ペムブロリズマブ、ニボルマブおよびピディリズマブからなる群から選択される抗ＰＤ−１抗体である、請求項３６に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  38. ＰＤ−１アンタゴニストが、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤＬ−１抗体である、請求項３６に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  39. ＰＤ−１アンタゴニストが、
    （ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む抗ＰＤ−１抗体分子である、請求項３６に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  40. 前記がんが、腎臓がん、胃腸管がんおよび肺がん、好ましくは、非小細胞肺がんからなる群から選択される、請求項３１〜３９のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
  41. 抗体分子が、１種または複数のさらに別の治療剤または手技と組み合わせて投与される、請求項３１〜４０のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
  42. １種または複数のさらに別の治療剤または手技が、化学療法、標的化抗がん療法、腫瘍溶解薬、細胞傷害剤、免疫に基づく療法、サイトカイン、外科的手技、放射線手技または細胞免疫療法から選択される、請求項４１に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  43. さらに別の治療剤が、Ａ２ＡＲアンタゴニスト、ＣＤ３９アンタゴニスト、ＬＡＧ−３アンタゴニスト、ＣＴＬＡ−４アンタゴニスト、ＥＧＦＲアンタゴニストまたはＨＥＲ２アンタゴニストである、請求項４１に記載の方法、使用または使用するための抗体。
  44. 処置されるべき患者が、ＣＤ７３の発現増加に基づき選択される、請求項３１〜４３のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
  45. 処置されるべき患者が、別の治療剤による処置を以前に受けたことがあり、前記治療剤が、好ましくは、ＰＤ−１アンタゴニスト、特に、ペムブロリズマブ、ニボルマブ、ピディリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ならびに
    （ｉ）配列番号１２１のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２２のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉ）配列番号１２３のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２４のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｉｉ）配列番号１２５のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２６のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｉｖ）配列番号１２７のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１２８のアミノ酸配列を含む軽鎖；または
    （ｖ）配列番号１２９のアミノ酸配列を含む重鎖、および配列番号１３０のアミノ酸配列を含む軽鎖
    を含む抗体からなる群から選択されるＰＤ−１アンタゴニストである、請求項３１〜４４のいずれかに記載の方法、使用または使用するための抗体。
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