FI114483B - Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt - Google Patents
Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt Download PDFInfo
- Publication number
- FI114483B FI114483B FI20010323A FI20010323A FI114483B FI 114483 B FI114483 B FI 114483B FI 20010323 A FI20010323 A FI 20010323A FI 20010323 A FI20010323 A FI 20010323A FI 114483 B FI114483 B FI 114483B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- deletion
- adrenoceptor
- amino acids
- genotype
- hypertension
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/12—Antihypertensives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
1 1 4483
Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt KEKSINNÖN ALA 5 Tämä keksintö koskee menetelmää, jolla voidaan osoittaa tai diagnostisoida yksilön riski tai alttius kohonneelle verenpaineelle ja jolla voidaan kohdistaa antihypertensiivinen hoito yksilössä.
10 KEKSINNÖN TAUSTA
Julkaisut ja muu materiaali, jota tässä käytetään kuvaamaan keksinnön taustaa ja erityisesti tapaukset, jotka tarjoavat lisää käytäntöä koskevia yksityiskohtia, liitetään oheen viitteenä.
15 a2-adrenoseptorit (ci2-AR:t) välittävät katekoliamiinien, norepinefriinin ja epinefiiinin, monia fysiologisia vaikutuksia. Ihmisillä ja muilla imettäväisillä tunnetaan <X2-adreno-septorien kolme geneettistä alatyyppiä, jotka merkitään gc2a-, 0C2b- ja vastaavasti 012c-adrenoseptorit. Reseptoreja koodaavat ihmisgeenit sijaitsevat kromosomeissa 10,2 ja • ‘ : 20 vastaavasti 4. Näillä reseptoreilla ei tiedetä olevan silmukointivariantteja, koska geenit • * :" , i ovat intronittomia. Reseptorialatyyppien kudosjakaumia ja fysiologisia ja farmako- : * : logisia toimintoja ovat esittäneet esim. MacDonald et ai. (1997) ja Docherty (1998).
: 1 Geenikohdistetuilla ja siirtogeenisillä hiirillä äskettäin suoritettujen tutkimusten mukaan : : a2A-adrenoseptorit välittävät useimmat farmakologiset toiminnot, jotka luetaan tällä ’... 25 hetkellä saatavissa olevien a2-adrenoseptoriagonistien ansioksi, mukaan lukien neuro- transmitterin vapautumisen inhibitio, keskeiset hypotensiiviset ja bradykardiaaliset » f * •;;; vaikutukset, rauhoittuminen (sedatio) ja anestesia, ja analgesia. Samat tutkimukset '; * osoittavat, että a2B-adrenoseptorit välittävät ääreisverisuonten supistumisen vasteena ’ ·; · * agonistiaktivoinnille (Link et ai. 1996, Macmillan et ai. 1996). Muita fysiologisia tai ' ; · ’ 30 farmakologisia vaikutuksia ei ole varmuudella liitetty tähän reseptorialatyyppiin. 0C2C- •.,,: adrenoseptorialatyyppi näyttää liittyvän kompleksisen käyttäytymisen säätelyyn. Ei / 2 114483 tiedetä, että tällä alatyypillä olisi tärkeitä funktioita perifeerisissä kudoksissa keskushermoston ulkopuolella tai sydänverisuonisäätelyssä.
Kohonnut verenpaine, kuten monet muut yleiset sairaudet, syntyvät geneettisten ja ym-5 päristötekijöiden välisistä kompleksisista vuorovaikutuksista. On kohtuullista olettaa, että tullaan toteamaan, että verisuonten toimintojen säätelyn kannalta tärkeissä mekanismeissa funktionaalisesti merkitsevä geneettinen variaatio liittyy kohonneen verenpaineen patogeneesiin ja hoitoon. Äskettäin identifioitiin ihmisen ct2B-AR-geenin varianttimuoto (Heinonen et ai., 1999). Varianttialleeli koodaa reseptoriproteiinia, jossa 10 on kolmen glutamaattitähteen deleetio 18 aminohapon (joista 15 on glutamaatteja) happamessa jaksossa, joka sijaitsee reseptoripolypeptidin kolmannessa intrasellu-laarisessa silmukassa. Tämä hapan jakso on ainutlaatuinen piirre cc2B-AR:n primaarirakenteessa, verrattuna a2A-AR:ään ja ct2c-AR: ään, mikä viittaa siihen, että tällä piirteellä on selvä rooli a2B-AR:n toiminnassa. Eri imettäväisten ct2B-AR-15 polypeptidien aminohapposekvenssivertailu paljastaa, että hapan jakso on erittäin pysyvä imettäväisten 0C2B-AR:ien joukossa ja että hapan jakso on ihmisillä pitkä verrattuna muihin lajeihin. Tästä voidaan olettaa, että tämä piirre on tärkeä reseptorin toiminnallisuuden kannalta ja että lyhyt muoto (D, ’’deleetio”) luultavasti edustaa esi-: : isiltä perittyä (ancestral) muotoa ja pitkä muoto (I, ’’insertio”) voisi edustaa tuoreempaa : ‘ j 20 alleelista varianttia ihmisillä. Jewell-Motz ja Liggett (1995) tutkivat tämän jakson in • ,: vitro -toimintoja käyttäen paikkaan kohdistettua mutageneesiä poistamaan samoin kuin ' · korvaamaan jakson 16 aminohappoa. Heidän tuloksensa osoittavat, että tämä olennainen * hapan piirre on tarpeellinen täydelle agonistin aikaansaamalle reseptorifosforylaatiolle ja -vaimennukselle.
25 ;;; Sen perusteella, että hiirillä a2B-AR:llä on verisuonia supistava ominaisuus ja että tämä '! ’ hapan alue liittyy reseptorin vaimennusmekanismiin, oletimme, että deleetiovariantti ‘ tuottaa alentuneen reseptori vaimennuksen ja siitä syystä lisää verisuonten supistumista, ‘ · · · ‘ mikä voisi liittyä kohonneeseen verenpaineeseen. Tämän olettamuksen testaamiseksi : 11· 30 suoritimme väestötutkimuksen 912:11a keski-ikäisellä suomalaisella miehellä.
• * » 3 114483
KEKSINNÖN KOHDE JA YHTEENVETO
Keksinnön kohteena on aikaansaada menetelmä, jolla seulotaan yksilö sen arvioimiseksi, onko hänessä ct2B-adrenoseptorigeenin genotyyppiin perusteella riski 5 kehittyä kohonnut verenpaine.
Keksintö koskee menetelmää kohonneen verenpaineen riskin havaitsemiseksi yksilössä määrittämäl lä variantti a2B-adrenoseptorin koodaavan alleelin rakenne, ts. määrittelemällä onko ihmisen ct2B-adrenoseptorin genotyyppi sanotussa yksilössä deleetio/-10 deleetio (D/D) tyyppiä, jonka menetelmän mukaan testin avulla määritetään tutkittavan yksiölön biologisessa näytteessä ihmisen oc2B-adrenoseptorin insertio/insertio (I/I), deleetio/insertio (D/I), tai D/D genotyypin läsnäolo, mikä D/D genotyypin läsnäolo merkitsee kohonneen verenpaineen kehittymisen riskiä yksilöllä, jolloin sanottu deleetio (D) viittaa genotyyppiin, jossa alleeli koodaa variantti-ct2B-15 adrenoseptoriproteiinia, jossa on kolmen glutamaatin, aminohappojen 307-309 deleetio, 12 glutamaattia, aminohapot 298-309, käsittävässä glutamiinihappo-toistoelementissä, 18 aminohappoa, 294-311, käsittävässä happamessa jaksossa, reseptoripolypeptidin 3. intrasellulaarisessa silmukassa, ja sanottu insertio (I) viittaa ' * * genotyyppiin, jossa alleeli koodaa sanottua a2B-adrenoseptoriproteiinia ilman mainittua 20 deleetiota.
;' ’: KEKSINNÖN YKSITYISKOHTAINEN KUVAUS
Tämä keksintö koskee menetelmää, jolla arvioidaan imettäväisillä yksilöiden riski, että * 1!! 25 heille kehittyy kohonnut verenpaine.
• · ‘ ‘ Käsite ’’ihmisen a2B-adrenoseptorin deleetio/deleetio(D/D) -genotyyppi”, lyhennettynä ': ’ ”D/D-genotyyppi” tarkoittaa yksilön genotyyppiä, jossa molemmat a2B-adrenoseptori- ' * alleelit koodaavat variantti-(X2B-adrenoseptoria, jossa on kolmen glutamaatin, amino- ·’ 30 happojen 307-309, deleetio 12 glutamaattia, aminohapot 298-309, käsittävässäglutamii- nihappotoistoelementissä, 18 aminohappoa, 294-311 (SEQ ID NO: 4), käsittävässä 114483 happamessa jaksossa, reseptoripolypeptidin 3. intrasellulaarisessa silmukassa. Vastaavasti ”deleetio/insertio(D/I) -genotyyppi” viittaa genotyyppiin, jossa yksi geenialleeleista koodaa oc2B-adrenoseptoria, jossa on mainittu deleetio, ja toinen α2β-adrenoseptoria, jossa ei ole mainittua deleetiota, t.s. jolla on vastaava insertio, ja siten 5 ”insertio/insertio(I/I) -genotyyppi” tarkoittaa genotyyppiä, jossa molemmat alleelit koodaavat a2B-adrenoseptoria ilman mainittua deleetiota tai deleetioita.
Identifioimme äskettäin ihmisen a2B-AR-geenin (SEQ ID NO:3) yleisen varianttimuo-don (SEQ ID NO:l). Tämä varianttigeeni koodaa reseptoriproteiinia (SEQ ID NO:2), 10 jossa on 3 glutamaatin, aminohapot 307-309, deleetio 12 glutamaattia, aminohapot 298-309, käsittävässä glutamiinihappo(Glu)toistoelementissä, 18 aminohappoa, 294-311 (SEQ ID NO:4), käsittävässä happamessa jaksossa, joka sijaitsee reseptoripolypeptidin 3. intrasellulaarisessa silmukassa. Tämä varianttigeeni (SEQ ID NO:l) yhdistettiin alentuneeseen perusaineenvaihdunta-arvoon (BMR - basal metabolic rate) liikalihavien 15 suomalaisten ryhmässä (Heinonen et ai. 1999). Liikalihavista, joita oli 166,47 (28 %) oli homotsygootteja pitkän 12 glutamaatin toistoelementin (G1u12/G1u12) suhteen, kun taas 90 (54 %) oli heterotsygootteja (G1u12/G1u9) ja 29 (17 %) oli homotsygootteja :. lyhyen muodon (G1u9/G1u9) suhteen.
.' ’ 20 Jäljempänä esitettävät tulokset osoittavat, että 912 suomalaisen keski-ikäisen miehen väestöotoksessa henkilöillä, jotka ovat homotsygootteja edellä kuvatun lyhyen muodon (G1u9/G1u9) suhteen ja siten edustavat (X2B-adrenoseptorin deleetio/deleetio(D/D) -genotyyppiä, on merkittävästi lisääntynyt kohonneen verenpaineen riski. Näiden tulosten ja aikaisempien julkaisujen, joihin edellä viitattiin, perusteella voidaan olettaa, että tämä * i · 25 D/D-genotyyppi liittyy heikentyneeseen kapasiteettiin säätää alas a2B-adrenoseptorin toimintaa jatkuvan reseptoriaktivaation aikana. Koska muuttunut cc2B-adrenoseptori-; : ’: toiminto näyttää olevan merkityksellinen kohonneen verenpaineen patogeneesissa, : ’' ’: uskomme, että se voisi olla keskeinen myös yksilöillä, joilla on insertio/deleetio (I/D) , · · ·, (heterotsygootti G1u12/G1u9) ja insertio/insertio (I/I) (homotsygootti G1u12/G1u12) - : ·, \ 30 genotyypit, silloin kun kohonneen verenpaineen muut riskitekijät ovat läsnä. Edelleen, koska tämä 3 glutamaatin spesifinen deleetio mainitussa 12 glutamaatin, aminohapot 5 114483 298-309, glutamiinihappotoistoelementissä, mainitussa 18 aminohapon, 294-311, hap-pamessa jaksossa, joka sijaitsee reseptoripolypeptidin 3. solunsisäisessa silmukassa, näyttää olevan merkityksellinen kohonneessa verenpaineessa, uskomme, että myös muut deleetiot, t.s. ainakin yhden glutamaatin deleetiot mainitussa 12 glutamaatin, ami-5 nohapot 298-309, glutamiinihappotoistoelementissä, voisivat olla merkityksellisiä kohonneen verenpaineen patogeneesissa, koska reseptoripolypeptidin 3. solunsisäinen silmukka, jossa se sijaitsee, näyttää omaavan olennaisen roolin oc2B-adrenoseptori-toiminnan alassäätämisessä.
10 ct2B-adrenoseptorit välittävät valtimoiden supistumisen ja a2B-adrenoseptorigeenissä esiintyvä geneettinen polymorfismi tekee jotkut yksilöt herkemmiksi a2B-adrenosepto-rin välittämälle valtimoiden verisuonisupistumiselle ja siihen liittyville kliinisille sairauksille, kuten kohonneelle verenpaineelle. Erityisesti nämä yksilöt hyötyvät ct2B-ad-renoseptoriantagonistihoidosta ja heillä on haitallisten vaikutusten lisääntynyt riski, jos 15 heille annostetaan alatyypiltään ei-selektiivista a2-agonistia. Tästä syystä geenitesti, joka tunnistaa yksilöt, joilla on a2B-adrenoseptorigeenin deleetiovariantti, on hyödyllinen diagnostiikassa ja valittaessa potilaita spesifisiin terapeuttisiin toimenpiteisiin. Geenitesti, joka tunnistaa oc2B-adrenoseptorin D/D-genotyypin, on käyttökelpoinen ar-: . * vioitaessa yksilön riskiä, että hänelle kehittyy kohonnut verenpaine j a muita kliinisiä *: 20 sairauksia, joihin liittyy D/D-genotyypistä johtuva valtimoiden verisuonisupistuminen.
: · ‘ Geenitesti, joka tunnistaa <X2B-adrenoseptorin D/D-genotyypin, on käyttökelpoinen • j valittaessa lääkehoitoa potilaille, joilla on kohonnut verenpaine; hypertensiiviset yksilöt, joilla on D/D-genotyyppi, hyötyvät erityisesti hoidosta ct2-adrenoseptoriantagonisteilla ((^-selektiivinen tai -ei-selektiivinen). Geenitesti, joka tunnistaa a2B-adrenoseptorin , i, 25 D/D-genotyypin, on käyttökelpoinen valittaessa lääkehoitoa potilaille, joilla saattaa olla * * 1 * , · · ·. lisääntynyt riski a2-adrenergisten agonistien haittavaikutusten suhteen; joko on mahdol- ‘. lista välttää 012-agonistien käyttöä tällaisilla potilailla, tai on mahdollista sisällyttää , · , spesifinen a2B-antagonisti heidän terapeuttiseen lääkehoitoon.
• » ,! ’! 30 DNA-sekvenssiä voidaan käyttää seulottaessa yksilöä määritettäväksi, kantaako mainit tu yksilö varianttigeeniä. Määritys voidaan suorittaa joko DNA-analyysinä hyvin tun- 6 114483 nettujen menetelmien mukaisesti, joita ovat normaalin ja varianttigeenin suora DNA-sekventointi, alleelispesifinen amplifikaatio käyttäen polymeraasiketjureaktiota (PCR), joka mahdollistaa joko normaalin tai varianttisekvenssin osoittamisen, tai normaalin tai varianttigeenin epäsuora osoittaminen erilaisilla molekyylibiologisilla menetelmillä, 5 joita ovat esim. PCR-yksisäikeinen konformaatiopolymorfismi (SSCP = single stranded conformation polymorphism) -menetelmä tai denaturoiva gradienttigeelielektroforeesi (DGGE). Normaalin tai varianttigeenin osoittaminen voidaan tehdä myös restriktioffag-menttipolymorfismi (restriction fragment length polymorphism (RFLP) -menetelmällä, joka on erityisen sopiva genotyypitettäessä suurta joukkoa näytteitä. Samallatavalla 10 voidaan helposti kehittää, analogisesti monien nykyisin olemassa olevien, yhden nukleotidin polymorfismeille tarkoitettujen testien kanssa, testi, joka perustuu geenisiruun tai saijateknologiaan.
Määritys voidaan suorittaa myös RNA-tasolla analysoimalla RNA, joka ilmentyy ku-15 dostasolla, käyttäen erilaisia menetelmiä. Hybridisaatioon voidaan suunnitella alleeli- spesifiset koettimet. Hybridisaatio voidaan tehdä esim. käyttäen Nothem blot-testiä, RNase suojaustestiä tai in situ hybridisaatiomenetelmiä. Normaalista tai varianttigee-nista johdettua RNA:ta voidaan myös analysoida muuttamalla kudos-RNA ensin cDNArksi, minkä jälkeen cDNA amphfioidaan alleelispesifisellä PCR-menetelmällä.
20 , , Keksintöä kuvataan yksityiskohtaisemmin kokeellisessa osassa.
| KOKEELLINEN OSA
: a9R-adrenoseptoria koodaavien genomisten alleelien määritys 25 .,; ·' PCR-SSCA-analyysi :: Polymeraasiketjureaktio- yksisäikeinen konformaatioanalyysi (PCR-SSCA), jota käy- : :'; tettiin a2B-adrenoseptoria koodaavien genomisten alleelien identifioimiseksi, suoritettiin seuraavalla tavalla: a2B-adrenergistä reseptoria koodaava genominen DNA amplifioi-: ‘''; 30 tiin kahdessa, intronittomalle a2B-adrenoseptorigeenisekvenssille spesifisessä osassa : ’ * ’; (Lomasney et ai. 1990). PCR-amplifikaation PCR-alukeparit olivat seuraavat: pari 1: / 7 114483 5 ’-GGGGCGACGCTCTTGTCTA-3 ’(SEQ ID N0:5) ja 5’-GGTCTCCCCCTCCTCCTTC-3’ (SEQ ID NO. 6) (tuotekoko 878 bp), pari 2: 5’-GCAGCAACCGCAGAGGTC-3 ’ (SEQ ID NO:7) ja 5’-GGGCAAGAAGCAGGGTGAC-3’ (SEQ ID NO:8) (tuotekoko 814 bp). Alukkeet 5 toimitti KeboLab (Helsinki, Suomi). PCR-amplifikaatio suoritettiin 5:1 tilavuudessa, joka sisälsi 100 ng genomista DNA:ta (eristetty kokoverestä), 2,5 mmoolia/1 jokaista aluketta, 1,0 mmoolia/1 deoksi-NTPrää, 30 nmoolia/133P-dCTP:tä ja 0,25 U:ta AmpliTaq DNA-polymeraasia (Perkin Elmer Cetus, Norwalk, CT). PCR-olosuhteet optimoitiin käyttäen PCR Optimizer™ -pakkausta (Invitrogen, San Diego, CA). Näyt-10 teet amplifioitiin GeneAmp PCR System 9600:11a (Perkin Elmer Cetus). PCR-tuotteet katkaistiin SSCA-analyysin restriktioentsyymeillä. Alukeparin 1 tuote katkaistiin Dde I:llä ja Dra 111:11a (Promega Corp., Madison, WI). Alukeparin 2 tuote katkaistiin Alu I:llä ja Hinc H:lla (Promega Corp.). Katkaistut näytteet sekoitettiin SSCA-puskurin kanssa, joka sisälsi 95 % formamidia, 10 mmoolia/1 NaOH:ta, 0,05 % ksyleenisyanolia 15 ja 0,05 % bromifenolisinistä (kokonaistilavuus 25:1). Ennen latausta näytteitä denaturoitiin 5 minuutin ajan 95 °C:ssa ja niitä pidettiin 5 minuuttia jään päällä. Kolme mikro-litraa jokaista näytettä ladattiin suuren erotuskyvyn omaavalle MDE™ -geelille (FMC, BioProducts, Rockland, MA). Geelielektroforeesi suoritettiin kaksi kertaa, käyttäen . kahta erilaista ajo-olosuhdetta: 6%:inen MDE-geeli + 4 °C:ssa ja 3%:inen MDE-geeli j 20 huoneenlämmössä, molemmat 4 W vakioteholla 16 tunnin ajan. Nämä geelit kuivattiin 1 ; ja autoradiografia suoritettiin Kodak BioMax MR-filmillä 24 tunnin ajan huoneenläm- : mössä.
: Sekventointi ja genotyypitys 25 DNA-näytteet, jotka vaeltavat eri nopeuksilla SSCA:ssa, sekventoitiin Thermo
Sequenase™ Cycle Sequencing -pakkauksella (Amersham Life Science, Cleveland, :* OH). Identifioidun 3-glutaamihappodeleetion genotyyppittämiseksi DNA uutettiin : : : perifeerisestä verestä standardimenetelmiä käyttäen. cc2b-AR I/D-genotyyppi määri- ‘,,, · tettiin erottamalla PCR-amplifioidut DNA-fragmentit elektroforeesilla. I/D-variaatioi- : ’ ”; 30 den luonteen perusteella pitkien ja lyhyiden alleelien identifiointi suoritettiin niiden i' * *: erilaisilla elektroforeettisilla kulkeutumisnopeuksilla, mikä johtui 9 bp:n kokoerosta.
8 114483
Kiinnostava alue amplifioitiin sense-alukkeella 5’-AGG-GTG-TTT-GTG-GGG-CAT-CT-3’ja antisense-alukkeella 5’-CAA-GCT-GAG-GCC-GGA-GAC-ACT-3’ (Oligold, Eurogentec, Belgia), jolloin pitkälle alleelille (I) saatiin 112 bp:n ja lyhyelle alleelille (D) 103 bp:n tuotekoko. PCR-amplifikaatio suoritettiin 10 μ1:η tilavuudessa, joka sisälsi 5 ~ 100 ng genomista DNA:ta, 1 x puskuri G:tä (Invitrogen, San Diego, CA, USA), 0,8 mM dNTP:ää, 0,3 μΜ jokaista aluketta ja 0,25 yksikköä AmpliTaq DNA -polymeraasia (Perkin Elmer Cetus, Norwalk, CT, USA). Näytteet amplifioitiin GeneAmp PCR System 9600:11a (Perkin Elmer Cetus). Alustavan denaturoinnin, joka tapahtui 94 °C:ssa 2 minuutin ajan, jälkeen näytteet amplifioitiin 35 syklissä. PCR-amplifikaatio-olosuh-10 teet olivat 96 °C (40 s), 69 °C (30 s) ja 72 °C (30 s), minkä jälkeen seurasi lopullinen pidennys 72 °C:ssa 6 minuutin ajan. PCR-tuotteet, jotka edustivat pitkiä ja lyhyitä allee-lejä, identifioitiin kahdella vaihtoehtoisella menetelmällä. 1) Amplifioidut näytteet sekoitettiin 4:1 lopetusliuoksen (Thermo Sequenase™ Cycle Sequencing kit) kanssa, kuumennettiin 95 °C:seen 2 minuutin ajaksi ja ladattiin kuumana sekventoiville geeleille 15 (Long Ranger™, FMC). Geelit kuivattiin ja autoradiografia suoritettiin edellä kuvatulla tavalla. 2) Amplifioitujen PCR-tuotteiden erottaminen tehtiin elektroforeesilla suuren erotuskyvyn omaavalla 4%:isella Metaphor-agaroosigeelillä (FCM Bioproducts, Rockland, Maine) ja juovat visualisoitiin väsäämällä etidiumbromidilla. Molemmissa ,: menetelmissä pitkät (Glu12) ja lyhyet (Glu9) alleelit identifioitiin niiden erilaisten elekt- ; 20 roforeettisten kulkeutumisnopeuksien perusteella.
♦ Väestötutkimus
Seuraavassa kuvataan yksityiskohtaisemmin edellä viitattua, neljä vuotta kestänyttä seurantatutkimusta, johon osallistui 912 suomalaista keski-ikäistä mieshenkilöä, 25 mukaan lukien 192 henkilöä, joilla oli a2B-adrenoseptorin spesifinen deleetio/- » ’!!deleetio(D/D) -genotyyppi: * * I I > ;;; ’ Koska tiesimme cc2B-AR:n verisuonia supistavasta ominaisuudesta hiirillä ja tutkitun t » ;' happaman alueen mahdollisen liittymisen reseptorin vaimentumismekanismiin, ’... · 30 oletimme, että havaittu insertio/deleetio-alleelinen variaatio voisi olla tekemisissä ; > * kohonneen verenpaineen kanssa. Tämän olettamuksen testaamiseksi suoritimme neljä / 9 114483 vuotta jatkuneen seurantatutkimuksen 912 keski-ikäisellä suomalaisella miehellä, joilla ei ollut aikaisempaa sydäntautihistoriaa. Tutkimus suoritettiin Kuopion iskeemisen sydäntautiriskitekijätutkimuksen (the Kuopio Ischemic Heart Disease Risk Factor Study = KIHD) osana, joka tutkimus on jatkuva väestöön perustuva tutkimus, joka on suun-5 niteltu sydänverisuonisairauksien riskitekijöiden ja siihen liittyvien tulosten tutkimiseksi itäisessä Suomessa asuvilla miehillä (Salonen, 1988).Tämä alue tunnetaan homogeenisesta väestöstään (Sajantila et ai. 1996) ja korkeasta sydänsairastuvuudestaan ja -kuolleisuudestaan (Keys 1980).
10 912:sta henkilöstä 192:11a (21 %) oli D/D-genotyyppi, 256:11a (28 %) oli I/I-genotyyppi ja 456 (51 %) olivat heterotsygootteja, t.s. heillä oli I/D-genotyyppi. Tämä genotyyppi-jakauma on Hardy-Weinbergin tasapainossa (p-0,46).
417:llä miehellä ei ollut kohonneen verenpaineen perhehistoriaa ja 495:llä oli kohonnut 15 verenpaine perheessä (joko vanhemmilla tai sisaruksilla tai molemmilla). Oletettiin, että geneettiset ominaisuudet liittyisivät vahvemmin kohonneeseen verenpaineeseen henkilöillä, joilla oli perheessä kohonneen verenpaineen historia, ja tästä johtuen (X2B-adreno-septorigenotyypin ja kohonneen verenpaineen välinen assosiaatio analysoitiin erikseen miehillä, joilla oli perhehistoria, ja miehillä, joilla ei ollut perhehistoriaa (taulukot 1 ja . j 20 2). Lineaarisessa monimuuttujaregressiomallissa miehillä, jotka olivat DD-genotyyppiä, • ‘; oli keskimäärin korkeampi systolinen keskiverenpaine (BP = blood pressure) verrat taessa toisiin genotyyppeihin (p=0,021) miehillä joilla oli perhehistoria (taulukko 1).
•: Miehistä, joilla oli kohonneen verenpaineen perhehistoria, DD-homotsygooteilla : : miehillä oli logistisessa monimuuttujamallissa kohonneen verenpaineen (joko systoli- 25 nen BP ainakin 165 mmHg:tä tai diastolinen BP ainakin 95 mmHg:tä tai antihyperten-siivinen lääkitys, taulukko 2) todennäköisyys (yleisyys) 2,04-kertainen (95 %:n luot-*... tamusväli 1,06-3,93, p=0,032).
• I · :, _ : a2-agonistien käytön yhteys kohonneeseen verenpaineeseen analysoitiin erikseen DD- :: 30 homotsygooteilla miehillä ja muilla miehillä. Miehillä, joilla oli DD-genotyyppi mutta i ‘ * ‘: ei muilla miehillä, cc2-agonistien käyttöön liittyi sekä kohonnut systolinen että diastoli- 10 114483 nen verenpaine, kuten myös itse raportoitujen haitallisten vaikutusten lukumäärän lisääntynyt esiintyminen.
Kun otetaan huomioon oi2B-AR:n tunnetut biologiset ominaisuudet, suomalaisen väestön 5 homogeenisyys, tutkimussuunnittelu, suhteellisen laaja edustava tutkimusväestö ja kohonneen verenpaineen yhteys yhteen ominaisuuteen, nämä yhdessä osoittavat, että D/D-reseptorialleeli on kohonneen verenpaineen kausaalinen geneettinen riskitekijä.
On selvää, että tämän keksinnön menetelmät voidaan yhdistää erilaisiin suoritusmuotoi-10 hin, j öistä vain muutama on tässä esitetty. Alan ammattimiehelle on ilmeistä, että on olemassa muita suoritusmuotoja, jotka eivät eroa keksinnön hengestä. Näin ollen esitetyt suoritusmuodot ovat kuvaavia eikä niitä tule tulkita rajoittaviksi.
• · * a · » » · a a * a 1 * I * 1 1 114483
;2 PhO«-H>OOOCS
•g o' v v v °' °" o °' 13 __________ ε .g w3 g p! O ^ 00 O O ^ $ tn S o (N a\ >n o^ cs _ j3 IS _g a ,> ^ o © rn o' t-Γ
13 J: 5 es on i> ts σΓ r\f _T
S Ö & m ^ <Ί 00 ©„ <n -
Oft ω OiOOOOOOCNi ·— ω δ s ► § Ö3 ^ § 2 .s 0 ."G GiSoC^^^^Of^^avoin
•i o g3Hoooor^mcso°\o^iS
S "? 2 JS .¾ fo o' o" o <n o' 1 0-
,2 2 ’g Ή W
1 3 ___________ i .¾--
S ’S OoS^^'^O'-O
ö ® _σ\§§0Γ^σΐ(Ν0 ;G «J Ρηγ~««Οι—lOmco a 7 ® v v °Λ ° © o -S-2 g « & © <n <N £ 8 .2 ^ g fi „ - ο ο ™ - <n ~ a -g & J; » ί § S π, 8 °. w.
S a S σ\ °? o' o' o" 9 o' ^ T
g G Ö •G <D > •S J S J ä
c& l5'g5gS2sSovoR
S Ö |-gi2C?^000o''o ‘i g ·* -e g g M a __
g S O ^ O
.> a g q <u ^4 *5 3 o w co O £ X > ·’· o “ I "o 2 s .2 θ ^ ξ I έ ' · G3 « Q ‘g ja > SS cd 2.5 :¾ ° 'Sb ä ’Π ..: &% itiini i I? S ϊι s as -: i , SI ? Ϊ '§ S ? * fli Cm ö ^ ^ ζΛ O Λ /1¾ g | rg i §· s « 3 ! ! H -I s '3 3 ^ I δ ^
p4 ä |Ph |q |hj |> \< |pq Ph |S
12 1 1 4483 rt 'Π CS«r>Q(Nr^O·^·^ o cnr-tVfocsmom % P-t oo^-vooooo Ö ’S o' o" & <S ©“ o" o' o' o 13 v S rt £____________ ej § . “ S o P4 2 “ 2* Π m —' o o ' o cn o § Ό g Λ N H o o^ oo u C ro —Γ *-Γ ,-T vo en £ . o .. - „ m ^ ~ „ J-H^O -a o"· OCNOOfnO(NI> y, =3 a S, -n q o ° ° q o 'q ® a .2 1 g Ξ1_____ :o3 <U c3 Sh > λ m q § 3 ö ^ c e *S ® e o
S -2, t3 g .S ^^OrOOogovCN vnS
g «f g e ~ o -1 - o n o © ® § a «N
2=0 O S — — H* n N * o"
*—< '"S ^ S
e .2 h 3 3 3
•<s e . ^ on C
* S .a ------------- :2. O — <Ov -g» .2 m S—1 rf m ro w-> es ö P4 co _ rOoOOOOOOOCN^ ω -2 a ^ m 4 o m q o^ p n “•au o' 'y o" o' o o o" o
.2, “ -S
M 8 ------------ ^te™ - Π r--voo<NO^.vn >* e PP g '«J vocncNOvoorj-d- COCO 2? _H r. «N rv cv " *N OJ r.
*5HW C f—4»-Hr—<1—li-Hi-HlOi—< «eeg g -ö ........
"5 ’> CC eö o'- CNCN-^U^r-OOcn g I 'o & <0 <>i -i ® <* <* °. Oi
gra·^» g ON o^^OO-—> © O
a i2 <3 o g .0 > g S .2 g .§ 0 2 .2, S cog -h m cNoovoogp- t^-g •S 7 * s -s a q oi r- cv n o g ^ : ° o, .S "? o^<—io^r-^0-o ^ o e £, S O 2 «2 _ H S .2 £ a 3 > 2 « O. CO ‘G _________ aa co ------------- CO·" —
o e a o .O
u u u a ca u g öfl a a a a e S 1 t-i C Oi? o pd 2 .2 e e > •§^C= s l?ga iV = I 1 1 e ? s 1 I ! '. : 53 ö .S o Q -g 6 > X ee 3
3 l & 8 -a NS s S $ 1 I ~ :S
•: I .1 g & |s» 1 |SS|!a
> 2 f ^ S ϊ s s t ! M
0 - π ? ΐ ΐ 2 i ^ :h S
1 S’ ώ1ο·3^|#2β«ώ I ^ &!*§·8Ι8·§ I .s s H _|pd I a |ph |a [3 |> |<! PQ Pm \Χ [a |a 13 1 1 4483
Kirjallisuusviitteet
Docherty JR: Subtypes of functional cti- and ot2-receptors. Eur JPharmacol 1998;361:1-15 5 Heinonen P, Koulu M, Pesonen U, Karvonen M, Rissanen A, Laakso M, Valve R, Uusitupa M, Scheinin M: Identification of a three amino acid deletion in the alpha-2B-adrenergic receptor which is associated with reduced basal metabolic rate in obese subjects. J Clin Endocrinol Metab 1999;84:2429-2433 10 Jewell-Motz E, Liggett SB: An acidic motif within the third intracellular loop of the alpha2C2 adrenergic receptor is required for agonist-promoted phosphorylation and desensitization. Biochemistry 1995;34:11946-11953
Keys A: Seven Countries: A Multivariate Analysis of Death and Coronary Heart 15 Disease. Cambridge, Mass, Harvard University Press, 1980.
Link RE, Desai K, Hein L, Stevens ME, Chruscinski A, Bernstein D, Barsh GS,
Kobilka BK: Cardiovascular regulation in mice lacking alpha2-adrenergic receptor . subtypes b and c. Science 1996;273:803-805 20 : Lomasney JW, Lorenz W, Allen LF, King K, Regan JW, Yang-Feng TL, Caron MC, ’; Lefkowitz RJ: Expansion of the alpha-2 adrenergic receptor family; cloning and : charecterization of a human alpha-2 adrenergic receptor subtype, the gene for which is located on chromosome 2. Proc Natl Acad Sci USA. 1990;87:5094-5098 25
MacDonald E, Kobilka BK, Scheinin M: Gene targeting - homing in on a2-.. ‘ adrenoceptor subtype function. Trends Pharmacol Sei 1997;18:211-219
MacMillan LB, Hein L, Smith MS, Piascik MT, Limbird LE: Central hypotensive • ‘ ‘ . 30 effects of the alpha2a-adrenergic receptor subtype. Science 1996;273:801-803 / 114483 14
Sajantila A, Salem AH, Savolainen P, Bauer K, Grieg C, Paabo S: Paternal and maternal DNA lineages reveal a bottleneck in the foundning of the Finnish population. Proc.Natl.Acad.Sci. U.S.A. 1996;93:12035-12039 5 Salonen JT: Is there a continuing need for longitudinal epidemiologic research? The
Kuopio Ischaemic Heart Disease Risk Factor Study. Ann.Clin Res 1988;20:46-50 1 / t »
Claims (6)
15 1 1 4483
1. Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin havaitsemiseksi yksilössä määrittämällä variantti a2B-adrenoseptorin koodaavan alleelin rakenne, ts. määrittele-5 mällä onko ihmisen ct2B-adrenoseptorin genotyyppi sanotussa yksilössä deleetio/deleetio (D/D) tyyppiä, jonka menetelmän mukaan testin avulla määritetään tutkittavan yksilön biologisessa näytteessä ihmisen (X2B-adrenoseptorin insertio/insertio (I/I), deleetio/insertio (D/I), tai D/D genotyypin läsnäolo, mikä D/D genotyypin läsnäolo merkitsee kohonneen verenpaineen kehittymi-10 sen riskiä yksilöllä, jolloin sanottu deleetio (D) viittaa genotyyppiin, jossa alleeli koodaa variantti-(X2B-adrenoseptoriproteiinia, jossa on kolmen glutamaatin, aminohappojen 307-309 deleetio, 12 glutamaattia, aminohapot 298-309, käsittäväs sä glutamiinihappotoistoelementissä, 18 aminohappoa, 294-311, käsittävässä happamessa jaksossa, reseptoripolypeptidin 3. intrasellulaarisessa 15 silmukassa, ja sanottu insertio (I) viittaa genotyyppiin, jossa alleeli koodaa sanottua a2B-adrenoseptoriproteiinia ilman mainittua deleetiota. ,: 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että testi on DNA-testi. 20
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että alleelinen rakenne määritetään käy ttämällä po lymeraasiketjureaktiota.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että genominen : “ ’; 25 DNA eristetään yksilön verinäytteestä. . 1 · ·. 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se perustuu I I , I, pyyntikoettimeen, joka käsittää yksi säikeisen cDNA.n, jolloin sanottu DNA- ;" 1, sekvenssi on cDNA, joka käsittää nuk leotidisekvenssin, joka koodaa variantti 30 a2B-adrenoseptoriproteiinin, jossa on kolmen glutamaatin deleetio, aminohapot 114483 307-309, 12 glutamaattia, aminohapot 298-309, käsittävässä glutaamihapon toistoelementissä, 18 aminohappoa 294-311 käsittävässä happamessa jaksossa reseptoripolypeptidin 3. intrasellulaarisessa silmukassa.
6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se perustuu pyyntökoettimeen, joka käsittää yksi säikeisen cDNA:n, joka vastaa cub-adrenoseptoria ilman patenttivaatimuksessa 5 määriteltyä deleetiota.
10 Patentkrav
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20010323A FI114483B (fi) | 2001-02-20 | 2001-02-20 | Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt |
| EP02711915A EP1368454A1 (en) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | Method for detecting a risk of hypertension and uses thereof |
| DE0001368454T DE02711915T1 (de) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | Verfahren zum nachweis eines bluthochdruckrisikos und verwendungen davon |
| PCT/FI2002/000113 WO2002066617A1 (en) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | Method for detecting a risk of hypertension and uses thereof |
| CNA028086015A CN1522303A (zh) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | 检测高血压危险因素的方法及其应用 |
| AU2002231847A AU2002231847A1 (en) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | Method for detecting a risk of hypertension and uses thereof |
| JP2002566324A JP2004528830A (ja) | 2001-02-20 | 2002-02-13 | 高血圧症発症の危険度の判定方法とその用途 |
| US10/077,870 US7029849B2 (en) | 2001-02-20 | 2002-02-20 | Method for detecting a risk of hypertension and uses thereof |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20010323A FI114483B (fi) | 2001-02-20 | 2001-02-20 | Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt |
| FI20010323 | 2001-02-20 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI20010323A0 FI20010323A0 (fi) | 2001-02-20 |
| FI20010323A FI20010323A (fi) | 2002-08-21 |
| FI114483B true FI114483B (fi) | 2004-10-29 |
Family
ID=8560429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI20010323A FI114483B (fi) | 2001-02-20 | 2001-02-20 | Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7029849B2 (fi) |
| EP (1) | EP1368454A1 (fi) |
| JP (1) | JP2004528830A (fi) |
| CN (1) | CN1522303A (fi) |
| AU (1) | AU2002231847A1 (fi) |
| DE (1) | DE02711915T1 (fi) |
| FI (1) | FI114483B (fi) |
| WO (1) | WO2002066617A1 (fi) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI117516B (fi) * | 2002-12-11 | 2006-11-15 | Jurilab Ltd Oy | Menetelmä ja reagenssipakkaus diabetesriskin havainnoimiseksi |
| WO2005089639A2 (en) * | 2004-03-16 | 2005-09-29 | Talarico M D Matthew T | Method for vascular dysregulation |
| JP4880591B2 (ja) | 2004-06-04 | 2012-02-22 | テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド | イルベサルタンを含む医薬組成物 |
| WO2006076655A2 (en) * | 2005-01-13 | 2006-07-20 | Perlegen Sciences, Inc. | Use of alpha-2 adrenergic receptor agonists |
| US20080269346A1 (en) * | 2005-02-17 | 2008-10-30 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | B-Blocker Pharmacogenetics in Heart Failure |
| WO2007066678A1 (ja) * | 2005-12-06 | 2007-06-14 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | 角結膜障害治療剤 |
| EP3569618A1 (en) | 2018-05-19 | 2019-11-20 | Boehringer Ingelheim International GmbH | Antagonizing cd73 antibody |
| CN108948183B (zh) * | 2018-06-05 | 2022-01-28 | 武汉华纪元生物技术开发有限公司 | α1受体和AT1受体抗原类似物多肽及其抗体检测试剂盒和应用 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5053337A (en) * | 1989-10-30 | 1991-10-01 | Neurogenetic Corporation | DNA encoding an α2B -adrenergic receptor |
| PT1071710E (pt) * | 1998-04-15 | 2007-01-31 | Serono Genetics Inst Sa | Sequência genómica da proteína activadora da 5- lipoxigenase ( flap), seus marcadores polimórficos e métodos para a detecção de asma |
| JP2003512040A (ja) * | 1999-10-22 | 2003-04-02 | オサケユイチア ユバンティア ファーマ リミティド | 変異α２Ｂ−アドレノセプター・タンパク質をコードするＤＮＡ分子及びその使用 |
-
2001
- 2001-02-20 FI FI20010323A patent/FI114483B/fi active IP Right Grant
-
2002
- 2002-02-13 DE DE0001368454T patent/DE02711915T1/de active Pending
- 2002-02-13 AU AU2002231847A patent/AU2002231847A1/en not_active Abandoned
- 2002-02-13 CN CNA028086015A patent/CN1522303A/zh active Pending
- 2002-02-13 JP JP2002566324A patent/JP2004528830A/ja active Pending
- 2002-02-13 WO PCT/FI2002/000113 patent/WO2002066617A1/en not_active Application Discontinuation
- 2002-02-13 EP EP02711915A patent/EP1368454A1/en not_active Withdrawn
- 2002-02-20 US US10/077,870 patent/US7029849B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE02711915T1 (de) | 2004-07-08 |
| WO2002066617A1 (en) | 2002-08-29 |
| EP1368454A1 (en) | 2003-12-10 |
| WO2002066617A8 (en) | 2003-11-27 |
| CN1522303A (zh) | 2004-08-18 |
| US20030003470A1 (en) | 2003-01-02 |
| US7029849B2 (en) | 2006-04-18 |
| JP2004528830A (ja) | 2004-09-24 |
| FI20010323A (fi) | 2002-08-21 |
| AU2002231847A1 (en) | 2002-09-04 |
| FI20010323A0 (fi) | 2001-02-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Saeed et al. | Genetic variants in LEP, LEPR, and MC4R explain 30% of severe obesity in children from a consanguineous population | |
| US20180148786A1 (en) | Genetic alterations associated with autism and the autistic phenotype and methods of use thereof for the diagnosis and treatment of autism | |
| US6521747B2 (en) | Haplotypes of the AGTR1 gene | |
| US20150051114A1 (en) | Genetic variants underlying human cognition and methods of use thereof as diagnostic and therapeutic targets | |
| US20030092013A1 (en) | Diagnosis and treatment of vascular disease | |
| US20230287502A1 (en) | Piezo Type Mechanosensitive Ion Channel Component 1 (PIEZO1) Variants And Uses Thereof | |
| Maekawa et al. | Genetic variation and haplotype structure of the ABC transporter gene ABCG2 in a Japanese population | |
| FI114483B (fi) | Menetelmä kohonneen verenpaineen riskin osoittamiseksi ja sen käytöt | |
| US20040091912A1 (en) | Diagnostic method | |
| JP2001520021A (ja) | βアドレナリン受容体多型 | |
| US7939257B2 (en) | Polymorphic GHSR nucleic acids and uses thereof | |
| US20080020385A1 (en) | Use Of A Genetic Modification In The Human Gnaq Gene For Predicting Risk Of Disease, The Course Of Disease, And Reaction To Treatments | |
| US20040152637A1 (en) | DNA molecule encoding a variant alpha-2B-adrenoaceptor protein and uses thereof | |
| US6861217B1 (en) | Variation in drug response related to polymorphisms in the β2-adrenergic receptor | |
| EP2129801B1 (en) | Tbc1d1 as a diagnostic marker for obesity or diabetes | |
| BRPI0806599A2 (pt) | Marcador e plataforma de diagnóstico para elaboração de fármaco em infarto do miocárdio e falência cardíaca | |
| US20060154249A1 (en) | Method and kit for detecting a risk for diabetes or a metabolic syndrome | |
| US20090228995A1 (en) | Polymorphisms and Haplotypes of the Alpha 2C Adrenergic Receptor Gene | |
| JP4659620B2 (ja) | 糖尿病又は糖尿病性腎症の治療又は予防薬のスクリーニング方法 | |
| WO2000031307A1 (en) | POLYMORPHISMS IN THE 5' LEADER CISTRON OF THE β2-ADRENERGIC RECEPTOR | |
| JP2000316578A (ja) | 糖尿病発症危険因子の検出方法 | |
| US20030165902A1 (en) | Haplotypes of the F2R gene | |
| US20030194728A1 (en) | Haplotypes of the SLC26A2 gene | |
| US20030198969A1 (en) | Haplotypes of the TACR2 gene | |
| US20030165844A1 (en) | Haplotypes of the TNFRSF1A gene |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 114483 Country of ref document: FI |