JP2021505141A - 操作された免疫グロブリンラムダ軽鎖を有する非ヒト動物及びその使用 - Google Patents

操作された免疫グロブリンラムダ軽鎖を有する非ヒト動物及びその使用 Download PDF

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Abstract

ヒト抗体コード配列（すなわち、免疫グロブリン遺伝子）を含むゲノムを有する非ヒト動物（及び／または非ヒト細胞）ならびにその使用方法が提供される。本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒトＶλドメインが存在することによって特徴付けられる免疫グロブリン（Ｉｇ）軽鎖を含む抗体を発現する。本明細書で提供される非ヒト動物は、いくつかの実施形態では、当該非ヒト動物の内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座に挿入されたヒトＩｇλ軽鎖コード配列によってコードされるヒトＶλ軽鎖を含む抗体を発現することによって特徴付けられる。ヒト可変領域及びマウス定常領域を含む抗体を非ヒト動物から産生させるための方法も提供される。【選択図】図１８

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１７年１２月５日出願の米国仮出願第６２／５９４，９４４号、２０１７年１２月５日出願の米国仮出願第６２／５９４，９４６号、２０１７年１２月２１日出願の米国仮出願第６２／６０９，２４１号、及び２０１７年１２月２１日出願の米国仮出願第６２／６０９，２５１号に対する優先権を主張し、これらの文献はそれぞれ、参照によって本明細書に組み込まれる。
配列表
本出願は、配列表を含み、この配列表は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出されており、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。このＡＳＣＩＩコピーは、２０１８年１２月３日に作成されたものであり、２０１０７９４−１４４０＿ＳＬ．ｔｘｔという名称を有し、そのサイズは３０，０５９バイトである。
ヒト抗体は、最も成長が著しいクラスの治療剤である。現在ヒト抗体の生成に使用される技術の中で、ヒト抗体の全部または一部をコードする遺伝物質で操作された遺伝子操作動物（例えば、げっ歯類）を開発することは、さまざまな疾患を治療するためのヒト治療モノクローナル抗体の分野に革命をもたらしてはいるものの、遺伝子操作された宿主動物におけるヒト抗体レパートリーを最大化する改良型のヒトモノクローナル抗体産生インビボ系を開発することが依然として求められている。
いくつかの実施形態では、本開示は、げっ歯類を提供し、このげっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のＣλ遺伝子と、
を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、１つまたは複数のＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、げっ歯類は、操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＣλ遺伝子は、ある１つのＣλ遺伝子である。いくつかの実施形態では、Ｃλ遺伝子は、げっ歯類Ｃλ遺伝子であるか、またはげっ歯類Ｃλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子、マウスＣλ２遺伝子、またはマウスＣλ３遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子であるか、またはマウスＣλ１遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、ラットＣλ遺伝子であるか、またはラットＣλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、またはラットＣλ４遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりに存在する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントによって、すべての機能性のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、及び／またはすべての機能性のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメントが代替される。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、及びＶλ３−１を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる。例えば、図２０を参照すると、第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてＶλ３−１２遺伝子セグメント（の３’側）に隣接して見られる。第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ３−１２遺伝子セグメント（好ましくは、その３’側）に隣接する位置に当該非コード配列を含み得る。第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ２−１１遺伝子セグメント（好ましくは、その５’側）に隣接する位置に当該非コード配列を含むこともあり得る。場合によっては、第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ３−１２遺伝子セグメント（好ましくは、その３’側）及びＶλ２−１１遺伝子セグメント（好ましくは、その５’側）に隣接する位置に当該非コード配列を含むこともあり得る。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ遺伝子セグメントに隣接して見られる。例えば、図２１を参照すると、第１の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に見られる。第１の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ遺伝子セグメント（例えば、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７）に隣接する位置に非コード配列を含み得る。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列を含む。いくつかの実施形態では、κ軽鎖非コード配列は、ヒトκ軽鎖非コード配列である。いくつかの実施形態では、ヒトκ軽鎖非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である。いくつかの実施形態では、げっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントは、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、げっ歯類のゲノムは、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、転写制御要素は、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、外来性ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を自体の生殖細胞ゲノムに含まない同等マウス（例えば、同腹仔）と比較して軽鎖の結合部多様性（ｊｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ）が少なくとも１．２倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．７５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍に増加する（例えば、このように増加した結合部多様性を伴う軽鎖可変ドメインを発現する）。いくつかの実施形態では、結合部多様性は、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、このげっ歯類が産生する軽鎖（例えば、ラムダ軽鎖及び／またはカッパ軽鎖）の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％が、鋳型非依存性のヌクレオチド付加を伴って生じる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する。ある実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、及びＶＨ６−１を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントは、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントは、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、及びＤＨ７−２７を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、及びＪＨ６を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のＶＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のＤＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のＪＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である。
いくつかの実施形態では、げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域は、内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域である。
いくつかの実施形態では、内在性のＶλ遺伝子セグメント、内在性のＪλ遺伝子セグメント、及び内在性のＣλ遺伝子は、その全部または一部が欠失される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない。いくつかの実施形態では、げっ歯類の生殖細胞ゲノムは、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片は、（例えば、雄性生殖器系の細胞（例えば、精巣細胞）において）発現する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する。いくつかの実施形態では、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ１−２であり、第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ６−１である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインは、（ｉ）１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリン重鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む。いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインは、（ｉ）１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリン重鎖可変領域配列によってコードされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、１つまたは複数のエピトープを含む抗原での免疫化に応答してＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、げっ歯類は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する（例えば、特異的に結合する）抗体を発現するＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する抗体を発現するＢ細胞集団を産生し、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列には、体細胞超変異が生じる。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団におけるＢ細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％が、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、マウスまたはラットである。
いくつかの実施形態では、げっ歯類から得られる細胞及び／または組織（例えば、単離された細胞及び／または組織）が本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、提供される細胞及び組織には、例えば、リンパ系組織、脾細胞、Ｂ細胞、幹細胞、及び／または生殖細胞が含まれる。いくつかの実施形態では、提供される細胞は、単離される。いくつかの実施形態では、単離された細胞は、プロＢ細胞、プレＢ細胞、未熟Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、Ｂ細胞系リンパ球、及び／または形質細胞であるか、あるいはそれを含む。いくつかの実施形態では、単離された細胞は、幹細胞（例えば、胚性幹細胞）及び／または生殖細胞（例えば、精子、卵母細胞）を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、単離されたげっ歯類細胞を提供し、この単離されたげっ歯類細胞の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）Ｃλ遺伝子と、
を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離されたげっ歯類細胞は、操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離されたげっ歯類細胞は、げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞である。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生じたげっ歯類胚を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、本明細書に記載の単離されたげっ歯類細胞から生じた不死化細胞を提供する。
いくつかの実施形態では、本開示は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類の作製方法を提供し、この方法は、
（ａ）げっ歯類ＥＳ細胞の生殖細胞ゲノムに１つまたは複数のＤＮＡ断片を導入するステップであって、１つまたは複数のＤＮＡ断片が、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）１つまたは複数のＣλ遺伝子
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のＣλ遺伝子が、げっ歯類ＥＳ細胞の生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入され、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のＣλ遺伝子が、機能可能なように連結される、当該導入するステップと、
（ｂ）（ａ）において生じたげっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生じさせるステップと、
を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類の作製方法は、げっ歯類ＥＳ細胞の生殖細胞ゲノムにおいて１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列が位置するようにげっ歯類ＥＳ細胞の生殖細胞ゲノムにκ軽鎖非コード配列を導入するステップを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類の作製方法を提供し、この方法は、
生殖細胞ゲノムにおいて内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のＣλ遺伝子と、
を含むように操作するステップ、
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、１つまたは複数のＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、
１つまたは複数のＣλ遺伝子は、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座に挿入される。
いくつかの実施形態では、Ｃλ遺伝子によって、内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座におけるげっ歯類Ｃκ遺伝子が代替される。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、及びＶλ３−１を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、及びＶλ３−１を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、Ｃλ遺伝子は、げっ歯類Ｃλ遺伝子であるか、またはげっ歯類Ｃλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子、マウスＣλ２遺伝子、またはマウスＣλ３遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子であるか、またはマウスＣλ１遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、ラットＣλ遺伝子であるか、またはラットＣλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、またはラットＣλ４遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＤＮＡ断片は、少なくとも１つ選択マーカーを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のＤＮＡ断片は、少なくとも１つの部位特異的組換え部位を含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップは、げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類ＥＳ細胞において実施される。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のＤＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のＪＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列はそれぞれ、イントロンであるか、またはイントロンを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、げっ歯類における抗体の産生方法を提供し、この方法は、
（ｉ）げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップであって、
げっ歯類が、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｃ）１つまたは複数のＣλ遺伝子、
を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含む生殖細胞ゲノムを有し、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
１つまたは複数のＣλ遺伝子が、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに、操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座に存在する、当該免疫化するステップと、
目的抗原に対する免疫応答をげっ歯類が生成する上で十分な条件の下でげっ歯類を維持するステップと、
目的抗原に結合する抗体を、げっ歯類、げっ歯類の細胞、またはげっ歯類の細胞に由来する細胞、から回収するステップと、
を含む。
いくつかの実施形態では、免疫化するステップに応答して、げっ歯類は、目的抗原に結合する抗体を発現するＢ細胞を産生する。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、免疫化するステップに応答して、げっ歯類は、目的抗原に結合する抗体を発現するＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、免疫化するステップに応答して、げっ歯類は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する抗体を発現するＢ細胞集団を産生し、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列には、体細胞超変異が生じる。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団におけるＢ細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％が、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、目的抗原に結合する抗体は、げっ歯類のＢ細胞から単離、回収、または同定される。いくつかの実施形態では、目的抗原に結合する抗体は、げっ歯類のＢ細胞を用いて作製されたハイブリドーマから単離、回収、または同定される。
いくつかの実施形態では、抗原は、１つまたは複数のエピトープを含み、目的抗原に結合する抗体は、１つまたは複数のエピトープのうちの１つのエピトープに結合する。
いくつかの実施形態では、Ｃλ遺伝子は、げっ歯類Ｃλ遺伝子であるか、またはげっ歯類Ｃλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子、マウスＣλ２遺伝子、またはマウスＣλ３遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子であるか、またはマウスＣλ１遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、ラットＣλ遺伝子であるか、またはラットＣλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、またはラットＣλ４遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％である配列を有する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、及びＶλ３−１を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、及びＶλ３−１を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる。
いくつかの実施形態では、げっ歯類は、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を含む生殖細胞ゲノム
を有し、
１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、げっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、及びＶＨ６−１を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントは、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントは、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、及びＤＨ７−２７を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントは、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、及びＪＨ６を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、またはＶＨ６−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座のＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、またはＶＨ６−１に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、またはＤＨ７−２７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座のＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、またはＤＨ７−２７に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、またはＪＨ６にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列を含み、１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列はそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座のＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、またはＪＨ６に隣接して見られる。いくつかの実施形態では、回収されるげっ歯類の細胞は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、げっ歯類の細胞に由来する細胞は、ハイブリドーマである。
いくつかの実施形態では、ヒト重鎖可変領域配列、ヒトラムダ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトカッパ軽鎖可変領域配列をコードするヌクレオチド配列は、Ｂ細胞から得られる。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない。いくつかの実施形態では、げっ歯類の生殖細胞ゲノムは、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片は、（例えば、雄性生殖器系の細胞（例えば、精巣細胞）において）発現する。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する。いくつかの実施形態では、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ１−２であり、第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ＶＨ６−１である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する。
いくつかの実施形態では、げっ歯類は、マウスまたはラットである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ホモ接合型の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類を提供し、この操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、
（ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及びげっ歯類Ｃλ遺伝子は、機能可能なように互いに連結され、
げっ歯類Ｃλ遺伝子は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在し、
操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、
（ａ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、当該１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｂ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、当該１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含み、
免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にヒトκ軽鎖非コード配列を含み、このヒトκ軽鎖非コード配列は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する。
いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子である。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーであるＥκｉ及びＥκ３’を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント及び／または１つもしくは複数のＪκ遺伝子セグメントが欠失している。いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、機能性のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント及び／またはげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメントがすべて欠失している。
いくつかの実施形態では、本開示は、げっ歯類を提供し、このげっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）ヒト重鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類重鎖定常ドメイン配列をそれぞれが含む免疫グロブリン重鎖をげっ歯類が発現するように１つまたは複数の内在性の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含むホモ接合型の内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と、
（ｂ）ヒトκ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類κ軽鎖定常ドメイン配列をそれぞれが含む免疫グロブリン軽鎖をげっ歯類が発現するように内在性のげっ歯類Ｃκ領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及び１つまたは複数のＪκ遺伝子セグメントを含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
（ｃ）第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及びげっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
げっ歯類Ｃλ遺伝子が、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在し、
操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ａ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、当該１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列、及び
（ｂ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、当該１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列
を含み、
免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にヒトκ軽鎖非コード配列を含み、このヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有し、
その結果、げっ歯類が、ヒトλ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類λ軽鎖定常ドメイン配列をそれぞれが含む免疫グロブリン軽鎖を発現する、当該第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である。
いくつかの実施形態では、げっ歯類のゲノムは、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、転写制御要素は、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、外来性ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を自体の生殖細胞ゲノムに含まない同等マウス（例えば、同腹仔）と比較して軽鎖の結合部多様性が少なくとも１．２倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．７５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍に増加する（例えば、このように増加した結合部多様性を伴う軽鎖可変ドメインを発現する）。いくつかの実施形態では、結合部多様性は、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定される。いくつかの実施形態では、結合部多様性は、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、このげっ歯類が産生する軽鎖（例えば、ラムダ軽鎖及び／またはカッパ軽鎖）の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％が、鋳型非依存性のヌクレオチド付加を伴って生じる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、ラットまたはマウスである。
いくつかの実施形態では、本開示は、ある方法によって調製される抗体を提供し、この方法は、
（ａ）本明細書に記載のげっ歯類を提供するステップと、
（ｂ）げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップと、
（ｃ）目的抗原に対する免疫応答をげっ歯類が生成する上で十分な条件の下でげっ歯類を維持するステップと、
（ｄ）目的抗原に結合する抗体を、げっ歯類、またはげっ歯類の細胞、またはげっ歯類の細胞に由来する細胞、から回収するステップと、
を含み、
（ｄ）に記載の抗体は、ヒト重鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖可変ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、ある方法によって調製される抗体を提供し、この方法は、
（ａ）本明細書に記載のげっ歯類を目的抗原で免疫化するステップと、
（ｂ）目的抗原に対する免疫応答をげっ歯類が生成する上で十分な条件の下でげっ歯類を維持するステップと、
（ｃ）目的抗原に結合する抗体を、げっ歯類、またはげっ歯類の細胞、またはげっ歯類の細胞に由来する細胞、から回収するステップと、
を含み、
（ｃ）に記載の抗体は、ヒト重鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖可変ドメインを含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない。いくつかの実施形態では、げっ歯類は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、１つまたは複数のエピトープを含む抗原での免疫化に応答してＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、げっ歯類は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する（例えば、特異的に結合する）抗体を発現するＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する抗体を発現するＢ細胞集団を産生し、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、及び／または（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列には、体細胞超変異が生じる。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団におけるＢ細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％が、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、抗体の作製方法を提供し、この方法は、
（ｉ）宿主細胞において免疫グロブリン重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を発現させることであって、第１のヌクレオチド配列がヒト重鎖可変領域配列を含む、当該発現させること、
（ｉｉ）宿主細胞において免疫グロブリンλ軽鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を発現させることであって、第２のヌクレオチド配列が、げっ歯類から同定（例えば、発現及び／または単離）されたヒトλ軽鎖可変領域配列を含み、このげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のＣλ遺伝子と、
を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、１つまたは複数のＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、
げっ歯類が、操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、当該発現させること、
（ｉｉｉ）免疫グロブリン軽鎖及び免疫グロブリン重鎖が発現し、抗体を形成するように宿主細胞を培養すること、ならびに
（ｉｖ）宿主細胞及び／または宿主細胞培養物から抗体を得ること、
を含む。
いくつかの実施形態では、第１のヌクレオチド配列は、ヒト重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。
いくつかの実施形態では、第２のヌクレオチドは、ヒトλ軽鎖定常領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、リバースキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、第１のヌクレオチド配列は、げっ歯類重鎖定常領域を含む。いくつかの実施形態では、第２のヌクレオチド配列は、げっ歯類λ軽鎖定常領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、げっ歯類を提供し、このげっ歯類の生殖細胞ゲノムは、
（ａ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
げっ歯類が、第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、当該第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
（ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメント
をさらに含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、当該第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
を含む。
いくつかの実施形態では、Ｃκ遺伝子は、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である。
いくつかの実施形態では、げっ歯類のゲノムは、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、転写制御要素は、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、外来性ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である。
いくつかの実施形態では、げっ歯類のゲノムは、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、転写制御要素は、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、外来性ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を自体の生殖細胞ゲノムに含まない同等マウス（例えば、同腹仔）と比較して軽鎖の結合部多様性が少なくとも１．２倍、少なくとも１．５倍、少なくとも１．７５倍、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、または少なくとも５倍に増加する（例えば、このように増加した結合部多様性を伴う軽鎖可変ドメインを発現する）。いくつかの実施形態では、結合部多様性は、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定される。いくつかの実施形態では、結合部多様性は、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を自体の生殖細胞ゲノムに含み、このげっ歯類が産生する軽鎖（例えば、ラムダ軽鎖及び／またはカッパ軽鎖）の少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％が、鋳型非依存性のヌクレオチド付加を伴って生じる。
さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、げっ歯類、げっ歯類細胞、またはげっ歯類組織であり、いくつかの実施形態では、マウス、マウス細胞、またはマウス組織であり、いくつかの実施形態では、ラット、ラット細胞、またはラット組織である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のマウス、マウス細胞、またはマウス組織は、１２９系、ＢＡＬＢ／ｃ系、Ｃ５７ＢＬ／６系、１２９ｘＣ５７ＢＬ／６ミックス系、またはそれらの組み合わせを含む遺伝的背景を含む。
本明細書に含まれる図面は、下記の図から構成されており、当該図面は、例示のみを目的とするものであり、限定のためのものではない。
本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用される標的化ベクター（実施例１．１に記載のもの）を構築するための方針の実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用される標的化ベクター（実施例１．１に記載のもの）を構築するための方針の実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞クローン（本開示による実施形態の作製に使用したもの）の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座に標的化ベクター（実施例１．１に記載のもの）を挿入する実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用される標的化ベクター（実施例１．１に記載のもの）を挿入することで得られる操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座における選択カセット（複数可）をリコンビナーゼ介在性に除去する実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用される標的化ベクター（実施例１．２に記載のもの）を構築するための方針の実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞クローン（本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用したもの）の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座への標的化ベクター（実施例１．２に記載のもの）の挿入を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 本開示によるげっ歯類の実施形態の作製に使用される標的化ベクター（実施例１．２に記載のもの）を挿入することで得られる操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座における選択カセット（複数可）をリコンビナーゼ介在性に除去する実施形態例を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、野生型（ＷＴ）マウス及び６５５８ＨＯ（ＬｉＫ、ホモ接合型）マウスから収集した脾細胞のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものが示され、上の横列は、ＣＤ１９（ｙ軸）及びＣＤ３（ｘ軸）の発現を示し、下の横列は、ＣＤ１９＋ゲート処理した脾細胞による免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ、ｙ軸）及び免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ、ｘ軸）の発現を示す。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、野生型（ＷＴ）マウス及び６５５８ＨＯ（ＬｉＫ、ホモ接合型）マウスから収集した骨髄のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものが示され、上の横列は、ＣＤ１９（ｙ軸）及びＣＤ３（ｘ軸）の発現を示し、下の横列は、免疫グロブリンＭ（ＩｇＤ、ｙ軸）及びＢ２２０（ｘ軸）の発現を示す。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、野生型（ＷＴ）マウス及び６５５８ＨＯ（ＬｉＫ、ホモ接合型）マウスから得られた脾細胞のＣＤ１９＋ゲート処理したものを代表するものによって、マウスＩｇλ（ｙ軸）定常領域またはマウスＩｇκ（ｘ軸）定常領域を含む免疫グロブリン軽鎖の発現が示される。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した脾細胞のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによってＣＤ１９（ｙ軸）及びＣＤ３（ｘ軸）の発現が示される。ＨＯＨ／ＬｉＫ／λ−／−マウスは、ヒト化免疫グロブリン重鎖（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号を参照のこと）についてホモ接合型であり、ＬｉＫ遺伝子座についてホモ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であるマウスを表す。ＨＯＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−マウスは、ヒト化免疫グロブリン重鎖（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号を参照のこと）についてホモ接合型であり、ＬｉＫ遺伝子座と、ヒト化免疫グロブリンカッパ軽鎖遺伝子座を含む第２のカッパ遺伝子座と、を含む一方のカッパ遺伝子座についてヘミ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であるマウスを表す。ＨＯＨ／ＫｏＫマウスは、ヒト化免疫グロブリン重鎖についてホモ接合型であり、ヒト化免疫グロブリンカッパ軽鎖についてホモ接合型である対照マウスを表す。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した脾細胞のＣＤ１９＋ゲート処理したものを代表するものによって、マウスＩｇλ（ｙ軸）定常領域またはマウスＩｇκ（ｘ軸）定常領域を含む免疫グロブリン軽鎖の発現が示される。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した骨髄のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによって免疫グロブリンＭ（ＩｇＤ、ｙ軸）及びＢ２２０（ｘ軸）の発現が示される。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した骨髄のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによって、マウスＩｇλ（ｙ軸）定常領域またはマウスＩｇκ（ｘ軸）定常領域を含む免疫グロブリン軽鎖の、未熟（上の横列）Ｂ細胞及び成熟（下の横列）Ｂ細胞における発現が示される。 本開示による実施形態例を模式図で示し（図の縮尺は実際のものとは異なる）、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、及び当該遺伝子座の再構成によるｍＲＮＡ分子の形成が示される。 本開示による代表的な実施形態から得られた結果を示し、実施例３．３に記載の野生型（ＷＴ）マウス及び６５５８ホモ接合型（ＬｉＫ ＨＯ）マウスから単離された血清を使用したＳＤＳ−ＰＡＧＥの代表的なタンパク質免疫ブロット（ウエスタンブロット）が示される。 本開示による実施形態の試験結果を示し、ヒト化マウスから収集した脾細胞のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによってＣＤ１９（ｙ軸）及びＣＤ３（ｘ軸）の発現が示される。ＨＯＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスは、ヒト化免疫グロブリン重鎖（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号を参照のこと）についてホモ接合型であり、ＬｉＫ遺伝子座についてホモ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であるマウスであって、外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を含むマウスを表す。ＨＯＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスは、ヒト化免疫グロブリン重鎖（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号を参照のこと）についてホモ接合型であり、ＬｉＫ遺伝子座と、ヒト化免疫グロブリンカッパ軽鎖遺伝子座を含む第２のカッパ遺伝子座と、を含む一方のカッパ遺伝子座についてヘミ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であるマウスであって、外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列を含むマウスを表す。 本開示による実施形態の試験結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した脾細胞のＣＤ１９＋ゲート処理したものを代表するものによって、マウスＩｇλ（ｙ軸）定常領域またはマウスＩｇκ（ｘ軸）定常領域を含む免疫グロブリン軽鎖の発現が示される。 本開示による実施形態の試験結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した骨髄の単一細胞のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによって免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ、ｙ軸）及びＢ２２０（ｘ軸）の発現が示される。 本開示による実施形態の試験結果を示し、示されるさまざまなヒト化マウスから収集した骨髄のｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌゲート処理したものを代表するものによって、マウスＩｇλ（ｙ軸）定常領域またはマウスＩｇκ（ｘ軸）定常領域を含む免疫グロブリン軽鎖の、未熟（上の横列）Ｂ細胞及び成熟（下の横列）Ｂ細胞における発現が示される。 本開示による実施形態の試験結果を示し、タンパク質免疫原で免疫化した後にＬｉＫ／ＶＩ−３マウス系統、ＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウス系統、及びＶＩ−３／ＴｄＴマウス系統における免疫応答を比較したグラフが示される。 本開示による実施形態の試験結果を示し、ＨＩＳタグに融合した無関係のタンパク質抗原で免疫化した後にＬｉＫ／ＶＩ−３マウス系統、ＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウス系統、及びＶＩ−３／ＴｄＴマウス系統におけるＨｉｓタグに対する免疫応答を比較したグラフが示される。 内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座の一部を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。図２０では、内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座における第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列を表すものが第１の矢印によって指し示される。示されるように、内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座における第１の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列（線によって表される）は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンＩｇλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ３−１２遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）及びヒトＶλ２−１１遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）に隣接して見られる。同様に、図２０では、内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座における第２の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列を表すものが第２の矢印によって指し示される。示されるように、内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座における第２の例示の内在性のヒトＶλ非コード配列（線によって示される）は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ２−１１遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）及びヒトＶλ３−１０遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）に隣接して見られる。 内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座の一部を図示する（図の縮尺は実際のものとは異なる）。図２１では、内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における第１の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列を表すものが第１の矢印によって指し示される。示されるように、内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における第１の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列（線によって示される）は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）及びヒトＪκ２遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）に隣接して見られる。同様に、図２１では、内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における第２の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列を表すものが第２の矢印によって指し示される。示されるように、内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における第２の例示の内在性のヒトＪκ非コード配列（線によって示される）は、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ２遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）及びヒトＪκ３遺伝子セグメント（濃い灰色四角によって表される）に隣接して見られる。
配列表から選択した配列に関する簡単な説明
下記のものは、マウス、ラット、またはヒトのラムダ遺伝子のさまざまな免疫グロブリン定常領域の代表的な核酸配列及びアミノ酸配列である。免疫グロブリン遺伝子及びポリペプチドの核酸配列及びアミノ酸配列は、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍのウェブサイト（ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ．）から入手可能である。
マウスＣλ１ ＤＮＡ（配列番号１）：
マウスＣλ１ アミノ酸（配列番号２）：
マウスＣλ２ ＤＮＡ（配列番号３）：
ＧＴＣＡＧＣＣＣＡＡＧＴＣＣＡＣＴＣＣＣＡＣＴＣＴＣＡＣＣＧＴＧＴＴＴＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＴＧＡＧＧＡＧＣＴＣＡＡＧＧＡＡＡＡＣＡＡＡＧＣＣＡＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＴＣＴＧＡＴＴＴＣＣＡＡＣＴＴＴＴＣＣＣＣＧＡＧＴＧＧＴＧＴＧＡＣＡＧＴＧＧＣＣＴＧＧＡＡＧＧＣＡＡＡＴＧＧＴＡＣＡＣＣＴＡＴＣＡＣＣＣＡＧＧＧＴＧＴＧＧＡＣＡＣＴＴＣＡＡＡＴＣＣＣＡＣＣＡＡＡＧＡＧＧＧＣＡＡＣＡＡＧＴＴＣＡＴＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣＣＴＡＣＡＴＴＴＧＡＣＡＴＣＧＧＡＣＣＡＧＴＧＧＡＧＡＴＣＴＣＡＣＡＡＣＡＧＴＴＴＴＡＣＣＴＧＴＣＡＡＧＴＴＡＣＡＣＡＴＧＡＡＧＧＧＧＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＴＣＴＧＴＣＴＣＣＴＧＣＡＧＡＡＴＧＴＣＴＣ
マウスＣλ２ アミノ酸（配列番号４）：
マウスＣλ３ ＤＮＡ（配列番号５）：
マウスＣλ３ アミノ酸（配列番号６）：
ラットＣλ１ ＤＮＡ（配列番号７）：
ラットＣλ１ アミノ酸（配列番号８）：
ラットＣλ２ ＤＮＡ（配列番号９）：
ＡＣＣＡＡＣＣＣＡＡＧＧＣＴＡＣＧＣＣＣＴＣＡＧＴＣＡＣＣＣＴＧＴＴＣＣＣＡＣＣＴＴＣＣＴＣＴＧＡＡＧＡＧＣＴＣＡＡＧＡＣＴＧＡＣＡＡＧＧＣＴＡＣＡＣＴＧＧＴＧＴＧＴＡＴＧＧＴＧＡＣＡＧＡＴＴＴＣＴＡＣＣＣＴＧＧＴＧＴＴＡＴＧＡＣＡＧＴＧＧＴＣＴＧＧＡＡＧＧＣＡＧＡＴＧＧＴＡＣＣＣＣＴＡＴＣＡＣＴＣＡＧＧＧＴＧＴＧＧＡＧＡＣＴＡＣＣＣＡＧＣＣＴＴＴＣＡＡＡＣＡＧＡＡＣＡＡＣＡＡＧＴＡＣＡＴＧＧＣＴＡＣＣＡＧＣＴＡＣＣＴＧＣＴＴＴＴＧＡＣＡＧＣＡＡＡＡＧＣＡＴＧＧＧＡＧＡＣＴＣＡＴＡＧＣＡＡＴＴＡＣＡＧＣＴＧＣＣＡＧＧＴＣＡＣＴＣＡＣＧＡＡＧＡＧＡＡＣＡＣＴＧＴＧＧＡＧＡＡＧＡＧＴＴＴＧＴＣＣＣＧＴＧＣＴＧＡＧＴＧＴＴＣＣ
ラットＣλ２ アミノ酸（配列番号１０）：
ラットＣλ３ ＤＮＡ（配列番号１１）：
ラットＣλ３ アミノ酸（配列番号１２）：
ラットＣλ４ ＤＮＡ（配列番号１３）：
ラットＣλ４ アミノ酸（配列番号１４）：
ヒトＣλ１ ＤＮＡ（配列番号１５）：
ヒトＣλ１ アミノ酸（配列番号１６）：
ヒトＣλ２ ＤＮＡ（配列番号１７）：
ヒトＣλ２ アミノ酸（配列番号１８）：
ヒトＣλ３ ＤＮＡ（配列番号１９）：
ヒトＣλ３ アミノ酸（配列番号２０）：
ヒトＣλ６ ＤＮＡ（配列番号２１）：
ヒトＣλ６ アミノ酸（配列番号２２）：
ヒトＣλ７ ＤＮＡ（配列番号２３）：
ヒトＣλ７ アミノ酸（配列番号２４）：
定義
本発明の範囲は、本明細書に添付される特許請求の範囲によって定義され、本明細書に記載のある特定の実施形態によって限定されない。当業者なら、本明細書を読めば、そのような記載の実施形態と均等となるか、またはその他の形態で特許請求の範囲に入り得るさまざまな改変を認識するであろう。一般に、本明細書に記載の用語は、別に明確に示されない限り、それが当該技術分野で理解される意味に従って使用される。以下には、ある特定の用語の定義が明示的に示され、本明細書を通じて具体的な実例において使用されるこうした用語及び他の用語の意味は、当業者には文脈から明らかであろう。下記の用語及び他の用語についての追加の定義は、本明細書を通じて示される。本明細書内で引用される参考特許文献及び参考非特許文献、またはその関連部分は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
請求要素を改変するために特許請求の範囲において順序を示す用語（「第１の」、「第２の」、「第３の」など）が使用されることは、その用語自体によって、ある請求要素が別の請求要素を上回る何らかの優先性、優位性、または順序を有していることを暗示するものでもなければ、方法の行為が実施される時間的な順序を暗示するものでもなく、ある特定の名称を有するある請求要素を、同じ名称（順序を示す用語が使用されていること以外は同じ名称）を有する別の要素と区別するための単なる標識として使用され、これによって、こうした請求要素が区別される。
本出願において使用される「約」及び「およそ」という用語は、均等物として使用される。本出願において使用される数字はいずれも、約またはおよそによって修飾されていようがいまいが、当業者が理解する任意の通常の増減を網羅することが意図される。
本明細書及び特許請求の範囲において使用される「ａ」及び「ａｎ」という冠詞は、異なる定義が明確に示されない限り、複数の指示対象を含むと理解されたい。一群に属する１つまたは複数のメンバーの間に「または」を含む請求項または説明は、異なる定義が示されない限り、またはその他の状況の下で文脈から明らかでない限り、そうした群メンバーのうちの１つ、複数、またはすべてが、所与の生成物もしくはプロセスに存在するか、そこで用いられるか、またはその他の様式でそれと関連する場合を満たすものと見なされる。本発明は、当該群に属する正確に１つのメンバーが、所与の生成物もしくはプロセスに存在するか、そこで用いられるか、またはその他の様式でそれと関連する実施形態を含む。本発明は、当該群に属する複数またはすべてのメンバーが、所与の生成物もしくはプロセスに存在するか、そこで用いられるか、またはその他の様式でそれと関連する実施形態も含む。さらに、別段の指定がない限り、または矛盾もしくは不一致が生じ得ることが当業者に明らかとなることが想定されない限り、１つまたは複数の限定、要素、項、説明用語などが、列挙される請求項の１つまたは複数から、同じ基礎請求項に依存する別の請求項（または関連する任意の他の請求項）へと導入される変形、組み合わせ、及び順列はすべて、本発明によって包含されることが理解されよう。要素がリスト（例えば、マーカッシュ群または類似形式のもの）として提示される場合、こうした要素の各部分群も開示されると共に、当該群から任意の要素（複数可）を除外可能であることが理解されよう。一般に、本発明または本発明の態様が特定の要素、特徴などを含むと称される場合、本発明のある特定の実施形態、または本発明のある特定の態様は、そのような要素、特徴などからなるか、またはそれから本質的になると理解されたい。単純化の目的で、そうした実施形態は、そのような多くの言葉を用いて本明細書で場合ごとに具体的には示されていない。本発明の実施形態または態様はいずれも、具体的に除外されることが本明細書に記載されているか否かとは無関係に、特許請求の範囲から明確に除外可能であることも理解されたい。
投与：本明細書で使用されるこの用語は、組成物を対象または系（例えば、細胞、臓器、組織、生物、またはその関連する構成要素もしくは構成要素のセット）に投与することを含む。投与経路は、例えば組成物が投与される対象または系、組成物の性質、投与の目的などに応じて異なり得ることを当業者なら理解するであろう。例えば、ある特定の実施形態では、動物対象（例えば、ヒトまたはげっ歯類）への投与は、気管支（気管支点滴によるものを含む）、頬側、腸内、皮下（ｉｎｔｅｒｄｅｒｍａｌ）、動脈内、皮内、胃内、髄内、筋肉内、鼻腔内、腹腔内、くも膜下腔内、静脈内、脳室内、粘膜、鼻腔、口腔、直腸、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、舌下、局所、気管（気管内点滴によるものを含む）、経皮、膣、及び／または硝子体へのものであり得る。いくつかの実施形態では、投与は、間欠投与を行うものであり得る。いくつかの実施形態では、投与は、少なくとも選択期間、連続投与（例えば、灌流）を行うものであり得る。
軽快：本明細書で使用されるこの用語は、状態の阻止、低減、もしくは緩和、または対象の状態の改善を含む。軽快は、疾患、障害、または病状の完全回復または完全阻止を含むが、それが要件というわけではない。
およそ：１つまたは複数の目的値に適用されるこの用語は、記載の参照値と同様の値を含む。ある特定の実施形態では、「およそ」または「約」という用語は、別段の記載がない限り、またはその他の状況の下で文脈から明らかでない限り、記載の参照値の±１０％以内（記載の参照値を超えるか、または下回る）となる値の範囲を指す（但し、そのような数が、とり得る値の１００％を超えることになる場合は除かれる）。
生物学的に活性：本明細書で使用されるこの用語は、インビトロまたはインビボ（例えば、生物内）の生物学的系において活性を有する任意の物質の特徴を指す。例えば、生物に存在するときにその生物内で生物学的な作用を有する物質は、生物学的に活性であると考えられる。特定の実施形態では、タンパク質またはポリペプチドが生物学的に活性である場合、そのタンパク質またはポリペプチドにおいてそのタンパク質またはポリペプチドの生物学的な活性の少なくとも１つを共有する部分は、典型的には、「生物学的に活性」な部分と称される。
同等：本明細書で使用されるこの用語は、２つ以上の物質、実体、状況、状態セットなどが、互いに同一ではあり得ないが、観測される差異または類似性に基づいて結論が合理的に導かれ得るほどに十分に類似していることで、それらの間での比較が可能であることを指す。２つ以上のそのような物質、実体、状況、状態セットなどが同等と見なされるには任意の所与の状況においてどの程度の同一性が必要とされるかを、当業者なら文脈を加味して理解するであろう。
保存的：本明細書で使用されるこの用語は、保存的アミノ酸置換を説明する場合を指し、こうした保存的アミノ酸置換には、アミノ酸残基が、化学特性（例えば、電荷または疎水性）が類似する側鎖Ｒ基を有する別のアミノ酸残基によって置換されることが含まれる。一般に、保存的アミノ酸置換がなされても、タンパク質の目的機能特性（例えば、受容体がリガンドに結合する能力）が実質的に変化することはない。化学特性が類似する側鎖を有するアミノ酸群の例としては、以下のものが挙げられる：脂肪族側鎖（グリシン（Ｇｌｙ，Ｇ）、アラニン（Ａｌａ，Ａ）、バリン（Ｖａｌ，Ｖ）、ロイシン（Ｌｅｕ，Ｌ）、及びイソロイシン（Ｉｌｅ，Ｉ）など）、脂肪族−ヒドロキシル側鎖（セリン（Ｓｅｒ，Ｓ）及びスレオニン（Ｔｈｒ，Ｔ）など）、アミド含有側鎖（アスパラギン（Ａｓｎ，Ｎ）及びグルタミン（Ｇｌｎ，Ｑ）など）、芳香族側鎖（フェニルアラニン（Ｐｈｅ，Ｆ）、チロシン（Ｔｙｒ，Ｙ）、及びトリプトファン（Ｔｒｐ，Ｗ）など）、塩基性側鎖（リジン（Ｌｙｓ，Ｋ）、アルギニン（Ａｒｇ，Ｒ）、及びヒスチジン（Ｈｉｓ，Ｈ）など）、酸性側鎖（アスパラギン酸（Ａｓｐ，Ｄ）及びグルタミン酸（Ｇｌｕ，Ｅ）など）、ならびに含硫側鎖（システイン（Ｃｙｓ，Ｃ）及びメチオニン（Ｍｅｔ，Ｍ）など）。保存的アミノ酸置換群には、例えば、バリン／ロイシン／イソロイシン（Ｖａｌ／Ｌｅｕ／Ｉｌｅ，Ｖ／Ｌ／Ｉ）、フェニルアラニン／チロシン（Ｐｈｅ／Ｔｙｒ，Ｆ／Ｙ）、リジン／アルギニン（Ｌｙｓ／Ａｒｇ，Ｋ／Ｒ）、アラニン／バリン（Ａｌａ／Ｖａｌ，Ａ／Ｖ）、グルタミン酸／アスパラギン酸（Ｇｌｕ／Ａｓｐ，Ｅ／Ｄ）、及びアスパラギン／グルタミン（Ａｓｎ／Ｇｌｎ，Ｎ／Ｑ）が含まれる。いくつかの実施形態では、保存的アミノ酸置換は、タンパク質における任意の天然残基をアラニンで置換するものであり得、こうした置換は、例えば、アラニンスキャニング変異導入法において使用されるものである。いくつかの実施形態では、Ｇｏｎｎｅｔ，Ｇ．Ｈ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６：１４４３−１４４５（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に開示されるＰＡＭ２５０対数尤度行列において正の値を有する保存的置換が行われる。いくつかの実施形態では、置換は、中程度に保存的な置換であり、この場合の置換は、ＰＡＭ２５０対数尤度行列において負ではない値を有する。
対照：本明細書で使用されるこの用語は、結果の比較対象となる標準であるという、当該技術分野で理解される意味の「対照」を指す。典型的には、変数を抽出してそのような変数に関する結論が出るようにすることによって実験における公正性を向上させるために対照が使用される。いくつかの実施形態では、対照は、試験反応または試験アッセイと同時に実施されることで比較物を与える反応またはアッセイである。「対照」は、「対照動物」も含む。「対照動物」は、本明細書に記載の改変を有するか、本明細書に記載のものとは異なる改変を有するか、または改変を有し得ない（すなわち、野生型動物）。ある実験では、「試験」（すなわち、試験対象の変数）が適用され、第２の実験では、試験対象の当該変数が適用されず、これが「対照」となる。いくつかの実施形態では、対照は、歴史的対照（すなわち、以前に実施された試験もしくはアッセイのもの、または既に知られている量もしくは結果）である。いくつかの実施形態では、対照は、出版もしくはその他の様式で保存された記録であるか、またはそれらを含む。対照は、正の対照または負の対照であり得る。
破壊：本明細書で使用されるこの用語は、ＤＮＡ分子（例えば、内在性の相同配列（遺伝子または遺伝子座など）を有するもの）による相同組換え事象の結果を指す。いくつかの実施形態では、ＤＮＡ配列（複数可）の挿入、欠失、置換、代替、ミスセンス変異、もしくはフレームシフト、またはそれらの任意の組み合わせが、破壊によって達成されるか、またはもたらされ得る。挿入には、遺伝子全体または遺伝子断片（例えば、エクソン）の挿入が含まれ得、挿入され得るこうした遺伝子全体または遺伝子断片は、内在性配列以外を起源とするもの（例えば、異種配列）であり得る。いくつかの実施形態では、破壊によって、遺伝子または遺伝子産物（例えば、遺伝子によってコードされるポリペプチド）の発現及び／または活性が増加し得る。いくつかの実施形態では、破壊によって、遺伝子または遺伝子産物の発現及び／または活性が減少し得る。いくつかの実施形態では、破壊によって、遺伝子またはコードされる遺伝子産物（例えば、コードされるポリペプチド）の配列が変化し得る。いくつかの実施形態では、破壊によって、遺伝子またはコードされる遺伝子産物（例えば、コードされるポリペプチド）が短縮化または断片化し得る。いくつかの実施形態では、破壊によって、遺伝子またはコードされる遺伝子産物が伸長し得る。いくつかのそのような実施形態では、破壊によって、融合ポリペプチドのアセンブリが達成され得る。いくつかの実施形態では、破壊は、遺伝子または遺伝子産物のレベルに影響を及ぼし得るが、遺伝子または遺伝子産物の活性には影響を及ぼし得ない。いくつかの実施形態では、破壊は、遺伝子または遺伝子産物の活性に影響を及ぼし得るが、遺伝子または遺伝子産物のレベルには影響を及ぼし得ない。いくつかの実施形態では、破壊は、遺伝子または遺伝子産物のレベルに顕著な影響を及ぼし得ない。いくつかの実施形態では、破壊は、遺伝子または遺伝子産物の活性に顕著な影響を及ぼし得ない。いくつかの実施形態では、破壊は、遺伝子または遺伝子産物のレベルまたは活性のいずれにも顕著な影響を及ぼし得ない。
決定、測定、判断、評価、アッセイ、及び分析：これらの用語は、任意の形態の測定を指すために本明細書で互換的に使用され、要素の存在有無を決定することを含む。これらの用語は、定量的決定及び／または定性的決定の両方を含む。アッセイは、相対的または絶対的なものであり得る。「の存在のアッセイ」は、存在する何かの量を決定すること、及び／またはその存在有無を決定すること、であり得る。
内在性プロモーター：本明細書で使用されるこの用語は、天然では内在性遺伝子に（例えば、野生型生物では）付随するプロモーターを指す。
操作された：本明細書で使用されるこの用語は、一般に、人工的に処理されているという側面を指す。例えば、いくつかの実施形態では、２つ以上の配列が、天然ではその順序で一緒に連結されないものであり、人工的に処理されることで、操作されるポリヌクレオチドにおいて互いに直接的に連結されるとき、そのポリヌクレオチドは、「操作された」と考えられ得る。いくつかの実施形態では、第１のコード配列とは機能可能なように結び付いているが、第２のコード配列とは機能可能なように結び付いていない状態で天然では見られる調節配列であって、第２のコード配列と機能可能なように結び付くように人工的に連結された調節配列を、操作されたポリヌクレオチドは含み得る。代替または追加として、いくつかの実施形態では、ポリペプチド要素またはポリペプチドドメインをそれぞれがコードし、天然では互いに連結されない第１の核酸配列と第２の核酸配列とが、単一の操作されたポリヌクレオチドにおいて互いに連結され得る。同様に、いくつかの実施形態では、細胞または生物は、その遺伝情報が改変されるように処理されている（例えば、それまでは存在しなかった新たな遺伝物質が導入されているか、または既に存在した遺伝物質が、改変もしくは除去されている）のであれば、「操作された」と考えられ得る。慣行であり、当業者なら理解していることであるが、操作されたポリヌクレオチドまたは細胞の子孫は、実際の処理が前の実体に対して実施されたものであったとしても、典型的には、依然として「操作された」と称される。さらに、当業者なら理解するであろうが、本明細書に記載の「操作」が達成され得る方法論は、さまざまなものが利用可能である。例えば、いくつかの実施形態では、「操作」は、分析または比較を実施するか、あるいはその他の方法で配列、改変などを分析、推奨、及び／または選択するようにプログラムされたコンピューターシステムを使用することによって選択または設計（例えば、核酸配列、ポリペプチド配列、細胞、組織、及び／または生物の選択または設計）を行うものであり得る。代替または追加として、いくつかの実施形態では、「操作」は、インビトロの化学合成方法論及び／または組換え核酸技術（例えば、核酸の増幅（例えば、ポリメラーゼ連鎖反応を介すもの）、ハイブリダイゼーション、変異導入、形質転換、トランスフェクトなど）、及び／またはさまざまな制御された接合方法論のいずれか、を使用するものであり得る。当業者なら理解するであろうが、確立されたそのような技術（例えば、組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成、ならびに組織培養及び形質転換のためのもの）（例えば、電気穿孔、リポフェクションなど）は、当該技術分野でさまざまなものが知られており、本明細書を通じて引用及び／または論じられるさまざまな一般参考文献及びより具体的な参考文献に記載されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ２ｎｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９、及びＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ，５ｔｈ Ｅｄ．，ｅｄ．Ｂｙ Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，１９９４（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
機能性：本明細書で使用されるこの用語は、実体（例えば、遺伝子または遺伝子セグメント）の形態または断片が、特定の特性（例えば、コード配列の一部を形成する）及び／または活性を示すことを指す。例えば、免疫グロブリンの文脈では、アセンブリ（または組換え）が生じることで機能性のコード配列を形成する特有の遺伝子セグメント（すなわち、Ｖ、Ｄ、及び／またはＪ）によって可変領域がコードされる。遺伝子セグメントは、ゲノムに存在するときは、多様性は生じるものの、クラスター中にまとまっている。「機能性」遺伝子セグメントは、発現する配列（すなわち、可変領域）に出現する遺伝子セグメントであって、それに対応するゲノムＤＮＡが単離（すなわち、クローニング）され、シークエンスによって同定されている遺伝子セグメントである。免疫グロブリン遺伝子セグメント配列が、発現するレパートリーには出現しないものの、オープンリーディングフレームを含み、機能性であると考えられる場合もある一方で、免疫グロブリン遺伝子セグメント配列が、変異（例えば、点変異、挿入、欠失など）を含むことで終止コドン及び／または短縮型配列が生じ、それに伴って、そのような遺伝子セグメント配列が、非変異配列（複数可）には伴う特性（複数可）及び／または活性（複数可）を発揮することが不可能となる場合もある。そのような配列は、発現する配列には出現せず、それ故に、偽遺伝子として分類される。
遺伝子：本明細書で使用されるこの用語は、染色体において産物（例えば、ＲＮＡ産物及び／またはポリペプチド産物）をコードするＤＮＡ配列を指す。いくつかの実施形態では、遺伝子は、コード配列（すなわち、特定の産物をコードする配列）を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子は、非コード配列を含む。いくつかの特定の実施形態では、遺伝子は、コード（例えば、エクソン）配列も非コード配列（例えば、イントロン）配列も含み得る。いくつかの実施形態では、遺伝子は、１つまたは複数の調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサーなど）及び／またはイントロン配列を含み得、こうした配列は、例えば、遺伝子発現（例えば、細胞型特異的発現、誘導性発現など）の側面の１つまたは複数を制御するか、またはそれに影響を与え得る配列である。明確化の目的で記載すると、本開示において使用される「遺伝子」という用語は、一般に、ポリペプチドまたはその断片をコードする核酸の一部分を指すことに留意されたい。当業者には文脈から明らかであろうが、この用語は、任意選択で調節配列を包含し得る。この定義は、「遺伝子」という用語が非タンパク質コード発現単位に適用されることの除外を意図するものではなく、むしろ、本文書で使用されるこの用語がポリペプチドコード核酸を指すことが多いことの明確化を意図するものである。
異種：本明細書で使用されるこの用語は、物質または実体が、異なる供給源に由来することを指す。例えば、この用語は、特定の細胞または生物に存在するポリペプチド、遺伝子、または遺伝子産物に関して使用されるとき、言及されるポリペプチド、遺伝子、または遺伝子産物が、１）人工的に操作されたものであり、２）（例えば、遺伝子操作を介して）人工的に細胞もしくは生物（またはその前駆体）に導入されたものであり、及び／または３）言及される細胞もしくは生物（例えば、言及される細胞型もしくは生物型）によって天然では産生されないか、またはそこに天然では存在しないものであることを明確化するものである。「異種」は、ポリペプチド、遺伝子、または遺伝子産物が特定の天然の細胞または生物には通常存在するが、変更または改変されていることも含み、こうした変更または改変は、例えば、変異導入によって行われるか、または天然では付随しない調節要素であって、いくつかの実施形態では非内在性である調節要素（例えば、プロモーター）の制御下に配置することによって行われる。
宿主細胞：本明細書で使用されるこの用語は、核酸またはタンパク質が導入されている細胞を指す。そのような用語は、特定の対象細胞を指すだけでなく、そのような細胞の子孫を指すためにも使用されることを、当業者なら本開示を読めば理解するであろう。そのような子孫は、変異または環境の影響に起因して世代を経るにつれてある特定の改変が生じ得るため、実際は親細胞と同一ではあり得ないが、「宿主細胞」という語句の範囲内に依然として含まれる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、原核細胞もしくは真核細胞であるか、または原核細胞もしくは真核細胞を含む。一般に、宿主細胞は、細胞が分類される生命界とは無関係に、異種核酸または異種タンパク質の受容及び／または産生に適した任意の細胞である。細胞の例としては、原核生物及び真核生物の細胞（単一細胞または複数細胞）、細菌細胞（例えば、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属の種、Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属の種などの株）、マイコバクテリア細胞、真菌細胞、酵母細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、Ｐｉｃｈｉａ ｍｅｔｈａｎｏｌｉｃａなど）、植物細胞、昆虫細胞（例えば、ＳＦ−９、ＳＦ−２１、バキュロウイルスに感染した昆虫細胞、Ｔｒｉｃｈｏｐｌｕｓｉａ ｎｉなど）、非ヒト動物細胞、ヒト細胞、または細胞融合体（例えば、ハイブリドーマもしくはクアドローマなど）が挙げられる。いくつかの実施形態では、細胞は、ヒト細胞、サル細胞、類人猿細胞、ハムスター細胞、ラット細胞、またはマウス細胞である。いくつかの実施形態では、細胞は、真核細胞であり、下記の細胞から選択される：ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ Ｋ１、ＤＸＢ−１１ ＣＨＯ、Ｖｅｇｇｉｅ−ＣＨＯ）、ＣＯＳ（例えば、ＣＯＳ−７）、網膜細胞、Ｖｅｒｏ、ＣＶ１、腎細胞（例えば、ＨＥＫ２９３、２９３ＥＢＮＡ、ＭＳＲ２９３、ＭＤＣＫ、ＨａＫ、ＢＨＫ）、ＨｅＬａ、ＨｅｐＧ２、ＷＩ３８、ＭＲＣ５、Ｃｏｌｏ２０５、ＨＢ８０６５、ＨＬ−６０、（例えば、ＢＨＫ２１）、Ｊｕｒｋａｔ、Ｄａｕｄｉ、Ａ４３１（上皮）、ＣＶ−１、Ｕ９３７、３Ｔ３、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、ＳＰ２／０、ＮＳ−０、ＭＭＴ０６０５６２、Ｓｅｒｔｏｌｉ細胞、ＢＲＬ ３Ａ細胞、ＨＴ１０８０細胞、骨髄腫細胞、腫瘍細胞、及び前述の細胞に由来する細胞株。いくつかの実施形態では、細胞は、１つまたは複数のウイルス遺伝子を含み、例えば、ウイルス遺伝子を発現する網膜細胞（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）細胞）である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、単離された細胞であるか、または単離された細胞を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、組織の一部である。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、生物の一部である。
同一性：配列の比較と関連して本明細書で使用されるこの用語は、ヌクレオチド配列及び／またはアミノ酸配列の同一性を測定するために使用され得る、当業者に知られるいくつかの異なるアルゴリズムによって決定される同一性を指す。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の同一性は、１０．０のオープンギャップペナルティ、０．１の伸長ギャップペナルティを用いるＣｌｕｓｔａｌＷ ｖ．１．８３（低速）アライメント、及びＧｏｎｎｅｔ類似性行列（ＭＡＣＶＥＣＴＯＲ（商標）１０．０．２，ＭａｃＶｅｃｔｏｒ Ｉｎｃ．，２００８）を使用して決定される。
の代わりに：本明細書で使用されるこの用語は、第１の核酸配列が、染色体における第２の核酸配列の位置（例えば、第２の核酸配列が、染色体において以前は（例えば、元々は）例えば第２の核酸配列の内在性の遺伝子座に位置していた位置）に位置する位置置換を指す。「の代わりに」という語句は、第２の核酸配列が、例えば遺伝子座または染色体から除去されることを必要とするものではない。いくつかの実施形態では、第２の核酸配列と第１の核酸配列とは、例えば、これらの第１の配列と第２の配列とが、互いに相同的であり、対応する要素（例えば、タンパク質コード要素、調節要素など）を含み、及び／または類似もしくは同一の配列を有するという点において、互いに同等である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列及び／または第２の核酸配列は、プロモーター、エンハンサー、スプライスドナー部位、スプライスアクセプター部位、イントロン、エクソン、非翻訳領域（ＵＴＲ）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列及び／または第２の核酸配列は、１つまたは複数のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第２の核酸配列のホモログまたはバリアント（例えば、変異体）である。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第２の配列のオルソログまたはホモログである。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、ヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列がヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む場合を含めて、第２の核酸配列は、げっ歯類配列（例えば、マウス配列もしくはラット配列）であるか、またはげっ歯類配列（例えば、マウス配列もしくはラット配列）を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列がヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む場合を含めて、第２の核酸配列は、ヒト配列であるか、またはヒト配列を含む。いくつかの実施形態では、第１の核酸配列は、第２の配列のバリアントまたは変異体（すなわち、第２の配列と比較して１つまたは複数の配列差異（例えば、置換）を含む配列）である。実際に導入される核酸配列は、実際に導入される配列を得るために使用される供給源核酸配列の一部である調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、５’非翻訳領域、または３’非翻訳領域など）を１つまたは複数含み得る。例えば、さまざまな実施形態において、第１の核酸配列は、内在性配列を異種配列で置換するものであり、この置換の結果、実際に導入された核酸配列（異種配列を含む）からは遺伝子産物が産生するが、内在性配列は発現しない。第１の核酸配列は、内在性のゲノム配列の特徴を有するものであり、当該内在性配列によってコードされるポリペプチドと類似の機能を有するポリペプチドをコードする核酸配列を有する（例えば、当該内在性のゲノム配列は、非ヒト可変領域ポリペプチドの全部または一部をコードし、当該ＤＮＡ断片は、１つまたは複数のヒト可変領域ポリペプチドの全部または一部をコードする）。さまざまな実施形態において、ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントまたはその断片は、内在性の非ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントまたはその断片の代わりに存在する。
インビトロ：本明細書で使用されるこの用語は、多細胞生物内ではなく、人工的な環境（例えば、試験管内または反応容器内、細胞培養物内など）において事象が生じることを指す。
インビボ：本明細書で使用されるこの用語は、多細胞生物（ヒト及び／または非ヒト動物など）内で事象が生じることを指す。細胞ベースの系の文脈では、この用語は、（例えば、インビトロ系と対比して）生細胞内で事象が生じることを指すために使用され得る。
単離された：本明細書で使用されるこの用語は、物質及び／または実体が、（１）それが最初に生じたとき（天然及び／または実験的状況であるかは問われない）にはそれに付随していた成分の少なくともいくつかとは分離されており、及び／または（２）人工的に設計、生成、調製、及び／または製造されているものであることを指す。単離された物質及び／または実体は、それに最初に付随したその他の成分の約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超が分離された状態であり得る。いくつかの実施形態では、単離された物質は、それに最初に付随したその他の成分の１０％〜１００％、１５％〜１００％、２０％〜１００％、２５％〜１００％、３０％〜１００％、３５％〜１００％、４０％〜１００％、４５％〜１００％、５０％〜１００％、５５％〜１００％、６０％〜１００％、６５％〜１００％、７０％〜１００％、７５％〜１００％、８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、９６％〜１００％、９７％〜１００％、９８％〜１００％、または９９％〜１００％が分離されている。いくつかの実施形態では、単離された物質は、それに最初に付随したその他の成分の１０％〜１００％、１０％〜９９％、１０％〜９８％、１０％〜９７％、１０％〜９６％、１０％〜９５％、１０％〜９０％、１０％〜８５％、１０％〜８０％、１０％〜７５％、１０％〜７０％、１０％〜６５％、１０％〜６０％、１０％〜５５％、１０％〜５０％、１０％〜４５％、１０％〜４０％、１０％〜３５％、１０％〜３０％、１０％〜２５％、１０％〜２０％、または１０％〜１５％が分離されている。いくつかの実施形態では、単離された物質は、それに最初に付随したその他の成分の１１％〜９９％、１２％〜９８％、１３％〜９７％、１４％〜９６％、１５％〜９５％、２０％〜９０％、２５％〜８５％、３０％〜８０％、３５％〜７５％、４０％〜７０％、４５％〜６５％、５０％〜６０％、または５５％〜６０％が分離されている。いくつかの実施形態では、単離された物質の純度は、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、または約９９％超である。いくつかの実施形態では、単離された物質の純度は、８０％〜９９％、８５％〜９９％、９０％〜９９％、９５％〜９９％、９６％〜９９％、９７％〜９９％、または９８％〜９９％である。いくつかの実施形態では、単離された物質の純度は、８０％〜９９％、８０％〜９８％、８０％〜９７％、８０％〜９６％、８０％〜９５％、８０％〜９０％、または８０％〜８５％である。いくつかの実施形態では、単離された物質の純度は、８５％〜９８％、９０％〜９７％、または９５％〜９６％である。いくつかの実施形態では、物質は、他の成分を実質的に含まないのであれば、「純粋」である。いくつかの実施形態では、当業者なら理解するであろうが、物質は、ある特定の他の成分（例えば、１つまたは複数の担体または医薬品添加物（例えば、緩衝剤、溶剤、水など）など）と組み合わさった後にも依然として「単離された」と考えられるか、または「純粋」であるとさえ考えられ得る。そのような実施形態では、物質の単離パーセントまたは純度は、そのような担体または医薬品添加物を含めずに計算される。一例を挙げるにすぎないが、いくつかの実施形態では、天然に生じる生物学的ポリマー（ポリペプチドまたはポリヌクレオチドなど）は、ａ）それが得られる起源または供給源の要因によって、天然におけるその天然状態ではそれに付随する成分のいくつかまたはすべてがそれに伴わないとき、ｂ）天然においてそれを産生する種と同一の種の他のポリペプチドまたは核酸をそれが実質的に含まないとき、あるいはｃ）天然においてそれを産生する種のものではない細胞もしくは他の発現系によってそれが発現するか、またはその他の様式で当該細胞もしくは他の発現系に由来する成分がそれに付随するとき、「単離された」と考えられる。したがって、例えば、いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、化学的に合成されるか、またはそれを天然に産生するものとは異なる細胞系において合成されるものであるとき、「単離された」ポリペプチドであると考えられる。代替または追加として、いくつかの実施形態では、１つまたは複数の精製技術に供されているポリペプチドは、ａ）天然ではそれに付随し、及び／またはｂ）それが最初に産生したときにそれに付随する他の物質からそれが分離されている限りにおいては、「単離された」ポリペプチドであると考えられ得る。
遺伝子座：本明細書で使用されるこの用語は、遺伝子（もしくは相当配列）、ＤＮＡ配列、またはポリペプチドコード配列の位置（複数可）を指すか、あるいは生物のゲノムの染色体上の位置を指す。例えば、「免疫グロブリン遺伝子座」は、免疫グロブリン遺伝子セグメント（例えば、Ｖ、Ｄ、Ｊ、もしくはＣ）、免疫グロブリン遺伝子セグメントＤＮＡ配列、または免疫グロブリン遺伝子セグメントコード配列の位置を指すか、あるいは生物のゲノムの染色体上でそのような配列が存在することが同定されている免疫グロブリン遺伝子セグメント位置を指し得る。「免疫グロブリン遺伝子座」は、免疫グロブリン遺伝子セグメントの制御要素を含み得、こうした制御要素には、限定されないが、エンハンサー配列、プロモーター配列、５’調節配列、及び／または３’調節配列、あるいはエンハンサー領域、プロモーター領域、５’調節領域、及び／または３’調節領域、あるいはそれらの組み合わせが含まれる。「免疫グロブリン遺伝子座」は、遺伝子間ＤＮＡ（例えば、野生型遺伝子座において遺伝子セグメントの間に通常は存在または出現するＤＮＡ）を含み得る。染色体は、いくつかの実施形態では、数百の遺伝子または数千にも及ぶ遺伝子を含み、異なる種の間で比較すると類似の遺伝子座が局在化する位置が物理的に共通し得ることを当業者なら理解するであろう。そのような遺伝子座は、シンテニーが共有されていると説明され得る。
天然では見られる：生物学的要素（例えば、核酸配列）に関して本明細書で使用されるこの用語は、細胞または生物（例えば、動物）において、操作（例えば、遺伝子操作）が行われていなければ、特定の状況及び／または位置に生物学的要素が見られ得ることを意味する。換言すれば、天然では特定の状況及び／または位置に見られる配列が、操作（例えば、遺伝子操作）の結果として、特定の状況及び／または位置に存在しないということである。例えば、天然では内在性のヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１遺伝子セグメントに隣接して見られる配列は、ヒトにおいて、遺伝子操作が行われていなければ、内在性のヒト免疫グロブリンカッパ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１遺伝子セグメントに隣接して見られ得る配列である。いくつかの実施形態では、配列は、それが細胞または生物に天然では見られる場所から入手、取得、及び／または単離され得る。いくつかの実施形態では、細胞または生物は、当該細胞または生物に天然では見られる配列の直接的な供給源ではない。例えば、細胞または生物における対応配列は、同定された後、当該技術分野で知られる機構によって生成または複製され得る。
非ヒト動物：本明細書で使用されるこの用語は、ヒトではない任意の脊椎動物を指す。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、円口類、硬骨魚類、軟骨魚類（例えば、サメまたはエイ）、両生類、爬虫類、哺乳類、及び鳥類である。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、哺乳類である。いくつかの実施形態では、非ヒト哺乳類は、霊長類、ヤギ、ヒツジ、ブタ、イヌ、雌ウシ、またはげっ歯類である。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、げっ歯類（ラットまたはマウスなど）である。
核酸：本明細書で使用されるこの用語は、オリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込まれ得る任意の化合物及び／または物質を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ホスホジエステル結合を介してオリゴヌクレオチド鎖に組み込まれるか、または組み込まれ得る化合物及び／または物質である。文脈から明らかであろうが、いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基（例えば、ヌクレオチド及び／またはヌクレオシド）を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、個々の核酸残基を含むオリゴヌクレオチド鎖を指す。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＲＮＡであるか、またはＲＮＡを含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ＤＮＡであるか、またはＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つもしくは複数の天然核酸残基であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つもしくは複数の核酸アナログであるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、核酸アナログは、ホスホジエステル骨格を利用しないという点において、「核酸」とは異なる。例えば、いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つもしくは複数の「ペプチド核酸」であるか、それを含むか、またはそれからなり、「ペプチド核酸」は、当該技術分野で知られており、ホスホジエステル結合の代わりにペプチド結合を骨格中に有する。代替または追加として、いくつかの実施形態では、「核酸」は、ホスホジエステル結合ではなく、ホスホロチオエート結合及び／または５’−Ｎ−ホスホロアミダイト結合を１つまたは複数有する。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つもしくは複数の天然ヌクレオシド（例えば、アデノシン、チミジン、グアノシン、シチジン、ウリジン、デオキシアデノシン、デオキシチミジン、デオキシグアノシン、及びデオキシシチジン）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つもしくは複数のヌクレオシドアナログ（例えば、２−アミノアデノシン、２−チオチミジン、イノシン、ピロロ−ピリミジン、３−メチルアデノシン、５−メチルシチジン、Ｃ−５プロピニル−シチジン、Ｃ−５プロピニル−ウリジン、２−アミノアデノシン、Ｃ５−ブロモウリジン、Ｃ５−フルオロウリジン、Ｃ５−ヨードウリジン、Ｃ５−プロピニル−ウリジン、Ｃ５−プロピニル−シチジン、Ｃ５−メチルシチジン、２−アミノアデノシン、７−デアザアデノシン、７−デアザグアノシン、８−オキソアデノシン、８−オキソグアノシン、Ｏ（６）−メチルグアニン、２−チオシチジン、メチル化塩基、介在塩基（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ ｂａｓｅ）、及びそれらの組み合わせ）であるか、それを含むか、またはそれからなる。いくつかの実施形態では、「核酸」は、天然核酸に見られる糖と比較して修飾された糖（例えば、２’−フルオロリボース、リボース、２’−デオキシリボース、アラビノース、及びヘキソース）を１つまたは複数含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、機能性遺伝子産物（ＲＮＡまたはポリペプチドなど）をコードするヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つまたは複数のイントロンを含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、１つまたは複数のエクソンを含む。いくつかの実施形態では、「核酸」は、天然源からの単離、相補的鋳型に基づく重合による酵素合成（インビボまたはインビトロ）、組換え細胞または組換え系における再産生、及び化学合成、のうちの１つまたは複数によって調製される。いくつかの実施形態では、「核酸」は、例えば、限定されないが、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１５個、少なくとも２０個、少なくとも２５個、少なくとも３０個、少なくとも３５個、少なくとも４０個、少なくとも４５個、少なくとも５０個、少なくとも５５個、少なくとも６０個、少なくとも６５個、少なくとも７０個、少なくとも７５個、少なくとも８０個、少なくとも８５個、少なくとも９０個、少なくとも９５個、少なくとも１００個、少なくとも１１０個、少なくとも１２０個、少なくとも１３０個、少なくとも１４０個、少なくとも１５０個、少なくとも１６０個、少なくとも１７０個、少なくとも１８０個、少なくとも１９０個、少なくとも２０個、少なくとも２２５個、少なくとも２５０個、少なくとも２７５個、少なくとも３００個、少なくとも３２５個、少なくとも３５０個、少なくとも３７５個、少なくとも４００個、少なくとも４２５個、少なくとも４５０個、少なくとも４７５個、少なくとも５００個、少なくとも６００個、少なくとも７００個、少なくとも８００個、少なくとも９００個、少なくとも１０００個、少なくとも１５００個、少なくとも２０００個、少なくとも２５００個、少なくとも３０００個、少なくとも３５００個、少なくとも４０００個、少なくとも４５００個、少なくとも５０００個、またはそれを超える数の残基の長さを有する。いくつかの実施形態では、「核酸」は、一本鎖である。いくつかの実施形態では、「核酸」は、二本鎖である。いくつかの実施形態では、「核酸」は、ポリペプチドをコードする要素を少なくとも１つ含むヌクレオチド配列を有するか、またはポリペプチドをコードする配列の相補配列である要素を少なくとも１つ含むヌクレオチド配列を有する。いくつかの実施形態では、「核酸」は、酵素活性を有する。
機能可能なように連結された：本明細書で使用されるこの用語は、記載の要素が、その意図される様式でそれが機能することを可能にする関係性において並置されていることを指す。コード配列に「機能可能なように連結された」制御配列は、制御配列と適合する条件の下でコード配列の発現が達成されるような様式でライゲーションされている。「機能可能なように連結された」配列は、目的遺伝子と近接する発現制御配列と、トランス作用を及ぼして目的遺伝子（もしくは目的配列）を制御する発現制御配列、または離れた位置から作用して目的遺伝子（もしくは目的配列）を制御する発現制御配列と、の両方を含む。「発現制御配列」という用語は、ライゲーション対象であるコード配列の発現及びプロセシングに影響を与える上で必要なポリヌクレオチド配列を含む。「発現制御配列」は、適切な転写開始配列、転写終結配列、転写プロモーター配列、及び転写エンハンサー配列、効率的なＲＮＡプロセシングシグナル（スプライシングシグナル及びポリアデニル化シグナルなど）、細胞質ｍＲＮＡを安定化する配列、翻訳効率を向上させる配列（すなわち、コザックコンセンサス配列）、ポリペプチドの安定性を向上させる配列、ならびに望まれるときには、ポリペプチドの分泌を向上させる配列、を含む。そのような制御配列の性質は、宿主生物に応じて異なる。例えば、原核生物では、そのような制御配列は、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位、及び転写終結配列を含み、一方、真核生物では、典型的には、そのような制御配列は、プロモーター及び転写終結配列を含む。「制御配列」という用語は、発現及びプロセシングに不可欠な存在である構成要素を含むことが意図され、存在すると有利となる追加の構成要素（例えば、リーダー配列及び融合パートナー配列）も含み得る。
生理学的条件：本明細書で使用されるこの用語は、細胞または生物が生存し、及び／またはその数を増やす条件に関してこの用語が当該技術分野で理解される意味を指す。いくつかの実施形態では、この用語は、生物系または細胞系について天然で生じ得る外部環境条件または内部環境条件を含む。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、ヒトまたは非ヒト動物の体内に生じる条件であり、特に、手術部位及び／またはその内部に生じる条件である。生理学的条件には、典型的には、例えば、２０〜４０℃の温度範囲、１の気圧、６〜８のｐＨ、１〜２０ｍＭのグルコース濃度、大気レベルの酸素濃度、及び地球上で受ける重力が含まれる。いくつかの実施形態では、実験室における条件は、生理学的条件に操作及び／または維持される。いくつかの実施形態では、生理学的条件は、生物に見られるものである。
ポリペプチド：本明細書で使用されるこの用語は、アミノ酸の任意のポリマー鎖を指す。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然に生じるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然には生じないアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然では互いに別々に生じる部分（すなわち、２種類以上の異なる生物に由来する部分（例えば、ヒト部分及び非ヒト部分））を含むアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、人工的に設計及び／または生成されるという点において操作されたアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、ポリペプチドは、天然には生じない配列（例えば、当該ポリペプチドをコードするために人工的に設計及び／または生成されるという点において操作された配列）によってコードされるアミノ酸配列を有する。
組換え：本明細書で使用されるこの用語は、ポリペプチドが組換え手段によって設計、操作、調製、発現、創出、または単離されることを指し、こうして得られるポリペプチドは、組換え発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクトすることで発現するポリペプチド、組換えヒトポリペプチドのコンビナトリアルライブラリーから単離されたポリペプチド（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ，Ｈ．Ｒ．，１９９７，ＴＩＢ Ｔｅｃｈ．１５：６２−７０、Ａｚｚａｚｙ，Ｈ．ａｎｄ Ｗ．Ｅ．Ｈｉｇｈｓｍｉｔｈ，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３５：４２５−４５、Ｇａｖｉｌｏｎｄｏ，Ｊ．Ｖ．ａｎｄ Ｊ．Ｗ．Ｌａｒｒｉｃｋ，２００２，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９：１２８−４５、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ Ｈ．，ａｎｄ Ｐ．Ｃｈａｍｅｓ，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−８（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））、ヒト免疫グロブリン遺伝子を含むように遺伝子操作されている動物（例えば、マウス）から単離された抗体（例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−９５、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ，Ｓ−Ａ．ａｎｄ Ｌ．Ｌ．Ｇｒｅｅｎ，２００２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−７、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−７０、Ｏｓｂｏｒｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０：１４８１−９０、Ｌｅｅ，Ｅ−Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３２（４）：３５６−６３、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｌ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１４７−５２、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３−８（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、または選択される配列要素が互いに関連してスプライシングを受ける任意の他の手段によって調製、発現、創出、もしくは単離されるポリペプチドなどである。いくつかの実施形態では、そのような選択される配列要素の１つまたは複数は、天然に見られるものである。いくつかの実施形態では、そのような選択される配列要素の１つまたは複数は、インシリコで設計される。いくつかの実施形態では、そのような選択される配列要素の１つまたは複数は、既知の配列要素（例えば、天然の供給源または合成の（例えば、人工的な）供給源に由来するもの）に変異が導入される（例えば、インビボまたはインビトロで行われる）ことで得られる。例えば、いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、目的の供給源生物（例えば、ヒト、マウスなど）のゲノムに見られる配列から構成される。いくつかの実施形態では、組換えポリペプチドは、変異導入（例えば、インビトロまたはインビボでのものであり、例えば、非ヒト動物において行われる）によって得られるアミノ酸配列を有し、その結果、組換えポリペプチドのアミノ酸配列は、ポリペプチド配列が起源であり、それと関連はするものの、天然ではインビボで非ヒト動物のゲノム内に存在し得ない配列となる。
参照：本明細書で使用されるこの用語は、目的の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値の比較対象となる標準または対照の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値を指す。いくつかの実施形態では、参照の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値は、目的の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値の試験または決定と実質的に同時に試験及び／または決定される。いくつかの実施形態では、参照の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値は、歴史的参照であり、こうした歴史的参照は、任意選択で実際の媒体において具体化される。いくつかの実施形態では、参照は、対照を指し得る。「参照」は、「参照動物」も含む。「参照動物」は、本明細書に記載の改変を有するか、本明細書に記載のものとは異なる改変を有するか、または改変を有し得ない（すなわち、野生型動物）。典型的には、当業者なら理解するであろうが、参照の物質、動物、コホート、個体、集団、試料、配列、または値は、目的の物質、動物（例えば、哺乳類）、コホート、個体、集団、試料、配列、または値の決定または特徴付けに利用されるものと同等の条件の下で決定または特徴付けされる。
代替：本明細書で使用されるこの用語は、宿主遺伝子座（例えば、ゲノムにおけるもの）に見られる「代替される」核酸配列（例えば、遺伝子）が、当該遺伝子座から除去され、その位置に異なる「代替」核酸が位置するプロセスを指す。いくつかの実施形態では、代替される核酸配列及び代替核酸配列は、例えば、それらの配列が、互いに相同的であり、対応する要素（例えば、タンパク質コード要素、調節要素など）を含み、及び／または類似もしくは同一の配列を有するという点において、互いに同等である。いくつかの実施形態では、代替される核酸配列は、プロモーター、エンハンサー、スプライスドナー部位、スプライスアクセプター部位、イントロン、エクソン、非翻訳領域（ＵＴＲ）のうちの１つまたは複数を含む。いくつかの実施形態では、代替核酸配列は、１つまたは複数のコード配列を含む。いくつかの実施形態では、代替核酸配列は、代替される核酸配列のホモログまたはバリアント（例えば、変異体）である。いくつかの実施形態では、代替核酸配列は、代替される配列のオルソログまたはホモログである。いくつかの実施形態では、代替核酸配列は、ヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む。いくつかの実施形態では、代替核酸配列がヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む場合を含めて、代替される核酸配列は、げっ歯類配列（例えば、マウス配列もしくはラット配列）であるか、またはげっ歯類配列（例えば、マウス配列もしくはラット配列）を含む。いくつかの実施形態では、代替核酸配列がヒト核酸配列であるか、またはヒト核酸配列を含む場合を含めて、代替される核酸配列は、ヒト配列であるか、またはヒト配列を含む。いくつかの実施形態では、代替核酸配列は、代替される配列のバリアントまたは変異体（すなわち、代替される配列と比較して１つまたは複数の配列差異（例えば、置換）を含む配列）である。実際に導入される核酸配列は、実際に導入される配列を得るために使用される供給源核酸配列の一部である調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、５’非翻訳領域、または３’非翻訳領域など）を１つまたは複数含み得る。例えば、さまざまな実施形態において、代替物は、内在性配列を異種配列で置換するものであり、この置換の結果、実際に導入された核酸配列（異種配列を含む）からは遺伝子産物が産生するが、内在性配列は発現しない。代替物は、内在性のゲノム配列の特徴を有するものであり、当該内在性配列によってコードされるポリペプチドと類似の機能を有するポリペプチドをコードする核酸配列を有する（例えば、当該内在性のゲノム配列は、非ヒト可変領域ポリペプチドの全部または一部をコードし、当該ＤＮＡ断片は、１つまたは複数のヒト可変領域ポリペプチドの全部または一部をコードする）。さまざまな実施形態において、内在性の非ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントまたはその断片は、ヒト免疫グロブリン遺伝子セグメントまたはその断片で代替される。
実質的に：本明細書で使用されるこの用語は、目的の特徴または特性が示される程度または度合いが完全またはほぼ完全である定性的な状態を指す。生物学的現象及び化学的現象が、皆無ではないにせよ、完了に至り、及び／または完全な状態まで進行するか、あるいは絶対的な結果を達成または回避することは稀であることを生物学分野の当業者なら理解するであろう。それ故に、「実質的に」という用語は、多くの生物学的現象及び化学的現象に固有の潜在的な完全性欠如をとらえるために本明細書で使用される。
実質的な類似性：本明細書で使用されるこの用語は、アミノ酸配列間または核酸配列間の比較を指す。当業者なら理解するであろうが、２つの配列は、一般に、類似残基（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を対応位置に含むのであれば、「実質的に類似する」と考えられる。当該技術分野では理解されていることであるが、類似残基は、同一残基であり得る（後述の実質的な同一性も参照のこと）一方で、類似残基は、ほぼ同等の構造特徴及び／または機能特徴を有する非同一残基でもあり得る。例えば、当業者にはよく知られていることであるが、ある特定のアミノ酸は、典型的には、「疎水性」アミノ酸もしくは「親水性」アミノ酸として分類され、及び／または「極性」側鎖もしくは「非極性」側鎖を有するものとして分類される。あるアミノ酸を同じ型の別のアミノ酸へと置換することは、多くの場合、「保存的」置換であると考えられ得る。以下の表は、典型的なアミノ酸分類のまとめである。
当該技術分野ではよく知られていることであるが、アミノ酸配列または核酸配列は、さまざまなアルゴリズムのいずれを使用しても比較することができ、こうしたアルゴリズムには、商業的なコンピュータープログラム（ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなど）において利用可能なものが含まれる。そのようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：４６０−８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９−４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，Ａ．Ｄ．ａｎｄ Ｂ．Ｆ．Ｆ．Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ（ｅｄｓ．）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９８（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。上述のプログラムは、類似配列を同定することに加えて、典型的には、類似性度の指標も提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応残基の関連残基区間にわたる類似性（例えば、同一性、または保存的置換を含む）が、例えば、限定されないが、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれを超える％であるならば、実質的に類似すると考えられる。いくつかの実施形態では、関連区間は、完全配列（例えば、遺伝子の配列、遺伝子セグメント、ドメインをコードする配列、ポリペプチド、またはドメイン）である。いくつかの実施形態では、関連区間の残基数は、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、またはそれを超える数である。いくつかの実施形態では、関連区間の残基数は、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、またはそれを超える数である。いくつかの実施形態では、関連区間は、完全配列に沿う連続残基を含む。いくつかの実施形態では、関連区間は、完全配列に沿う非連続残基を含み、こうした非連続残基は、例えば、ポリペプチドまたはその一部が折り畳まれて立体構造が生じることによって一緒にまとまる非連続残基である。
実質的な同一性：本明細書で使用されるこの用語は、アミノ酸配列間または核酸配列間の比較を指す。当業者なら理解するであろうが、２つの配列は、一般に、同一残基（例えば、アミノ酸またはヌクレオチド）を対応位置に含むのであれば、「実質的に同一」であると考えられる。当該技術分野ではよく知られていることであるが、アミノ酸配列または核酸配列は、さまざまなアルゴリズムのいずれを使用しても比較することができ、こうしたアルゴリズムには、商業的なコンピュータープログラム（ヌクレオチド配列についてはＢＬＡＳＴＮ、ならびにアミノ酸配列についてはＢＬＡＳＴＰ、ギャップＢＬＡＳＴ、及びＰＳＩ−ＢＬＡＳＴなど）において利用可能なものが含まれる。そのようなプログラムの例は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２１５（３）：４０３−１０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：４６０−８０、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９−４０２、Ｂａｘｅｖａｎｉｓ，Ａ．Ｄ．ａｎｄ Ｂ．Ｆ．Ｆ．Ｏｕｅｌｌｅｔｔｅ（ｅｄｓ．）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｔｈｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｗｉｌｅｙ，１９９８、及びＭｉｓｅｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３２，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，１９９８（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載されている。上述のプログラムは、同一配列を同定することに加えて、典型的には、同一性度の指標も提供する。いくつかの実施形態では、２つの配列は、それらの対応残基の関連残基区間にわたる同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、またはそれを超える％であるならば、実質的に同一であると考えられる。いくつかの実施形態では、関連残基区間は、完全配列である。いくつかの実施形態では、関連残基区間の残基数は、例えば、限定されないが、少なくとも１０、少なくとも１５、少なくとも２０、少なくとも２５、少なくとも３０、少なくとも３５、少なくとも４０、少なくとも４５、少なくとも５０、またはそれを超える数である。
標的化コンストラクトまたは標的化ベクター：本明細書で使用されるこの用語は、標的化領域を含むポリヌクレオチド分子を指す。標的化領域は、標的細胞、標的組織、または標的動物における配列と同一または実質的に同一の配列を含み、当該細胞、組織、または動物のゲノム内の位置へと相同組換えを介して標的化コンストラクトの組み込みに提供される。部位特異的リコンビナーゼの認識部位（例えば、ｌｏｘＰ部位またはＦｒｔ部位）を標的化に使用する標的化領域も含められ、こうした標的化領域は、本明細書に記載される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化コンストラクトは、特定の目的核酸配列もしくは目的遺伝子、選択可能マーカー、制御配列、及び／または調節配列、ならびにそのような配列が関与する組換えを支援または促進するタンパク質を外来性に導入することによって媒介される組換えを可能にする他の核酸配列、をさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化コンストラクトは、目的遺伝子の全部または一部をさらに含み、目的遺伝子は、内在性配列によってコードされるタンパク質と類似の機能を有するポリペプチドの全部または一部をコードする異種遺伝子である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化コンストラクトは、目的ヒト化遺伝子の全部または一部をさらに含み、目的ヒト化遺伝子は、内在性配列によってコードされるポリペプチドと類似の機能を有するポリペプチドの全部または一部をコードする。いくつかの実施形態では、標的化コンストラクト（または標的化ベクター）は、人工的に処理された核酸配列を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、２つ以上の配列を含む操作されたポリヌクレオチドまたは組換えポリヌクレオチドを含むように標的化コンストラクト（または標的化ベクター）を構築することができ、これらの２つ以上の配列は、天然ではその順序で一緒に連結されることがないが、当該操作されたポリヌクレオチドまたは組換えポリヌクレオチドにおいて互いに直接的に連結されるように人工的に処理されている。
導入遺伝子または導入遺伝子コンストラクト：本明細書で使用されるこれらの用語は、本明細書に記載の方法などによって人工的に細胞に導入されている核酸配列（例えば、目的ポリペプチドの全部または一部をコードするもの）を指す。導入遺伝子は、それが導入される遺伝子操作動物または遺伝子操作細胞にとって、部分的または全体的に異種、すなわち、外来のものであり得る。導入遺伝子は、１つまたは複数の転写調節配列と、選択される核酸配列の発現に必要となり得る任意の他の核酸（イントロンまたはプロモーターなど）と、を含み得る。
遺伝子改変された非ヒト動物または遺伝子操作された非ヒト動物：これらの用語は、本明細書で互換的に使用され、目的ポリペプチドの全部または一部をコードする異種核酸及び／または異種遺伝子を自体の細胞の１つまたは複数が含む任意の非天然起源の非ヒト動物を指す。例えば、いくつかの実施形態では、「遺伝子改変された非ヒト動物」または「遺伝子操作された非ヒト動物」は、本明細書に記載の導入遺伝子または導入遺伝子コンストラクトを含む非ヒト動物を指す。いくつかの実施形態では、異種核酸及び／または異種遺伝子は、前駆細胞への導入、意図的な遺伝子処理（マイクロインジェクションなど）、または組換えウイルスを用いる感染によって、直接的または間接的に細胞に導入される。遺伝子処理という用語は、古典的な交配繁殖技術は含まず、むしろ、組換えＤＮＡ分子（複数可）の導入を対象とする。この分子は、染色体内に組み込まれ得るか、または染色体外で複製されるＤＮＡであり得る。「遺伝子改変された非ヒト動物」または「遺伝子操作された非ヒト動物」という語句は、異種核酸及び／または異種遺伝子についてヘテロ接合型またはホモ接合型である動物、及び／または異種核酸及び／異種遺伝子のコピーを１つまたは複数有する動物、を指す。
ベクター：本明細書で使用されるこの用語は、自体に付随する別の核酸を輸送する能力を有する核酸分子を指す。ある実施形態では、ベクターは、それと連結される核酸を宿主細胞（真核細胞及び／または原核細胞など）において染色体外で複製及び／または発現させる能力を有する。機能可能なように連結された遺伝子の発現を誘導する能力を有するベクターは、本明細書では「発現ベクター」と称される。
野生型：本明細書で使用されるこの用語は、（変異体、疾患状態、改変状態などと対比して）「通常」の状態または状況で天然に見られる構造及び／または活性を有する実体を指す。野生型の遺伝子及びポリペプチドは、多くの場合、複数の異なる形態（例えば、アレル）で存在することを当業者なら理解するであろう。
詳細な説明
本開示は、とりわけ、ヒトＶλドメインをコードする異種遺伝物質を有する操作された非ヒト動物を提供し、当該異種遺伝物質は、ヒトＶλ遺伝子配列及びヒトＪλ遺伝子配列（すなわち、遺伝子セグメント）と、ヒト部分及び非ヒト部分を含むＩｇλ軽鎖を有する抗体、または完全にヒトのＩｇλ軽鎖を有する抗体、を適切に再構成（例えば、組換えシグナル配列（ＲＳＳ））し、発現させる他のヒト配列と、を含む。例えば、さまざまな実施形態において、操作された非ヒト動物のゲノムにヒト遺伝子セグメントが存在するとき、対応する組換えシグナル配列（複数可）も存在し得る（例えば、Ｖλ遺伝子セグメントにはＶλＲＳＳが付随し、Ｊλ遺伝子セグメントにはＪλＲＳＳが付随し、Ｖκ遺伝子セグメントにはＶκＲＳＳが付随し、Ｊκ遺伝子セグメントにはＪκＲＳＳが付随するなどする）。さまざまな実施形態において、提供される操作された非ヒト動物は、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを有する軽鎖を含む抗体が当該非ヒト動物の抗体レパートリーに発現するような様式で挿入された異種遺伝物質を含む。さらに、提供される操作された非ヒト動物は、当該非ヒト動物の生殖細胞ゲノムにおいてヒトＩｇλ遺伝子配列及び非ヒトＩｇλ遺伝子配列（例えば、遺伝子セグメント）ならびにいくつかの実施形態ではヒトＩｇκ軽鎖配列を含む操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座から、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを有する軽鎖を含む抗体が発現するような様式で挿入された異種遺伝物質を含む。
いずれの特定の理論によっても拘束されることは望まないが、本明細書に記載の非ヒト動物は、治療抗体を産生させるためのヒトＶλドメインを含む抗体の発現を活用する改良型のインビボ系を提供することが企図される。偏った抗体応答（例えば、κ軽鎖またはλ軽鎖のいずれかの比率が圧倒的に高いことによって特徴付けられる抗体応答）と関連する疾患標的に対するヒト抗体ベースの治療剤（例えば、ヒトモノクローナル抗体、多重特異性の結合物質、ｓｃＦｖ、融合ポリペプチドなど）を開発するための異種遺伝物質を含む別の操作形態の軽鎖遺伝子座（例えば、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座）が、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物から得られることも企図される。したがって、抗体レパートリー及び／または抗体応答が偏ることに部分的には起因して、付随する免疫原性が不十分な標的（例えば、ウイルス）に対するヒト抗体及びヒト抗体ベースの分子（例えば、多重特異性の結合物質、ｓｃＦｖ、融合ポリペプチドなど）を開発する上で、提供される非ヒト動物は特に有用である。
本開示では、とりわけ、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及びＣλ遺伝子を含む免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座について記載される。そのような遺伝子座は、「ラムダ・イン・カッパ」遺伝子座または「ＬｉＫ」と称される。
具体的には、本開示では、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む生殖細胞ゲノムを有する非ヒト動物（例えば、げっ歯類）の作製について記載され、当該操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座は、いくつかの実施形態では、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結されるように、当該複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが導入され、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子が導入されていることによって特徴付けられる。本明細書に記載のように、そのような操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座が生成される結果として、非ヒト動物の生殖細胞ゲノムにおける当該操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座から、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを含む軽鎖を含む抗体が発現する。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物の生殖細胞ゲノムは、ヒトＩｇλ軽鎖配列を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物の生殖細胞ゲノムは、（ｉ）ヒトＩｇλ軽鎖配列を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座と、（ｉｉ）（ａ）ヒトＩｇλ軽鎖配列を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座または（ｉｉ）（ｂ）ヒトＩｇκ軽鎖配列を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座と、を含む。提供される非ヒト動物の生殖細胞ゲノムは、いくつかの実施形態では、本明細書に記載のＩｇκ軽鎖遺伝子座を含むと共に、（ｉ）ヒト化ＩｇＨ遺伝子座、または（ｉｉ）ヒト化ＩｇＨ遺伝子座、及び機能的サイレンシングもしくはその他の様式での非機能化が行われた内在性のＩｇλ軽鎖遺伝子座、をさらに含む。提供される非ヒト動物は、本明細書に記載のように、ヒトＶλドメインを含むＩｇλ軽鎖を含む抗体レパートリーを発現する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内にヒトＩｇλ軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内にヒトＩｇλ軽鎖配列及び非ヒトＩｇλ軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内にヒトＩｇλ軽鎖配列及びヒトＩｇκ軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内にヒトＩｇλ軽鎖配列、ヒトＩｇκ軽鎖配列、及びネズミＩｇκ軽鎖配列、及び／またはネズミＩｇλ軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内にヒトＩｇλ軽鎖配列、非ヒトＩｇλ軽鎖配列、ヒトＩｇκ軽鎖配列、非ヒトＩｇκ軽鎖配列、またはそれらの組み合わせを含む。本明細書に記載の非ヒト動物の実施形態の多くでは、非ヒト配列は、ネズミ配列（例えば、マウスもしくはラット）であるか、またはネズミ配列（例えば、マウスもしくはラット）を含む。
いくつかの実施形態では、Ｉｇκ軽鎖配列及び／またはＩｇλ軽鎖配列は、ヒト及び／またはネズミを起源とする遺伝子間ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇκ軽鎖配列及び／またはＩｇλ軽鎖配列は、ヒトまたはネズミを起源とする供給源配列に基づく操作された遺伝子間ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、当該遺伝子間ＤＮＡは、当該遺伝子間ＤＮＡが実際に導入、挿入、配置、または操作される免疫グロブリン遺伝子座と同じ免疫グロブリン遺伝子座のものである（例えば、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座にＩｇκ遺伝子間ＤＮＡが含められる）。いくつかの実施形態では、当該遺伝子間ＤＮＡは、当該遺伝子間ＤＮＡが実際に導入、挿入、配置、または操作される免疫グロブリン遺伝子座とは異なる免疫グロブリン遺伝子座のものである（例えば、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座にＩｇλ遺伝子間ＤＮＡが含められる）。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｉｇκ軽鎖配列（複数可）、Ｉｇλ軽鎖配列（複数可）、及び／またはそれらの組み合わせを含む遺伝子間ＤＮＡを含む操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む。
さまざまな実施形態において、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域（例えば、１つまたは複数の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡなど）を含む内在性の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域）に機能可能なように連結された少なくとも１つのヒトＶＨ遺伝子セグメント、少なくとも１つのヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び少なくとも１つのヒトＪＨ遺伝子セグメント（例えば、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結された複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメント）を含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、図面に示される免疫グロブリン遺伝子座を１つまたは複数含む生殖細胞ゲノムを有する。そのような操作された非ヒト動物は、ヒト抗体及びヒト抗体断片の供給源となる共に、ヒト治療抗体を産生させるためのヒトＶλ配列の活用に適した改良型のインビボ系を提供する。
後述の実施例セクションに記載のように、それぞれのヒト重鎖可変領域遺伝子セグメント（すなわち、ＶＨ、ＤＨ、及びＪＨ）及びヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメント（例えば、内在性のカッパ遺伝子座に対してはＶλ及びＪλ）のうちの少なくとも１つ（例えば、複数のヒト重鎖可変領域遺伝子セグメント（すなわち、ＶＨ、ＤＨ、及びＪＨ）及びヒト軽鎖可変領域遺伝子セグメント（例えば、内在性のカッパ遺伝子座に対してはＶλ及びＪλ））を非ヒト可変領域遺伝子セグメントの代わりに内在性の免疫グロブリン遺伝子座に含むと共に、これらのヒト可変領域遺伝子セグメントの間にヒト非コード遺伝子間ＤＮＡを含むゲノムを有する非ヒト動物が提供される。そのような遺伝子間ＤＮＡは、例えば、抗体の可変ドメインが生じる状況の下でのヒト遺伝子セグメントの適切な組換え及び発現を可能にするプロモーター、リーダー配列、及び組換えシグナル配列を含む。非ヒト免疫グロブリン遺伝子座は、そのような非コード遺伝子間ＤＮＡも含むことを当業者は理解している。そのような遺伝子座の構築において他のヒト遺伝子間ＤＮＡまたは非ヒト遺伝子間ＤＮＡを用いても、非ヒト動物において抗体が生じる状況の下でヒト可変ドメインが同じく発現し得ることを、本開示を読めば当業者なら理解するであろう。そのような類似の遺伝子座がヒト可変ドメインを含む抗体の発現を達成する上で必要なことは、所望のヒト遺伝子セグメントのヒトコード配列（すなわち、エクソン）を含むことのみである。
下記のセクションには、さまざまな態様のある特定の実施形態が詳述され、それらはそれぞれ、本明細書に記載の任意の態様または実施形態に適用することが可能である。セクションは、限定のために使用されるものではない。
非ヒト動物における抗体レパートリー
免疫グロブリン（抗体とも呼ばれる）は、病原体（例えば、ウイルス、細菌など）を中和するために宿主免疫系のＢ細胞が産生する大型（約１５０ｋＤ）のＹ字型糖タンパク質である。免疫グロブリン（Ｉｇ）はそれぞれ、２つの同一の重鎖及び２つの同一の軽鎖から構成され、これらの重鎖及び軽鎖はそれぞれ、可変ドメイン及び定常ドメインという２種類の構造的構成要素を有する。異なるＢ細胞が産生する抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は異なるが、単一のＢ細胞またはＢ細胞クローンが産生する抗体はすべて、同じ重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する。それぞれの抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、一緒になって抗原結合領域（または抗原結合部位）を構成する。免疫グロブリンは、それが含む重鎖定常領域（または重鎖定常ドメイン）に基づいてアイソタイプまたはクラスと称される異なる種類のものとして存在し得る。アイソタイプが同じ抗体はすべて、同一の重鎖定常領域を有するが、アイソタイプが異なる抗体の重鎖定常領域は異なる。以下の表は、マウス及びヒトにおける９つの抗体アイソタイプのまとめである。
他の種では、アイソタイプは他にも同定されている。異なるアイソタイプの間には構造特徴差異が存在するため、アイソタイプは、特定の生物学的特性を抗体に付与するものであり、動物の体内でアイソタイプが見られる位置（細胞、組織など）は異なる。Ｂ細胞は、初期には、同一の抗原結合領域を有するＩｇＭ及びＩｇＤを産生する。Ｂ細胞は、活性化すると、クラススイッチと称されるプロセスによってアイソタイプを異なるものに切り替える。このプロセスでは、Ｂ細胞が産生する抗体の定常領域は変化するが、可変領域は同じまま残り、それによって元の抗体（Ｂ細胞）の抗原特異性が保存される。
２つの別々の遺伝子座（Ｉｇκ及びＩｇλ）は、再構成時に抗体の軽鎖をコードする遺伝子セグメントを含んでおり、アレル排除もアイソタイプ排除も示す。κ＋Ｂ細胞とλ＋Ｂ細胞との発現比は、種間で異なる。例えば、ヒトで見られる比は、約６０：４０（κ：λ）である。マウス及びラットで観測される比は、９５：５（κ：λ）である。興味深いことに、ネコにおいて観測されるκ：λ比（５：９５）は、マウス及びラットのものとは逆である。観測されるこうした比の背後に存在する考え得る理由を解明するために試験がいくつか実施されており、遺伝子座の複雑性（すなわち、遺伝子セグメントの数、具体的にはＶ遺伝子セグメントの数）と、遺伝子セグメント再構成の効率と、の両方が理論的根拠として提唱されている。ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座は、１，０００ｋｂにわたって広がっており、およそ７０個のＶλ遺伝子セグメント（２９〜３３個が機能性）及び７つのＪλ−Ｃλ遺伝子セグメント対（４〜５対が機能性）が３つのクラスターにまとまったものを含むものである（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の図１を参照のこと）。発現する抗体レパートリーにおいて観測されるＶλ領域の大部分は、最も近位のクラスター（クラスターＡと称される）内に含まれる遺伝子セグメントによってコードされる。マウスＩｇλ軽鎖遺伝子座は、ヒト遺伝子座と比較して著しく異なり、系統によっては、わずか数個のＶλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントが２つの異なる遺伝子クラスターにまとまったもの含むものである（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の図２を参照のこと）。
さまざまなヒト疾患を治療するための治療抗体の開発の大部分は、ヒト免疫グロブリン遺伝子に相当する遺伝物質を異なる量で自体のゲノムに保有する操作された非ヒト動物系統（具体的には、操作されたげっ歯類系統）の創出に重点が置かれてきた（このことは、例えば、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ａｒｃｈ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｈｅｒ．Ｅｘｐ．６３：１０１−８（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に概説されている）。そのような遺伝子操作されたげっ歯類系統を創出する初期の試みでは、遺伝子セグメントの組換えが自体によって支援され得るようにヒト免疫グロブリン遺伝子座の複数部分を組み込み、内在性の免疫グロブリン遺伝子座を不活化した状態で完全ヒト重鎖及び／または完全ヒト軽鎖を産生させることに焦点が当てられた（例えば、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６７−０９−１３、Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２１：１３２３−６、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０：６２８７−６２９５、Ｄａｖｉｅｓ，Ｎ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１：９１１−４、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．７：１３−２１、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｎａｔｕｒｅ ３６８：８５６−９、Ｔａｙｌｏｒ，Ｌ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５７９−９１、Ｗａｇｎｅｒ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２６７２−８１、Ｆｉｓｈｗｉｌｄ，Ｄ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：８４５−５１、Ｗａｇｎｅｒ，Ｓ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３５：４０５−１４、Ｍｅｎｄｅｚ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５：１４６−５６、Ｇｒｅｅｎ，Ｌ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８：４８３−９５、Ｘｉａｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ ２：３３３−４３、Ｌｉｔｔｌｅ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３６４−７０、Ｋｅｌｌｅｒｍａｎｎ，Ｓ．Ａ．ａｎｄ Ｌ．Ｌ．Ｇｒｅｅｎ，２００２，Ｃｕｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１３：５９３−７（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる）を参照のこと）。具体的には、ヒトＩｇλ軽鎖配列の組み込みが試みられたこともある（例えば、米国特許出願公開第２００２／００８８０１６Ａ１号、同第２００３／０２１７３７３Ａ１号、及び同第２０１１／０２３６３７８Ａ１号、米国特許第６，９９８，５１４号及び同第７，４３５，８７１号、Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ，Ｉ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：６８９８−９０６、Ｐｏｐｏｖ，Ａ．Ｖ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（１０）：１６１１−１９（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。そのような試みでは、ヒトＶλ配列、ヒトＪλ配列、及びヒトＣλ配列を含む酵母人工染色体を無作為に組み込み、それによって完全ヒトＩｇλ軽鎖（すなわち、ヒトＶλドメイン及びヒトＣλドメイン）を発現するマウス系統を創出することに焦点が当てられている。より最近の試みでは、上記の試みと同様にヒトＶλ配列、ヒトＪλ配列、及びヒトＣλ配列を含むコンストラクトを使用する類似方針が用いられている（Ｏｓｂｏｒｎ，Ｍ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０：１４８１−９０、Ｌｅｅ，Ｅ−Ｃ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．３２（４）：３５６−６３（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。
さらに他の試みでは、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが内在性のＩｇ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結されるように当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを内在性のげっ歯類Ｉｇ軽鎖遺伝子座（κ及びλ）に特異的に挿入することが行われている（例えば、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献はすべて、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。そのような動物では、クラスターＡ及びクラスターＢに由来するヒトＶλ遺伝子セグメントのすべてと、１つまたは４つのヒトＪλ遺伝子セグメントとが、内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座及びＩｇλ軽鎖遺伝子座に挿入された。結果として、いくつかの異なるヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが、両方の操作されたげっ歯類Ｉｇ軽鎖遺伝子座において適切に再構成されることで、げっ歯類抗体レパートリーに発現する機能性軽鎖を形成し、内在性のＣκ領域及びＣλ領域のいずれかと関連して当該軽鎖がヒトＶλドメインを含むことが示された（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の表７及び図１１〜１３を参照のこと）。具体的には、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを内部に有する操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を有するマウスでは、脾臓コンパートメントにおいてヒトラムダと内在性ラムダとの比（ＩｇＣκとＩｇＣλとの比によって測定されたもの）が約１：１となることが示された（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の表４を参照のこと）。実際、両方の操作されたマウス系統（すなわち、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座または操作されたＩｇλ軽鎖遺伝子座）において、げっ歯類において内在性のＩｇ軽鎖遺伝子座（通常は、軽鎖発現に大きな偏りが見られる（上記の内容を参照のこと））からヒトＶλドメインが発現し得ることが示された。本開示は、操作された別のＩｇ軽鎖遺伝子座構造を生じさせることで、非ヒト動物において治療標的に対する抗体レパートリーの中でのヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの利用度が最大化し得るという認識を提供し、このことは、具体的には、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座（すなわち、ヒト細胞に見られる遺伝子座）に通常伴う複雑性及び強固な品質を有さないＩｇλ軽鎖遺伝子座を含む非ヒト動物（例えば、マウス及びラット）と比較したときに見られ得る。そのような操作された別のＩｇ軽鎖遺伝子座構造は、その設計から得られる特有の抗体レパートリーを生じさせるための能力を与えるものである。
本開示は、内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座の非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子の代わりに挿入された非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む操作された内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物が良好に作製される例を示す。具体的には、（１）ヒト可変領域及び非ヒト定常領域を有する抗体であって、ヒトＶλドメイン及び非ヒトＣλドメインを含む軽鎖を含む抗体を発現する操作された非ヒト動物と、（２）ヒト可変領域及びヒト定常領域を有する抗体であって、ヒトＶλドメイン及びヒトＣλドメインを含む軽鎖を含む抗体を発現する操作された非ヒト動物と、が良好に作製されることを本開示は具体的に示す。本明細書に具体例が示されるように、そのような軽鎖の発現は、当該複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に挿入することによって達成される。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、内在性のＩｇλ軽鎖可変領域の発現が（例えば、遺伝子欠失によって）不活化するように操作される。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、内在性のＩｇκ軽鎖可変領域の発現が（例えば、代替または置換によって）不活化するように操作される。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、当該非ヒト動物が、操作された内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座からヒトＩｇλ軽鎖可変領域を発現し、操作された内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座からヒトＩｇκ軽鎖可変領域を発現するように操作される。したがって、本開示は、少なくともいくつかの実施形態では、別ものになるように操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む操作された非ヒト動物を提供することによって、ヒト抗体を産生させるための改良型のインビボ系を開発することを包含し、当該操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座からは、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを含む抗体レパートリーが発現する。
核酸コンストラクト
典型的には、ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント）またはその一部（複数可）を含むポリヌクレオチド分子は、宿主細胞において当該ポリヌクレオチド分子を複製するためにベクター（好ましくは、ＤＮＡベクター）と連結される（例えば、そこに挿入される）。
ヒトＩｇλ軽鎖配列は、既知の配列もしくは供給源（例えば、ライブラリー）から直接的にクローニングするか、またはＧｅｎＢａｎｋもしくは他の公的に利用可能なデータベース（例えば、ＩＭＧＴ）から入手可能な公開配列に基づいてインシリコで設計された生殖細胞配列から合成することができる。あるいは、細菌人工染色体（ＢＡＣ）ライブラリーから目的の免疫グロブリンＤＮＡ配列（例えば、ヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列、ならびにそれらの組み合わせ）を得ることができる。ＢＡＣライブラリーは、１００〜１５０ｋｂのサイズの挿入断片を含み得、３００ｋｂもの大きさの挿入断片を保有する能力を有する（Ｓｈｉｚｕｙａ，ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ ８９：８７９４−８７９７、Ｓｗｉａｔｅｋ，ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ７：２０７１−２０８４、Ｋｉｍ，ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ３４ ２１３−２１８（文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。例えば、保有挿入断片の平均サイズが１６４〜１９６ｋｂのヒトＢＡＣライブラリーについて記載されている（Ｏｓｏｅｇａｗａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１１（３）：４８３−９６、Ｏｓｏｅｇａｗａ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，１９９８，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ５２：１−８，Ａｒｔｉｃｌｅ Ｎｏ．ＧＥ９８５４２３（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。ヒト及びマウスのゲノムＢＡＣライブラリーが構築されており、商業的に利用可能である（例えば、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）。ゲノムＢＡＣライブラリーは、免疫グロブリンＤＮＡ配列に加えて、転写制御領域の供給源としても役立ち得るものである。
あるいは、免疫グロブリンＤＮＡ配列は、酵母人工染色体（ＹＡＣ）から単離、クローニング、及び／または導入され得る。例えば、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座のヌクレオチド配列が決定されている（例えば、Ｄｕｎｈａｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｎａｔｕｒｅ ４０２：４８９−９５（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。さらに、以前には、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座導入遺伝子をアセンブリするためにＹＡＣが用いられている（例えば、Ｐｏｐｏｖ，Ａ．Ｖ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｇｅｎｅ １７７：１９５−２０１、Ｐｏｐｏｖ，Ａ．Ｖ．ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９（１０）：１６１１−１９（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。Ｉｇλ軽鎖遺伝子座（ヒトまたはげっ歯類）全体をクローニングし、いくつかのＹＡＣ内に含めることができる。複数のＹＡＣが用いられ、それらのＹＡＣが、オーバーラップする類似領域を含むのであれば、それらのＹＡＣを酵母宿主株内で組換えることで、遺伝子座全体または遺伝子座の所望部分（例えば、標的化ベクターの標的となる領域）に相当する単一のコンストラクトを得ることができる。当該技術分野で知られ、及び／または本明細書に記載される方法による胚性幹細胞または胚へのコンストラクトの導入を支援するよう組み込まれた哺乳類の選択カセットを付加することによってＹＡＣアームに付加的な改変を施すことができる。
本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座の構築において使用するためのヒトＩｇλ軽鎖遺伝子セグメントのＤＮＡ配列及びアミノ酸配列は、公開データベース（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ、ＩＭＧＴなど）及び／または公開抗体配列から入手することができる。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子セグメントを含む核酸コンストラクトは、Ｊ領域（すなわち、複数の軽鎖Ｊ遺伝子セグメントを含むゲノム配列）を含み、このＪ領域は、ヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列をその対応１２ＲＳＳと共に含み、ヒトＪκ遺伝子セグメントのコード配列にその対応２３ＲＳＳと共に典型的には付随する非コード遺伝子間ＤＮＡの間に当該１２ＲＳＳが配置されている。
いくつかの実施形態では、そのような配列は、操作された軽鎖Ｊ領域と称され得る。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子セグメントを含む核酸コンストラクトは、ヒトＩｇλ軽鎖定常領域（Ｃλ）遺伝子または非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域（Ｃλ）遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子セグメントを含む核酸コンストラクトは、１つまたは複数の非ヒトＩｇκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）に機能可能なように連結されたヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子セグメントを含む核酸コンストラクトは、非ヒトＣλ領域遺伝子またはヒトＣλ領域遺伝子と非ヒトＩｇκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）とに機能可能なように連結されたヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列を含む核酸コンストラクトは、ヒト及び／またはネズミを起源とする遺伝子間ＤＮＡをさらに含む。いくつかの実施形態では、遺伝子間ＤＮＡは、ネズミ非コードＩｇκ軽鎖配列、ヒト非コードＩｇκ軽鎖配列、ネズミ非コードＩｇλ軽鎖配列、ヒト非コードＩｇλ軽鎖配列、もしくはそれらの組み合わせであるか、またはこれを含む。
核酸コンストラクトは、当該技術分野で知られる方法を使用して調製され得る。例えば、核酸コンストラクトは、より大きなプラスミドの一部として調製され得る。そのように調製することで、正しく構築されたものを当該技術分野で知られる効率的な様式でクローニング及び選択することが可能となる。ヒトＩｇλ軽鎖配列の全部または一部を本明細書に記載のように含む核酸コンストラクトは、プラスミド上の制限酵素作用部位の間に位置し得る結果、所望の非ヒト動物への組み込みを行うためのその他のプラスミド配列から単離すること可能である。
核酸コンストラクト（例えば、プラスミド）の調製及び宿主生物の形質転換において用いられる方法は、さまざまなものが当該技術分野で知られている。原核細胞及び真核細胞の両方のための他の適切な発現系、ならびに一般的な組換え手順については、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｇｅｎｅ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ：Ａｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ，５ｔｈ Ｅｄ．，ｅｄ．Ｂｙ Ｏｌｄ，Ｒ．Ｗ．ａｎｄ Ｓ．Ｂ．Ｐｒｉｍｒｏｓｅ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｉｎｃ．，１９９４ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ Ｅｄ．，ｅｄ．ｂｙ Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ：１９８９（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
標的化ベクター
ゲノムの標的遺伝子座への核酸コンストラクトの導入には標的化ベクターを用いることができ、こうした標的化ベクターは、核酸コンストラクトと、当該核酸コンストラクトに隣接するホモロジーアームと、を含む。標的化ベクターの設計、構造、及び／または使用に一般に適用可能なさまざまな選択肢及び特徴を当業者なら認識するであろう。例えば、標的化ベクターは、直鎖形態または環状形態をとり得、一本鎖または二本鎖であり得る。標的化ベクターは、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）であり得る。参照しやすいように、ホモロジーアームは、本明細書では５’（すなわち、上流）ホモロジーアーム及び３’（すなわち、下流）ホモロジーアームと称される。この用語法は、標的化ベクター内での核酸コンストラクトに対するホモロジーアームの相対位置に関する。５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームは、標的遺伝子座内の領域に対応するか、または別の標的化ベクター内の領域に対応し、これらの領域は、本明細書ではそれぞれ「５’標的配列」及び「３’標的配列」と称される。いくつかの実施形態では、ホモロジーアームは、５’標的配列または３’標的配列としても機能し得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法では、互いに組換えを生じさせる能力を有する２つ、３つ、または４つ以上の標的化ベクターが用いられる。さまざまな実施形態において、標的化ベクターは、本明細書の他の箇所に記載の大型標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）である。そのような実施形態では、第１の標的化ベクター、第２の標的化ベクター、及び第３の標的化ベクターは、それぞれが５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームを含む。第１の標的化ベクターの３’ホモロジーアームは、第２の標的化ベクターの５’ホモロジーアームとオーバーラップする配列（すなわち、オーバーラップ配列）を含み、これによって、第１のＬＴＶＥＣと第２のＬＴＶＥＣとの間での相同組換えが可能となる。
二重標的化法の場合、第１の標的化ベクターの５’ホモロジーアーム、及び第２の標的化ベクターの３’ホモロジーアームは、標的ゲノム遺伝子座内の対応セグメント（すなわち、標的配列）に類似し得、これによって、第１の標的化ベクター及び第２の標的化ベクターとゲノムの対応セグメントとの相同組換えが促進され、標的ゲノム遺伝子座が改変され得る。
三重標的化法の場合、第２の標的化ベクターの３’ホモロジーアームは、第３の標的化ベクターの５’ホモロジーアームとオーバーラップする配列（すなわち、オーバーラップ配列）を含み得、これによって、第２のＬＴＶＥＣと第３のＬＴＶＥＣとの間での相同組換えが可能となり得る。第１の標的化ベクターの５’ホモロジーアーム、及び第３の標的化ベクターの３’ホモロジーアームは、標的ゲノム遺伝子座内の対応セグメント（すなわち、標的配列）に類似しており、これによって、第１の標的化ベクター及び第３の標的化ベクターとゲノムの対応セグメントとの相同組換えが促進され、標的ゲノム遺伝子座が改変され得る。
ホモロジーアーム及び標的配列、または２つのホモロジーアームは、これらの２つの領域が、相同組換え反応の基質として働く上で十分なレベルの配列同一性を互いに共有するとき、互いに「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄ）」か、または「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ）」。所与の標的配列と、標的化ベクターに見られる対応ホモロジーアーム（すなわち、オーバーラップ配列）と、の間の配列同一性、または２つのホモロジーアームの間の配列同一性は、相同組換えを生じさせる任意の度合いの配列同一性であり得る。一例を挙げるにすぎないが、標的化ベクター（またはその断片）のホモロジーアームと、別の標的化ベクターの標的配列または標的ゲノム遺伝子座（もしくはその断片）の標的配列と、によって共有される量の配列同一性は、例えば、限定されないが、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の配列同一性であり得、その結果、これらの配列には、相同組換えが生じる。
さらに、ホモロジーアームと対応標的配列と間の対応類似性（例えば、同一性）領域は、標的ゲノム遺伝子座における相同組換えの促進に十分な任意の長さのものであり得る。例えば、所与のホモロジーアーム及び／または対応標的配列は、例えば、限定されないが、約５〜１０ｋｂ、約５〜１５ｋｂ、約５〜２０ｋｂ、約５〜２５ｋｂ、約５〜３０ｋｂ、約５〜３５ｋｂ、約５〜４０ｋｂ、約５〜４５ｋｂ、約５〜５０ｋｂ、約５〜５５ｋｂ、約５〜６０ｋｂ、約５〜６５ｋｂ、約５〜７０ｋｂ、約５〜７５ｋｂ、約５〜８０ｋｂ、約５〜８５ｋｂ、約５〜９０ｋｂ、約５〜９５ｋｂ、約５〜１００ｋｂ、約１００〜２００ｋｂ、または約２００〜３００ｋｂの長さの対応類似性領域（本明細書の他の箇所に記載のものなど）を含み得、その結果、ホモロジーアームは、細胞の標的ゲノム遺伝子座内の対応標的配列（複数可）、または別の標的化ベクター内の対応標的配列（複数可）、との相同組換えを受ける上で十分な類似性を有する。いくつかの実施形態では、所与のホモロジーアーム及び／または対応標的配列は、例えば、限定されないが、約１０〜１００ｋｂ、約１５〜１００ｋｂ、約２０〜１００ｋｂ、約２５〜１００ｋｂ、約３０〜１００ｋｂ、約３５〜１００ｋｂ、約４０〜１００ｋｂ、約４５〜１００ｋｂ、約５０〜１００ｋｂ、約５５〜１００ｋｂ、約６０〜１００ｋｂ、約６５〜１００ｋｂ、約７０〜１００ｋｂ、約７５〜１００ｋｂ、約８０〜１００ｋｂ、約８５〜１００ｋｂ、約９０〜１００ｋｂ、または約９５〜１００ｋｂの長さの対応類似性領域（本明細書の他の箇所に記載のものなど）を含み、その結果、ホモロジーアームは、細胞の標的ゲノム遺伝子座内の対応標的配列（複数可）、または別の標的化ベクター内の対応標的配列（複数可）、との相同組換えを受ける上で十分な類似性を有する。
第１の標的化ベクターの３’ホモロジーアームと第２の標的化ベクターの５’ホモロジーアームとのオーバーラップ配列、または第２の標的化ベクターの３’ホモロジーアームと第３の標的化ベクターの５’ホモロジーアームとのオーバーラップ配列は、当該標的化ベクターの間での相同組換えの促進に十分な任意の長さのものであり得る。例えば、ホモロジーアームの所与のオーバーラップ配列は、約１〜５ｋｂ、約５〜１０ｋｂ、約５〜１５ｋｂ、約５〜２０ｋｂ、約５〜２５ｋｂ、約５〜３０ｋｂ、約５〜３５ｋｂ、約５〜４０ｋｂ、約５〜４５ｋｂ、約５〜５０ｋｂ、約５〜５５ｋｂ、約５〜６０ｋｂ、約５〜６５ｋｂ、約５〜７０ｋｂ、約５〜７５ｋｂ、約５〜８０ｋｂ、約５〜８５ｋｂ、約５〜９０ｋｂ、約５〜９５ｋｂ、約５〜１００ｋｂ、約１００〜２００ｋｂ、または約２００〜３００ｋｂの長さの対応オーバーラップ領域を含み得、その結果、ホモロジーアームのオーバーラップ配列は、別の標的化ベクター内の対応オーバーラップ配列との相同組換えを受ける上で十分な類似性を有する。いくつかの実施形態では、ホモロジーアームの所与のオーバーラップ配列は、約１〜１００ｋｂ、約５〜１００ｋｂ、約１０〜１００ｋｂ、約１５〜１００ｋｂ、約２０〜１００ｋｂ、約２５〜１００ｋｂ、約３０〜１００ｋｂ、約３５〜１００ｋｂ、約４０〜１００ｋｂ、約４５〜１００ｋｂ、約５０〜１００ｋｂ、約５５〜１００ｋｂ、約６０〜１００ｋｂ、約６５〜１００ｋｂ、約７０〜１００ｋｂ、約７５〜１００ｋｂ、約８０〜１００ｋｂ、約８５〜１００ｋｂ、約９０〜１００ｋｂ、または約９５〜１００ｋｂの長さのオーバーラップ領域を含み、その結果、ホモロジーアームのオーバーラップ配列は、別の標的化ベクター内の対応オーバーラップ配列との相同組換えを受ける上で十分な類似性を有する。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、１〜５ｋｂ（両端値を含む）のものである。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、約１ｋｂ〜約７０ｋｂ（両端値を含む）のものである。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、約１０ｋｂ〜約７０ｋｂ（両端値を含む）のものである。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、約１０ｋｂ〜約５０ｋｂ（両端値を含む）のものである。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、少なくとも１０ｋｂのものである。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、少なくとも２０ｋｂのものである。例えば、オーバーラップ配列は、約１ｋｂ〜約５ｋｂ（両端値を含む）、約５ｋｂ〜約１０ｋｂ（両端値を含む）、約１０ｋｂ〜約１５ｋｂ（両端値を含む）、約１５ｋｂ〜約２０ｋｂ（両端値を含む）、約２０ｋｂ〜約２５ｋｂ（両端値を含む）、約２５ｋｂ〜約３０ｋｂ（両端値を含む）、約３０ｋｂ〜約３５ｋｂ（両端値を含む）、約３５ｋｂ〜約４０ｋｂ（両端値を含む）、約４０ｋｂ〜約４５ｋｂ（両端値を含む）、約４５ｋｂ〜約５０ｋｂ（両端値を含む）、約５０ｋｂ〜約６０ｋｂ（両端値を含む）、約６０ｋｂ〜約７０ｋｂ（両端値を含む）、約７０ｋｂ〜約８０ｋｂ（両端値を含む）、約８０ｋｂ〜約９０ｋｂ（両端値を含む）、約９０ｋｂ〜約１００ｋｂ（両端値を含む）、約１００ｋｂ〜約１２０ｋｂ（両端値を含む）、約１２０ｋｂ〜約１４０ｋｂ（両端値を含む）、約１４０ｋｂ〜約１６０ｋｂ（両端値を含む）、約１６０ｋｂ〜約１８０ｋｂ（両端値を含む）、約１８０ｋｂ〜約２００ｋｂ（両端値を含む）、約２００ｋｂ〜約２２０ｋｂ（両端値を含む）、約２２０ｋｂ〜約２４０ｋｂ（両端値を含む）、約２４０ｋｂ〜約２６０ｋｂ（両端値を含む）、約２６０ｋｂ〜約２８０ｋｂ（両端値を含む）、または約２８０ｋｂ〜約３００ｋｂ（両端値を含む）のものであり得る。一例を挙げるにすぎないが、オーバーラップ配列は、約２０ｋｂ〜約６０ｋｂ（両端値を含む）のものであり得る。あるいは、オーバーラップ配列は、少なくとも１ｋｂ、少なくとも５ｋｂ、少なくとも１０ｋｂ、少なくとも１５ｋｂ、少なくとも２０ｋｂ、少なくとも２５ｋｂ、少なくとも３０ｋｂ、少なくとも３５ｋｂ、少なくとも４０ｋｂ、少なくとも４５ｋｂ、少なくとも５０ｋｂ、少なくとも６０ｋｂ、少なくとも７０ｋｂ、少なくとも８０ｋｂ、少なくとも９０ｋｂ、少なくとも１００ｋｂ、少なくとも１２０ｋｂ、少なくとも１４０ｋｂ、少なくとも１６０ｋｂ、少なくとも１８０ｋｂ、少なくとも２００ｋｂ、少なくとも２２０ｋｂ、少なくとも２４０ｋｂ、少なくとも２６０ｋｂ、少なくとも２８０ｋｂ、または少なくとも３００ｋｂのものであり得る。いくつかの実施形態では、オーバーラップ配列は、最大で４００ｋｂ、最大で３５０ｋｂ、最大で３００ｋｂ、最大で２８０ｋｂ、最大で２６０ｋｂ、最大で２４０ｋｂ、最大で２２０ｋｂ、最大で２００ｋｂ、最大で１８０ｋｂ、最大で１６０ｋｂ、最大で１４０ｋｂ、最大で１２０ｋｂ、最大で１００ｋｂ、最大で９０ｋｂ、最大で８０ｋｂ、最大で７０ｋｂ、最大で６０ｋｂ、または最大で５０ｋｂのものであり得る。
ホモロジーアームは、いくつかの実施形態では、細胞にとって自己起源の遺伝子座（例えば、標的遺伝子座）に対応するか、あるいは細胞のゲノムに組み込まれた異種または外来性のＤＮＡセグメントの一領域（例えば、導入遺伝子、発現カセット、または異種もしくは外来性のＤＮＡ領域が挙げられる）に対応し得る。いくつかの実施形態では、ホモロジーアームは、いくつかの実施形態では、細胞における標的化ベクター上の一領域に対応する。いくつかの実施形態では、標的化ベクターのホモロジーアームは、酵母人工染色体（ＹＡＣ）の一領域、細菌人工染色体（ＢＡＣ）の一領域、ヒト人工染色体の一領域、または適切な宿主細胞に含められた任意の他の操作された領域に対応し得る。さらに別の場合、標的化ベクターのホモロジーアームは、ＢＡＣライブラリー、コスミドライブラリー、またはＰ１ファージライブラリーの一領域に対応し得るか、または当該一領域に由来し得る。いくつかのある特定の実施形態では、標的化ベクターのホモロジーアームは、原核生物、酵母、鳥類（例えば、ニワトリ）、非ヒト哺乳類、げっ歯類、ヒト、ラット、マウス、ハムスター、ウサギ、ブタ、ウシ、シカ、ヒツジ、ヤギ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）、家畜化哺乳類、農業哺乳類、または任意の他の目的生物にとって自己起源、異種、または外来性の遺伝子座に対応する。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ物質（例えば、Ｃａｓタンパク質）によって誘導されるニックまたは二本鎖切断が存在しなければ、通常の方法を使用する標的化に対する感受性が限られているか、あるいは標的部位に対する良好な組み込みが生じるレベルが相対的に低く、及び／またはオフターゲット組み込みが顕著なレベルで生じる細胞の遺伝子座にホモロジーアームが対応する。いくつかの実施形態では、ホモロジーアームは、操作されたＤＮＡを含むように設計される。
いくつかの実施形態では、標的化ベクター（複数可）の５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームは、標的ゲノムに対応する。あるいは、ホモロジーアームは、関連ゲノムに対応する。例えば、標的ゲノムは、第１の系統のマウスゲノムであり、標的化アームは、第２の系統のマウスゲノムに対応し、第１の系統と第２の系統とは異なる。ある特定の実施形態では、ホモロジーアームは、同じ動物のゲノムに対応するか、または同じ系統のゲノムに由来し、例えば、標的ゲノムは、第１の系統のマウスゲノムであり、標的化アームは、同じマウスまたは同じ系統に由来するマウスゲノムに対応する。
標的化ベクターのホモロジーアームは、対応標的配列との相同組換え事象の促進に十分な任意の長さのものであり得、こうした長さの例としては、例えば、１〜５ｋｂ（両端値を含む）、５〜１０ｋｂ（両端値を含む）、５〜１５ｋｂ（両端値を含む）、５〜２０ｋｂ（両端値を含む）、５〜２５ｋｂ（両端値を含む）、５〜３０ｋｂ（両端値を含む）、５〜３５ｋｂ（両端値を含む）、５〜４０ｋｂ（両端値を含む）、５〜４５ｋｂ（両端値を含む）、５〜５０ｋｂ（両端値を含む）、５〜５５ｋｂ（両端値を含む）、５〜６０ｋｂ（両端値を含む）、５〜６５ｋｂ（両端値を含む）、５〜７０ｋｂ（両端値を含む）、５〜７５ｋｂ（両端値を含む）、５〜８０ｋｂ（両端値を含む）、５〜８５ｋｂ（両端値を含む）、５〜９０ｋｂ（両端値を含む）、５〜９５ｋｂ（両端値を含む）、５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、１００〜２００ｋｂ（両端値を含む）、または２００〜３００ｋｂ（両端値を含む）の長さが挙げられる。いくつかの実施形態では、標的化ベクターのホモロジーアームは、１〜１００ｋｂ（両端値を含む）、５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、１０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、１５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、２０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、２５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、３０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、３５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、４０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、４５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、５０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、５５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、６０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、６５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、７０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、７５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、８０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、８５〜１００ｋｂ（両端値を含む）、９０〜１００ｋｂ（両端値を含む）、または９５〜１００ｋｂ（両端値を含む）の長さを有する対応標的配列との相同組換え事象の促進に十分な長さを有する。本明細書に記載のように、大型標的化ベクターでは、より長い標的化アームを用いることができる。
標的遺伝子座の改変（例えば、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座の改変、または既に改変または操作されているＩｇκ軽鎖遺伝子座の改変）を促進するためにヌクレアーゼ物質（例えば、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系）を標的化ベクターと併用することができる。そのようなヌクレアーゼ物質は、標的化ベクターと標的遺伝子座との間の相同組換えを促進し得る。ヌクレアーゼ物質が標的化ベクターと併用される場合、ヌクレアーゼ切断可能部位にニックまたは二本鎖切断が生じたときに標的配列とホモロジーアームとの間での相同組換え事象の発生が促進されるようにヌクレアーゼ切断可能部位に十分に近接して位置する５’標的配列及び３’標的配列に対応する５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームを標的化ベクターが含み得る。「ヌクレアーゼ切断可能部位」という用語は、ヌクレアーゼ物質によってニックまたは二本鎖切断が創出されるＤＮＡ配列（例えば、Ｃａｓ９切断可能部位）を含む。標的化ベクターの５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームに対応する標的遺伝子座内の標的配列は、認識部位においてニックまたは二本鎖切断が生じたときに５’標的配列及び３’標的配列と５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームとの間での相同組換え事象の発生が促進されるような距離となっていれば、ヌクレアーゼ切断可能部位に「十分に近接して位置する」。したがって、ある特定の実施形態では、標的化ベクターの５’ホモロジーアーム及び／または３’ホモロジーアームに対応する標的配列は、所与の認識部位から少なくとも１ヌクレオチド以内に位置するか、または所与の認識部位から少なくとも１０ヌクレオチド〜約１４ｋｂ以内に位置する。いくつかの実施形態では、ヌクレアーゼ切断可能部位は、標的配列の少なくとも一方または両方に直接隣接する。
標的化ベクターのホモロジーアームに対応する標的配列とヌクレアーゼ切断可能部位との間の空間的な関係性は異なり得る。例えば、標的配列は、ヌクレアーゼ切断可能部位に対して５’側に位置し得るか、標的配列は、認識部位に対して３’側に位置し得るか、または標的配列は、ヌクレアーゼ切断可能部位に隣接し得る。
標的化ベクター（例えば、大型標的化ベクターが挙げられる）をヌクレアーゼ物質と併用することで、標的化ベクターの単独使用時と比較して標的化効率が向上し得る。例えば、標的化ベクターが、ヌクレアーゼ物質と併用されると、標的化ベクターの標的化効率が、標的化ベクターの単独使用時と比較して少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、またはこれらの整数から形成される範囲内（２〜１０倍など）に向上し得る。
標的化ベクターによっては、「大型標的化ベクター」または「ＬＴＶＥＣ」であり、こうした標的化ベクターには、細胞における相同組換えの実施が意図される他の手法によって典型的には使用されるものと比較して大きな核酸配列に対応するホモロジーアームを含む標的化ベクター、及び当該大きな核酸配列に由来するホモロジーアームを含む標的化ベクター、が含まれる。ＬＴＶＥＣは、例えば、長さが少なくとも１０ｋｂのものであり得るか、または５’ホモロジーアームと３’ホモロジーアームとの合計の長さは、例えば、少なくとも１０ｋｂであり得る。ＬＴＶＥＣには、細胞における相同組換えの実施が意図される他の手法によって典型的には使用されるものと比較して大きな核酸コンストラクトを含む標的化ベクターも含まれる。例えば、従来のプラスミドベースの標的化ベクターではその収容サイズ限界のために収容することが不可能な大きな遺伝子座でも、ＬＴＶＥＣを使用すれば改変することが可能となる。例えば、標的遺伝子座は、ヌクレアーゼ物質（例えば、Ｃａｓタンパク質）によって誘導されるニックまたは二本鎖切断が存在しなければ、通常の方法を使用して標的化することが不可能であるか、または不正確にしか標的化できないか、もしくは標的化の効率がかなり低いものにとどまり得る細胞の遺伝子座であり得る（すなわち、５’ホモロジーアーム及び３’ホモロジーアームは、こうした遺伝子座に対応し得る）。
いくつかの実施形態では、３つまたは４つの要素が関与する組換え事象において、互いの組換えに加えて標的ゲノム遺伝子座との組換えも生じさせる能力を有する２つまたは３つのＬＴＶＥＣが、本明細書に記載の方法において用いられる。そのような方法では、単一のＬＴＶＥＣを使用したのでは達成することが不可能な大きな遺伝子座の改変を行うことが可能となる。
ＬＴＶＥＣの例としては、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、ヒト人工染色体、または酵母人工染色体（ＹＡＣ）に由来するベクターが挙げられる。ＬＴＶＥＣは、直鎖形態または環状形態をとり得る。ＬＴＶＥＣ及びその調製方法の例は、例えば、米国特許第６，５８６，２５１号、同第６，５９６，５４１号、及び同第７，１０５，３４８号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２００２／０３６７８９号に記載されており、これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、及び非ヒト組織
ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座の少なくとも一部（すなわち、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも一部）に対応し、ヒトＶλドメイン（すなわち、再構成されたヒトＶλ−Ｊλ配列）をコードする遺伝物質が組み込まれることで生じるヒトＶλドメインを含む軽鎖を含む抗体を発現する（例えば、自体のＢ細胞が当該抗体を発現する）非ヒト動物であって、当該遺伝物質が、対応する非ヒトＩｇκ軽鎖可変領域配列の代わりに自体の生殖細胞ゲノムに存在する非ヒト動物が提供される。本明細書に記載の適切な例としては、限定されないが、げっ歯類、具体的にはマウスが挙げられる。
本開示は、例えば、ヒトが患うさまざまな疾患の治療において、使用可能な新たな抗体、抗体構成要素（例えば、抗原結合部分及び／またはそれを含む組成もしくは形式）、及び／または抗体ベースの治療剤を同定及び開発するための改良型のインビボ系を提供する。さらに、本開示は、操作された免疫グロブリン遺伝子座（操作された免疫グロブリン（Ｉｇ）カッパ（κ）軽鎖遺伝子座など）を有し、及び／またはその他の状況の下で、ヒトＶラムダ（λ）領域を軽鎖が有することによって特徴付けられる抗体レパートリーを発現、産生、もしくは含有する非ヒト動物（例えば、げっ歯類）が有用であるという認識も包含する。例えば、いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物は、新たな抗体ベースの治療剤の同定及び開発においてヒトＶλ配列の多様性を利用する上で有用であり得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒトに投与するための抗体及び／または抗体ベースの治療剤を開発するための改良型のインビボ系を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒトＶλ領域配列を含む現存インビボ系から得られる抗体及び／または抗体ベースの治療剤と比較して性能（例えば、抗原特異的抗体レパートリーの発現及び／または出現）が改良されていることによって特徴付けられるヒトＶλドメイン含有抗体及び／またはヒトＶλドメイン含有抗体ベースの治療剤を開発するための改良型のインビボ系を提供する。
本開示は、とりわけ、操作された免疫グロブリン軽鎖可変領域及び操作された免疫グロブリン軽鎖定常領域遺伝子を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座を有する非ヒト動物を提供する。本明細書に記載のように、提供される非ヒト動物は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することによって特徴付けられる操作された免疫グロブリンκ軽鎖可変領域を含む免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含み、当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、免疫グロブリンλ軽鎖定常領域（Ｃλ）遺伝子に機能可能なように連結され、当該免疫グロブリンλ軽鎖定常領域（Ｃλ）遺伝子は、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域（Ｃκ）遺伝子の代わりに当該非ヒト動物の内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座に配置される。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、起源が免疫グロブリンλ軽鎖及び／または免疫グロブリンκ軽鎖ならびにそれらの組み合わせである遺伝子間ＤＮＡを含むＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む。
多くの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖可変領域は、当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に配置または挿入された免疫グロブリンκ軽鎖配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に配置または挿入された当該免疫グロブリンκ軽鎖配列は、ネズミ（例えば、ラットもしくはマウス）配列であるか、またはネズミ（例えば、ラットもしくはマウス）配列を含む。いくつかの実施形態では、当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に配置または挿入された当該免疫グロブリンκ軽鎖配列は、ヒト配列であるか、またはヒト配列を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列は、天然ではヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られるゲノム配列であるか、または当該ゲノム配列を含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、少なくとも５つ、少なくとも６つ、少なくとも７つ、少なくとも８つ、少なくとも９つ、少なくとも１０個、少なくとも１１個、少なくとも１２個、少なくとも１３個、少なくとも１４個、少なくとも１５個、少なくとも１６個、少なくとも１７個、少なくとも１８個、少なくとも１９個、少なくとも２０個、少なくとも２１個、少なくとも２２個、少なくとも２３個、少なくとも２４個、または少なくとも２５個の機能性のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、５〜２５個、５〜２４個、５〜２３個、５〜２２個、５〜２１個、５〜２０個、５〜１９個、５〜１８個、５〜１７個、５〜１６個、５〜１５個、５〜１４個、５〜１３個、５〜１２個、５〜１１個、５〜１０個、５〜９つ、５〜８つ、５〜７つ、または５〜６つの機能性のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、６〜２５個、７〜２５個、８〜２５個、９〜２５個、１０〜２５個、１１〜２５個、１２〜２５個、１３〜２５個、１４〜２５個、１５〜２５個、１６〜２５個、１７〜２５個、１８〜２５個、１９〜２５個、２０〜２５個、２１〜２５個、２２〜２５個、２３〜２５個、または２４〜２５個の機能性のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、６〜２４個、７〜２３個、８〜２２個、９〜２１個、１０〜２０個、１１〜１９個、１２〜１８個、１３〜１７個、１４〜１６個、または１５〜１６個の機能性のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、６〜２４個、７〜２３個、８〜２２個、９〜２１個、１０〜２０個、１１〜１９個、１２〜１８個、１３〜１７個、または１４〜１６個の機能性のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、全部で１０〜７０個、１０〜６５個、１０〜６０個、１０〜５５個、１０〜５０個、１０〜４５個、１０〜４０個、１０〜３５個、１０〜３０個、１０〜２５個、１０〜２０個、または１０〜１５個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、全部で１５〜７０個、２０〜７０個、２５〜７０個、３０〜７０個、３５〜７０個、４０〜７０個、４５〜７０個、５０〜７０個、５５〜７０個、６０〜７０個、または６５〜７０個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、全部で１５〜６５個、２０〜６０個、２５〜５５個、２０〜５０個、２５〜４５個、３０〜４０個、３０〜３５個、または３５〜４０個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、天然または生殖細胞における配置を有するヒトＶλ遺伝子セグメント及び／またはヒトＪλ遺伝子セグメント（例えば、ヒト非コード免疫グロブリンλ軽鎖配列が間に存在する複数のヒトＶλ遺伝子セグメントコード配列及び／またはヒトＪλ遺伝子セグメントコード配列を含むＤＮＡ配列）を含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、天然もしくは生殖細胞における配置とははずれた配置または天然もしくは生殖細胞における配置から逸脱した配置を有するヒトＶλ遺伝子セグメント及び／またはヒトＪλ遺伝子セグメント（例えば、非コード免疫グロブリンκ軽鎖配列（例えば、ヒトまたはネズミ）が間に存在する複数のヒトＶλ遺伝子セグメントコード配列及び／またはヒトＪλ遺伝子セグメントコード配列を含むＤＮＡ配列）を含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、天然ではヒト細胞の生殖細胞ゲノムのヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座に見られない配置を有するヒトＶλ遺伝子セグメント及び／またはヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト非コード免疫グロブリン軽鎖配列（例えば、κ、λ、及びそれらの組み合わせ）が間に存在する（または並置される、付随するなどする）複数のヒトＶλコード配列及びヒトＪλコード配列を含むＤＮＡ配列を内在性の非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座に含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、非ヒト（例えば、ネズミ）非コード免疫グロブリンλ軽鎖配列が間に存在する複数のヒトＶλコード配列及びヒトＪλコード配列を含むＤＮＡ配列を内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、当該非ヒト動物の生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から抗体が発現することによって特徴付けられ、当該抗体は、（１）ヒトＶλドメインと、（２）非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインと、を含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、１匹または複数匹の操作された参照非ヒト動物と比較して、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座からのヒトＶλ領域の利用度が（例えば、限定されないが、約２倍に）改良されていることによって特徴付けられる。
いくつかの実施形態では、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織が提供され、当該内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、（ｃ）Ｃλ遺伝子と、を含み、（ａ）と（ｂ）とは、（ｃ）に機能可能なように連結され、当該げっ歯類は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及びＣλ遺伝子の挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織が提供され、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、当該Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該Ｃλ遺伝子は、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに当該内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される。非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態の多くでは、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入されるＣλ遺伝子は、非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子である。いくつかの実施形態では、非ヒトＣλ遺伝子は、霊長類Ｃλ遺伝子、ヤギＣλ遺伝子、ヒツジＣλ遺伝子、ブタＣλ遺伝子、イヌＣλ遺伝子、雌ウシＣλ遺伝子、またはげっ歯類Ｃλ遺伝子からなる群から選択される哺乳類Ｃλ遺伝子であるか、または当該哺乳類Ｃλ遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、非ヒトＣλ遺伝子は、げっ歯類Ｃλ遺伝子であるか、またはげっ歯類Ｃλ遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、マウスＣλ遺伝子であるか、またはマウスＣλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１、マウスＣλ２、及びマウスＣλ３からなる群から選択されるマウスＣλ遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１、マウスＣλ２、及びマウスＣλ３からなる群から選択されるマウスＣλ遺伝子と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、マウスＣλ１遺伝子は、配列番号１であるか、または配列番号１を含む。いくつかのある特定の実施形態では、マウスＣλ２遺伝子は、配列番号３であるか、または配列番号３を含む。いくつかのある特定の実施形態では、マウスＣλ３遺伝子は、配列番号５であるか、または配列番号５を含む。いくつかのある特定の実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子と同一の配列を含む。
いくつかの実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１、マウスＣλ２、及びマウスＣλ３からなる群から選択されるマウスＣλ遺伝子との同一性が８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、または９８％〜１００％である配列を含む。いくつかの実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１、マウスＣλ２、及びマウスＣλ３からなる群から選択されるマウスＣλ遺伝子との同一性が８０％〜９８％、８０％〜９５％、８０％〜９０％、または８０％〜８５％である配列を含む。いくつかの実施形態では、マウスＣλ遺伝子は、マウスＣλ１、マウスＣλ２、及びマウスＣλ３からなる群から選択されるマウスＣλ遺伝子との同一性が８５％〜９８％、９０％〜９５％、または８８％〜９３％である配列を含む。
いくつかの実施形態では、げっ歯類Ｃλ遺伝子は、ラットＣλ遺伝子であるか、またはラットＣλ遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、及びラットＣλ４遺伝子からなる群から選択されるラットＣλ遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、及びラットＣλ４遺伝子からなる群から選択されるラットＣλ遺伝子と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ラットＣλ１遺伝子は、配列番号７であるか、または配列番号７を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ラットＣλ２遺伝子は、配列番号９であるか、または配列番号９を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ラットＣλ３遺伝子は、配列番号１１であるか、または配列番号１１を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ラットＣλ４遺伝子は、配列番号１３であるか、または配列番号１３を含む。
いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、及びラットＣλ４遺伝子からなる群から選択されるラットＣλ遺伝子との同一性が８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、または９８％〜１００％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、及びラットＣλ４遺伝子からなる群から選択されるラットＣλ遺伝子との同一性が８０％〜９８％、８０％〜９５％、８０％〜９０％、または８０％〜８５％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ラットＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、及びラットＣλ４遺伝子からなる群から選択されるラットＣλ遺伝子との同一性が８５％〜９８％、９０％〜９５％、または８８％〜９３％である配列を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子と同一の配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ１遺伝子は、配列番号１５であるか、または配列番号１５を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ２遺伝子は、配列番号１７であるか、または配列番号１７を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ３遺伝子は、配列番号１９であるか、または配列番号１９を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ６遺伝子は、配列番号２１であるか、または配列番号２１を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ７遺伝子は、配列番号２３であるか、または配列番号２３を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ２遺伝子であるか、またはヒトＣλ２遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子との同一性が８０％〜１００％、８５％〜１００％、９０％〜１００％、９５％〜１００％、または９８％〜１００％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子との同一性が８０％〜９８％、８０％〜９５％、８０％〜９０％、または８０％〜８５％である配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、及びヒトＣλ７遺伝子からなる群から選択されるヒトＣλ遺伝子との同一性が８５％〜９８％、９０％〜９５％、または８８％〜９３％である配列を含む。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントを挿入することによって、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における非ヒトＶκ遺伝子セグメント及び非ヒトＪκ遺伝子セグメントが代替される。いくつかの実施形態では、挿入は、ヒトＶλ遺伝子セグメントの間及びヒトＪλ遺伝子セグメントの間、ならびにそれらの組み合わせの間に天然では見られるヒト非コードＤＮＡを含む。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントを挿入することによって、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における非ヒトＶκ遺伝子セグメント及び非ヒトＪκ遺伝子セグメントの代わりにされるか、またはこれらの遺伝子セグメントが代替される。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、少なくとも２４個、少なくとも３４個、少なくとも５２個、少なくとも６１個、または少なくとも７０個のヒトＶλ遺伝子セグメントと、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのヒトＪλ遺伝子セグメントと、の挿入を含む。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織のある特定の実施形態のいくつかでは、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、３９個のヒトＶλ遺伝子セグメントと、少なくとも５つのヒトＪλ遺伝子セグメントと、の挿入を含む。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせと、ヒトＪＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７、またはそれらの任意の組み合わせと、の挿入を含む。いくつかの実施形態では、挿入は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、またはヒトＶλ３−１に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、またはヒトＪλ７に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡ（の全部または一部）と、を含む。いくつかのある特定の実施形態では、挿入は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、またはヒトＶλ３−１に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、天然では内在性のヒトκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１、ヒトＪκ２、ヒトＪκ３、ヒトＪκ４、またはヒトＪκ５に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせの挿入は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、またはヒトＶλ３−１に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含み、ヒトＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７、またはそれらの任意の組み合わせの挿入は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡ（の全部または一部）を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせの挿入は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、またはヒトＶλ３−１に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含み、ヒトＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７、またはそれらの任意の組み合わせの挿入は、天然では内在性のヒトκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１、ヒトＪκ２、ヒトＪκ３、ヒトＪκ４、またはヒトＪκ５に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡ（の全部または一部）を含む。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、本明細書に記載の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの間、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの間、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間、ならびにそれらの組み合わせにヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列をさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列は、天然ではヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られるゲノム配列であるか、または当該ゲノム配列を含む。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、当該非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の生殖細胞ゲノムは、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座をさらに含み、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを挿入することによって、非ヒトＶＨ遺伝子セグメント、非ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び非ヒトＪＨ遺伝子セグメントの全部もしくは一部の代わりにされるか、または当該全部もしくは一部が代替される（例えば、当該挿入によって、ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントのコード配列で非ヒトＶＨ遺伝子セグメント、非ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び非ヒトＪＨ遺伝子セグメントのコード配列が位置的に代替または置換される）。いくつかのある特定の実施形態では、挿入は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントの間、ヒトＤＨ遺伝子セグメントの間、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントの間、ならびにそれらの組み合わせの間に天然では見られるヒト非コードＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域は、内在性の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域であるか、または内在性の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域を含む。多くの実施形態では、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域（例えば、内在性のもの）は、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子または非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子セグメント（例えば、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＡなど）を含む。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントであるＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせと、ヒトＤＨ遺伝子セグメントであるＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせと、ヒトＪＨ遺伝子セグメントであるＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせと、の挿入を含む。いくつかのある特定の実施形態では、挿入は、天然では内在性の重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ３−７４、ヒトＶＨ３−７３、ヒトＶＨ３−７２、ヒトＶＨ２−７０、ヒトＶＨ１−６９、ヒトＶＨ３−６６、ヒトＶＨ３−６４、ヒトＶＨ４−６１、ヒトＶＨ４−５９、ヒトＶＨ１−５８、ヒトＶＨ３−５３、ヒトＶＨ５−５１、ヒトＶＨ３−４９、ヒトＶＨ３−４８、ヒトＶＨ１−４６、ヒトＶＨ１−４５、ヒトＶＨ３−４３、ヒトＶＨ４−３９、ヒトＶＨ４−３４、ヒトＶＨ３−３３、ヒトＶＨ４−３１、ヒトＶＨ３−３０、ヒトＶＨ４−２８、ヒトＶＨ２−２６、ヒトＶＨ１−２４、ヒトＶＨ３−２３、ヒトＶＨ３−２１、ヒトＶＨ３−２０、ヒトＶＨ１−１８、ヒトＶＨ３−１５、ヒトＶＨ３−１３、ヒトＶＨ３−１１、ヒトＶＨ３−９、ヒトＶＨ１−８、ヒトＶＨ３−７、ヒトＶＨ２−５、ヒトＶＨ７−４−１、ヒトＶＨ４−４、ヒトＶＨ１−３、ヒトＶＨ１−２、またはヒトＶＨ６−１に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、天然ではヒトＤＨ１−１、ヒトＤＨ２−２、ヒトＤＨ３−３、ヒトＤＨ４−４、ヒトＤＨ５−５、ヒトＤＨ６−６、ヒトＤＨ１−７、ヒトＤＨ２−８、ヒトＤＨ３−９、ヒトＤＨ３−１０、ヒトＤＨ５−１２、ヒトＤＨ６−１３、ヒトＤＨ２−１５、ヒトＤＨ３−１６、ヒトＤＨ４−１７、ヒトＤＨ６−１９、ヒトＤＨ１−２０、ヒトＤＨ２−２１、ヒトＤＨ３−２２、ヒトＤＨ６−２５、ヒトＤＨ１−２６、またはヒトＤＨ７−２７に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、天然では内在性の重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ１、ヒトＪＨ２、ヒトＪＨ３、ヒトＪＨ４、ヒトＪＨ５、またはヒトＪＨに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡと、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、自体のゲノム（例えば、自体の生殖細胞ゲノム）にＡｄａｍ６遺伝子を含み、当該Ａｄａｍ６遺伝子は、ＡＤＡＭ６ポリペプチド、ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、ＡＤＡＭ６ポリペプチド、ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片は、Ａｄａｍ６遺伝子から発現する。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子の起源は、Ａｄａｍ６遺伝子を含む非ヒト動物とは異なる（例えば、マウスが、ラットＡｄａｍ６遺伝子を含むか、または別の系統のマウスから得られるマウスＡｄａｍ６遺伝子を含む）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、異所性Ａｄａｍ６遺伝子を含む。本明細書で使用される「異所性」Ａｄａｍ６遺伝子は、Ａｄａｍ６遺伝子が野生型の非ヒト動物に見られる状況とは異なる状況の下にあるＡｄａｍ６遺伝子を指す。例えば、Ａｄａｍ６遺伝子は、異なる染色体に位置するか、異なる遺伝子座に位置するか、または異なる配列に隣接して配置され得る。異所性Ａｄａｍ６遺伝子の例は、ヒト免疫グロブリン配列（例えば、ヒト重鎖可変領域遺伝子セグメント）内に位置するマウスＡｄａｍ６遺伝子である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、挿入または組み込まれたＡｄａｍ６遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の非ヒトＡｄａｍ６ポリペプチド、非ヒトＡｄａｍ６機能性オルソログ、非ヒトＡｄａｍ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列の挿入を自体のゲノム（例えば、自体の生殖細胞ゲノム）に含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を自体のゲノム（例えば、自体の生殖細胞ゲノム）に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、マウスＡｄａｍ６ａ遺伝子及び／またはマウスＡｄａｍ６ｂ遺伝子を自体のゲノム（例えば、自体の生殖細胞ゲノム）に含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数のヌクレオチド配列（マウスＡＤＡＭ６ａ、マウスＡＤＡＭ６ａ機能性オルソログ、マウスＡＤＡＭ６ａ機能性ホモログ、もしくはその機能性断片、及び／またはマウスＡＤＡＭ６ｂ、マウスＡＤＡＭ６ｂ機能性オルソログ、マウスＡＤＡＭ６ｂ機能性ホモログ、もしくはその機能性断片）を含む。
いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体に挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列がヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントと近接するような位置に挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列がヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントに隣接するような位置に挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列がヒト免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子セグメントの間に位置するような位置に挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ヒトＶＨ１−２であり、第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントは、ヒトＶＨ６−１である。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに挿入され、及び／または位置する。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の非ヒトＡＤＡＭ６ポリペプチド、非ヒトＡＤＡＭ６機能性オルソログ、非ヒトＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に挿入される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ＡＤＡＭ６活性を回復または増強するＡｄａｍ６遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子は、機能性の内在性Ａｄａｍ６遺伝子を含む同等の非ヒト動物のレベルにまでＡＤＡＭ６活性を回復させる。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子は、機能性のＡｄａｍ６遺伝子を含まない同等の非ヒト動物のＡＤＡＭ６活性の少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍のレベルにまでＡＤＡＭ６活性を増強する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、雄性非ヒト動物における妊孕性を回復または増強するＡｄａｍ６遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子は、機能性の内在性Ａｄａｍ６遺伝子を含む同等の非ヒト動物のレベルにまで雄性非ヒト動物の妊孕性を回復させる。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子は、雄性非ヒト動物を交配させることによって産まれる仔の数が、機能性のＡｄａｍ６遺伝子を含まない同等の雄性非ヒト動物を同等に交配させることによって産まれる仔の数の少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％となるように雄性非ヒト動物の妊孕性を回復させる。いくつかの実施形態では、Ａｄａｍ６遺伝子は、雄性非ヒト動物を交配させることによって産まれる仔の数が、機能性のＡｄａｍ６遺伝子を含まない同等の雄性非ヒト動物を同等に交配させることによって産まれる仔の数の少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、または少なくとも１０倍となるように雄性非ヒト動物の妊孕性を増強する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、少なくとも１つの内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子を含まない。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子を含まないことで、内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子を含まない雄性マウスのＡＤＡＭ６活性及び／または妊孕性が低下する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、少なくとも１つの内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子の破壊を含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つの内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子が破壊されることで、内在性の非ヒトＡｄａｍ６遺伝子を含まない雄性マウスのＡＤＡＭ６活性及び／または妊孕性が低下する。
非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、本明細書に記載の内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型またはヘテロ接合型である。
非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、本明細書に記載の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型またはヘテロ接合型である。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座は、その全部または一部が欠失される。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の実施形態のいくつかでは、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座は、機能的にサイレンシングされるか、またはその他の様式で非機能化される（例えば、遺伝子標的化によって非機能化される）。提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織のある特定の実施形態のいくつかでは、非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、機能的サイレンシングまたはその他の様式での非機能化が行われた本明細書に記載の内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型またはヘテロ接合型である。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖、または内在性の免疫グロブリンλ軽鎖及び内在性の免疫グロブリンκ軽鎖を検出可能なほど発現しない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含むゲノムを有する。
いくつかの実施形態では、転写制御要素は、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、外来性ＴｄＴをコードする核酸配列は、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に位置する。
いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ヒトＴｄＴである。いくつかの実施形態では、ＴｄＴは、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である。
ヒトＩｇλ軽鎖配列は、いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に由来する（例えば、そこから単離されるか、もしくは得られる）遺伝物質を含むか、またはヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座と同一の遺伝物質を含み、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に由来する遺伝物質のコード部分を含むＩｇ軽鎖をコードする。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列は、少なくとも１つのヒトＶλ遺伝子セグメント、及び少なくとも１つのヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびに当該少なくとも１つのヒトＶλ遺伝子セグメントと当該少なくとも１つのヒトＪλ遺伝子セグメントとの再構成の促進に必要な１つまたは複数の配列（例えば、組換えシグナル配列（複数可））、を含むことで、ヒトＶλドメインをコードする機能性の再構成されたヒトＶλ−Ｊλ配列を形成する。多くの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびに当該ヒトＶλ遺伝子セグメントと当該ヒトＪλ遺伝子セグメントとの再構成の促進に必要な１つまたは複数の配列、を含む。多くの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントのコード配列（例えば、エクソン）を少なくとも含むと共に、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列（例えば、エクソン）を少なくとも含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列は、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座のゲノム配列（例えば、細菌人工染色体から単離及び／またはクローニングされたもの）であり、生殖細胞における配置を有する複数のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、生殖細胞における配置を有するヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列（すなわち、遺伝子セグメント）（すなわち、組換えに必要な組換え促進配列を含む介在ＤＮＡによって分離された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び組換えに必要な組換え促進配列を含む介在ＤＮＡによって分離された複数のＪλ遺伝子セグメント）を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列は、操作された配列であり、ヒト細胞においてヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に見られる配置とは異なる配置を有する複数のヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列は、操作された配列であり、野生型のネズミ細胞またはヒト細胞のＩｇκ軽鎖遺伝子座に見られる配置と同様または類似の配置を有する複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、操作されたヒトＪλ配列（すなわち、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントとの組換えに必要な組換え促進配列を含めるデノボＤＮＡ合成によって調製されるヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列）を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、Ｉｇκ配列及びＩｇλ配列を含み、これらのＩｇκ配列及びＩｇλ配列は、天然ではそれぞれＩｇκゲノム配列及びＩｇλゲノム配列に別々に見られるものである。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、Ｉｇκ配列（複数可）（具体的には、Ｊκ領域（すなわち、複数のＪκ遺伝子セグメントを含む領域に見られるコード配列及び非コード配列を含む配列））を含み、当該Ｉｇκ配列は、当該Ｉｇκ配列が、Ｊλ遺伝子セグメントのコード配列及びＪλ１２ＲＳＳを、それぞれ対応するＪκ遺伝子セグメントのコード配列及びＪκ２３ＲＳＳの代わりに含むということを除けばＩｇκ軽鎖遺伝子座に天然では見られるものである。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、Ｊκ領域配列のＪκ遺伝子セグメント及びＪκ２３ＲＳＳの代わりに複数のＪλ遺伝子セグメント及びＪλ１２ＲＳＳを含む。さまざまな実施形態において、組換えに必要な組換え促進配列を含む介在（または遺伝子間）ＤＮＡは、ヒトＩｇκゲノム配列（複数可）及び／またはヒトＩｇλゲノム配列（複数可）を含む。あるいは、及びいくつかの実施形態では、組換えに必要な組換え促進配列を含む介在（または遺伝子間）ＤＮＡは、ネズミＩｇκゲノム配列（複数可）及び／またはネズミＩｇλゲノム配列（複数可）を含む。
いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、図面に見られる配列であるか、または図面に見られる配列を含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、Ｖλドメインポリペプチドを（例えば、ヒト遺伝子セグメントの再構成後に）コードするか、またはコードする能力を有し、当該Ｖλドメインポリペプチドは、免疫グロブリン（具体的には、ヒトＢ細胞が発現する免疫グロブリン）に見られるものである。当該ヒトＩｇλ軽鎖配列を対応非ヒトＩｇκ軽鎖配列（例えば、内在性のげっ歯類Ｉｇκ軽鎖遺伝子座）の代わりに含む非ヒト動物、非ヒト胚、非ヒト細胞、ならびにこれらの非ヒト動物、非ヒト胚、及び非ヒト細胞を調製するための標的化コンストラクトも提供される。
いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、対応非ヒトＩｇκ軽鎖配列の代わりに非ヒト動物の生殖細胞ゲノム内に挿入される。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子配列）の上流に挿入され、当該非ヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒトＩｇκ軽鎖配列（例えば、非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子配列）の代わりに配置される。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇκ軽鎖配列は、当該ヒトＩｇκ軽鎖配列がヒトＩｇλ軽鎖配列と並置されるように当該ヒトＩｇλ軽鎖配列の中央（すなわち、ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間）に挿入される。
いくつかの実施形態では、非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の可変領域のすべてまたは実質的にすべてが、１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列（本明細書に記載のもの）で代替または置換され、当該１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される。いくつかの実施形態では、非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子は、本明細書に記載のヒトＩｇλ軽鎖配列を含む非ヒト動物において欠失または代替される。１つの非限定的な例では、ヒトＩｇλ軽鎖配列の挿入が、非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座への挿入である場合、当該挿入は、挿入点付近の非ヒトＩｇκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）（例えば、非ヒトＩｇκイントロンエンハンサー及び／または非ヒトＩｇκ３’エンハンサー）の完全性が維持される様式で実施される。したがって、そのような非ヒト動物は、ヒトＩｇλ軽鎖配列及び非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびに非ヒトＣλ領域遺伝子）に機能可能なように連結された野生型Ｉｇκ軽鎖エンハンサー領域（もしくはエンハンサー配列）を有するか、またはヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびにヒトＣλ領域遺伝子）に機能可能なように連結された野生型Ｉｇκ軽鎖エンハンサー領域（もしくはエンハンサー配列）を有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列で改変、置換、破壊、欠失、代替、または操作される非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座は、ネズミＩｇκ軽鎖遺伝子座である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列は、非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の２つのコピーのうちの、当該非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座の１つのコピー（すなわち、アレル）に挿入され、その結果、ヒトＩｇκ軽鎖配列に関してヘテロ接合型である非ヒト動物が生じる。ヒトＩｇκ軽鎖配列に関してヘテロ接合型である非ヒト動物の実施形態のいくつかでは、非ヒト動物は、非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のもう一方のコピー（すなわち、アレル）に挿入された１つまたは複数のヒトＩｇκ軽鎖配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列を含むＩｇκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である非ヒト動物が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座は、非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含み、当該非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子は、同じ種の非ヒト動物の野生型Ｉｇκ軽鎖遺伝子座に見られる非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子の代わりに位置する。
いくつかの実施形態では、内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座の内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖配列の１つもしくは複数（またはその一部）は欠失されない。いくつかの実施形態では、内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座の内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖配列の１つもしくは複数（またはその一部）は欠失される。いくつかの実施形態では、内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座の内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、Ｖ、Ｊ、及び／またはＣ、あるいはそれらの任意の組み合わせ）の１つまたは複数は、当該非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座が機能的にサイレンシングされるように改変、置換、破壊、欠失、または代替される。いくつかの実施形態では、内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座の内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、Ｖ、Ｊ、及び／またはＣ、あるいはそれらの任意の組み合わせ）の１つまたは複数は、当該非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座が機能的に不活化されるように（すなわち、非ヒト動物の抗体レパートリーにおいて発現し、及び／または検出可能な抗体の機能性軽鎖を産生することが不可能なように）標的化ベクターで改変、置換、破壊、欠失、または代替される。内在性の非ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座を不活化するための指針は、例えば、米国特許第９，００６，５１１号（例えば、図２を参照のこと）（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に提供されている。
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、（例えば、無作為に組み込まれるヒトＩｇλ軽鎖配列の一部として）自体のゲノムに無作為に組み込まれた本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む。したがって、そのような非ヒト動物は、非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子、及び非ヒトＩｇκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むヒトＩｇλ軽鎖導入遺伝子を有し、その結果、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、再構成を受け、当該非ヒト動物の発現レパートリーに含まれる抗体のＩｇ軽鎖をコードする能力を有し、当該Ｉｇ軽鎖は、ヒトＶλドメイン及び非ヒトＣλドメインを含むか、またはヒトＶλドメイン及びヒトＣλドメインを含むと説明され得る。本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座または導入遺伝子は、さまざまな方法を使用して検出することができ、こうした方法には、例えば、ＰＣＲ、ウエスタンブロット、サザンブロット、制限酵素断片長多型（ＲＦＬＰ）、またはアレルの獲得もしくは消失を捉えるアッセイが含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座に関してヘテロ接合型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座に関してヘミ接合型である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座または導入遺伝子のコピーを１つまたは複数含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、図面に示されるＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む。
本明細書に記載の非ヒト動物は、その抗体選択及び抗体生成機構（例えば、組換え及び体細胞超変異）において、自体のゲノムに含められたヒト重鎖可変領域遺伝子セグメント、ヒトλ軽鎖可変領域遺伝子セグメント、及びヒトκ軽鎖可変領域遺伝子セグメントを利用することになるという認識を本開示は有する。したがって、さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物によって生じるヒト免疫グロブリンヒト重鎖可変ドメイン、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメイン、及びヒト免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインは、それぞれ自体のゲノムに含まれるヒト重鎖可変領域遺伝子セグメント、ヒトλ軽鎖可変領域遺伝子セグメント、及びヒトκ軽鎖可変領域遺伝子セグメント、または体細胞超変異が生じたそのバリアントによってコードされる。
いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体のゲノムに含む非ヒト動物が提供され、非ヒト動物は、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含むＢ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本開示のマウスのＢ細胞に存在するヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれを超える数の体細胞超変異を有する。成熟抗体配列への供給源となる遺伝子セグメントを同定する方法を当業者なら認識するであろう。例えば、この分析の支援にはさまざまなツールが利用可能であり、こうしたツールは、例えば、ＤＮＡＰＬＯＴ、ＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴ、ＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ、ＳｏＤＡ、及びＡｂ−ｏｒｉｇｉｎなどである。
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する細胞及び組織を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する脾細胞（及び／または他のリンパ系組織）が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するＢ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するプロＢ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するプレＢ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する未熟Ｂ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する成熟ナイーブＢ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する活性化Ｂ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するメモリーＢ細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するＢ細胞系リンパ球が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する血漿または形質細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する幹細胞が提供される。いくつかの実施形態では、幹細胞は、胚性幹細胞である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する生殖細胞が提供される。いくつかの実施形態では、生殖細胞は、卵母細胞である。いくつかの実施形態では、生殖細胞は、精子細胞である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する精子細胞は、１つまたは複数のＡＤＡＭ６ポリペプチド、ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片を発現する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する任意の細胞または組織が単離され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物に由来する単離された細胞及び／または単離された組織が提供される。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマが提供され、ハイブリドーマは、本明細書に記載の非ヒト動物のＢ細胞を用いて調製される。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマは、目的抗原で免疫化されている非ヒト動物のＢ細胞を用いて調製される。いくつかの実施形態では、ハイブリドーマは、目的抗原上のエピトープに結合する（例えば、特異的に結合する）抗体を発現する非ヒト動物のＢ細胞を用いて調製される。
本明細書に記載の非ヒト動物はいずれも、１つまたは複数の目的抗原に対する免疫応答を当該非ヒト動物に生じさせる上で十分な条件及び時間を適用して当該１つまたは複数の目的抗原で免疫化され得る。非ヒト動物の免疫化するための方法を当業者なら認識している。一例として、非ヒト動物を免疫化するための方法は、限定されないが、ＵＳ２００７／０２８０９４５Ａ１（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。
本開示は、とりわけ、本明細書に記載の免疫化された非ヒト動物、ならびに当該免疫化された非ヒト動物から単離された細胞及び組織を提供する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数のエピトープを含む抗原での免疫化に応答してＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する（例えば、特異的に結合する）抗体を発現するＢ細胞集団を産生する。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、及び／または本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。
いくつかの実施形態では、非ヒト動物は、目的抗原のエピトープの１つまたは複数に結合する抗体を発現するＢ細胞集団を産生し、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団が発現する抗体は、（ｉ）ヒト重鎖可変領域配列によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを有する重鎖、（ｉｉ）本明細書に記載のヒトラムダ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトラムダ軽鎖可変ドメインを有するラムダ軽鎖、（ｉｉｉ）本明細書に記載のヒトカッパ軽鎖可変領域配列によってコードされるヒトカッパ軽鎖可変ドメインを有するカッパ軽鎖、または（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列には、体細胞超変異が生じる。いくつかの実施形態では、抗原に応答して産生されるＢ細胞集団におけるＢ細胞の少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、少なくとも約５０％、少なくとも約５５％、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％が、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される非ヒト動物は、（１）（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び（ｃ）Ｃλ遺伝子、を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントがＣλ遺伝子に機能可能なように連結された操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含み、（２）自体の生殖細胞ゲノムにおいて、操作された内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まず、（３）（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメント、及び（ｃ）Ｃκ遺伝子、を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントがＣκ遺伝子に機能可能なように連結された操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む。いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物の脾細胞における軽鎖のうち、λ軽鎖である軽鎖の割合（例えば、検出または観測されるものであり、こうした検出または観測は、例えば、フローサイトメトリーによって実施される（例えば、実施例３を参照のこと））は、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、または少なくとも７５％である。いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物の脾細胞における軽鎖のうち、λ軽鎖である軽鎖の割合（例えば、検出または観測されるものであり、こうした検出または観測は、例えば、フローサイトメトリーによって実施される（例えば、実施例３を参照のこと））は、３５〜８０％、３５〜７５％、４０〜８０％、４０〜７５％、５０〜８０％、５０〜７５％、５５〜８０％、５５〜７５％、６０〜８０％、または６０〜７５％である。いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物の脾細胞における軽鎖のうち、κ軽鎖である軽鎖の割合（例えば、検出または観測されるものであり、こうした検出または観測は、例えば、フローサイトメトリーによって実施される（例えば、実施例３を参照のこと））は、最大で６５％、最大で６０％、最大で５５％、最大で５０％、最大で４５％、最大で４０％、または最大で３５％である。いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物の脾細胞における軽鎖のうち、κ軽鎖である軽鎖の割合（例えば、検出または観測されるものであり、こうした検出または観測は、例えば、フローサイトメトリーによって実施される（例えば、実施例３を参照のこと））は、２０〜６５％、２５〜６５％、２０〜６０％、２５〜６０％、２０〜５５％、２５〜５５％、２０〜５０％、２５〜５０％、２０〜４５％、２５〜４５％、２０〜４０％、または２５〜４０％である。いくつかの実施形態では、そのような非ヒト動物の脾細胞におけるκ軽鎖：λ軽鎖の比（例えば、検出または観測されるものであり、こうした検出または観測は、例えば、フローサイトメトリーによって実施される（例えば、実施例３を参照のこと））は、０．５：１〜３：１、０．６５：１〜３：１、０．８：１〜３：１、１：１〜３：１、１．２：１〜３：１、１：１〜２．３：１、１．１：１〜１．８：１、１．２：１〜２．３：１、または１．２：１〜１．８：１である。
提供される非ヒト動物の作製方法
特定の多型のヒトＶλセグメント及びヒトＪλセグメント（例えば、特定のＶアレル及び／またはＪアレル、あるいはそのバリアント）を含むヒトＩｇλ軽鎖コード配列を含めて、１つまたは複数のヒトＩｇλ軽鎖配列（例えば、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント）を非ヒトＩｇκ軽鎖配列の代わりに含む操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物を作製するための組成物及び方法が提供され、こうした組成物及び方法には、野生型の非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座に通常は見られる非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子の代わりに位置する非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むＩｇκ軽鎖遺伝子座からアセンブリされるヒト可変領域及び非ヒト定常領域またはヒト定常領域を含むＩｇλ軽鎖を含む抗体を発現する非ヒト動物を作製するための組成物及び方法が含まれる。いくつかの実施形態では、そのような抗体を内在性のＩｇκエンハンサー（複数可）及び／または内在性のＩｇκ調節配列（複数可）の制御下で発現する非ヒト動物を作製するための組成物及び方法も提供される。いくつかの実施形態では、そのような抗体を異種Ｉｇκエンハンサー（複数可）及び／または異種Ｉｇκ調節配列（複数可）の制御下で発現する非ヒト動物を作製するための組成物及び方法も提供される。
本明細書に記載の方法は、野生型の非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座に通常は見られる非ヒトＩｇκ軽鎖定常領域遺伝子の代わりに位置する非ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子（例えば、ネズミＣλ領域遺伝子またはヒトＣλ領域遺伝子）の上流に、ヒトＶλドメインをコードするヒトＶλ配列及びヒトＪλ配列を挿入することを含み、その結果、ヒトＶλドメイン及び非ヒトＣλドメイン（例えば、げっ歯類Ｃλドメイン）を含む軽鎖が存在することによって特徴付けられる抗体が発現するか、またはヒトＶλドメイン及び非ヒトＣλドメイン（例えば、１つもしくは複数のげっ歯類Ｃλドメイン）を含む軽鎖が存在することによって特徴付けられる抗体が発現し、これらの抗体は、Ｂ細胞の表面にも非ヒト動物の血清中にも発現する。
いくつかの実施形態では、方法は、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む遺伝物質をＩｇκ軽鎖遺伝子座（例えば、野生型のＩｇκ軽鎖遺伝子座、改変されたＩｇκ軽鎖遺伝子座、または操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座）に挿入することを含む。いくつかのある特定の実施形態では、方法は、ヒトＪλ遺伝子セグメントを含む遺伝物質を改変または操作された系統のＩｇκ軽鎖遺伝子座に挿入することを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列を含む遺伝物質は、操作されたものであるか、またはゲノム由来のもの（例えば、細菌人工染色体からクローニングされたもの）であり得る。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇλ軽鎖配列を含む遺伝物質は、ヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に見られる配向とは異なる配向でヒトＶλセグメント及びヒトＪλセグメントを当該遺伝物質が含むが、当該ヒトＶλセグメント及びヒトＪλセグメントが再構成されてＩｇ軽鎖の機能性のヒトＶλドメインをコードすることを支援する配列を当該遺伝物質が含むように、公開供給源及び／または細菌人工染色体から設計され得る。一例を挙げるにすぎないが、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントに対応する遺伝物質は、本明細書で提供される指針が使用されることで、ヒト細胞のヒトＩｇλ軽鎖遺伝子座に見られるものとは異なる順序及び／または配置（例えば、ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座またはげっ歯類Ｉｇκ軽鎖遺伝子座と同様または類似の配置（一連のＶ遺伝子セグメントの３’側に介在ＤＮＡが続き、その３’側に一連のＪ遺伝子セグメントが続く配置など））でヒトＶλセグメント及びヒトＪλセグメントを含むヒトＩｇλ軽鎖配列が構築されるように設計され得る。そのような例では、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの遺伝的内容は、ヒト細胞における対応セグメントと等しくなると想定されるが、順序及び配置は異なることになると想定される。本明細書に記載の非ヒト動物を作製するための操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座の構築時には、ヒトＶ遺伝子セグメント及びヒトＪ遺伝子セグメントが正しく再構成され、機能性のヒトＶλドメインを形成し得るように、必要な組換えシグナル配列が配置され得る。生殖細胞におけるヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの配置、ならびに適切な組換えに必要な配列のための指針は、例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｂ Ｃｅｌｌｓ，Ｌｏｎｄｏｎ：Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００４，Ｅｄ．Ｈｏｎｊｏ，Ｔ．，Ａｌｔ，Ｆ．Ｗ．，Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｍ．Ｃｈａｐｔｅｒｓ ４（ｐｐ．３７−５９）ａｎｄ ５（６１−８２）において見つけることができ、当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、方法は、単一のＥＳ細胞クローンに複数の挿入を行うことを含む。いくつかの実施形態では、方法は、後継ＥＳ細胞クローンに逐次的に挿入することを含む。いくつかの実施形態では、操作されたＥＳ細胞クローンに単一の挿入を行うことを含む。
いくつかの実施形態では、方法には、ＤＮＡ挿入物（複数可）がネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）に機能可能なように連結されるように当該ネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）の上流に当該ＤＮＡ挿入物（複数可）を含み、当該ＤＮＡ挿入物（複数可）は、ヒトＶλ遺伝子セグメントであるＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせと、ヒトＪλ遺伝子セグメントであるＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせと、を含み、当該ネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）は、内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座のネズミＣκ遺伝子の代わりに位置する。
いくつかの実施形態では、方法には、ＤＮＡ挿入物（複数可）がネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）に機能可能なように連結されるように、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ３−１遺伝子セグメントの下流となり、非ヒトＩｇκイントロンエンハンサー領域（またはエンハンサー配列）の上流となる位置に当該ＤＮＡ挿入物（複数可）を含み、当該ＤＮＡ挿入物（複数可）は、天然ではヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られるヒトＩｇκゲノム配列と、１つまたは複数（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つ）のヒトＪλ遺伝子セグメントと、を含み、当該ネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）は、内在性の非ヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のネズミＣκ遺伝子の代わりに位置する。いくつかのある特定の実施形態では、方法には、ヒトＶλ３−１遺伝子セグメントと非ヒトＩｇκイントロンエンハンサーとの間にＤＮＡ挿入物（複数可）を含み、当該ＤＮＡ挿入物（複数可）は、天然ではヒトＩｇκ軽鎖遺伝子座のヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られるヒトＶκ−Ｊκ配列と、５つのヒトＪλ遺伝子セグメント（例えば、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７）と、を含む。さまざまな実施形態において、ヒトＪλ遺伝子セグメントを含むＤＮＡ挿入物（複数可）は、ヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列及びヒトＪλ１２ＲＳＳを有するヒトＪκゲノムＤＮＡを含む。
本明細書に記載の方法を使用して追加のヒトＶλセグメント及びヒトＪλセグメントを挿入することで、操作されたＩｇλ軽鎖遺伝子座の多様性のさらなる補足が達成され得る。例えば、いくつかの実施形態では、方法は、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座のネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）に約２７０ｋｂのＤＮＡが機能可能なように連結されるように、当該ネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）の上流に当該ＤＮＡを挿入することを含み得、当該ＤＮＡは、ヒトＶλ遺伝子セグメントであるＶλ１０−５４、Ｖλ６−５７、Ｖλ４−６０、Ｖλ８−６１、及びＶλ４−６９を含む。そのような実施形態では、当該ＤＮＡは、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座のネズミＣλ１遺伝子（またはヒトＣλ２遺伝子）に機能可能なように連結されたヒトＶλ５−５２遺伝子セグメントの上流に挿入され、当該ＤＮＡは、ヒトＶλ遺伝子セグメントであるＶλ１０−５４、Ｖλ６−５７、Ｖλ４−６０、Ｖλ８−６１、及びＶλ４−６９を含む。いくつかのある特定の実施形態では、当該ＤＮＡは、ヒトＶｐｒｅＢ遺伝子を含む。上記の追加のヒトＶλ遺伝子セグメントは、市販のＢＡＣクローンから直接的にクローニングされ、本明細書に記載の組換え技術または当該技術分野で知られるその他の技術を使用することで、より小さなＤＮＡ断片に配置され得る。あるいは、上記の追加のヒトＶλ遺伝子セグメントは、操作されたＤＮＡ断片として合成され、当該技術分野で知られる分子生物学的技術を使用することで、上記の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座に付加され得る。同様に、追加のヒトＪλ遺伝子セグメントを、市販のＢＡＣクローンから得るか、または公開配列から直接的に合成することができる。本明細書に記載の非ヒト動物の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を図示した例は、図２Ｂまたは図４Ｂに示される。
適切な場合、ヒトＶλドメインをコードするヒトＩｇλ軽鎖配列（すなわち、ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む配列）は、非ヒト動物での発現が最適化されたコドンを含むように、個別に改変され得る（例えば、米国特許第５，６７０，３５６号及び同第５，８７４，３０４号を参照のこと）。コドン最適化配列は、操作された配列であり、好ましくは、コドンが最適化されていない親ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドと同一のポリペプチド（または全長ポリペプチドの生物学的に活性な断片であって、全長ポリペプチドと実質的に同じ活性を有する断片）をコードする。いくつかの実施形態では、ヒトＶλドメインをコードするヒトＩｇλ軽鎖配列は、特定の細胞型（例えば、げっ歯類細胞）のコドン利用が最適化されるように改変された配列を個別に含み得る。例えば、非ヒト動物（例えば、げっ歯類）のゲノムに挿入すべきそれぞれのヌクレオチド配列のコドンは、非ヒト動物の細胞での発現向けに最適化され得る。そのような配列は、コドン最適化配列と記載され得る。
ヒトＶλドメインをコードするヌクレオチド配列の挿入では、本明細書に記載の非ヒト動物の生殖細胞ゲノムの改変が最小限にとどまるようにされ、その結果、内在性の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座から発現するヒトＶλドメインを有する軽鎖を含む抗体が発現する。ノックアウト動物及びノックイン動物を含めて、操作された非ヒト動物を作製するための方法は、当該技術分野で知られている（例えば、Ｇｅｎｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｊｏｙｎｅｒ，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，２０００（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。例えば、遺伝子操作されたげっ歯類の作製では、１つまたは複数の内在性のげっ歯類遺伝子（または遺伝子セグメント）の遺伝子座の破壊と、げっ歯類ゲノムへの１つまたは複数の異種遺伝子（または遺伝子セグメントもしくはヌクレオチド配列）の導入と、が任意選択で行われ得、いくつかの実施形態では、内在性のげっ歯類遺伝子（または遺伝子セグメント）と同じ位置に対して行われる。いくつかの実施形態では、ヒトＶλドメインをコードするヌクレオチド配列は、げっ歯類の生殖細胞ゲノムに無作為に挿入された操作された軽鎖導入遺伝子のネズミＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子の上流に導入される。いくつかの実施形態では、ヒトＶλドメインをコードするヌクレオチド配列は、げっ歯類の生殖細胞ゲノムにおける内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座のネズミＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子またはヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子の上流に導入される。いくつかのある特定の実施形態では、内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座は、マウスＣλ１遺伝子に機能可能なように連結されたまたはヒトＣλ２遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＩｇλ遺伝子セグメント（例えば、ヒトＶ及びヒトＪ）を含むように変更、改変、または操作される。
本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を構築するための方法の例を示す模式図（図の縮尺は実際のものとは異なる）は、図１Ａ、図１Ｂ、図２Ａ、図２Ｂ、図３、図４Ａ、及び図４Ｂに提供される。具体的には、図１Ａ及び図１Ｂは、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むヌクレオチド配列が挿入されていることによって特徴付けられる操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を構築するための方針の例を示す。図１Ａ及び図１Ｂに示されるように、ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間領域（米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号を参照のこと）と、ヒトＪλ遺伝子断片のセット（例えば、ヒトＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７）を含む操作された断片と、を含むＤＮＡ断片が、実施例１に記載のさまざまな分子生物学的技術を使用する一連のステップを介して、げっ歯類Ｉｇκイントロンエンハンサー領域（またはエンハンサー配列）に機能可能なように連結される。この操作された断片は、ヒトＪλ遺伝子セグメントに機能可能なように連結されたげっ歯類Ｉｇλ軽鎖定常領域を含むようにも操作される。標的化ベクターに選択カセット（例えば、ネオマイシン及びハイグロマイシン）を含めることで、細菌細胞及び哺乳類細胞（例えば、胚性幹細胞）に含まれる陽性クローンを選択することが可能になる。図示されるように、ネオマイシン耐性遺伝子は、ｌｏｘ２３７２部位特異的組換え部位（ｌｏｘ）に隣接しており、ヒトＶκ−Ｊκ領域とヒトＪλ遺伝子セグメントのセットとの間に配置され、ハイグロマイシン選択カセットは、ｌｏｘＰ部位特異的組換え部位に隣接し、げっ歯類Ｉｇλ軽鎖定常領域（ｍＣλ１）遺伝子の３’側に配置される。次に、当該ＤＮＡ断片を、げっ歯類Ｉｇκ軽鎖３’エンハンサーを含むＤＮＡ断片と結合することで、最終的な標的化ベクターが創出される（図１Ｂ）。得られた標的化ベクター（コンストラクトＧ）を直鎖化し、電気穿孔によってげっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞に導入することで、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類が創出される。後述の実施例セクションに記載されるように、標的化ベクターの電気穿孔では、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に以前に記載されている操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含むげっ歯類ＥＳ細胞を用いた。図３に示される標的化ベクターとの相同組換えの結果、ネズミＣλ１遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントによって特徴付けられる操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座が生じ、当該ネズミＣλ１遺伝子は、天然では野生型Ｉｇκ軽鎖遺伝子座に見られるネズミＣκ遺伝子の代わりに位置する。ヒトＪλ遺伝子セグメントが特有に操作導入されている配列は、ヒトゲノムＪκ領域に天然では見られるが、ヒトＪκコード配列及び付随する２３ＲＳＳの代わりにヒトＪλコード配列及び付随する１２ＲＳＳを有する配列である。陽性のげっ歯類ＥＳ細胞クローンは、本明細書に記載され、及び／または当該技術分野で知られるスクリーニング方法を使用して確認される。残存する選択カセットはいずれも、リコンビナーゼ介在性に欠失させることによって、望まれるように欠失され得る（実施例２を参照のこと）。
別の手法として、標的化ベクターにおいてマウスＣλ遺伝子の代わりにヒトＣλ遺伝子が用いられ得る。一例を挙げるにすぎないが、図３は、上記のものと類似の様式で構築された標的化ベクターを示し、この構築においては、唯一異なる点として、ヒトＣλ２遺伝子をコードする配列が標的化ベクターに操作導入されており、５つのヒトＪλ遺伝子セグメントと機能可能なように連結されている。そのような手法を使用することで、軽鎖の可変領域及び定常領域をコードするＤＮＡが一緒に単離され、それによって、完全ヒト抗体を調製するためのヒト軽鎖定常領域へのいずれの連結クローニングステップもその後に行う必要がなくなり得るため、ヒト抗体治療剤の開発に利点が加わる。
本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を構築するための標的化ベクターは、非ヒト細胞（例えば、げっ歯類胚性幹細胞）の生殖細胞ゲノムに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化ベクターは、１つまたは複数の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子と機能可能なように連結されたヒトＶＨゲノムＤＮＡ、ヒトＤＨゲノムＤＮＡ、及びヒトＪＨゲノムＤＮＡ（例えば、複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含むもの）をさらに含む非ヒト細胞の生殖細胞ゲノムにおける野生型Ｉｇκ軽鎖遺伝子座に組み込まれる（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の標的化ベクターは、１つまたは複数の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子と機能可能なように連結されたヒトＶＨゲノムＤＮＡ、ヒトＤＨゲノムＤＮＡ、及びヒトＪＨゲノムＤＮＡ（例えば、複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含むもの）をさらに含む非ヒト細胞の生殖細胞ゲノムにおける改変または操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に組み込まれる（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、同第８，７９１，３２３号、同第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
標的化ベクターは、電気穿孔によってげっ歯類（例えば、マウス）胚性幹細胞に導入され、その結果、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを含む軽鎖を有する抗体を発現する能力が、標的化ベクターに含まれる配列によって非ヒト細胞または非ヒト動物（例えば、マウス）に付与され、当該軽鎖は、内在性の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から発現する。本明細書に記載のように、遺伝子操作されたげっ歯類が作製され、このげっ歯類の生殖細胞ゲノムには、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（例えば、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりにげっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＩｇλ軽鎖配列（すなわち、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメント）を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座）が創出されている。抗体は、げっ歯類Ｂ細胞の表面及び当該げっ歯類の血清中に発現し、当該抗体は、軽鎖がヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを有することによって特徴付けられる。げっ歯類の生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が標的化ベクターの標的ではないとき、操作された免疫グロブリンκ軽鎖導入遺伝子は、好ましくは、内在性のげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座の位置とは異なる位置に挿入される（例えば、導入遺伝子は、無作為に挿入される）。
上記のように非ヒト動物において操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を創出することで、ヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを有するそのような操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から発現する免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を産生する操作されたげっ歯類系統が得られる。免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の存在を活用することで、ヒト抗体ベースの治療剤を開発するための抗体及び抗体構成要素を産生する操作されたげっ歯類系統が創出される。このようにして、ヒト疾患を治療するために新たな抗体ベースの薬剤を開発するためのヒトＶλドメインを利用するための別のインビボ系を提供する能力を有する単一の操作されたげっ歯類系統が実現する。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物の作製方法が提供され、この方法は、（ａ）ＤＮＡ断片を非ヒト胚性幹細胞に導入することであって、当該ＤＮＡ断片が、（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子（例えば、非ヒトまたはヒト）と、を含むヌクレオチド配列を含み、（ｉ）〜（ｉｉｉ）が、機能可能なように連結され、当該ヌクレオチド配列が、（ｉ）と（ｉｉ）との間に免疫グロブリンｋ軽鎖配列をさらに含む、当該導入すること、（ｂ）（ａ）において生じる非ヒト胚性幹細胞を得ること、ならびに（ｃ）（ｂ）に記載のげっ歯類胚性幹細胞を使用してげっ歯類を創出すること、を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物の作製方法が提供され、この方法は、（ａ）ＤＮＡ断片を非ヒト胚性幹細胞に導入することであって、当該ＤＮＡ断片が、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー、及び非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子、を含むヌクレオチド配列を含み、当該ヒトＪλ遺伝子セグメントが、当該１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー、及び当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結される、当該導入すること、（ｂ）（ａ）において生じる非ヒト胚性幹細胞を得ること、ならびに（ｃ）（ｂ）に記載のげっ歯類胚性幹細胞を使用してげっ歯類を創出すること、を含む。
いくつかの実施形態では、操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物の作製方法であって、当該操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子の挿入を含み、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが、当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子が、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに当該内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座に挿入される、当該作製方法が提供され、この方法は、非ヒト動物の生殖細胞ゲノムを改変することを含み、その結果、当該生殖細胞ゲノムは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子の挿入を含む操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子は、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに当該内在性の免疫グロブリンκ遺伝子座に挿入される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、少なくとも２４個、少なくとも３４個、少なくとも５２個、少なくとも６１個、または少なくとも７０個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、３９個のヒトＶλ遺伝子セグメントを含む。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかのある特定の実施形態では、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントは、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座において関連するヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含む。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、または少なくとも５つのヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、５つのヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、ヒトＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む。いくつかのある特定の実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座において関連するヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡの全部または一部を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントは、天然では内在性のヒトκ軽鎖遺伝子座においてヒトＪκ１〜Ｊκ５に隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含む。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、非コード免疫グロブリンＤＮＡを含む遺伝子間ＤＮＡ（例えば、２つのＶ遺伝子セグメントのコード配列の間、Ｖ遺伝子セグメントのコード配列とＪ遺伝子セグメントのコード配列との間、または２つのＪ遺伝子セグメントのコード配列の間に天然では見られるＤＮＡ）を含む。多くの実施形態では、当該非コード免疫グロブリンＤＮＡは、非コード免疫グロブリン軽鎖ＤＮＡ（例えば、ヒトまたはネズミ）である。いくつかの実施形態では、非コード免疫グロブリン軽鎖ＤＮＡは、免疫グロブリンκ軽鎖ＤＮＡ、免疫グロブリンλ軽鎖ＤＮＡ、またはそれらの組み合わせである。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、１つまたは複数の選択マーカーをさらに含む。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、１つまたは複数の部位特異的組換え部位をさらに含む。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、同じリコンビナーゼで組換えが生じる部位特異的組換え部位のセットを１つまたは複数、さらに含む。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、異なるリコンビナーゼで組換えが生じる部位特異的組換え部位のセットを１つまたは複数、さらに含む。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、免疫グロブリンκ軽鎖配列と免疫グロブリンλ軽鎖配列とが一緒になって含まれる連続配列を含む操作された配列を含む。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、免疫グロブリンκ軽鎖配列と免疫グロブリンλ軽鎖配列とが一緒になって含まれるが、これらの軽鎖配列の間に非免疫グロブリン配列（例えば、組換えシグナル配列、耐性遺伝子、及びそれらの組み合わせ）が介在する単一の配列、を含む操作された配列をＤＮＡ断片は含む。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、操作された配列は、Ｊκ領域の複数部分、及びＪλ領域の複数部分を含む。いくつかの実施形態では、操作された配列は、ヒトＪκ領域の複数部分、及びヒトＪλ領域の複数部分を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＪκ領域の複数部分は、天然ではヒト細胞のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に見られるヒトＪκ領域の非コード配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、ヒトＪλ領域の複数部分は、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列及び組換えシグナル配列（ＲＳＳ）を含む。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、ＤＮＡ断片は、操作された配列を含み、この操作された配列は、いくつかの実施形態では、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントのコード配列及び組換えシグナル配列（ＲＳＳ）が存在することによって特徴付けられ、これらの配列は、ヒトＪκ遺伝子セグメントの対応するコード配列及び組換えシグナル配列（ＲＳＳ）を位置的に代替または置換し（すなわち、これらの対応配列の代わりに位置する）、その結果、当該１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの当該コード配列及び組換えシグナル配列（ＲＳＳ）は、当該１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントの当該非コード配列に内在するか、それに隣接するか、それと近接するか、またはそれと並置される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数の操作された免疫グロブリン遺伝子座（例えば、免疫グロブリン重鎖、免疫グロブリンκ軽鎖、免疫グロブリンλ軽鎖、及びそれらの組み合わせ）を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞にＤＮＡ断片が導入される。いくつかのある特定の実施形態では、操作された免疫グロブリン遺伝子座は、内在性の操作された免疫グロブリン遺伝子座である。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞にＤＮＡ断片が導入され、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞にＤＮＡ断片が導入され、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される。非ヒト動物の作製方法のある特定の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびに当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと当該１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に配置されるか、導入されるか、または位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列、の挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞にＤＮＡ断片が導入され、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を非ヒト動物の生殖細胞ゲノムが含むように当該生殖細胞ゲノムを改変することは、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの挿入を含む内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞において実施され、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を非ヒト動物の生殖細胞ゲノムが含むように当該生殖細胞ゲノムを改変することは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞において実施され、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される。非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を非ヒト動物の生殖細胞ゲノムが含むように当該生殖細胞ゲノムを改変することは、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、ならびに当該１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと当該１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に配置されるか、導入されるか、または位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列、の挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト胚性幹細胞において実施され、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される。
非ヒト動物の作製方法の実施形態のいくつかでは、１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子断の挿入は、天然では内在性のヒト免疫グロブリン遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡ、及び天然では内在性のヒト免疫グロブリン遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法から作製されるか、生じるか、生成されるか、得られるか、または得ることが可能な非ヒト動物が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物のゲノムは、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載のヒト免疫グロブリン重鎖可変領域の１つまたは複数をさらに含む。あるいは、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、異なる改変系統（例えば、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）系統など）（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号及び／または同第８，６４２，８３５号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）の胚性幹細胞に操作導入され得る。次に、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座のホモ接合性は、交配繁殖によって達成され得る。あるいは、操作された免疫グロブリンκ軽鎖導入遺伝子（上記のもの）が無作為に挿入される場合、げっ歯類系統は、とりわけ、導入遺伝子からのヒトＶλドメインの発現に基づいて選択され得る。いくつかの実施形態では、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）１（ＶＩ−１）マウスであり得、ＶＩ−１マウスは、１８個のヒトＶＨ遺伝子セグメント、すべてのヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びすべてのＪＨ遺伝子セグメントを含む。ＶＩ−１マウスは、１６個のヒトＶκ遺伝子セグメント、及びすべてのヒトＪκ遺伝子セグメントも含み得る。いくつかの実施形態では、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）２（ＶＩ−２）マウスであり得、ＶＩ−２マウスは、３９個のヒトＶＨ遺伝子セグメント、すべてのヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びすべてのＪＨ遺伝子セグメントを含む。ＶＩ−２マウスは、３０個のヒトＶκ遺伝子セグメント、及びすべてのヒトＪκ遺伝子セグメントも含み得る。いくつかの実施形態では、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）３（ＶＩ−３）マウスであり得、ＶＩ−３マウスは、８０個のヒトＶＨ遺伝子セグメント、すべてのヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びすべてのＪＨ遺伝子セグメントを含む。ＶＩ−３マウスは、４０個のヒトＶκ遺伝子セグメント、及びすべてのヒトＪκ遺伝子セグメントも含み得る。
代替及び／または追加として、いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物の生殖細胞ゲノムは、欠失、不活化、機能的サイレンシング、またはその他の様式での非機能化が行われた内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む。遺伝子または遺伝子座を欠失または非機能化するための遺伝子改変は、本明細書に記載され、及び／または当該技術分野で知られる方法を使用して達成され得る。
遺伝子操作された樹立非ヒト動物は、自体の生殖細胞ゲノムに操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座が存在すること、及び／または非ヒト動物の組織もしくは細胞においてヒトＶλドメインと非ヒトＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを有する抗体が発現すること、に基づいて同定され得る。次に、遺伝子操作された樹立非ヒト動物は、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を保有する追加の非ヒト動物との交配繁殖に使用され、それによって、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のコピーをそれぞれが１つまたは複数保有する非ヒト動物のコホートが創出され得る。さらに、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を保有する遺伝子操作された非ヒト動物は、他の導入遺伝子（例えば、ヒト免疫グロブリン遺伝子）または他の望まれるように操作された免疫グロブリン遺伝子座を保有する他の遺伝子操作された非ヒト動物とさらに交配繁殖され得る。
遺伝子操作された非ヒト動物は、導入遺伝子または組み込み配列（複数可）の発現を調節し、誘導し、誘導性にし、及び／または細胞型特異的にすることを可能にする選択された系を含むようにも作製され得る。例えば、本明細書に記載の非ヒト動物は、抗体のヒトＶλドメインをコードする１つまたは複数の条件的発現配列を含むように操作され得る（このことは、例えば、Ｒａｊｅｗｓｋｉ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８（３）：６００−３（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に概説されている）。系の例としては、バクテリオファージＰ１のＣｒｅ／ｌｏｘＰリコンビナーゼ系（例えば、Ｌａｋｓｏ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：６２３２−６（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、及びＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのＦＬＰ／Ｆｒｔリコンビナーゼ系（Ｏ’Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，１９９１，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：１３５１−５（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））が挙げられる。そのような動物は、例えば、一方が、選択された改変を含む導入遺伝子（例えば、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座）を含み、もう一方が、リコンビナーゼ（例えば、Ｃｒｅリコンビナーゼ）をコードする導入遺伝子を含む２匹の遺伝子操作された動物を交配させることによって、「二重」に遺伝子操作された動物を構築することによって提供され得る。
本明細書に記載の非ヒト動物は、上記のように作製されるか、または当該技術分野で知られる方法が使用されることで、ヒト遺伝子、ヒト化遺伝子、またはその他の様式で操作された遺伝子を追加で含み得、こうした遺伝子は、多くの場合、当該非ヒト動物の意図される使用に応じて当該非ヒト動物に含められる。そのようなヒト遺伝子、ヒト化遺伝子、またはその他の様式で操作された遺伝子の遺伝物質は、上記の遺伝子改変もしくは遺伝子変化を有する細胞（例えば、胚性幹細胞）のゲノムをさらに改変するか、または望まれるように遺伝子改変もしくは遺伝子操作された他の系統を用いて当該技術分野で知られる交配繁殖技術を適用することによって、導入され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒトＩｇＨ及び／またはヒトＩｇκ軽鎖の遺伝子または遺伝子セグメント（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３−５１５８、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号、米国特許第８，７９１，３２３号、ならびに米国特許出願公開第２０１３／００９６２８７Ａ１号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）をさらに含むように作製される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、改変または操作された系統に由来する細胞へと本明細書に記載の標的化ベクターを導入することによって作製され得る。例えば、本明細書に記載の標的化ベクターは、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに導入され得る。ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスは、完全ヒト可変領域及びマウス定常領域を有する抗体を発現する。別の例では、本明細書に記載の標的化ベクターは、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）のいずれか１つに記載の操作されたマウスに導入され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子（可変域遺伝子及び／または定常領域遺伝子）をさらに含むように作製される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座と、異なる種（例えば、ヒト）に由来する遺伝物質と、を含み、遺伝物質は、１つまたは複数のヒト重鎖可変領域及び／またはヒトＩｇκ軽鎖可変領域の全部または一部をコードする。
例えば、本明細書に記載のように、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含む非ヒト動物は、Ｍｕｒｐｈｙ，Ａ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．，（２０１４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１５３−８、Ｍａｃｄｏｎａｌｄ，Ｌ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．１１１（１４）：５１４７−５２、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号（これらの文献はすべて、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に記載の改変を（例えば、異種交配または複数の遺伝子標的化方針を介して）１つまたは複数、さらに含み得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むげっ歯類は、ヒト化免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座及び／またはヒト化免疫グロブリンκ軽鎖可変領域遺伝子座（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び／または同第８，７９１，３２３号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を含むげっ歯類と交配される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むげっ歯類は、ヒト化免疫グロブリン重鎖可変領域遺伝子座（例えば、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び／または同第８，７９１，３２３号（これらの文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）と、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）と、を含むげっ歯類と交配される。
操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むマウス（すなわち、マウスＣκ遺伝子の代わりに位置するマウスＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子と機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在し、その結果、ヒトＶλドメインとマウスＣλドメインまたはヒトＣλドメインとを含む抗体が発現することによって特徴付けられる操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むマウス）を構築することを説明する実施形態が広範囲にわたって本明細書で論じられるが、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含む他の非ヒト動物も提供される。そのような非ヒト動物には、本明細書に記載の抗体を発現するように遺伝子改変され得る非ヒト動物がいずれも含まれ、こうした非ヒト動物には、例えば、哺乳類、例えば、マウス、ラット、ウサギ、ブタ、ウシ（例えば、雌ウシ、雄ウシ、水牛）、シカ、ヒツジ、ヤギ、ニワトリ、ネコ、イヌ、フェレット、霊長類（例えば、マーモセット、アカゲザル）などが含まれる。例えば、遺伝子改変が可能な適切なＥＳ細胞を入手することが困難な非ヒト動物については、遺伝子改変を含む非ヒト動物を作製するために他の方法が用いられる。そのような方法には、例えば、非ＥＳ細胞（例えば、線維芽細胞または人工多能性細胞）のゲノムを改変するもの、及び体細胞核移植（ＳＣＮＴ）を用いて遺伝子改変ゲノムを適切な細胞（例えば、除核卵母細胞）に移植するもの、ならびに適切な条件の下で非ヒト動物に改変細胞（例えば、改変卵母細胞）を懐胎させて胚を形成させるもの、が含まれる。
非ヒト動物の生殖細胞ゲノム（例えば、ブタ、雌ウシ、げっ歯類、ニワトリなどのゲノム）を改変するための方法には、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、またはＣａｓタンパク質（すなわち、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ系）を用いて本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含めるものが含まれる。非ヒト動物の生殖細胞ゲノムを改変するための方法向けの指針は、例えば、米国特許出願第１４／７４７，４６１号（２０１５年６月２３日出願）、同第１４／９４８，２２１号（２０１５年１１月２０日出願）、及び同第１４／９７４，６２３号（２０１５年１２月１８日出願）（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、哺乳類である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、小型哺乳類であり、例えば、Ｄｉｐｏｄｏｉｄｅａ上科またはＭｕｒｏｉｄｅａ上科に属する小型哺乳類である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変された動物は、げっ歯類である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、マウス、ラット、及びハムスターから選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、Ｍｕｒｏｉｄｅａ上科から選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変された動物は、Ｃａｌｏｍｙｓｃｉｄａｅ科（例えば、マウス様ハムスター）、Ｃｒｉｃｅｔｉｄａｅ科（例えば、ハムスター、新世界ラット及び新世界マウス、ハタネズミ）、Ｍｕｒｉｄａｅ科（真正マウス及び真正ラット、スナネズミ、トゲマウス、タテガミネズミ）、Ｎｅｓｏｍｙｉｄａｅ科（キノボリマウス、イワマウス、オジロキヌゲネズミ（ｗｉｔｈ−ｔａｉｌｅｄ ｒａｔ）、マダガスカルネズミ及びマダガスカルマウス）、Ｐｌａｔａｃａｎｔｈｏｍｙｉｄａｅ科（例えば、トゲヤマネ）、ならびにＳｐａｌａｃｉｄａｅ科（例えば、メクラネズミ、タケネズミ、及びモグラネズミ）から選択される科に由来する。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変されたげっ歯類は、真正マウスまたは真正ラット（Ｍｕｒｉｄａｅ科）、スナネズミ、トゲマウス、ならびにタテガミネズミから選択される。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変されたマウスは、Ｍｕｒｉｄａｅ科のメンバーに由来する。ある実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、げっ歯類である。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のげっ歯類は、マウス及びラットから選択される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、マウスである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、Ｃ５７ＢＬ／Ａ、Ｃ５７ＢＬ／Ａｎ、Ｃ５７ＢＬ／ＧｒＦａ、Ｃ５７ＢＬ／ＫａＬｗＮ、Ｃ５７ＢＬ／６、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ、Ｃ５７ＢＬ／６ＢｙＪ、Ｃ５７ＢＬ／６ＮＪ、Ｃ５７ＢＬ／１０、Ｃ５７ＢＬ／１０ＳｃＳｎ、Ｃ５７ＢＬ／１０Ｃｒ、及びＣ５７ＢＬ／Ｏｌａから選択されるＣ５７ＢＬ系のマウスであるげっ歯類である。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のマウスは、１２９Ｐ１、１２９Ｐ２、１２９Ｐ３、１２９Ｘ１、１２９Ｓ１（例えば、１２９Ｓ１／ＳＶ、１２９Ｓ１／ＳｖＩｍ）、１２９Ｓ２、１２９Ｓ４、１２９Ｓ５、１２９Ｓ９／ＳｖＥｖＨ、１２９／ＳｖＪａｅ、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）、１２９Ｓ７、１２９Ｓ８、１２９Ｔ１、１２９Ｔ２である系統からなる群から選択される１２９系である（例えば、Ｆｅｓｔｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｇｅｎｏｍｅ １０：８３６、Ａｕｅｒｂａｃｈ，Ｗ．ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２９（５）：１０２４−１０２８，１０３０，１０３２（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の遺伝子改変されたマウスは、前述の１２９系と前述のＣ５７ＢＬ／６系とのミックスである。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のマウスは、前述の１２９系のミックスであるか、または前述のＢＬ／６系のミックスである。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のミックスの１２９系は、１２９Ｓ６（１２９／ＳｖＥｖＴａｃ）系である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のマウスは、ＢＡＬＢ系（例えば、ＢＡＬＢ／ｃ系）である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のマウスは、ＢＡＬＢ系と別の前述の系統とのミックスである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ラットである。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のラットは、Ｗｉｓｔａｒラット、ＬＥＡ系、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ系、Ｆｉｓｃｈｅｒ系、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉから選択される。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載のラット系統は、Ｗｉｓｔａｒ、ＬＥＡ、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ、Ｆｉｓｃｈｅｒ、Ｆ３４４、Ｆ６、及びＤａｒｋ Ａｇｏｕｔｉからなる群から選択される２つ以上の系統のミックスである。
ラットの多能性及び／または全能性の細胞は、任意のラット系統に由来するものであり得、こうしたラット系統には、例えば、ＡＣＩラット系統（Ａｕｇｕｓｔ系及びＣｏｐｅｎｈａｇｅｎ系を起源とする近交系）、Ｄａｒｋ Ａｇｏｕｔｉ（ＤＡ）ラット系統、Ｗｉｓｔａｒラット系統、ＬＥＡラット系統、Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット系統、またはＦｉｓｃｈｅｒラット系統（Ｆｉｓｈｅｒ Ｆ３４４もしくはＦｉｓｈｅｒ Ｆ６など）が含まれる。ラットの多能性及び／または全能性の細胞は、上記の系統の２つ以上のミックスに由来する系統から得ることもできる。例えば、ラットの多能性及び／または全能性の細胞は、ＤＡ系またはＡＣＩ系に由来し得る。ＡＣＩラット系統は、毛皮模様が黒のアグーチであり、腹部及び足が白く、ＲＴ１ａｖ１ハプロタイプを有することによって特徴付けられる。そのような系統は、Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓを含めて、さまざまな供給元から利用可能である。ＡＣＩラットに由来するラットＥＳ細胞株の例は、ＡＣＩ．Ｇ１ラットＥＳ細胞である。ＤＡラット系統は、毛皮模様がアグーチであり、ＲＴ１ａｖ１ハプロタイプを有することによって特徴付けられる。そのようなラットは、Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ ａｎｄ Ｈａｒｌａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓを含めて、さまざまな供給元から利用可能である。ＤＡラットに由来するラットＥＳ細胞株の例は、ＤＡ．２ＢラットＥＳ細胞株及びＤＡ．２ＣラットＥＳ細胞株である。いくつかの実施形態では、ラットの多能性及び／または全能性の細胞は、近交系ラット系統に由来する（例えば、２０１４年８月２１日公開の米国特許出願公開第２０１４−０２３５９３３Ａ１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。本明細書に記載の方法及び／またはコンストラクトを使用してラットゲノム（例えば、ラットＥＳ細胞のゲノム）に改変を施すための指針は、例えば、米国特許出願公開第２０１４−０３１０８２８号及び同第２０１７−０２０４４３０号（これらの文献は両方共、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。
特定の実施形態例−免疫グロブリン重鎖遺伝子座
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むと共に、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子、非ヒト免疫グロブリン重鎖エンハンサー、及び非ヒト免疫グロブリン重鎖調節領域に機能可能なように連結された複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントが生殖細胞における配置で存在することによって特徴付けられる操作されたＩｇＨ遺伝子座（またはアレル）をさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座（またはアレル）は、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＶＨ遺伝子セグメントであるＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作されたＩｇＨ遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＤＨ遺伝子セグメントであるＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＪＨ遺伝子セグメントであるＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも含む。
本明細書に記載の非ヒト動物は、その抗体選択機構及び抗体生成機構（例えば、組換え及び体細胞超変異）において、自体のゲノムに含められたヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントを利用することになるという認識を本開示は有する。したがって、さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物によって生じるヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインは、自体のゲノムに含まれるヒト重鎖可変領域遺伝子セグメントまたは体細胞超変異が生じたそのバリアントによってコードされる。
いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体のゲノムに含む非ヒト動物が提供され、非ヒト動物は、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含むＢ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本開示のマウスのＢ細胞に存在するヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれを超える数の体細胞超変異を有する。成熟抗体配列への供給源となった遺伝子セグメントを同定する方法を当業者なら認識するであろう。例えば、この分析の支援にはさまざまなツールが利用可能であり、こうしたツールは、例えば、ＤＮＡＰＬＯＴ、ＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴ、ＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ、ＳｏＤＡ、及びＡｂ−ｏｒｉｇｉｎなどである。
いくつかの実施形態では、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域は、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子（例えば、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、免疫グロブリンＤ（ＩｇＤ）、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）、及び免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）など）を含む。いくつかのある特定の実施形態では、非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域は、げっ歯類ＩｇＭ定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＤ定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＧ３定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＧ１定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＧ２ｂ定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＧ２ａ定常領域遺伝子、げっ歯類ＩｇＥ定常領域遺伝子、及びげっ歯類ＩｇＡ定常領域遺伝子を含む。いくつかの実施形態では、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖エンハンサー（すなわち、エンハンサー配列またはエンハンサー領域）に機能可能なように連結される。いくつかの実施形態では、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖調節領域（または調節配列）に機能可能なように連結される。いくつかの実施形態では、当該ヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントは、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖エンハンサー（またはエンハンサー配列）、及び１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖調節領域（または調節配列）に機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、内在性のＡｄａｍ６遺伝子を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、同じ種の野生型非ヒト動物の生殖細胞ゲノムに見られる位置と同じ生殖細胞ゲノム位置に内在性のＡｄａｍ６遺伝子（またはＡｄａｍ６コード配列）を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子を含まない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、非ヒト（例えば、げっ歯類）のＡｄａｍ６ポリペプチド、Ａｄａｍ６機能性オルソログ、Ａｄａｍ６機能性ホモログ、またはその機能性断片を１つまたは複数コードする少なくとも１つのヌクレオチド配列の挿入を含む。いくつかの実施形態では、当該挿入は、非ヒト動物、細胞、または組織の生殖細胞ゲノムにおける、本明細書に記載の操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の外側（例えば、限定されないが、最も５’側のＶＨ遺伝子セグメントの上流）、操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の内部、またはその他の場所（例えば、限定されないが、非ヒトＡｄａｍ６コード配列が無作為に導入される場合）になされ得る。
さまざまな実施形態において、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、抗体分子における内在性の非ヒトＶＨ領域の全部または一部を検出可能なほど発現しない。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、抗体分子における内在性の非ヒトＶＨ領域（例えば、ＶＨ、ＤＨ及び／またはＪＨ）の全部または一部をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含まない（または当該ヌクレオチド配列を欠いているか、もしくは当該ヌクレオチド配列の欠失を含む）。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、内在性の非ヒトＶＨ遺伝子セグメント、非ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び非ヒトＪＨ遺伝子セグメントの全部または一部の欠失を含む生殖細胞ゲノムを有する。さまざまな実施形態において、提供される非ヒト動物は、繁殖力を有する。
そのような操作された免疫グロブリン重鎖遺伝子座（またはアレル）を保有する標的化ベクター、非ヒト細胞、及び非ヒト動物を創出するための指針は、米国特許第８，５０２，０１８号、同第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、及び同第８，７９１，３２３号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。非ヒト（例えば、哺乳類）ゲノムのそのような遺伝子操作及び／または遺伝子処理を達成するための技術、あるいは非ヒト動物の生殖細胞ゲノムに導入するためのそのような配列をその他の方法で調製、提供、または製造するための技術は、さまざまなものが当該技術分野で知られており、こうしたさまざまな技術を当業者なら認識している。
特定の実施形態例−免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに挿入された非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子の上流に挿入された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが生殖細胞における配置（すなわち、再構成されておらず、組換えシグナル配列が付随する状態）で存在することによって特徴付けられる操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含む。本明細書に記載のように、そのような操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）をさらに含む。いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のクラスターＡに見られるヒトＶλ遺伝子セグメントを少なくとも含み、いくつかの実施形態では、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のクラスターＡ及びクラスターＢに見られるヒトＶλ遺伝子セグメントを少なくとも含み、いくつかのある特定の実施形態では、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のクラスターＡ、クラスターＢ、及びクラスターＣに見られるヒトＶλ遺伝子セグメントを少なくとも含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＶλ遺伝子セグメントであるＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＪλ遺伝子セグメントであるＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも含む。
本明細書に記載の非ヒト動物は、その抗体選択機構及び抗体生成機構（例えば、組換え及び体細胞超変異）において、自体のゲノムに含められたヒトλ軽鎖可変領域遺伝子セグメントを利用することになるという認識を本開示は有する。したがって、さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物によって生じるヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインは、自体のゲノムに含まれるヒトλ軽鎖可変領域遺伝子セグメントまたは体細胞超変異が生じたそのバリアントによってコードされる。
いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体のゲノムに含む非ヒト動物が提供され、非ヒト動物は、体細胞超変異が生じたヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列を含むＢ細胞を含む。いくつかの実施形態では、本開示のマウスのＢ細胞に存在するヒト重鎖可変領域配列、ヒトλ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトκ軽鎖可変領域配列は、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、またはそれを超える数の体細胞超変異を有する。成熟抗体配列への供給源となった遺伝子セグメントを同定する方法を当業者なら認識するであろう。例えば、この分析の支援にはさまざまなツールが利用可能であり、こうしたツールは、例えば、ＤＮＡＰＬＯＴ、ＩＭＧＴ／Ｖ−ＱＵＥＳＴ、ＪＯＩＮＳＯＬＶＥＲ、ＳｏＤＡ、及びＡｂ−ｏｒｉｇｉｎなどである。
多くの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、野生型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に見られるものと同じ非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）を含む。いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、異なる種（例えば、異なるげっ歯類種）の野生型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に見られる非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー領域（またはエンハンサー配列）を含む。
いくつかの実施形態では、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー（すなわち、エンハンサー配列またはエンハンサー領域）に機能可能なように連結される。いくつかのある特定の実施形態では、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、ネズミ免疫グロブリンκ軽鎖イントロンエンハンサー領域（ＩｇκＥｉまたはＥｉκ）に機能可能なように連結される。いくつかのある特定の実施形態では、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、ネズミ免疫グロブリンκ軽鎖３’エンハンサー領域（Ｉｇκ３’Ｅまたは３’Ｅκ）に機能可能なように連結される。いくつかのある特定の実施形態では、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、ネズミＥｉκに機能可能なように連結され、かつネズミ３’Ｅκに機能可能なように連結される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）は、ヒトＶｐｒｅＢ遺伝子（またはヒトＶｐｒｅＢ遺伝子コード配列）を含まない（すなわち、欠いている）。
いくつかの実施形態では、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、げっ歯類Ｃλ遺伝子（例えば、マウスＣλ遺伝子またはラットＣλ遺伝子など）を含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、１２９系、ＢＡＬＢ／ｃ系、Ｃ５７ＢＬ／６系、１２９ｘＣ５７ＢＬ／６ミックス系、またはそれらの組み合わせを含む遺伝的背景に由来するマウスＣλ遺伝子であるか、または当該マウスＣλ遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、配列番号１（マウスＣλ１）、配列番号３（マウスＣλ２）、または配列番号５（マウスＣλ３）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、配列番号１（マウスＣλ１）、配列番号３（マウスＣλ２）、または配列番号５（マウスＣλ３）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子の配列であるか、または当該配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλドメインは、配列番号２（マウスＣλ１）、配列番号４（マウスＣλ２）、または配列番号６（マウスＣλ３）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλドメインは、配列番号２（マウスＣλ１）、配列番号４（マウスＣλ２）、または配列番号６（マウスＣλ３）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλ遺伝子は、マウスＣλ１ドメインポリペプチドであるか、またはマウスＣλ１ドメインポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、配列番号７（ラットＣλ１）、配列番号９（ラットＣλ２）、配列番号１１（ラットＣλ３）、または配列番号１３（ラットＣλ４）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、配列番号７（ラットＣλ１）、配列番号９（ラットＣλ２）、配列番号１１（ラットＣλ３）、または配列番号１３（ラットＣλ４）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかのある特定の実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）の非ヒトＣλ遺伝子は、ラットＣλ１遺伝子の配列であるか、または当該配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλドメインは、配列番号８（ラットＣλ１）、配列番号１０（ラットＣλ２）、配列番号１２（ラットＣλ３）、または配列番号１４（ラットＣλ４）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλドメインは、配列番号８（ラットＣλ１）、配列番号１０（ラットＣλ２）、配列番号１２（ラットＣλ３）、または配列番号１４（ラットＣλ４）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされる非ヒトＣλドメインは、ラットＣλ１ドメインポリペプチドであるか、またはラットＣλ１ドメインポリペプチドを含む。
いくつかの実施形態では、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）のヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ遺伝子（例えば、ヒトＣλ１遺伝子、ヒトＣλ２遺伝子、ヒトＣλ３遺伝子、ヒトＣλ６遺伝子、またはヒトＣλ７遺伝子など）を含む。いくつかのある特定の実施形態では、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）のヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ２遺伝子であるか、またはヒトＣλ２遺伝子を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）のヒトＣλ遺伝子は、配列番号１５（ヒトＣλ１）、配列番号１７（ヒトＣλ２）、配列番号１９（ヒトＣλ３）、配列番号２１（ヒトＣλ６）、または配列番号２３（ヒトＣλ７）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）のヒトＣλ遺伝子は、配列番号１５（ヒトＣλ１）、配列番号１７（ヒトＣλ２）、配列番号１９（ヒトＣλ３）、配列番号２１（ヒトＣλ６）、または配列番号２３（ヒトＣλ７）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）のヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ２遺伝子の配列であるか、または当該配列を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされるヒトＣλドメインは、配列番号１６（ヒトＣλ１）、配列番号１８（ヒトＣλ２）、配列番号２０（ヒトＣλ３）、配列番号２２（ヒトＣλ６）、または配列番号２４（ヒトＣλ７）との同一性が少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９８％である配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされるヒトＣλドメインは、配列番号１６（ヒトＣλ１）、配列番号１８（ヒトＣλ２）、配列番号２０（ヒトＣλ３）、配列番号２２（ヒトＣλ６）、または配列番号２４（ヒトＣλ７）と実質的に同一または同一の配列を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）に配置される配列によってコードされるヒトＣλドメインは、ヒトＣλ２ドメインポリペプチドであるか、またはヒトＣλ２ドメインポリペプチドを含む。
とりわけ、本開示は、Ｉｇκ軽鎖遺伝子座（またはアレル）にヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することで、提供される非ヒト動物の軽鎖レパートリーの多様性が、そのような操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を含まない非ヒト動物が発現する抗体レパートリーにおける軽鎖の多様性と比較して増加することを示す。
特定の実施形態例−免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むと共に、野生型の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（もしくはアレル）または不活化された免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（もしくはアレル）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、及び／または非ヒト組織は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座の全部または一部の欠失を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、及び／または非ヒト組織は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座内に挿入を含み、当該挿入によって、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座が非機能化する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、及び／または非ヒト組織は、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座の１つまたは複数の遺伝子セグメントの欠失を含み、その結果、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座は、抗体の機能性軽鎖を生じさせる組換え及び／またはその発現を行うことができない。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、抗体分子における内在性の非ヒトＶλ領域の全部または一部を検出可能なほど発現しない。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、抗体分子における内在性の非ヒトＶλ領域の全部または一部をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列を含まない（または当該ヌクレオチド配列を欠いているか、もしくは当該ヌクレオチド配列の欠失を含む）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、内在性の非ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの全部または一部の欠失を含む生殖細胞ゲノムを有する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、内在性の非ヒトＶλ遺伝子セグメント、非ヒトＪλ遺伝子セグメント、及び非ヒトＣλ遺伝子セグメントの全部または一部の欠失を含む生殖細胞ゲノムを有する。
不活化されたＩｇλ軽鎖遺伝子座（またはアレル）を保有する標的化ベクター、非ヒト細胞、及び動物を創出するための指針は、例えば、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０１２，７１７号、同第９，０２９，６２８号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）において見つけることができる。非ヒト（例えば、哺乳類）ゲノムの特定の遺伝子座の遺伝子的不活化及び／または非ヒト（例えば、哺乳類）ゲノムの処理を達成するための技術、あるいは非ヒト動物の生殖細胞ゲノムに導入するためのそのような遺伝子的不活化（例えば、遺伝子欠失）をその他の方法で調製、提供、または製造するための技術は、さまざまなものが当該技術分野で知られており、こうしたさまざまな技術を当業者なら認識している。
特定の実施形態例−免疫グロブリン遺伝子座の組み合わせ
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むと共に、（例えば、異種交配または複数の遺伝子標的化方針を介して）１つまたは複数の追加のヒト遺伝子またはヒト化遺伝子をさらに含む。そのような非ヒト動物は、上記のように作製されるか、または当該技術分野で知られる方法が使用されることで、非ヒト動物の意図される使用に応じて、所望の操作された遺伝子型が達成され得る。そのような追加のヒト遺伝子またはヒト化遺伝子の遺伝物質は、上記の遺伝子改変を有する細胞（例えば、胚性幹細胞）のゲノムをさらに改変するか、または望まれるように遺伝子改変された他の系統を用いて当該技術分野で知られる交配繁殖技術を適用することによって、導入され得る。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（例えば、限定されないが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含むものが挙げられる）をさらに含むように作製される。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型であり、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であり、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（例えば、限定されないが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含むものが挙げられる）と、ヒト化免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（例えば、限定されないが、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に含むものが挙げられる）と、をさらに含むように作製される。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてヘテロ接合型であり、げっ歯類免疫グロブリンλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む１つの内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（すなわち、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座）と、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを有する別の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、をさらに含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型であり、げっ歯類免疫グロブリンλ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む１つの内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（すなわち、本明細書に記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座）と、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを有する別の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、をさらに含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、（ａ）非ヒトＣＨドメイン配列と融合したヒトＶＨドメイン配列を含む免疫グロブリン重鎖を非ヒト動物が発現するように１つまたは複数の内在性の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結されたヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含むホモ接合型またはヘテロ接合型のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座と、（ｂ）非ヒトＣλドメイン配列と融合したヒトＶλドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を非ヒト動物が発現するように非ヒト免疫グロブリンＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む第１の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、（ｃ）マウスＣκドメイン配列と融合したヒトＶκドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を非ヒト動物が発現するように内在性の非ヒトＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、を含むゲノムを有する。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、（ａ）非ヒトＣＨドメイン配列と融合したヒトＶＨドメイン配列を含む免疫グロブリン重鎖を非ヒト動物が発現するように１つまたは複数の内在性の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域に機能可能なように連結されたヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含むホモ接合型またはヘテロ接合型のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座またはヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座と、（ｂ）非ヒトＣλドメイン配列と融合したヒトＶλドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を非ヒト動物が発現するように非ヒト免疫グロブリンＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む第１の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、（ｃ）マウスＣκドメイン配列と融合したヒトＶκドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を非ヒト動物が発現するように内在性の非ヒトＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、（ｄ）全部または一部が機能的に不活化または欠失した、ホモ接合型またはヘテロ接合型の内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座と、を含むゲノムを有する。
例えば、本明細書に記載のように、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含む非ヒト動物は、米国特許第８，６４２，８３５号、同第８，６９７，９４０号、同第９，００６，５１１号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって組み込まれる）に記載の改変を（例えば、交配または複数の遺伝子標的化方針を介して）１つまたは複数、さらに含み得る。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（例えば、１つまたは複数の非ヒト免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶＨ遺伝子セグメント、ヒトＤＨ遺伝子セグメント、及びヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む免疫グロブリン重鎖遺伝子座）をさらに含む。いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座、及び非機能性の内在性免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（例えば、その全部もしくは一部が欠失しているか、またはその他様式で非機能化されたもの）をさらに含む。
いくつかの実施形態では、提供される非ヒト動物は、非ヒトＣκ遺伝子の代わりに配置されたヒトＣλ遺伝子または非ヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを有する免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、内在性の非ヒトＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、を含む。そのような実施形態では、提供される非ヒト動物は、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘミ接合型と称される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される当該ヘミ接合型の非ヒト動物は、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座をさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される当該ヘミ接合型の非ヒト動物は、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座、及び非機能性の内在性免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む。
提供される非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織の使用方法
本明細書に記載の非ヒト動物は、抗体を開発するためのプラットホームとして使用することができる。具体的には、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒトラムダ軽鎖可変ドメイン及びそのようなヒトラムダ軽鎖可変ドメインを含む抗体の生成及び同定に特に有利なプラットホームとなる。
したがって、本開示は、抗体の調製方法において本明細書に記載の非ヒト動物を使用できることを示す。本開示に従って調製される抗体には、例えば、ヒト抗体、キメラ抗体、リバースキメラ抗体、これらの抗体のいずれかの断片、またはそれらの組み合わせが含まれ得る。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒト抗体（例えば、完全ヒト抗体）の調製に用いることができ、当該ヒト抗体は、本明細書に記載の非ヒト動物の細胞の遺伝物質によってコードされる核酸配列に由来する可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、目的抗原に対する免疫応答を当該非ヒト動物に生じさせる上で十分な条件及び時間を適用して当該目的抗原で免疫化される。そのように免疫化された非ヒト動物（または１つもしくは複数の細胞（例えば、１つもしくは複数のＢ細胞）から抗体及び／または抗体配列（すなわち、抗体の一部をコードする配列（例えば、可変領域配列））が単離及び／または同定され、さまざまなアッセイを使用して特徴付けられる。こうしたアッセイは、例えば、親和性、特異性、エピトープマッピング、リガンド−受容体相互作用の遮断能力、抑制受容体活性化などを測定するアッセイである。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物によって産生される抗体は、当該非ヒト動物から単離された１つまたは複数のヒト可変領域ヌクレオチド配列に由来する１つまたは複数のヒト可変領域を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物において抗薬物抗体（例えば、抗イディオタイプ抗体）が産生され得る。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物によって産生される抗体は、ヒト軽鎖可変ドメイン及び非ヒト（例えば、げっ歯類）軽鎖定常ドメイン、及び／またはヒト重鎖可変ドメイン及び非ヒト（例えば、げっ歯類）重鎖定常ドメインを含むリバースキメラ抗体である。
さまざまな実施形態において、非ヒト動物によって産生される抗体は、ヒト可変ドメイン及び非ヒト定常ドメインを有する重鎖及び軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物によって産生される抗体は、ヒト軽鎖可変ドメイン及び非ヒト（例えば、げっ歯類）軽鎖定常ドメインを含むリバースキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物によって産生される抗体は、ヒト重鎖可変ドメイン及び非ヒト（例えば、げっ歯類）重鎖定常ドメインを含むリバースキメラ抗体である。
いくつかの実施形態では、提供される方法は、本明細書に記載の非ヒト動物を目的抗原で免疫化することを含む。いくつかの実施形態では、提供される方法は、当該非ヒト動物からリンパ球（例えば、クローン的に選択されたリンパ球）を同定することを含み、当該リンパ球は、目的抗原に結合する（例えば、特異的に結合する）抗体を発現する。いくつかの実施形態では、リンパ球は、Ｂ細胞である。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖可変領域配列、ヒトラムダ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトカッパ軽鎖可変領域配列が、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）から得られ、及び／または同定される（例えば、遺伝子型が同定される（例えば、シークエンスされる））。いくつかの実施形態では、ヒト重鎖可変ドメイン、ヒトラムダ軽鎖可変ドメイン、及び／またはヒトカッパ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、リンパ球（例えば、Ｂ細胞）から得られ、及び／または同定される（例えば、シークエンスされる）。いくつかの実施形態では、非ヒト動物のＢ細胞に由来するヒト重鎖可変領域配列、ヒトラムダ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトカッパ軽鎖可変領域配列は、宿主細胞において発現する。いくつかの実施形態では、非ヒト動物のＢ細胞に由来するヒト重鎖可変領域配列、ヒトラムダ軽鎖可変領域配列、及び／またはヒトカッパ軽鎖可変領域配列のバリアントは、宿主細胞において発現する。いくつかの実施形態では、バリアントは、１つまたは複数の変異を含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異によって、バリアントを含む抗体の薬物動態特性及び／または薬力学的特性が改良され得る。いくつかの実施形態では、１つまたは複数の変異によって、バリアントを含む抗体の特異性、親和性、及び／または免疫原性が改良され得る。
いくつかの実施形態では、ヒト抗体の調製方法は、本明細書に記載の非ヒト動物に由来するヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメイン及び／またはヒト免疫グロブリン軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を同定すること、ならびに（ｉ）ヒト免疫グロブリン重鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列に対してヒト免疫グロブリン重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を連結またはライゲーションし、それによって、完全ヒト免疫グロブリン重鎖をコードするヒト免疫グロブリン重鎖配列を形成させること、（ｉｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列に対してヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を連結またはライゲーションし、それによって、完全ヒト免疫グロブリンλ軽鎖をコードするヒト免疫グロブリンλ軽鎖配列を形成させること、及び／または（ｉｉｉ）ヒト免疫グロブリンκ軽鎖定常ドメインをコードするヌクレオチド配列に対してヒト免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を連結またはライゲーションし、それによって、完全ヒト免疫グロブリンκ軽鎖をコードするヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列を形成させること、を含む。ある特定の実施形態では、ヒト免疫グロブリン重鎖配列と、（ｉ）ヒト免疫グロブリンλ軽鎖配列、または（ｉｉ）ヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列とが、細胞（例えば、宿主細胞、哺乳類細胞）において発現し、その結果、完全ヒト免疫グロブリン重鎖と、（ｉ）完全ヒト免疫グロブリンλ軽鎖、または（ｉｉ）完全ヒト免疫グロブリンκ軽鎖とが、発現し、ヒト抗体を形成する。いくつかの実施形態では、ヒト抗体は、細胞、または細胞を含む培地から単離される。
本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の非ヒト動物によって生じるヒト可変ドメイン（例えば、エピトープまたは抗原に対する抗体の一部としてのもの）をコードするヌクレオチド配列または核酸配列を同定するために用いられ得る。
本明細書に記載の非ヒト動物は、本明細書に記載の非ヒト動物によって生じるヒト可変ドメイン（例えば、エピトープまたは抗原に対する抗体の一部としてのもの）のアミノ酸配列を同定するために用いられ得る。
本明細書に記載の非ヒト動物は、さまざまなアッセイに有用なヒト抗体を産生させるための改良型のインビボ系及び生物学的材料（例えば、細胞、ヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質複合体）供給源となる。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、目的ポリペプチド（例えば、膜貫通ポリペプチドもしくは分泌ポリペプチド）を標的とし、及び／または当該目的ポリペプチドと関連する１つもしくは複数の活性を調節し、及び／または当該目的ポリペプチドと他の結合パートナー（例えば、リガンドもしくは受容体ポリペプチド）との相互作用を調節する治療剤の開発に使用される。例えば、さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の受容体ポリペプチドを標的とし、受容体ポリペプチドの活性を調節し、及び／または受容体ポリペプチドと他の結合パートナーとの相互作用を調節する治療剤の開発に使用される。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の目的ポリペプチドに結合する候補治療剤（例えば、抗体、ｓｉＲＮＡなど）の同定、スクリーニング、及び／または開発に使用される。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つもしくは複数の目的ポリペプチドの活性を遮断するか、または１つもしくは複数の目的受容体ポリペプチドの活性を遮断する候補治療剤（例えば、抗体、ｓｉＲＮＡなど）のスクリーニング及び開発に使用される。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の目的ポリペプチドのアンタゴニスト及び／またはアゴニストの結合プロファイルの決定に使用される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数の目的ポリペプチドに結合する１つまたは複数の候補治療抗体のエピトープ（複数可）の決定に使用される。
さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、１つまたは複数のヒト抗体候補の薬物動態プロファイルの決定に使用される。さまざまな実施形態において、１匹または複数匹の本明細書に記載の非ヒト動物と、１匹または複数匹の対照または参照の非ヒト動物とは、さまざまな用量（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．４ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、４ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｍｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、もしくは５０ｍｇ／ｋｇ、またはそれを超える用量）で１つまたは複数のヒト抗体候補にそれぞれが曝露される。候補治療抗体は、注射投与経路、ならびに非注射投与経路を含めて、任意の所望の投与経路を介して投与され得る。注射投与経路には、例えば、静脈内注射、動脈内注射、門脈内注射、筋肉内注射、皮下注射、腹腔内注射、脊髄内注射、くも膜下腔内注射、脳室内注射、頭蓋内注射、胸膜内注射、または他の注射経路が含まれる。非注射投与経路には、例えば、経口投与、鼻腔投与、経皮投与、肺投与、直腸投与、頬側投与、膣投与、眼投与が含まれる。投与は、持続注入、局所投与、留置物（ゲル、膜、もしくは同様のもの）からの持続放出、及び／または静脈内注射によるものでもあり得る。さまざまな時点（例えば、０時間時点、６時間時点、１日時点、２日時点、３日時点、４日時点、５日時点、６日時点、７日時点、８日時点、９日時点、１０日時点、１１日時点、または最大で３０日以上が経過した時点）に非ヒト動物（ヒト化された非ヒト動物、及び対照非ヒト動物）から血液が単離される。本明細書に記載の非ヒト動物から得られた試料を使用してさまざまなアッセイ（限定されないが、全ＩｇＧ、抗治療抗体応答、凝集を調べるものなどが含まれる）が実施されることで、投与された候補治療抗体の薬物動態プロファイルが決定され得る。
さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、目的ポリペプチドの活性を遮断もしくは調節する治療効果、及び細胞変化の結果としての遺伝子発現に対する効果、または受容体ポリペプチドが存在する状況の下での、非ヒト動物における細胞表面の受容体ポリペプチドの密度に対する効果、を測定するために使用される。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物、またはそこから単離された細胞は、目的ポリペプチドに結合する候補治療剤に曝露され、その後、ある一定時間が経過してから、当該目的ポリペプチドと関連する特定の細胞プロセス（例えば、リガンド−受容体相互作用またはシグナル伝達）に対する効果について分析される。
本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒト抗体可変領域を発現するため、細胞、細胞株、及び細胞培養物を生成させることで、結合アッセイ及び機能性アッセイにおいて使用するためのヒト抗体可変領域の供給源として役立ち得るものであり、こうしたアッセイは、例えば、アンタゴニストまたはアゴニストの結合または機能についてのアッセイであり、具体的には、アンタゴニストまたはアゴニストが、目的ヒト抗原に特異的であるか、またはリガンド−受容体相互作用（結合）において機能するエピトープに特異的である場合に行われる。さまざまな実施形態において、候補治療抗体または候補治療ｓｉＲＮＡが結合するエピトープを、本明細書に記載の非ヒト動物から単離された細胞を使用して決定することができる。
提供される非ヒト動物に由来する細胞は、必要に応じて特定の目的のために単離及び使用するか、または多世代にわたって培養で維持することができる。さまざまな実施形態において、提供される非ヒト動物に由来する細胞は、不死化（例えば、ウイルスを使用することによるもの）され、培養（例えば、連続培養）で無期限に維持される。
いくつかの実施形態では、非ヒト細胞は、非ヒトリンパ球である。いくつかの実施形態では、非ヒト細胞は、Ｂ細胞、樹状細胞、マクロファージ、単球、及びＴ細胞から選択される。いくつかの実施形態では、非ヒト細胞は、未熟Ｂ細胞、成熟ナイーブＢ細胞、活性化Ｂ細胞、メモリーＢ細胞、及び／または形質細胞である。
いくつかの実施形態では、非ヒト細胞は、非ヒト胚性幹（ＥＳ）細胞である。いくつかの実施形態では、非ヒトＥＳ細胞は、げっ歯類ＥＳ細胞である。いくつかのある特定の実施形態では、げっ歯類ＥＳ細胞は、マウスＥＳ細胞であり、１２９系、Ｃ５７ＢＬ系、ＢＡＬＢ／ｃ、またはそれらのミックスに由来する。いくつかのある特定の実施形態では、げっ歯類胚性幹細胞は、マウス胚性幹細胞であり、１２９系とＣ５７ＢＬ系とのミックスである。いくつかのある特定の実施形態では、げっ歯類胚性幹細胞は、マウス胚性幹細胞であり、１２９系、Ｃ５７ＢＬ系、及びＢＡＬＢ／ｃ系のミックスである。
いくつかの実施形態では、非ヒト動物を作製するために本明細書に記載の非ヒトＥＳ細胞が利用される。いくつかのある特定の実施形態では、非ヒトＥＳ細胞は、マウスＥＳ細胞であり、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むマウスの作製に使用される。いくつかのある特定の実施形態では、非ヒトＥＳ細胞は、ラットＥＳ細胞であり、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むラットの作製に使用される。
いくつかの実施形態では、非ヒト組織は、脂肪、膀胱、脳、乳房、骨髄、眼、心臓、腸、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、筋肉、膵臓、血漿、血清、皮膚、脾臓、胃、胸腺、精巣、卵、及びそれらの組み合わせから選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の単離された非ヒト細胞または非ヒト組織から調製、生成、産生、または取得された不死化細胞が提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒトＥＳ細胞から調製、生成、産生、または取得された非ヒト胚が提供される。いくつかのある特定の実施形態では、非ヒト胚は、げっ歯類胚であり、いくつかの実施形態では、マウス胚であり、いくつかの実施形態では、ラット胚である。
本明細書に記載の非ヒト動物は、目的ポリペプチドに結合するヒト抗体可変領域のバリアント（例えば、ヒトＶλドメインバリアント）を生成させるためのインビボ系を提供する。そのようなバリアントには、目的ポリペプチドのバリアントの２つ以上が共有する共通エピトープに対する所望の機能性、特異性、低交差反応性を有するヒト抗体可変領域が含まれる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物は、機能性が所望のものまたは改良されたものを得るためのスクリーニングの対象となる一連のバリアント可変領域を含むヒト抗体可変領域パネルを生成させるために用いられる。
本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒト抗体可変領域ライブラリー（例えば、ヒトＶλドメインライブラリー）を生成させるためのインビボ系を提供する。そのようなライブラリーは、重鎖可変領域配列及び／または軽鎖可変領域配列の供給源となり、こうした重鎖可変領域配列及び／または軽鎖可変領域配列は、所望のエフェクター機能に基づいて異なるＦｃ領域に移植することができ、当該技術分野で知られる手法を使用してそうした可変領域配列の親和性を成熟させるための供給源として使用することができ（例えば、部位特異的変異導入、エラープローンＰＣＲなど）、及び／または抗体ベースの治療分子（例えば、キメラ抗原受容体（すなわち、抗体構成要素を使用して操作された分子（例えば、ｓｃＦｖ））、多重特異性の結合物質（例えば、二重特異性結合物質）、及び融合タンパク質（例えば、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖなど）など）を生成させるための抗体構成要素の供給源として使用することができるものである。
いくつかの実施形態では、非ヒト動物における抗体の産生方法が提供され、この方法は、（ａ）本明細書に記載の非ヒト動物を目的抗原で免疫化するステップと、（ｂ）目的抗原に対する免疫応答を非ヒト動物が生成する上で十分な条件の下で非ヒト動物を維持するステップと、（ｃ）目的抗原に結合する抗体を非ヒト動物または非ヒト細胞から回収するステップと、を含む。
非ヒト動物における抗体の産生方法の実施形態のいくつかでは、非ヒト細胞は、Ｂ細胞である。非ヒト動物における抗体の産生方法の実施形態のいくつかでは、非ヒト細胞は、ハイブリドーマである。
いくつかの実施形態では、（ｉ）ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせと、（ｉｉ）ヒトＪＪλ１、ヒトＪλ２、ヒトＪλ３、ヒトＪλ６、ヒトＪλ７、またはそれらの任意の組み合わせと、（ｉｉｉ）非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子と、を含むホモ接合型の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物が提供され、（ｉ）〜（ｉｉｉ）は、機能可能なように互いに連結され、非ヒトＣλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座の非ヒトＣκ遺伝子の代わりに挿入され、ヒトＶλ遺伝子セグメント（複数可）は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座において対応するヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含み、ヒトＪλ遺伝子セグメント（複数可）は、天然では内在性のヒトλ軽鎖遺伝子座において対応するヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られるヒト非コードＤＮＡを含む。提供される非ヒト動物のある特定の実施形態のいくつかでは、非ヒトＣλ遺伝子は、マウスＣλ１遺伝子であるか、またはマウスＣλ１遺伝子を含む。提供される非ヒト動物のある特定の実施形態のいくつかでは、ヒトＣλ遺伝子は、ヒトＣλ２遺伝子であるか、またはヒトＣλ２遺伝子を含む。提供される非ヒト動物のある特定の実施形態のいくつかでは、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、非ヒト免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーであるＥκｉ及び３’Ｅκをさらに含む。提供される非ヒト動物のある特定の実施形態のいくつかでは、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、非ヒトＶκ遺伝子セグメント及び非ヒトＪκ遺伝子セグメントの欠失を含む。
いくつかの実施形態では、（ａ）本明細書に記載の非ヒト動物を提供するステップと、（ｂ）非ヒト動物を目的抗原で免疫化するステップと、（ｃ）目的抗原に対する免疫応答を非ヒト動物が生成する上で十分な条件の下で非ヒト動物を維持するステップと、（ｄ）目的抗原に結合する抗体を非ヒト動物または非ヒト細胞から回収するステップと、を含む方法によって調製される抗体が提供され、（ｄ）に記載の抗体は、ヒトＶＨドメイン及びヒトＶλドメインを含む。
方法によって調製される抗体の実施形態のいくつかでは、ヒトＶＨ３−７４、ヒトＶＨ３−７３、ヒトＶＨ３−７２、ヒトＶＨ２−７０、ヒトＶＨ１−６９、ヒトＶＨ３−６６、ヒトＶＨ３−６４、ヒトＶＨ４−６１、ヒトＶＨ４−５９、ヒトＶＨ１−５８、ヒトＶＨ３−５３、ヒトＶＨ５−５１、ヒトＶＨ３−４９、ヒトＶＨ３−４８、ヒトＶＨ１−４６、ヒトＶＨ１−４５、ヒトＶＨ３−４３、ヒトＶＨ４−３９、ヒトＶＨ４−３４、ヒトＶＨ３−３３、ヒトＶＨ４−３１、ヒトＶＨ３−３０、ヒトＶＨ４−２８、ヒトＶＨ２−２６、ヒトＶＨ１−２４、ヒトＶＨ３−２３、ヒトＶＨ３−２１、ヒトＶＨ３−２０、ヒトＶＨ１−１８、ヒトＶＨ３−１５、ヒトＶＨ３−１３、ヒトＶＨ３−１１、ヒトＶＨ３−９、ヒトＶＨ１−８、ヒトＶＨ３−７、ヒトＶＨ２−５、ヒトＶＨ７−４−１、ヒトＶＨ４−４、ヒトＶＨ１−３、ヒトＶＨ１−２、ヒトＶＨ６−１、または体細胞超変異が生じたそのバリアントを含む再構成されたヒト重鎖可変領域によってヒトＶＨドメインがコードされる。
方法によって調製される抗体の実施形態のいくつかでは、ヒトＶλ４−６９、ヒトＶλ８−６１、ヒトＶλ４−６０、ヒトＶλ６−５７、ヒトＶλ１０−５４、ヒトＶλ５−５２、ヒトＶλ１−５１、ヒトＶλ９−４９、ヒトＶλ１−４７、ヒトＶλ７−４６、ヒトＶλ５−４５、ヒトＶλ１−４４、ヒトＶλ７−４３、ヒトＶλ１−４０、ヒトＶλ５−３９、ヒトＶλ５−３７、ヒトＶλ１−３６、ヒトＶλ３−２７、ヒトＶλ３−２５、ヒトＶλ２−２３、ヒトＶλ３−２２、ヒトＶλ３−２１、ヒトＶλ３−１９、ヒトＶλ２−１８、ヒトＶλ３−１６、ヒトＶλ２−１４、ヒトＶλ３−１２、ヒトＶλ２−１１、ヒトＶλ３−１０、ヒトＶλ３−９、ヒトＶλ２−８、ヒトＶλ４−３、ヒトＶλ３−１、または体細胞超変異が生じたそのバリアントを含む再構成されたヒトλ軽鎖可変領域によってヒトＶλドメインがコードされる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、治療または診断のための薬物（例えば、抗体またはその断片）の製造及び／または開発において使用するために提供される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織は、疾患、障害、または病状の治療、予防、または軽快のための治療用薬剤の製造において使用するために提供される。
いくつかの実施形態では、薬剤において使用するための薬物またはワクチン（例えば、治療用薬剤として使用するためのものなど）の製造及び／または開発において本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、または非ヒト組織が利用される。
いくつかの実施形態では、抗体またはその断片の製造及び／または開発において本明細書に記載の非ヒト動物または非ヒト細胞が利用される。
本明細書に記載の非ヒト動物は、薬物またはワクチンを分析及び試験するためのインビボ系を提供する。さまざまな実施形態において、１匹または複数匹の本明細書に記載の非ヒト動物に候補薬物または候補ワクチンが送達された後、非ヒト動物が監視されることで、薬物またはワクチンに対する免疫応答、薬物またはワクチンの安全性プロファイル、あるいは疾患もしくは病状、及び／または疾患もしくは病状の１つもしくは複数の症状に対する作用、のうちの１つまたは複数が決定され得る。安全性プロファイルの決定に使用される方法の例としては、毒性の測定、最適用量濃度の測定、抗体（すなわち、抗薬物）応答の測定、薬物またはワクチンの効力の測定、及び考え得る危険因子の測定が挙げられる。そのような薬物またはワクチンは、そのような非ヒト動物において改良及び／または開発され得る。
ワクチンの効力は、いくつかの方法で決定され得る。簡潔に記載すると、当該技術分野で知られる方法を使用して本明細書に記載の非ヒト動物に予めワクチン接種が行われた後に非ヒト動物にワクチンとともに抗原が負荷されるか、または感染履歴を有する非ヒト動物にワクチンが投与される。非ヒト動物（複数可）（もしくはそこから単離された細胞）を監視し、及び／または非ヒト動物（複数可）（もしくはそこから単離された細胞）に対するアッセイを１つもしくは複数実施することによってワクチンに対する非ヒト動物（複数可）の応答が測定されることで、ワクチンの効力が決定され得る。次に、ワクチンに対する非ヒト動物（複数可）の応答は、当該技術分野で知られ、及び／または本明細書に記載される尺度の１つまたは複数を使用して対照動物と比較される。
ワクチンの効力は、ウイルス中和アッセイによってさらに決定され得る。簡潔に記載すると、本明細書に記載の非ヒト動物は、免疫化され、免疫化後のさまざまな日に血清が採取される。血清の段階希釈系列がウイルスと共に事前にインキュベートされ、このインキュベートの間に、当該ウイルスに特異的な血清中の抗体が当該ウイルスに結合することになる。次に、このウイルス／血清混合物が許容細胞に添加されることで、プラークアッセイまたはマイクロ中和アッセイによって感染性が決定される。血清中の抗体がウイルスを中和するのであれば、対照群と比較して、プラークの数が減るか、または相対ルシフェラーゼユニットが低下する。
本明細書に記載の非ヒト動物は、ヒト抗体可変領域を生成するものであり、それ故に、診断用途（例えば、免疫学、血清学、微生物学、細胞病理学など）において使用するためのヒト抗体を産生させるためのインビボ系を提供する。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物は、細胞変化（例えば、病理学的な変化を示す特定の細胞表面マーカーの発現など）を同定するための関連抗原部位に結合するヒト抗体可変領域の生成に使用され得る。そのような抗体は、さまざまな化学実体（例えば、放射性トレーサー）と複合体化され、望まれるようにさまざまなインビボのアッセイ及び／またはインビトロのアッセイにおいて用いられ得る。
本明細書に記載の非ヒト動物は、腫瘍疾患及び／または感染性疾患において使用するためのヒト抗体を開発及び選択するための改良型のインビボ系を提供する。さまざまな実施形態において、本明細書に記載の非ヒト動物及び対照非ヒト動物（例えば、本明細書に記載のものとは異なる遺伝子改変を有する非ヒト動物、または遺伝子改変を有さない非ヒト動物（すなわち、野生型の非ヒト動物））に対して、腫瘍（もしくは腫瘍細胞）が移植されるか、またはウイルス（例えば、インフルエンザ、ＨＩＶ、ＨＣＶ、ＨＰＶなど）の感染が行われ得る。感染の成立後、候補治療剤が非ヒト動物に投与され得る。非ヒト動物内の１つまたは複数の位置に腫瘍またはウイルスが確立するように十分な時間を取ってから、候補治療剤の投与が行われ得る。代替及び／または追加として、そのような非ヒト動物における免疫応答は、治療剤として開発され得る可能性のあるヒト抗体が特徴付け及び選択されるように監視され得る。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の非ヒト動物によって産生される抗体、核酸、もしくは治療的に関連するその一部、または本明細書に開示の非ヒト動物によって産生される抗体、核酸、もしくは治療的に関連するその一部に由来する抗体、核酸、もしくは治療的に関連するその一部は、対象（例えば、ヒト対象）に投与され得る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書に開示の非ヒト動物によって産生される抗体を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、緩衝剤、希釈剤、医薬品添加物、またはそれらの任意の組み合わせを含み得る。いくつかの実施形態では、組成物は、望まれるのであれば、追加の治療的に活性な物質も１つまたは複数含み得る。
本明細書で提供される医薬組成物の説明は、ヒトへの倫理的な投与に適した医薬組成物を主に対象としているが、そのような組成物は、一般に、すべての種類の動物への投与に適することを当業者なら理解するであろう。ヒトへの投与に適した医薬組成物を、そうした組成物がさまざまな動物への投与に適するように改変することについては知見が豊富であり、通常の技術を有する獣医学の薬理学者なら、そのような改変を設計及び／または実施することができ、こうした改変に伴う実験は、行われるとしても、単なる通常の実験にすぎない。
例えば、本明細書で提供される医薬組成物は、滅菌された注射用形態（例えば、皮下注射または静脈内注入に適した形態）で提供され得る。例えば、いくつかの実施形態では、医薬組成物は、注射に適した液体剤形で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、粉末（例えば、例えば、凍結乾燥され、及び／または滅菌されたもの）として提供され、こうした粉末は、任意選択で減圧下に置かれた状態であり、注射前に水性希釈剤（例えば、水、緩衝剤、塩溶液など）で再構成することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、水、塩化ナトリウム溶液、酢酸ナトリウム溶液、ベンジルアルコール溶液、リン酸緩衝生理食塩水などで希釈及び／または再構成される。いくつかの実施形態では、粉末は、水性希釈剤で穏やかに（例えば、振とうせずに）混合すべきである。
本明細書に記載の医薬組成物の製剤は、既知の任意の方法によって調製されるか、または薬理学の技術分野で今後開発される任意の方法によって調製され得る。一般に、そのような調製方法は、希釈剤もしくは別の医薬品添加物、及び／または１つもしくは複数の他の副成分に活性成分を結び付けた後、必要であり、及び／または望ましいのであれば、製品を所望の単回用量単位または複数回用量単位へと成型及び／または包装するステップを含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示の非ヒト動物によって産生される抗体を含む医薬組成物は、保管または投与のための容器（例えば、バイアル、シリンジ（例えば、ＩＶシリンジ）、またはバッグ（例えば、ＩＶバッグ））に含められ得る。本開示による医薬組成物は、単回単位用量、及び／または複数の単回単位用量としてバルクで調製、包装、及び／または販売され得る。本明細書で使用される「単位用量」は、所定量の活性成分を含む個別の医薬組成物量である。活性成分の量は、一般に、対象への投与が想定される活性成分用量、及び／またはそのような用量の好都合な画分（例えば、そのような用量の２分の１もしくは３分の１など）に等しい。
本開示による医薬組成物における活性成分、医薬的に許容可能な医薬品添加物、及び／または任意の追加成分の相対量は、治療される対象の独自性、大きさ、及び／または病状に応じるだけでなく、組成物が投与されることになる経路にも応じて、異なることになる。例として、組成物は、活性成分を０．１％〜１００％（ｗ／ｗ）含み得る。
医薬組成物は、医薬的に許容可能な医薬品添加物を追加で含み得、こうした医薬的に許容可能な医薬品添加物には、本明細書で使用されるように、溶剤、分散媒体、希釈剤、または他の液体媒体、分散助剤または懸濁助剤、界面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固形結合剤、滑沢剤、及び同様のもののうちのいずれかまたはすべてが含まれ、これらのものは、特定の所望の剤形に適合化される。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，ＭＤ，２００６）では、医薬組成物の製剤化において使用されるさまざまな医薬品添加物、及び医薬組成物を調製するための既知の手法が開示されている。いずれの通常の医薬品添加物媒体も、いずれかの望ましくない生物学的作用を引き起こすか、またはその他の有害な様式で医薬組成物の任意の他の成分（複数可）と相互作用するなどして物質またはその誘導体と不適合とならない限りにおいては、その使用が本開示の範囲に含まれることが企図される。
いくつかの実施形態では、医薬的に許容可能な医薬品添加物の純度は、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％である。いくつかの実施形態では、医薬品添加物は、ヒトにおける使用及び獣医学的使用について認可されているものである。いくつかの実施形態では、医薬品添加物は、米国食品医薬品局によって認可されているものである。いくつかの実施形態では、医薬品添加物は、医薬品グレードのものである。いくつかの実施形態では、医薬品添加物は、米国薬局方（ＵＳＰ）、欧州薬局方（ＥＰ）、英国薬局方、及び／または国際薬局方の基準を満たすものである。
医薬組成物の製造において使用される医薬的に許容可能な医薬品添加物には、限定されないが、不活性な希釈剤、分散剤、及び／または造粒剤、界面活性剤及び／または乳化剤、崩壊剤、結合剤、保存剤、緩衝剤、滑沢剤、及び／または油が含まれる。そのような医薬品添加物は、医薬製剤に任意選択で含められ得る。ココアバター及び坐剤ワックス、着色剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤、及び／または芳香剤などの医薬品添加物を製剤者の判断に従って組成物に含めることができる。
いくつかの実施形態では、提供される医薬組成物は、１つまたは複数の医薬的に許容可能な医薬品添加物（例えば、保存剤、不活性な希釈剤、分散剤、界面活性剤及び／または乳化剤、緩衝剤など）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１つまたは複数の保存剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、保存剤を含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、冷蔵状態及び／または凍結状態であり得る形態で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、冷蔵状態及び／または凍結状態ではあり得ない形態で提供される。いくつかの実施形態では、再構成された溶液及び／または液体剤形は、再構成後、ある特定の期間（例えば、２時間、１２時間、２４時間、２日間、５日間、７日間、１０日間、２週間、１ヶ月間、２ヶ月間、またはそれより長い期間）保管され得る。いくつかの実施形態では、抗体組成物が特定の期間を超えて保管されると抗体の分解を招く。
液体剤形及び／または再構成された溶液は、投与前に微粒子状物質及び／または変色を含み得る。いくつかの実施形態では、溶液に変色もしくは濁りがあり、及び／またはろ過後に微粒子状物質が残存するのであれば、その溶液は使用すべきでない。
医薬物質の製剤化及び／または製造における概論は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ ２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，２００５において見つけることができる。
キット
本開示は、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、ＤＮＡ断片、標的化ベクター、またはそれらの任意の組み合わせを少なくとも１つ含めた１つまたは複数の容器を含むパックまたはキットをさらに提供する。キットは、任意の適用可能な方法（例えば、研究方法）において使用され得る。そのような容器（複数可）には、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する行政機関によって規定される形式の留意情報が任意選択で付随し得、こうした留意情報は、（ａ）ヒトへの投与を目的とする製造、使用もしくは販売に関する当局による承認、（ｂ）使用のための指示、及び／または（ｃ）２つ以上の実体の間及びそれらの組み合わせの間での材料及び／または生物学的製品（例えば、本明細書に記載の非ヒト動物もしくは非ヒト細胞）のやり取りを規定する取り決め、を示すものである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、非ヒト組織、不死化細胞、非ヒトＥＳ細胞、または非ヒト胚を含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、非ヒト組織、不死化細胞、非ヒトＥＳ細胞、または非ヒト胚に由来するアミノ酸（例えば、抗体またはその断片）を含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、非ヒト組織、不死化細胞、非ヒトＥＳ細胞、または非ヒト胚に由来する核酸（例えば、抗体またはその断片をコードする核酸）を含むキットが提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の非ヒト動物、非ヒト細胞、非ヒト組織、不死化細胞、非ヒトＥＳ細胞、または非ヒト胚から同定された配列（アミノ酸配列及び／または核酸配列）を含むキットが提供される。
いくつかの実施形態では、治療または診断のための薬物（例えば、抗体またはその断片）の製造及び／または開発において使用するための本明細書に記載のキットが提供される。
いくつかの実施形態では、疾患、障害、または病状の治療、予防、または軽快のための薬物（例えば、抗体またはその断片）の製造及び／または開発において使用するための本明細書に記載のキットが提供される。
実施形態例が以下に説明される過程において、ある特定の実施形態の他の特徴が明らかになるであろうが、こうした実施形態例は、例示のために示されるものであり、その限定を意図するものではない。
下記の実施例は、本明細書に記載の方法及び組成物をどのように構成及び使用するかについて当業者への説明となるように提供されるものであり、本開示の発明者らが自身の発明と見なすものの範囲の限定を意図するものではない。別段の指定がない限り、温度は、セ氏で示され、圧力は、大気圧または大気圧付近である。
実施例１．カッパ軽鎖遺伝子座から少なくとも１種類のラムダ軽鎖を発現するげっ歯類を作製するための標的化ベクターの構築
実施例１．１．げっ歯類ラムダ定常領域を含む標的化ベクターの操作
この実施例は、非ヒト動物（げっ歯類（例えば、マウス）など）のゲノムに挿入するための標的化ベクターの構築方法の例を示す。さらに、この実施例は、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物の作製を示す。具体的には、この実施例は、げっ歯類が、当該非ヒト動物の生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から、ヒト可変領域及び非ヒト免疫グロブリンλ定常（Ｃλ）領域を有する免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現及び／または産生するように、当該げっ歯類における当該免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するための標的化ベクターの構築を示す。実施例２に後述されるように、複数のヒトＪλ（例えば、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７）コード配列と、げっ歯類Ｃλ（例えば、マウスＣλ１）コード配列と、を含むＤＮＡ断片が、内在性のげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される。具体的な実施形態例では、マウスＣκ遺伝子の代わりにマウスＣλ１遺伝子が挿入され、機能可能なようにげっ歯類Ｉｇκエンハンサー（例えば、Ｅκｉ及び３’Ｅκ）と連結される。図１では、げっ歯類（例えば、マウス）Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、かつ内在性のＩｇκエンハンサーに機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することによって特徴付けられる操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座をげっ歯類において生成させるための標的化ベクターを創出するための方針の例が示される（図１Ａ：標的化ベクターを構築する最初のステップ、図１Ｂ：標的化ベクターを構築する追加の後続ステップ；ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間のヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列は、幅の広い下向きの斜線が中に並ぶ白抜きの棒によって示される（例えば、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号を参照のこと）、ｌｏｘ：ｌｏｘ２３７２；ＮＥＯ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏＲ）、ＨＹＧ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるハイグロマイシン耐性遺伝子（ｈｙｇＲ）、Ｓｐｅｃ：スペクチノマイシン耐性遺伝子（ＳｐｅｃＲ）、Ｒ６Ｋ：Ｒ６Ｋ複製起点）。
げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入するためのヒトＪλコード配列及びげっ歯類Ｃλコード配列を含む標的化ベクターは、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２−９（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）ならびに当該技術分野で知られる分子生物学的技術を使用して創出した。こうした記載の技術及び手法を用いることで、任意のヒトＪλコード配列及び任意のＣλコード配列、またはコード配列（もしくは配列断片）の組み合わせを望まれるように利用できることを当業者なら本実施例を読めば理解するであろう。
簡潔に記載すると、ヒトＪλ遺伝子セグメントであるＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７と、特有の５’オーバーラップ領域及び３’オーバーラップ領域（それぞれヒトＶκ−Ｊκゲノム（非コード）配列及びマウスＣκ遺伝子の５’側ゲノム配列に対応する）と、を含む２．７ｋｂのＤＮＡ断片をデノボＤＮＡ合成によって調製した（ｐＡ；図１Ａの左上、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）。このＤＮＡ断片にさまざまな制限酵素認識部位を含めることで、選択マーカー及び他のＤＮＡ断片（後述のもの）の後続のクローニングが容易になるようにした。このＤＮＡ断片は、ヒトＪκ非コード配列がヒトＪλコード配列及びヒトＪλ組換えシグナル配列（ＲＳＳ）と並置されて含まれるように特有に設計した。当該技術分野では知られていることであるが、ＲＳＳは、７つのヌクレオチド（七量体）の保存されたブロックと、その後に続く１２塩基対または２３塩基対の長さのスペーサーと、その後に続く９つのヌクレオチド（九量体）の第２の保存されたブロックと、からなる。したがって、ＲＳＳは、付随遺伝子セグメントに応じて７−１２−９（１２ＲＳＳ）または７−２３−９（２３ＲＳＳ）という配置を有する（例えば、Ｍｕｒｐｈｙ，Ｋｅｎｎｅｔｈ，ｅｔ ａｌ．“Ｃｈａｐｔｅｒ ５．”Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，８ｔｈ ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ／Ｔａｙｌｏｒ ＆ Ｆｒａｎｃｉｓ Ｇｒｏｕｐ，ＬＬＣ，２０１２（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の図５．４を参照のこと）。具体的には、ヒトＪκ遺伝子セグメント（すなわち、ヒトＪκコード配列）及びその付随２３ＲＳＳを、その代わりとしてヒトＪλ遺伝子セグメント（すなわち、ヒトＪλコード配列）及びその付随１２ＲＳＳで置換した。このようにして、この断片にヒトＪλＤＮＡ配列及びヒトＪκＤＮＡ配列を含めた。そのような配列を本明細書に記載の標的化ベクターに含めることで、操作されたげっ歯類Ｉｇκ軽鎖遺伝子座内でヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを効率的に連結することが可能となり得る（またはこの効率的な連結を促進することが可能となり得る）。
プラスミドＡ（ｐＡ）をＡｇｅＩ及びＥｃｏＲＩで消化し、適合末端を含むネオマイシン選択カセット（すなわち、ユビキチンプロモーターの制御下にあるＮｅｏＲ遺伝子にｌｏｘ２３７２部位が隣接するもの）にライゲーションしてプラスミドＢ（ｐＢ）を創出した（図１Ａ）。これとは別に、マウスＩｇκイントロンエンハンサー（Ｅｉ）を含む特有のＤＮＡ断片と、マウスＣλ１遺伝子（ＢＡＣクローンＲＰ２３−６０ｅ１４由来のもの）を含む特有のＤＮＡ断片と、マウスＣκコード配列のすぐ下流に位置する３１６ｂｐの配列及び等温アセンブリを促進するための８０ｂｐのオーバーラップ配列ならびに後続のクローニングステップを促進するための制限酵素認識部位（ＮｏｔＩ、ＭｌｕＩ）を含むＤＮＡ断片と、Ｒ６Ｋ−Ｓｐｅｃ（スペクチノマイシンアデニリルトランスフェラーゼ遺伝子及びＲ６Ｋ複製起点）と、をポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅し、等温アセンブリ（例えば、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ．ａｌ．，２００９，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈ．６（５）：３４３−５、Ｇｉｂｓｏｎ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｎａｔ．Ｍｅｔｈ．７：９０１−９０３（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）によって結合させて一緒にすることでプラスミドＣ（ｐＣ）を創出した。次に、ｐＣをＮｏｔＩ及びＭｌｕＩで消化し、適合末端を含むハイグロマイシン選択カセット（すなわち、ユビキチンプロモーターの制御下にあるＨｙｇＲ遺伝子にｌｏｘＰ部位が隣接するもの）にライゲーションしてプラスミドＤ（ｐＤ；図１Ａの右上及び中央）を創出した。この得られたプラスミド（ｐＤ；図１Ａの中央）を、次に、ＰＩ−ＳｃｅＩ及びＡｓｃＩで消化し、適合末端を含むプラスミドＢ（ｐＢ）とライゲーションしてプラスミドＥ（ｐＥ）（図１Ａの下）を生じさせた。
次のステップでは、上記のものとは別に、マウスＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントと、当該ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）と、を含む標的化ベクターをＮｏｔＩで消化し、再ライゲーションすることで、ヒト免疫グロブリンκ配列を含むヒトＶλ領域を除去し（図１Ｂの上）、これによって約１３７ｋｂを欠失させた。得られたコンストラクト（コンストラクトＦ）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９等温アセンブリ法（例えば、米国特許第９，７３８，８９７号及び米国公開公報第２０１６／０１４５６４６号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を使用してプラスミドＥ（ｐＥ）と結合することで、ヒトＪλ−１２ＲＳＳコード配列（ＣＤＳ）を含むヒトＪκ領域を、ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間（非コード）領域（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）及びマウスＩｇκ３’エンハンサーと機能可能なように連結した（図１Ｂ）。カナマイシン、ハイグロマイシン、及びスペクチノマイシンを含む培地上で陽性細菌クローンを選択した。得られた標的化ベクター（コンストラクトＧ）は、５’から３’の順に、ｌｏｘＰ認識部位、ＮｏｔＩ部位、ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間配列（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、ｌｏｘ２３７２認識部位に隣接するネオマイシン選択カセット、５つのヒトＪλ遺伝子セグメント及びそのそれぞれの１２ＲＳＳを含むヒトＪκ領域、マウス免疫グロブリンκイントロンエンハンサー（Ｅｉκ）、マウスＣλ１遺伝子、ｌｏｘＰ認識部位に隣接するハイグロマイシン選択カセット、マウス免疫グロブリンκ３’エンハンサー（３’Ｅκ）、ならびにスペクチノマイシン選択カセット、を含むものである（図１Ｂ）。
実施例１．２．ヒトラムダ定常領域を含む標的化ベクターの操作
この実施例は、非ヒト動物（げっ歯類（例えば、マウス）など）のゲノムに挿入するための標的化ベクターの構築方法の例を示す。さらに、この実施例は、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物の作製を示す。具体的には、この実施例は、げっ歯類が、当該非ヒト動物の生殖細胞ゲノムにおける内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から、ヒト可変領域及びヒト免疫グロブリンλ定常（Ｃλ）領域を有する免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現及び／または産生するように、当該げっ歯類における当該免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するための標的化ベクターの構築を示す。実施例２に後述されるように、複数のヒトＪλ（例えば、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７）コード配列と、ヒトＣλ（例えば、ヒトＣλ２）コード配列と、を含むＤＮＡ断片が、内在性のげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される。具体的には、マウスＣκ遺伝子の代わりにヒトＣλ２遺伝子が挿入され、機能可能なようにげっ歯類免疫グロブリンκエンハンサー（例えば、Ｅｉκ及び３’Ｅκ）と連結される。標的化ベクターを創出するための方針の例は、図３に示される。
げっ歯類Ｉｇκ軽鎖遺伝子座に挿入するためのヒトＪλコード配列及びヒトＣλコード配列を含む標的化ベクターは、ＶＥＬＯＣＩＧＥＮＥ（登録商標）技術（例えば、米国特許第６，５８６，２５１号及びＶａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１（６）：６５２−９（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）ならびに当該技術分野で知られる分子生物学的技術を使用して創出した。こうした記載の手法及び技術を用いることで、任意のヒトＪλコード配列及びヒトＣλコード配列、またはコード配列（もしくは配列断片）の組み合わせを望まれるように利用できることを当業者なら本実施例を読めば理解するであろう。
簡潔に記載すると、ヒトＣλコード配列と、特有の５’オーバーラップ領域及び３’オーバーラップ領域（それぞれマウスＣκ遺伝子の５’側ゲノム配列及び３’側ゲノム配列に対応する）と、を含む８７１ｂｐのＤＮＡ断片をデノボＤＮＡ合成によって調製した（ｐＨ；図３の左上、Ｂｌｕｅ Ｈｅｒｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ，Ｂｏｔｈｅｌｌ，ＷＡ）。このＤＮＡ断片にさまざまな制限酵素認識部位を含めることで、選択マーカー及び他のＤＮＡ断片（以下に記載のもの）の後続のクローニングを可能にした。プラスミドＨ（ｐＨ）をＡｇｅＩ及びＸｈｏＩで消化し、適合末端を含むハイグロマイシン選択カセット（すなわち、ユビキチンプロモーターの制御下にあるＨｙｇＲ遺伝子にｌｏｘＰ部位が隣接するもの）にライゲーションしてプラスミドＪ（ｐＪ；図３）を創出した。マウスＣκ遺伝子及びマウスＩｇκエンハンサーに機能可能なように連結されたヒトＪλコード配列を含む操作されたヒトＪκ領域（上記のもの）を含む中間コンストラクト（Ｃａｓ９及び等温アセンブリを使用してコンストラクトＦ及びプラスミドＢから生成させたコンストラクトＫ）を、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９等温アセンブリ法（例えば、米国特許第９，７３８，８９７号及び米国公開公報第２０１６／０１４５６４６号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）を使用してプラスミドＪと結合することで、ヒトＪλ−１２ＲＳＳコード配列（ＣＤＳ）を含むヒトＪκ領域を、プラスミドＪのヒトＣλ２コード配列と機能可能なように連結した（図３）。カナマイシン、ハイグロマイシン、及びスペクチノマイシンを含む培地上で陽性細菌クローンを選択した。得られた標的化ベクター（コンストラクトＬ）は、５’から３’の順に、ｌｏｘＰ認識部位、ＮｏｔＩ部位、ヒトＶκ−Ｊκ遺伝子間配列（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、ｌｏｘ２３７２認識部位に隣接するネオマイシン選択カセット、５つのヒトＪλ遺伝子セグメント及びそのそれぞれの１２ＲＳＳを含むヒトＪκ領域、マウスＩｇκイントロンエンハンサー（Ｅｉκ）、ヒトＣλ２遺伝子、ｌｏｘＰ認識部位に隣接するハイグロマイシン選択カセット、マウス免疫グロブリンκ３’エンハンサー（３’Ｅκ）、ならびにスペクチノマイシン選択カセット、を含むものである（図３）。
実施例２．操作された軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類の作製
この実施例は、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントとげっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子との挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物（例えば、げっ歯類）の作製を示し、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、当該げっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該げっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子は、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに挿入される。そのような非ヒト動物は、いくつかの実施形態では、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から免疫グロブリンλ軽鎖（可変ドメイン及び定常ドメイン）が発現することによって特徴付けられる。
実施例１．１及び実施例１．２に記載の標的化ベクターが狙い通りに挿入されたかどうかは、ポリメラーゼ連鎖反応によって確認した。標的ＢＡＣ ＤＮＡを、ポリメラーゼ連鎖反応によって確認し、電気穿孔を介してＦ１雑種（Ｃ５７ＢＬ６ＮＴａｃ／１２９Ｓ６ＳｖＥｖＴａｃ）マウス胚性幹（ＥＳ）細胞に導入し、その後、このマウスＥＳ細胞を選択培地において培養した。
げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むヘテロ接合型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーと、当該ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列と、を含む、ヘテロ接合型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、ならびに１つの野生型のげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、を含む生殖細胞ゲノムを有するＥＳ細胞をコンストラクトＧ（マウスＣλ１）の電気穿孔に使用した。図２Ａには、電気穿孔前後のＥＳ細胞が示される（１７４１ＨＥＴ：げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーと、当該ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列（幅の広い下向きの斜線が中に並ぶ白抜きの棒によって示される）と、を含む、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、についてゲノムがヘテロ接合型であり、野生型の免疫グロブリン重鎖遺伝子座及び免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類ＥＳ細胞クローン（例えば、米国特許第９，００６，５１１号、同第９，０３５，１２８号、同第９，０６６，５０２号、同第９，１５０，６６２号、及び同第９，１６３，０９２号（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）、６５５７ＨＥＴ：コンストラクトＧを挿入した後のマウスＥＳ細胞クローンであり、この挿入の結果、当該マウスＥＳ細胞クローンのゲノムは、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーを含む操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型であり、当該操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座は、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することによって特徴付けられ、当該ヒトＪλ遺伝子セグメントは、ヒトＪκ領域配列内に含まれ、当該ヒトＪκ領域配列は、ヒトＪλ遺伝子セグメントコード配列及びヒトＪλ１２ＲＳＳを、対応するヒトＪκ遺伝子セグメントコード配列及びヒトＪκ２３ＲＳＳの代わりに含み、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、げっ歯類免疫グロブリンλ軽鎖定常領域遺伝子（例えば、ｍＣλ１）に機能可能なように連結される；ｌｏｘ：ｌｏｘ２３７２；ＮＥＯ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏＲ）；ＨＹＧ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるハイグロマイシン耐性遺伝子（ｈｙｇＲ）；ＥＳ細胞クローンをスクリーニングするためのプライマー／プローブの選択セットの位置は、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座内の領域位置の付近に示されており、これらの領域位置を後述のアッセイにおいて検出した）。
げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むヘテロ接合型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーと、当該ヒトＶλ遺伝子セグメントとヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒト免疫グロブリンκ軽鎖配列と、を含む、ヘテロ接合型の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、ならびに１つの野生型のげっ歯類Ｉｇκ遺伝子座、を含む生殖細胞ゲノムを有するＥＳ細胞をコンストラクトＬ（ヒトＣλ２）の電気穿孔に使用した。図４Ａには、電気穿孔前後のＥＳ細胞が示される（１７４１ＨＥＴ：前出のもの；２００２９ＨＥＴ：標的化ベクターを挿入した後のマウスＥＳ細胞クローンであり、当該マウスＥＳ細胞クローンが有するゲノムは、げっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサーを含む操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型であり、当該操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座は、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することによって特徴付けられ、当該ヒトＪλ遺伝子セグメントは、ヒトＪκ領域配列内に含まれ、当該ヒトＪκ領域配列は、ヒトＪλ遺伝子セグメントコード配列及びヒトＪλ１２ＲＳＳを、対応するヒトＪκ遺伝子セグメントコード配列及びヒトＪκ２３ＲＳＳの代わりに含み、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、ヒトＩｇλ軽鎖定常領域遺伝子（例えば、ｈＣλ２）に機能可能なように連結される；ｌｏｘ：ｌｏｘ２３７２；ＮＥＯ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるネオマイシン耐性遺伝子（ｎｅｏＲ）；ＨＹＧ：ユビキチンプロモーターの転写制御下にあるハイグロマイシン耐性遺伝子（ｈｙｇＲ）；ＥＳ細胞クローンをスクリーニングするためのプライマー／プローブの選択セットの位置は、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座内の領域位置の付近に示されており、これらの領域位置を以下に記載のアッセイにおいて検出した）。
電気穿孔から１０日後に薬剤耐性コロニーをピッキングし、標的化が正しく行われたかを、以前に説明されたようにＴＡＱＭＡＮ（商標）及び核型分析によってスクリーニングした（Ｖａｌｅｎｚｕｅｌａ ｅｔ ａｌ．（前出のもの）、Ｆｒｅｎｄｅｗｅｙ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．４７６：２９５−３０７（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））。表１は、陽性のＥＳ細胞クローンのスクリーニングに使用したプライマー／プローブセットの例を示す（Ｆ：フォワード、Ｒ：リバース、Ｐ：プローブ、ＧＯＡ：アレルの獲得、ＬＯＡ：アレルの消失、ＷＴ：野生型）。
ＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）法（ＤｅＣｈｉａｒａ，Ｔ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．４７６：２８５−２９４、ＤｅＣｈｉａｒａ，Ｔ．Ｍ．，２００９，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．５３０：３１１−３２４、Ｐｏｕｅｙｍｉｒｏｕ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：９１−９９（これらの文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる））は、コンパクションを起こしていない８細胞期のＳｗｉｓｓ Ｗｅｂｓｔｅｒ胚に標的ＥＳ細胞を注射するものであり、この方法を使用することで、完全にＥＳ細胞由来であり、操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座（図２Ａ及び図４Ａ）についてヘテロ接合型の健康なＦ０世代マウスを作製した。Ｆ０世代のヘテロ接合型マウスをＣ５７Ｂｌ６／ＮＴａｃマウスと交配させてＦ１ヘテロ接合体を作製し、これらのＦ１ヘテロ接合体を互いに交配させることで、表現型分析のためのホモ接合型のＦ２世代動物を作製した。
別の方法として、上記の操作された免疫グロブリンκ遺伝子座を有するネズミＥＳ細胞を、標的化ベクターを用いて導入した１つまたは複数の選択カセットを望まれるように除去するよう改変することもできる（図２Ｂ：６５５７ＨＥＴ：前出のもの；６５５８ＨＥＴ：標的化ベクターとの相同組換えの後に挿入されたネオマイシン選択カセット及びハイグロマイシン選択カセットをリコンビナーゼ介在性に除去した後のマウスＥＳ細胞クローン；図４Ｂ：２００２９ＨＥＴ：前出のもの；２００３０ＨＥＴ：標的化ベクターとの相同組換えの後に挿入されたネオマイシン選択カセット及びハイグロマイシン選択カセットをリコンビナーゼ介在性に除去した後のマウスＥＳ細胞クローン。Ｃｒｅ：Ｃｒｅリコンビナーゼ）。例えば、標的化ベクターによって導入されたネオマイシンカセット及びハイグロマイシンカセットは、リコンビナーゼを一過性に発現させることによって、操作されたＥＳ細胞（もしくは胚）において除去されるか、またはリコンビナーゼを発現するように遺伝子操作された系統との交配繁殖によって除去され得る（例えば、Ｌａｋｓｏ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：６２３２−６、Ｏｒｂａｎ，Ｐ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：６８６１−５、Ｇｕ，Ｈ．ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｃｅｌｌ ７３（６）：１１５５−６４、Ａｒａｋｉ，Ｋ．ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９２：１６０−４、Ｄｙｍｅｃｋｉ，Ｓ．Ｍ．，１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９３（１２）：６１９１−６（これらの文献はすべて、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）。
まとめると、この実施例は、内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに挿入されたげっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントが存在することによって特徴付けられる操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含むげっ歯類（例えば、マウス）の作製を示す。記載の操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座は、内在性の配置とは異なる配置で複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む。ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを挿入すると共に、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりにげっ歯類Ｃλ遺伝子またはヒトＣλ遺伝子を挿入するための本明細書に記載の方針は、ヒトＶλドメインを排他的に含む抗体を発現するげっ歯類を構築することを可能にするものである。λ遺伝子セグメント（内在性の向きとは異なる向きで内在性のλ遺伝子座以外に存在するもの）を排他的に含むそのような操作されたＩｇκ軽鎖遺伝子座から機能性軽鎖を産生させることが可能であり得るかは不明であったが、本明細書に記載のように、提供されるげっ歯類の生殖細胞ゲノムにおける内在性のＩｇκ軽鎖遺伝子座からは、そのようなヒトＶλドメインが発現する。
実施例３．操作された免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類の特徴付け
実施例３．１．操作された免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類における免疫細胞の表現型評価
この実施例は、げっ歯類Ｃλ遺伝子ならびにげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖エンハンサー領域及びげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖調節領域に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座内に含むように操作されたげっ歯類（例えば、マウス）におけるさまざまな免疫細胞集団の特徴付けを示す。具体的には、この実施例は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類が、野生型のげっ歯類と比較して特有の軽鎖発現プロファイルを示すことを具体的に示す。この実施例は、提供されるげっ歯類が、操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座からヒトＶλ領域の幅広いレパートリーを発現することも示す。
簡潔に記載すると、野生型（ＷＴ，７５％ Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ ２５％ １２９ＳｖＥｖＴａｃ）マウス及び６５５８ＨＯ（ホモ接合型ＬｉＫ，７５％ Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ ２５％ １２９ＳｖＥｖＴａｃ）マウスから脾臓及び大腿骨を収集した。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を２．５％含む１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ，Ｇｉｂｃｏ）を流し込むことによって大腿骨から骨髄を採取した。脾臓及び骨髄調製物に由来する赤血球をＡＣＫ溶解緩衝剤（Ｇｉｂｃｏ）で溶解した後、ＦＢＳを２．５％含む１×ＰＢＳで洗浄した。
単離した細胞（１×１０６個）を、選択した抗体のカクテルと共に＋４℃で３０分間インキュベートした：抗ｍＩｇκ−ＦＩＴＣ（１８７．１，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、抗ｍＩｇλ−ＰＥ（ＲＭＬ−４２，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ；１０６０−０９，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、抗ｍＩｇλ−ＦＩＴＣ（１０６００２，Ｂｉｏ−Ｒａｄ；ＡＢＩＮ３０３９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−ｏｎｌｉｎｅ）、抗マウスＩｇＭ−ＰｅＣｙ７（ＩＩ／４１，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗マウスＩｇＤ−ＰｅｒＣＰ／Ｃｙ５．５（１１−２６ｃ．２ａ，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗マウスＣＤ３−Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ（１７Ａ２，ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）、抗マウスＢ２２０−ＡＰＣ（ＲＡ３−６Ｂ２，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、抗マウスＣＤ１９−ＡＰＣ−Ｈ７（ＩＤ３，ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）。染色後、細胞を洗浄し、２％のホルムアルデヒド中で固定化した。ＢＤ ＬＳＲＦＯＲＴＥＳＳＡ（商標）フローサイトメーターでデータを取得し、ＦＬＯＷＪＯ（商標）ソフトウェアで解析した。図５〜７には、代表的な結果が示される。
図５及び図６に示されるように、それぞれ脾臓コンパートメント及び骨髄コンパートメントにおいて、ＬｉＫマウスにおけるＣＤ１９＋Ｂ細胞及び未熟／成熟Ｂ細胞の分布は、野生型マウスのものと比較して類似していることが見て取れる。しかしながら、ＬｉＫマウスは、こうしたマウスにおいて観測される発現がＩｇλ＋のもののみであったという点において、野生型マウスと比較して特有の軽鎖発現を示す（図７）。具体的には、ＬｉＫマウスにおけるＣＤ１９＋Ｂ細胞の＞９０％が免疫グロブリンλ軽鎖を発現しており、このことによって、操作された免疫グロブリンκ遺伝子座における組換え及び発現が適切に生じていることが裏付けられる。こうしたマウスがマウスＣκ遺伝子を含まないことから予想される通り、ＬｉＫマウスは、フローサイトメトリーによって検出可能なほど免疫グロブリンκを発現しない（すなわち、抗ｍＩｇκ抗体は、定常領域を検出する）。追加のＬｉＫマウス同腹仔からも類似レベルの免疫グロブリンλ軽鎖の発現が観測された（データ掲載なし）。ＬｉＫ遺伝子座からマウスＣλ領域と関連してヒトＶλ領域が発現することは、とりわけ、次世代シークエンシング手法（以下の実施例３．２に記載のもの）を使用して免疫グロブリンレパートリーを分析することによって確認した。
実施例３．２．操作された免疫グロブリン軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類における免疫グロブリンレパートリー
上記の操作されたげっ歯類系統におけるヒト抗体遺伝子（すなわち、ＶＤＪ遺伝子セグメント）の利用度を、次世代シークエンシング抗体レパートリー分析によって決定した。具体的には、ＬｉＫ遺伝子座についてホモ接合型のマウス（６５５８ＨＯ）の脾細胞から単離したＲＮＡに対してＲＴ−ＰＣＲシークエンシングを実施することで、ＬｉＫ遺伝子座の転写及び組換えが正しく生じているかを確認した。図１２には、再構成されたＬｉＫ遺伝子座の代表的な図が示される（ＬｉＫ遺伝子座：本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座；再構成されたＬｉＫ遺伝子座：操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（本明細書では「ＬｉＫ遺伝子座」と称される）の再構成によってヒトＶλ−Ｊλ組換えが生じたものを代表するもの；再構成されたＬｉＫ ｍＲＮＡ：再構成されたＬｉＫ遺伝子座の転写及びｍＲＮＡプロセシングが生じたものを代表するもの）。
簡潔に記載すると、マウス抗ＣＤ１９電磁ビーズ及びＭＡＣＳ（登録商標）カラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）を使用する磁気細胞選別によって全脾細胞からＣＤ１９陽性細胞を選別して脾臓Ｂ細胞を富化した。製造者の説明書に従ってＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓ ＲＮＡ単離キット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して、精製脾臓Ｂ細胞から全ＲＮＡを単離した。ＳＭＡＲＴｅｒ（商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）及び免疫グロブリンλ特異的プライマー（以下を参照のこと）を使用して逆転写を実施することで、免疫グロブリンλ定常領域遺伝子配列を含むｃＤＮＡを生成させた。このプロセスの間に、新たに合成されたｃＤＮＡの３’末端にＤＮＡ配列（鋳型スイッチング（ＴＳ）プライマーの３’末端区間に対する逆相補配列）を付加した。次に、ＴＳに特異的なプライマーと、マウスＣλ１の配列に特異的なリバースプライマーと、を使用して１回目のＰＣＲ反応を行うことによって精製Ｉｇλ特異的ｃＤＮＡを増幅した。約４５０〜７００ｂｐの範囲のＰＣＲ産物を、Ｐｉｐｐｉｎ Ｐｒｅｐ（ＳＡＧＥ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して単離した後、こうした断片を、２回目のＰＣＲ反応を行うことによってさらに増幅した。表２は、レパートリーライブラリーの構築に使用した選択プライマーの配列を示す（ｆｏｒ：フォワードプライマー、ｒｅｖ：リバースプライマー）。約４００ｂｐ〜７００ｂｐの範囲のＰＣＲ産物を単離及び精製し、ＫＡＰＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＫＡＰＡ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｑＰＣＲによって定量化した後、Ｍｉｓｅｑ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｋｉｔｓ ｖ３を使用するシークエンシング（２×３００サイクル）を行うためにＭｉｓｅｑシークエンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）にロードした。
生物情報学的解析については、生のＩｌｌｕｍｉｎａ配列をデマルチプレックス化し、クオリティ、長さ、及び対応する定常領域遺伝子プライマーとのマッチに基づいてフィルタリングした。オーバーラップするペアエンドリードをマージし、社内のカスタムパイプラインを使用して解析した。このパイプラインでは、ローカルにインストールしたＩｇＢＬＡＳＴ（ＮＣＢＩ，ｖ２．２．２５＋）を使用することで、再構成された軽鎖配列を、ヒト生殖細胞のＶλ遺伝子セグメント及びＪλ遺伝子セグメントのデータベースにアライメントし、終止コドンの存在と併せて生産的連結及び非生産的連結を示した。ＣＤＲ３配列及び予測される鋳型非依存ヌクレオチドを、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＩＭＧＴ）において定義される境界を使用して抽出した。
本明細書に例示の操作されたマウスにおけるＬｉＫ遺伝子座に含まれる機能性のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの大部分が、当該内在性のカッパ遺伝子座においてげっ歯類Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むＬｉＫマウスの発現抗体レパートリーに出現した（データ掲載なし）。全体として、本発明者らは、予想通りに、ＬｉＫ遺伝子座から発現する軽鎖を有する抗体をＬｉＫマウスのＢ細胞が発現することを観測した。解析した転写産物において、変化したスプライシング産物、挿入、欠失、またはその他の予想外の変異が観測されることはなかった。こうした結果は、ＬｉＫ遺伝子座における組換えから、こうしたマウスの抗体レパートリーの一部として機能性軽鎖が生じることを裏付けるものである。内在性のカッパ遺伝子座においてヒトＣλ遺伝子に機能可能なように連結された複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含むマウスにおいても類似の分析を実施したところ、複数のヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントの発現が検出された（データ掲載なし）。
実施例３．３．操作された軽鎖遺伝子座を有するげっ歯類における抗体発現
この実施例は、非ヒト動物からの抗体（例えば、ＩｇＧ）の発現を示し、当該抗体は、ヒトＶλ領域とげっ歯類Ｃλ領域またはヒトＣλ領域とが存在することによって特徴付けられる軽鎖を含み、当該軽鎖は、操作された内在性のげっ歯類免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座から発現する。とりわけ、この実施例は、１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及びげっ歯類Ｃλ遺伝子の挿入を含む内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含む非ヒト動物（例えば、げっ歯類）の血清中にＩｇＧ抗体（二量体形態及び単量体形態のもの）が発現することを具体的に示し、当該ヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントは、当該げっ歯類Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、当該げっ歯類Ｃλ遺伝子は、内在性のげっ歯類Ｉｇκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに挿入される。
野生型（ＷＴ，７５％ Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ ２５％ １２９ＳｖＥｖＴａｃ）マウス及び６５５８ホモ接合型（「ＬｉＫ」，７５％ Ｃ５７ＢＬ／６ＮＴａｃ ２５％ １２９ＳｖＥｖＴａｃ）マウスから血液を採取した。Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆチューブを使用して４℃、９０００ｒｐｍで遠心分離を５分間行うことによって血液から血清を分離した。収集した血清を免疫ブロットに使用してＩｇＧ抗体の発現を同定した。
マウス血清をＰＢＳ（Ｃａ２＋及びＭｇ２＋を含まないもの）で１：１００または１：５００となるように希釈し、還元条件下及び非還元条件下で４〜２０％のＮｏｖｅｘトリス−グリシンゲル上で泳動させた。製造者の説明書に従ってポリフッ化ビニリデン（ＰＶＤＦ）膜にゲルを転写した。Ｔｗｅｅｎ−２０を０．０５％含むトリス−緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ，Ｓｉｇｍａ）に脱脂乳を５％含めた溶液を用いてブロットを一晩ブロッキングした。脱脂乳０．１％含有ＴＢＳＴで１：１０００となるように希釈した一次抗体（ＨＲＰと複合体化したヤギ抗ｍＩｇＧ１、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）にＰＶＤＦ膜を室温で１時間曝露した。ブロットを４回洗浄し（１回の洗浄につき１０分間実施）、製造者の説明書に従ってＡｍｅｒｓｈａｍ ＥＣＬ Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて５分間発色させた。次に、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＩｍａｇｅＱｕａｎｔ ＬＡＳ−４０００ Ｃｏｏｌｅｄ ＣＣＤ Ｃａｍｅｒａ Ｇｅｌ Ｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍを使用してブロットを画像化した。画像の撮影は１５秒間隔で実施し、撮影枚数が２０に達するか、または画像の露出が完全となるかのどちらかが満たされるまで実施した。図１３には代表的な結果が示される（各ゲル画像の上にはレーン番号が示され、両方の画像でレーンの割り当ては同じである；左上：還元試料、左下：非還元試料；ＬｉＫ ＨＯ：６５５８ホモ接合型；ＷＴ：野生型；各ゲル画像の左側には分子量が示される）。
図１３に示されるように、ＬｉＫマウスにおいて発現したＩｇＧ抗体のサイズは、野生型マウスにおいて発現したＩｇＧ抗体で観測されたサイズと類似しており、このことは、抗原に結合する機能性抗体をＬｉＫマウスが産生し、ヒト疾患（複数可）の治療において使用するためのヒト抗体及びヒト抗体構成要素を産生させるためのインビボ系としてＬｉＫマウスを使用できることを示す。
実施例４．操作された免疫グロブリン遺伝子座をいくつか含むげっ歯類の作製及び特徴付け
本明細書に記載のＬｉＫげっ歯類を、当該技術分野で知られる手法を使用して、複数の操作されたげっ歯類系統と複数回の交配繁殖を経て別々に交配繁殖を行うことで、下記の操作された免疫グロブリン遺伝子座を含むげっ歯類系統が確立される：（１）ヒト化免疫グロブリン重鎖（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）についてホモ接合型であり、本明細書に記載のＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）についてホモ接合型であるげっ歯類系統（いくつかの実施形態では、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−マウスと本明細書で称される）、（２）ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（前出のもの）についてホモ接合型であり、不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（前出のもの）についてホモ接合型であり、本明細書に記載のＣλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む第１の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、内在性のマウスＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）と、を有する免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘミ接合型であるげっ歯類系統（いくつかの実施形態では、ＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−マウスと本明細書で称される）。別の方法として、そのようなマウスは、操作された遺伝子座を含む標的化ベクターを、操作された免疫グロブリン遺伝子座を既にいくつか含むＥＳ細胞に導入することによっても作製され得る。いくつかの実施形態では、当該げっ歯類における免疫グロブリン重鎖遺伝子座は、機能性かつ発現するげっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含む。
具体的には、ＬｉＫマウスを複数の操作されたマウス系統と複数回の交配繁殖を経て交配繁殖させることで、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−マウス及びＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−マウスを確立した。
確立時点で、こうしたヒト化マウスにおけるさまざまな免疫細胞集団をフローサイトメトリーによって特徴付けた。簡潔に記載すると、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−マウス（ｎ＝３）、ＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−マウス（ｎ＝４）、及びＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（「ＨｏＨ／ＫｏＫ」（ｎ＝３）（米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと））から脾臓及び大腿骨を収集し、上記のフローサイトメトリー分析用に調製した。図８〜１１には、代表的な結果が示される。試験した操作されたマウス系統の脾細胞において観測された平均軽鎖発現比（κ：λ）は、およそ下記の通りであった：ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−：０：１００、ＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−：４０：６０、ＨｏＨ／ＫｏＫ：８５：１５。
実施例５．操作されたげっ歯類における抗体の産生
この実施例は、目的抗原（例えば、１回膜貫通型または複数回膜貫通型の膜タンパク質など）を使用することで、上記の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むげっ歯類において抗体が産生することを示す。この実施例に記載の方法、または当該技術分野でよく知られる免疫化方法を使用することで、記載の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むげっ歯類をさまざまな抗原（例えば、ポリペプチドなど）で免疫化することができる。本明細書の上記の遺伝子改変されたげっ歯類のいずれを使用しても、目的抗原での免疫化後に抗体を産生させることができ、こうした遺伝子改変されたげっ歯類は、例えば、ＬｉＫマウス（Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶλ遺伝子セグメント及びヒトＪλ遺伝子セグメントを含む免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むマウス（ＬｉＫ遺伝子座についてホモ接合型のマウスなど））、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−マウス（ＬｉＫ遺伝子座を含むと共に、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）ならびに不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）も含むマウス（ＬｉＫ遺伝子座についてホモ接合型のマウスなど））、ならびにＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−マウス（ＬｉＫを含む第１の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、内在性のマウスＣκ遺伝子に機能可能なように連結されたヒトＶκ遺伝子セグメント及びヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号を参照のこと）と、を有する免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘミ接合型であり、ヒト化免疫グロブリン重鎖遺伝子座（例えば、米国特許第８，６４２，８３５号及び同第８，６９７，９４０号（これらの文献はそれぞれ、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）ならびに不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座（例えば、米国特許第９，００６，５１１号（当該文献は、参照によって本明細書に組み込まれる）を参照のこと）も含むマウス）、である。そのようなマウスは、免疫化、ならびにヒト抗体及び／またはヒト抗体断片の産生に適している。
上記の操作された免疫グロブリン遺伝子座をさらに含むＬｉＫマウスに対する目的抗原の負荷は、当該技術分野で知られる免疫化方法を使用して行われる。抗体免疫応答は、ＥＬＩＳＡ免疫アッセイ（すなわち、血清中力価）によって監視される。所望の免疫応答が達成された時点で、脾細胞（及び／または他のリンパ組織）を収集し、マウス骨髄腫細胞と融合させることで、その生存能が確保され、不死化したハイブリドーマ細胞株が形成される。生じたハイブリドーマ細胞株は、スクリーニング（例えば、ＥＬＩＳＡアッセイによって行われる）及び選択されることで、抗原特異的抗体を産生するハイブリドーマ細胞株が同定される。ハイブリドーマは、望まれるように関連結合親和性及びアイソタイプについてさらに特徴付けられ得る。この手法及び上記の免疫原を使用することで、抗原特異的キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びげっ歯類定常ドメインを有する抗体）がいくつか得られる。
重鎖及び軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡは、単離するか、またはその他の状態で調製することができ、完全ヒト抗体を調製するためのヒト重鎖定常領域及びヒト軽鎖定常領域（例えば、所望のアイソタイプのもの）に連結することができる。そのような完全ヒト抗体（及び／またはその重鎖もしくは軽鎖）は、細胞（典型的には、ＣＨＯ細胞などの哺乳類細胞）において産生させることができる。次に、関連結合親和性及び／または目的抗原の中和活性について完全ヒト抗体を特徴付けることができる。
本明細書に記載及び／または例示の操作されたマウスのＢ細胞が産生する抗原特異的キメラ抗体、及び／またはその軽鎖及び／または重鎖の可変ドメイン、をコードするＤＮＡは、抗原特異的リンパ球から直接的に単離することができる。例えば、ヒト可変領域及びげっ歯類定常領域を有する高親和性キメラ抗体を単離及び特徴付けることができ、その結果、特定の目的抗体（及び／または当該目的抗体を産生するＢ細胞）が明らかにされる。少数例を挙げるにすぎないが、そのような抗体、及び／またはその可変領域及び／または定常領域の評価される特徴は、エピトープの親和性、選択性、独自性などのうちの１つもしくは複数であり得るか、または当該１つもしくは複数を含み得る。
げっ歯類定常領域を所望のヒト定常領域で代替えすることで、完全ヒト抗体が得られる。選択される定常領域は、特定の用途に応じて異なり得る一方で、高親和性抗原結合特徴及び標的特異性特徴は、可変領域に属する。別の方法として、本明細書に記載のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりにヒトＣλ２遺伝子を含むＬｉＫマウスを用いる場合は、免疫化されたマウスから単離された抗体におけるげっ歯類定常領域を代替えするステップは省かれる。抗原特異的抗体は、抗原陽性Ｂ細胞（免疫化されたマウスに由来するもの）から、骨髄腫細胞への融合を省いて、直接的に単離されることもあり、このことは、例えば、米国特許第７，５８２，２９８号に記載されており、当該文献は、その全体が参照によって本明細書に明確に組み込まれる。この方法を使用することで、抗原特異的完全ヒト抗体（すなわち、ヒト可変ドメイン及びヒト定常ドメインを有する抗体）がいくつか得られる。
実施例６．操作された軽鎖遺伝子座を有すると共に、ヒトターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）遺伝子を発現するげっ歯類の作製
実施例６．１．操作された軽鎖遺伝子座を有すると共に、ヒトＴＤＴを発現するげっ歯類の作製
この実施例は、本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体の生殖細胞ゲノムに含み、さらに、ヒトＴｄＴを発現するマウスの作製を示す。ヒトＴｄＴを発現するマウスは、ＷＯ２０１７／２１０５８６（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）の実施例１．１．に記載のように作製した。本明細書に記載の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含むゲノムを有するだけでなく、さらに、ヒトＴｄＴも発現するマウスを複数回の交配繁殖によって作製することで、両方の改変を含むマウス系統のコホートを確立した。
実施例６．２．操作されたカッパ遺伝子座を有すると共に、ヒトＴＤＴを発現するげっ歯類の表現型評価
確立時点で、こうしたヒト化マウスにおける免疫細胞集団をフローサイトメトリーによって特徴付けた。簡潔に記載すると、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウス（ｎ＝４）及びＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウス（ｎ＝６）から脾臓及び大腿骨を収集し、上記のフローサイトメトリー分析（上記の実施例３を参照のこと）用に調製した。図１４〜１７には、代表的な結果が示される。試験した操作されたマウス系統の脾細胞において観測された平均軽鎖発現比（κ：λ）は下記の通りであった：ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴ：０：１００、ＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴ：４５：５５。
実施例６．３．ヒトＴｄＴＳを含むＬｉＫマウスにおけるヒト免疫グロブリンカッパの結合部多様性及び生殖細胞の遺伝物質に依存しない付加
ＷＯ２０１７／２１０５８６（当該文献は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる）に示されるように、外来性に導入されたＴｄＴを含むマウスでは、その軽鎖における結合部多様性と、生殖細胞の遺伝物質に依存しないヌクレオチド付加（本明細書では「鋳型非依存性のヌクレオチド付加」も使用される）と、の両方が増加した。ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴを含むマウス、及びＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴを含むマウスを、次世代シークエンシング技術を使用して評価することで、その免疫グロブリンレパートリーの配列多様性及びそのＣＤＲ３における鋳型非依存性のヌクレオチド付加の存在を決定した。
簡潔に記載すると、マウスから脾細胞を収集し、抗マウスＣＤ１９電磁ビーズ及びＭＡＣＳカラム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）によって全脾細胞からＣＤ１９陽性細胞を選別してＢ細胞を富化した。ＲＮｅａｓｙ Ｐｌｕｓキット（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して脾臓Ｂ細胞から全ＲＮＡを単離した。
ＳＭＡＲＴｅｒ（商標）ＲＡＣＥ ｃＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）を使用することで、オリゴｄＴプライマーを用いて逆転写を実施した後、遺伝子特異的ＰＣＲを実施して、マウスＣλ１配列を含むｃＤＮＡを生成させた。逆転写の間に、新たに合成されたｃＤＮＡの３’末端に特定のＤＮＡ配列（ＰＩＩＡ：５’−ＣＣＣＡＴＧＴＡＣＴ ＣＴＧＣＧＴＴＧＡＴ ＡＣＣＡＣＴＧＣＴＴ−３’（配列番号７１））を付加した。このｃＤＮＡをＮｕｃｌｅｏＳｐｉｎ Ｇｅｌ及びＰＣＲ Ｃｌｅａｎ−Ｕｐ Ｋｉｔ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）によって精製した後、ＰＩＩＡに対する逆相補配列（５’−ＡＡＧＣＡＧＴＧＧＴ ＡＴＣＡＡＣＧＣＡＧ ＡＧＴＡＣＡＴ−３’（配列番号７２））を有するプライマーをマウスＣλ１特異的プライマー（５’−ＣＡＣＣＡＧＴＧＴＧ ＧＣＣＴＴＧＴＴＡＧ ＴＣＴＣ−３’（配列番号７３））とペアにして使用することで、当該ｃＤＮＡをさらに増幅した。
次に、精製した増幅産物を、ＰＩＩＡ特異的プライマー（５’−ＧＴＧＡＣＴＧＧＡＧ ＴＴＣＡＧＡＣＧＴＧ ＴＧＣＴＣＴＴＣＣＧ ＡＴＣＴＡＡＧＣＡＧ ＴＧＧＴＡＴＣＡＡＣ ＧＣＡＧＡＧＴ−３’（配列番号７４））及びマウスＣλ１特異的ネステッドプライマー（５’−ＡＣＡＣＴＣＴＴＴＣ ＣＣＴＡＣＡＣＧＡＣ ＧＣＴＣＴＴＣＣＧＡ ＴＣＴＡＡＧＧＴＧＧ ＡＡＡＣＡＧＧＧＴＧ ＡＣＴＧＡＴＧ−３’（配列番号７５））を使用してＰＣＲによって増幅した。４５０〜６９０ｂｐのＰＣＲ産物を単離し、Ｐｉｐｐｉｎ Ｐｒｅｐ（ＳＡＧＥ Ｓｃｉｅｎｃｅ）によって収集した。この断片を、下記のプライマーを使用してＰＣＲによってさらに増幅した：５’−ＡＡＴＧＡＴＡＣＧＧ ＣＧＡＣＣＡＣＣＧＡ ＧＡＴＣＴＡＣＡＣＸ ＸＸＸＸＸＡＣＡＣＴ ＣＴＴＴＣＣＣＴＡＣ ＡＣＧＡＣＧＣＴＣＴ ＴＣＣＧＡＴＣ−３’（配列番号７６）、及び５’−ＣＡＡＧＣＡＧＡＡＧ ＡＣＧＧＣＡＴＡＣＧ ＡＧＡＴＸＸＸＸＸＸ ＧＴＧＡＣＴＧＧＡＧ ＴＴＣＡＧＡＣＧＴＧ ＴＧＣＴＣＴＴＣＣＧ ＡＴＣＴ−３’（配列番号７７）（「ＸＸＸＸＸＸ」は、試料のマルチプレックスシークエンシングを可能にするための６ｂｐのインデックス配列を表す）。４９０ｂｐ〜７１０ｂｐのＰＣＲ産物を単離し、Ｐｉｐｐｉｎ Ｐｒｅｐによって収集した後、ＫＡＰＡ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（ＫＡＰＡ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してｑＰＣＲによって定量化してから、シークエンシング（ｖ３、６００サイクル）に向けてＭｉｓｅｑシークエンサー（Ｉｌｌｕｍｉｎａ）にロードした。
生物情報学的解析については、得られたＩｌｌｕｍｉｎａ配列をデマルチプレックス化し、クオリティトリミングを行った。次に、オーバーラップするペアエンドリードをアセンブリし、ローカルにインストールしたｉｇｂｌａｓｔ（ＮＣＢＩ，ｖ２．２．２５＋）を使用してアノテーションを行った。ヒト生殖細胞のＶλセグメント及びＪλセグメントのデータベースにリードをアライメントし、ベストヒットについてソートした。同一のスコアを有するベストヒットが複数検出された時には、配列を曖昧として印付けし、解析から除外した。一連の内部のｐｅｒｌスクリプトを開発して結果を解析した。
ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスから得られた脾臓Ｂ細胞に由来するラムダ軽鎖、ならびにＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスから得られた脾臓Ｂ細胞に由来するラムダ軽鎖とカッパ軽鎖との両方を、ラムダ遺伝子座及び／またはカッパ遺伝子座における鋳型非依存性のヌクレオチド付加及び結合部多様性の増加について試験した。ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウス及びＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスに由来する軽鎖では、１０，０００リード当たりの特有ＣＤＲ３数によって測定すると、結合部多様性が少なくとも２倍に増加した（データ掲載なし）。さらに、ＨｏＨ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウス及びＨｏＨ／ＫｏＫ／ＬｉＫ／λ−／−／ＴｄＴマウスに由来する軽鎖（ラムダ及び／またはカッパ）の約５０％に鋳型非依存性のヌクレオチド付加が生じており、これに比較して、ＴｄＴを有さない対照マウスに由来する軽鎖では鋳型非依存性のヌクレオチド付加が生じる割合が約１０％にすぎなかった。
実施例７．操作されたげっ歯類の免疫化、及び免疫原に対する免疫応答の分析
この実施例は、ＬｉＫ／ＶＩ−３マウス及びＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウスの免疫化、ならびに免疫原に対する血清中抗体応答の分析を示す。簡潔に記載すると、（１）ＶＩ−３／ＴｄＴ（例えば、ヒトカッパ軽鎖に対する正の対照となるものであり、このマウスは、内在性のマウスラムダ軽鎖遺伝子座も有する）、ならびにそれぞれヒトラムダ軽鎖を有するＶＩ−３マウスである（２）ＬｉＫ／ＶＩ−３及び（３）ＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴを、標準的なプロトコール及びアジュバントを使用してタンパク質免疫原で免疫化した。マウスは、交配繁殖させてから免疫化を開始し、免疫原での追加免疫化後に定期的に交配繁殖させた。それぞれの抗原に対する抗血清中力価をアッセイした。
免疫原に対する血清中抗体力価を、ＥＬＩＳＡを使用して決定した。リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ，Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）に２μｇ／ｍｌとなるように含めた抗原を用いて９６ウェルマイクロタイタープレートを４℃で一晩コートした。Ｔｗｅｅｎ−２０を０．０５％含むＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）でプレートを洗浄し、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を０．５％含む２５０μｌのＰＢＳを用いて室温でプレートを１時間ブロッキングした。プレートをＰＢＳ−Ｔで洗浄した。免疫化前及び免疫化後の抗血清を１％ＢＳＡ−ＰＢＳで３倍の段階希釈を行ってからプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ヤギ抗マウスＩｇＧ−Ｆｃ−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）複合体化二次抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）、ヤギ抗マウスカッパ−ＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）、またはヤギ抗マウスラムダ−ＨＲＰ（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅｃｈ）の１：５０００希釈液をプレートに添加し、室温で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、ＴＭＢ／Ｈ２Ｏ２を基質として使用して１５〜２０分間インキュベートすることによってプレートの発色処理を行った。酸で反応を停止し、分光光度計（Ｖｉｃｔｏｒ，Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）でプレートの読み取り処理（４５０ｎｍ）を行った。Ｇｒａｐｈｐａｄ ＰＲＩＳＭソフトウェアを使用して抗体力価を計算した。力価は、結合シグナルがバックグラウンドの２倍となる内挿した血清希釈係数として定義される。
タンパク質免疫原で免疫化した後にＬｉＫ／ＶＩ−３マウス、ＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウス、及びＶＩ−３／ＴｄＴマウスにおける液性免疫応答を調べた。タンパク質で免疫化したマウスに由来する抗血清が示す抗原に対する力価は、ＬｉＫ／ＶＩ−３系及びＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴ系において、ＶＩ−３／ＴｄＴ系と同等に高いものである（図１８）。ＬｉＫ／ＶＩ−３マウス及びＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウスにおいて誘発されたラムダ力価は、共に高いものであった。ＶＩ−３／ＴｄＴ系のマウスにおいては、３匹のマウスではラムダ力価は観測されなかった一方で、２匹のマウスでは低い力価が観測されており、このことは、この系統ではマウスラムダ可変領域の利用度が低いことと一致する。予想通り、ＬｉＫ／ＶＩ−３マウス及びＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウスはカッパ軽鎖を有さないため、これらのマウスでカッパ力価が誘発されることはなかったが、ＶＩ−３／ＴｄＴは高いカッパ力価を示した。図１９では、Ｈｉｓタグのための無関係のタンパク質抗原で観測された力価が、３つのマウス系統のすべてにおいて抗Ｆｃ検出及び抗カッパ検出でベースライン力価（最小血清希釈）であった一方で、ＬｉＫ／ＶＩ−３マウス及びＬｉＫ／ＶＩ−３／ＴｄＴマウスでは抗ラムダ検出で非常に低い力価が観測されたことが示される。
ある特定の実施形態
実施形態１
遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）Ｃλ遺伝子と、
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子についてヘテロ接合型である、実施形態１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態６
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、実施形態１〜５のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態７
遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ａ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
（ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメント
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
を含む、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態８
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態９
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、実施形態１〜８のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１０
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
（ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態１〜９のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１１
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１〜１０のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１２
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１３
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１４
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１〜１３のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１５
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１６
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１７
遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
（ｉｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
（ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１８
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態１９
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態１８に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２０
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１〜１９のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２１
遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ａ）ヒト重鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類重鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン重鎖を前記げっ歯類が発現するように１つまたは複数の内在性の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座であって、前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座、
（ｂ）第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
（ｉｖ）前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｖ）前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
（ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに前記第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に存在する、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、ならびに
（ｃ）ヒトκ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類κ軽鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を前記げっ歯類が発現するように内在性のげっ歯類Ｃκ領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及び１つまたは複数のＪκ遺伝子セグメントを含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、
を含み、
前記げっ歯類が、ヒトλ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類λ軽鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を発現する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２２
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、実施形態２０または実施形態２１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２３
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態２０〜２２のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２４
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
（ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態２０〜２３のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２５
前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、実施形態２０〜２４のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２６
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態２０〜２５のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２７
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、実施形態２０〜２６のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２８
前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、実施形態２０〜２７のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態２９
前記１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片が発現する、実施形態２８に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３０
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、実施形態２８または実施形態２９に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３１
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、実施形態２８〜３０のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３２
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、実施形態２８〜３１のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３３
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、実施形態２８〜３２のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３４
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態２８〜３３のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３５
前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、実施形態３４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３６
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態２８〜３１のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３７
前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態２０及び実施形態２２〜３６のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３８
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、マウスＣλ１遺伝子、マウスＣλ２遺伝子、またはマウスＣλ３遺伝子との同一性が少なくとも８０％である配列を有する、実施形態９〜３７のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態３９
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、マウスＣλ１遺伝子を含む、実施形態９〜３８のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４０
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、ラットＣλ遺伝子を含む、実施形態９〜３９のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４１
前記ラットＣλ遺伝子が、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、またはラットＣλ４遺伝子との同一性が少なくとも８０％である配列を有する、実施形態４０に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４２
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりに存在する、実施形態１〜４１のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４３
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態１〜４２のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４４
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列をさらに含む、実施形態１〜４３のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４５
前記κ軽鎖非コード配列が、ヒトκ軽鎖非コード配列である、実施形態４４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４６
前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、実施形態４５に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４７
不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む、実施形態１〜４６のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４８
前記げっ歯類が、前記不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、実施形態４７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態４９
前記げっ歯類が、前記不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態４７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５０
前記内在性のＶλ遺伝子セグメント、前記内在性のＪλ遺伝子セグメント、及び前記内在性のＣλ遺伝子の全部または一部が欠失される、実施形態１〜４９のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５１
前記げっ歯類が、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない、実施形態１〜５０のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５２
前記げっ歯類が、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない、実施形態１〜５１のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５３
前記げっ歯類が、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む、実施形態１〜５２のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５４
前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインが、（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域配列によってコードされる、実施形態５３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５５
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１〜５４のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５６
前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、実施形態５５に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５７
前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態５５または実施形態５６に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５８
外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記生殖細胞ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、実施形態５５〜５７のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態５９
遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ａ）転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、
（ｂ）ヒト重鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類重鎖定常ドメイン配列をそれぞれが含む免疫グロブリン重鎖を前記げっ歯類が発現するように１つまたは複数の内在性の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座であって、前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ならびに
（ｃ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
（ｉｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
（ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を含む、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
を含む、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在し、
前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であり、
前記げっ歯類が、げっ歯類λ軽鎖定常ドメイン配列に融合したヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を発現する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態６０
前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、実施形態１〜５９のいずれか１つに記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
実施形態６１
実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類から得られた、単離されたげっ歯類細胞。
実施形態６２
実施形態６１に記載の単離されたげっ歯類細胞から生じた不死化細胞。
実施形態６３
前記げっ歯類細胞が、げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞である、実施形態６１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態６４
実施形態６３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生じたげっ歯類胚。
実施形態６５
抗体を調製するための、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類の使用。
実施形態６６
軽鎖可変領域配列を調製するための、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類の使用。
実施形態６７
軽鎖可変ドメイン配列を調製するための、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類の使用。
実施形態６８
実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類から得られた、単離されたＢ細胞であって、前記Ｂ細胞のゲノムが、
（ａ）ラムダ軽鎖可変領域配列に機能可能なように連結された、再構成されたヒトラムダ軽鎖可変領域配列
を含み、
前記再構成されたヒトラムダ軽鎖可変領域配列が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
を含む、
前記単離されたＢ細胞。
実施形態６９
（ｂ）げっ歯類重鎖可変領域配列に機能可能なように連結された、再構成されたヒト重鎖可変領域配列
をさらに含む、実施形態６８に記載の単離されたＢ細胞であって、
前記再構成されたヒト重鎖可変領域配列が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
を含む、
前記単離されたＢ細胞。
実施形態７０
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を提供するステップと、
（ｂ）前記げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップと、
（ｃ）前記目的抗原に対する免疫応答を前記げっ歯類が生成する上で十分な条件の下で前記げっ歯類を維持するステップと、
（ｄ）前記げっ歯類から
（ｉ）前記目的抗原に結合する抗体、
（ｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体のヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒト重鎖可変ドメイン、軽鎖、または重鎖をコードするヌクレオチド、あるいは
（ｉｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体を発現する細胞
を回収するステップと、
を含む方法によって調製された抗体であって、
（ｄ）に記載の抗体が、ヒト重鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖可変ドメインを含む、前記抗体。
実施形態７１
単離されたげっ歯類細胞であって、前記単離されたげっ歯類細胞のゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）Ｃλ遺伝子と、
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７２
前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態７１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７３
前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、実施形態７１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７４
前記単離されたげっ歯類細胞の前記ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態７３に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７５
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態７４に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７６
前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、実施形態７１〜７５のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７７
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、実施形態７１〜７６のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７８
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
（ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態７１〜７７のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態７９
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態７１〜７８のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８０
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態７９に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８１
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態７９に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８２
（ａ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｂ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態７１〜８１のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８３
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態８２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８４
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態８２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８５
前記げっ歯類細胞の前記ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態７１〜８４のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８６
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、実施形態８５に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８７
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態８５または実施形態８６に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８８
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
（ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態８５〜８７のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態８９
前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、実施形態８５〜８８のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９０
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態８５〜８９のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９１
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、実施形態８５〜９０のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９２
前記げっ歯類細胞の前記ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、実施形態８５〜９１のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９３
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、実施形態９２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９４
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、実施形態９２または実施形態９３に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９５
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９６
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、実施形態９２〜９５のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９７
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態９２〜９６のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９８
前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、実施形態９７に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態９９
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態９２〜９４のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１００
前記単離されたげっ歯類細胞が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態８５〜９９のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０１
前記単離されたげっ歯類細胞の前記ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、実施形態７１〜１００のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０２
前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、実施形態１０１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０３
前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１０１または実施形態１０２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０４
外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記げっ歯類細胞の前記ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、実施形態１０１〜１０３のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０５
前記げっ歯類細胞が、ラット細胞またはマウス細胞である、実施形態７１〜１０４のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０６
実施形態７１〜１０５のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞から生じた不死化細胞。
実施形態１０７
前記げっ歯類細胞が、げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞である、実施形態７１〜１０５のいずれか１つに記載の単離されたげっ歯類細胞。
実施形態１０８
実施形態１０７に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生じたげっ歯類胚。
実施形態１０９
遺伝子改変されたげっ歯類の作製方法であって、前記方法が、
（ａ）げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける第１の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に１つまたは複数のＤＮＡ断片を導入するステップであって、
前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記Ｃλ遺伝子が、前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムにおける前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入され、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記Ｃλ遺伝子が、機能可能なように連結される、前記導入するステップと、
（ｂ）（ａ）において生じた前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生じさせるステップと、
を含む、前記方法。
実施形態１１０
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１０９に記載の方法。
実施形態１１１
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１０９または実施形態１１０に記載の方法。
実施形態１１２
前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、少なくとも１つの選択マーカーをさらに含む、実施形態１０９〜１１１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１３
前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、少なくとも１つの部位特異的組換え部位をさらに含む、実施形態１０９〜１１２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１４
１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列、及び１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入することをさらに含む、実施形態１０９〜１１３のいずれか１つに記載の方法であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、ヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接し、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、ヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接する、前記方法。
実施形態１１５
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列が位置するように前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムに前記κ軽鎖非コード配列を導入することをさらに含む、実施形態１０９〜１１４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１６
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、ラットＥＳ細胞またはマウスＥＳ細胞である、実施形態１０９〜１１５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１１７
遺伝子改変されたげっ歯類の作製方法であって、前記方法が、
（ａ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記Ｃλ遺伝子が、前記第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される、前記方法。
実施形態１１８
前記方法が、
（ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記Ｃλ遺伝子が、前記第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される、実施形態１１７に記載の方法。
実施形態１１９
前記方法が、
（ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１１７に記載の方法。
実施形態１２０
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態１１９に記載の方法。
実施形態１２１
前記方法が、
（ｃ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を操作するステップ
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１１７〜１２０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２２
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作する前記ステップが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及び１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体のゲノムに含むげっ歯類ＥＳ細胞において実施される、実施形態１１７〜１２１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２３
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態１２２に記載の方法。
実施形態１２４
前記操作するステップが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を自体のゲノムに含むげっ歯類ＥＳ細胞において実施される、実施形態１１７〜１２０、実施形態１２２、及び実施形態１２３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２５
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、実施形態１２１〜１２４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２６
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、実施形態１２１〜１２５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２７
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、実施形態１２１〜１２６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２８
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、げっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、実施形態１０９〜１２７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１２９
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態１１０〜１１５及び実施形態１１９〜１２８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３０
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、実施形態１０９〜１２９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３１
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
（ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態１０９〜１３０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３２
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１０９〜１３１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３３
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１３２に記載の方法。
実施形態１３４
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１３２に記載の方法。
実施形態１３５
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１０９〜１３４のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３６
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１３５に記載の方法。
実施形態１３７
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１３５に記載の方法。
実施形態１３８
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１３７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１３９
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１３８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４０
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
（ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１３９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４１
前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１４０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４２
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１４１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４３
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１４２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４４
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノム、または前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１４３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４５
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、実施形態１４４に記載の方法。
実施形態１４６
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、実施形態１４４または実施形態１４５に記載の方法。
実施形態１４７
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、実施形態１４４〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４８
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、実施形態１４４〜１４７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１４９
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態１４４〜１４８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５０
前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、実施形態１４９に記載の方法。
実施形態１５１
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態１４４〜１４６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５２
前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態１１１〜１１６及び実施形態１２１〜１５１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５３
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノム、または前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１０９〜１５２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５４
前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、実施形態１５３に記載の方法。
実施形態１５５
前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１５３または実施形態１５４に記載の方法。
実施形態１５６
外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、実施形態１５３〜１５５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５７
前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、実施形態１０９〜１５６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１５８
遺伝子改変されたげっ歯類における抗体の産生方法であって、前記方法が、
（ａ）げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップであって、
前記げっ歯類が、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含む生殖細胞ゲノムを有し、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記Ｃλ遺伝子（ｃ）が、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に存在する、前記免疫化するステップと、
（ｂ）前記目的抗原に対する免疫応答を前記げっ歯類が生成する上で十分な条件の下で前記げっ歯類を維持するステップと、
（ｃ）前記げっ歯類から
（ｉ）前記目的抗原に結合する抗体、
（ｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体のヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒト重鎖可変ドメイン、軽鎖、または重鎖をコードするヌクレオチド、あるいは
（ｉｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体を発現する細胞
を回収するステップと、
を含む、前記方法。
実施形態１５９
前記げっ歯類の前記細胞が、Ｂ細胞である、実施形態１５８に記載の方法。
実施形態１６０
前記Ｂ細胞からハイブリドーマを生成させることをさらに含む、実施形態１５９に記載の方法。
実施形態１６１
抗体の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）宿主細胞において免疫グロブリン重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を発現させることであって、前記第１のヌクレオチド配列が、ヒト重鎖可変領域配列を含む、前記発現させること、
（ｂ）宿主細胞において免疫グロブリンλ軽鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を発現させることであって、前記第２のヌクレオチド配列が、遺伝子改変されたげっ歯類から同定されたヒトλ軽鎖可変領域配列を含み、
前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記発現させること、
（ｃ）免疫グロブリン軽鎖及び免疫グロブリン重鎖が発現し、抗体を形成するように前記宿主細胞を培養すること、ならびに
（ｄ）前記宿主細胞または宿主細胞培養物から前記抗体を得ること
を含む、前記方法。
実施形態１６２
前記第１のヌクレオチドが、ヒト重鎖定常領域遺伝子をさらに含む、実施形態１６１に記載の方法。
実施形態１６３
前記第２のヌクレオチドが、ヒトλ軽鎖定常領域遺伝子をさらに含む、実施形態１６１または実施形態１６２に記載の方法。
実施形態１６４
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態１５８〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６５
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、実施形態１５８〜１６３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６６
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１６５に記載の方法。
実施形態１６７
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態１６６に記載の方法。
実施形態１６８
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、実施形態１５８〜１６７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１６９
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、実施形態１５８〜１６８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７０
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
（ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態１５８〜１６９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７１
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１５８〜１７０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７２
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１７１に記載の方法。
実施形態１７３
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１７１に記載の方法。
実施形態１７４
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１５８〜１７３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７５
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態１７４に記載の方法。
実施形態１７６
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態１７４に記載の方法。
実施形態１７７
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態１５８〜１７６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１７８
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、実施形態１７７に記載の方法。
実施形態１７９
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態１７７または実施形態１７８に記載の方法。
実施形態１８０
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
（ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態１７７〜１７９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８１
前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、実施形態１７７〜１８０のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８２
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態１７７〜１８１のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８３
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、実施形態１７７〜１８２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８４
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、実施形態１７７〜１８３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８５
前記１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片が発現する、実施形態１８４に記載の方法。
実施形態１８６
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、実施形態１８４または実施形態１８５に記載の方法。
実施形態１８７
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、実施形態１８４〜１８６のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８８
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、実施形態１８４〜１８７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１８９
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、実施形態１８４〜１８８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９０
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態１８４〜１８９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９１
前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、実施形態１９０に記載の方法。
実施形態１９２
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態１８４〜１８７のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９３
前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態１７７〜１９２のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９４
前記げっ歯類が、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む、実施形態１５８〜１９３のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９５
前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインが、（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域配列によってコードされる、実施形態１９４に記載の方法。
実施形態１９６
前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、実施形態１５８〜１９５のいずれか１つに記載の方法。
実施形態１９７
前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、実施形態１９６に記載の方法。
実施形態１９８
前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態１９６または実施形態１９７に記載の方法。
実施形態１９９
外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記生殖細胞ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、実施形態１９６〜１９８のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２００
前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、実施形態１５８〜１９９のいずれか１つに記載の方法。
実施形態２０１
げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞であって、前記げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
（ｃ）Ｃλ遺伝子と、
を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記げっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０２
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態２０１に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０３
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、実施形態２０１に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０４
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態２０３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０５
前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、実施形態２０４に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０６
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
（ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
を含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態２０１〜２０５のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０７
前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、実施形態２０１〜２０６に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０８
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、実施形態２０１〜２０７のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２０９
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
（ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態２０１〜２０８のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１０
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態２０１〜２０９のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１１
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態２１０に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１２
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態２１０に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１３
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態２０１〜２１２のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１４
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
を含む、実施形態２１３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１５
前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
（ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
を含む、実施形態２１３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１６
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
（ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
（ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
（ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
をさらに含み、
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、実施形態２０１〜２１５のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１７
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、実施形態２１６に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１８
前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、実施形態２１６または実施形態２１７に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２１９
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
（ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
（ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
をさらに含む、実施形態２１６〜２１８のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２０
前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、実施形態２１６〜２１９のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２１
（ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
（ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
実施形態２１６〜２２０のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２２
前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、実施形態２１６〜２２１のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２３
前記げっ歯類の前記ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、実施形態２１６〜２２２のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２４
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、実施形態２２３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２５
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、実施形態２２３または実施形態２２４に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２６
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、実施形態２２３〜２２５のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２７
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、実施形態２２３〜２２６のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２８
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態２２３〜２２７のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２２９
前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、実施形態２２８に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３０
１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、実施形態２２３〜２２５のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３１
前記げっ歯類細胞が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、実施形態２１６〜２３０のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３２
前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、実施形態２０１〜２３１のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３３
前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、実施形態２３２に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３４
前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、実施形態２３２または実施形態２３３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３５
外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、実施形態２３２〜２３４のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３６
前記げっ歯類ＥＳ細胞が、ラットＥＳ細胞またはマウスＥＳ細胞である、実施形態２０１〜２３５のいずれか１つに記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
実施形態２３７
抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を前記抗原で免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を決定し、及び／または前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を決定するステップと、
（ｃ）（ｉ）ヒト重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列、及び／または
（ｉｉ）ヒト軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメインをコードする前記ヌクレオチド配列、
を用いることによって完全ヒト抗体を発現させるステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２３８
抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）２つのヒトλ軽鎖及び２つのヒト重鎖を含む完全ヒト抗体を哺乳類細胞において発現させるステップであって、それぞれのヒトλ軽鎖が、ヒトλ軽鎖可変領域によってコードされるヒトλ軽鎖可変ドメインを含み、それぞれのヒト重鎖が、ヒト重鎖可変領域によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを含み、少なくとも１つのヒト重鎖可変領域またはヒトλ軽鎖可変領域のヌクレオチド配列が、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類から得られたものである、前記発現させるステップと、
（ｂ）前記完全ヒト抗体を得るステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２３９
抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列を決定し、及び／または前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
（ｃ）（ｉ）ヒト重鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列、及び／または
（ｉｉ）ヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列
を用いることによって完全ヒト抗体を発現させるステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２４０
ヒト重鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列を用いることが、（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列及び前記ヒト重鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む、実施形態２３９に記載の方法。
実施形態２４１
ヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を用いることが、（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列及び前記ヒト軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む、実施形態２３９または実施形態２４０に記載の方法。
実施形態２４２
抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）２つのヒトλ軽鎖及び２つのヒト重鎖を含む前記完全ヒト抗体を哺乳類細胞において発現させるステップであって、それぞれのヒトλ軽鎖が、ヒト軽鎖可変ドメインを含み、それぞれのヒト重鎖が、ヒト重鎖可変ドメインを含み、少なくとも１つのヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類から得られたものである、前記発現させるステップと、
（ｂ）前記完全ヒト抗体を得るステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２４３
ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を生成させるための方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２４４
ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定することが、前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を決定することを含む、実施形態２４３に記載の方法。
実施形態２４５
完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
（ｃ）前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結して完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖を形成させるステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２４６
前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結することが、前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を、前記ヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能なように連結することを含む、実施形態２４５に記載の方法。
実施形態２４７
ヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を生成させるための方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするそれぞれヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を決定するステップと、
を含む、前記方法。
実施形態２４８
完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖をコードするヌクレオチド配列の調製方法であって、前記方法が、
（ａ）実施形態１〜６０のいずれか１つに記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
（ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするそれぞれヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を決定するステップと、
（ｃ）前記ヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を、それぞれヒト重鎖定常領域遺伝子またはヒト軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結することで、完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成させるステップと、
を含む、前記方法。
均等物
当業者なら本開示に対するさまざまな変更、改変、及び改良を容易に思い付くであろうことを当業者なら理解するであろう。そのような変更、改変、及び改良は、本開示の一部をなすことが意図され、本発明の趣旨及び範囲に含まれることが意図される。したがって、前述の説明及び図面は例として示されるものにすぎず、本開示に記載の発明はいずれも、さらに詳細な説明がなされるとすれば、それは後述の特許請求の範囲によってなされる。
本明細書に記載のアッセイまたは他のプロセスにおいて得られる値に起因し得る典型的な標準偏差または標準誤差を当業者なら理解するであろう。本発明の背景を説明すると共に、その実施に関する追加詳細を提供するために本明細書で参照される刊行物、ウェブサイト、及び他の参照材料は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。

Claims (248)

  1. 遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）Ｃλ遺伝子と、
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
  2. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  3. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子についてヘテロ接合型である、請求項１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  4. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  5. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  6. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  7. 遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
    （ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメント
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座と、
    を含む、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
  8. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  9. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  10. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
    （ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  11. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１〜１０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  12. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  13. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  14. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１〜１３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  15. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  16. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  17. 遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を含み、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
    （ｉｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    （ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
    前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
  18. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  19. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項１８に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  20. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  21. 遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）ヒト重鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類重鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン重鎖を前記げっ歯類が発現するように１つまたは複数の内在性の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座であって、前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座、
    （ｂ）第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
    （ｉｖ）前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｖ）前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    （ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
    前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに前記第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に存在する、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、ならびに
    （ｃ）ヒトκ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類κ軽鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を前記げっ歯類が発現するように内在性のげっ歯類Ｃκ領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及び１つまたは複数のＪκ遺伝子セグメントを含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、
    を含み、
    前記げっ歯類が、ヒトλ軽鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類λ軽鎖定常ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を発現する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
  22. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、請求項２０または請求項２１に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  23. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  24. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
    （ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
    （ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  25. 前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項２０〜２４のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  26. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  27. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、請求項２０〜２６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  28. 前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２０〜２７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  29. 前記１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片が発現する、請求項２８に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  30. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、請求項２８または請求項２９に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  31. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  32. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  33. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、請求項２８〜３２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  34. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項２８〜３３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  35. 前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、請求項３４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  36. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項２８〜３１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  37. 前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項２０及び請求項２２〜３６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  38. 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、マウスＣλ１遺伝子、マウスＣλ２遺伝子、またはマウスＣλ３遺伝子との同一性が少なくとも８０％である配列を有する、請求項９〜３７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  39. 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、マウスＣλ１遺伝子を含む、請求項９〜３８のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  40. 前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、ラットＣλ遺伝子を含む、請求項９〜３９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  41. 前記ラットＣλ遺伝子が、ラットＣλ１遺伝子、ラットＣλ２遺伝子、ラットＣλ３遺伝子、またはラットＣλ４遺伝子との同一性が少なくとも８０％である配列を有する、請求項４０に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  42. 前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせの代わりに存在する、請求項１〜４１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  43. 前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類Ｖκ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類Ｊκ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項１〜４２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  44. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列をさらに含む、請求項１〜４３のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  45. 前記κ軽鎖非コード配列が、ヒトκ軽鎖非コード配列である、請求項４４に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  46. 前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を有する、請求項４５に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  47. 不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座をさらに含む、請求項１〜４６のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  48. 前記げっ歯類が、前記不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、請求項４７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  49. 前記げっ歯類が、前記不活化された内在性の免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項４７に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  50. 前記内在性のＶλ遺伝子セグメント、前記内在性のＪλ遺伝子セグメント、及び前記内在性のＣλ遺伝子の全部または一部が欠失される、請求項１〜４９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  51. 前記げっ歯類が、内在性の免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない、請求項１〜５０のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  52. 前記げっ歯類が、内在性の免疫グロブリンκ軽鎖可変ドメインを検出可能なほど発現しない、請求項１〜５１のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  53. 前記げっ歯類が、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む、請求項１〜５２のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  54. 前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインが、（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域配列によってコードされる、請求項５３に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  55. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、請求項１〜５４のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  56. 前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項５５に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  57. 前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項５５または請求項５６に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  58. 外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記生殖細胞ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、請求項５５〜５７のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  59. 遺伝子改変されたげっ歯類であって、前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列、
    （ｂ）ヒト重鎖可変ドメイン配列及びげっ歯類重鎖定常ドメイン配列をそれぞれが含む免疫グロブリン重鎖を前記げっ歯類が発現するように１つまたは複数の内在性の免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座であって、前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ならびに
    （ｃ）操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座であって、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）げっ歯類Ｃλ遺伝子と、
    （ｉｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｖ）前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、及びＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    （ｖｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間に位置するヒトκ軽鎖非コード配列であって、前記ヒトκ軽鎖非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座においてヒトＶκ４−１遺伝子セグメントとヒトＪκ１遺伝子セグメントとの間に見られる配列を含む、前記ヒトκ軽鎖非コード配列と、
    を含む、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、機能可能なように互いに連結され、
    前記げっ歯類Ｃλ遺伝子が、前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のげっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに存在し、
    前記生殖細胞ゲノムが、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型であり、
    前記げっ歯類が、げっ歯類λ軽鎖定常ドメイン配列に融合したヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を含む免疫グロブリン軽鎖を発現する、前記遺伝子改変されたげっ歯類。
  60. 前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、請求項１〜５９のいずれか１項に記載の遺伝子改変されたげっ歯類。
  61. 請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類から得られた、単離されたげっ歯類細胞。
  62. 請求項６１に記載の単離されたげっ歯類細胞から生じた不死化細胞。
  63. 前記げっ歯類細胞が、げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞である、請求項６１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  64. 請求項６３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生じたげっ歯類胚。
  65. 抗体を調製するための、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類の使用。
  66. 軽鎖可変領域配列を調製するための、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類の使用。
  67. 軽鎖可変ドメイン配列を調製するための、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類の使用。
  68. 請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類から得られた、単離されたＢ細胞であって、前記Ｂ細胞のゲノムが、
    （ａ）ラムダ軽鎖可変領域配列に機能可能なように連結された、再構成されたヒトラムダ軽鎖可変領域配列
    を含み、
    前記再構成されたヒトラムダ軽鎖可変領域配列が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
    を含む、
    前記単離されたＢ細胞。
  69. （ｂ）げっ歯類重鎖可変領域配列に機能可能なように連結された、再構成されたヒト重鎖可変領域配列
    をさらに含む、請求項６８に記載の単離されたＢ細胞であって、
    前記再構成されたヒト重鎖可変領域配列が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、
    を含む、
    前記単離されたＢ細胞。
  70. （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を提供するステップと、
    （ｂ）前記げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップと、
    （ｃ）前記目的抗原に対する免疫応答を前記げっ歯類が生成する上で十分な条件の下で前記げっ歯類を維持するステップと、
    （ｄ）前記げっ歯類から
    （ｉ）前記目的抗原に結合する抗体、
    （ｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体のヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒト重鎖可変ドメイン、軽鎖、または重鎖をコードするヌクレオチド、あるいは
    （ｉｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体を発現する細胞
    を回収するステップと、
    を含む方法によって調製された抗体であって、
    （ｄ）に記載の抗体が、ヒト重鎖可変ドメイン及びヒトλ軽鎖可変ドメインを含む、前記抗体。
  71. 単離されたげっ歯類細胞であって、前記単離されたげっ歯類細胞のゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）Ｃλ遺伝子と、
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記単離されたげっ歯類細胞。
  72. 前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項７１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  73. 前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、請求項７１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  74. 前記単離されたげっ歯類細胞の前記ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項７３に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  75. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項７４に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  76. 前記単離されたげっ歯類細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、請求項７１〜７５のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  77. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、請求項７１〜７６のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  78. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
    （ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項７１〜７７のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  79. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項７１〜７８のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  80. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項７９に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  81. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項７９に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  82. （ａ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｂ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項７１〜８１のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  83. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項８２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  84. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項８２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  85. 前記げっ歯類細胞の前記ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項７１〜８４のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  86. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、請求項８５に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  87. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項８５または請求項８６に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  88. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
    （ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
    （ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項８５〜８７のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  89. 前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項８５〜８８のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  90. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項８５〜８９のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  91. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、請求項８５〜９０のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  92. 前記げっ歯類細胞の前記ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項８５〜９１のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  93. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、請求項９２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  94. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、請求項９２または請求項９３に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  95. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  96. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、請求項９２〜９５のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  97. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項９２〜９６のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  98. 前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、請求項９７に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  99. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項９２〜９４のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  100. 前記単離されたげっ歯類細胞が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項８５〜９９のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  101. 前記単離されたげっ歯類細胞の前記ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、請求項７１〜１００のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  102. 前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項１０１に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  103. 前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１０１または請求項１０２に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  104. 外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記げっ歯類細胞の前記ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、請求項１０１〜１０３のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  105. 前記げっ歯類細胞が、ラット細胞またはマウス細胞である、請求項７１〜１０４のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  106. 請求項７１〜１０５のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞から生じた不死化細胞。
  107. 前記げっ歯類細胞が、げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞である、請求項７１〜１０５のいずれか１項に記載の単離されたげっ歯類細胞。
  108. 請求項１０７に記載のげっ歯類ＥＳ細胞から生じたげっ歯類胚。
  109. 遺伝子改変されたげっ歯類の作製方法であって、前記方法が、
    （ａ）げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムにおける第１の操作された免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に１つまたは複数のＤＮＡ断片を導入するステップであって、
    前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記Ｃλ遺伝子が、前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムにおける前記内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入され、前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び前記Ｃλ遺伝子が、機能可能なように連結される、前記導入するステップと、
    （ｂ）（ａ）において生じた前記げっ歯類ＥＳ細胞を使用してげっ歯類を生じさせるステップと、
    を含む、前記方法。
  110. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１０９に記載の方法。
  111. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１０９または請求項１１０に記載の方法。
  112. 前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、少なくとも１つの選択マーカーをさらに含む、請求項１０９〜１１１のいずれか１項に記載の方法。
  113. 前記１つまたは複数のＤＮＡ断片が、少なくとも１つの部位特異的組換え部位をさらに含む、請求項１０９〜１１２のいずれか１項に記載の方法。
  114. １つまたは複数のヒトＶλ非コード配列、及び１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列を前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に導入することをさらに含む、請求項１０９〜１１３のいずれか１項に記載の方法であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、ヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接し、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、ヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接する、前記方法。
  115. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントとの間にκ軽鎖非コード配列が位置するように前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムに前記κ軽鎖非コード配列を導入することをさらに含む、請求項１０９〜１１４のいずれか１項に記載の方法。
  116. 前記げっ歯類ＥＳ細胞が、ラットＥＳ細胞またはマウスＥＳ細胞である、請求項１０９〜１１５のいずれか１項に記載の方法。
  117. 遺伝子改変されたげっ歯類の作製方法であって、前記方法が、
    （ａ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
    を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記Ｃλ遺伝子が、前記第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される、前記方法。
  118. 前記方法が、
    （ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
    を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記Ｃλ遺伝子が、前記第２の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に挿入される、請求項１１７に記載の方法。
  119. 前記方法が、
    （ｂ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作するステップ
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１１７に記載の方法。
  120. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項１１９に記載の方法。
  121. 前記方法が、
    （ｃ）（ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含むように前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を操作するステップ
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１１７〜１２０のいずれか１項に記載の方法。
  122. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムにおける第１の内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を操作する前記ステップが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント及び１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントを含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座を自体のゲノムに含むげっ歯類ＥＳ細胞において実施される、請求項１１７〜１２１のいずれか１項に記載の方法。
  123. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項１２２に記載の方法。
  124. 前記操作するステップが、１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントを含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座を自体のゲノムに含むげっ歯類ＥＳ細胞において実施される、請求項１１７〜１２０、請求項１２２、及び請求項１２３のいずれか１項に記載の方法。
  125. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のヒトＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、請求項１２１〜１２４のいずれか１項に記載の方法。
  126. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＤＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、請求項１２１〜１２５のいずれか１項に記載の方法。
  127. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪＨ非コード配列を含み、前記１つまたは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、請求項１２１〜１２６のいずれか１項に記載の方法。
  128. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、げっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、請求項１０９〜１２７のいずれか１項に記載の方法。
  129. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項１１０〜１１５及び請求項１１９〜１２８のいずれか１項に記載の方法。
  130. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、請求項１０９〜１２９のいずれか１項に記載の方法。
  131. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
    （ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項１０９〜１３０のいずれか１項に記載の方法。
  132. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１０９〜１３１のいずれか１項に記載の方法。
  133. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１３２に記載の方法。
  134. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１３２に記載の方法。
  135. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１０９〜１３４のいずれか１項に記載の方法。
  136. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１３５に記載の方法。
  138. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１３７のいずれか１項に記載の方法。
  139. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１３８のいずれか１項に記載の方法。
  140. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
    （ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
    （ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１３９のいずれか１項に記載の方法。
  141. 前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１４０のいずれか１項に記載の方法。
  142. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１４１のいずれか１項に記載の方法。
  143. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１４２のいずれか１項に記載の方法。
  144. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノム、または前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１４３のいずれか１項に記載の方法。
  145. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、請求項１４４に記載の方法。
  146. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、請求項１４４または請求項１４５に記載の方法。
  147. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、請求項１４４〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
  148. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、請求項１４４〜１４７のいずれか１項に記載の方法。
  149. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項１４４〜１４８のいずれか１項に記載の方法。
  150. 前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、請求項１４９に記載の方法。
  151. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項１４４〜１４６のいずれか１項に記載の方法。
  152. 前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項１１１〜１１６及び請求項１２１〜１５１のいずれか１項に記載の方法。
  153. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノム、または前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、請求項１０９〜１５２のいずれか１項に記載の方法。
  154. 前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項１５３に記載の方法。
  155. 前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１５３または請求項１５４に記載の方法。
  156. 外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、請求項１５３〜１５５のいずれか１項に記載の方法。
  157. 前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、請求項１０９〜１５６のいずれか１項に記載の方法。
  158. 遺伝子改変されたげっ歯類における抗体の産生方法であって、前記方法が、
    （ａ）げっ歯類を目的抗原で免疫化するステップであって、
    前記げっ歯類が、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメント、及び
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含む生殖細胞ゲノムを有し、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記Ｃλ遺伝子（ｃ）が、げっ歯類Ｃκ遺伝子の代わりに前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座に存在する、前記免疫化するステップと、
    （ｂ）前記目的抗原に対する免疫応答を前記げっ歯類が生成する上で十分な条件の下で前記げっ歯類を維持するステップと、
    （ｃ）前記げっ歯類から
    （ｉ）前記目的抗原に結合する抗体、
    （ｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体のヒト軽鎖可変ドメインもしくはヒト重鎖可変ドメイン、軽鎖、または重鎖をコードするヌクレオチド、あるいは
    （ｉｉｉ）前記目的抗原に結合する抗体を発現する細胞
    を回収するステップと、
    を含む、前記方法。
  159. 前記げっ歯類の前記細胞が、Ｂ細胞である、請求項１５８に記載の方法。
  160. 前記Ｂ細胞からハイブリドーマを生成させることをさらに含む、請求項１５９に記載の方法。
  161. 抗体の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）宿主細胞において免疫グロブリン重鎖をコードする第１のヌクレオチド配列を発現させることであって、前記第１のヌクレオチド配列が、ヒト重鎖可変領域配列を含む、前記発現させること、
    （ｂ）宿主細胞において免疫グロブリンλ軽鎖をコードする第２のヌクレオチド配列を発現させることであって、前記第２のヌクレオチド配列が、遺伝子改変されたげっ歯類から同定されたヒトλ軽鎖可変領域配列を含み、
    前記遺伝子改変されたげっ歯類の生殖細胞ゲノムが、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）Ｃλ遺伝子と、
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記発現させること、
    （ｃ）免疫グロブリン軽鎖及び免疫グロブリン重鎖が発現し、抗体を形成するように前記宿主細胞を培養すること、ならびに
    （ｄ）前記宿主細胞または宿主細胞培養物から前記抗体を得ること
    を含む、前記方法。
  162. 前記第１のヌクレオチドが、ヒト重鎖定常領域遺伝子をさらに含む、請求項１６１に記載の方法。
  163. 前記第２のヌクレオチドが、ヒトλ軽鎖定常領域遺伝子をさらに含む、請求項１６１または請求項１６２に記載の方法。
  164. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項１５８〜１６３のいずれか１項に記載の方法。
  165. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、請求項１５８〜１６３のいずれか１項に記載の方法。
  166. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１６５に記載の方法。
  167. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項１６６に記載の方法。
  168. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、請求項１５８〜１６７のいずれか１項に記載の方法。
  169. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、請求項１５８〜１６８のいずれか１項に記載の方法。
  170. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
    （ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項１５８〜１６９のいずれか１項に記載の方法。
  171. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１５８〜１７０のいずれか１項に記載の方法。
  172. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１７１に記載の方法。
  173. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１７１に記載の方法。
  174. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１５８〜１７３のいずれか１項に記載の方法。
  175. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項１７４に記載の方法。
  176. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項１７４に記載の方法。
  177. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項１５８〜１７６のいずれか１項に記載の方法。
  178. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、請求項１７７に記載の方法。
  179. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項１７７または請求項１７８に記載の方法。
  180. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
    （ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
    （ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項１７７〜１７９のいずれか１項に記載の方法。
  181. 前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項１７７〜１８０のいずれか１項に記載の方法。
  182. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項１７７〜１８１のいずれか１項に記載の方法。
  183. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、請求項１７７〜１８２のいずれか１項に記載の方法。
  184. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項１７７〜１８３のいずれか１項に記載の方法。
  185. 前記１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片が発現する、請求項１８４に記載の方法。
  186. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、請求項１８４または請求項１８５に記載の方法。
  187. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、請求項１８４〜１８６のいずれか１項に記載の方法。
  188. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、請求項１８４〜１８７のいずれか１項に記載の方法。
  189. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、請求項１８４〜１８８のいずれか１項に記載の方法。
  190. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項１８４〜１８９のいずれか１項に記載の方法。
  191. 前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、請求項１９０に記載の方法。
  192. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項１８４〜１８７のいずれか１項に記載の方法。
  193. 前記げっ歯類が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項１７７〜１９２のいずれか１項に記載の方法。
  194. 前記げっ歯類が、ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインをそれぞれが含む免疫グロブリンλ軽鎖を含む抗体を発現するＢ細胞集団を含む、請求項１５８〜１９３のいずれか１項に記載の方法。
  195. 前記ヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変ドメインが、（ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、（ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの１つ、または体細胞超変異が生じたそのバリアントと、を含む再構成されたヒト免疫グロブリンλ軽鎖可変領域配列によってコードされる、請求項１９４に記載の方法。
  196. 前記げっ歯類の前記生殖細胞ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、請求項１５８〜１９５のいずれか１項に記載の方法。
  197. 前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項１９６に記載の方法。
  198. 前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項１９６または請求項１９７に記載の方法。
  199. 外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、前記生殖細胞ゲノムにおいて免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、請求項１９６〜１９８のいずれか１項に記載の方法。
  200. 前記げっ歯類が、ラットまたはマウスである、請求項１５８〜１９９のいずれか１項に記載の方法。
  201. げっ歯類胚性幹（ＥＳ）細胞であって、前記げっ歯類ＥＳ細胞のゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）Ｃλ遺伝子と、
    を含む第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、前記Ｃλ遺伝子に機能可能なように連結され、
    前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、前記げっ歯類ＥＳ細胞。
  202. 前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項２０１に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  203. 前記げっ歯類ＥＳ細胞が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座についてヘテロ接合型である、請求項２０１に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  204. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントと、
    を含む第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶκ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪκ遺伝子セグメントが、Ｃκ遺伝子に機能可能なように連結される、請求項２０３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  205. 前記第２の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃκ遺伝子が、内在性のげっ歯類Ｃκ遺伝子である、請求項２０４に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  206. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
    （ｉ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｉｉｉ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    を含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項２０１〜２０５のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  207. 前記げっ歯類が、前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座にげっ歯類Ｃκ遺伝子を含まない、請求項２０１〜２０６に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  208. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座における前記Ｃλ遺伝子が、げっ歯類Ｃλ遺伝子を含む、請求項２０１〜２０７のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  209. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＶλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶλ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列が、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座においてヒトＪλ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪλ非コード配列、または
    （ｉｉｉ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項２０１〜２０８のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  210. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項２０１〜２０９のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  211. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項２１０に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  212. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項２１０に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  213. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶλ遺伝子セグメントが、Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、Ｖλ３−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪλ遺伝子セグメントが、Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、Ｊλ７、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項２０１〜２１２のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  214. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＪλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪλ非コード配列と、
    を含む、請求項２１３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  215. 前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｖλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座のＶλ４−６９、Ｖλ８−６１、Ｖλ４−６０、Ｖλ６−５７、Ｖλ１０−５４、Ｖλ５−５２、Ｖλ１−５１、Ｖλ９−４９、Ｖλ１−４７、Ｖλ７−４６、Ｖλ５−４５、Ｖλ１−４４、Ｖλ７−４３、Ｖλ１−４０、Ｖλ５−３９、Ｖλ５−３７、Ｖλ１−３６、Ｖλ３−２７、Ｖλ３−２５、Ｖλ２−２３、Ｖλ３−２２、Ｖλ３−２１、Ｖλ３−１９、Ｖλ２−１８、Ｖλ３−１６、Ｖλ２−１４、Ｖλ３−１２、Ｖλ２−１１、Ｖλ３−１０、Ｖλ３−９、Ｖλ２−８、Ｖλ４−３、またはＶλ３−１に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＶλ非コード配列と、
    （ｉｉ）前記第１の操作された内在性の免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座において前記Ｊλ１、Ｊλ２、Ｊλ３、Ｊλ６、またはＪλ７にそれぞれが隣接する１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列であって、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座のＪκ１、Ｊκ２、Ｊκ３、Ｊκ４、またはＪκ５に隣接して見られる、前記１つまたは複数のヒトＪκ非コード配列と、
    を含む、請求項２１３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  216. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、
    （ａ）１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントと、
    （ｂ）１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントと、
    （ｃ）１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントと、
    を含む操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座
    をさらに含み、
    前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座において１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結される、請求項２０１〜２１５のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  217. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの組み合わせの代わりに存在する、請求項２１６に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  218. 前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメント、１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメント、及び１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントによって、１つもしくは複数のげっ歯類ＶＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＤＨ遺伝子セグメント、１つもしくは複数のげっ歯類ＪＨ遺伝子セグメント、またはそれらの任意の組み合わせが代替される、請求項２１６または請求項２１７に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  219. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、
    （ｉ）前記１つもしくは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＶＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＶＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＶＨ非コード配列、
    （ｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＤＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＤＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＤＨ非コード配列、
    （ｉｉｉ）前記１つもしくは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントの少なくとも１つにそれぞれが隣接する１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列であって、前記１つもしくは複数のＪＨ非コード配列がそれぞれ、天然では内在性のヒト免疫グロブリン重鎖遺伝子座においてヒトＪＨ遺伝子セグメントに隣接して見られる、前記１つもしくは複数のヒトＪＨ非コード配列、または
    （ｉｖ）それらの任意の組み合わせ
    をさらに含む、請求項２１６〜２１８のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  220. 前記１つまたは複数のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子が、１つまたは複数の内在性のげっ歯類免疫グロブリン重鎖定常領域遺伝子である、請求項２１６〜２１９のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  221. （ｉ）前記１つまたは複数のヒトＶＨ遺伝子セグメントが、ＶＨ３−７４、ＶＨ３−７３、ＶＨ３−７２、ＶＨ２−７０、ＶＨ１−６９、ＶＨ３−６６、ＶＨ３−６４、ＶＨ４−６１、ＶＨ４−５９、ＶＨ１−５８、ＶＨ３−５３、ＶＨ５−５１、ＶＨ３−４９、ＶＨ３−４８、ＶＨ１−４６、ＶＨ１−４５、ＶＨ３−４３、ＶＨ４−３９、ＶＨ４−３４、ＶＨ３−３３、ＶＨ４−３１、ＶＨ３−３０、ＶＨ４−２８、ＶＨ２−２６、ＶＨ１−２４、ＶＨ３−２３、ＶＨ３−２１、ＶＨ３−２０、ＶＨ１−１８、ＶＨ３−１５、ＶＨ３−１３、ＶＨ３−１１、ＶＨ３−９、ＶＨ１−８、ＶＨ３−７、ＶＨ２−５、ＶＨ７−４−１、ＶＨ４−４、ＶＨ１−３、ＶＨ１−２、ＶＨ６−１、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＤＨ遺伝子セグメントが、ＤＨ１−１、ＤＨ２−２、ＤＨ３−３、ＤＨ４−４、ＤＨ５−５、ＤＨ６−６、ＤＨ１−７、ＤＨ２−８、ＤＨ３−９、ＤＨ３−１０、ＤＨ５−１２、ＤＨ６−１３、ＤＨ２−１５、ＤＨ３−１６、ＤＨ４−１７、ＤＨ６−１９、ＤＨ１−２０、ＤＨ２−２１、ＤＨ３−２２、ＤＨ６−２５、ＤＨ１−２６、ＤＨ７−２７、またはそれらの任意の組み合わせを含み、
    （ｉｉｉ）前記１つまたは複数のヒトＪＨ遺伝子セグメントが、ＪＨ１、ＪＨ２、ＪＨ３、ＪＨ４、ＪＨ５、ＪＨ６、またはそれらの任意の組み合わせを含む、
    請求項２１６〜２２０のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  222. 前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座が、機能性の内在性げっ歯類Ａｄａｍ６遺伝子を含まない、請求項２１６〜２２１のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  223. 前記げっ歯類の前記ゲノムが、１つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする１つまたは複数のヌクレオチド配列をさらに含む、請求項２１６〜２２２のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  224. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座と同じ染色体上に含まれる、請求項２２３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  225. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座に含まれる、請求項２２３または請求項２２４に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  226. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子の代わりに存在する、請求項２２３〜２２５のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  227. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列によって、ヒトＡｄａｍ６偽遺伝子が代替される、請求項２２３〜２２６のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  228. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントと第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項２２３〜２２７のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  229. 前記第１のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ１−２であり、前記第２のヒトＶＨ遺伝子セグメントがＶＨ６−１である、請求項２２８に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  230. １つまたは複数のげっ歯類ＡＤＡＭ６ポリペプチド、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性オルソログ、げっ歯類ＡＤＡＭ６機能性ホモログ、またはその機能性断片をコードする前記１つまたは複数のヌクレオチド配列が、ヒトＶＨ遺伝子セグメントとヒトＤＨ遺伝子セグメントとの間に位置する、請求項２２３〜２２５のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  231. 前記げっ歯類細胞が、前記操作された内在性の免疫グロブリン重鎖遺伝子座についてホモ接合型である、請求項２１６〜２３０のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  232. 前記げっ歯類ＥＳ細胞の前記ゲノムが、転写制御要素に機能可能なように連結された外来性のターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）をコードする核酸配列をさらに含む、請求項２０１〜２３１のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  233. 前記ＴｄＴが、ＴｄＴの短鎖アイソフォーム（ＴｄＴＳ）である、請求項２３２に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  234. 前記転写制御要素が、ＲＡＧ１転写制御要素、ＲＡＧ２転写制御要素、免疫グロブリン重鎖転写制御要素、免疫グロブリンκ軽鎖転写制御要素、免疫グロブリンλ軽鎖転写制御要素、またはそれらの任意の組み合わせを含む、請求項２３２または請求項２３３に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  235. 外来性ＴｄＴをコードする前記核酸配列が、免疫グロブリンκ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリンλ軽鎖遺伝子座、免疫グロブリン重鎖遺伝子座、ＲＡＧ１遺伝子座、またはＲＡＧ２遺伝子座に存在する、請求項２３２〜２３４のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  236. 前記げっ歯類ＥＳ細胞が、ラットＥＳ細胞またはマウスＥＳ細胞である、請求項２０１〜２３５のいずれか１項に記載のげっ歯類ＥＳ細胞。
  237. 抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を前記抗原で免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を決定し、及び／または前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列を決定するステップと、
    （ｃ）（ｉ）ヒト重鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメインをコードするヌクレオチド配列、及び／または
    （ｉｉ）ヒト軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメインをコードする前記ヌクレオチド配列、
    を用いることによって完全ヒト抗体を発現させるステップと、
    を含む、前記方法。
  238. 抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）２つのヒトλ軽鎖及び２つのヒト重鎖を含む完全ヒト抗体を哺乳類細胞において発現させるステップであって、それぞれのヒトλ軽鎖が、ヒトλ軽鎖可変領域によってコードされるヒトλ軽鎖可変ドメインを含み、それぞれのヒト重鎖が、ヒト重鎖可変領域によってコードされるヒト重鎖可変ドメインを含み、少なくとも１つのヒト重鎖可変領域またはヒトλ軽鎖可変領域のヌクレオチド配列が、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類から得られたものである、前記発現させるステップと、
    （ｂ）前記完全ヒト抗体を得るステップと、
    を含む、前記方法。
  239. 抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列を決定し、及び／または前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
    （ｃ）（ｉ）ヒト重鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列、及び／または
    （ｉｉ）ヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列
    を用いることによって完全ヒト抗体を発現させるステップと、
    を含む、前記方法。
  240. ヒト重鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列を用いることが、（ｂ）に記載のヒト重鎖可変ドメイン配列及び前記ヒト重鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む、請求項２３９に記載の方法。
  241. ヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結された（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を用いることが、（ｂ）に記載のヒトλ軽鎖可変ドメイン配列及び前記ヒト軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を発現させることを含む、請求項２３９または請求項２４０に記載の方法。
  242. 抗原に対して特異的な完全ヒト抗体の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）２つのヒトλ軽鎖及び２つのヒト重鎖を含む前記完全ヒト抗体を哺乳類細胞において発現させるステップであって、それぞれのヒトλ軽鎖が、ヒト軽鎖可変ドメインを含み、それぞれのヒト重鎖が、ヒト重鎖可変ドメインを含み、少なくとも１つのヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインのアミノ酸配列が、請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類から得られたものである、前記発現させるステップと、
    （ｂ）前記完全ヒト抗体を得るステップと、
    を含む、前記方法。
  243. ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を生成させるための方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
    を含む、前記方法。
  244. ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定することが、前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を決定することを含む、請求項２４３に記載の方法。
  245. 完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を決定するステップと、
    （ｃ）前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結して完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖を形成させるステップと、
    を含む、前記方法。
  246. 前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列を、それぞれヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列に機能可能なように連結することが、前記ヒト重鎖可変ドメイン配列またはヒトλ軽鎖可変ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列を、前記ヒト重鎖定常ドメイン配列またはヒト軽鎖定常ドメイン配列をコードするヌクレオチド配列に機能可能なように連結することを含む、請求項２４５に記載の方法。
  247. ヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を生成させるための方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするそれぞれヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を決定するステップと、
    を含む、前記方法。
  248. 完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖をコードするヌクレオチド配列の調製方法であって、前記方法が、
    （ａ）請求項１〜６０のいずれか１項に記載のげっ歯類を免疫化するステップと、
    （ｂ）前記遺伝子改変されたマウスによって産生され、かつ前記抗原に特異的に結合する抗体のヒト重鎖可変ドメインまたはヒトλ軽鎖可変ドメインをコードするそれぞれヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を決定するステップと、
    （ｃ）前記ヒト重鎖可変領域配列またはヒトλ軽鎖可変領域配列を、それぞれヒト重鎖定常領域遺伝子またはヒト軽鎖定常領域遺伝子に機能可能なように連結することで、完全ヒト重鎖または完全ヒト軽鎖をコードするヌクレオチド配列を形成させるステップと、
    を含む、前記方法。
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