JP2021193374A - リン酸化アルファ−シヌクレインを検出するための方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、米国仮出願第62/297,777号(2016年2月19日出願)、及び第62/209,800号(2015年8月25日出願)に関連し、これらは参照によりその全体が組み込まれる。
本出願は、参照により、2016年8月25日に作成され、1608バイトを含む、ファイル719PCT_SEQLST.txtとして、コンピュータで読み取り可能な形式で提出された、配列表を組み込む。
アルファ−シヌクレイン脳病理は、シヌクレイノパチーと呼ばれるいくつかの神経変性疾患の顕著な特徴である。アルファ−シヌクレインは、レビー小体(LB)及びレビーニューライト(これらは神経細胞内封入体である)の主要な成分である。
本発明は、セリン129でリン酸化されたアルファ−シヌクレイン(PS129アルファ−シヌクレイン)を検出する方法を提供し、この方法は、サンプルを、PS129アルファ−シヌクレインに優先的に結合する捕捉抗体及びアルファ−シヌクレインの残基40−55内のエピトープに特異的に結合するレポーター抗体と接触させるステップであって;サンプル中にPS129アルファ−シヌクレインが存在する場合、捕捉抗体及びレポーター抗体がPS129アルファ−シヌクレインに結合してサンドイッチ複合体を形成する、ステップ;及びステップ(a)においてPS129−アルファシヌクレインが存在する場合にPS129−アルファシヌクレインに結合するレポーター抗体を検出して、PS129アルファ−シヌクレインの存在又は非存在を示すステップを含む。
抗体が標的に「特異的に結合する」というフレーズは、他の生物製剤の異種集団の存在下で抗体の存在を決定する結合反応を指す。したがって、指定されたイムノアッセイ条件下で、特定の分子は特定の標的に優先的に結合し、サンプル中に存在する他の生物製剤には、顕著な量では結合しない。そのような条件下での標的への抗体の特異的結合には、抗体が標的に対するその特異性について選択されることが必要とされる。2つの実体間の特異的結合とは、少なくとも106、107、108、109又は1010M−1の親和性を意味する。108M−1より大きい親和性が好ましい。特異的結合が欠如していることは、無関係の対照抗体と区別できない標的への結合及び/又は106M−1未満の親和性を意味する。
本発明は、サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインを検出するための方法を提供する。PS129アルファ−シヌクレインが、典型的には、このようなサンプル中の全アルファ−シヌクレインのほんのわずかな部分しか構成しないため、ピコモル未満の高い検出感度が有利である。
本発明は、捕捉抗体及びレポーター抗体を使用してアルファ−シヌクレインを検出する方法を提供する。捕捉抗体は、非リン酸化完全長アルファ−シヌクレインよりも、残基129でリン酸化された完全長アルファ−シヌクレイン(PS129アルファ−シヌクレイン)に優先的に結合する。優先的結合とは、PS129アルファ−シヌクレインについての結合定数が、非リン酸化アルファ−シヌクレインについての結合定数よりも少なくとも5倍高いことを意味する。任意選択的に、PS129アルファ−シヌクレインについての結合定数は、非リン酸化アルファ−シヌクレインについての結合定数よりも少なくとも10倍高い。任意選択的に、抗体は、非リン酸化アルファ−シヌクレインへの特異的結合を欠く。11A5抗体は、適切な捕捉抗体の一例である。
基本的な抗体構造単位は、サブユニットのテトラマーを含むことが知られている。各テトラマーは、同一の2対のポリペプチド鎖から構成され、各対は、1つの「軽」鎖(約25kDa)及び1つの「重」鎖(約50−70kDa)を有する。各鎖のアミノ末端部分は、抗原認識に主として関与している約100〜110又はそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に主として関与している定常領域を規定する。
マウス又は他の非ヒト抗体は、従来のハイブリドーマ技術によって生成することができる。所望の結合特異性は、免疫原及び/又はスクリーニングアプローチの選択によって付与することができる。残基40と55との間のエピトープ特異性を備える抗体を作り出すために、これらの残基(すなわち、40−55)から成るアルファ−シヌクレインのフラグメント又はこれらの残基を完全長アルファ−シヌクレインまで含むより長いフラグメントを、免疫原として使用することができる。抗体は、上述のように重複ペプチドに結合することによって、スクリーニングすることができる。PS129アルファ−シヌクレインに優先的に結合する抗体を生成するために、完全長PS129アルファシヌクレイン又は残基129及びエピトープを構成するために十分な両側の残基(例えば、残基129を含む3−15の連続残基)を含むそのフラグメントを、免疫原として使用することができる。抗体は、非リン酸化アルファ−シヌクレインに対しての、PS129アルファ−シヌクレインへの優先的結合についてスクリーニングされる。
アルファ−シヌクレインに対するヒト抗体は、以下に説明される様々な技術によって提供される。ヒト抗体はまた、アルファ−シヌクレインのフラグメントのみを免疫原として使用することによって、及び/又はアルファ−シヌクレインの欠失変異体のコレクションに対する抗体をスクリーニングすることによって、特定のエピトープ特異性についてスクリーニングすることができる。ヒト抗体は好ましくは、アイソタイプ特異性ヒトIgG1を有する。トリオーマ法、Oestberg et al., Hybridoma 2:361-367 (1983);Oestbergの米国特許第4,634,664号;及びEnglemanらの米国特許第4,634,666号(これらのそれぞれは、参照によりその全体が全ての目的のために組み込まれる);例えば、Lonberg らのWO93/1222、米国特許第5,877,397号、米国特許第5,874,299号、米国特許第5,814,318号、米国特許第5,789,650号、米国特許第5,770,429号、米国特許第5,661,016号、米国特許第5,633,425号、米国特許第5,625,126号、米国特許第5,569,825号、米国特許第5,545,806号、Nature 148, 1547-1553 (1994)、Nature Biotechnology 14, 826 (1996)、KucherlapatiのWO91/10741(これらのそれぞれは、参照によりその全体が全ての目的のために組み込まれる)によって詳細に説明される、トランスジェニック非ヒト哺乳動物;及びファージディスプレイ法(例えば、DowerらのWO91/17271及びMcCaffertyらのWO92/01047、米国特許第5,877,218号、米国特許第5,871,907号、米国特許第5,858,657号、米国特許第5,837,242号、米国特許第5,733,743号及び米国特許第5,565,332号(これらのそれぞれは、参照によりその全体が全ての目的のために組み込まれる)を参照されたい)を含む、ヒト抗体を生成するためのいくつかの方法が利用可能である。
キメラ、ヒト化、又はヒト抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結することができる。定常領域の選択は、部分的に、抗体依存性補体及び/又は細胞介在性毒性が望ましいかどうかに依存する。例えば、アイソタイプIgG1及びIgG3は補体活性を有し、アイソタイプIgG2及びIgG4は有さない。アイソタイプの選択はまた、抗体の脳内への通過にも影響を及ぼす可能性がある。ヒトアイソタイプIgG1が好ましい。軽鎖定常領域はラムダ又はカッパである可能性がある。抗体は、2つの軽鎖及び2つの重鎖を含むテトラマーとして、別個の重鎖、軽鎖として、Fab、Fab'、F(ab')2、及びFvとして、又は重鎖及び軽鎖可変ドメインがスペーサを介して連結されている単一鎖抗体として、発現させることができる。
キメラ抗体、ヒト化抗体及びヒト抗体は典型的には、組換え発現によって生成される。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、天然に関連する又は異種のプロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換又は遺伝子導入することができるベクター中の真核プロモーターシステムである。ベクターが適切な宿主に組み込まれると、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベル発現、及び交差反応する抗体の回収及び精製に適切な条件下で維持される。
アルファ−シヌクレインはもともと、ADプラークの非ベータアミロイド成分(NAC)の前駆体タンパク質として、ヒト脳において同定された(Ueda et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90 (23):11282-11286 (1993))。アルファ−シヌクレインは、ADアミロイドの非Aβ成分の前駆体(NACP)とも呼ばれ、140アミノ酸のペプチドである。完全長アルファ−シヌクレインは、アミノ酸配列:
(配列番号:1)MDVFMKGLSKAKEGVVAAAEKTKQGVAEAAGKTKEGVLYVGSKTKEGVVH GVATVAEKTKEQVTNVGGAVVTGVTAVAQKTVEGAGSIAAATGFVKKDQL GKNEEGAPQEGILEDMPVDPDNEAYEMPSEEGYQDYEPEA(Ueda et al., Ibid.;GenBank受託番号:P37840)を有する。
アルファ−シヌクレインは、サンドイッチイムノアッセイによって検出することができる(米国特許第4,376,110号、第4,486,530号、第5,914,241号、及び第5,965,375号を参照されたい)。ここで、1つの抗体が固相に固定化され(捕捉抗体)、別の抗体が溶液中にある(レポーター抗体)。典型的には、レポーター抗体は、直接的に、又は抗イディオタイプ抗体などの二次標識化試薬を介して、標識される。捕捉抗体及びレポーター抗体は異なる結合特異性を有するため、両方がアルファ−シヌクレインに同時に結合することができる。捕捉抗体及びレポーター抗体は、順番に又は同時に、標的抗原と接触させることができる。捕捉抗体が最初に接触する場合、このアッセイは、フォワードアッセイであると呼ばれる。反対に、レポーター抗体が最初に接触する場合、このアッセイは、リバースアッセイであると呼ばれる。標的が両方の抗体に同時に接触する場合、このアッセイは、同時アッセイと呼ばれる。標的を抗体と接触させた後、サンプルを、ある期間(これは、約10分〜約24時間の範囲で変わることが可能であるが、典型的には約1−2時間である)インキュベートする。洗浄ステップを実施して、固相に特異的に結合していないサンプルの成分を除去することができる。捕捉抗体及びレポーター抗体が別個のステップで結合される場合、いずれか又は両方の結合ステップの後に洗浄を実施することができる。洗浄後、レポーター抗体を検出する。レポーター抗体は、捕捉抗体、PS129アルファ−シヌクレインレポーター抗体のサンドイッチ複合体の一部である間に、又はこのようなサンドイッチ複合体からの溶出後に、検出することができる。レポーター抗体は、直接的に、又はレポーター抗体に結合する二次標識抗体を介して間接的に、標識することができる。通常、捕捉抗体及びレポーター抗体の所与の対について、既知の濃度の標的抗原を含有するサンプルから検量線を作成する。次いで、試験されているサンプル中の抗原の濃度を、検量線から補間によって読み取る。平衡時の標識されたレポーター抗体結合の量から、又は平衡に達する前の一連の時点で結合した標識された溶液抗体からの反応速度測定によって、分析物を測定することができる。このような曲線の傾きは、サンプル中の標的の濃度の尺度である。代替的に、サンプル中のアルファ−シヌクレインへの結合からのレポーター抗体のシグナルを、対照サンプル中の既知の量のアルファ−シヌクレインへの結合からのレポーター抗体のシグナルと比較することによって、サンプル中のアルファ−シヌクレインの量を決定することができる。
A. 体液
患者サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインのインビボ検出は、レビー小体又はアルファ−シヌクレインの他の堆積物によって特徴付けられる疾患の診断及びモニタリングのために使用することができる。シクヌレイノパチー疾患は、パーキンソン病(PD)、レビー小体型認知症(DLB)、アルツハイマー病のレビー小体変異型(LBVAD)、多系統萎縮症(MSA)、脳鉄沈着を伴う神経変性症1型(NBIA−1)、びまん性レビー小体病(DLBD)、及びPDとアルツハイマー病(AD)を組み合わせたものを含む。適切な患者サンプルは、体液、例えば、血液、CSF、尿、及び腹腔液などを含む。シクヌレイノパチー疾患の存在は一般に、正常個体、すなわち、シクヌレイノパチー疾患を患っていない個体における平均値と比較して、(典型的には増加した)流体中の有意に変化したレベルのPS129アルファ−シヌクレインに関連する。レベルは、それが正常個体の集団における平均レベルから、少なくとも1標準偏差、及び好ましくは少なくとも2標準偏差だけ逸脱する場合、有意に変化している。いくつかの方法において、全アルファ−シヌクレイン又は非リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルもまた決定され、任意選択的に、リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルと、全アルファ−シヌクレイン又は非リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルとの間で、比率が計算される。このような比率は一般に、PS129アルファ−シヌクレインと同じ方向に変化する(すなわち、比率の増加は疾患の存在又はそれ以上の重症度を示す)。
PS129アルファ−シヌクレインのプロセシング、リン酸化及び分泌、並びにそれに対する潜在的薬剤の効果を分析するために、適切な細胞培養からの条件培地におけるPS129アルファ−シヌクレインのインビトロモニタリングを使用することができる。アルファ−シヌクレインのリン酸化のモニタリングは、それに関与しているホスホリラーゼを同定するための手段を提供する。PS129アルファ−シヌクレインのプロセシング及び/又は分泌を阻害する薬剤は、シクヌレイノパチー疾患の予防に潜在的に有用な薬理的活性を有する。典型的には、阻害活性は、試験薬剤で処理された細胞からの培地中のPS129アルファ−シヌクレインのレベルを、薬剤で処理していない同等の対照細胞と比較することによって決定する。
本発明の抗体及びそれらを検出するためのアッセイは、疾患のトランスジェニック動物モデルにおいて、PS129アルファ−シヌクレインの生成、リン酸化及びプロセシングをモニタリングするために使用することもできる。レビー小体疾患のトランスジェニック動物モデルは、Masliah, et al. Science 287:1265-1269 (2000);Masliah et al., PNAS USA 98:12245-12250 (2001)によって説明されている。アルファシヌクレインは、ヒトサンプルについて上述したような体液において、又は動物から直接採取した組織サンプルにおいて、分析することができる(参照により組み込まれる同時係属中の60/423,012号(2002年11月1日出願)を参照されたい)。組織サンプルは、レビー小体、微粒子画分及び可溶性画分として分類することができる。PS129アルファ−シヌクレインの形成を阻害する能力について薬剤をスクリーニングするために、単純なアッセイを細胞培養に関して実施することができる。典型的には、特に、薬剤で処理されたトランスジェニック動物の組織サンプル由来の体液又は画分中のPS129アルファ−シヌクレインのレベルを、薬剤で処理されていない対照トランスジェニック動物の同じ体液又は画分中のPS129アルファ−シヌクレインのレベルと比較することによって、阻害活性が決定される。阻害活性は、対照と比較した、処理された動物における、そのPS129アルファ−シヌクレインのレベルの減少によって示される。
本発明は、本発明の1又は複数の捕捉抗体及びレポーター抗体の対を含むキットをさらに提供する。いくつかのキットにおいて、捕捉抗体は、マイクロタイターディッシュなどの固相に予め固定化される。任意選択的に、抗イディオタイプ抗体などの標識化試薬もキットに含まれる。標識化はまた、測定された標識のレベルをアルファ−シヌクレインに対する抗体のレベルに相関させる、チャート又は他の対応規則を含み得る。用語ラベリング(labeling)は、キットの製造、輸送、販売又は使用中にいつでもキットに添付されている、又は他の方法でキットに付随する、任意の書面にされた又は記録された資料を指す。例えば、用語ラベリングは、広告チラシ及びパンフレット、包装材料、説明書、オーディオカセット又はビデオカセット、コンピュータディスク、及びキットに直接刻印された書面を包含する。キットは、例えば、研究試薬又は診断試薬として販売することができる。
11A5(JH22−11A5)エピトープAYEMP(ホスホ)SEEGYQ(Syn124−134)
4B12(panアルファ−syn)市販エピトープNEEGAP(Syn103−108)
MJFR1(panアルファ−syn)市販エピトープVDPDNE(Syn118−123)
23E8(JH19−23E8)エピトープVGSKTKEGVVHGVATV-GGC(Syn40−55)
1)PLK2(Carna Biosciences, Cat#05-158)
2)沸騰/アニオン交換法又は加熱なしで調製されるNiNTA/アニオン交換法を使用して調製された、組換え精製アルファ−シヌクレインE. coli発現タンパク質
3)10x PLK2反応バッファー(新鮮に調製された)
200mM トリス pH7.5
100mM MgCl2
10mM DTT
4)ATPストック(非常に限定された凍結解凍歴を有する)、10mM(New England BiolabsからのATP)
1)アルファ−シヌクレインを調製する。(1.25mg アルファ−シヌクレイン、<3.5mg/mLの濃度に調製された。)最終反応体積は0.5mLであった。
2)濃縮されたアルファ−シヌクレインをddH2Oにバッファー交換する。
3)反応を組み立てる。標準の0.5ml反応のための最終反応混合物:
1x PLK2バッファー
25μM ATP
1.25mg アルファ−シヌクレイン
5μg PLK2(1:250 キナーゼ:基質比率)
ddH2Oを0.5mLまで
4)一晩30℃でインキュベートする。
5)任意選択:翌朝、サンプルを沸騰させてキナーゼを沈殿させる(クロマトグラフィーステップが続く場合は不要。PLK2はホスホ−シヌクレインから分割される。)。
リン酸化シヌクレインをキナーゼ反応混合物から分割するために、以下の条件を使用した:1mL Q HP HiTrapカラム(GE Lifesciences)で遅い塩勾配、AKTA Purifier使用。以下の条件を使用して、タンパク質性の非リン酸化ピーク及びリン酸化ピーク、及びPLK2、並びに非タンパク質性のATP及びADPを分割した。
バッファーA:20mM トリス pH7.5
バッファーB:1M NaClを含む20mM トリス pH7.5
サンプル:ローディングバッファーで2:1に希釈された(すなわち、サンプルに2倍のサンプル体積が添加された)
流量:1ml/min
3CV バッファーAで洗浄
20% Bにステップし、3CVで洗浄
勾配:35CVにわたり、20−55% B
最初の実行では、より低い、より遅い勾配を実行して、分割が成功していることを確認してよい。
導電率による溶出ピーク:
ADP:16mS/cm
ATP:18.3mS/cm
非リン酸化シヌクレイン:25.7mS/cm
ホスホ−シヌクレイン:28.4mS/cm
o100μLの標準PS129アルファ−シヌクレイン+抗体11A5でコーティングされた100μLの磁性粒子(MP)を添加する
o120分25℃でインキュベートする
o磁気分離を使用して1回洗浄する
o20μLの検出抗体23E8を添加し、60分25℃でインキュベートする
o磁気分離を使用して4回洗浄する
o溶出バッファーを添加し、5−10分25℃でインキュベートする
o溶出液を、中和バッファーを含有する384ウェルプレートに移す
oErennaで384ウェルプレートを読み取る
Claims (38)
- セリン129でリン酸化されたアルファ−シヌクレイン(PS129アルファ−シヌクレイン)を検出する方法であって、
(a)サンプルを、PS129アルファ−シヌクレインに優先的に結合する捕捉抗体及びアルファ−シヌクレインの残基40−55内のエピトープに特異的に結合するレポーター抗体と接触させるステップであって;前記サンプル中にPS129アルファ−シヌクレインが存在する場合、前記捕捉抗体及びレポーター抗体が前記PS129アルファ−シヌクレインに結合してサンドイッチ複合体を形成する、ステップ;及び
(b)ステップ(a)において前記PS129−アルファシヌクレインが存在する場合に前記PS129−アルファシヌクレインに結合する前記レポーター抗体を検出して、前記PS129アルファ−シヌクレインの存在又は非存在を示すステップ
を含む、方法。 - 前記捕捉抗体が11A5であり、前記レポーター抗体が23E8である、請求項1に記載の方法。
- 前記捕捉抗体がリンカーを介して支持物に結合する、請求項1又は2に記載の方法。
- 前記レポーター抗体を検出する前に、前記サンドイッチ複合体から前記レポーター抗体を溶出するステップをさらに含む、請求項1〜3のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レポーター抗体が蛍光標識され、単一分子計数によって検出される、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルを前記捕捉抗体と接触させ、前記捕捉抗体がPS129アルファ−シヌクレインに結合し、PS129アルファ−シヌクレインに結合した前記捕捉抗体を前記サンプルの他の成分から分離して溶液中に再懸濁し、この溶液を前記レポーター抗体と接触させ、前記レポーター抗体が前記PS129アルファ−シヌクレインに結合して前記サンドイッチ複合体を形成し、前記サンドイッチ複合体を前記再懸濁溶液の他の成分から分離し、前記レポーター抗体を前記サンドイッチ複合体から溶出して検出する、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法。
- 定性的に実施される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 定量的に実施されて、前記PS129アルファ−シヌクレインの絶対量又は相対量を示す、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、0.1−1.0Mのグアニジンを含有する、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、0.5Mのグアニジンを含有する、請求項10に記載の方法。
- 前記接触ステップの前に、前記捕捉抗体を固相に結合させる、請求項1〜10のいずれか一項に記載の方法。
- 前記固相が磁気ビーズである、請求項1〜11のいずれか一項に記載の方法。
- 前記捕捉抗体を磁気ビーズに結合させ、磁場を印加することによって、この磁気ビーズを前記サンプルの残り又は再懸濁溶液から分離する、請求項12に記載の方法。
- 前記レポーター抗体からのシグナルを、既知の量のPS129アルファ−シヌクレインを含有する対照サンプル中の前記レポーター抗体からのシグナルと比較して、前記サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインの量を決定するステップをさらに含む、請求項1〜13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レポーター抗体からのシグナルを、PS129アルファ−シヌクレインの量に対するシグナルの検量線と比較して、前記サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインの量を決定するステップをさらに含む、請求項1〜14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レポーター抗体からのシグナルが、前記サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインの量に比例する、請求項1〜15のいずれか一項に記載の方法。
- 前記レポーター抗体を標識された抗体と接触させて、前記レポーター抗体の存在及びこれにより前記サンプル中のPS129アルファ−シヌクレインの存在を示すシグナルを生じるステップをさらに含む、請求項1〜16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプル中の全アルファ−シヌクレイン又は非リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルを決定し、リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルと全アルファ−シヌクレイン又は非リン酸化アルファ−シヌクレインのレベルとの比率を計算するステップをさらに含む、請求項1〜17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、0.1%のトリトンX−405を含むSingulex標準希釈剤で希釈される、請求項1〜18のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、ヒト由来のサンプルである、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、ヒトアルファ−シヌクレインを発現する導入遺伝子を有するトランスジェニックマウス由来である、請求項1〜19のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが体液である、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルがヒトの脳脊髄液(CSF)である、請求項22に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、0.1%のトリトンX−405を含むSingulex標準希釈剤で1:4に希釈される、請求項23に記載の方法。
- 500pg/mLまでで、シヌクレインモノマーとの交差反応性が存在しない、請求項1〜24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、<500ng/mLのヘモグロビンを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、200ng/mL〜500ng/mLのヘモグロビンを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記CSFサンプルが、<200ng/mLのヘモグロビンを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記サンプルが、ヒト又はトランスジェニック動物の脳ホモジネートである、請求項1〜21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記サンプルが、細胞を培養するのに使用される培地である、請求項1〜20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記細胞が組換えヒトアルファ−シヌクレインを発現する、請求項30に記載の方法。
- PS129アルファ−シヌクレインの存在を0.1pg/mLのレベルで検出する、請求項1〜31のいずれか一項に記載の方法。
- PS129アルファ−シヌクレインの存在を少なくとも0.4pg/mLのレベルで検出する、請求項24に記載の方法。
- PS129−アルファ−シヌクレインの存在が、前記サンプルが得られた被験体を、レビー小体疾患と診断するために使用される、請求項1〜20又は22〜33のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が被験体の集団に対して実施され、PS129−アルファシヌクレインが存在しない被験体よりも、大きい割合で、PS129アルファ−シヌクレインが存在する被験体が、その後、レビー小体疾患の治療を受ける、請求項1〜20又は22〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 前記方法が被験体の集団に対して実施され、PS129アルファ−シヌクレインのレベルが閾値未満である被験体よりも、大きい割合で、PS129アルファ−シヌクレインのレベルが閾値以上である被験体が、レビー小体疾患の治療を受ける、請求項1〜20又は22〜34のいずれか一項に記載の方法。
- 23E8(ATCC受託番号PTA−122711)のKabat CDRを含む、モノクローナル抗体。
- キメラ、ベニア化又はヒト化である、請求項37に記載のモノクローナル抗体。
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