JP2021050247A - 免疫チェックポイント阻害薬と併用するプリナブリンの使用 - Google Patents

Abstract

【課題】がん治療のためのプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を含む組成物を提供することを課題とする。【解決手段】がん治療のためのプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を含む組成物を見出した。またそれを必要とする対象にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することによるがんの治療方法を見出した。【選択図】図１Ａ

Description

関連技術
本願は、２０１５年２月１２日に出願された米国特許仮出願第６２／１１５，４６８号および２０１５年１１月１３日に出願された米国特許仮出願第６２／２５５，２５９号（これらの開示は全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする）の優先権を主張する。

技術分野
本発明は、化学および医薬の分野に関する。
より詳細には、本発明は、プリナブリン、プリナブリンを含む組成物、および治療におけるその使用に関する。

ヒトがんは、免疫系により強く認識されるネオ抗原を生成する多数の遺伝的およびエピジェネティックな変化を有する（Ｓｊｏｂｌｏｍら、２００６）。Ｔ細胞およびＢ細胞から成る適応免疫系は、多種多様な腫瘍抗原に応答する広い能力および極めて高い特異性を有する強力にがんを抑える可能性を有する。

近年のがん免疫療法の研究は、活性化エフェクター細胞の養子移植による抗腫瘍免疫、関連抗原に対する免疫化、サイトカインなどの非特異的免疫刺激薬の提供、または抗がんエフェクター細胞に対するインヒビターの除去を増強するアプローチに対して相当な努力に集中していた。特異的免疫チェックポイント阻害薬開発の努力が始まり、進行性メラノーマ患者の治療のため、サイトカインＴリンパ球抗原４（ＣＴＬＡ−４）と結合して阻害する抗体、イピリムマブの開発を含むがん治療のための新規免疫療法アプローチを得た（Ｈｏｄｉら、２０１０）。がんは大多数の患者にとって不治の病として残っているが、がん免疫療法で使用できる効果的な治療薬開発が特に必要である。

いくつかの実施形態は、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を含む医薬組成物に関する。

いくつかの実施形態は、それを必要とする対象にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することを含むがんの治療方法に関する。

図１Ａは、様々な濃度のプリナブリンおよびＬＰＳコントロールで治療した樹状細胞内のＤＣ成熟マーカーＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６、およびＭＨＣＩＩの発現を示す。 図１Ｂは、プリナブリンおよびＬＰＳで治療した樹状細胞内の生存率を示す。 図２Ａは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、またはコントロールで治療した樹状細胞内のＣＤ４０マーカーの発現を示す。 図２Ｂは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、またはコントロールで治療した樹状細胞内のＣＤ８０マーカーの発現を示す。 図２Ｃは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、またはコントロールで治療した樹状細胞内のＣＤ８６マーカーの発現を示す。 図２Ｄは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、またはコントロールで治療した樹状細胞内のＭＨＣＩＩマーカーの発現を示す。 図３Ａは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、およびコントロールで治療した樹状細胞内のＩＬ−１βの産生を示す。 図３Ｂは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、およびコントロールで治療した樹状細胞内のＩＬ−６マーカーの産生を示す。 図３Ｃは、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、およびコントロールで治療した樹状細胞内のＩＬ−１２ｐ４０の産生を示す。 図４Ａ〜４Ｃは、免疫担当マウスのＭＣ−３８腫瘍モデルにおけるＰＤ−１抗体＋ＣＴＬＡ−４抗体の抗腫瘍効果のプリナブリン誘導増強を示す。図４Ａは、腫瘍成長に対する効果を示す。 図４Ａ〜４Ｃは、免疫担当マウスのＭＣ−３８腫瘍モデルにおけるＰＤ−１抗体＋ＣＴＬＡ−４抗体の抗腫瘍効果のプリナブリン誘導増強を示す。図４Ｂは、剖検での平均腫瘍重量に対する効果を示す。 図４Ａ〜４Ｃは、免疫担当マウスのＭＣ−３８腫瘍モデルにおけるＰＤ−１抗体＋ＣＴＬＡ−４抗体の抗腫瘍効果のプリナブリン誘導増強を示す。図４Ｃは、腫瘍が開始体積の１０倍に達する時間を示す。 図５Ａ〜５Ｃは、実施例６に記載の試験から剖検における腫瘍の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析の結果を示す。図５Ａは、Ｔｒｅｇ細胞に対する効果を示す。 図５Ａ〜５Ｃは、実施例６に記載の試験から剖検における腫瘍の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析の結果を示す。図５Ｂは、Ｔｒｅｇ細胞に対するＣＤ８＋細胞の比を示す。 図５Ａ〜５Ｃは、実施例６に記載の試験から剖検における腫瘍の蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析の結果を示す。図５Ｃは、マクロファージに対する効果を示す。

プリナブリン、（３Ｚ，６Ｚ）−３−ベンジリデン−６−｛［５−（２−メチル−２−プロパニル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル］メチレン｝−２，５−ピペラジンジオンは、天然化合物フェニルアヒスチンの合成類似体である。プリナブリンを、米国特許第７，０６４，２０１号および同第７，９１９，４９７号（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられるものとする）に記載の方法および手順に従って容易に製造できる。いくつかの実施形態では、腫瘍特異抗原が樹状細胞により提示され免疫エフェクター細胞を刺激する場合、プリナブリンは効果的に抗原取り込みおよび樹状細胞のリンパ節への移動を促進できる。樹状細胞をプリナブリンに暴露することにより樹状細胞の成熟を誘導し、Ｔ細胞を刺激する能力を著しく増大できる。いくつかの実施形態では、プリナブリンは、腫瘍内微小環境の免疫調節により腫瘍サイズの減少を媒介して抗腫瘍免疫増強効果を促進できる。いくつかの実施形態では、プリナブリンを免疫チェックポイント阻害薬と併用する場合、かなりの治療相乗効果を達成できる。

いくつかの実施形態は、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性Ｔリンパ球抗原４）、ＰＤ−１（プログラム細胞死タンパク質１）、ＰＤ−Ｌ１（プログラム細胞死リガンド１）、ＰＤ−Ｌ２（プログラム細胞死リガンド２）、ＰＤ−Ｌ３（プログラム細胞死リガンド３）、ＰＤ−Ｌ４（プログラム細胞死リガンド４）、ＬＡＧ−３（リンパ球活性化遺伝子３）、およびＴＩＭ−３（Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチンタンパク質３）の阻害薬などの１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬と併用したプリナブリンの使用に関する。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−１の結合リガンドである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４の結合リガンドである。

ＰＤ−１は、活性化Ｔ細胞およびＢ細胞により発現された主要免疫チェックポイント受容体であり、免疫抑制を媒介する。ＰＤ−１は、受容体のＣＤ２８ファミリーのメンバーであり、ＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、ＩＣＯＳ、ＰＤ−１およびＢＴＬＡが挙げられる。本明細書で使用するとき、「ＰＤ−１」という語は、ヒトＰＤ−１（ｈＰＤ−１）、ｈＰＤ−１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つのｈＰＤ−１と共通のエピトープを有する類似体を包含する。

ＰＤ−１の様々な細胞表面糖タンパク質リガンドは、多くのヒトがんだけでなく抗原提示細胞上で発現されるＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ３およびＰＤ−Ｌ４を含み同定され、Ｔ細胞活性化およびＰＤ−１との結合の際にサイトカイン分泌を下方制御することが分かった。本明細書で使用するとき、「ＰＤ−Ｌ１」という語は、ヒトＰＤ−Ｌ１（ｈＰＤ−Ｌ１）、ｈＰＤ−Ｌ１の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つのｈＰＤ−Ｌ１と共通のエピトープを有する類似体を包含する。本明細書で使用するとき、「ＰＤ−Ｌ２」という語は、ヒトＰＤ−Ｌ２（ｈＰＤ−Ｌ２）、ｈＰＤ−Ｌ２の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つのｈＰＤ−Ｌ２と共通のエピトープを有する類似体を包含する。本明細書で使用するとき、「ＰＤ−Ｌ３」という語は、ヒトＰＤ−Ｌ３（ｈＰＤ−Ｌ３）、ｈＰＤ−Ｌ３の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つのｈＰＤ−Ｌ３と共通のエピトープを有する類似体を包含する。本明細書で使用するとき、「ＰＤ−Ｌ４」という語は、ヒトＰＤ−Ｌ４（ｈＰＤ−Ｌ４）、ｈＰＤ−Ｌ４の変異体、アイソフォーム、および種ホモログ、ならびに少なくとも１つのｈＰＤ−Ｌ４と共通のエピトープを有する類似体を包含する。

ＣＴＬＡ−４（細胞傷害性Ｔリンパ球関連タンパク質４）は、免疫チェックポイントとして機能して免疫系を下方制御するタンパク質受容体である。ＣＴＬＡ−４は、Ｔ細胞表面で見られ、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーでもあり；ＣＴＬＡ−４は単一細胞外Ｉｇドメインを含む。ＣＴＬＡ−４転写物が、ＣＴＬＡ−４が細胞溶解反応で機能し得ることを示唆する細胞障害活性を有するＴ細胞集団内で発見された。

定義
別段の定義がない限り、本明細書で使用する全技術および科学用語は、本開示に属する分野の当業者により共通に理解されるのと同じ意味を有する。
全特許、出願、公開された出願、および他の出版物は、その全文を参照することにより組み入れられる。本明細書の用語の複数の定義がある場合、特に指定されない限り、本節中のものが適用される。

「薬剤的に許容可能な担体」または「薬剤的に許容可能な賦形剤」という語は、いずれかおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を包含する。医薬作用物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は当分野で周知である。従来の媒体または薬剤が有効成分と相溶性がない場合を除き、治療組成物での使用が期待される。加えて、当分野で共通に仕様されるような様々なアジュバントを含有してもよい。医薬組成物中への様々な成分の含有についての考察は、例えば、Gilman et al. (Eds.) (1990); Goodman and Gilman’s: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載されている。薬剤的に許容可能な賦形剤は、単糖または単糖誘導体であり得る。

本明細書で使用するとき、「対象」は、ヒトまたは非ヒト哺乳類、例えば、イヌ、ネコ、マウス、ラット、雌ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、非ヒト霊長類または鳥類、例えば、ニ
ワトリ、ならびにその他の脊椎動物または無脊椎動物を意味する。

「哺乳類」という語は、その通常の生物学上の意味で使用される。従って、詳細には、サル（チンパンジー、類人猿、サル）を含む霊長類およびヒト、ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、ウサギ、イヌ、ネコ、げっ歯類、ラット、マウス、モルモット等が挙げられるが、これに限定されない。

本明細書で使用するとき、「効果量」または「治療効果量」は、疾病もしくは病状の１つ以上の徴候をある程度軽減する、またはその発症の可能性を減らす効果がある治療薬の量を表す。

本明細書で使用するとき、「治療する」、「治療」、または「治療すること」は、予防および／または治療目的のために対象に化合物または医薬組成物を投与することを表す。「予防的治療」という語は、疾病もしくは病状の徴候をまだ示していないが特定の疾病もしくは病状に罹患し易い、さもなければそのリスクがある対象を治療して、それにより、治療が、患者が該疾病もしくは病状にかかる可能性を減らすことを表す。「治療処置」という語は、既に疾病または病状に罹患している対象に投与治療を表す。

本明細書で使用するとき、「化学療法薬」は、腫瘍性疾患の対象の腫瘍転移もしくは腫瘍の成長を減少、予防、緩和、制限、および／または遅延する医薬的効果量で、腫瘍のネクローシスもしくはアポトーシスまたは他の機序により、腫瘍転移もしくは腫瘍の成長を減少、予防、緩和、制限、および／または遅延する、または腫瘍細胞を直接殺す薬剤、または別の方法で使用できる薬剤を表す。化学療法薬としては、例えば、フルオロピリミジン；ピリミジンヌクレオシド；プリンヌクレオシド；葉酸代謝拮抗薬、白金系薬；アントラサイクリン／アントラセンジオン；エピポドフィロトキシン；カンプトセシン；ホルモン；ホルモン複合体；抗ホルモン薬；酵素、タンパク質、ペプチドおよびポリクローナルおよび／またはモノクローナル抗体；ビンカアルカロイド；タキサン；エポチロン；微小管阻害薬；アルキル化薬；代謝拮抗薬；トポイソメラーゼ阻害薬；抗ウイルス薬；および様々な他の細胞傷害性薬物および細胞分裂阻害薬が挙げられるが、これに限定されない。

投与および医薬組成物
いくつかの実施形態は、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を含む医薬組成物に関する。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ３、ＰＤ−Ｌ４、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲまたはＴＩＭ３の阻害薬である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−１阻害薬である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ１の結合リガンドである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ１阻害薬である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ２阻害薬またはＰＤ−Ｌ１／ＰＤ−Ｌ２複合阻害薬である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４阻害薬である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、第一免疫チェックポイント阻害薬および第二免疫チェックポイント阻害薬を含み、第一免疫チェックポイント阻害薬は、第二免疫チェックポイント阻害薬と異なる。いくつかの実施形態では、第一および第二免疫チェックポイント阻害薬は、独立して、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ３、ＰＤ−Ｌ４、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲまたはＴＩＭ３の阻害薬である。いくつかの実施形態では、第一免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−１阻害薬であり、第二免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４阻害薬である。
いくつかの実施形態では、第一免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ１阻害薬であり、第二免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４阻害薬である。いくつかの実施形態では、第一免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ２阻害薬であり、第二免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４阻害薬である。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、Ｔ細胞調節機能を阻害できる低分子ペプチド薬であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、Ｔ細胞調節機能を阻害できる低分子（例えば、５００ダルトン未満）であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、Ｔ細胞活性化の同時刺激を提供する分子であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ナチュラルキラー細胞活性化の同時刺激を提供する分子であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、抗体であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−１抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ１抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ２抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ３抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＰＤ−Ｌ４抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４抗体である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ＣＴＬＡ−４、ＬＡＧ３、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ４、ＫＩＲ、またはＴＩＭ３の抗体である。

抗体を、α−ＣＤ３−ＡＰＣ、α−ＣＤ３−ＡＰＣ−Ｈ７、α−ＣＤ４−ＥＣＤ、α−ＣＤ４−ＰＢ、α−ＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ−８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、α−ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、α−ＣＤ１１ｂ−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ１１ｂ−ＡＦ７００、α−ＣＤ１４−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ１６−ＰＢ、α−ＣＤ１９−ＡＦ７８０、α−ＣＤ１９−ＡＦ７００、α−ＣＤ２０−ＰＯ、α−ＣＤ２５−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ４０−ＡＰＣ、α−ＣＤ４５−ビオチン、ストレプトアビジン−ＢＶ６０５、α−ＣＤ６２Ｌ−ＥＣＤ、α−ＣＤ６９−ＡＰＣ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８０−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ８３−ビオチン、ストレプトアビジン−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ、α−ＣＤ１２３−ＰＥ、α−ＣＤ１５４−ＰＥ、α−ＣＤ１６１−ＰＥ、α−ＣＴＬＡ４−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＦｏｘＰ３−ＡＦ４８８（クローン ２５９Ｄ）、ＩｇＧ１−アイソタイプ−ＡＦ４８８、α−ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）−ＰＥ、α−ＨＬＡ−Ａ２−ＰＥ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰＢ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、α−ＰＤ１−ＡＰＣ、ＶＩＳＴＡ、共刺激分子ＯＸ４０、およびＣＤ１３７から選択できる。

様々な抗体（Ａｂｓ）を、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２、ＰＤ−Ｌ３またはＰＤ−Ｌ４と結合する高親和性を有する抗体を含む本明細書に記載の組成物中で使用できる。高親和性でＰＤ−１と特異的に結合する（例えば、ヒトＰＤ−１と結合し、カニクイザルなどの他の種からのＰＤ−１と交差反応し得る）ヒトｍＡｂｓ（ＨｕＭＡｂｓ）は、米国特許第８，００８，４４９号（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に開示されている。高親和性でＰＤ−Ｌ１と特異的に結合するＨｕＭＡｂｓは、米国特許第７，９４３，７４３号（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に開示されている。他の抗ＰＤ−１ ｍＡｂｓは、例えば、米国特許第６，８０８，７１０号、同第７，４８８，８０２号および同第８，１６８，７５７号ならびにＰＣＴ国際公開第２０１２／１４５４９３号（これら全てはその全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載されている。抗ＰＤ−Ｌ１ ｍＡｂｓは、例えば、米国特許第７，６３５，７５７号および同第８，２１７，１４９号、米国特許出願公開第２００９／０３１７３６８号およびＰＣＴ国際公開第２０１１／０６６３８９号および国際公開第２０１２／１４５４９号（これら全てはその全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載されている。

いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１ ＨｕＭＡｂｓを、１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４（本明細書中、ニボルマブとも呼ぶ）、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４から選択でき、これら全ては米国特許第８，００８，４４９号に記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＰＤ−１ ＨｕＭＡｂｓを、３Ｇ１０、１２Ａ４（本明細書中、ＢＭＳ−９３６５５９とも呼ぶ）、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７、および１３Ｇ４から選択でき、これら全ては米国特許第７，９４３，７４３号に記載されている。

いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の薬剤的に許容可能な希釈剤をさらに含むことができる。いくつかの実施形態では、薬剤的に許容可能な希釈剤は、コリフォール（Kolliphor）ＨＳ１５（登録商標）（ポリオキシル（１５）−ヒドロキシステアレート）を含むことができる。いくつかの実施形態では、薬剤的に許容可能な希釈剤は、プロピレングリコールを含むことができる。いくつかの実施形態では、薬剤的に許容可能な希釈剤は、コリフォールおよびプロピレングリコールを含むことができる。いくつかの実施形態では、薬剤的に許容可能な希釈剤は、コリフォールおよびプロピレングリコールを含むことができ、希釈剤の総重量に対して、コリフォールは約４０重量％であり、プロピレングリコールは約６０重量％である。いくつかの実施形態では、組成物は、１つ以上の他の薬剤的に許容可能な賦形剤をさらに含むことができる。

標準的製剤処方技術を、Remington's The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott Williams & Wilkins (2005)（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載のものなど、本明細書に記載の医薬組成物を製造するために使用できる。従って、いくつかの実施形態は、（ａ）プリナブリンまたはその薬剤的に許容可能な塩の安全かつ治療効果のある量；（ｂ）免疫チェックポイント阻害薬および（ｃ）薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤またはその組合せを含む医薬組成物を含む。

他の実施形態は、別々の組成物中のプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬の同時投与を含む。従って、いくつかの実施形態は、（ａ）プリナブリンまたはその薬剤的に許容可能な塩の安全かつ治療効果のある量および（ｂ）薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤またはその組合せを含む第一医薬組成物；ならびに（ａ）１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬および（ｂ）薬剤的に許容可能な担体、希釈剤、賦形剤またはその組合せを含む第二医薬組成物を含む。

本明細書に記載の医薬組成物の投与は、これに限定されないが、経口、舌下、口腔、皮下、静脈内、鼻腔内、局所、経皮、皮内、腹腔内、筋肉内、肺内、腟内、直腸内、または眼内を含む同様な有用性を果たす薬剤の投与の許容された方法のいずれでもよい。経口および非経口投与は、好ましい実施形態の対象である徴候を治療する際にお決まりのことである。

「薬剤的に許容可能な担体」または「薬剤的に許容可能な賦形剤」という語は、いずれかおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤等を包含する。医薬作用物質のためのこのような媒体および薬剤の使用は当分野で周知である。従来の媒体または薬剤が有効成分と相溶性がない場合を除き、治療組成物での使用が期待される。加えて、当分野で共通に仕様されるような様々なアジュバントを含有してもよい。医薬組成物中への様々な成分の含有についての考察は、例えば、Gilman et al. (Eds.) (1990); Goodman and Gilman’s: The Pharmacological Basis of Therapeutics, 8th Ed., Pergamon Press（その全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載されている。

薬剤的に許容可能な担体またはその成分の役割ができる物質のいくつかの例は、ラクト
ース、グルコースおよびショ糖などの糖類；トウモロコシデンプンおよびジャガイモデンプンなどのデンプン類；カルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロース、およびメチルセルロースなどのセルロースおよびその誘導体；トラガント末；麦芽；ゼラチン；タルク；ステアリン酸およびステアリン酸マグネシウムなどの固形潤滑剤；硫酸カルシウム；ピーナッツ油、綿実油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油およびカカオ油などの植物油；プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、マンニトールおよびポリエチレングリコールなどのポリオール類；アルギン酸；ツイーンなどの乳化剤；ラウリル硫酸ナトリウムなどの湿潤剤；着色剤；香味料；打錠薬剤、安定剤；酸化防止剤；防腐剤；発熱物質なしの水；等張食塩水；およびリン酸緩衝液である。

本明細書に記載の組成物を好ましくは単位剤形で提供する。本明細書で使用するとき、「単位剤形」は、適正な医療行為に従って、１回の投与で動物、好ましくは哺乳類対象に投与するのに適切な化合物または組成物の量を含有する組成物である。しかしながら、１回または単位剤形の製剤は、該剤形を１日１回または治療過程当たり１回投与することを意味しない。このような剤形は、１日１回、２回、３回またはそれ以上投与されると考えられ、ある期間（例えば、約３０分から約２〜６時間まで）にわたって点滴で投与してもよく、または持続点滴として投与してもよく、１回の投与を特に除外しないが、治療過程中に１回より多く与えられてもよい。製剤形態は治療全過程を特に予期するものではなく、このような決定は製剤形態よりむしろ治療の当業者に委ねられると当業者は認識するだろう。

上記有用な組成物は、様々な投与経路、例えば、経口、舌下、口腔、鼻腔、直腸、局所（経皮および皮内を含む）、眼、脳内、頭蓋内、くも膜下腔内、動脈内、静脈内、筋肉内、または他の非経口投与経路用に適切な形態のいずれでもよい。経口および鼻腔用組成物は、吸入により投与され、利用可能な方法により製造される組成物を含むと当業者は認識するだろう。所望の特定の投与経路に応じて、当分野で周知の様々な薬剤的に許容可能な担体を使用してもよい。薬剤的に許容可能な担体としては、例えば、固形または液体充填剤、希釈剤、ヒドロトロピー、界面活性剤、およびカプセル化物質が挙げられる。必要に応じて、化合物または組成物の阻害活性と実質的に干渉しない医薬活性物質を含有してもよい。化合物または組成物と共に使用する担体の量は、化合物の単位用量当たり投与する物質の実用量を提供するのに充分なものである。本明細書に記載の方法で有用な剤形を製剤化するための技術および組成物は、以下の参考文献（全て参照により本明細書に組み入れられる）に記載されている：Modern Pharmaceutics, 4th Ed., Chapters 9 and 10 (Banker & Rhodes, editors, 2002); Lieberman et al., Pharmaceutical Dosage Forms：Tablets (1989); and Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms 8th Edition
(2004)。

錠剤、カプセル剤（例えば、固体ゲルカプセルおよび液体ゲルカプセル）、顆粒剤および混合散剤などの固体形態を含む様々な経口用剤形を使用できる。適切な結合剤、潤滑剤、希釈剤、崩壊剤、着色剤、香味料、流動誘導剤、および溶融剤を含み、圧縮錠剤、粉薬錠剤、腸溶錠剤、糖衣錠剤、フィルムコート錠剤、または多重圧縮錠剤であり得る。液体経口用剤形としては、適切な溶媒、防腐剤、乳化剤、懸濁剤、希釈剤、甘味料、溶融剤、着色剤および香味料を含有する、水性液剤、乳剤、懸濁剤、非発泡性顆粒剤から再構成した液剤および／または懸濁剤、ならびに発泡性顆粒剤から再構成した発泡性製剤が挙げられる。

経口投与用単位剤形の製剤に適切な薬剤的に許容可能な担体は、当分野で周知である。錠剤は、通常、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、マンニトール、ラクトースおよびセルロースなどの不活性希釈剤；デンプン、ゼラチンおよびショ糖などの結合剤；デンプン、アルギン酸およびクロスカルメロースなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステア
リン酸およびタルクなどの潤滑剤として従来の薬剤的に適合するアジュバントを含む。二酸化ケイ素などの流動促進剤を使用して、粉末混合物の流動特性を改良できる。ＦＤ＆Ｃ染料などの着色剤を外観のために使用できる。アスパルテーム、サッカリン、メントール、ペパーミント、および果実フレーバーなどの甘味料および香料はチュアブル錠用に有用なアジュバントである。カプセル剤は、通常、上記に開示の１つ以上の固体希釈剤を含む。担体成分の選択は、味、費用、および保存性など、重要でない二次的考察に依存し、当業者により容易に製造できる。

経口用組成物としては、液剤、乳剤、懸濁剤等も挙げられる。このような組成物の製剤に適切な薬剤的に許容可能な担体は、当分野で周知である。シロップ剤、エリキシル剤、乳剤および懸濁剤用担体の典型的成分としては、エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液状ショ糖、ソルビトールおよび水が挙げられる。懸濁剤のため、典型的懸濁剤としては、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ＡＶＩＣＥＬ ＲＣ−５９１、トラガントおよびアルギン酸ナトリウムが挙げられ；典型的に、湿潤剤としては、レクチンおよびポリソルベート８０が挙げられ；典型的防腐剤としては、メチルパラベンおよび安息香酸ナトリウムが挙げられる。経口用液体組成物は、上記開示の甘味料、香料および着色剤などの１つ以上の成分を含有してもよい。

このような組成物を、対象組成物が所望の局所用途の近傍の胃腸管内で、または所望の作用が広がる様々な時間において放出されるように、通常、ｐＨまたは時間依存性コーティングを用いた従来方法によりコーティングしてもよい。このような剤形としては、典型的には、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、エチルセルロース、オイドラギットコーティング、ワックスおよびシェラックの１つ以上が挙げられるが、これに限定されない。

本明細書に記載の組成物は、必要に応じて他の薬効成分を含んでもよい。

対象化合物の全身送達を達成するために有用な他の組成物としては、舌下、口腔および鼻腔用剤形が挙げられる。このような組成物は、典型的には、ショ糖、ソルビトールおよびマンニトールなどの可溶充填物質；およびアカシア、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースおよびヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの結合剤の１つ以上を含む。上記開示の流動促進剤、潤滑剤、甘味料、着色料、酸化防止剤および香料も含んでもよい。

局所用眼科用途に処方された液体組成物を、眼に局所投与できるように製剤する。時々、製剤検討（例えば、薬剤安定性）があまり最適な快適さを必要としなくてもよいが、快適さを可能な限り最大化してもよい。快適さが最大化できない場合、局所眼科用途の患者に受け入れられるように液体を製剤してもよい。加えて、眼科的に許容可能な液体を、１回使用用に包装してもよく、あるいは複数回の使用にわたって汚染を防止するために防腐剤を含有してもよい。

眼科用途のため、主要な媒体として生理食塩水を用いて、液剤または薬剤をしばしば製剤する。好ましくは、眼科用液剤を適切な緩衝系を用いて快適なｐＨに維持してもよい。製剤は、従来の薬剤的に許容可能な防腐剤、安定剤および界面活性剤も含有してもよい。

本明細書に開示の医薬組成物中に使用してもよい防腐剤としては、塩化ベンザルコニウム、ＰＨＭＢ、クロロブタノール、チメロサール、酢酸フェニル水銀、および硝酸フェニル水銀が挙げられるが、これに限定されない。有用な界面活性剤は、例えば、ツイーン８０である。同様に、様々な有用な媒体を、本明細書に開示の眼科用製剤で使用してもよい。これらの媒体としては、ポリビニルアルコール、ポビドン、ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、ポロキサマー、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよび精製水が挙げられるが、これに限定されない。

等張調整剤を必要に応じてまたは都合に応じて添加してもよい。等張調整剤としては、塩、特に、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールおよびグリセリン、または他の適切な眼科的に許容可能な等張調整剤が挙げられるが、これに限定されない。

得られた製剤が眼科的に許容可能である限り、様々な緩衝液およびｐＨを調節するための手段を使用してもよい。多くの組成物のため、ｐＨは、４〜９であるだろう。従って、緩衝液としては、酢酸緩衝液、クエン酸緩衝液、リン酸緩衝液およびホウ酸緩衝液が挙げられる。酸または塩基を使用して、必要に応じて、これらの製剤のｐＨを調節してもよい。

眼科的に許容可能な酸化防止剤としては、メタ重亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、アセチルシステイン、ブチル化ヒドロキシアニソールおよびブチル化ヒドロキシトルエンが挙げられるが、これに限定されない。

眼科用製剤に含有してもよい他の賦形剤成分は、キレート剤である。他のキレート剤も代わりにまたはこれと共に使用してもよいが、有用なキレート剤はエデト酸二ナトリウムである。

局所用途のため、本明細書に開示の組成物を含有するクリーム剤、軟膏剤、ゲル剤液剤または懸濁剤、他を使用する。局所用製剤は、概して、医薬用担体、共溶媒、乳化剤、浸透促進剤、防腐剤系、および皮膚軟化薬から成り得る。

静脈内投与のため、本明細書に記載の組成物を、食塩水またはブドウ糖液などの薬剤的に許容可能な希釈剤中に溶解または分散してもよい。適切な賦形剤を含有して、所望のｐＨを達成してもよく、ＮａＯＨ、炭酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ＨＣｌ、およびクエン酸が挙げられるが、これに限定されない。様々な実施形態では、最終組成物のｐＨは、２〜８、または好ましくは４〜７の範囲である。酸化防止賦形剤としては、亜硫酸水素ナトリウム、アセトン−重亜硫酸ナトリウム、ホルムアルデヒドスルホキシル酸ナトリウム、チオ尿素、およびＥＤＴＡが挙げられ得る。最終静脈内組成物中に見られる適切な賦形剤の他の非限定的な例としては、リン酸ナトリウムまたはカリウム、クエン酸、酒石酸、ゼラチン、およびブドウ糖、マンニトール、およびデキストランなどの炭水化物が挙げられ得る。さらに許容可能な賦形剤は、Powell, et al., Compendium of Excipients for Parenteral Formulations, PDA J Pharm Sci and Tech 1998, 52 238-311 および Nema et
al., Excipients and Their Role in Approved Injectable Products: Current Usage and Future Directions, PDA J Pharm Sci and Tech 2011, 65 287-332（これら両方ともその全文を参照することにより本明細書に組み入れられる）に記載されている。抗菌剤を含有して、静菌性または静真菌性溶液を達成してもよく、硝酸フェニル水銀、チメロサール、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、フェノール、クレゾール、およびクロロブタノールが挙げられるが、これに限定されない。

静脈内投与用組成物を、投与前に短時間で滅菌水、食塩水またはブドウ糖水溶液などの適切な希釈剤で再構成するもう１つの固体の形態で介護者に提供してもよい。他の実施形態では、組成物をすぐに非経口投与できる液剤で提供する。さらに他の実施形態では、組成物を投与前にさらに希釈する液剤で提供する。本明細書に記載の組成物および別の薬剤の組合せを投与することを含む実施形態では、この組合せを混合物として介護者に提供してもよく、または介護者が投与前に２つの薬剤を混合してもよく、２つの薬剤を別々に投与してもよい。

本明細書に記載の活性化合物の実際の用量は具体的な化合物、および治療する病状に依存し；適切な用量の選択は当業者の知見の範囲内である。いくつかの実施形態では、プリナブリンの毎日の用量は、約０．２５ｍｇ／体重ｋｇ〜約１２０ｍｇ／体重ｋｇ以上、約０．５ｍｇ／体重ｋｇ以下〜約７０ｍｇ／体重ｋｇ、約１．０ｍｇ／体重ｋｇ〜約５０ｍｇ／体重ｋｇ、または約１．５ｍｇ／体重ｋｇ〜約１０ｍｇ／体重ｋｇであり得る。従って、７０ｋｇの人に投与するため、投与範囲は、約１７ｍｇ／日〜約８０００ｍｇ／日、約３５ｍｇ／日以下〜約７０００ｍｇ／日以上、約７０ｍｇ／日〜約６０００ｍｇ／日、約１００ｍｇ／日〜約５０００ｍｇ／日、または約２００ｍｇ／日〜約３０００ｍｇ／日であろう。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物を、他の治療薬と併用して使用できる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物を、化学療法、放射線療法、および生物学的療法などの治療と組み合わせて投与または使用できる。

治療方法
いくつかの実施形態は、本明細書に記載の医薬組成物を用いた、それを必要とする対象に対するがんの治療方法に関する。いくつかの実施形態は、それを必要とする対象にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することを含むがんの治療方法に関する。いくつかの実施形態は、対象は動物、例えば、哺乳類、ヒトであり得る。いくつかの実施形態では、対象はヒトである。

いくつかの実施形態は、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することによるがんに対するＴ細胞活性化の同時刺激を提供する方法に関する。いくつかの実施形態は、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することによるがんに対するナチュラルキラー細胞の同時刺激を提供する方法に関する。

いくつかの実施形態では、がんは、ＰＤ−１の結合リガンドを発現するがん細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１の結合リガンドはＰＤ−Ｌ１である。いくつかの実施形態では、ＰＤ−１の結合リガンドはＰＤ−Ｌ２である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、ＰＤ−１の結合リガンドを発現するがん細胞を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、ＰＤ−Ｌ１を発現するがん細胞を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、ＰＤ−Ｌ２を発現するがん細胞を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、ＰＤ−Ｌ３またはＰＤ−Ｌ４を発現するがん細胞を同定することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、ＰＤ−１の結合リガンドを発現するがん細胞の同定は、結合リガンドの存在を検出するアッセイを使用することを含む。適用できるアッセイの例としては、Ｄａｋｏ社から入手可能なＰＤ−Ｌ１ ＩＨＣ ２２Ｃ３ ｐｈａｒｍＤｘキットおよびＰＤ−Ｌ１ ＩＨＣ ２８−８ ｐｈａｒｍＤｘが挙げられるが、これに限定されない。

いくつかの実施形態では、がんは、ＣＴＬＡ−４の結合リガンドを発現するがん細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＣＴＬＡ−４の結合リガンドはＢ７．１またはＢ７．２である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、ＣＴＬＡ−４の結合リガンドを発現するがん細胞を同定することをさらに含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載のがんの治療方法は、Ｂ７．１またはＢ７．２を発現するがん細胞を同定することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント阻害薬は、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、イピリムマブ、ダカルバジン、ＢＭＳ ９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはそのいずれかの組合せである。

いくつかの実施形態では、がんは、頭頚部がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵がん、前立腺がん、乳がん、 腎がん、膀胱がん、卵巣がん、子宮頚がん、メラノーマ、グリオブラストーマ、骨髄腫、リンパ腫、または白血病である。いくつかの実施形態では、がんは、腎細胞がん、悪性黒色腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、ホジキンリンパ腫または扁平上皮がんである。いくつかの実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、直腸がん、肺がん、前立腺がん、メラノーマ、白血病、卵巣がん、胃がん、腎細胞がん、肝がん、膵がん、リンパ腫および骨髄腫から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍または血液がんである。

いくつかの実施形態では、がんは、検出レベルで、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２を発現するいずれもの細胞を有しない。

いくつかの実施形態では、がんは、乳がん、結腸がん、直腸がん、肺がん、前立腺がん、メラノーマ、白血病、卵巣がん、胃がん、腎細胞がん、肝がん、膵がん、リンパ腫および骨髄腫から選択される。いくつかの実施形態では、がんは、固形腫瘍または血液がんである。

いくつかの実施形態は、がん患者にプリナブリンを含む組成物を投与することを含むがん患者中の樹状細胞成熟の誘導方法に関する。

いくつかの実施形態は、プリナブリン化合物および１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を対象に同時投与することを含み対象中のがん関連腫瘍血管系の破壊方法に関する。

様々ながんを腫瘍血管系の形成に関連付ける。いくつかの実施形態では、がんは、メラノーマ、膵がん、結腸直腸腺癌、脳腫瘍、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、ホルモン不応性転移性前立腺がん、転移性乳がん、非小細胞肺がん、腎細胞がん、頭頚部がん、前立腺がん、結腸がん、組織非形成性甲状腺がんから成る群から選択される。

いくつかの実施形態は、本明細書に記載の組成物、および／または医薬組成物を追加の薬物と一緒に同時投与することを含む。例えば、上記のように、いくつかの実施形態は、プリナブリンを１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬と同時投与することを含む。「同時投与」は、１つ以上の薬剤の投与が、いつまたは如何に実際に投与するかに関わらず、１つ以上の他の薬剤の有効性および／または安全性に対する効果を有するように、２つ以上の薬剤を投与することを意味する。１つの実施形態では、薬剤を同時に投与する。１つのこのような実施形態では、１つの剤形で薬剤を組み合わせることにより組合せ投与を行う。別の実施形態では、薬剤を逐次投与する。１つの実施形態では、経口または静脈内など同じ経路により薬剤を投与する。別の実施形態では、１つは経口投与し、もう１つは静脈内投与するなど異なる経路により薬剤を投与する。いくつかの実施形態では、１つ以上の薬剤の投与と同時投与される１つ以上の薬剤の投与との間の時間は、約１時間、２時間、３時間、５時間、８時間、１０時間、１２時間、１５時間、１８時間、２０時間、２４時間、３６時間、４８時間、３日、４日、５日、６日、７日、１０日、１４日、２１日、
２８日、または３０日であり得る。

いくつかの実施形態では、治療サイクルは、プリナブリン単独の投与または１つ以上のチェックポイント阻害薬単独の投与と組み合わせて、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与することを含むことができる。いくつかの実施形態では、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を、１日目に同時投与し、次いで、１日目、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、２週目、または３週目後に単独にプリナブリンを投与してから、次いで、１日後、２日後、３日後、４日後、５日後、６日後、７日後、２週間後、または３週間後、プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬の同時投与する。いくつかの実施形態では、１日目にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時に投与し、次いで、２日目〜３１日目から選択される日にプリナブリンまたは１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬単独を投与してから、３日目〜３１日目から選択される日にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与する。いくつかの実施形態では、１日目にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与し、次いで、８日目にプリナブリン単独を投与してから、１５日目にプリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を同時投与する。いくつかの実施形態では、治療サイクルを２回以上反復できる。

追加の薬物の例としては、他の化学療法薬が挙げられる。

いくつかの実施形態では、化学療法薬を、アビラテロン酢酸エステル、アビトレキサート（Abitrexate）（メトトレキサート）、アブラキサン（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ＡＢＶＤ、ＡＢＶＥ、ＡＢＶＥ−ＰＣ、ＡＣ、ＡＣ−Ｔ、アドセトリス（ブレンツキシマブベドチン）、ＡＤＥ、Ａｄｏ−トラスツズマブエムタンシン、アドリアマイシン（ドキソルビシン塩酸塩）、アファチニブ二マレイン酸塩、アフィニトール（エベロリムス）、アキンゼオ（ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩）、アルダラ（イミキモド）、アルデスロイキン、アレセンサ（アレクチニブ）、アレクチニブ、アレムツズマブ、アリムタ（ペメトレキセド二ナトリウム）、アロキシ（パロノセトロン塩酸塩）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アンボクロリン（クロラムブシル）、アミノレブリン酸、アナストロゾール、アプレピタント、アレディア（パミドロン酸二ナトリウム）、アリミデックス（アナストロゾール）、アロマシン（エキセメスタン）、アラノン（ネララビン）、亜ヒ酸、アルゼラ（オファツムマブ）、アスパラギナーゼエルウィニアクリサンテミ、アバスチン（ベバシズマブ）、アキシチニブ、アザシチジン、ＢＥＡＣＯＰＰ、ベセヌム（Becenum）（カルムスチン）、ベレオダク（ベリノスタット）、ベリノスタット、ベンダムスチン塩酸塩、ＢＥＰ、ベバシズマブ、ベキサロテン、ベキサール（トシツモマブおよびヨード Ｉ １３１ トシツモマブ）、ビカルタミド、ＢｉＣＮＵ（カルムスチン）、ブレオマイシン、ブリナツモマブ、ブリンサイト（ブリナツモマブ）、ボルテゾミブ、ボシュリフ（ボスチニブ）、ボスチニブ、ブレンツキシマブベドチン、ブスルファン、カバジタキセル、カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩、ＣＡＦ、キャンパス（アレムツズマブ）、カンプトサル（Camptosar）（イリノテカン塩酸塩）、カペシタビン、ＣＡＰＯＸ、カラック（Carac）（フルオロウラシル外用薬）、カルボプラチン、ＣＡＲＢＯＰＬＡＴＩＮ−ＴＡＸＯＬ（カルボプラチン−タキソール）、カルフィルゾミブ、カルムブリス（カルムスチン）、カルムスチン、カルムスチンインプラント、カソデックス（ビカルタミド）、ＣｅｅＮＵ（ロムスチン）、セリチニブ、セルビジン（ダウノルビシン塩酸塩）、セルバリックス（ＨＰＶ２価ワクチン（遺伝子組換え））、セツキシマブ、クロラムブシル、ＣＨＬＯＲＡＭＢＵＣＩＬ−ＰＲＥＤＮＩＳＯＮＥ（クロラムブシル−プレドニゾン）、ＣＨＯＰ、シスプラチン、クラフェン（シクロホスファミド）、クロファラビン、クロファレックス（クロファラビン）、クロラール（クロファラビン）、ＣＭＦ、コビメチニブ、コメトリック（カボザンチニブ−Ｓ−リンゴ酸塩）、ＣＯＰＤＡＣ
、ＣＯＰＰ、ＣＯＰＰ−ＡＢＶ、コスメゲン（ダクチノマイシン）、コテリック（コビメチニブ）、クリゾチニブ、ＣＶＰ、シクロホスファミド、サイフォス（Cyfos）（イホスファミド）、サイラムザ（ラムシルマブ）、シタラビン、シタラビンリポソーム、シトサール−Ｕ（シタラビン）、シトキサン（シクロホスファミド）、ダブラフェニブ、ダカルバジン、ダコゲン（デシタビン）、ダクチノマイシン、ダラツムマブ、ダルザレックス（ダラツムマブ）、ダサチニブ、ダウノルビシン塩酸塩、デシタビン、デガレリクス、デニロイキンジフチトクス、デノスマブ、デポサイト（シタラビンリポソーム）、デキサメタゾン、デクスラゾキサン塩酸塩、ジヌツキシマブ、ドセタキセル、ドキシル（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ドキソルビシン塩酸塩、ドキソルビシン塩酸塩リポソーム、Ｄｏｘ−ＳＬ（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ＤＴＩＣ−Ｄｏｍｅ（ダカルバジン）、エフディクス（Efudex）（フルオロウラシル外用薬）、エリテック（Elitek）（ラスブリカーゼ）、エレンス（エピルビシン塩酸塩）、エロツズマブ、エロキサチン（オキサリプラチン）、エルトロンボパグオラミン、イメンド（アプレピタント）、エムプリシティ（エロツズマブ）、エンザルタミド、エピルビシン塩酸塩、ＥＰＯＣＨ、アービタックス（セツキシマブ）、エリブリンメシル酸塩、エリベッジ（ビスモデギブ）、エルロチニブ塩酸塩、エルウィナーゼ（アスパラギナーゼエルウィニアクリサンテミ）、エトポホス（Etopophos）（エトポシドリン酸塩）、エトポシド、エトポシドリン酸塩、エバセト（Evacet）（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、エベロリムス、エビスタ（ラロキシフェン塩酸塩）、エキセメスタン、５−ＦＵ（フルオロウラシル注射液）、５−ＦＵ（フルオロウラシル外用薬）、フェアストン（トレミフェン）、ファリーダック（パノビノスタット）、フェソロデックス（フルベストラント）、ＦＥＣ、フェマーラ（レトロゾール）、フィルグラスチム、フルダラ（フルダラビンリン酸エステル）、フルダラビンリン酸エステル、フルオロプレックス（フルオロウラシル外用薬）、フルオロウラシル注射液、フルオロウラシル外用薬、フルタミド、フォレックス（メトトレキサート）、フォレックスＰＦＳ（メトトレキサート）、ＦＯＬＦＩＲＩ、ＦＯＬＦＩＲＩ−ＢＥＶＡＣＩＺＵＭＡＢ、ＦＯＬＦＩＲＩ−ＣＥＴＵＸＩＭＡＢ、ＦＯＬＦＩＲＩＮＯＸ、ＦＯＬＦＯＸ、フォロチン（プララトレキサート）、ＦＵ−ＬＶ、フルベストラント、ガーダシル（ＨＰＶ４価ワクチン（遺伝子組換え））、ガーダシル９（ＨＰＶ９価ワクチン（遺伝子組換え））、ガジーバ（オビヌツズマブ）、ゲフィチニブ、ゲムシタビン塩酸塩、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ−ＣＩＳＰＬＡＴＩＮ（ゲムシタビン−シスプラチン）、ＧＥＭＣＩＴＡＢＩＮＥ−ＯＸＡＬＩＰＬＡＴＩＮ（ゲムシタビン−オキサリプラチン）、ゲムツズマブオゾガマイシン、ジェムザール（ゲムシタビン塩酸塩）、ジオトリフ（アファチニブ二マレイン酸塩）、グリベック（イマチニブメシル酸塩）、ギリアデル（カルムスチンインプラント）、グリアデルウェファー（カルムスチンインプラント）、グルカルピダーゼ、ゴセレリン酢酸塩、ハラヴェン（エリブリンメシル酸塩）、ハーセプチン（トラスツズマブ）、ＨＰＶ２価ワクチン（遺伝子組換え）、ＨＰＶ９価ワクチン（遺伝子組換え）、ＨＰＶ４価ワクチン（遺伝子組換え）、ハイカムチン（トポテカン塩酸塩）、ハイパーＣＶＡＤ、イブランス（パルボシクリブ）、イブリツモマブチウキセタン、イブルチニブ、ＩＣＥ、アイクルシグ（ポナチニブ塩酸塩）、イダマイシン（イダルビシン塩酸塩）、イデラリシブ、アイフェックス（Ifex）（イホスファミド）、イホスファミド、ＩＬ−２（アルデスロイキン）、イマチニブメシル酸塩、イムブルビカ（イブルチニブ）、イミキモド、イムリジク（Imlygic）（タリモゲネラヘルパレプベク（Talimogene Laherparepvec））、インライタ（アキシチニブ）、インターフェロンα−２ｂ（遺伝子組換え）、インターロイキン−２（アルデスロイキン）、イントロンＡ（インターフェロンα−２ｂ（遺伝子組換え））、ヨードＩ １３１ トシツモマブおよびトシツモマブ、イピリムマブ、イレッサ（ゲフィチニブ）、イリノテカン塩酸塩、イリノテカン塩酸塩リポソーム、イストダックス（ロミデプシン）、イクサベピロン、イキサゾミブクエン酸エステル、イキセンプラ（イクサベピロン）、ジャカフィ（ルキソリチニブリン酸塩）、ジェブタナ（カバジタキセル）、カドサイラ（アド−トラスツズマブエムタンシン）、ケオキシフェン（ラロキシフェン塩酸塩）、ケピバンス（パリフェルミン）、キイトルーダ（ペムブロリズマブ）、カイプロリ
ス（カルフィルゾミブ）、ランレオチド酢酸塩、ラパチニブジトシル酸塩、レナリドマイド、レンバチニブメシル酸塩、レンビマ（レンバチニブメシル酸塩）、レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、ロイケラン（クロラムブシル）、ロイプロリド酢酸塩、レブラン（アミノレブリン酸）、リンフォリジン（Linfolizin）（クロラムブシル）、リポドックス（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム）、ロムスチン、ロンサーフ（トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩）、リュープロン（Lupron）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ（Lupron Depot）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ−ペド（Lupron Depot-Ped）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ−３ヶ月（Lupron Depot-3 Month）（リュープロリド酢酸塩）、リュープロンデポ−４ヶ月（Lupron Depot-3 Month）（リュープロリド酢酸塩）、リンパルザ（オラパリブ）、マルキボ（Marqibo）（ビンクリスチン硫酸塩リポソーム）、マツラン（Matulane）（プロカルバジン塩酸塩）、メクロレタミン塩酸塩、メゲース（メゲストロール酢酸エステル）、メゲストロール酢酸エステル、メキニスト（トラメチニブ）、メルカプトプリン、メスナ、メスネックス（メスナ）、メタゾラストン（テモゾロミド）、メトトレキサート、メトトレキサートＬＰＦ（メトトレキサート）、メキサート（メトトレキサート）、メキサート−ＡＱ（メトトレキサート）、マイトマイシンＣ、ミトキサントロン塩酸塩、ミトザイトレックス（マイトマイシンＣ）、ＭＯＰＰ、モゾビル（プレリキサホル）、ムスタルゲン（メクロレタミン塩酸塩）、
ミュータマイシン（マイトマイシンＣ）、ミレラン（ブスルファン）、マイロサー（Mylosar）（アザシチジン）、マイロターグ（ゲムツズマブオゾガマイシン）、ナノ粒子パクリタキセル（パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤）、ナベルビン（ビノレルビン酒石酸塩）、ネシツムマブ、ネララビン、ネオサール（シクロホスファミド）、ネツピタントおよびパロノセトロン塩酸塩、ニューポジェン（フィルグラスチム）、ネクサバール（ソラフェニブトシル酸塩）、ニロチニブ、ニンラーロ（イキサゾミブクエン酸エステル）、ニボルマブ、ノルバデックス（タモキシフェンクエン酸塩）、Ｎプレート（ロミプロスチム）、オビヌツズマブ、オドムゾ（ソニデジブ）、ＯＥＰＡ、オファツムマブ、ＯＦＦ、オラパリブ、オマセタキシンメペスクシナート、オンカスパー（Oncaspar）（ペガスパルガーゼ）、オンダンセトロン塩酸塩、オニバイド（Onivyde）（イリノテカン塩酸塩リポソーム）、オンタック（デニロイキンディフティトックス）、オプジーボ（ニボルマブ）、ＯＰＰＡ、オシメルチニブ、オキサリプラチン、パクリタキセル、パクリタキセルアルブミン安定化ナノ粒子製剤、ＰＡＤ、パルボシクリブ、パリフェルミン、パロノセトロン塩酸塩、パロノセトロン塩酸塩およびネツピタント、パミドロン酸二ナトリウム、パニツムマブ、パノビノスタット、パラプラット（カルボプラチン）、パラプラチン（カルボプラチン）、パゾパニブ塩酸塩、ＰＣＶ、ペガスパルガーゼ、ペグインターフェロンα−２ｂ、ＰＥＧ−イントロン（ペグインターフェロンα−２ｂ）、ペムブロリズマブ、ペメトレキセド二ナトリウムパージェタ（ペルツズマブ）、ペルツズマブ、プラチノール（シスプラチン）、プラチノール−ＡＱ（シスプラチン）、プレリキサホル、ポマリドミド、ポマリスト（ポマリドミド）、ポナチニブ塩酸塩、ポルトラザ（ネシツムマブ）、プララトレキサート、プレドニゾン、プロカルバジン塩酸塩、プロロイキン（アルデスロイキン）、プロリア（デノスマブ）、プロマクタ（エルトロンボパグオラミン）、プロベンジ（シプロイセル−Ｔ）、プリントール（メルカプトプリン）、プリキサン（Purixan）（メルカプトプリン）、二塩化ラジウム２２３、ラロキシフェン塩酸塩、ラムシルマブ、ラスブリカーゼ、Ｒ−ＣＨＯＰ、Ｒ−ＣＶＰ、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）２価ワクチン、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）９価ワクチン、遺伝子組換えヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）４価ワクチン、遺伝子組換えインターフェロンα−２ｂ、レゴラフェニブ、Ｒ−ＥＰＯＣＨ、レブリミド（レナリドマイド）、リウマトレックス（メトトレキサート）、リツキシマブ、ロラピタント塩酸塩、ロミデプシン、ロミプロスチム、ルビドマイシン（ダウノルビシン塩酸塩）、ルキソリチニブリン酸塩、スクレロソル胸膜内エアロゾル（Sclerosol Intrapleural Aerosol）（タルク）、シルツキシマブ、シプリューセル−Ｔ、ソマチュリンデポ（ランレオチド酢酸塩）、ソニデジ
ブ、ソラフェニブトシル酸塩、スプリセル（ダサチニブ）、ＳＴＡＮＦＯＲＤ Ｖ、滅菌タルクパウダー（タルク）、ステリタルク（タルク）、スチバーガ（レゴラフェニブ）、スニチニブリンゴ酸塩、スーテント（スニチニブリンゴ酸塩）、サイラトロン（Sylatron）（ペグインターフェロンα−２ｂ）、シルバント（シルツキシマブ）、シノビール（Synovir）（サリドマイド）、シンリボ（オマセタキシンメペスクシナート）、タブロイド（チオグアニン）、ＴＡＣ、タフィンラー（ダブラフェニブ）、タグリッソ（オシメルチニブ）、タルク、タリモジーンラハーパレプベック、タモキシフェンクエン酸塩、タラビンＰＦＳ（シタラビン）、タルセバ（エルロチニブ塩酸塩）、タルグレチン （ベキサロテン）、タシグナ（ニロチニブ）、タキソール（パクリタキセル）、タキソテール（ドセタキセル）、テモダール（テモゾロミド）、テモゾロミド、テムシロリムス、サリドマイド、チオグアニン、チオテパ、トラク（Tolak）（フルオロウラシル外用薬）、トポサール（エトポシド）、トポテカン塩酸塩、トレミフェン、トリセル（テムシロリムス）、トシツモマブおよびヨードＩ １３１、トシツモマブ、トテクト（デクスラゾキサン塩酸塩）、ＴＰＦ、トラベクテジン、トラメチニブ、トラスツズマブ、トレアンダ（ベンダムスチン塩酸塩）、トリフルリジンおよびチピラシル塩酸塩、トリセノックス（亜ヒ酸）、タイカーブ（ラパチニブジトシル酸塩）、ユニツキシン（ジヌツキシマブ）、ウリジントリアセテート、ＶＡＣ、バンデタニブ、ＶＡＭＰ、バルビ（Varubi）（ロラピタント塩酸塩）、ベクティビックス（パニツムマブ）、ＶｅＩＰ、ベルバン（ビンブラスチン硫酸塩）、ベルケイド（ボルテゾミブ）、ベルサール（ビンブラスチン硫酸塩）、ベムラフェニブ、ベプシド（エトポシド）、ビアドゥール（Viadur）（リュープロリド酢酸塩）、ビダーザ（アザシチジン）、ビンブラスチン硫酸塩、ビンカサールＰＦＳ（ビンクリスチン硫酸塩）、ビンクリスチン硫酸塩、ビンクリスチン硫酸塩リポソーム、ビノレルビン酒石酸塩、ＶＩＰ、ビスモデギブ、ビストガード（Vistogard）（ウリジントリアセテート）、ボラキサーゼ(Voraxaze)（グルカルピダーゼ）、ボリノスタット、ヴォトリエント（パゾパニブ塩酸塩）、ウェルコボリン（ロイコボリンカルシウム）、ザーコリ（クリゾチニブ）、ゼローダ（カペシタビン）、ＸＥＬＩＲＩ、ＸＥＬＯＸ、Ｘｇｅｖａ（デノスマブ）、ゾーフィゴ（二塩化ラジウム２２３）、イクスタンジ（Xtandi）（エンザルタミド）、ヤーボイ（イピリムマブ）、ヨンデリス（トラベクテジン）、ザルトラップ（Ｚｉｖ−アフリベルセプト）、ザルジオ（フィルグラスチム）、ゼルボラフ（ベムラフェニブ）、ゼヴァリン（イブリツモマブ チウキセタン）、ザインカード（Zinecard）（デクスラゾキサン塩酸塩）、Ｚｉｖ−アフリベルセプト、ゾフラン（オンダンセトロン塩酸塩）、ゾラデックス（ゴセレリン酢酸塩）、ゾレドロン酸、ゾリンザ（ボリノスタット）、ゾメタ（ゾレドロン酸）、ザイデリグ（イデラリシブ）、ジカディア（セリチニブ）、およびザイティガ（アビラテロン酢酸エステル）から成る群から選択することができる。

本発明をさらに例証するため、以下の実施例を記載する。もちろん、実施例は、本発明を具体的に限定するものと解釈すべきでない。請求の範囲内のこれらの実施例の変化形は、当業者の理解の範囲内であり、本明細書に記載、および特許請求された本発明の範囲内と見なされる。本開示、および当分野の技術を用いて当業者は実施例を網羅しなくとも本発明を製造および使用できると読者は認識するだろう。

実施例１
樹状細胞成熟に対するプリナブリン効果
セルライン：
未成熟マウスＤＣセルラインＳＰ３７Ａ３（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡから提供された）を、１０％熱失活およびエンドトキシン試験したＦＢＳ（ＰＡＡ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシンＬ−グルタミン混合物（Ｇｉｂｃｏ）、イーグルミニマムエッセンシャル媒地（ＭＥＭ）、非必須アミノ酸（Ｓｉｇｍａ）、シプロキシン（Ｂａｙｅｒ）、および０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ ２−メルカプトエタノール（
Ｇｉｂｃｏ）を添加したイスコフ改変ダルベッコ培地（ＩＭＤＭ；Ｓｉｇｍａ）中で培養した。ＩＭＤＭ完全培地に２０ｎｇ／ｍＬ遺伝子組換えマウスＧＭ−ＣＳＦおよび２０ｎｇ／ｍＬ遺伝子組換えマウスＭ−ＣＳＦ（両方共、Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ）を添加した。マウス腫瘍セルラインＥＧ７および３ＬＬ−ＯＶＡを、それぞれ、ＡＴＣＣから得た、またはＤｏｕｇｌａｓ Ｔ．Ｆｅａｒｏｎ（キャンサーリサーチＵＫケンブリッジインスチチュート、Ｌｉ Ｋａ Ｓｈｉｎｇセンター、ケンブリッジ大学、英国ケンブリッジ）から提供された。全セルラインを試験し、マイコプラズマフリーであることを確認した。ＥＧ７および３ＬＬ−ＯＶＡ中のＯＶＡならびにＲＭＡＴｈｙ１．１中のＴｈｙ１．１の発現を、それぞれ、確認した；遺伝子識別は行わなかった。

ＳＰ３７Ａ３ＤＣ（マウスＤＣライン、Ｍｅｒｃｋ）を、１８０μＬ ＩＭＤＭ完全培地［１０％熱失活およびエンドトキシン試験したＦＢＳ（ＰＡＡ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシンＬ−グルタミン混合物（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ、非必須アミノ酸（Ｓｉｇｍａ）および０．０５ｍＭ ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＩＭＤＭ培地（Ｓｉｇｍａ）］中に播種した（８×１０^４細胞／ウェル、９６ウェル平底、組織培養処理済）。ＩＭＤＭ完全培地に、２０ｎｇ／ｍＬ遺伝子組換えマウスＧＭ−ＣＳＦを添加した。２０μＬ中、プリナブリン、培地、またはコントロールとしてＬＰＳを１０×濃度で添加する前に、２時間ＤＣを付着させた。ＤＣを、それぞれ、様々な濃度（０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）、培地、およびＬＰＳでプリナブリンと一緒に２０時間インキュベートした。これらの培養液の上澄みを集め、ＥＬＩＳＡ（ＢＤから入手可能なキット）によりサイトカイン産生の検出に使用し、細胞を、フローサイトメトリー分析のため、ＬＤ−ＩＲバイアビリティ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ならびにＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０およびＭＨＣＩＩに対する蛍光色素標識モノクローナル抗体で染色した。細胞を、ＤＩＶＡソフトウエアを装備したＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを用いて分析した。生存細胞内のＤＣ成熟マーカーＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの平均蛍光強度（ＭＦＩ）を未処置（培地）ＤＣ中で検出されたマーカーのＭＦＩに対して正規化した。図１Ａに示すように、プリナブリンは、全４つのＤＣ成熟マーカー：ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＭＨＣＩＩの発現を有意に増加させた。図１Ｂに示すように、ＳｙｔｏｘＧｒｅｅｎを用いて決定したとき、試験した薬物濃度のいずれにおいてもＤＣ生存率は有意に変化しなかった。

実施例２
樹状細胞成熟に対するパクリタキセルおよびエトポシドとの比較におけるプリナブリン
２つの他のがん薬剤、パクリタキセルおよびエトポシドも、ＤＣ成熟に対する効果をプリナブリンと比較するために試験した。ＳＰ３７Ａ３ＤＣ（マウスＤＣライン、Ｍｅｒｃｋ）を、１８０μＬ ＩＭＤＭ完全培地［１０％熱失活およびエンドトキシン試験したＦＢＳ（ＰＡＡ）、ピルビン酸ナトリウム（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシンＬ−グルタミン混合物（Ｇｉｂｃｏ）、ＭＥＭ、非必須アミノ酸（Ｓｉｇｍａ）および０．０５ｍＭ ２−メルカプトエタノール（Ｇｉｂｃｏ）を添加したＩＭＤＭ培地（Ｓｉｇｍａ）］中に播種した（８×１０^４細胞／ウェル、９６ウェル平底、組織培養処理済）。ＩＭＤＭ完全培地に、２０ｎｇ／ｍＬ遺伝子組換えマウスＧＭ−ＣＳＦを添加した。２０μＬ中、プリナブリン、パクリタキセル、エトポシド、培地、またはＬＰＳ（ポジティブコントロール）を１０×濃度で添加する前に、２時間ＤＣを付着させた。ＤＣを、それぞれ、プリナブリン（０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）、パクリタキセル（０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）、エトポシド（０．００１μＭ、０．０１μＭ、０．１μＭ、１μＭ、１０μＭ）、培地、およびＬＰＳ（ポジティブコントロール）と一緒に２０時間インキュベートした。これらの培養液の上澄みを集め、ＥＬＩＳＡ（ＢＤから入手可能なキット）によりサイトカイン産生の検出に使用し、細胞を、フローサイトメトリー分析のため、ＬＤ−ＩＲバイアビリ
ティ染料（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ならびにＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ４０およびＭＨＣＩＩに対する蛍光色素標識モノクローナル抗体で染色した。細胞を、ＤＩＶＡソフトウエアを装備したＢＤ Ｆｏｒｔｅｓｓａ Ｃｙｔｏｍｅｔｅｒを用いて分析した。生存細胞内のＤＣ成熟マーカーＣＤ４０（図２Ａ）、ＣＤ８０（図２Ｂ）、ＣＤ８６（図２Ｃ）およびＭＨＣＩＩ（図２Ｄ）の平均蛍光強度（ＭＦＩ）を未処置（培地）ＤＣ中で検出されたマーカーのＭＦＩに対して正規化した。炎症誘発性サイトカインＩＬ−１β（図３Ａ）、ＩＬ−６（図３Ｂ）、およびＩＬ−１２ｐ４０（図３Ｃ）の産生も、ＥＬＩＳＡにより決定した。ＤＣ培養液からの上澄みを、これらの炎症誘発性サイトカインについて分析し、Ｔ細胞機能および抗腫瘍免疫応答の調節に重要な役割をすることが示された。

なお、プリナブリンは、３つの薬剤全ての中でＤＣ成熟の最も強力な誘発物質であった。プリナブリンは、パクリタキセルおよびエトポシドより全４つのマーカー、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＭＨＣＩＩおよびＣＤ８６のずっと大きな発現を示した。プリナブリンは、ポジティブコントロールＬＰＳと比較した場合、全４つの有意な発現増加も示した。プリナブリンは、対照的に、パクリタキセル、エトポシド、およびＬＰＳと比較して、ＩＬ１ｂ、ＩＬ６およびＩＬ１２の産生増加を引き起こした。従って、プリナブリンは、成熟マーカーの上方制御および炎症誘発性サイトカインの産生を増加させて、Ｔ細胞刺激能の増強をもたらした。

実施例３
プリナブリンおよび免疫チェックポイント阻害薬（ＰＤ−１抗体）の相乗効果
プリナブリンおよびＰＤ−１チェックポイント阻害薬を合わせた治療を、プリナブリン単独での治療およびＰＤ−１抗体単独での治療と比較して試験する。ＭＣ−３８腫瘍細胞を皮下に注射した７〜１０週齢マウスを用いて試験を行う。５つの試験群を準備して、各群は９匹のマウスを含む。

群１に食塩水を投与し；群２にプリナブリン希釈液（プリナブリン非存在）を投与し；群３に７．５ｍｇ／ｋｇの濃度に希釈液に溶解したプリナブリンを投与し；群４にＰＤ−１抗体を投与し；および群５にプリナブリン／ＰＤ−１抗体との併用治療を投与する。プリナブリン／ＰＤ−１抗体併用治療（群５）のため、マウスに、希釈液に溶解したプリナブリン（７．５ｍｇ／ｋｇ）を週２回（各週の１日目および４日目）マウスに投与し、次いで、各プリナブリン投与後１時間でＰＤ−１抗体を投与する。プリナブリンのみ治療（群３）または抗体のみ治療（群４）のため、プリナブリン（７．５ｍｇ／ｋｇ、希釈液に溶解）または抗体のみを、週２回（各週の１日目および４日目）マウスに投与する。群１および２のため、週２回、食塩水またはプリナブリン希釈液のみをマウスに投与する。

各治療は、おおよそ１２５ｍｍ^３の腫瘍サイズで開始し、１５００ｍｍ^３の腫瘍サイズに達するまで続ける。いずれの群の平均腫瘍サイズも実験４５日目治療により１５００ｍｍ^３に達しなかった場合、治療を止めて、腫瘍サイズを評価し続ける。各治療の有効性を決定するため、以下のデータを集める：腫瘍サイズが１５００ｍｍ^３に達する前の死亡率；治療前週２回両方評価したマウスの体重；腫瘍サイズ測定（毎週２回）により決定した腫瘍成長速度；腫瘍成長指標；全体生存率；および腫瘍サイズが倍になるのに要する時間。プリナブリンおよびＰＤ−１抗体での併用治療の試験結果は、プリナブリンが腫瘍成長の阻害において、ＰＤ−１抗体と相乗的に作用することを示している。

実施例４
ＯＶＡ特異性ＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩ細胞のインビボ刺激
ＳＰ３７Ａ３細胞または７日目ＢＭＤＣを、プリナブリンまたはＯＶＡ２５７−２６４ペプチド（Ｔ４）／ＯＶＡ３２３−３３９ペプチド（５００ｎｇ／ｍＬ；活性化後）で活性化前にＯＶＡ完全長タンパク質（０．１ｍｇ／ｍＬ）で１時間パルスし、ＯＴ−Ｉ／Ｏ
Ｔ−ＩＩトランスジェニックマウス（２×１０^５全細胞／ウェル、９６ウェル丸底プレート）から精製したＣＤ８^＋／ＣＤ４^＋Ｔ細胞に指示された比で添加する。ＣＤ４^＋Ｔ細胞に、共培養前に増殖色素ｅＦｌｕｏｒ６７０を添加する。フローサイトメトリーを用いて３日後に増殖を評価する。

実施例５
抗原特異性ＣＤ４およびＣＤ８Ｔ細胞のインビボ刺激
ナイーブＯＴ−ＩおよびＯＴ−ＩＩトランスジェニックマウス（Ｌｙ５．２）のランゲルハンス細胞（ＬＣ）および脾臓細胞をｅＦｌｕｏｒ６７０で標識し、Ｃ５７ＢＬ／６−Ｌｙ５．１マウス内に養子移植する。２４時間後、プリナブリンまたはＬＰＳと一緒に、ＯＶＡ２５７−２６４ペプチド（Ｔ４：ＳＩＩＮＦＥＫＬ；ＳＩＩＮＦＥＫＬの低親和性変異体）またはＯＶＡ３２３−３３９ペプチドを尾基部注射により免疫する。ＯＴ−Ｉ ＣＤ８^＋およびＯＴ−ＩＩ ＣＤ４^＋Ｔ細胞の増殖を、フローサイトメトリーにより養子移植後４日目に評価する。

実施例６
腫瘍灌流ＬＮへのＤＣホーミングの分析
プリナブリンの注射に対するＤＣホーミングの検出のため、皮下ＥＧ７腫瘍形成マウスに、プリナブリンまたはＰＢＳ／担体（モックコントロール）と一緒に、ＦＩＴＣ結合デキストラン（１００ｍｇ／マウス；Ｓｉｇｍａ）を腫瘍内に注射する。腫瘍灌流および非灌流ＬＮの単体細胞懸濁液を、プリナブリン注射後４８時間に準備し、フローサイトメトリーにより分析する。

実施例７
プリナブリンおよび免疫チェックポイント阻害薬（ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体）の相乗効果
ＣＴＬＡ−４チェックポイント阻害薬と組み合わせて、プリナブリンおよびＰＤ−１チェックポイント阻害薬での併用治療を、プリナブリン単独での治療、ＰＤ−１抗体単独での治療、またはＣＴＬＡ−４抗体と組み合わせたＰＤ−１抗体での治療と比較して試験した。ＭＣ−３８腫瘍細胞を皮下に注射した７〜１０週齢マウスを用いて試験を行った。６つの試験群を準備して、各群は１０匹のマウスを含んだ。

群１にＩｇＧ２ａおよびプリナブリン媒体を投与した；群２に７．５ｍｇ／ｋｇの濃度で希釈液に溶解したプリナブリンを投与した；群３にＰＤ−１抗体を投与した；群４にプリナブリン／ＰＤ−１抗体併用治療を投与した；群５に複合ＰＤ−１／ＣＴＬＡ−４抗体を投与した；群６に複合ＰＤ−１抗体／ＣＴＬＡ−４抗体／プリナブリン治療を投与した。プリナブリン／ＰＤ−１抗体併用治療（群４）およびプリナブリン／ＰＤ−１／ＣＴＬＡ−４抗体治療（群６）のため、マウスに、希釈液に溶解したプリナブリン（７．５ｍｇ／ｋｇ）を週２回（各週の１日目および４日目）マウスに投与し、各プリナブリン投与後１時間目に抗体（複数可）を投与した。プリナブリンのみ治療（群２）または抗体（複数可）のみ治療（群３および５）のため、プリナブリン（７．５ｍｇ／ｋｇ、希釈液に溶解）または抗体（複数可）のみを、週２回（各週の１日目および４日目）マウスに投与した。

各治療は、おおよそ１２５ｍｍ^３の腫瘍サイズで開始し、３０００ｍｍ^３の腫瘍サイズに達するまで続けた。群１の平均腫瘍サイズが３０００ｍｍ^３に達した場合、実験を止めた。各治療の有効性を決定するため、以下のデータを集めた：腫瘍サイズが３０００ｍｍ^３に達する前の死亡率；治療前週２回両方評価したマウスの体重；腫瘍サイズ測定（毎週２回）により決定した腫瘍成長速度；腫瘍成長指標；全体生存率；剖検時の腫瘍重量；および腫瘍サイズが１０倍になるのに要する時間。剖検において、組織の重量を量り、ＦＡ
ＣＳ分析した。

プリナブリンおよびＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体での併用治療の試験結果は、腫瘍成長の阻害においてプリナブリンが抗体と相乗的に作用し、６つの試験群のうち腫瘍重量が１０倍に増加するのに最も長時間要したことを示した。図４Ａは、腫瘍成長に対する群１、５、および６の効果を示す。図４Ａに示すように、群６、プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体での併用治療は、群５、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体治療群の組合せより腫瘍成長をより良好に阻害し、群５および群６の両方は、コントロール群１と比較して腫瘍成長の阻害を示した。図４Ｂは、剖検における平均腫瘍重量に対する６つの治療群の効果を示す。図４Ｂに示すように、プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体での併用治療は、剖検において最も小さい腫瘍重量を得、次いで、プリナブリンおよびＰＤ−１抗体での治療群であった。図４Ｃは、６つの治療群において、腫瘍の開始体積が１０倍に達する時間を示す。図４Ｃに示すように、合わせたプリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体での治療群は、腫瘍の開始体積が１０倍に達するのに最も長時間であった。従って、単独またはＰＤ−１抗体もしくはＰＤ−１＋ＣＴＬＡ−４抗体との併用のいずれかのプリナブリン治療は、結果として剖検における腫瘍重量を減少させた。プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体の併用治療は、プリナブリン単独治療より良好な腫瘍阻害薬効果を示したプリナブリンおよびＰＤ−１抗体の治療より良好な腫瘍阻害薬効果を有した。

図５は、上記ＭＣ−３８ ＣＲＣ腫瘍モデルにおいて、Ｔｒｅｇ細胞の変化パーセント、ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇの割当量、およびＣＤ４５＋リンパ球中のマクロファージのパーセントを含む剖検の腫瘍のＦＡＣＳ分析の結果を示す。図５Ａは、Ｔｒｅｇ細胞のパーセントに対する６つの治療群の効果を示す。図５Ａに示すように、プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体の治療、プリナブリンおよびＰＤ−１抗体の治療ならびにプリナブリン単独の治療は、プリナブリンなしでの対照群と比較してＴｒｅｇ細胞％の減少を示した。図５Ｂは、Ｔｒｅｇ細胞に対するＣＤ８＋細胞の比を示す。図５Ｂに示すように、プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体の治療は、最も高いＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比を示した。図５Ｃは、マクロファージに対する６つの治療群の効果を示す。図５Ｃに示すように、プリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体の治療群、プリナブリンの治療群ならびにＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体の治療群全ては、それぞれの対照群と比較した場合、マクロファージのパーセントの減少を示した。

従って、腫瘍組織のＦＡＣＳ分析は、プリナブリン単独、プリナブリンおよび免疫チェックポイント阻害薬（例えば、ＰＤ−１抗体と一緒にプリナブリン、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体と一緒にプリナブリン）の治療が、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）パーセントの減少、マクロファージ染色細胞パーセントの減少、およびＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比の同時増大に関連することを示した。Ｔｒｅｇ細胞パーセントおよびマクロファージ染色細胞の減少ならびにＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ細胞比の増大は、プリナブリン単独または抗体（複数可）を用いた群より、プリナブリンおよび免疫チェックポイント阻害薬を用いた治療群においてより顕著であった。これらのデータは、プリナブリンおよび免疫チェックポイント阻害薬（例えば、ＰＤ−１抗体およびＣＴＬＡ−４抗体）を用いた併用治療の相乗的がん免疫特性を示した。

Claims (46)

1. プリナブリンおよび１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を含む医薬組成物であって、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４の阻害薬である、組成物。
2. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１阻害薬である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ１阻害薬である、請求項１に記載の組成物。
4. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ２阻害薬である、請求項１に記載の組成物。
5. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項１に記載の組成物。
6. 第一免疫チェックポイント阻害薬および第二免疫チェックポイント阻害薬を含み、前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、前記第二免疫チェックポイント阻害薬と異なる、請求項１に記載の組成物。
7. 前記第一および第二免疫チェックポイント阻害薬が、独立して、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４の阻害薬である、請求項６に記載の組成物。
8. 前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１阻害薬であり、前記第二免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項７に記載の組成物。
9. 前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ１阻害薬であり、前記第二免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項７に記載の組成物。
10. 前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ２阻害薬であり、前記第二免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項７に記載の組成物。
11. 前記免疫チェックポイント阻害薬が抗体である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の組成物。
12. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１抗体である、請求項１１に記載の組成物。
13. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項１１に記載の組成物。
14. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ２抗体である、請求項１１に記載の組成物。
15. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項１１に記載の組成物。
16. 前記抗体が、α−ＣＤ３−ＡＰＣ、α−ＣＤ３−ＡＰＣ−Ｈ７、α−ＣＤ４−ＥＣＤ、
    α−ＣＤ４−ＰＢ、α−ＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ−８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、α−ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、α−ＣＤ１１ｂ−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ１１ｂ−ＡＦ７００、α−ＣＤ１４−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ１６−ＰＢ、α−ＣＤ１９−ＡＦ７８０、α−ＣＤ１９−ＡＦ７００、α−ＣＤ２０−ＰＯ、α−ＣＤ２５−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ４０−ＡＰＣ、α−ＣＤ４５−ビオチン、ストレプトアビジン−ＢＶ６０５、α−ＣＤ６２Ｌ−ＥＣＤ、α−ＣＤ６９−ＡＰＣ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８０−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ８３−ビオチン、ストレプトアビジン−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ、α−ＣＤ１２３−ＰＥ、α−ＣＤ１５４−ＰＥ、α−ＣＤ１６１−ＰＥ、α−ＣＴＬＡ４−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＦｏｘＰ３−ＡＦ４８８（クローン ２５９Ｄ）、ＩｇＧ１−アイソタイプ−ＡＦ４８８、α−ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）−ＰＥ、α−ＨＬＡ−Ａ２−ＰＥ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰＢ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、α−ＰＤ１−ＡＰＣ、ＶＩＳＴＡ、共刺激分子ＯＸ４０、およびＣＤ１３７から選択される、請求項１１に記載の組成物。
17. １つ以上の薬剤的に許容可能な賦形剤をさらに含む、請求項１〜１６のいずれか一項に記載の組成物。
18. １つ以上の追加の化学療法薬をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の組成物。
19. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、イピリムマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはそのいずれかの組合せである、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の組成物。
20. プリナブリンを含む医薬組成物であって、１つ以上の免疫チェックポイント阻害薬を組み合わせて用いる、がんの治療のための組成物であって、前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４の阻害薬である、組成物。
21. １つ以上の追加化学療法薬をさらに組み合わせて用いる、請求項２０に記載の組成物。
22. 前記がんが、ＰＤ−１の結合リガンドを発現するがん細胞を含む、請求項２０または２１に記載の組成物。
23. 前記ＰＤ−１の結合リガンドが、ＰＤ−Ｌ１またはＰＤ−Ｌ２である、請求項２２に記載の組成物。
24. 前記がんが、頭頚部がん、肺がん、胃がん、結腸がん、膵がん、前立腺がん、乳がん、腎がん、膀胱がん、卵巣がん、子宮頚がん、メラノーマ、グリオブラストーマ、骨髄腫、リンパ腫、または白血病である、請求項２２に記載の組成物。
25. 前記がんが、腎細胞がん、悪性黒色腫、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、卵巣がん、ホジキンリンパ腫または扁平上皮がんである、請求項２２に記載の組成物。
26. 前記がんが、ＣＴＬＡ−４の結合リガンドを発現するがん細胞を含む、請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の組成物。
27. 前記ＣＴＬＡ−４の結合リガンドが、Ｂ７．１またはＢ７．２である、請求項２６に記載の組成物。
28. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１阻害薬である、請求項２０〜２７のいず
    れか一項に記載の組成物。
29. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ１阻害薬である、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
30. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ２阻害薬である、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
31. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
32. 第一免疫チェックポイント阻害薬および第二免疫チェックポイント阻害薬を含み、前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、前記第二免疫チェックポイント阻害薬と異なる、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
33. 前記第一および第二免疫チェックポイント阻害薬が、独立して、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、ＰＤ−Ｌ２またはＣＴＬＡ−４の阻害薬である、請求項３２に記載の組成物。
34. 前記第一免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１阻害薬であり、前記第二免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４阻害薬である、請求項３３に記載の組成物。
35. 前記免疫チェックポイント阻害薬が抗体である、請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の組成物。
36. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−１抗体である、請求項３５に記載の組成物。
37. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ１抗体である、請求項３５に記載の組成物。
38. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＰＤ−Ｌ２抗体である、請求項３５に記載の組成物。
39. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ＣＴＬＡ−４抗体である、請求項３５に記載の組成物。
40. 前記抗体が、α−ＣＤ３−ＡＰＣ、α−ＣＤ３−ＡＰＣ−Ｈ７、α−ＣＤ４−ＥＣＤ、α−ＣＤ４−ＰＢ、α−ＣＤ８−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ−８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、α−ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、α−ＣＤ１１ｂ−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ１１ｂ−ＡＦ７００、α−ＣＤ１４−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ１６−ＰＢ、α−ＣＤ１９−ＡＦ７８０、α−ＣＤ１９−ＡＦ７００、α−ＣＤ２０−ＰＯ、α−ＣＤ２５−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ４０−ＡＰＣ、α−ＣＤ４５−ビオチン、ストレプトアビジン−ＢＶ６０５、α−ＣＤ６２Ｌ−ＥＣＤ、α−ＣＤ６９−ＡＰＣ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８０−ＦＩＴＣ、α−ＣＤ８３−ビオチン、ストレプトアビジン−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＣＤ８６−ＰＥ、α−ＣＤ１２３−ＰＥ、α−ＣＤ１５４−ＰＥ、α−ＣＤ１６１−ＰＥ、α−ＣＴＬＡ４−ＰＥ−Ｃｙ７、α−ＦｏｘＰ３−ＡＦ４８８（クローン ２５９Ｄ）、ＩｇＧ１−アイソタイプ−ＡＦ４８８、α−ＩＣＯＳ（ＣＤ２７８）−ＰＥ、α−ＨＬＡ−Ａ２−ＰＥ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰＢ、α−ＨＬＡ−ＤＲ−ＰｅｒＣＰＣｙ５．５、α−ＰＤ１−ＡＰＣ、ＶＩＳＴＡ、共刺激分子ＯＸ４０、およびＣＤ１３７から選択される、請求項３５に記載の組成物。
41. 前記免疫チェックポイント阻害薬が、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、イピリムマブ、ＢＭＳ−９３６５５９、アテゾリズマブ、デュルバルマブ、またはそのいずれかの組合せである、請求項２０〜４０のいずれか一項に記載の組成物。
42. 前記がんが、乳がん、結腸がん、直腸がん、肺がん、前立腺がん、メラノーマ、白血病、卵巣がん、胃がん、腎細胞がん、肝がん、膵がん、リンパ腫および骨髄腫から選択される、請求項２０に記載の組成物。
43. 前記がんが、固形腫瘍または血液がんである、請求項２０に記載の組成物。
44. 前記がんが、ＰＤ−１、ＰＤ−Ｌ１、またはＰＤ−Ｌ２を発現する細胞を有しない、請求項２０に記載の組成物。
45. 放射線と組み合わせて使用される、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の組成物。
46. 生物学的療法と組み合わせて使用される、請求項２０〜４４のいずれか一項に記載の組成物。

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