JP2021000130A - Ｃｄ１２３抗体及びその複合体 - Google Patents

Ｃｄ１２３抗体及びその複合体 Download PDF

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Abstract

【課題】ＣＤ１２３抗体及びその複合体の提供。【解決手段】特定の配列に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、特定の配列に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、またはＣＤ１２３タンパク質に結合する抗体もしくはその抗原結合断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。【選択図】図７

Description

ＣＤ１２３は、ＩＬ−３受容体の７０ｋＤタンパク質膜貫通アルファ鎖であり、ＩＬ３Ｒ−アルファとも称される。ＣＤ１２３は、原発性ＡＭＬサンプル上に発現されることが知られ、多くの悪性細胞に関して報告されている。本発明は、ＣＤ１２３抗体及びその複合体を提供する。
発明の概要
抗ＣＤ１２３抗体及びＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体が本明細書において提供される。特に、ＣＤ１２３指向ピロロベンゾジアゼピン（「ＰＢＤ」）抗体−薬物複合体、及びＣＤ１２３発現障害を治療するためにそのような複合体を使用する方法が本明細書において提供される。好ましい抗ＣＤ１２３抗体は、マウス７Ｇ３抗体のキメラまたはヒト化形態である（Ｓｕｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ，１９９６，８７（１）：８３−９２）。マウス７Ｇ３抗体は、配列番号８に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号９に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む。本明細書での使用のための好ましいヒト化７Ｇ３抗体は、重鎖可変領域に関してヒト生殖系列配列ｈＩＧＨｖ１−２及びＪエクソンＪＨ−１を、軽鎖可変領域に関してヒト生殖系列配列ｈＩＧＫｖ４−１及びＪエクソンＪＫ−２を使用して構築される抗体である。特に好ましいいヒト化７Ｇ３抗体は、配列番号１に記載される重鎖可変領域と、配列番号２に記載される軽鎖可変領域とを含む。
本発明に使用するための抗体は、無傷抗体またはその抗原結合断片であり得る。ヒト化７Ｇ３抗体は、重鎖定常領域に融合した成熟重鎖可変領域、及び軽鎖定常領域に融合した成熟軽鎖可変領域を有し得る。重鎖定常領域は、天然に生じるか、またはヒト定常領域（例えば、配列番号５、位置２３９にセリンに対して置換するシステインを有する重鎖ＩｇＧ１定常領域（Ｓ２３９Ｃ）または配列番号６）の突然変異型であり得る。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１アイソタイプの重鎖定常領域であり得る。例示的な軽鎖定常領域アミノ酸配列は、配列番号７に記載される。
本明細書に記載されるキメラまたはヒト化７Ｇ３抗体は、ＰＢＤ薬物−リンカーを含む薬物−リンカーと複合体化されて、ＣＤ１２３抗体−薬物複合体を提供する。結合は、従来型または部位特異的複合体化法を介し得る。例示的な結合は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従い重鎖定常領域の位置２３９で改変システインを介したものである。ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体を使用して、ＡＭＬ等のＣＤ１２３発現癌を含むＣＤ１２３発現病を治療するために使用される。
他の実施形態では、本明細書に記載されるキメラまたはヒト化７Ｇ３抗体は、グルクロニド−ペグ化ＭＭＡＥ薬物−リンカーを含む薬物−リンカーと複合体化されて、ＣＤ１２３抗体−薬物複合体を提供する。
更なる実施形態では、ヒト化７Ｇ３抗体に結合された薬物−リンカーは、下式：
を有するか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それとの共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲であり、ＲＰＲは、水素または保護基であり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。
本開示のいくつかの実施形態では、値ｎは、８〜１４の範囲であり得る。本開示の他の実施形態では、値ｎは、１０〜１２の範囲である。本開示の更なる実施形態では、ｎの値は、１２である。別の実施形態では、Ｒ２１は、−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
別の実施形態では、本開示のペグ化−ＭＭＡＥ抗体−薬物複合体のうちのいずれかは、８のｐ値を有する。別の実施形態では、薬物−リンカーは、抗体の鎖間ジスルフィド結合のシステイン残基を介して抗体に結合される。
ＭＤＲ＋−陽性ＡＭＬ細胞系、ＫＧ−１に対してヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体を試験したインビトロ細胞毒性分析の結果を示し、ＣＤ３３と比較してＣＤ１２３の低いコピーを表す。低コピー数にもかかわらず、ｈ７Ｇ３ｅｃ−ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体は、強力な活性を示した。 ＭＤＲ＋−陽性ＡＭＬ細胞系、Ｋａｓｕｍｉ−１に対してヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体を試験したインビトロ細胞毒性分析の結果を示し、ＣＤ３３と比較してＣＤ１２３の低いコピーを表す。低コピー数にもかかわらず、ｈ７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体は、強力な活性を示した。 ＡＭＬ異種移植片モデル、ＴＨＰ−１の結果を示し、ヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体が、低コピー数にもかかわらず、強力な活性を表したことを示す。活性は、より低いコピー数にもかかわらず、ＣＤ３３抗体−薬物複合体に相当した。 ＡＭＬ異種移植片モデル、ＫＧ１−ＩＮＶの結果を示し、ヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体が、より低いコピー数にもかかわらず、強力な活性、及びＣＤ３３抗体−薬物複合体に相当する活性を表したことを示す。 マウス７Ｇ３抗体の重鎖可変領域ならびにヒト化ｖＨＡ、ｖＨＢ、及びｖＨＣ重鎖のアミノ酸配列、ならびに選択されたヒト生殖系列アクセプター可変領域配列を示す。 マウス７Ｇ３抗体の軽鎖可変領域ならびにヒト化ｖＬＡ、及びｖＬＢ、軽鎖のアミノ酸配列、ならびに選択されたヒト生殖系列アクセプター可変領域配列を示す。 ＡＭＬ異種移植片モデル、ＨＮＴ−３４の結果を示し、ヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体が、強力な細胞傷害性活性を表したことを示す。 ＡＭＬ異種移植片モデル、播種性Ｍｏｌｍ−１３ＡＭＬモデルの結果を示し、ヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体が、強力な細胞傷害性活性を表したことを示す。 ＡＭＬ異種移植片モデル、原発性ＭＤＲ＋ＡＭＬの播種性モデルの結果を示し、ヒト化７Ｇ３ｅｃ ＳＧＤ−１９１０抗体−薬物複合体が、強力な細胞傷害性活性を表したことを示す。
定義
「モノクロ−ナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体、すなわち、集団を含む個々の抗体が微量で存在し得る可能な天然に生じる突然変異を除き同一である集団から得られた抗体を指す。修飾語「モノクロ−ナル」は、実質的に均質な抗体の集団から得られたときの抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されないものとする。例えば、本発明に従い使用されるモノクローナル抗体は、最初にＫｏｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５により記載されたハイブリドーマ法により作製され得るか、または組換えＤＮＡ法により（例えば、米国特許第４８１６５６７号を参照されたい）作製され得る。「モノクローナル抗体」は、例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７に記載される技法を使用してファージ抗体ライブラリーからも単離され得るか、または他の方法により作製され得る。本明細書に記載される抗体は、モノクロ−ナル抗体である。
抗体は典型的には、単離された形態で提供される。これは、抗体が典型的には、その産生または精製から生じる妨害タンパク質及び他の汚染物の少なくとも５０％ｗ／ｗ純粋であることを意味するが、その抗体がその使用を容易にすることを意図した過剰の薬学的な担体（複数可）または他のビヒクルと組み合わされる可能性を除外しない。時折、抗体は、産生または精製からの妨害タンパク質及び汚染物から少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５、または９９％ｗ／ｗ純粋である。単離された抗体を含む抗体は、細胞傷害性薬と複合体化されて、抗体薬物複合体として提供され得る。
「単離された」ポリヌクレオチドは、特定され、その天然の構成成分から分離及び／または回収されたポリヌクレオチドを指す。
モノクローナル抗体の、その標的抗原への特異的結合は、少なくとも１０６、１０７、１０８、１０９、または１０１０Ｍ−１の親和性を意味する。特異的結合は、検出可能に規模が高く、少なくとも１つの無関係の標的に生じる非特異的結合から区別可能である。特異的結合は、特定の官能基間の結合の形成または特定の空間的適合（例えば、ロック・アンド・キータイプ）の結果であり得るが、非特異的結合は通常、ファンデルワース力の結果である。ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体及び抗ＣＤ１２３抗体は、ＣＤ１２３に特異的に結合する。
基本的な抗体構造単位は、サブユニットの四量体である。各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖の対を含み、各対は、１つの「軽」鎖（約２５ｋＤａ）及び１つの「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０個以上のアミノ酸の可変領域を含む。切断可能なシグナルペプチドに連結されたこの可変領域が最初に発現される。シグナルペプチドを有しない可変領域は、時折、成熟可変領域と称される。よって、例えば、軽鎖成熟可変領域は、軽鎖シグナルペプチドを有しない軽鎖可領域を意味する。軽鎖は、カッパまたはラムダのいずれかに分類される。重鎖は、ガンマ、ミュー、アルファ、デルタ、またはエプシロンに分類され、それぞれ、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＥとして抗体のアイソタイプを定義する。軽鎖及び重鎖内で、添字及び定常領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」領域により結合され、重鎖も約１０個以上のアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ ｅｄ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．，１９８９，Ｃｈ．７を参照されたい、全ての目的に関して参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。各軽／重鎖対の成熟可変領域は、抗体結合部位を形成する。よって、無傷抗体は２つの結合部位を有する。鎖は全て、相補性決定領域またはＣＤＲとも呼ばれる３つの超可変領域により結合された、比較的保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）の同じ一般構造を呈する。各対の２本の鎖からのＣＤＲは、フレームワーク領域により整合され、特定のエピトープへの結合を可能にする。Ｎ末端からＣ末端まで、軽鎖及び重鎖両方は、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割当は、Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）またはＣｈｏｔｈｉａ＆Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。Ｋａｂａｔは、異なる重鎖可変領域間または異なる軽鎖可変領域間の対応する残基が同じ番号を割り当てられる、広く使用されている付番規則（Ｋａｂａｔ付番システム）も提供する。重鎖定常領域の付番は、Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７ ａｎｄ １９９１）に記載されるＥＵインデックスによる。
「抗体」という用語は、無傷抗体及びその抗原結合断片を含む。「無傷抗体」は、抗原結合可変領域ならびに抗体クラスに適した軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及びＣＨ４を含むものである。定常ドメインは、天然の配列定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異型であり得る。抗体断片は、それらが別個の重鎖、軽鎖Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆ（ａｂ）ｃ、ダイアボディ、Ｄａｂｓ、ナノボディ、及びＦｖを含む標的への特異的結合について得られた無傷抗体と競合する。断片は、組換えＤＮＡ技術により、または無傷免疫グロブリンの酵素もしくは化学分離により産生され得る。「抗体」という用語は、二重特異性抗体または同様のものであるダイアボディ（ホモ二量体Ｆｖ断片）またはミニボディ（ＶＬ−ＶＨ−ＣＨ３）も含む。二重特異性または二重機能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖対、及び２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である（例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ ａｎｄ Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，７９：３１５−３２１（１９９０）、Ｋｏｓｔｅｌｎｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：１５４７−５３（１９９２）を参照されたい）。
「患者」という用語は、予防的または治療的処置のいずれかを受けるヒト及び他の哺乳類対象を含む。
アミノ酸置換を保存または非保存に分類する目的に関して、アミノ酸は、以下のようにグループ分けされる：グループＩ（疎水性側鎖）：ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；グループＩＩ（中性親水性側鎖）：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；グループＩＩＩ（酸性側鎖）：ａｓｐ、ｇｌｕ；グループＩＶ（塩基性側鎖）：ａｓｎ、ｇｌｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；グループＶ（鎖配向に影響を及ぼす残基）：ｇｌｙ、ｐｒｏ；及びグループＶＩ（芳香族側鎖）：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ。保存的置換は、同じクラスのアミノ酸間の置換を伴う。非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のメンバーと交換することに相当する。
パーセント配列同一性は、Ｋａｂａｔ付番規則により最大限に整合された抗体配列により決定される。整合後、対象抗体領域（例えば、重鎖または軽鎖の成熟可変領域全体）が参照抗体の同じ領域と比較される場合、対象と参照抗体領域との間のパーセント配列同一性は、対象及び参照抗体領域の両方において同じアミノ酸により占められる位置の数を、２つの領域の整合された位置の総数で除し（ギャップは数えられない）、１００を乗じてパーセントに変換する。
１つ以上の列挙される要素を「含む」組成物または方法は、具体的に列挙されない他の要素を含み得る。例えば、抗体を含む組成物は、抗体のみを含むか、または他の成分との組み合わせであり得る。
「治療有効量」または「有効量」という用語は、哺乳動物における疾患または障害を治療するのに有効である抗体−薬物複合体の量を指す。癌の場合、複合体の治療有効量は、癌細胞の数を低減し得る、腫瘍サイズを低減し得る、末梢器官への癌細胞浸潤を阻害し得る（すなわち、ある程度緩徐化し、好ましくは停止させる）、腫瘍転移を阻害し得る（すなわち、ある程度緩徐化し、好ましくは停止させる）、腫瘍成長を阻害し得る、及び／または癌に関連する症状のうちの１つ以上を軽減し得る。癌療法に関して、有効性は、例えば、疾患進行までの時間（ＴＴＰ）を評価し、かつ／または奏功率（ＲＲ）を決定することにより測定され得る。「有効なレジメン」という用語は、投与される複合体の量と障害の治療を達成するのに適切な投薬頻度との組み合わせを指す。
「治療する（ｔｒｅａｔ）」または「治療（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」という用語は、文脈により別途記載のない限り、目的が癌の発生もしくは広がりなど、望ましくない生理学的変化または障害を阻害もしくは緩徐化する（軽減する）ことである、治療的処置を指す。有益または所望の臨床結果は、限定されないが、検出可能または検出不能にかかわらず、症状の緩和、疾患の程度の縮小、疾患の安定した（すなわち、悪化しない）状態、疾患進行の遅延もしくは緩徐化、疾患状態の改善もしくは緩和、及び寛解（部分的または完全にかかわらず）を含む。「治療」は、治療を受けない場合の予想生存期間と比較したときの生存期間の延長も意味し得る。治療を必要とするものは検出可能な疾患を有するものを含む。治療を必要とするものは、検出不能な疾患を有するもの、例えば、ＣＤ１２３発現障害の治療後に完全な奏功を達成したが、再発を防止するために療法を必要とする患者も含み得る。
「薬学的に許容される」という用語は、米国の連邦もしくは州政府の規制機関により承認されたもしくは承認可能である、または動物、より具体的にはヒトにおいて使用するための米国薬局方もしくは他の一般的に認識されている薬局方に列記されていることを意味する。「薬学的に相溶性の成分」という用語は、抗ＣＤ１２３抗体または抗体−薬物複合体とともに対象に投与される薬学的に許容される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。
「薬学的に許容される塩」という句は、薬学的に許容される有機塩または無機塩を指す。例示的な塩には、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、酸リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、糖酸塩（ｓａｃｃｈａｒａｔｅ）、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐトルエンスルホン酸塩、及びパモ酸塩（すなわち、１，１’メチレンビス−（２ヒドロキシ３ナフトエート））が含まれる。薬学的に許容される塩は、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオンなどの別の分子の包含を伴ってもよい。対イオンは、親化合物上の電荷を安定させる任意の有機または無機の部分であり得る。更に、薬学的に許容される塩は、その構造内に２つ以上の荷電原子を有し得る。複数の荷電原子が薬学的に許容される塩の一部である場合は、複数の対イオンを有し得る。したがって、薬学的に許容される塩は、１つ以上の荷電原子及び／または１つ以上の対イオンを有し得る。
本発明の文脈における溶媒和物は、溶媒分子との調整を通して固体または液体状態において複合体を形成する本発明の化合物のそれらの形態である。水和物は、溶媒和物の１つの特定の形態であり、調整は水と行われる。本発明の文脈における好ましい溶媒和物は、水和物である。
文脈から別途明らかでない限り、「約」という用語は、規定値の標準偏差内の値を包含する。
詳細な説明
Ｉ．概要
本発明は一部、ＣＤ１２３を標的とするＰＢＤ抗体−薬物複合体を含む抗体−薬物複合体がＣＤ１２３＋発現細胞の死滅に特に有効であるという発見に基づく。特に、高親和性７Ｇ３ヒト化抗体は、重鎖可変領域アクセプター配列として、生殖系列ｈＩＧＨｖ１−２及びＪエクソンＪＨ−１を使用して、軽鎖可変領域アクセプター配列に関しては、生殖系列ｈＩＧＫｖ４−１及びＪエクソンＪＫ−２を使用して、ならびに残基を１つ以上の主要な部位でマウス抗体またはマウス生殖系列配列に突然変異させることによって構築され得ることが分かった。重鎖に関して、これらの主要な部位は、位置Ｈ２０、Ｈ３８、Ｈ４８、Ｈ６６、Ｈ６７、Ｈ６９、Ｈ７１、Ｈ７３、Ｈ８１、Ｈ８２Ａ、及びＨ９３のうちの１つ以上を含んだ。軽鎖に関して、これらの主要な部位は、位置Ｌ２、Ｌ１９、Ｌ２１、Ｌ２２、及びＬ３８のうちの１つ以上を含んだ。特に、高親和性７Ｇ３ヒト化抗体は、親和性成熟を行う必要がなく、またマウス抗体のＣＤＲの同一性を維持しながら構築された。高親和性７Ｇ３ヒト化抗体は、抗体薬物複合体の一部としての薬物送達にも有効であった。ＳＧＤ−１９１０ＰＢＤ薬物−リンカーと複合体化されたとき、得られるｈ７Ｇ３ｅｃ ＰＢＤ複合体は、低いＣＤ１２３コピー数及びＭＤＲ＋状態に関係なく、ＡＭＬ細胞系及び原発性ＡＭＬサンプルのパネルに対して非常に活性であった。ｈ７Ｇ３に後続する「ｅｃ」の表示は、抗体が、重鎖の位置２３９にシステイン置換を有することを示す（付番は、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスによるものである）。
ＩＩ．標的分子
別途記載のない限り、ＣＤ１２３及びＩＬ−３Ｒアルファは、交互に用いられ、ＣＤ１２３またはＩＬ−３Ｒアルファを指す。例示的なヒト配列は、ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ−Ｐｒｏｔ受入番号−ｐ２６９５１を割り当てられている。
ＩＩＩ．本発明の抗体
ヒト化抗体は、非ヒト「ドナー」抗体からのＣＤＲがヒト「アクセプター」抗体配列にグラフトされる遺伝子組換えされた抗体である（例えば、Ｑｕｅｅｎ，ＵＳ５，５３０，１０１及び５，５８５，０８９、Ｗｉｎｔｅｒ，ＵＳ５，２２５，５３９、Ｃａｒｔｅｒ，ＵＳ６，４０７，２１３、Ａｄａｉｒ，ＵＳ５，８５９，２０５、ならびにＦｏｏｔｅ，ＵＳ６，８８１，５５７を参照されたい）。アクセプター抗体配列は、例えば、成熟ヒト抗体配列、かかる配列の複合体、ヒト抗体配列のコンセンサス配列、または生殖系列領域配列であり得る。
よって、ヒト化抗体は、完全にまたは実質的に非ヒトドナー抗体ならびに可変領域フレームワーク配列及び定常領域から、存在する場合、完全にまたは実質的にヒト抗体配列からの一部または全てのＣＤＲを有する抗体である。同様に、ヒト化重鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体重鎖ならびに重鎖可変領域フレームワーク配列及び重鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト重鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも１つ、２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。同様に、ヒト化軽鎖は、完全にまたは実質的にドナー抗体軽鎖ならびに軽鎖可変領域フレームワーク配列及び軽鎖定常領域から、存在する場合、実質的にヒト軽鎖可変領域フレームワーク及び定常領域配列からの少なくとも１つ、２つ、及び通常３つ全てのＣＤＲを有する。ナノボディ及びダイアボディ以外、ヒト化抗体は典型的には、ヒト化重鎖及びヒト化軽鎖を含む。ヒト化またはヒト抗体におけるＣＤＲは、対応する残基（Ｋａｂａｔにより定義されるように）の少なくとも６０％、８５％、９０％、９５％、または１００％がそれぞれのＣＤＲ間で同一であるとき、実質的に非ヒト抗体において対応するＣＤＲからであるか、またはそれに実質的に同一である。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体またはヒト抗体におけるＣＤＲは、各ＣＤＲにおいて３つ以下の保存アミノ酸置換があるとき、実質的に非ヒト抗体において対応するＣＤＲからであるか、またはそれに実質的に同一である。抗体鎖の可変領域フレームワーク配列または抗体鎖の定常領域は、Ｋａｂａｔにより定義される対応する残基の少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％が同一であるとき、それぞれ、実質的にヒト可変領域フレームワーク配列またはヒト定常領域からである。本発明のいくつかのヒト化抗体において、本抗体の重鎖可変フレームワーク領域において少なくとも６つのマウス７Ｇ３逆突然変異があり、本抗体の軽鎖可変領域において少なくとも２つのマウス７Ｇ３逆突然変異がある。
ヒト化抗体は、マウス抗体からの６つ全てのＣＤＲ（好ましくはＫａｂａｔにより定義されるように）を組み込むことが多いが、それらは、マウス抗体からの全てより少ないＣＤＲ（例えば、少なくとも３つ、４つ、または５つ）とでも作製され得る（例えば、Ｐａｓｃａｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：３０７６，２００２、Ｖａｊｄｏｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３２０：４１５−４２８，２００２、Ｉｗａｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６：１０７９−１０９１，１９９９、Ｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６４：１４３２−１４４１，２０００）。
ヒト可変領域フレームワーク残基からのある特定のアミノ酸は、ＣＤＲ構造及び／または抗原への結合に対するそれらの可能な影響に基づく置換に関して選択され得る。かかる可能な影響の研究は、モデル化、特定の位置でのアミノ酸の特性の検査、または特定のアミノ酸の置換もしくは突然変異誘発の作用の経験的観察によるものである。
本発明は、ＣＤ１２３抗原に対して指向された抗体を提供する。好ましい抗体は、マウス７Ｇ３抗体に由来するキメラまたはヒト化抗体である。重鎖可変領域の好ましいアクセプター配列は、生殖系列ＶＨエクソンｈＩＧＨｖ１−２であり、Ｊエクソン（ＪＨ）に関しては、エクソンＪＨ−１である。軽鎖可変領域に関して、好ましいアクセプター配列は、エクソンｈＩＧＫｖ４−１であり、Ｊエクソンに関してはＪＫ−２である。
例示的な抗ＣＤ１２３抗体は、配列番号１に記載される重鎖ＣＤＲと、配列番号２に記載される軽鎖ＣＤＲとを含み、加えて、配列番号１に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、または９５％同一性を有する成熟重鎖可変領域、及び配列番号２に少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、または９５％同一性を有する成熟軽鎖可変領域を有するヒト化抗体である。ＣＤＲは、Ｋａｂａｔに定義される通りである。好ましくは、重鎖可変ドメインフレームワークの以下のアミノ酸残基は、維持され、Ｈ４８がＩにより占められ、Ｈ６７がＡにより占められ、Ｈ６９がＬにより占められ、Ｈ７１がＶにより占められ、Ｈ７３がＲにより占められ、Ｈ９３がＴにより占められ、軽鎖の以下のアミノ酸残基は、維持され、Ｌ２がＦにより占められ、Ｌ３８がＬにより占められる。いくつかの態様では、重鎖の以下のアミノ酸残基が維持され、Ｈ２０がＭにより占められ、Ｈ３８がＫにより占められ、Ｈ４８がＩにより占められ、Ｈ６６がＫにより占められ、Ｈ６７がＡにより占められ、Ｈ６９がＬにより占められ、Ｈ７１がＶにより占められ、Ｈ７３がＲにより占められ、Ｈ８１がＨにより占められ、Ｈ８２ＡがＮにより占められ、Ｈ９３がＴにより占められ、軽鎖可変ドメインフレームワークの以下のアミノ酸残基が維持され、Ｌ２がＦにより占められ、Ｌ３８がＬにより占められる。いくつかの態様では、重鎖可変ドメインフレームワークの以下のアミノ酸残基が存在し、Ｈ２０がＭまたはＶにより占められ、Ｈ３８がＫまたはＲにより占められ、Ｈ４８がＩにより占められ、Ｈ６６がＫまたはＲにより占められ、Ｈ６７がＡにより占められ、Ｈ６９がＬにより占められ、Ｈ７１がＶにより占められ、Ｈ７３がＲにより占められ、Ｈ８１がＥまたはＨにより占められ、Ｈ８２ＡがＳまたはＮにより占められ、Ｈ９３がＴにより占められ、軽鎖可変ドメインフレームワークの以下のアミノ酸残基が存在し、Ｌ２がＦにより占められ、Ｌ１９がＡまたはＶにより占められ、Ｌ２１がＩまたはＭにより占められ、Ｌ２２がＮまたはＳにより占められ、Ｌ３８がＬにより占められる。
したがって、配列番号１に記載される重鎖可変領域と、配列番号２に記載される軽鎖可変領域とを含むヒト化抗体が、本明細書で提供され、それは、Ｈ２０がＭまたはＶにより占められ、Ｈ３８がＫまたはＲにより占められ、Ｈ４８がＩにより占められ、Ｈ６６がＫまたはＲにより占められ、Ｈ６７がＡにより占められ、Ｈ６９がＬにより占められ、Ｈ７１がＶにより占められ、Ｈ７３がＲにより占められ、Ｈ８１がＥまたはＨにより占められ、Ｈ８２ＡがＳまたはＮにより占められ、Ｈ９３がＴにより占められ、軽鎖の以下のアミノ酸残基が存在し、Ｌ２がＦにより占められ、Ｌ１９がＡまたはＶにより占められ、Ｌ２１がＩまたはＭにより占められ、Ｌ２２がＮまたはＳにより占められ、Ｌ３８がＬにより占められることが条件である。
マウスｍ７Ｇ３抗体のヒト化形態は、３つの例示されたヒト化重鎖成熟可変領域（ＨＡ−ＨＣ）と、２つの例示されたヒト化軽鎖成熟可変領域（ＬＡ−ＬＢ）とを含む。これらの鎖の順列は、ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＢＬＡ，ＨＢＬＢ、ＨＣＬＡ、及びＨＣＬＢを含む。これらの順列のうち、ＨＣＬＡが好ましい。ＨＣＬＡは、配列番号１に記載される重鎖と、配列番号２に記載される軽鎖とを含む。しかしながら、ＨＣＬＡの代わりに、ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＢＬＡ，ＨＢＬＢ、及びＨＣＬＢのうちのいずれか１つを使用することができる。
いくつかの態様では、ヒトＣＤ１２３に対するヒト化７Ｇ３抗体の見かけ解離定数（ｋｄ）は、好ましくは、０．１ｎＭ〜１０ｎＭの範囲内、更により好ましくは０．１ｎＭ〜５ｎＭの範囲内、更に好ましくは１ｎＭ〜３ｎＭまたは２ｎＭ〜約３ｎＭの範囲内である。いくつかの態様では、本発明の抗体は、ヒトＣＤ１２３に対するマウス７Ｇ３抗体の見かけ解離定数の０．１〜１．５倍、または更には０．５〜２倍の範囲内の見かけ解離定数を有する。いくつかの態様では、ヒトＣＤ１２３に対する抗体の見かけ解離定数（ｋｄ）は、約２．７である。
Ａ．定常領域の選択
ヒト化７Ｇ３抗体の重鎖及び軽鎖可変領域は、ヒト定常領域の少なくとも一部に連結され得る。定常領域の選択は、一部、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、抗体依存性細胞食作用、及び／または補体依存性細胞傷害性が所望されるかどうかに依存し得る。例えば、ヒトアイソタイプＩｇＧ１及びＩｇＧ３は強い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトアイソタイプＩｇＧ２は弱い補体依存性細胞傷害性を有し、ヒトＩｇＧ４は補体依存性細胞傷害性を欠く。ヒトＩｇＧ１及びＩｇＧ３は、ヒトＩｇＧ２及びＩｇＧ４よりも強い細胞媒介エフェクター機能も誘導する。軽鎖定常領域は、ラムダまたはカッパであり得る。抗体は、２つの軽鎖及び２つの重鎖を含有する四量体として、別個の重鎖、軽鎖として、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖとして、または重鎖及び軽鎖添字ドメインがスペーサーを通して連結される単鎖抗体として発現され得る。
ヒト定常領域は、異なる個体間でアロタイプ多様性及びイソアロタイプ多様性を示す、つまり、定常領域は１つ以上の多型位置で異なる個体において異なり得る。イソアロタイプは、イソアロタイプを認識する血清が１つ以上の他のアイソタイプの非多型領域に結合するという点でアロタイプとは異なる。
重鎖のＣ末端リジンなどの軽鎖及び／もしくは重鎖のアミノまたはカルボキシ末端の１個またはいくつかのアミノ酸は、ある比率で、もしくは分子の全てを欠損するか、または誘導体化され得る。置換は、補体媒介細胞傷害性もしくはＡＤＣＣなどのエフェクター機能を低減または増加させるために（例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、米国特許第５，６２４，８２１号；Ｔｓｏら、米国特許第５，８３４，５９７号；及びＬａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３：４００５，２００６を参照されたい）、あるいはヒトにおける半減期を延長するために（例えば、Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９：６２１３，２００４を参照されたい）定常領域において行われ得る。
定常領域は、薬物−リンカーの部位特異的複合体化を可能にするように修飾され得る。かかる技法は、天然に生じるまたは改変システイン残基、ジスルフィド架橋、ポリ−ヒスチジン配列、糖鎖改変タグ、及びトランスグルタミナ−ゼ認識配列の使用を含む。細菌性トランスグルタミナ−ゼを使用する部位特異的複合体化の例示的な置換は、Ｎ２９７ＳまたはＮ２９７Ｑである。改変システミンを使用する部位特異的複合体化の例示的な置換は、Ｓ２３９Ｃである。抗体断片も薬物−リンカーの部位特異的複合体化のために修飾されてもよく、例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ ２００８；７（８）を参照されたい。
Ｂ．組換え抗体の発現
ヒト化またはキメラ７Ｇ３抗体は、組換え発現により産生され得る。組換えポリヌクレオチド構築物は典型的には、自然に会合した、または異種プロモーター領域を含む、抗体鎖のコード配列に動作可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクターにおける真核プロモーター系である。ベクターが適切な宿主内に組み込まれたら、宿主は高レベルのヌクレオチド配列の発現、ならびに交差反応抗体の回収及び精製に適した条件下で維持される。
哺乳類細胞は、免疫グロブリンまたはその断片をコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好ましい宿主である。Ｗｉｎｎａｃｋｅｒ，Ｆｒｏｍ Ｇｅｎｅｓ ｔｏ Ｃｌｏｎｅｓ，（ＶＣＨ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，ＮＹ，１９８７）を参照されたい。無傷異種タンパク質をスクリーニングすることが可能ないくつかの好適な宿主細胞系が当該技術分野において開発されており、ＣＨＯ細胞系（例えば、ＤＧ４４）、様々なＣＯＳ細胞系、ＨｅＬａ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、Ｌ細胞、及び非抗体産生骨髄腫（Ｓｐ２／０及びＮＳ０を含む）を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターは、複製起点、プロモーター、エンハンサー（Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．８９：４９（１９８６））などの発現制御配列、及びリボソーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位などの必要なプロセシング情報部位、ならびに転写終結配列を含み得る。好ましい発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピロ−マウイルスなどに由来するプロモーターである。Ｃｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１１４９（１９９２）を参照されたい。
発現されたら、抗体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィ−、ゲル電気泳動などを含む、当該技術分野の標準的な手順に従い精製され得る（一般的に、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，ＮＹ，１９８２）を参照されたい）。
ＩＶ．核酸
本発明は、本明細書に記載されるヒト化重鎖及び軽鎖のうちのいずれかをコードする核酸を更に提供する。典型的には、核酸は、成熟重鎖及び軽鎖可変領域に融合した単一ペプチドもコードする。核酸上のコード配列は、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、転写終結シグナルなど、コード配列の発現を確実にするために、調節配列と動作可能な連結にあってもよい。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は単離された形態で生じるか、または１つ以上のベクターにクローニングされ得る。核酸は、例えば、固体状態の合成または重複オリゴヌクレオチドのＰＣＲにより合成され得る。重鎖及び軽鎖をコードする核酸は、例えば発現ベクター内で１つの隣接核酸として結合され得るか、または例えば、各々がそれ自体の発現ベクター内にクローニングされる、別個であり得る。
一実施形態では、本開示は、ＨＡ、ＨＢ、またはＨＣに記載されるアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。例えば、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードし得る。この単離されたポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＧ重鎖定常領域を更にコードし得る。ＩｇＧ定常領域のアイソタイプは、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４である。一実施形態では、ＩｇＧ定常領域のアイソタイプは、ＩｇＧ１である。別の実施形態では、コードされたＩｇＧ１定常領域は、Ｋａｂａｔシステムに記載されるＥＵインデックスに従い、残基２３９、すなわち、Ｓ２３９Ｃに置換を含むアミノ酸配列を有する。本開示は、ＨＡ、ＨＢ、またはＨＣに記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号１またはその変異型）を含む抗体重鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び更にその発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
別の実施形態では、本開示は、ＬＡまたはＬＢに記載されるアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを提供する。例えば、単離されたポリヌクレオチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする。この単離されたポリヌクレオチドは、ヒトＩｇＧ軽鎖定常領域を更にコードし得る。ＩｇＧ軽鎖定常領域のアイソタイプは、例えば、カッパ定常領域である。本開示は、ＬＡまたはＬＢに記載されるアミノ酸配列（例えば、配列番号２またはその変異型）を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドを含む発現ベクター、及び更にその発現ベクターを含む宿主細胞も提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳類宿主細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
別の実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域と、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域とをコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを提供し、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、ヒトＣＤ１２３に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を形成する。本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域、及び配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域をコードする単離されたポリヌクレオチドまたはポリヌクレオチドを含む、発現ベクターも提供する。発現ベクターまたはベクターを含む宿主細胞も提供される。宿主細胞は、好ましくは、哺乳類細胞、例えば、ＣＨＯ細胞である。
別の実施形態では、本開示は、配列番号１のアミノ酸配列を含む抗体重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドと、配列番号２のアミノ酸配列を含む抗体軽鎖可変領域とをコードするポリヌクレオチドを含む第１及び第２のベクターを提供し、重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、ヒトＣＤ１２３に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を形成する。ベクターを含む宿主細胞、好ましくは、ＣＨＯ細胞などの哺乳類宿主細胞が提供される。
Ｖ．抗体−薬物複合体
抗ＣＤ１２３抗体は、細胞傷害部分または細胞増殖抑制部分と複合体化されて、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成し得る。抗体との複合体化のための特に適した部分は、細胞傷害性薬（例えば、化学療法薬）、プロドラッグ変換酵素、放射性同位体もしくは化合物、または毒素（治療薬と総称されるこれらの部分）である。例えば、抗ＣＤ１２３抗体は、化学療法薬等の細胞傷害性薬、または毒素（例えば、細胞増殖抑制もしくは殺細胞薬、例えば、アブリン、リシンＡ、緑膿菌外毒素、またはジフテリア毒素）と複合体化され得る。細胞傷害性薬の有用なクラスの例は、例えば、ＤＮＡ小溝結合、ＤＮＡアルキル化剤、及び微小管破壊剤を含む。例示的な細胞傷害性薬は、例えば、アウリスタチン、カンプトセシン、カリケアマイシン、デュオカルマイシン、エトポシド、マイタンシノイド（例えば、ＤＭ１、ＤＭ２、ＤＭ３、ＤＭ４）、タキサン、ベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）及びビンカアルカロイドを含む。例示的な抗体−薬物複合体は、薬物構成成分がアウリスタチン薬物であるという意味のアウリスタチン系抗体−薬物複合体、薬物構成成分がマイタンシノイド薬物であるという意味のマイタンシノイド抗体−薬物複合体、及び薬物構成成分がベンゾジアゼピン（例えば、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、及びオキサゾリジノベンゾジアゼピン）であるという意味のベンゾジアゼピン抗体−薬物複合体を含む。
治療薬を抗体と複合体化するための技法は周知である。（例えば、Ａｌｌｅｙ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１０ １４：１−９、Ｓｅｎｔｅｒ，Ｃａｎｃｅｒ Ｊ．，２００８，１４（３）：１５４−１６９を参照されたい。）治療薬は、それが抗体を切断しない限り（例えば、加水分解による、タンパク分解による、または切断剤による）、その活性を低減させる方法で複合体化され得る。いくつかの態様では、例えば、治療薬は、複合体が、ＣＤ１２３−発現癌細胞によって内在化されるときに抗体から切断されるように（例えば、エンドソーム環境において、または例えば、ｐＨ感受性もしくはプロテアーゼ感受性により、リソソーム環境において、またはカベオラ（ｃａｖｅｏｌｅａｒ）環境において）、ＣＤ１２３−発現癌細胞の細胞内環境における切断に感受性であるが、細胞外環境に実質的に感受性ではない切断可能なリンカーを有する抗体に結合される。いくつかの態様では、治療薬は、切断可能なリンカーを有する抗体にも結合され得る。
本発明者は、ＰＢＤ薬物−リンカーを含むＣＤ１２３標的ＡＤＣが、ＣＤ１２３−発現障害を治療するために特に効果的であることを発見した。
本発明に使用するための好ましいＰＢＤは、以下：
の通りであるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり、式中、添字ｎは、１または３である。
本発明に使用するための好ましいＰＢＤ薬物−リンカーは、下式Ｉ：
により表されるか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物であり、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数である。
薬物−リンカーのＰＢＤ薬物構成成分の好ましい立体化学は、下式Ｉａに示される通りである。
ＳＧＤ−１９１０ＰＢＤ薬物−リンカーのＰＢＤ薬物及びリンカーの構成成分の好ましい立体化学は、下式Ｉｂに示される通りである。
ＰＢＤ薬物−リンカーは、本発明のヒト化ＣＤ１２３抗体と複合体化されて、以下の式ＩＩ、ＩＩａ、及びＩＩｂに示されるＣＤ１２３標的抗体−薬物複合体：
または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは塩の溶媒和物を産生し、式中、添字ｎは、１または３であり、添字ｍは、２〜５の整数であり、添字ｐは、１〜４である。
例示的な薬物−リンカーは、ＭＭＡＥ薬物−リンカーを含む。側鎖としてポリエチレングリコールポリマーを切断可能なβ−グルクロニドＭＭＡＥ薬物−リンカーに組み込むことにより、非ＰＥＧ化対照と比較したとき、異種移植片モデルにおいて、減少した血漿クリアランス及び増加した抗腫瘍活性を有する抗体薬物複合体が得られる。したがって、本発明の抗体を結合するための特に有益な薬物−リンカーは、以下：
の通りであるか、またはその薬学的に許容される塩である。
かかる薬物−リンカーのための好ましい立体化学は、以下：
に示されるか、またはその薬学的に許容されるに許容される塩であり、式中、式Ｖ及びＶａに関して、Ｚは、抗体上の官能基と反応して、それと共有結合を形成することが可能な反応性部位を有する有機部分を表し、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲であり（最も好ましくは１２）、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
好ましいＺ部分は、マレイミド含有部分である。特に好ましいＺ部分は、以下の薬物−リンカー：
に示されるか、またはその薬学的に許容される塩である。
かかる薬物−リンカーのための好ましい立体化学は、以下：
に示されるか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、式ＶＩ、ＶＩａ、ＶＩＩ、及びＶＩＩａに関して、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲であり（最も好ましくは１２）、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸不安定性保護基、例えば、ＢＯＣであり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈである。
上述のように、ＲＰＲは、水素または保護基であり得る。本明細書で使用される場合、保護基は、一時的または永久的のいずれかで、多官能化合物の反応性部位を選択的に遮断する基を指す。保護基は、分子の他の箇所で所望の化学変換をもたらすのに必要な反応条件下で、及び所望される場合、新しく形成された分子の精製中に望ましくない副反応または保護基の早期喪失を阻止または回避することが可能であり、その新しく形成された分子の構造または立体化学の一体性に悪影響を及ぼさない条件下で除去され得る場合、好適な保護基である。好適なアミン保護基は、Ｉｓｉｄｒｏ−Ｌｌｏｂｅｌ ｅｔ ａｌ．“Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ−ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ ｇｒｏｕｐｓ”Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．（２００９）１０９：２４５５−２５０４により提供されるものを含む、酸不安定性窒素保護基を含む。典型的には、酸不安定性窒素保護基は、一級または二級アミノ基をその対応するカルバメ−トに変換し、ｔ−ブチル、アリル、及びベンジルカルバメ−トを含む。
上述のように、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位である。当業者に理解されるように、ポリエチレングリコ−ル単位は、多種多様の有機部分、典型的には比較的非反応性であるもので末端キャップされ得る。アルキル及び置換アルキル基が好ましく、例えば、−Ｃ１−１０アルキル、−Ｃ２−１０アルキル−ＣＯ２Ｈ、−Ｃ２−１０アルキル−ＯＨ、−Ｃ２−１０アルキル−ＮＨ２、Ｃ２−１０アルキル−ＮＨ（Ｃ１−３アルキル）、またはＣ２−１０アルキル−Ｎ（Ｃ１−３アルキル）２を含む。
一般に、ペグ化ＭＭＡＥ薬物−リンカーに関して、各抗体に１〜１６の薬物−リンカーが結合される。
薬物負荷−「ｐ」
式ＩＩ、ＩＩａ、及びＩＩｂのＣＤ１２３標的−薬物複合体を参照すると、添字ｐは、抗体分子に対する薬物負荷（抗体分子に結合された薬物の分子数）を表し、整数値である。抗体−薬物複合体分子の集団を含む組成物において、平均薬物負荷（例えば、集団における抗体当たりの薬物−リンカー分子の平均数）は、標的細胞に送達され得る薬物の量を決定するため、重要な品質特性である。平均薬物負荷は、整数値または非整数値であってもよいが、典型的には非整数値である。任意の平均薬物負荷は、薬物または薬物−リンカーの組み合わせの同一性によって変動する。
抗体−薬物複合体組成物の不均質は、いくつかの態様では、薬物−リンカー分子を抗体分子と複合体化するために使用される複合体化技術に依存する。例えば、いくつかの態様では、薬物−リンカー分子を抗体分子と複合体化するために使用される複合体化技術は、抗体上での薬物−リンカー分子の分布に関して、及び／または抗体分子上での薬物−リンカーの数に関して不均一である抗体−薬物複合体組成物をもたらす（例えば、非部位特異的技術を使用して鎖間ジスルフィドを介して複合体化するとき）。他の態様では、薬物−リンカー分子を複合体化するために使用される複合体化技術は、リガンド分子上での薬物−リンカー分子の分布に関して、及び／または抗体分子上での薬物−リンカー分子の数に関して実質的に均一である抗体−薬物複合体組成物をもたらす（例えば、部位特異的複合体化技術を使用するとき）。部位特異的及び非部位特異的方法の両方で、典型的に、非複合体化抗体分子の低いパーセントもみられる。非複合体化抗体分子のパーセントは、平均薬物負荷値に含まれる。
本発明の好ましい態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団を含む組成物を指すとき、平均薬物負荷は、約２〜約１４、好ましくは約２〜約１０である。本明細書に例示されるものなど、ＰＢＤ抗体薬物複合体に関して、特に好ましい平均薬物負荷は、約２である。いくつかの態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜４、１〜３、または１〜２であり、主要薬物負荷は２である。好ましい態様では、約２の平均薬物負荷は、部位特異的複合体化技法（例えば、抗体に導入された改変システミン）を介して得られる。
本発明のいくつかの他の態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団を含む組成物を指すとき、平均薬物負荷は、約３〜約４であり、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜８である。
本明細書に例示されるものなど、ＭＭＡＥ ＰＥＧ化ＡＤＣに関して、特に好ましい平均薬物負荷は、約８である。例示的な実施形態では、薬物−リンカーは、還元鎖間ジスルフィドのシステミン残基と複合体化される。いくつかの態様では、抗体−薬物複合体化合物の集団における個々の抗体分子の実際の薬物負荷は、１〜１０（または６〜１０、または６〜８）であり、主要薬物負荷は８である。例えば、鎖間ジスルフィドに加えて、薬物−リンカーが導入されたシステイン残基（ＥＵインデックスに従う位置２３９に導入されたシステイン残基など）と複合体化される場合、より高い薬物負荷を得ることができる。
例示的なＡＤＣは、以下：
を含むか、またはその薬学的に許容される塩であり、式中、ｎは、８〜３６の範囲、最も好ましくは８〜１４の範囲（最も好ましくは１２）であり、ＲＰＲは、水素または保護基、例えば、酸不安定性保護基、例えば、ＢＯＣであり、Ｒ２１は、ポリエチレングリコール部分のキャッピング単位、好ましくは−ＣＨ３または−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２Ｈであり、Ａｂは、抗ＣＤ４８抗体を表し、ｐは、個々の抗体分子を指す場合、１〜１６、好ましくは１〜１４、６〜１２、６〜１０、または８〜１０の範囲の整数を表し、抗体分子の集団を指す場合、約４または約６〜約１４、好ましくは約８の平均薬物負荷を表す。
上述のように、薬物リンカーのＰＥＧ（ポリエチレングリコ−ル）部分は、８〜３６の範囲であり得るが、１２エチレンオキシド単位のＰＥＧが特に好ましいことが分かった。より長いＰＥＧ鎖は、より緩徐なクリアランスをもたらし得る一方で、より短いＰＥＧ鎖は縮小した活性をもたらし得ることが分かった。したがって、上記の実施形態の全てにおいて、添字ｎは、好ましくは８〜１４、８〜１２、１０〜１２、または１０〜１４であり、最も好ましくは１２である。
多分散ＰＥＧＳ、単分散ＰＥＧＳ、及び個別のＰＥＧは、本発明のＰＥＧ化抗体薬物複合体を作製するために使用され得る。多分散ＰＥＧは、不均質なサイズ及び分子量の混合物である一方で、単分散ＰＥＧは、典型的には、不均質な混合物から精製され、したがって、単一の鎖長及び分子量を提供する。好ましいＰＥＧ単位は、段階的に合成され、重合プロセスを介さない化合物である、個別のＰＥＧである。個別のＰＥＧは、規定の及び特定の鎖長を有する単一分子を提供する。添字「ｐ」と同様に、抗体−薬物複合体の集団を指す場合、添字「ｎ」の値は平均数であってもよく、整数または非整数であってもよい。
好ましい実施形態では、抗体の薬物−リンカーへの共有結合は、薬物リンカーのマレイミド官能基と相互作用して、チオ置換スクシンイミドを形成する抗体のスルフヒドリル官能基を通して達成される。スルフヒドリル官能基は、リガンドの天然状態、例えば、天然に生じる残基（鎖間ジスルフィド残基）におけるリガンド単位上に存在し得るか、または化学修飾を介して、もしくは生物学的改変により、もしくはその２つの組み合わせでリガンドに導入され得る。抗体置換スクシンイミドが加水分解形態（複数可）で存在し得ることが理解される。例えば、好ましい実施形態では、ＡＤＣは、抗体に結合されたとき、
の構造により表されるスクシンイミド部分で構成されるか、または抗体に結合されたとき、
または
波線は、薬物−リンカーの残部への連結を示す。
複合体化反応からの製剤におけるリガンド単位当たりの薬物−リンカー単位の平均数は、質量分析，ＥＬＩＳＡアッセイ、ＨＩＣ、及びＨＰＬＣ等の常法によって特徴付けられ得る。ｐに関するリガンド−リンカー−薬物複合体の量的分布も決定され得る。場合によっては，ｐが他の薬物負荷を有するリガンド−薬物複合体からの一定値である、均質のリガンド−薬物複合体の分離、精製、及び特徴付けは、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動等の手段によって達成され得る。
ＶＩ．治療の適用
本明細書に記載されるＣＤ１２３標的抗体−薬物複合体は、ＣＤ１２３発現癌などのＣＤ１２３発現障害を治療するために使用され得る。典型的には、かかる癌は、タンパク質（例えば、免疫アッセイにより）またはＲＮＡレベルで測定された検出可能レベルのＣＤ１２３を示す。いくつかのかかる癌は、同じ種類、好ましくは同じ患者からの非癌性組織に対して上昇したレベルのＣＤ１２３を示す。任意選択で、癌におけるＣＤ１２３のレベルは、治療を行う前に測定される。
ＣＤ１２３発現と関係がある癌の例は、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）及び骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）等の骨髄疾患を含む。他の癌は、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、ファンコニ貧血、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、ホジキン病、未熟Ｔ細胞急性リンパ性白血病（未熟Ｔ−ＡＬＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、またはマントル細胞リンパ腫を含む。
本発明の方法は、患者に本発明の抗体−薬物複合体を投与することを含む、ＣＤ１２３を発現する癌を有する患者を治療することを含む。癌は、いかなるＣＤ１２３発現癌でもあり得、例えば、ＡＭＬ、ＭＤＳ、Ｂ−ＡＬＬ、有毛細胞白血病、ファンコニ貧血、ＢＰＤＣＮ、ホジキン病、未熟Ｔ−ＡＬＬ、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、ＣＬＬ、またはマントル細胞リンパ腫を含む。
いくつかの癌細胞は、タンパク質の増加する発現が癌細胞からの治療薬の流出を増加させた後、治療薬への耐性を持つ。そのようなタンパク質は、Ｐ−糖タンパク質、多剤耐性関連タンパク質、肺耐性関連タンパク質、及び乳癌耐性タンパク質を含む。癌細胞における薬物体制の検出は、業者によって行われることができる。流出タンパク質を検出する抗体またはアッセイは、例えば、Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ａｂｃａｍ、及びＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから市販される。本方法によって治療される癌は、ＣＤ１２３を発現するマルチ耐性癌であり得る。いくつかの態様では、癌は、多剤耐性ＣＤ１２３＋ＡＭＬである。
ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体は、有効なレジメン、つまり、癌の少なくとも１つの徴候または症状の発症を遅延する、その重症度を低減する、その更なる悪化を阻害する、及び／またはそれを寛解する投薬量、投与経路、及び投与頻度で投与される。
ＣＤ１２３指向複合体の例示的な投薬量は、約１．０μｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、１．０μｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ〜約１．０ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、約１．０μｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ、または約１．０μｇ／ｋｇ〜５００．０μｇ／ｋｇ、または約１．０μｇ／ｋｇ〜８０．０、１００．０、もしくは２００．０μｇ／ｋｇを含む。
ＣＤ１２３指向ＰＢＤ複合体の例示的な投薬量は、一般的に、約１．０μｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ、または約１．０μｇ／ｋｇ〜５００．０μｇ／ｋｇ、または約１．０μｇ／ｋｇ〜８０．０、１００．０、もしくは２００．０μｇ／ｋｇであるが、代替の投薬量が想定される。
投与は、様々な投与経路によるものであってよい。ある特定の実施形態では、複合体は、静脈内、筋肉内、または皮下など、非経口投与される。癌の治療のためのＡＤＣの投与に関して、静脈内または皮下投与による全身循環への送達であり得る。特定の実施形態では、投与は、静脈内送達を介したものである。静脈内投与は、例えば、３０〜９０分などの期間にわたる注入により、または単一ボ−ラス注射によるものであり得る。いくつかの態様では、投与は、末梢挿入中心カテーテルにおける緩徐なＩＶプッシュ（すなわち、３０〜６０秒にわたって）を介したものである。
投与頻度は、患者がヒトまたは動物にかかわらず、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、及び投与される他の薬剤を含む、多くの異なる要因に依存する。頻度は、患者の状態または治療される癌の進行の変化に応じて、毎日、毎週、毎月、３ヶ月ごと、または不規則な間隔であり得る。静脈内投与の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって週に２回〜３ヶ月ごとであるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。静脈内投与の他の例示的な頻度は、継続的な治療過程にわたって３週間ごと、または毎週もしくは毎月の間であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。皮下投与に関して、例示的な投薬頻度は、毎日〜毎月であるが、より頻繁な、またはより少ない頻度の投薬も可能である。
非経口投与用の薬学的組成物は、好ましくは、減菌かつ実質的に等張性であり、ＧＭＰ状態下で製造される。薬学的組成物は、単位剤形で（すなわち、単一投与用の投薬量）提供され得る。薬学的組成物は、１つ以上の生理学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、または助剤を使用して製剤化され得る。製剤は、選択される投与経路による。注射に関して、複合体は、水性溶液、好ましくはハンクス液、リンゲル液、もしくは生理学的生理食塩水などの生理学的に適合性の緩衝液、または酢酸緩衝液（注射部位の不快感を低減するため）に製剤化され得る。溶液は、懸濁剤、安定剤、及び／または分散剤などの製剤用作用物質を含有し得る。あるいは、本抗体は、使用前に、好適なビヒクル、例えば、減菌発熱物質不含水で構築するために、凍結乾燥形態であり得る。液体製剤中の複合体の濃度は、広く変動し得る。いくつかの態様では、ＡＤＣは、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、約２ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌ、または約２ｍｇ／ｍｌ〜約５ｍｇ／ｍｌの濃度で存在する。
本発明の複合体を用いた治療は、化学療法、放射線、幹細胞治療、外科手術、及び治療される特定の障害の標準治療を含む、治療される障害に対して有効な他の治療と組み合わせることができる。したがって、本発明は、単独療法としての、または例えば、本明細書に記載される疾患及び障害の標準療法もしくは治験薬との併用療法での、かかる疾患及び障害の治療方法を包含する。癌の治療方法は、それを必要とする患者に、追加の抗癌剤または癌を治療するための他の薬剤と組み合わせて、有効量の本発明のＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体を投与することを含む。
併用療法の一例は、７日間のシタラビン及び３日間の（これらに限定されない）ダウノルビシンまたはイダルビシン等のアントラサイクリンを伴う７＋３レジメンを含む。実施形態では、シタラビン及びアントラサイクリンの７＋３レジメンは、本発明のＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体との併用療法で施される。更なる実施形態では、シタラビン及びアントラサイクリンの７＋３レジメンは、本発明のヒト化７Ｇ３抗体−薬物複合体との併用療法で施される。更なる実施形態では、シタラビン及びアントラサイクリンの７＋３レジメンは、本発明のｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０との併用療法で施される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体及び７＋３レジメンの組み合わせは、６０歳以下の患者に適用される。
併用療法の別の例は、上述される７＋３レジメン、更にクラドリビンを含む。実施形態では、７＋３レジメン、更にクラドリビンは、本発明のＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体との併用療法で施される。更なる実施形態では、７＋３レジメン、更にクラドリビンは、本発明のヒト化７Ｇ３抗体−薬物複合体との併用療法で施される。更なる実施形態では、７＋３レジメン、更にクラドリビンは、本発明のｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０との併用療法で施される。
併用療法の別の例は、（これらに限定されない）デシタビンまたはアザシチジン等の低メチル化剤を含む。実施形態では、低メチル化剤は、本発明のＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、低メチル化剤は、本発明のヒト化７Ｇ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。更なる実施形態では、低メチル化剤は、本発明のｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０との併用療法で投与される。
いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体及び低メチル化剤の組み合わせは、投薬を受けていない患者、従来の治療が無効である患者、またはそのような治療への反応後に再発した患者に適用される。いくつかの実施形態では、ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体及び低メチル化剤の組み合わせは、高齢の患者、例えば、６０歳以上の患者を治療するために使用される。他の病弱または虚弱な患者、例えば、拒否する患者、または標準誘導／併用処理の対象とならない患者は、ＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体及び低メチル化剤の組み合わせを使用して治療され得る。加えて、高リスクの疾病特性を有する高齢の患者も、強化化学療法で見られる利益の欠如を前提として、本組み合わせを使用して治療され得る。高リスクの疾病特性は、知られていて、例えば、Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．Ｌｅｕｋｅｍｉａ２８：５０−５８（２０１４）に述べられる。
併用療法のための他の薬剤及びレジメンは、シタラビン、高用量シタラビン、ヒドロキシウレア、クロファラビン、ミトキサントロン、フルダラビン、トポテカン、エトポシド、ＭＥＣ（ミトキサントロン、エトポシド、及び、シタラビン）、ＣＬＡＧ−Ｍ（クラドリビン、シタラビン、ミトキサントロン、及びフィルグラスチム）、及びＦＬＡＧ−ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、イダルビシン、及びフィルグラスチム）を含む。実施形態では、ヒドロキシウレア、クロファラビン、ミトキサントロン、フルダラビン、トポテカン、エトポシド、ＭＥＣ（マイトマイシン、エトポシド、及びシタラビン）、ＣＬＡＧ−Ｍ（クラドリビン、シタラビン、ミトキサントロン、及びフィルグラスチム）、及びＦＬＡＧ−ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、イダルビシン、及びフィルグラスチム）のうちの１つが、本発明のＣＤ１２３指向抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。
更なる実施形態では、シタラビン、高用量シタラビン、ヒドロキシウレア、クロファラビン、ミトキサントロン、フルダラビン、トポテカン、エトポシド、ＭＥＣ（ミトキサントロン、エトポシド、及びシタラビン）、ＣＬＡＧ−Ｍ（クラドリビン、シタラビン、ミトキサントロン、及びフィルグラスチム）、及びＦＬＡＧ−ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、イダルビシン、及びフィルグラスチム）のうちの１つが、本発明のヒト化７Ｇ３抗体−薬物複合体との併用療法で投与される。
更なる実施形態では、シタラビン、高用量シタラビン、ヒドロキシウレア、クロファラビン、ミトキサントロン、フルダラビン、トポテカン、エトポシド、ＭＥＣ（ミトキサントロン、エトポシド、及びシタラビン）、ＣＬＡＧ−Ｍ（クラドリビン、シタラビン、ミトキサントロン、及びフィルグラスチム）、及びＦＬＡＧ−ＩＤＡ（フルダラビン、シタラビン、イダルビシン、及びフィルグラスチム）のうちの１つが、本発明のｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０との併用療法で投与される。
本発明の任意の特徴、工程、要素、実施形態、または態様は、具体的に別途記載のない限り、任意のその他と組み合わせて使用され得る。本発明は、明確性及び理解の目的のため、図示及び例によりある程度詳細に記載されてきたが、ある特定の変更及び修正が付属の特許請求の範囲の範囲内で実践され得ることは明らかであろう。
本発明は、例えば以下の実施形態を包含する：
［実施形態１］下式：
〔式中、
添字ｎが１または３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ１２３無傷抗体またはその抗原結合断片であり、
添字ｐが１〜４の整数である。〕
を有する抗ＣＤ１２３抗体−薬物複合体化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
［実施形態２］下式：
を有する実施形態１に記載の化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
［実施形態３］下式：
を有する実施形態１に記載の化合物、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物。
［実施形態４］ｎが１である、実施形態１〜３のいずれかに記載の化合物。
［実施形態５］ｎが３である、実施形態１〜３のいずれかに記載の化合物。
［実施形態６］ｍが５である、実施形態１〜５のいずれかに記載の化合物。
［実施形態７］Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、実施形態１〜６のいずれかに記載の化合物。
［実施形態８］Ａｂが、ヒト重鎖定常領域に融合した配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ヒト軽鎖定常領域に融合した配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、実施形態１〜７のいずれかに記載の化合物。
［実施形態９］Ａｂが、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、Ａｂへの結合は、ＥＵインデックス付番システムに従う前記重鎖定常領域の位置２３９の硫黄原子または改変システイン残基を介する、実施形態８に記載の化合物。
［実施形態１０］ｐが２である、実施形態１〜９のいずれかに記載の化合物。
［実施形態１１］下式：
〔式中、
添字ｎが１〜３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ１２３無傷抗体またはその抗原結合断片であり、
添字ｐが１〜４の整数である。〕
を有する抗ＣＤ１２３抗体−薬物複合体分子、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物の集団を含む薬学的組成物であって、前記組成物の平均薬物負荷が約２である、薬学的組成物。
［実施形態１２］前記抗体−薬物複合体分子が、下式：
を有するか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、実施形態１１に記載の薬学的組成物。
［実施形態１３］前記抗体−薬物複合体分子が、下式：
を有するか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、実施形態１１に記載の薬学的組成物。
［実施形態１４］ｎが１である、実施形態１１〜１３のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態１５］ｎが３である、実施形態１１〜１３のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態１６］ｍが５である、実施形態１１〜１５のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態１７］Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、実施形態１１〜１６のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態１８］Ａｂが、ヒト重鎖定常領域に融合した配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ヒト軽鎖定常領域に融合した配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、実施形態１１〜１７のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態１９］Ａｂが、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、Ａｂへの結合は、ＥＵインデックス付番システムに従う前記重鎖定常領域の位置２３９の硫黄原子または改変システイン残基を介する、実施形態１８に記載の薬学的組成物。
［実施形態２０］ｐが１または２である、実施形態１１〜１９のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態２１］水性形態にある、実施形態１１〜２０のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態２２］凍結乾燥形態にある、実施形態１１〜２０のいずれかに記載の薬学的組成物。
［実施形態２３］下式：
〔式中、
添字ｎが１〜３であり、
添字ｍが２〜５であり、
Ａｂが、配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む抗ＣＤ１２３無傷抗体またはその抗原結合断片であり、
添字ｐが１〜４の整数である。〕
を有する抗ＣＤ１２３抗体−薬物複合体分子、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物の集団を含む抗体−薬物複合体組成物であって、前記組成物の平均薬物負荷が約２である、組成物。
［実施形態２４］前記抗体−薬物複合体分子が、下式：
を有するか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、実施形態２３に記載の組成物。
［実施形態２５］前記抗体−薬物複合体分子が、下式：
を有するか、または薬学的な塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、実施形態２３に記載の組成物。
［実施形態２６］ｎが１である、実施形態２３〜２５のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２７］ｎが３である、実施形態２３〜２５のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２８］ｍが５である、実施形態２３〜２７のいずれかに記載の組成物。
［実施形態２９］Ａｂへの結合が、Ａｂの改変システイン残基の硫黄原子を介する、実施形態２３〜２８のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３０］Ａｂが、ヒト重鎖定常領域に融合した配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、ヒト軽鎖定常領域に融合した配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、実施形態２３〜２９のいずれかに記載の組成物。
［実施形態３１］Ａｂが、配列番号３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含み、Ａｂへの結合は、ＥＵインデックス付番システムに従う前記重鎖定常領域の位置２３９の硫黄原子または改変システイン残基を介する、実施形態３０に記載の組成物。
［実施形態３２］配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域とを含む、抗ＣＤ１２３無傷抗体またはその抗原結合断片。
［実施形態３３］前記重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合し、前記軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合している、実施形態３２に記載の抗体。
［実施形態３４］配列番号３に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖と、配列番号４に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖とを含む、実施形態３２に記載の抗体。
［実施形態３５］ＣＤ１２３を発現する癌を有する患者を治療する方法であって、実施形態１１〜２１のいずれかに記載の薬学的組成物の有効なレジメンを前記患者に投与することを含む、方法。
［実施形態３６］前記癌が、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）である、実施形態３５に記載の方法。
［実施形態３７］前記癌が、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、Ｂ細胞急性リンパ性白血病（Ｂ−ＡＬＬ）、有毛細胞白血病、ファンコニ貧血、芽球形質細胞様樹状細胞腫瘍（ＢＰＤＣＮ）、ホジキン病、未熟Ｔ細胞急性リンパ性白血病（未熟Ｔ−ＡＬＬ）、バーキットリンパ腫、濾胞性リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、またはマントル細胞リンパ腫である、実施形態３５に記載の方法。
［実施形態３８］細胞傷害性薬と複合体化される、実施形態３２〜３４のいずれかに記載の無傷抗体または抗原結合断片。
［実施形態３９］前記細胞傷害性薬が、マイタンシノイド、アウリスタチン、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、またはオキサゾリジノベンゾジアゼピンである、実施形態３８に記載の無傷抗体または抗原結合断片。
［実施形態４０］実施形態３８または３９に記載の無傷抗体またはその抗原結合断片を含む、薬学的組成物。
［実施形態４１］配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有するが、Ｈ２０がＭまたはＶにより占められ、Ｈ３８がＫまたはＲにより占められ、Ｈ４８がＩにより占められ、Ｈ６６がＫまたはＲにより占められ、Ｈ６７がＡにより占められ、Ｈ６９がＬにより占められ、Ｈ７１がＶにより占められ、Ｈ７３がＲにより占められ、Ｈ８１がＥまたはＨにより占められ、Ｈ８２ＡがＳまたはＮにより占められ、Ｈ９３がＴにより占められることが条件である、重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有するが、Ｌ２がＦにより占められ、Ｌ１９がＡまたはＶにより占められ、Ｌ２１がＩまたはＭにより占められ、Ｌ２２がＮまたはＳにより占められ、Ｌ３８がＬにより占められることが条件である、軽鎖可変領域と、を含む、抗ＣＤ１２３無傷抗体またはその抗原結合断片。
［実施形態４２］ＨＡＬＡ、ＨＡＬＢ、ＨＢＬＡ、ＨＢＬＢ、またはＨＣＬＢである、実施形態４１に記載の無傷抗体またはその抗原結合断片。
［実施形態４３］前記重鎖可変領域が、重鎖定常領域に融合し、前記軽鎖可変領域が、軽鎖定常領域に融合している、実施形態４１または４２に記載の抗体。
［実施形態４４］細胞傷害性薬と複合体化される、実施形態４１〜４３のいずれかに記載の無傷抗体または抗原結合断片。
［実施形態４５］前記細胞傷害性薬が、マイタンシノイド、アウリスタチン、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、またはオキサゾリジノベンゾジアゼピンである、実施形態４４に記載の無傷抗体または抗原結合断片。
［実施形態４６］前記細胞傷害性薬が、下式：
〔式中、添字ｎが１または３である。〕
またはその薬学的に許容される塩、溶媒和物、もしくは前記塩の溶媒和物である、実施形態４５に記載の無傷抗体または抗原結合断片。
［実施形態４７］実施形態４４または４５または４６に記載の無傷抗体またはその抗原結合断片を含む薬学的組成物。
方法
競合結合アッセイ
１０万個のＣＤ１２３−陽性細胞を、９６−ウェルプレートに移動させ、非標識されたハイブリッドのヒト化またはマウス７Ｇ３ｍＡｂの濃度を増加して（０．０１ｎｍ〜６８０ｎＭ）、５ｎＭのＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８標識されたｍ７Ｇ３とともに氷上で１時間インキュベートした。細胞を遠心分離し、ＰＢＳで３回洗浄し、１２５μＬのＰＢＳ＋１％ＢＳＡ溶液に再懸濁した。蛍光を、フローサイトメーターを使用して分析し、飽和蛍光信号の割合を使用して、割合標識された７Ｇ３ｍＡｂ結合を決定した。ＥＣ５０を、可変勾配を有するＳ字形用量反応曲線に適合させることによって外挿した。
飽和結合アッセイ
１０万個のＣＤ１２３−陽性細胞（ヒトまたはカニクイザルＣＤ１２３を発現するようにトランスフェクトされたＨＥＫ−２９３Ｆ細胞）を９６−ウェルプレートに移動させた。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ−４８８標識されたＣＤ１２３ｍＡｂを１２５０ｎＭ〜１３．５ｐＭの範囲の濃度で添加し、細胞を３０分間、氷上でインキュベートした。細胞を遠心分離でペレット化し、ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ溶液で３回洗浄し、１２５μＬｎｏＰＢＳ＋１％ＢＳＡに再懸濁した。蛍光を、フローサイトメーターを使用して分析し、飽和蛍光信号の割合を使用して、割合結合を決定し、続いて、見かけのＫｄを計算した。
インビトロ細胞毒性分析
ＡＭＬ細胞系または原発性ＡＭＬ細胞を３７℃で９６時間、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）で処理した。いくつかの実験では、非抗原結合ＡＤＣを陰性対照として含めた。細胞系の細胞生存性は、メーカーの説明に従ってＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を使用して測定した。細胞をＣｅｌｌｔｉｔｅｒＧｌｏ試薬とともに室温で２５分インキュベートし、発光をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｗａｌｔｈａｍ，ＭＡ）上で測定した。原発性ＡＭＬ細胞に関して、ＡＭＬ芽球の生存性を、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ及びプロピジウムイオダイド染色を使用してフローサイトメトリーによって測定した。結果は、ビヒクル処理細胞と比較して生存性における５０％の減少（対照＝１００％）を得るために必要な化合物の濃度であるＩＣ５０として報告される。
インビボ活性試験
皮下ＡＭＬモデル
ＳＣＩＤマウスに５×１０６ＴＨＰ−１または２×１０６ＫＧ−１ＡＭＬ腫瘍細胞を皮下接種した。腫瘍成長をキャリパーで監視し、平均腫瘍体積を、式（０．５×［長さ×幅２］）を使用して計算した。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウス（ｎ＝８／群）を未処理にしたか、またはＣＤ１２３ＡＤＣもしくは非結合対照ＡＤＣの単一投与を腹腔内に行った。ＫＧ−１モデルに関して、マウスを、ＡＭＬ細胞上での試験ＡＤＣの、Ｆｃ受容体との相互作用を最小限にするために、治療薬の投与４時間前に、マウスをヒトＩＶＩｇ（１０ｍｇ／ｋｇの単一腹腔内注射）で処理した。マウスは、腫瘍体積が約１０００ｍｍ３に達したときに屠殺された。全ての動物処置は、実験動物管理の評価と認定協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）によって認可を受けた施設における動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されたプロトコルの下で行われた。
抗体−薬物複合体の産生
抗体−薬物複合体を、本明細書に記載される抗ＣＤ１２３抗体を使用してＷＯ２０１１／１３０６１３に記載される通りに調製した。ＩｇＧ１ｍＡｂのシステイン突然変異体の調製は、概して、ＵＳ２０１０／０１５８９０９に記載される。薬物−リンカーＳＧＤ−１９１０を、抗体のＩｇＧ１鎖の位置２３９に導入されたシステイン残基のチオール基を介して抗ＣＤ１２３抗体と複合体化し、平均薬物負荷は、抗体当たり約２薬物であった。２３９位置のシステインを有する抗体は、指定ＥＣを持つ。
結果
ヒト化ｍＡｂの設計及び試験
いくつかのヒト化７Ｇ３抗体は、ヒトアクセプター配列として、ｈＩＧＨｖ１−２．０２／ＩＧＨＪ１．０１重鎖可変領域ヒト生殖系列及びｈＩＧＫｖ４−１．０１／ＩＧＨＪ２．０１軽鎖可変領域ヒト生殖系列を使用して構築された。本抗体は、マウス抗体に戻して突然変異されるアミノ酸残基の選択またはマウス生殖系列配列において異なった。ＨＣＬＡ（配列番号１に記載される重鎖（ｖＨＣ）及び配列番号２に記載される軽鎖（ｖＬＡ）と命名された抗体は、他の変異型と比較したときのその（ｉ）結合特性、（ｉｉ）薬物を送達する能力、及び（ｉｉｉ）逆突然変異の数に基づいて、リードヒト化７Ｇ３抗体として選択された。
ＨＡＬＡ（ｖＨＡと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＡと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＡＬＢ（ｖＨＡと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＢＬＡ（ｖＨＢと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＡと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＢＬＢ（ｖＨＢと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）、ＨＣＬＢ（ｖＨＣと命名された重鎖可変領域と、ｖＬＢと命名された軽鎖可変領域とを有する抗体）と命名された抗体が、本発明において、ＨＣＬＡ抗体の代わりに使用され得る。ｖＨＡ、ｖＨＢ、ｖＨＣ、ｖＬＡ、及びｖＬＢ配列に関しては図５及び６を参照されたい。７Ｇ３のキメラ及び様々なヒト化形態の結合親和性は、ＣＤ１２３−発現ＡＭＬ細胞系（表１）またはヒトまたはｃｙｎｏ ＣＤ１２３を過剰発現するＨＥＫ２９３細胞（表２）に対して試験されたか否かにかかわらず、類似する。
ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０のインビトロ抗腫瘍活性
ＳＧＤ−１９１０（ピロロベンゾジアゼピン二量体薬物−リンカー）と複合体化されたｈ７Ｇ３ＥＣ抗体の細胞傷害性活性を、ＣＤ１２３及びＣＤ３３両方を発現したＡＭＬ細胞系のパネルに対して評価した。活性を、ＳＧＤ−１９１０（ＣＤ３３−ＳＧＤ−１９１０）と複合体化された抗ＣＤ３３抗体の活性と比較した。表３に示される通り、ＡＭＬ細胞系は、概して、ＣＤ３３と比較してＣＤ１２３のより低いコピー数を表した。ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０ＡＤＣは、１１個のＣＤ１２３−陽性ＡＭＬ細胞系のうちの１０個に対して活性であったが（応答細胞系に対する平均ＩＣ５０、０．０２〜３８ｎｇ／ｍｌの範囲で７ｎｇ／ｍｌ）、ＣＤ３３−ＳＧＤ−１９１０は、試験した１２個のＡＭＬ細胞系のうちの１２個に対して強力な活性を有した（平均ＩＣ５０、０．０４〜１８１ｎｇ／ｍｌの範囲で２６ｎｇ／ｍｌ）図１及び２は、ＣＤ３３と比較してＣＤ１２３の低いコピーを表した２つのＭＤＲ−陽性ＡＭＬ細胞系に対するｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の強力な活性を示す。ＫＧ１−ＩＮＶ細胞系は、ＣＤ３３の７３００コピーと比較して、ＣＤ１２３の５０００コピーを表す。Ｋａｓｕｍｉ−１細胞系は、ＣＤ３３の１６０００コピーと比較して、ＣＤ１２３の２０００コピーを表す。ＣＤ１２３を発現しなかったＨＥＬ９２１７ＡＭＬ細胞系に対して、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０では、細胞傷害性活性が観察されなかった。更に、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０は、ＡＭＬ患者から単離された１７個の一次サンプルのうちの１５個に対して活性であることが分かった（表４を参照されたい。応答サンプルに対する平均ＩＣ５０、０．０６〜６．５ｎｇ／ｍｌの範囲で１ｎｇ／ｍｌ）。比較すると、ＣＤ３３−ＳＧＤ−１９１０は、１７個の原発性ＡＭＬサンプルのうちの１０個に対して活性であった（応答サンプルに対する平均ＩＣ５０、０．２３〜７．７ｎｇ／ｍｌの範囲で２ｎｇ／ｍｌ）。非結合ＡＤＣをＡＭＬ細胞系または原発性ＡＭＬサンプルに対して試験したとき、活性は観察されなかった（ＩＣ５０＞１０００ｎｇ／ｍｌ）。要するに、これらのデータは、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０がＣＤ１２３−発現細胞を選択的に標的とし、ＭＤＲ状態にかかわらずＡＭＬ細胞系及び原発性ＡＭＬ患者のサンプルに対して強力な細胞傷害性活性を示すことを証明する。
ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０のインビボ抗腫瘍活性
ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の活性を、２つの皮下ＡＭＬ異種移植片モデル、ＴＨＰ−１及びＫＧ−１において試験した。確立された（〜１００ｍｍ３）腫瘍を持つＳＣＩＤマウスに、ＭＤＲ−陰性ＴＨＰ−１モデルに関しては図３に（ＣＤ１２３の８０００コピー；ＣＤ３３の１８０００コピー）、ＭＤＲ−陽性ＫＧ−１腫瘍モデルに関しては図４に（ＣＤ１２３の７０００コピー、ＣＤ３３の２００００コピー）示される通り、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０または非結合対照ＡＤＣ（ｈ００ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０）を投与した。ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０での処理は、未処理及び非結合対照ＡＤＣ処理マウスと比較して、腫瘍成長を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）。ＣＤ１２３−標的ＡＤＣで観察された抗腫瘍活性は、用量依存性であった。ＴＨＰ−１腫瘍に関して、０．１ｍｇ／ｋｇの単一投与は、８匹の処理マウスのうちの２匹において完全かつ永続的な腫瘍退縮をもたらした（図３）。０．３ｍｇ／ｋｇのより高い用量は、８匹の処理マウスのうちの８匹において完全かつ永続的な腫瘍退縮をもたらし、腫瘍が４倍になる平均日数は、８５日目の試験最終日まで達成されなかった。ＭＤＲ−陽性ＫＧ−１腫瘍モデル（図４）では、０．１ｍｇ／ｋｇのｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の単一投与は、８匹の処理マウスのうちの１匹において完全かつ永続的な腫瘍退縮をもたらした。一方、０．３ｍｇ／ｋｇの単一投与は、８匹の処理マウスのうち、１つの完全な退縮、及び３つの完全かつ永続的な腫瘍退縮を得た（未処理マウスと比較してｐ＜０．００８）。対照的に、同様に非結合対照ＡＤＣ（ｈ００ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０）を投与されたマウスの腫瘍は、３５日目までに体積が４倍になり、未処理マウスと有意に異ならなかった。０．１ｍｇ／ｋｇまたは０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ３３−ＳＧＤ−１９１０を投与されたマウスの抗腫瘍反応は、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の反応と同様であった（図４）。データは、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０が、ＣＤ３３と比較してより低いＣＤ１２３抗原レベルを表すＡＭＬ異種移植片モデルにおいて有意な用量依存的抗腫瘍活性を示すことを証明した。
追加のインビボＡＭＬモデル
方法
皮下ＡＭＬモデル
ＳＣＩＤマウスに５×１０６ＨＮＴ−３４ＡＭＬ腫瘍細胞を皮下接種した。腫瘍成長をキャリパーで監視し、平均腫瘍体積を、式（０．５×［長さ×幅２］）を使用して計算した。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウス（ｎ＝８／群）を未処理にしたか、またはＣＤ１２３ＡＤＣもしくは非結合対照ＡＤＣの単一投与を腹腔内に行った。マウスは、腫瘍体積が約１０００ｍｍ３に達したときに屠殺された。全ての動物処置は、実験動物管理の評価と認定協会（Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ａｎｄ Ａｃｃｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ）によって認可を受けた施設における動物実験委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ａｎｉｍａｌ Ｃａｒｅ ａｎｄ Ｕｓｅ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）によって承認されたプロトコルの下で行われた。
播種性ＡＭＬモデル
Ｍｏｌｍ−１３モデルに関して、５×１０６細胞を、ＳＣＩＤマウスの外側尾静脈へ注射し、未処理にしたか、または７日後にＣＤ１２３ＡＤＣまたは非結合対照ＡＤＣの単一投与を腹腔内に行った。マウスを、ＡＭＬ細胞上での試験ＡＤＣの、Ｆｃ受容体との相互作用を最小限にするために、治療薬の投与４時間前に、マウスをヒトＩＶＩｇ（１０ｍｇ／ｋｇの単一腹腔内注射）で処理した。動物は、観察し、後肢麻痺等の進行性疾患の証拠または１５％以上の減量のために屠殺された。原発性ＡＭＬ異種移植片モデルに関して、ＮＯＤ／ＳＣＩＤ／ＩＬ−２Ｒγヌルマウス（ＮＳＧ；Ｔｈｅ Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ、ＭＥ）を、再発性ＡＭＬを有する患者からの７×１０５原発性白血病細胞（０６２２７；ＡｌｌＣｅｌｌｓ、Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、ＣＡ）の静脈注射の１日前に１Ｇｙで照射した。血液及び骨髄中の疾病負担を、ヒトＣＤ４５＋／ＣＤ３３＋細胞のフローサイトメトリー染色によって定期的に監視し、腫瘍負担が６５％に達したときに、治療を開始した。治療効果を監視するために、少量の骨髄を、麻酔下にあるマウスから、上顆の間にある大腿顆間窩領域から得て、フローサイトメトリーによって分析した。データを、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して描き、分析した。
結果
ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の活性を、１つの皮下ＡＭＬ種移植片モデル、ＨＮＴ−３４、及び２つの播種性ＡＭＬモデル、Ｍｏｌｍ−１３及び原発性ＡＭＬモデルにおいて更に試験した。確立された（約１００ｍｍ３）ＭＤＲ−陰性ＨＮＴ−３４腫瘍（ＣＤ１２３コピー数約２４，０００）を持つＳＣＩＤマウスに、図７に示される通り、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０または非結合対照ＡＤＣを投与した。ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０での処理は、未処理及び非結合対照ＡＤＣ処理マウスと比較して、腫瘍成長を有意に低下させた（ｐ＜０．０００１）。ＣＤ１２３−標的ＡＤＣで観察された抗腫瘍活性は、用量依存性であった。０．０２５ｍｇ／ｋｇの単一投与は、８匹の処理マウスのうちの２匹において完全かつ永続的な腫瘍退縮をもたらした（図７）。０．０７５ｍｇ／ｋｇのより高い用量は、８匹の処理マウスのうちの７匹において完全かつ永続的な腫瘍退縮をもたらした。腫瘍が４倍になる平均日数は、ＣＤ１２３−ＡＤＣ群に関して、６２日目の試験最終日まで達成されなかった。
ＡＭＬのＭＤＲ−陰性Ｍｏｌｍ−１３播種性モデル（図８、ＣＤ１２３コピー数約２０，０００）では、７日目に投与された０．０１ｍｇ／ｋｇまたは０．０３ｍｇ／ｋｇのｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０の単一投与は、マウスの生存期間を有意に改善した。ＣＤ１２３−ＡＤＣ処理マウスの生存期間は、対照群の２２〜２５日と比較して、８０日より長かった（未処理、ｈＩＶＩｇ、または非結合対照ＡＤＣと比較してｐ＜０．０００１）。ＣＤ１２３−ＡＤＣの抗白血病応答も、再発性ＡＭＬを有する患者からの原発性白血病細胞（ＭＤＲ＋）を使用して異種移植片モデルにおいて立証された。原発性ヒト白血病細胞をＮＳＧマウスに移植し、骨髄において６５％の腫瘍負担まで成長させた（ＣＤ１２３コピー数約２２００）。０日目及び１１日目に、マウスに０．３ｍｇ／ｋｇのＣＤ１２３−ＳＧＤ−１９１０を投与した（図９）。処理マウスにおける腫瘍負担は、２４日目までに有意に低下し、６４日目の試験最終日まで低下したレベルに留まった。
データは、ｈ７Ｇ３ＥＣ−ＳＧＤ−１９１０が、ＭＤＲ状態に関係なく異なるＣＤ１２３抗原レベルを表す、ＡＭＬを有するヒトの患者からの原発性腫瘍細胞を使用するモデルを含むいくつかのＡＭＬ異種移植片モデルにおいて有意な用量依存的抗腫瘍活性を有することを立証する。
非公式配列表
配列番号１、ＨＣに対する重鎖可変領域
配列番号２、ＬＡに対する軽鎖可変領域
配列番号３、Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従い、位置２３９にシステイン置換を有する突然変異体ＩｇＧ１を伴うＨＣに対する重鎖
配列番号４、ＬＡに対する軽鎖
配列番号５、突然変異体重鎖定常領域（Ｋａｂａｔに記載されるＥＵインデックスに従い、位置２３９にシステイン置換を有する）
配列番号６、天然に生じる重鎖定常領域
配列番号７、軽鎖定常領域
配列番号８、マウス７Ｇ３抗体重鎖可変領域
配列番号９、マウス７Ｇ３抗体軽鎖可変領域
配列番号１０−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｈ１のアミノ酸配列
配列番号１１−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｈ２のアミノ酸配列
配列番号１２−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｈ３のアミノ酸配列
配列番号１３−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｌ１のアミノ酸配列
配列番号１４−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｌ２のアミノ酸配列
配列番号１５−ヒト化７Ｇ３のＣＤＲ−Ｌ３のアミノ酸配列

Claims (9)

  1. 配列番号１に記載されるアミノ酸配列を有する重鎖可変領域と、配列番号２に記載されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域、またはＣＤ１２３タンパク質に結合する抗体もしくはその抗原結合断片をコードする配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
  2. 請求項１に記載のポリヌクレオチドを含む単離されたベクター。
  3. 請求項２に記載のベクターを含む単離された宿主細胞。
  4. ＣＨＯ細胞である、請求項３に記載の宿主細胞。
  5. 抗ＣＤ１２３抗体またはその抗原結合断片の作製方法であって、
    （ａ）抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドの発現に適した条件下で請求項３に記載の宿主細胞を維持する工程、および
    （ｂ）前記抗体またはその抗原結合断片を回収する工程
    を含む方法。
  6. 前記宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項５に記載の方法。
  7. 抗ＣＤ１２３抗体−薬物複合体の作製方法であって、
    （ａ）抗体またはその抗原結合断片をコードするポリヌクレオチドの発現に適した条件下で請求項３に記載の宿主細胞を維持する工程、
    （ｂ）前記抗体またはその抗原結合断片を回収する工程、および
    （ｃ）前記抗体またはその抗原結合断片に細胞傷害性薬を複合体化する工程
    を含む方法。
  8. 前記宿主細胞がＣＨＯ細胞である、請求項７に記載の方法。
  9. 前記細胞傷害性薬が、マイタンシノイド、アウリスタチン、ピロロ［１，４］ベンゾジアゼピン、インドリノベンゾジアゼピン、またはオキサゾリジノベンゾジアゼピンである、請求項７または８に記載の方法。
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