JP2020508672A - 呼吸器ウイルス感染症に対する免疫応答を有利に調節することができるビフィドバクテリウム・ロンガム - Google Patents

Abstract

ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株は、ウイルス感染症、特にインフルエンザ、ライノウイルスおよびＲＳＶなどのウイルス呼吸器感染症の治療に有用である。ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０はまた、二次細菌感染症を取り除くのにも有用である。【選択図】図９

Description

本発明は、ヒト結腸細菌叢中に存在するいくつかの優勢な培養可能な細菌の１つであるビフィドバクテリウム属菌に関する。

ビフィドバクテリウム属菌は、十分な数で摂取されると、基本的栄養を超えた健康効果を及ぼす生存生物であるので、プロバイオティクスと考えられる。プロバイオティクス効果を及ぼすためには、高レベルの摂取ビフィドバクテリウム属菌がその作用部位に到達しなければならない。腸内容物１グラム当たりおよそ１０^６〜１０^７個の生存ビフィドバクテリウム属菌の最小レベルが示唆されている（Ｂｏｕｈｎｉｋ，Ｙ．、Ｌａｉｔ １９９３）。成人および乳児で行われたインビボ試験が、ビフィドバクテリウム属菌の一部の株が胃腸管を生きて通過することができることを示していることを示す報告が文献にある。様々なビフィドバクテリウム株が酸および胆汁酸塩に耐える能力の間には有意な差が観察されており、潜在的なプロバイオティクス株の選択にとって生存が重要な基準となることを示している。

ビフィドバクテリウム属菌の摂取は、胃腸管通過を改善することができ、胃腸管（ＧＩＴ）感染症、便秘、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）−クローン病および潰瘍性大腸炎、食物アレルギー、抗生物質誘発性の下痢、心血管疾患および一定のがん（例えば、結腸直腸がん）などの欠乏性または障害性細菌叢によって引き起こされ得る病気を予防し得る、またはその治療を支援し得る。

ウイルス感染症は、罹患率および死亡率の主因である。インフルエンザウイルス、ライノウイルス（感冒）および呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）は、通常、健康な個体では適切な宿主免疫応答によってうまく取り除かれる高度感染性ウイルスである。しかしながら、これらの感染症による問題の多くは、初期ウイルスではなく、むしろしばしばこれに付随する二次感染症、例えば肺炎を引き起こす細菌感染症、洞組織の感染症等である。ＣＯＰＤまたは喘息または肥満を患っている個体などの感受性個体は、ウイルス感染症に対する応答が極めて乏しく、その後の二次感染症が重篤となり、このような個体にとっては生命を脅かすものとなり得る。

これらの状態のこれらのウイルス誘発性憎悪は、相当な医療費および著しい苦痛を伴う。これらの憎悪のための新規の有効な治療法の開発は、主要な未だ対処されていない臨床的必要性があるので、有益となると予想される。インフルエンザウイルス、特に世界的流行性の鳥インフルエンザウイルスに罹患した患者への副腎皮質ステロイドの投与は、比較的一般的であるが、論争の的になったままである。日常的なステロイドの使用は、ウイルス負荷を減らさず、後で二次細菌感染症のクリアランスを阻害もするので、インフルエンザウイルス感染症にとって理想的ではない（Ｙａｎｇら、２０１５）。

感染の早い段階では、インフルエンザ、ライノウイルスおよびＲＳＶ複製が肺上皮細胞で起こり、ウイルスセンサーの活性化、ならびに抗ウイルスＩ型およびＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮ）ならびにケモカインおよびサイトカインの放出をもたらす。これらの炎症促進性メディエータは、一次感染症を取り除くのに役立つが、Ｉ型ＩＦＮはまたその後の損傷（免疫病理学）を引き起こし得る。ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β分子の増加などのＩＦＮ Ｉ型応答は、インフルエンザ感染症のモデルにおける罹患率および死亡率の増加と直接相関することが示されている（Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２０１４）。抗ウイルスＩ型ＩＦＮおよび関連するＩＰ−１０ケモカインの過剰産生は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）、モラクセラ・カタラーリス（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）およびインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、および黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）などの細菌因子によって引き起こされる（Ｈｅｗｉｔｔら、２０１６）ような明らかな二次感染症に対する適切な免疫応答を阻害する（Ｎａｋａｍｕｒａら、２０１１；Ｓｈａｈａｎｇｉａｎら、２００９；Ｌｉら、２０１２）。これらの二次感染症は、肺内の過剰な細胞死を引き起こす。感受性個体では、これが、肺組織傷害および肺機能低下につながり、ある場合、例えばＣＯＰＤ患者では重篤な合併症および死亡率を引き起こす。重要なことに、炎症促進性活性化は、Ｉ型ＩＦＮ応答にのみ起こり、好中球の動員を引き起こすが、ＩＩＩ型ＩＦＮ応答では起こらない（Ｇａｌａｎｉら、２０１７）。

しかしながら、ＩＦＮラムダ（ＩＦＮ−λ）などのＩＩＩ型ＩＦＮは、炎症促進性応答も免疫病理学も誘導することなくウイルス複製を制限することができる（Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２０１６；Ｇａｌａｎｉら、２０１７）。

そのため、適切なＩＩＩ型応答および抗ウイルス防御を維持しながら、ウイルス感染症に対するＩ型ＩＦＮ応答ならびに付随する炎症促進性および組織損傷性応答を制限することができる治療薬は、呼吸器ウイルス感染症の管理における有意な進歩となると予想される。この免疫病理学の減少は、宿主生存および疾患の消散にとって重要である。

他の先天性センサーまたは免疫メディエータも、早期の抗ウイルス防御で重要な役割を果たすことができる。サーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰ−Ｄ）は、感染の初期相の一部であるインフルエンザウイルスの上皮細胞への侵入を抑えることができる。（Ｔｈｉｅｌら、１９８９；Ｓａｓｔｒｙら、１９９３）。また、ウイルスに結合して、これが気管支上皮細胞に感染するのを抑えることができるこの先天性センサーを誘導することができる治療薬は、インフルエンザ、ライノウイルスおよびＲＳＶなどのウイルスの治療における有意な進歩となると予想される。さらに、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）、重要な炎症性サイトカインの阻害は、肺免疫病理学の程度に対する有意な効果を有し、炎症性細胞浸潤およびサイトカイン応答を阻害した。ＴＮＦ−αは、高度病原性インフルエンザウイルスに感染したマカクサルおよびヒトで罹患率および死亡率と相関することが示されている。ＴＮＦ−αが抑制されると、インフルエンザウイルス感染マウスのインフルエンザウイルス複製の減少および生存増加が観察された。エタネルセプトによるこの炎症性サイトカインの阻害は、マウスで致死性Ｈ１Ｎ１インフルエンザ感染症に対する防御を提供する（Ｓｈｉら、２０１３）。

ＩＩＩ型ＩＦＮ−λおよび／またはＳＰ−Ｄを誘導することができる治療薬は、二次細菌感染症の可能性を減少させながら、一次ウイルス感染症の早期クリアランスにおいて役割を果たし、ＡＲＤＳ、喘息、肥満およびＣＯＰＤの管理における有意な進歩となると予想される。

本発明によると、受託番号ＮＣＩＭＢ４２０２０を有するビフィドバクテリウム・ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｏｎｇｕｍ）株が提供される。この株は、生物学的に純粋な培養物の形態であり得る。

ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株も提供される。
この株は、生細胞の形態および／または非生細胞の形態であり得る。
この株は、健康なヒト対象の糞便または胃腸管から単離され得る。

この株は、細菌ブロスの形態であり得る。あるいは、この株は、凍結乾燥粉末の形態である。
この株は、ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する。ＩＰ−１０はＩＦＮ−γに応答していくつかの細胞型によって分泌されるので、これは重要である。これらの細胞型は、単球および内皮細胞を含む。ＩＰ−１０は、単球／マクロファージ、Ｔ細胞、ＮＫ細胞および樹状細胞の化学誘引、ならびに内皮細胞へのＴ細胞接着の促進を含むいくつかの役割に帰属し、ウイルス誘導性宿主系活性化の指標である。

この株は、ウイルスに対するインターフェロンλ応答などの、ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強し得る。
この株は、ウイルスに対するインターフェロンα応答および／またはウイルスに対するインターフェロンβ応答などの、ウイルスに対するインターフェロンＩ型応答を抑制し得る。

この株は、ウイルスに対するサーファクタントタンパク質Ｄ応答を増強し得る。
本発明はまた、本発明のビフィドバクテリウム株を含む製剤を提供する。
製剤は、別のプロバイオティクス物質および／またはプレバイオティクス（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ）物質をさらに含み得る。

製剤は、摂取可能な担体をさらに含み得る。摂取可能な担体は、カプセル、錠剤または粉末などの薬学的に許容される担体であり得る。摂取可能な担体は、酸性乳、ヨーグルト、フローズンヨーグルト、アイスクリーム、粉乳、乳濃縮物、アイスクリーム、チーズスプレッド、ドレッシングまたは飲料などの食品製品であり得る。

製剤は、タンパク質および／またはペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸塩に富むタンパク質および／またはペプチド、脂質、炭水化物、ビタミン、ミネラルならびに／あるいは微量元素をさらに含み得る。

ビフィドバクテリウム株は、製剤１グラム当たり１０^６ｃｆｕ超の量で存在し得る。
製剤は、アジュバント、薬物実体および／または生物学的化合物をさらに含み得る。
製剤は、肺または鼻への投与に適合され得る。例えば、製剤は、点鼻薬の形態であり得る。製剤の粘度は０．００１Ｐａ・ｓ（１ｃｐ）〜２Ｐａ・ｓ（２０００ｃｐ）であり得る。

ビフィドバクテリウム株またはその製剤は、食品に使用するため、または医薬品として使用するためのものであり得る。
ビフィドバクテリウム株またはその製剤は、望ましくない炎症活性の予防および／または治療に使用するためのものであり得る。

ビフィドバクテリウム株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体は、望ましくない炎症活性の予防および／または治療に使用するためのものであり得る。

ビフィドバクテリウム株またはその製剤は、喘息および／またはアレルギーを治療するための医薬品の調製に使用するための製剤であって、医薬品は、吸入に適した形態であってもよい、製剤であり得る。

ビフィドバクテリウム株またはその製剤は、対象のウイルス感染症の予防または治療に使用するためのものであり得る。
ビフィドバクテリウム株またはその製剤は、対象の呼吸器ウイルス感染症に関連する二次細菌感染症の予防に使用するためのものであり得る。

ウイルスは、いくつかの場合、インフルエンザウイルス、ライノウイルスおよび呼吸器合胞体ウイルスから選択され得る呼吸器ウイルスである。
対象は、炎症性肺疾患と診断されていてもよい。

いくつかの場合、対象は、呼吸器感染症に対する感受性が増加している。
対象は、肥満、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者、喘息患者、または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者の１つまたは複数であり得る。

ある場合、対象は５歳未満の小児である。
別の場合、対象は６０歳超の高齢者である。
本発明はまた、対象のウイルス感染症を予防または治療する方法であって、有効量のビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法を提供する。

ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体は、
ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱し得る；
ウイルスに対するインターフェロンλ応答などの、ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強し得る；
ウイルスに対するインターフェロンα応答および／またはウイルスに対するインターフェロンβ応答などの、ウイルスに対するインターフェロンＩ型応答を抑制し得る；ならびに／あるいは
ウイルスに対するサーファクタントタンパク質Ｄ応答を増強し得る。

ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株から単離された細胞壁画分も提供される。
細胞壁画分は、
ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱し得る；
ウイルスに対するインターフェロンλ応答などの、ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強し得る；
ウイルスに対するインターフェロンα応答および／またはウイルスに対するインターフェロンβ応答などの、ウイルスに対するインターフェロンＩ型応答を抑制し得る；ならびに／あるいは
ウイルスに対するサーファクタントタンパク質Ｄ応答を増強し得る。

ウイルスは、いくつかの場合、インフルエンザウイルス、ライノウイルスおよび呼吸器合胞体ウイルスから選択され得る呼吸器ウイルスである。
対象は、炎症性肺疾患と診断されていてもよい。

いくつかの場合、対象は、呼吸器感染症に対する感受性が増加している。
対象は、肥満、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者、喘息患者、または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者の１つまたは複数であり得る。

ある場合、対象は５歳未満の小児である。
別の場合、対象は６０歳超の高齢者である。
細胞壁画分は、１００ｋＤａ超の分子量を有し得る。細胞壁画分はサイズが０．４５μｍ未満であり得る。

一実施形態では、画分が、ビフィドバクテリウム・ロンガムを切開し、細胞質画分から細胞壁画分を分離することによって単離される。
対象の呼吸器ウイルス感染症の予防または治療に使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株から単離された細胞壁画分も提供される。

本発明はまた、対象の呼吸器ウイルス感染症に関連する二次細菌感染症の予防に使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株から単離された細胞壁画分も提供する。
ビフィドバクテリウム・ロンガムの細胞壁画分を単離する方法であって、
ビフィドバクテリウム・ロンガムを切開して、細胞壁画分および細胞質画分を形成するステップと；
細胞質画分から細胞壁画分を分離するステップと
を含む方法も提供される。

ビフィドバクテリウム・ロンガムの切開は、
キレート剤で処理すること；
酵素で処理すること；および
剪断力を印加すること
の少なくとも１つを含み得る。

キレート剤は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのカルシウムキレート剤であり得る。酵素は、リゾチームなどのグリコシドヒドロラーゼであり得る。あるいはまたはさらに、酵素はムタノリシン（ｍｕｔａｎｏｌｙｓｉｎ）などのムラリティック（ｍｕｒａｌｙｔｉｃ）酵素である。

剪断力は、超音波処理によって、および／またはフレンチプレスなどによる圧力によって印加され得る。
分離は遠心分離を含み得る。

いくつかの場合、分離後、細胞壁画分が濾過されて、サイズが０．４５μｍ未満の画分が得られる。
細胞壁画分を含む製剤も提供される。

製剤は、別のプロバイオティクス物質および／またはプレバイオティクス物質をさらに含み得る。
製剤は、摂取可能な担体をさらに含み得る。摂取可能な担体は、カプセル、錠剤または粉末などの薬学的に許容される担体であり得る。摂取可能な担体は、酸性乳、ヨーグルト、フローズンヨーグルト、アイスクリーム、粉乳、乳濃縮物、アイスクリーム、チーズスプレッド、ドレッシングまたは飲料などの食品製品であり得る。

製剤は、タンパク質および／またはペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸塩に富むタンパク質および／またはペプチド、脂質、炭水化物、ビタミン、ミネラルならびに／あるいは微量元素をさらに含み得る。

製剤は、アジュバント、薬物実体および／または生物学的化合物をさらに含み得る。
製剤は、肺または鼻への投与に適合され得る。例えば、製剤は、点鼻薬の形態であり得る。製剤の粘度は０．００１Ｐａ・ｓ（１ｃｐ）〜２Ｐａ・ｓ（２０００ｃｐ）であり得る。

本発明は、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０（ＡＨ０１０６）の単離株を提供する。
本発明はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株の突然変異体または変異体を提供する。

単離株は生細胞の形態であり得る。
単離株は非生細胞の形態であり得る。
本発明はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株を含む製剤を提供する。

製剤は、摂取可能な担体を含み得る。摂取可能な担体は、カプセル、錠剤または粉末などの薬学的に許容される担体であり得る。摂取可能な担体は、酸性乳、ヨーグルト、フローズンヨーグルト、粉乳、乳濃縮物、チーズスプレッド、ドレッシングまたは飲料などの食品製品であり得る。

一実施形態では、この株がウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する。
一実施形態では、この株がウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する。

一実施形態では、この株がウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する。
一実施形態では、この株がウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する。
ある場合、この株が、
ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する；
ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する；
ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する；および
ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する。

この株は、摂取可能な担体１グラム当たり１０^６ｃｆｕ超で存在し得る。
本発明はさらに、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を提供する。

本発明はまた、プロバイオティクス株としてのビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株の使用を提供する。
一実施形態では、製剤が、肺または鼻への投与に適合されている。

本発明の特定の株が、カプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、トローチ、丸剤、坐剤、懸濁剤およびシロップなどの、従来の製剤における経口摂取可能な形態で動物（ヒトを含む）に投与され得ることが理解されると予想される。適切な製剤は、従来の有機および無機添加剤を使用して一般的に利用される方法によって調製され得る。医薬組成物中の有効成分の量は、所望の治療効果を及ぼすレベルであり得る。

製剤はまた、細菌成分、薬物実体または生物学的化合物を含み得る。
さらに、本発明の株を含むワクチンは、任意の適切な公知の方法を使用して調製され得、薬学的に許容される担体またはアジュバントを含み得る。

本発明はまた、対象のウイルス感染症の予防または治療に使用するための、本発明のビフィドバクテリウム株または本発明の製剤を提供する。
ある場合、対象は急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者である。

別の場合、対象は喘息患者である。
さらなる場合、対象は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者である。
本発明はまた、ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０から単離された細胞壁画分を提供する。

ある場合、画分が、ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する。
ある場合、画分が、ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する。
ある場合、画分が、ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する。

本発明はさらに、
ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する；
ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する；
ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する；および
ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０から単離された細胞壁画分を提供する。

ある場合、細胞壁画分の分子量が１００ｋＤａ超である。
ある場合、細胞壁画分が、サイズが０．４５μｍ未満である。
ある場合、細胞壁画分が、１００ｋＤａ超の分子量を有し、サイズが０．４５μｍ未満である。

本発明はさらに、対象のウイルス感染症を予防または治療する方法であって、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０から単離された細胞壁画分を投与するステップを含む方法を提供する。

ある場合、細胞壁画分が、ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する。
ある場合、画分が、ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する。
ある場合、画分が、ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する。

ある場合、画分が、ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する。
対象のウイルス感染症を予防または治療する方法であって、
ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する；
ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する；
ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する；および
ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０から単離された細胞壁画分を投与するステップを含む方法も提供される。

ある場合、細胞壁画分の分子量が１００ｋＤａ超である。
ある場合、細胞壁画分が、サイズが０．４５μｍ未満である。
ある場合、細胞壁画分が、肺または鼻への投与に適した製剤で投与される。

ある場合、対象は急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者である。
ある場合、対象は喘息患者である。
ある場合、対象は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者である。

本発明はまた、寄託された株の突然変異体および変異体を含む。本明細書を通して、突然変異体、変異体および遺伝子修飾突然変異体という用語は、その遺伝的および／または表現型特性が親株と比較して変化している株を含む。天然に生じる変異体は、選択的に単離された標的化特性の自発的変化を含む。親株特性の意図的変化は、遺伝子破壊、接合伝達等などの従来の（インビトロ）遺伝子操作技術によって達成される。遺伝子修飾は、例えばプラスミドＤＮＡまたはバクテリオファージを含むベクターによる菌株のゲノムへの挿入による、株のゲノムへの外因性および／内因性ＤＮＡ配列の導入を含む。

自然のまたは誘発された突然変異は、ＤＮＡ配列によってコードされるアミノ酸配列の変化をもたらし得る欠失、挿入、塩基転換または他のＤＮＡ修飾などの少なくとも単一の塩基変化を含む。

突然変異体、変異体および遺伝子修飾突然変異体という用語はまた、全ての微生物について自然で一貫している速度でゲノムに蓄積する遺伝子変化、ならびに／あるいはゲノムの意図的（インビトロ）操作によっては達成されないが、抗生物質などの環境圧にさらされると細菌の生存を支持するための選択的利点を提供する変異体および／または突然変異体の自然選択を通して達成される自発的突然変異および／または遺伝子の獲得および／または遺伝子の喪失を通して起こる遺伝子変化を受けた株を含む。突然変異体は、生物の生化学的機能性を基本的には変化させないが、その産物を細菌の同定または選択に使用することができる特定の遺伝子、例えば抗生物質耐性をゲノムに意図的に（インビトロで）挿入することによって作製され得る。

当業者であれば、親株を用いたＤＮＡ配列相同性分析によって、突然変異または変異株が同定され得ることを認識すると予想される。実証可能な表現型または測定可能な機能的差異を有さないで、親株と近い配列同一性を有する株が突然変異体または変異株とみなされる。親ＤＮＡ配列と９９．５％以上の配列同一性（相同性）を有する株が、突然変異体または変異体とみなされ得る。配列相同性は、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ，ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／で公的に入手可能な、オンライン相同性アルゴリズム「ＢＬＡＳＴ」プログラムを使用して決定され得る。

本発明は、添付の図面を参照して、単なる例として記載された以下のその説明からより明確に理解されると予想される。

増加する濃度（中および高）のＢ．ロンガム株３５６２４、ＡＨ１２０６、ＡＨ１３６２、１７１４、ＢＬ１２０７およびＡＨ０１０６によるインビトロ刺激後のＰＢＭＣおよびＭＤＤＣ中のＩＬ−１０の誘導プロファイルを示す棒グラフである。 同上。 増加する濃度（中および高）のＢ．ロンガム株３５６２４、ＡＨ１２０６、ＡＨ１３６２、１７１４、ＢＬ１２０７およびＡＨ０１０６によるインビトロ刺激後のＰＢＭＣおよびＭＤＤＣ中のＩＬ−１２ｐ４０の誘導プロファイルを示す棒グラフである。 同上。 増加する濃度（中および高）のＢ．ロンガム株３５６２４、ＡＨ１２０６、ＡＨ１３６２、１７１４、ＢＬ１２０７およびＡＨ０１０６によるインビトロ刺激後のＰＢＭＣおよびＭＤＤＣ中のＴＮＦ−αの誘導プロファイルを示す棒グラフである。 同上。 増加する濃度（中および高）のＢ．ロンガム株３５６２４、ＡＨ１２０６、ＡＨ１３６２、１７１４、ＢＬ１２０７およびＡＨ０１０６によるインビトロ刺激後のＰＢＭＣおよびＭＤＤＣ中のＩＬ−１βの誘導プロファイルを示す棒グラフである。 同上。 Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６の存在下でのライノウイルスに対するＩＰ−１０応答の棒グラフである。 図６（ａ）は、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６の存在下でのライノウイルスに対するインターフェロンλ（ＩＩＩ型インターフェロン）応答の棒グラフである。図６（ｂ）は、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６の存在下でのライノウイルスに対するインターフェロンα（１型インターフェロン）応答の棒グラフである。図６（ｃ）は、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６の存在下でのライノウイルスに対するインターフェロンβ（１型インターフェロン）応答の棒グラフである。 Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６または黄色ブドウ球菌株の存在下でのライノウイルス１６に対するＩＰ−１０応答を比較する棒グラフである。 Ｂ．ロンガム株ＡＨ０１０６および３５６２４の存在下でのＬＰＳに対するＩＰ−１０応答の棒グラフである。 Ｂ．ロンガム株ＡＨ０１０６および３５６２４の存在下でのＬＰＳに対するＴＮＦ−α応答の棒グラフである。 ウイルス感染後のＢ．ロンガムＡＨ０１０６株、Ｂ．ロンガム３５６２４株およびプラセボに応じた肺のウイルス複製のグラフである。 Ｂ．ロンガム株ＡＨ０１０６、３５６２４およびプラセボによる感染後の期間にわたる生存のグラフである。 ウイルス感染後のＢ．ロンガム株ＡＨ０１０６株、３５６２４株およびプラセボに対する気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中のサイトカイン応答および血清中のサーファクタントタンパク質Ｄ応答の一連のグラフである。 ウイルス感染後のＢ．ロンガム株ＡＨ０１０６株、３５６２４株およびプラセボに応じたＢＡＬで測定された様々なバイオマーカーのヒートマップを示す図である；バンドの強度が高くなるほど、誘導が大きくなる。 ウイルス感染後のＢ．ロンガム株ＡＨ０１０６株、３５６２４株およびプラセボに応じたマクロファージのＢＡＬ数のグラフである。 ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＨ０１０６から細胞壁画分を単離するために使用される方法のフローチャートである。 図１６（ａ）は、単球由来樹状細胞におけるＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分（Ｂｉｆ ＡＨ０１０６ペレット）の存在下でのヒトライノウイルス（ＨＲＶ１６）に対するＩＰ−１０応答のグラフである。図１６（ｂ）は、単球由来樹状細胞におけるＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分（Ｂｉｆ ＡＨ０１０６ペレット）の存在下でのヒトライノウイルス（ＨＲＶ１６）に対するＩＦＮ−α応答のグラフである。図１６（ｃ）は、単球由来樹状細胞におけるＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分（Ｂｉｆ ＡＨ０１０６ペレット）の存在下でのヒトライノウイルス（ＨＲＶ１６）に対するＩＦＮ−β応答のグラフである。 同上。 図１７（ａ）は、単球由来樹状細胞におけるＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分と比較したＵＣＣ２００３株由来の細胞壁画分の存在下でのヒトライノウイルス（ＨＲＶ１６）に対するＩＰ−１０応答の棒グラフである。図１７（ｂ）は、単球由来樹状細胞におけるＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分と比較したＵＣＣ２００３株由来の細胞壁画分の存在下でのインターフェロンベータ（ＩＦＮ−β）に対するＩＰ−１０応答の棒グラフである。 図１８（ａ）は、単球由来樹状細胞におけるＢ．ロンガム株ＡＨ０１０６および３５６２４由来の細胞壁画分と比較したＵＣＣ２００３株由来の細胞壁画分の存在下でのＬＰＳに対するＴＮＦ−α応答の棒グラフである。図１８（ｂ）は、単球由来樹状細胞におけるＢ．ロンガム株ＡＨ０１０６および３５６２４由来の細胞壁画分と比較したＵＣＣ２００３株由来の細胞壁画分の存在下でのＰｏｌｙ：ＩＣに対するＴＮＦ−α応答の棒グラフである。 図１９（ａ）は、ウイルス感染症に対する異常な応答のカスケードの図である。図１９（ｂ）は、Ｂ．ロンガムＡＨ１０６株またはその細胞壁画分によって媒介されるウイルス感染症に対する応答のカスケードの図である。

ビフィドバクテリウム・ロンガムＡＨ０１０６株の寄託は、２０１２年８月２日に国立産業食品および海洋菌保存機関（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）（ＮＣＩＭＢ）Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ、ＡＢ２１ ９ＹＡ、スコットランド、英国でなされ、受託番号ＮＣＩＭＢ４２０２０が与えられた。

本明細書はまた、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４１００３（３５６２４（登録商標）株）にも言及する。この株は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ００／４２１６８に記載されている。この株は、１９９９年１月１３日に国立産業食品および海洋菌保存機関（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ａｎｄ Ｍａｒｉｎｅ Ｂａｃｔｅｒｉａ）、Ｆｅｒｇｕｓｏｎ Ｂｕｉｌｄｉｎｇ、Ｃｒａｉｂｓｔｏｎｅ Ｅｓｔａｔｅ、Ｂｕｃｋｓｂｕｒｎ、Ａｂｅｒｄｅｅｎ、ＡＢ２１ ９ＹＡ、スコットランド、英国で寄託された。

本発明者らは、特定の菌株が抗ウイルス防御を促進し、損傷を及ぼす炎症促進性応答を阻害し、喘息患者およびＣＯＰＤ患者におけるウイルス誘発性ＡＲＤＳまたはウイルス誘発性憎悪の予防および／または治療に特に有用であることを発見した。

以下の実施例は、本発明の範囲内の実施形態をさらに記載および実証する。本発明の精神および範囲から逸脱することなく、多くの変化が可能であるので、これらの実施例は単なる例示目的で与えられるにすぎず、本発明の限定として解釈されるべきでない。

実施例１ ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離
ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株を、健康なヒト対象に由来する糞便試料から単離した。

糞便試料をプロバイオティクス菌株についてスクリーニングした。試料を、０．０５％システイン−ＨＣｌを補足したリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を含有する採取管に移した。次いで、溶液を１０分間インキュベートした。試料をボルテックスし、選択寒天（Ｄｅ Ｍａｎ、ＲｏｇｏｓａおよびＳｈａｒｐｅ（ＭＲＳ）寒天＋１０％スクロース＋ムピロシンおよびコンゴレッド＋システイン＋ムピロシン）上に置いた。コンゴレッド寒天スクリーニングを使用して、ＥＰＳ発現菌株を表現型的にスクリーニングした。手短に言えば、１０ｍｌ改変Ｒｏｇｏｓａブロス培地（＋０．０５％システイン）に、菌株の新たに増殖させたコロニーを無菌的に接種し、混濁するまで（約１６時間〜約２４時間）、３７℃で嫌気的にインキュベートした。ブロス培養物を、コンゴレッド寒天プレート上に無菌的に画線接種（ｓｔｒｅａｋｅｄ）し、３７℃で４８時間嫌気的にインキュベートした。一定の株の増殖および／または代謝の副産物として産生されるＥＰＳがコンゴレッド染料の取り込みを防ぎ、クリーム色／白色コロニー形態をもたらすと考えられる。ＥＰＳをあまり産生しない株はコンゴレッド染料を容易に取り込み、ピンク色／赤色コロニー形態をもたらす。ＥＰＳを産生しない株は、赤色に染色し、赤色寒天背景中でほぼ透明に見える。

単離コロニーをプレートから選び取り、３回再画線接種して純度を確保した。顕微鏡検査、グラム染色、カタラーゼ試験、フルクトース−６−リン酸ホスホケトラーゼ評価を使用して、推定上のビフィドバクテリウム属種を決定し、単離株を４０％グリセロールにストックし、−８０℃で保存した。１６Ｓ遺伝子間スペーサー領域配列決定（ＩＧＳ）を使用して、新たに単離された株を同定した。

名称ＡＨ０１０６を与えられた、純粋なビフィドバクテリウム株の単離後、これはその後ＮＣＩＭＢで寄託され、名称４２０２０を与えられた。微生物学的特徴を評価し、以下の表１に要約する。Ｂ．ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０はグラム陽性、カタラーゼ陰性多形性形状の細菌であり、フルクトース−６−リン酸ホスホケトラーゼ陽性であり、ビフィドバクテリウム属菌として同定される。

１６ｓ〜２３ｓ遺伝子間スペーサー（ＩＧＳ）配列決定を行って、単離したビフィドバクテリウム属菌の種を同定した。手短に言えば、１００μｌの抽出溶液および２５μｌの組織調製溶液（Ｓｉｇｍａ、ＸＮＡＴ２キット）を使用して、ＮＣＩＭＢ４２０２０からＤＮＡを単離した。試料を室温で２時間、引き続いて９５℃で２時間インキュベートし、次いで、１００μｌの中和溶液（Ｓｉｇｍａ、ＸＮＡＴ２キット）を添加した。Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を使用して、ゲノムＤＮＡ溶液を定量化し、４℃で保存した。ＩＧＳプライマーを使用して、ＰＣＲを行った。使用したプライマー対はＩＧＳ Ｒ ５’−ＣＴＧＧＴＧＣＣＡＡＧＧＣＡＴＣＣＡ−３’（配列番号１）およびＩＧＳ Ｌ ５’−ＧＣＴＧＧＡＴＣＡＣＣＴＣＣＴＴＴＣＴ−３’（配列番号２）であった。サイクリング条件は９４℃４分（１サイクル）、９４℃４５秒、５３℃４５秒、７２℃４５秒（２８サイクル）であった。ＰＣＲ反応は２μｌ（１００ｎｇ）のＤＮＡ、ＰＣＲミックス（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｄ Ｔａｑ）、０．０２５ｎＭ ＩＧＳ ＬおよびＲプライマー（ＭＷＧ Ｂｉｏｔｅｃｈ、ドイツ）を含有していた。ＰＣＲ反応をＢｉｏｔｈｅｒｍａサーモサイクラーで行った。ＰＣＲ産物（１０μｌ）を、ＴＡＥ中２％アガロースＥｔＢｒ染色ゲル上に分子量マーカー（１００ｂｐラダー、Ｒｏｃｈｅ）と並んで泳動して、ＩＧＳプロファイルを決定した。Ｐｒｏｍｅｇａ Ｗｉｚａｒｄ ＰＣＲ精製キットを使用して、ビフィドバクテリウム属菌のＰＣＲ産物（単一バンド）を精製した。遺伝子間スペーサー領域について、プライマー配列（上記）を使用して、精製ＰＣＲ産物を配列決定した。次いで、配列データをＮＣＢＩヌクレオチドデータベースに対して検索して、ヌクレオチド相同性によって株を同定した。得られたＤＮＡ配列データを、ＮＣＢＩ標準ヌクレオチド対ヌクレオチド相同性ＢＬＡＳＴ検索エンジン（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）にかけた。配列との最も近い一致を特定し、次いで、ＤＮＡＳＴＡＲ ＭｅｇＡｌｉｇｎソフトウェアを使用して、配列を比較のために整列させた。配列は配列表（表２）で見ることができる。ＮＣＩＭＢデータベースを検索することによって、ＮＣＩＭＢ４２０２０が特有のＩＧＳ（表２）配列を有し、その最も近い配列がビフィドバクテリウム・ロンガムと相同であることが明らかになった。

実施例２ ＡＨ１０６のサイトカインプロファイルおよび潜在的な健康上の利益を有する他のビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ）・ロンガム株のプロファイルとの比較
密度勾配遠心分離を使用して、健康なドナーから末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。ＰＢＭＣを洗浄し、ダルベッコ変法イーグル培地−Ｇｌｕｔａｍａｘ（ＤＭＥＭ）（商標）（Ｇｌｕｔａｍａｘ（グルタミン代替物）＋ピルビン酸塩＋４．５ｇ／ｌグルコース（Ｇｉｂｃｏカタログ１０５６９−０１０）１０％ウシ胎児血清（ＳｉｇｍａカタログＦ４１３５）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳｉｇｍａカタログＰ０７８１）に再懸濁した。ＰＢＭＣを、３７℃、５％ＣＯ２で、補足ＤＭＥＭ中で２４時間、様々な用量のビフィドバクテリウム・ロンガム（（全細菌：ＰＢＭＣ）高（１００：１）および中（５０：１））で刺激した。

単球由来樹状細胞作製について：密度勾配遠心分離を使用して、健康なドナーから末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。ＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１３０−０５０−２０１）によりＣＤ１４陽性単離を使用して、ヒト末梢血単球を単離した。細胞を単球由来樹状細胞（ＭＤＤＣ）に分化させるために、インターロイキン４ １０００Ｕ／ｍｌ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、３００−０３）１０００Ｕ／ｍｌを含むｃＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２１８７５−０９１）で６日間培養した。ＭＤＤＣを、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、様々な用量のＢ．ロンガム（（全細菌：ＭＤＤＣ）高（１００：１）および中（５０：１））で刺激した。製造業者の指示に従って市販のサイトカインキット（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プラットフォームを使用して、サイトカイン分泌を測定した。

ＡＨ０１０６は、互いに類似のプロファイルを与える他の全ての菌株（３５６２４、ＡＨ１２０６、ＡＨ１３６２、１７１４、ＢＬ１２０７）よりも、ＰＢＭＣとＭＤＤＣの両方で多くのＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ４０、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１βを誘導した（図１〜図４）。ＡＨ１０６は、３５６２４および１７１４などの他のＢ．ロンガムの特に知られている抗炎症性株よりもはるかに強力なサイトカインの刺激因子であり、ＡＨ０１０６が、より免疫刺激性の様式で、他のＢ．ロンガム株とは異なる方法で、ヒト免疫系と連動していることを実証している。

実施例３ ＡＨ０１０６株（単球由来樹状細胞で１型インターフェロンおよび結果としてのＩＰ−１０誘導（炎症促進性ケモカイン）を有利に遮断し、３型インターフェロンＩＦＮ−λを増加させる）
ウイルス感染に対する樹状細胞による過剰な免疫応答は、肺で炎症促進性応答を引き起こす。１型ＩＦＮは、Ｔｈ１細胞の化学誘引物質であるケモカイン、ＩＰ−１０の産生を刺激し得る。Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６がヒト単球由来樹状細胞に対する有益な抗ウイルス効果を有するかどうかを決定するために、ＭＤＤＣを、ヒトライノウイルス１６（ＨＲＶ１６）に曝露する前にＢ．ロンガムＡＨ０１０６で刺激し、ＨＲＶ１６に対するインターフェロンおよびＩＰ−１０応答を監視した。ＭＤＤＣを、複数用量のＢ．ロンガムＡＨ０１０６（１００：１、５０：１、２５：１、１０：１、１：１）による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、ＨＲＶ１６（ＭＯＩ）２５：１）で、またはＨＲＶ１６単独で刺激した。ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−λおよびＩＰ−１０を測定するＢｉｏ−Ｐｌｅｘ多重懸濁アレイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によってサイトカイン分泌を調べた。驚くべきことに、ＲＶに対するＩＰ−１０応答が、用量依存的様式でＢ．ロンガムＡＨ０１０６株によって減弱された（図５）。同様に驚くべきことに、低用量では、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株とのコインキュベーションは、ＩＩＩ型インターフェロン応答（インターフェロンλ）の増強をもたらしたが、ＩＰ−１０応答と同様に、高用量では、インターフェロンαおよびβ応答が抑制された（図６）。このデータは、損傷性応答を弱めながら防御免疫応答を支持することにおいて、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６がＲＶに対する免疫応答を変化させることを示している。

実施例４ 全てのグラム陽性菌株が同じ効果を有するわけではない
別のグラム陽性菌株が、ヒト単球由来樹状細胞に対する有益な抗ウイルス効果を有するかどうかを決定するために、黄色ブドウ球菌で刺激したＭＤＤＣをヒトライノウイルス１６（ＨＲＶ１６）に曝露し、ＩＰ−１０応答を監視した。手短に言えば、ＭＤＤＣを、複数用量の黄色ブドウ球菌（１００：１、５０：１）による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、ＨＲＶ１６（ＭＯＩ）２５：１）で刺激し、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６（１００：１）またはＨＲＶ１６単独と比較した。黄色ブドウ球菌株は、ＨＲＶ１６に応じてＤＣ ＩＰ−１０分泌を減少させなかった（図７）。

実施例５ ＡＨ０１０６株は単球由来樹状細胞でＴＮＦ−αならびにＩＰ−１０を有利に遮断するが、全てのビフィドバクテリウム・ロンガム株が同じ効果を有するわけではない
炎症を起こした粘膜内では、ＩＰ−１０およびＴＮＦ−α分泌を誘導するのがウイルス自体だけではなく、他の（ｔｏｌｌ様受容体）ＴＬＲリガンドもその産生を誘導し得る。そのため、ＭＤＤＣを、ＬＰＳに曝露する前にＢ．ロンガムＡＨ０１０６またはＢ．ロンガム３５６２４で前処理した。ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニストに対するＩＰ−１０およびＴＮＦ応答を監視した。手短に言えば、ＭＤＤＣを、（１００：１）の用量のＢ．ロンガムＡＨ０１０６もしくは３５６２４による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間ＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）、またはＬＰＳ単独で刺激した。驚くべきことに、ＬＰＳに対するＩＰ−１０およびＴＮＦ−α応答はＢ．ロンガムＡＨ１０６によって減弱された一方、Ｂ．ロンガム３５６２４への曝露後、ＬＰＳに対するＩＰ−１０応答はほんのわずかしか減少せず（図８）、Ｂ．ロンガム３５６２４は同じ用量でＴＮＦ−αを増加させる（図９）。Ｂ．ロンガム３５６２４は周知の抗炎症性株であり、仮定される最高の候補であったので、これは非常に驚くべき結果である。Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６に関するサイトカインデータのあるものは、これが一般化された免疫刺激反応を引き起こすことを示唆していたが、実際には、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６は、この細胞系で優れた、特異的免疫応答を有していた。

実施例６ 呼吸器感染症の前臨床インビボモデルにおけるＢ．ロンガムＡＨ１０６とＢ．ロンガム３５６２４の比較
本発明者らは、治療利益を示すよう設計された前臨床モデルで、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株の有効性を試験した。ライノウイルスマウスモデルは、マウスがＩＣＡＭ、細胞に侵入するための主要なグループのライノウイルスの受容体を有さないために、ヒト感染症の優れた代用と考えられない。そのため、本発明者らは、優れたモデルと考えられるマウスにおける致死性インフルエンザモデルを利用した（Ｂａｒｔｌｅｔｔら、２０１５）。Ｈ１Ｎ１インフルエンザ株Ａ／ＲＰ８／３４（１００ＰＦＵ／５０ｕｌ）株を使用してマウスを感染させた。

Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株、Ｂ．ロンガム３５６２４株またはプラセボを、ウイルス感染後−２時間、＋１日および＋３日に鼻腔内投与した。これらの株は１×１０^９個全細胞の用量で投与した。

２時間、１日目および３日目 １鼻腔当たりビヒクル対照（１群）、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６（２群およびＢ．ロンガム３５６２４細胞壁画分（３群）の投与（５０μｌ容量）。

０日目 １鼻腔当たり一用量の致死性インフルエンザ（ＲＰ８）の投与（１〜３群）。
０〜１０日目 罹患率についての動物の監視（体重、体温および臨床スコア、１〜３群）。

５日目：１群当たり５匹の動物を最終的な出血のために屠殺し、器官を取り出し、各日について分析する。５日目（１〜３群）。
５日目：サイトカインおよび細胞浸潤物の測定のためのＢＡＬ液の単離。定量的ＰＣＲによる肺のウイルス力価の定量化のための肺組織の回収（全肺葉の半分）。
肺組織のウイルス力価の測定
単離した肺葉を、定量的ＰＣＲによる肺組織のウイルス量の定量化のために調製した。ＲＮＡをＴＲＩ試薬（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ）で調製し、次いで、ＤＮアーゼ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で処理してゲノムＤＮＡ汚染を回避した後、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＩＩＩ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して逆転写によってＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用してリアルタイムＰＣＲ（ｉＣｙｃｌｅｒ；Ｂｉｏ−Ｒａｄ）によってｃＤＮＡを定量化し、試料をＧＡＰＤＨ発現レベルで正規化した。使用したプライマー配列（それぞれ、順方向および逆方向）は、インフルエンザＲＰ８ Ｍタンパク質、５’−ＧＧＡＣＴＧＣＡＧＣＧＴＡＧＡＣＧＣＴＴ−３’（配列番号４）および５’ＣＡＴＣＣＴＧＴＡＴＡＴＧＡＧＧＣＣＣＡＴ−３’（配列番号５）であった。
群（１〜３）：
１．プラセボ−ＰＢＳに再懸濁した凍結保護物質による処理。
２．Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６ １０^９個全細胞による処理。
３．Ｂ．ロンガム３５６２４ １０^９個全細胞による処理。
１群当たりのマウス数（１〜３群）＝５
サイトカインおよびケモカインの測定。

製造業者の指示に従って市販のＵ−ＰＬＥＸ Ｂｉｏｍａｒｋｅｒ Ｇｒｏｕｐ１ Ｍｏｕｓｅ ３５−Ｐｌｅｘ（ＭｅｓｏＳｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ）プラットフォームを使用して、血清中とＢＡＬ液中の両方のマウスＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２ｐ７０、ＩＬ−１２／ＩＬ−２３ｐ４０、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｅ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３、ＩＬ−３０、ＩＬ−３１、ＩＬ−３３、ＩＰ−１０、ＭＩＰ３α、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−１、ＫＣ／ＧＲＯ、ＴＮＦ−α、ＶＥＧＦ、ＥＰＯ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＦＮ−γの濃度を測定した；ＥＬＩＳＡキット（ＲａｙＢｉｏｔｅｃｈ，Ｉｎｃ）を使用して、マウスＩＬ−２８（ＩＦＮ−λ２／３）、マウスＧ−ＣＳＦ、マウスＴＲＡＩＬ、マウスＡＲＥＧを検出した；製造業者の指示に従ってＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ製のＱｕａｎｔｉｋｉｎｅキットを使用して、オンコスタチンＭおよびマウスサーファクタントタンパク質Ｄ（ＳＰＤ）を測定した。マウスＩＦＮα白金ＥＬＩＳＡ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）によって、血清およびＢＡＬ液中のマウスＩＦＮ−αを測定した。ＶｅｒｉＫｉｎｅマウスインターフェロンベータＨＳ ＥＬＩＳＡキット（ＰＢＬ Ａｓｓａｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、マウスインターフェロン−β（ＩＦＮ−β）の血清およびＢＡＬ液レベルを測定した。
ＢＡＬへの細胞浸潤物の測定
細胞をＢＡＬ液から単離し、コールターカウンター（ＩＧ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｅｎ−Ｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ＡＧ、Ｂａｓａｌ、スイス）を使用して、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）液中の全細胞数を測定した。Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｋ溶液（Ｄａｄｅ Ｂｅｈｒｉｎｇ、Ｓｉｅｍｅｎｓ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）で染色したサイトスピンでの標準的な形態学的および細胞化学的基準に基づいて、微分細胞計数を行った（２００個細胞数／試料）。

驚くべきことに、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６の投与は、Ｂ．ロンガム３５６２４株よりもマウスをよく保護した。両株で、ウイルス力価は同様のレベルだけ低下したが（図１０）、死亡率はＢ．ロンガムＡＨ０１０６処理マウスでより低下した（図１１）。この生存増強は、減少したインターフェロン−αおよびインターフェロン−β応答ならびに増強したサーファクタントタンパク質Ｄ応答に関連していた（図１２）。さらに、５日目でＢＡＬ中のマクロファージの増加（図１４）に関連するＡＨ０１０６処理動物におけるサイトカインおよびケモカインの強力な誘導（図１３）があった。この免疫応答は、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６処理動物で見られるウイルスクリアランスの増強に寄与し、治癒プロセスの開始がマクロファージの肺への流入をもたらした。

実施例７ 細胞壁ペレット作製
細菌収穫／洗浄
方法：
１．遠心分離（１４０００ｒｐｍ、４℃、２０分；ローターＪＡ−２０（Ａｖａｎｔｉ Ｊ−２６×Ｐ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）によって、元の細菌バイオマス（全細胞数＝１．５×１０^１１）２５０ｍｌ当量を収穫する。細菌ペレットを滅菌ＰＢＳで洗浄し、上清を廃棄し、再度洗浄する（さらに２回繰り返す）。
２．生および非生凍結乾燥細菌（３．０×１０^１１粉末０．５ｇまたは全細胞数＝１．５×１０^１１）を５０ｍｌに再懸濁し、遠心分離（１４０００ｒｐｍ、４℃、２０分；ローターＪＡ−２０（Ａｖａｎｔｉ Ｊ−２６×Ｐ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ）によって収穫した。細菌ペレットを滅菌ＰＢＳで洗浄し、上清を廃棄し、再度洗浄する（さらに２回繰り返す）。
３．最後に、ペレットを滅菌ＰＢＳ ５０ｍｌに再懸濁し、細菌溶液を２つの２５ｍｌ分割量に分ける。
細胞破壊
この手順の目的は、細菌全体から細胞壁画分を作製し、細胞質画分および他の成分を除去することであった。これは、以下から選択される１つまたは複数のステップを含む：
・溶解を助けるために酵素処理を使用する場合にＤＮアーゼまたはプロテアーゼ活性を防ぐために、場合により凍結融解手順と合わせた、キレート剤による処理
・グリコシドヒドロラーゼおよび／またはＮアセチルムラミダーゼによる酵素処理
・超音波処理またはフレンチプレス使用などの高圧の印加などの剪断力の印加。
・遠心分離を使用することによる、細胞質画分からの細胞壁画分の分離
・細胞壁画分の濾過
材料：
・ＥＤＴＡ（０．５Ｍ Ｆｌｕｋａ）は、細胞壁溶解のために酵素を使用する場合にＤＮアーゼまたはプロテアーゼ活性を防ぐために金属イオン（カルシウムまたはマグネシウム）を除去するためのキレート剤である
・リゾチーム（Ｓｉｇｍａ １０ｍｇ／ｍｌ）^＊エンドトキシンフリーは、Ｎ−アセチルムラミン酸とＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミン残基との間の１，４−β−結合の加水分解を触媒するグリコシドヒドロラーゼである。この加水分解は、細菌細胞壁の完全性を損ない、細菌の溶解を引き起こす。
・ムタノリシン（１ｍｌ Ｈ_２Ｏに希釈した１０ＫＵ Ｓｉｇｍａ）は、細菌細胞壁のβ−Ｎ−アセチルムラミル−（１→４）−Ｎ−アセチルグルコサミン結合を切断するムラリティック酵素である、Ｎ−アセチルムラミダーゼである。この切断は、細菌細胞壁の完全性を損ない、細菌の溶解を引き起こす。
・ガラスビーズ９０〜１５０μｍ粒径（ＶＷＲ）は溶解を助けるために超音波処理と合わせて使用した
方法：
１．２５０μｌのＥＤＴＡ（０．５Ｍストック Ｆｌｕｋａ）を２５ｍｌ分割量の各々に添加することにより、最終濃度を５ｍＭ ＥＤＴＡにした。
２．凍結するまで２つの分割量を液体窒素に入れることによって分割量を凍結し、次いで、分割量を水中で融解する；この手順を２回繰り返す。
３．細菌分割量それぞれ２５ｍｌを、時折穏やかなボルテックスで、３７℃で１時間、２５０μｌのリゾチーム（１０ｍｇ／ｍｌ）および２５０μｌのムタノリシン（２．５ＫＵ）と共にインキュベートする。このステップから、超音波処理器またはフレンチプレスによる剪断力を使用して、細菌細胞を破壊する。
超音波処理
・小さじ２分の１のオートクレーブ処理したガラスビーズ９０〜１５０μｍ粒径（ＶＭＲ）を、超音波処理直前に細菌分割量に添加した。
・２５ｍｌの再懸濁した細菌材料を一度に超音波処理し、次いで、氷上に置き、５０ｍｌプローブを含む超音波処理器（ＶｉｂｒａＣｅｌｌ ＳＯＮＩＣＳ）を使用して他の分割量を超音波処理する。（設定チューン＝５０、周波数＝６０）。この手順を氷上で１０分間、４回繰り返す。超音波処理後、４℃で１０分間の１０００ｒｐｍでの遠心分離によって、ガラスビーズ、壊れていない細胞および細胞片を除去する。
フレンチプレスによる高圧
・あるいは、フレンチプレス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ＦＡ−０７８Ａ）を使用した高圧設定（１３７．９３ＭＰａ（２０，０００ｐｓｉ）当量）で、１０．３４ＭＰａ（１５００ｐｓｉ）の圧力によって、細菌細胞を破壊する。この手順を氷上で３回繰り返す。
・フレンチプレスを使用した剪断力の印加は、３回目の実行後に混濁した細菌細胞の清澄化をもたらす。フレンチプレス破壊後、４℃で１０分間の１０００ｒｐｍでの遠心分離によって、壊れていない細胞および細胞片を除去し、細胞壁材料および細胞質画分を含有する上清が保持される。
４．剪断力（超音波処理または高圧）の印加後、細胞壁材料および細胞質画分を含有する上清が保持された。この上清を４℃で２０分間、１４０００ｒｐｍで遠心分離して、細胞質材料から細胞壁材料を分離する。上清を廃棄する。
５．細胞壁材料を含有するペレットを、元の細菌バイオマス２５０ｍｌ当たり５ｍｌのＰＢＳに再懸濁する。細胞壁材料のペレットを１０００ｒｐｍで１０分間遠心分離して、ペレット中の黒色残渣を除去した。細胞壁材料を含有するペレットを−８０℃で保存した。

遠心分離機およびローター
Ａｖａｎｔｉ Ｊ−Ｅ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ
ローター：ＪＡ−２０
超音波処理器
ＶｉｂｒａＣｅｌｌ ＳＯＮＩＣＳ、Ｓｏｎｉｃｓ ａｎｄ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ
プローブ４３５−０９
フレンチプレス
フレンチプレスＦＡ−０７８Ａ
Ｃｅｌｌ ＦＡ−０３２（４０Ｋ標準）（３５ｍｌ容量で標準フレンチプレス圧２７５．８６ＭＰａ（４０，０００ｐｓｉ）Ｃｅｌｌ、圧力最大２７５．８６ＭＰａ（４０，０００ｐｓｉ））
サイズ濾過、引き続いて限外濾過
材料：
・ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜フィルター（０．４５μｍ孔径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）
・１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＵＦ装置（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）。
１．細胞壁材料を含有する再懸濁した細菌ペレット（５ｍｌ）を融解し、ポリビニリデンジフルオリド（ＰＶＤＦ）膜フィルター（０．４５μｍ孔径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ；使用前にＰＢＳで徹底的にすすぐ）を通して濾過する。膜フィルターを通り抜ける材料は、無傷細菌を含まず、サイズが０．４５μｍ未満の細胞壁材料である。この０．４５μｍフィルターステップによって、４ｍｌの細胞壁材料を産生する。元の２５０ｍｌの細菌培養物から、４ｍｌの懸濁細胞壁材料が残る。
２．次いで、０．４５μｍ未満の細胞壁材料を限外濾過する。

ａ．ＵＦ装置を最初に１５ｍｌ ＰＢＳですすぎ、４℃で、３５００×ｇで回転させる。
ｂ．０．４５μｍ未満の細菌ペレット抽出物を取り、約４ｍｌを１００ｋＤａ ＭＷＣＯ ＵＦ装置にローティングする。

ｃ．１００ｋＤａ超上側溶液の体積が小さくなったら、ＰＢＳで透析濾過する。
ｄ．１００ｋＤａフィルターを通り抜ける材料が保持され、−８０℃で保存する。
ｅ．保持液（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）は、限外濾過装置に添加したのと同じ容量のＰＢＳ（４ｍｌ）に再懸濁すべきである。この材料を１００ｋＤａ超細菌ペレットと呼ぶ。こうして産生された細胞壁画分の最終乾燥重量は、保持液４ｍｌ中１２０ｍｇであり、これは最終濃度が１ｍｌ当たり３０ｍｇの細胞壁画分であるのと等しい。

ｆ．この細胞壁画分をより増強した溶解度についてのインビトロおよびインビボ試験のために濃縮した。３００ｍｇ／ｍｌ（１０×）または１５０ｍｇ／ｍｌ（５×）の１００ｋＤａ超細菌ペレット溶液などの３０ｍｇ／ｍｌより濃縮した材料を作製するために、細胞壁画分を、出発材料よりも１０倍または５倍少ない容量にただ再懸濁する。

実施例８ ＡＨ０１０６由来の細胞壁画分は、ＭＤＤＣＳにおいて１型インターフェロンおよび結果としてのＩＰ−１０誘導（炎症促進性ケモカイン）を有利に遮断する
実施例７で作製される、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６由来の細胞壁画分が有益な抗ウイルス効果を有するかどうかを決定するために、画分を、ＨＲＶ１６に曝露したヒトＭＤＤＣでインキュベートし、１型インターフェロンおよび細胞ＩＰ−１０応答を監視した。単球由来樹状細胞作製について：密度勾配遠心分離を使用して、健康なドナーから末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を単離した。ＭＡＣＳシステム（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ、１３０−０５０−２０１）によるＣＤ１４陽性単離を使用して、ヒト末梢血単球を単離した。細胞を、インターロイキン４ １０００Ｕ／ｍｌ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、３００−０３）１０００Ｕ／ｍｌを含むｃＲＰＭＩ培地（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２１８７５−０９１）で６日間培養して、ＭＤＤＣに分化させた。細胞をｃＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、２１８７５−０９１）＋１０％ウシ胎児血清（ＳｉｇｍａカタログＦ４１３５）および１％ペニシリン／ストレプトマイシン（ＳｉｇｍａカタログＰ０７８１）で培養した。

ＭＤＤＣを、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６由来の細胞壁画分（３０ｍｇ／ｍｌ）による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、ＨＲＶ１６（ＭＯＩ）２５：１）で、またはＨＲＶ１６単独で刺激した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ多重懸濁アレイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）によって、サイトカイン分泌を調べた（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＰ−１０）。

上記のＢ．ロンガムＡＨ０１０６株で前処理したＨＲＶ１６刺激ＭＤＤＣの結果と一致して、ＨＲＶ１６に対するＩＰ−１０（図１６（ａ））、ＩＦＮ−α（図１６（ｂ））およびＩＦＮ−β（図１６（ｃ））応答は、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分によって減弱された。

実施例９ 全てのビフィドバクテリウム属種由来の細胞壁画分が同じ効果を有するわけではない
実施例４に記載される方法論を使用して、別のビフィドバクテリウム属菌、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａ ｂｒｅｖｅ）（Ｂｉｆ ＵＣＣ２００３）由来の細胞壁画分も試験したが、同様の有意な効果は示さなかった。Ｂｉｆ ＵＣＣ２００３画分は、ウイルス刺激後にＩＰ−１０産生を減少させたが、２４時間アッセイ中、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６細胞壁画分と同程度ではなかった（図１７（ａ））。

さらに、炎症を起こした粘膜内では、ＩＰ−１０分泌を誘導するのがウイルス自体だけではなく、他のサイトカインもＩＰ−１０産生を誘導し得る。ＩＦＮ−βなどのサイトカインは、一次抗ウイルス宿主応答の一部として産生される。ＩＦＮ−βは、特に、ＩＰ−１０の強力な誘導因子である。そのため、本発明者らは、ＩＦＮ−βに応じたＩＰ−１０の分泌に対する細胞壁画分の効果を調べた（図１７（ｂ））。ＭＤＤＣを、細胞壁画分（３０ｍｇ／ｍｌ）による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、ＩＦＮ−β（２００ｎｇ／ｍｌ）でまたはＩＦＮ−β単独で刺激した。Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６細胞壁ペレット画分はこれらの刺激に対するＩＰ−１０分泌を抑制した一方、Ｂｉｆ ＵＣＣ２００３細胞壁ペレット画分はＩＰ−１０分泌を全く減少させなかった。

実施例１０ Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株由来の細胞壁画分は、炎症の減少に寄与する、単球由来樹状細胞におけるさらなる有益な効果を有する（ＴＮＦ−αを遮断する）が、全てのビフィドバクテリウム株が同じ効果を有するわけではない
炎症を起こした粘膜内では、炎症促進性ＴＮＦ−α分泌を誘導するのがウイルス自体だけではなく、他の（ｔｏｌｌ様受容体）ＴＬＲリガンドもその産生を誘導し得る。そのため、本発明者らは、ＴＬＲリガンドＰｏｌｙ：ＩＣ（ＴＬＲ−３）およびＬＰＳ（ＴＬＲ−４）に応じたＴＮＦ−αの分泌を調べた。ＭＤＤＣを、ＬＰＳ、ＴＬＲ−４アゴニストに曝露する前に細胞壁Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６、Ｂ．ロンガム３５６２４およびＢｉｆ ＵＣＣ２００３で前処理し、ＩＰ−１０およびＴＮＦ応答を監視した。ＭＤＤＣを、（３０ｍｇ／ｍｌ）の用量のビフィドバクテリウム属菌由来の細胞壁画分による前処理（１時間）後に、３７℃、５％ＣＯ２でｃＲＰＭＩ中２４時間、ＴＬＲ−４アゴニストＬＰＳ（５０ｎｇ／ｍｌ）もしくはＴＬＲ−３アゴニストＰｏｌｙ：ＩＣ（５μｇ／ｍｌ）でまたはＴＬＲアゴニスト単独で刺激した。Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）によってＴＮＦ−α分泌を調べた。Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６株全体の結果と一致して、ＬＰＳおよびＰｏｌｙ：ＩＣに対するＴＮＦ−α応答はＢ．ロンガムＡＨ１０６由来の細胞壁画分によって減弱された一方、Ｂ．ロンガム３５６２４由来の細胞壁画分とＢｉｆ ＵＣＣ２００３由来の細胞壁画分の両方とも、同じ用量でＴＮＦ−αを増加させる（図１８ａおよび図１８ｂ）。Ｂ．ロンガム３５６２４は周知の抗炎症性株であるので、これは非常に驚くべき結果であり、Ｂ．ロンガムＡＨ０１０６はこの系で優れた応答を有していた。
考察
要約すると、実施例２〜１０に例示されるように、本発明者らは、有益なＩＩＩ型インターフェロン応答増強が存在し、ＡＨ０１０６由来の細胞壁画分の添加がこの望ましい応答を引き起こすことを示した。後期宿主免疫系応答（ＤＣ）の一部である細胞では、細胞壁画分が、細胞損傷および二次感染症をもたらし得る過剰な１型インターフェロン応答を遮断する。この標的化効果は、小児と成人の両方、および肥満個体においてインフルエンザ、感冒（ライノウイルス）およびＲＳＶによって引き起こされる感染症、喘息、ＣＯＰＤおよびＡＲＤなどの慢性呼吸器疾患のウイルス性憎悪で利益がある。
カスケード応答
ウイルス感染症に対する異常な応答のカスケードを図１９（ａ）に例示する。

ウイルス感染症に対するＡＨ０１０６細胞壁画分媒介応答のカスケードを図１９（ｂ）に例示する。
主な抗ウイルス応答はＩＦＮによって制御される。最もよく定義されたＩ型ＩＦＮはＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βである。ほとんどの細胞型はＩＦＮ−βを産生する一方で、造血細胞、特に形質細胞様樹状細胞はＩＦＮ−αの優勢な産生者である（ＩｖａｓｈｋｉｖおよびＤｏｎｌｉｎ ２０１４）。前述のように、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−βなどのインターフェロンＩ型応答は、インフルエンザ感染症のモデルで罹患率および死亡率増加と直接相関することが示されている（Ｄａｖｉｄｓｏｎら、２０１４）。１型ＩＦＮは、ＩＰ−１０（ＣＸＣＬ−１０とも呼ばれる）、その主な機能がＴｈ１細胞の化学誘引物質である、ＣＸＣＲ３に結合するケモカインの産生を刺激し得る。λＩＦＮ（ＩＦＮ１、ＩＩＩ型ＩＦＮまたはＩＬ２８およびＩＬ−２９）は、Ｉ型ＩＦＮと相同性、発現様式および抗ウイルス機能を共有するインターフェロンの新たなクラスを構成する（Ｌａｚｅａｒら、２０１５ｂ；Ｗａｃｋら、２０１５）。これらは、Ｉ型ＩＦＮのものと著しく類似しているように思われる下流シグナル伝達を誘導し、ＩＳＧの発現および抗ウイルス応答の誘導を駆動する（Ｄｕｒｂｉｎら、２０１３；Ｍｅｎｄｏｚａら、２０１７）。しかしながら、ＩＩＩ型インターフェロンは、炎症促進性応答または免疫病理学を制限するのに重要な役割を果たす。

インフルエンザウイルスによる感染で、ＩＰ−１０が肺で上昇する（Ｉｃｈｉｋａｗａら、２０１３）。実際、モノクローナル抗体を使用したＩＰ−１０の遮断は、ウイルス誘発性肺傷害を改善する（Ｗａｎｇら、２０１３）。ＩＰ−１０はＡＲＤＳ患者の肺で上昇しており、ＡＲＤＳ病理学における重要な因子であることが示されている（Ｉｃｈｉｋａｗａら、２０１３）。

ＳＰ−Ｄは、ウイルスのＨＡ／ＮＡ糖タンパク質上のマンノースに富むグリカンに結合することによって、インフルエンザに対する自然宿主防御で重要な役割を果たす（Ｈａｒｔｓｈｏｒｎら、１９９７；Ｒｅａｄｉｎｇら、１９９７；Ｈａｒｔｓｈｏｒｎら、２０００）。ＳＰ−Ｄは、ウイルス感染性の中和およびウイルスＮＡの酵素活性の阻害を含むインビトロでの所定範囲の抗ウイルス活性を媒介し、ＳＰ−Ｄ欠損マウスは、高度グリコシル化インフルエンザウイルスによる感染により感受性であった。（Ｈａｒｔｓｈｏｒｎら、１９９７；Ｒｅａｄｉｎｇら、１９９７；Ｔｅｃｌｅら、２００７；ＬｅＶｉｎｅら、２００１；Ｖｉｇｅｒｕｓｔら、２００７；Ｈａｗｇｏｏｄら、２００４）。ＳＰ−Ｄは、ＲＳＶの貪食および肺クリアランスを増強する（ＬｅＶｉｎｅら、２００４）。

二次細菌感染症は、ウイルス感染後の主要な問題である。ウイルス−細菌同時感染はインフルエンザ、ライノウイルスおよびＲＳＶでよく認識されている。気道における主な細菌感染症には、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、モラクセラ・カタラーリスおよびインフルエンザ菌が含まれるが、黄色ブドウ球菌もウイルス感染症後に重篤な感染症を引き起こすことが示されている（Ｈｅｗｉｔｔら、２０１６）。二次細菌感染症は、最も頻繁には一次ウイルス感染症の５〜１０日後に起こるので、一過的な免疫抑制（一次応答）が細菌増殖を担い得ることを示唆している。インフルエンザと肺炎連鎖球菌との間の相乗作用について提案されている機序が、一次インフルエンザウイルス感染症によって誘発される抗ウイルス１型ＩＦＮ（ＩＦＮ−α／β）応答が、抗菌免疫の抑制を介して二次細菌負荷に対する宿主の感受性を増強することを示唆している（Ｎａｋａｍｕｒａら、２０１１；Ｓｈａｈａｎｇｉａｎら、２００９；Ｌｉら、２０１２）。対照的に、ＩＦＮ−λなどのＩＩＩ型インターフェロンは、ＩＦＮ−α／β誘導後に起こる二次細菌感染症のクリアランスを阻害することなくウイルス複製を制限することができる。ＩＦＮＬＲ１ Ｆｃタンパク質による細菌負荷の直前のＩＦＮ−λシグナル伝達の減弱の影響は、動物で対照と比較して、肺における細菌負荷を十分に増加させることが示されている（Ｒｉｃｈら、２０１７）。さらに、ＳＰ−Ｄの欠損は、上気道および下気道の肺炎連鎖球菌によるコロニー形成および感染増強、ならびに菌血症の早期発症および長期持続に関連していた。ＳＰ−Ｄは、インビトロで肺炎連鎖球菌に結合し、これを凝集させることが示された（喘息およびＣＯＰＤ患者における二次憎悪の重要な問題である二次細菌感染因子）（Ｊｏｕｎｂｌａｔら、２００５）。

ウイルス感染症に対する調節不全のまたは異常な免疫応答によって急性的に影響を及ぼされる様々な状態は以下の通り要約される；急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、小児喘息を含む喘息、ＣＯＰＤ、肥満。

急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、世界中の多数の人々に発症しており、非常に高い死亡率（３０〜５０％）を伴う。呼吸器ウイルス感染症（例えば、インフルエンザ）はＡＲＤＳに関連する。

喘息は、通常は気道過敏および可変気流に関連する、気道の慢性炎症性障害である。
喘息は、しばしば自然にまたは治療中に可逆性の、通常は気道過敏および可変気流閉塞に関連する、気道の慢性炎症性障害である（ＷＴＯ、２００７）。小児、青年期およびあまり頻度は高くないが成人における喘息憎悪のおよそ８０〜８５％がウイルス性上気道ウイルス感染症に関連しており、ライノウイルス（ＲＶ）がこれらのウイルス関連憎悪の約６０〜７０％を占める。ウイルス感染症は全年齢の小児で喘鳴病と密接に関連している。ＲＳＶが細気管支炎またはクループの主原因物質である一方で、ライノウイルス（ＲＶ）はその後に喘鳴小児で最も一般的に検出される。これらのウイルスのいずれかによって誘発される重篤な呼吸器病はその後の喘息発症に関連し、ＲＶ感染症で喘鳴している若齢小児でリスクが最も大きい（ＪａｒｔｔｉおよびＧｅｒｎ、２０１７）。

肥満は、調節不全の免疫および炎症応答に関連する。喘息の発生に対する肥満の効果は、女性および非アレルギー個体でより顕著であるように思われる一方で、喘息発生率に対するボディマス指数（ＢＭＩ）増加の用量反応効果が存在する。肥満が、従来の喘息治療に対して可変的応答を有するより重篤な疾患を特徴とする特有の喘息表現型に関連することがますます自明になっている。さらに、肥満は、２００９年のインフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）世界的流行の間に、重篤なインフルエンザについての危険因子として特定され、肥満個体は呼吸器ウイルスに対する抗ウイルス防御が損なわれている（Ａｌｍｏｎｄら、２０１３）。証拠は、この損傷性応答を駆動するのが、ウイルス自体ではなく、ＲＶに対する免疫応答の性質であることを示唆している（Ｓｔｅｉｎｋｅら、２０１６）。

ＣＯＰＤは、米国の死因第３位である。実際、ＣＯＰＤは、その発生率が増加している唯一の主な死因であり、２０３０年までに先進国の死因第３位になると予想される（心疾患および脳卒中のみが超過する）。これは、気道の炎症誘発性損傷から生じ、慢性気管支炎および／または気腫を引き起こす。広範なウイルスがＣＯＰＤ患者の憎悪を誘導し得るが、また、症状の悪化をもたらすのはウイルスではなく、ウイルスに対する免疫応答であるように思われる（Ｚｈｏｕら、２０１５）。

本発明の株は、カプセル剤、マイクロカプセル剤、錠剤、顆粒剤、散剤、トローチ、丸剤、坐剤、懸濁剤およびシロップなどの従来の製剤で経口摂取可能な形態で動物（ヒトを含む）に投与され得ることが理解されると予想される。適切な製剤は、従来の有機および無機添加剤を使用して一般的に利用される方法によって調製され得る。医薬組成物中の有効成分の量は、所望の治療効果を及ぼすレベルであり得る。

製剤はまた、細菌成分、薬物実体または生物学的化合物を含み得る。
さらに、本発明の株を含むワクチンは、任意の適切な公知の方法を使用して調製され得、薬学的に許容される担体またはアジュバントを含み得る。

ヒト免疫系は、広範囲のヒト疾患の病因学および病理学において有意な役割を果たす。過免疫および低免疫（ｈｙｐｏ−ｉｍｍｕｎｅ）応答性が、疾患状態の大部分をもたらす、またはその構成要素である。サイトカインと呼ばれる生物学的実体の１つのファミリーが、免疫過程の制御にとって特に重要である。これらの繊細なサイトカインネットワークの摂動が、多くの疾患にますます関連している。これらの疾患には、それだけに限らないが、炎症性障害、免疫不全、炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、がん（特に胃腸および免疫系のもの）、下痢性疾患、抗生物質関連下痢、小児下痢、虫垂炎、自己免疫障害、多発性硬化症、アルツハイマー病、関節リウマチ、セリアック病、糖尿病、臓器移植、細菌感染症、ウイルス感染症、真菌感染症、歯周病、泌尿生殖器疾患、性感染症、ＨＩＶ感染症、ＨＩＶ複製、ＨＩＶ関連下痢、手術関連外傷、手術誘発性転移性疾患、敗血症、体重減少、食欲不振、熱制御、悪液質、創傷治癒、潰瘍、腸バリア機能、アレルギー、喘息、呼吸器障害、循環障害、冠動脈心疾患、貧血、血液凝固系の障害、腎疾患、中枢神経系の障害、肝疾患、虚血、栄養障害、骨粗鬆症、内分泌障害、上皮障害、乾癬および尋常性ざ瘡が含まれる。サイトカイン産生に対する効果は、調査したプロバイオティクス株に特異的である。よって、特に特定の疾患型について排他的なサイトカイン不均衡を正常化するために特定のプロバイオティクス株が選択され得る。ＡＮ１２０６の単一株またはその突然変異体もしくは変異体またはこれらの株の選択を使用して、疾患特異的療法のカスタム化が達成され得る。

腸内細菌叢は、腸免疫系の発達および適切な機能にとって重要である。腸内細菌叢が存在しないと、無菌動物モデルで実証されるように、腸免疫系が発達不全となり、マクロファージ貪食能および免疫グロブリン産生などの一定の機能的パラメータが減少する。非損傷性免疫応答を刺激することにおける腸内細菌叢の重要性がより自明になっている。西洋諸国でのアレルギーの発生率および重症度の増加は、宿主が遭遇する感染性負荷の数および範囲の減少に付随した、衛生および公衆衛生の増加に関連している。この免疫刺激の欠如が、宿主が非病原性であるが抗原性物質に反応するのを可能にし、アレルギーまたは自己免疫をもたらし得る。一連の非病原性免疫調節性細菌の計画的な消費は、宿主に、免疫機能の適切な発達および制御のために必要な適切な教育的刺激を提供すると予想される。

炎症は、実質的な物理的損傷、感染を有する、または進行中の免疫応答が存在する部位における体液、血漿タンパク質および白血球の局所的蓄積を記載するために使用される用語である。炎症反応の制御は、いくつかのレベルで及ぼされる。制御因子は、サイトカイン、ホルモン（例えば、ヒドロコルチゾン）、プロスタグランジン、反応性中間体およびロイコトリエンを含む。サイトカインは、免疫学的および炎症性反応の生成および制御に関与する低分子量の生物学的に活性なタンパク質である一方で、発達、組織修復および造血も調節する。サイトカインは、白血球自体の間および白血球自体と他の細胞型との間の連通の手段を提供する。ほとんどのサイトカインは、多面発現性であり、複数の生物学的に重複する活性を発現する。サイトカインカスケードおよびネットワークは、特定の細胞型に対する特定のサイトカインの作用よりもむしろ炎症反応を制御する。炎症反応の漸減は、低濃度の適切な活性化シグナルおよび他の炎症性メディエータをもたらし、炎症反応の停止につながる。ＴＮＦαは、炎症状態をもたらすサイトカインカスケードおよび生物学的効果を開始するので、重要な炎症促進性サイトカインである。そのため、炎症性疾患の治療には、ＴＮＦαを阻害する薬剤、例えばインフリキシマブが現在使用されている。

炎症促進性サイトカインは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を含む多くの炎症性疾患の発病において主要な役割を果たすと考えられる。現在のＩＢＤを治療するための療法は、ＩＬ−８およびＴＮＦαを含むこれらの炎症促進性サイトカインのレベルを低下させることを目指している。このような療法はまた、関節リウマチなどの全身炎症性疾患の治療においても有意な役割を果たし得る。

本発明の株は、特に非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）またはインフリキシマブなどの他の抗炎症療法と組み合わせて使用されると、所定範囲の炎症性疾患の治療において潜在的用途を有し得る。

広範囲の腫瘍型にわたる多機能性サイトカインの産生は、がん患者で有意な炎症反応が進行中であることを示唆している。この反応がインビボで腫瘍細胞の増殖および発達に対してどのような保護効果を有するのかは現在はっきりしない。しかしながら、これらの炎症反応は腫瘍保有宿主に悪影響を及ぼし得ると予想される。腫瘍および正常組織内のサイトカイン産生および細胞増殖の調節には複雑なサイトカイン相互作用が関与している。体重減少（悪液質）は、がん患者の唯一の最も一般的な死因であり、初期栄養不良は予後不良を示すことが長く認識されている。腫瘍が増殖し、広がるためには、これが新たな血管形成を誘導し、細胞外マトリックスを分解しなければならない。炎症反応は、上記機序で果たす有意な役割があるので、宿主の衰弱および腫瘍の進行に寄与し得る。ビフィドバクテリウム・ロンガムの抗炎症特性のために、これらの菌株は、悪性細胞形質転換の速度を低下させ得る。さらに、腸内細菌は、食物化合物から、遺伝毒性、発癌性および腫瘍促進活性を有する物質を産生し、腸内細菌はＤＮＡ反応剤に対する前発癌物質を活性化し得る。一般に、ビフィドバクテリウム属の種は、バクテロイデス、真正細菌およびクロストリジウムなどの腸内の他の集団と比較して生体異物代謝酵素の活性が低い。そのため、腸内のビフィドバクテリウム属細菌の数の増加は、これらの酵素のレベルを有利に修正し得ると予想される。

病原性生物の大部分は、粘膜表面を介して侵入する。これらの部位の効率的なワクチン接種は、特定の感染因子による侵入から防御する。経口ワクチン接種戦略は、現在までのところ、弱毒化した生きた病原性生物または精製したカプセル化抗原の使用に集中している。インビボで感染因子からの抗原を産生するよう操作されたプロバイオティクス細菌は、これらの細菌がヒト消費にとって安全であると考えられるので（ＧＲＡＳ状態）、魅力的な代替を提供し得る。

マウス研究は、外来抗原を発現するプロバイオティクス細菌の消費が、防御免疫応答を誘発することができることを実証している。破傷風毒素フラグメントＣ（ＴＴＦＣ）をコードする遺伝子がラクトコッカス・ラクティス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ ｌａｃｔｉｓ）で発現され、経口経路を介してマウスが免疫された。この系は、マウスを致死毒素負荷から防御するのに十分有意に高い抗体価を誘導することができた。抗原提示に加えて、生細菌ベクターは、インビボで免疫刺激性サイトカインなどの生理活性化合物を産生することができる。生理活性ヒトＩＬ−２またはＩＬ−６およびＴＴＦＣを分泌するＬ．ラクティスは、鼻腔内免疫化マウスで１０〜１５倍高い血清ＩｇＧ力価を誘導した。しかしながら、この特定の菌株では、これらのサイトカインとの同時発現によって総ＩｇＡレベルは増加しなかった。ストレプトコッカス・ゴルドニ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｇｏｒｄｏｎｉｉ）などの他の菌株も、粘膜ワクチンとしての有用性について調べられている。マウス口腔および膣腔でコロニー形成している組換えＳ．ゴルドニは、この細菌によって発現される抗原に対する粘膜と全身両方の抗体応答を誘導した。よって、ベクターとしてプロバイオティクス細菌を使用した経口免疫は、宿主を感染から防御するだけでなく、病原体が通常誘発する免疫学的刺激に取って代わり得るので、宿主の免疫学的教育に寄与する。
プレバイオティクス
プロバイオティクス生物の導入は、適切な担体中の微生物の摂取によって達成される。大腸内でのこれらのプロバイオティクス株の増殖を促進するような媒体を提供することが有利となると予想される。１種または複数のオリゴ糖、多糖または他のプレバイオティクスの添加は、胃腸管内の乳酸細菌の増殖を増強する。プレバイオティクスは、プラスの価値があると考えられる常在菌、例えばビフィドバクテリウム属菌、乳酸桿菌によって結腸内で特異的に発酵される任意の非生存食物成分を指す。プレバイオティクスの種類には、フルクトース、キシロース、大豆、ガラクトース、グルコースおよびマンノースを含有するものが含まれ得る。プロバイオティクス株と１種または複数のプレバイオティクス化合物の組合せ投与は、インビボで投与されたプロバイオティクスの増殖を増強し、より明白な健康上の利益をもたらし得るので、シンバイオティクスと呼ばれる。
他の有効成分
プロバイオティクス株は、それ自体で、あるいは上記のように他のプロバイオティクスおよび／またはプレバイオティクス物質と共に、予防的にまたは治療方法として投与され得ることが理解されると予想される。さらに、細菌は、他の活性物質、例えば炎症または他の障害、特に免疫学的関与を有するものを治療するために使用されるものを使用した予防的または治療体制の一部として使用され得る。このような組合せは、単一製剤で、または同時にもしくは異なる時に、同じもしくは異なる投与経路を使用して投与される別々の製剤として投与され得る。
医薬組成物
医薬組成物は、治療上有効量の薬学的に活性の薬剤を含むまたはからなる組成物である。これは、好ましくは薬学的に許容される担体、希釈剤または賦形剤（これらの組合せを含む）を含む。治療的使用のための許容される担体または希釈剤は製薬分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓに記載されている。医薬担体、賦形剤または希釈剤の選択は、意図した投与経路および標準的な薬務に関して選択され得る。医薬組成物は、担体、賦形剤または希釈剤として、またはこれに加えて、任意の適切な結合剤、潤滑剤、懸濁化剤、コーティング剤、可溶化剤、噴霧剤を含み得る。

薬学的に許容される担体の例としては、例えば、水、塩溶液、アルコール、シリコーン、ワックス、ワセリン、植物油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、リポソーム、糖、ゼラチン、ラクトース、アミロース、ステアリン酸マグネシウム、タルク、界面活性剤、ケイ酸、粘性パラフィン、香油、脂肪酸モノグリセリドおよびジグリセリド、ペトロエテラル（ｐｅｔｒｏｅｔｈｒａｌ）脂肪酸エステル、ヒドロキシメチル−セルロース、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。

必要に応じて、医薬組成物は、吸入、坐剤もしくはペッサリーの形態、ローション、溶液、クリーム、軟膏もしくは粉剤の形態で局所的、皮膚パッチの使用により、デンプンもしくはラクトースなどの賦形剤を含有する錠剤の形態で経口的、または単独もしくは賦形剤との混合物のカプセル剤もしくは膣坐剤（ｏｖｕｌｅ）、または香味剤もしくは着色剤を含有するエリキシル、液剤もしくは懸濁剤の形態のいずれか１つまたは複数によって投与され得る、あるいは医薬組成物は非経口的に、例えば陰茎海綿体内、静脈内、筋肉内または皮下注射され得る。非経口投与については、組成物は、他の物質、例えば溶液を血液と等張にするのに十分な塩または単糖を含有し得る滅菌水溶液の形態で最もよく使用され得る。頬側または舌下投与については、組成物は、従来の様式で製剤化され得る錠剤またはロゼンジの形態で投与され得る。

鼻腔内投与は、点鼻薬、鼻洗浄液または鼻内への直接施用を使用して達成され得る。
肺への投与は、乾燥粉末の形態であり得、吸入装置を使用して吸入され得る。いくつかの場合、製剤は、エアロゾルの形態である。エアロゾルは、例えばＨＦＡ噴霧剤を含む方法用量吸入器、非ＨＦＡ噴霧剤を含む定量吸入器、ネブライザー、加圧カン、または連続噴霧器を使用した、溶液、懸濁液、スプレー、ミスト、蒸気、液滴、粒子または乾燥粉末であり得る。

製剤は、ウイルスをカプセル化する、除去するおよび／または不活性化するように設計され得る。あるいはまたはさらに、製剤は、ウイルスが気道にさらに感染するのを阻止し得る。

鼻腔などの気道への送達およびその中での維持を助けるために、製剤は、０．００１Ｐａ・ｓ（１センチポアズ）〜２Ｐａ・ｓ（２０００センチポアズ）、例えば０．００５Ｐａ・ｓ（５ｃｐ）〜０．５Ｐａ・ｓ（５００ｃｐ）または０．００５Ｐａ・ｓ（５ｃｐ）〜０．３Ｐａ・ｓ（３００ｃｐ）の所望の粘度を有し得る。所望の粘度を達成するために、任意の適切な粘度修正剤が使用され得る。このような物質は、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの適切な天然または合成ポリマー材料であり得る。

様々な送達システムに応じた様々な組成物／製剤要件が存在し得る。例として、本発明の医薬組成物は、ミニポンプを使用してまたは粘膜経路によって送達されるように、例えば点鼻薬もしくは吸入用エアロゾルもしくは摂取可能な溶液として製剤化されてもよいし、または非経口的に製剤化されてもよく、その場合、組成物は注射可能な形態に製剤化され、例えば静脈内、筋肉内または皮下経路による送達用に製剤化されてもよい。あるいは、製剤は、両経路によって送達されるように設計され得る。

本発明は、上記実施形態に限定されず、詳細が変化し得る。
参考文献
Bouhnik, Y., Survie et effets chez l’homme des bacteries ingerees dans les laits fermentes. Lait 1993, 73;241-247.
Yang JW., Fan LC., Miao XY., Mao B., Li MH., Lu HW., Liang S., Xu JF. Corticosteroids for the treatment of human infection with influenza virus: a systematic review and meta-analysis. Clin Microbiol Infect. 2015 Oct;21(10):956-63.
Davidson S., Crotta S., McCabe TM., Wack A. Pathogenic potential of interferon αβ in acute influenza infection. Nat Commun. 2014 May 21;5:3864.
Nakamura S., Davis KM., Weiser JN. Synergistic stimulation of type I interferons during influenza virus coinfection promotes Streptococcus pneumoniae colonization in mice. J Clin Invest 2011;121:3657-65.
Shahangian A., Chow EK., Tian X. et al. Type I IFNs mediate development of postinfluenza bacterial pneumonia in mice. J Clin Invest 2009;119:1910-20.
Li W., Moltedo B., Moran TM. Type I interferon induction during influenza virus infection increases susceptibility to secondary Streptococcus pneumoniae infection by negative regulation of gammadelta T cells. J Virol 2012;86:12304-12.
Hewitt R., Farne H., Ritchie A., Luke E., Johnston SL., Mallia P. The role of viral infections in exacerbations of chronic obstructive pulmonary disease and asthma. Ther Adv Respir Dis. 2016 Apr;10(2):158-74. doi: 10.1177/1753465815618113.
Galani IE., Triantafyllia V., Eleminiadou EE., Koltsida O., Stavropoulos A., Manioudaki M., Thanos D., Doyle SE., Kotenko SV., Thanopoulou K., Andreakos E. Interferon-λ Mediates Non-redundant Front-Line Antiviral Protection against Influenza Virus Infection without Compromising Host Fitness. Immunity. 2017 May 16;46(5):875-890.
Davidson S., McCabe TM., Crotta S., Gad HH., Hessel EM., Beinke S., Hartmann R., Wack A. IFN-λ is a potent anti-influenza therapeutic without the inflammatory side effects of IFN-α treatment. EMBO Mol Med. 2016 Sep 1;8(9):1099-112.
Thiel, S., and Reid K. 1989 -Structures and functions associated with the group of mammalian lectins containing collagen-like sequences. FEBS Lett. 250:78.2.
Sastry, K., and Ezekowitz R.A. 1993. Collectins: pattern recognition molecules involved in first line host defense. Curr. Opin. Immunol. 5:59.
Shi X., Zhou W., Huang H., Zhu H., Zhou P., Zhu H., Ju D. Inhibition of the inflammatory cytokine tumor necrosis factor-alpha with etanercept provides protection against lethal H1N1 influenza infection in mice. Crit. Care, 2013; 17(6);R301.
Bartlett NW1., Singanayagam A., Johnston SL. Mouse models of rhinovirus infection and airways disease. Methods Mol Biol. 2015;1221:181-8. doi: 10.1007/978-1-4939-1571-2_14.
Ivashkiv LB., and Donlin LT. Regulation of type I interferon responses. Nat Rev Immunol. 2014 Jan; 14(1): 36-49.
Lazear HM., Nice TJ., Diamond MS. Interferon-λ: Immune Functions at Barrier Surfaces and Beyond. Immunity, 2015 Jul 21;43(1): 15-28.
Wack A., Terczynska-Fyla E., Hartmann R. Guarding the frontiers: the biology of the type III interferons. Nat Immunol. 2015 Aug; 16(8): 802-9.
Durbin RK., Kotenko SV., Durbin JE. Interferon induction and function at the muscol surface. Immunol Rev. 2013 Sep;255(1): 25-39.
Mendoza JL., Schneider WM., Hoffmann HH., Vercauteren K., Jude KM., Xiong A., Moraga I., Horton TM., Glenn JS., de Jong YP., Rice CM., Garcia KC. The IFN-λ-IFN-λR1-IL-10Rβ Complex Reveals Structural Features Underlying Type III IFN Functional Plasticity. Immunity. 2017 Mar 21;46(3): 379-392.
Ichikawa A., Kuba K., Morita M., Chida S., Tezuka H., Hara H., Sasaki T., Ohteki T., Ranieri VM., dos Santos CC., Kawaoka Y., Akira S., Luster AD., Lu B., Penninger JM., Uhlig S., Slutsky AS., Imai Y. CXCL10-CXCR3 enhances the development of neutrophil-mediated fulminant lung injury of viral and nonviral origin. Am J Respir Crit Care Med. 2013 Jan 1;187(1):65-77.
Wei Wang., Penghui Yang., et al. Monoclonal antibody against CXCL-10/IP-10 ameliorates influenza A (H1N1) virus induced acute lung injury. Cell Research (2013) 23:577-580.
Hartshorn KL., White MR., Shepherd V., Reid K., Jensenius JC., Crouch EC. Mechanisms of anti-influenza activity of surfactant proteins A and D: comparison with serum collectins. Am J Physiol 1997; 273: L1156-L1166.
Reading PC., Morey LS., Crouch EC., Anders EM. Collectin-mediated antiviral host defense of the lung: evidence from influenza virus infection of mice. J Virol 1997;71: 8204-8212.
Hartshorn KL., White MR., Voelker DR., Coburn J., Zaner K., Crouch EC. Mechanism of binding of surfactant protein D to influenza A viruses: importance of binding to haemagglutinin to antiviral activity. Biochem J 2000; 351 (Pt 2): 449-458.
Tecle T., White MR., Crouch EC., Hartshorn KL. Inhibition of influenza viral neuraminidase activity by collectins. Arch Virol 2007; 152: 1731-1742.
LeVine AM., Whitsett JA., Hartshorn KL., Crouch EC., Korfhagen TR. SP- D enhances clearance of influenza A virus from the lung in in vivo mouse models. J Immunol 2001; 167:5868-5873.
Vigerust DJ., Ulett KB., Boyd KL., Madsen J., Hawgood S., McCullers JA. N-linked glycosylation attenuates H3N2 influenza viruses. J Virol 2007; 81:8593-8600.
Hawgood S., Brown C., Edmondson J., Stumbaugh A., Allen L., Goerke J. et al. Pulmonary collectins modulate strain-specific influenza a virus infection and host responses. J Virol 2004; 78: 8565-8572.
LeVine AM(1)., Elliott J., Whitsett JA., Srikiatkhachorn A., Crouch E., DeSilva N., Korfhagen T. Surfactant protein-d enhances phagocytosis and pulmonary clearance of respiratory syncytial virus. Am J Respir Cell Mol Biol. 2004 Aug;31(2):193-9.
Rich H., Robinson KE., McHugh KJ., Clay ME., Alcorn JF. The role of interferon lambda during influenza, Staphylococcus aureus super-infection.J Immunol May 1, 2017, 198(1 Supplement) 77.16.
Jounblat R., Clark H., Eggleton P., Hawgood S., Andrew PW., Kadioglu A. The role of surfactant protein D in the colonisation of the respiratory tract and onset of bacteraemia during pneumococcal pneumonia Respir Res. 2005 Oct 28;6:126.
World Health Organisation 2007. Global surveillance, prevention and control of chronic respiratory diseases, a comprehensive approach. (Editors Jean Bousquet and Nikolai Khaltaev).
Jartti T., Gern JE. Role of viral infections in the development and exacerbation of asthma in children. J Allergy Clin Immunol. 2017 Oct;140(4):895-906.
Almond MH1., Edwards MR., Barclay WS., Johnston SL. Obesity and susceptibility to severe outcomes following respiratory viral infection. Thorax. 2013 Jul;68(7):684-6. doi: 10.1136/thoraxjnl-2012-203009.
Steinke JW., Borish L. Immune Responses in Rhinovirus-Induced Asthma Exacerbations. Curr Allergy Asthma Rep. 2016 Nov;16(11):78.
Zhou X., Li Q., Zhou X. Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Cell Biochem Biophys. 2015 Nov;73(2):349-55.

Claims (65)

1. 受託番号ＮＣＩＭＢ４２０２０を有するビフィドバクテリウム・ロンガム株。
2. 生物学的に純粋な培養物の形態である、請求項１に記載のビフィドバクテリウム株。
3. ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０の単離株。
4. 生細胞の形態である、請求項１〜３のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株。
5. 非生細胞の形態である、請求項１〜４のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株。
6. 糞便から単離される、請求項１〜５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株。
7. 細菌ブロスの形態である、請求項１〜６のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株。
8. 凍結乾燥粉末の形態である、請求項１〜６のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株。
9. ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する、請求項１〜８のいずれかに記載の株。
10. ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する、請求項１〜９のいずれかに記載の株。
11. ウイルスに対するインターフェロンλ応答を増強する、請求項１から１０のいずれかに記載の株。
12. ウイルスに対するインターフェロンＩ型応答を抑制する、請求項１〜１１のいずれかに記載の株。
13. ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する、請求項１〜１２のいずれかに記載の株。
14. ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する、請求項１〜１３のいずれかに記載の株。
15. ウイルスに対するサーファクタントタンパク質Ｄ応答を増強する、請求項１〜１４のいずれかに記載の株。
16. 請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株を含む製剤。
17. 別のプロバイオティクス物質をさらに含む、請求項１６に記載の製剤。
18. プレバイオティクス物質をさらに含む、請求項１６または１７のいずれかに記載の製剤。
19. 摂取可能な担体をさらに含む、請求項１６または１７のいずれかに記載の製剤。
20. 前記摂取可能な担体が、カプセル、錠剤または粉末などの薬学的に許容される担体である、請求項１９に記載の製剤。
21. 前記摂取可能な担体が、酸性乳、ヨーグルト、フローズンヨーグルト、アイスクリーム、粉乳、乳濃縮物、アイスクリーム、チーズスプレッド、ドレッシングまたは飲料などの食品製品である、請求項１９に記載の製剤。
22. タンパク質および／またはペプチド、特にグルタミン／グルタミン酸塩に富むタンパク質および／またはペプチド、脂質、炭水化物、ビタミン、ミネラルならびに／あるいは微量元素をさらに含む、請求項１６〜２１のいずれかに記載の製剤。
23. 前記ビフィドバクテリウム株が、製剤１グラム当たり１０^６ｃｆｕ超の量で存在する、請求項１６〜２２に記載の製剤。
24. アジュバントをさらに含む、請求項１６〜２３に記載の製剤。
25. 薬物実体をさらに含む、請求項１６〜２４に記載の製剤。
26. 生物学的化合物をさらに含む、請求項１６〜２５に記載の製剤。
27. 肺または鼻への投与に適合されている、請求項１〜１５のいずれかに記載の株を含む製剤。
28. 点鼻薬の形態の、請求項２７に記載の製剤。
29. 製剤の粘度が０．００１Ｐａ・ｓ（１ｃｐ）〜２Ｐａ・ｓ（２０００ｃｐ）である、請求項２７または２８に記載の製剤。
30. 食品に使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２６のいずれかに記載の製剤。
31. 医薬品として使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２６のいずれかに記載の製剤。
32. 望ましくない炎症活性の予防および／または治療に使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２９のいずれかに記載の製剤。
33. 望ましくない炎症活性の予防および／または治療に使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体。
34. 喘息および／またはアレルギーを治療するための医薬品の調製に使用するための請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２９のいずれかに記載の製剤であって、前記医薬品は、吸入に適した形態であってもよい、製剤。
35. 対象のウイルス感染症の予防または治療に使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載のビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２９のいずれかに記載の製剤。
36. 対象の呼吸器ウイルス感染症に関連する二次細菌感染症の予防に使用するための、請求項１〜１５のいずれかに記載ビフィドバクテリウム株または請求項１６〜２９のいずれかに記載の製剤。
37. 前記ウイルスが呼吸器ウイルスである、請求項３５または３６に記載の使用するためのビフィドバクテリウム株。
38. 前記呼吸器ウイルスが、インフルエンザウイルス、ライノウイルスおよび呼吸器合胞体ウイルスから選択される、請求項３７に記載の使用するためのビフィドバクテリウム株。
39. 前記対象が、炎症性肺疾患と診断されている、請求項３５〜３８のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
40. 前記対象が、呼吸器感染症に対する感受性が増加している、請求項３５〜３９のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
41. 前記対象が肥満である、請求項３５〜４０のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
42. 前記対象が急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者である、請求項３５〜４１のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
43. 前記対象が喘息患者である、請求項３５〜４２のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
44. 前記対象が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者である、請求項３５〜４３のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
45. 前記対象が５歳未満の小児である、請求項３５〜４４のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
46. 前記対象が６０歳超の高齢者である、請求項３５〜４４のいずれかに記載の使用するためのビフィドバクテリウム・ロンガム株。
47. 対象のウイルス感染症を予防または治療する方法であって、有効量のビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体を、それを必要とする対象に投与するステップを含む方法。
48. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、ウイルスに対するＩＰ−１０応答を減弱する、請求項４７に記載の方法。
49. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するＩＩＩ型インターフェロン応答を増強する、請求項４７または４８に記載の方法。
50. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するインターフェロンλ応答を増強する、請求項４７〜４９のいずれかに記載の方法。
51. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するインターフェロンＩ型応答を抑制する、請求項４７〜５０のいずれかに記載の方法。
52. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するインターフェロンα応答を抑制する、請求項４７〜５１のいずれかに記載の方法。
53. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するインターフェロンβ応答を抑制する、請求項４７〜５２のいずれかに記載の方法。
54. 前記ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０株またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体が、前記ウイルスに対するサーファクタントタンパク質Ｄ応答を増強する、請求項４７〜５３のいずれかに記載の方法。
55. 対象の二次細菌感染症を予防または治療する方法であって、ビフィドバクテリウム・ロンガムＮＣＩＭＢ４２０２０またはその活性誘導体もしくはフラグメントもしくは突然変異体もしくは変異体から単離された細胞壁画分を投与するステップを含む方法。
56. 前記ウイルスが呼吸器ウイルスである、請求項４７〜５５のいずれかに記載の方法。
57. 前記ウイルスが、インフルエンザウイルス、ライノウイルスおよび呼吸器合胞体ウイルスから選択される、請求項４７〜５６のいずれかに記載の方法。
58. 前記対象が、炎症性肺疾患と診断されている、請求項４７〜５７のいずれかに記載の方法。
59. 前記対象が、呼吸器感染症に対する感受性が増加している、請求項４７〜５８のいずれかに記載の方法。
60. 前記対象が肥満である、請求項４７〜５９のいずれかに記載の方法。
61. 前記対象が急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）患者である、請求項４７〜６０のいずれかに記載の方法。
62. 前記対象が喘息患者である、請求項４７〜６１のいずれかに記載の方法。
63. 前記対象が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）患者である、請求項４７〜６２のいずれかに記載の方法。
64. 前記対象が５歳未満の小児である、請求項４７〜６３のいずれかに記載の方法。
65. 前記対象が６０歳超の高齢者である、請求項４７〜６４のいずれかに記載の方法。