JP2020202865A - 神経前駆細胞集団およびそれらの使用 - Google Patents
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Abstract
Description
本方法はさらに、神経前駆細胞集団を前記細胞の増殖を補助する条件下で培養することも含み得る。
本発明はまた、哺乳類中枢神経系または末梢神経系への移植時に機能的抑制性介在ニューロンへ分化する能力を有する細胞が大多数(50%を超える)を占める神経前駆細胞集団を提供する。
これらの態様ならびに本発明の他の特徴および利点を以下により詳細に記載する。当業者ならば、本明細書に記載の本発明の特定の実施形態との多くの均等物を認識し、または慣例の実験だけを用いて確認することができるであろう。このような均等物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
本明細書で使用する用語は、当業者に理解されているような明瞭かつ通常の意味を有するものとする。以下の定義は本発明を理解する上で読み手を助けることを意図するものであって、明示されていない限り、このような用語の意味に変更、あるいは他の形による制限を与えるものではない。
本明細書に記載される技術の実施には、特に断りのない限り、細胞生物学、細胞培養、分子生物学(組換え技術を含む)、生化学、治療薬製剤、幹細胞分化の従来の技術および記載を使用することができ、これらは全て当業者の技術の範囲内にある。このような従来の技術には、本明細書に記載の方法に補足的または有用な分化技術、細胞集団を含む治療薬の製剤のための技術、本発明の細胞集団の送達に有用な送達方法などが含まれる。好適な技術の具体的な実例は、本明細書の実施例を参照することにより得ることができる。
他の実施形態では、本発明は、細胞集団の少なくとも55%が、細胞の遊走し介在ニューロン、具体的には、GABA発現介在ニューロンへ分化する能力の指標となる2以上、好ましくは3以上、いっそうより好ましくは5以上の神経前駆体マーカーを発現する神経前駆細胞集団を提供する。いくつかの実施形態では、細胞集団の少なくとも70%が、細胞の遊走し介在ニューロン、具体的には、GABA発現介在ニューロンへ分化する能力の指標となる2以上、好ましくは3以上、いっそうより好ましくは5以上の神経前駆体マーカーを発現する。さらに他の実施形態では、細胞集団の少なくとも80%が、細胞の遊走し介在ニューロン、具体的には、GABA発現介在ニューロンへ分化する能力の指標となる2以上、好ましくは3以上、いっそうより好ましくは5以上の神経前駆体マーカーを発現する。
特定の実施形態では、本発明の神経前駆細胞集団は、MGE由来ヒト介在ニューロンで発現される1以上の細胞表面タンパク質を用いて富化される。このようなマーカーは、興奮性ニューロンまたは放射状グリアもしくは未分化ヒト多能性幹細胞などの他の細胞種の集団よりもヒト皮質介在ニューロンで豊富に発現される。本発明の神経前駆細胞集団の単離および/または富化に使用するための細胞表面マーカーとしては、限定されるものではないが、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2、またはTMEM2が含まれる。
本開示の本発明の神経前駆細胞を動物、特にヒトに投与する方法は本明細書に詳細に記載され、対象の標的部位への本発明の神経前駆細胞の注射または移植を含む。本開示の細胞は、動物への本細胞の注射または移植による導入を補助する送達装置に挿入することができる。このような送達装置には、レシピエント動物の体内へ細胞および流体を注入するためのチューブ、例えば、カテーテルが含まれる。好ましい実施形態では、このチューブはさらに、動物の所望の場所へ細胞を導入することができる針、例えば、シリンジを備えている。本発明の神経前駆細胞は、このような送達装置、例えば、シリンジに種々の形態で挿入することができる。例えば、細胞は、このような送達装置に含まれるにあたり、溶液中に懸濁させることができ、また支持体マトリックスに包埋することもできる。本明細書で使用する場合、用語「溶液」には、細胞が生存を維持する薬学上許容される担体または希釈剤が含まれる。薬学上許容される担体および希釈剤には、生理食塩水、バッファー水溶液、溶媒および/または分散媒が含まれる。このような担体および希釈剤の使用は当技術分野では周知である。溶液は好ましくは無菌であり、かつ、送達を容易にするために流体である。好ましくは、この溶液は、製造および保存の条件下で安定であり、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、およびチメロサールなどの使用によって、細菌および真菌などの微生物の混入の影響から保護される。本開示の溶液は、薬学上許容される担体または希釈剤および必要に応じて上記で列挙された他の成分に関して本明細書に記載されたように調製した後、濾過除菌を行うことができる。
いくつかの実施形態では、本開示は、変性疾患の処置において有用である。変性疾患は、特定の細胞種、例えば、神経細胞種の減退(例えば、機能、構造、生化学)が有害な臨床状態をもたらす疾患である。例えば、パーキンソン病は、中枢神経系、例えば、大脳基底核の変性疾患であり、律動的筋振戦、動きの固縮、加速歩行、前傾姿勢および仮面様顔貌を特徴とする。本開示の実質的に均質な細胞集団で処置可能な変性疾患には、例えば、パーキンソン病、多発性硬化症、癲癇、ハンチントン病、失調症(変形性筋失調症(dystonia musculmusculorum deformans))および舞踏病アテトーゼが含まれる。
マウス抑制性介在ニューロン前駆体移植は、癲癇、パーキンソン病、自閉症、アルツハイマー病、および神経因性疼痛を含む複数の前臨床モデルの脳および脊髄において効能があることが示されている(米国特許出願公開第20090311222号明細書、米国特許出願公開第20130202568号明細書)。in vivoで遊走し抑制性介在ニューロンへ分化する能力を有する細胞の同定を目的に、ヒト介在ニューロンにおいて、またヒト介在ニューロンの前駆体において新規な転写産物発現を同定するために、RNAシークエンシングを用いて発達中のヒト胎児脳のグローバル遺伝子発現プロファイルを調べた。調べたこれらのマーカーは細胞内マーカーと細胞表面で発現されるマーカーの両方を含んでいた。
TX)、MAFBに対する抗体(Sigma、セントルイス、MO)、およびCMAFに対する抗体(Santa Cruz、ダラス TX)を用いた。他の抗体は、それぞれCGE由来介在ニューロン、未熟ニューロン、乏突起神経膠細胞、放射状グリア/星状細胞、小グリア細胞、増殖細胞、およびアポトーシス細胞を検出するためのSP8、DCX、OLIG2(Millipore、テメキュラ、CA)、GFAP(Millipore、テメキュラ、CA)、IBA1およびPU1(Millipore、テメキュラ、CA)、KI67、および切断型カスパーゼ3(Millipore、テメキュラ、CA)に相当した。染色された細胞を分析し、ライカDmi8顕微鏡で画像を得た。
対象とする神経前駆細胞の特異的マーカーの発現を、ヒト皮質から単離された細胞において調べた。次に、実施例1に関して調製したヒト皮質由来介在ニューロンのFACSソート集団のRNA配列分析を行った。3つの精製細胞集団(CXCR4選別、CXCR7選別およびERBB4選別)のそれぞれならびに標準的な技術を用いて、選別しなかった各サンプルの細胞からmRNAを単離し、RNeasy RNA精製キット(Qiagen、ヒルデン、ドイツ)を用いてmRNAを精製し、S.Wang他,Plant Cell Rep.(2014)33(10):1687−96に記載の方法に従ってRNAシークエンシングを行った。アダプター連結およびPCR増幅の後に、ライブラリーをクラスター化し、配列を決定した。
細胞表面マーカー(例えば、CRCX4、CRCX7、またはERBB4)を発現するヒト皮質組織から調製した神経前駆細胞は、FACSソーティングまたはMACSソーティングのいずれかによる富化および培養の後にin vitroでGABAを発現および分泌することが示された。ヒト皮質組織から細胞をソートして5日後、神経前駆細胞マーカー陽性および神経前駆細胞マーカー陰性細胞培養物をGABA分泌に関してHPLC分析により分析した。図15は、ヒト皮質サンプルからのを用いたFACS(左のパネル)またはMACS(右のパネル)培養神経前駆細胞マーカー陽性集団においてGABA分泌の増加を示す。
ヒト皮質組織から富化された神経前駆細胞マーカー陽性細胞の、in vivoで遊走し介在ニューロンへ分化する能力を判定するために、FACSまたはMACSによりソートされた神経前駆細胞マーカー陽性細胞を濃縮し、新生仔マウス皮質に移植した。濃縮細胞懸濁液を、油圧式インジェクターに取り付けた面取りガラスマイクロピペット(Wiretrol 5μl、Drummond Scientific Company)に装填した。P0〜P2新生仔SCIDマウスを低体温法により麻酔し、注射プラットフォーム上のクレイヘッドモールド内に配置した。定位固定装置を用い、注射部位当たり所定数の細胞を各仔マウスの大脳皮質の正中(矢状洞)から1.0mm、ラムダから2.6mmおよび皮膚表面から深度0.3mmに経頭蓋的に注射した。これらの細胞を免疫組織化学分析法まで動物においてin vivoで遊走および分化させた。
ヒト皮質組織から富化された神経前駆細胞マーカー陽性細胞の、in vivoの成体脳において遊走し介在ニューロンへ分化する能力を決定するために、FACSまたはMACSによりソートされた神経前駆細胞マーカー陽性細胞を濃縮し、成体ラットの海馬に移植した。細胞集団をまず、CXCR4またはERBB4のいずれかに対する抗体によりソートした。濃縮細胞懸濁液を、油圧インジェクターに取り付けた面取りガラスマイクロピペット(Wiretrol 5μl、Drummond Scientific Company)に装填した。成体RNUラットを低体温法により麻酔し、注射プラットフォーム上のクレイヘッドモールド内に配置した。注射部位を図19に模式的に示す。
妊娠20週のヒト基底核隆起(内側、尾側、および外側)は、神経前駆細胞表面マーカー(「NPCSM」)(例えば、CRCX4、CRCX7またはERBB4)およびPLEXINA4の両方を発現する細胞集団を含むことが判明している(Hoch RV他,Cell Rep.2015,July 21,12:3 484−492)。内側GEには、比率的に多いPLEXINA4単一陽性細胞といくらかのNPCSM単一陽性細胞が見られる。染色hESC由来培養物がMGE系譜へ向けて分化していた場合には、類似の発現パターンが検出された。
ヒトES細胞(ESC)系統は、ビトロネクチン支持体(ThermoFisher)上のTESR−E8培地(Stem Cell Technologies)中で培養した。ヒトESCを、MGE型の介在ニューロンを誘導するために特定の時点で添加される最適なモルフォゲンカクテルを用い、MGE型の培養物へ分化させた(14/763,397,Nicholas C他,Cell Stem Cell.2013,12(5):573−86に詳細に記載される通り)。これらの細胞は、上記実施例に詳細に記載した通り、ヒト皮質細胞およびヒトMGE細胞の両方に使用されたセルソーティング技術を用い、対象とする神経前駆体に関してさらに富化することができる。
上記のように選択されたhESC由来神経前駆細胞(PLEXINA4+単一陽性、NPCSM+単一陽性、またはPLEXINA4+NPCSM+)を次に、in vivoで遊走しGABA産生細胞へ分化するそれらの能力に関して試験した。ソート細胞を上記のように免疫不全SCID新生仔マウス皮質に移植し、マウス脳内で遊走させ、分化させた。生着1か月後に、ヒトHNA+細胞は、DCX、MAFB、LHX6、およびGABAを含むMGE型皮質介在ニューロンのマーカー発現を示した。移植細胞内ではSP8の発現はほとんどまたは全く検出されず、これらの介在ニューロンがLGE型またはCGE型の介在ニューロンではなかったことを示す。
hESC由来MGE様培養物からMACS精製したNPCSM陽性細胞は、側頭葉癲癇(TLE:temporal lobe epilepsy)の免疫不全ラットモデルにおいて成体海馬に生着することが示された。生着3週間で、これらのヒト細胞は遊走性介在ニューロンのマーカー発現(DCXおよびNKX2.1)を示した。移植細胞内では、それぞれLGEおよびCGE由来介在ニューロンおよび増殖のSP8またはKi67発現マーカーはほとんどまたは全く検出されなかった。
本発明の神経前駆細胞集団を、急性および慢性発作を軽減する能力に関して調べる。in vivoにおける抑制性介在ニューロン機能の回復または増強は脳へのMGE細胞の移植により達成され、このような細胞は、注射部位から0.75mm〜5mmの間に分布を有する宿主新皮質において遊走することが証明されている(U.S.20090311222、U.S.9,220,729およびAlvarez−Dolado他,J Neurosci.2006 Jul 12;26(28):7380−9を参照されたい)。本発明の神経前駆細胞集団が癲癇のマウスモデルで遊走し急性発作性疾患を軽減するものと同じ能力を有することを証明するために以下の実験を行う。
パーキンソン病(PD)は、米国および欧州で100,000人におよそ150人が罹患している。PDは、運動障害ならびに認知および自律神経機能不全および気分障害を特徴とする。PDの4つの基本的特徴は、TRAPの頭文字で分類することができる:安静時振戦(Tremor at rest)、筋強剛(Rigidity)、無動(Akinesia)(または動作緩慢)および姿勢反射障害(Postural instability)。さらに、屈曲姿勢およびすくみ反応(運動遮断)も、PDを最も一般的な形態とするパーキンソン症候群の古典的特徴の中に含まれている。既存の処置はPDの症状を減弱することはできるが、治癒はない。
MGE細胞は、脊髄損傷に関連する特定の病状を改善する能力を有することがこれまでに記載されている(例えば、米国特許第9,220,729号明細書および米国特許出願公開第20130202568号明細書を参照)。局部回路、また、挫傷脊髄および離断脊髄への一体化を評価するために、齧歯類の非損傷脊髄に神経前駆細胞集団を移植する。軽度(挫傷)および中等度(離断)の痙縮を評価するために挫傷および離断を調べる。
痙縮は、脳および脊髄の損傷を有する患者で一般的な障害である。有病率は脊髄損傷患者のおよそ65〜78%(Maynard他、1990)、持続性片麻痺を伴う脳卒中患者の35%前後(Sommerfeld他、2004)である。ヒト脊髄損傷後数ヶ月にわたって病変部の尾側の分節に反射過剰興奮が生じる。また、難治性痙縮は、多発性硬化症患者の一般的な障害源でもある。症状には、筋緊張亢進、クローヌス、痙攣および反射亢進が含まれる。膀胱痙縮もまた、高齢者、妊娠中または妊娠後の女性、および閉経の際に一般に発生する。
上記の実験に加え、神経前駆細胞の移植は、神経因性疼痛も改善し得る。特に、神経前駆細胞は、これまでに記載されているように(Shields他、2003)spared nerve injury(SNI)モデルを用い、損傷誘発性の神経因性疼痛を用いた動物モデル研究に移植することができる。このモデルは動物の片側の坐骨神経の3つの分岐のうち2つの離断により作出され、長期の機械的過敏性を生じる(Shields他,J Pain.、2003 Oct;4(8):465−70)。
本発明の方法はまた、アルツハイマー病の処置において、これらの患者の学習および記憶の障害を改善するために使用することもできる。神経前駆細胞は、これまでに記載されているように(Tong LM他,J.Neuroscience 34(29):9506−9515)、apoE4−KIマウスの門に、または家族性アルツハイマー病(FAD:familial Alzheimer’s disease)のモデルに、apoE4誘発性の認知欠陥、ならびに発作の救済を証明するために移植することができる。本発明の神経前駆細胞の移植は、海馬における移植由来のGABA作動性介在ニューロンの機能的成熟および一体化、ならびに成体マウスでのapoE4誘発性認知障害の救済をもたらす。
本発明の神経前駆細胞の、脳卒中などの外傷性脳損傷を有する対象における歩行運動および協調を改善する能力を、脳卒中の中大脳動脈閉塞(MCAO:middle cerebral artery occlusion)モデルを用いて試験する。簡単に述べれば、Sprague−Dawley(SD)成体ラット(275〜310g、Charles River Laboratories、ウィルミントン、MA)に、これまでに記載されているように(Daadi,M.他,PLoS ONE3(2):e1644;200)、血管内縫合により1.5時間の一過性MCAOを施す。これまでに記載されているように(Borlongan,C.V.他,J.Neurosci.,15(7)Pt.2:5372-5378;1995)、MCAO後に、持ち上げボディースィング試験(EBST:elevated body swing test)を用いて体幹の非対称性を評価する。動物を尾でぶら下げ、20回の試行で最初に虚血側と反対に頭を揺らす頻度を数え、合計に対するパーセンテージとして表す。75%を超える偏向スィングのある虚血ラットを試験に使用する。虚血傷害の2週間後に、2μlの神経前駆細胞懸濁液を50,000細胞/μlの濃度で、傷害を受けた線条体および皮質内の4箇所に定位固定的に移植する。虚血を受け、ビヒクルを移植したラットを対照として使用する。
本発明の方法はまた、自閉症スペクトラム障害の処置において、これらの患者の社会的障害および学習障害などの行動を改善するために使用することもできる。BTBR T+
Itpr3tf/Jマウス(BTBRマウス)は、十分に研究されている特発性自閉症モデルである(Defensor,E.B.,Pearson他,(2011).Behav.Brain Res,.217,302-308;McFarlane,H.G.他,(2008).Genes Brain Behav.7,152-163;Yang,M.他(2012),Physiol.Behav.107,649-662.)。BTBRマウスは、対照系統C57BL/6Jに比べて海馬におけるGABAA受容体が媒介する抑制性神経伝達のレベルが低く、これが自閉様行動の一因であり得る。Han他,Neuron 2014;81:1282−1289。本発明の神経前駆細胞の移植およびその結果としての移植由来GABA作動性介在ニューロンの海馬における機能的成熟および一体化は、神経前駆細胞の移植を受けたBTBRマウスにおいて自閉様行動を救済し得る。
本発明の方法はまた、統合失調症などの精神病障害の処置において、これらの患者の神経調節不全に関連する行動を改善するために使用することもできる。サイクリンD2ノックアウト(Ccnd2−/−)マウスモデルは、海馬基礎代謝活性の増大、中脳DAニューロン活性の増大、AMPHに対する応答の増強、および海馬を動員し海馬に依存する認知プロセスの破綻を含む、精神病に関する成体神経行動表現型に関連する皮質PV+介在ニューロンの減少を示す。Ccnd2−/−マウスは、腹側被蓋野ドーパミンニューロン集団活性の増大、アンフェタミンに対する行動過敏反応、および海馬依存的認知の障害を含む海馬の脱抑制により生み出されると予想されるいくつかの神経生理学的および行動的表現型を有する。例えば、Gilani他、Proc Natl Acad Sci USA.2014 May 20;111(20):7450−5参照。
本発明は、本発明の好ましい態様に関して詳細に記載されるように、多くの異なる形態の態様により満足されるが、本開示は本発明の原理の例示と見なされるべきであり、本発明を本明細書に例示および記載される特定の態様に限定することは意図されないと理解される。当業者ならば本発明の趣旨から逸脱することなく多くの変形を行うことができる。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲およびそれらの均等物により判断される。要約および発明の名称は本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではなく、それらの目的は適当な権威者ならびに一般公衆が本発明の一般的性質を素早く判断することを可能にすることである。本明細書に引用されている全ての参照文献は、あらゆる目的でそれらの全内容が参照により本明細書の一部として援用される。以下の特許請求の範囲では、「手段(means)」という用語が使われていない限り、特許請求の範囲に列挙されたいずれの特徴または要素も米国特許法第112条第6段落に基づくミーンズ・プラス・ファンクションの限定と解釈されるべきでない。
Claims (43)
- 神経前駆細胞で上方調節される1以上の細胞表面マーカーの発現が増強されている哺乳類脳組織から細胞を単離すること;および
神経細胞表面マーカー発現細胞を富化して、細胞表面マーカー富化細胞集団を作出することを含み、
前記富化細胞集団は、GABA産生ニューロンを形成することができる神経前駆細胞を含む、
神経前駆細胞集団を作出する方法。 - 前記神経前駆細胞から形成された前記ニューロンがin vitroでGABAを産生することができる、請求項1に記載の方法。
- 前記神経前駆細胞から形成された前記ニューロンが哺乳類神経系への移植後にGABAを産生することができる、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞表面マーカーがATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2、またはTMEM2である、請求項1に記載の方法。
- 前記富化細胞がAS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2−1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11−384F7.2、RP4−791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B、またはWI2−1896O14.1のうち1以上の発現においてさらに富化される、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞が細胞表面マーカーとの結合剤を用いて富化される、請求項1に記載の方法。
- 前記細胞表面マーカー発現細胞が請求項4に記載の細胞表面マーカーと選択的に結合する薬剤を用いて富化される、請求項6に記載の方法。
- 前記細胞集団が蛍光活性化セルソーティング(FACS)を用いて富化される、請求項6に記載の方法。
- 前記細胞集団が磁気活性化セルソーティング(MACS)を用いて富化される、請求項6に記載の方法。
- 前記脳組織がヒト胎児脳組織である、請求項1に記載の方法。
- 前記脳組織がヒト皮質由来の細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記脳組織がヒト基底核隆起由来の細胞を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記富化細胞集団を、GABAを産生することができる抑制性介在ニューロン前駆細胞へ分化させることをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 多能性哺乳類幹細胞集団を準備すること;および
前記細胞に対象とする神経前駆細胞で上方調節される1以上の細胞表面マーカーの発現を増強させる条件下で前記幹細胞を分化させること;および
前記細胞集団の、前記細胞表面マーカーのうち1以上を発現する細胞を富化すること
を含み;
前記富化細胞集団は、GABA産生ニューロンを形成することができる神経前駆細胞を含む、神経前駆細胞集団を作出する方法。 - 前記神経前駆細胞から形成された前記ニューロンがin vitroでGABAを産生することができる、請求項14に記載の方法。
- 前記神経前駆細胞から形成された前記ニューロンが哺乳類神経系への移植後にGABAを産生することができる、請求項14に記載の方法。
- 前記富化細胞表面マーカーがATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2、またはTMEM2である、請求項14に記載の方法。
- 前記富化細胞がAS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2−1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11−384F7.2、RP4−791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B、WI2−1896O14.1のうち1以上の発現においてさらに富化される、請求項14に記載の方法。
- 前記細胞が、対象とする神経前駆細胞で上方調節される細胞表面マーカーへの結合剤を用いて富化される、請求項14に記載の方法。
- 前記細胞が、請求項17に記載の細胞表面マーカーと選択的に結合する薬剤を用いて富化される、請求項19に記載の方法。
- 前記細胞が、対象とする神経前駆細胞で上方調節される1以上の細胞表面マーカーの発現が低い細胞の数を減らすことにより富化される、請求項19に記載の方法。
- 前記細胞が、ATP1A2、BCAN、CD271、CD98、CNTFR、FGFR3、GJA1、MLC1、NOTCH1、NOTCH3、PDPN、PTPRZ1、SLC1A5、TMEM158、またはTTYH1の群からの細胞表面マーカーを発現する細胞の枯渇により富化される、請求項21に記載の方法。
- 前記細胞が請求項22に記載の細胞表面マーカーと選択的に結合する薬剤を用いて富化される、請求項21に記載の方法。
- 前記細胞集団が蛍光活性化セルソーティング(FACS)を用いて富化される、請求項22に記載の方法。
- 前記細胞集団が磁気活性化セルソーティング(MACS)を用いて富化される、請求項22に記載の方法。
- 前記幹細胞がヒト多能性幹細胞である、請求項14に記載の方法。
- 前記富化細胞集団を、GABAを産生することができる抑制性介在ニューロン前駆細胞へ分化させることをさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 神経前駆細胞集団であって、
AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2−1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11−384F7.2、RP4−791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B、またはWI2−1896O14.1のうち1以上の発現の増強;および
PLEXINA4の発現の増強、
を含む、細胞が富化された、神経前駆細胞集団。 - GABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項28に記載の神経前駆細胞集団。
- in vitroでGABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項29に記載の神経前駆細胞集団。
- 哺乳類神経系への移植後にGABAを発現する細胞へ分化することができる神経前駆細胞を含む、請求項29に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞が多能性幹細胞から分化された、請求項28に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞がヒト多能性幹細胞から分化された、請求項32に記載の神経前駆細胞集団。
- 神経前駆細胞集団であって、
ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GRIA1、GRIA4、L1CAM、NCAM1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PLXNA4、ROBO1、ROBO2、またはTMEM2のうち1以上の細胞表面マーカーの発現の増強;および
PLEXINA4の発現の増強
を含む、細胞が富化された、神経前駆細胞集団。 - in vitroでGABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項34に記載の神経前駆細胞集団。
- 哺乳類神経系への移植後にGABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項34に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞が多能性幹細胞から分化された、請求項34に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞がヒト多能性幹細胞から分化された、請求項37に記載の神経前駆細胞集団。
- 神経前駆細胞集団であって、
AS1、ATRNL1、CD200、CELSR3、CHRM4、CNTNAP4、CXCR4、CXCR7、DSCAML1、ELAVL2、ENSG00000260391、EPHA5、ERBB4、FAM5B、FAM65B、FNDC5、GAD1、GAD2、GNG2、GPD1、GRIA1、GRIA4、HMP19、INA、KALRN、KDM6B、KIF21B、L1CAM、LHX6、LINC00340、LINC00599、MAF、MAFB、MAPT、MIAT、NCAM1、NKX2−1、NMNAT2、NPAS1、NRCAM、NRXN3、NXPH1、PDZRN4、PIP5K1B、PLS3、PLXNA4、RAI2、ROBO1、ROBO2、RP11−384F7.2、RP4−791M13.3、RUNX1T1、SCG3、SCRT1、SCRT2、SIAH3、SLC32A1、SOX6、SRRM4、SST、ST8SIA5、STMN2、TAGLN3、TIAM1、TMEM2、TTC9B、またはWI2−1896O14.1のうち1以上の発現の増強を含む、細胞が富化された、神経前駆細胞集団。 - in vitroでGABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項39に記載の神経前駆細胞集団。
- 哺乳類神経系への移植後にGABAを発現する細胞へ分化することができる細胞を含む、請求項39に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞が多能性幹細胞から分化された、請求項39に記載の神経前駆細胞集団。
- 細胞がヒト多能性幹細胞から分化された、請求項42に記載の神経前駆細胞集団。
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