JP2020070270A - フィブロネクチン遺伝子発現促進剤 - Google Patents
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Abstract
Description
従って、本発明の課題は、フィブロネクチン遺伝子の発現を促進することにより、創傷等の皮膚損傷を治癒し得る薬剤や化粧品として利用できる成分を提供することにある。
〔2〕グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである〔1〕記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
〔3〕フィブロネクチン遺伝子発現が、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子発現である〔1〕又は〔2〕記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
〔4〕グリコーゲンを有効成分とする皮膚損傷治癒促進剤。
〔5〕グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである〔4〕記載の皮膚損傷治癒促進剤。
アコヤガイ貝肉2kgに二倍量の熱水(85〜98℃)を加えて、抽出し、上清を回収し、減圧濃縮した。濃縮液に三倍量のエタノールを加え、グリコーゲン含有画分を沈殿させて回収した。沈殿に水を加えて溶解し、これにトリクロロ酢酸を5重量%濃度になるように加えて、タンパク質を沈殿させて除去した。グリコーゲン含有液(濾液)は水を用いて透析し、低分子不純物及びトリクロロ酢酸を除去した。透析内液(グリコーゲン含有溶液)にプロテアーゼを加えて、共存タンパク質を分解した。次に、グリコーゲン含有溶液に水酸化ナトリウムを0.8質量%になるように加えた後、沸騰浴中で加熱して、残留している酵素及びタンパク質を分解した。得られたグリコーゲン含有溶液に塩化セチルピリジニウム(CPC)1重量%濃度になるように加えて、共存しているアミノ酸を沈殿させて除去した。濾液に三倍量のエタノールを加えてグリコーゲンを沈殿させて回収し、凍結乾燥してグリコーゲン粉末2.5gを得た。
正常ヒト新生児表皮由来の線維芽細胞を用いて、フィブロネクチン遺伝子の発現量を試験した。すなわち、線維芽細胞を50〜70%コンフルエントになるまで、培養後、作用培地に置き換え、一日培養した後、各濃度のグリコーゲン粉末を加えた作用培地にて二日間培養した。培養後、RNA回収試薬を用いて、RNAを回収し、2μgのRNAから逆転写酵素を用いて、cDNAを合成した。遺伝子発現比較は、Realtime PCRsystemを用い、TaqMan probe法を用いたΔΔCT法にて、フィブロネクチン遺伝子の発現量を測定した。
Claims (5)
- グリコーゲンを有効成分とするフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
- グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである請求項1記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
- フィブロネクチン遺伝子発現が、線維芽細胞におけるフィブロネクチン遺伝子発現である請求項1又は2記載のフィブロネクチン遺伝子発現促進剤。
- グリコーゲンを有効成分とする皮膚損傷治癒促進剤。
- グリコーゲンが、貝類由来グリコーゲンである請求項4記載の皮膚損傷治癒促進剤。
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A521 | Request for written amendment filed |
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A02 | Decision of refusal |
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