JP2003507440A - フィブロネクチンを含む固形創傷治癒用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 創傷治癒促進剤、とくにフィブロネクチンの濃縮液を使用して固形創傷包帯を開発する。フィブロネクチンを含む固形創傷包帯は適用が簡単で、剥離が簡単で、また生理的活性量の範囲でフィブロネクチンを供給する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 実施例１ 固形フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム創傷包帯の配合 アルギン酸塩ならびに以下の実施態様で説明される包帯システムは凍結乾燥処
理で繊維に変換できる。この方法は親水性のあるスポンジ状構造を作成する。液
体存在下にて包帯はゲル状の状態になり、創傷滲出液を包帯重量の２０倍まで吸
収できるようになる。繊維状ゲルはこれによって創傷に所望の湿潤環境を作成す
る。包帯はまた最小量の不快感だけで除去可能であり、このことにより肉芽組織
の形成を最小限に抑さえ、包帯交換中に上皮細胞を傷害しないようになる。

【０００２】 本発明によるフィブロネクチン−アルギン酸カルシウムおよびその他のフィブ
ロネクチン固体創傷包帯は４℃で少なくとも１２か月の長期にわたってフィブロ
ネクチンを劣化させずに保存できる。これらの包帯の残留水分量は低く、およそ
５％程度である。

【０００３】 本発明によるフィブロネクチン−アルギン酸カルシウムおよびその他のフィブ
ロネクチン固体創傷包帯は高濃度のフィブロネクチンを創傷部位へ供給する。

【０００４】 フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯が機能する基本的機構は、この
包帯が滲出液中のナトリウムと接触した時点でイオン交換が行なわれ、アルギン
酸カルシウム繊維を保護性能を有する非接着性のフィルム状ゲルに変化させる。
このゲル状態のときには、フィブロネクチンはゲルから創傷へ自由に移動できる
。

【０００５】

【０００６】 Ｃａ^＋＋は不溶性アルギン酸塩を形成しＮａ^＋は可溶性アルギン酸塩を形成す
る（第１と第２のカチオンの当量比は５０：５０、ただし０．２ＭのＮａＣｌと
０．２ＭのＣａＣｌ_２）。包帯の最大均質性はゲル化カチオンと非ゲル化カチオ
ン両方の適当な濃度で到達する。更なるＮａ^＋は滲出液から得られるか、または
創傷が乾燥しすぎているか滲出液がない場合、包帯を装着する直前に少量の生理
食塩水を創傷に添加すればよい。

【０００７】 アルギン酸はアニオン性多糖類であるから、複合体は蛋白質の等電点（ｐＨ６
．２）より高くないｐＨでフィブロネクチンとアルギン酸ナトリウムを組み合わ
せることで形成するのが望ましく、フィブロネクチンはプラスに荷電している。
このｐＨは終点ｐＨ約５．０として氷酢酸を添加することにより実現できる。酢
酸は揮発性が高く、ある程度の量の酢酸が真空中での凍結乾燥処理で失われる。
包帯の終点ｐＨは約６．５である。

【０００８】 混合したアルギン酸塩包帯では属性同志の非常に有効な組み合わせが得られる
。たとえば、製品を比較的操作し易くするのに充分な不溶性カチオンが混合アル
ギン酸塩に存在する。またフィブロネクチンを創傷に放出し易くするのに充分な
可溶性カチオンも存在する。可溶性アルギン酸繊維および不溶性アルギン酸繊維
の組み合わせは、創傷治療後は包帯を簡単に除去できまた当初は簡単に適用でき
るという更なる利点がある。

【０００９】 フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯の組成 アルギン酸ナトリウムの市販の３種類の調製を試験した。Ｐｒｏｔａｎａｌ
ＦＬ １２０Ｍアルギン酸ナトリウム（Pronova Biopolymer, Inc., Drammen, N
orway）は後述の好適実施例より脆弱な製品を得ていた。さらに、このアルギン
酸ナトリウムはフィブロネクチンを含む同じ包帯と比較して見かけ上黄色みのあ
るプラセボ包帯（即ちフィブロネクチンなしの対照）を得ていた。結果として、
この配合は人間を対象とした臨床試験には使用できなかった。特に好適なアルギ
ン酸はＰｒｏｎｏｖａ ＵＰ ＬＶＧ アルギン酸ナトリウム（Pronova Biomedi
cal A.S., Oslo, Norway）である。

【００１０】 本発明の一つの実施態様において、フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム
創傷包帯は以下のように調製する：アルギン酸ナトリウム５ｇ（Protanal LF 10
/60, Pronova Biopolymer, Drammen, Norway）を脱イオン脱塩純水９５ｇに分散
させ約１時間パドル型スターラで撹拌する。このように作成したコロイド状分散
は高濃度アルギン酸ナトリウム原液（５％ｗ／ｗ）を提供するので、これをオー
トクレーブで滅菌する。この濃厚液から調製した滅菌瀘過アルギン酸ナトリウム
１％溶液のｐＨを、酢酸を用いて４．０に調節した（１７．４Ｎ氷酢酸３．３３
μｌを脱塩水１００ｍｌに希釈するとｐＨ４．０となる）。水道水の脱塩はミリ
ポア−ミリＱ純粋製造器（Millipore Milli-Q water system）を使用した。脱塩
および脱イオンという術語は本出願全体では互換性のある言葉として使用される
。１０ｍｌ脱塩水のｐＨを実施例９で説明するようにｐＨ８．０から１１．０に
調節する。以下の好適実施態様においてはｐＨは１１．６に調節してある。

【００１１】 実施例１０にしたがって調製して、次に、０．０２５から０．１ｇ、望ましく
は０．１ｇの凍結ヒト血漿フィブロネクチンを脱塩水ｐＨ１１．６に溶解した。
フィブロネクチンが完全に溶解するまで溶液を３７℃に維持した。次に、フィブ
ロネクチン溶液を０．２２μｍアセテート・フィルタで瀘過する。この溶液が本
実施例および後続実施例で使用するフィブロネクチン原液となる。

【００１２】 こうして得られた０．２５％から１％の滅菌フィブロネクチン溶液のうち３．
４ｍｌを、前述したｐＨ調製済みの希釈アルギン酸ナトリウム溶液１．５ｍｌと
混合した。滅菌フィブロネクチン溶液および滅菌アルギン酸ナトリウム溶液は気
泡が入らないように注意してシリンジ内で混合する。無菌環境たとえば層流フー
ド内などで作業して汚染を防止する。一般に、２本のシリンジを使用し、加圧し
て複数回入れ換えする。アダプタ装置たとえばメス型ルアー接続をつかってシリ
ンジやその他の交換装置を接続することができる。フィブロネクチンの沈澱を避
けるため強い振盪は最小限にする。

【００１３】 溶液のゲル化は１５μｌの０．２ＭのＮａＣｌ＋０．２ＭのＣａＣｌ_２と３．
４μｌの氷酢酸を添加することで行なう。この時点で、フィブロネクチン−アル
ギン酸カルシウム複合体をホラケイ酸ガラス製バイアル（表面積５．３ｃｍ^２で
５ｍｌ）に集積し−２０℃で２時間、−８０℃で３０分凍結する。好適なバイア
ルは幅２２．５ｍｍ、高さ４６．５ｍｍでアルミ製シール（パーツ番号２４−０
３９６，Comar, Buena, NJ）付きである。Ｌａｂｃｏｎｃｏフリーズドライヤ（
７７５８０型、Kansas City, Mo）を使って凍結乾燥し水分を除去する。この技
術により、固形スポンジ状フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム創傷包帯が
作成され、これは表面積が４．２ｃｍ^２でフィブロネクチン濃度は８０μｇ／ｍ
ｍ^２までである。固形創傷包帯を他の不溶性繊維から調製することも可能である
ことは注意すべきである。創傷に対して副作用のないものであればどんな不溶性
繊維または材料であっても良い。好適な植物性多糖類の例としては、カラギーナ
ンやセルロース誘導体、たとえばカルボキシメチルセルロースまたはハイドロキ
シプロピルセルロースが以下の実施例で記載される。合成カルボマー樹脂を使用
する実施例も説明する。たとえば「三次元細胞および組織培養システム」と題し
参照により本明細書に含まれる米国特許第４，９６３，４８９号に記載されてい
るような組織マトリクスや人工皮膚システムも本発明の実施態様において使用可
能である。

【００１４】 実施例２ 固体カルボキシメチルセルローズ（ＣＭＣ）包帯 好適なグレードはＧＰＲ（登録商標）ＣＭＣ（BDH Laboratories, Ville St-L
aurent, Canada）である。フィブロネクチン６２％、ＣＭＣ３８％を含む（ｗ／
ｗ）固体創傷包帯を後述のように調製した。まず、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｔｅｒ
ｉｌｉｚｅｒ ２０２０ Ｖａｃａｍｔｉｃ Ｅａｇｌｅ ｓｅｒｉｅｓ オー
トクレーブ（Steris Corp., Ohio）を使用して１２１℃で３０分の乾熱滅菌処理
を行ないＣＭＣ粉体を滅菌した。ＣＭＣ６ｇを９４ｍｌの脱塩水に分散させパド
ル型スターラで約３時間混和した。これにより滅菌濃縮ハイドロゲル原液（６％
ｗ／ｗ）が得られた。

【００１５】 これとは別に、実施例１０にしたがって調製した凍結乾燥ヒト血漿フィブロネ
クチン５０ｍｇを、３ＭのＮａＯＨ１２μｌを含む脱イオン水（５ｍｌ）に溶解
し、終点ｐＨ１１．６とした。完全にフィブロネクチンの溶解が見られるまで溶
液を３７℃に維持した。フィブロネクチン１０ｍｇ／ｍｌのこの原液を０．２２
μｍアセテート・フィルタで瀘過した。このフィブロネクチン溶液のうち３．３
ｍｌを濃厚ＣＭＣ原液０．３４ｇに加え、実施態様１に記載したようにシリンジ
で混和した。１ＮのＨＣｌを２５μｌ添加してｐＨを７．０に調節した。この時
点で、フィブロネクチン−ＣＭＣ複合体の均質な溶液をプラスチック型に入れて
凍結した。Ｃｏｓｔａｒ ６ウェル（６穴）ポリスチレン細胞培養クラスター（
丸め表面積９．６ｃｍ^２）（Corning Inc., Corning, NY）をプラスチック型と
して使用した。Ｌａｂｃｏｎｃｏフリーズドライヤ（７７５８０型、Kansas Cit
y, Mo）を使って凍結乾燥し水分を除去する。この技術により、スポンジ状構造
のフィブロネクチン−ＣＭＣ創傷包帯が作成される。

【００１６】 実施例３ 固形ハイドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）包帯 Ｋｌｕｃｅｌ−ＨＦ（登録商標）ＨＰＣ（Aqualon, Houston, Texas）の好適
グレードを使用して固形ハイドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）包帯を調製
した。フィブロネクチン４５％、ＨＰＣ５５％を含む（ｗ／ｗ）固体創傷包帯を
次のように作成した。まず、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｒ ２０２
０ Ｖａｃａｍｔｉｃ Ｅａｇｌｅ ｓｅｒｉｅｓ オートクレーブ（Steris C
orp., Ohio）を使用して１２１℃で３０分の乾熱滅菌処理を行ない、ＨＰＣ粉体
を滅菌した。ＨＰＣ（６ｇ）を脱イオン水９４ｍｌに分散させ、パドル型スター
ラで約３時間混和した。これにより滅菌濃縮ハイドロゲル原液（６％ｗ／ｗ）が
得られた。これとは別に、実施例１０にしたがって調製した凍結乾燥ヒト血漿フ
ィブロネクチン５０ｍｇを、３ＭのＮａＯＨ１２μｌを含む脱イオン水（５ｍｌ
）ｐＨ１１．６に溶解した。完全にフィブロネクチンの溶解が見られるまで溶液
を３７℃に維持した。フィブロネクチン１０ｍｇ／ｍｌのこの原液を０．２２μ
ｍアセテート・フィルタで瀘過した。このフィブロネクチン溶液のうち３．３ｍ
ｌを濃厚ＨＰＣ原液０．６８ｇに加えて実施態様１に記載したようにシリンジで
混和した。１ＮのＨＣｌを２５μｌ添加してｐＨを７．０に調節した。この時点
で、フィブロネクチン−ＨＰＣ複合体の均質な溶液をプラスチック型に入れて凍
結した。Ｃｏｓｔａｒ ６ウェル（６穴）型ポリスチレン細胞培養クラスター（
丸め表面積９．６ｃｍ^２）（Corning Inc., Corning, NY）をプラスチック型と
して使用した。Ｌａｂｃｏｎｃｏフリーズドライヤ（７７５８０型、Kansas Cit
y, Mo）を使って凍結乾燥し水分を除去する。この技術により、スポンジ状構造
のフィブロネクチン−ＣＭＣ創傷包帯が作成される。

【００１７】 実施例４ 固体カルボマー包帯 好適グレードとしてＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）９７４Ｐ ＮＦカルボマー
（BF Goodrich, Cleveland, Ohio）を使用し固体カルボマー包帯を調製した。フ
ィブロネクチン７５％、カルボマー２５％を含む（ｗ／ｗ）固体創傷包帯を次の
ように作成した。２．８０ｇのカルボマーを脱塩水９７．２ｍｌに分散させパド
ル型スターラで約３時間混和した。この分散液をオートクレーブ滅菌して滅菌濃
厚ハイドロゲル原液（２．８０％ｗ／ｗ）を得た。実施例１０にしたがって調製
した凍結乾燥ヒト血漿フィブロネクチン５０ｍｇを、３ＭのＮａＯＨ１２μｌを
含む脱イオン水（５ｍｌ）ｐＨ１１．６に溶解した。完全にフィブロネクチンの
溶解が見られるまで溶液を３７℃に維持した。フィブロネクチン（１０ｍｇ／ｍ
ｌ）のこの原液を０．２２μｍアセテート・フィルタで瀘過した。このフィブロ
ネクチン溶液のうち３．３ｍｌを０．０４ｇの濃厚カルボマー原液に添加し必要
量のゲル化促進剤（３ＭのＮａＯＨを２５μｌ）を加え実施例１に記載したよう
にシリンジで混和した。フィブロネクチンカルボマー・ハイドロゲルをプラスチ
ック型に集積し凍結した。Ｃｏｓｔａｒ ６ウェル（６穴）型ポリスチレン細胞
培養クラスター（丸め表面積９．６ｃｍ^２）（Corning Inc., Corning, NY）を
プラスチック型として使用した。Ｌａｂｃｏｎｃｏフリーズドライヤ（７７５８
０型、Kansas City, Mo）を使って凍結乾燥し水分を除去する。この技術により
、スポンジ状構造のフィブロネクチン−カルボマー包帯が作成される。

【００１８】 実施例５ 固体カラギーナン包帯 固形カラギーナン包帯を調製した。好適なグレードはＧｅｌｃａｒｉｎ（登録
商標）ＮＦカラギーナン（FMC Corporation Pharmaceutical Division, Newark,
Delaware）である。フィブロネクチン７３％、カルボマー２７％を含む（ｗ／
ｗ）固体創傷包帯を次のように作成した。カラギーナン２．５０ｇを脱イオン水
９７．５ｍｌに分散させパドル型スターラで約３時間混和した。この分散液をオ
ートクレーブ滅菌して滅菌濃厚ハイドロゲル原液（２．５０％ｗ／ｗ）を得た。
実施態様１０にしたがって調製した凍結乾燥ヒト血漿フィブロネクチン５０ｍｇ
を、３ＭのＮａＯＨ１２μｌを含む脱イオン水（５ｍｌ）ｐＨ１１．６に溶解し
た。完全にフィブロネクチンの溶解が見られるまで溶液を３７℃に維持した。フ
ィブロネクチン（１０ｍｇ／ｍｌ）原液を０．２２μｍアセテート・フィルタで
瀘過した。フィブロネクチン溶液のうち３．３ｍｌを０．５０ｇの濃厚カラギー
ナン原液に加え、実施態様１に記載したようにシリンジで混和した。１ＮのＨＣ
ｌ６０μｌの添加でｐＨを７．０に調節した。この時点で、フィブロネクチン−
カラギーナン複合体の均質溶液をプラスチック型に集積し凍結した。Ｃｏｓｔａ
ｒ ６ウェル（６穴）ポリスチレン細胞培養クラスター（丸め表面積９．６ｃｍ ^２ ）（Corning Inc., Corning, NY）をプラスチック型として使用した。Ｌａｂ
ｃｏｎｃｏフリーズドライヤ（７７５８０型、Kansas City, Mo）を使って凍結
乾燥し水分を除去する。この技術により、スポンジ状構造のフィブロネクチン−
カラギーナン包帯が作成される。

【００１９】 実施例６ 固体創傷包帯の体外（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）研究 細胞拡散システムを使用する非上皮化ヒト皮膚でのフィブロネクチン吸収のｉ
ｎ ｖｉｔｒｏ研究では、次のように調製したフィブロネクチン−アルギン酸カ
ルシウム包帯からフィブロネクチンの９１．７％までのものが１２時間以内に放
出されることが明らかになった（図１参照）：１０．０ｇのアルギン酸ナトリウ
ム（Protanal LF 10/60, Pronova Biopolymer, Drammen, Norway）を９０ｇの脱
イオン脱塩水に分散しパドル型スターラで約１時間混和した。この分散液をオー
トクレーブ滅菌して滅菌濃厚アルギン酸原液（１０％ｗ／ｗ）とした。１．０％
フィブロネクチン原液１０ｍｌを０．２２μｍアセテート・フィルタで瀘過し、
濃厚アルギン酸原液から調製した酢酸の薄い１％アルギン酸ナトリウム溶液５ｍ
ｌとシリンジ内で混和した。（０．２ＭのＮａＣｌ＋０．２ＭのＣａＣｌ_２）３
７５μｌと１７．４５Ｎ酢酸３０μｌで終点ｐＨ４．０としたものを加えて溶液
のゲル化を行なった。この時点で、フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム複
合体の均質溶液をプラスチック型に入れて凍結した。Ｃｏｓｔａｒ ６ウェル（
６穴）型ポリスチレン細胞培養クラスター（丸め表面積９．６ｃｍ^２）（Cornin
g Inc., Corning, NY）をプラスチック型として使用した。Ｌａｂｃｏｎｃｏフ
リーズドライヤ（７７５８０型、Kansas City, Mo）を使って凍結乾燥し水分を
除去する。この技術により、スポンジ状構造を備えるフィブロネクチン−アルギ
ン酸カルシウム創傷包帯が作成される。凍結乾燥後、製品ディスクの表面積は８
．９６ｃｍ^２表面積に近いが、これは凍結乾燥中にディスクが収縮するためであ
る。５ｍｌ配合中のフィブロネクチン量は３７μｇ／ｍｍ^２表面積の濃度で３３
．３ｍｇ（３３，３３３μｇ／８９６ｍｍ^２）である。

【００２０】 このフィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯と実施例２〜５の固体創傷
包帯とを、非上皮化皮膚拡散細胞システムで１２時間にわたり比較した。図１に
図示した実験で使用した非上皮化皮膚拡散細胞システムはＢｅａｕｌｉｅｕの１
９９９年３月２日付米国特許第５，８７７，１４９号に記載されており、参照に
より本明細書に含まれる。

【００２１】 放出量は非上皮化皮膚表面積ｍｍ^２あたりフィブロネクチン３４．１μｇで、
参照により本明細書に含まれる米国特許第５，８２１，２２０号に記載されてい
るように、１２時間後の１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲル
から放出されるフィブロネクチン１３．０μｇと比較した場合、有意なレベルの
増加が見られる（２６２％）。実施例２および実施例３のフィブロネクチン−セ
ルロース誘導体から放出されたフィブロネクチン量はフィブロネクチン−アルギ
ン酸カルシウムで得られた値と類似していた（図１参照）。しかし、いったん生
理食塩水で湿潤されるとフィブロネクチン−セルロース包帯は非上皮化ヒト皮膚
の表面に希望通りの線維性保護膜を提供しない。

【００２２】 実施例７ ウサギ耳表皮潰瘍モデル 創傷治癒を刺激する上でのフィブロネクチン−アルギン酸カルシウム創傷包帯
の有効性について、Mustoe et al., (1991) J. Clin Invest 87:694-703が開発
した創傷治癒のウサギ耳表皮潰瘍モデルを使っての研究を行なった。

【００２３】 ニュージーランド白ウサギの若い成体３．０〜３．５ｋｇ（Charles River La
boratories, Canada）をケタミン（６０ｍｇ／ｋｇ）とキシラジン（９５ｍｇ／
ｋｇ）で全麻した。６ｍｍトレフィンと顕微手術器具を使い、無菌環境で、円形
全厚６ｍｍ直径の潰瘍をbare cartilageの深さに作成した。軟骨は血管走行がな
いので新規の肉芽組織形成は潰瘍周辺だけに発生する。

【００２４】 直径６ｍｍの固形包帯片を手術直後に貼布した。アルギン酸包帯（Kaltostat,
ConvaTec, Skillman, NJ）、コラーゲン−アルギン酸包帯（Fibracol, Johnson
& Johnson, Arlington, TX）、フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯
を潰瘍に貼布し４０μｌの生理食塩水（Ａｑｕａｌｉｔｅ（登録商標）０．９％
塩化ナトリウム水溶液）で湿潤した。フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム
包帯は実施例１に記載した方法にしたがって調製した。対照治療（図２〜図５に
示される）は４０μｌの生理食塩水単独で治療した潰瘍である。創傷は閉鎖性ポ
リウレタンフィルム（Tegaderm film, 3M, Minneapolis, MN）で被覆して創面の
乾燥を防止した。実験期間中は首カラーをウサギに装着した。治療グループ間の
治癒率の差は第７日目に測定した。

【００２５】 Ａ．新生肉芽組織の組織形態学的測定 屠殺時に、潰瘍を切り出し１０％緩衝ホルマリンで固定した。標本を無水アル
コールとキシレンで脱水し、パラフィン包埋して薄切し、創傷中心に可能な限り
近い断面を得るように心がけた。３μｍ切片のマッソントリクローム染色後、肉
芽組織ギャップ（ＧＡＰ）（新生肉芽組織のない創傷の残りの部分の直径と定義
する）と創傷前縁での新生肉芽組織の最大高さ（ＭＨ）をＢｉｏｍｅｔｒｉｃｓ
Ｂｉｏｑｕａｎｔ ｔｒｕｅ ｃｏｌｏｒ ｌａｓｅｒ ｖｉｓｉｏｎ（R&M,
Nashville, TN）を使って組織形態学的に測定した。各ＭＨ値は、各潰瘍につい
て２枚の組織切片の左側と右側について、新生肉芽組織の最大高さの測定値４つ
の平均を表わす。

【００２６】 ＧＡＰ距離を用いて式（ＧＡＰ／２）^２πから創傷の表面積を計算した。０日
目（手術日）には、測定ＧＡＰは６．２ｍｍで、表面積は（６．２／２）^２π＝
３０．１９ｍｍ^２だった。新生肉芽組織表面積は０日の創傷面積から７日目の創
傷面積を序したもの、即ち（ＧＡＰ［ｄａｙ ０］／２）^２π−（ＧＡＰ［ｄａ
ｙ ７］／２）^２πである。新生肉芽組織量（ＮＧＶ）は新生組織表面積×ＭＨ
である。新生肉芽組織の表面積と容積の測定値は、創傷部が同心円状に治癒し収
縮しないものとの仮定に基づいて計算した。統計処理は研究に使った各配合につ
いてＳｔｕｄｅｎｔの両側ｔ検定を使用して行ない、Ｅｘｃｅｌ ５．０（Micr
osoft Corporation）を使用した。全ての比較はペア対照創傷（生理食塩水、ア
ルギン酸、コラーゲン−アルギン酸）について行なった。Ｐ＜０．０５を有意と
した。

【００２７】 Ｂ．新生肉芽組織形成を刺激する上での６５％フィブロネクチン（ｗ／ｗ）を
含むフィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯の効果 組織形態学的測定の結果では、実施例６にしたがって調製したフィブロネクチ
ン−アルギン酸カルシウム包帯の１回の適用の効果は、ウサギ耳表皮潰瘍モデル
における新生肉芽組織形成において、アルギン酸（Ｋａｌｔｏｓｔａｔ）または
コラーゲン−アルギン酸（Ｆｉｂｒａｃｏｌ）包帯より有意に良好だったことが
示された。供給されるフィブロネクチン量はウサギ表面潰瘍面積ｍｍ^２あたり約
３４μｇであることを示しており、コラーゲン−アルギン酸包帯ではコラーゲン
ｍｍ^２あたり約３９μｇを使用した。図２に図示したように、７日間の治療後、
フィブロネクチン−アルギン酸カルシウムで治療した創傷の最大高さ（ＭＨ）は
対照創傷と比較して有意に高かった（７３２±１３μｍ、これに対して生理食塩
水で治療した創傷５９９±１６μｍ、アルギン酸６４８±１１、コラーゲン−ア
ルギン酸６２１±２７、全例についてＰ＜０．０００１）。新生肉芽量（ＮＧＶ
）値では、フィブロネクチン−アルギン酸カルシウムで有意な増加（コラーゲン
−アルギン酸と比較して１２０％以上、アルギン酸と比較して１２２％以上、生
理食塩水と比較して１３７％以上）が見られた（図３）。計算値はそれぞれフィ
ブロネクチン−アルギン酸カルシウムについて１５．０２±０．７７ｍｍ^３、生
理食塩水について１０．９５±０．７６、アルギン酸について１２．２９±０，
５９、コラーゲン−アルギン酸について１２．４６±１．４７である。アルギン
酸包帯もコラーゲン−アルギン酸包帯も相互または生理食塩水との比較でＭＨ値
（Ｐ＝０．１０５２）とＮＧＶ値（Ｐ＝０．４４２４）で有意差がなかった。

【００２８】 Ｃ．１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲルの効果 ウサギ表皮潰瘍モデルにおいて１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイ
ドロゲル配合のフィブロネクチンによる治療を新生肉芽組織形成を刺激する能力
で評価した。フィブロネクチンは０．２８１％カルボマー・ハイドロゲルとして
適用し、フィブロネクチン４００μｇを含む容量４０μｌのハイドロゲルを適用
した。１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲルは実施例９にした
がってｐＨ１１．６に調製した。これは米国特許第５，８２１，２２０号に記載
されているようにウサギ潰瘍表面積ｍｍ^２あたり約１３μｇのフィブロネクチン
を供給する。フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲルは手術時から起算し
て７日間の期間で１日１回実験潰瘍に塗布した。対照創傷に適用した局所用配合
物の容量も４０μｌ（生理食塩水またはフィブロネクチンを含まない０．２８１
％カルボマー・ハイドロゲル）とした。無菌ツルグラ包帯（Ｂａｃｔｉｇｒａｓ
（登録商標）, Smith & Nephew, Lachine, Canada）と非接着吸収包帯（Ｍｅｌ
ｏｌｉｔｅ（ 登録商標）, Smith & Nephew, Lachine, Canada）を使って創傷の
乾燥を防止した。毎回の塗布前に潰瘍を滅菌生理食塩水で洗浄し湿らせた綿棒で
やさしく清拭した。

【００２９】 組織形態学的測定値を分析した際に、フィブロネクチン−カルボマー・ハイド
ロゲルで治療した創傷における新生肉芽組織の最大高さの平均値（９００±３０
μｍ、ｎ＝４５）は、生理食塩水（８１９±２３μｍ、ｎ＝４３，Ｐ＝０．０１
）またはフィブロネクチンを含まないカルボマー・ハイドロゲル（７９３±１９
μｍ、ｎ＝４３，Ｐ＝０．００１）いずれかの治療と比較して有意なレベルで高
かった（図４）。さらに、新生肉芽組織形成の容積は１．０％フィブロネクチン
−カルボマー・ハイドロゲル治療（２１．２２±１．１４ｍｍ^３、ｎ＝４５）で
、生理食塩水（１８．６７±０．７９ｍｍ^３、ｎ＝４３、Ｐ＝０．０２８５）ま
たはフィブロネクチンを含まないカルボマー・ハイドロゲル（１８．４３±０．
９５ｍｍ^３、ｎ＝４３、Ｐ＝０．０２３８）と比較して有意に大きかった（図５
）。生理食塩水とカルボマー・ハイドロゲル単独との間には相違は認められなか
った（Ｐ＝０．４１５２）。

【００３０】 Ｄ．フィブロネクチンの用量試験 創傷治癒に対してフィブロネクチンの使用量を変化させた場合の効果について
前述した技術を使用してウサギモデルで研究を行なった。ただし、この実験にお
いては、９ｍｍのＡｃｕＰｕｎｃｈ（登録商標）生検パンチを使用してモデル潰
瘍をウサギ耳に作成した。実験動物各個体の各耳に４個の潰瘍を作成した。一方
の耳は生理食塩水の対照包帯で治療し、他方の耳は前述したフィブロネクチン−
アルギン酸カルシウム包帯で治療した。本実験用のフィブロネクチン−アルギン
酸カルシウム・ディスクは実施例１と同様に調製した。ディスクを積み重ねて必
要ならカットし以下の量のフィブロネクチン投与量を提供した：１０．３μｇ／
ｍｍ^２、２０．６μｇ／ｍｍ^２、４１．２５μｇ／ｍｍ^２、８２．５μｇ／ｍｍ ^２ 、１２３．７５μｇ／ｍｍ^２、１６５μｇ／ｍｍ^２。最大高さ（ＭＨ）と新生
肉芽組織容積（ＮＧＶ）に対する投与量変化の結果を各々以下の表１と表２に示
す。フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム・ディスクの存在による明白な利
益が示されたが、とくに効果は１０から１２０μｇ／ｍｍ^２の範囲で用量に比例
するように思われる。

【００３１】

【表１】

【００３２】

【表２】

【００３３】 非上皮化皮膚拡散細胞系で、実施例１のフィブロネクチン−アルギン酸ナトリ
ウム・ディスク・ディスクを使用して適用量を１０．３から１６５μｇ／ｍｍ^２ まで変化させた場合のフィブロネクチン吸収に関するｉｎ ｖｉｔｒｏ研究も行
なった。結果を図６に示す。

【００３４】 実施例８ 高濃度のヒト血漿フィブロネクチン供給用アルギン酸カルシウム・デ
ィスク 本発明の好適な供給システムは固体ディスクを形成するためアルギン酸カルシ
ウム存在下に凍結乾燥したヒト血漿フィブロネクチンからなり、これを治療しよ
うとする創傷綿に局所塗布することになる。フィブロネクチンを含む液状配合と
は対向して、アルギン酸カルシウム・ディスクを使用することで創傷面へ既知の
、一貫した量のフィブロネクチンの供給を保証する一助となる。

【００３５】 本発明の一つの実施態様において、ヒトフィブロネクチンはライセンス製造メ
ーカー（MedImmune, Maryland through DCI Management, New York, NY）からク
リオプレシピテートの形で購入する。クリオプレシピテート抽出物をまず溶解し
不純物除去する。次にクリオプレシピテート抽出物を処理して、０．３％トリ（
ｎ−ブチル）リン酸（ＴＮＢＰ）と１％トライトンＸ１００を室温で４時間作用
させる溶剤／洗剤法により、脂質エンベロープで覆ったウィルスを不活化する。
処理試薬を除去してから、ゼラチン−セファローズ・アフィニティクロマトグラ
フィでフィブロネクチンを精製する。結合フィブロネクチンはｐＨ５．０の１Ｍ
の臭化カリウムでカラムから溶離する。塩の除去に続いて、フィブロネクチンを
１００ＫＤメンブレン限外濾過で濃縮、０．２２μｍアセテートフィルタを用い
て滅菌、そして凍結乾燥する。つぎに実施態様１に記載したとおり滅菌アルギン
酸カルシウムと化合させる。食品医薬品局（Food and Drug Administration）ク
ラス１００優良製造手順にしたがいフィブロネクチン／アルギン酸カルシウム混
合物５ｍｌを滅菌ガラスバイアルに無菌充填する。

【００３６】 ストッパーをバイアルに途中まで挿入して調製物をＦＴＳ Ｄｕｒａｌｙｏｐ
ｈｉｌｉｚｅｒ凍結乾燥器で乾燥させる。本発明の好適実施態様において、調製
ディスクは直径４．２ｃｍ^２でピンセットでバイアルから取り出し、治療しよう
とする創傷に載置して滅菌生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）で湿潤する。各包
帯は表面積ｍｍ^２あたり８０μｇのフィブロネクチンを含有している。表皮潰瘍
やその他の治療領域の大きさによっては１つ以上の包帯を使用することがあり、
また創傷の形状に適合するように切り抜く必要がある。ディスクを積層すると大
量のフィブロネクチンたとえば１６０μｇ／ｍｍ^２、２４０μｇ／ｍｍ^２、など
を供給できる。

【００３７】 本実施例および前記実施例による包帯はヒト以外の供給源に由来するフィブロ
ネクチンを用いて調製できる。代表的な動物種としては、ウマ、イヌ、ネコなど
がありこれに限定されない。

【００３８】 ヒト患者または動物患畜の治療を行なう一つの好適な方法において、他の軟膏
、クリーム、または包帯を創傷、潰瘍、またはその他の病変に塗布することなく
本実施態様のフィブロネクチン固形創傷包帯を使用する。包帯は長い伸縮性４層
包帯を使って高圧圧迫法で適用するのが望ましい。

【００３９】 たとえば、脚の病変の場合、就寝に使用する患者用ベッドの脚を持ち上げて約
２０度の角度を作るべきである。たとえば、２インチのブロックをヒト患者用ベ
ッドの脚の下に入れるかまたは枕２個を敷物とベッドのマットレスの間に差し込
むことができる。処置後３０分以上にわたって患者が座ったまままたは横になっ
ている場合、患者に脚を持ち上げさせる。同様に、患者が処置後に直立位でいる
場合には３０分毎に歩行させる必要がある。

【００４０】 週に２回本発明による包帯を除去して創傷床での感染の有無を検査する。感染
の兆候が見られた場合、適切な診療施設（health care practitioner）により必
要な診断治療を受けるべきである。感染の兆候がない場合、創傷床を次のように
評価する。創傷床の少なくとも５０％が薄いピンクから牛肉のような赤になって
いれば（壊死巣を示す灰色、黄色、または黒色と対向して）、包帯の交換と圧迫
を適用する。潰瘍床の５０％未満がピンクまたは赤の場合、創傷床のデブリドマ
ンを行なう即ち全ての壊死巣を摘除べきである。デブリドマンは鋭利な外科器具
を使って行なうべきであり局所麻酔を使用して行なうことが可能である。

【００４１】 実施例９ フィブロネクチンの溶解性 フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲル１０ｇを調製するには、以下の
成分を順次追加する必要がある。最初に、ｐＨ５．０の脱塩水８．８ｍｌのｐＨ
を３ＭのＮａＯＨ２．９５μｇから２．９５ｍｇの追加によりｐＨ８．０から１
１．０に調節する。供給源の異なる脱塩水は開始ｐＨ値が異なるので３ＭのＮａ
ＯＨの正確な量は必要に応じて希望する値に調節できる。

【００４２】 次に、０．０５から０．１ｇの凍結乾燥フィブロネクチンを脱塩水ｐＨ８．０
〜ｐＨ１１．０に溶解する。手順の最後のステップで、０．０２８ｇのカルボマ
ーと０．０９３９９７０５ｇから０．０９１０５ｇの３ＭのＮａＯＨを含む水１
ｍｌを混合物に追加する。幾つかのフィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲ
ルの組成例を表２に示す。「ＦＮ」は凍結乾燥フィブロネクチンを表わす。

【００４３】

【表３】

【００４４】 本発明によるフィブロネクチン・ゲルのとくに好適な実施態様においては、以
下の成分をこの順序で追加する必要がある。まず、脱塩水（８．８５６または８
．８０６ｇ）のｐＨを３ＭのＮａＯＨ０．０２３５ｇで１１．６に調節する。０
．０５ｇのフィブロネクチンを加える場合には８．８５６ｇの水を使用し、０．
１ｇのフィブロネクチンを加える場合には８．８０６ｇの水を使用する。次に０
．０５または０．１ｇの凍結乾燥フィブロネクチンを脱塩水に溶解する。手順の
最後のステップで、０．０２８ｇのカルボマーと０．０７０５ｇの３ＭのＮａＯ
Ｈを混合物に加える。０．０２８ｇのカルボマーは２．８％カルボマー原液１．
０ｇに由来する。濃厚カルボマー原液は３．７５％または２．８０％とする。異
なる濃度のカルボマー原液を使用してのフィブロネクチン−カルボマー・ハイド
ロゲル調製を表２に示した。カルボマーの好適なグレードはＣａｒｂｏｐｏｌ（
登録商標）９７４Ｐ ＮＦ ｃａｒｂｏｍｅｒ（BF Goodrich, Cleveland, Ohio
）である。フィブロネクチン濃度は周知のマイクロ・ブラッドフォード法（micr
o-Bradford method）で測定する。ブラッドフォード蛋白アッセイはブラッドフ
ォード色素結合法に基づく（Bradford, M., Anal. Biochem. 72, 248, 1976）。
蛋白アッセイはＣｏｏｍａｓｓｉｅ（クマシー）（登録商標）ブリリアントブル
ーＧ−２５０色素が様々な濃度の蛋白に反応して色変化することに基づいたもの
である。

【００４５】

【表４】

【００４６】

【表５】

【００４７】 実施例１０ 溶剤／洗剤処理ヒト均質血漿フィブロネクチン 実施例１〜７と実施例９で使用した凍結乾燥フィブロネクチンは本実施例で記
載するとおりに調製した。

【００４８】 まず、異なるドナーから採取した血漿のロットについて非特異抗体、Ｂ型およ
びＣ型肝炎ウィルス（ＨＢＶ，ＨＣＶ）、ヒト免疫不全症ウィルス（ＨＩＶ）、
ヒトＴ細胞白血病ウィルス（ＨＴＬＶ）、サイトメガロウィルス（ＣＭＶ）、梅
毒について検査した。

【００４９】 次に、トリ（ｎ−ブチル）リン酸（ＴＮＢＰ）とトライトンＸ−１００を用い
るウィルス不活化溶剤／洗剤法を行なった。有機溶媒であるトリ（ｎ−ブチル）
リン酸（ＴＮＢＰ）とトライトンＸ−１００洗剤による血漿製品の処理はフィブ
ロネクチンなどの不安定形蛋白に影響を与えることなくきわめて大量のＨＢＶ，
ＨＣＶ，ＨＩＶを不活化することが示された（Horowitz et al., 1992, Blood 7
9 (3):826-31）。

【００５０】 典型的な調製において、５名のドナーに由来する凍結血漿を、１％（ｖｏｌ／
ｖｏｌ）ＴＮＢＰ、１％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）トライトンＸ−１００、１ｍＭフェ
ニルメチルスルフォニルフッ素と一緒に２４℃で６時間スターラ撹拌しながら凍
結融解処理した。処理後、大豆油（２０％ｖｏｌ／ｖｏｌ）を加え、室温で３０
分間ゆっくりと混和してから、４℃で漏斗を用いて除去した。

【００５１】 たとえば後述するゼラチン−セファローズ・アフィニティクロマトグラフィ法
などでフィブロネクチンを血漿から精製したら、最終溶液についてＴＮＢＰとト
ライトンＸ−１００による汚染を確認する。ＴＮＢＰは８０／１００メッシュSu
pelcoport（Supelco, Bellafonte, PA）上の１０％ＳＰ−１０００充填０．２５
インチ×内径２ｍｍ×４フィート・ガラスカラムを用いるガスクロマトグラフィ
でヘキサン抽出後に精製フィブロネクチンサンプルで定量した。トライトンＸ−
１００は、ゲル濾過カラムＧ２０００ＳＷ内径７．５ｍｍ×６０ｃｍ（Tosohass
）から２３０ｎｍにセットしたＵＶ検出器へ接続した高速液体クロマトグラフィ
（ＨＰＬＣ）フィブロネクチンサンプルを打ち込み、測定を行なった。フィブロ
ネクチン調製はＴＮＢＰまたはトライトンＸ−１００いずれか１ｐｐｍ未満を含
むことが分かった。

【００５２】 フィブロネクチンは溶剤／洗剤処理ヒト血漿から、ゼラチン−セファローズ・
アフィニティクロマトグラフィ法（Horowitz and Chang, 1989）で分離した。こ
の方法は手順のうちでゼラチンに対するフィブロネクチンの親和性を利用して高
収量でヒト血漿から電気泳動的に純粋なフィブロネクチンの分離ができる。

【００５３】 本法では、ゼラチンはＣＮＢｒ活性化後にセファローズＣＬ−４Ｂと共有結合
している。このシステムで提供されるヒト血漿フィブロネクチンでの結合能は＞
１ｍｇ／ｍｌゲルである。精製は容量３７５ｍｌで瀘過面積１０．５ｃｍ^２のガ
ラス製ファンネル・フィルタホルダー（Costar Nucleopore, Pleasanton, CA）
で流量２５ｍｌ／分のバッチ処理で行なう。

【００５４】 要約すると、血漿サンプルをゼラチン−セファローズ・ゲルに２回通す。マト
リックスを数倍量の０．１５Ｍのトリス塩酸バッファｐＨ７．５で洗浄し、数倍
量の０．１５Ｍのトリス塩酸バッファｐＨ７．５＋１ＭのＮａＣｌで洗浄し、ま
た０．１５Ｍのトリス塩酸バッファｐＨ７．５で洗浄する。溶離は０．１Ｍの酢
酸バッファｐＨ５．０に１ＭのＫＢｒを加えて行なう。得られたフィブロネクチ
ン溶液は脱イオン脱塩水に対して排他的に透析し、窒素雰囲気下で限外濾過し、
凍結乾燥し−８０℃で使用時まで冷凍保存する。

【００５５】 蛋白濃度はＢｉｏ−Ｒａｄ蛋白アッセイ（Bio-Rad Laboratories, Richmond,
CA）を用いて決定した。以下の図表は精製ステップの要約である。

【００５６】 ヒト以外の動物由来のフィブロネクチンを同様の方法を使って精製可能である
。血漿ロットは適宜供給源生物についての非特異抗体をスクリーニング検査する
ことになるが、これは当業者には既知である。

【００５７】 たとえば、イエネコ血漿はネコ白血病ウィルスについてスクリーニングする ＴＮＢＰ／トライトンＸ−１００処理ヒト血漿からフィブロネクチンを精製す
る手順 ２．５リットル血漿（ドナー５名から） １．０％（ｖ／ｖ）ＴＮＢＰ＋ １．０％（ｖ／ｖ）トライトンＸ−１００ ６時間／２４℃ 溶剤／洗剤血漿 ２０％（ｖ／ｖ）植物油でＴＮＢＰ抽出 血漿＋２００ｍｌのゼラチン−セファローズ・ゲル トリス塩酸バッファ０．１５Ｍ，ｐＨ７．５で最初の洗浄 トリス塩酸バッファ０．１５Ｍ＋１Ｍ，ＮａＣｌ，ｐＨ７．５で２回目
の洗浄 トリス塩酸バッファ０．１５Ｍ，ｐＨ７．５で３回目の洗浄 酢酸ナトリウムバッファ０．１Ｍ＋１Ｍ，ＫＢｒ，ｐＨ５．０で溶離 脱イオン脱塩水に対して透析 窒素雰囲気下で限外濾過により濃縮 ０．２２μｍアセテート・フィルタで滅菌瀘過 凍結乾燥

【００５８】 実施例１１ 血漿フィブロネクチンの乾熱処理（低温殺菌法） 前述の実施例に記載したようなウィルス不活化溶剤／洗剤法（２５℃で６時間
）はエンベロープのあるウィルスの殺滅に非常に有効であることが分かった。Ｒ
ａｄｏｓｅｖｉｃｈ（Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 24(2) 157-161
, 1998）によれば、低温殺菌法は広範囲の殺ウィルス作用があり、これはエンベ
ロープを持たないウィルスを不活化する別の能力によるものである。エンベロー
プを持たないウィルスは一般にエンベロープのあるウィルスより物理化学的処理
に対して抵抗性が強い。つまり、ことなるウィルス殺滅処理の組み合わせで血漿
製品のウィルス学的安全性の改善が得られる（たとえば溶剤／洗剤法＋乾熱処理
）。

【００５９】 凍結乾燥した溶剤／洗剤処理フィブロネクチンに対して追加する６８℃で９６
時間の乾熱処理は前述した実施態様に記載した本発明の創傷配合にフィブロネク
チンを含める前に施行できる。たとえば、本発明の一つの実施態様において、実
施例１０で調製した凍結乾燥フィブロネクチン５０ｍｇを無菌操作技術で５０ｍ
ｌポリプロピレン製コニカルチューブ（Becton Dickinson Labware, Franklin L
akes, NJ）に入れて封止する。チューブを良く制御されている水浴槽（Exacal E
x-110 water bath Neslab Instruments, Newington, NJ）で６８℃で９６時間浸
漬する。

【００６０】 ウィルス不活化／除去手順を実施する場合、蛋白構造の変化がないことと生物
学的活性の変化がないことを測定するのが重要である。上述したフィブロネクチ
ン低温殺菌を行なったものと新鮮な精製フィブロネクチンとで、標準ＳＤＳ−Ｐ
ＡＧＥゲルの分子量標準に対する結果は低温殺菌フィブロネクチンが構造的完全
性を維持していることを示した。低温殺菌フィブロネクチンはゼラチン結合、細
胞付着促進活性、化学走化性について調べると新鮮な精製血漿フィブロネクチン
と同等の活性を示した。これらの試験での新鮮な精製血漿フィブロネクチンは実
施例１０に記載した方法にしたがって調製した。これ以外に、凍結乾燥フィブロ
ネクチンを８０℃で７２時間水浴させることが可能である。実施例１〜５と実施
例８の固体創傷治癒配合もバイアルに封入した後で低温殺菌可能である。

【００６１】 実施例１２ 組み換えフィブロネクチン 先行実施例で記載した方法により精製滅菌した血漿フィブロネクチンの代わり
として、組み替え手段により作成したヒトまたは動物フィブロネクチンを本発明
の固体創傷包帯に使用できる。従来技術で周知の方法を使用して、フィブロネク
チンの活性フラグメントまたは改変したフィブロネクチンフラグメントを本発明
の別の実施例で使用できる。このような方法としては、蛋白作成用のＤＮＡ組み
換え法や化学合成法がある。たとえば、組み換えフィブロネクチンポリペプタイ
ド・フラグメントはバクテリアまたは化学合成で作成可能である。本発明で使用
されるフィブロネクチン、フィブロネクチンポリペプタイド・フラグメントまた
は何らかのポリペプタイド化合物は動物組織または血漿から分離する、または細
胞培養から作成分離することができる。遺伝を改変した動物たとえば遺伝子組み
替え動物などから作成分離してフィブロネクチンのもっと内因性または外因性の
型を精製できる。フィブロネクチンの配列は当業者に既知であり、たとえば参照
により本明細書に含まれるKornblihtt et al., EMBO J. 4:1755-1759 (1985)や
、またはGenbank、NCBI、NIHから入手可能であり、またインターネット上でhttp
://www.ncbi.nlm.nih.govからも容易に検索できる。一般に利用できるデータベ
ースは参照によりその全体が本明細書に含まれる。

【００６２】 フィブロネクチン・フラグメントの代表的な例が、「細胞外マトリクス・アセ
ンブリをmodulate可能なポリペプタイド・フラグメント」と題する米国特許第５
，４５３，４８９号、「創傷治癒用の組み換えフィブロネクチンによる細胞外マ
トリクス」と題する米国特許第５，９５８，８７４号、「スーパーフィブロネク
チンを用いて癌を阻害する方法」と題する米国特許題５，９２２，６７６号に開
示されており、これらは全て参照によりその全体が本明細書に含まれる。組み換
えフィブロネクチン・フラグメントは宝酒造（Takara Shuzo (Otsu, Japan)）か
らも入手可能である。

【００６３】 実施例１３ フィブロネクチン以外の創傷治癒促進剤 本発明の固体創傷配合はフィブロネクチンと類似の組成を有するその他の創傷
治癒促進剤たとえば同様なサイズの蛋白（細胞外マトリクス蛋白、たとえばトロ
ンボスポンジン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノゲンなど）またはもっ
と小さいサイズの蛋白（成長因子を含むペプタイドたとえば血小板由来成長因子
など）を含むことができる。本発明の好適実施態様において、適当な種特異性創
傷治癒促進剤を使用する、即ちヒトフィブロネクチンおよび／またはヒト用のそ
の他の創傷治癒促進剤を使用する。

【００６４】 本発明はこれの特定の実施態様に関連して説明したが、その他多くの変化、変
更、および使用法が当業者には明らかになろう。したがって本発明の多数の変化
は添付の請求項に記載される本発明の範囲および精神に含まれるものとして成し
得ることは理解されるべきである。

【００６５】

【産業上の利用分野】

本発明は有効量のフィブロネクチンを放出する固形創傷包帯、とくにフィブロ
ネクチン−アルギン酸カルシウム包帯に関する。

【００６６】

【従来の技術】

フィブロネクチンはおよそ５％の炭水化物を含みどこにでもみられる細胞外糖
蛋白である。体液中には可溶体でまた細胞外マトリクスには不溶体で存在する。
フィブロネクチンは多くの重要な生理的過程、たとえば胚形成、止血、血栓症、
創傷の治癒などで重要な役割を果たす（Potts, J. R. and Campbell, I. D. Cur
rent Opinion in Cell Biology 6:648-55, 1994）。血漿フィブロネクチンの特
徴的な形態は分子量４４０，０００ダルトンのジスルフィド結合（disulfide-bo
nded SS結合）ダイマーで、各サブユニットは分子量約２２０，０００ダルトン
である。血漿フィブロネクチンは他にも様々な名前で知られており、これには冷
間不溶性グロブリン、抗ゼラチン因子、細胞付着蛋白、細胞拡散因子、オプソニ
ンα２表面結合糖蛋白、などがある。これらの呼称はフィブロネクチンの生理的
活性たとえば細胞の補充、粒子状組織壊死片のオプソニン作用、傷口の収縮の促
進などを反映している。フィブロネクチンの構造および活性についての概論は別
に発刊されている（Hynes, R. O. Fibronectins, Rich, A., ed. New York, Spr
inger-Verlag 1990）。

【００６７】 創傷治癒は通常３相に分けられる。炎症相、増殖相、リモデリング相である。
フィブロネクチンはとくに侵入細胞が付着できる足場を作成することで、創傷治
癒過程の各段階に関与すると言われている。最初に、多くの伝達物質たとえばフ
ィブロネクチンやフィブリノゲンなどが創傷部位へ放出される。フィブロネクチ
ンは創傷への炎症細胞浸潤や単核細胞による組織壊死片貪食作用を促進する。そ
の後、血管新生や再上皮化が行なわれる。この段階で、フィブロネクチンは内皮
細胞に白血球走化性活性として作用し基底膜へ向かって上皮細胞と線維芽細胞の
侵潤を促進する。フィブロネクチンはまたリモデリング相の必須要素であるとも
されており、膠原細線維の構成に大きな役割を果たしている。膠原細線維は最終
的に線維束を形成して組織の抗張力を大幅に増加させることで創傷の閉止を促す
。通常血漿中に３００μｇ／ｍｌの濃度で見られるフィブロネクチンはHorowitz
とChangが開発した方法を用いて抽出精製される（Horowitz, B. and Chang, M.
D. Y. "Preparation of fibronection for therapeutic administration in Fib
ronection, D. F. Mosher ed., Academic Press, San Diego 441-455 (1989)）
。

【００６８】

【発明が解決しようとする課題】

血漿フィブロネクチンの局所塗布は角膜損傷（Nishida, T. et al., Japan Jo
urnal of Ophthalmology 26:416-24, 1982; Phan, T. M. et al., American Jou
rnal of Ophthalmology 104:494-501, 1987）や脚潰瘍（Wysocki, A. et al., A
rch. Dermatology 124:175-177, 1988）などで創傷治癒率を増加させることから
有用であると報告されている。しかし、有効量のフィブロネクチンを薬理的に受
け入れられる組成で供給することが可能なものであって創傷治療用に使用できる
適切な局所用担体が存在しない。薬剤を有効に局所投与するための形態を開発す
る際の大きな制限要素は、有効薬剤を有するだけでなく、担体から供給対象部位
へ有効薬剤の移動を可能にする配合物である。

【００６９】

【課題を解決するための手段】

フィブロネクチンと創傷部との接触時間を最大にしつつ創傷へのフィブロネク
チンの放出を制御するような局所用配合はハイドロゲル配合物である。薬剤供給
においては、術語ハイドロゲルは代表的には有意な量の水（＞乾燥重量の２０％
）を吸収でき一方で明らかな三次元構造を維持できるポリマー性材料だけに使わ
れるものである（Gehrke, S. H. and Lee, P. I., "Hydrogels for drug delive
ry systems," In Specialized Drug Delivery Systems Manufacturing and Prod uction Technology , Chapter 8, Vol. 8, pp 333-392, Marcel Dekker, New Yor
k 1990）。ハイドロゲルのもっとも重要な特性は水中での膨張度である。ハイド
ロゲルは他のどのような非天然材料よりも密接に生体組織を模倣する。組織に対
してのこのようなきわめて近い類似性は柔軟で可撓性のある性質と高い含水量に
よる。これで機械的刺激や人体組織の損傷が最小限に抑さえられる。ハイドロゲ
ル配合物のその他の利点としては、高い含水量のため創傷を湿潤に保つ能力があ
る、創傷の過剰な水分（滲出液）を吸収できる能力がある、創傷への塗布と除去
（水洗による）が簡単である、などがある。また患部に塗布した場合には冷たい
感触を与えるが、これは患者の快適度を向上させられる性質である。

【００７０】 ハイドロゲルは４つの主要な性質を備えている：膨潤度、生体親和性、透水性
、膨潤動態である。こうした化合物の例としては、ビニルポリマー（ポリアクリ
ル酸など）、セルロースとセルロース誘導体が挙げられる。ポリアクリル酸ポリ
マーはカルボマーとも呼ばれ、たとえばＣａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）カルボマ
ー（BF Goodrich社）などは薬理的に受け入れられる他の配合物より皮膚創傷へ
のフィブロネクチン供給の点で優れていることが示されていたため他のポリマー
（たとえばセルローズやセルロース誘導体）に代わり選択されていた。

【００７１】 高濃度のフィブロネクチンを含むことができるような水溶性かつ薬理的に受け
入れられるポリマーを含むハイドロゲル配合物が、「ヒト血漿フィブロネクチン
を含む創傷治癒配合」と題する米国特許第５，６４１，４８３号に開示されてお
り、これは参照によりその全体が本明細書に含まれる。フィブロネクチンの非緩
衝高濃度水溶液および１％までのフィブロネクチンを含むハイドロゲルを調製す
る方法は、「非緩衝高濃度フィブロネクチン溶液の調製方法」と題する米国特許
第５，８２１，２２０号、および「ヒト血漿フィブロネクチンを含む創傷治癒配
合物」と題する国際特許出願第ＰＣＴ／ＣＡ９７／００９６６号、国際公開番号
ＷＯ９８／２６７９７号に開示されており、ともに参照によりその全体が本明細
書に含まれる。

【００７２】 アルギン酸は海産褐藻類から抽出される自然に産生する物質で、製薬、化粧品
、テキスタイル、食品工業で使用される。アルギン酸はポリアニオン多糖類でＤ
−マンヌロン酸とＬ−グルロン酸の直鎖２価コポリマーからなる。もっとも一般
的な使用方法はアルギン酸の高分子電解性によるもので、これがゲル化する性質
と膨張能の基礎を提供する。市販のアルギン酸ナトリウムは水溶性である。たと
えば２価のアルカリ希土類イオン、たとえばＣａ^＋＋などの多価イオンを含む溶
液にこのようなイオンを加えると、半固体状のアルギン酸ゲルが生成される。こ
れは数個のアルギン酸鎖のイオン交差結合の結果である。

【００７３】 アルギン酸カルシウムは繊維または不織布材料を形成する能力が古くから知ら
れていた。これは主として医療用、手術用またはその他の目的の綿棒または包帯
として使用されて来ており、たとえば「アルギン酸創傷包帯」と題するヨーロッ
パ特許ＥＰ０７２１３５５Ｂ１号に記載されており、これは参照によりその全体
が本明細書に含まれる。不織布創傷包帯の形で滲出性の創口の治療に供給された
場合、アルギン酸カルシウム包帯は滲出液中のナトリウムイオンと反応する制御
されたイオン活性ゲルが創傷部位の上に形成されることを促進すると言われてい
る。滲出性創傷の例としては、褥瘡性潰瘍、静脈鬱血性潰瘍、糖尿病性潰瘍、動
脈性潰瘍、第２レベルの熱傷、移植皮膚片供与部位などが挙げられる。

【００７４】 本発明は創傷治癒に有効な量のフィブロネクチンを創傷部位に供給することが
できる固形創傷包帯の作成技術を提供する。フィブロネクチン供給に使用される
固形包帯の例としては、アルギン酸カルシウム、カルボキシメチルセルローズ（
ＣＭＣ）、ハイドロキシプロピルセルローズ（ＨＰＣ）、カルボマー、カラギー
ナンなどが挙げられる。

【００７５】 フィブロネクチンの含有を想定した局所投与用形態の配合物の場合は、幾つか
の品質基準を遵守すべきである。調製の全ての成分は、溶剤やゲル化剤を含めて
、創傷に対して無毒性であって投与薬剤との適合性があるべきである。最終製品
は作用部位に対して投与薬剤の最適な放出を促進し、創傷と投与薬剤との接触時
間を長くできるように十分な形状維持性があること、そしてまた無菌的であるべ
きである。

【００７６】 本発明の固形包帯を使用することは用量再現性、保管・輸送・塗布の容易さに
関して特定の利点を提供する。さらに、保存剤は不要である。

【００７７】 これらの固形包帯は供給部位へのゆっくりとしたフィブロネクチンの放出を提
供する。これにより１日１回のように便利な固形創傷包帯の適用が可能になる。
１日１回の適用スケジュールとその固体状の剤形のため、使い終わった薬剤を除
去するときに創傷が受ける外傷は最小限に抑さえられるはずである。

【００７８】 本発明の好適な配合物はフィブロネクチンと類似の組成物、たとえば同様な寸
法の蛋白質（トロンボスポンジン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノゲン
）またはもっと寸法の小さい蛋白質（たとえば成長因子を含むペプチド類）など
の組成物を有するその他の創傷治癒促進剤と併せて使用可能である。

【００７９】 好適な配合物は、非上皮化皮膚サンプルを含む固定レセプターからなる体外（
ｉｎ ｖｉｔｒｏ）拡散細胞システムを使用して評価可能で、「非上皮化皮膚拡
散細胞システム」と題し、参照により本明細書に含まれる米国特許第５，８７７
，１４９号に詳細に開示されているように、非上皮化側を上向きにしてドナー区
画へ向け、表皮側を下向きにレセプター区画へ向ける。レセプター区画は循環緩
衝液回路へ接続し、緩衝液温度を３７℃に維持し皮膚表面を約３２℃とする。

【００８０】

【発明の効果】

本発明により、創傷治癒促進剤、とくにフィブロネクチンの濃縮液を使用して
固形創傷包帯を開発する。フィブロネクチンを含む固形創傷包帯は適用が簡単で
、剥離が簡単で、また生理的活性量の範囲内でフィブロネクチンが供給される。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は２４時間の間に渡り異なる固体創傷包帯を使用した非上皮
化ヒト皮膚におけるフィブロネクチンの吸収を示す。丸括弧内の数字は２４時間
の間における非上皮化ヒト皮膚１平方ｍｍ（ｍｍ^２）あたりのフィブロネクチン
吸収量（μｇ）を表わす。鈎括弧内の数字は包帯の単位重量あたり吸収された生
理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）の量を表わす。バーは平均（値）の標準偏差（値
）を示す。

【図２】 図２は新規な肉芽組織形成で、フィブロネクチン−アルギン酸カ
ルシウム包帯による治療に応答させたときの最大高さ（μｍ）を７日間の治療後
に計ったものを示す。６ｍｍ直径の包帯を手術時に適用した。アルギン酸包帯（
Kaltostat）、コラーゲン−アルギン酸包帯（Fibracol）、フィブロネクチン−
アルギン酸カルシウム包帯を潰瘍部に載置して４０μｌの生理食塩水で湿潤した
。対照治療（†“生理食塩水”で示す）は４０μｌの生理食塩水単独で治療した
潰瘍である。閉鎖包帯（Tegaderm）を使用して創傷の乾燥を防止した。フィブロ
ネクチン−アルギン酸カルシウム包帯（ｎ＝５３）は生理食塩水（Ｐ＜０．００
０１，ｎ＝３７）、アルギン酸（ｐ＜０．０００１，ｎ＝６１）、またはコラー
ゲン−アルギン酸（Ｐ＜０．０００１，ｎ＝１１）より有意に良好だった。Stud
entの両側ｔ検定で、アルギン酸とコラーゲン−アルギン酸包帯（Ｐ＝０．１０
５２）の間には相違が見られなかった。バーは平均値の標準偏差値を表わす。

【図３】 図３はフィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯でもって治
療したときに応答して７治療日後に形成された新規な肉芽の体積を示す。６ｍｍ
直径の包帯を手術時に適用した。アルギン酸包帯（Kaltostat）、コラーゲン−
アルギン酸包帯（Fibracol）、フィブロネクチン−アルギン酸カルシウム包帯を
潰瘍部に載置して４０μｌの生理食塩水で湿潤した。対照となる治療（†“生理
食塩水”で示す）は４０μｌの生理食塩水単独で治療した潰瘍である。閉鎖包帯
（Tegaderm）を使用して創傷の乾燥を防止した。フィブロネクチン−アルギン酸
カルシウム包帯（ｎ＝５３）は新規の肉芽組織形成を刺激する上で生理食塩水（
Ｐ＜０．０００３，ｎ＝３７）、アルギン酸（Ｐ＜０．００２，ｎ＝６１）また
はコラーゲン−アルギン酸（Ｐ＜０．０３，ｎ＝１１）包帯と比較して有意に良
好だった。Studentの両側ｔ検定で、アルギン酸とコラーゲン−アルギン酸包帯
の間（Ｐ＝０．４４２４）には相違が見られなかった。バーは平均値の標準偏差
値を表わす。

【図４】 図４は新規の肉芽組織形成で、１．０％フィブロネクチン・カル
ボマー・ハイドロゲルに応答させたときの７治療日後に測定した最大高さ（μｍ
）を示す。フィブロネクチンは０．２８１％カルボマー・ハイドロゲル（４０μ
ｌ中に４００μｇのフィブロネクチンを含む）として手術時及び以後７日間の間
毎日適用した。対照となる創傷へ適用した局所用配合物の量も（生理食塩水と０
．２８１％カルボマー・ハイドロゲル）４０μｌとした。防腐用ツルグラ包帯（
Bactigras）と非接着性吸収包帯（Melolite）を使って創傷の乾燥を防止した。
１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲルによる治療（ｎ＝４５）
は生理食塩水（Ｐ＝０．０１，ｎ＝４３）、または新規肉芽組織形成を刺激する
上でフィブロネクチンを含まないカルボマー・ハイドロゲル（Ｐ＝０．００１，
ｎ＝４３）より有意に優れていた。Studentの両側ｔ検定で、生理食塩水とカル
ボマー・ハイドロゲルとの間（Ｐ＝０．１７５２）には相違が見られなかった。
バーは平均値の標準偏差値を表わす。

【図５】 図５は１．０％フィブロネクチン−カルボマー・ハイドロゲルに
応答させたときの７治療日後の新規の肉芽組織量を示す。フィブロネクチンは０
．２８１％カルボマー・ハイドロゲル（４０μｌ中に４００μｇのフィブロネク
チンを含む）として手術時及び以後７日間の間毎日適用した。対照となる創傷に
適用した局所用配合物の量（生理食塩水と０．２８１％カルボマー・ハイドロゲ
ル）も４０μｌとした。防腐用ツルグラ包帯（Bactigras）と非接着性吸収包帯
（Melolite）を使って創傷の乾燥を防止した。１．０％フィブロネクチン−カル
ボマー・ハイドロゲル治療（ｎ＝４５）は生理食塩水（Ｐ＝０．０２８５，ｎ＝
４３）、新規肉芽組織形成を刺激する上でフィブロネクチンを含まないカルボマ
ー・ハイドロゲル（Ｐ＝０．０２３８，ｎ＝４３）と比較した場合有意に優れて
いた。Studentの両側ｔ検定で、生理食塩水とカルボマー・ハイドロゲル単独と
の間（Ｐ＝０．４１５２）には相違が見られなかった。バーは平均値の標準偏差
値を表わす。

【図６】 図６は実施例１にしたがって調製した各種のフィブロネクチンの
量であってフィブロネクチン−アルギン酸カルシウム・ディスクから吸収される
フィブロネクチンの量を示す。吸収はヒト非上皮化皮膚拡散細胞系を使用し２４
時間後に測定した。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年５月２日（２００２．５．２）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 47/36 Ａ６１Ｐ 17/02 47/38 Ａ６１Ｋ 37/02 Ａ６１Ｌ 15/44 Ａ６１Ｌ 15/03 Ａ６１Ｐ 7/04 Ａ６１Ｋ 37/465 17/02 37/24 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ， ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ロバート・パキン カナダ国 ケベック州 ジー６ゼット ２ ピー５、セント―ルージュ、ケミン セン ト―ジーン クリソストーム、ルー ド ラ ロレーヌ (72)発明者 ベノイト・ラリヴィエール カナダ国 ケベック州 ジー７エー ３エ ルアイ、セント―ニコラス、ルー ロール コナン、312 Ｆターム(参考） 4C076 AA76 AA77 BB31 CC14 EE30A EE31A EE36A FF33 FF68 4C081 AA02 AA12 BA11 BA12 CD021 CD041 CD051 DA04 DA05 4C084 AA02 AA03 BA44 CA17 CA18 DB52 DC11 MA02 MA11 MA63 NA10 NA12 ZA531 ZA532 ZA891 ZA892

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 有効量のフィブロネクチンを含む固体包帯。
2. 【請求項２】 少なくとも重量で０．５％から１．０％のフィブロネクチン
   を含むことを特徴とする請求項１に記載の固体包帯。
3. 【請求項３】 前記フィブロネクチンは血漿フィブロネクチン、組み換えフ
   ィブロネクチン、血漿フィブロネクチンの生物学的活性フラグメント、および組
   み換えフィブロネクチンの生物学的活性フラグメントを含むことを特徴とする請
   求項２に記載の固体包帯。
4. 【請求項４】 前記フィブロネクチンを前記包帯に組み込む前と後で前記フ
   ィブロネクチンが実質的に同じ生物学的活性を有することを特徴とする請求項３
   に記載の固体包帯。
5. 【請求項５】 前記フィブロネクチンはヒトフィブロネクチンであることを
   特徴とする請求項３に記載の固体包帯。
6. 【請求項６】 前記フィブロネクチンはヒト以外の動物由来のフィブロネク
   チンであることを特徴とする請求項３に記載の固体包帯。
7. 【請求項７】 フィブロネクチン以外で有効量の創傷治癒促進剤をさらに含
   むことを特徴とする請求項３に記載の固体包帯。
8. 【請求項８】 前記フィブロネクチン以外の創傷治癒促進剤は、トロンボス
   ポンジン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノゲン、または成長因子から構
   成されるグループから選択されることを特徴とする請求項７に記載の固体包帯。
9. 【請求項９】 有効量のフィブロネクチンを含む線維性包帯を含む医薬品供
   給システム。
10. 【請求項１０】 前記線維性包帯は植物多糖体を含むことを特徴とする請求
    項９に記載の医薬品供給システム。
11. 【請求項１１】 前記植物多糖体は、アルギン酸、カラギーナン、及びセル
    ロース誘導体から構成されるグループから選択されることを特徴とする請求項１
    ０に記載の医薬品供給システム。
12. 【請求項１２】 前記有効量のフィブロネクチンを含む前記線維性包帯は滲
    出性創面と接触する前は固体であり滲出性創面と接触後は少なくとも部分的にゲ
    ルであることを特徴とする請求項９に記載の医薬品供給システム。
13. 【請求項１３】 フィブロネクチン−植物多糖体包帯を含み、前記フィブロ
    ネクチン−植物多糖体包帯のフィブロネクチン濃度が約８０μｇ／ｍｍ^２である
    ことを特徴とする請求項１１に記載の医薬品供給システム。
14. 【請求項１４】 フィブロネクチン−多糖体包帯を含み、前記フィブロネク
    チンの少なくとも８０％が１２時間後に非上皮化皮膚拡散細胞系の表皮層に吸収
    されることを特徴とする請求項１１に記載の医薬品供給システム。
15. 【請求項１５】 前記線維性包帯は組織マトリクス系を含むことを特徴とす
    る請求項９に記載の医薬品供給システム。
16. 【請求項１６】 前記フィブロネクチンはヒトフィブロネクチンであること
    を特徴とする請求項９に記載の医薬品供給システム。
17. 【請求項１７】 前記フィブロネクチンはヒト以外の動物由来のフィブロネ
    クチンであることを特徴とする請求項９に記載の医薬品供給システム。
18. 【請求項１８】 フィブロネクチン以外で有効量の創傷治癒促進剤をさらに
    含むことを特徴とする請求項９に記載の医薬品供給システム。
19. 【請求項１９】 前記フィブロネクチン以外の創傷治癒促進剤は、トロンボ
    スポンジン、ラミニン、ビトロネクチン、フィブリノゲン、または成長因子から
    構成されるグループから選択されることを特徴とする請求項１８に記載の医薬品
    供給システム。
20. 【請求項２０】 請求項１に記載の固体創傷包帯を作成する方法であって ａ）不溶性繊維の分散とフィブロネクチンの溶液を混合して均質混合物を作成
    するステップと、 ｂ）前記ステップの均質混合物を凍結乾燥して固体創傷包帯を作成するステッ
    プと を含むことを特徴とする方法。
21. 【請求項２１】 不溶性繊維の前記分散はある程度の可溶性繊維を含むこと
    を特徴とする請求項２０に記載の方法。
22. 【請求項２２】 前記不溶性繊維はある条件下では可溶性であることを特徴
    とする請求項２０に記載の方法。
23. 【請求項２３】 前記フィブロネクチン溶液は１０ｍｇ／ｍｌの濃度を有す
    ることを特徴とする請求項２０に記載の方法。
24. 【請求項２４】 前記ステップａ）とｂ）は無菌環境下に行なわれ、さらに
    ｃ）ステップｂ）の前記固体創傷包帯を無菌環境下に滅菌容器に入れて封止す
    るステップ をさらに含むことを特徴とする請求項２０に記載の方法。