JP2019535321A5

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Publication number: JP2019535321A5
Application number: JP2019547066A
Authority: JP
Filing date: 2017-11-16
Publication date: 2020-12-24

Claims

ペプチドタグ及び結合パートナー対であって、ここで
ａ）ペプチドタグが、β−クラスプ含有タンパク質中のβ−クラスプ配置内に自発的に形成されるエステル結合に関与することが可能である１個の反応性残基を含み、且つここでこのペプチドタグが、該β−クラスプ含有タンパク質の少なくとも５個の隣接アミノ酸、例えば、８、１０、１２、１４、又は１６個のアミノ酸を含み、且つ任意にβ−クラスプ含有タンパク質の全アミノ酸配列を含まず；
ｂ）該結合パートナーが：
ｉ． β−クラスプ含有タンパク質の個別の断片を含み、ここで該断片は、該β−クラスプ含有タンパク質の少なくとも約１０個の、例えば、２０、３０、４０、５０個の隣接アミノ酸を含むか、又は該断片と少なくとも７５％、例えば、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％の同一性を有する配列を含み；
ｉｉ． β−クラスプ含有タンパク質中に自発的に形成されるエステル結合に関与することが可能である他の反応性残基を含み：並びに
該ペプチドタグ及び結合パートナーは、自発的に形成されるエステル結合を形成することにより互いに結合することが可能である、ペプチドタグ及び結合パートナー対。
ａ）ペプチドタグが、βシートを形成することが可能である少なくとも１０個のアミノ酸を含み、ここでこれらのアミノ酸の１つが、Ｉｇ様フォールド含有タンパク質のＩｇ様フォールド中の分子間エステル結合を自発的に形成することが可能である反応性残基であり、ここでこの反応性残基は、トレオニン、セリン、グルタミン、及びグルタメート／グルタミン酸を含む群から選択され、且つ任意にここでこのペプチドタグは、Ｉｇ様フォールド含有タンパク質の全アミノ酸配列を含まず；
ｂ）該結合パートナーが：
ｉ．Ｉｇ様フォールド含有タンパク質の個別の断片を含み、ここで該断片が、［Ｉｇ様フォールド含有タンパク質由来の］Ｉｇ様フォールドドメインの少なくとも約１０個の隣接アミノ酸を含むか、又は該断片との少なくとも７５％同一性を有する配列を含み、並びに
ｉｉ．Ｉｇ様フォールド含有タンパク質中の自発的分子間エステル結合に関与した反応性残基を含み、ここでこのペプチドタグ中の反応性残基がトレオニン又はセリンである場合、結合パートナー中の反応性残基が、グルタミンもしくはグルタメート／グルタミン酸であり、並びにペプチドタグ中の反応性残基がグルタミンもしくはグルタメート／グルタミン酸である場合、結合パートナー中の反応性残基が、トレオニン又はセリンであり；並びに
ｃ）該ペプチドタグ及び結合パートナーは、エステル結合を自発的に形成することにより互いに結合することが可能である、請求項１記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
ペプチドタグが反応性セリン残基を含む場合、結合パートナーが、反応性グルタミンもしくはグルタメート／グルタミン酸残基を含むか、又はペプチドタグが反応性グルタミンもしくはグルタメート／グルタミン酸残基を含む場合、結合パートナーが、反応性セリン残基を含む、請求項１又は２記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
２つの反応性残基間に形成されたエステル結合が、可逆的に加水分解可能である、請求項１〜３のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
２つの反応性残基間に形成されたエステル結合が、ｐＨが７よりも大きい場合に可逆的に加水分解される、請求項１〜４のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
前記β−クラスプ含有タンパク質又はＩｇ様フォールド含有タンパク質が、１以上のエステル結合を自発的に形成することが可能である、クロストリジウム・パーフリンゲンス由来のアドヘシンタンパク質Ｃｐｅ０１４７、又はそれと少なくとも７５％同一性のあるタンパク質である、請求項１〜５のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
ａ）前記ペプチドタグが、配列番号１に示された配列のアミノ酸５６５−５８７の１０個以上の隣接アミノ酸又はそれと少なくとも７５％の同一性のある配列を含む；及び／又は
ｂ）前記ペプチドタグが、長さ５０個未満のアミノ酸である；及び／又は
ｃ）前記結合パートナーが、配列番号１に示された配列のアミノ酸４３９−５６３の１０個以上の隣接アミノ酸又はそれと少なくとも７５％の同一性のある配列を含む、請求項１〜６のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
ａ）請求項１〜７のいずれか一項記載のペプチドタグ、及び１以上の異種アミノ酸配列；又は、
ｂ）請求項１〜７のいずれか一項記載のペプチドタグ、及び１以上の異種アミノ酸配列、ここで前記ペプチドタグ中の反応性残基が、セリンである；又は、
ｃ）請求項１〜７のいずれか一項記載のペプチドタグ、及び１以上の異種アミノ酸配列、ここで前記ペプチドタグ中の反応性残基が、トレオニンである；又は、
ｄ）請求項１〜７のいずれか一項記載の結合パートナー及び１以上の異種アミノ酸配列；
ｅ）請求項１〜７のいずれか一項記載の結合パートナー、及び１以上の異種アミノ酸配列、ここで前記結合パートナー中の反応性残基が、セリンである；
ｆ）請求項１〜７のいずれか一項記載の結合パートナー、及び１以上の異種アミノ酸配列、ここで前記結合パートナー中の反応性残基が、トレオニンである；
を含むキメラタンパク質。
ａ）請求項１〜７のいずれか一項記載の２個以上のペプチドタグ、又は
ｂ）請求項１〜７のいずれか一項記載の２個以上の結合パートナー、又は
ｃ）請求項１〜７のいずれか一項記載の少なくとも１個のペプチドタグ、及び請求項１〜７のいずれか一項記載の少なくとも１個の結合パートナー：を含み、
場合により、上記ａ）〜ｃ）の１つまたは複数について、
ｉ．キメラタンパク質が、１以上の異種アミノ酸配列を含む；及び／又は、
ｉｉ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの１つのみが、反応性残基としてセリンを含む；又は、
ｉｉｉ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの各々が、反応性残基としてセリンを含む；又は、
ｉｖ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの１つのみが、反応性残基としてトレオニンを含む；又は、
ｖ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの各々が、反応性残基としてトレオニンを含む；
ｖｉ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの１つのみが、反応性残基としてトレオニン、グルタミン、又はグルタメート／グルタミン酸を含む；又は、
ｖｉｉ．キメラタンパク質中に存在するペプチドタグ又は結合パートナーの各々が、反応性残基としてトレオニン、グルタミン、又はグルタメート／グルタミン酸を含む、請求項８記載のキメラタンパク質。
一方又は両方の結合パートナーが、自発的分子間エステル結合形成を促進する１以上のアミノ酸残基を含む、請求項１〜７のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
自発的分子間エステル結合形成を促進する１以上のアミノ酸残基が、反応性残基と一緒にアミノ酸配列を形成するベータ−鎖中に存在する、請求項１〜７のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
グルタミン又はグルタメート／グルタミン酸反応性残基を含む結合パートナー中に存在するグルタミン又はグルタメート／グルタミン酸反応性残基が、アミノ酸配列ＨＸＤＸＸＤＸＸ［Ｑ／Ｅ］（配列番号３０）に存在するか、又はアミノ酸配列［Ｈ／Ｅ］ＸＤＸＸ［Ｄ／Ｓ］ＸＸ［Ｑ／Ｅ］（配列番号５５）に存在するか、又はアミノ酸配列ＨＸＤＸＸ［Ｄ／Ｓ］ＸＸ［Ｑ／Ｅ］（配列番号５６）に存在するか、又はアミノ酸配列ＨＸＤＸＸＳＸＸ［Ｑ／Ｅ］（配列番号５７）に存在するか、又はアミノ酸配列［Ｈ／Ｅ］ＸＤＸＸＸＸＸ［Ｑ／Ｅ］（配列番号５８）に存在する、請求項１〜７、１０及び１１のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
グルタミン又はグルタメート／グルタミン酸反応性アミノ酸残基を含む結合パートナーが、自発的分子間エステル結合形成を促進するヒスチジンアミノ酸残基を含み、ここでヒスチジンが、グルタミン又はグルタメート／グルタミン酸反応性残基の約６、約５．５、約５、約４．５、約４、約３．５、約３、約２．５又は約２オングストローム以内にある、請求項１〜７及び１０〜１２のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
結合パートナーが接触される場合、自発的分子間エステル結合形成を促進するヒスチジンが、トレオニン及びセリン反応性残基の約５、約４．５、約４、約３．５、約３、約２．５又は約２オングストローム以内にある、請求項１２又は１３記載のペプチドタグ及び結合パートナー対。
第一のペプチド結合パートナー及び第二のペプチド結合パートナーを含む請求項１〜７及び１０〜１４のいずれか一項記載のペプチドタグ及び結合パートナー対であって、ここで接触する場合、これらのペプチド結合パートナーは、分子間エステル結合を自発的に形成することが可能であり、ここで
ａ）一方の結合パートナーは、トレオニン及びセリンからなる群から選択された反応性残基を含み、並びに
ｂ）他方の結合パートナーは、グルタミン及びグルタメート／グルタミン酸からなる群から選択される反応性残基を含み、
且つ接触する場合、第一及び第二の結合パートナーは、セリンプロテアーゼ活性部位様構造を形成し、
且つセリンプロテアーゼ活性部位様構造が、タンパク質データバンクの標準直交座標系における以下の相対原子位置：
ｃ）Ｃβ（ＣＢ）Ｔｈｒ／Ｓｅｒ：０、０、０；
ｄ）Ｃδ（ＣＤ）Ｇｌｎ／Ｇｌｕ：０．０２、１．９１、−１．６１：
を有する活性部位中に存在する反応性アミノ酸残基を含み、
且つセリンプロテアーゼ活性部位様構造が、反応性Ｔｈｒ／ＳｅｒＣβ位置に対する以下のＣγ（ＣＧ）位置：
ｅ）Ｈｉｓ：１．３５、３．６７、３．３４
ｆ）Ａｓｐ：−３．４５、−０．８９、−２．１９：
を有するその活性部位に存在するアクセサリーアミノ酸残基を含む、ペプチドタグ及び結合パートナー対。
請求項１〜７及び１０〜１５のいずれか一項記載のペプチドタグ、前述の請求項１〜７及び１０〜１５のいずれか一項記載の結合パートナー、請求項８又は９記載のキメラタンパク質、及び異種アミノ酸配列を含む群から選択される、１以上の成分を含む、多量体タンパク質複合体。
請求項８又は９記載のキメラタンパク質の２種以上を含む、請求項１６記載の多量体タンパク質複合体。
キメラタンパク質の少なくとも１種が、酵素、抗原、構造タンパク質、抗体、サイトカイン、又は受容体を含む、異種アミノ酸配列を含む、請求項１６又は１７記載の多量体タンパク質複合体。
多量体タンパク質複合体が、２種以上のキメラタンパク質を含み、且つここで少なくとも１種のキメラタンパク質が、酵素を含む異種アミノ酸配列を含み、並びに少なくとも１種のキメラタンパク質が、酵素を含む異なる異種アミノ酸配列を含む、請求項１６〜１８のいずれか一項記載の多量体タンパク質複合体。
多量体タンパク質複合体中に存在する１以上のタンパク質成分が、
ａ）配列番号１−４又は２１−３０のいずれか一つのアミノ酸配列の１０個以上の隣接アミノ酸；
ｂ）配列番号３１−５８のいずれか一つのアミノ酸配列の１０個以上の隣接アミノ酸；又は
ｃ）配列番号３１−５８のいずれか一つのアミノ酸配列の１０個以上の隣接アミノ酸；を含み、且つ
本明細書の表３７から表４１の一つにおいて規定された該アミノ酸配列中に存在する２以上のドメイン由来の少なくとも１個のアミノ酸を含む、請求項１６〜１９のいずれか一項記載の多量体タンパク質複合体。