JP2019528281A - 加齢防止製剤 - Google Patents
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Abstract
Description
(a)前記製造方法は、前記容器または格納手段中で前記液体をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記液体の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記液体はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記液体の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記液体のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または格納手段と接触した前記液体の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)前記製造方法は、前記容器または格納手段中で前記液体をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記液体の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記液体はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記液体の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記液体のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または格納手段と接触した前記液体の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)前記製造方法は、前記容器または格納手段中で前記液体をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記液体の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記液体はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記液体の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記液体のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または格納手段と接触した前記液体の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)前記製造方法は、前記容器または入れ物中で前記血液試料をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記血液試料の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記血液試料はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記血液試料の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記血液試料のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または入れ物と接触した前記血液試料の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)前記製造方法は、前記容器または入れ物中で前記血液試料をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記血液試料の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記血液試料はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記血液試料の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記血液試料のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または入れ物と接触した前記血液試料の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)前記製造方法は、前記容器または入れ物中で前記血液試料をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記血液試料の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記血液試料はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記血液試料の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記血液試料のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または入れ物と接触した前記血液試料の細胞成分を除去する工程とをさらに含む。
(a)酸化的損傷、DNA損傷、DNA修復障害、細胞分裂障害、過剰な炎症、免疫過程の病原性偏向(pathogenic polarisation)、もしくは過剰な細胞死によって引き起こされる障害、または
(b)ヌクレオチド除去修復経路のタンパク質をコードする遺伝子中に少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異を欠くマウスと比較して早期加齢表現型を引き起こす、遺伝子改変マウスの障害と似た障害、または
(c)加齢性障害、もしくはその発生率が年齢と共に直線的によりも大きく増加する障害、または
(d)皮膚の機械的パラメーターに影響を及ぼす障害、もしくはコラーゲン損傷および/もしくはエラスチン損傷、老化、テロメア短縮、抗酸化酵素の発現障害もしくは抗酸化酵素の活性障害によって引き起こされる障害
の治療における上記の使用(これは、好ましくは、加齢の治療における、または加齢防止剤としての使用である)のための医薬製剤を提供する。
R−パラメーター
R0:皮膚の力に対する受動的な挙動(硬さ)を表し、最大振幅で見る。
R1:皮膚が元の状態に戻る能力
R2:総弾性、この値が高いほど曲線は弾性がある。
R3:繰り返し吸引した後の最後の吸引曲線の最大振幅。新たな吸引のたびに振幅は増加するので、皮膚の「疲労効果」(疲れ)が見られる。
R4:最初の曲線と比較した最後の最小振幅、新たな吸引のたびに再変形の能力が低下するので、皮膚の「疲労効果」が見られる。
R5:正味の弾性、この値が高いほど皮膚は弾性がある。
R6:曲線の弾性部分上の粘弾性の部分。この値が小さいほどエラスチン繊維の伸張性が高い。
R7:完全曲線と比較した弾性の部分、この値が高いほど皮膚は弾性がある。
R8:皮膚の回復、この値がR0に近いほど、皮膚がその元の状態に戻る能力が優れている。
R9:皮膚の吸引と開放を繰り返した後の皮膚の疲労効果を表す。R9が小さいほど疲労効果は小さい。
F−パラメーター
F0、F1:これらの面積は総面積から差し引かれる。完全に弾性の材料はまったく面積を示さず、この値が0に近いほど材料は弾性がある。
F2:繰り返し吸引した後の疲労効果を示す、上部包絡曲線の上の面積。
F3:包絡曲線内の面積は皮膚の疲れを表す。
F4:上部包絡曲線の下の面積。F4が小さいほど、皮膚は吸引に対してより強く抵抗する(皮膚の硬さ)。
Q−パラメーター
Q0:最大回復面積、皮膚の硬さが増加するにつれて減少する。
Q1:弾性回復、皮膚の弾性が増加するにつれて増加する。
Q2:粘性回復
Q3:粘弾性回復率(全体的な弾性)、皮膚の弾性が増加するにつれて増加する。
実施例1:髄核起源の細胞の増殖
髄核細胞の増殖を様々なサプリメントの存在下で試験した:ヒトコンディショニング血清(「ACS」)、これは本明細書の製造方法に従って調製した、エキソソームを含むものと含まない医薬製剤である;エキソソームを含むものと含まないウシ胎児血清(「FBS」);およびACSとFBSから単離されたエキソソーム(図1を参照のこと)。
抗アポトーシス効果を有するNF−κB経路の刺激は、以下の試料を使用することによってGFP/ルシフェラーゼレポーターシステムを使用することによって試験した:インキュベーション中に生じたエキソソームを単離または濃縮することを含まなかった、本明細書の製造方法に従って調製された医薬製剤(ここで医薬製剤は血清であり、インキュベーション時間は6時間であった(「ACS」))および本明細書の製造方法を行わなかった対照血清を使用する対照(「対照」)。NF−κB経路は、様々な濃度のIL−1βで刺激した。この実験では、軟骨細胞起源の細胞を、ルシフェラーゼ遺伝子を駆動する塩基性CMVプロモーターおよびNF−κBタンパク質に対する先行する4倍結合モチーフ(TRE)からなるDNA構築物で遺伝子改変した。したがって、これらの細胞におけるNF−κB経路の誘導は、定量化することができる増強されたルシフェラーゼ活性(相対発光量(RLU))として見える。
最初の一連の実験では、髄核細胞を、血清の非存在下および血清の形態である本明細書の製造方法に従って調製された医薬製剤の存在下で24ウェルプレートに播種した(「EOT」)。EOT濃度は、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%および1%であった。EOT試料の一部はインキュベーションしなかったが、直ちに処理した(「EOT0」)。EOT試料の他の部分は6時間インキュベーションした(「EOT6」)。
異なる年齢層(20〜45歳、48〜58歳、60〜83歳)のヒト被験者が、単離されたエキソソームを含む本明細書の製造方法に従って調製された医薬製剤の筋肉内または関節内注射を受けた。エキソソームを100,000gで2時間の遠心分離によりコンディショニング血液試料から分離し、ペレットをPBSに再懸濁した。PBSの容量は血清容量の10分の1であった。各被験者に1mlずつ筋肉内投与した。被験者の総数は22人であった。被験者はそれぞれ単回注射を受け、CRPレベルは注射の前後2週間で測定した。
本明細書の製造方法に従って調製された医薬製剤の組成にヒトの年齢が影響を与えるかどうかを調べた。
4人の志願者はそれぞれ、本明細書の製造方法に従って調製された4mlの医薬製剤の4回の筋肉内注射を受け、それは自己コンディショニング血清の形態であった(1週間に1回)。
顔面皮膚への注射により、顔面皮膚および弾性の喪失感がある21人の患者(年齢35〜55歳)を治療した。患者は、本明細書の調整された製造方法に従って調製された医薬製剤を、インキュベーション後に血液試料の細胞成分が血清(「ACS」)の形態で除去されている状態で注射された。インキュベーション時間tは6時間であり、内部表面積Aは41cm2であった。t/Aとして定義されると、fは0.146であった。
差:visit5からベースラインを引いたもの
p値:対応のあるt検定
標準偏差が小さい場合は、たとえわずかな差でも統計的に有意な結果につながる可能性があることに留意した。
医薬製剤は、本明細書の調整された製造方法に従って血清の形態で調製した(「ACS」)。インキュベーション時間tは6時間であり、内部表面積Aは41cm2であった。t/Aとして定義されると、fは0.146であった。
医薬製剤は、本明細書の調整された製造方法に従って血清の形態で調製した(「ACS」)。インキュベーション時間tは6時間であり、内部表面積Aは41cm2であった。t/Aとして定義されると、fは0.146であった。
Claims (24)
- 皮膚への注射による使用のための医薬製剤であって、ここで前記医薬製剤は、血液の細胞成分を含む、生物から採取した液体を準備する工程と、内部表面積を有する容器または格納手段を準備する工程と、前記液体を前記容器または格納手段と接触させる工程とを含む製造方法によって調製可能であり、ここで
(a)前記製造方法は、前記容器または格納手段中で前記液体をインキュベーション時間インキュベーションし、任意に前記インキュベーション後に前記液体の細胞成分を除去する工程をさらに含むか、
(b)前記液体はエキソソームを含み、前記製造方法は、前記エキソソームを濃縮し、任意に前記濃縮後に前記液体の細胞成分を除去するか、もしくは前記エキソソームを単離する工程をさらに含むか、または
(c)前記製造方法は、前記液体のインキュベーションを回避する工程と、前記容器または格納手段と接触した前記液体の細胞成分を除去する工程とをさらに含む、医薬製剤。 - 前記インキュベーション時間と前記内部表面積との間の関係が以下の式:t=f×Aに従い、前記式中、tは前記インキュベーション時間を表し、Aは前記内部表面積を表し、かつfは0.5h/cm2以下である、請求項1の変法(a)に記載の使用のための医薬製剤。
- 前記製造方法が、前記エキソソームを濃縮または単離する前記工程の前に、前記容器または格納手段中で前記液体をインキュベーション時間に亘ってインキュベーションする工程、または前記液体のインキュベーションを回避する工程をさらに含む、請求項1の変法(b)に記載の使用のための医薬製剤。
- 前記液体が血液試料である、請求項1、2または3記載の使用のための医薬製剤。
- (1)全血試料、または(2)細胞が取り除かれた全血試料である、請求項4記載の使用のための医薬製剤。
- 取り除かれた前記細胞が赤血球である、請求項5記載の使用のための医薬製剤。
- 細胞成分を除去する前記工程が、赤血球、血小板または細胞成分の全体を除去する工程である、請求項1から6までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- (a)前記製造方法が、前記液体の容量を減らす工程をさらに含み、かつ/または
(b)医薬製剤が乾燥形態である、
請求項1から7までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。 - 前記注射を3mm未満の深さで行う、請求項1から8までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- 前記皮膚への注射が、真皮または皮下への注射である、請求項1から9までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- 前記使用が1回以上のその後の注射を含み、連続した注射間の時間間隔が1日〜52週間である、請求項1から10までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- (1)加齢の治療における、または(2)加齢防止剤としての、請求項1から11までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- (a)酸化的損傷、DNA損傷、DNA修復障害、細胞分裂障害、過剰な炎症、免疫過程の病原性偏向、もしくは過剰な細胞死によって引き起こされる障害、または
(b)ヌクレオチド除去修復経路のタンパク質をコードする遺伝子中に少なくとも1つの突然変異を有し、前記突然変異を欠くマウスと比較して早期加齢表現型を引き起こす、遺伝子改変マウスの障害と似た障害、または
(c)加齢性障害、もしくはその発生率が年齢と共に直線的によりも大きく増加する障害、または
(d)皮膚の機械的パラメーターに影響を及ぼす障害、もしくはコラーゲン損傷および/もしくはエラスチン損傷、老化、テロメア短縮、抗酸化酵素の発現障害もしくは抗酸化酵素の活性障害によって引き起こされる障害
の治療における、請求項12記載の使用のための医薬製剤。 - (a)前記酸化的損傷が、反応性酸素種による損傷であり、前記DNA損傷によって引き起こされる障害が、UV依存性DNA損傷によって引き起こされる障害であり、前記DNA修復障害によって引き起こされる障害が、不完全なヌクレオチド除去修復によって引き起こされる障害であり、前記細胞分裂障害によって引き起こされる障害が、髄核細胞の分裂障害に関連する障害であり、前記過剰な炎症によって引き起こされる障害が、非整形外科的障害、神経系に関連しない障害および/もしくは眼に関連しない障害であり、前記免疫過程の病原性偏向が1型免疫過程の優位性であり、もしくは前記細胞死がアポトーシスであり、または
(b)前記遺伝子改変マウスにおける前記突然変異がErcc1遺伝子にあり、または
(c)前記発生率が年齢と共に指数関数的に増加し、または
(d)前記コラーゲン損傷および/もしくはエラスチン損傷によって引き起こされる障害が、皮膚のゆるみ、乾燥およびしわから選択される、
請求項13記載の使用のための医薬製剤。 - 前記生物がヒトである、請求項1から14までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- 前記ヒトが少なくとも30歳である、請求項15記載の使用のための医薬製剤。
- (a)IL−6のレベルが2000pg/ml以下であり、
(b)それぞれpg/mlで測定したIL−1RaとIL−6とのレベルの比が3以上であり、
(c)IL−1Raのレベルが200pg/ml以上であり、
(d)それぞれpg/mlで測定したIL−1RaとIL−1とのレベルの比が10以上であり、
(e)医薬製剤にヒアルロン酸は添加されていない、
請求項1から16までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。 - 前記医薬製剤がエキソソームを含む、請求項1から17までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- エキソソームが、前記インキュベーション中に生じたものである、請求項18記載の使用のための医薬製剤。
- 前記製造方法が、前記インキュベーション後に前記エキソソームを濃縮または単離し、任意に前記濃縮または単離されたエキソソームを流体中に取り込む工程をさらに含む、請求項18または19記載の使用のための医薬製剤。
- 血清または血漿を含む、請求項1から20までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
- 前記インキュベーションを、
(a)5分〜22時間のインキュベーション時間、
(b)0℃〜45℃の温度で、かつ/または
(c)添加抗凝固剤の非存在下で
行う、請求項1から21までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。 - 前記容器または格納手段が、
(a)1ml〜1000mlの容量を有し、
(b)液体、好ましくは血液試料と接触するための、ガラス、プラスチック、コランダムもしくは石英もしくはそれらの組合せを含む表面を含み、かつ/または
(c)巨視的粒子、微視的粒子およびナノ粒子からなる群から選択される粒子を含み、前記インキュベーション中、前記液体(好ましくは血液試料)は、前記粒子と接触している、請求項1から22までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。 - 前記使用が、
(a)前記液体(好ましくは血液試料)が採取されたのと同じ生物への注射によるものであり、かつ/または
(b)1つ以上の他の有効な薬剤との併用療法におけるものである、
請求項1から23までのいずれか1項記載の使用のための医薬製剤。
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