KR20240057912A - 청귤 엑소좀을 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 청귤 엑소좀을 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 청귤 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 우수한 보습효과, 피부주름 및 탄력개선효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.
Description
본 발명은 청귤 엑소좀을 함유하는 피부 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로는 청귤 엑소좀을 유효성분으로 함유하여 우수한 보습효과, 피부주름 및 탄력개선효과를 나타내는 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부 노화는 크게 내인성 노화와 광노화로 구분된다. 이러한 피부 노화는 주름살 증가, 탄력성 감소, 피부 처짐 등의 현상이 동반된다. 주름은 특정 방향으로 근육을 오랜 기간 동안 반복으로 움직임으로써 형성되며 그외 연령, 외부환경, 자외선 등에 영향을 받는다. 지속적이고 반복적인 자외선에 노출 시 피부 광노화가 발생하며 이러한 광노화의 주된 특징은 피부 두께 증가, 거칠어짐, 깊은 주름, 피부 색소 침착 등이 있다. 특히 피부 주름은 수분함량과 더불어 진피 매트릭스를 구성하는 콜라겐, 엘라스틴 그리고 히알루론산의 생성 및 분해가 원활하지 못해 매트릭스의 견고성이 떨어져 피부의 탄력이 떨어지고 주름이 생성된다.
광노화는 자외선 조사에 의해 콜라겐 생엉이 감소하는 동시에 기질 금속단백 분해효소인 matrix metalloproteinases(MMPs)의 발현이 증가하여 기질의 주요 구성 성분인 콜라겐과 엘라스틴 등의 분해가 증가되어 주름살을 비롯한 광 노화 현상이 진행되는 것으로 알려져 있다. 또한 Elastase 역시 탄력섬유의 분해과정에서 탄력소를 분해하는 효소로 자외선 조사에 의해 그 활성이 증가하여 광 노화 현상에 관여하게 된다.
Hyaluronan(HA)는 피부 진피에 존재하며 수분을 보유하고 있는 것으로 알려져 있다. 인체 피부에서 HA의 양의 감소는 보습력의 저하나 주름 형성의 원인이 될 수 있다. HA는 hyaluronan synthase(HAS)에 의해 합성되므로 피부 내에서 HAS 발현 감소는 주름 유발과 관련 있음을 알 수 있다.
엑소좀은 생체유래 세포들에서 분비되는 수십 내지 수백 나노미터 크기의 입자로, 원형 이중 지질막 구조물로 이루어져 있으며 근접 세포 또는 생체 내 순환을 통하여 장거리 세포간 신호를 전달하는 신호전달 매개체이다. 엑소좀은 유전물질, 대사물질, 단백질 등과 같은 다양한 생물학적 정보를 함유하고 있으며, 이러한 물질을 타깃 세포로 전달하여 세포기능 조절에 기여한다고 알려져 있다. 동물 유래 줄기세포에서 분리되는 엑소좀은 포함된 인자가 목적 이외의 효과를 나타낼 수 있으며, 엑소좀의 분리에 있어 줄기세포가 포함될 수 있다는 점에서 안정성의 문제가 있을 수 있다. 따라서 식물 유래의 엑소좀을 이용하여 이러한 문제점을 해결할 수 있어 많은 식물세포의 엑소좀에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있으나 그 결과는 아직 미진한 상태이다.
본 발명자들은 감귤(柑橘)을 원료로 하는 화장료의 개발을 위한 연구과정 중에 다양한 감귤의 엑소좀을 제조하여 그 피부개선 활성을 평가하였다. 그 결과 청귤에서 분리된 엑소좀이 보습에 관련된 히알루론산 생성을 증가시키며, 콜라겐을 분해하는 MMP1과 엘라스틴을 분해하는 elastase를 억제시켜 우수한 보습활성, 피부주름 및 탄력 개선활성을 나타내는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 청귤 엑소좀을 함유하여 우수한 보습활성, 피부 주름 및 탄력개선활성을 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에 따르면, 청귤 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
또한, 본 발명에 따르면 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
상기 혼합엑소좀은 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀이 각각 1~3:1~3의 중량비로 혼합되어 이루어진다.
상기 화장료 조성물은 피부 보습용 또는 피부 주름 및 탄력개선용임을 특징으로 한다.
상기 활성성분으로서의 엑소좀은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~30중량% 함유된다.
본 발명에 따른 청귤 엑소좀은 천연원료로서 안전하며, 우수한 보습 및 피부 주름 및 탄력개선활성을 나타내므로 이를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은 항노화용 화장품으로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 청귤 엑소좀의 크기를 나타내는 그래프이다.
도 2는 청귤 엑소좀의 PEN-1 단백질 발현 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 세포독성시험결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 엘라스틴 생성촉진 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 MMP-1 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 HA 생성증가 효과를 나타내는 그래프이다.
도 2는 청귤 엑소좀의 PEN-1 단백질 발현 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 세포독성시험결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 엘라스틴 생성촉진 효과를 나타내는 그래프이다.
도 5는 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 MMP-1 생성 저해 효과를 나타내는 그래프이다.
도 6은 본 발명 실시예에 따른 엑소좀들의 HA 생성증가 효과를 나타내는 그래프이다.
이하, 본 발명을 더욱 구체적으로 설명한다.
감귤(柑橘)은 인도 지역에서 탄생하여, 변종과 교잡 등을 통하여 새로운 품종으로 개량되면서 여러 지역으로 점차 확산되어 세계적으로 100여개의 나라에서 재배되며, 2,000여종 이상의 종류가 알려져 있다. 농촌진흥청의 홈페이지에서 감귤의 플라보노이드 성분에 관한 내용을 보면(www.nongsaro.go.kr), 우리나라에서는 삼국시대부터 제주도에서 재배되었으며, 재래감귤은 문헌에 따르면 대략 20여종으로 추정하고 있으며 현재 남아 있는 재래종은 당유자, 사두감, 지각, 편귤, 유자, 병귤, 동정귤, 감자, 청귤, 빈귤, 진귤, 홍귤 등 12종 정도이다. 이들 재래종의 플라보노이드 성분을 보면, 청귤, 진귤, 병귤, 홍귤에서는 노빌레틴과 탄제레틴의 함량이 높다고 알려져 있다. 그리고 유자와 병귤은 헤스페리딘과 나리루핀의 함량이 높으며, 당유자와 경우는 네오헤스페리딘과 나린진의 함량이 높다. 이처럼 감귤은 품종마다 다양한 플라보노이드와 함량의 차이로 각기 다른 효과를 가진다.
청귤(Citrus nippokoreana)은 덜익어 껍질이 초록색인 감귤, 즉 풋귤과는 차이가 있다. 제주 특별자치도 농업기술원에 따르면 청귤은 감귤의 한 품종으로서 제주의 고유 품종 중의 하나로 다른 감귤과 달리 꽃이 핀 이듬해인 2월까지 껍질이 푸르며, 3~4월이 지나서야 황색으로 익는다. 여러 감귤 품종 중에서도 추위와 질병에 강한 생태적 특성을 지닌 것으로 알려져 있다.
피부는 다양한 외부환경의 자극으로부터 신체를 보호하며 바깥쪽에서부터 표피, 진피, 피하지방의 3층으로 구성되어 있다. 그 중에서 진피층은 콜라겐 섬유와 엘라스틴 섬유가 그물 모양으로 교차하고, 그 틈새에 수분 유지력이 강한 글라이코사미노글리칸(히알루론산 등)이 채워져 있다. 이러한 피부가 자외선에 장기 노출되면 피부 주름이나 처짐 등이 발생한다. 진피에서의 글라이코사미노글리칸의 이상 축적이나 탄성섬유인 엘라스틴의 변성, 콜라겐의 정상적인 형성 방해에 따른 비정상적인 콜라겐 가교로 인해 진피의 경화와 그에 따른 주름 고정화로 깊은 주름이 생성된다.
본 발명은 활성성분으로서의 청귤 엑소좀이 진피의 구성성분인 글라이코사미노글리칸(히알루론산)과 엘라스틴 생성을 촉진시키고, 피부 주름에 관여하는 MMP1과 elastase를 억제시킴으로써 우수한 보습활성, 피부 주름 및 탄력개선활성을 나타낸다는 것을 기술적 특징으로 한다.
본 발명에 따르면, 청귤 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
본 발명에서, "청귤 엑소좀"은 청귤 유래의 지질 이중충의 소낭을 말한다. 상기 엑소좀은 청귤 유래의 고유의 단백질 및 핵산 등을 포함하고 있으며, 50~200 nm 크기의 생체 나노입자로, 내부에 DNA, RNA, 펩타이드 등으로 이루어진 정보가 담겨있다. 엑소좀은 내부의 물질을 체액 내 분해 효소 등으로부터 안전하게 운반하여 인접 세포 또는 원거리 세포에 정보 전달을 하여 세포 주변의 미세 환경에 영향을 미친다(Sies H, Belousov VV, Chandel NS, Davies MJ, Jones DP, Mann GE, Murphy MP, Yamamoto M, Winterbourn C. RNA delivery by extracellular vesicles in mammalian cells and its applications. Nat Rev Mol Cell Biol 21, 585??606 (2020); Sepideh N., Jafar R., Naime Majidi Z., Reza J. Mesenchymal stem cell derived-exosomes: a modern approach in translational medicine Transl Med. 18(1), 449-469 (2020)).
상기 청귤 엑소좀은 엑소좀 제조에 사용되는 통상적인 방법에 의하여 제조될 수 있다. 본 발명의 일 구체예에 따르면 상기 청귤 엑소좀은 원심분리법에 의하여 제조될 수 있다.
청귤에서 엑소좀을 분리하기 위하여 청귤의 껍질을 벗긴 후 나온 과육을 저속 스크류를 이용하여 착즙한다. 회수한 착즙을 1000 xg로, 10분간 원심분리하여 부유물을 제거하고 침전물을 제외한 상층액을 회수한다. 회수한 내용물을 다시 20,000 xg로, 20분간 원심분리하여 상등액을 회수하고, 마지막으로 120,000 xg, 90분 동안 초고속 원심분리한다. 다음으로, 상등액을 제거하고 엑소좀 펠렛을 PBS로 현탁시킨 후 필터로 여과하여 엑소좀을 분리 제조한다.
이와 같이 제조되는 청귤 엑소좀은 우수한 엘라스타제 활성 저해, 엘라스틴 생성촉진, MMP-1 합성 저해 및 히알루론산 생성 촉진활성을 나타내었다.
또한, 본 발명에 따르면 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물이 제공된다.
한라봉(漢拏峰)은 쌍떡잎식물 무환자나무목 운향과 만다린계의 귤이다. 청견과 폰캉(중야 3호)의 교잡종으로, 우리나라에는 1990년을 전후해 도입되었다. 일본의 품종명은 부지화(不知火)이고, 한라봉은 이 품종이 제주도에서 재배되면서 새롭게 명명된 것이다.
상기 청귤 엑소좀과 함께 한라봉 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 경우에 더욱 우수한 보습 및 피부주름 및 탄력 개선활성을 나타내었다.
이때, 상기 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀은 각각 1~3:1~3의 중량비율로 혼합되어 함유될 수 있다.
상기 활성성분으로서의 엑소좀은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~30중량% 함유된다. 상기 화장료 조성물은 피부 보습용 또는 피부 주름 및 탄력개선용임을 특징으로 한다.
상기 화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 가능하며 예를 들면, 스킨로션, 스킨토너, 팩, 영양크림, 수분 크림, 에센스, 바디크림, 바디로션, 바디오일, 클렌징폼, 클렌징로션, 비누, 패치, 파운데이션, 립스틱, 메이크업 베이스, 립스틱 등으로 제조될 수 있다.
[실시예]
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예, 시험예 등의 구체적인 예를 들어 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예 또는 시험예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 아래에서 상술하는 예들에 한정되는 것으로 해석되어지지 않아야 한다. 본 발명에 따른 실시예 및 시험예들은 당 업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해서 제공 되어지는 것에 불과하므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
실시예 1: 청귤 엑소좀의 제조
청귤에서 엑소좀을 분리하기 위하여 청귤의 껍질을 벗긴 후 나온 과육을 저속 스크류를 이용하여 착즙하였다. 회수한 착즙을 1000 xg, 10분간 원심분리하여 부유물을 제거하고 침전물을 제외한 상층액을 회수하였다. 그리고 회수한 내용물로 20,000 xg, 20분간 원심분리하고 다시 상등액을 회수하고 마지막으로 120,000 xg, 90분 동안 초고속 원심분리하였다. 다음으로, 상등액을 제거하고 엑소좀 펠렛을 PBS로 현탁시킨 후 0.22 ㎛ 필터로 필터 후 실험에 이용하였다.
비교예 1: 밀감 엑소좀의 제조
청귤 대신 온주밀감을 사용한 것을 제외하고는, 상시 실시예 1과 동일한 방법으로 밀감 엑소좀을 제조하였다.
비교예 2: 레몬 엑소좀의 제조
청귤 대신 레몬을 사용한 것을 제외하고는, 상시 실시예 1과 동일한 방법으로 레몬 엑소좀을 제조하였다.
비교예 3: 오렌지 엑소좀의 제조
청귤 대신 오렌지를 사용한 것을 제외하고는, 상시 실시예 1과 동일한 방법으로 오렌지 엑소좀을 제조하였다.
비교예 4: 한라봉 엑소좀의 제조
청귤 대신 한라봉을 사용한 것을 제외하고는, 상시 실시예 1과 동일한 방법으로 한라봉 엑소좀을 제조하였다.
실시예 2, 비교예 5~7: 혼합 엑소좀의 제조
하기 표 1에 나타낸 바와 같이, 청귤과 밀감, 레몬, 오렌지 또는 한라봉과의 혼합 과육을 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1에서 제조하는 방법과 동일하게 감귤 혼합 엑소좀을 제조하였다.
| 혼합비(중량%) | ||||
| 비교예 5 | 비교예 6 | 비교예 7 | 실시예 2 | |
| 밀감 | 50 | - | - | - |
| 레몬 | - | 50 | - | - |
| 오렌지 | - | - | 50 | - |
| 청귤 | 50 | 50 | 50 | 50 |
| 한라봉 | - | - | - | 50 |
시험예 1: 엑소좀의 특성 확인
엑소좀의 크기 측정
청귤 엑소좀의 크기를 확인하기 위하여 나노 입자 추적 분석기(Nanosight, NS300, Malvern, Nederland)를 이용하여 엑소좀의 크기를 측정하였으며, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 확인되는바와 같이 실시예 1에서 분리 제조된 엑소좀은 50~200nm 크기를 나타내었다.
PEN-1 단백질 발현 확인
실시예 1에서 제조된 청귤 엑소좀을 10% SDS 폴리아크릴마이드 젤을 이용하여 단백질을 분리하였다. 상기 분리한 단백질은 니트로셀룰로오스막(GE Health care)으로 옮긴 후, 1시간 동안 5% 탈지분유에 반응시켜 항체의 비특이적 결합을 방지하였다. PEN-1(Cusabio) 1차 항체를 1:1,000의 비율로 희석하여 4℃에서 12시간 동안 니트로셀룰로오스막에 결합시켰다. 이후, 상온에서 HRP-tagged anti-rabbit 항체와 1시간 동안 반응시켰다. ECL kit(Amersham, England)를 사용하여 단백질 밴드를 관찰하였다.
식물 세포막에서 소낭의 exocytosis에 관여하는 바이오 마커인 PEN-1 발현 여부를 웨스턴블랏을 이용하여 확인하였다. 도 2에 나타난 바와 같이 청귤 엑소좀에서는 PEN-1 단백질의 발현을 확인하였다.
시험예 2: 엘라스타아제 활성 저해 효과
상기 실시예 1 및 비교예 1~4에서 제조한 시료의 피부 주름억제 및 개선 효과를 검정하고자 elastase 활성 억제실험을 실시하였다.
Elastin을 분해하는 효소인 elastase의 활성을 측정하는 방법으로 elastase 기질인 N-succinyl-(Ala)3-ρ-nitroaniline을 이용하여 ρ-nitro-aniline이 분해되면서 생기는 색의 변화를 405 nm의 파장에서 흡광도를 측정함으로써 elastase 활성을 측정하는 방법이다.
완충액은 pH 8.0, 0.267M Trizma-HCl(Sigma), 기질액은 8.8 mM N-succinyl-(Ala)3-ρ-nitroaniline(Sigma), 효소액은 돼지췌장 elastase를 10 μg/mL (Sigma)의 농도로 사용하였다. 완충액 60 μL, 효소액 20 μL와 상기 실시예 1 과 비교예 1~4로부터 얻은 각각의 시료를 농도별로 정제수에 녹여 100 μL로 한 시료액을 섞은 후, 37℃ incubator에서 10분간 반응시킨다. 이 후 기질액 20 μL을 넣어 37℃ incubator에서 15분간 반응시켜 ρ-nitro-aniline의 생성량을 microplate reader(Synergy, BioTek, USA)로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. 한편, 상기 elastase 활성도를 측정하기 위한 대조군은 시료용액 대신 정제수를 넣어 같은 방법으로 측정하였으며, 효소액 대신 정제수를 넣어 각각에 대한 색 보정값을 얻은 경우를 설정하였다. 엘라스타아제 저해율을 수치로 계산하여 하기 표 2에 나타내었다.
| 시료 | 농도 | Inhibition of Elsastase (%) |
| 실시예 1 | 100 ㎍/mL | 40 |
| 비교예 1 | 100 ㎍/mL | 11 |
| 비교예 2 | 100 ㎍/mL | 23 |
| 비교예 3 | 100 ㎍/mL | 9 |
| 비교예 4 | 100 ㎍/mL | 30 |
상기 표 2에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1의 청귤 엑소좀에서 가장 우수한 엘라스타아제 저해 활성을 나타내었으며, 실시예 1, 비교예 4, 비교예 2, 비교예 1 그리고 비교예 3 순으로 엘라스타아제 활성을 억제시키는 것으로 나타났다.
시험예 3: 세포독성 시험
인간 피부 각질세포 HaCaT를 96 well plate에 배양하였다. 실시예 1~2와 비교예 1~7을 24시간 처리 후, 10% WST 용액이 포함된 배지로 교환한 후에 37℃에서 4 시간 동안 반응시켰다. ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 세포에 대한 독성은 각각의 대조구의 평균 흡광도 값에 대한 백분율로 나타냈다. 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 확인되는 바와 같이 비교예 2는 50 ㎍/mL에서부터 생존율이 80% 이하로 나타났으며, 실시예 1과 비교예 1, 3, 4는 200 ㎍/mL까지 피부세포에서 독성이 없었다. 감귤 혼합엑소좀에 있어서도 비교예 6을 제외하고는 독성이 나타나지 않았다.
시험예 4: 엘라스틴 합성시험
정상 사람 섬유아세포를 2×105 세포/웰의 농도로 접종시키고 12 well plate에 seeding 하였다. 24시간 후에 serum-free DMEM 교체하고 시료 엑소좀을 처리해주었다. 엘라스틴의 양은 엘라스틴 측정 키트(FastinTM elastin assay kit, Biocolor, UK)를 이용하여 측정하였다. 엘라스틴의 양은 단백질량으로 보정하였다. 양성 대조군으로 ascorbic acid (AA)를 사용하였다. 그 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에 의하면, 실시예 1과 2는 농도 의존적으로 우수한 엘라스틴 합성 증가 효과를 보이고 있어, 이를 통한 피부 탄력 개선 효과가 있음을 확인할 수 있다. 실시예 1과 실시예 2의 200 ㎍/ml과 양성대조군 ascorbic acid(AA) 250 ㎍/ml에서 엘라스틴 생성은 각각 289%, 300%와 135%로 양성대조군보다 우수한 효과를 나타내었다. 특히 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀인 실시예 2의 경우, 그 상승효과에 의하여 더 우수한 탄력개선효과를 나타냄을 알 수 있었다.
시험예 5: 콜라게나아제(MMP-1) 합성 저해 효과
상기 실시예 1, 2 및 비교예 5, 7에서 제조한 엑소좀을 UV-B 조사한 섬유아세포에 처리하여 collagenase(MMP-1)의 발현 저해 효과를 ELISA 방법으로 실시하였다.
정상 사람 섬유아세포를 24-웰 마이크로플레이트(24-well microplate)에 1×105 세포/웰의 밀도로 접종시키고 37℃, 5% 농도의 CO2 배양기에서 24시간 배양하였다. 자외선 챔버 CL-1000M UV Crosslinker(UVP, USA)를 이용하여 배양한 섬유아세포에 UV-B 100 mJ/cm2를 조사한 후 시료물질을 농도별로 serum이 함유되지 않은 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, HyClone Lab., USA) 배지에서 24시간 동안 배양하였다. collagenase(MMP-1) 생성 저해 효과는 collagenase(MMP-1) 측정 키트(Matrix Metalloproteinase-1, MMP-1, Human, Biotrak, ELISA System, GE Healthcare, UK)를 이용하여 측정하였다. 측정결과는 도 5에 나타내었다. 이때 시료를 처리하지 않은 세포 배양액의 흡광도를 대조군 100%로 하였으며, 실험은 각각 3회씩 수행하여 평균값±표준편차로 나타내었다. 양성 대조군으로 adenosine(AN)를 사용하였다.
도 5에서 확인되는 바와 같이, 실시예 1과 2의 시료를 적용했을 때, 농도의존적으로 MMP-1의 생성이 감소되는 것을 확인하였다. 또한 실시예 1과 2, 대조군인adenosine(AN)은 200 ㎍/mL에서 각각 47%, 35%, 30% 억제 효과를 나타내었다. 실시예 1과 2는 200 ㎍/mL에서는 양성대조군 보다 효과가 우수하게 나타났다.
시험예 6: HA-ELISA(HA enzyme-linked immunosorbent assay) 분석
인간 피부 각질세포 HaCaT를 5×105 cells/㎖ 농도로 6 well plate에 seeding 하였다. 24시간 후에 serum-free DMEM으로 2번 washing 해준 후에 serum-free DMEM 교체하고 시료 엑소좀을 처리해주었다. 24시간 후에 media를 취하여 15,000 xg에서 15분간 원심분리하고 상층액을 취하여 ELISA를 수행하였다. ELISA는 HA-ELISA kit(echelon, USA)를 이용하였으며 제조사에서 제공한 방법에 의해 진행하여 HA의 생성량을 측정하였다. 양성 대조군으로 retinoic acid(RA)를 사용하였다. 그 결과를 도 6에 나타내었다.
도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 200 ㎍/mL에서는 7%의 HA의 생성이 증가 되었으며, 실시예 2와 비교예 5와 7에서는 변화가 없었다.
제형예 1~2: 크림의 제조
하기 표 3의 조성으로 상기 실시예에 따라서 제조된 청귤 엑소좀, 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀을 포함하는 크림을 통상의 방법으로 제조하였다.
| 성 분(중량%) | 제형예 1 | 제형예 2 |
| 청귤 엑소좀(실시예 1) | 3 | - |
| 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀(실시예 2) | - | 3 |
| 글리세린 | 10 | 10 |
| 부틸렌글라이콜 | 5 | 5 |
| 글리세릴올리에이트 | 1.8 | 1.8 |
| 세테아릴올리베이트 | 0.5 | 0.5 |
| 솔비탄올리베이트 | 0.5 | 0.5 |
| 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 5.0 | 5.0 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 1.0 | 1.0 |
| 비즈왁스 | 0.5 | 0.5 |
| 스쿠알란 | 0.2 | 0.2 |
| 1,2-헥산다이올 | 0.2 | 0.2 |
| 콜레스테릴/베헤닐/옥틸도데실라우로일글루타메이트 | 1.0 | 1.0 |
| 디메치콘 | 0.5 | 0.5 |
| 사이클로펜타실론삭/사이클로헥사실록산 | 2.0 | 2.0 |
| 세티아릴알코올 | 1.0 | 1.0 |
| 미네랄 오일 | 2.5 | 2.5 |
| 디소듐이디티에이 | 0.02 | 0.02 |
| 비에이치티 | 0.05 | 0.05 |
| 토코페릴아세테이트 | 0.3 | 0.3 |
| 판테놀 | 0.2 | 0.2 |
| 에칠헥실메톡시신나메이트 | 0.2 | 0.2 |
| 향 | 0.01 | 0.01 |
| 정제수 | 잔량 | 잔량 |
Claims (6)
- 청귤 엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
- 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀의 혼합엑소좀을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 혼합엑소좀은 청귤 엑소좀과 한라봉 엑소좀이 각각 1~3:1~3의 중량비로 혼합되어 이루어지는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 유효성분으로서의 상기 엑소좀은 조성물 전체 중량에 대하여 0.001~30중량% 함유되는 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 보습용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 피부 주름 및 탄력개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
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