JP2019501156A - 便細菌叢試料の凍結乾燥方法 - Google Patents
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Abstract
Description
A) ドナー被験者からの便細菌叢の試料を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、及び、
B) A)で得られた混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いで凍結乾燥させる工程。
A1) 凍結融解によって形成されるイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を任意で調製する工程、
A2) 少なくとも1つのドナー被験者からの便細菌叢の試料とイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドを任意で含む生理食塩水緩衝液を、嫌気条件下で混合する工程、
A3) A2)で得られた混合物の沈着物を、A1)で得られた勾配下で任意で形成する工程、
A4) A2)又はA3)で得られた混合物を、嫌気条件下で低加速度にて連続的に遠心分離する、又は超遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された細菌リング又は上清を、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された細菌リング又は上清を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、及び
B) A6)で得られた混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いで凍結乾燥させる工程。
A) ドナー被験者からの便細菌叢の試料を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、
B) A)で得られた混合物を-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いで凍結乾燥させる工程。
- ドナー被験者からの便細菌叢の試料を受け入れることが出来る内部空間を含むボディ、及びボディの内部空間へのアクセスのための開口の範囲を定めるネック、を含むコンテナ、及び
- ネックのアクセス開口部を密閉してボディの内部空間を閉鎖するように、コンテナのネックに取り外し可能且つ、エアータイト様式で取り付けることが出来るカバー、
ここで、コンテナのボディが、フレキシブルパウチで構成され、コンテナ及びカバーの少なくとも1つが、コンテナのボディの内部空間に収容されたガスの少なくとも一部を排気することが可能な排気部材を備える。
- ドナー被験者からの便細菌叢の試料を受け入れることが出来る内部空間を含むボディ、及びボディの内部空間へのアクセスのための開口の範囲を定めるネック、を含むコンテナ、及び
- ネックのアクセス開口部を密閉してボディの内部空間を閉鎖するように、コンテナのネックに取り外し可能且つ、エアータイト様式で取り付けることが出来るカバー、
ここで、コンテナのボディの内部空間が、任意で酸素を中和する化学装置を含む。
- 二糖〜五糖、すなわち二糖類、三糖類、四糖類及び五糖類等の凍結保護物質; 又はグリセロール、マンニトール、ソルビトール、プロピレングリコール又はエチレングリコール等のポリオール、
- 充填剤、例えばデンプンの部分加水分解物、特に、大量のマルトデキストリンを含む、コムギ若しくはトウモロコシ、又はフェクラ(fecula)の部分加水分解物、又は
- 及びそれらの混合物。
- 塩化ナトリウム、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム、グルコン酸ナトリウム及び酢酸ナトリウムから選択される少なくとも1つの塩、及び
- 任意で、好ましくは、L-アスコルビン酸ナトリウム、トコフェロール、L-システイン塩酸塩一水和物及びそれらの混合物から選択される少なくとも1つの抗酸化剤を含む。
B1) A)で得られた混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃、好ましくは約-80℃の温度で凍結すること、
B2) 大気圧下、-50℃〜-30℃の温度に予め冷却されたフリーズドライ凍結乾燥機(freeze-drier lyophilizer)に、B1)で得られた凍結混合物を装填すること、次いで
B3) 圧力を80〜200μバール(好ましくは100〜150μバール)の値に低下させること、次いで棚の温度を0.2〜0.5℃/分の加熱速度を適用しながら、-20℃〜+25℃(好ましくは-10℃)まで上昇させることを含む、B2)に装填された混合物の一次乾燥の少なくとも1つの工程。圧力及び棚の温度の値は、昇華中の産物の温度が崩壊温度以下に維持されるように選択される。パラメータは、混合物から氷が完全になくなるまで一定に保たれ、次いで
B4) 圧力を80μバール未満又は等しい値、好ましくは装置の取り得る最低値まで低下させること、及び棚の温度を+25℃〜+35℃、優先的には25℃、0.1℃〜0.3℃/分の加熱温度で、上昇させること、及びそれを8〜15時間維持すること、を含むB3)で得られた混合物の二次乾燥工程。
A1) 任意で、凍結融解により形成されたイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を調製する工程、
A2) 少なくとも1つのドナー被験者からの便細菌叢の試料とイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドを任意で含む生理食塩水緩衝液を、嫌気条件下で混合する工程、
A3) 任意でA2)で得られた混合物の沈着物を、A1)で得られた勾配下で形成する工程、
A4) A2)又はA3)で得られた混合物を嫌気条件下で低加速度にて連続的に遠心分離又は超遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された細菌リング又は上清を、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された細菌リング又は上清を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程。
好ましくは、第1の代替案によれば、本発明による方法は、以下の工程を含む:
A1) 凍結融解により形成されたイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を調製する工程、
A2) 少なくとも1つのドナー被験者からの便細菌叢の試料とイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドを任意で含む生理食塩水緩衝液(好ましくは、前記生理食塩緩衝液は、塩化ナトリウムを含むHEPESの水溶液)を、嫌気条件下で混合する工程、
A3) 任意でA2)で得られた混合物の沈着物を、A1)で得られた勾配下で形成する工程、
A4) A3)で得られた混合物を、40〜50分の時間、13000〜16000×gの加速度、2℃〜6℃の温度で超遠心分離する工程、
A5)工程A4)を完了することで形成された細菌リングを、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された細菌リングを、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、及び
B) A6)で得られた混合物を-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いでそれを凍結乾燥させる工程。
A1. a) -70℃〜-100℃の温度で少なくとも12時間、イオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの溶液を、凍結する工程。好ましくは、前記溶液は脱気される。オジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの脱気された溶液とは、溶存空気の濃度が、例えば、真空下等で減少されたイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの溶液を意味する。これにより、精製方法の間で細菌の生存に有利な微小-嫌気状態を作り出すことが可能になる; 次いで
A1. b) 周囲温度で2〜4時間、A1. a)で得られた溶液を解凍し、イオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を得る工程。
好ましくは、第2の代替案に従い、調製方法は、以下の工程を含む:
A2) ドナー被験者からの便細菌叢の少なくとも1つの試料を、生理食塩水緩衝液と嫌気条件下で混合する工程、
A4) A2)で得られた混合物を、嫌気条件下で低速で連続的に遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された上清を、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された上清を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、及び
B) A6)で得られた混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いでそれを凍結乾燥させる。
A5.1) 工程A4)を完了することで形成された上清を、回収し、
A5.2) A4)で得られたペレットを、生理食塩水緩衝液(工程A2)のものと同じ)と混合し、次いで、工程A4)に記載されているように低下速度で連続的な遠心分離に供し、及びこのように得られた上清を、画分A5.1)の上清と混合する。このペレットを洗浄する操作は、ペレットが細菌から排出されるまで、随意で繰り返すことが出来る。実際問題並びに時間及び抽出容量の経済性のために、ペレットの一回の洗浄が典型的に実施される。
a) 生理食塩水緩衝液に懸濁されたA5)で得られた細菌リング又は上清を、3000〜4000×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
b) 工程a)を完了することで得られたペレットを回収し、及び生理食塩水緩衝液に再懸濁し、次いで200〜500×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
c) 工程b)を完了することで得られた上清を回収し、及び生理食塩水緩衝液に再懸濁し、次いで3000〜4000×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
d) 工程c)を完了することで得られたペレットを回収する工程、及び
e) d)において回収されたペレットを、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程。
凍結融解により自動的に形成されたOptiPrepの連続勾配内の浮力による全細菌画分の分離。OptiPrepにおける大量の便の希釈液は、凍結融解により予め形成されたOpriPrepの連続勾配下に置かれる。遠心分離の間、細菌は浮遊密度(1.110-1.190)まで勾配内で上昇するが、食物及び内因性デブリは勾配の底に沈む。全ての方法は、嫌気条件下である。
Hepes-NaCl緩衝液
− 脱気したOptiPrep-20溶液16mLをピペットで吸引し、溶液の通気を避けながらチューブに移す
− -80℃で一晩チューブを凍結させる
− 使用前に周囲温度で2〜3時間静かに、動かさずにチューブを解凍する; 1.03〜1.22の連続密度勾配が自動的に形成される。
− 便の試料を、嫌気条件チャンバーに入れる
− 秤の上に、二重の濾過滅菌スワードバッグを置き、所望の便の重量を測定する(1勾配については最大3.5g、おそらくそれ以下であり; この場合、10mM Hepes-9g/L NaCl緩衝液で3.5gとする)
− スワードバッグのフィルターに便懸濁用希釈液24mLを加える、
− 混合物をホモジナイズする
− 濾過しホモジナイズした便懸濁液を50mLのファルコンタイプチューブに移す
− このチューブから、便希釈液を入れた針を備えた20mLシリンジを満たす
− A1)で得られた凍結融解により予め形成された勾配の底部に、A2)で得られたシリンジの針を突き刺す
− 予め形成された勾配の下で20mLの便希釈液を静かにロードする
− 他の勾配に関し再開する
− 全てのチューブを秤量し、10mMのHepes-9g/LのNaCl緩衝液で正確に同じ重量になるようにペアでチューブを調製する
− 振動ローター用の冷やした遠心分離バケットにチューブを注意深く挿入する
− 4℃で45分間、14,567×gで遠心分離する
− 遠心バケットを開かずに嫌気条件チャンバーに挿入する
− バケットを開く
− ピペットを用いて、上相を除去する
− 中間の細胞相をピペットで分取し、2つの50mLファルコンチューブに分注する
− 2つのファルコンチューブの目盛50まで洗浄緩衝液(10mM Hepes-9g/L NaCl)を加える
− 同様の方法で全ての勾配の細菌相を除去する
− 振動ローターで10分間4000×g、22℃で遠心分離する
− 吸引により上清を除去する
− 洗浄緩衝液をファルコンチューブ25mLの目盛まで加える
− ピペットを用いて慎重に細菌を懸濁し、50mLにする
− 振動ローターで5分間、300×g、22℃で遠心分離し、残ったデブリを除去する
− 上清(残渣を有しない細菌を含む)を、2つの新しい50mLファルコンにピペットで移す; デブリのペレットを捨てる
− 振動ローターで10分間、3500×g、22℃で遠心分離を行う
− 上清を除去する
得られた残渣のない細菌ペレットを、選択された賦形剤中に再懸濁することが出来る。
低下速度で連続的に遠心分離することにより、全細菌画分を分離する。
Hepes-NaCl緩衝液
− 便の試料を、嫌気条件チャンバーに入れる
− 所望の重量の便を、スワードバッグのフィルターに移す
− 14gの便(すなわち1:25希釈)に対して10mMのHepes-9g/LのNaClを含むQS 350gを調製し、ホモジナイズする(工程b))
− 50mLの濾過しホモジナイズした便懸濁液を、6つの50mLファルコンタイプチューブに移す
− 振動ローターで10分間300×g、22℃の遠心分離を行い、デブリを除去する(工程d))
− 上清(細菌を含む)を、12個の新しい50mLチューブ(25mLまで/チューブ)に分注する
− 6つのペレットを50mLの10mM Hepes-9g/L NaClに再懸濁し、振動ローターで10分間300×g、22℃で遠心分離を行う(工程d))
− 6つの新しい上清を、予め第1の上清が入っている待機中の12本のチューブに分注する。10mM Hepes-9g/L NaClで12本のチューブについてQS50mLにする
− 細菌をペレット化するために、12本のチューブを振動ローター中で3500×g、22℃で10分間遠心分離を行う
− ピペットを用い、上清を慎重に除去する
最後に、得られた残渣のない細菌ペレットを、選択された賦形剤に再懸濁する。
− NaCl: 9g/L
− 9g/L NaCl中、マルトデキストリン : トレハロース、15/5又は5/15
− イオジキサノール:40mM HEPES-9g/L NaCl緩衝液で3倍希釈した60mMの市販水溶液
次いで、それらを-80℃〜-100℃で凍結させた
実施例3で得られた便細菌叢の凍結乾燥物中に存在する細菌の生存率を、以下のプロトコルに従って測定した:
− 染色しようとする試料において約106細菌/mLの最終希釈を達成するために嫌気条件雰囲気下での連続的な10倍希釈; この操作は、選択された賦形剤中に残渣を含まない細菌ペレットを再懸濁することを直ちに連続して行わなければならない; 最後の希釈液の染色も直ちに行わなければならない、
− 賦形剤が栄養基質を含む場合、生存している個体群が急速に増殖するため、再懸濁と染色との間に30分未満の経過が必要である: 周囲温度で4時間待ち、嫌気条件下及び単一の栄養基質の存在下において個体群は、半対数増加し、細菌の割合は10%増加する、
− 製造元の指示に従って、LIVE/DEAD(登録商標)BacLight(商標)Bacterial Viability Kitを使用して細菌を染色する、
− フローサイトメトリーによる生菌及び死菌の定量: 染色されたサンプル(常に光から隠れている)を室温又は砕いた氷上で待機させるか否かにかかわらず、染色と定量との間の時間は、20分を超えてはならない、
結果を、下記の表に示す。
− NaCl: 9g/L
− 9g/L NaCl中、マルトデキストリン : トレハロース、15/5又は5/15
次いで、懸濁液を、-80℃又は-100℃で凍結した。
Claims (15)
- ドナー被験者からの便細菌叢の凍結乾燥物を調製する方法であって、以下の工程、
A) ドナー被験者からの便細菌叢の試料を、ポリオール、二糖〜五糖、マルトデキストリン及びそれらの混合物から選択される希釈剤と混合する工程、及び
B) A)で得られた前記混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いで凍結乾燥させる工程、
を含む方法。 - 前記希釈剤が、(i) ポリオール、二糖〜五糖、又はそれらの混合物から少なくとも選択される凍結保護物質、及び(ii)マルトデキストリンを含む生理食塩水溶液であることによって特徴づけられる、請求項1に記載の凍結乾燥物を調製する方法。
- 前記希釈剤が、凍結保護物質として、少なくともガラクトース-ラクトース又はトレハロースを含む生理食塩水溶液であることによって特徴づけられる、請求項1又は2に記載の凍結乾燥物を調製する方法。
- 前記希釈剤が、少なくともマルトデキストリンの混合物を、好ましくは、前記溶液の全容量に対して4〜20%の量で含む生理食塩水溶液であることによって特徴づけられる、請求項1〜3の何れか1項に記載の凍結乾燥物を調製する方法。
- 前記生理食塩水溶液中の凍結保護物質の全量が、前記溶液の全容量に対して3〜30重量%、好ましくは、前記溶液の全容量に対して4〜20重量%であることによって特徴づけられる、請求項1〜4の何れか1項に記載の凍結乾燥物を調製する方法。
- 工程A)が、以下の工程、
A1) 凍結融解によって形成されるイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を任意で調製する工程、
A2) 少なくとも1つのドナー被験者からの便細菌叢の試料とイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドを任意で含む生理食塩水緩衝液を、嫌気条件下で混合する工程、
A3) A2)で得られた前記混合物の沈着物を、A1)で得られた前記勾配下で任意で形成する工程、
A4) A2)又はA3)で得られた前記混合物を、嫌気条件下で低加速度にて連続的に遠心分離又は超遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された前記細菌リング又は前記上清を、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された前記細菌リング又は前記上清を、前記希釈剤と混合する工程、
を含むことによって特徴づけられる、請求項1〜5の何れか1項に記載の方法。 - 工程A6)として、嫌気条件下で、以下の工程;
a)生理食塩水緩衝液に懸濁されたA5)で得られた前記細菌リング又は前記上清を、3000〜4000×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
b) 工程a)を完了することで得られた前記ペレットを回収し、生理食塩水緩衝液に再懸濁し、次いで200〜500×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
c) 工程b)を完了することで得られた前記上清を回収し、生理食塩水緩衝液に再懸濁し、次いで3000〜4000×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で遠心分離する工程、
d) 工程c)を完了することで得られた前記ペレットを回収する工程、及び
e) d)において回収された前記ペレットを、前記希釈剤と混合する工程、
を含むことによって特徴づけられる、請求項1〜6の何れか1項に記載の方法。 - 工程B)の前記凍結乾燥が、以下の条件:
B1) A)で得られた前記混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結すること、
B2) 大気圧下、-50℃〜-30℃の温度のフリーズドライ凍結乾燥機(freeze-drier lyophilizer)に、B1)で得られた前記凍結混合物を装填すること、次いで
B3) 前記圧力を80〜200μバールの値に低下させること、次いで前記棚の温度を0.2〜0.5℃/分の加熱速度を適用しながら、-20℃〜+25℃まで上昇させることを含む、B2)に装填された前記混合物の一次乾燥の少なくとも1つの工程、次いで
B4) 前記圧力を、80μバール以下の値、及び前記棚の温度を+25℃〜+35℃に0.1℃〜0.3℃/分の加熱温度で上昇させること、及びそれを8〜15時間維持すること、を含むB3)で得られた前記混合物の二次乾燥工程、
で実施されることによって特徴づけられる、請求項1〜7の何れか1項に記載の方法。 - 前記生理食塩水緩衝液が、好ましくは、7〜15g/lの濃度で塩化ナトリウムを含むHEPESの水溶液であることによって特徴づけられる、請求項6〜8の何れか1項に記載の方法。
- A1) 凍結融解によって形成されるイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を、調製する工程、
A2) 少なくとも1つのドナー被験者からの便細菌叢の試料とイオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドを含む水溶液に加えられた生理食塩水緩衝液を、嫌気条件下で混合する工程、好ましくは、前記生理食塩水緩衝液は、塩化ナトリウムを含むHEPESの水溶液である、
A3) A2)で得られた前記混合物の沈着物を、A1)で得られた前記勾配下で形成する工程、
A4) A3)で得られた前記混合物を、40〜50分間の時間、2℃〜6℃の温度、13000〜16000×gの速度で超遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された前記細菌リングを、嫌気条件下で回収する工程、
A6) A5)で回収された前記細菌リングを、前記希釈剤と混合する工程、及び
B) A6)で得られた前記混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いで凍結乾燥させる工程、
の工程を含むことによって特徴づけられる、請求項1〜9の何れか1項に記載の方法。 - 前記工程A1)において凍結融解によって形成されるイオジキサノールの連続勾配の調製が、以下の工程、
A1.a) イオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3-ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの溶液を、-70℃〜-100℃の温度で少なくとも12時間、凍結する工程、次いで
A1.b) 周囲温度で2〜4時間、A1. a)で得られた前記溶液を解凍し、イオジキサノール又は5-(N-2,3-ジヒドロキシプロピルアセトアミド)-2,4,6-トリヨード-N,N'-ビス(2,3ジヒドロキシプロピル)イソフタルアミドの連続勾配を得る工程、
に従い実施されることによって特徴づけられる、請求項1〜10の何れか1項に記載の方法。 - 嫌気条件下で以下の工程、
A2) ドナー被験者からの便細菌叢の少なくとも1つの試料を、生理食塩水緩衝液と混合する工程、
A4) A2)で得られた前記混合物を、低加速度で連続的に遠心分離する工程、
A5) 工程A4)を完了することで形成された前記上清を、回収する工程、
A6) A5)で回収された前記上清を、前記希釈剤と混合する工程、及び
B) A6)で得られた前記混合物を、-50℃未満、好ましくは-70℃〜-100℃の温度で凍結させ、次いでそれを凍結乾燥させる工程、
を含むことによって特徴づけられる、請求項1〜9又は11の何れか1項に記載の方法。 - 工程A4)の低速での前記連続的な遠心分離が、200〜500×gの加速度、5〜15分の時間、20〜30℃の温度で実施されることによって特徴づけられる、請求項12に記載の方法。
- 前記自己又は同種の便細菌叢の移植に使用するため、又は腸のディスバイオシスを治療するための、請求項1〜13の何れか1項に記載の方法によって得られるドナー被験者からの便細菌叢の凍結乾燥物。
- 好ましくはファンクショナルゲノミクス、メタプロテオミクス又は免疫学における研究ツールとしての、請求項1〜13の何れか1項に記載の方法によって得られる凍結乾燥物の使用。
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