JP2019023187A - 抗ｃｄ４７抗体およびその使用方法 - Google Patents

抗ｃｄ４７抗体およびその使用方法 Download PDF

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Abstract

【課題】ＣＤ４７に特異的な第１のアームを少なくとも含む一価抗体および／または二重特異性抗体を提供すること。【解決手段】好ましくは、それらの一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識する一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、２０１２年１２月３日に出願された米国仮特許出願第６１／７３２４５２号；２０１３年４月２８日に出願された米国仮特許出願第６１／８１６７８８号；２０１３年８月７日に出願された米国仮特許出願第６１／８６３１０６号；２０１３年９月２４日に出願された米国仮特許出願第６１／８８１５２３号；および２０１３年１１月１日に出願された米国仮特許出願第６１／８９８７１０号の利益を請求し、その各々は、その全体が参照によって本明細書に組み込まれる。
発明の分野
本発明は、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体および／または一価抗体に関する。本発明は、ＣＤ１９に結合するモノクローナル抗体および／または一価抗体に関する。本発明は、免疫グロブリン分子の各結合部位に異なる特異性を有する新規二重特異性モノクローナル抗体にも関し、ここで、その結合部位の１つは、ＣＤ４７に特異的である。本発明は、免疫グロブリン分子の各結合部位に異なる特異性を有する新規二重特異性モノクローナル抗体にも関し、ここで、その結合部位の１つは、ＣＤ１９に特異的である。
発明の背景
ＣＤ４７またはインテグリン関連タンパク質（ＩＡＰ）は、細胞間コミュニケーションにおいて複数の機能を有する遍在性の５０ｋＤａ膜貫通糖タンパク質である。それは、複数のリガンド（例えば、インテグリン、ＳＩＲＰα（シグナル調節タンパク質アルファ）、ＳＩＲＰγおよびトロンボスポンジン）と相互作用する（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ，Ｐ．Ａ．，ＣＤ４７：Ａ Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｗｈｉｃｈ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＳＲＮ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１３；２０１３：６１４６１９；Ｓｏｔｏ−Ｐａｎｔｏｊａ ＤＲら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＤ４７（２０１２），Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１３ Ｊａｎ；１７（１）：８９−１０３；Ｓｉｃｋ Ｅら、ＣＤ４７ Ｕｐｄａｔｅ：ａ ｍｕｌｔｉｆａｃｅｄ ａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１２ Ｄｅｃ；１６７（７）：１４１５−３０）。自然免疫系という背景において、ＣＤ４７は、骨髄性細胞（例えば、マクロファージ、好中球および樹状細胞）によって発現されるＳＩＲＰαへの結合を通じて阻害性の「ドント・キル・ミー（ｄｏｎ’ｔ ｋｉｌｌ ｍｅ）」シグナルを伝える自己のマーカーとして作用する。ゆえに、生理学的状況におけるＣＤ４７の広範な発現の役割は、健常な細胞を自然免疫系による排除から保護することである（Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡら、ＣＤ４７−Ｓｉｇｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ α（Ｓｉｒｐα）Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｆｃγ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００１ Ａｐｒ ２；１９３（７）：８５５−６２；Ｍａｔｔｉａｓ Ｏｌｓｓｏｎ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ４７／ＳＩＲＰα-ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｕｍｅａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｍｅａ，Ｓｗｅｄｅｎ，Ｔｈｅｓｉｓ；Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡ．，Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ｉｎ ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２００４ Ｊｕｌ；４５（７）：１３１９−２７；Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡら、Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ａｓ ａ Ｍａｒｋｅｒ ｏｆ Ｓｅｌｆ ｏｎ Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００ Ｊｕｎ １６；２８８（５４７３）：２０５１−４；Ｂｒｏｗｎ ＥＪ，Ｆｒａｚｉｅｒ ＷＡ．，ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＤ４７）ａｎｄ ｉｔｓ ｌｉｇａｎｄｓ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｍａｒ；１１（３）：１３０−５）。
腫瘍細胞は、それらが免疫監視機構および自然免疫細胞による殺滅から逃れるのを効率的に助けてくれるＣＤ４７を過剰発現することによって、この免疫抑制機構を乗っ取る（Ｍａｊｅｔｉ Ｒ，Ｃｈｅｔら、ＣＤ４７ ｉｓ ａｎ ａｄｖｅｒｓｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２８６−９９；Ｓ．Ｊａｉｓｗａｌら、ＣＤ４７ ｉｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ａｖｏｉｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ．，Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２７１−８５）。ＣＤ４７の発現は、ほとんどのヒト癌（例えば、ＮＨＬ、ＡＭＬ、乳癌、結腸癌、神経膠芽腫、神経膠腫、卵巣癌、膀胱癌および前立腺癌）においてアップレギュレートされ、高レベルのＣＤ４７発現は、高悪性度の疾患および不良な生存率と明らかに相関する（Ｍａｊｅｔｉ Ｒら、Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２８６−９９；Ｓ．Ｊａｉｓｗａｌら、Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２７１−８５；Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢら、Ｔｈｅ ＣＤ４７−ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｐｈａ（ＳＩＲＰα）ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２ Ａｐｒ ２４；１０９（１７）：６６６２−７；Ｃｈａｏ ＭＰら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣＤ４７ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１ Ｆｅｂ １５；７１（４）：１３７４−８４）。
健常な組織におけるＣＤ４７の広範な発現は、処置の安全性および有効性の問題を招く：第１に、中和モノクローナル抗体（Ｍａｂ）でＣＤ４７を標的化することは、健常な細胞に影響を及ぼし、マウスおよびカニクイザルを用いた前臨床試験において示されているように、強い毒性をもたらし得る（Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２ Ａｐｒ ２４；１０９（１７）：６６６２−７；Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋら、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ＳＩＲＰα Ｖａｒｉａｎｔｓ ａｓ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｔｏ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３ Ｊｕｌ ５；３４１（６１４１）：８８−９１）。第２に、たとえ、代替の形式を使用することによって強い毒性が回避され得るかまたは緩和され得るとしても（Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３ Ｊｕｌ ５；３４１（６１４１）：８８−９１）、なおもＣＤ４７の広範な発現は、標的に媒介される薬物の処分によってＣＤ４７結合分子の迅速な排除を引き起こし、不良な薬物動態および低い有効性をもたらし得る。
したがって、ＣＤ４７の標的化を可能にし、かつこれらの障害を克服する抗体および治療薬が必要とされている。
Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ，Ｐ．Ａ．，ＣＤ４７：Ａ Ｃｅｌｌ Ｓｕｒｆａｃｅ Ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｗｈｉｃｈ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＳＲＮ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１３；２０１３：６１４６１９ Ｓｏｔｏ−Ｐａｎｔｏｊａ ＤＲら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｆｏｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｈｅ ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ＣＤ４７（２０１２），Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｔｈｅｒ Ｔａｒｇｅｔｓ．２０１３ Ｊａｎ；１７（１）：８９−１０３ Ｓｉｃｋ Ｅら、ＣＤ４７ Ｕｐｄａｔｅ：ａ ｍｕｌｔｉｆａｃｅｄ ａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｔｕｍｏｒ ｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ ｏｆ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１２ Ｄｅｃ；１６７（７）：１４１５−３０） Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡら、ＣＤ４７−Ｓｉｇｎａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｒｏｔｅｉｎ α（Ｓｉｒｐα）Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｆｃγ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２００１ Ａｐｒ ２；１９３（７）：８５５−６２ Ｍａｔｔｉａｓ Ｏｌｓｓｏｎ，Ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ４７／ＳＩＲＰα-ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｕｍｅａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｍｅａ，Ｓｗｅｄｅｎ，Ｔｈｅｓｉｓ；Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡ．，Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ｉｎ ｅｒｙｔｈｒｏｉｄ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｉｔｙ，Ｌｅｕｋ Ｌｙｍｐｈｏｍａ．２００４ Ｊｕｌ；４５（７）：１３１９−２７ Ｏｌｄｅｎｂｏｒｇ ＰＡら、Ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ａｓ ａ Ｍａｒｋｅｒ ｏｆ Ｓｅｌｆ ｏｎ Ｒｅｄ Ｂｌｏｏｄ Ｃｅｌｌｓ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０００ Ｊｕｎ １６；２８８（５４７３）：２０５１−４ Ｂｒｏｗｎ ＥＪ，Ｆｒａｚｉｅｒ ＷＡ．，ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＤ４７）ａｎｄ ｉｔｓ ｌｉｇａｎｄｓ．，Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２００１ Ｍａｒ；１１（３）：１３０−５） Ｍａｊｅｔｉ Ｒ，Ｃｈら、ＣＤ４７ ｉｓ ａｎ ａｄｖｅｒｓｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｆａｃｔｏｒ ａｎｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔ ｏｎ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｅｌｏｉｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２８６−９９ Ｓ．Ｊａｉｓｗａｌら、ＣＤ４７ ｉｓ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｏｎ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ａｖｏｉｄ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ．，Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２７１−８５ Ｍａｊｅｔｉ Ｒら、Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２８６−９９；Ｓ．Ｊａｉｓｗａｌら、Ｃｅｌｌ．２００９ Ｊｕｌ ２３；１３８（２）：２７１−８５ Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢら、Ｔｈｅ ＣＤ４７−ｓｉｇｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｌｐｈａ（ＳＩＲＰα）ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｉｓ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔ ｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｓｏｌｉｄ ｔｕｍｏｒｓ，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２ Ａｐｒ ２４；１０９（１７）：６６６２−７ Ｃｈａｏ ＭＰら、Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ ＣＤ４７ ｅｌｉｍｉｎａｔｅｓ ｈｕｍａｎ ａｃｕｔｅ ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１１ Ｆｅｂ １５；７１（４）：１３７４−８４） Ｗｉｌｌｉｎｇｈａｍ ＳＢら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２０１２ Ａｐｒ ２４；１０９（１７）：６６６２−７ Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋら、Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ＳＩＲＰα Ｖａｒｉａｎｔｓ ａｓ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｄｊｕｖａｎｔｓ ｔｏ Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３ Ｊｕｌ ５；３４１（６１４１）：８８−９１ Ｗｅｉｓｋｏｐｆ Ｋら、Ｓｃｉｅｎｃｅ．２０１３ Ｊｕｌ ５；３４１（６１４１）：８８−９１
発明の要旨
本発明は、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体または抗ＣＤ４７ｍＡｂと本明細書中で集合的に称される。好ましくは、それらのモノクローナル抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識するモノクローナル抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。本発明はまた、本明細書中に開示される抗ＣＤ４７モノクローナル抗体と同じエピトープに結合し、かつＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間、例えば、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する抗体も含む。
本発明はまた、ＣＤ４７に特異的な第１のアームを少なくとも含む一価抗体および／または二重特異性抗体も提供する。好ましくは、それらの一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識する一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。本発明はまた、本明細書中に開示される抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、かつＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の、例えば、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する抗体も含む。
本発明は、ＣＤ４７および第２の標的を認識する二重特異性抗体を提供する。本発明は、配列が標準的な抗体と識別不能であり、結合部位の１つが、ＣＤ４７に特異的であり、第２の結合部位が、別の標的、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的である、二重特異性抗体の同定、作製および精製を可能にする。いくつかの実施形態において、ＴＡＡは、癌細胞の細胞表面上に発現されている抗原である。いくつかの実施形態において、癌細胞は、肺癌細胞、気管支癌細胞、前立腺癌細胞、乳癌細胞、直腸結腸癌細胞、膵癌細胞、卵巣、白血病癌細胞、リンパ腫癌細胞、食道癌細胞、肝臓癌細胞、泌尿器および／もしくは膀胱癌細胞、腎癌細胞、口腔癌細胞、咽頭癌細胞、子宮癌細胞ならびに／またはメラノーマ癌細胞から選択される。
いくつかの実施形態において、好適なＴＡＡとしては、非限定的な例として、ＣＤ２０、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３、ＥＧＦＲ、ＩＧＦ１Ｒ、ｃ−Ｍｅｔ、ＰＤＧＦＲ１、ＣＤ４０、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ３０、ＣＳ１、ＣＤ７０、グリピカン、メソテリン（ｍｅｓｏｔｈｅｌｉｎ）、ＰＳＭＡ、ＰＳＣＡ、ＭＵＣ１、ＣＡ１２５、ＣＥＡ、ＦＲＡ、ＥｐＣＡＭ、ＤＲ５、ＨＧＦＲ１および／または５Ｔ４が挙げられる。
ＣＤ４７（表面抗原分類（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ）４７）は、食細胞に対する「ドント・イート・ミー（ｄｏｎ’ｔ ｅａｔ ｍｅ）」シグナルとして作用し、多くの腫瘍によって過剰発現されると知られている（免疫回避）。ＣＤ４７は、食細胞上に発現されるＳＩＲＰαと相互作用する。ＣＤ４７は、食作用活性をダウンレギュレートする。ＣＤ４７は、樹状細胞（ＤＣ）の成熟および活性化を阻害する。ＣＤ４７は、例えば、アポトーシス、生存、増殖、接着、遊走、ならびに血管新生、血圧、組織灌流および／または血小板ホメオスタシスの制御などのプロセスにも関わっている。
ＣＤ４７は、癌にも関わっている。例えば、ＣＤ４７は、様々な血液学的なおよび固形の悪性病変において過剰発現される。ＣＤ４７は、実証された癌幹細胞／腫瘍始原細胞マーカーである。ＣＤ４７の過剰発現は、腫瘍細胞が免疫監視機構および自然免疫細胞による殺滅から逃れるのを助け得ると考えられている。高レベルのＣＤ４７は、癌（例えば、白血病、リンパ腫、乳癌、結腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌および／または神経膠腫）における不良な臨床成績にも関連する。したがって、ＣＤ４７の標的化は、癌の症状を処置する際、その進行を遅延させる際またはその他の方法で回復させる際に有用だろう。
ＣＤ４７は、遍在的に発現されるので、モノクローナル抗体（ｍＡｂ）にとっては、難儀な標的である。それにもかかわらず、本明細書中に記載されるＣＤ４７に特異的な抗体は、単一特異的抗体として有用であり、治療的介入のためにまたは研究用もしくは診断用の試薬として使用され得る。ＣＤ４７に結合する本発明の単一特異的抗体、ならびに免疫学的に活性であってなおもＣＤ４７に結合するこれらの単一特異的抗体のフラグメントには、本明細書中に記載される例示的な抗体、例えば、５Ａ３抗体、５Ａ３Ｍ４抗体、５Ａ３Ｍ３抗体、５Ａ３Ｍ５抗体、ＫＥ８抗体、ＫＥ８−Ｐ６Ｈ５抗体（本明細書中でＫＥ８Ｈ５とも称される）、ＫＥ８−Ｐ３Ｂ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ｂ２とも称される）、ＫＥ８−Ｐ２Ａ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ａ２５とも称される）、ＫＥ８Ｆ２抗体、ＫＥ８Ｇ２抗体、ＫＥ８４Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ａ３抗体、ＫＥ８Ｅ８抗体、ＫＥ８Ｇ６抗体、ＫＥ８Ｈ３抗体、ＫＥ８Ｃ７抗体、ＫＥ８Ａ４抗体、ＫＥ８Ａ８抗体、ＫＥ８Ｇ１１抗体、ＫＥ８Ｂ７抗体、ＫＥ８Ｆ１抗体、ＫＥ８Ｃ４抗体、ＫＥ８Ａ３抗体、ＫＥ８６Ｇ９抗体、ＫＥ８Ｈ６抗体、ＫＡ３抗体、ＫＡ３−Ｐ５Ｇ２抗体（本明細書中でＫＡ３Ｇ２とも称される）、ＫＡ３−Ｐ１Ａ３抗体（本明細書中でＫＡ３Ａ３とも称される）、ＫＡ３−Ｐ５Ｃ５抗体（本明細書中でＫＡ３Ｃ５とも称される）、ＫＡ３Ｈ８抗体、ＫＡ３Ｂ２抗体、ＫＡ３Ａ２抗体、ＫＡ３Ｄ３抗体、ＫＡ３Ｈ３抗体、ＫＣ４抗体、ＫＣ４−Ｐ１Ｇ１１ＫＣ４−Ｐ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４−Ｐ６Ｂ１ＫＣ４−Ｐ４Ｆ４抗体およびＫＣ４−Ｐ２Ｅ２抗体（本明細書中でＫＣ４Ｅ２とも称される）、ＫＣ４抗体、ＫＣ４Ｆ４抗体、ＫＣ４Ａ１抗体、ＫＣ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４Ｅ１０抗体、ＫＣ４Ｂ１抗体、ＫＣ４Ｃ３抗体、ＫＣ４Ａ４抗体、ＫＣ４Ｇ１１抗体、ＫＣ４Ｇ９抗体、ならびにそれらのフラグメントが含まれる。
ＣＤ４７に結合する本発明の抗体およびそのフラグメントは、ＣＤ４７の機能活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉するように働く。ＣＤ４７の機能活性としては、非限定的な例として、ＳＩＲＰαとの相互作用が挙げられる。上記抗体は、上記抗体の存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書中に記載される抗体との結合の非存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比べて、少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％低下するとき、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を完全に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉すると見なされる。上記抗体は、上記抗体の存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書中に記載される抗体との結合の非存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比べて、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％または９０％低下するとき、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を部分的に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉すると見なされる。
本発明はまた、少なくとも１つの結合部位がＣＤ４７に特異的な二重特異性抗体も提供する。本発明の二重特異性抗体は、ＣＤ４７および第２の抗原、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）を標的化する。いくつかの実施形態において、その二重特異性抗体は、機能的なＦｃ部分を含む。その二重特異性抗体のＴＡＡ結合アームは、ＣＤ４７アームを腫瘍細胞または癌幹細胞に対して標的化する。そのＣＤ４７アームは、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断するか、阻害するか、またはその他の方法で減少させ、それによって、「イート・ミー（ｅａｔ ｍｅ）」シグナルを食細胞に伝える。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体のＴＡＡ結合アームは、抗ＣＤ１９抗体の配列またはその抗原結合フラグメントを含む。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、２つの標的の各々に対して「バランスのとれた」親和性を示す。他の実施形態において、上記二重特異性抗体は、２つの標的の各々に対して「アンバランスな」親和性を示す。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体において、抗ＣＤ１９アームの親和性が、高められている。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体において、抗ＣＤ４７アームの親和性が、低下されている。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体において、抗ＣＤ１９アームの親和性が高められており、かつ抗ＣＤ４７アームの親和性が低下されている。これらのアンバランスな親和性の二重特異性抗体は、例えば、標的細胞または標的細胞群に対する選択性を改善するために、有用である。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１９アームの親和性は、親和性成熟後に少なくとも１００倍高められる。いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７アームの親和性は、親和性脱成熟（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｄｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎ）後に少なくとも２倍低下される。例えば、いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７アームは、親和性脱成熟後に約２倍〜１００倍低いＣＤ４７に対する親和性を示す。
少なくとも１つの抗ＣＤ４７アームを含む本発明の二重特異性抗体は、ＣＤ４７の機能活性を調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉するように働く。ＣＤ４７の機能活性としては、非限定的な例として、ＳＩＲＰαとの相互作用が挙げられる。上記二重特異性抗体は、上記二重特異性抗体の存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書中に記載される二重特異性抗体との結合の非存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比べて、少なくとも９５％、例えば、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％低下するとき、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を完全に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉すると見なされる。上記二重特異性抗体は、上記二重特異性抗体の存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルが、本明細書中に記載される二重特異性抗体との結合の非存在下におけるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のレベルと比べて、９５％未満、例えば、１０％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％、７５％、８０％、８５％または９０％低下するとき、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を部分的に調節する、遮断する、阻害する、減少させる、拮抗する、中和する、またはその他の方法で干渉すると見なされる。
本発明の二重特異性抗体の抗ＣＤ４７アームは、他の抗原、例えば、ＴＡＡに結合するいくつかのアームとともに有用である。本発明の例示的な抗ＣＤ４７アーム、抗ＣＤ４７一価抗体および／または二重特異性抗体としては、本明細書中で５Ａ３抗体、５Ａ３Ｍ４抗体、５Ａ３Ｍ３抗体、５Ａ３Ｍ５抗体、ＫＥ８抗体、ＫＥ８−Ｐ６Ｈ５抗体（本明細書中でＫＥ８Ｈ５とも称される）、ＫＥ８−Ｐ３Ｂ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ｂ２とも称される）、ＫＥ８−Ｐ２Ａ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ａ２５とも称される）、ＫＥ８Ｆ２抗体、ＫＥ８Ｇ２抗体、ＫＥ８４Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ａ３抗体、ＫＥ８Ｅ８抗体、ＫＥ８Ｇ６抗体、ＫＥ８Ｈ３抗体、ＫＥ８Ｃ７抗体、ＫＥ８Ａ４抗体、ＫＥ８Ａ８抗体、ＫＥ８Ｇ１１抗体、ＫＥ８Ｂ７抗体、ＫＥ８Ｆ１抗体、ＫＥ８Ｃ４抗体、ＫＥ８Ａ３抗体、ＫＥ８６Ｇ９抗体、ＫＥ８Ｈ６抗体、ＫＡ３抗体、ＫＡ３−Ｐ５Ｇ２抗体（本明細書中でＫＡ３Ｇ２とも称される）、ＫＡ３−Ｐ１Ａ３抗体（本明細書中でＫＡ３Ａ３とも称される）、ＫＡ３−Ｐ５Ｃ５抗体（本明細書中でＫＡ３Ｃ５とも称される）、ＫＡ３Ｈ８抗体、ＫＡ３Ｂ２抗体、ＫＡ３Ａ２抗体、ＫＡ３Ｄ３抗体、ＫＡ３Ｈ３抗体、ＫＣ４抗体、ＫＣ４−Ｐ１Ｇ１１ＫＣ４−Ｐ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４−Ｐ６Ｂ１ＫＣ４−Ｐ４Ｆ４抗体およびＫＣ４−Ｐ２Ｅ２抗体（本明細書中でＫＣ４Ｅ２とも称される）、ＫＣ４抗体、ＫＣ４Ｆ４抗体、ＫＣ４Ａ１抗体、ＫＣ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４Ｅ１０抗体、ＫＣ４Ｂ１抗体、ＫＣ４Ｃ３抗体、ＫＣ４Ａ４抗体、ＫＣ４Ｇ１１抗体、ＫＣ４Ｇ９抗体と称される抗体、ならびにそれらのフラグメントが挙げられる。いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体のＴＡＡ結合アームは、抗ＣＤ１９抗体の配列またはその抗原結合フラグメントを含む。
本発明は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列を含む第１のアームおよびＣＤ４７に結合しない第２のアミノ酸配列を含む第２のアームを有する単離された二重特異性抗体を提供し、ここで、その二重特異性抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、第２のアミノ酸配列は、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する。いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１０倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１，０００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を５ｎＭより高いＩＣ５０で阻害する第１のアームを含み、ここで、一価抗体５Ａ３Ｍ３は、およそ１３ｎＭのＩＣ５０を有する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、実施例１５に記載されているように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される第１のアームを含む。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１，０００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害し、かつ実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を５ｎＭより高いＩＣ５０で阻害する第１のアームを含み、ここで、一価抗体５Ａ３Ｍ３は、およそ１３ｎＭのＩＣ５０を有する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１０倍、少なくとも１００倍または少なくとも１，０００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害し、かつ実施例１５に記載されるように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される第１のアームを含む。
いくつかの実施形態において、ＴＡＡは、ＣＤ１９である。いくつかの実施形態において、第２のアミノ酸配列は、ヒトタンパク質に結合しない。
いくつかの実施形態において、第１のアミノ酸配列は、配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、第１のアミノ酸配列は、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、その第１の軽鎖と第２の軽鎖とは、異なる。
いくつかの実施形態において、第１の軽鎖の少なくとも一部は、カッパータイプであり、第２の軽鎖の少なくとも一部は、ラムダタイプである。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、少なくともカッパー定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、少なくともラムダ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、第２の軽鎖は、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、定常フレームワーク領域配列および可変フレームワーク領域配列は、ヒトである。
本発明はまた、実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を５ｎＭより高いＩＣ５０で阻害する第１のアームを少なくとも含む、二重特異性抗体および／または一価抗体も提供し、ここで、抗体５Ａ３Ｍ３は、およそ１３ｎＭのＩＣ５０を有する。
本発明はまた、実施例１５に記載されるように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される第１のアームを少なくとも含む二重特異性抗体および／または一価抗体も提供する。いくつかの実施形態において、その二重特異性抗体および／または一価抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、その二重特異性抗体および／または一価抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
本発明はまた、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列を含む第１のアームおよびＣＤ１９に結合する第２のアミノ酸配列を含む第２のアームを有する単離された二重特異性抗体も提供し、ここで、その二重特異性抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１０倍強力、少なくとも１００倍強力および少なくとも１，０００倍強力からなる群より選択されるレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、第１のアミノ酸配列は、配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、第１のアミノ酸配列は、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、その第１の軽鎖と第２の軽鎖とは、異なる。
いくつかの実施形態において、第１の軽鎖の少なくとも一部は、カッパータイプであり、第２の軽鎖の少なくとも一部は、ラムダタイプである。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、少なくともカッパー定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、少なくともラムダ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、第２の軽鎖は、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、定常フレームワーク領域配列および可変フレームワーク領域配列は、ヒトである。
本発明はまた、ＣＤ４７に結合する一価抗体も提供する。これらの抗体は、抗ＣＤ４７一価抗体または抗ＣＤ４７ ｍｏｎｏｖ ｍＡｂと本明細書中で集合的に称される。本発明の一価抗体は、ＣＤ４７を特異的に認識する１つのアームおよび本明細書中でダミーアームと称される第２のアームを含む。そのダミーアームは、ヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ダミーアームは、全血中に見られるヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。当業者は、血液中に見られるヒトタンパク質が、全身の循環（ｓｙｓｔｅｍ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ）中に存在するすべてのまたは実質的にすべての抗原に相当する代用物であることを認識するだろう。いくつかの実施形態において、ダミーアームは、固形組織に見られるヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。好ましくは、上記一価抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識する一価抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。
本発明の一価抗体の抗ＣＤ４７アームは、任意のダミーアームとともに有用である。本発明の一価抗体の例示的な抗ＣＤ４７アームとしては、本明細書中で５Ａ３抗体、５Ａ３Ｍ４抗体、５Ａ３Ｍ３抗体、５Ａ３Ｍ５抗体、ＫＥ８抗体、ＫＥ８−Ｐ６Ｈ５抗体（本明細書中でＫＥ８Ｈ５とも称される）、ＫＥ８−Ｐ３Ｂ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ｂ２とも称される）、ＫＥ８−Ｐ２Ａ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ａ２５とも称される）、ＫＥ８Ｆ２抗体、ＫＥ８Ｇ２抗体、ＫＥ８４Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ａ３抗体、ＫＥ８Ｅ８抗体、ＫＥ８Ｇ６抗体、ＫＥ８Ｈ３抗体、ＫＥ８Ｃ７抗体、ＫＥ８Ａ４抗体、ＫＥ８Ａ８抗体、ＫＥ８Ｇ１１抗体、ＫＥ８Ｂ７抗体、ＫＥ８Ｆ１抗体、ＫＥ８Ｃ４抗体、ＫＥ８Ａ３抗体、ＫＥ８６Ｇ９抗体、ＫＥ８Ｈ６抗体、ＫＡ３抗体、ＫＡ３−Ｐ５Ｇ２抗体（本明細書中でＫＡ３Ｇ２とも称される）、ＫＡ３−Ｐ１Ａ３抗体（本明細書中でＫＡ３Ａ３とも称される）、ＫＡ３−Ｐ５Ｃ５抗体（本明細書中でＫＡ３Ｃ５とも称される）、ＫＡ３Ｈ８抗体、ＫＡ３Ｂ２抗体、ＫＡ３Ａ２抗体、ＫＡ３Ｄ３抗体、ＫＡ３Ｈ３抗体、ＫＣ４抗体、ＫＣ４−Ｐ１Ｇ１１ＫＣ４−Ｐ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４−Ｐ６Ｂ１ＫＣ４−Ｐ４Ｆ４抗体およびＫＣ４−Ｐ２Ｅ２抗体（本明細書中でＫＣ４Ｅ２とも称される）、ＫＣ４抗体、ＫＣ４Ｆ４抗体、ＫＣ４Ａ１抗体、ＫＣ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４Ｅ１０抗体、ＫＣ４Ｂ１抗体、ＫＣ４Ｃ３抗体、ＫＣ４Ａ４抗体、ＫＣ４Ｇ１１抗体、ＫＣ４Ｇ９抗体と称される抗体、ならびにそれらのフラグメントが挙げられる。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体のＴＡＡ結合アームは、抗ＣＤ１９抗体の配列またはその抗原結合フラグメントを含む。
いくつかの実施形態において、上記一価抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
いくつかの実施形態において、上記一価抗体の抗ＣＤ４７アームは、配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む第１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、上記一価抗体の抗ＣＤ４７アームは、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む第１のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、上記一価抗体は、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、その第１の軽鎖と第２の軽鎖とは、異なる。
いくつかの実施形態において、第１の軽鎖の少なくとも一部は、カッパータイプであり、第２の軽鎖の少なくとも一部は、ラムダタイプである。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、少なくともカッパー定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、少なくともラムダ定常領域を含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第２の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの実施形態において、第１の軽鎖は、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、第２の軽鎖は、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む。
いくつかの実施形態において、定常フレームワーク領域配列および可変フレームワーク領域配列は、ヒトである。
本発明の二重特異性抗体は、当該分野で公知の任意の方法（例えば、非限定的な例として、架橋されたフラグメント、クアドローマおよび／または任意の種々の組換え形式（例えば、非限定的な例として、連結された抗体フラグメント、強制（ｆｏｒｃｅｄ）ヘテロ二量体およびまたは単一ドメインに基づく組換え形式）の使用）を用いて作製される。二重特異的形式の例としては、Ｆａｂアームの交換に基づく二重特異性ＩｇＧ（Ｇｒａｍｅｒら、２０１３ ＭＡｂｓ．５（６））；ＣｒｏｓｓＭａｂ形式（Ｋｌｅｉｎ Ｃら、２０１２ ＭＡｂｓ ４（６））；強制ヘテロ二量体化アプローチ、例えば、ＳＥＥＤ技術（Ｄａｖｉｓ ＪＨら、２０１０ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３（４）：１９５−２０２）、静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃ ｓｔｅｅｒｉｎｇ）（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２８５（２５）：１９６３７−４６．）もしくはノブ・イントゥ・ホール（ｋｎｏｂ−ｉｎｔｏ−ｈｏｌｅ）（Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ ９（７）：６１７−２１．）またはホモ二量体形成を妨げる他の変異セット（Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ＴＳら、２０１３ ＭＡｂｓ．５（５）：６４６−５４．）に基づく複数の形式；タンデムｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥｓ）などのフラグメントに基づく二重特異的形式（Ｗｏｌｆ Ｅら、２００５ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７−４４．）；二重特異性四価抗体（Ｐｏｒｔｎｅｒ ＬＭら、２０１２ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６１（１０）：１８６９−７５．）；二重親和性再標的化分子（Ｍｏｏｒｅ ＰＡら、２０１１ Ｂｌｏｏｄ．１１７（１７）：４５４２−５１）、ダイアボディ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＲＥら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ １５（７）：６２９−３１）が挙げられるがこれらに限定されない。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、各結合部位（ｅａｃｈ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｓｉｔｅ）において異なる特異性を有し、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、その第１の軽鎖と第２の軽鎖とは、異なる。
いくつかの抗体において、第１の軽鎖の少なくとも第１の部分は、カッパータイプであり、第２の軽鎖の少なくとも一部は、ラムダタイプである。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、少なくともカッパー定常領域を含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、少なくともラムダ定常領域を含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、第２の軽鎖は、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む。いくつかの実施形態において、定常フレームワーク領域配列および可変フレームワーク領域配列は、ヒトである。
これらの抗ＣＤ４７アーム、単一特異的な抗ＣＤ４７抗体、一価の抗ＣＤ４７抗体、および／または少なくとも１つの結合部位がＣＤ４７に特異的である二重特異性抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
本発明は、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体を提供する。例えば、本発明は、実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を０．３ｎＭより高いＩＣ５０で阻害するモノクローナル抗体を提供し、ここで、抗体５Ａ３Ｍ３は、およそ０．３６ｎＭのＩＣ５０を有する。
本発明はまた、ＣＤ４７に結合し、かつ実施例１５に記載されるように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される、モノクローナル抗体も提供する。いくつかの実施形態において、そのモノクローナル抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、そのモノクローナル抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。
本発明はまた、配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む抗ＣＤ４７モノクローナル抗体も提供する。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変重鎖アミノ酸配列、ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７抗体は、５Ａ３、５Ａ３Ｍ４、５Ａ３Ｍ３、５Ａ３Ｍ５、ＫＥ８、ＫＥ８Ｆ２、ＫＥ８Ｇ２、ＫＥ８４Ｇ９、ＫＥ８１Ｇ９、ＫＥ８１Ａ３、ＫＥ８Ｅ８、ＫＥ８Ｇ６、ＫＥ８Ｈ５、ＫＥ８Ａ２、ＫＥ８Ｈ３、ＫＥ８Ｃ７、ＫＥ８Ｂ２、ＫＥ８Ａ４、ＫＥ８Ａ８、ＫＥ８Ｇ１１、ＫＥ８Ｂ７、ＫＥ８Ｆ１、ＫＥ８Ｃ４、ＫＥ８Ａ３、ＫＥ８６Ｇ９、ＫＥ８Ｈ６、ＫＡ３、ＫＡ３Ｈ８、ＫＡ３Ａ３、ＫＡ３Ｃ５、ＫＡ３Ｂ２、ＫＡ３Ａ２、ＫＡ３Ｄ３、ＫＡ３Ｇ２、ＫＡ３Ｈ３、ＫＣ４、ＫＣ４Ｅ２、ＫＣ４Ｆ４、ＫＣ４Ａ１、ＫＣ４Ｃ１１、ＫＣ４Ｅ１０、ＫＣ４Ｂ１、ＫＣ４Ｃ３、ＫＣ４Ａ４、ＫＣ４Ｇ１１およびＫＣ４Ｇ９において示される組み合わせからなる群より選択される、可変重鎖配列と可変軽鎖配列との組み合わせを含む。
本発明は、ＣＤ１９に結合するモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体または抗ＣＤ１９ｍＡｂと本明細書中で集合的に称される。好ましくは、それらのモノクローナル抗体は、少なくともヒトＣＤ１９に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ１９を認識するモノクローナル抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ１９タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ１９、例えば、カニクイザルＣＤ１９および／またはげっ歯類ＣＤ１９）に対しても交差反応性である。
いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変重鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、配列番号２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８および２２０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変軽鎖アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、上記抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８および２２０から選択されるアミノ酸配列と少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一である可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、抗ＣＤ１９モノクローナル抗体は、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号２０８、２１０、２１２、２１４、２１６、２１８および２２０から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む。
本発明はまた、ＣＤ１９に結合する一価抗体も提供する。これらの抗体は、抗ＣＤ１９一価抗体または抗ＣＤ１９ ｍｏｎｏｖ ｍＡｂと本明細書中で集合的に称される。本発明の一価抗体は、ＣＤ１９を特異的に認識する１つのアームおよび本明細書中でダミーアームと称される第２のアームを含む。そのダミーアームは、ヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ダミーアームは、全血中に見られるヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ダミーアームは、固形組織に見られるヒトタンパク質に結合しないかまたはその他の方法で交差反応しないアミノ酸配列を含む。好ましくは、上記一価抗体は、少なくともヒトＣＤ１９に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ１９を認識する一価抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ１９タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ１９、例えば、カニクイザルＣＤ１９および／またはげっ歯類ＣＤ１９）に対しても交差反応性である。
本発明はまた、ＣＤ１９および第２の標的を認識する二重特異性抗体も提供する。いくつかの実施形態において、第２の標的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患（例えば、Ｂ細胞媒介性自己免疫疾患）および／または炎症性疾患（非限定的な例として、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、関節リウマチ（ＲＡ）、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、ワルデンシュトレーム高ガンマグロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓ ｈｙｐｅｒｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎａｅｍｉａ）、シェーグレン症候群、多発性硬化症（ＭＳ）および／またはループス腎炎が挙げられる）に関連するかまたはその他の方法で関わると知られる抗原である。
いくつかの実施形態において、好適な第２の標的としては、非限定的な例として、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ４０、ＢＡＦＦＲ、ＣＤ５、ＣＤ３２ｂ、ＩＣＯＳＬ、ＩＬ６Ｒおよび／またはＩＬ２１Ｒが挙げられる。
ＣＤ１９および第２の標的を認識する本発明の二重特異性抗体は、当該分野で公知の任意の方法（例えば、非限定的な例として、架橋されたフラグメント、クアドローマおよび／または任意の種々の組換え形式（例えば、非限定的な例として、連結された抗体フラグメント、強制ヘテロ二量体およびまたは単一ドメインに基づく組換え形式）の使用）を用いて作製される。本発明は、配列が標準的な抗体と識別不能であり、結合部位の１つが、ＣＤ１９に特異的であり、第２の結合部位が、別の標的、例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に特異的である、二重特異性抗体の同定、作製および精製を可能にする。本発明の抗体の改変されていない性質は、好ましい製造法および標準的なモノクローナル抗体に類似した生化学的特徴をそれらの抗体に提供する。
いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、各結合部位において異なる特異性を有し、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、その第１の軽鎖と第２の軽鎖とは、異なる。
いくつかの抗体において、第１の軽鎖の少なくとも第１の部分は、カッパータイプであり、第２の軽鎖の少なくとも一部は、ラムダタイプである。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、少なくともカッパー定常領域を含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、少なくともラムダ定常領域を含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、ラムダ可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第２の軽鎖は、カッパー可変領域をさらに含む。いくつかの抗体において、第１の軽鎖は、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、第２の軽鎖は、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む。いくつかの実施形態において、定常フレームワーク領域配列および可変フレームワーク領域配列は、ヒトである。
本発明のモノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体は、治療的介入のためにまたは研究用もしくは診断用の試薬として使用され得る。例えば、本発明のモノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体は、以下のような処置または予防が望ましい被験体に本発明の抗体を投与することによって、異常なＣＤ４７および／もしくは異常なＣＤ４７−ＳＩＲＰαの発現および／もしくは活性に関連する病状を処置する、予防するおよび／もしくはその進行を遅延させる方法またはそのような病状に関連する症状を軽減する方法において有用である。処置される被験体は、例えば、ヒトである。上記モノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体は、上記病状に関連する症状を処置するか、予防するか、その進行を遅延させるかまたは軽減するのに十分な量で投与される。
いくつかの実施形態において、本明細書中に記載されるモノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体は、１つ以上のさらなる薬剤またはさらなる薬剤の組み合わせとともに使用される。好適なさらなる薬剤には、意図される用途、例えば、癌、炎症および／または自己免疫疾患のための現行の医薬的治療および／または外科的治療が含まれる。いくつかの実施形態において、上記モノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体は、リツキシマブとともに使用され得る。
いくつかの実施形態において、上記モノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、単一の治療的組成物に製剤化され、そのモノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体およびさらなる薬剤は、同時に投与される。あるいは、上記ａｃモノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、互いと分離しており、例えば、各々が、別個の治療的組成物に製剤化され、そのモノクローナル抗体、一価抗体および／もしくは二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、同時に投与されるか、またはそのモノクローナル抗体、一価抗体および／もしくは二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、処置レジメン中の異なる時点において投与される。例えば、上記モノクローナル抗体、一価抗体および／もしくは二重特異性抗体は、さらなる薬剤の投与の前に投与されるか、上記モノクローナル抗体、一価抗体および／もしくは二重特異性抗体は、さらなる薬剤の投与の後に投与されるか、または上記モノクローナル抗体、一価抗体および／もしくは二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、交互の形式で投与される。本明細書中に記載されるように、上記モノクローナル抗体、一価抗体および／または二重特異性抗体ならびにさらなる薬剤は、単回用量または複数回用量で投与される。
本発明の抗体を使用して処置されるおよび／または予防される病状としては、例えば、癌または異常なＣＤ４７の発現および／または活性に関連する他の任意の疾患もしくは障害が挙げられる。
本発明はまた、２つの標的の各々に対して「アンバランスな」親和性を示す二重特異性抗体を生成する方法も提供する。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ１９アームの親和性は、親和性成熟を用いて高められる。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ４７アームの親和性は、親和性脱成熟を用いて低下される。例えば、抗ＣＤ４７／ＣＤ１９二重特異性抗体のいくつかの実施形態において、抗ＣＤ１９アームの親和性は、親和性成熟を用いて高められ、抗ＣＤ４７アームの親和性は、親和性脱成熟を用いて低下される。これらのアンバランスな親和性の二重特異性抗体は、例えば、標的細胞または標的細胞群に対する選択性を改善するために有用である。
本発明に係る薬学的組成物は、本発明の抗体およびキャリアを含み得る。これらの薬学的組成物は、キット、例えば、診断キットに含められ得る。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
（項目１）
ＣＤ４７に結合する第１のアミノ酸配列を含む第１のアームおよびＣＤ４７に結合しない第２のアミノ酸配列を含む第２のアームを含む単離された二重特異性抗体であって、ここで、該二重特異性抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する、単離された二重特異性抗体。
（項目２）
前記第２のアミノ酸配列が、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目３）
前記二重特異性抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目２に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目４）
前記二重特異性抗体が、ＣＤ４７に結合する前記第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１０倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目３に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目５）
前記二重特異性抗体が、ＣＤ４７に結合する前記第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目３に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目６）
前記二重特異性抗体が、ＣＤ４７に結合する前記第１のアミノ酸配列およびヒトタンパク質に結合しない第２のアミノ酸配列を含む一価の抗ＣＤ４７抗体によって示されるヒトＣＤ４７／ヒトＳＩＲＰα相互作用の阻害の対応するレベルよりも少なくとも１，０００倍強力なレベルでヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目３に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目７）
前記第１のアームが、実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を５ｎＭより高いＩＣ５０で阻害するアミノ酸配列を含み、一価抗体５Ａ３Ｍ３が、およそ１３ｎＭのＩＣ５０を有する、項目１〜６のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目８）
前記第１のアームが、実施例１５に記載されているように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収されるアミノ酸配列を含む、項目１〜６のいずれか１項に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目９）
前記ＴＡＡが、ＣＤ１９である、項目２に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１０）
前記第２のアミノ酸配列が、ヒトタンパク質に結合しない、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１１）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１２）
前記第１のアミノ酸配列が、配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列ならびに配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列を含む、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１３）
前記二重特異性抗体が、２コピーの単一の重鎖ポリペプチドならびに第１の軽鎖および第２の軽鎖を含み、ここで、該第１の軽鎖と該第２の軽鎖とは異なる、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１４）
前記第１の軽鎖の少なくとも一部が、カッパータイプであり、前記第２の軽鎖の少なくとも一部が、ラムダタイプである、項目１３に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１５）
前記第１の軽鎖が、少なくともカッパー定常領域を含む、項目１４に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１６）
前記第１の軽鎖が、カッパー可変領域をさらに含む、項目１５に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１７）
前記第１の軽鎖が、ラムダ可変領域をさらに含む、項目１５に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１８）
前記第２の軽鎖が、少なくともラムダ定常領域を含む、項目１４に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目１９）
前記第２の軽鎖が、ラムダ可変領域をさらに含む、項目１８に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目２０）
前記第２の軽鎖が、カッパー可変領域をさらに含む、項目１８に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目２１）
前記第１の軽鎖が、カッパー定常領域およびカッパー可変領域を含み、前記第２の軽鎖が、ラムダ定常領域およびラムダ可変領域を含む、項目１４に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目２２）
前記定常フレームワーク領域配列および前記可変フレームワーク領域配列が、ヒトである、項目１に記載の単離された二重特異性抗体。
（項目２３）
ヒトＣＤ４７に結合し、実施例１５に記載されるように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される、第１のアームを含む、単離された一価抗体または二重特異性抗体。
（項目２４）
前記抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目２３に記載の単離された一価抗体または二重特異性抗体。
（項目２５）
ヒトＣＤ４７に結合し、実施例１５に記載されるように、ヒト全血中、１０μｇ／ｍｌの濃度において３７℃で３０分間インキュベーションした後に８０％超で回収される、アミノ酸配列を含む、単離されたモノクローナル抗体。
（項目２６）
前記抗体が、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する、項目２５に記載の単離されたモノクローナル抗体。
（項目２７）
ＣＤ４７に結合し、実施例４に記載されるアッセイにおいて細胞表面のヒトＣＤ４７と可溶性ヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を０．３ｎＭより高いＩＣ５０で阻害する、アミノ酸配列を含み、抗体５Ａ３Ｍ３が、およそ０．３６ｎＭのＩＣ５０を有する、単離されたモノクローナル抗体。
（項目２８）
ＣＤ４７に結合し、かつ配列番号２２５の可変重鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＨ１）アミノ酸配列、配列番号２２６の可変重鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＨ２）アミノ酸配列、配列番号２２７の可変重鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列を含む可変重鎖、配列番号２２８〜２４１および２６２〜２７２から選択される可変軽鎖相補性決定領域１（ＣＤＲＬ１）アミノ酸配列、２４２〜２４５および２７３〜２８０から選択される可変軽鎖相補性決定領域２（ＣＤＲＬ２）アミノ酸配列、ならびに２４６〜２６１および２８１から選択される可変軽鎖相補性決定領域３（ＣＤＲＨ３）アミノ酸配列の組み合わせを含む、単離されたモノクローナル抗体。
（項目２９）
配列番号１１４の可変重鎖アミノ酸配列と、配列番号１１６、１１８、１２０、１２２、１２４、１２６、１２８、１３０、１３２、１３４、１３６、１３８、１４０、１４２、１４４、１４６、１４８、１５０、１５２、１５４、１５６、１５８、１６０、１６２、１６４、１６６、１６８、１７０、１７２、１７４、１７６、１７８、１８０、１８２、１８４、１８６、１８８、１９０、１９２、１９４、１９６、１９８、２００、２０２、２０４および２０６から選択される可変軽鎖アミノ酸配列との組み合わせをさらに含む、項目２８に記載の単離されたモノクローナル抗体。
図１は、抗ＣＤ４７抗体５Ａ３の可変軽鎖（ＶＬ）配列（配列番号１１６）と、その最も近い生殖細胞系列配列（配列番号２８２）であるＩＭＧＴ命名法によるところのヒトＩＧＫＶ１−３３との間の配列アラインメントの例証である。
図２は、ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合アッセイにおいて、親抗体５Ａ３と比較したときの５Ａ３−Ｍ３および５Ａ３−Ｍ５抗体バリアントの遮断効力を表しているグラフである。
図３は、フローサイトメトリーによって評価される、ヒトＣＤ４７でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞への精製されたＣＤ４７ Ｍａｂの結合によって示されるときの様々なＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｍａｂ）の特異性を表しているグラフである（灰色のバー）。ＣＤ４７ ＭＡｂは、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞には結合しなかった（黒色のバー）。
図４は、フローサイトメトリーによって評価される、ＨＥＫ２９３−Ｐ細胞への精製されたＣＤ４７ Ｍａｂの結合によって示されるときの天然のＣＤ４７への結合およびＣＤ４７ ＭＡｂの特異性を表しているグラフである（灰色のバー）。ｈＣＤ４７特異的ｓｉＲＮＡで安定にトランスフェクトされたＨＥＫ２９３−Ｐ細胞への結合は、有意に減少する（黒色のバー）。
図５は、天然のヒトＣＤ４７への結合およびカニクイザルＣＤ４７との交差反応性を表しているグラフである。ヒトＰＢＭＣ ＣＤ４＋Ｔ細胞（薄い灰色のバー）およびカニクイザルＰＢＭＣ ＣＤ４＋Ｔ細胞（濃い灰色のバー）への精製されたＣＤ４７ Ｍａｂの結合を評価した。
図６は、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα阻害アッセイ（実施例４に記載されるような、ｈＣＤ４７を発現しているＣＨＯ細胞への組換え可溶性ヒトＳＩＲＰαの結合の競合阻害）において試験されたときの、ＣＤ４７ ＭａｂがＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断する効力を表しているグラフである。用量反応実験において得られたＩＣ５０値が示されている。ＣＤ４７ Ｍａｂは、ファミリーに分類され、高い効力から低い効力にランク付けされる。本発明の抗体の中和活性を、商業的に入手可能なＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２と比較している。
図７は、ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性を表している例証である。赤血球凝集は、ウェルの下縁の周りの底に三日月形で凝集したＲＢＣの沈着物として明示されるのに対し、凝集していない場合は、凝集物を形成せず、ウェルの表面積に均等に分布される。図７は、５Ａ３、Ｋｅ８およびＫａ３ファミリーの高親和性ＣＤ４７ Ｍａｂが、赤血球凝集を誘導すること；他の３つのファミリーとは対照的に、この実験において試験されたＫｃ４ファミリー抗体は、赤血球凝集を誘導しないことを証明している。
図８は、Ｒａｊｉ細胞ならびに元の抗ＣＤ１９クローン１Ｂ７、１回目の親和性成熟ラウンド後に同定されたクローンＤ１１および２回目の親和性成熟ラウンドから生じた最終的なクローンＬ７Ｂ７＿ｃ２を用いて行われたＦＡＣＳ結合アッセイに対する用量反応曲線を表しているグラフである。
図９Ａ〜９Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂが細胞表面の２つの標的に共結合する能力を表している一連のグラフである。図９Ａ〜９Ｃにおけるグラフは、ＣＤ１９陰性Ｂ−ＮＨＬ細胞（ＤＳ−１）およびＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞（Ｒａｊｉ）に結合する一価抗体および二重特異性抗体を用いて生成されたＦＡＣＳプロファイルを示している。すべての抗体が、ヒトＩｇＧ１形式であり、示されるような４つの濃度でそれらを試験した。 図９Ａ〜９Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂが細胞表面の２つの標的に共結合する能力を表している一連のグラフである。図９Ａ〜９Ｃにおけるグラフは、ＣＤ１９陰性Ｂ−ＮＨＬ細胞（ＤＳ−１）およびＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞（Ｒａｊｉ）に結合する一価抗体および二重特異性抗体を用いて生成されたＦＡＣＳプロファイルを示している。すべての抗体が、ヒトＩｇＧ１形式であり、示されるような４つの濃度でそれらを試験した。 図９Ａ〜９Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂが細胞表面の２つの標的に共結合する能力を表している一連のグラフである。図９Ａ〜９Ｃにおけるグラフは、ＣＤ１９陰性Ｂ−ＮＨＬ細胞（ＤＳ−１）およびＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞（Ｒａｊｉ）に結合する一価抗体および二重特異性抗体を用いて生成されたＦＡＣＳプロファイルを示している。すべての抗体が、ヒトＩｇＧ１形式であり、示されるような４つの濃度でそれらを試験した。
図１０は、一価抗体および二重特異性抗体のＳＩＲＰα遮断活性を表している一連のグラフである。図１０は、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂによるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の中和がＣＤ１９依存的であることを示すことによって、標的細胞の表面上でのＣＤ１９およびＣＤ４７の共結合を証明している。これらの実験は、４つ組で行った。平均値およびＳＥＭが示されている。用量反応阻害曲線を、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを用いて当てはめた。
図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型（黒色）または対応するＣＤ４７一価抗体（灰色）を用いて作成されたＡＤＣＣ用量反応曲線を示している。ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２によるＡＤＣＣが、比較のために示されている（灰色破線）。このＡＤＣＣアッセイは、エフェクター細胞として全ヒトＰＢＭＣ、ならびに標的細胞として、ＣａｌｃｅｉｎＡＭで染色されたＲａｊｉ（図１１Ａ、１１Ｃ）またはＲａｍｏｓ（図１１Ｂ）（エフェクターと標的との比：５０）を用いて行われた。細胞傷害性を、標的細胞からのカルセイン放出の程度から計算した。特異的な細胞殺滅のパーセンテージ＋／−ＳＤが示されている。これらの実験は、２つ組で行った。図１１Ａ〜１１Ｂは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂがＣＤ１９陽性細胞をＣＤ１９依存的様式で殺滅する能力を証明しているが、対応するＣＤ４７一価抗体は、それほど効率的でないかまたは全く効率的でなかった。図１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９抗体によるＲａｊｉ細胞の殺滅の有効性が、リツキシマブに匹敵し、ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２よりもかなり高いことを証明している。 図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型（黒色）または対応するＣＤ４７一価抗体（灰色）を用いて作成されたＡＤＣＣ用量反応曲線を示している。ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２によるＡＤＣＣが、比較のために示されている（灰色破線）。このＡＤＣＣアッセイは、エフェクター細胞として全ヒトＰＢＭＣ、ならびに標的細胞として、ＣａｌｃｅｉｎＡＭで染色されたＲａｊｉ（図１１Ａ、１１Ｃ）またはＲａｍｏｓ（図１１Ｂ）（エフェクターと標的との比：５０）を用いて行われた。細胞傷害性を、標的細胞からのカルセイン放出の程度から計算した。特異的な細胞殺滅のパーセンテージ＋／−ＳＤが示されている。これらの実験は、２つ組で行った。図１１Ａ〜１１Ｂは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂがＣＤ１９陽性細胞をＣＤ１９依存的様式で殺滅する能力を証明しているが、対応するＣＤ４７一価抗体は、それほど効率的でないかまたは全く効率的でなかった。図１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９抗体によるＲａｊｉ細胞の殺滅の有効性が、リツキシマブに匹敵し、ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２よりもかなり高いことを証明している。 図１１Ａ〜１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型（黒色）または対応するＣＤ４７一価抗体（灰色）を用いて作成されたＡＤＣＣ用量反応曲線を示している。ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２によるＡＤＣＣが、比較のために示されている（灰色破線）。このＡＤＣＣアッセイは、エフェクター細胞として全ヒトＰＢＭＣ、ならびに標的細胞として、ＣａｌｃｅｉｎＡＭで染色されたＲａｊｉ（図１１Ａ、１１Ｃ）またはＲａｍｏｓ（図１１Ｂ）（エフェクターと標的との比：５０）を用いて行われた。細胞傷害性を、標的細胞からのカルセイン放出の程度から計算した。特異的な細胞殺滅のパーセンテージ＋／−ＳＤが示されている。これらの実験は、２つ組で行った。図１１Ａ〜１１Ｂは、ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂがＣＤ１９陽性細胞をＣＤ１９依存的様式で殺滅する能力を証明しているが、対応するＣＤ４７一価抗体は、それほど効率的でないかまたは全く効率的でなかった。図１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９抗体によるＲａｊｉ細胞の殺滅の有効性が、リツキシマブに匹敵し、ＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２よりもかなり高いことを証明している。
図１２は、用量反応ＡＤＣＰ実験における、対応するＣＤ４７一価抗体（灰色線）と比べた、本発明のＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型のうちの３つ（黒色の線）の食作用活性を表しているグラフである。ＣＤ４７ Ｍａｂ Ｂ６Ｈ１２（ヒトＩｇＧ１バックグラウンドのもの、黒色点線）およびＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２（灰色点線）によるファゴサイトーシスが、比較のために示されている。このＡＤＣＰ実験は、末梢血単球から分化したヒトマクロファージおよび標的細胞としてＲａｊｉを用いて（エフェクター：標的比１：５）行われた。ファゴサイトーシスをＦＡＣＳによって評価した。少なくとも１つの標的細胞を貪食したマクロファージのパーセンテージが示されている。ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型は、ＣＤ１９依存的様式の解析においてＣＤ１９陽性細胞を貪食するが、対応するＣＤ４７一価抗体は、それほど効率的でないか、または全く効率的でなかった。
図１３は、ＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスのＲａｊｉ Ｂ細胞リンパ腫異種移植片における様々な抗体の活性を表しているグラフである。腫瘍移植片が約０．１ｃｍ３に達した後、抗体処置を開始し、Ｄ２５に終了した。処置群（ｎ＝５）は、挿入図に示されているとおりだった。１処置群あたりの平均腫瘍容積＋／−ＳＤの漸進的変化が示されている。図１３は、ＢｓＡＢの有効性が、Ｂ６Ｈ１２またはリツキシマブに似ていること、および腫瘍撲滅がＣＤ１９依存的だったが、対応する一価は、それほど効果的でなかったことを示している。
図１４は、高いおよび中程度の親和性のＣＤ４７抗体が、赤血球上に効率的に吸着されることを表しているグラフである。ＢｓＡｂの場合、この現象は、高親和性ＣＤ４７アームを有する分子、例えば、５Ａ３に限定される。
詳細な説明
本発明は、ＣＤ４７に結合するモノクローナル抗体を提供する。これらの抗体は、抗ＣＤ４７モノクローナル抗体または抗ＣＤ４７ｍＡｂと本明細書中で集合的に称される。好ましくは、それらのモノクローナル抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識するモノクローナル抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７モノクローナル抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。本発明はまた、本明細書中に開示される抗ＣＤ４７モノクローナル抗体と同じエピトープに結合し、かつＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の、例えば、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する抗体も含む。
本発明はまた、ＣＤ４７に特異的な第１のアームを少なくとも含む一価抗体および／または二重特異性抗体も提供する。好ましくは、それらの一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくともヒトＣＤ４７に特異的である。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ４７を認識する一価抗体および／または二重特異性抗体は、少なくとも１つの他の非ヒトＣＤ４７タンパク質（例えば、非限定的な例として、非ヒト霊長類ＣＤ４７、例えば、カニクイザルＣＤ４７および／またはげっ歯類ＣＤ４７）に対しても交差反応性である。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体は、ＣＤ４７とシグナル調節タンパク質アルファ（ＳＩＲＰα）との間の相互作用を阻害する。いくつかの実施形態において、これらの抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体は、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する。本発明はまた、本明細書中に開示される抗ＣＤ４７一価抗体および／または抗ＣＤ４７二重特異性抗体と同じエピトープに結合し、かつＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の、例えば、ヒトＣＤ４７とヒトＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する抗体も含む。
本発明の二重特異性抗体は、２本の抗体アームが細胞表面上の２つの抗原に同時に結合する（共結合（ｃｏ−ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）と呼ばれる）ことが可能であり、これにより、アビディティー機構に起因して、親和性が相加的または相乗的に増加する。結果として、共結合によって、ただ１つの抗原しか発現していない細胞と比べて、両方の抗原を発現している細胞に対する高選択性がもたらされる。さらに、二重特異性抗体の２本のアームとそれらのそれぞれの標的との親和性は、標的細胞への結合がもっぱら一方の抗体アームによって駆動されるように設定され得る。いくつかの実施形態において、上記二重特異性抗体は、ＣＤ４７に結合する第１のアームおよび腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合する第２のアームを含み、ここで、その第２のアームは、ＴＡＡに高親和性で結合し、第１のアームは、ＣＤ４７に低親和性で、すなわち、ＴＡＡ共結合においてＣＤ４７／ＳＩＲＰαを阻害するのに十分な親和性で結合する。このデザインによって、本発明の二重特異性抗体が、正常細胞と比較して癌細胞においてＣＤ４７を優先的に阻害することが可能になる。本明細書中に提供される例において、ＣＤ４７に低親和性で結合する第１のアームおよびＣＤ１９に高親和性で結合する第２のアームを有する二重特異性抗体（ＣＤ４７×ＣＤ１９二重特異性と呼ばれる）は、正常細胞と比較して癌細胞においてＣＤ４７の優先的な阻害を可能にする。２本の抗原結合アームに加えて、ＣＤ４７×ＴＡＡ二重特異性抗体は、マクロファージおよび／または他の免疫エフェクター細胞をリクルートするために機能的なＦｃ部分を必要とする。完全ヒト二重特異性ＩｇＧ形式（例えば、本明細書中に記載されるκλ型の形式）は、二重標的化ＣＤ４７×ＴＡＡ二重特異性抗体の作製にとって適切である。本明細書中に提供される例に示されるように、二重標的化二重特異性抗体がＣＤ４７およびＣＤ１９と共結合する能力は、ＣＤ１９陽性細胞への結合の親和性およびＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のＣＤ１９依存的中和の有意な増大をもたらす。これは、ひいては、本明細書中に提供されるＡＤＣＣ実験およびＡＤＣＰ実験において証明されるように、ＣＤ４７×ＣＤ１９二重特異性抗体によって媒介される効率的かつ選択的な癌細胞の殺滅に至る。
本発明の例示的な抗ＣＤ４７モノクローナル抗体、単一特異的抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４７一価抗体、および／または少なくとも１つの結合部位がＣＤ４７に特異的である二重特異性抗体としては、例えば、５Ａ３抗体、５Ａ３Ｍ４抗体、５Ａ３Ｍ３抗体、５Ａ３Ｍ５抗体、ＫＥ８抗体、ＫＥ８−Ｐ６Ｈ５抗体（本明細書中でＫＥ８Ｈ５とも称される）、ＫＥ８−Ｐ３Ｂ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ｂ２とも称される）、ＫＥ８−Ｐ２Ａ２抗体（本明細書中でＫＥ８Ａ２５とも称される）、ＫＥ８Ｆ２抗体、ＫＥ８Ｇ２抗体、ＫＥ８４Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ｇ９抗体、ＫＥ８１Ａ３抗体、ＫＥ８Ｅ８抗体、ＫＥ８Ｇ６抗体、ＫＥ８Ｈ３抗体、ＫＥ８Ｃ７抗体、ＫＥ８Ａ４抗体、ＫＥ８Ａ８抗体、ＫＥ８Ｇ１１抗体、ＫＥ８Ｂ７抗体、ＫＥ８Ｆ１抗体、ＫＥ８Ｃ４抗体、ＫＥ８Ａ３抗体、ＫＥ８６Ｇ９抗体、ＫＥ８Ｈ６抗体、ＫＡ３抗体、ＫＡ３−Ｐ５Ｇ２抗体（本明細書中でＫＡ３Ｇ２とも称される）、ＫＡ３−Ｐ１Ａ３抗体（本明細書中でＫＡ３Ａ３とも称される）、ＫＡ３−Ｐ５Ｃ５抗体（本明細書中でＫＡ３Ｃ５とも称される）、ＫＡ３Ｈ８抗体、ＫＡ３Ｂ２抗体、ＫＡ３Ａ２抗体、ＫＡ３Ｄ３抗体、ＫＡ３Ｈ３抗体、ＫＣ４抗体、ＫＣ４−Ｐ１Ｇ１１ＫＣ４−Ｐ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４−Ｐ６Ｂ１ＫＣ４−Ｐ４Ｆ４抗体およびＫＣ４−Ｐ２Ｅ２抗体（本明細書中でＫＣ４Ｅ２とも称される）、ＫＣ４抗体、ＫＣ４Ｆ４抗体、ＫＣ４Ａ１抗体、ＫＣ４Ｃ１１抗体、ＫＣ４Ｅ１０抗体、ＫＣ４Ｂ１抗体、ＫＣ４Ｃ３抗体、ＫＣ４Ａ４抗体、ＫＣ４Ｇ１１抗体、ＫＣ４Ｇ９抗体、ならびにそれらの免疫学的に活性なフラグメントおよび／または抗原結合フラグメントが挙げられる。
いくつかの実施形態において、本発明の例示的な抗ＣＤ４７モノクローナル抗体、単一特異的抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４７一価抗体および／または二重特異性抗体は、表１、２および３に示されるＣＤＲ配列から選択される重鎖相補性決定領域と軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）との組み合わせを含み、ここで、表１、２および３に示されるＣＤＲは、ＩＭＧＴ命名法に従って定義されている。
いくつかの実施形態において、本発明の例示的な抗ＣＤ４７モノクローナル抗体、単一特異的抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４７一価抗体および／または二重特異性抗体は、表１からの重鎖ＣＤＲ配列と、表２および３に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３配列から選択される２セットの軽鎖ＣＤＲとの組み合わせを含む。
いくつかの実施形態において、本発明の例示的な抗ＣＤ４７モノクローナル抗体、単一特異的抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ４７一価抗体および／または二重特異性抗体は、表１からの重鎖ＣＤＲ配列と、表２に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３配列から選択される第１のセットの軽鎖ＣＤＲと、表３に示されるＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２およびＣＤＲＬ３配列から選択される第２のセットの軽鎖ＣＤＲとの組み合わせを含む。
本明細書中に記載される例示的な抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１９抗体、一価抗体および二重特異性抗体の各々は、下記に列挙されるアミノ酸配列および対応する核酸配列に示されるような、共通の重鎖（ＨＣ）、抗ＣＤ４７抗体および抗ＣＤ１９抗体の場合、１つのカッパー鎖または１つのラムダ鎖、一価抗体および二重特異性抗体の場合、１つのカッパー軽鎖および１つのラムダ軽鎖（ＬＣ）を含む。下記に記載される例示的な抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１９抗体、一価抗体および二重特異性抗体の各々は、下記に列挙されるアミノ酸配列および対応する核酸配列に示されるような、共通の可変重鎖ドメイン（ＶＨ）、抗ＣＤ４７および抗ＣＤ１９抗体の場合、１つのカッパー可変軽鎖ドメインまたは１つのラムダ可変軽鎖ドメイン、一価抗体および二重特異性抗体の場合、１つのカッパー可変軽鎖ドメインおよび１つのラムダ可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）を含む。
下記の抗体配列は、例として本明細書中に提供されるが、これらの配列は、当該分野で認められている種々の任意の手法を用いて二重特異性抗体を作製するために使用され得ると理解されるべきである。二重特異的形式の例としては、Ｆａｂアームの交換に基づく二重特異性ＩｇＧ（Ｇｒａｍｅｒら、２０１３ ＭＡｂｓ．５（６））；ＣｒｏｓｓＭａｂ形式（Ｋｌｅｉｎ Ｃら、２０１２ ＭＡｂｓ ４（６））；強制ヘテロ二量体化アプローチ、例えば、ＳＥＥＤ技術（Ｄａｖｉｓ ＪＨら、２０１０ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ Ｄｅｓ Ｓｅｌ．２３（４）：１９５−２０２）、静電的ステアリング（Ｇｕｎａｓｅｋａｒａｎ Ｋら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２０１０ ２８５（２５）：１９６３７−４６．）もしくはノブ・イントゥ・ホール（Ｒｉｄｇｗａｙ ＪＢら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１９９６ ９（７）：６１７−２１．）またはホモ二量体形成を妨げる他の変異セット（Ｖｏｎ Ｋｒｅｕｄｅｎｓｔｅｉｎ ＴＳら、２０１３ ＭＡｂｓ．５（５）：６４６−５４．）に基づく複数の形式；タンデムｓｃＦｖ（例えば、ＢｉＴＥｓ）などのフラグメントに基づく二重特異的形式（Ｗｏｌｆ Ｅら、２００５ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．Ｔｏｄａｙ １０（１８）：１２３７−４４．）；二重特異性四価抗体（Ｐｏｅｒｔｎｅｒ ＬＭら、２０１２ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６１（１０）：１８６９−７５．）；二重親和性再標的化分子（Ｍｏｏｒｅ ＰＡら、２０１１ Ｂｌｏｏｄ．１１７（１７）：４５４２−５１）、ダイアボディ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＲＥら、Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９７ １５（７）：６２９−３１）が挙げられるがこれらに限定されない。
例示的な抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１９抗体、一価抗体および二重特異性抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含む。
＞ＣＯＭＭＯＮ−ＨＣ−ＮＴ（配列番号１）
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAAGTTATGGTGCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTCTCGAGCGCCTCCACCAAGGGCCCATCGGTCTTCCCCCTGGCACCCTCCTCCAAGAGCACCTCTGGGGGCACAGCGGCCCTGGGCTGCCTGGTCAAGGACTACTTCCCCGAACCGGTGACAGTCTCGTGGAACTCAGGAGCCCTGACCAGCGGCGTGCACACCTTCCCGGCTGTCCTACAGTCCTCAGGACTCTACTCCCTCAGCAGCGTGGTGACTGTGCCCTCCAGCAGCTTGGGCACCCAGACCTACATCTGCAACGTGAATCACAAGCCCAGCAACACCAAGGTGGACAAGAGAGTTGAGCCCAAATCTTGTGACAAAACTCACACATGCCCACCGTGCCCAGCACCTGAACTCCTGGGGGGACCGTCAGTCTTCCTCTTCCCCCCAAAACCCAAGGACACCCTCATGATCTCCCGGACCCCTGAGGTCACATGCGTGGTGGTGGACGTGAGCCACGAAGACCCTGAGGTCAAGTTCAACTGGTACGTGGACGGCGTGGAGGTGCATAATGCCAAGACAAAGCCGCGGGAGGAGCAGTACAACAGCACGTACCGTGTGGTCAGCGTCCTCACCGTCCTGCACCAGGACTGGCTGAATGGCAAGGAGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCTCCAAAGCCAAAGGGCAGCCCCGAGAACCACAGGTGTATACCCTGCCCCCATCTCGGGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTCAGCCTGACTTGCCTGGTCAAAGGCTTCTATCCCAGCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGAGCAACGGGCAGCCGGAGAACAACTACAAGACCACGCCTCCCGTGCTGGACTCCGACGGCTCCTTCTTCCTCTATAGCAAGCTCACCGTGGACAAGTCCAGGTGGCAGCAGGGGAACGTCTTCTCATGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCACAACCACTACACGCAGAAGAGCCTCTCCCTGTCTCCGGGTTAA
＞ＣＯＭＭＯＮ−ＨＣ−ＡＡ（配列番号２）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSYGAFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
抗ＣＤ４７抗体、抗ＣＤ１９抗体、一価抗体および二重特異性抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含む。
＞ＣＯＭＭＯＮ−ＶＨ−ＮＴ（配列番号１１３）
GAGGTGCAGCTGTTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGAAAAGTTATGGTGCTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTCTCGAGC
＞ＣＯＭＭＯＮ−ＶＨ−ＡＡ（配列番号１１４）
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSYGAFDYWGQGTLVTVSS
抗ＣＤ４７抗体
５Ａ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４）を含む。
＞５Ａ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞５Ａ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
５Ａ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１１６）を含む。
＞５Ａ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１１５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞５Ａ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１１６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIK
５Ａ３−Ｍ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGAACCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞５Ａ３−Ｍ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRNPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
５Ａ３−Ｍ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１１７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１１８）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１１７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGAACCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞５Ａ３−Ｍ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１１８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRNPRTFGQGTKVEIK
５Ａ３−Ｍ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号８）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGTCCATTAGTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCTCGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞５Ａ３−Ｍ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
５Ａ３−Ｍ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１１９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２０）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１１９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGTCCATTAGTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGCTGCATCCTCGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞５Ａ３−Ｍ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１２０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIK
５Ａ３−Ｍ５抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１０）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ５−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGTACCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞５Ａ３−Ｍ５−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRYPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
５Ａ３−Ｍ５抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１２１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２２）を含む。
＞５Ａ３−Ｍ５−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１２１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTACGGTGCATCCAGGTTGGAAACAGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGAAGTGGATCTGGGACAGATTTTACTTTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATATTGCAACATATTACTGTCAGCAGAAGCACCCCCGGTACCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞５Ａ３−Ｍ５−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１２２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYGASRLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQKHPRYPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１２）を含む。
＞Ｋｅ８−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCACAAGCGGCGGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRRPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１２３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２４）を含む。
＞Ｋｅ８−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１２３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCACAAGCGGCGGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１２４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRRPQTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｈ５抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１４）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ５−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCGAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTGCGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｈ５−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRAPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｈ５抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１２５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２６）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ５−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１２５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCGAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTGCGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｈ５−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１２６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIARYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRAPQTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｂ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１６）を含む。
＞ＫＥ８Ｂ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCACCCGCGTGCCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｂ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｂ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１２７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２８）を含む。
＞ＫＥ８Ｂ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１２７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCACCCGCGTGCCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｂ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１２８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ａ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１８）を含む。
＞ＫＥ８Ａ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ａ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ａ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１２９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３０）を含む。
＞ＫＥ８Ａ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１２９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ａ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１３０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｅ８抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２０）を含む。
＞ＫＥ８Ｅ８−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGGCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｅ８−ＬＣ−ＡＡ（配列番号２０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｅ８抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１３１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３２）を含む。
＞ＫＥ８Ｅ８−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１３１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGGCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｅ８−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１３２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｈ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号２１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２２）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号２１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｈ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号２２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｈ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１３３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３４）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１３３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTGGGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｈ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１３４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRGPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｇ６抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号２３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２４）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ６−ＬＣ−ＮＴ（配列番号２３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGCGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｇ６−ＬＣ−ＡＡ（配列番号２４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｇ６抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１３５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３６）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ６−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１３５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGCGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｇ６−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１３６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ａ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号２５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２６）を含む。
＞ＫＥ８Ａ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号２５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGTAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCCCGTGGGCCGAGCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ａ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号２６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPSTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ａ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１３７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３８）を含む。
＞ＫＥ８Ａ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１３７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGTAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCCCGTGGGCCGAGCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ａ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１３８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRVSQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPSTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８１Ａ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号２７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２８）を含む。
＞ＫＥ８１Ａ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号２７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGCCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８１Ａ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号２８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRAPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８１Ａ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１３９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１４０）を含む。
＞ＫＥ８１Ａ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１３９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGCCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８１Ａ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１４０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRAPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ａ８抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号２９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号３０）を含む。
＞ＫＥ８Ａ８−ＬＣ−ＮＴ（配列番号２９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGCGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ａ８−ＬＣ−ＡＡ（配列番号３０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ａ８抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１４１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１４２）を含む。
＞ＫＥ８Ａ８−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１４１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGCGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ａ８−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１４２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｃ７抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号３２）を含む。
＞ＫＥ８Ｃ７−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGCGCCATCCGCGTGGCCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｃ７−ＬＣ−ＡＡ（配列番号３２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｃ７抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１４３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１４４）を含む。
＞ＫＥ８Ｃ７−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１４３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTAATAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGCGCCATCCGCGTGGCCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｃ７−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１４４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDINRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｇ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号３４）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGCGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｇ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号３４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｇ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１４５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１４６）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１４５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAACAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCCCGTGCGCCGAGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｇ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１４６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８１Ｇ９抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号３６）を含む。
＞ＫＥ８１Ｇ９−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGCGGCATAAGCGTTCCCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８１Ｇ９−ＬＣ−ＡＡ（配列番号３６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHKRSPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８１Ｇ９抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１４７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１４８）を含む。
＞ＫＥ８１Ｇ９−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１４７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGCGGCATAAGCGTTCCCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８１Ｇ９−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１４８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHKRSPQTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｆ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号３８）を含む。
＞ＫＥ８Ｆ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTGCGCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｆ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号３８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｆ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１４９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５０）を含む。
＞ＫＥ８Ｆ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１４９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTGCGCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｆ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１５０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRAPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｂ７抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号３９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４０）を含む。
＞ＫＥ８Ｂ７−ＬＣ−ＮＴ（配列番号３９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGGAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTAGCCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｂ７−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｂ７抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１５１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５２）を含む。
＞ＫＥ８Ｂ７−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１５１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGGAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTAGCCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｂ７−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１５２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｃ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号４１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４２）を含む。
＞ＫＥ８Ｃ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号４１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGGGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｃ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｃ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１５３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５４）を含む。
＞ＫＥ８Ｃ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１５３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGGGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｃ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１５４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｆ１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号４３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４４）を含む。
＞ＫＥ８Ｆ１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号４３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTTCTTATGTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTCGGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｆ１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYVNWYQQKPGKAPKLLIYAASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRRPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｆ１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１５５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５６）を含む。
＞ＫＥ８Ｆ１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１５５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTTCTTATGTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTCGGCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｆ１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１５６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYVNWYQQKPGKAPKLLIYAASGLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRRPQTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｇ１１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号４５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４６）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ１１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号４５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGGAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGGGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｇ１１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｇ１１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１５７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５８）を含む。
＞ＫＥ８Ｇ１１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１５７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGGAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCGCGTGGGCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｇ１１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１５８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGRYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ｈ６抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号４７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４８）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ６−ＬＣ−ＮＴ（配列番号４７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAATGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGGGCCGCGCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ｈ６−ＬＣ−ＡＡ（配列番号４８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYNASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ｈ６抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１５９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６０）を含む。
＞ＫＥ８Ｈ６−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１５９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAATGCATCCACTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGGGCCGCGCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ｈ６−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１６０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYNASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８４Ｇ９抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号４９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５０）を含む。
＞ＫＥ８４Ｇ９−ＬＣ−ＮＴ（配列番号４９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTAGCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８４Ｇ９−ＬＣ−ＡＡ（配列番号５０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRSPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８４Ｇ９抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１６１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６２）を含む。
＞ＫＥ８４Ｇ９−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１６１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAAGCATCCGCGTAGCCCGCGGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８４Ｇ９−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１６２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQKHPRSPRTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８Ａ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５２）を含む。
＞ＫＥ８Ａ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTAGCCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８Ａ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号５２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIAKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRSPQTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８Ａ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１６３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６４）を含む。
＞ＫＥ８Ａ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１６３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGTTCCATAAGCGTAGCCCGCAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８Ａ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１６４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIAKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFHKRSPQTFGQGTKVEIK
Ｋｅ８６Ｇ９抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５４）を含む。
＞ＫＥ８６Ｇ９−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAATGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGGGCCGACCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＥ８６Ｇ９−ＬＣ−ＡＡ（配列番号５４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYNASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPTTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋｅ８６Ｇ９抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１６５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６６）を含む。
＞ＫＥ８６Ｇ９−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１６５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAATGCATCCAATTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGAGGCATCCGCGTGGGCCGACCACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＥ８６Ｇ９−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１６６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYNASNLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRHPRGPTTFGQGTKVEIK
Ｋａ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５６）を含む。
＞ＫＡ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCACCCGCGCGCCCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号５６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１６７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６８）を含む。
＞ＫＡ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１６７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGCAGCTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCACCCGCGCGCCCCGAAGACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１６８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ａ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５８）を含む。
＞ＫＡ３Ａ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ａ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号５８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ａ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１６９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７０）を含む。
＞ＫＡ３Ａ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１６９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ａ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１７０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｈ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６０）を含む。
＞ＫＡ３Ｈ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号５９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTGCTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGCTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｈ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIAKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASALQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｈ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１７１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７２）を含む。
＞ＫＡ３Ｈ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１７１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCAGGCGAGTCAGGACATTGCTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCGCTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｈ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１７２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDIAKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASALQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ａ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号６１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６２）を含む。
＞ＫＡ３Ａ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号６１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ａ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ａ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１７３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７４）を含む。
＞ＫＡ３Ａ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１７３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCTAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ａ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１７４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｈ８抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号６３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６４）を含む。
＞ＫＡ３Ｈ８−ＬＣ−ＮＴ（配列番号６３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCGAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｈ８−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｈ８抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１７５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７６）を含む。
＞ＫＡ３Ｈ８−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１７５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGCGAGTTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCGGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCTCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｈ８−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１７６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIASYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRSPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｂ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号６５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６６）を含む。
＞ＫＡ３Ｂ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号６５）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｂ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６６）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｂ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１７７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７８）を含む。
＞ＫＡ３Ｂ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１７７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAACATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATAGTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｂ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１７８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｃ５抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号６７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６８）を含む。
＞ＫＡ３Ｃ５−ＬＣ−ＮＴ（配列番号６７）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCTCTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCCCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｃ５−ＬＣ−ＡＡ（配列番号６８）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｃ５抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１７９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８０）を含む。
＞ＫＡ３Ｃ５−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１７９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTAGTAGGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATTCTGCATCCTCTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCCCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｃ５−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１８０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISRYLNWYQQKPGKAPKLLIYSASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｇ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号６９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号７０）を含む。
＞ＫＡ３Ｇ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号６９）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGGGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｇ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号７０）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｇ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１８１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８２）を含む。
＞ＫＡ３Ｇ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１８１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGATAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGGGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｇ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１８２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIDKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRGPKTFGQGTKVEIK
Ｋａ３Ｄ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号７２）を含む。
＞ＫＡ３Ｄ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７１）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＫＡ３Ｄ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号７２）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
Ｋａ３Ｄ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１８３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８４）を含む。
＞ＫＡ３Ｄ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１８３）
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGCATTGGTAAGTATTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGGTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAGCAGATGCATCCTCGCGCGCCGAAAACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＫＡ３Ｄ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１８４）
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSIGKYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQMHPRAPKTFGQGTKVEIK
Ｋｃ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７３に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号７４）を含む。
＞ＫＣ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７３）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号７４）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１８５に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１８６）を含む。
＞ＫＣ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１８５）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCAGTAATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１８６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｇ１１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号７６）を含む。
＞ＫＣ４Ｇ１１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７５）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGGAAGGCGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGGATAGTGATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｇ１１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号７６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGKANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKDSDRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｇ１１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１８７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１８８）を含む。
＞ＫＣ４Ｇ１１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１８７）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGGAAGGCGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGGATAGTGATCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｇ１１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１８８）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGKANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKDSDRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｃ１１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７７に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号７８）を含む。
＞ＫＣ４Ｃ１１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７７）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGGGAATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAATAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｃ１１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号７８）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRGNNYVSWYQQHPGKAPKLMIYENSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｃ１１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１８９に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１９０）を含む。
＞ＫＣ４Ｃ１１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１８９）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGGGAATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAATAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｃ１１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１９０）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRGNNYVSWYQQHPGKAPKLMIYENSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ａ１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号７９に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号８０）を含む。
＞ＫＣ４Ａ１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号７９）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGTGCGAGGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ａ１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８０）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVSARNYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ａ１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１９１に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１９２）を含む。
＞ＫＣ４Ａ１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１９１）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGTGCGAGGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ａ１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１９２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVSARNYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ａ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号８１に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号８２）を含む。
＞ＫＣ４Ａ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号８１）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTAGAACCAGCAGTGACGTTAATAATACTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGACTAGTGGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ａ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTRTSSDVNNTNYVSWYQQHPGKAPKLMIYKTSGRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ａ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１９３に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１９４）を含む。
＞ＫＣ４Ａ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１９３）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTAGAACCAGCAGTGACGTTAATAATACTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGACTAGTGGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ａ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１９４）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTRTSSDVNNTNYVSWYQQHPGKAPKLMIYKTSGRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｅ１０抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号８３に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号８４）を含む。
＞ＫＣ４Ｅ１０−ＬＣ−ＮＴ（配列番号８３）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAATTCTGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAGTAGTAGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｅ１０−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８４）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVNSANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKSSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｅ１０抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１９６）を含む。
＞ＫＣ４Ｅ１０−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１９５）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAATTCTGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAGTAGTAGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｅ１０−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１９６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVNSANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKSSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｇ９抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号８５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号８６）を含む。
＞ＫＣ４Ｇ９−ＬＣ−ＮＴ（配列番号８５）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGAGAGGAAGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAATAGTACTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｇ９−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVERKNYVSWYQQHPGKAPKLMIYKNSTRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｇ９抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１９７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号１９８）を含む。
＞ＫＣ４Ｇ９−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１９７）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGAGAGGAAGAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAATAGTACTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｇ９−ＶＬ−ＡＡ（配列番号１９８）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVERKNYVSWYQQHPGKAPKLMIYKNSTRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｃ３抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号８７に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号８８）を含む。
＞ＫＣ４Ｃ３−ＬＣ−ＮＴ（配列番号８７）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGCGGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAATAGTACTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｃ３−ＬＣ−ＡＡ（配列番号８８）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRAANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKNSTRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｃ３抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号１９９に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２００）を含む。
＞ＫＣ４Ｃ３−ＶＬ−ＮＴ（配列番号１９９）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGCGGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATAAGAATAGTACTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｃ３−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２００）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRAANYVSWYQQHPGKAPKLMIYKNSTRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｆ４抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号８９に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９０）を含む。
＞ＫＣ４Ｆ４−ＬＣ−ＮＴ（配列番号８９）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGAGGGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATCAGGATAGTAGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｆ４−ＬＣ−ＡＡ（配列番号９０）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRRANYVSWYQQHPGKAPKLMIYQDSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｆ４抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２０１に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０２）を含む。
＞ＫＣ４Ｆ４−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２０１）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGAGGGCTAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATCAGGATAGTAGTCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｆ４−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２０２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRRANYVSWYQQHPGKAPKLMIYQDSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｂ１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９１に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９２）を含む。
＞ＫＣ４Ｂ１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９１）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGCTAATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTGCGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｂ１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号９２）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRANNYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSARPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｂ１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２０３に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０４）を含む。
＞ＫＣ４Ｂ１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２０３）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTAGGGCTAATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTGCGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｂ１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２０４）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVRANNYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSARPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
Ｋｃ４Ｅ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９３に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９４）を含む。
＞ＫＣ４Ｅ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９３）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTTATTATAATAAGTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＫＣ４Ｅ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号９４）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVYYNKYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｋｃ４Ｅ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０６）を含む。
＞ＫＣ４Ｅ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２０５）
CAGTCTGCCCTGACTCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTTATTATAATAAGTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGAGTAGTAAGCGGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGATTGGTGGTTCCGCCCCAAGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＫＣ４Ｅ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２０６）
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVYYNKYVSWYQQHPGKAPKLMIYESSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYDWWFRPKVFGGGTKLTVL
抗ＣＤ１９抗体
Ｃ２抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。
＞Ｃ２−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９５）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGAAGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACCAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｃ２−ＬＣ−ＡＡ（配列番号９６）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIEDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDQSLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｃ２抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
＞Ｃ２−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２０７）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGAAGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACCAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｃ２−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２０８）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIEDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDQSLYGWVFGGGTKLTVL
Ａ６抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９７に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９８）を含む。
＞Ａ６−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９７）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGGTGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACGTACGACGAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ａ６−ＬＣ−ＡＡ（配列番号９８）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIGDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDESLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ａ６抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２０９に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１０）を含む。
＞Ａ６−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２０９）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGGTGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACGTACGACGAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ａ６−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２１０）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIGDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDESLYGWVFGGGTKLTVL
Ｃ６抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号９９に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１００）を含む。
＞Ｃ６−ＬＣ−ＮＴ（配列番号９９）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCAATGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTTTGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACACCAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｃ６−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１００）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSINDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYFDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDTSLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｃ６抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２１１に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１２）を含む。
＞Ｃ６−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２１１）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCAATGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTTTGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACACCAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｃ６−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２１２）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSINDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYFDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDTSLYGWVFGGGTKLTVL
Ｃ９抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１０１に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０２）を含む。
＞Ｃ９−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１０１）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGCTGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACGAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｃ９−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１０２）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIADKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDESLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｃ９抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２１３に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１４）を含む。
＞Ｃ９−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２１３）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGCTGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACGAGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｃ９−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２１４）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIADKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDESLYGWVFGGGTKLTVL
Ｂ１１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１０３に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０４）を含む。
＞Ｂ１１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１０３）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGAAGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACAACAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｂ１１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１０４）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIEDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDNSLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｂ１１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２１５に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１６）を含む。
＞Ｂ１１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２１５）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGAAGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCATTGTGATCTATTATGATAACGAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGACCTACGACAACAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｂ１１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２１６）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIEDKYVQWYQQRPGSSPTIVIYYDNERPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQTYDNSLYGWVFGGGTKLTVL
Ｄ１１抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。
＞Ｄ１１−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１０５）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATCGATGATAAGTTTGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATTATGATAACATTAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCCTATGACGCGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｄ１１−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１０６）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIDDKFVQWYQQRPGSSPTTVIYYDNIRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDASLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｄ１１抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
＞Ｄ１１−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２１７）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCAGCATCGATGATAAGTTTGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATTATGATAACATTAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCCTATGACGCGAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｄ１１−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２１８）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIDDKFVQWYQQRPGSSPTTVIYYDNIRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDASLYGWVFGGGTKLTVL
Ｂ７抗体は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）を含み、配列番号１０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０８）を含む。
＞Ｂ７−ＬＣ−ＮＴ（配列番号１０７）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGCGGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCCTATGACAGCAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞Ｂ７−ＬＣ−ＡＡ（配列番号１０８）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIADKYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSLYGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
Ｂ７抗体は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）を含み、配列番号２１９に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２２０）を含む。
＞Ｂ７−ＶＬ−ＮＴ（配列番号２１９）
AATTTTATGCTGACTCAGCCCCACTCTGTGTCGGAGTCTCCGGGGAAGACGGTAACCATCTCCTGCACCCGCAGCAGTGGCTCTATCGCGGATAAGTATGTGCAGTGGTACCAGCAGCGCCCGGGCAGTTCCCCCACCACTGTGATCTATGAGGATAACCAAAGACCCTCTGGGGTCCCTGATCGGTTCTCTGGCTCCATCGACAGCTCCTCCAACTCTGCCTCCCTCACCATCTCTGGACTGAAGACTGAGGACGAGGCTGACTACTACTGTCAGTCCTATGACAGCAGCCTGTATGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞Ｂ７−ＶＬ−ＡＡ（配列番号２２０）
NFMLTQPHSVSESPGKTVTISCTRSSGSIADKYVQWYQQRPGSSPTTVIYEDNQRPSGVPDRFSGSIDSSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDSSLYGWVFGGGTKLTVL
ダミー軽鎖
ダミー軽鎖１（配列番号１１０）は、配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされる。
＞ＤＵＭＭＹ−ＬＣ１−ＮＴ（配列番号１０９）
CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAATATTGAGACTGGTTCTGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATGACAGCCTGCCTGGATGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTCAGCCCAAGGCTGCCCCCTCGGTCACTCTGTTCCCGCCCTCCTCTGAGGAGCTTCAAGCCAACAAGGCCACACTGGTGTGTCTCATAAGTGACTTCTACCCGGGAGCCGTGACAGTGGCTTGGAAAGCAGATAGCAGCCCCGTCAAGGCGGGAGTGGAGACCACCACACCCTCCAAACAAAGCAACAACAAGTACGCGGCCAGCAGCTATCTGAGCCTGACGCCTGAGCAGTGGAAGTCCCACAGAAGCTACAGCTGCCAGGTCACGCATGAAGGGAGCACCGTGGAGAAGACAGTGGCCCCTACAGAATGTTCATAA
＞ＤＵＭＭＹ−ＬＣ１−ＡＡ（配列番号１１０）
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIETGSVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDDSLPGWVFGGGTKLTVLGQPKAAPSVTLFPPSSEELQANKATLVCLISDFYPGAVTVAWKADSSPVKAGVETTTPSKQSNNKYAASSYLSLTPEQWKSHRSYSCQVTHEGSTVEKTVAPTECS
ダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）は、配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされる。
＞ＤＵＭＭＹ−ＶＬ１−ＮＴ（配列番号２２１）
CAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAAGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAAGCAGCTCCAATATTGAGACTGGTTCTGTATCCTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATGACAGCCTGCCTGGATGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTA
＞ＤＵＭＭＹ−ＶＬ１−ＡＡ（配列番号２２２）
QSVLTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIETGSVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDDSLPGWVFGGGTKLTVL
ダミー軽鎖２（配列番号１１２）は、配列番号１１１に示される核酸配列によってコードされる。
＞ＤＵＭＭＹ−ＬＣ２−ＮＴ（配列番号１１１）
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGACGGTTAAGAATAATTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAACAACTGGTTGCCCATCAACCCCTATACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAACGTACGGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTCCCGCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCTGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCCAGAGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCGGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACGCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACAAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGCTCGCCCGTCACAAAGAGCTTCAACAGGGGAGAGTGTTAA
＞ＤＵＭＭＹ−ＬＣ２−ＡＡ（配列番号１１２）
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQTVKNNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWLPINPYTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
ダミー可変軽鎖ドメイン２（配列番号２２４）は、配列番号２２３に示される核酸配列によってコードされる。
＞ＤＵＭＭＹ−ＶＬ２−ＮＴ（配列番号２２３）
GAAATAGTGATGACGCAGTCTCCAGCCACCCTGTCTGTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCAGACGGTTAAGAATAATTTAGCCTGGTACCAGCAGAAACCTGGCCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCACCAGGGCCACTGGTATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCAGTTTATTACTGTCAGCAGTATAACAACTGGTTGCCCATCAACCCCTATACCTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
＞ＤＵＭＭＹ−ＶＬ２−ＡＡ（配列番号２２４）
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQTVKNNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQQYNNWLPINPYTFGQGTKVEIK
一価抗体
いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１１６）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３−Ｍ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号８）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３−Ｍ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１１９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２０）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３−Ｍ５は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１０）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体５Ａ３−Ｍ５は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２２）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１２）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２４）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ａ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１８）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ａ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３０）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｂ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１６）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｂ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２８）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｇ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号４５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４６）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｇ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１５７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５８）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｃ４は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号４１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４２）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ｃ４は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１５３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５４）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ａ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号２５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２６）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋｅ８Ａ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１３７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３８）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５６）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１６７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６８）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ａ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号６１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６２）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ａ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１７３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７４）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ｇ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号６９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号７０）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ｇ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１８１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８２）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ｈ３は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６０）および配列番号１０９に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー軽鎖１（配列番号１１０）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｋａ３Ｈ３は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１７１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７２）および配列番号２２１に示される核酸配列によってコードされるラムダダミー可変軽鎖ドメイン１（配列番号２２２）を含む。
いくつかの実施形態において、一価抗体Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１１１に示される核酸配列によってコードされるカッパーダミー軽鎖２（配列番号１１２）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、一価抗体Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号２２３に示される核酸配列によってコードされるカッパーダミー可変軽鎖ドメイン２（配列番号２２４）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
二重特異性抗体
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号３に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１１６）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号８）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１１９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２０）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ３×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号８）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ３×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１１９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２０）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ５×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１０）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ５×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２２）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ５×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１０）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体５Ａ３−Ｍ５×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２２）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１２）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２４）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１２）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２４）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ２×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１７に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１８）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ２×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２９に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３０）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｂ２×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号１５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号１６）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｂ２×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１２７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１２８）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｇ１１×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号４５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４６）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｇ×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１５７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５８）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｃ４×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号４１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４２）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｃ４×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１５３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５４）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｃ４×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号４１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号４２）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ｃ４×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１５３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１５４）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号２５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２６）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１３７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３８）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ３×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号２５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号２６）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋｅ８Ａ３×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１３７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１３８）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５６）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１６７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６８）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５５に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号５６）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１６７に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１６８）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号６１に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６２）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ａ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１７３に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７４）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｇ２×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号６９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号７０）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｇ２×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１８１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８２）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｇ２×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号６９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号７０）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｇ２×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１８１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１８２）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｈ３×Ｄ１１は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６０）および配列番号１０５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号１０６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｈ３×Ｄ１１は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１７１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７２）および配列番号２１７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２１８）を含む。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｈ３×Ｃ２は、配列番号１に示される核酸配列によってコードされる共通の重鎖（配列番号２）、配列番号５９に示される核酸配列によってコードされるカッパー軽鎖（配列番号６０）および配列番号９５に示される核酸配列によってコードされるラムダ軽鎖（配列番号９６）を含む。いくつかの実施形態において、二重特異性抗体Ｋａ３Ｈ３×Ｃ２は、配列番号１１３に示される核酸配列によってコードされる共通の可変重鎖ドメイン（配列番号１１４）、配列番号１７１に示される核酸配列によってコードされるカッパー可変軽鎖ドメイン（配列番号１７２）および配列番号２０７に示される核酸配列によってコードされるラムダ可変軽鎖ドメイン（配列番号２０８）を含む。
定義：
別段定義されない限り、本発明に関連して使用される科学用語および専門用語は、当業者が通常理解している意味を有するものとする。さらに、文脈によって別段必要とされない限り、単数形の用語は、複数形を含むものとし、複数形の用語は、単数形を含むものとする。一般に、本明細書中に記載される、細胞培養および組織培養、分子生物学、ならびにタンパク質およびオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドの化学およびハイブリダイゼーションに関して使用される術語およびそれらの手法は、当該分野において周知であり、当該分野において通常使用されるものである。組換えＤＮＡ、オリゴヌクレオチド合成ならびに組織培養および形質転換（例えば、エレクトロポレーション、リポフェクション）に対しては、標準的な手法が使用される。酵素反応および精製法は、製造者の仕様書に従って、または当該分野で通常行われているとおり、または本明細書中に記載されるとおりに、行われる。前述の手法および手順は、一般に、当該分野で周知の従来の方法に従って、ならびに本明細書全体を通して引用され、論じられる様々な一般的な参考文献およびより具体的な参考文献に記載されているように、行われる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（２ｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照のこと。本明細書中に記載される分析化学、有機合成化学ならびに医薬品化学および製薬化学に関して使用される術語ならびにそれらの研究室での手順および手法は、当該分野において周知であり、通常使用されるものである。化学合成、化学分析、医薬の調製、製剤化および送達ならびに患者の処置に対する標準的な手法が使用される。
本開示に従って使用されるとき、以下の用語は、別段示されない限り、以下の意味を有すると理解されるものとする：
本明細書中で使用されるとき、用語「抗体」は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン（Ｉｇ）分子の免疫学的に活性な部分、すなわち、抗原に特異的に結合する（免疫反応する）抗原結合部位を含む分子のことを指す。「特異的に結合する」または「免疫反応する」または「免疫特異的に結合する」は、抗体が、所望の抗原の１つ以上の抗原決定基と反応し、かつ他のポリペプチドと反応しないか、またはかなり低い親和性（Ｋｄ＞１０−６）で結合することを意味する。抗体には、ポリクローナル、モノクローナル、キメラ、ｄＡｂ（ドメイン抗体）、一本鎖、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメント、ｓｃＦｖならびにＦａｂ発現ライブラリーが含まれるが、これらに限定されない。
基本的な抗体の構造単位は、四量体を構成すると知られている。各四量体は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対が、１本の「軽」鎖（約２５ｋＤａ）および１本の「重」鎖（約５０〜７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主に抗原認識に関与する約１００〜１１０またはそれ以上のアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主にエフェクター機能に関与する定常領域を定義する。一般に、ヒトから得られる抗体分子は、その分子に存在する重鎖の性質によって互いに異なるＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤクラスのいずれかに関する。ある特定のクラスは、同様に、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２などのようなサブクラスを有する。さらに、ヒトでは、軽鎖は、カッパー鎖またはラムダ鎖であり得る。
用語「モノクローナル抗体」（ＭＡｂ）または「モノクローナル抗体組成物」は、本明細書中で使用されるとき、ユニークな軽鎖遺伝子産物およびユニークな重鎖遺伝子産物からなる抗体分子のただ１つの分子種を含む抗体分子の集団のことを指す。特に、モノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、その集団の全分子において同一である。ＭＡｂは、それに対するユニークな結合親和性によって特徴付けられる抗原の特定のエピトープと免疫反応することができる抗原結合部位を含む。
用語「抗原結合部位」または「結合部分」とは、抗原結合に関与する免疫グロブリン分子の一部のことを指す。抗原結合部位は、重（「Ｈ」）鎖および軽（「Ｌ」）鎖のＮ末端可変（「Ｖ」）領域のアミノ酸残基によって形成される。「超可変領域」と称される、重鎖および軽鎖のＶ領域内の３つの高度に相違する一続きが、「フレームワーク領域」または「ＦＲ」として公知のより保存された隣接する一続きの間に挿入されている。したがって、用語「ＦＲ」とは、天然に、免疫グロブリンの超可変領域の間に隣接して見られるアミノ酸配列のことを指す。抗体分子において、軽鎖の３つの超可変領域および重鎖の３つの超可変領域は、３次元空間において互いに対して配置されることにより、抗原結合表面を形成する。抗原結合表面は、結合される抗原の３次元表面に相補的であり、重鎖および軽鎖の各々の３つの超可変領域は、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」と称される。各ドメインに対するアミノ酸の割り当ては、Ｋａｂａｔ Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７および１９９１））またはＣｈｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７），Ｃｈｏｔｈｉａら、Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７８−８８３（１９８９）の定義に従う。
本明細書中で使用されるとき、用語「エピトープ」は、免疫グロブリン、ｓｃＦｖまたはＴ細胞レセプターへの特異的結合が可能な任意のタンパク質決定基を含む。用語「エピトープ」は、免疫グロブリンまたはＴ細胞レセプターへの特異的結合が可能な任意のタンパク質決定基を含む。エピトープ決定基は、通常、アミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面群からなり、通常、特異的な３次元構造の特徴ならびに特異的な電荷の特徴を有する。例えば、抗体は、ポリペプチドのＮ末端またはＣ末端のペプチドに対して作製され得る。解離定数が≦１μＭ；例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは、≦１０ｎＭ、より好ましくは、≦１ｎＭであるとき、抗体は、抗原に特異的に結合する。
本明細書中で使用されるとき、用語「免疫学的結合」および「免疫学的結合特性」とは、免疫グロブリン分子とその免疫グロブリンが特異的である抗原との間に生じるタイプの非共有結合性の相互作用のことを指す。免疫学的結合の相互作用の強度または親和性は、その相互作用の解離定数（Ｋｄ）に関して表現され得、ここで、より小さいＫｄが、より高い親和性に相当する。選択されたポリペプチドの免疫学的結合特性は、当該分野で周知の方法を用いて定量化され得る。そのような方法の１つは、抗原結合部位／抗原複合体の形成および解離の速度を計測することを必要とし、ここで、それらの速度は、複合体のパートナーの濃度、相互作用の親和性および両方向の速度に等しく影響する幾何学的パラメータに依存する。したがって、「会合（ｏｎ）速度定数」（Ｋｏｎ）と「解離（ｏｆｆ）速度定数」（Ｋｏｆｆ）の両方が、濃度の計算ならびに会合および解離の実際の速度によって決定され得る（Ｎａｔｕｒｅ ３６１：１８６−８７（１９９３）を参照のこと）。Ｋｏｆｆ／Ｋｏｎの比は、親和性に関係しないすべてのパラメータの相殺を可能にし、解離定数Ｋｄに等しい（Ｄａｖｉｅｓら（１９９０）Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ ５９：４３９−４７３を広く参照のこと）。本発明の抗体は、平衡結合定数（Ｋｄ）が、アッセイ（例えば、放射性リガンド結合アッセイまたは当業者に公知の類似のアッセイ）によって計測されたとき、≦１μＭ、例えば、≦１００ｎＭ、好ましくは、≦１０ｎＭ、より好ましくは、≦１ｎＭであるとき、その標的に特異的に結合する。
本明細書中で使用される場合、用語「単離されたポリヌクレオチド」は、ゲノム、ｃＤＮＡもしくは合成起源のポリヌクレオチドまたはそれらのいくつかの組み合わせを意味するものとし、その起源によって、「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）その「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見られるポリヌクレオチドの全部または一部と会合していないか、（２）天然では連結されていないポリヌクレオチドに作動可能に連結されているか、または（３）天然では、より大きな配列の一部として存在しない。本発明に係るポリヌクレオチドには、本明細書中に記載される、重鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子および軽鎖免疫グロブリン分子をコードする核酸分子が含まれる。
本明細書中で言及される場合、用語「単離されたタンパク質」は、ｃＤＮＡ、組換えＲＮＡもしくは合成起源のタンパク質またはそれらのいくつかの組み合わせを意味し、その起源または由来の源によって、「単離されたタンパク質」は、（１）天然に見られるタンパク質と会合していないか、（２）同じ起源由来の他のタンパク質を含まない、例えば、マウス（ｍａｒｉｎｅ）タンパク質を含まないか、（３）異なる種由来の細胞によって発現されるか、または（４）天然に存在しない。
用語「ポリペプチド」は、天然のタンパク質、ポリペプチド配列のフラグメントまたはアナログのことを指す一般的な用語として本明細書中で使用される。ゆえに、天然のタンパク質、フラグメントおよびアナログは、ポリペプチド類の種である。本発明に係るポリペプチドは、本明細書中に記載される重鎖免疫グロブリン分子および軽鎖免疫グロブリン分子、ならびにその重鎖免疫グロブリン分子を軽鎖免疫グロブリン分子（例えば、カッパー軽鎖免疫グロブリン分子）とともに含む組み合わせおよびその逆によって形成される抗体分子、ならびにそれらのフラグメントおよびアナログを含む。
本明細書中で使用される場合、用語「天然に存在する」は、ある対象に対して適用されるとき、ある対象が天然に見ることができる事実を指す。例えば、天然における起源から単離され得る、および研究室において人によってまたは別の方法で意図的に改変されていない、ある生物（ウイルスを含む）に存在するポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列は、天然に存在する。
本明細書中で使用される場合、用語「作動可能に連結される」とは、構成要素が意図される様式で機能するのを可能にする関係性で存在すると記載されるそれらの構成要素の位置のことを指す。コード配列に「作動可能に連結された」調節配列は、そのコード配列の発現がその調節配列に適合した条件下で達成されるような方法でライゲートされる。
本明細書中で使用される場合、用語「調節配列」とは、それにライゲートされているコード配列の発現およびプロセシングをもたらすのに必要なポリヌクレオチド配列のことを指す。そのような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なり、原核生物では、そのような調節配列としては、一般に、プロモーター、リボソーム結合部位および転写終結配列が挙げられ、真核生物では、一般に、そのような調節配列としては、プロモーターおよび転写終結配列が挙げられる。用語「調節配列」は、その存在が発現およびプロセシングにとって不可欠であるすべての構成要素を最低でも含むことが意図されており、その存在が有益であるさらなる構成要素、例えば、リーダー配列および融合パートナー配列も含み得る。本明細書中で言及される用語「ポリヌクレオチド」は、少なくとも１０塩基長のヌクレオチドの重合体ホウ素（ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｂｏｒｏｎ）、リボヌクレオチドもしくはデオキシヌクレオチドまたはいずれかのタイプのヌクレオチドの改変された形態を意味する。この用語には、一本鎖および二本鎖の形態のＤＮＡが含まれる。
本明細書中で使用されるとき、２０種の従来のアミノ酸およびそれらの省略形は、従来の使用法に従う。Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ ａｎｄ Ｄ．Ｒ．Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ Ｍａｓｓ．（１９９１））を参照のこと。２０種の従来のアミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄ−アミノ酸）、非天然のアミノ酸（例えば、α−，α−二置換アミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸および他の非従来のアミノ酸）もまた、本発明のポリペプチドに適した構成要素であり得る。非従来のアミノ酸の例としては、４ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタメート、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニンならびに他の同様のアミノ酸およびイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）が挙げられる。本明細書中で使用されるポリペプチドの表記では、標準的な使用法および慣習に従って、左側の方向は、アミノ末端の方向であり、右側の方向は、カルボキシ末端の方向である。
ポリペプチドに適用されるとき、用語「実質的な同一性」は、２つのペプチド配列が、例えば、デフォルトのギャップウェイトを使用するプログラムＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴによって、最適にアラインメントされたとき、少なくとも８０パーセントの配列同一性、好ましくは、少なくとも９０パーセントの配列同一性、より好ましくは、少なくとも９５パーセントの配列同一性、最も好ましくは、少なくとも９９パーセントの配列同一性を共有することを意味する。
好ましくは、同一でない残基位置は、保存的なアミノ酸置換によって異なる。
保存的なアミノ酸置換とは、類似の側鎖を有する残基が互いに交換可能であることを指す。例えば、脂肪族側鎖を有するアミノ酸の群は、グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシンであり；脂肪族ヒドロキシル側鎖を有するアミノ酸の群は、セリンおよびトレオニンであり；アミド含有側鎖を有するアミノ酸の群は、アスパラギンおよびグルタミンであり；芳香族側鎖を有するアミノ酸の群は、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファンであり；塩基性側鎖を有するアミノ酸の群は、リジン、アルギニンおよびヒスチジンであり；硫黄含有側鎖を有するアミノ酸の群は、システインおよびメチオニンである。好ましい保存的なアミノ酸置換の群は、バリン−ロイシン−イソロイシン、フェニルアラニン−チロシン、リジン−アルギニン、アラニンバリン、グルタミン酸−アスパラギン酸およびアスパラギン−グルタミンである。
本明細書中で論じられるように、抗体または免疫グロブリン分子のアミノ酸配列における軽微なバリエーションは、そのアミノ酸配列内のバリエーションが、少なくとも７５％、より好ましくは、少なくとも８０％、９０％、９５％、最も好ましくは、９９％維持するなら、本発明によって包含されると企図される。特に、保存的なアミノ酸の置換が、企図される。保存的置換は、アミノ酸の側鎖に関連するそれらのファミリー内で起こる置換である。遺伝的にコードされるアミノ酸は、一般に、ファミリーに分けられる：（１）酸性アミノ酸は、アスパラギン酸、グルタミン酸であり；（２）塩基性アミノ酸は、リジン、アルギニン、ヒスチジンであり；（３）無極性アミノ酸は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファンであり、（４）無電荷極性アミノ酸は、グリシン、アスパラギン、グルタミン、システイン、セリン、トレオニン、チロシンである。親水性アミノ酸には、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、ヒスチジン、リジン、セリンおよびトレオニンが含まれる。疎水性アミノ酸には、アラニン、システイン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシンおよびバリンが含まれる。アミノ酸の他のファミリーとしては、（ｉ）脂肪族ヒドロキシファミリーであるセリンおよびトレオニン；（ｉｉ）アミド含有ファミリーであるアスパラギンおよびグルタミン；（ｉｉｉ）脂肪族ファミリーであるアラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；ならびに（ｉｖ）芳香族ファミリーであるフェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンが挙げられる。例えば、特に、以下の置換がフレームワーク部位内のアミノ酸を巻き込まない場合、イソロイシンまたはバリンによるロイシンの単離された置換、グルタミン酸によるアスパラギン酸の単離された置換、セリンによるトレオニンの単離された置換、または構造的に関係するアミノ酸によるあるアミノ酸の同様の置換が、結果として生じる分子の結合または特性に大きな影響を及ぼさないだろうと予想することは、妥当である。アミノ酸の変化が機能性ペプチドをもたらすか否かは、ポリペプチド誘導体の特定の活性をアッセイすることによって容易に判断することができる。アッセイは、本明細書中に詳細に記載される。抗体または免疫グロブリン分子のフラグメントまたはアナログは、当業者によって容易に調製され得る。フラグメントまたはアナログの好ましいアミノ末端およびカルボキシ末端は、機能ドメインの境界付近に存在する。構造ドメインおよび機能ドメインは、ヌクレオチド配列および／またはアミノ酸配列のデータを公的または専売の配列データベースと比較することによって同定され得る。好ましくは、コンピュータ化された比較方法を使用することにより、公知の構造および／または機能の他のタンパク質に存在する配列モチーフまたは予測されるタンパク質立体配座ドメインが同定される。公知の３次元構造に折り畳まれるタンパク質配列を同定する方法は、公知である。Ｂｏｗｉｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５３：１６４（１９９１）。したがって、前述の例は、当業者が、本発明に係る構造ドメインおよび機能ドメインを定義するために使用され得る配列モチーフおよび構造的立体配座を認識できることを証明する。
好ましいアミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させるもの、（２）酸化に対する感受性を低下させるもの、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させるもの、（４）結合親和性を変化させるもの、および（４）そのようなアナログの他の物理化学的または機能的な特性を付与するかまたは改変するものである。アナログは、天然に存在するペプチド配列以外の配列の様々なムテインを含み得る。例えば、単一または複数のアミノ酸置換（好ましくは、保存的なアミノ酸置換）が、天然に存在する配列（好ましくは、分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの部分）において行われ得る。保存的なアミノ酸置換は、親配列の構造的な特徴を実質的に変更しないだろう（例えば、置換アミノ酸は、親配列に存在するらせんを破壊しないかまたは親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破壊しない傾向があるだろう）。当該分野において認められているポリペプチドの二次構造および三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；およびＴｈｏｒｎｔｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５４：１０５（１９９１）に記載されている。
本明細書中で使用されるとき、用語「標識」または「標識された」とは、例えば、放射標識されたアミノ酸の組み込み、またはマークされたアビジン（例えば、光学的方法または熱量測定法によって検出され得る蛍光マーカーまたは酵素活性を含むストレプトアビジン）によって検出され得るビオチニル部分のポリペプチドへの付着による、検出可能なマーカーの組み込みのことを指す。ある特定の状況において、標識またはマーカーは、治療的でもあり得る。ポリペプチドおよび糖タンパク質を標識する様々な方法は、当該分野で公知であり、使用され得る。ポリペプチドに対する標識の例としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：放射性同位体または放射性核種（例えば、３Ｈ、１４Ｃ、１５Ｎ、３５Ｓ、９０Ｙ、９９Ｔｃ、１１１Ｉｎ、１２５Ｉ、１３１Ｉ）、蛍光標識（例えば、ＦＩＴＣ、ローダミン、ランタニド発光体）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、ｐ−ガラクトシダーゼ、ルシフェラーゼ、アルカリホスファターゼ）、化学発光、ビオチニル基、二次レポーターによって認識される所定のポリペプチドエピトープ（例えば、ロイシンジッパー対配列、二次抗体に対する結合部位、金属結合ドメイン、エピトープタグ）。いくつかの実施形態において、標識は、潜在的な立体障害を減少させるために、様々な長さのスペーサーアームによって付着される。本明細書中で使用される場合、用語「医薬品または薬物」とは、患者に適切に投与されたとき、所望の治療効果を誘導することができる化学的化合物または組成物のことを指す。
本明細書中の他の化学用語は、Ｔｈｅ ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（Ｐａｒｋｅｒ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ（１９８５））によって例証されているような当該分野における従来の使用法に従って使用される。
本明細書中で使用されるとき、「実質的に純粋」は、目的の種が、存在する優勢な種である（すなわち、それが、モル濃度基準で、その組成物中の他の任意の個別の種よりも豊富である）こと、好ましくは、実質的に精製された画分がその組成物であることを意味し、ここで、その目的の種は、存在するすべての高分子種の少なくとも約５０パーセント（モル濃度基準で）を構成する。
一般に、実質的に純粋な組成物は、その組成物中に存在するすべての高分子種の約８０パーセント超、より好ましくは、約８５％、９０％、９５％および９９％超を構成し得る。最も好ましくは、目的の種は、必要不可欠な均一性まで精製され（夾雑物種は、従来の検出方法によってその組成物中に検出され得ず）、ここで、その組成物は、単一の高分子種から本質的になる。
患者という用語は、ヒトおよび獣医学の被験体を含む。
抗体
所与の標的（例えば、ＣＤ４７、腫瘍関連抗原または他の標的）またはその誘導体、フラグメント、アナログ、ホモログもしくはオルソログに対するポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を作製するための当該分野内で公知の様々な手順が、使用され得る（例えば、参照により本明細書中に援用されるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｅ，ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。
抗体は、周知の手法（例えば、主に免疫血清のＩｇＧ画分を提供するプロテインＡまたはプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィー）によって精製される。続いてまたはあるいは、探し求められた免疫グロブリンの標的である特異的な抗原またはそのエピトープが、カラム上に固定化されることにより、イムノアフィニティークロマトグラフィーによって免疫特異的抗体が精製され得る。免疫グロブリンの精製は、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎによって論じられている（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｉｎｃ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ ＰＡによって出版されたＴｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，Ｖｏｌ．１４，Ｎｏ．８（Ａｐｒｉｌ １７，２０００），ｐｐ．２５−２８）。
いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、モノクローナル抗体である。モノクローナル抗体は、例えば、本明細書中に提供される実施例に示される手順を使用することによって作製される。抗体は、例えば、高レベルの所与の標的を表面上に発現している細胞トランスフェクタントの組み合わせでＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫することによっても、作製される。次いで、ミエローマ／Ｂ細胞融合に由来するハイブリドーマを、選択された標的に対する反応性についてスクリーニングする。
モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載された方法）を用いて、調製される。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスターまたは他の適切な宿主動物が、代表的には、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することができるリンパ球を誘発する免疫剤で免疫される。あるいは、それらのリンパ球は、インビトロで免疫され得る。
上記免疫剤には、代表的には、タンパク質抗原、そのフラグメントまたはその融合タンパク質が含まれ得る。一般に、ヒト起源の細胞が望ましい場合、末梢血リンパ球が使用されるか、または非ヒト哺乳動物の起源が望ましい場合、脾臓細胞もしくはリンパ節細胞が使用される。次いで、それらのリンパ球は、ポリエチレングリコールなどの好適な融合剤を使用して不死化細胞株と融合されることにより、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。不死化細胞株は、通常、癌化された哺乳動物細胞、特に、げっ歯類、ウシおよびヒト起源のミエローマ細胞である。通常、ラットまたはマウスのミエローマ細胞株が使用される。ハイブリドーマ細胞は、好ましくは、融合されていない不死化細胞の成長または生存を阻害する１つ以上の物質を含む、好適な培養液中で培養され得る。例えば、親細胞が、酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、そのハイブリドーマ用の培養液は、代表的には、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含み（「ＨＡＴ培地」）、それらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の成長を妨げる。
好ましい不死化細胞株は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による安定した高レベルの抗体発現を支持し、ＨＡＴ培地などの培地に感受性である細胞株である。より好ましい不死化細胞株は、例えば、Ｓａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣａｌｉｆｏｒｎｉａおよびＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａから入手可能であるマウスミエローマ株である。ヒトミエローマ細胞株およびマウス−ヒトヘテロミエローマ細胞株もまた、モノクローナル抗体の作製について報告されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１−６３）を参照のこと）。
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養された培養液が、その抗原に対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされ得る。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）または酵素結合免疫吸着測定法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂｅｎｔ ａｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ））によって測定される。そのような手法およびアッセイは、当該分野で公知である。モノクローナル抗体の結合親和性は、例えば、Ｍｕｎｓｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって測定され得る。さらに、モノクローナル抗体の治療的な用途では、標的抗原に対して高度の特異性および高い結合親和性を有する抗体を同定することが重要である。
所望のハイブリドーマ細胞が同定された後、クローンを限界希釈法によってサブクローン化し、標準的な方法によって生育させることができる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３を参照のこと）。この目的に好適な培養液としては、例えば、ダルベッコ改変イーグル培地およびＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物の腹水としてインビボで生育することができる。
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製法（例えば、プロテインＡ−セファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィー）によって培養液または腹水から単離され得るかまたは精製され得る。
モノクローナル抗体は、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されている方法などの組換えＤＮＡ法によっても作製され得る。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され得、配列決定され得る。本発明のハイブリドーマ細胞は、そのようなＤＮＡの好ましい供給源として働く。いったん単離されたら、ＤＮＡは、発現ベクター内に配置され得、次いで、その発現ベクターは、宿主細胞（例えば、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または免疫グロブリンタンパク質を別途産生しないミエローマ細胞）にトランスフェクトされることにより、組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成がもたらされる。そのＤＮＡは、例えば、相同なマウス配列の代わりにヒト重鎖定常ドメインおよびヒト軽鎖定常ドメインに対するコード配列を用いること（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８１２−１３（１９９４）を参照のこと）または非免疫グロブリンポリペプチドに対するコード配列の全部または一部を免疫グロブリンコード配列に共有結合的につなぐことによっても、改変され得る。そのような非免疫グロブリンポリペプチドは、本発明の抗体の定常ドメインの代わりに用いられるか、または本発明の抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインの代わりに用いられることにより、キメラ二価抗体が作製され得る。
本発明のモノクローナル抗体には、ヒト化抗体またはヒト抗体が含まれる。これらの抗体は、投与された免疫グロブリンに対してヒトが免疫応答を発生させることなくヒトに投与することに適している。ヒト化型の抗体は、主としてヒト免疫グロブリンの配列を含み、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含む、キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそれらのフラグメント（例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または抗体の他の抗原結合部分配列）である。ヒト化は、例えば、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法（Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））に従って、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を用いることによって、行われる（米国特許第５，２２５，５３９号も参照のこと）。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。ヒト化抗体は、例えば、レシピエント抗体にも、移入されるＣＤＲまたはフレームワーク配列にも見られない残基も含む。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、代表的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ここで、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべては、非ヒト免疫グロブリンのすべてまたは実質的にすべてに対応し、フレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべては、ヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のすべてまたは実質的にすべてである。ヒト化抗体は、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）の少なくとも一部、代表的には、ヒト免疫グロブリンの少なくとも一部も最適に含む（Ｊｏｎｅｓら、１９８６；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８；およびＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，２：５９３−５９６（１９９２））。
完全ヒト抗体は、ＣＤＲを含む軽鎖と重鎖の両方の配列全体がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。そのような抗体は、本明細書中で「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を作製する、トリオーマ法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照のこと）；およびＥＢＶハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅら、１９８５ Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）を使用することによって調製され得る。モノクローナル抗体は、ヒトハイブリドーマを使用することによって（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロにおいてヒトＢ細胞をエプスタイン・バーウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅら、１９８５ Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）、使用され得、作製され得る。
さらに、ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含むさらなる手法を用いても作製され得る（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１（１９９１）を参照のこと）。同様に、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン遺伝子座をトランスジェニック動物、例えば、内在性の免疫グロブリン遺伝子が部分的にまたは完全に不活性されたマウスに導入することによって作製され得る。抗原曝露（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）の際、ヒト抗体の産生が観察され、それは、遺伝子再配列、集合および抗体レパートリーを含むすべての点においてヒトに見られるものによく似ている。このアプローチは、例えば、米国特許第５，５４５，８０７号；同第５，５４５，８０６号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，６６１，０１６号ならびにＭａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０，７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら、Ｎａｔｕｒｅ ３６８ ８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ ３６８，８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １４，８２６（１９９６）；およびＬｏｎｂｅｒｇ ａｎｄ Ｈｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３ ６５−９３（１９９５）に記載されている。
ヒト抗体はさらに、抗原曝露に応答して、動物の内因性抗体ではなく完全ヒト抗体を産生するように改変されたトランスジェニック非ヒト動物を用いて作製され得る（ＰＣＴ公開ＷＯ９４／０２６０２を参照のこと）。その非ヒト宿主における重鎖免疫グロブリン鎖および軽鎖免疫グロブリン鎖をコードする内因性遺伝子は、無力にされており、ヒト重鎖グロブリンおよびヒト軽鎖免疫グロブリンをコードする活性な遺伝子座が、宿主のゲノムに挿入される。それらのヒト遺伝子は、例えば、要求性のヒトＤＮＡセグメントを含む酵母人工染色体を使用して、組み込まれる。次いで、所望の改変のすべてを提供する動物は、それらの改変のすべての相補鎖（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）よりも少ない相補鎖を含む中間のトランスジェニック動物を交雑することによって子孫として得られる。そのような非ヒト動物の例は、ＰＣＴ公開ＷＯ９６／３３７３５およびＷＯ９６／３４０９６に開示されているようなＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）と呼ばれるマウスである。この動物は、完全ヒト免疫グロブリンを分泌するＢ細胞を産生する。それらの抗体は、目的の免疫原で免疫した後にその動物から直接、例えば、ポリクローナル抗体の調製物として、あるいは、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマなどのその動物に由来する不死化されたＢ細胞から、得ることができる。さらに、ヒト可変領域を有する免疫グロブリンをコードする遺伝子が、抗体を直接得るために、回収され、発現され得るか、または抗体のアナログ（例えば、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子）を得るためにさらに改変され得る。
内在性の免疫グロブリン重鎖の発現を欠くマウスとして例証される非ヒト宿主を作出する方法の例は、米国特許第５，９３９，５９８号に開示されている。それは、内在性の重鎖遺伝子座の再配列を防ぐためおよび再配列された免疫グロブリン重鎖遺伝子座の転写物の形成を防ぐために、胚性幹細胞において少なくとも１つのその遺伝子座からＪセグメント遺伝子を欠失させる工程（その欠失は、選択マーカーをコードする遺伝子を含む標的化ベクターによって達成される）；ならびにその体細胞および生殖細胞が上記選択マーカーをコードする遺伝子を含む上記胚性幹細胞からトランスジェニックマウスを作出する工程を含む方法によって得ることができる。
ヒト抗体などの目的の抗体を作製するための１つの方法は、米国特許第５，９１６，７７１号に開示されている。この方法は、重鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、培養中の１つの哺乳動物宿主細胞に導入する工程、軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む発現ベクターを、別の哺乳動物宿主細胞に導入する工程、およびそれらの２つの細胞を融合することにより、ハイブリッド細胞を形成させる工程を含む。そのハイブリッド細胞は、その重鎖および軽鎖を含む抗体を発現する。
この手順に対するさらなる改善において、免疫原上の臨床的に関連性のあるエピトープを同定するための方法およびその関連性のあるエピトープに高親和性で特異的に結合する抗体を選択するための相関する方法は、ＰＣＴ公開ＷＯ９９／５３０４９に開示されている。
上記抗体は、上に記載された一本鎖抗体をコードするＤＮＡセグメントを含むベクターによって発現され得る。
これらには、ベクター、リポソーム、裸のＤＮＡ、アジュバントに支援されるＤＮＡ、遺伝子銃、カテーテルなどが含まれ得る。ベクターには、標的化部分（例えば、細胞表面レセプターに対するリガンド）および核酸結合部分（例えば、ポリリジン）を有するＷＯ９３／６４７０１に記載されているような化学的結合体、ウイルスベクター（例えば、ＤＮＡウイルスベクターまたはＲＮＡウイルスベクター）、標的部分（例えば、標的細胞に特異的な抗体）および核酸結合部分（例えば、プロタミン）を含む融合タンパク質であるＰＣＴ／ＵＳ９５／０２１４０（ＷＯ９５／２２６１８）に記載されているような融合タンパク質、プラスミド、ファージなどが含まれる。それらのベクターは、染色体、非染色体または合成であり得る。
好ましいベクターとしては、ウイルスベクター、融合タンパク質および化学的結合体が挙げられる。レトロウイルスベクターには、モロニーマウス白血病ウイルスが含まれる。ＤＮＡウイルスベクターが、好ましい。これらのベクターには、ポックスベクター（例えば、オルトポックスまたはアビポックスベクター）、ヘルペスウイルスベクター（例えば、単純ヘルペスＩウイルス（ＨＳＶ）ベクター（Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ，６４：４８７（１９９５）；Ｌｉｍ，Ｆ．ら、ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ，Ｅｄ．（Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｅｎｇｌａｎｄ）（１９９５）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．：Ｕ．Ｓ．Ａ．９０：７６０３（１９９３）；Ｇｅｌｌｅｒ，Ａ．Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ８７：１１４９（１９９０）を参照のこと）、アデノウイルスベクター（ＬｅＧａｌ ＬａＳａｌｌｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５９：９８８（１９９３）；Ｄａｖｉｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ ３：２１９（１９９３）；Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６９：２００４（１９９５）を参照のこと）およびアデノ随伴ウイルスベクター（Ｋａｐｌｉｔｔ，Ｍ．Ｇ．ら、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．８：１４８（１９９４）を参照のこと）が含まれる。
ポックスウイルスベクターは、遺伝子を細胞の細胞質に導入する。アビポックスウイルスベクターは、核酸の短期間の発現だけをもたらす。アデノウイルスベクター、アデノ随伴ウイルスベクターおよび単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）ベクターは、神経細胞に核酸を導入する場合に好ましい。アデノウイルスベクターは、ＨＳＶベクターよりも短いアデノ随伴ウイルス（約４ヶ月間）よりも短い期間の発現（約２ヶ月間）をもたらす。選択される特定のベクターは、標的細胞および処置される状態に依存する。導入は、標準的な手法、例えば、感染、トランスフェクション、形質導入または形質転換によって行われ得る。遺伝子導入の様式の例としては、例えば、裸のＤＮＡ、ＣａＰＯ４沈殿、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、プロトプラスト融合、リポフェクション、細胞マイクロインジェクションおよびウイルスベクターが挙げられる。
上記ベクターを用いることにより、本質的に任意の所望の標的細胞を標的化することができる。例えば、定位注射を用いることにより、ベクター（例えば、アデノウイルス、ＨＳＶ）を所望の位置に方向づけることができる。さらに、ＳｙｎｃｈｒｏＭｅｄ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍなどのミニポンプ注入システムを使用する脳室内（ｉｃｖ）注入によって、粒子が送達され得る。対流と呼ばれる細胞間隙流（ｂｕｌｋ ｆｌｏｗ）に基づく方法もまた、大分子を脳の広い範囲に送達するのに有効であると立証されており、ベクターを標的細胞に送達する際に有用であり得る（Ｂｏｂｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１：２０７６−２０８０（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６６：２９２−３０５（１９９４）を参照のこと）。使用され得る他の方法としては、カテーテル、静脈内、非経口、腹腔内および皮下注射、ならびに経口または他の公知の投与経路が挙げられる。
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に対して結合特異性を有する抗体である。本件において、結合特異性の１つは、ＣＤ４７またはその任意のフラグメントなどの標的に対するものである。第２の結合標的は、他の任意の抗原であり、有益には、細胞表面タンパク質またはレセプターもしくはレセプターサブユニットである。
二重特異性抗体を作製するための方法は、当該分野で公知である。従来、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現に基づき、ここで、その２つの重鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖および軽鎖のランダムな組み合わせのおかげで、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０個の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、そのうちの１つだけが、正しい二重特異性構造を有する。その正しい分子の精製は、通常、アフィニティークロマトグラフィー工程によって行われる。同様の手順は、１９９３年５月１３日に公開されたＷＯ９３／０８８２９およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
本発明の二重特異性抗体および／または一価抗体は、当該分野において認められている種々の手法（２０１１年８月１６日に出願された同時係属出願であるＷＯ２０１２／０２３０５３（その内容のすべてが本明細書に参照により援用される）に開示されている手法を含む）のいずれかを用いて作製され得る。ＷＯ２０１２／０２３０５３に記載されている方法は、ヒト免疫グロブリンと構造が同一である二重特異性抗体を作製する。このタイプの分子は、２コピーのユニークな重鎖ポリペプチド、定常カッパードメインに融合された第１の軽鎖可変領域および定常ラムダドメインに融合された第２の軽鎖可変領域から構成される。各結合部位は、重鎖と軽鎖の両方が寄与する異なる抗原特異性を示す。軽鎖可変領域は、ラムダまたはカッパーファミリーであり得、好ましくは、それぞれラムダ定常ドメインおよびカッパー定常ドメインに融合される。これは、非天然のポリペプチド接合点の作製を回避するために好ましい。しかしながら、第１の特異性に対して、カッパー軽鎖可変ドメインを定常ラムダドメインに融合し、第２の特異性に対して、ラムダ軽鎖可変ドメインを定常カッパードメインに融合することによって、本発明の二重特異性抗体を得ることも可能である。ＷＯ２０１２／０２３０５３に記載されている二重特異性抗体は、新しい完全ヒト二重特異性ＩｇＧ形式である、ＩｇＧκλ抗体または「κλ型」と称される。このκλ型の形式は、標準的なモノクローナル抗体と識別不能な特徴を有する標準的なＩｇＧ分子と識別不能な二重特異性抗体の親和性精製を可能にし、ゆえに、以前の形式と比べて好ましい。
上記方法の必須の工程は、同じ重鎖可変ドメインを共有する異なる抗原特異性を有する２つの抗体Ｆｖ領域（各々が、可変軽鎖ドメインおよび可変重鎖ドメインによって構成されている）の同定である。モノクローナル抗体およびそのフラグメントを作製するための数多くの方法が、報告されている（例えば、参照により本明細書中に援用されるＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ Ｅ，ａｎｄ Ｌａｎｅ Ｄ，１９８８，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）。完全ヒト抗体は、ＣＤＲ１および２を含む軽鎖と重鎖の両方の配列がヒト遺伝子に由来する抗体分子である。ＣＤＲ３領域は、ヒト起源であり得るか、または合成の手段によって設計され得る。そのような抗体は、本明細書中で「ヒト抗体」または「完全ヒト抗体」と呼ばれる。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトモノクローナル抗体を作製する、トリオーマ法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照のこと）；およびＥＢＶハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅら、１９８５ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）を使用することによって調製され得る。ヒトモノクローナル抗体は、ヒトハイブリドーマを使用することによって（Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８０：２０２６−２０３０を参照のこと）、またはインビトロにおいてヒトＢ細胞をエプスタイン・バーウイルスで形質転換することによって（Ｃｏｌｅら、１９８５ Ｉｎ：ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ ＡＮＤ ＣＡＮＣＥＲ ＴＨＥＲＡＰＹ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６を参照のこと）、使用され得、作製され得る。
モノクローナル抗体は、例えば、標的抗原またはその免疫原性フラグメント、誘導体もしくはバリアントで動物を免疫することによって、産生される。あるいは、動物は、標的抗原をコードする核酸分子を含むベクターでトランスフェクトされた細胞で免疫される（その標的抗原は、発現されて、トランスフェクトされた細胞の表面と会合される）。異種の非ヒト動物を作出するための種々の手法が、当該分野で周知である。例えば、その全体が本明細書に参照により援用される、米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号を参照のこと。
あるいは、抗体は、抗体または抗原結合ドメイン配列を含むライブラリーを標的抗原への結合についてスクリーニングすることによって得られる。このライブラリーは、例えば、集合したファージ粒子の表面上に発現されるバクテリオファージコートタンパク質とのタンパク質融合物またはペプチド融合物として、およびファージ粒子内に含められるコードＤＮＡ配列として、バクテリオファージにおいて調製される（すなわち、「ファージディスプレイライブラリー」）。
次いで、ミエローマ／Ｂ細胞融合に由来するハイブリドーマは、標的抗原に対する反応性についてスクリーニングされる。モノクローナル抗体は、例えば、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）によって記載された方法）を用いて、調製される。ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスターまたは他の適切な宿主動物が、代表的には、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生するかまたは産生することができるリンパ球を誘発する免疫剤で免疫される。あるいは、それらのリンパ球は、インビトロで免疫され得る。
厳密には不可能ではないが、同じ重鎖可変ドメインを有するが異なる抗原に対する種々の抗体が思いがけず同定されることは、非常に稀である。実際には、ほとんどの場合、重鎖は、抗原結合表面に大きく寄与し、配列が最も可変性である。特に、重鎖のＣＤＲ３は、配列、長さおよび構造が最も多様なＣＤＲである。したがって、異なる抗原に特異的な２つの抗体は、ほぼ必ず異なる重鎖可変ドメインを有するだろう。
同時係属出願ＷＯ２０１２／０２３０５３に開示されている方法は、この限界を克服し、重鎖可変ドメインがすべてのライブラリーメンバーに対して同じであるがゆえに多様性が軽鎖可変ドメインに限定される抗体ライブラリーを使用することによって、同じ重鎖可変ドメインを有する抗体の単離を大きく促進する。そのようなライブラリーは、例えば、同時係属出願ＷＯ２０１０／１３５５５８およびＷＯ２０１１／０８４２５５（これらの各々のすべてが、本明細書に参照により援用される）に記載されている。しかしながら、軽鎖可変ドメインは、重鎖可変ドメインとともに発現されるので、両方のドメインが、抗原結合に寄与し得る。このプロセスをさらに促進するために、同じ重鎖可変ドメインおよびラムダ可変軽鎖またはカッパー可変軽鎖の多様性を含む抗体ライブラリーが、異なる抗原に対する抗体のインビトロ選択のために並行して使用され得る。このアプローチによって、共通の重鎖を有するが、一方がラムダ軽鎖可変ドメインを有し、他方がカッパー軽鎖可変ドメインを有する２つの抗体（それらは、本発明の完全な免疫グロブリン形式の二重特異性抗体の作製のための構成単位として使用され得る）を同定することが可能になる。本発明の二重特異性抗体は、異なるアイソタイプであり得、それらのＦｃ部分は、異なるＦｃレセプターへの結合特性を変更するため、そして抗体のエフェクター機能ならびにその薬物動態学的特性を改変するために改変され得る。Ｆｃ部分を改変するための数多くの方法が、報告されており、本発明の抗体に適用可能である（例えば、Ｓｔｒｏｈｌ，ＷＲ Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２００９（６）：６８５−９１；米国特許第６，５２８，６２４号；２００９年１月９日に出願されたＰＣＴ／ＵＳ２００９／０１９１１９９を参照のこと）。本発明の方法は、Ｆｃ部分を欠くＦ（ａｂ’）２形式の二重特異性抗体および抗体混合物を作製するためにも使用され得る。
共通の重鎖および２つの異なる軽鎖が、単一の細胞内で同時発現されることにより、本発明の二重特異性抗体の集合が可能になる。それらのポリペプチドのすべてが、同じレベルで発現され、等しく順調に集合することにより、免疫グロブリン分子が形成される場合、単一特異性（同じ軽鎖）と二重特異性（２つの異なる軽鎖）との比は、５０％になるはずである。しかしながら、異なる軽鎖は、異なるレベルで発現され、かつ／または同じ効率で集合しない可能性が高い。ゆえに、異なるポリペプチドの相対的な発現量を調節する手段を用いることにより、それらの内因性発現の特徴または共通の重鎖と集合する異なる性質が補償される。この調節は、プロモーター強度、異なる効率を特徴とする配列内リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）の使用、または転写レベルもしくは翻訳レベルで作用し得るならびにｍＲＮＡ安定性に対して作用する他のタイプの調節エレメントを介して達成され得る。異なる強度の異なるプロモーターとしては、ＣＭＶ（最初期サイトメガロウイルスウイルスプロモーター）；ＥＦ１−１α（ヒト伸長因子１α−サブユニットプロモーター）；Ｕｂｃ（ヒトユビキチンＣプロモーター）；ＳＶ４０（サルウイルス４０プロモーター）が挙げられるだろう。哺乳動物およびウイルス起源の種々のＩＲＥＳもまた、報告されている（例えば、Ｈｅｌｌｅｎ ＣＵ ａｎｄ Ｓａｒｎｏｗ Ｐ．Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ ２００１ １５：１５９３−６１２を参照のこと）。これらのＩＲＥＳは、その長さおよびリボソームリクルート効率が大きく異なり得る。さらに、複数コピーのＩＲＥＳを導入することによって活性をさらに調整することが可能である（Ｓｔｅｐｈｅｎら、２０００ Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９７：１５３６−１５４１）。発現の調節は、一方または他方の軽鎖を発現する個々の遺伝子のコピー数を増加させ、ゆえにそれらの相対的な発現量を改変する、複数の連続した細胞のトランスフェクションによっても達成され得る。本明細書中に提供される実施例は、異なる鎖の相対的発現の制御が、二重特異性抗体の集合および全収率を最大にするために重要であることを証明している。
重鎖と２つの軽鎖との同時発現により、３つの異なる抗体の混合物が細胞培養上清中に生成される：２つの単一特異性二価抗体および１つの二重特異性二価抗体。後者は、目的の分子を得るためにその混合物から精製されなければならない。本明細書中に記載される方法は、カッパー軽鎖定常ドメインまたはラムダ軽鎖定常ドメインと特異的に相互作用するアフィニティークロマトグラフィー媒体（例えば、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ Ｆａｂ Ｋａｐｐａ親和性マトリックスおよびＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ Ｆａｂ Ｌａｍｂｄａ親和性マトリックス（ＢＡＣ ＢＶ，Ｈｏｌｌａｎｄ））を使用することによって、この精製手順を大きく促進する。この多段階のアフィニティークロマトグラフィー精製アプローチは、効率的であり、本発明の抗体に広く適用可能である。これは、クアドローマに由来する各二重特異性抗体または抗体混合物を発現する他の細胞株に対して開発および最適化されなければならない特定の精製方法とは際立って対照的である。実際には、混合物中の異なる抗体の生化学的な特徴が似ている場合、イオン交換クロマトグラフィーなどの標準的なクロマトグラフィー法による分離は、困難であり得るか、または全く不可能であり得る。
他の好適な精製方法としては、２０１２年１０月１９日に出願され、ＷＯ２０１３／０８８２５９として公開された同時係属出願ＰＣＴ／ＩＢ２０１２／００３０２８（この内容のすべてが、本明細書に参照により援用される）に開示されている方法が挙げられる。
二重特異性抗体を作製する他の実施形態において、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメイン（抗体−抗原結合部位）は、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合され得る。この融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとの融合である。その融合物の少なくとも１つに存在する軽鎖の結合のために必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物、および所望であれば、免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクターに挿入され、好適な宿主生物に同時トランスフェクトされる。二重特異性抗体の作製のさらなる詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
ＷＯ９６／２７０１１に記載されている別のアプローチによると、抗体分子対の間の界面を操作することにより、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体のパーセンテージを最大にすることができる。好ましい界面は、抗体定常ドメインのＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖が、より大きな側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換えられる。その大きな側鎖と同一または類似のサイズの代償的な「空洞」は、大きなアミノ酸側鎖をより小さなもの（例えば、アラニンまたはトレオニン）で置き換えることによって、第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体などの他の望まれない最終生成物を上回るヘテロ二量体の収率を高めるための機構が提供される。
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製するための手法は、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製され得る。作製された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定化のための作用物質として使用され得る。
二重特異性抗体フラグメントを組換え細胞培養物から直接作製するためおよび単離するための様々な手法も報告されている。例えば、二重特異性抗体は、ロイシンジッパーを用いて作製された。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。ＦｏｓおよびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結した。ホモ二量体の抗体をヒンジ領域で還元することにより、モノマーが形成され、次いで、再度酸化することにより、ヘテロ二量体の抗体が形成された。この方法は、ホモ二量体の抗体を作製するためにも利用され得る。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）によって記載された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを作製するための代替の機構を提供した。それらのフラグメントは、同じ鎖上の２つのドメイン間で対形成するには短すぎるリンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続された重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。したがって、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、別のフラグメントの相補的なＶＬおよびＶＨドメインと対形成せざるを得ず、それにより、２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体を使用することによって二重特異性抗体フラグメントを作製するための別のストラテジーもまた、報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと。
２より大きい結合価を有する抗体が企図される。例えば、三重特異性抗体が調製され得る。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
例示的な二重特異性抗体は、２つの異なるエピトープ（そのうちの少なくとも１つは、本発明のタンパク質抗原に由来する）に結合し得る。あるいは、免疫グロブリン分子の抗−抗原性（ａｎｔｉ−ａｎｔｉｇｅｎｉｃ）アームが、特定の抗原を発現している細胞に細胞防御機構の焦点を合わせるために、白血球上のトリガー分子、例えば、Ｔ細胞レセプター分子（例えば、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ２８またはＢ７）、またはＩｇＧに対するＦｃレセプター（ＦｃγＲ）（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと組み合わされ得る。二重特異性抗体は、特定の抗原を発現している細胞に細胞傷害剤を向かわせるためにも使用され得る。これらの抗体は、抗原結合アーム、および細胞傷害剤または放射性核種キレート剤（例えば、ＥＯＴＵＢＥ、ＤＰＴＡ、ＤＯＴＡまたはＴＥＴＡ）に結合するアームを有する。目的の別の二重特異性抗体は、本明細書中に記載されるタンパク質抗原に結合し、さらに組織因子（ＴＦ）に結合する。
ヘテロ結合体抗体もまた、本発明の範囲内である。ヘテロ結合体抗体は、２つの共有結合的につながれた抗体から構成される。そのような抗体は、例えば、免疫系細胞を望まれない細胞に標的化するため（米国特許第４，６７６，９８０号を参照のこと）、およびＨＩＶ感染を処置するために（ＷＯ９１／００３６０；ＷＯ９２／２００３７３；ＥＰ０３０８９を参照のこと）提案された。それらの抗体は、架橋剤を必要とする方法を含む合成タンパク質化学において公知の方法を用いてインビトロで調製され得ることが企図される。例えば、ジスルフィド交換反応を用いるか、またはチオエーテル結合を形成することによって、免疫毒素が構築され得る。この目的に適した試薬の例としては、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート、ならびに例えば、米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている試薬が挙げられる。
例えば、癌ならびに／または異常なＣＤ４７の発現および／もしくは活性に関連する他の疾患および障害を処置する際の抗体の有効性を高めるために、本発明の抗体をエフェクター機能に関して改変することが望ましいだろう。例えば、システイン残基をＦｃ領域に導入することによって、この領域における鎖間のジスルフィド結合の形成が可能になり得る。このように作製されたホモ二量体抗体は、改善された内部移行能および／または高い補体媒介性細胞殺滅および抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有し得る（Ｃａｒｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ Ｍｅｄ．，１７６：１１９１−１１９５（１９９２）およびＳｈｏｐｅｓ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８：２９１８−２９２２（１９９２）を参照のこと）。あるいは、二重のＦｃ領域を有することにより、高い補体溶解能およびＡＤＣＣ能を有し得る抗体が、操作され得る（Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ，３：２１９−２３０（１９８９）を参照のこと）。
本発明は、細胞傷害剤（例えば、トキシン（例えば、細菌、真菌、植物もしくは動物起源の酵素的に活性なトキシンまたはそれらのフラグメント）または放射性同位体（すなわち、放射性結合体））に結合体化された抗体を含む免疫結合体にも関する。
使用され得る酵素的に活性なトキシンおよびそのフラグメントとしては、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の活性な非結合性フラグメント、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン（ｓａｒｃｉｎ）、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ−Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、マイトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）およびトリコテシン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）が挙げられる。種々の放射性核種が、放射性結合体化抗体を作製するために利用可能である。例としては、２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙおよび１８６Ｒｅが挙げられる。
抗体と細胞傷害剤との結合体は、種々の二機能タンパク質カップリング剤（例えば、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオール）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（例えば、アジプイミド酸ジメチルＨＣＬ）、活性エステル（例えば、ジスクシンイミジルスベレート）、アルデヒド（例えば、グルタルアルデヒド（ｇｌｕｔａｒｅｌｄｅｈｙｄｅ））、ビス−アジド化合物（例えば、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン）、ビス−ジアゾニウム誘導体（例えば、ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミン）、ジイソシアネート（例えば、トリエン２，６−ジイソシアネート）およびビス−活性フッ素化合物（例えば、１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン））を用いて作製される。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されているように調製され得る。炭素−１４で標識された１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドを抗体に結合体化するための例示的なキレート剤である（ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと）。
当業者は、多種多様の可能性のある部分が、本発明の結果として生じる抗体にカップリングされ得ることを認識するだろう（例えば、“Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｖａｃｃｉｎｅｓ”，Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ｔｏ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｊ．Ｍ．Ｃｒｕｓｅ ａｎｄ Ｒ．Ｅ．Ｌｅｗｉｓ，Ｊｒ（ｅｄｓ），Ｃａｒｇｅｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８９）（この内容は参照により本明細書中に援用される）を参照のこと）。
抗体および他の部分がそれぞれの活性を保持する限り、任意の化学反応によって、その２つの分子に結合するカップリングは達成され得る。この結合は、多くの化学的機構、例えば、共有結合、親和性結合、インターカレーション、配位結合および錯体形成を含み得る。しかしながら、好ましい結合は、共有結合である。共有結合は、既存の側鎖の直接的な縮合または外部の架橋分子の組み込みによって達成され得る。多くの二価または多価の連結剤は、本発明の抗体などのタンパク質分子を他の分子にカップリングする際に有用である。例えば、代表的なカップリング剤としては、有機化合物（例えば、チオエステル、カルボジイミド、スクシンイミドエステル、ジイソシアネート、グルタルアルデヒド、ジアゾベンゼンおよびヘキサメチレンジアミン）が挙げられ得る。この列挙は、当該分野で公知の様々なクラスのカップリング剤を網羅することを目的としておらず、むしろ、より一般的なカップリング剤の例示である（Ｋｉｌｌｅｎ ａｎｄ Ｌｉｎｄｓｔｒｏｍ，Ｊｏｕｒ．Ｉｍｍｕｎ．１３３：１３３５−２５４９（１９８４）；Ｊａｎｓｅｎら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ６２：１８５−２１６（１９８２）；およびＶｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）を参照のこと）。
好ましいリンカーは、文献に記載されている（例えば、ＭＢＳ（Ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル）の使用を記載しているＲａｍａｋｒｉｓｈｎａｎ，Ｓ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４４：２０１−２０８（１９８４）を参照のこと）。オリゴペプチドリンカーを介して抗体にカップリングされるハロゲン化アセチルヒドラジド誘導体の使用を記載している米国特許第５，０３０，７１９号も参照のこと。特に好ましいリンカーとしては、（ｉ）ＥＤＣ（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド塩酸塩；（ｉｉ）ＳＭＰＴ（４−スクシンイミジルオキシカルボニル−アルファ−メチル−アルファ−（２−ピリジル（ｐｒｉｄｙｌ）−ジチオ）−トルエン（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．（２１５５８Ｇ）；（ｉｉｉ）ＳＰＤＰ（スクシンイミジル−６［３−（２−ピリジルジチオ）プロピオンアミド］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ ＃２１６５１Ｇ）；（ｉｖ）スルホ−ＬＣ−ＳＰＤＰ（スルホスクシンイミジル６［３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオンアミド（ｐｒｏｐｉａｎａｍｉｄｅ）］ヘキサノエート（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．Ｃａｔ．＃２１６５−Ｇ）；および（ｖ）ＥＤＣに結合体化されたスルホ−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシスルホ−スクシンイミド：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍ．Ｃｏ．，Ｃａｔ．＃２４５１０）が挙げられる。
上に記載されたリンカーは、異なる特質を有する構成要素を含み、ゆえに、異なる生理化学的特性を有する結合体がもたらされる。例えば、アルキルカルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルは、芳香族カルボキシレートのスルホ−ＮＨＳエステルよりも安定である。ＮＨＳ−エステル含有リンカーは、スルホ−ＮＨＳエステルよりも可溶性でない。さらに、リンカーＳＭＰＴは、立体障害型の（ｓｔｅｒｉｃａｌｌｙ ｈｉｎｄｅｒｅｄ）ジスルフィド結合を含み、高い安定性を有する結合体を形成し得る。ジスルフィド結合は、インビトロにおいて切断されるので、ジスルフィド結合は、一般に他の結合よりも安定でなく、結果として、より少ない結合体しか入手可能にならない。特に、スルホ−ＮＨＳは、カルボジイミド（ｃａｒｂｏｄｉｍｉｄｅ）カップリングの安定性を高め得る。カルボジイミドカップリング（例えば、ＥＤＣ）は、スルホ−ＮＨＳとともに使用されるとき、カルボジイミドカップリング反応だけよりも加水分解に対して抵抗性のエステルを形成する。
本明細書中に開示される抗体は、免疫リポソームとしても製剤化され得る。抗体を含むリポソームは、当該分野で公知の方法（例えば、Ｅｐｓｔｅｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；ならびに米国特許第４，４８５，０４５号および同第４，５４４，５４５号に記載されている方法）によって調製される。長い循環時間を有するリポソームは、米国特許第５，０１３，５５６号に開示されている。
特に有用なリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロールおよびＰＥＧ誘導体化ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含む脂質組成物を用いた逆相蒸発法によって作製され得る。リポソームは、規定のポアサイズのフィルターを通って押し出されることにより、所望の直径を有するリポソームが得られる。本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントは、ジスルフィド交換反応によって、Ｍａｒｔｉｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されているようなリポソームに結合体化され得る。
抗ＣＤ４７抗体の使用
本発明に係る治療的実体の投与は、好適なキャリア、賦形剤、および改善された移行、送達、寛容などをもたらすために製剤に組み込まれる他の作用物質とともに投与されることが理解されるだろう。すべての製薬化学者に知られた処方集：Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（１５ｔｈ ｅｄ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９７５））、特に、その中のＢｌａｕｇ，ＳｅｙｍｏｕｒによるＣｈａｐｔｅｒ ８７には、多数の適切な製剤が見られる。これらの製剤としては、例えば、散剤、ペースト、軟膏、ゼリー、ワックス、オイル、脂質、脂質（陽イオン性または陰イオン性）含有ベシクル（例えば、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（商標））、ＤＮＡ結合体、無水吸収ペースト、水中油型および油中水型エマルジョン、エマルジョンカーボワックス（様々な分子量のポリエチレングリコール）、半固体ゲル、ならびにカーボワックスを含む半固体混合物が挙げられる。製剤中の活性成分が、製剤化によって不活性化されず、その製剤が、投与経路と生理的に適合性であり、許容できるならば、前述の任意の混合物が、本発明に係る処置および治療において適切であり得る。製薬化学者に周知の製剤、賦形剤およびキャリアに関するさらなる情報について、Ｂａｌｄｒｉｃｋ Ｐ．“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ：ｔｈｅ ｎｅｅｄ ｆｏｒ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｇｕｉｄａｎｃｅ．” Ｒｅｇｕｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２（２）：２１０−８（２０００），Ｗａｎｇ Ｗ．“Ｌｙｏｐｈｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ．” Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍ．２０３（１−２）：１−６０（２０００），Ｃｈａｒｍａｎ ＷＮ “Ｌｉｐｉｄｓ，ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ ｄｒｕｇｓ，ａｎｄ ｏｒａｌ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ−ｓｏｍｅ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔｓ．” Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ．８９（８）：９６７−７８（２０００），Ｐｏｗｅｌｌら、“Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｆｏｒ ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ” ＰＤＡ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｓｃｉ Ｔｅｃｈｎｏｌ．５２：２３８−３１１（１９９８）およびこれらの中の引用も参照のこと。
本発明の抗体を含む本発明の治療的な製剤は、癌（例えば、非限定的な例として、白血病、リンパ腫、乳癌、結腸癌、卵巣癌、膀胱癌、前立腺癌、神経膠腫、肺癌および気管支癌、直腸結腸癌、膵癌、食道癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌および腎盂癌、口腔癌および咽頭癌、子宮体癌ならびに／またはメラノーマ）に関連する症状を処置するためまたは軽減するために使用される。本発明は、癌に関連する症状を処置するまたは軽減する方法も提供する。治療的レジメンは、標準的な方法を用いて、癌に罹患している（または癌を発症するリスクがある）被験体、例えば、ヒト患者を同定することによって行われる。
処置の効果は、特定の免疫関連障害を診断するためまたは処置するための任意の公知の方法と併せて判断される。免疫関連障害の１つ以上の症状の軽減は、抗体が臨床的有用性をもたらすことを示唆する。
所望の特異性を有する抗体をスクリーニングするための方法としては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）および当該分野で公知の他の免疫学的に媒介される手法が挙げられるが、これらに限定されない。
標的（例えば、ＣＤ４７、腫瘍関連抗原または他の抗原（またはそれらのフラグメント））に対する抗体は、例えば、適切な生理学的サンプル内のこれらの標的のレベルを計測する際に使用するため、診断方法において使用するため、タンパク質のイメージングにおいて使用するためなど、これらの標的の局在化および／または定量化に関する当該分野で公知の方法において使用され得る。所与の実施形態において、抗体由来の抗原結合ドメインを含む、これらの任意の標的またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログに特異的な抗体は、薬理学的に活性な化合物（本明細書中以後「治療薬」と称される）として利用される。
本発明の抗体は、標準的な手法（例えば、免疫親和性、クロマトグラフィーまたは免疫沈降）を用いて特定の標的を単離するために使用され得る。本発明の抗体（またはそのフラグメント）は、臨床試験の手順の一部として、例えば、所与の処置レジメンの有効性を判断するために、組織におけるタンパク質レベルをモニターするために診断的に使用され得る。検出は、検出可能な物質に抗体をカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）によって、促進され得る。検出可能な物質の例としては、様々な酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料、生物発光材料および放射性材料が挙げられる。好適な酵素の例としては、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光材料の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられ；発光材料の例としては、ルミノールが挙げられ；生物発光材料の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ、好適な放射性材料の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。
ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト化抗体および完全ヒト抗体を含む本発明の抗体は、治療剤として使用され得る。そのような薬剤は、一般に、被験体において所与の標的の異常な発現または活性化に関連する疾患または病状を処置するためまたは予防するために使用され得る。抗体調製物、好ましくは、その標的抗原に対して高特異性および高親和性を有するものが、被験体に投与され、それは、一般に、標的との結合に起因して、効果を有する。抗体の投与は、標的のシグナル伝達機能を無効にし得るか、または阻害し得るか、または干渉し得る。抗体の投与は、その抗体が天然に結合する内在性リガンドと標的の結合を無効にし得るか、または阻害し得るか、または干渉し得る。例えば、抗体は、標的に結合し、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を中和するか、またはその他の方法で阻害する。
本発明の抗体の治療有効量は、通常、治療的な目的を達成するために必要な量に関する。上で述べたように、これは、ある特定の場合において、標的の機能を干渉する、抗体とその標的抗原との間の結合相互作用であり得る。投与されるのに必要な量は、さらに、その特異的な抗原に対する抗体の結合親和性に依存し得、また、投与される抗体が、それが投与される他の被験体の自由体積（ｆｒｅｅ ｖｏｌｕｍｅ ｏｔｈｅｒ ｓｕｂｊｅｃｔ）から枯渇される速度にも依存し得る。本発明の抗体または抗体フラグメントの治療的に有効な投与のための通常の範囲は、非限定的な例として、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重であり得る。通常の投与頻度は、例えば、１日に２回から１週間に１回の範囲であり得る。
本発明の抗体またはそのフラグメントは、薬学的組成物の形態で、種々の疾患および障害の処置のために投与され得る。そのような組成物の調製に関する原理および考慮すべき事柄、ならびに構成要素の選択における指針は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ Ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ １９ｔｈ ｅｄ．（Ａｌｆｏｎｓｏ Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏら、ｅｄｉｔｏｒｓ）Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．：１９９５；Ｄｒｕｇ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ：Ｃｏｎｃｅｐｔｓ，Ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｉｅｓ，Ｌｉｍｉｔａｔｉｏｎｓ，Ａｎｄ Ｔｒｅｎｄｓ，Ｈａｒｗｏｏｄ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｌａｎｇｈｏｒｎｅ，Ｐａ．，１９９４；およびＰｅｐｔｉｄｅ Ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ａｄｖａｎｃｅｓ Ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．４），１９９１，Ｍ．Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに提供されている。
抗体フラグメントが使用される場合、標的タンパク質の結合ドメインに特異的に結合する最も小さい阻害性フラグメントが好ましい。例えば、抗体の可変領域配列に基づいて、標的タンパク質配列に結合する能力を保持するペプチド分子が設計され得る。そのようなペプチドは、化学的に合成され得、かつ／または組換えＤＮＡ技術によって産生され得る（例えば、Ｍａｒａｓｃｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：７８８９−７８９３（１９９３）を参照のこと）。製剤は、必要に応じて、処置される特定の適応症に対する２つ以上の活性な化合物、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものも含み得る。あるいは、またはさらに、組成物は、その機能を高める作用物質（例えば、細胞傷害剤、サイトカイン、化学療法剤または成長阻害剤）を含み得る。そのような分子は、意図される目的にとって有効な量で、組み合わせて適切に存在する。
活性成分はまた、例えば、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルジョン、ナノ粒子およびナノカプセル）またはマクロエマルジョンにおいて、コアセルベーション法または界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースまたはゼラチン−マイクロカプセルおよびポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセルの中に閉じ込められ得る。
インビボ投与のために使用される製剤は、滅菌されなければならない。これは、滅菌された濾過膜で濾過することによって容易に達成される。
徐放調製物が調製され得る。徐放調製物の好適な例としては、抗体を含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられ、そのマトリックスは、成形された物品、例えば、フィルムまたはマイクロカプセルの形態である。徐放マトリックスの例としては、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタメートとの共重合体、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性の乳酸−グリコール酸共重合体、例えば、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸共重合体および酢酸ロイプロリドから構成される注射可能なミクロスフェア）およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。エチレン−酢酸ビニルおよび乳酸−グリコール酸などのポリマーは、１００日超にわたって分子の放出を可能にするが、ある特定のヒドロゲルは、より短い期間にわたってタンパク質を放出する。
本発明に係る抗体は、サンプル中の所与の標的（またはそのタンパク質フラグメント）の存在を検出するための作用物質として使用され得る。いくつかの実施形態において、その抗体は、検出可能な標識を含む。抗体は、ポリクローナル、またはより好ましくは、モノクローナルである。インタクトな抗体またはそのフラグメント（例えば、Ｆａｂ、ｓｃＦｖまたはＦ（ａｂ）２）が、使用される。プローブまたは抗体に関する用語「標識された」は、プローブまたは抗体に検出可能な物質をカップリングすること（すなわち、物理的に連結すること）による、そのプローブまたは抗体の直接的な標識、ならびに直接標識された別の試薬との反応性によるそのプローブまたは抗体の間接的な標識を包含すると意図される。間接的な標識の例としては、蛍光標識された二次抗体を使用した１次抗体の検出、および蛍光標識されたストレプトアビジンで検出され得るようなビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。用語「生物学的サンプル」は、被験体から単離された組織、細胞および生体液、ならびに被験体内に存在する組織、細胞および体液を含むと意図される。ゆえに、血液、および血清、血漿またはリンパを含む血液の画分または構成要素は、用語「生物学的サンプル」の使用法に含められる。すなわち、本発明の検出方法は、生物学的サンプル中の被検体ｍＲＮＡ、タンパク質またはゲノムＤＮＡをインビトロならびにインビボにおいて検出するために使用され得る。例えば、被検体ｍＲＮＡを検出するためのインビトロの手法としては、ノーザンハイブリダイゼーションおよびインサイチュハイブリダイゼーションが挙げられる。被検体タンパク質を検出するためのインビトロの手法としては、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット、免疫沈降および免疫蛍光法が挙げられる。被検体ゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロの手法としては、サザンハイブリダイゼーションが挙げられる。イムノアッセイを行うための手順は、例えば、“ＥＬＩＳＡ：Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．４２，Ｊ．Ｒ．Ｃｒｏｗｔｈｅｒ（Ｅｄ．）Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９５；“Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ”，Ｅ．Ｄｉａｍａｎｄｉｓ ａｎｄ Ｔ．Ｃｈｒｉｓｔｏｐｏｕｌｕｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ，１９９６；および“Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｐ．Ｔｉｊｓｓｅｎ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５に記載されている。さらに、被検体タンパク質を検出するためのインビボの手法は、標識された抗被検体タンパク質抗体を被験体に導入することを含む。例えば、その抗体は、被験体内のその存在および位置が標準的なイメージング法によって検出され得る放射性マーカーで標識され得る。
薬学的組成物
本発明の抗体（本明細書中で「活性な化合物」とも称される）ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログは、投与に適した薬学的組成物中に組み込まれ得る。そのような組成物は、代表的には、抗体および薬学的に許容され得るキャリアを含む。本明細書中で使用されるとき、用語「薬学的に許容され得るキャリア」は、薬学的投与に適合した任意およびすべての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などを含むと意図される。好適なキャリアは、参照により本明細書中に援用される、当該分野における標準的な参考テキストであるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓの最新版に記載されている。そのようなキャリアまたは希釈剤の好ましい例としては、水、食塩水、リンガー溶液、デキストロース溶液および５％ヒト血清アルブミンが挙げられるが、これらに限定されない。リポソームおよび非水性ビヒクル（例えば、固定油）もまた、使用され得る。薬学的に活性な物質に対するそのような媒質および作用物質の使用法は、当該分野で周知である。任意の従来の媒質または作用物質が、活性な化合物と不適合性である場合を除いて、組成物中におけるその使用が企図される。補助的な活性な化合物もまた、組成物に組み込まれ得る。
本発明の薬学的組成物は、意図される投与経路と適合性であるように製剤化される。投与経路の例としては、非経口的、例えば、静脈内、皮内、皮下、経口（例えば、吸入）、経皮的（すなわち、局所的）、経粘膜的および直腸投与が挙げられる。非経口的、皮内または皮下適用のために使用される溶液または懸濁液は、以下の構成要素を含み得る：滅菌された希釈剤（例えば、注射用水、食塩水溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶媒）；抗菌剤（例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン）；酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム）；キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））；緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩）、および張度を調整するための作用物質（例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース）。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整され得る。非経口用の調製物は、ガラス製またはプラスチック製のアンプル、使い捨て注射器または複数回量バイアルの中に封入され得る。
注射可能物質の使用に適した薬学的組成物は、滅菌された水溶液（水溶性の場合）または分散液、および滅菌された注射可能な溶液または分散液の即時調製用の滅菌された粉末を含む。静脈内投与の場合、好適なキャリアとしては、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ，Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ，Ｎ．Ｊ．）またはリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。すべての場合において、組成物は、滅菌されなければならないし、容易に注射針を通過する程度に流動性であるべきである。組成物は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならないし、細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されていなければならない。キャリアは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコールおよび液体ポリエチレングリコールなど）およびそれらの好適な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングを使用することによって、分散液の場合では必要な粒径を維持することによって、そして界面活性物質を使用することによって、維持され得る。微生物の作用を防止することは、様々な抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成され得る。多くの場合において、組成物中に、等張剤、例えば、糖、多価アルコール（例えば、マンニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトール）、塩化ナトリウムを含めることが好ましい。注射可能な組成物の吸収の延長は、組成物中に、吸収を遅らせる作用物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを含めることによってもたらされ得る。
滅菌された注射可能な溶液は、必要な量の活性な化合物を、１つで、または上に列挙した成分の組み合わせで、適切な溶媒中に組み込んだ後、必要に応じて、濾過滅菌することによって調製され得る。一般に、分散液は、基本的な分散媒および上に列挙した成分からの必要とされる他の成分を含む滅菌されたビヒクルに活性な化合物を組み込むことによって調製される。滅菌された注射可能な溶液を調製するための滅菌された粉末の場合、調製方法は、活性成分およびそれらの予め濾過滅菌された溶液からの任意のさらなる所望の成分の粉末をもたらす、真空乾燥および凍結乾燥である。
経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤または可食キャリアを含む。それらは、ゼラチンカプセル内に封入され得るか、または錠剤に圧縮され得る。経口で治療的に投与する目的のために、活性な化合物は、賦形剤とともに組み込まれ得、錠剤、トローチ剤またはカプセルの形態で使用され得る。経口組成物は、うがい薬として使用するために流体のキャリアを用いても調製され得、ここで、流体のキャリア中の化合物は、経口的に適用され、局所使用され（ｓｗｉｓｈｅｄ）、吐き出されるか、または嚥下される。薬学的に適合性の結合剤および／または補助剤の材料は、組成物の一部として含められ得る。錠剤、丸剤、カプセル、トローチ剤などは、以下の任意の成分または類似の性質の化合物を含み得る：結合剤（例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴムまたはゼラチン）；賦形剤（例えば、デンプンまたはラクトース）、崩壊剤（例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはトウモロコシデンプン）；潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｓ）；流動促進剤（例えば、コロイド状二酸化ケイ素）；甘味剤（例えば、スクロースまたはサッカリン）；または香味料（例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料）。
吸入による投与の場合、上記化合物は、好適な噴霧剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含む加圧された容器もしくはディスペンサー、または噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で送達される。
全身投与は、経粘膜的または経皮的な手段によるものでもあり得る。経粘膜的投与または経皮的投与の場合、透過する障壁に適切な浸透剤が、製剤中に使用される。そのような浸透剤は、当該分野で広く公知であり、それらとしては、例えば、経粘膜的投与の場合、界面活性剤、胆汁酸塩およびフシジン酸誘導体が挙げられる。経粘膜的投与は、点鼻薬または坐剤を使用することによって達成され得る。経皮的投与の場合、活性な化合物は、当該分野で広く知られているような軟膏、膏薬、ゲルまたはクリームに製剤化される。
上記化合物は、直腸送達のために坐剤（例えば、カカオバターおよび他のグリセリドなどの従来の坐剤基剤を用いて）または停留浣腸の形態でも調製され得る。
１つの実施形態において、活性な化合物は、その化合物の身体からの迅速な排出から保護するキャリア（例えば、埋没物およびマイクロカプセル化された送達系を含む放出制御製剤）とともに調製される。生分解性で生体適合性のポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステルおよびポリ乳酸）を使用することができる。そのような製剤を調製するための方法は、当業者に明らかであろう。上記材料は、Ａｌｚａ ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎおよびＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手可能でもあり得る。リポソーマル懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を用いて感染細胞に標的化されたリポソームを含む）もまた、薬学的に許容され得るキャリアとして使用され得る。これらは、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号に記載されているような当業者に公知の方法に従って調製され得る。
投与を簡便にするため、および投薬量を均一にするために、投薬単位形態（ｄｏｓａｇｅ ｕｎｉｔ ｆｏｒｍ）で経口組成物または非経口組成物を製剤化することが、特に有益である。本明細書中で使用される投薬単位形態は、処置される被験体に対する単位投薬量として適した物理的に別個の単位のことを指し；各単位は、必要な薬学的キャリアと併せて所望の治療効果をもたらすように計算された所定の量の活性な化合物を含む。本発明の投薬単位形態の規格は、活性な化合物のユニークな特徴および達成されるべき特定の治療効果、ならびに個体を処置するためにそのような活性な化合物を配合する当該分野に固有の規制によって決定され、それらに直接依存する。
上記薬学的組成物は、投与のための指示書とともに容器、パックまたはディスペンサー内に含められ得る。
本発明は、請求項に記載される本発明の範囲を限定しない以下の実施例においてさらに説明される。
実施例１：ヒトＣＤ４７のクローニング、発現および精製
クローニング。ヒトＣＤ４７（ｈＣＤ４７）の細胞外ドメインに対応する配列を、特異的なオリゴヌクレオチドを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、ヒトｃＤＮＡから増幅した。増幅産物をゲル精製し、ｐＥＡＫ８哺乳動物発現ベクター（Ｅｄｇｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）にクローニングした。そのベクターを、タンパク質の単一部位でのビオチン化およびＩＭＡＣ（固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー）による精製を可能にする、Ａｖｉｔａｇ（商標）（Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｄｅｎｖｅｒ ＣＯ）およびヘキサ−ヒスチジンタグをＣ末端に導入するためにさらに改変した。それらの構築物を、ＤＮＡ配列決定により、確認した。
発現。次いで、上記プラスミドを、ＴｒａｎｓＩＴ−ＬＴ１（Ｍｉｒｕｓ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）などのリポソームベースのトランスフェクション試薬を使用して、哺乳動物細胞にトランスフェクトした。トランスフェクション工程は、少量のＤＮＡおよび細胞、代表的には、２×１０５個の細胞および２μｇのプラスミドＤＮＡ／ウェルだけが必要であり、トランスフェクションは、６ウェルプレートにおいて行った。種々の哺乳動物細胞株を使用することができるが、下記に与えられる実施例では、癌化されたヒト胚腎臓単層上皮細胞（ＰＥＡＫ細胞）をトランスフェクトした。これらの細胞は、エピソーム複製プロセスをさらに支持するＥＢＮＡ−１遺伝子を安定に発現し、半接着性であり、標準的な条件の細胞培養恒温器（１０％ウシ胎仔血清が補充されたＤＭＥＭ培地中、５％ＣＯ２；３７℃）において生育され得る。エピソームベクターを有する細胞は、ピューロマイシンに対して抵抗性であるので、２４時間後、０．５〜２μｇ／ｍＬのピューロマイシンを含む培地を加えることによって、細胞を選択的条件下に置いた。
トランスフェクションの２〜３週間後、産生工程のためにＴｒｉ−フラスコまたは使い捨てのＣＥＬＬｉｎｅバイオリアクターを使用して、播種した。ＣＥＬＬｉｎｅは、標準的な細胞培養恒温器において使用され得る２コンパートメントバイオリアクターである。小さい方のコンパートメント（１５ｍｌ）は、細胞を含み、１０ｋＤａのカットオフサイズを有する半透膜によって、培地を含む大きい方（１リットル）のコンパートメントと隔離されている（Ｂｒｕｃｅら、２００２，ＭｃＤｏｎａｌｄら、２００５）。この系は、小さい方のコンパートメント内に細胞および分泌されたタンパク質を保持しつつ、栄養分、気体（ｇａｚｅｓ）および代謝廃棄物の拡散が可能である。培養物を７〜１０日間維持した後、上清を回収した。培地は、血清を含むので、細胞は、良好な生存率を維持し、いくつかの産生ランは、同じ細胞および容器を用いて行われ得る。
精製。回収後、細胞培養上清を遠心分離により清澄化し、０．２２μｍ膜で濾過した。目的のタンパク質を保持するのに適切なカットオフサイズを有する膜を備えるＳａｒｔｏＦｌｏｗ２００（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）などの濃縮デバイスを使用して、Ｔｒｉ−フラスコからの上清を２０〜４０倍濃縮した。細胞コンパートメントから回収される体積が小さいので、この工程では、ＣＥＬＬｌｉｎｅバイオリアクターを使用する必要は無かった。さらに、濃縮工程により、目的のタンパク質と高分子量夾雑物（例えば、ウシ血清アルブミンまたは免疫グロブリン）の両方の濃度が上昇する。対照的に、夾雑物は、反応容器の２つのチャンバーを仕切っている１０ｋＤａ膜を越えることができないので、ＣＥＬＬｉｎｅバイオリアクターの細胞コンパートメントから回収された上清は、濃縮された組換えタンパク質および低レベルの夾雑物を含む。この増加された組換えタンパク質と夾雑物との比は、ＩＭＡＣを使用した精製の効率を大きく上昇させる。次いで、濃縮された上清に、１００ｍＭイミダゾールを補充し、Ｎｉ−ＮＴＡアフィニティークロマトグラフィー樹脂（Ｑｉａｇｅｎ）に充填した。比較的高い濃度のイミダゾールは、その樹脂への夾雑物の結合を最小限にする。カラムを洗浄した後、ＡＫＴＡ Ｐｒｉｍｅクロマトグラフィーシステム（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）において３０ｍＬのイミダゾール勾配（２０〜４００ｍＭイミダゾール）を使用し、２ｍＬ／分の流速でタンパク質を溶出する。この溶出の勾配により、組換えタンパク質の純度がさらに改善されるが、クロマトグラフィーシステムが利用可能でない場合、この溶出の勾配は、溶出アプローチの工程によって置き換えられ得る。溶出された画分を、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたはＥＬＩＳＡによって解析することにより、組換えタンパク質の含有量を測定することができる。目的の画分をプールし、リン酸緩衝食塩水または別の適切な緩衝液と平衡化されたＰＤ−１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で脱塩する。次いで、脱塩されたタンパク質は、様々な手法を用いて定量化され得、それらの純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって解析され得る。ビオチンリガーゼ（Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｄｅｎｖｅｒ ＣＯ）を製造者の指示書に従って使用して、組換えＣＤ４７をインビトロでビオチン化した。脱塩の後、ストレプトアビジン磁気ビーズを使用するプルダウンアッセイおよびＳＤＳ−ＰＡＧＥ解析によって、ビオチン化のレベルを評価した。
実施例２：ヒトＣＤ１９のクローニング、発現および精製
クローニング。ヒトＣＤ１９（ｈＣＤ４１９）の細胞外ドメインに対応する配列を、特異的なオリゴヌクレオチドを使用するポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって、ヒトｃＤＮＡから増幅した。増幅産物をゲル精製し、ｐＥＡＫ８哺乳動物発現ベクター（Ｅｄｇｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）にクローニングした。そのベクターを、タンパク質の単一部位でのビオチン化およびＩＭＡＣ（固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー）による精製を可能にする、Ａｖｉｔａｇ（商標）（Ａｖｉｄｉｔｙ，Ｄｅｎｖｅｒ ＣＯ）およびヘキサ−ヒスチジンタグをＣ末端に導入するためにさらに改変した。それらの構築物を、ＤＮＡ配列決定により、確認した。
発現および精製。可溶性ｈＣＤ１９の発現、精製およびビオチン化を、実施例１に記載されたように行った。
実施例３：固定された可変重鎖を含むヒトｓｃＦｖライブラリーを使用したファージディスプレイ選択
Ｍ１３バクテリオファージ上に提示されるヒトｓｃＦｖライブラリーの構築および取扱いに対する一般的な手順は、その全体が本明細書に参照により援用されるＶａｕｇｈａｎら（Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１９９６，１４：３０９−３１４）に記載されている。選択およびスクリーニングのために使用されるライブラリーは、すべてが同じＶＨドメインを共有し、もっぱらＶＬドメインにおいて多様化されている、ｓｃＦｖをコードする。固定されたＶＨライブラリーを作製するための方法、ならびに二重特異性抗体の同定および集合のためのそれらの使用法は、ＵＳ２０１２／０１８４７１６およびＷＯ２０１２／０２３０５３（これらの各々のすべてが、本明細書に参照により援用される）に記載されている。ｈＣＤ１９またはｈＣＤ４７に結合するｓｃＦｖを同定する手順を下記に記載する。
液相選択。ｓｃＦｖファージライブラリー（１０１２Ｐｆｕ）のアリコートを、ローターリーミキサー上で室温において１時間、３％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳでブロッキングした。次いで、ブロッキングされたファージを、ローターリーミキサー上で室温において１時間、ストレプトアビジン磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ Ｍ−２８０）上に取り出した（ｄｅｓｅｌｅｃｔｅｄ）。次いで、取り出されたファージを、ローターリーミキサー上で室温において２時間、インビボにおいてビオチン化されたｈＣＤ１９またはｈＣＤ４７（１００ｎＭ）とともにインキュベートした。磁気スタンドを使用してビーズを捕捉した後、ＰＢＳ／０．１％Ｔｗｅｅｎ２０で４回洗浄し、ＰＢＳで３回洗浄した。次いで、ビーズを、指数関数的に生育している１０ｍｌのＴＧ１細胞に直接加え、３７℃で１時間、ゆっくり振盪しながら（１００ｒｐｍ）インキュベートした。感染されたＴＧ１のアリコートを段階希釈することにより、選択結果を滴定した。残った感染されたＴＧ１を、３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、０．５ｍｌの２×ＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２％グルコースを含む２×ＴＹ培地）に再懸濁し、２×ＴＹＡＧ寒天バイオアッセイプレート上に広げた。３０℃で一晩インキュベーションした後、そのプレートに１０ｍｌの２×ＴＹＡＧを加え、細胞を表面から掻き取り、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。１７％グリセロールという最終濃度が得られるように、５０％グリセロールを含む２×ＴＹＡＧをその細胞懸濁液に加えた。選択ラウンドのアリコートを−８０℃で維持した。
ファージレスキュー。前の選択ラウンドから得られた１００μｌの細胞懸濁液を２０ｍｌの２×ＴＹＡＧに加え、０．３〜０．５のＯＤ６００に到達するまで、振盪しながら（２４０ｒｐｍ）３７℃で生育した。次いで、その培養物を３．３×１０１０ＭＫ１３Ｋ０７ヘルパーファージで重感染させ、３７℃（１５０ｒｐｍ）で１時間インキュベートした。次いで、細胞を２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、培地を除去し、ペレットを２０ｍｌの２×ＴＹ−ＡＫ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリン；５０μｇ／ｍｌのカナマイシン）に再懸濁することによって、培地を交換した。次いで、その培養物を３０℃（２４０ｒｐｍ）で一晩生育した。翌日、ファージ含有上清を次の選択ラウンドのために使用した。
細胞表面選択。ファージ含有上清を、ローターリーミキサー上で室温において１時間、３％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳでブロッキングした。次いで、ブロッキングされたファージを、ＣＤ１９を発現せず、かつ２％（ｗ／ｖ）スキムミルクを含むＰＢＳで予めブロッキングされた、Ｊｕｋａｔ Ｔ細胞上に１時間取り出した。次いで、取り出されたファージを、静かに振盪しながら室温において１時間、ＣＤ１９を発現している２×１０７個のＲａｊｉ細胞とともにインキュベートした。次いで、細胞をペレットにし、ＰＢＳで１０回洗浄した。指数関数的に生育している１０ｍｌのＴＧ１をＴ７５フラスコに直接加え、３７℃で１時間、ゆっくり振盪しながらインキュベートすることによって、結合したファージを溶出した。感染されたＴＧ１のアリコートを段階希釈することにより、選択結果を滴定した。感染されたＴＧ１を、３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、０．５ｍｌの２×ＴＹ−ＡＧ（１００μｇ／ｍｌのアンピシリンおよび２％グルコースを含む２×ＴＹ培地）に再懸濁し、２×ＴＹＡＧ寒天バイオアッセイプレート上に広げた。３０℃で一晩インキュベーションした後、そのプレートに１０ｍｌの２×ＴＹＡＧを加え、細胞を表面から掻き取り、５０ｍｌのポリプロピレンチューブに移した。１７％グリセロールという最終濃度が得られるように、５０％グリセロールを含む２×ＴＹＡＧをその細胞懸濁液に加えた。選択ラウンドのアリコートを−８０℃で維持した。
結合試験用および機能試験用のｓｃＦｖペリプラズム調製物。個々のクローンを、１ウェルあたり０．９ｍｌの２×ＴＹＡＧ培地（０．１％グルコース）を含む深ウェルマイクロタイタープレートに接種し、３７℃で５〜６時間（２５０ｒｐｍ）生育した。次いで、１００μｌ／ウェルの、２×ＴＹ培地中の０．２ｍＭ ＩＰＴＧを加えることにより、０．０２ｍＭ ＩＰＴＧという最終濃度を得た。次いで、プレートを、２５０ｒｐｍで振盪しながら、３０℃で一晩インキュベートした。その深ウェルプレートを、２，５００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上清を慎重に除去した。ペレットを１５０μｌのＴＥＳ緩衝液（Ｃｏｍｐｌｅｔｅプロテアーゼ阻害剤，Ｒｏｃｈｅが補充された、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ／ＨＣｌ（ｐＨ８）、１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８）、２０％スクロース）に再懸濁した。１５０μｌの希釈されたＴＥＳ緩衝液（１：５ＴＥＳ：水希釈）を加え、氷上で３０分間インキュベートすることによって、低浸透圧ショックをもたらした。次いで、プレートを４０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することにより、細胞および残屑を除去した。上清を別のマイクロタイタープレートに慎重に移し、機能アッセイまたは結合アッセイにおいて直ちに試験するために氷上で維持した。
ファージクローンの配列決定。シングルクローンを、１ウェルあたり１５０μｌの２×ＴＹＡＧ培地（２％グルコース）を含むマイクロタイタープレートに入れ、３０℃（１２０ｒｐｍ）で一晩生育した。翌日、５μｌの培養物を、４５μｌのｄＨ２Ｏを含む別のプレートに移し、混合した。次いで、そのプレートを−２０℃において凍結した。解凍した後、１μｌのこの懸濁液を、ｐＮＤＳ１に特異的なプライマー：ｍｙｃｓｅｑ，５’−ＣＴＣＴＴＣＴＧＡＧＡＴＧＡＧＴＴＴＴＴＧ−３’（配列番号２８３）およびｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒ，５’−ＴＴＡＴＴＡＴＴＣＧＣＡＡＴＴＣＣＴＴＴＡＧＴＴＧＴＴＣＣＴ−３’（配列番号２８４）とともに標準的なＰＣＲプロトコルを使用するＰＣＲ増幅に使用した。ＰＣＲ反応物を、Ｍｏｎｔａｇｅ ＰＣＲμ９６システム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用して９６ウェル形式で精製した。溶出された５μｌのＤＮＡを、ｍｙｃｓｅｑおよびｇｅｎｅ３ｌｅａｄｅｒプライマーを使用して配列決定した。
実施例４：ｈＣＤ４７に結合するｓｃＦｖについておよびＳＩＲＰα相互作用を阻害するｓｃＦｖについてのスクリーニング
結合：ｈＣＤ４７への結合についてのｓｃＦｖのスクリーニングを、ＦＭＡＴ技術を使用するホモジニアスアッセイにおいて試験した。以下の試薬を、３８４光学プレート（Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルにおいて混合した：ビオチン化ｈＣＤ４７またはコントロールビオチン化タンパク質（ＮｕｓＡ）でコーティングされた３０μｌのストレプトアビジンポリスチレンビーズ懸濁液（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ；３０００ビーズ／ウェル）；６０μｌのｓｃＦｖペリプラズム調製物；１０μｌの検出緩衝液（５μｇ／ｍＬの抗ｃｍｙｃ抗体を含むＰＢＳ；１：２００希釈された抗マウスＦｃ ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ６４７）。４５０ｒｐｍで５分間混合した後、３８４ウェルプレートを、室温においてインキュベートし、１および３時間後にＦＭＡＴ ８２００ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において読み出した。各ｓｃＦｖサンプルを、ｈＣＤ４７およびＮｕｓＡに対して２つ組で試験した。ｈＣＤ４７に対して特異的なシグナルを与えるがＮｕｓＡに対して特異的なシグナルを与えない、ｓｃＦｖを発現しているクローンを、さらなる解析のために選択した。
ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の阻害：ＳｃＦｖを、ＦＭＡＴ技術を使用するビーズベースのホモジニアスアッセイにおいて、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する能力についてもスクリーニングした。プロテインＡポリスチレンビーズ（Ｓｐｈｅｒｏｔｅｃｈ）を、５μｇ／ｍＬのヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃｙ特異的（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）とともにインキュベートする。ビーズを洗浄した後、融合タンパク質が、ビーズ表面において捕捉され得るように５μｇ／ｍＬのＳＩＲＰα−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を加える。ＰＢＳ；２％Ｔｒｏｐｉｘ ｌ−ｂｌｏｃｋ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）でブロッキングした後、３０μｌのコーティングされたビーズ懸濁液（３０００ビーズ／ウェル）を、３８４光学プレート（Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルに加えた。別個の９６ウェルプレートにおいて、１２０μｌのｓｃＦｖペリプラズム調製物を、２４μｌのビオチン化ｈＣＤ４７（３００ｎｇ／ｍｌ）と混合し、ｓｃＦｖがｈＣＤ４７に結合し得るように室温において５０分間インキュベートした。インキュベーションの後、２４μｌのストレプトアビジンＣｙ５（１μｇ／ｍｌ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）をその混合物に加え、７０μｌのこの最終的な混合物を、３８４ウェルプレートの各ウェル内の３０μｌのビーズに加える。室温における３時間のインキュベーションの後、ＦＭＡＴ ８２００ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）においてプレートを読み出す。ｓｃＦｖを含まないかまたはＣＤ４７に結合しない無関係のｓｃＦｖを含むコントロールウェルを、各プレートに含め、コントロールにおいて計測されたＳＩＲＰα−ＣＤ４７シグナルの減少をもたらすｓｃＦｖを発現しているクローンをさらなる解析のために選択した。
あるいは、安定にトランスフェクトされたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株の表面に発現されるｈＣＤ４７と可溶性ＳＩＲＰαとの相互作用をモニターする細胞ベースのアッセイもまた、候補のスクリーニングのために使用した。ｈＣＤ４７を発現する３０００個のＣＨＯ細胞を含む２０μｌのＰＢＳ−ＢＳＡ２％アジド０．１％を、３８４光学プレート（Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルに加えた。次いで、５０μｌの、ｓｃＦｖペリプラズム調製物の２倍希釈物を、そのウェルに加え、室温において３０分間インキュベートすることにより、ｓｃＦｖを細胞上のＣＤ４７に結合させた。インキュベーションの後、１０ｎｇ／ｍｌのＳＩＲＰα−Ｆｃ（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ）を含む３０μｌのＰＢＳ２％ＢＳＡアジド０．１％およびＡｎｔｉ ｈＩｇＧ−Ｆｃ ＦＭＡＴ Ｂｌｕｅ結合抗体（１：２０００希釈したもの）を加え、さらに３時間インキュベートした後、ＦＭＡＴ ８２００ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において読み出した。
実施例５：ｈＣＤ１９に結合するｓｃＦｖについてのスクリーニング
組換えｈＣＤ１９への結合についてのｓｃＦｖのスクリーニングを、実施例４に記載されたようなＦＭＡＴ技術を使用するホモジニアスアッセイにおいて試験した。
天然の形態のｈＣＤ１９への結合についてのスクリーニングもＲａｊｉ細胞において行った。３８４光学プレート（Ｃｏｓｔａｒ）の各ウェルに、３０００個のＲａｊｉ細胞（ＣＤ１９を発現するヒトＢ細胞株）またはＪｕｒｋａｔ細胞（ＣＤ１９を発現しないヒトＴ細胞株）を含む３０μｌのＰＢＳ−ＢＳＡ２％アジド０．１％を加えた。次いで、３０μｌのｓｃＦｖペリプラズム調製物の２倍希釈物、３０μｌのＰＢＳ−ＢＳＡ２％および１０ ３０μｌの１０×検出緩衝液（ＰＢＳ−ＢＳＡ２％において１：７００希釈されたＱｉａｇｅｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｅｎｔａＨｉｓ ＡＦ６４７）。４５０ｒｐｍで５分間混合した後、その３８４ウェルプレートを室温においてインキュベートし、１および３時間後にＦＭＡＴ ８２００ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）において読み出した。Ｒａｊｉ細胞に対しては特異的なシグナルを与えるが、Ｊｕｒｋａｔ細胞に対しては特異的なシグナルを与えない、ｓｃＦｖを発現しているクローンを、さらなる解析のために選択した。
実施例６：固定されたＶＨ候補のＩｇＧへのリフォーマット（ｒｅｆｏｒｍａｔｔｉｎｇ）、および哺乳動物細胞における一過性の発現
スクリーニングの後、ｈＣＤ１９またはｈＣＤ４７に対するｓｃＦｖ候補をＩｇＧにリフォーマットし、ＰＥＡＫ細胞への一過性のトランスフェクションによって発現させた。選択されたｓｃＦｖのＶＨおよびＶＬ配列を、特異的なオリゴヌクレオチドを用いて増幅し、重鎖定常領域および軽鎖定常領域を含む発現ベクターにクローニングし、その構築物を、配列決定することによって確かめた。それらの発現ベクターを、Ｆｕｇｅｎｅ ６ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｒｏｃｈｅ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して哺乳動物細胞にトランスフェクトした。簡潔には、Ｐｅａｋ細胞を、６ウェルプレートにおいて、ウシ胎児血清を含む２ｍｌの培養液中、６×１０５細胞／ウェルの濃度で培養した。候補ＶＨ配列および候補ＶＬ配列をコードする発現ベクターを、Ｆｕｇｅｎｅ ６ Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔを製造者の指示書に従って使用して、上記細胞に同時トランスフェクトした。トランスフェクションの１日後に、培養液を吸引し、３ｍｌの新鮮無血清培地を細胞に加え、３７℃で３日間培養した。３日間の培養期間後に、製造者の指示書に従ってプロテインＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂファストフローカラム（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）において精製されるＩｇＧのために上清を回収した。簡潔には、トランスフェクトされた細胞からの上清を、ＩｍｍｕｎｏＰｕｒｅ（Ｇ）ＩｇＧ結合緩衝液（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ ＩＬ）とともに４℃で一晩インキュベートした。次いで、サンプルをプロテインＧ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂファストフローカラムに通し、その結果として、溶出緩衝液を使用してＩｇＧを精製した。次いで、溶出されたＩｇＧ画分をＰＢＳに対して透析し、ＩｇＧ含有量を２８０ｎｍにおける吸収によって定量化した。純度およびＩｇＧの完全性をＳＤＳ−ＰＡＧＥによって確かめた。
実施例７：抗ｈＣＤ４７抗体の親和性調節
（ａ）抗体Ｋａ３、Ｋｅ８、Ｋｃ４
上記の実施例に記載されたスクリーニングプロセス中に同定された３つの抗体は、ヒトＣＤ４７に特異的であり、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を遮断することができると示され、これらの抗体を、それらの親和性および効力を高めるために、親和性成熟に向けて選択した。これらの抗体のすべてが、同じ可変重鎖を共有するが、異なる可変軽鎖を有する。Ｋａ３およびＫｅ８は、カッパー軽鎖（ＩＭＧＴ命名法によるところのＩＧＶＫ１−３９）を含むのに対し、Ｋｃ４は、ラムダ軽鎖（ＩＧＶＬ２−１４）を含む。重鎖可変領域を改変せずに維持しつつ、可変軽鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に多様性を導入することによって、ｓｃＦｖバリアントを提示するいくつかのファージライブラリーを作製した。７×１０５という理論上の多様性を網羅する９×１０７個の形質転換体のライブラリーを、Ｋａ３に対して１つ作製し；各々が２．４×１０９という理論上の多様性を部分的に網羅する２×１０８個の形質転換体のライブラリーをＫｅ８に対して２つ作製し、２．６×１０５という理論上の多様性を網羅する３．６×１０７個の形質転換体のライブラリーをＫｃ４に対して１つ作製した。これらのライブラリーを、異なるラウンド間でｈＣＤ４７の濃度を下げることによって選択ストリンジェンシーをラウンド間で上げたこと以外は実施例３に記載されたようなファージディスプレイ選択に使用した：１０ｎＭおよび１ｎＭのｈＣＤ４７をそれぞれ１回目および２回目の選択ラウンドにおいて使用した。選択されたバリアントを、実施例４に記載されたアッセイを使用して、ｈＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用を阻害する能力についてスクリーニングした。次いで、陽性クローンをＩｇＧとしてリフォーマットし、以下の実施例に記載されるように特徴づけた。これらの親和性成熟の試みにより、以下の抗ＶＤ４７抗体が同定された：
・Ｋｅ８Ｈ６；Ｋｅ８６Ｇ９；Ｋｅ８Ａ３；Ｋｅ８Ｃ４；Ｋｅ８Ｆ１；Ｋｅ８Ｂ７；Ｋｅ８Ｇ１１；Ｋｅ８Ａ８；Ｋｅ８Ａ４；Ｋｅ８Ｂ２；Ｋｅ８Ｃ７；Ｋｅ８Ｈ３；Ｋｅ８Ａ２；Ｋｅ８Ｈ５；Ｋｅ８Ｇ６；Ｋｅ８Ｅ８；Ｋｅ８１Ａ３；Ｋｅ８１Ｇ９；Ｋｅ８４Ｇ９；Ｋｅ８Ｇ２；Ｋｅ８Ｆ２
・Ｋａ３Ｇ２；Ｋａ３Ｄ３；Ｋａ３Ａ２；Ｋａ３Ｂ２；Ｋａ３Ｃ５；Ｋａ３Ａ３；Ｋａ３Ｈ８；Ｋａ３Ｈ３
・Ｋｃ４Ｅ２；Ｋｃ４Ｆ４；Ｋｃ４Ａ１；Ｋｃ４Ｃ１１；Ｋｃ４Ｅ１０；Ｋｃ４Ｂ１；Ｋｃ４Ｃ３；Ｋｃ４Ａ４；Ｋｃ４Ｇ１１；Ｋｃ４Ｇ９
（ｂ）親和性調節のための５Ａ３抗体の操作
抗ＣＤ４７ ５Ａ３抗体のＶＬ配列を操作することにより、その標的に対する親和性を低下させた。５Ａ３−ＶＬ配列を、最も近い生殖細胞系列配列である、ＩＭＧＴ命名法によるところのヒトＩＧＫＶ１−３３とアラインメントした（図１）。このアラインメントを使用すると、５Ａ３ ＶＬのＣＤＲＬ１およびＣＤＲＬ２において、その生殖細胞系列配列と保存されていないいくつかの残基が同定された。その抗体の結合親和性を変更するために、これらのアミノ酸のいくつかを変異させた。５Ａ３ ＣＤＲＬ３の残基もまた、同時にＣＤ４７上の同じエピトープを標的化しつつ、抗体結合を調節するために変化させた。これらの異なるストラテジーにより、５Ａ３−Ｍ３および５Ａ３−Ｍ５候補が同定された。
まず、これらのバリアントをＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合アッセイにおいて試験することにより、親５Ａ３抗体と比較されるそれらの遮断効力を測定した（図２）。５Ａ３−Ｍ３と５Ａ３−Ｍ５の両方が、ＣＤ４７とＳＩＲＰαとの間の相互作用の阻害において、５Ａ３よりも強力でなく、５Ａ３−Ｍ５は、最も弱い阻害効力プロファイルを示した。
次いで、ヒトＣＤ４７に対するこれらのバリアントの親和性を表面プラズモン共鳴技術によって評価した。５Ａ３、５Ａ３−Ｍ３および５Ａ３−Ｍ５抗体のＫＤは、それぞれ、約２．３６Ｅ−０８、５．６０Ｅ−０８および２．８４Ｅ−０６Ｍである。これらのデータから、５Ａ３バリアントは、親抗体と比べてより低い親和性でＣＤ４７に結合していること、および５Ａ３−Ｍ５は、ヒトＣＤ４７に対して最も弱い親和性を有する一方で５Ａ３−Ｍ３は、中間の親和性を有することが確かめられた。
実施例８：ＣＤ４７抗体の特徴付け。
ｈｕＣＤ４７でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞へのＣＤ４７抗体の結合
ヒトＣＤ４７で安定にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ｈｕＣＤ４７細胞）を使用するフローサイトメトリーによって、ＣＤ４７モノクローナル抗体（Ｍａｂ）の特異性が示された。トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞をコントロールとして使用した。手短に言えば、精製されたＣＤ４７ Ｍａｂを、１０μｇ／ｍｌという最終濃度で３０分間、ＣＨＯ−ｈｕＣＤ４７細胞とともにインキュベートした。２回洗浄した後、結合したＣＤ４７抗体を、Ｃｙ−５結合体化抗ヒトＦｃ二次抗体（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用して検出した。図３は、ＣＤ４７ ＭＡｂが、ｈｕ−ＣＤ４７でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞に有意に結合するが、トランスフェクトされていないＣＨＯ細胞には結合しないこと（またはバックグラウンドレベルで結合すること）を示しており、ゆえに、本発明のＣＤ４７ ＭＡｂの特異性が証明される。
ＨＥＫ２９３−Ｐ細胞へのＣＤ４７抗体の結合
ｓｉＲＮＡ媒介性のＣＤ４７遺伝子ノックダウンとともにＨＥＫ２９３−Ｐ細胞を使用する実験において、ＣＤ４７ Ｍａｂの特異性をさらに確かめた。ＨＥＫ２９３−Ｐ細胞（Ｐｅａｋ細胞）は、ヒト胎児腎細胞に由来し、低レベルから中程度のレベルのＣＤ４７を発現する。Ｐｅａｋ細胞をＣＤ４７遺伝子に特異的なｓｉＲＮＡで安定にトランスフェクトすることによって、Ｐｅａｋ細胞のＣＤ４７欠損バリアントを作製した。ＣＤ４７抗原の細胞表面発現は、これらのＣＤ４７ノックダウンＰＥＡＫ細胞では８５％超減少する（データ示さず）。図４は、トランスフェクトされていないＰｅａｋ細胞およびＣＤ４７ノックダウンＰｅａｋ細胞への選択されたＣＤ４７ ＭＡｂの結合を証明している。ＣＤ４７ｓｉＲＮＡでトランスフェクトされたＰｅａｋ細胞へのＣＤ４７ Ｍａｂの結合は、有意に減少するので、それらの抗原特異性が確認された。
カニクイザルＣＤ４７とのＣＤ４７抗体の交差反応性；ヒトおよびカニクイザルＣＤ４＋Ｔ細胞へのＣＤ４７抗体の結合
本発明のＣＤ４７モノクローナル抗体が天然のカニクイザルＣＤ４７と交差反応する能力を、フローサイトメトリーによって試験した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）中に存在するカニクイザルＣＤ４陽性Ｔリンパ球へのＣＤ４７抗体の結合を、対応するヒト細胞集団への結合と比較した。手短に言えば、カニクイザル末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、Ｒｉｃｅｒｃａ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから入手した。ヒトＰＢＭＣを、ＣＰＴフィコールチューブ（Ｂｅｃｋｔｏｎ ａｎｄ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用してバフィーコートから単離した。フローサイトメトリー解析に向けて、Ｆｃガンマレセプターを遮断するために、ＰＢＭＣをＦｃｇＲ Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ．）とともに２０分間プレインキュベートした後、ＣＤ４７抗体（０．００５ｍｇ／ｍｌの最終濃度）を加えた。３０分間のインキュベーション時間の後、細胞を洗浄し、ＰＥ結合体化抗ヒトＣＤ４抗体（クローンＬ２００，ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ １／１００希釈）およびＦＭＡＴ Ｂｌｕｅ結合体化ヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１０９−００５−０９８）と反応させた。次いで、ＣＤ４７結合（ＦＬ４）についてのＭＦＩを、ＣＤ４＋陽性集団においてフローサイトメトリーで測定した（ＦＬ２でゲーティング）。図５に示されているように、本発明のＣＤ４７モノクローナル抗体は、天然のヒトＣＤ４７に結合し、カニクイザルＣＤ４７と交差反応する。
ＣＤ４７抗体のＳＩＲＰα遮断活性
ＣＤ４７のＳＩＲＰα遮断活性をＣＤ４７−ＳＩＲＰα競合結合アッセイにおいて測定した。ＣＤ４７ Ｍａｂを用いた用量反応実験では、本発明の各ＣＤ４７ ＭＡｂに対するＩＣ５０値の測定が可能だった。手短に言えば、ヒトＣＤ４７でトランスフェクトされたＣＨＯ細胞を、Ｈｉｓタグ化された可溶性ヒトＳＩＲＰα（最終濃度，２００ｎｇ／ｍｌ）および増加性の濃度のＣＤ４７ Ｍａｂ（３．３ｐＭ〜３３０ｎＭ，４つ組）とともにインキュベートした。結合したＳＩＲＰαの検出は、実施例４に記載されたとおりだった。図６は、ＩＣ５０値によって表された、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断するＣＤ４７ Ｍａｂの効力を示している。ＣＤ４７ Ｍａｂは、ファミリーに分類され、高い効力から低い効力にランク付けされる。それらの中和活性を、商業的に入手可能なＣＤ４７抗体Ｂ６Ｈ１２と比較した。本発明のＣＤ４７ Ｍａｂの中和効力が、広い範囲にわたって様々であることは、図６から明らかである。
ＣＤ４７抗体の赤血球凝集活性
図７は、５Ａ３、Ｋｅ８およびＫａ３ファミリーの高親和性ＣＤ４７ Ｍａｂが、赤血球凝集を誘導すること；他の３つのファミリーとは対照的に、この実験において試験されたＫｃ４ファミリー抗体は、ＣＤ４７に強く結合し、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を強く阻害するときでさえ、赤血球凝集を誘導しないとみられることを証明している。
赤血球のホモタイプのクラスター形成（赤血球凝集）を誘導する能力について、ＣＤ４７ ＭＡｂを試験した。１０マイクロリットルのヒト全血を、平底９６ウェルプレートにおいて、種々の濃度（範囲：０．００３マイクロｇ／ｍｌ〜５０マイクロｇ／ｍｌの最終Ｍａｂ濃度）でＰＢＳ中の４０マイクロリットルの抗体溶液において希釈した。この血液−抗体混合物を、振盪せずに３７℃で一晩インキュベートした。インキュベーションの終わりに、プレートを、約３０℃において手で揺り動かし、傾け、約１０分間静置させた。
赤血球凝集の証拠は、ウェルの下縁の周りの底に三日月形で凝集した沈着物の形成によって証明される。５Ａ３、Ｋｅ８およびＫａ３ファミリーの最も低親和性のＣＤ４７抗体のほぼすべて（具体的には、５Ａ３Ｍ５、Ｋｅ８Ａ３、Ｋａ３Ａ３）が、赤血球凝集を引き起こした。対照的に、Ｋｃ４ファミリーのＣＤ４７抗体は、より高い親和性のものでさえ（Ｋｃ４Ｅ２、Ｋｃ４Ｆ４）、赤血球凝集を引き起こさなかった。
実施例９：ＣＤ１９抗体の親和性成熟
（ａ）抗体Ｂ７
上記の実施例に記載されたスクリーニングプロセス中に同定された抗体の中で、ｈＣＤ１９に対する親和性を高めるために、親和性成熟に向けてＢ７を選択した。候補Ｂ７は、ラムダ軽鎖（ＩＧＬＶ６−５７）を含み、重鎖可変領域を改変せずに維持しつつ、可変軽鎖領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３に多様性を導入することによって、ｓｃＦｖバリアントを提示するいくつかのファージライブラリーを作製した。種々の多様化ストラテジーを使用することにより、４×１０１２という理論上の多様性を部分的に網羅する合計２×１０９個の形質転換体を含むライブラリーを２０個作製した。
（ｂ）抗体Ｌ７Ｂ７＿Ｄ１１
上に記載されたＢ７の親和性成熟中に抗体Ｄ１１が同定され、それは、親抗体Ｂ７よりも高い親和性でｈＣＤ１９に結合する。軽鎖の２回目の親和性成熟ラウンドのために、この抗体を選択した。４×１０９という理論上の多様性を部分的に網羅する２．８×１０９個の形質転換体を含む合計６つのライブラリーを作製し、各選択ラウンドのために１ｎＭのｈＣＤ１９を使用したこと以外は上に記載されたようなファージディスプレイ選択のために使用した。この２回目の親和性成熟ラウンドにより、ＣＤ１９に対する結合が改善された以下の抗体が同定された：Ｌ７Ｂ７＿Ｃ２；Ｌ７Ｂ７＿Ａ６；Ｌ７Ｂ７＿Ｂ１１；Ｌ７Ｂ７＿Ｃ６およびＬ７Ｂ７＿Ｃ９。
実施例１０：ラムダ軽鎖およびカッパー軽鎖を有する二重特異性抗体の発現および精製。
同じ細胞における１つの重鎖および２つの軽鎖の同時発現は、３つの異なる抗体の集合をもたらし得る。同時発現は、種々の方法（例えば、共発現される、それらの鎖のうちの１つを発現する複数のベクターのトランスフェクション、または複数の遺伝子発現を駆動するベクターを使用すること）で達成され得る。ＵＳ２０１２／０１８４７１６およびＷＯ２０１２／０２３０５３（これらの各々のすべてが、本明細書に参照により援用される）に記載されているように、１つの重鎖、１つのカッパー軽鎖および１つのラムダ軽鎖の同時発現を可能にするベクターｐＮｏｖｉ κＨλを予め作製した。これらの３つの遺伝子の発現は、ヒトサイトメガロウイルスプロモーター（ｈＣＭＶ）によって駆動され、ベクターは、安定した細胞株の選択および確立を可能にするグルタミンシンテターゼ遺伝子（ＧＳ）も含む。抗ｈＣＤ１９ ＩｇＧλまたは抗ｈＣＤ４７ ＩｇＧκのＶＨおよびＶＬ遺伝子を、哺乳動物細胞における一過性の発現のために、ベクターｐＮｏｖｉ κＨλにクローニングした。Ｐｅａｋ細胞を、６ウェルプレートにおいて、ウシ胎児血清を含む２ｍｌの培養液中、６×１０５細胞／ウェルの濃度で培養した。ＴｒａｎｓＩＴ−ＬＴ１トランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ）を製造者の指示書に従って使用して、それらの細胞に２μｇのプラスミドＤＮＡをトランスフェクトした。トランスフェクトされた細胞の血清含有上清中の抗体濃度を、Ｂｉｏ−Ｌａｙｅｒ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｍｅｔｒｙ（ＢＬＩ）技術を使用して、産生中のいくつかの時点において計測した。ＯｃｔｅｔＲＥＤ９６装置およびプロテインＡバイオセンサーを定量化のために使用した（Ｐａｌｌ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。２００μＬの上清を使用して、ＩｇＧ濃度を測定し；バイオセンサーを予め調整し、１０ｍＭグリシンｐＨ１．７を使用して再生し、ＰＥＡＫ細胞調整培地で希釈されたＩｇＧ標準物質を、検量線作成のために調製した。用量反応５ＰＬ重みつけＹ検量線方程式および初期傾斜結合反応速度式を使用して、濃度を測定した。抗体濃度に従って、上清をトランスフェクションの７〜１０日後に回収し、１３００ｇでの１０分間の遠心分離によって清澄化した。この精製プロセスは、３つの親和性工程から構成された。第１に、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＩｇＧ−ＣＨ１親和性マトリックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｚｕｇ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）をＰＢＳで洗浄し、次いで、清澄化された上清に加えた。＋４℃での一晩のインキュベーションの後、上清を１０００ｇで１０分間遠心分離し、フロースルーを保存し、樹脂をＰＢＳで２回洗浄した。次いで、その樹脂をスピンカラムに移し、ｐＨ２．７の５０ｍＭグリシンを含む溶液を溶出のために使用した。いくつかの溶出画分を作製し、プールし、５０ｋＤａ Ａｍｉｃｏｎ（登録商標）Ｕｌｔｒａ Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌフィルターユニット（Ｍｅｒｃｋ ＫＧａＡ，Ｄａｒｍｓｔａｄｔ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用してＰＢＳに対して脱塩した。上清からの全ヒトＩｇＧを含む最終生成物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐ分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥ）を使用して定量化し、適切な容積のＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＬＣ−カッパー（Ｈｕ）親和性マトリックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｚｕｇ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）とともにＲＴ、２０ｒｐｍで１５分間インキュベートした。インキュベーション、樹脂回収、溶出および脱塩工程を、先に記載したように行った。最後の親和性精製工程は、先の２つの精製に対するプロセスと同じプロセスを適用して、ＣａｐｔｕｒｅＳｅｌｅｃｔ（商標）ＬＣ−ラムダ（Ｈｕ）親和性マトリックス（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｚｕｇ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を使用して行った。最終生成物を、Ｎａｎｏｄｒｏｐを使用して定量化した。精製された二重特異性抗体を、変性条件および還元条件における電気泳動によって解析した。Ａｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒを、製造者（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，ＣＡ，ＵＳＡ）が記載しているように、Ｐｒｏｔｅｉｎ ８０キットとともに使用した。４μＬの精製されたサンプルを、ジチオトレイトール（ＤＴＴ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）が補充されたサンプル緩衝液と混合した。サンプルを９５℃で５分間加熱し、次いで、チップに充填した。すべてのサンプルを、Ｌｉｍｕｌｕｓ Ａｍｅｂｏｃｙｔｅ Ｌｙｓａｔｅ試験（ＬＡＬ；Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を使用して、エンドトキシン混入について試験した。
実施例１１：一価抗体および二重特異性抗体の特徴付け。
二重標的化二重特異性抗体は、同じ細胞の表面上の２つの異なる抗原に結合する。２本の抗体アームが細胞表面上の２つの抗原に同時に結合すること（共結合と呼ばれる）により、アビディティー機構に起因して、親和性が相加的または相乗的に増加する。結果として、共結合によって、ただ１つの単一抗原しか発現しない細胞と比べて、両方の抗原を発現している細胞に対する高選択性がもたらされる。さらに、それぞれの標的に対する二重特異性抗体の２本のアームの親和性は、標的細胞への結合が、もっぱらその抗体アームの一方によって駆動されるように設定され得る。例えば、腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）、例えば、ＣＤ１９に高親和性で結合する１本のアーム、およびより低い親和性であるが、ＴＡＡ共結合の際にはＣＤ４７／ＳＩＲＰαを阻害するのに十分な親和性でＣＤ４７に結合する第２のアームから構成される二重標的化κλ型は、正常細胞と比較して癌細胞においてＣＤ４７の優先的な阻害を可能にするはずである。下記に記載される実験（図９〜１３）では、ＣＤ４７×ＣＤ１９二重特異性κλ型および対応する一価抗体、すなわち、同じＣＤ４７結合アーム＋「ダミー」非結合アームを有する抗体の結合親和性、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα中和効力および腫瘍細胞殺滅活性が比較される。
Ｂ細胞株への一価抗体および二重特異性抗体の結合
標的細胞へのＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の結合がＣＤ１９依存的であることを証明するために、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の結合とそれらの一価対応物の結合とを比較する一連のＦＡＣＳ実験を行った。２つのタイプの細胞、ＣＤ１９陽性バーキットリンパ腫細胞株Ｒａｊｉ（細胞１つあたり約６５，０００個のＣＤ４７分子を発現する）およびＣＤ１９陰性Ｂ−ＮＨＬ細胞株ＤＳ−１（細胞１つあたり約１５０，０００個のＣＤ４７分子を発現する）をコントロールとして使用した。図９Ａ〜９Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型が、Ｒａｊｉ細胞の表面において２つの標的と共結合することを証明している。これは、（ｉ）ＤＳ−１細胞と比べてＲａｊｉ細胞に対する高い親和性、および（ｉｉ）Ｒａｊｉ細胞で観察されるがＤＳ−１細胞で観察されない、ＣＤ４７一価抗体と比べてＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の高い親和性によって示される。Ｒａｊｉ細胞へのＣＤ１９一価抗体、ＣＤ４７一価抗体およびＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の結合によって生成されたＦＡＣＳプロファイルの比較によって、標的細胞へのＣＤ４７×ＣＤ１９κλの結合が、もっぱらＣＤ１９アームによって駆動されることが明らかに証明される。
一価抗体および二重特異性抗体のＳＩＲＰα遮断活性
別の一連の実験は、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型によるＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の中和が、ＣＤ１９依存的であることを示すことによって、標的細胞の表面上でのＣＤ１９およびＣＤ４７の共結合のさらなる証拠を提供する。この実験では、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型および対応する一価抗体の活性を、実施例４に記載されたようなＣＤ４７−ＳＩＲＰα阻害アッセイにおいて試験した。図１０は、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型が、対応するＣＤ４７一価抗体よりも有意に高い効力で、Ｒａｊｉ細胞においてＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を阻害したことを示している。ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用の効率的な中和には、ＣＤ１９の共結合が必要だった。ＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂで得られたＩＣ５０値は、対応するＣＤ４７一価抗体で得られた値よりも２０〜１０００倍低い（表４を参照のこと）。
実施例１２：二重特異性抗体によって媒介されるＡＤＣＣは、ＣＤ１９依存的である。
ＣＤ４７およびＣＤ１９と共結合する二重標的化κλ型の能力のおかげで、ＣＤ１９陽性細胞への結合の親和性およびＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用のＣＤ１９依存的中和が有意に増加する。次に、これにより、この実施例および以下の実施例に記載されるＡＤＣＣおよびＡＤＣＰ実験において証明されるように、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型によって媒介される効率的かつ選択的な癌細胞の殺滅に至る。
未分画のヒトＰＢＭＣおよびＲａｊｉ標的細胞またはＲａｍｏｓ Ｂ細胞リンパ腫標的細胞を用いて、ＡＤＣＣアッセイを行った。図１１に示される用量反応実験は、本明細書中に提供されるＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型が、対応するＣＤ４７一価抗体よりも効率的な方法でＢ細胞リンパ腫細胞を殺滅することを証明する。ゆえに、効率的なＡＤＣＣは、ＣＤ１９共結合に依存する。図１１Ｃは、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型によるＡＤＣＣの有効性が、リツキシマブに匹敵すること、およびＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２の場合よりも有意に高いことを示している。
実施例１３：二重特異性抗体によって媒介されるＡＤＣＰは、ＣＤ１９依存的である。
図１２は、本明細書中に提供されるＣＤ４７×ＣＤ１９ ＢｓＡｂが、ＣＤ１９依存的様式でＣＤ１９陽性細胞を貪食するが、対応するＣＤ４７一価抗体は、それほど効率的でない（たとえあったとしても）ことを証明している。
末梢血単球から分化したヒトマクロファージおよびＲａｊｉを標的細胞として用いて、ＡＤＣＰ実験を行った。マクロファージを、増加性の濃度の二重特異性または一価抗体の存在下、３７℃において２．５時間、ＣＦＳＥ標識されたＲａｊｉ細胞（エフェクター：標的比１：５）とともに共インキュベートした。インキュベーション時間の終わりに、ビオチン化抗ヒトＣＤ１４抗体およびＳｔｒｅｐ−Ｃｙ５を加えることにより、マクロファージを標識した。次いで、それらの細胞を洗浄し、ＦＡＣＳ解析に供した。ファゴサイトーシスは、二重陽性の事象によって明示された。
図１２に示される用量反応実験は、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型が、対応するＣＤ４７一価抗体よりも強力であることを証明している。ゆえに、効率的なＡＤＣＣは、ＣＤ１９共結合に依存している。二重特異性抗体によるＣＤ１９共結合は、有効性を推進する。さらに、図１２に示される実験では、効率的なＡＤＣＰを誘発するためにＣＤ４７の遮断が必要であるが、標的細胞に高親和性で結合するＣＤ１９ Ｍａｂ Ｃ２は、有意なファゴサイトーシスを誘導しないことが確認される。
実施例１４：二重特異性抗体のインビボ抗腫瘍活性
ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の抗腫瘍活性を、リンパ腫のＲａｊｉモデルにおいて評価した。２．１０６個のＲａｊｉ細胞をＮＯＤ／ＳＣＩＤマウスの皮下に埋め込んだ。腫瘍容積を１週間に３回計測した。腫瘍移植片が、０．１ｃｍ３に達した後、マウスを５つの群にランダム化し（１群あたり５匹のマウス）、抗体処置を開始した。この実験は、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型のＫａ３×Ｄ１１の効果と、Ｋａ３一価抗体、ならびに２つのポジティブコントロールＭａｂであるＣＤ４７ Ｍａｂ Ｂ６Ｈ１２およびリツキシマブの効果とを比較した。実験の終わり（ｄ２５）まで、抗体を１週間に３回、ｉ．ｐ．注射した。リツキシマブは、２００μｇ／マウス／注射で投与した。他のすべての抗体は、４００μｇ／マウス／注射で投与した。
図１３に示されているように、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型のＫａ３×Ｄ１１の有効性は、ＣＤ４７に強く結合すること、ＣＤ４７−ＳＩＲＰα相互作用を遮断すること、およびこのリンパ腫モデルにおいて腫瘍の成長を抑制することが知られているＢ６Ｈ１２と似ている。注目すべきことに、ＣＤ４７×ＣＤ１９κλ型の有効性は、リツキシマブの有効性にも匹敵した。一価ＣＤ４７抗体は、ＣＤ４７×ＣＤ１９二重特異性κλ型よりも明らかに有効でなかったことから、腫瘍撲滅がＣＤ１９依存的であることが証明された。
実施例１５：赤血球に結合するＣＤ４７抗体
血液１ｍｌあたり５０億個超の細胞、および細胞１つあたり２５，０００個のＣＤ４７分子を用いると、赤血球は、潜在的に、ＣＤ４７結合抗体に対する主要な抗原シンク（ｍａｊｏｒ ａｎｔｉｇｅｎ ｓｉｎｋ）となる。赤血球吸着の効果を評価するために、ＣＤ４７抗体を全血とともにインキュベートした。インキュベーションの後、血漿中に残存するＣＤ４７抗体の画分を、ＥＬＩＳＡで測定した。
手短に言えば、抗凝固剤を含む２００μｌの全血を、２０μｌの抗体（ＰＢＳ中の１１０μｌ／ｍｌ）と混合し、振盪しながら３７℃で３０分間インキュベートした。次いで、その血漿を遠心分離によって細胞から分離し、未結合抗体の濃度をＥＬＩＳＡで測定した。試験された各抗体について、得られた結果を、血漿中に直接加えられた同じ抗体であるコントロールと比較し、並行して試験された非結合ＩｇＧに対して正規化した。
図１４は、高いおよび中程度の親和性のＣＤ４７抗体が赤血球上に効率的に吸着されることを証明している。しかしながら、ＢｓＡｂの場合、この現象は、高親和性ＣＤ４７アームを有する分子、例えば、５Ａ３に限定される。このことから、通常、ＢｓＡｂは、ＣＤ４７ Ｍａｂよりも赤血球吸着およびＴＭＤＤの傾向が低いことが示唆される。
他の実施形態
本発明は、その詳細な説明とともに記載されてきたが、前述の説明は、添付の請求項の範囲によって定義される本発明の範囲を例証することを目的としているのであって、限定することを目的としていない。他の態様、利点および改変は、以下の請求の範囲内である。

Claims (1)

  1. 本明細書に記載の発明。
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