JP2019019085A - 抗ウイルス剤 - Google Patents
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Abstract
Description
項1. プロテオグリカン、ムコ多糖、及びプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物からなる群より選択される少なくとも1種を含有する、抗ウイルス剤。
からなる群より選択される少なくとも一種を含む、抗ウイルス用繊維。
本発明は、一態様として、プロテオグリカン、グリコサミノグリカン、及びプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物からなる群より選択される少なくとも1種を含有する、抗ウイルス剤(本明細書において、「本発明の抗ウイルス剤」と示すこともある。)に関する。以下に、これについて説明する。
プロテオグリカンとしては、コアタンパク質にグリコサミノグリカンが結合してなる化合物であれば特に限定されない。プロテオグリカンとしては、例えばアグリカン、バイグリカン、バーシカン、ニューロカン、デコリン、ビグリカン、フィブロモデュリン、ルミカン、パールカン、シンデカン、セルグリシン、ブレビカン、ケラトカン、ミメカン、バーマカン、アグリン等、或いはこれらの分解物等が挙げられる。
イカリナマコ科生物、クルマナマコ科生物、キクモンナマコ科生物等の無足目生物; 、カウディナ科生物等の隠足目生物; クロナマコ科生物、シカクナマコ科生物、ミツマタナマコ科生物等の楯手目生物; カンテンナマコ科生物、クマナマコ科生物、クラゲナマコ科生物、エボシナマコ科生物、オニナマコ科生物等の板足目生物; フラスコナマコ科生物、イガグリキンコ科生物等の指手目生物; キンコ科生物、ジイガセキンコ科生物、グミモドキ科生物、スクレロダクティラ科生物、ウロコナマコ科生物等の樹手目生物; 等が挙げられ、好ましくは楯手目生物、板足目生物等が挙げられ、より好ましくは楯手目生物が挙げられ、さらに好ましくはシカクナマコ科生物が挙げられ、よりさらに好ましくはマナマコが挙げられる。
ムコ多糖としては、例えばコンドロイチン硫酸鎖、コンドロイチン鎖、ヘパリン、ヘパラン硫酸鎖、ケラタン硫酸鎖、デルマタン硫酸鎖、ムチン、アルギン酸等が挙げられる。これらのムコ多糖は、直鎖状であっても、分岐鎖状であってもよい。分岐鎖状のムコ多糖としては、例えば分岐型コンドロイチン硫酸等が挙げられる。
プロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物とは、プロテオグリカンにおいて糖鎖の一部又は全部とペプチドとが分離してなる物である限り特に限定されない。該分離物は、通常、プロテオグリカン由来のペプチド(糖鎖が一部残っていてもよい)とプロテオグリカン由来の糖鎖を含有する。
本発明の抗ウイルス剤の対象ウイルスとしては、特に制限されないが、例えばインフルエンザウイルス(例えばA型、B型等)、風疹ウイルス、エボラウイルス、コロナウイルス、麻疹ウイルス、水痘・帯状疱疹ウイルス、ヘルペスウイルス、ムンプスウイルス、アルボウイルス、RSウイルス、SARSウイルス、肝炎ウイルス(例えば、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス等)、黄熱ウイルス、エイズウイルス、狂犬病ウイルス、ハンタウイルス、デングウイルス、ニパウイルス、リッサウイルス等のエンベロープウイルス(エンベロープを有するウイルス); アデノウイルス、ノロウイルス、ロタウイルス、ヒトパピローマウイルス、ポリオウイルス、エンテロウイルス、コクサッキーウイルス、ヒトパルボウイルス、脳心筋炎ウイルス、ポリオウイルス、ライノウイルス等の非エンベロープウイルス(エンベロープを有さないウイルス)等が挙げられる。これらの中でも、好ましくはエンベロープウイルスが挙げられ、より好ましくはインフルエンザウイルス、ヘルペスウイルス等が挙げられる。
生体に適用する用途としては、例えば医薬、化粧品、洗浄剤、食品組成物、口腔用組成物、健康増進剤、栄養補助剤(サプリメントなど)等が挙げられる。この場合の適用対象は特に限定されず、例えば、ヒト、サル、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウサギ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、シカなどの種々の哺乳類動物などが挙げられる。
物品に適用する用途としては、例えば物品のウイルス消毒薬等が挙げられる。この場合の適用対象は、特に制限されず、各種分野において用いられている工業製品やその原材料が挙げられる。工業製品の具体例としては、OA機器、家電、空調機器、掃除機、机、椅子、ソファー、ベンチ、窓、つり革、ハンドル、シート、自動改札機、自動券売機、自動販売機、扉、柵、手摺、食器、調理用具、包装フィルム、包装袋、瓶、ボトル、包装パック、シンク、便器、文房具、書籍、棚、歯ブラシ、鏡、フィルター、マスク、コート、ジャケット、ズボン、スカート、ワイシャツ、ニットシャツ、ブラウス、セーター、カーディガン、ナイトウエア、肌着、下着、オムツ、サポーター、靴下、タイツ、ストッキング、帽子、スカーフ、マフラー、襟巻き、ストール、手袋、服の裏地、服の芯地、服の中綿、作業着、ユニフォーム、学童用制服等の衣料、カーテン、アミ戸、布団地、布団綿、布団カバー、枕カバー、シーツ、マット、カーペット、タオル、ハンカチ、壁布、バンドエイド、包帯等、さらにはこれらの複合材料等が挙げられる。これらの中でも、繊維及び繊維製品以外の物品に適用することが好ましい。
本発明は、一態様として、(X)繊維、並びに
(Y)該繊維に保持された、
(A1)ナマコ及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織のプロテオグリカン含有抽出物、及び
(B1)該抽出物中のプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物
からなる群より選択される少なくとも一種(以下、「抗ウイルス成分」と示すこともある。)
を含む、抗ウイルス用繊維(本明細書において、「本発明の繊維」と示すこともある。)に関する。また、本発明は、本発明の繊維を含有する、抗ウイルス用繊維製品(本明細書において、「本発明の繊維製品」と示すこともある。)に関する。以下、これらについて説明する。
本発明は、一態様として、ナマコ及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織を材料としてプロテオグリカンを抽出することを特徴とする、プロテオグリカンの製造方法、それにより得られたプロテオグリカン、及び該プロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物に関する。
和歌山県産の完熟した南高梅(3 kg)と食塩(360 g)とを混合し、よく揉んだ。これを瓶に詰め、上におもりを載せて、3日間冷所で静置した。静置後、梅を取り除いた後に得られた溶液を濾過し、630 mLの梅干し廃液を得た。この梅干し廃液のpHは2.1であった。
破砕された魚類軟骨(30g)と、参考例1で得られた梅干し廃液(600mL)とを混合し、室温にて緩やかに撹拌しながら24時間放置した。得られた混合液をろ紙でろ過して、不溶成分を除去した。得られたろ液に、食塩が飽和量溶解したエタノール(食塩飽和エタノール)(1.8L)を加えて混合した後、4℃にて12時間放置した。遠心分離(1300 g×10分間)した後、ペレット(白色)を回収した。白色沈殿をエタノール(100mL)で洗浄後、風乾して、1.03gのプロテオグリカンを得た。
Aplysia kurodai(アメフラシの一種)を採取した。2cm四方に切断したアメフラシ(2頭)と、参考例1で得られた梅干し廃液(200mL)とを混合し、室温にて緩やかに撹拝しながら24時間放置した。得られた混合液をろ紙でろ過して、不溶成分を除去した。得られたろ液に、食塩が飽和量溶解したエタノール(食塩飽和エタノール)(600mL)を加えて混合した後、4℃にて12時間放置した。遠心分離(1300 g×10分間)した後、ペレット(白色)を回収した。白色沈殿をエタノール(20mL)で洗浄後、風乾して、1.12 gのプロテオグリカン含有抽出物を得た。
マナマコ(ナマコの一種)を採取した。2cm四方に切断したナマコ外皮(39g)と、参考例1で得られた梅干し廃液(200mL)とを混合し、室温にて緩やかに撹拝しながら24時間放置した。得られた混合液をろ紙でろ過して、不溶成分を除去した。得られたろ液に、食塩が飽和量溶解したエタノール(食塩飽和エタノール)(600mL)を加えて混合した後、4℃にて12時間放置した。遠心分離(1300 g×10分間)した後、ペレット(灰色)を回収した。灰色沈殿をエタノール(20mL)で洗浄後、風乾して、150mgのプロテオグリカン含有抽出物を得た。
実施例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物及び実施例2で得られたプロテオグリカン含有抽出物それぞれを水に溶解させ、0.1%プロテオグリカン水溶液を調製し、そのうち(5μL)と、別途調製したスタンダード溶液(ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸水溶液)を、泳動用緩衝液(0.1 Mギ酸−ピリジン緩衝液(pH 3.0))を予め浸透させたセルロースアセテート膜上にスポットした。次いでそのセルロースアセテート膜を泳動層にのせ1mA/cmにて15分間、電気泳動を行った。泳動後、セルロースアセテート膜をアルシアンブルー染色に供し、70%エタノールで脱色した後、染色バンドを目視で観察した。
実施例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物及び実施例2で得られたプロテオグリカン含有抽出物それぞれを水に溶解させ、0.1%プロテオグリカン水溶液を調製し、このうち30μLを高速液体クロマトグラフィー分析に供した。分析条件は下記に示すとおりである。
検出器:示差屈折率計RI-2031plus(日本分光)
カラム:TOSOH TSK-gel G5000PWXL
溶出液:0.2M-NaCl
流速:1 ml/min
カラムtemp.:40℃
ピークが観測された保持時間より、実施例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物又は実施例2で得られたプロテオグリカン含有抽出物の平均分子量は、いずれも約40万ダルトンであることが分かった。なお、平均分子量は、プルランスタンダード(shodex社製、P-82)を用いて算出した。
参考例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物、実施例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物、及び実施例2で得られたプロテオグリカン含有抽出物それぞれを、10mM クエン酸緩衝液(pH 5.9)に撹拌溶解した。種々の濃度のプロテオグリカンを含有する10mM クエン酸緩衝液(pH 5.9)と、HSV-1(単純ヘルペスウイルス1型)とを、37℃20分間保温した後の感染価を測定し、リン酸塩類緩衝液(ダルベッコのPBS)中で保温した時の感染価を基準値(1.0)として基準化した。
参考例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物、実施例1で得られたプロテオグリカン含有抽出物、そのβ脱離反応処理物、実施例2で得られたプロテオグリカン含有抽出物、及びそのβ脱離反応処理物それぞれを、10mM クエン酸緩衝液(pH 5.9)に撹拌溶解した。種々の濃度のPGを含む10 mMクエン酸緩衝液(pH 5.9) 190μlにウイルス(インフルエンザウイルスA0PR8 (H1N1))液10μlを加え、37℃20分間保温した後の感染価を測定し、リン酸塩類緩衝液(ダルベッコのPBS)中で保温した時の感染価を基準値(1.0)として基準化した。
(工程1:コアタンパク質の分解処理)実施例1で得られたプロテオグリカン50mgを、100 mM Tris-HCl(pH 8.0) 50 mM CaCl2含有緩衝液 10 mlに溶解した。アクチナーゼEを10mg 添加し、37℃にて48時間インキュベートした。
(工程2:タンパク質分解酵素の失活処理)100℃にて5分間加熱した後、10,000 r.p.m.にて15分間遠心分離を行い、上清を回収した。
(工程3:エタノール沈殿処理)得られた上清に3倍量の食塩飽和エタノールを添加し、4℃にて12時間静置した。10,000 r.p.mにて15分間遠心分離を行い、沈殿を回収した。
(工程4:β脱離反応処理(アルカリ処理))その沈殿に0.1Nの水酸化ナトリウム水溶液5mLを加え溶解し、4℃にて15時間静置した。
(工程5:ペプチド成分の沈殿及び除去処理)氷浴中、2N塩酸を滴下し中和した後、トリクロロ酢酸25mgを添加し溶解後、氷浴中で10分間静置した。10,000 r.p.m.で20分間遠心分離を行った。
(工程6:エタノール沈殿処理)回収した上清に3倍量の食塩飽和エタノールを添加し、4℃にて静置した。10,000 r.p.m.で20分間遠心分離を行い、ペレット(白色沈殿物)を回収した。白色沈殿をエタノールで洗浄後風乾し、27mgの白色粉末を得た。
Claims (14)
- プロテオグリカン、ムコ多糖、及びプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物からなる群より選択される少なくとも1種を含有する、抗ウイルス剤。
- (A)生物組織のプロテオグリカン含有抽出物、及び
(B)該抽出物中のプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物
からなる群より選択される少なくとも一種を含有する、請求項1に記載の抗ウイルス剤。 - 前記抽出物の抽出溶媒が梅干し廃液(梅酢)である、請求項2に記載の抗ウイルス剤。
- 前記生物組織が魚類、ナマコ、及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織である、請求項2又は3に記載の抗ウイルス剤。
- 前記生物組織がナマコ及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織である、請求項2〜4のいずれかに記載の抗ウイルス剤。
- 前記生物組織がナマコ組織である、請求項2〜5のいずれかに記載の抗ウイルス剤。
- ウイルス不活化用である、請求項1〜6のいずれかに記載の抗ウイルス剤。
- (X)繊維、並びに
(Y)該繊維に保持された、
(A1)ナマコ及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織のプロテオグリカン含有抽出物、及び
(B1)該抽出物中のプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物
からなる群より選択される少なくとも一種
を含む、抗ウイルス用繊維。 - 前記繊維がさらに梅干し廃液(梅酢)のエタノール沈殿物を保持する、請求項8に記載の抗ウイルス用繊維。
- 請求項8又は9に記載の繊維を含有する、抗ウイルス用繊維製品。
- ナマコ及びアメフラシからなる群より選択される少なくとも1種の組織を材料としてプロテオグリカンを抽出することを特徴とする、プロテオグリカン及びムコ多糖の製造方法。
- 抽出溶媒として梅干し廃液(梅酢)を用いる、請求項11に記載の製造方法。
- 請求項11又は12に記載の方法によって得られ得る、プロテオグリカン及びムコ多糖。
- 請求項13に記載のプロテオグリカンの糖鎖−ペプチド間分離物。
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