JP2018533981A - 新規の組換え高安定性スーパーオキシドジスムターゼおよびその応用 - Google Patents
新規の組換え高安定性スーパーオキシドジスムターゼおよびその応用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2018533981A JP2018533981A JP2018545540A JP2018545540A JP2018533981A JP 2018533981 A JP2018533981 A JP 2018533981A JP 2018545540 A JP2018545540 A JP 2018545540A JP 2018545540 A JP2018545540 A JP 2018545540A JP 2018533981 A JP2018533981 A JP 2018533981A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- inflammation
- sod
- superoxide dismutase
- zebrafish
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 title claims abstract description 151
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 title claims abstract description 151
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 42
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 19
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims abstract description 17
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims abstract description 4
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 112
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 111
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 22
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 17
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 14
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims description 13
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 230000032683 aging Effects 0.000 claims description 9
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 9
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 claims description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 7
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 6
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 claims description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 6
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 claims description 5
- 241000893966 Trichophyton verrucosum Species 0.000 claims description 5
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 4
- 208000001034 Frostbite Diseases 0.000 claims description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 201000007100 Pharyngitis Diseases 0.000 claims description 3
- 208000012641 Pigmentation disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 claims description 3
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 claims description 3
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 claims description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 claims description 3
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 claims description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 3
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 claims description 3
- 208000008964 Chemical and Drug Induced Liver Injury Diseases 0.000 claims description 2
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010012442 Dermatitis contact Diseases 0.000 claims description 2
- 206010072268 Drug-induced liver injury Diseases 0.000 claims description 2
- 206010016936 Folliculitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010019728 Hepatitis alcoholic Diseases 0.000 claims description 2
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007117 Oral Ulcer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029082 Pelvic Inflammatory Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010039793 Seborrhoeic dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 241000589970 Spirochaetales Species 0.000 claims description 2
- 206010042496 Sunburn Diseases 0.000 claims description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 claims description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000002353 alcoholic hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 208000010247 contact dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 201000008865 drug-induced hepatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010023332 keratitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 2
- 239000006186 oral dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 206010033072 otitis externa Diseases 0.000 claims description 2
- 244000045947 parasite Species 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 claims description 2
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 claims description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 claims description 2
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 claims description 2
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008742 seborrheic dermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 claims description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 229940042126 oral powder Drugs 0.000 claims 1
- 229940100688 oral solution Drugs 0.000 claims 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 14
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 14
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract description 9
- 230000029087 digestion Effects 0.000 abstract description 3
- 101100377299 Arabidopsis thaliana ZHD13 gene Proteins 0.000 abstract description 2
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 85
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 51
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 42
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 29
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 24
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 20
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 19
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 16
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 14
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 14
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 13
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 12
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 12
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 10
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 10
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 10
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 9
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 9
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 8
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 8
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 8
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 7
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 7
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 7
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 7
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 7
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 7
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 7
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 6
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 5
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 5
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 5
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 5
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 5
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 5
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 5
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 5
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 5
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 4
- 229910000365 copper sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate Chemical compound [Cu+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] ARUVKPQLZAKDPS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 208000010227 enterocolitis Diseases 0.000 description 4
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 4
- PSFDQSOCUJVVGF-UHFFFAOYSA-N harman Chemical compound C12=CC=CC=C2NC2=C1C=CN=C2C PSFDQSOCUJVVGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 4
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 208000003251 Pruritus Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 230000034196 cell chemotaxis Effects 0.000 description 3
- 230000009028 cell transition Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 3
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 3
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- 235000013402 health food Nutrition 0.000 description 3
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 3
- 230000007803 itching Effects 0.000 description 3
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- -1 oxygen free radical Chemical class 0.000 description 3
- 238000010827 pathological analysis Methods 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 3
- 108010008359 protein kinase C lambda Proteins 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 3
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 2
- 206010033733 Papule Diseases 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 2
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 2
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 2
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 2
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 231100001160 nonlethal Toxicity 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 102000007863 pattern recognition receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010089193 pattern recognition receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N pyrogallol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1O WQGWDDDVZFFDIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000001223 reverse osmosis Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 101000836247 Aquifex pyrophilus Superoxide dismutase [Fe] Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 102100025621 Cytochrome b-245 heavy chain Human genes 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 241001198387 Escherichia coli BL21(DE3) Species 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- 206010018691 Granuloma Diseases 0.000 description 1
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 1
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 1
- 101800002739 Melanin-concentrating hormone Proteins 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010039509 Scab Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 206010040844 Skin exfoliation Diseases 0.000 description 1
- 206010042674 Swelling Diseases 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 208000006374 Uterine Cervicitis Diseases 0.000 description 1
- 210000003892 absorptive cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 1
- 230000010398 acute inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 230000001668 ameliorated effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001754 anti-pyretic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 239000002221 antipyretic Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003796 beauty Effects 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011138 biotechnological process Methods 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 208000027503 bloody stool Diseases 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 101150055276 ced-3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000032677 cell aging Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 206010008323 cervicitis Diseases 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000016532 chronic granulomatous disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000012085 chronic inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 230000013872 defecation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 108091007735 digestive proteases Proteins 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 210000004921 distal colon Anatomy 0.000 description 1
- NQGIJDNPUZEBRU-UHFFFAOYSA-N dodecanoyl chloride Chemical compound CCCCCCCCCCCC(Cl)=O NQGIJDNPUZEBRU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 238000007905 drug manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 1
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000008821 health effect Effects 0.000 description 1
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000006749 inflammatory damage Effects 0.000 description 1
- 238000013101 initial test Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical group 0.000 description 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 1
- 230000009191 jumping Effects 0.000 description 1
- 230000003780 keratinization Effects 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- ORRDHOMWDPJSNL-UHFFFAOYSA-N melanin concentrating hormone Chemical compound N1C(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CCSC)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC(O)=O)C(C)O)CCSC)CSSCC(C(=O)NC(CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(C(C)C)C(O)=O)NC(=O)C2CCCN2C(=O)C(CCCNC(N)=N)NC(=O)C1CC1=CC=C(O)C=C1 ORRDHOMWDPJSNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000047659 melanin-concentrating hormone Human genes 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011812 mixed powder Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000011242 neutrophil chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 239000000041 non-steroidal anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940062054 oxygen 30 % Drugs 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 238000009372 pisciculture Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 229940079877 pyrogallol Drugs 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012106 screening analysis Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 101150005399 sod2 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000004797 therapeutic response Effects 0.000 description 1
- 201000004647 tinea pedis Diseases 0.000 description 1
- 210000003371 toe Anatomy 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008728 vascular permeability Effects 0.000 description 1
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 1
- 210000001325 yolk sac Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
- A61K8/66—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
- A23L29/06—Enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/44—Oxidoreductases (1)
- A61K38/446—Superoxide dismutase (1.15)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
- C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
- C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Birds (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Mycology (AREA)
Abstract
好熱菌ＨＢ２７に由来する突然変異型スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）、それをコードする遺伝子およびその応用を提供する。当該突然変異型スーパーオキシドジスムターゼは、耐高温性、耐酸性・耐アルカリ性、消化管の酵素による分解に対する耐性等の特性を有し、薬物、化粧品または食品添加剤の作製に用いることができる。
Description
本発明は、生物医薬、化粧品および機能性食品等の分野に属する。具体的には、消化管の酵素による分解に対する耐性と、耐酸性・耐アルカリ性と、耐高温性とを有するスーパーオキシドジスムターゼ（superoxide dismutase；ＳＯＤ）、それをコードする遺伝子およびその応用、並びに、該耐高温性のスーパーオキシドジスムターゼを含む化粧品、健康食品や薬物組成物およびこれらの応用に関する。
フリーラジカルは生命科学の分野において盛んに研究されてきた。１９５６年、アメリカ人のHarmanによって、放射線化学分野のフリーラジカルという概念が生物分野に導入され、著名なフリーラジカル説（Free radial theory）が提唱された。活性酸素（ＲＯＳ）は生体内の最も一般的なフリーラジカルであり、そして人体内の主なフリーラジカルは酸素フリーラジカルである。活性酸素が生体内に過剰に存在すると、脂質の過酸化、生体の膜組織の構造や機能の変化が生じ、タンパク質の変性や架橋、酵素の失活等が起こる。そのため、活性酸素は、心筋梗塞、放射線ダメージ、アテローム性動脈硬化、免疫不全等の疾患の発生や進行に深く関係している。また、フリーラジカルが過剰に存在すると、生体内の酸化反応が誘発され、生体組織および細胞がダメージを受けるため、老化が引き起こされる。これについては、Harmanによる著名なフリーラジカル老化説が提唱されている。また、酸化ストレスは、生体分子の酸化ダメージを引き起こすため、生体内因性のダメージ関連分子パターン（ＤＡＭＰｓ；Damage‐Associated Molecular Patterns）によるサイトカイン生成および放出を誘起する。サイトカインは、パターン認識受容体（ＰＲＲｓ；pattern-recognition receptors）の下流シグナル経路、たとえば核内因子κＢ（ＮＦ−κＢ）、ＪＡＫ、ＳＴＡＴおよびＭＡＰＫ等を活性化させ得るため、サイトカインおよびケモカインの放出が増加し、より多くの炎症細胞が動員、活性化され、生体システム的慢性炎症反応が発生する。酸化ストレスと炎症や老化との密接な関連性に基づく酸化−炎症老化説を提唱したDe la Fuenteらによれば、酸化ストレスは、炎症性老化を引き起こすと考えられている。
スーパーオキシドジスムターゼは、幅広く様々な生物の体内に存在しており、生体に欠かせない重要な酸素フリーラジカル除去剤であり、酸化ダメージに対する生物体防御において重要な役割を果たす。ＳＯＤは、結合されている金属イオン基に応じて、Ｃｕ／Ｚｎ−ＳＯＤ、Ｆｅ−ＳＯＤ、Ｍｎ−ＳＯＤおよびＮｉ−ＳＯＤの４つの種類に大別される。また、研究によると、ＳＯＤは、酸素フリーラジカルを効果的に除去でき、様々な炎症の治療に有用であると共に、放射線ダメージの予防および治療にも重要な役割を果たすことが明らかになっている。中でも、性質が最も安定し、且つ毒性が最も低いものはＭｎ−ＳＯＤである。
ミトコンドリアの酸化的リン酸化電子伝達システムでは、Ｏ２分子が最後の受容体である。通常、Ｏ２は４つの電子を取り入れることでＨ２Ｏを形成するが、部分的な電子伝達の場合には、強活性の酸素フリーラジカル（ＲＯＳ）が形成される。この酸素フリーラジカルは、脂質膜組織、タンパク質、ＤＮＡにアタックし、神経の退行、老化、ガン、肺繊維化、血管疾患を引き起こす。また、ＲＯＳは炎症反応を誘発する要因でもある。炎症とは、感染源、外傷または組織性虚血に対する生体の防御反応である。異常な炎症反応は様々な疾患を引き起こす。炎症に共通する最も重要な病理学的特徴は、白血球（好中球細胞および大食細胞）の遷移、集結および浸潤である。炎症を研究する最も一般的な方法としては、好中球細胞の集結部位およびその数量を研究する方法が挙げられる。また、抗酸化酵素が炎症反応の主要な調節因子であることが、多くの実験を通じて証明されている。そして、ミトコンドリア内のＭｎ−ＳＯＤは、酸素フリーラジカルを除去する初期酵素であり、その活性は、フリーラジカルの除去レートおよび炎症の回復効率に関わっている。
哺乳類動物のＭｎ−ＳＯＤは、ミトコンドリア内に存在し、その機能は、ミトコンドリア内のＯ２ −レベルを制御し、酸素フリーラジカルによるミトコンドリアへのダメージを避けることにある。生体内のＭｎ−ＳＯＤの機能についての研究により、Ｍｎ−ＳＯＤは炎症反応、細胞の老化に深く関係することが証明されている。なお、当該遺伝子が欠如しているマウスは、複数の器官においてミトコンドリアに大きなダメージが発生していた。また、当該遺伝子がノックアウトされたマウスは、その多くが胎児期で死亡するが、Ｍｎ−ＳＯＤを補充すれば、その生存期間を延ばすことができた。したがって、Ｍｎ−ＳＯＤは新規の抗炎症薬物となり得る。
環境汚染、心的ストレス、喫煙や飲酒等の悪生活習慣により体内代謝が異常化する。酸素フリーラジカルの大量蓄積によって意気消沈、疲労や免疫力の低下が引き起こされ、長期的に未病の状態に陥るおそれがある。これらの未病症状は、適量のＳＯＤを補充すれば改善される。そのため、ＳＯＤは健康食品に用い、または食品添加剤として使用することができる。さらに、Ｍｎ−ＳＯＤは、老化防止、皮膚の色素沈着の防止等の働きがあり、化粧品に添加し使用することもできる。
ＳＯＤによる作用のメカニズムおよびその効果は、従来の基礎研究によって証明されているが、ＳＯＤの実用は未だ困難であり、所望の治療効果には達成できていない。その要因は次のように考えられる。まず、薬物の製造、化粧品や食品の加工過程において、滅菌、加熱抽出等の工程がよく用いられる。しかし、通常のＳＯＤは、安定性が悪く、耐高温性を有しておらず、長期間の貯蔵に適さないという特性があるため、産業上の応用が大きく制限されている。次に、ＳＯＤは生体高分子であるため、経皮吸収の量が限られ、その治療効果に限界がある。最後に、経口薬物や食品はいずれも消化管によって消化、吸収されるため、タンパク質としてのＳＯＤは胃液や腸液中のプロテアーゼに消化、分解されることが多く、本来の効果が得られない。なお、欧州食品安全機関（European Food Safety Authority；ＥＦＳＡ）によると、ＳＯＤによる健康促進効果は、より多くの証拠で証明する必要がある（EFSA Journal 2010;8(10):1753）とされている。
上記の欠点を克服するために、多くの研究者が、たとえば遺伝子工学的方法による耐高温性ＳＯＤの生産を模索してきた。しかし、従来の技術における以下の技術的課題は未だ解決されていない。
１）組換えて発現させたＳＯＤは、耐酸性・耐アルカリ性が不十分である。
２）生成されたＳＯＤは、消化管内のペプシンやトリプシンによって分解され、失活し易い。
１）組換えて発現させたＳＯＤは、耐酸性・耐アルカリ性が不十分である。
２）生成されたＳＯＤは、消化管内のペプシンやトリプシンによって分解され、失活し易い。
したがって、従来の技術のＳＯＤは、耐高温性、耐酸性・耐アルカリ性、ペプシンやトリプシンによる分解に対する耐性等において問題があるため、化粧品、食品および医学分野におけるＳＯＤの応用が大いに限られている。それゆえ、耐高温性と、耐酸性・耐アルカリ性と、ペプシンやトリプシン等による分解に対する耐性とを有するスーパーオキシドジスムターゼの開発は、現在の急務である。
本発明は、遺伝子工学的手法を用いて従来技術における上記課題を解決する。したがって、本発明の１つの目的は、耐高温性と、耐酸性・耐アルカリ性と、消化管の酵素による分解に対する耐性とを有する新規のスーパーオキシドジスムターゼ、それをコードする遺伝子およびその応用を提供することにある。
本発明は、耐高温性と、耐酸性・耐アルカリ性と、消化管の酵素による分解に対する耐性とを有するスーパーオキシドジスムターゼであって、アミノ酸配列が配列番号４に示されるスーパーオキシドジスムターゼを提供する。
本発明は、耐高温性と、耐酸性・耐アルカリ性と、消化管酵素による分解に対する耐性とを有する上記スーパーオキシドジスムターゼをコードする遺伝子をさらに提供する。上記遺伝子の配列は、配列表中の配列番号３に示されるＤＮＡ配列であることが好ましい。
本発明の他の態様によれば、本発明は上記遺伝子を含む発現ベクター、遺伝子導入細胞系、宿主菌をさらに提供する。
本発明の他の態様によれば、本発明は、アミノ酸配列が配列番号４に示されるスーパーオキシドジスムターゼを有効治療量で含む薬物組成物をさらに提供する。なお、「有効治療量」とは、「本発明に記載の薬物組成物において、所望の結果または治療効果を達成するのに必要な投与量、および、投与周期に応じた有効な量」を指す。有効治療量は、たとえば、治療対象のヒトまたは動物の疾患状況、年齢、性別および重量等、本分野の周知要素に応じて変更してもよい。なお、当業者に理解されるように、最適な治療反応を実現するために、上記投与量の構成は変更可能である。たとえば、投与量を日ごとの複数回分に分けてもよく、治療状況の緊急度に比例して投与量を増減してもよい。さらに、本発明の組成物は、有効治療量を実現するために、必要な頻度で投与することができる。
本発明の他の態様によれば、本発明によって提供される上記薬物組成物は、抗菌剤、および／または薬学的に許容可能な担体（pharmaceuticallyacceptable carrier）、および／または賦形剤をさらに含む。上記薬物組成物の調剤の形態は、内服型または外用型である。上記内服型は、経口液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、経口散剤等が好ましく、上記外用型は、外用散剤、軟膏剤、貼布剤、外用液剤、坐剤、スプレー剤、エアゾール剤、吸入剤が好ましい。また、タンパク質薬物の血中滞留時間を延ばすために、本発明は、耐高温性のＳＯＤを化学的修飾する脂肪酸、多糖類物質、ラウロイルクロリド、デキストラン、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等、製薬分野における常用の修飾剤を用いてもよい。
本発明の他の態様によれば、本発明は、本発明の上記スーパーオキシドジスムターゼを有効量で含むことを特徴とする化粧品組成物をさらに提供する。
本発明の他の態様によれば、本発明は、本発明の上記スーパーオキシドジスムターゼを含む食品添加剤をさらに提供する。
本発明の他の態様によれば、本発明は、アミノ酸配列が配列番号４に示される耐高温性スーパーオキシドジスムターゼの作製方法を提供する。上記作製方法は、具体的には、上記耐高温性スーパーオキシドジスムターゼをコードする遺伝子の発現、たとえば配列表中の配列番号３に示されるＤＮＡ配列を発現させることによるか、または化学的合成方法により、上記耐高温性スーパーオキシドジスムターゼを得る。
本発明の他の態様によれば、本発明は、本発明の上記スーパーオキシドジスムターゼ、上記遺伝子、上記発現ベクター、遺伝子導入細胞系、宿主菌、または上記薬物組成物の、抗炎症薬物の作製における応用をさらに提供する。上記炎症は、粘膜炎症、外因性炎症因子（inflammatory agent）による炎症、または皮膚炎症を含む。また、上記粘膜炎症は、呼吸器系、消化管、生殖器官、聴覚器官、視覚器官の粘膜炎症を含み、好ましくは口腔潰瘍、歯齦炎、腸炎、胃炎、膣炎、骨盤内炎症、膀胱炎、子宮頸管炎、鼻炎、咽頭炎、中耳炎、外耳道炎、結膜炎、角膜炎である。上記外因性炎症因子による炎症は、生物的因子、物理的因子、外因性化学的因子、またはこれら炎症因子の組み合わせによる炎症を含む。生物的因子による炎症は、好ましくは細菌、ウイルス、リケッチア、病原虫、真菌、スピロヘータおよび寄生虫が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含む。物理的因子による炎症は、好ましくは物理的力、高温、低温、電離放射線、紫外線が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含み、さらに好ましくはやけど、熱傷、凍傷、日焼け、切り傷、放射線ダメージにより引き起こされる炎症、または、外科手術後もしくは放射線治療後に発生する炎症である。外因性化学的因子による炎症は、好ましくは放射性物質、強酸、強アルカリ、強酸化剤、アルコール、化学品が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含み、さらに好ましくはアルコール性もしくは薬物誘発性肝炎、化学療法後に発生する炎症である。上記皮膚炎症は、手・足の白癬、毛嚢炎、接触性皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、神経性皮膚炎、脂漏性皮膚炎を含み、好ましくは乳幼児湿疹である。
具体的には、生物的因子は炎症を引き起こす最も一般的な原因であり、生物的因子による炎症は感染とも呼ばれる。たとえば、細菌から放出された内毒素と外毒素により引き起こされる炎症、細胞内でのウイルス複製より感染された細胞の壊死、特定病原体の抗原性により誘発された過敏反応性炎症（たとえば結核病等）がある。また、物理的因子は物理的力（たとえば切り傷）、高温（たとえばやけど、熱傷）、低温（たとえば凍傷）、電離放射線（たとえば核放射線ダメージ）、紫外線（たとえば紫外線ダメージ）等、様々な物理性因子を含み、これらによる人体への作用は、一定の強さまたは一定の作用時間に達した場合、何れも炎症を引き起こし得る。中でも、外因性化学的因子は、放射性物質、強酸、強アルカリ、強酸化剤またはその他の化学物質を含み、これらが体内で一定の濃度または量に達した場合、炎症を引き起こし得る。
本発明の他の態様によれば、本発明は、本発明の上記スーパーオキシドジスムターゼ、上記遺伝子、上記発現ベクター、遺伝子導入細胞系、宿主菌の、化粧品および健康食品の作製における用途をさらに提供する。なお、化粧品は、老化や皮膚の色素沈着を防止する化粧品が好ましい。
〔実施例１〕本発明の突然変異型耐高温性スーパーオキシドジスムターゼの作製
＜１＞高収率の突然変異型耐高温性ＳＯＤ菌株の取得
好熱菌ＨＢ２７（米国ＡＴＣＣ（American Type CultureCollection）細胞バンクから購入）のＳＯＤをコードする遺伝子を鋳型とし、以下の配列のプライマーで増幅させ、目標遺伝子を得た。
フォワードプライマー：５’−ＡＡＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＣＧＴＡＣＣＣＧＴＴＣＡＡＧＣＴ−３’（配列番号１）；
リバースプライマー：５’−ＣＴＧＴＣＧＡＣＴＣＡＧＧＣＴＴＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＣ−３’（配列番号２）。
回収キット（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）を用いて増幅後の産物を回収した。それを２種類の酵素（ＥｃｏＲＩとＳａｌＩ）で切断し（Double Digestion）、同様の２種類の酵素で切断されたプラスミドベクターｐＥＴ２８ａ（＋）（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）に連結させた。該組換えプラスミドをコンピテント化大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）に形質転換し、スクリーニング、配列解析を経た後、高収率の突然変異型耐高温性ＳＯＤ（以下、Ｍ型−ＳＯＤと略称する）の菌株を得た。配列決定された、Ｍ型−ＳＯＤをコードする遺伝子の具体的にヌクレオチド配列を以下に示す。
＜１＞高収率の突然変異型耐高温性ＳＯＤ菌株の取得
好熱菌ＨＢ２７（米国ＡＴＣＣ（American Type CultureCollection）細胞バンクから購入）のＳＯＤをコードする遺伝子を鋳型とし、以下の配列のプライマーで増幅させ、目標遺伝子を得た。
フォワードプライマー：５’−ＡＡＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＣＧＴＡＣＣＣＧＴＴＣＡＡＧＣＴ−３’（配列番号１）；
リバースプライマー：５’−ＣＴＧＴＣＧＡＣＴＣＡＧＧＣＴＴＴＧＴＴＧＡＡＧＡＡＣ−３’（配列番号２）。
回収キット（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）を用いて増幅後の産物を回収した。それを２種類の酵素（ＥｃｏＲＩとＳａｌＩ）で切断し（Double Digestion）、同様の２種類の酵素で切断されたプラスミドベクターｐＥＴ２８ａ（＋）（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）に連結させた。該組換えプラスミドをコンピテント化大腸菌ＢＬ２１（ＤＥ３）（生工生物工程上海（股ふん）有限公司から購入）に形質転換し、スクリーニング、配列解析を経た後、高収率の突然変異型耐高温性ＳＯＤ（以下、Ｍ型−ＳＯＤと略称する）の菌株を得た。配列決定された、Ｍ型−ＳＯＤをコードする遺伝子の具体的にヌクレオチド配列を以下に示す。
＜２＞Ｍ型−ＳＯＤタンパクの発現および精製
発酵工程は、一次菌種培養、二次菌種培養、タンク発酵、発現誘導という４つのステップを経て、最終的に発酵産物としてＭ型−ＳＯＤを得た。具体的な過程は以下の通りである。
発酵工程は、一次菌種培養、二次菌種培養、タンク発酵、発現誘導という４つのステップを経て、最終的に発酵産物としてＭ型−ＳＯＤを得た。具体的な過程は以下の通りである。
発酵用タンクにおける基礎ＬＢ培地の成分、補充成分を下表に示す。
（１）一次菌種培養：２０ｍＬのＬＢ液体培養。
（２）上記培養液をグリセロールストック５μＬに接種し、カナマイシンの最終濃度を５０ｍｇ／Ｌとし、３７℃、２２０ｒｐｍで１０時間培養した。
（３）二次菌種培養：上記ステップで培養した菌液を２００ｍＬのＬＢ液体培地に移し、カナマイシンの最終濃度を５０ｍｇ／Ｌとし、３７℃、２２０ｒｐｍで４時間培養した。
（４）タンク発酵：上記ステップで培養した２００ｍＬの二次菌種の菌液を、容積６．６Ｌの発酵用タンクに接種した。発酵条件は溶存酸素３０％、温度３０℃、ｐＨ７．０、２００ｒｐｍ〜８００ｒｐｍの回転速度（溶存酸素に応じて自動調節される）であった。
（５）５〜６時間発酵し、ＯＤ６００が約２８となった時点で、誘導剤ＩＰＴＧを最終濃度が１ｍＭとなるように入れた。２４時間発酵した後、発酵を停止し、遠心分離して菌体を回収した。
（６）遠心分離した菌体をＢｕｆｆｅｒ Ａ（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０）に溶解した後、３００Ｗの超音波下で菌体を超音波破砕した。超音波をかける合計時間は４５分間であった。
（７）９０℃で１時間加熱した。
（８）室温まで冷却した後、４℃、１２０００Ｇで３０分間遠心分離した。
（９）上清を回収し、５０％硫酸アンモニウムを入れて酵素を沈澱させた。
（１０）４℃で１２０分間静置した後、４℃、１２０００Ｇで３０分間遠心分離した。
（１１）溶解、沈澱した後、一夜かけて透析した。
（１２）透析した産物を分けて乾燥し、完成品を得た。
精製後のＭ型−ＳＯＤ（純度は９８％に到達可能）のアミノ酸配列を以下に示す。
ＧｅｎＢａｎｋにおいて開示されている耐高温性ＳＯＤ（ＧｅｎＢａｎｋ:ＢＡＡ２５７０１．１；野生型耐高温性ＳＯＤ；以下は「Ｗ型−ＳＯＤ」と略称する）と比べ、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤは、その第２０２位のアミノ酸が、Ｗ型−ＳＯＤにおける同位置のリジン（ＬｙｓまたはＫ）からアスパラギン（ＡｓｎまたはＮ）に突然変異した点で、異なっている。
〔実施例２〕本発明の突然変異型耐高温性スーパーオキシドジスムターゼの物理化学的性質の分析
＜１＞耐熱性の比較
Ｗ型−ＳＯＤ（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226，以下は同様）、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤおよび通常ＳＯＤ（Ｓｉｇｍａ、ＭＦＣＤ００１３２４０４）について、その熱安定性を比較した（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226に記載の条件と完全に同様の条件下で、異なる温度で１時間処理し、残留酵素の活性を測定した）。結果を図１に示す。図１から分かるように、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤは、より幅広い温度範囲において、極めて高い安定性が維持されている。
＜１＞耐熱性の比較
Ｗ型−ＳＯＤ（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226，以下は同様）、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤおよび通常ＳＯＤ（Ｓｉｇｍａ、ＭＦＣＤ００１３２４０４）について、その熱安定性を比較した（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226に記載の条件と完全に同様の条件下で、異なる温度で１時間処理し、残留酵素の活性を測定した）。結果を図１に示す。図１から分かるように、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤは、より幅広い温度範囲において、極めて高い安定性が維持されている。
＜２＞ｐＨに関する耐性の比較
Ｗ型−ＳＯＤ、Ｍ型−ＳＯＤおよび通常ＳＯＤ（Ｓｉｇｍａ、ＭＦＣＤ００１３２４０４）について、異なるｐＨ値での安定性を比較した（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226に記載の条件と完全に同様の条件で）。結果を図２に示す。図２から分かるように、Ｍ型−ＳＯＤは、ｐＨ１２の場合であっても９７％の活性を有するが、Ｗ型−ＳＯＤは、ｐＨ１１の時点で４０％未満の活性しかなかった。つまり、Ｍ型−ＳＯＤは極めて突出した耐酸性・耐アルカリ性を有することが分かる。
Ｗ型−ＳＯＤ、Ｍ型−ＳＯＤおよび通常ＳＯＤ（Ｓｉｇｍａ、ＭＦＣＤ００１３２４０４）について、異なるｐＨ値での安定性を比較した（Jianguo Liuら，Extremophiles, 2011:15:221 226に記載の条件と完全に同様の条件で）。結果を図２に示す。図２から分かるように、Ｍ型−ＳＯＤは、ｐＨ１２の場合であっても９７％の活性を有するが、Ｗ型−ＳＯＤは、ｐＨ１１の時点で４０％未満の活性しかなかった。つまり、Ｍ型−ＳＯＤは極めて突出した耐酸性・耐アルカリ性を有することが分かる。
＜３＞ペプシンに対する耐性の実験
中国薬典２０１０年版の基準に沿って、人工疑似胃液を作製した。即ち、希塩酸（塩酸２３４ｍＬに水を加え、１０００ｍＬになるまで希釈したもの。該希釈液は９．５％〜１０．５％のＨＣｌを含む）１６．４ｍＬに、水約８００ｍＬとペプシン（ＳＩＮＯＰＨＡＲＭ、２０１４１２０９）１０ｇを加え、均一に振とうした後、１０００ｍＬになるまで水を加えて希釈し、人工疑似胃液を得た。
中国薬典２０１０年版の基準に沿って、人工疑似胃液を作製した。即ち、希塩酸（塩酸２３４ｍＬに水を加え、１０００ｍＬになるまで希釈したもの。該希釈液は９．５％〜１０．５％のＨＣｌを含む）１６．４ｍＬに、水約８００ｍＬとペプシン（ＳＩＮＯＰＨＡＲＭ、２０１４１２０９）１０ｇを加え、均一に振とうした後、１０００ｍＬになるまで水を加えて希釈し、人工疑似胃液を得た。
ＳＯＤもタンパク質の１種であるため、消化管内のプロテアーゼによる分解で失活しやい。Ｍ型−ＳＯＤと通常ＳＯＤとの２種類の酵素を、上記人工疑似胃液で２時間処理したところ、Ｍ型−ＳＯＤは、通常ＳＯＤよりも、ペプシンによる分解に対する耐性が明らかに優れることが分かった。具体的には図３に示す。
＜４＞トリプシンに対する耐性の実験
１０Ｕ／ｍＬ〜３００Ｕ／ｍＬのトリプシン溶液（上海瑞永生物科技公司、ＲＭ１０２１−１００ｇ）を用い、Ｍ型−ＳＯＤと通常ＳＯＤとを、３７℃で３時間インキュベートしたところ、Ｍ型−ＳＯＤは活性が損なわれないが、通常ＳＯＤは活性を約６０％失ったことが分かった。これは、Ｍ型−ＳＯＤは、トリプシンによる分解に対する耐性が極めて強いことを意味する。具体的には図４に示す。
１０Ｕ／ｍＬ〜３００Ｕ／ｍＬのトリプシン溶液（上海瑞永生物科技公司、ＲＭ１０２１−１００ｇ）を用い、Ｍ型−ＳＯＤと通常ＳＯＤとを、３７℃で３時間インキュベートしたところ、Ｍ型−ＳＯＤは活性が損なわれないが、通常ＳＯＤは活性を約６０％失ったことが分かった。これは、Ｍ型−ＳＯＤは、トリプシンによる分解に対する耐性が極めて強いことを意味する。具体的には図４に示す。
なお、上記ＳＯＤに関する酵素活性の測定は、ピロガロール自動酸化法によって行われた。
以上をまとめると、当該突然変異型ＳＯＤ（Ｍ型−ＳＯＤ）は、耐高温性、ｐＨ変化に対する耐性、および消化プロテアーゼによる分解に対する耐性において非常に優れている。したがって、経口や外用薬物、食品や化粧品に適用し、良好な治療効果、美容効果および健康効果を得ることが期待される。
〔実施例３〕粘膜炎症に対する、本発明の突然変異型耐高温性スーパーオキシドジスムターゼ（Ｍ型−ＳＯＤ）による抗炎症性の研究
＜実験動物＞
ゼブラフィッシュモデルは、以下の要件を満たしているため、疾病研究や薬物スクリーニングにおいて幅広く使用されている。（１）サンプルの大量供与が可能であるため、薬物のハイスループットスクリーニングが可能となる。（２）免疫学やゲノム学等において、ヒトとは高度な保全性を有する。（３）良好な追跡性を有する。（４）炎症に共通する最も重要な病理的特徴が明白、明確に表れる。ゼブラフィッシュは、国際的に公認されている最も重要な、薬物スクリーニング用動物モデルの１つである。ゼブラフィッシュの透明な体は、非常に強い造影特性を有するため、研究者による遺伝子操作は扱い易くなる。そのため、ゼブラフィッシュは、様々な炎症に対する反応を研究するための理想的なモデルとなっている。ゼブラフィッシュの消化系は哺乳類動物と極めて類似し、同様に肝臓、膵臓、胆嚢、および、吸収と分泌機能を有する線状分節型腸管を含む。また、腸上皮は、腸管の全域に亘って機能しており、且つ、吸収性細胞、杯状細胞、内分泌性細胞等、哺乳類動物にも見つけられる上皮細胞を含んでいる。したがって、近年、ゼブラフィッシュは、粘膜炎症、特に消化管の粘膜炎症を含む様々な炎症を研究するための典型的な動物モデルとなっている。中でも、最も代表的なものは炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関するゼブラフィッシュ（動物）モデルである。
＜実験動物＞
ゼブラフィッシュモデルは、以下の要件を満たしているため、疾病研究や薬物スクリーニングにおいて幅広く使用されている。（１）サンプルの大量供与が可能であるため、薬物のハイスループットスクリーニングが可能となる。（２）免疫学やゲノム学等において、ヒトとは高度な保全性を有する。（３）良好な追跡性を有する。（４）炎症に共通する最も重要な病理的特徴が明白、明確に表れる。ゼブラフィッシュは、国際的に公認されている最も重要な、薬物スクリーニング用動物モデルの１つである。ゼブラフィッシュの透明な体は、非常に強い造影特性を有するため、研究者による遺伝子操作は扱い易くなる。そのため、ゼブラフィッシュは、様々な炎症に対する反応を研究するための理想的なモデルとなっている。ゼブラフィッシュの消化系は哺乳類動物と極めて類似し、同様に肝臓、膵臓、胆嚢、および、吸収と分泌機能を有する線状分節型腸管を含む。また、腸上皮は、腸管の全域に亘って機能しており、且つ、吸収性細胞、杯状細胞、内分泌性細胞等、哺乳類動物にも見つけられる上皮細胞を含んでいる。したがって、近年、ゼブラフィッシュは、粘膜炎症、特に消化管の粘膜炎症を含む様々な炎症を研究するための典型的な動物モデルとなっている。中でも、最も代表的なものは炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に関するゼブラフィッシュ（動物）モデルである。
実験動物は、野生型ＡＢ系ゼブラフィッシュ（杭州環特生物科技有限公司より入手）を選択し、自然交尾、繁殖させた。受精後３日の合計６３０匹を実験グループごとに３０匹ずつ振り分け、結腸炎に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる治療効果の評価、および腸管組織の病理学的分析に用いた。遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ（杭州環特生物科技有限公司より入手）を自然交尾、繁殖させた。受精後３日の合計２１０匹を実験グループごとに３０匹ずつ振り分け、結腸炎の炎症解消に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる影響の評価に用いた。なお、実験動物は、２８℃の養魚用水（水質：逆浸透水１Ｌあたり２００ｍｇの快速溶解性海塩を添加したもの；導電率４８０〜５１０μＳ／ｃｍ、ｐＨ６．９〜７．２、硬度５３．７〜７１．６ｍｇ／Ｌ ＣａＣＯ３）中で飼育していた（実験動物の使用許可証番号は、ＳＹＸＫ（浙）２０１２−０１７１）。また、飼育の管理は国際ＡＡＡＬＡＣの認可基準を満たしていた。
＜実験用薬物＞
実施例１で作製したＭ型−ＳＯＤ（白色の粉末；使用直前に、超純水を用いて濃度２０ｍｇ／ｍＬの母液（mother solution）に調製する、即ち、その都度調製する）
プレドニゾン（白色粉末；バッチ番号２８７７８；上海晶純実業有限公司より入手；使用直前に、１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度１５ｍｇ／ｍＬの母液に調製する）
トリニトロベンゼンスルホン酸（以下、ＴＮＢＳと略称する；茶褐色の液体；バッチ番号Ｄ１３２６０１８；上海晶純実業有限公司により入手）。
実施例１で作製したＭ型−ＳＯＤ（白色の粉末；使用直前に、超純水を用いて濃度２０ｍｇ／ｍＬの母液（mother solution）に調製する、即ち、その都度調製する）
プレドニゾン（白色粉末；バッチ番号２８７７８；上海晶純実業有限公司より入手；使用直前に、１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度１５ｍｇ／ｍＬの母液に調製する）
トリニトロベンゼンスルホン酸（以下、ＴＮＢＳと略称する；茶褐色の液体；バッチ番号Ｄ１３２６０１８；上海晶純実業有限公司により入手）。
＜使用器材＞
解剖顕微鏡（ＳＺＸ７；ＯＬＹＭＰＵＳ社、日本）
電動ズーム式連続倍率変更型蛍光顕微鏡（ＡＺ１００；Ｎｉｋｏｎ社）
６穴プレート（Ｎｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）
メチルセルロース（Ａｌａｄｄｉｎ社、Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）。
解剖顕微鏡（ＳＺＸ７；ＯＬＹＭＰＵＳ社、日本）
電動ズーム式連続倍率変更型蛍光顕微鏡（ＡＺ１００；Ｎｉｋｏｎ社）
６穴プレート（Ｎｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）
メチルセルロース（Ａｌａｄｄｉｎ社、Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）。
＜モデルの構築＞
モデル１：受精後３日の野生型ＡＢ系ゼブラフィッシュを、最終濃度４．５μＭのＴＮＢＳを含む養魚用水で４８時間培養し、ゼブラフィッシュの結腸炎モデルを作製した（具体的なプロセスは、A. Jemal, R. Siegel, J. Xuら. Ward. Clinicians, 2010,277-300；および、Intestinal Upregulation of Melanin-Concentrating Hormone inTNBS-Induced Enterocolitis in Adult Zebrafish. Plos One, 2013,8(12):1524-1528を参照）。モデルを作製した結果、モデルコントロールグループの腸内腔面積（１９７６６０）は、正常コントロールグループ（１３０７１１）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。当該モデルは後述する実験１に用いられる。
モデル１：受精後３日の野生型ＡＢ系ゼブラフィッシュを、最終濃度４．５μＭのＴＮＢＳを含む養魚用水で４８時間培養し、ゼブラフィッシュの結腸炎モデルを作製した（具体的なプロセスは、A. Jemal, R. Siegel, J. Xuら. Ward. Clinicians, 2010,277-300；および、Intestinal Upregulation of Melanin-Concentrating Hormone inTNBS-Induced Enterocolitis in Adult Zebrafish. Plos One, 2013,8(12):1524-1528を参照）。モデルを作製した結果、モデルコントロールグループの腸内腔面積（１９７６６０）は、正常コントロールグループ（１３０７１１）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。当該モデルは後述する実験１に用いられる。
モデル２：受精後３日の、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを、最終濃度４．５μＭのＴＮＢＳを含む養魚用水で４８時間培養し、ゼブラフィッシュの結腸炎モデルを作製した。手順は上記モデル１と同様である。結果、モデルコントロールグループのゼブラフィッシュの腸管における好中球細胞の個数（９．４）は、正常コントロールグループ（１．６）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。当該モデルは後述する実験２に用いられる。
（実験１ 結腸炎に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる治療効果）
＜実験方法＞
（１）Ｍ型−ＳＯＤの非致死最大濃度（ＭＮＬＣ）の特定
異なる複数の濃度に設定したＭ型−ＳＯＤを用いてゼブラフィッシュを処理（４８時間処理）した。
＜実験方法＞
（１）Ｍ型−ＳＯＤの非致死最大濃度（ＭＮＬＣ）の特定
異なる複数の濃度に設定したＭ型−ＳＯＤを用いてゼブラフィッシュを処理（４８時間処理）した。
Ｍ型−ＳＯＤの初期のテスト濃度は、１５０μｇ／ｍＬ、２００μｇ／ｍＬ、３３３μｇ／ｍＬ、１０００μｇ／ｍＬ、および２０００μｇ／ｍＬの５つとした。
各実験グループは何れも３０匹のゼブラフィッシュを処理した。
実験期間中は、毎日、死亡したゼブラフィッシュの数をカウントし、死亡したゼブラフィッシュを取り除いた。
Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、各実験グループのゼブラフィッシュ死亡数を統計することで、ＭＮＬＣを特定した。
＜実験結果＞
表１の濃度−致死データによると、Ｍ型−ＳＯＤのＭＮＬＣは１５０μｇ／ｍＬであった。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの３つの濃度を選択し、薬効学的評価実験に供する。
表１の濃度−致死データによると、Ｍ型−ＳＯＤのＭＮＬＣは１５０μｇ／ｍＬであった。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの３つの濃度を選択し、薬効学的評価実験に供する。
（２）結腸炎に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる治療効果の評価
モデルコントロールグループ：ＴＮＢＳでゼブラフィッシュモデルの結腸炎を誘発した（モデル１）。
モデルコントロールグループ：ＴＮＢＳでゼブラフィッシュモデルの結腸炎を誘発した（モデル１）。
陽性コントロールグループ：プレドニゾンを最終濃度が１５μｇ／ｍＬとなるように、養魚用水に入れた。
治療グループ：Ｍ型−ＳＯＤを、選択された３つの濃度で養魚用水に入れた。Ｍ型−ＳＯＤの最終濃度は、それぞれ１ＭＮＬＣ、１／３ＭＮＬＣおよび１／１０ＭＮＬＣとした。
なお、正常コントロールグループまたは溶剤グループは、文脈上において同じ意味を指し、具体的には、何ら処理されていない受精後３日の野生型ＡＢ系ゼブラフィッシュを指す。
＜手順の説明＞
各実験グループは何れも３０匹のゼブラフィッシュを処理した（処理時間は何れも４８時間）。Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、グループごとに、ランダムに１５匹のゼブラフィッシュを選び、顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。画像分析ソフトで画像を分析し、ゼブラフィッシュの腸内腔面積を計算すると共に、定量分析を行った。統計学的に処理した結果を下記式で表す。
各実験グループは何れも３０匹のゼブラフィッシュを処理した（処理時間は何れも４８時間）。Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、グループごとに、ランダムに１５匹のゼブラフィッシュを選び、顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。画像分析ソフトで画像を分析し、ゼブラフィッシュの腸内腔面積を計算すると共に、定量分析を行った。統計学的に処理した結果を下記式で表す。
結腸炎に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる治療効果の計算式は以下の通りである。
また、陽性コントロールグループの治療効率は、上式中の治療グループを陽性コントロールグループに置き換えることによって、算出した。
分散分析およびＤｕｎｎｅｔｔ's Ｔ−テストで統計学的分析を行ったところ、ｐ＜０．０５であった。これは、有義差の存在を意味する。
代表的な実験グラフを作成した。
＜実験結果＞
モデルコントロールグループの腸内腔面積（１９７６６０）は、正常コントロールグループ（１３０７１１）と比較すると、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築が大いに成功したことを意味する。プレドニゾン剤を用いた陽性コントロールの腸内腔面積（１４７８７６）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。また、ゼブラフィッシュの結腸炎に対する、プレドニゾンによる治療効率は７４％であった。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの各Ｍ型−ＳＯＤは、結腸炎に対する治療効率が、それぞれ６６％、８２％および８４％であった。各グループは、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。これは、Ｍ型−ＳＯＤが結腸炎に対して顕著な治療効果を有することを意味する。詳細を表２、図５、図６、図７および図８に示す。
モデルコントロールグループの腸内腔面積（１９７６６０）は、正常コントロールグループ（１３０７１１）と比較すると、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築が大いに成功したことを意味する。プレドニゾン剤を用いた陽性コントロールの腸内腔面積（１４７８７６）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。また、ゼブラフィッシュの結腸炎に対する、プレドニゾンによる治療効率は７４％であった。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの各Ｍ型−ＳＯＤは、結腸炎に対する治療効率が、それぞれ６６％、８２％および８４％であった。各グループは、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。これは、Ｍ型−ＳＯＤが結腸炎に対して顕著な治療効果を有することを意味する。詳細を表２、図５、図６、図７および図８に示す。
（実験２ 結腸炎の炎症解消に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる影響）
＜実験方法＞
テストのためにＭ型−ＳＯＤの濃度を３つ選択した（１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの最終濃度で養魚用水に入れた）。
＜実験方法＞
テストのためにＭ型−ＳＯＤの濃度を３つ選択した（１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの最終濃度で養魚用水に入れた）。
モデルコントロールグループ：ＴＮＢＳで結腸炎を誘発したモデル（結腸炎モデルゼブラフィッシュ；モデル２）。
治療グループ：Ｍ型−ＳＯＤを用いて結腸炎モデルゼブラフィッシュを処理した。
陽性コントロールグループ：プレドニゾンを、最終濃度が１５μｇ／ｍＬとなるように、結腸炎モデルゼブラフィッシュの養魚用水に入れた。
なお、正常コントロールグループまたは溶剤グループは、文脈上において同じ意味を指し、具体的には、何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを指す。
各実験グループは何れも３０匹の、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを処理した。処理時間は４８時間であった。
Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、グループごとに、ランダムに１２匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。
画像分析ソフトを用い、結腸炎組織における好中球細胞の分布を定量した。統計学的に処理した結果を下記式で表す。
結腸炎の炎症解消に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる薬効学的効果の計算式は以下の通りである。
また、陽性コントロールグループの治療効率は、上式中の治療グループを陽性コントロールグループに置き換えることによって、算出した。
分散分析およびＤｕｎｎｅｔｔ's Ｔ−テストで統計学的分析を行ったところ、ｐ＜０．０５であった。これは、有義差の存在を意味する。
代表的な実験グラフを作成した。
＜実験結果＞
モデルコントロールグループのゼブラフィッシュの腸管における好中球細胞の個数（９．４）は、正常コントロールグループ（１．６）と比べ、p＜０．００１であった。これは、モデル構築が大いに成功したことを意味する。プレドニゾン剤を用いた陽性コントロールにおける好中球細胞の個数（３．８）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。これは、プレドニゾンが、結腸炎の炎症解消に対して促進作用を有することを意味する。その炎症解消の促進率は７１％であった。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの各Ｍ型−ＳＯＤは、結腸炎の炎症解消に対する促進率がそれぞれ３４％、４９％よび７４％であった。各グループは、モデルコントロールグループと比べ、それぞれp＜０．０５、p＜０．０１、およびp＜０．００１であった。これは、Ｍ型−ＳＯＤが結腸炎の炎症解消に対して顕著な促進作用を有することを意味する。詳細を表３、図９、図１０および図１１に示す。
モデルコントロールグループのゼブラフィッシュの腸管における好中球細胞の個数（９．４）は、正常コントロールグループ（１．６）と比べ、p＜０．００１であった。これは、モデル構築が大いに成功したことを意味する。プレドニゾン剤を用いた陽性コントロールにおける好中球細胞の個数（３．８）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であった。これは、プレドニゾンが、結腸炎の炎症解消に対して促進作用を有することを意味する。その炎症解消の促進率は７１％であった。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬの各Ｍ型−ＳＯＤは、結腸炎の炎症解消に対する促進率がそれぞれ３４％、４９％よび７４％であった。各グループは、モデルコントロールグループと比べ、それぞれp＜０．０５、p＜０．０１、およびp＜０．００１であった。これは、Ｍ型−ＳＯＤが結腸炎の炎症解消に対して顕著な促進作用を有することを意味する。詳細を表３、図９、図１０および図１１に示す。
（実験３ 腸管組織の病理学的分析）
＜グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：１５μｇ／ｍＬのプレドニゾン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：１５μｇ／ｍＬのプレドニゾン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜実験方法＞
Ｍ型−ＳＯＤで処理するグループ：処理方法、グループ別での濃度設定は、実験１と同様である。
Ｍ型−ＳＯＤで処理するグループ：処理方法、グループ別での濃度設定は、実験１と同様である。
陽性コントロールグループ：プレドニゾンで処理したグループ（処理方法は上記と同様）。
腸炎モデルグループ：モデル１。
正常コントロールグループ：具体的には、何ら処理されていない受精後３日の野生型ＡＢ系ゼブラフィッシュを用いた。
各実験グループでは、３０匹のゼブラフィッシュを処理した。処理時間は４８時間であった。
Ｍ型−ＳＯＤによる処理が完了した後、４％パラホルムアルデヒドで固定し、固定後のゼブラフィッシュを７０％エタノール中に移した。
顕微鏡で、固定後のゼブラフィッシュの腸内腔組織を観察し、撮影した写真を記録すると共に、組織の病理学的分析を行った。結果は、下記の実験結果の通りである。
＜実験結果＞
正常コントロールグループのゼブラフィッシュは、腸粘膜が滑らかで無傷であり、腸のヒダが明確に見える。モデルコントロールグループのゼブラフィッシュは、腸内が拡張し、腸粘膜が薄くなり、腸のヒダが消え、粘膜の糜爛や潰瘍が見られた。また、プレドニゾン剤で治療した陽性コントロールは、組織学の観点から、腸粘膜が明らかに改善された。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤで処理したグループは、腸内腔面積や腸のヒダがほぼ回復し、腸粘膜の炎症が顕著に改善され、炎症による目立った潰瘍が見られなかった。詳細を図１２に示す。
正常コントロールグループのゼブラフィッシュは、腸粘膜が滑らかで無傷であり、腸のヒダが明確に見える。モデルコントロールグループのゼブラフィッシュは、腸内が拡張し、腸粘膜が薄くなり、腸のヒダが消え、粘膜の糜爛や潰瘍が見られた。また、プレドニゾン剤で治療した陽性コントロールは、組織学の観点から、腸粘膜が明らかに改善された。また、濃度１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬおよび１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤで処理したグループは、腸内腔面積や腸のヒダがほぼ回復し、腸粘膜の炎症が顕著に改善され、炎症による目立った潰瘍が見られなかった。詳細を図１２に示す。
〔実施例４〕ヒト腸炎に対する、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤによる治療効果（臨床観察）
炎症性腸疾患（Inflammatory bowel disease；ＩＢＤ）は、よく見られる疾患であり、通常、クローン病（Crohn's disease；ＣＤ）および潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis；ＵＣ）と総称される。クローン病は、局所性腸炎、分節性腸炎または肉芽腫性小腸結腸炎とも呼ばれる。この疾患は、原因不明な胃腸の慢性肉芽腫性疾患であり、回腸末端および近位結腸によく見られ、段階的または跳躍的な病変分布を呈し、腸壁全層に亘る炎症である。潰瘍性結腸炎は、非特異性潰瘍性結腸炎とも呼ばれ、原因不明な直腸および結腸の慢性炎症性疾患である。その病変は、主に大腸粘膜および粘膜下組織に及び、最も一般的な患部は直腸および遠位結腸である。但し、重度な病変の場合、結腸全体および回腸末端にまで及ぶことがある。上記疾患は、通常、下痢、腹痛、ないしは血便といった人体症状が現れる。現在、ＩＢＤの発病メカニズムであろうものは次のように考えられている。何らかの遺伝的な決定要素によって罹患し易くなっている敏感性個体は、感染因子または腸内腔の抗原の作用により、粘膜関連リンパ組織が刺激され、アップレギュレーション化したＴ細胞反応が引き起こされる。これにより、様々なサイトカインによるネットワークが活性化し、局所組織の炎症発生、炎症拡大および炎症持続が誘発され、腸壁のダメージおよび対応する臨床症状が引き起こされる。その治療には、糖質ステロイド（ＧＣＳ）系薬物（プレドニゾン、副腎皮質ホルモン）および抗生物質等がよく使用されるが、治療効果が薄く、副作用が強く、さらに薬物耐性が発生し易い。本発明者らは、本発明における錠剤（１錠あたり、１００００ＵのＭ型−ＳＯＤが含まれる）を作製し、本発明による治療効果を検証した。錠剤の作製方法は以下の通りである。
炎症性腸疾患（Inflammatory bowel disease；ＩＢＤ）は、よく見られる疾患であり、通常、クローン病（Crohn's disease；ＣＤ）および潰瘍性結腸炎（ulcerative colitis；ＵＣ）と総称される。クローン病は、局所性腸炎、分節性腸炎または肉芽腫性小腸結腸炎とも呼ばれる。この疾患は、原因不明な胃腸の慢性肉芽腫性疾患であり、回腸末端および近位結腸によく見られ、段階的または跳躍的な病変分布を呈し、腸壁全層に亘る炎症である。潰瘍性結腸炎は、非特異性潰瘍性結腸炎とも呼ばれ、原因不明な直腸および結腸の慢性炎症性疾患である。その病変は、主に大腸粘膜および粘膜下組織に及び、最も一般的な患部は直腸および遠位結腸である。但し、重度な病変の場合、結腸全体および回腸末端にまで及ぶことがある。上記疾患は、通常、下痢、腹痛、ないしは血便といった人体症状が現れる。現在、ＩＢＤの発病メカニズムであろうものは次のように考えられている。何らかの遺伝的な決定要素によって罹患し易くなっている敏感性個体は、感染因子または腸内腔の抗原の作用により、粘膜関連リンパ組織が刺激され、アップレギュレーション化したＴ細胞反応が引き起こされる。これにより、様々なサイトカインによるネットワークが活性化し、局所組織の炎症発生、炎症拡大および炎症持続が誘発され、腸壁のダメージおよび対応する臨床症状が引き起こされる。その治療には、糖質ステロイド（ＧＣＳ）系薬物（プレドニゾン、副腎皮質ホルモン）および抗生物質等がよく使用されるが、治療効果が薄く、副作用が強く、さらに薬物耐性が発生し易い。本発明者らは、本発明における錠剤（１錠あたり、１００００ＵのＭ型−ＳＯＤが含まれる）を作製し、本発明による治療効果を検証した。錠剤の作製方法は以下の通りである。
Ｍ型−ＳＯＤ錠剤の配合：Ｍ型−ＳＯＤ２ｇ、ラクトース４０ｇ、ゼラチン化澱粉５０ｇ、ポリビニルピロリドンＫ３０ ６ｇ、ステアリン酸マグネシウム１ｇ。
＜作製工程＞
（１）８０メッシュ篩で篩分けしたＭ型−ＳＯＤ粉末を用意した。
（１）８０メッシュ篩で篩分けしたＭ型−ＳＯＤ粉末を用意した。
（２）バインダーの調製：配合量のポリビニルピロリドンＫ３０を量り取り、適量（約６０ｇ）の７５％エタノール中に入れ、攪拌し用意した。
（３）配合量のゼラチン化澱粉、ラクトース、配合量のＳＯＤを量り取り、均一に混合した。
（４）製錠：工程（２）で得られたバインダーを上記混合された粉体に加えて軟質の原料を作った後、２０メッシュの篩で整粒した。
（５）６０±２℃で、湿顆粒を、水分が１．０％〜３．５％になるまで乾燥した後、２０メッシュの篩で整粒した。
（６）乾燥された顆粒を配合量のステアリン酸マグネシウムに均一混合した。
（７）プレス製錠機でプレスし、１錠あたり１００００ユニットのＭ型−ＳＯＤを含む錠剤を得た。
本実施例では、合計６３名の被験者に本製品を試験的に投与した。実験の内訳は、男性３７名および女性２６名のうち、年齢３０〜４０歳の被験者が２１名、４０〜５０歳の被験者が３０名、５０歳以上の被験者が１２名であった。
＜診断基準＞
ＵＣでは、特異性に関する診断基準が不足しており、ＣＤでは、診断を確定することが可能な病理組織学的結果（非乾酪性肉芽腫）が得られ難い。そのため、現在、ＩＢＤの病因および疾患類型を判断することは比較的困難である。しかし、ＩＢＤ患者によく見られる臨床症状として、長年繰り返される腹痛、下痢等が現れるため、これらの症状の改善または緩和の有無を観察、記録することは可能である。
ＵＣでは、特異性に関する診断基準が不足しており、ＣＤでは、診断を確定することが可能な病理組織学的結果（非乾酪性肉芽腫）が得られ難い。そのため、現在、ＩＢＤの病因および疾患類型を判断することは比較的困難である。しかし、ＩＢＤ患者によく見られる臨床症状として、長年繰り返される腹痛、下痢等が現れるため、これらの症状の改善または緩和の有無を観察、記録することは可能である。
＜投与方法＞
毎晩１錠、１０日間の連続服用を１クールとした。
毎晩１錠、１０日間の連続服用を１クールとした。
＜治療効果の評価基準＞
有効：１０日間の使用において、下痢や腹痛がなく、固形便が排便される。
有効：１０日間の使用において、下痢や腹痛がなく、固形便が排便される。
改善：時折、下痢や腹痛症状がある。
無効：下痢や腹痛が改善されない。
＜結果＞
上記実施例３〜４によれば、それぞれ動物モデルおよび患者の臨床観察から、本発明のＭ型−ＳＯＤが様々な炎症性腸疾患に顕著な治療効果を有し、その治療効果がホルモン剤プレドニゾンの治療効果よりも優れていることが証明された。
〔実施例５〕外因性炎症因子による炎症に対する、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤによる抗炎症性の研究
＜実験動物＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ（杭州環特生物科技股ふん有限公司）を自然交尾、繁殖させた。受精後３日の合計８１０匹を実験グループごとに３０匹ずつ振り分けた。なお、実験動物は、２８℃の養魚用水（水質：逆浸透水１Ｌあたり２００ｍｇの快速溶解性海塩を添加したもの；導電率４８０〜５１０μＳ／ｃｍ、ｐＨ６．９〜７．２、硬度５３．７〜７１．６ｍｇ／Ｌ ＣａＣＯ３）中で飼育していた（実験動物の使用許可証番号は、ＳＹＸＫ（浙）２０１２−０１７１）。また、飼育の管理は国際ＡＡＡＬＡＣの認可基準を満たしていた。
＜実験動物＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ（杭州環特生物科技股ふん有限公司）を自然交尾、繁殖させた。受精後３日の合計８１０匹を実験グループごとに３０匹ずつ振り分けた。なお、実験動物は、２８℃の養魚用水（水質：逆浸透水１Ｌあたり２００ｍｇの快速溶解性海塩を添加したもの；導電率４８０〜５１０μＳ／ｃｍ、ｐＨ６．９〜７．２、硬度５３．７〜７１．６ｍｇ／Ｌ ＣａＣＯ３）中で飼育していた（実験動物の使用許可証番号は、ＳＹＸＫ（浙）２０１２−０１７１）。また、飼育の管理は国際ＡＡＡＬＡＣの認可基準を満たしていた。
＜実験用薬物＞
実施例１で作製したＭ型−ＳＯＤ（白色の粉末；使用直前に、超純水を用いて濃度２０ｍｇ／ｍＬの母液に調製する、即ち、その都度調製する）
インドメタシン（白色粉末；バッチ番号１１０８９３９；上海晶純実業有限公司より入手；１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度６０ｍＭの母液に調製する）
ＬＰＳ（リポ多糖類；白色粉末；バッチ番号Ｌ−２８８０；米ｓｉｇｍａ社より入手；１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度１０ｍｇ／ｍＬの母液に調製する）
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ社；バッチ番号ＢＣＢＮ０８４５Ｖ）
硫酸銅五水和物（西隴化工股ふん有限公司；バッチ番号１２０２０１）。
実施例１で作製したＭ型−ＳＯＤ（白色の粉末；使用直前に、超純水を用いて濃度２０ｍｇ／ｍＬの母液に調製する、即ち、その都度調製する）
インドメタシン（白色粉末；バッチ番号１１０８９３９；上海晶純実業有限公司より入手；１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度６０ｍＭの母液に調製する）
ＬＰＳ（リポ多糖類；白色粉末；バッチ番号Ｌ−２８８０；米ｓｉｇｍａ社より入手；１００％ジメチルスルホキシドを用いて濃度１０ｍｇ／ｍＬの母液に調製する）
ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ；Ｓｉｇｍａ社；バッチ番号ＢＣＢＮ０８４５Ｖ）
硫酸銅五水和物（西隴化工股ふん有限公司；バッチ番号１２０２０１）。
＜使用器材および試薬＞
解剖顕微鏡（ＳＺＸ７；ＯＬＹＭＰＵＳ社、日本）
電動ズーム式連続倍率変更型蛍光顕微鏡（ＡＺ１００；Ｎｉｋｏｎ社、日本）
６穴プレート（Ｎｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、中国）
メチルセルロース（Ａｌａｄｄｉｎ社、Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）。
解剖顕微鏡（ＳＺＸ７；ＯＬＹＭＰＵＳ社、日本）
電動ズーム式連続倍率変更型蛍光顕微鏡（ＡＺ１００；Ｎｉｋｏｎ社、日本）
６穴プレート（Ｎｅｓｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ社、中国）
メチルセルロース（Ａｌａｄｄｉｎ社、Ｓｈａｎｇｈａｉ、中国）。
＜Ｍ型−ＳＯＤの非致死最大濃度（ＭＮＬＣ）＞
Ｍ型−ＳＯＤを用いてゼブラフィッシュを処理した（処理時間は５時間）。Ｍ型−ＳＯＤのテスト濃度は、１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの５つとした。各実験グループは何れも３０匹のゼブラフィッシュを処理した。実験期間中は、毎日、死亡したゼブラフィッシュの数をカウントし、死亡したゼブラフィッシュを取り除いた。Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、各実験グループのゼブラフィッシュ死亡数を統計することで、ＭＮＬＣを特定した。結果、Ｍ型−ＳＯＤの濃度が２０００μｇ／ｍＬの場合、５時間作用した後でも、ゼブラフィッシュに対する毒害作用が現れないことが分かった。したがって、２０００μｇ／ｍＬを、ＳＯＤによる抗炎症効果を評価する最高濃度とした。
Ｍ型−ＳＯＤを用いてゼブラフィッシュを処理した（処理時間は５時間）。Ｍ型−ＳＯＤのテスト濃度は、１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの５つとした。各実験グループは何れも３０匹のゼブラフィッシュを処理した。実験期間中は、毎日、死亡したゼブラフィッシュの数をカウントし、死亡したゼブラフィッシュを取り除いた。Ｍ型−ＳＯＤでの処理が完了した後、各実験グループのゼブラフィッシュ死亡数を統計することで、ＭＮＬＣを特定した。結果、Ｍ型−ＳＯＤの濃度が２０００μｇ／ｍＬの場合、５時間作用した後でも、ゼブラフィッシュに対する毒害作用が現れないことが分かった。したがって、２０００μｇ／ｍＬを、ＳＯＤによる抗炎症効果を評価する最高濃度とした。
（実験１ 硫酸銅で誘発された炎症に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる抗炎症効果の評価）
＜グループ＞
実験グループ１：正常対照グループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ８：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ９：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜グループ＞
実験グループ１：正常対照グループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ８：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ９：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜濃度を決定する理由＞
濃度を模索するテストの結果、ＳＯＤの濃度が２０００μｇ／ｍＬまでの場合、ゼブラフィッシュに対する毒害作用が現れなかった。したがって、２０００μｇ／ｍＬを、ＳＯＤによる抗炎症効果を評価する最高濃度とした。抗炎症効果を評価するための濃度をそれぞれ、１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬに設定した。
濃度を模索するテストの結果、ＳＯＤの濃度が２０００μｇ／ｍＬまでの場合、ゼブラフィッシュに対する毒害作用が現れなかった。したがって、２０００μｇ／ｍＬを、ＳＯＤによる抗炎症効果を評価する最高濃度とした。抗炎症効果を評価するための濃度をそれぞれ、１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬに設定した。
＜モデルの作製＞
１０μＭの硫酸銅五水和物を水に溶解させた溶液を用いて、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを処理し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した（具体的な方法は、d'Alenconら, BMC Biology. 2010,8:151，A high-throughputchemically inducedinflammation assay in zebrafish.を参照）。モデルコントロールグループでは、炎症部位（聴覚細胞領域）における好中球細胞の個数（１５．５）は、正常コントロールグループ（１．３）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。
１０μＭの硫酸銅五水和物を水に溶解させた溶液を用いて、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを処理し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した（具体的な方法は、d'Alenconら, BMC Biology. 2010,8:151，A high-throughputchemically inducedinflammation assay in zebrafish.を参照）。モデルコントロールグループでは、炎症部位（聴覚細胞領域）における好中球細胞の個数（１５．５）は、正常コントロールグループ（１．３）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。
＜実験方法＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュをランダムに選び、６穴プレートの１穴ごとに３０匹を入れ、硫酸銅を用いてゼブラフィッシュ炎症モデルに誘発した。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。Ｍ型−ＳＯＤによる処理の時間は５時間であった。処理が完了した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ製ＮＩＳ−ＥｌｅｍｅｎｔｓＤ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュをランダムに選び、６穴プレートの１穴ごとに３０匹を入れ、硫酸銅を用いてゼブラフィッシュ炎症モデルに誘発した。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。Ｍ型−ＳＯＤによる処理の時間は５時間であった。処理が完了した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ製ＮＩＳ−ＥｌｅｍｅｎｔｓＤ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
式中、試験対象グループは、Ｍ型−ＳＯＤで処理されたグループと、インドメタシン剤で処理された陽性コントロールグループとを含む。
分散分析およびＤｕｎｎｅｔｔ's Ｔ−テストで統計学的分析を行ったところ、ｐ＜０．０５であった。これは、有義差の存在を意味する。代表的な実験グラフを作成した。
＜実験結果＞
モデルコントロールグループでは、炎症部位の好中球細胞の個数（１５．５）は、正常コントロールグループ（１．３）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（１．９）は、モデルコントロールグループと比べてｐ＜０．００１であり、その炎症解消率は８８％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１４．９、１１．８、８．３、３．６、１．４および１．２であり、その炎症解消率は、それぞれ４％、２４％、４７％、７７％、９１％および９２％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、１５μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬのグループを除き、残りのグループが、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、硫酸銅で誘発されたゼブラフィッシュ炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と投与量との相関性を表している。詳細を表４、図１３、図１４および図１５に示す。
モデルコントロールグループでは、炎症部位の好中球細胞の個数（１５．５）は、正常コントロールグループ（１．３）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（１．９）は、モデルコントロールグループと比べてｐ＜０．００１であり、その炎症解消率は８８％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１４．９、１１．８、８．３、３．６、１．４および１．２であり、その炎症解消率は、それぞれ４％、２４％、４７％、７７％、９１％および９２％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、１５μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬのグループを除き、残りのグループが、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、硫酸銅で誘発されたゼブラフィッシュ炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と投与量との相関性を表している。詳細を表４、図１３、図１４および図１５に示す。
（実験２ ＬＰＳで誘発された炎症に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる抗炎症効果の評価）
＜濃度グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ８：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ９：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜濃度グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ８：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ９：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜モデルの作製＞
ＬＰＳを注射する方式で、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを処理し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した。モデルコントロールグループでは、炎症部位（卵黄嚢領域）における好中球細胞の個数（１７．８）は、正常コントロールグループ（２．４）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する（具体的なプロセスは、Li-LingYangら，Molecules2014,19,2390-2409．Endotoxin MoleculeLipopolysaccharide-Induced Zebrafish Inflammation Model:A Novel ScreeningMethod for Anti-Inflammatory Drugs.を参照）。
ＬＰＳを注射する方式で、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュを処理し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した。モデルコントロールグループでは、炎症部位（卵黄嚢領域）における好中球細胞の個数（１７．８）は、正常コントロールグループ（２．４）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する（具体的なプロセスは、Li-LingYangら，Molecules2014,19,2390-2409．Endotoxin MoleculeLipopolysaccharide-Induced Zebrafish Inflammation Model:A Novel ScreeningMethod for Anti-Inflammatory Drugs.を参照）。
＜実験方法＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュをランダムに選び、６穴プレートの１穴ごとに３０匹を入れ、ＬＰＳを用いてゼブラフィッシュ炎症モデルに誘発した。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。５時間処理した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ社製のＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓ Ｄ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュをランダムに選び、６穴プレートの１穴ごとに３０匹を入れ、ＬＰＳを用いてゼブラフィッシュ炎症モデルに誘発した。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。５時間処理した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ社製のＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓ Ｄ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
式中、試験対象グループは、Ｍ型−ＳＯＤで処理されたグループと、インドメタシン剤で処理された陽性コントロールグループとを含む。
分散分析およびＤｕｎｎｅｔｔ's Ｔ−テストで統計学的分析を行ったところ、ｐ＜０．０５であった。これは、有義差の存在を意味する。代表的な実験グラフを作成した。
＜実験結果＞
モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（１７．８）は、正常コントロールグループ（２．４）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これはモデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（４．９）は、モデルコントロールグループと比べ、ｐ＜０．００１であり、その炎症解消率は７２％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１７．７、１４．９、１２．３、１１．７、７．４および６．３であり、その炎症解消率は、それぞれ０％、１６％、３１％、３４％、５８％および６５％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、１５μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬのグループを除き、残りのグループが、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、ＬＰＳで誘発されたゼブラフィッシュ炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と投与量との相関性を表している。詳細を表５、図１６、図１７および図１８に示す。
モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（１７．８）は、正常コントロールグループ（２．４）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これはモデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（４．９）は、モデルコントロールグループと比べ、ｐ＜０．００１であり、その炎症解消率は７２％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５μｇ／ｍＬ、５０μｇ／ｍＬ、１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１７．７、１４．９、１２．３、１１．７、７．４および６．３であり、その炎症解消率は、それぞれ０％、１６％、３１％、３４％、５８％および６５％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、１５μｇ／ｍＬおよび５０μｇ／ｍＬのグループを除き、残りのグループが、ｐ＜０．０５、ｐ＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、ＬＰＳで誘発されたゼブラフィッシュ炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と投与量との相関性を表している。詳細を表５、図１６、図１７および図１８に示す。
（実験３ 尾切断損傷による炎症に対する、Ｍ型−ＳＯＤによる抗炎症効果の評価）
＜グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜グループ＞
実験グループ１：正常コントロールグループ、具体的には何ら処理されていない、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュ；
実験グループ２：モデルコントロールグループ；
実験グループ３：６０μＭのインドメタシン剤を用いる陽性コントロール；
実験グループ４：１５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ５：４５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ６：１３５０μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる；
実験グループ７：２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いる。
＜モデルの作製＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュの尾ビレを器械で切断し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した。モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（２０．２）は、正常コントロールグループ（４．８）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これはモデル構築の成功を意味する。なお、稚魚の尾ビレの一部を切断した稚魚尾創傷モデルは、最も知られているゼブラフィッシュダメージモデルである。本発明者は、このような遺伝子導入ゼブラフィッシュの損傷モデルについて、好中球細胞の特有なペルオキシターゼ触媒の転写を制御しつつ発現させた緑色蛍光タンパク（ＥＧＦＰ）を利用し、損傷部位への好中球細胞の走化性に関する最新メカニズムを研究した（具体的には、J.Yuan, S.Shaham,S.Ledoux,et al. TheC.elegans cell death gene ced-3 encodes a protein similar to mammalianinterleukin-1β-converting enzyme[J].Cell, 1993,641-652.を参照）。
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュの尾ビレを器械で切断し、ゼブラフィッシュ炎症モデルを構築した。モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（２０．２）は、正常コントロールグループ（４．８）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これはモデル構築の成功を意味する。なお、稚魚の尾ビレの一部を切断した稚魚尾創傷モデルは、最も知られているゼブラフィッシュダメージモデルである。本発明者は、このような遺伝子導入ゼブラフィッシュの損傷モデルについて、好中球細胞の特有なペルオキシターゼ触媒の転写を制御しつつ発現させた緑色蛍光タンパク（ＥＧＦＰ）を利用し、損傷部位への好中球細胞の走化性に関する最新メカニズムを研究した（具体的には、J.Yuan, S.Shaham,S.Ledoux,et al. TheC.elegans cell death gene ced-3 encodes a protein similar to mammalianinterleukin-1β-converting enzyme[J].Cell, 1993,641-652.を参照）。
＜実験方法＞
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュの尾ビレを器械で切断した後、６穴プレートの１穴ごとに３０匹をランダムに入れた。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン剤の濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。５時間処理した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ社製のＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓ Ｄ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュの尾ビレを器械で切断した後、６穴プレートの１穴ごとに３０匹をランダムに入れた。Ｍ型−ＳＯＤを水溶液とし、それぞれ１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬの濃度にした。また、陽性コントロールのインドメタシン剤の濃度を６０μＭにした。穴ごとに３ｍＬの薬液を投入すると共に、正常コントロールグループおよびモデルコントロールグループを設けた。５時間処理した後、グループごとに、ランダムに１０匹のゼブラフィッシュを選び、蛍光顕微鏡で観察し、撮影した画像を保存した。ＮＩＫＯＮ社製のＮＩＳ−Ｅｌｅｍｅｎｔｓ Ｄ ３．１０（高級画像処理ソフト）で画像を分析し、炎症化ゼブラフィッシュにおける好中球細胞の個数（Ｎ）を計算し、定量分析を行った。試料の炎症解消率の計算式は以下の通りである。
式中、試験対象グループは、Ｍ型−ＳＯＤで処理されたグループと、インドメタシン剤で処理された陽性コントロールグループとを含む。
分散分析およびＤｕｎｎｅｔｔ's Ｔ−テストで統計学的分析を行ったところ、ｐ＜０．０５であった。これは、有義差の存在を意味する。代表的な実験グラフを作成した。
＜実験結果＞
モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（２０．２）は、正常コントロールグループ（４．８）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（７．６）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であり、その炎症解消率は６２％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１４．３、９．９、８．４および８．３であり、その炎症解消率は、それぞれ２９％、５１％、５８％および５９％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、p＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、ゼブラフィッシュの尾切断損傷による炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と分量との相関性を表している。詳細を表６、図１９、図２０および図２１に示す。
モデルコントロールグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（２０．２）は、正常コントロールグループ（４．８）と比べ、ｐ＜０．００１であった。これは、モデル構築の成功を意味する。また、インドメタシンを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数（７．６）は、モデルコントロールグループと比べ、p＜０．００１であり、その炎症解消率は６２％であった。これは、インドメタシンが抗炎症効果を有することを意味する。１５０μｇ／ｍＬ、４５０μｇ／ｍＬ、１３５０μｇ／ｍＬおよび２０００μｇ／ｍＬのＭ型−ＳＯＤを用いたグループでは、炎症部位における好中球細胞の個数は、それぞれ１４．３、９．９、８．４および８．３であり、その炎症解消率は、それぞれ２９％、５１％、５８％および５９％であった。モデルコントロールグループと比べ、Ｍ型−ＳＯＤを用いたグループは、p＜０．０１、およびｐ＜０．００１であった。これは、本実験の濃度条件下のＭ型−ＳＯＤが、ゼブラフィッシュの尾切断損傷による炎症に対して顕著な抗炎症効果を有することを意味する。また、効果と分量との相関性を表している。詳細を表６、図１９、図２０および図２１に示す。
上記実験１〜３によると、本発明のＭ型−ＳＯＤは、複数種の外因性刺激、たとえば、硫酸銅、ＬＰＳおよび尾切断により誘発されたゼブラフィッシュ炎症の何れに対しても顕著な抗炎症効果を有することが分かる。上記の幾つかの実験では、体の単核大食細胞システムは、ＬＰＳの継続的な刺激により、大量のサイトカインや活性酸素等の生物活性物質を生成し、細胞のダメージやアポトーシスを引き起こし、最終的には制御不能な炎症反応を誘起した。また、ゼブラフィッシュの聴覚細胞にダメージを与えて炎症を引き起こし得るＣｕＳＯ４は、局所性炎症反応の研究に用いられた。物理的な力でゼブラフィッシュの尾ビレを切断する尾切断実験は、ダメージ性炎症反応の研究に用いられた。また、遺伝子導入により好中球細胞を蛍光化したゼブラフィッシュにおける好中球細胞数を顕微鏡で観察することにより、モデル構築が成功したかどうかを確認し、その後、薬物（インドメタシン）およびＭ型−ＳＯＤでの処理をそれぞれ行った。非ステロイド系抗炎症薬であるインドメタシンは、抗炎症、解熱および鎮痛の効果を有するが、不良反応の発生率が比較的高かった。なお、薬物で処理した後、炎症部位における好中球細胞数が少なければ少ないほど、炎症の解消が速くなり、薬物の抗炎症効果がより優れることを意味する。以上の実験データによると、全身性、局所性および物理的ダメージ性の炎症の何れにおいても、Ｍ型−ＳＯＤによる治療効果は、薬物であるインドメタシンよりも優れ、またはそれに相当するものであった。
〔実施例６〕皮膚炎症に対する、本発明の突然変異型耐高温性スーパーオキシドジスムターゼ（Ｍ型−ＳＯＤ）による治療効果
（実験１ 皮膚炎性湿疹に対する本発明による治療の臨床観察）
合計５１名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性２４名および女性２７名のうち、年齢５〜１５歳の被験者が１４名、２０〜３０歳の被験者が２６名、４０〜５０歳の被験者が６名、５０歳以上の被験者が５名であった。
（実験１ 皮膚炎性湿疹に対する本発明による治療の臨床観察）
合計５１名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性２４名および女性２７名のうち、年齢５〜１５歳の被験者が１４名、２０〜３０歳の被験者が２６名、４０〜５０歳の被験者が６名、５０歳以上の被験者が５名であった。
＜診断基準＞
皮膚炎性湿疹の症状として、皮膚が赤色に変わり、重度な場合には、少々腫れ、または丘疹が発生して頂部に水疱が生じ、かゆくなる。掻き破った後、かさぶたが形成される（図２２中、上側の写真を参照）。
皮膚炎性湿疹の症状として、皮膚が赤色に変わり、重度な場合には、少々腫れ、または丘疹が発生して頂部に水疱が生じ、かゆくなる。掻き破った後、かさぶたが形成される（図２２中、上側の写真を参照）。
＜投与方法＞
１日３回、本発明の製品を患者の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
１日３回、本発明の製品を患者の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
＜治療効果の評価基準＞
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した。
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した。
改善：８０％の皮膚が正常に回復した（図２２中、下側の写真を参照）。
無効：一部の皮膚が改善基準に達さず、または改善されず、ないしは悪化し続けた。
＜結果＞
（実験２ 白癬に対する本発明による治療の臨床観察）
合計４７名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性２２名および女性２５名のうち、年齢１５〜３０歳の被験者が１８名、３０〜５０歳の被験者が２３名、５０歳以上の被験者が６名であった。
合計４７名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性２２名および女性２５名のうち、年齢１５〜３０歳の被験者が１８名、３０〜５０歳の被験者が２３名、５０歳以上の被験者が６名であった。
＜診断基準＞
手・足の白癬の症状として、足の指（手の指）の間の皮膚に角化、水疱、丘疹、糜爛、発赤性腫れが発生し、局所的発赤性腫れや、強烈な痒みが常に伴う（図２３における上側の２つの写真を参照）。
手・足の白癬の症状として、足の指（手の指）の間の皮膚に角化、水疱、丘疹、糜爛、発赤性腫れが発生し、局所的発赤性腫れや、強烈な痒みが常に伴う（図２３における上側の２つの写真を参照）。
＜投与方法＞
１日３回、本発明の製品を患者の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
１日３回、本発明の製品を患者の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
＜治療効果の評価基準＞
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した（図２３中、下側の２つの写真を参照）。
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した（図２３中、下側の２つの写真を参照）。
改善：８０％の皮膚が正常に回復した。
無効：一部の皮膚が改善基準に達さず、または改善されず、ないしは悪化し続けた。
＜結果＞
（実験３ 過敏性皮膚炎に対する本発明による治療の臨床観察）
合計７４名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性３８名および女性３６名のうち、年齢１５〜３０歳の被験者が３４名、３０〜５０歳の被験者が３１名、５０歳以上の被験者が９名であった。
合計７４名の被験者に、本製品（Ｍ型−ＳＯＤをグリセリンに溶解、均一混合し、最終濃度が４０００〜６０００Ｕ／ｍｇになるように調製したもの）を試験的に投与した。実験の内訳は、男性３８名および女性３６名のうち、年齢１５〜３０歳の被験者が３４名、３０〜５０歳の被験者が３１名、５０歳以上の被験者が９名であった。
＜診断基準＞
抗原に起因する皮膚病である過敏性皮膚炎の主な症状として、人体が何らかの抗原に晒された場合に生じた皮膚の発赤性腫れ、痒み、膨疹、皮の剥け等（図２４中、上側の写真を参照）。
抗原に起因する皮膚病である過敏性皮膚炎の主な症状として、人体が何らかの抗原に晒された場合に生じた皮膚の発赤性腫れ、痒み、膨疹、皮の剥け等（図２４中、上側の写真を参照）。
＜投与方法＞
１日３回、本発明の製品を患部の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
１日３回、本発明の製品を患部の皮膚表面に塗布し、７日間の使用を１クールとした。
＜治療効果の評価基準＞
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した（図２４中、下側の写真を参照）。
有効：１週間使用した後、皮膚が正常に回復した（図２４中、下側の写真を参照）。
改善：８０％の皮膚が正常に回復した。
無効：一部の皮膚が改善基準に達さず、または改善されず、ないしは悪化し続けた。
＜結果＞
＜結論＞
炎症は、感染源、外傷または組織虚血に対する生体の防御反応である。炎症に共通する最も重要な病理学的特徴は、白血球（好中球細胞および大食細胞）の遷移、集結および浸潤である。中でも、好中球細胞の走化、遷移および集結による効果は、急性ダメージおよび炎症反応に対する効果的防御のための生体免疫反応メカニズムである。特に、生体自身の組織が損傷された場合や、体外の物質に侵された場合には、このような防御効果はさらに重要になる。
炎症は、感染源、外傷または組織虚血に対する生体の防御反応である。炎症に共通する最も重要な病理学的特徴は、白血球（好中球細胞および大食細胞）の遷移、集結および浸潤である。中でも、好中球細胞の走化、遷移および集結による効果は、急性ダメージおよび炎症反応に対する効果的防御のための生体免疫反応メカニズムである。特に、生体自身の組織が損傷された場合や、体外の物質に侵された場合には、このような防御効果はさらに重要になる。
しかし、このような防御プロセス（血管透過性の増加、白血球の遷移、集結および浸潤）では、局所的な酸化ストレスを引き起こすフリーラジカルが大量に生じるため、この酸化ストレスが解消（フリーラジカルが分解）されなければ、生体の組織および細胞のダメージ（脂質の過酸化、ＤＮＡダメージ等）が引き起こされ、炎症性細胞がダメージ箇所に過剰に集結し、継続的な、重度な炎症反応が誘起される。これは、ヒトに発生する様々な疾患、たとえば、慢性潰瘍性結腸炎、膣炎、咽頭炎等の粘膜炎症；やけど、熱傷、切り傷、感染、または外科手術もしくは放射線／化学的治療等の外因性炎症因子による炎症；手・足の白癬、皮膚炎、湿疹等の皮膚炎症、等において類似、共通の特徴である。
様々な炎症反応の発生や進行には、病理学上で共通する基礎、即ち、好中球細胞の走化効果と遷移効果が存在する。炎症部位への好中球細胞の走化や遷移を効果的に抑制することは、有効な抗炎症薬物のスクリーニングの鍵となる。本発明は、複数種類のゼブラフィッシュ炎症モデルの構築に成功し、対応する臨床観察を実験として行った。その結果、本発明のＭ型−ＳＯＤは、多くの炎症に対する治療効果が顕著であることが分かった。さらに、本発明は、炎症解消プロセスにおける好中球細胞の変化の規則を示した。このような細胞は、上記のように様々な炎症反応に関する特徴的な指標であるが、本発明のＭ型−ＳＯＤは、上記プロセスにおける酸素フリーラジカルを除去することにより消炎効果を発揮している。したがって、本発明で提供されるＭ型−ＳＯＤは、たとえば、様々な粘膜炎症、外因性炎症因子による炎症または皮膚炎症等、多くの炎症を効果的に治療することができる。
Claims (13)
- アミノ酸配列が配列表中の配列番号４に示されることを特徴とするスーパーオキシドジスムターゼ。
- 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼをコードする遺伝子であって、
好ましくは、上記遺伝子の配列が、配列表中の配列番号３に示されるＤＮＡ配列である、遺伝子。 - 請求項２に記載の遺伝子を含む発現ベクター、遺伝子導入細胞系、および宿主菌。
- 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼを有効治療量で含むことを特徴とする薬物組成物。
- 抗菌剤、および／または薬学的に許容可能な担体、および／または賦形剤をさらに含むことを特徴とする請求項４に記載の薬物組成物。
- 調剤の形態が内服型または外用型であり、
上記内服型は、好ましくは経口液剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒剤、経口散剤であり、
上記外用型は、好ましくは外用散剤、軟膏剤、貼布剤、外用液剤、坐剤、スプレー剤、エアゾール剤、吸入剤であることを特徴とする請求項４または５に記載の薬物組成物。 - 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼを有効量で含むことを特徴とする化粧品組成物。
- 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼを含むことを特徴とする食品添加剤。
- 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼを作製する方法であって、
スーパーオキシドジスムターゼをコードする請求項２に記載の遺伝子を発現させることによるか、または化学的合成方法により、請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼを得ることを特徴とする方法。 - 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼ、または請求項２に記載の遺伝子、または請求項３に記載の発現ベクター、遺伝子導入細胞系、および宿主菌、または請求項４〜６のいずれか１項に記載の薬物組成物の、抗炎症薬物の作製における応用。
- 上記炎症は、粘膜炎症、外因性炎症因子による炎症、または皮膚炎症を含む請求項１０に記載の応用。
- 上記粘膜炎症は、呼吸器系、消化管、生殖器官、聴覚器官、視覚器官の粘膜炎症を含み、好ましくは口腔潰瘍、歯齦炎、腸炎、胃炎、膣炎、骨盤内炎症、膀胱炎、子宮頸管炎、鼻炎、咽頭炎、中耳炎、外耳道炎、結膜炎、角膜炎であり、
上記外因性炎症因子による炎症は、生物的因子、物理的因子、外因性化学的因子またはこれらの組み合わせによる炎症を含み、
生物的因子による炎症は、好ましくは細菌、ウイルス、リケッチア、病原虫、真菌、スピロヘータおよび寄生虫が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含み、
物理的因子による炎症は、好ましくは物理的力、高温、低温、電離放射線、紫外線が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含み、さらに好ましくはやけど、熱傷、凍傷、日焼け、切り傷、放射線ダメージにより引き起こされる炎症、または、外科手術後もしくは放射線治療後に発生する炎症であり、
外因性化学的因子による炎症は、好ましくは放射性物質、強酸、強アルカリ、強酸化剤、アルコール、化学品が生体に作用することにより引き起こされる炎症を含み、さらに好ましくはアルコール性もしくは薬物誘発性肝炎、化学療法後に発生する炎症であり、
上記皮膚炎症は、手・足の白癬、毛嚢炎、接触性皮膚炎、湿疹、蕁麻疹、神経性皮膚炎、脂漏性皮膚炎を含み、好ましくは乳幼児湿疹であることを特徴とする請求項１１に記載の応用。 - 請求項１に記載のスーパーオキシドジスムターゼ、または請求項２に記載の遺伝子、または請求項３に記載の発現ベクター、遺伝子導入細胞系、および宿主菌の、化粧品の作製における用途であって、
上記化粧品は、好ましくは老化や皮膚の色素沈着を防止する化粧品である、用途。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610099824.8A CN105624126B (zh) | 2016-02-23 | 2016-02-23 | 一种新型重组高稳定性超氧化物歧化酶及其应用 |
| CN201610099824.8 | 2016-02-23 | ||
| PCT/CN2016/112123 WO2017143850A1 (zh) | 2016-02-23 | 2016-12-26 | 一种新型重组高稳定性超氧化物歧化酶及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2018533981A true JP2018533981A (ja) | 2018-11-22 |
| JP6691609B2 JP6691609B2 (ja) | 2020-04-28 |
Family
ID=56039475
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2018545540A Active JP6691609B2 (ja) | 2016-02-23 | 2016-12-26 | 新規の組換え高安定性スーパーオキシドジスムターゼおよびその応用 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10391048B2 (ja) |
| EP (1) | EP3421594B1 (ja) |
| JP (1) | JP6691609B2 (ja) |
| KR (1) | KR102057035B1 (ja) |
| CN (1) | CN105624126B (ja) |
| WO (1) | WO2017143850A1 (ja) |
Families Citing this family (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105624126B (zh) * | 2016-02-23 | 2017-02-01 | 杭州睿道医药科技有限公司 | 一种新型重组高稳定性超氧化物歧化酶及其应用 |
| CN107823635A (zh) * | 2017-11-29 | 2018-03-23 | 杭州睿道医药科技有限公司 | 锰型高稳定性超氧化物歧化酶的应用 |
| KR102223657B1 (ko) * | 2018-09-04 | 2021-03-08 | 주식회사 제노포커스 | 염증성 장질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
| CN109276711B (zh) * | 2018-10-18 | 2022-04-05 | 杭州睿道医药科技有限公司 | 锰型高稳定性超氧化物歧化酶在改善自闭症中的应用及产品 |
| CN110872581B (zh) * | 2019-12-03 | 2022-07-22 | 苏州大学 | 一种耐高温、带ptd的突变型sod和应用 |
| CN112891521A (zh) * | 2019-12-04 | 2021-06-04 | 凯睿恒济生物医药(杭州)有限公司 | 锰型高稳定性超氧化物歧化酶在脑卒中预防或治疗中的应用 |
| CN112725295A (zh) * | 2020-05-27 | 2021-04-30 | 浙江工业大学 | 一种重组型超氧化物歧化酶及其编码基因和制备方法 |
| CN112067764B (zh) * | 2020-08-26 | 2023-06-27 | 南京新环检测科技有限公司 | 一种评价化妆品对皮肤炎症舒缓或修复功效的方法 |
| CN112033944B (zh) * | 2020-08-26 | 2023-03-28 | 南京新环检测科技有限公司 | 一种评价化妆品对皮肤刺激性的方法 |
| CN112245596B (zh) * | 2020-11-09 | 2022-01-18 | 浙江大学 | 一种基于斑马鱼炎症性肠病模型筛选药效物质的方法 |
| EP4000598A1 (en) * | 2020-11-17 | 2022-05-25 | The Boots Company plc | Tetrapeptide and compositions comprising tetrapeptides |
| US20220403412A1 (en) * | 2021-06-11 | 2022-12-22 | Hui JING | Baculovirus Of Recombinant Superoxide Dismutase Gene, Preparation And Application Thereof |
| CN114277004B (zh) * | 2021-12-01 | 2023-10-17 | 浙江安各洛生物技术有限公司 | 一种耐高温重组突变型sod及其编码基因和应用 |
| CN115975960A (zh) * | 2022-11-15 | 2023-04-18 | 自然资源部第三海洋研究所 | 深海管状蠕虫Ridgeia piscesae超氧化物歧化酶RPSOD及制备方法 |
| CN116042551B (zh) * | 2022-12-13 | 2024-01-12 | 广州美神生物科技有限公司 | 一种高活性超氧化物歧化酶及其制备方法和在制备抗氧产品中的应用 |
| CN116369249B (zh) * | 2023-01-13 | 2024-05-17 | 四川轻化工大学 | 斑马鱼肠炎模型的构建方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61185184A (ja) * | 1984-12-28 | 1986-08-18 | Piasuaraizu Kk | 新規ス−パ−オキシドジスムタ−ゼ |
| JPH0530976A (ja) * | 1991-07-26 | 1993-02-09 | Yotsuba Nyugyo Kk | 耐熱性スーパーオキシドジスムターゼをコードする遺伝子及びそれを含むプラスミド |
| JPH07135970A (ja) * | 1993-06-11 | 1995-05-30 | Heliosynthese Sa | 熱安定性スーパーオキシドジスムターゼの産生・抽出方法 |
| WO2007108434A1 (ja) * | 2006-03-20 | 2007-09-27 | National University Corporation Nagoya University | 凝集体形成性タンパク質分解用の発現コンストラクト、及び凝集体形成性タンパク質が凝集体を形成することを抑制する方法 |
| JP2008005797A (ja) * | 2006-06-30 | 2008-01-17 | Toyota Motor Corp | 溶媒組成物 |
| JP2008530241A (ja) * | 2005-02-18 | 2008-08-07 | ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド | スーパーオキシドジスムターゼ−１の凝集を阻害する化合物 |
| JP2010270222A (ja) * | 2009-05-21 | 2010-12-02 | Toyota Motor Corp | 溶媒組成物 |
| CN104357410A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 岭南师范学院 | 一种修饰龙舌兰麻sod冻干粉的制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101275144B (zh) | 2008-03-13 | 2012-04-04 | 浙江清华长三角研究院 | 重组耐高温超氧化物岐化酶的高密度发酵与纯化工艺 |
| CN101985614A (zh) * | 2010-10-13 | 2011-03-16 | 中国石油大学(华东) | 一种快速制备重组耐热锰超氧化物歧化酶的方法 |
| CN104946606B (zh) * | 2015-07-03 | 2018-11-02 | 南开大学 | 一种基因工程改造的耐热抗逆sod及其编码基因与应用 |
| CN105112379A (zh) * | 2015-09-28 | 2015-12-02 | 上海巨朗生物科技有限公司 | 基于耐受极端条件的超氧化物歧化酶sod、制备方法及其应用 |
| CN105624126B (zh) * | 2016-02-23 | 2017-02-01 | 杭州睿道医药科技有限公司 | 一种新型重组高稳定性超氧化物歧化酶及其应用 |
-
2016
- 2016-02-23 CN CN201610099824.8A patent/CN105624126B/zh active Active
- 2016-12-26 EP EP16891298.8A patent/EP3421594B1/en active Active
- 2016-12-26 JP JP2018545540A patent/JP6691609B2/ja active Active
- 2016-12-26 WO PCT/CN2016/112123 patent/WO2017143850A1/zh active Application Filing
- 2016-12-26 KR KR1020187017051A patent/KR102057035B1/ko active IP Right Grant
- 2016-12-26 US US15/767,991 patent/US10391048B2/en active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61185184A (ja) * | 1984-12-28 | 1986-08-18 | Piasuaraizu Kk | 新規ス−パ−オキシドジスムタ−ゼ |
| JPH0530976A (ja) * | 1991-07-26 | 1993-02-09 | Yotsuba Nyugyo Kk | 耐熱性スーパーオキシドジスムターゼをコードする遺伝子及びそれを含むプラスミド |
| JPH07135970A (ja) * | 1993-06-11 | 1995-05-30 | Heliosynthese Sa | 熱安定性スーパーオキシドジスムターゼの産生・抽出方法 |
| JP2008530241A (ja) * | 2005-02-18 | 2008-08-07 | ザ ブライハム アンド ウイメンズ ホスピタル， インコーポレイテッド | スーパーオキシドジスムターゼ−１の凝集を阻害する化合物 |
| WO2007108434A1 (ja) * | 2006-03-20 | 2007-09-27 | National University Corporation Nagoya University | 凝集体形成性タンパク質分解用の発現コンストラクト、及び凝集体形成性タンパク質が凝集体を形成することを抑制する方法 |
| JP2008005797A (ja) * | 2006-06-30 | 2008-01-17 | Toyota Motor Corp | 溶媒組成物 |
| JP2010270222A (ja) * | 2009-05-21 | 2010-12-02 | Toyota Motor Corp | 溶媒組成物 |
| CN104357410A (zh) * | 2014-11-05 | 2015-02-18 | 岭南师范学院 | 一种修饰龙舌兰麻sod冻干粉的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J. MOL. BIOL., vol. Vol. 219, JPN6019009771, 1991, pages pp. 335-358 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105624126B (zh) | 2017-02-01 |
| EP3421594B1 (en) | 2021-04-28 |
| JP6691609B2 (ja) | 2020-04-28 |
| KR102057035B1 (ko) | 2020-01-22 |
| WO2017143850A1 (zh) | 2017-08-31 |
| US20180303743A1 (en) | 2018-10-25 |
| EP3421594A4 (en) | 2019-10-02 |
| EP3421594A1 (en) | 2019-01-02 |
| US10391048B2 (en) | 2019-08-27 |
| KR20180082583A (ko) | 2018-07-18 |
| CN105624126A (zh) | 2016-06-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6691609B2 (ja) | 新規の組換え高安定性スーパーオキシドジスムターゼおよびその応用 | |
| JP3902406B2 (ja) | 老化防御効果を示すテトラペプチド、これを基にした薬理学的物質、及びその利用法 | |
| EA016576B1 (ru) | Применение сложных эфиров гидроксибензойной кислоты для получения лекарственного средства для предупреждения и лечения папилломавирусной инфекции человека | |
| KR102567756B1 (ko) | 커큐민-펩타이드 컨쥬게이트 및 이의 제형 | |
| CN113768917A (zh) | 木犀草素在抑制nlrp3炎症小体活化中的应用 | |
| CN113995766B (zh) | 地高辛在制备治疗和/或预防骨关节炎的药物中的用途 | |
| CN1723955A (zh) | 射干提取物及其制备方法和用途 | |
| CN103641889B (zh) | 一种降糖肽及其药物用途 | |
| CN1230160C (zh) | 竹叶总黄酮在制备前列腺疾病防治药物中的应用 | |
| CN113880915A (zh) | 用于修复黏膜损伤或皮肤创伤的多肽及其应用 | |
| CN106177900B (zh) | 一种抗人乳头瘤病毒的凝胶及其制备方法 | |
| CN103443265A (zh) | 组合物和用于分离、表征且施用可溶性含硒糖蛋白的方法 | |
| CN102836152B (zh) | 酸浆苦素b在制备治疗和/或预防血吸虫病药物中的应用 | |
| CN102631360B (zh) | 齐墩果烷型皂苷在制备治疗和/或预防血吸虫病药物中的应用 | |
| JP6039670B2 (ja) | 乾燥抽出物の製造方法 | |
| CN101249141A (zh) | 一种北豆根提取物及制剂和制备方法及用途 | |
| Lyu et al. | Neuroprotective Effect of Dexmedetomidine on Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury in Rats. | |
| RU2742160C1 (ru) | Способ лечения алеутской болезни норок | |
| WO2019104587A1 (zh) | 一种药物组合物及其用途 | |
| CN107669700A (zh) | 一种治疗溃疡性结肠炎的药物及其制备方法 | |
| CN110127642B (zh) | 含氩化合物及其制备方法和用途 | |
| Guo et al. | S-Methylisothiourea induces apoptosis of herpes simplex virus-1-infected microglial cells | |
| WO2008095429A1 (fr) | Glycoprotéine destinée au traitement de maladies pulmonaires obstructives chroniques | |
| CN105748471A (zh) | 利托那韦的医药新用途 | |
| CN105797132A (zh) | 沙奎拉韦的医药新用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180518 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190313 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190319 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190619 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190730 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191017 |
|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200317 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200410 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6691609 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |