JP2018523826A - 光開裂可能標識を使用する抗原検出の方法 - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、概して、組織学、病理学、および分子生物学の分野に関する。より具体的には、本発明は、例えば、多重および連続抗原検出を含む抗原検出のための光開裂可能標識(PCL)の使用に関する。
典型的に使用される免疫染色プロトコルにおいては、抗原特異的抗体を、組織切片、細胞、またはタンパク質ブロットを含むがこれらに限定されない抗原含有標本へ添加し、抗原へ結合させる。この抗原結合化抗体は、次いで、以下を含む様々な技術のいずれかを使用して検出される:(a)フルオロフォア(例えば、Cy5)または比色検出のために使用される酵素(例えば、HRP)へコンジュゲートされた、第1抗体について特異的親和性を有する、第2抗体;(b)フルオロフォア(例えば、Cy5)または比色検出のために使用される酵素(例えば、HRP)へコンジュゲートされたアビジンまたはストレプトアビジンを使用してその後検出されるビオチンへコンジュゲートされた、第1抗体について特異的親和性を有する、第2抗体;ならびに(c)第1抗体へ直接コンジュゲートされている、フルオロフォア(例えば、Cy5)または比色検出のために使用される酵素(例えば、HRP)またはビオチン。場合(a)および(b)において、そのような技術は、それぞれユニークに標識された、約3個の抗体が、同じサンプルにおいて使用されることを可能にする。場合(c)において、そのような技術は、別々に画像化することができる別個の標識へコンジュゲートされた約4個の抗体に制限される。しかしながら、二次抗体間の非特異的相互作用、および個々の標識を検出する制限された能力は、より高次の多重化を妨げている。新しい多重技術が出現しているが、多くは、例えば、時間がかかる、高価である、かつ/または広範囲に最適化された一次抗体を必要とするという欠点に悩まされている。抗原検出を自動化するための改良された方法および機器が望ましい。
の抗原結合された抗原結合性複合体を形成しており、
光開裂可能標識の存在は第1抗原の存在を示す。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、コンジュゲーション部分へ結合された一次抗体を含み、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(III):
によってさらに定義される。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、第1リガンドへ共有結合的にコンジュゲートされた一次抗体を含み、第1リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(V):
によってさらに定義される。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、第1リガンドへ共有結合された一次抗体を含み、第1リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、第2リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(VII):
によってさらに定義される。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、二次抗体によって結合された一次抗体を含み、二次抗体は第1リガンドへ共有結合されており、第1リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(IX):
によってさらに定義される。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、二次抗体によって結合された一次抗体を含み、二次抗体は第1リガンドへ共有結合されており、第1リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、第2リガンドは第1抗-リガンドへ非共有結合されており、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(XI):
によってさらに定義される。
によって定義され、
第1抗原結合性複合体は、二次抗体によって結合された一次抗体を含み、二次抗体は、官能性リンカーを通して光開裂可能標識へ共有結合されており、抗原結合された抗原結合性複合体は、式(XIII):
によってさらに定義される。
によってさらに定義される。
固定組織標本中の抗原の免疫蛍光検出は、臨床診療および研究所において慣例的に使用されている。現在の方法は、1組織切片当たり1〜4つの抗原の検出に制限されている。従って、追加の抗原の検出は、別個の切片上における複数の独立した染色を必要とし、単一の切片上における抗原の共局在化を制限する。さらに、現在の方法は、染色および画像化が分離されたプロセスであるために、非常に時間を消費する。
様々な態様において、本発明は、光開裂可能標識が官能性リンカーを介してコンジュゲートされている「抗原結合性複合体」を構築するために必要とされる様々なインキュベーティング段階を含む、サンプル上または中の少なくとも第1抗原の存在を検出する方法を提供する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.第1リガンド/第1抗-リガンドブロック(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン/ビオチンブロック)を行う。
5.一次抗体と共にインキュベートする。
6.洗浄する。
7.第1リガンド-コンジュゲート化(例えば、ビオチン化)二次抗体と共にインキュベートする。
8.洗浄する。
9.第1抗-リガンド(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン)と共にインキュベートする。
10.洗浄する。
11.第2リガンド(例えば、ビオチン)-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
12.洗浄する。
13.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
14.光開裂する。
15.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.第1リガンド/第1抗-リガンドブロック(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン/ビオチンブロック)を行う。
5.一次抗体と共にインキュベートする。
6.洗浄する。
7.第1リガンド-コンジュゲート化(例えば、ビオチン化)二次抗体と共にインキュベートする。
8.洗浄する。
9.第1抗-リガンド(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン)-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
10.洗浄する。
11.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
12.光開裂する。
13.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.一次抗体と共にインキュベートする。
5.洗浄する。
6.光開裂可能標識へコンジュゲートされた二次抗体と共にインキュベートする。
7.洗浄する。
8.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
9.光開裂する。
10.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.第1リガンド/第1抗-リガンドブロック(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン/ビオチンブロック)を行う。
5.第1リガンド-コンジュゲート化(例えば、ビオチン化)一次抗体と共にインキュベートする。
6.洗浄する。
7.第1抗-リガンド(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン)-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
8.洗浄する。
9.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
10.光開裂する。
11.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.第1リガンド/第1抗-リガンドブロック(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン/ビオチンブロック)を行う。
5.第1リガンド-コンジュゲート化(例えば、ビオチン化)一次抗体と共にインキュベートする。
6.洗浄する。
7.第1抗-リガンド(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン)と共にインキュベートする。
8.洗浄する。
9.第2リガンド(例えば、ビオチン)-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
10.洗浄する。
11.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
12.光開裂する。
13.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.非タンパク質第1リガンド-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
5.洗浄する。
6.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
7.光開裂する。
8.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
1.必要に応じて抗原検出のためにサンプルを調製する(例えば、脱パラフィン、再水和など)。これらについての方法は当業者に周知である。
2.抗原回復を行う(例えば、熱 + 塩 + pH)。
3.非特異的抗原ブロッキングを行う(例えば、BSA、血清、または非タンパク質ベースのブロッキング剤、例えばTween(登録商標)-20)。
4.第1リガンド/第1抗-リガンドブロック(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン/ビオチンブロック)を行う。
5.第1リガンド-コンジュゲート化(例えば、ビオチン化)アプタマーと共にインキュベートする。
6.洗浄する。
7.第1抗-リガンド(例えば、アビジンまたはストレプトアビジン)と共にインキュベートする。
8.洗浄する。
9.第2リガンド(例えば、ビオチン)-結合化光開裂可能標識と共にインキュベートする。
10.洗浄する。
11.光開裂可能標識からのシグナルを検出する。
12.光開裂する。
13.任意で、光開裂可能標識からのシグナルの非存在を検出することによって光開裂の成功を確認する。
本発明のいくつかの局面は、連続的にかつ/または同時に単一のサンプル中における複数のタンパク質を検出することに使用するための、改善されたUV開裂速度を有する光開裂可能標識を提供することへ向けられる。例えば365 nm UV光での、2-ニトロベンジルまたは置換2-ニトロベンジル基の開裂は、前回のサイクルにおいて使用された標識からの干渉なしに、抗原検出の次のサイクルが行われることを可能にする。理論によって拘束されないが、少なくとも2つの因子が、置換2-ニトロベンジル基のUV開裂速度に影響を与えることがわかった:(a)2-ニトロベンジル基のα炭素置換の立体化学、および(b)ベンジル環上の置換。
前述したように、本明細書に開示される例示的な方法は、自動次世代組織学(NGH)装置によって行ってもよい。最初に図13を参照して、そのような装置100の一つの例示的な態様の図が提供される。装置100は、抗原検出抗体を除去する必要なく、サンプルの同じ組織切片における複数の迅速な染色サイクルを可能にすることができる。さらに下記において考察されるように、装置100はまた、手動時間の短縮のための自動流体工学、および多重PCL検出のための顕微鏡イメージングシステムを含む。示される態様において、装置100は、イメージングシステム110、サンプルチャンバ120、および流体制御システム130を含む。
用語「抗原」は、本明細書において使用される場合、サンプル上または中に存在する任意の標的物質を指す。例えば、抗原は、タンパク質、糖類、脂質、核酸、リガンド、糖質、薬物標的、またはそれらの組み合わせであり得る。抗原は、細胞中または上に存在し得る。抗原は、正常細胞ではなく癌細胞中または上にのみ存在し得る。抗原は、細胞フリーサンプル、例えば、血清または細胞溶解物中に存在し得る。
以下の実施例は、本発明の好ましい態様を示すために含まれる。当業者は、以下の実施例で開示される技術が、本発明の実施において十分に機能すると本発明者によって発見された技術を代表するものであり、従って、その実施の好ましい様式を構成すると考えられ得ることを認識すべきである。しかし、当業者は、本開示に照らして、本発明の精神および範囲を逸脱することなく、開示されている具体的な態様に多くの変更を行い、なお類似または同様の結果を得ることができることを認識すべきである。
この実施例は、式(IX)の抗原結合された抗原結合性複合体を説明する。先ず、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)前立腺癌組織切片を調製し、PBS中のBSAでブロッキングした。次いで、切片をマウス抗-サイトケラチン抗体と共にインキュベートし、続いて洗浄した。次に、切片をビオチン化ヤギ抗-マウスIgG二次抗体と共にインキュベートし、続いて洗浄した。次いで、切片をアビジンもしくはストレプトアビジンまたはバッファー単独のいずれかと共にインキュベートし、続いて洗浄した。次いで、切片をビオチン-コンジュゲート化光開裂可能Cy5またはアビジン-フルオレセインのいずれかと共にインキュベートし、続いて洗浄した。ビオチン-コンジュゲート化光開裂可能Cy5は、その5'末端でビオチン修飾およびその3'末端でdC-Cy5(図8)を有した。最後に、20×水浸レンズを使用して、切片を画像化した。図1は、ビオチン-コンジュゲート化光開裂可能Cy5が、二次抗体のビオチン化に依存する様式でシグナルを生じさせたことを示している。
この実施例は、式(VII)の抗原結合された抗原結合性複合体を説明する。連続FFPEについて、組織を、先ず、ビオチン化抗-平滑筋アクチンと共に2時間、アビジンと共に30分間、光開裂可能AF532を含有するビオチン-コンジュゲート化プローブと共に20分間インキュベートし、その後、緑色チャネルを画像化した。150 mW/cm2での2分間のUV曝露後、組織に対して、ヒストンH3抗体および赤色光開裂可能Cy5を用いて同じ染色手順を行った。同じ視野を、赤色チャネルにおいて画像化し、ImageJソフトウェアを使用して前回の緑色チャネル上に重ね合わせた(図11)。
別の実験において、ヒト前立腺(正常)の6μm切片を調製し、3つの連続するサイクルにおいて染色した。各サイクルにおいて組織切片を複数の標的タンパク質についてプローブし、各サイクルでの様々な波長での単一のイメージング事象は、様々な標的タンパク質からのシグナルをキャプチャーした。UV曝露による開裂事象に続いて、組織を、標的タンパク質の次のセットについて再びプローブした。3つのそのような多重サイクルは、単一の組織切片中において以下の8つの標的をキャプチャーした:サイクルI:コラーゲン(CNA35)、Hoechst(核DNA)、抗-ALCAMおよび抗-CD44;サイクルII:抗-サイトケラチンおよび抗-SMA;サイクルIII:抗-フィブロネクチンおよび抗-ヒストンH3。各サイクルは4つのチャネルからの画像をキャプチャーした:Cy7(750nm)、Cy5(650nm)、Cy2(488 nm)およびHoechst(365 nm)。実験の完了時に、Cy2チャネルを使用して、3つの画像データセットを共表示した。単一の12-チャネル画像への画像統合を、ImageJソフトウェアを使用して行った。図19は、循環的な多重染色および画像化を示す。
実施例2に記載される手順を使用して、FFPE組織切片を調製した。各々がユニークな蛍光色素を有する、3つのユニークなビオチン-光開裂可能標識を有する3つの抗体を使用して、同じ組織切片上の3つの組織領域において、多重染色を達成した。組織切片をブロッキングし、ビオチン標識化一次抗体、ストレプトアビジン、ビオチン標識化光開裂可能標識と共に連続的にインキュベートし、そしてこのサイクルをその後の2つの抗体および光開裂可能標識について繰り返した。抗-CD44は光開裂可能Cy3によって、抗-29-7は光開裂可能Cy5によって、そして抗-ヒストンH3は光開裂可能Cy7によって検出された。単一の画像が、3つの適切な波長でシグナルをキャプチャーし、ImageJソフトウェアを使用して画像合成を行い、3つの別個の色で3つの別個の領域を共視覚化した(図20)。単一の光開裂事象が、画像化後、全ての光開裂可能標識からシグナルを放出させた(図21)。
部分的に二本鎖のビオチン-オリゴヌクレオチド-光開裂可能Cy5蛍光色素を調製するために、dC-Cy5(図8)を、図2に示されるように、DNAポリメラーゼを使用して、上部オリゴの3'へ伸長した。二本鎖産物をRP-HPLCによって精製した。収集された二本鎖産物溶液の体積を減らした。次いで、産物を1× PBS中50μM最終濃度へ希釈した。
個々の組織切片(前立腺癌、ヒト)を単一のバッチ中において調製した。切片をブロッキングし(アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、総タンパク質)、ビオチン化抗-SMA抗体で染色し、続いて、アビジンを添加し、次いで、一連のPCL(スタンダード・デュプレックスPCL、ロング・デュプレックスPCL、ショート・デュプレックスPCL、およびシングルビオチンPCL;図12を参照のこと)のうちの1つを同一の濃度で添加した。スタンダード・デュプレックスPCLは、それらの5'末端上にビオチンおよびそれらの3'末端上に光開裂可能蛍光標識を有する2つの34-ヌクレオチドオリゴからなり、オリゴをアニーリングし、各末端上に4ヌクレオチド一本鎖突出部を有する28-ヌクレオチド二本鎖セクションを形成させた。ロング・デュプレックスPCLは、それらの5'末端上にビオチンおよびそれらの3'末端上に光開裂可能蛍光標識を有する2つの69-ヌクレオチドオリゴからなり、オリゴをハイブリダイズさせ、各末端上に2ヌクレオチド一本鎖突出部を有する67-ヌクレオチド二本鎖セクションを形成させた。ショート・デュプレックスPCLは、その5'末端上にビオチンおよびその3'末端上に光開裂可能蛍光標識を有する単一の12-ヌクレオチドオリゴからなった。シングルビオチンPCLは、各ハイブリッド中の2つのオリゴのうちの1つのみがその5'末端上にビオチンを有したことを除いて、スタンダードPCLと同じであった。加えて、光開裂可能ビオチンを有するオリゴヌクレオチド(IDT-PCL;Integrated DNA Technologies, Coralville, Iowa製)での染色を、同一の濃度のPCLで別個のバッチ中において行った。IDT-PCLは、それらの5'末端上に光開裂可能ビオチンおよびそれらの3'末端上に蛍光標識を有する2つの34-ヌクレオチドオリゴからなり、オリゴをハイブリダイズさせ、各末端上に4ヌクレオチド一本鎖突出部を有する28-ヌクレオチド二本鎖セクションを形成させた(図12)。各切片についての視野の中央を、タイムラプスイメージング中、光開裂した(それぞれの間に2分間フラッシュを伴って3 × 2秒間)。等しいサイズの2つの領域(ROI)においてシグナル強度を測定した:特定のステインの1つの領域およびバックグラウンドの1つの領域。ステインの最大強度を経時的に追跡した(図10A)。シグナルとバックグラウンドとの差を、絶対的シグナル(図10B)および最大シグナルの%(図10C)として両方ともプロットした。タイムラプスキャプチャーに加えて、各染色切片の画像を、光開裂前および光開裂後の両方において得た。図11D〜Hは、約25枚の画像を一緒に継ぎ合わせることによって作られた各切片の画像を示す。これらのデータは、全てのプローブバリエーションがPCLとして使用可能であることを示している。
この実施例は、式(III)の抗原結合された抗原結合性複合体を説明する。2つの一本鎖オリゴヌクレオチドをIDT(Integrated DNA Technologies, Coralville, Iowa)から得、そのうちの1つのオリゴヌクレオチドは5'C6アミノ修飾を有した。オリゴヌクレオチドをアニーリングし、部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドを形成し、-dC-Cy5またはdU-Cy7PCLを3'末端へ伸長した。PCL合成に続いて、RP-HPLC精製を行った。Sulfo-SMCC(二官能性架橋剤)を二本鎖の5'アミノ修飾鎖へ結合し、反応物をRP-HPLCによって精製した。Sulfo-SMCCをアミド連結によってオリゴヌクレオチドの5'末端上の第1級アミンへ結合した。SMCCリンカーは抗体へのプローブの直接連結を可能にし、プローブと抗体との間の別個のリガンド-レセプターコネクション、例えば、前述した、ビオチン-アビジンまたはストレプトアビジン連結の必要性を排除した。追加のリガンドの排除は、非特異的相互作用および立体障害(stearic hindrance)のリスクを減らした。
Claims (118)
- 光開裂可能標識を光開裂する工程をさらに含む、請求項1記載の方法。
- 光開裂する工程が、サンプルを紫外線に曝露することを含む、請求項2記載の方法。
- 光開裂可能標識が、光開裂可能部分へ共有結合されたレポーター部分を含む、請求項1記載の方法。
- 光開裂可能部分が、2-ニトロベンジル基、ベンゾイン基、クマリニル基、およびp-ヒドロキシフェナシル基からなる群より選択される、請求項4記載の方法。
- 光開裂可能部分が2-ニトロベンジル基である、請求項5記載の方法。
- 2-ニトロベンジル基が、α炭素上および/またはベンゼン環上に置換を含む、請求項6記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項1記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項8記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項8記載の方法。
- 一次抗体が、少なくとも1つの還元剤によって修飾されている、請求項11記載の方法。
- 少なくとも1つの還元剤がTCEPまたは2-MEAである、請求項12記載の方法。
- コンジュゲーション部分がヘテロ二官能性リンカーである、請求項11記載の方法。
- ヘテロ二官能性リンカーがSulfo-SMCCまたはSM(PEG)nである、請求項14記載の方法。
- コンジュゲーション部分が一次抗体へ共有結合されている、請求項11記載の方法。
- コンジュゲーション部分が官能性リンカーへ共有結合されている、請求項11記載の方法。
- 官能性リンカーが、5'末端にC6アミノ修飾および3'末端に光開裂可能標識を有する部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項11記載の方法。
- サンプルを一次抗体および第1抗-リガンドと連続的に接触させる工程をさらに含む、請求項19記載の方法。
- サンプルを一次抗体および第1抗-リガンドと同時に接触させる工程をさらに含む、請求項19記載の方法。
- 第1リガンドが、ビオチン、アビジンもしくはストレプトアビジン、または第1の一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項19記載の方法。
- 第1抗-リガンドが、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、または第1の一本鎖オリゴヌクレオチドに対して少なくとも部分的に相補的な第2の一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項22記載の方法。
- 光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項19記載の方法。
- 同じ光開裂可能標識の2つの事象(occurrence)が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項24記載の方法。
- 2つの異なる光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項24記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項24記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項27記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項27記載の方法。
- サンプルを一次抗体、第1抗-リガンド、および/または第2リガンドと連続的に接触させる工程をさらに含む、請求項30記載の方法。
- サンプルを一次抗体、第1抗-リガンド、および/または第2リガンドと同時に接触させる工程をさらに含む、請求項30記載の方法。
- 光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項30記載の方法。
- 同じ光開裂可能標識の2つの事象が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項33記載の方法。
- 2つの異なる光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項33記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項33記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項36記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項36記載の方法。
- 第1リガンドが、ビオチンまたはアビジンもしくはストレプトアビジンである、請求項30記載の方法。
- 第1抗-リガンドが、アビジンもしくはストレプトアビジンまたはビオチンである、請求項30記載の方法。
- 第2リガンドが、ビオチンまたはアビジンもしくはストレプトアビジンである、請求項30記載の方法。
- サンプルを一次抗体、二次抗体、および/または第1抗-リガンドと連続的に接触させる工程をさらに含む、請求項42記載の方法。
- サンプルを一次抗体、二次抗体、および/または第1抗-リガンドと同時に接触させる工程をさらに含む、請求項42記載の方法。
- 第1リガンドが、ビオチン、アビジンもしくはストレプトアビジン、または第1の一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項42記載の方法。
- 第1抗-リガンドが、アビジンもしくはストレプトアビジン、ビオチン、または第1の一本鎖オリゴヌクレオチドに対して少なくとも部分的に相補的な第2の一本鎖オリゴヌクレオチドである、請求項45記載の方法。
- 光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項42記載の方法。
- 同じ光開裂可能標識の2つの事象が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項47記載の方法。
- 2つの異なる光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第1抗-リガンドへ共有結合されている、請求項47記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項47記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項50記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項50記載の方法。
- サンプルを一次抗体、二次抗体、第1抗-リガンド、および/または第2リガンドと連続的に接触させる工程をさらに含む、請求項53記載の方法。
- サンプルを一次抗体、二次抗体、第1抗-リガンド、および/または第2リガンドと同時に接触させる工程をさらに含む、請求項53記載の方法。
- 光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項53記載の方法。
- 同じ光開裂可能標識の2つの事象が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項56記載の方法。
- 2つの異なる光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第2リガンドへ共有結合されている、請求項56記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項56記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項59記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項59記載の方法。
- 第1リガンドが、ビオチンまたはアビジンもしくはストレプトアビジンである、請求項53記載の方法。
- 第1抗-リガンドが、アビジンもしくはストレプトアビジンまたはビオチンである、請求項53記載の方法。
- 第2リガンドが、ビオチンまたはアビジンもしくはストレプトアビジンである、請求項53記載の方法。
- サンプルを一次抗体および二次抗体と連続的に接触させる工程をさらに含む、請求項65記載の方法。
- サンプルを一次抗体および二次抗体と同時に接触させる工程をさらに含む、請求項65記載の方法。
- 同じ光開裂可能標識の2つの事象が、官能性リンカーを通して二次抗体へ共有結合されている、請求項65記載の方法。
- 2つの異なる光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して二次抗体へ共有結合されている、請求項65記載の方法。
- 官能性リンカーが、一本鎖オリゴヌクレオチド、少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチド、ペプチド、またはアルカンジイル(C≦16)である、請求項65記載の方法。
- 部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、完全に二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項70記載の方法。
- 少なくとも部分的に二本鎖のオリゴヌクレオチドが、ヘアピンオリゴヌクレオチドである、請求項70記載の方法。
- サンプルをアプタマーと接触させる工程をさらに含む、請求項73記載の方法。
- 方法が、サンプル中の少なくとも2つの抗原の存在を検出する方法と定義され、方法が、サンプル中の少なくとも第2光開裂可能標識の存在を検出する工程をさらに含み、
第2光開裂可能標識が、官能性リンカーを通して第2抗原結合性複合体へコンジュゲートされており、
第2抗原結合性複合体が、第2抗原へ結合されており、
第2光開裂可能標識の存在が、第2抗原の存在を示す、
請求項1記載の方法。 - 第1光開裂可能標識を検出する工程および第2光開裂可能標識を検出する工程が、同時に行われる、請求項75記載の方法。
- 第1抗原結合性複合体および第2抗原結合性複合体が、各々、ユニークな光開裂可能標識を含む、請求項75記載の方法。
- 第1抗原結合性複合体および第2抗原結合性複合体が、各々、同じ光開裂可能標識を含む、請求項75記載の方法。
- 第1光開裂可能標識を検出する工程および第2光開裂可能標識を検出する工程が、連続的に行われる、請求項75記載の方法。
- 第2光開裂可能標識を検出する工程の前に、第1光開裂可能標識を光開裂する工程をさらに含む、請求項79記載の方法。
- 光開裂する工程が、サンプルを紫外線に曝露することを含む、請求項80記載の方法。
- 第2光開裂可能標識の検出後に、第2光開裂可能標識を光開裂する工程をさらに含む、請求項79記載の方法。
- 光開裂が、サンプルを紫外線に曝露することを含む、請求項82記載の方法。
- 自動化された方法としてさらに定義される、請求項75記載の方法。
- 光開裂可能標識が、比色色素、蛍光色素、放射性標識、化学発光基、または生物発光基である、請求項1記載の方法。
- サンプルが、組織切片、生検サンプル、細胞培養サンプル、細胞スミア、またはタンパク質溶解物である、請求項1記載の方法。
- サンプルを画像化するように構成されたイメージングシステム;
流体入口および流体出口を含むサンプルチャンバ;ならびに
複数のリザーバーを含む流体制御システムであって、サンプルチャンバの流体入口および流体出口と流体連結されている、流体制御システム
を含む、
段階1〜71の方法のいずれかを行うように構成された装置。 - 流体制御システムが、サンプルの自動連続染色を提供するように構成されている、請求項87記載の装置。
- 流体制御システムが、サンプルチャンバとおよび複数のリザーバーと流体連結されているバルブをさらに含む、請求項87記載の装置。
- バルブがロータリーバルブである、請求項89記載の装置。
- 第1抗原から第1抗原結合性複合体を光開裂するように構成された光源
をさらに含む、請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
イメージング溶液を含有する第1リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
洗浄溶液を含有する第2リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
開裂溶液を含有する第3リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
バッファー溶液を含有する第4リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
ハイブリダイゼーション洗浄溶液を含有する第5リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
ハイブリダイゼーション溶液を含有する第6リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 複数のリザーバーが、
イメージング溶液を含有する第1リザーバー;
洗浄溶液を含有する第2リザーバー;
開裂溶液を含有する第3リザーバー;
バッファー溶液を含有する第4リザーバー;
ハイブリダイゼーション洗浄溶液を含有する第5リザーバー;および
ハイブリダイゼーション溶液を含有する第6リザーバー
を含む、
請求項87記載の装置。 - 流体制御システムが、サンプルチャンバとならびに第1、第2、第3、第4、第5および第6リザーバーと流体連結されているバルブをさらに含む、請求項98記載の装置。
- サンプルチャンバが、
顕微鏡用スライド;
カバーガラス;および
顕微鏡用スライドとカバーガラスとの間に配置されたガスケット
を含む、
請求項87記載の装置。 - サンプルチャンバの流体入口および流体出口が、カバーガラスへ接続されている、請求項100記載の装置。
- サンプルチャンバが、X-Y面で動くように構成されたプラットフォームへ接続されている、請求項87記載の装置。
- サンプルチャンバの流体出口が、流体輸送デバイスへ接続されている、請求項87記載の装置。
- 流体輸送デバイスがシリンジポンプである、請求項103記載の装置。
- イメージングシステムが、
顕微鏡;
光源;
ライトガイドアダプター;および
カメラ
を含む、
請求項87記載の装置。 - 流体入口および流体出口を含むサンプルチャンバ;
サンプルチャンバ中のサンプルを画像化するように構成されたイメージングシステム;
サンプル上または中の第1抗原から第1抗原結合性複合体を光開裂するように構成された光源;ならびに
サンプルチャンバの流体入口および流体出口と流体連結されている流体制御システムであって、サンプルチャンバと流体連結されている複数のリザーバーを含む、流体制御システム
を含む、サンプル上または中の少なくとも第1抗原の存在を検出するための装置。 - 流体制御システムが、サンプルの自動連続染色を提供するように構成されている、請求項106記載の装置。
- イメージングシステムが、サンプルの自動画像化を提供するように構成されている、請求項107記載の装置。
- 複数のリザーバーが、
イメージング溶液を含有する第1リザーバー;
洗浄溶液を含有する第2リザーバー;
開裂溶液を含有する第3リザーバー;
バッファー溶液を含有する第4リザーバー;
ハイブリダイゼーション洗浄溶液を含有する第5リザーバー;および
ハイブリダイゼーション溶液を含有する第6リザーバー
を含む、
請求項106記載の装置。 - 流体制御システムが、サンプルチャンバとならびに第1、第2、第3、第4、第5および第6リザーバーと流体連結されているバルブをさらに含む、請求項109記載の装置。
- バルブがロータリーバルブである、請求項110記載の装置。
- サンプルチャンバが、
顕微鏡用スライド;
カバーガラス;および
顕微鏡用スライドとカバーガラスとの間に配置されたガスケット
を含む、
請求項106記載の装置。 - サンプルチャンバが、X-Y面で動くように構成されたプラットフォームへ接続されている、請求項106記載の装置。
- サンプルチャンバの流体入口および流体出口が、カバーガラスへ接続されている、請求項112記載の装置。
- サンプルチャンバの流体出口が、流体輸送デバイスへ接続されている、請求項87記載の装置。
- 流体輸送デバイスがシリンジポンプである、請求項115記載の装置。
- イメージングシステムが、
顕微鏡;
光源;
ライトガイドアダプター;および
カメラ
を含む、
請求項106記載の装置。 - 同時にまたはランダムアクセスによって複数のサンプルチャンバを染色および画像化するように構成されている、請求項106記載の装置。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020179211A1 (ja) * | 2019-03-06 | 2020-09-10 | ソニー株式会社 | 粒子標識用試薬、粒子染色方法、及び顕微鏡システム |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018200713A1 (en) * | 2017-04-25 | 2018-11-01 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Compositions and methods for targeted tumor immunotherapy |
EP3431173A1 (en) * | 2017-07-19 | 2019-01-23 | Bayer Pharma Aktiengesellschaft | Continuous manufacture of guidance molecule drug conjugates |
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CN114556074A (zh) * | 2019-06-14 | 2022-05-27 | 阿科亚生物科学股份有限公司 | 多重组织成像 |
CN111381034A (zh) * | 2020-03-03 | 2020-07-07 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种gpc-3抗体包被磁珠及其制备方法、试剂盒 |
US20230390773A1 (en) * | 2020-10-05 | 2023-12-07 | Clara Biotech, Inc. | Apparatus, system, and method for analyte release |
CN112595845B (zh) * | 2020-12-09 | 2022-10-21 | 深圳普门科技股份有限公司 | 透明质酸检测试剂盒及检测系统 |
Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050017191A1 (en) * | 2002-07-12 | 2005-01-27 | Montagu Jean I. | Excitation and imaging of fluorescent arrays |
US20090203023A1 (en) * | 2008-02-11 | 2009-08-13 | University Of Wyoming | Concentrating Microorganisms in Aqueous Solution Prior to Selective Staining and Detection |
JP2009538629A (ja) * | 2006-05-30 | 2009-11-12 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 抗体およびイムノコンジュゲートとこれらの使用方法 |
US20110031966A1 (en) * | 2009-08-04 | 2011-02-10 | Snu R&Db Foundation | Non-contact type transducer having multi-loop coil for plate member |
JP2011518320A (ja) * | 2008-04-02 | 2011-06-23 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 生体試料の反復染色 |
US20110311966A1 (en) * | 2008-12-17 | 2011-12-22 | Medizinische Hochschule Hannover | Detection conjugate and method for analysis |
EP2728359A1 (en) * | 2012-10-30 | 2014-05-07 | Samsung Electronics Co., Ltd | A method of sequential and multiple immunostaining for detection of various antigens in the same specimens |
JP2014532043A (ja) * | 2011-09-13 | 2014-12-04 | レーザーゲン インコーポレイテッド | 5−メトキシ3’−oh非遮断高速光開裂性末端ヌクレオチドおよび核酸配列決定のための方法 |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US41115A (en) * | 1864-01-05 | Edward b | ||
US6589736B1 (en) | 1994-11-22 | 2003-07-08 | The Trustees Of Boston University | Photocleavable agents and conjugates for the detection and isolation of biomolecules |
US6358689B1 (en) | 1994-05-11 | 2002-03-19 | Boston University | Detection of markers in nascent proteins |
CN2444230Y (zh) | 2000-05-16 | 2001-08-22 | 陈智 | 免疫组织化学仪 |
CN101203598A (zh) | 2005-04-21 | 2008-06-18 | 塞莱勒斯诊断公司 | 用于自动快速免疫组织化学的设备和强化的流体方法 |
WO2007068906A2 (en) | 2005-12-12 | 2007-06-21 | Innova Biosciences Ltd | Production of conjugates |
CA2727709C (en) | 2008-06-11 | 2017-11-14 | Lasergen, Inc. | Nucleotides and nucleosides and methods for their use in dna sequencing |
CN102230895B (zh) | 2011-03-31 | 2014-10-29 | 中国科学院合肥物质科学研究院 | 一种利用荧光蛋白作为荧光探针测量电离辐射下细胞氧化胁迫损伤的方法 |
AU2015222268B2 (en) | 2014-02-26 | 2017-06-29 | Ventana Medical Systems, Inc. | Photo-selective method for biological sample analysis field |
AU2016295158B2 (en) | 2015-07-17 | 2021-02-25 | Nanostring Technologies, Inc. | Simultaneous quantification of gene expression in a user-defined region of a cross-sectioned tissue |
-
2016
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-
2021
- 2021-02-12 US US17/174,860 patent/US20210181191A1/en not_active Abandoned
-
2022
- 2022-08-01 AU AU2022210222A patent/AU2022210222A1/en active Pending
Patent Citations (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050017191A1 (en) * | 2002-07-12 | 2005-01-27 | Montagu Jean I. | Excitation and imaging of fluorescent arrays |
JP2009538629A (ja) * | 2006-05-30 | 2009-11-12 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 抗体およびイムノコンジュゲートとこれらの使用方法 |
US20090203023A1 (en) * | 2008-02-11 | 2009-08-13 | University Of Wyoming | Concentrating Microorganisms in Aqueous Solution Prior to Selective Staining and Detection |
JP2011518320A (ja) * | 2008-04-02 | 2011-06-23 | ゼネラル・エレクトリック・カンパニイ | 生体試料の反復染色 |
US20110311966A1 (en) * | 2008-12-17 | 2011-12-22 | Medizinische Hochschule Hannover | Detection conjugate and method for analysis |
US20110031966A1 (en) * | 2009-08-04 | 2011-02-10 | Snu R&Db Foundation | Non-contact type transducer having multi-loop coil for plate member |
JP2014532043A (ja) * | 2011-09-13 | 2014-12-04 | レーザーゲン インコーポレイテッド | 5−メトキシ3’−oh非遮断高速光開裂性末端ヌクレオチドおよび核酸配列決定のための方法 |
EP2728359A1 (en) * | 2012-10-30 | 2014-05-07 | Samsung Electronics Co., Ltd | A method of sequential and multiple immunostaining for detection of various antigens in the same specimens |
Non-Patent Citations (5)
Title |
---|
AGASTI ET AL., J AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 134(45), JPN6020025797, 2012, pages 18499 - 18502, ISSN: 0004505597 * |
CHEN ET AL., N. AM. J. MED. SCI., vol. 2, no. 5, JPN6020025803, 2010, pages 241 - 245, ISSN: 0004505600 * |
RAMOS ET AL., HELV. CHIM. ACTA,, vol. 92, JPN6020025801, 2009, pages 613 - 622, ISSN: 0004505599 * |
ROGER RAMOS: "Photocleavage of Peptides and Oligodeoxynucleotides Carrying 2‐Nitrobenzyl Groups", HELVETICA CHIMICA ACTA, vol. 92, no. 4, JPN6021002912, April 2009 (2009-04-01), pages 613 - 622, XP071269984, ISSN: 0004505596, DOI: 10.1002/hlca.200800361 * |
VALLEY CHRISTOPHER C ET AL., PLOS ONE, vol. 10, no. 4, JPN6020025799, 10 April 2015 (2015-04-10), pages 1 - 22, ISSN: 0004505598 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2020179211A1 (ja) * | 2019-03-06 | 2020-09-10 | ソニー株式会社 | 粒子標識用試薬、粒子染色方法、及び顕微鏡システム |
Also Published As
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