JP2012518613A - スイッチング可能な親和性結合剤 - Google Patents
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Abstract
【選択図】図4
Description
Her2発現に関する陽性対照としてSKOV3ヒト卵巣細胞(ATCC)を使用した。ATCCプロトコルに従い、10%FBS及び1%ペニシリン−ストレプトマイシンを含むMcCoy5a培地中でSKOV3細胞を培養した。
上記実施例10に記載したようにしてSKOV3を調製して標識し、次いで未標識CHO細胞と混合することで、10%SKOV3細胞及び90%CHO細胞を得た。続く結合及び遊離試験は、上記実施例10に記載したようにCy5−CS4を用いて実施した。
細胞結合及びビーズ捕獲:SKOV3及びCHO細胞(106個/試料)をPBS中の1%BSAを用いて4℃で15分間ブロックした後、200μLの5μg/mLビオチン−PEG12−CS3結合剤を添加した。次いで、この混合物を穏やかに振盪しながら4℃で30分間インキュベートした。次いで、試料を遠心分離し、PBSで2回洗浄して過剰の未結合ビオチン−PEG12−CS3を除去した。Dynal Streptavidin磁気ビーズ(Invitrogen社)を室温のPBSで3回洗浄した後、150μLのこのビーズスラリーを細胞−結合剤混合物の各々に添加し、30〜60分間インキュベートした。インキュベーション後、磁石でビーズを捕獲し、未結合細胞を4℃で洗浄除去した後、イメージングによって結合細胞を定量化した。
た。
SP−NHSの合成:元来はAizawa et alによって発表されたプロトコルの修正バージョンを用いてスピロピラン前駆体分子SPを合成した。磁気撹拌棒を備えたフラスコに、2,3,3−トリメチルインドレニン(3.2mL、20mmol)及びβ−ヨードプロピオン酸(4.0g、20mmol)を添加した。得られた混合物を80℃で3時間加熱した後、室温(rt)に冷却し、メタノール(30〜50mL)で希釈した。酢酸エチル(150mL)の添加は、所望の1−カルボキシエチル−2,3,3−トリメチルインドレニウムヨージド生成物(TMII)の沈殿が誘起した。このピンク色固体をさらに過剰の酢酸エチルで数回洗浄し、減圧下で乾燥し、それ以上精製せずに使用した。生成物の正体及び相対純度は、TLC(5%MeOH/95%CH2Cl2)を用いて確認した。
細胞株及び培養条件:ヒト急性骨髄性白血病細胞KG1の変異体亜株KG1a(ATCC)及び前骨髄細胞株HL−60(ATCC、カタログ番号CCL−240)をそれぞれ培養し、製造者のプロトコルに従って2×105〜1×106個/mLの濃度に維持した。簡単に述べれば、細胞を5%CO2の雰囲気下において20%のウシ胎児血清を含むIscove's Modified Dulbecco's Medium(IMDM)(ATCC)中で37℃で維持した。週2回又は必要に応じて継代培養を行った。
実施例14と全く同様にして、CellTracker Green(CTG)細胞標識及び2つの独立したマイクロプレートの抗体固定化を実施した。細胞添加後、一方のプレートは室温で明視野照明に30分間暴露したのに対し、他方のプレートは室温で20分間の暗所インキュベーションと共に(ベンチトップ型トランスイルミネーターを用いて365nmの)UVA光に10分間暴露した(即ち、20分間の暗所インキュベーションによって隔てられた2×5分間のUVA暴露)。次いで、PBSBEで3回洗浄し、得られた保持細胞を上記のようにして可視化しかつ定量化した。
実施例15と全く同様にして、CellTrace Far Red(CTFR)細胞標識、抗体固定化、並びにマイクロプレートインキュベーション及び露光条件を実施した。
Claims (15)
- 細胞の結合及び遊離を行うためのキットであって、
細胞を結合するための高親和性状態と細胞を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含み、かつアフィボディ、抗体、ペプチド、そのフラグメント又はこれらの組合せの1以上を含む結合剤
を含むキット。 - 標的の結合及び遊離を行うためのキットであって、
標的を結合するための高親和性状態と標的を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含み、かつ2ヘリックス結合剤を含む結合剤
を含むキット。 - 標的が細胞、病原体、ウイルス、抗体又は抗体フラグメント、タンパク質、核酸、ペプチド、脂質、多糖或いはこれらの組合せである、請求項2記載のキット。
- 標的の結合及び遊離を行うためのキットであって、
標的を結合するための高親和性状態と標的を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含み、かつ化学修飾抗体又はそのフラグメントを含む結合剤
を含むキット。 - 標的が細胞、病原体、ウイルス、抗体又は抗体フラグメント、タンパク質、核酸、ペプチド、脂質、多糖或いはこれらの組合せである、請求項4記載のキット。
- 細胞の結合及び遊離を行うための方法であって、
細胞を結合するための高親和性状態と細胞を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含む1種以上の結合剤を細胞に接触させる段階、及び
スイッチが結合剤への細胞の結合又は結合剤からの細胞の遊離を引き起こすためのトリガーを導入する段階
を含む方法。 - トリガーが酸、塩基、熱、光、磁場、電場、還元剤、塩又はこれらの組合せの1以上を含む、請求項6記載の方法。
- 結合剤がアフィボディ、抗体、ペプチド、そのフラグメント又はこれらの組合せの1以上を含む、請求項6記載の方法。
- 標的の結合及び遊離を行うための方法であって、
標的を結合するための高親和性状態と標的を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含み、かつ2ヘリックス結合剤を含む1種以上の結合剤を標的に接触させる段階、及び
スイッチが結合剤への標的の結合又は結合剤からの標的の遊離を引き起こすためのトリガーを起動する段階
を含む方法。 - 標的が細胞、病原体、ウイルス、抗体又は抗体フラグメント、タンパク質、核酸、ペプチド、脂質、多糖或いはこれらの組合せである、請求項9記載の方法。
- トリガーが酸、塩基、熱、光、磁場、電場、還元剤、塩又はこれらの組合せの1以上からなる、請求項9記載の方法。
- 標的の結合及び遊離を行うための方法であって、
標的を結合するための高親和性状態と標的を遊離するための低親和性状態との間のスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含み、かつ化学修飾抗体又はそのフラグメントを含む1種以上の結合剤を標的に接触させる段階、及び
スイッチが結合剤への標的の結合又は結合剤からの標的の遊離を引き起こすためのトリガーを起動する段階
を含む方法。 - 標的が細胞、病原体、ウイルス、抗体又は抗体フラグメント、タンパク質及び核酸から選択される、請求項12記載の方法。
- トリガーが酸、塩基、熱、光、還元剤、塩又はこれらの組合せの1以上からなる、請求項12記載の方法。
- 試料中の複数の標的を検出する方法であって、
異なる親和性状態の間でのスイッチングが可能な環境反応性分子スイッチを含む結合剤を含むプローブを試料に適用して検査対象標的に結合する段階、
プローブを検出する段階、
外部刺激を適用してプローブを検査対象標的から遊離させる段階、
第2のプローブを適用して第2の検査対象標的に結合する段階、
第2のプローブを検出する段階、並びに
段階c及びdを必要に応じて複数回繰り返す段階
を含む方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2015083764A1 (ja) * | 2013-12-04 | 2015-06-11 | 中外製薬株式会社 | 化合物の濃度に応じて抗原結合能の変化する抗原結合分子及びそのライブラリ |
US11673947B2 (en) | 2012-05-30 | 2023-06-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Target tissue-specific antigen-binding molecule |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20140057282A1 (en) * | 2009-07-07 | 2014-02-27 | General Electric Company | Switchable affinity binders |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5985658A (en) * | 1997-11-14 | 1999-11-16 | Health Research Incorporated | Calmodulin-based cell separation technique |
WO2001053325A2 (en) * | 2000-01-24 | 2001-07-26 | The Regents Of The University Of California | Method of affinity purifying proteins using modified bis-arsenical fluorescein |
US20070202530A1 (en) * | 2002-03-15 | 2007-08-30 | Ross Amelia A | Devices And Methods For Isolating And Recovering Target Cells |
JP2008522195A (ja) * | 2004-12-01 | 2008-06-26 | マサチューセッツ・インスティテュート・オブ・テクノロジー | 光電子検出システム |
WO2009141664A1 (en) * | 2008-05-23 | 2009-11-26 | The University Of Sheffield | Separation method |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0767674A4 (en) * | 1994-06-29 | 1999-06-16 | Texas Biotechnology Corp | METHOD FOR INHIBITING THE BINDING OF INTEGRIN ALPHA 4 BETA 1 TO VCAM-1 OR FIBRONECTIN |
CA2262893C (en) * | 1996-08-02 | 2010-07-13 | Department Of The Army, U.S. Government | Peptides responsive to antibodies against a consensus peptide of the cs4-cfa/i family proteins |
AU2001287537A1 (en) * | 2000-08-11 | 2002-02-25 | Ruprecht-Karls-Universitat Heidelberg | Fv constructs with an influenceable affinity for substance that is to be linked |
CN1952659B (zh) * | 2005-10-19 | 2011-09-14 | 陕西北美基因股份有限公司 | 一种亲和素/链亲和素磁性复合微粒及其制备方法与用途 |
US8198043B2 (en) | 2006-12-08 | 2012-06-12 | General Electric Company | Two helix binders |
-
2009
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Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5985658A (en) * | 1997-11-14 | 1999-11-16 | Health Research Incorporated | Calmodulin-based cell separation technique |
WO2001053325A2 (en) * | 2000-01-24 | 2001-07-26 | The Regents Of The University Of California | Method of affinity purifying proteins using modified bis-arsenical fluorescein |
US20070202530A1 (en) * | 2002-03-15 | 2007-08-30 | Ross Amelia A | Devices And Methods For Isolating And Recovering Target Cells |
JP2008522195A (ja) * | 2004-12-01 | 2008-06-26 | マサチューセッツ・インスティテュート・オブ・テクノロジー | 光電子検出システム |
WO2009141664A1 (en) * | 2008-05-23 | 2009-11-26 | The University Of Sheffield | Separation method |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN5012008699; BIOCHEMICAL PHARMACOLOGY Vol. 59, No. 1, 20000101, P. 1-6 * |
JPN5012008700; CELL Vol. 78, No. 5, 1994, P. 897-909 * |
JPN5012008701; INTERNATIONAL JOURNAL OF RADIATION BIOLOGY Vol. 76, No. 9, 2000, P. 1265-1271 * |
JPN6014026494; Protein Engineering Design and Selection Vol. 20, No. 4, 2007, P. 155-161 * |
Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11673947B2 (en) | 2012-05-30 | 2023-06-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Target tissue-specific antigen-binding molecule |
WO2015083764A1 (ja) * | 2013-12-04 | 2015-06-11 | 中外製薬株式会社 | 化合物の濃度に応じて抗原結合能の変化する抗原結合分子及びそのライブラリ |
KR20160093666A (ko) * | 2013-12-04 | 2016-08-08 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 화합물의 농도에 따라 항원 결합능이 변화되는 항원 결합 분자 및 그의 라이브러리 |
JPWO2015083764A1 (ja) * | 2013-12-04 | 2017-03-16 | 中外製薬株式会社 | 化合物の濃度に応じて抗原結合能の変化する抗原結合分子及びそのライブラリ |
EP3763813A1 (en) * | 2013-12-04 | 2021-01-13 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecules, the antigen-binding activity of which varies according to the concentration of compounds, and libraries of said molecules |
US10961530B2 (en) | 2013-12-04 | 2021-03-30 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecules, the antigen-binding activity of which varies according to the concentration of compounds, and libraries of said molecules |
KR102284503B1 (ko) | 2013-12-04 | 2021-07-30 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 화합물의 농도에 따라 항원 결합능이 변화되는 항원 결합 분자 및 그의 라이브러리 |
KR20210096309A (ko) * | 2013-12-04 | 2021-08-04 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 화합물의 농도에 따라 항원 결합능이 변화되는 항원 결합 분자 및 그의 라이브러리 |
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KR102454360B1 (ko) | 2013-12-04 | 2022-10-12 | 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 | 화합물의 농도에 따라 항원 결합능이 변화되는 항원 결합 분자 및 그의 라이브러리 |
US11912989B2 (en) | 2013-12-04 | 2024-02-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antigen-binding molecules, the antigen-binding activity of which varies according to the concentration of compounds, and libraries of said molecules |
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