JP2017501708A - ポリエチレングリコール部分を含む化合物を用いて支持体に細胞を固定化する方法 - Google Patents
ポリエチレングリコール部分を含む化合物を用いて支持体に細胞を固定化する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017501708A JP2017501708A JP2016541241A JP2016541241A JP2017501708A JP 2017501708 A JP2017501708 A JP 2017501708A JP 2016541241 A JP2016541241 A JP 2016541241A JP 2016541241 A JP2016541241 A JP 2016541241A JP 2017501708 A JP2017501708 A JP 2017501708A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- moiety
- cell
- hydrophobic
- group
- cells
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 251
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 197
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims abstract description 56
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 35
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 title claims description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 245
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims abstract description 140
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims abstract description 131
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims abstract description 30
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims abstract description 30
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims abstract description 30
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims abstract description 30
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 76
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 64
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 49
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 49
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 46
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 42
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 claims description 37
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 29
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 claims description 29
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 27
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 26
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol group Chemical group OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 21
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 claims description 17
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 17
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 16
- UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N tetraethylene glycol Chemical compound OCCOCCOCCOCCO UWHCKJMYHZGTIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims description 15
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 14
- UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N docosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O UKMSUNONTOPOIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 claims description 12
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 claims description 12
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 11
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 11
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 11
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 claims description 11
- RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N Progesterone Chemical compound C1CC2=CC(=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H](C(=O)C)[C@@]1(C)CC2 RJKFOVLPORLFTN-LEKSSAKUSA-N 0.000 claims description 10
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- -1 More preferably Chemical class 0.000 claims description 9
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 9
- TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N tetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCC[14C](O)=O TUNFSRHWOTWDNC-HKGQFRNVSA-N 0.000 claims description 9
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 claims description 8
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 8
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 claims description 8
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims description 8
- TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 2-cyanobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1C#N TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 claims description 7
- 235000021357 Behenic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 claims description 6
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 claims description 6
- 229940116226 behenic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 6
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 6
- KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 2-aminopropane-1,3-diol Chemical compound OCC(N)CO KJJPLEZQSCZCKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical group NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 claims description 5
- 125000005587 carbonate group Chemical group 0.000 claims description 5
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 5
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 5
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 5
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 5
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 claims description 5
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 claims description 5
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 claims description 5
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 claims description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 claims description 4
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims description 4
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 claims description 4
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N oleic acid Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000186 progesterone Substances 0.000 claims description 4
- 229960003387 progesterone Drugs 0.000 claims description 4
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims description 4
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- LLUJWSJRGKQEMM-UHFFFAOYSA-N 1,3-diaminooxypropan-2-ol Chemical group NOCC(O)CON LLUJWSJRGKQEMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000005443 Circulating Neoplastic Cells Diseases 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 150000001647 brassinosteroids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 3
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 3
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 claims description 3
- 235000021313 oleic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 3
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 claims description 3
- DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N (+)-estrone Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N (16alpha,17betaOH)-Estra-1,3,5(10)-triene-3,16,17-triol Natural products OC1=CC=C2C3CCC(C)(C(C(O)C4)O)C4C3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 claims description 2
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 claims description 2
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 claims description 2
- HXWZQRICWSADMH-SEHXZECUSA-N 20-hydroxyecdysone Natural products CC(C)(C)CC[C@@H](O)[C@@](C)(O)[C@H]1CC[C@@]2(O)C3=CC(=O)[C@@H]4C[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C HXWZQRICWSADMH-SEHXZECUSA-N 0.000 claims description 2
- 125000002853 C1-C4 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DCEFCUHVANGEOE-UHFFFAOYSA-N Ecdysterone Natural products CC(CC(C)(C)O)C(O)C(C)(O)C1CCC2(O)C3=CC(=O)C4CC(O)C(O)CC4(C)C3CCC12C DCEFCUHVANGEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N Estrone Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 DNXHEGUUPJUMQT-CBZIJGRNSA-N 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003263 anabolic agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003098 androgen Substances 0.000 claims description 2
- AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N androst-4-ene-3,17-dione Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-QAGGRKNESA-N 0.000 claims description 2
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 claims description 2
- 229960005471 androstenedione Drugs 0.000 claims description 2
- AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N androstenedione Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CCC2=C1 AEMFNILZOJDQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- NKDFYOWSKOHCCO-UHFFFAOYSA-N beta-ecdysone Natural products C1C(O)C(O)CC2(C)C(CCC3(C(C(C)(O)C(O)CCC(C)(O)C)CCC33O)C)C3=CC(=O)C21 NKDFYOWSKOHCCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 claims description 2
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 claims description 2
- 125000004966 cyanoalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 claims description 2
- 150000002061 ecdysteroids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 claims description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 claims description 2
- PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N estriol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H]([C@H](O)C4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 PROQIPRRNZUXQM-ZXXIGWHRSA-N 0.000 claims description 2
- 229960001348 estriol Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003399 estrone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 2
- 230000002710 gonadal effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002423 hopanoids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 2
- 239000002395 mineralocorticoid Substances 0.000 claims description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940068065 phytosterols Drugs 0.000 claims description 2
- 229940037129 plain mineralocorticoids for systemic use Drugs 0.000 claims description 2
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000583 progesterone congener Substances 0.000 claims description 2
- 229940037128 systemic glucocorticoids Drugs 0.000 claims description 2
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 claims description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 abstract description 17
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 56
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 56
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 52
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 42
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 41
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 35
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 30
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 30
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 29
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 24
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 22
- 238000007444 cell Immobilization Methods 0.000 description 18
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 16
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 15
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 12
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 12
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical group O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 7
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 7
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 7
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 7
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 6
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 5
- QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M (4z)-1-(3-methylbutyl)-4-[[1-(3-methylbutyl)quinolin-1-ium-4-yl]methylidene]quinoline;iodide Chemical compound [I-].C12=CC=CC=C2N(CCC(C)C)C=CC1=CC1=CC=[N+](CCC(C)C)C2=CC=CC=C12 QGKMIGUHVLGJBR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 4
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 4
- 239000008004 cell lysis buffer Substances 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 4
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 4
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 4
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000002103 4,4'-dimethoxytriphenylmethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)(C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H])C1=C([H])C([H])=C(OC([H])([H])[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 3
- 102000018651 Epithelial Cell Adhesion Molecule Human genes 0.000 description 3
- 108010066687 Epithelial Cell Adhesion Molecule Proteins 0.000 description 3
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000013461 design Methods 0.000 description 3
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical group OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical group [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 3
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 3
- JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M sodium;4-[2-(4-iodophenyl)-3-(4-nitrophenyl)tetrazol-2-ium-5-yl]benzene-1,3-disulfonate Chemical compound [Na+].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C(=CC(=CC=2)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=N1 JUJBNYBVVQSIOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 2h-oxazine Chemical compound N1OC=CC=C1 BCHZICNRHXRCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 3-(1h-benzimidazol-2-yl)-7-(diethylamino)chromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2NC(C3=CC4=CC=C(C=C4OC3=O)N(CC)CC)=NC2=C1 GOLORTLGFDVFDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 5-[(3as,4s,6ar)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]-2-iminopentanoic acid Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCC(=N)C(=O)O)SC[C@@H]21 DEQPBRIACBATHE-FXQIFTODSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N Bilirubin Chemical compound N1C(=O)C(C)=C(C=C)\C1=C\C1=C(C)C(CCC(O)=O)=C(CC2=C(C(C)=C(\C=C/3C(=C(C=C)C(=O)N\3)C)N2)CCC(O)=O)N1 BPYKTIZUTYGOLE-IFADSCNNSA-N 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000000918 Europium Chemical class 0.000 description 2
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003491 array Methods 0.000 description 2
- LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N biotin peg2 amine Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)NCCOCCOCCN)SC[C@@H]21 LWISPDYGRSGXME-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 2
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 2
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N icosanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O VKOBVWXKNCXXDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 2
- HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N resorufin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3N=C21 HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 2
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 2
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 2
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 2
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 2
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 2
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 2
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N (4R,5S)-dethiobiotin Chemical compound C[C@@H]1NC(=O)N[C@@H]1CCCCCC(O)=O AUTOLBMXDDTRRT-JGVFFNPUSA-N 0.000 description 1
- XIIAYQZJNBULGD-UHFFFAOYSA-N (5alpha)-cholestane Natural products C1CC2CCCCC2(C)C2C1C1CCC(C(C)CCCC(C)C)C1(C)CC2 XIIAYQZJNBULGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 1
- SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound C1=CC=C2ON=NC2=C1 SLLFVLKNXABYGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 2-propionyl-6-dimethylaminonaphthalene Chemical class C1=C(N(C)C)C=CC2=CC(C(=O)CC)=CC=C21 MPPQGYCZBNURDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 2-pyridin-2-yl-1,3-oxazole Chemical compound C1=COC(C=2N=CC=CC=2)=N1 BNBQQYFXBLBYJK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 4-nitro-1,2,3-benzoxadiazole Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC=CC2=C1N=NO2 UWAUSMGZOHPBJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJYWUOCWYVJIJF-UHFFFAOYSA-N 6-(2-hydroxyethylamino)hexan-1-ol Chemical compound OCCCCCCNCCO GJYWUOCWYVJIJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N Digoxin Natural products O([C@H]1[C@H](C)O[C@H](O[C@@H]2C[C@@H]3[C@@](C)([C@@H]4[C@H]([C@]5(O)[C@](C)([C@H](O)C4)[C@H](C4=CC(=O)OC4)CC5)CC3)CC2)C[C@@H]1O)[C@H]1O[C@H](C)[C@@H](O[C@H]2O[C@@H](C)[C@H](O)[C@@H](O)C2)[C@@H](O)C1 LTMHDMANZUZIPE-AMTYYWEZSA-N 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N Ergosterol Natural products CC(C)[C@@H](C)C=C[C@H](C)[C@H]1CC[C@H]2C3=CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@@H]3CC[C@]12C DNVPQKQSNYMLRS-NXVQYWJNSA-N 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000708766 Homo sapiens Structural maintenance of chromosomes protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 239000005639 Lauric acid Substances 0.000 description 1
- 235000021353 Lignoceric acid Nutrition 0.000 description 1
- CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N Lignoceric acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCCC1=CC=C(O)C=C1 CQXMAMUUWHYSIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 1
- WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N Proflavine Chemical compound C1=CC(N)=CC2=NC3=CC(N)=CC=C3C=C21 WDVSHHCDHLJJJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N [9-(dimethylamino)-10-methylbenzo[a]phenoxazin-5-ylidene]azanium;chloride Chemical compound [Cl-].O1C2=CC(=[NH2+])C3=CC=CC=C3C2=NC2=C1C=C(N(C)C)C(C)=C2 ZHAFUINZIZIXFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N acridine orange free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=NC3=CC(N(C)C)=CC=C3C=C21 DPKHZNPWBDQZCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N acridine yellow Chemical compound [H+].[Cl-].CC1=C(N)C=C2N=C(C=C(C(C)=C3)N)C3=CC2=C1 BGLGAKMTYHWWKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003691 alpha-D-glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N alpha-D-mannose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 229940027998 antiseptic and disinfectant acridine derivative Drugs 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N auramine O free base Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(=N)C1=CC=C(N(C)C)C=C1 JPIYZTWMUGTEHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N benzoquinolinylidene Natural products C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 102000023852 carbohydrate binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008400 carbohydrate binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N cascade blue Chemical compound C=1C2=CC=CC=C2C(NCC)=CC=1C(C=1C=CC(=CC=1)N(CC)CC)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 CZPLANDPABRVHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036978 cell physiology Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- XIIAYQZJNBULGD-LDHZKLTISA-N cholestane Chemical compound C1CC2CCCC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 XIIAYQZJNBULGD-LDHZKLTISA-N 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000002079 cooperative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 150000004775 coumarins Chemical class 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000113 cyclohexyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001295 dansyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(N(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H])=C2C([H])=C([H])C([H])=C(C2=C1[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N digoxin Chemical compound C1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](C)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](O[C@@H]3C[C@@H]4[C@]([C@@H]5[C@H]([C@]6(CC[C@@H]([C@@]6(C)[C@H](O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)C[C@@H]2O)C)C[C@@H]1O LTMHDMANZUZIPE-PUGKRICDSA-N 0.000 description 1
- 229960005156 digoxin Drugs 0.000 description 1
- LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N digoxine Natural products C1C(O)C(O)C(C)OC1OC1C(C)OC(OC2C(OC(OC3CC4C(C5C(C6(CCC(C6(C)C(O)C5)C=5COC(=O)C=5)O)CC4)(C)CC3)CC2O)C)CC1O LTMHDMANZUZIPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 230000005518 electrochemistry Effects 0.000 description 1
- 238000000295 emission spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000052116 epidermal growth factor receptor activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700015053 epidermal growth factor receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002137 ergosterols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N ethyl (z)-3-(methylamino)but-2-enoate Chemical compound CCOC(=O)\C=C(\C)NC FARYTWBWLZAXNK-WAYWQWQTSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000695 excitation spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011078 in-house production Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000002032 lab-on-a-chip Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 description 1
- FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M malachite green Chemical compound [Cl-].C1=CC(N(C)C)=CC=C1C(C=1C=CC=CC=1)=C1C=CC(=[N+](C)C)C=C1 FDZZZRQASAIRJF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940107698 malachite green Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N merck compound 25 Chemical compound C1C[C@@H](C(O)=O)[C@H](O)CN1C(C1=C(F)C=CC=C11)=NN1C(=O)C1=C(Cl)C=CC=C1C1CC1 IBIKHMZPHNKTHM-RDTXWAMCSA-N 0.000 description 1
- DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M merocyanine Chemical compound [Na+].O=C1N(CCCC)C(=O)N(CCCC)C(=O)C1=C\C=C\C=C/1N(CCCS([O-])(=O)=O)C2=CC=CC=C2O\1 DZVCFNFOPIZQKX-LTHRDKTGSA-M 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 239000001788 mono and diglycerides of fatty acids Substances 0.000 description 1
- 235000019960 monoglycerides of fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N n,n-diethyl-5-iminobenzo[a]phenoxazin-9-amine;hydrochloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=[NH2+])C2=C1 SHXOKQKTZJXHHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N n-[3-[[6-[3-(trifluoromethyl)anilino]pyrimidin-4-yl]amino]phenyl]cyclopropanecarboxamide Chemical compound FC(F)(F)C1=CC=CC(NC=2N=CN=C(NC=3C=C(NC(=O)C4CC4)C=CC=3)C=2)=C1 YOHYSYJDKVYCJI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 150000002790 naphthalenes Chemical class 0.000 description 1
- VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N nile red Chemical compound C1=CC=C2C3=NC4=CC=C(N(CC)CC)C=C4OC3=CC(=O)C2=C1 VOFUROIFQGPCGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 210000004882 non-tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000001117 oleyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])/C([H])=C([H])\C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000004866 oxadiazoles Chemical class 0.000 description 1
- GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M oxazine-170 Chemical compound [O-]Cl(=O)(=O)=O.N1=C2C3=CC=CC=C3C(NCC)=CC2=[O+]C2=C1C=C(C)C(N(C)CC)=C2 GHTWDWCFRFTBRB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 150000004893 oxazines Chemical class 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N pentaporphyrin i Chemical compound N1C(C=C2NC(=CC3=NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 JZRYQZJSTWVBBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 229960000286 proflavine Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003220 pyrenes Chemical class 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 229920005613 synthetic organic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 241001223854 teleost fish Species 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 230000036964 tight binding Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 125000001834 xanthenyl group Chemical class C1=CC=CC=2OC3=CC=CC=C3C(C12)* 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
- G01N33/56972—White blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/14—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an inorganic carrier
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2503/00—Use of cells in diagnostics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/20—Small organic molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
Abstract
Description
a)下記の化合物またはその塩を用意する:
親水性ドメインに結合した1以上の疎水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
1以上の疎水性ドメインは親水性ドメインに共有結合しており、
1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、親水性ドメインはポリエチレングリコール(PEG)部分を含む
化合物であって、連結基を含む化合物;
b)化合物が細胞の膜と相互作用できる条件下で細胞をその化合物と接触させ、それにより連結基を細胞の表面に固定化する;そして
c)細胞に固定化された連結基を、その連結基を結合できる支持体と接触させ、それにより細胞を支持体に固定化する
ことを含む。
用語“固体支持体”は、液相中の試薬と不均一反応により相互作用する固相材料を表わす。固体支持体の使用は化学、生化学、医薬および分子生物学の分野で周知である。解決すべき技術的課題に応じて多数のタイプの固体支持体が開発されている。本発明に関してこれらのいずれかを使用できる。たとえば、本発明方法に使用する固体支持体は、シリカ、酢酸セルロース、ニトロセルロース、ナイロン、ポリエステル、ポリエーテルスルホン、ポリオレフィン、もしくはポリフッ化ビニリデン、またはその組合わせの成分を含むことができる。さらなる適切な固体支持体にはコントロールドポアガラス、ガラスプレートまたはスライドガラス、ポリスチレン、および活性デキストランが含まれるが、これらに限定されない。他の観点において、合成有機ポリマー、たとえばポリアクリルアミド、ポリメタクリレートおよびポリスチレンも例示的な支持体表面である。さらに、多糖類、たとえばセルロースおよびデキストランは支持体表面のさらなる例示である。他の支持体表面、たとえば繊維も作動可能である。
本発明方法に使用できる化合物の細胞固定化の基本原理は、本発明方法に使用できる化合物の末端疎水性部分が目的細胞膜の脂質二重層内へ固着(anchor)することであると仮定される。次いで細胞を、たとえばその後、特異的に修飾された表面に付着させ、所望により視覚化および/または検出のために標識することができる。疎水性部分に応じて、特定の細胞への優先的または排他的な結合を達成することもできる。
安定化効果、特に剪断保護効果は、特に本発明方法に使用できる化合物の疎水性部分としてのコレステロール、ミリスチン酸およびステアリン酸について証明される(参照:実施例5)。
連結基は、化合物を表面または支持体、特に固体支持体に可逆的もしくは不可逆的に、および/または共有結合もしくは非共有結合により固定化するのに適した部分である。好ましい態様において、連結基は抗体もしくは抗原結合性抗体フラグメント、受容体もしくはその結合部位、受容体に対するリガンド、酵素もしくはその結合部位、酵素に対する基質、タグ結合部位、タグ、または官能基である。
ストレプトアビジンへのビオチンの結合、または抗体もしくは抗原結合性抗体フラグメントの結合は、非共有結合性かつ可逆的である。固体支持体への非共有結合を用いるそのような連結基は、細胞をさらに使用するために、たとえば動物モデルに投与するために、再び離脱させることを意図する場合に好ましい。
脂質は、脂肪、ろう、ステロール、脂溶性疎水性ビタミン、たとえばビタミンA、D、EおよびK、脂肪酸のモノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、ならびにリン脂質から選択される疎水性小分子である。
本発明方法に使用できる化合物は、1以上の疎水性ドメイン、親水性ドメイン、および連結基を含み、好ましくはそれらからなる。
実施例に示すように、本発明方法に使用する化合物を細胞と接触させる。固定化は好ましくは生細胞または生存可能性のある細胞について行なわれるので、細胞は一般に、好ましくは緩衝化されたおよび/または栄養素を含有する水溶液中に存在し、たとえば細胞はPBSまたは培地に懸濁されている。本発明方法に使用する化合物を、たとえば溶液の形で、たとえば水溶液として、ピペッティングなど当技術分野で既知の方法により細胞に添加することができる。
一般に、接触は約1℃〜45℃、好ましくは10℃〜30℃、より好ましくは22℃〜38℃の温度で行なわれる。好ましくは、細胞の生存性に影響を及ぼさない温度が選択される。
同様に、細胞を化合物と共に、結合させるのに十分な時間、インキュベートすることが好ましい。一般に、細胞を化合物と共に、1分〜3日間、好ましくは5分〜24時間、よりいっそう好ましくは10分〜8時間、インキュベートすることが好ましい。
そのような条件により化合物は細胞の膜と相互作用することができる。それにより、連結基が細胞に固定化される。
好ましい態様において、本発明は、化合物が下記の化合物またはその塩である本発明方法に関する:
1以上の疎水性ドメインおよび親水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
1以上の疎水性ドメインは親水性ドメインに共有結合しており、
1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、
親水性ドメインは式(I)の化合物を含み:
X1−[A1−(L1)n]k1−Z−[A2−(L1)n]k2−X2 (I)
{式中:
Zは、1〜100、好ましくは1〜50、より好ましくは4〜30の−O−CH2−CH2−部分を含む線状ポリエチレングリコール(PEG)部分であり、その際、ポリエチレングリコール部分は2つの−O−CH2−CH2−部分を連結する1以上のスペーサー部分SPを含んでもよく、線状PEG部分は一端または両端にリンカー部分L3を含んでもよく、
各L1は、互いに独立して選択されるリンカー部分であり、
各nは、0または1のいずれかであり、互いに独立して選択され、
A1およびA2は、互いに独立して選択される2官能性または3官能性の部分であり、ただし、少なくとも1つのA1またはA2は3官能性であり、
k1およびk2は、0〜10の整数であり、互いに独立して選択され、ただし、k1およびk2のうち少なくとも1つは0ではなく、
X1およびX2は、独立して水素または保護基から選択され、
L3は、独立して、1〜10個のC原子を含む線状アルキルまたはアルケニル鎖から選択され、それは(i)1〜3個のN、OまたはS原子により中断されていてもよく、および/または(ii)1〜4個のヒドロキシル、カルボニル、アミノまたはチオール基により置換されていてもよい}、
1以上の疎水性ドメインは、親水性ドメインに3官能性ドメインを介して共有結合しており、
化合物はさらに連結基を含む。
本明細書における一般的理解のために、“疎水性部分”は“疎水性ドメイン”に含まれ、それの主要部を形成し、よってその疎水性を決定する。
線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンは、3官能性部分に直接に、またはリンカーL2を介して結合していてもよい。線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンが3官能性部分に直接結合している化合物の例は、化合物ミリスチン酸−ミリスチン酸−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEGである。線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンがリンカーL2を介して3官能性部分に結合している化合物の例は、化合物コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEGである。この後者の例においてTEG(テトラエチレングリコール)がリンカーL2である。
本発明によれば、“コレステロール−二重リンカー分子”は、2つの疎水性部分を含み、それらが両方ともコレステロールである、本発明方法に有用な化合物であると理解される。したがって、“ミリスチン酸−三重リンカー分子”は、3つの疎水性部分を含み、それらがすべてミリスチン酸である化合物であると理解される。
本発明方法に使用する化合物は、例において大部分がこのモジュール型の模式的様式で記載される。
本発明によれば、“ビオチン−TEG”はリンカーTEGを介して3官能性部分A2に結合したビオチン部分であると理解される。
よりいっそう模式的様式で、“コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEG”は構造“5’−XXYYYYYYYFZ−3’”のものであると記載することができ、その際、YはPEG+スペーサー部分であり、Xは3官能性リンカーを介して親水性部分に結合した疎水性部分であり、Fは蛍光標識フルオレセインであり、Zは連結基(ビオチン)である。5’および3’は、ヌクレオチドと同様に、実施例に示す自動合成による合成の方向を示す。
実験の部に記載する本発明方法に使用する化合物において、そうではないと明確に指摘しなければ、L1が存在し(n=1)、それはホスフェートである。
特に、コレステロール−二重リンカー分子、ミリスチン酸−二重または三重リンカー分子、およびステアリン酸−二重リンカー分子は、白血球および種々の培養細胞系を用いる定量的細胞固定化を達成するのに適切であることが見出された。さらに、コレステロール−二重リンカーとミリスチン酸−二重リンカー分子の組合わせは、単一の二重リンカー分子と比較してある細胞タイプの弱い固定化率増大を示す。
さらに、親水性ドメインに共有結合した2または3つの疎水性分子を含む本発明方法に有用な化合物は、細胞への緊密な結合を示し、それはおそらく協同結合効果の利用によるものであろう。細胞へのそのような分子の結合は、疎水性分子を1つだけ含む化合物を用いる結合または固定化と比較して100〜1000倍強い。
本発明方法に有用な化合物の親水性ドメインはPEG部分を含み、したがってフレキシブルである。
この親水性ドメインは、目的細胞の周囲で細胞を安全に包埋するのに必要なフレキシブルフォールディングを行なうことができ、それにより細胞の形態および機能を存続させるために重要な細胞フレンドリーなヒドロゲル様環境を生成する。
他の塩類も可能であり、当業者に知られている。 好ましくは、細胞の生存性または機能に全くまたは実質的に影響を及ぼさない塩類を使用する。
−(L3)n2−[O−CH2−CH2]y−(SP)n1]m−[O−CH2−CH2]y1−(L3)n2−
式中:
SPは、スペーサー部分であり、
各スペーサー部分SPは互いに独立して選択され、
各n1は、0または1のいずれかであり、m個の部分それぞれについて独立して選択され、
各n2は、0または1のいずれかであり、互いに独立して選択され、
mは、1から100、好ましくは1から50、より好ましくは4から30の整数であり、
yは、1から100、好ましくは1から50、より好ましくは4から30の整数であり、
y1は、0から30、好ましくは0から10、より好ましくは0から4の整数であり、
ただし、y*m+y1≦100であり、
L3は、前記に定めたものである。
例から分かるように、n1は一般に、本発明方法に有用な化合物において常に0であり、あるいは本発明方法に有用な化合物において常に1である。
n1=0の例示的化合物は、コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−PEG2000−Fluos−ビオチン−TEGである。
y1=0の例示的化合物は、コレステリル−TEG−スペーサーC12−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEGである。
y1=1の例示的化合物は、5’−コレステリルTEG−コレステリルTEG−(スペーサーC18)7−スペーサーC3−dT−ビオチンTEG−3’である。
本発明のさらなる好ましい態様において、スペーサー部分SPは互いに独立してホスフェートおよび2官能性部分からなる群から選択される。
本発明による2官能性部分は本発明方法に使用する化合物の合成前に2つの官能基を含む部分であると理解される。したがって、そのような2官能性部分は線状化合物の合成に適切である。適切な2官能性基は、好ましくは下記のものからなる群から選択される:ホスフェート基、カルバメート基、アミド基、核酸塩基を含む部分、よりいっそう好ましくはdT、および1〜10個のC原子、特に1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個の原子を含む線状アルキル基であって、末端C原子に、特に、独立してアミン、カルボニル、ヒドロキシル、チオール、炭酸基から選択される官能基を含むアルキル鎖。末端官能基をもつ適切な線状アルキル基の例は、ジアミノアルキル部分、たとえばH2N−(CH2)5−NH2またはヒドロキシル−カルボニル部分、たとえば−C(O)−(CH2)4−O−である。
(a)飽和もしくは不飽和脂肪酸、および/または
(b)8から26個のC原子、好ましくは12から22個のC原子、より好ましくは14から18個のC原子をもつ脂肪酸
である。
飽和脂肪酸の例は、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、およびセロチン酸である。
ステロイドは、互いに連結した特徴的配列の4つのシクロアルカン環を含むタイプの有機化合物である。ステロイドのコアは17個の炭素原子からなり、それらが互いに結合して4つの縮合環の形をとる:3つのシクロヘキサン環(環A、BおよびCと表記する)および1つのシクロペンタン環(D環)。ステロイドは、この4環コアに結合する官能基およびそれらの環の酸化状態により変異する。ステロールは特殊な形のステロイドであり、位置3のヒドロキシル基およびコレスタンから誘導された骨格をもつ。
(a)ステロイドはステロールである、または
(b)ステロイドは、コレステロール;ステロイドホルモン、好ましくは生殖腺ステロイド、より好ましくはアンドロゲン、たとえば同化ステロイド、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン、ジヒドロテストステロン、またはテストステロン、エストロゲン、たとえばエストラジオール、エストリオール、またはエストロン;黄体ホルモン物質、たとえばプロゲステロンまたはプロゲスチン、コルチコステロイド、特にグルココルチコイドまたはミネラルコルチコイド;エクジステロイド(ecdysteroid)、たとえばエクジステロン(ecdysterone);フィトステロール;ブラシノステロイド(brassinosteroid);ホパノイド(hopanoid);およびエルゴステロールからなる群から選択される、
より好ましくは、ステロイドはコレステロールである、または
(c)疎水性ビタミンはα−トコフェロールである。
本発明のさらなる好ましい態様において、親水性ドメインに共有結合している2以上の疎水性ドメインは異なるかまたは同一である。
本発明のさらなる好ましい態様において、疎水性ドメイン(単数または複数)は3官能性部分A1にリンカー部分L2を介して共有結合した線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、好ましくはそれからなる。
リンカーL2は、独立して、疎水性部分を親水性部分に共有結合させるのに適したいずれかのリンカー部分であり、そのリンカーは疎水性部分とそれぞれA1またはA2との間に50、30もしくは20原子またはそれ未満の長さをもつ。
−[O−CH2−CH2]y2−(SP)n]m1−
{式中:
SPおよびnは前記に定めたものであり、好ましくはn=0であり、
y2は、1から30、好ましくは3から10の整数であり、
m1は、1から10、好ましくは1から3の整数である}
からなる群から選択され、
より好ましくは、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンはリンカー部分テトラエチレングリコール(TEG)またはホスフェートを介して3官能性部分A1に結合している。
本発明の特に好ましい態様において、疎水性ドメイン(単数または複数)は、3官能性部分(単数または複数)A1のみを介して、または前記のドメインX1−[A1−(L1)n]k1を介して、その親水性ドメインに共有結合している。そのような態様に、本発明方法に使用する化合物のさらなる好ましい態様も適用される。そのような化合物において、疎水性ドメインは専ら分子の一方の末端部に位置し、これに対し、さらなる基、たとえば連結基(単数または複数)、および所望により標識部分(単数または複数)は、そこから空間的に離れた他方の末端部に位置する。
本発明方法に使用する化合物がdT部分を2官能性部分A2として含む場合、k2は好ましくは3、4、5または6である。
本発明方法のさらなる好ましい態様において、工程a)の化合物はさらに標識部分を含む。したがって、本発明のさらなる好ましい態様において、化合物は標識部分および連結基を含む。
好ましい1態様において、標識部分は下記のものから選択される:(a)色原体、化学発光性グループ(たとえば、アクリジニウムエステルまたはジオキセタン)、電気化学発光性化合物、色素、蛍光色素(たとえば、フルオレセイン、クマリン、ローダミン、オキサジン、レゾルフィン、シアニン、およびその誘導体)、発光性金属錯体、たとえばルテニウムまたはユーロピウムの錯体、および放射性同位体からなる群から選択される直接標識化部分;(b)あるいは間接検出系の一方のパートナー、好ましくは標識部分が下記のものからなる群から選択される結合対のメンバーのうちの一方であるもの:(i)ハプテンまたは抗原/抗体、(ii)ビオチンまたはビオチンアナログ、たとえばアミノビオチン、イミノビオチンまたはデスチオビオチン/アビジンまたはストレプトアビジン、(iii)糖/レクチン、(iv)核酸または核酸アナログ/相補的核酸、および(v)受容体または受容体フラグメント/リガンド、たとえばステロイドホルモン受容体/ステロイドホルモン。
好ましい態様において、標識部分は直接標識化のための標識部分であり、よりいっそう好ましくは標識部分は蛍光性部分または色素である。
本発明の特に好ましい態様において、疎水性ドメイン(単数または複数)は親水性ドメインに3官能性部分(単数または複数)A1のみを介して(または前記のドメインX1−[A1−(L1)n]k1を介して)共有結合しており、連結基および所望により標識部分は部分[A2−(L1)n]k2−X2に結合している。これにより、細胞膜内への挿入のための疎水性ドメインと固定化および所望により標識化のための部分との空間的分離が確実になる。
本発明の他の好ましい態様において、1以上の部分(単数または複数)A2は標識部分であり、より好ましくは部分A2は核酸塩基を含む部分であり、よりいっそう好ましくは実施例に記載する特定の化合物の場合のように、部分A2はdTである。
そのような態様において、本発明方法に使用する化合物はフルオレセインおよびdTを含むことができる。
よりいっそう好ましい態様において、連結基は3官能性部分A2を介して共有結合しており、標識部分は3官能性部分A2を介して共有結合している。
本発明のいっそうさらなる特に好ましい態様において、疎水性ドメイン(単数または複数)は親水性ドメインに3官能性部分(単数または複数)A1のみを介して(または前記のドメインX1−[A1−(L1)n]k1を介して)共有結合しており、連結基が部分[A2−(L1)n]k2−X2に結合しているが、標識部分は結合していない。
本発明のよりいっそう好ましい態様において、本発明方法に使用する化合物は標識部分および連結基を含み、その際、標識部分は蛍光標識であり、および/または連結基はビオチンである。
本発明のさらなる好ましい態様において、部分A1およびA2は、独立して、下記のものから選択される:ホスフェート基、カルバメート基、アミド基、核酸塩基を含む部分、よりいっそう好ましくはdT、および1〜10個のC原子を有する線状アルキル基であって末端C−原子に、特に、独立してアミン、カルボニル、ヒドロキシル、チオール、炭酸基から選択される官能基を含むアルキル鎖からなる群から選択される2官能性基;ならびに1〜10個のC原子を有し、少なくとも1つの−OH、−SH、および/または少なくとも1つの−NH2基を含み、好ましくはリジン、セリン、セリノール、−O−CH2−CH((CH2)4−NH2)−CH2−、グリセロール、および1,3 ジアミノグリセロール部分から選択される3官能性部分。
−[O−CH2−CH2]y2−(SP)n]m1−
{式中:
SPおよびnは前記に定めたものであり、好ましくはn=0であり、
y2は、1から30、好ましくは3から10の整数であり、
m1は、1から10、好ましくは1から3の整数である}
からなる群から選択される。
本発明方法に有用な他の化合物を当技術分野で知られている方法に従って同様に製造できる。
好ましい1態様において、1種類より多い前記化合物を含む組成物を使用できる。
したがって、1態様において、本発明は、細胞を支持体に固定化するための方法に関するものであって、その方法は、
a)下記の化合物またはその塩を含む組成物を用意する:
親水性ドメインに結合した1以上の疎水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
1以上の疎水性ドメインは親水性ドメインに共有結合しており、
1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、親水性ドメインはポリエチレングリコール(PEG)部分を含む
化合物であって、連結基を含む化合物;
b)化合物が細胞の膜と相互作用できる条件下で、前記化合物を含む組成物と細胞を接触させ、それにより連結基を細胞の表面に固定化する;そして
c)細胞に固定化された連結基を、その機能性ドメインを結合できる表面と接触させ、それにより細胞を表面に固定化する
ことを含む。
(i)異なる化合物は少なくともそれらの疎水性ドメインにおいて異なり、
(ii)異なる化合物は標識部分を含む。
本発明はさらに、本発明方法に有用な少なくとも1種類の化合物が少なくとも1つの細胞、好ましくは生細胞に結合したものを含む組成物に関する。そのような組成物は、それぞれ細胞の固定化および所望により検出に有用である。
さらなる態様において、本発明は、本発明方法に有用な1種類またはそれ以上の化合物を含む組成物を使用する本発明方法に関する。
したがって、他の態様において、本発明は、本発明方法に有用な少なくとも3種類の異なる化合物を含む組成物を使用する本発明方法に関するものであり、その際、異なる化合物は少なくともそれらの疎水性ドメインにおいて異なり、異なる化合物は標識部分を含む。
より好ましい態様において、少なくとも1種類の化合物の疎水性ドメインが飽和脂肪酸、殊にミリスチン酸、ステアリン酸またはベヘン酸、特にミリスチン酸を含み、好ましくはそれからなり、および/または少なくとも1種類の化合物の疎水性ドメインがステロイド、特にコレステロール、または疎水性ビタミン、特にα−トコフェロールを含み、好ましくはそれからなる。
本発明方法に使用する水溶液は、好ましくは緩衝化されている。たとえば、溶液はリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)、トリス、および/またはHepes緩衝液であってもよい。
なおさらなる態様において、本発明は、細胞を固定化するための、前記に開示した少なくとも1種類の化合物または組成物を含むキットの使用に関する。
したがって、他の態様において、本発明は目的細胞を含む細胞集団を支持体に固定化する方法に関するものであって、その方法は、
a)下記の化合物またはその塩を含む組成物を用意する:
親水性ドメインに結合した1以上の疎水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
1以上の疎水性ドメインは親水性ドメインに共有結合しており、
1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、親水性ドメインはポリエチレングリコール(PEG)部分を含む
化合物であって、連結基を含む化合物;
b)化合物が細胞の膜と相互作用できる条件下で細胞集団をその化合物と接触させ、それにより細胞の表面に連結基を固定化する;
c)細胞に固定化された連結基を、その連結基を結合できる表面と接触させ、それにより細胞をその表面に固定化する;そして
d)表面に固定化された目的細胞を所望により検出する
ことを含む。
この本発明方法には、細胞を表面に固定化するための前記の本発明方法のものと同じ態様が適用される。したがって、適切な化合物を含む組成物も前記のように使用できる。
よりいっそう好ましくは、細胞は懸濁状態の細胞であり、および/または細胞は動物細胞またはヒト細胞、特に脊椎動物細胞、殊に哺乳動物細胞である。
本発明のさらなる態様において、さらに標識部分を含む本発明方法に有用な化合物を用いる。これにより細胞集団自体の検出が可能になり、その細胞集団と比較した目的細胞についての情報を得ることが可能になる。
したがって、本発明のさらなる態様において、1つの希少細胞の特性分析はさらなる工程e)として、たとえば細胞表面マーカーの検出により実施される。
本発明のなおさらなる態様において、本方法は、工程e)固定化された細胞を用いる細胞の機能アッセイの実施をさらに含む。
好ましい1態様において、本発明の方法は in vitro 法である。
本発明の方法はラボ・オン・チップ(lab on a chip)として実施できる:2〜50個のような少数の細胞または単一細胞の細胞形態または細胞機能を調べるために、本発明方法に有用な化合物を支持体または表面に選択的かつ系統的にスポットすることができる。このスポッティングによって少数の細胞または単一細胞をそのようなスポット上にターゲティッド固定化することができる。これよりその支持体または表面(チップ)で直接に分子分析できる。
したがって、本発明はまた、本発明方法の固定化に際して、または工程a)以前の培養に際して、少なくとも1つの細胞を安定化するための、本発明方法の使用に関する。
フローサイトメトリーは特定の細胞集団を分離するためにごく一般的に用いられる方法である。このプロセスに際して、細胞は流速に応じた高い剪断応力を受ける。本発明方法に有用な化合物はこの剪断応力を低減する。
異なる表現型をもつ細胞集団を、磁性ビーズに結合した特異的抗体により分離することができる。このプロセスに際して、細胞はビーズのサイズに応じた高い剪断応力を受ける。本発明方法に有用な化合物はこの剪断応力を低減する。
すべての抗体の一般構造がきわめて類似するが、特定抗体の固有の特性は前記に詳述したように可変(V)領域により決定される。より具体的には、それぞれ軽鎖(VL)上に3つ、重鎖(VH)上に3つの可変ループが、抗原への結合、すなわちそれの抗原特異性に関与する。これらのループは相補性決定領域(CDR)と呼ばれる。VHとVLの両ドメインからのCDRが抗原−結合部位に寄与するので、最終的な抗原特異性を決定するのは重鎖と軽鎖の組合わせであって、いずれか単独ではない。
タグは、バイオテクノロジーにおける認識のために用いられるペプチドモチーフである。周知のタグは、Ni2+−カラムに結合させることができるHis−タグ(6×ヒスチジン)である。
レクチンは、糖部分に対して高特異的な炭水化物結合性タンパク質である。適切なレクチンとして、コンカナバリンAを使用でき、これはα−D−マンノシルおよびα−D−グルコシル残基、分岐α−マンノシド型(mannosidic)構造体(高α−マンノースタイプ、またはハイブリッドタイプ、および二アンテナ型複合体(biantennary complex)タイプのN−グリカンに結合する。
本発明方法に有用な下記の化合物を合成した:
本発明方法に有用な例示的化合物および合成副産物の化学構造を図6AおよびBに示す。
本発明のビオチン−PEG−Lys−(C18)2の合成を図6Cに示す。
F)本発明方法に有用なさらなる化合物および参照化合物ならびにその中間体の構造
本発明方法に有用な化合物および参照化合物の合成のために下記の中間体を用いた:
コレステリル−TEG−CE−PA(GlenResearch 10−1975),
ミリスチン酸−CE−PA(社内製造),
ビオチン−TEG−CE−PA(GlenResearch 10−1955),
ビオチン−dT−CE−PA(GlenResearch 10−1038),
dT−CE−PA(GlenResearch 10−1030),
対称doubler−CE−PA(GlenResearch 10−1920),
PEG−200−CED−PA(ChemGenes CLP−2119),
6−フルオレセイン−CE−PA(GlenResearch 10−1964)および
universal−CPG(Proligo 1000A M401010)
本発明方法に有用なさらなる化合物および参照化合物ならびに中間体の構造を図12に示す。
下記を以下の化合物のモジュール型記載に適用する:
X=疎水性部分,Y=PEG2000,Z=ビオチン−TEG,F=Fluos=フルオレセイン
下記の実験において細胞の回収率を決定した。
下記に示すように、異なるインキュベーション時間、実験を実施した:
化合物ビオチン−PEG−lys−(C14)2について下記の回収率が決定された:
M=2708,90g/mol
5,4mg/10ml EtOH
c=n/V=m/M*V
c=5,4g/(2708,9g/mol*10 l)=1,99 10e−4mol/l
1,99*10e−4mol/l=7,96nmol/4μl
4μl=4,5*10e6細胞
→1,77nmol/10e6細胞
この実験における回収率:85,72%
実施例4:本発明方法に有用な1つの疎水性部分を含む化合物と2つの疎水性部分を含む化合物との比較
この実験の目的:ストレプトアビジン−コートした表面への本発明方法に有用な異なる分子を用いる白血球固定化の試験。特に、単一コレステロール−分子および異なる二重リンカー分子(すなわち、2つの疎水性部分を含むもの)の性能を試験した。詳細には、ストレプトアビジン−コートした表面への異なるリンカー分子を用いる白血球(WBC)の固定化を、12−ウェルプレートで試験した:300000 WBC/ウェル。これに続いて、細胞の固定化および洗浄の後の細胞回収率をCellavista計測器(10xNuclei Operator s9s5)により測定した。
本発明方法に有用な化合物が細胞の安定化および固定化に及ぼす効果を判定した。
A)異なる分子を用いた遠心分離および細胞固定化の後のWBC回収率
図14に示すように、分子プローブHH1749*、HH1750*およびHH1755*(* ビオチン−PEG−リジン−(C18)2)は遠心分離後の回収率に関して異なる性能を示す:分子の濃度が高いほど、遠心分離後の細胞回収率は高くなる。遠心分離特性:10分、300×g。図15から分かるように、分子プローブHH1749*、HH1750*およびHH1755*は、異なる濃度での細胞固定化率に関して異なる性能を示す。リンカー濃度が高いほど、細胞固定化率は高くなる。
図16から分かるように、分子AおよびB(A:コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEG;B:ビオチン−PEG−リジン−(C18)2)は遠心分離後の回収率に関して異なる性能を示す。分子濃度が高いほど、遠心分離後の細胞回収率は高くなる。分子Bは3.5時間以内は細胞を固定化できる。遠心分離特性:10分、300×g。A:コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEG。B:ビオチン−PEG−リジン−(C18)2。
図17から分かるように、分子濃度が高いほど、遠心分離後の細胞回収率は高くなる。さらに、細胞安定化は実験者とは無関係である。遠心分離特性:10分、300×g。分子:コレステリル−TEG−コレステリル−TEG−(スペーサーC18)7−Fluos−ビオチン−TEG。
第1実験の結果を図18に示す。下記の分子を試験した:
・ 1234: 5’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−dT−ビオチン−TEG−3’
・ 1248: 3’−(コレステリル−TEG)2−PEG2000−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS 1254: 3’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ 1255: 3’−(ミリスチン酸)2−PEG2000−dT−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ すべての分子が2時間以内は細胞を固定化できる
・ PBS中におけるWBCは300×gで20分間の遠心分離に際して損傷を受ける
・ 分子1234は最良の性能を示し、化合物1255および1254がそれに続く。
これに関する第2実験の結果を図19に示す。下記の分子を試験した:
1255: 3’−(ミリスチン酸)2−PEG2000−dT−ビオチン−TEG−5’ INVERS 1234: 5’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−dT−ビオチン−TEG−3’
1248: 3’−(コレステリル−TEG)2−PEG2000−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
1254: 3’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
結果は下記のとおりである:
・ すべての分子が2時間以内は細胞を固定化できる
・ PBS中におけるWBCは500×gで20分間の遠心分離に際して損傷を受ける
・ 分子1234は最良の性能を示し、分子1255および1254がそれに続く。
・ 1255: 3’−(ミリスチン酸)2−PEG2000−dT−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ 1234: 5’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−dT−ビオチン−TEG−3’
・ 1248: 3’−(コレステリル−TEG)2−PEG2000−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ 1254: 3’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
結果は下記のとおりである:
・ すべての分子が2時間以内は細胞を固定化できる
・ PBS中におけるWBCは1000×gで20分間の遠心分離に際して損傷を受ける
遠心分離特性:20分、500×g。
この実験の結果を図21に示す。下記の分子を試験した:
・ 1255: 3’−(ミリスチン酸)2−PEG2000−dT−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ 1234: 5’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−dT−ビオチン−TEG−3’
・ 1248: 3’−(コレステリル−TEG)2−PEG2000−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
・ 1254: 3’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−Fluos−ビオチン−TEG−5’ INVERS
結果は下記のとおりである:
・ ジャーカット培養細胞は、PBS中および異なる分子を用いた遠心分離プロセスに際して5.5時間以内は安定である
遠心分離特性:20分、500×g。
これに関する第1実験の結果を図22AおよびBに示す。
3官能性リンカー部分が異なる、本発明方法に有用な異なる化合物を用いて、WST−1増殖キット(RAS)を用いる細胞生存性試験を実施した。
これに関する第2実験の結果を図23AおよびBに示す。本発明方法に有用な被験分子(No.1244および1274)は、4.5時間のリンカーインキュベーション時間中に細胞形態に影響を及ぼさないことが見出された。
この実験の結果を図24に示す。下記のことが見出された:
・ 本発明方法に有用な分子を添加しない場合、細胞は4.5時間のインキュベーション時間中に離散する
・ インキュベーション時間中に残った細胞の細胞形態は影響を受けていない。
この実験の結果を図25に示す。本発明方法に有用な下記の分子を試験した:
・ 1234: 5’−(コレステリル−TEG)2−スペーサーC18−dT−ビオチン−TEG−3’
・ 1255: 3’−(ミリスチン酸)2−PEG2000−dT−ビオチン−TEG−5’ INVERS
下記のことが見出された:
・ MDA−MB468培養細胞は、PBS中における、および本発明方法に有用な異なる分子を用いた遠心分離プロセスに際して、5時間以内は安定である
遠心分離特性:20分、500×g。
出発物質として5’−(コレステリル−TEG)2−PEG2000−Fluos−ビオチン_TEG−3’ INVERS(14530pmol/μl)(社内参照No.:29.891250)、およびストレプトアビジン処理したMTP(Microcoat)、12ウェルプレートを用いた。
−EDTA−全血59.423 6.400 WBC/μl(Ambulanz Roche)
細胞溶解緩衝液:100mM NH4Cl+5mM Hepes+0,5mM KHCO3+0,1mM EDTA−K
Ca 1×8mlの全血を細胞溶解緩衝液と共に50ml Falconチューブに充填し、室温で10分間インキュベートした。
250gで15分間遠心分離し、ペレットをPBSで再懸濁し、50mlまでPBSを充填し、250gで15分間遠心分離し、50mlまでPBSを充填した。
1:37.100のWBC/μl
− プレート上での実験のデザインを以下に説明する(参照:図2):
3×12ウェル MTP:本発明方法に有用な化合物によるWBCの処理:
4×判定:
横列A:200μlのPBSを導入し、それぞれ1nmolの化合物をそれに添加し、混合し、約30分間インキュベートし、PBSで2回洗浄し、800μlのPBSを導入し、300.000のWBC(非処理)を添加した;
横列B:800μlのPBSを導入し、300.000のWBC(非処理)を添加した;
横列C:1ml中の10×10^6のWBCを10nmolの本発明方法に有用な化合物と共に10分間インキュベートし、それぞれ800μlのPBS/ウェル、300.000の処理済みWBCを導入した。
−第3プレートを150分後に測定した。
計算した結果を図3に示す。これらの結果を表わすグラフを図4に示す。実験のプレートを図5に示す。
Claims (15)
- 細胞を支持体に固定化するための方法であって、
a)下記の化合物またはその塩を用意する:
親水性ドメインに結合した1以上の疎水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
該1以上の疎水性ドメインは該親水性ドメインに共有結合しており、
該1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、親水性ドメインはポリエチレングリコール(PEG)部分を含む
化合物であって、連結基を含む化合物;
b)該化合物が細胞の膜と相互作用できる条件下で細胞を該化合物と接触させ、それにより該連結基を該細胞の表面に固定化する;そして
c)細胞に固定化された該連結基を、該連結基を結合できる支持体と接触させ、それにより該細胞を支持体に固定化する
ことを含む、前記方法。 - 前記化合物は下記のものまたはその塩である:
1以上の疎水性ドメインおよび親水性ドメインを含み、好ましくはそれらからなり、
該1以上の疎水性ドメインは該親水性ドメインに共有結合しており、
該1以上の疎水性ドメインはそれぞれ、線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンを含み、
該親水性ドメインは式(I)の化合物を含み:
X1−[A1−(L1)n]k1−Z−[A2−(L1)n]k2−X2 (I)
{式中:
Zは、1〜100、好ましくは1〜50、より好ましくは4〜30の−O−CH2−CH2−部分を含む線状ポリエチレングリコール(PEG)部分であり、その際、該ポリエチレングリコール部分は2つの−O−CH2−CH2−部分を連結する1以上のスペーサー部分SPを含んでもよく、該線状PEG部分は一端または両端にリンカー部分L3を含んでもよく、
各L1は、互いに独立して選択されるリンカー部分であり、
各nは、0または1のいずれかであり、互いに独立して選択され、
A1およびA2は、互いに独立して選択される2官能性または3官能性の部分であり、ただし、少なくとも1つのA1またはA2は3官能性であり、
k1およびk2は、0〜10の整数であり、互いに独立して選択され、ただし、k1およびk2のうち少なくとも1つは0ではなく、
X1およびX2は、独立して水素または保護基から選択され、
L3は、独立して、1〜10個のC原子を含む線状アルキルまたはアルケニル鎖から選択され、それは(i)1〜3個のN、OまたはS原子により中断されていてもよく、および/または(ii)1〜4個のヒドロキシル、カルボニル、アミノまたはチオール基により置換されていてもよい}、
該1以上の疎水性ドメインは、該親水性ドメインに3官能性ドメインを介して共有結合しており、
該化合物はさらに連結基を含む、
請求項1に記載の方法。 - 式(I)中のZは、下記の構造:
−(L3)n2−[O−CH2−CH2]y−(SP)n1]m−[O−CH2−CH2]y1−(L3)n2
{式中:
SPは、スペーサー部分であり、
各スペーサー部分SPは互いに独立して選択され、
各n1は、0または1のいずれかであり、m個の部分それぞれについて独立して選択され、
各n2は、0または1のいずれかであり、互いに独立して選択され、
mは、1から100、好ましくは1から50、より好ましくは4から30の整数であり、
yは、1から100、好ましくは1から50、より好ましくは4から30の整数であり、
y1は、0から30、好ましくは0から10、より好ましくは0から4の整数であり、
ただし、y*m+y1≦100であり、
L3は、独立して、1〜10個のC原子を含む線状アルキルまたはアルケニル鎖から選択され、それは(i)1〜3個のN、OまたはS原子により中断されていてもよく、および/または(ii)1〜4個のヒドロキシル、カルボニルまたはチオール基により置換されていてもよい}
を有する、請求項2に記載の方法。 - (a)n1はm個の部分−[O−CH2−CH2]y−(SP)n1]−について同一である、および/または
(b)y1は0である、および/または
(c)yは4、5または6であり、n1は1である、または
(d)yは4、5または6であり、n1は1である、および/または
(e)スペーサー部分SPは、互いに独立して、ホスフェートおよび2官能性部分からなる群から選択される、および/または
(f)n2は両方とも0である、または
(g)一方または両方のn2=1であり、L3は1〜10個のC原子をもつアルキル基であり、それはアミド基、カルボニル基、カルバメートおよび/またはNH基を含んでもよい、
請求項3に記載の方法。 - (a)X1またはX2は疎水性ドメインにより置き換えられている、および/または
(b)連結基はビオチンである、
請求項2〜4のいずれか1項に記載の方法。 - 前記線状脂質は、
(a)飽和または不飽和脂肪酸である、および/または
(b)8から26個のC原子、好ましくは12から22個のC原子を有する脂肪酸であり、
より好ましくは、該線状脂質はオレイン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸およびベヘン酸からなる群から選択され、より好ましくはミリスチン酸およびオレイン酸から選択される、
請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。 - (a)前記ステロイドはステロールである、または
(b)前記ステロイドは、コレステロール;ステロイドホルモン、好ましくは生殖腺ステロイド、より好ましくはアンドロゲン、たとえば同化ステロイド、アンドロステンジオン、デヒドロエピアンドロステロン、ジヒドロテストステロン、またはテストステロン、エストロゲン、たとえばエストラジオール、エストリオール、またはエストロン;黄体ホルモン物質、たとえばプロゲステロンまたはプロゲスチン、コルチコステロイド、特にグルココルチコイドまたはミネラルコルチコイド;エクジステロイド、たとえばエクジステロン;フィトステロール;ブラシノステロイド;ホパノイド;およびエルゴステロールからなる群から選択され、
より好ましくは、ステロイドはコレステロールである、または
(c)前記疎水性ビタミンはα−トコフェロールである、
請求項1〜5のいずれか1項に記載の方法。 - (a)1、2、3または4、好ましくは1または2つの疎水性ドメインが親水性ドメインに共有結合しており、および/または
(b)親水性ドメインに共有結合している2以上の疎水性ドメインが異なるかまたは同一であり、好ましくは同一である、
請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。 - 前記疎水性ドメインは
(a)線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンからなる、または
(b)3官能性部分A1にリンカー部分L2を介して共有結合した線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンからなり、L2は下記のものを含み、好ましくはそれからなる:ホスフェート基、部分
−[O−CH2−CH2]y2−(SP)n]−
{式中:
SPおよびnは前記に定めたものであり、好ましくはn=0であり、y2は1から30、好ましくは3から10の整数であり、m1は1から10、好ましくは1から3の整数である}、グリセロール部分、カルバメート基、アミド基、1〜10個のC原子、特に1、2、3、4、5、6、7、8、9または10個の原子を有する線状アルキル基:そのアルキル鎖は末端C原子に、特に、独立してアミン、カルボニル、ヒドロキシル、チオール、炭酸基から選択される官能基を含み、それは1、2、3、4または5つの部分R1により置換されていてもよく、その際、R1は独立してC1−C4アルキル、C1−C4ヒドロキシアルキル、C1−C4アミノアルキル、C1−C4シアノアルキル、ヒドロキシル、チオール、アミノまたはカルボニル部分である、
より好ましくは
L2は、ホスフェート、アミド、カルバメート、エステル基、および部分
−[O−CH2−CH2]y2−(SP)n]m1−
{式中:
SPおよびnは前記に定めたものであり、好ましくはn=0であり、
y2は、1から30、好ましくは3から10の整数であり、
m1は、1から10、好ましくは1から3の整数である}
からなる群から選択され、
より好ましくは、該線状脂質、ステロイドまたは疎水性ビタミンはリンカー部分テトラエチレングリコール(TEG)またはホスフェートを介して3官能性部分A1に結合している、
請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法。 - (a)k1は、1、2、3、4または5、好ましくは1、2または3である、および/または
(b)前記疎水性ドメインは、3官能性部分A1のみを介して親水性ドメインに共有結合している、および/または
(c)k2は、1、2、3、4、5または6、好ましくは1、2または3である、
請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法。 - (a)化合物はさらに標識部分を含み、
好ましくは
標識部分は3官能性部分A2を介して共有結合しており、および/または
1以上の部分A2は標識部分であり、より好ましくは部分A2は核酸塩基を含む部分であり、よりいっそう好ましくは部分A2はdTであり、
よりいっそう好ましくは該標識部分は蛍光標識である、および/または
(b)連結基は3官能性部分A2を介して共有結合している、
請求項1〜10のいずれか1項に記載の方法。 - (a)リンカーL1は、独立してホスフェート、アミド、カルバメートおよびエステル基からなる群から選択される、および/または
(b)部分A1およびA2は、独立して、下記のものから選択される:ホスフェート基、カルバメート基、アミド基、核酸塩基を含む部分、よりいっそう好ましくはdT、および1〜10個のC原子を有する線状アルキル基であって末端C−原子に、特に、独立してアミン、カルボニル、ヒドロキシル、チオール、炭酸基から選択される官能基を含むアルキル鎖からなる群から選択される2官能性基;ならびに1〜10個のC原子を有し、少なくとも1つの−OH、−SH、および/または少なくとも1つの−NH2基を含み、好ましくはリジン、セリン、セリノール、−O−CH2−CH((CH2)4−NH2)−CH2−、グリセロール、および1,3 ジアミノグリセロール部分から選択される3官能性部分、および/または
(c)リンカーL2は、独立してホスフェート、アミド、カルバメート、エステル基、および部分
−[O−CH2−CH2]y2−(SP)n]m1−
{式中:
SPおよびnは前記に定めたものであり、好ましくはn=0であり、
y2は、1から30、好ましくは3から10の整数であり、
m1は、1から10、好ましくは1から3の整数である}
からなる群から選択される、
請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。 - 前記化合物またはその塩が、請求項1〜12のいずれか1項、より好ましくは請求項11または12に記載の1種類以上の化合物を含む組成物であり、
よりいっそう好ましくは該組成物は請求項1〜12のいずれか1項に記載の少なくとも3種類の異なる化合物を含み、
(i)該異なる化合物は少なくともそれらの疎水性ドメインにおいて異なり、および
(ii)該異なる化合物は標識部分を含み、
最も好ましくは、該組成物は少なくとも4、5、6、7、8、9または10種類の異なる化合物を含む、
請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。 - 目的細胞を含む細胞集団を支持体に固定化する方法であって、
a)請求項1〜12のいずれか1項に記載の化合物を用意する;そして
b)該化合物が細胞の膜と相互作用できる条件下で細胞集団を該化合物と接触させ、それにより該細胞の表面に連結基を固定化する;
c)細胞に固定化された該連結基を、該連結基を結合できる支持体と接触させ、それにより該細胞を支持体に固定化する;そして
d)該支持体に固定化された目的細胞を所望により検出する
ことを含み、
好ましくは、該目的細胞が白血球、特に希少細胞、たとえば循環型の腫瘍細胞、内皮細胞または上皮細胞である、
前記方法。 - 前記細胞が懸濁状態の細胞であり、および/または該細胞が動物もしくはヒトの細胞、特に脊椎動物細胞、殊に哺乳動物細胞である、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP13006040 | 2013-12-20 | ||
EP13006040.3 | 2013-12-20 | ||
PCT/EP2014/078739 WO2015091948A1 (en) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | Method of immobilizing a cell on a support using compounds comprising a polyethylene glycol moiety |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017501708A true JP2017501708A (ja) | 2017-01-19 |
JP6302560B2 JP6302560B2 (ja) | 2018-03-28 |
Family
ID=49911091
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016541241A Active JP6302560B2 (ja) | 2013-12-20 | 2014-12-19 | ポリエチレングリコール部分を含む化合物を用いて支持体に細胞を固定化する方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10890585B2 (ja) |
EP (1) | EP3084433B1 (ja) |
JP (1) | JP6302560B2 (ja) |
CN (1) | CN105829886B (ja) |
CA (1) | CA2929970C (ja) |
WO (1) | WO2015091948A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105829887B (zh) * | 2013-12-20 | 2019-05-10 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 可用于结合细胞的包含一个或多个疏水结构域和一个含有peg部分的亲水结构域的化合物 |
CN105829886B (zh) * | 2013-12-20 | 2018-04-03 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用包含聚乙二醇部分的化合物在支持物上固定细胞的方法 |
JP6461973B2 (ja) | 2013-12-20 | 2019-01-30 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 2以上の疎水性ドメインおよびpeg部分を含む親水性ドメインを含む化合物の、細胞の安定化のための使用 |
CN107760665B (zh) * | 2017-09-29 | 2020-05-08 | 浙江大学 | 一种基于水凝胶包裹单细胞的方法及产品和在制备通用型红细胞中的应用 |
CN109134541B (zh) * | 2018-09-10 | 2020-10-27 | 伯科生物医学科技(北京)有限公司 | 长链生物素标记物及其制备方法和用途 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005312377A (ja) * | 2004-04-30 | 2005-11-10 | Asahi Kasei Corp | 細胞膜に材料が結合した細胞 |
JP2008081486A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Canon Inc | 細胞融合性リポソーム及び該リポソームを利用した物質導入方法 |
JP4284412B2 (ja) * | 2002-03-01 | 2009-06-24 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 細胞およびリポソームの固定化体とその固定化方法 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996010399A1 (en) | 1994-10-03 | 1996-04-11 | Bergeron Michel G | Liposome-formulations for treatment of viral diseases |
US6270806B1 (en) | 1999-03-03 | 2001-08-07 | Elan Pharma International Limited | Use of peg-derivatized lipids as surface stabilizers for nanoparticulate compositions |
GB9917416D0 (ja) | 1999-07-23 | 1999-09-22 | Univ Ulster | |
HUP0303616A3 (en) | 2001-03-26 | 2006-07-28 | Alza Corp Mountain View | Liposome composition for improved intracellular delivery of a therapeutic agent |
JP2005269902A (ja) | 2004-03-22 | 2005-10-06 | Seiko Epson Corp | 固相表面に細胞を固定化する方法 |
US7404969B2 (en) | 2005-02-14 | 2008-07-29 | Sirna Therapeutics, Inc. | Lipid nanoparticle based compositions and methods for the delivery of biologically active molecules |
WO2008073458A2 (en) | 2006-12-11 | 2008-06-19 | Bracco Imaging S.P.A. | Fibrin-binding peptides and conjugates thereof |
WO2009103753A1 (en) * | 2008-02-20 | 2009-08-27 | Ablynx Nv | Methods for identifying and/or sorting cells by secreted molecule and kits for performing such methods |
CN102245765B (zh) | 2008-10-21 | 2015-01-07 | 通用医院公司 | 细胞移植 |
CN102665685A (zh) | 2009-06-02 | 2012-09-12 | 念·吴 | 纯的peg-脂质缀合物 |
JP5940975B2 (ja) | 2009-07-20 | 2016-06-29 | ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション ディー/ビー/エイ マサチューセッツ ジェネラル ホスピタル | 凍結保存細胞の生存率を向上させるための方法および組成物 |
JP2011185874A (ja) | 2010-03-10 | 2011-09-22 | Nippon Telegr & Teleph Corp <Ntt> | 生体分子分析用キット、これを用いた生体分子の分析方法 |
PL2455104T3 (pl) * | 2010-11-19 | 2013-12-31 | Univ Freiburg | Bio-funkcjonalizowane reagujące na bodziec rozpuszczalne hydrożele PEG |
US20140154703A1 (en) * | 2011-01-06 | 2014-06-05 | Alison Skelley | Circulating tumor cell capture on a microfluidic chip incorporating both affinity and size |
WO2013148579A1 (en) | 2012-03-29 | 2013-10-03 | Cebix Inc. | Pegylated c-peptide |
BR112014031421A2 (pt) | 2012-06-15 | 2017-06-27 | Brigham & Womens Hospital Inc | composições para tratamento de câncer e métodos para produção das mesmas |
CN105829886B (zh) * | 2013-12-20 | 2018-04-03 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 使用包含聚乙二醇部分的化合物在支持物上固定细胞的方法 |
JP6461973B2 (ja) * | 2013-12-20 | 2019-01-30 | エフ.ホフマン−ラ ロシュ アーゲーF. Hoffmann−La Roche Aktiengesellschaft | 2以上の疎水性ドメインおよびpeg部分を含む親水性ドメインを含む化合物の、細胞の安定化のための使用 |
CN105829887B (zh) * | 2013-12-20 | 2019-05-10 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 可用于结合细胞的包含一个或多个疏水结构域和一个含有peg部分的亲水结构域的化合物 |
-
2014
- 2014-12-19 CN CN201480069194.9A patent/CN105829886B/zh active Active
- 2014-12-19 WO PCT/EP2014/078739 patent/WO2015091948A1/en active Application Filing
- 2014-12-19 EP EP14825324.8A patent/EP3084433B1/en active Active
- 2014-12-19 CA CA2929970A patent/CA2929970C/en active Active
- 2014-12-19 JP JP2016541241A patent/JP6302560B2/ja active Active
-
2016
- 2016-06-20 US US15/186,581 patent/US10890585B2/en active Active
-
2020
- 2020-12-08 US US17/115,069 patent/US11965886B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4284412B2 (ja) * | 2002-03-01 | 2009-06-24 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 細胞およびリポソームの固定化体とその固定化方法 |
JP2005312377A (ja) * | 2004-04-30 | 2005-11-10 | Asahi Kasei Corp | 細胞膜に材料が結合した細胞 |
JP2008081486A (ja) * | 2006-08-31 | 2008-04-10 | Canon Inc | 細胞融合性リポソーム及び該リポソームを利用した物質導入方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
INTEGR. BIOL., 2012, VOL. 4, NO. 12, PP. 1550-1555, JPN6017022641 * |
日本細胞生物学会大会講演要旨集,2001,VOL.54TH,P.59, JPN6010015560 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3084433A1 (en) | 2016-10-26 |
CN105829886B (zh) | 2018-04-03 |
CA2929970A1 (en) | 2015-06-25 |
US20210102944A1 (en) | 2021-04-08 |
EP3084433B1 (en) | 2020-03-18 |
US10890585B2 (en) | 2021-01-12 |
US11965886B2 (en) | 2024-04-23 |
JP6302560B2 (ja) | 2018-03-28 |
US20170363624A1 (en) | 2017-12-21 |
CA2929970C (en) | 2020-05-12 |
CN105829886A (zh) | 2016-08-03 |
WO2015091948A1 (en) | 2015-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6461973B2 (ja) | 2以上の疎水性ドメインおよびpeg部分を含む親水性ドメインを含む化合物の、細胞の安定化のための使用 | |
US11965886B2 (en) | Method of immobilizing a cell on a support using compounds comprising a polyethylene glycol moiety | |
US11162939B2 (en) | Multisignal reagents for labeling analytes | |
JP6629736B2 (ja) | 1以上の疎水性ドメインおよびpeg部分を含む親水性ドメインを含む、細胞を結合するのに有用な化合物 | |
CA2671326A1 (en) | Methods of reversibly binding a biotin compound to a support | |
US20240044906A1 (en) | Biomolecule structure detection probe, biomolecule structure detection kit, and method for detecting biomolecule structure |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20170614 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20170619 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20170919 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20170920 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20180201 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20180302 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6302560 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |