JP2018522218A5 - - Google Patents
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<本発明の更なる実施態様>
[1]ヘマトキシリン溶液における沈殿物の形成を抑制する又は沈殿物を溶解させる方法であって、
(a)ヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2以上のpHを有する、アルミニウムキレート剤又は錯化剤;並びに
(b)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2.0から3.5のpHを有する、酸;
(c)酸化剤及び任意選択的に塩基;
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物とヘマトキシリン溶液を混合することを含み、
洗浄組成物及びヘマトキシリン溶液が、ヘマトキシリン沈殿物の形成を減少させるのに十分な一又は複数の要素の濃度をもたらす比率で混合される、方法。
[2]洗浄組成物が、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[3]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[4]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、更に、組み合わされたヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物のpHが4から9である、[1]から[3]のいずれか一項に記載の方法。
[5]洗浄組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[6]酸が、2.0から3.3の範囲のpHを得るのに十分な比で、ヘマトキシリン溶液と組み合わされる、[1]に記載の方法。
[7]pHが2.0から3.1である、[6]に記載の方法。
[8]洗浄組成物が酸化組成物を含み、且つ、任意選択的に塩基を含み、更に、
酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[9]洗浄組成物及びヘマトキシリン溶液が、9.0以上のpHを得るのに十分な比で組み合わされる、[8]に記載の方法。
[10]洗浄組成物が金属塩を含み、金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[1]に記載の方法。
[11]生物試料をヘマトキシリン溶液で染色するのに適している染色システム;及び
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後にのみ、ヘマトキシリン溶液を洗浄組成物に接触させるのに適している洗浄システム
を含む自動スライドステイナーにおいて実行される、[1]から[10]のいずれか一項に記載の方法。
[12]自動スライドステイナーが、
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後に、ヘマトキシリン溶液を染色システムから除去し、任意選択的にヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、洗浄システムが、洗浄組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に分配するのに適している、[11]に記載の方法。
[13]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去する前に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[14]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去するのと同時に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[15]ヘマトキシリン廃棄物システムによる、染色システムからのヘマトキシリン溶液の別々の除去間に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[16]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去した後に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[17]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン廃液を保管するための貯蔵器を含み、洗浄組成物の少なくとも一部が貯蔵器中に直接分配される、[11]から[16]のいずれか一項に記載の方法。
[18]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、洗浄組成物の少なくとも一部が流体チャネル中に直接分配されている、[11]から[17]のいずれか一項に記載の方法。
[19](a)生物試料をヘマトキシリン溶液の容積に接触させ、それによりヘマトキシリン廃液を生成するのに適している染色システム;及び
(b)ヘマトキシリン廃液を洗浄組成物の容積に接触させるのに適している洗浄システムであって、洗浄組成物が
(b1)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2以上のpHを有する、アルミニウムキレート剤又は錯化剤;並びに
(b2)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2.0から3.5のpHを有する、酸;
(b3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(b4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む、洗浄システム
を含む自動ヘマトキシリンステイナー。
[20]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又は錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又は錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、又はそれらの組合せから成る群より選択される、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[21]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが4から9である、[20]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[22]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[20]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[23]洗浄組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[24]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物の2.0から3.3の範囲のpHを得るために、十分な量の酸がヘマトキシリン廃液と組み合わされる、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[25]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが2.0から3.1である、[24]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[26]酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、又はそれらの組合せを含み;且つ
塩基が、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、又はそれらの組合せを含む、
[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[27]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが9.0以上である、[26]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[28]金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[29](c)ヘマトキシリンを染色システムから除去する、及び/又は染色システムから除去されたヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、洗浄システムが、洗浄組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に注入するのに適している、
[19]から[28]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[30]ヘマトキシリン廃棄物システムが、染色システムから除去されたヘマトキシリン溶液を保管するための貯蔵器を含み、洗浄システムが、洗浄組成物の少なくとも一部を廃棄物トレー中に直接分配するのに適している、[29]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[31]ヘマトキシリン廃棄物システムが、ヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、洗浄システムが、洗浄組成物の少なくとも一部を流体チャネル中に分配するのに適している、[29]又は[30]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[32]プロセッサ及びプロセッサに結合しているメモリを更に含み、メモリが、プロセッサにより実行されるとき、洗浄システムがヘマトキシリン廃棄物システム中に洗浄組成物を分配するよう命令することを含む動作をプロセッサに実行させるコンピュータ読み取り可能な命令を保管する、[19]から[31]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[33]自動ヘマトキシリンステイナーにおいてヘマトキシリン沈殿物を除去する、及び/又はヘマトキシリン沈殿物の形成を抑制する方法であって、ヘマトキシリン溶液と接触する自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素を
(c1)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(c2)酸;
(c3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(c4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素と接触させることを含む方法。
[34]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、又はそれらの組合せから成る群より選択される、[33]に記載の方法。
[35]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、ヘマテインよりもアルミニウムに対してより高い親和性を有する条件下で、自動ステイナーの構成要素と接触している、[33]又は[34]に記載の方法。
[36]条件が2を上回るpHを含む、[35]に記載の方法。
[37]pHが4から9である、[36]に記載の方法。
[38]十分な量の酸が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素と接触し、2.0から3.3の範囲のpHに構成要素を曝露する、[33]に記載の方法。
[39]pHが2.0から3.1である、[36]に記載の方法。
[40]酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[38]又は[39]に記載の方法。
[41]酸化剤及び任意選択的な塩基が、9.0以上のpHで自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素と接触している、[33]に記載の方法。
[42]pHが10以上である、[41]に記載の方法。
[43]酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、
[41]又は[42]に記載の方法。
[44]金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[33]に記載の方法。
[45]ヘマトキシリン沈殿物が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素の少なくとも一部に沈殿し、十分な量の要素が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素に接触し、ヘマトキシリン沈殿物を溶解させる、[33]から[44]のいずれか一項に記載の方法。
[46](a)生物試料をヘマトキシリン溶液と接触させ、ヘマトキシリン廃液を生成するステイナーシステムを含む自動ヘマトキシリンステイナー;
(b)
(c1)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(c2)酸;
(c3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(c4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物;並びに
(c)
(c1)[1]から[18]のいずれか一項に記載の方法に従って、(b)の洗浄組成物を使用して(a)のヘマトキシリン廃液における沈殿物の形成を抑制すること;及び/又は
(c2)[33]から[45]のいずれか一項に記載の方法に従って、(b)の洗浄組成物を使用して自動ヘマトキシリンステイナーにおけるヘマトキシリン沈殿物を除去する、及び/又はヘマトキシリン沈殿物の形成を抑制すること
に適している洗浄システム
を含むシステム。
[47]自動ヘマトキシリンステイナーが、[19]から[32]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナーである、[46]に記載のシステム。
[48]自動スライドステイナー上でスライドをヘマトキシリン溶液で染色するための方法であって、
生物試料を固定して含有する一又は複数のスライドを自動スライドステイナー上に置くことと;
自動スライドステイナーを操作することであって、操作が、
各スライドをヘマトキシリン溶液の容積と接触させること;
ヘマトキシリン溶液が一又は複数のスライドと接触した後に、ヘマトキシリン溶液を
(a)ヘマトキシリン溶液の容積中のアルミニウムの量に対して化学量論的に過剰のアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤をもたらす濃度を得るためにある量が添加される、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤、及び任意選択的に、2以上のpHを得るために十分な容積のpH調整剤が添加される、pH調整要素;並びに
(b)2.0から3.5のpHを得るために十分な容積が添加される、酸;
(c)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、9.0以上のpHを有する、酸化剤及び任意選択的に塩基;
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の組成物と接触させること;
を含む、操作することと
を含む方法。
[49]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[50]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[51]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、更に、組み合わされたヘマトキシリン溶液及び組成物のpHが4から9である、[48]から[50]のいずれか一項に記載の方法。
[52]組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[53]酸が、2.0から3.3の範囲のpHを得るのに十分な比で、ヘマトキシリン溶液と組み合わされる、[48]に記載の方法。
[54]pHが2.0から3.1である、[53]に記載の方法。
[55]組成物が酸化組成物を含み、且つ、任意選択的に塩基を含み、更に、
酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、
[48]に記載の方法。
[56]組成物及びヘマトキシリン溶液が、10.0以上のpHを得るのに十分な比で組み合わされる、[55]に記載の方法。
[57]組成物が金属塩を含み、金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[48]に記載の方法。
[58]自動スライドステイナーが、
生物試料をヘマトキシリン溶液で染色するのに適している染色システム;及び
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後にのみ、ヘマトキシリン溶液を組成物に接触させるのに適している洗浄システム
を含む、[48]から[57]のいずれか一項に記載の方法。
[59]自動スライドステイナーが、
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後に、ヘマトキシリン溶液を染色システムから除去し、任意選択的にヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、
洗浄システムが、組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に分配するのに適している、[58]に記載の方法。
[60]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去する前に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[61]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去するのと同時に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[62]ヘマトキシリン廃棄物システムによる、染色システムからのヘマトキシリン溶液の別々の除去の間に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[63]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去した後に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[64]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン廃液を保管するための貯蔵器を含み、組成物の少なくとも一部が貯蔵器中に直接分配される、[58]から[63]のいずれか一項に記載の方法。
[65]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、組成物の少なくとも一部が流体チャネル中に直接分配される、[58]から[64]のいずれか一項に記載の方法。
[66]ヘマトキシリン廃液中又は自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素上のヘマトキシリン沈殿物の形成を防ぐ、除去する、減少させる、又は抑制するための、
(a)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(b)酸;
(c)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物の使用。
以下の特許請求の範囲で列挙される参照番号は、本特許出願の精査を容易にするためのみのもので例示的であり、本発明の範囲を図面中の対応する参照番号を有する特定の特徴に限定するものと決して意図されていない。
[1]ヘマトキシリン溶液における沈殿物の形成を抑制する又は沈殿物を溶解させる方法であって、
(a)ヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2以上のpHを有する、アルミニウムキレート剤又は錯化剤;並びに
(b)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2.0から3.5のpHを有する、酸;
(c)酸化剤及び任意選択的に塩基;
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物とヘマトキシリン溶液を混合することを含み、
洗浄組成物及びヘマトキシリン溶液が、ヘマトキシリン沈殿物の形成を減少させるのに十分な一又は複数の要素の濃度をもたらす比率で混合される、方法。
[2]洗浄組成物が、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[3]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[4]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、更に、組み合わされたヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物のpHが4から9である、[1]から[3]のいずれか一項に記載の方法。
[5]洗浄組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[6]酸が、2.0から3.3の範囲のpHを得るのに十分な比で、ヘマトキシリン溶液と組み合わされる、[1]に記載の方法。
[7]pHが2.0から3.1である、[6]に記載の方法。
[8]洗浄組成物が酸化組成物を含み、且つ、任意選択的に塩基を含み、更に、
酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[1]に記載の方法。
[9]洗浄組成物及びヘマトキシリン溶液が、9.0以上のpHを得るのに十分な比で組み合わされる、[8]に記載の方法。
[10]洗浄組成物が金属塩を含み、金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[1]に記載の方法。
[11]生物試料をヘマトキシリン溶液で染色するのに適している染色システム;及び
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後にのみ、ヘマトキシリン溶液を洗浄組成物に接触させるのに適している洗浄システム
を含む自動スライドステイナーにおいて実行される、[1]から[10]のいずれか一項に記載の方法。
[12]自動スライドステイナーが、
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後に、ヘマトキシリン溶液を染色システムから除去し、任意選択的にヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、洗浄システムが、洗浄組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に分配するのに適している、[11]に記載の方法。
[13]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去する前に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[14]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去するのと同時に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[15]ヘマトキシリン廃棄物システムによる、染色システムからのヘマトキシリン溶液の別々の除去間に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[16]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去した後に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[12]に記載の方法。
[17]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン廃液を保管するための貯蔵器を含み、洗浄組成物の少なくとも一部が貯蔵器中に直接分配される、[11]から[16]のいずれか一項に記載の方法。
[18]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、洗浄組成物の少なくとも一部が流体チャネル中に直接分配されている、[11]から[17]のいずれか一項に記載の方法。
[19](a)生物試料をヘマトキシリン溶液の容積に接触させ、それによりヘマトキシリン廃液を生成するのに適している染色システム;及び
(b)ヘマトキシリン廃液を洗浄組成物の容積に接触させるのに適している洗浄システムであって、洗浄組成物が
(b1)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2以上のpHを有する、アルミニウムキレート剤又は錯化剤;並びに
(b2)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、2.0から3.5のpHを有する、酸;
(b3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(b4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む、洗浄システム
を含む自動ヘマトキシリンステイナー。
[20]洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又は錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又は錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、又はそれらの組合せから成る群より選択される、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[21]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが4から9である、[20]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[22]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[20]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[23]洗浄組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[24]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物の2.0から3.3の範囲のpHを得るために、十分な量の酸がヘマトキシリン廃液と組み合わされる、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[25]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが2.0から3.1である、[24]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[26]酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、又はそれらの組合せを含み;且つ
塩基が、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、又はそれらの組合せを含む、
[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[27]組み合わされたヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物のpHが9.0以上である、[26]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[28]金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[19]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[29](c)ヘマトキシリンを染色システムから除去する、及び/又は染色システムから除去されたヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、洗浄システムが、洗浄組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に注入するのに適している、
[19]から[28]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[30]ヘマトキシリン廃棄物システムが、染色システムから除去されたヘマトキシリン溶液を保管するための貯蔵器を含み、洗浄システムが、洗浄組成物の少なくとも一部を廃棄物トレー中に直接分配するのに適している、[29]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[31]ヘマトキシリン廃棄物システムが、ヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、洗浄システムが、洗浄組成物の少なくとも一部を流体チャネル中に分配するのに適している、[29]又は[30]に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[32]プロセッサ及びプロセッサに結合しているメモリを更に含み、メモリが、プロセッサにより実行されるとき、洗浄システムがヘマトキシリン廃棄物システム中に洗浄組成物を分配するよう命令することを含む動作をプロセッサに実行させるコンピュータ読み取り可能な命令を保管する、[19]から[31]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナー。
[33]自動ヘマトキシリンステイナーにおいてヘマトキシリン沈殿物を除去する、及び/又はヘマトキシリン沈殿物の形成を抑制する方法であって、ヘマトキシリン溶液と接触する自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素を
(c1)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(c2)酸;
(c3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(c4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素と接触させることを含む方法。
[34]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、又はそれらの組合せから成る群より選択される、[33]に記載の方法。
[35]アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、ヘマテインよりもアルミニウムに対してより高い親和性を有する条件下で、自動ステイナーの構成要素と接触している、[33]又は[34]に記載の方法。
[36]条件が2を上回るpHを含む、[35]に記載の方法。
[37]pHが4から9である、[36]に記載の方法。
[38]十分な量の酸が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素と接触し、2.0から3.3の範囲のpHに構成要素を曝露する、[33]に記載の方法。
[39]pHが2.0から3.1である、[36]に記載の方法。
[40]酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[38]又は[39]に記載の方法。
[41]酸化剤及び任意選択的な塩基が、9.0以上のpHで自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素と接触している、[33]に記載の方法。
[42]pHが10以上である、[41]に記載の方法。
[43]酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、
[41]又は[42]に記載の方法。
[44]金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[33]に記載の方法。
[45]ヘマトキシリン沈殿物が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素の少なくとも一部に沈殿し、十分な量の要素が自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素に接触し、ヘマトキシリン沈殿物を溶解させる、[33]から[44]のいずれか一項に記載の方法。
[46](a)生物試料をヘマトキシリン溶液と接触させ、ヘマトキシリン廃液を生成するステイナーシステムを含む自動ヘマトキシリンステイナー;
(b)
(c1)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(c2)酸;
(c3)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(c4)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物;並びに
(c)
(c1)[1]から[18]のいずれか一項に記載の方法に従って、(b)の洗浄組成物を使用して(a)のヘマトキシリン廃液における沈殿物の形成を抑制すること;及び/又は
(c2)[33]から[45]のいずれか一項に記載の方法に従って、(b)の洗浄組成物を使用して自動ヘマトキシリンステイナーにおけるヘマトキシリン沈殿物を除去する、及び/又はヘマトキシリン沈殿物の形成を抑制すること
に適している洗浄システム
を含むシステム。
[47]自動ヘマトキシリンステイナーが、[19]から[32]のいずれか一項に記載の自動ヘマトキシリンステイナーである、[46]に記載のシステム。
[48]自動スライドステイナー上でスライドをヘマトキシリン溶液で染色するための方法であって、
生物試料を固定して含有する一又は複数のスライドを自動スライドステイナー上に置くことと;
自動スライドステイナーを操作することであって、操作が、
各スライドをヘマトキシリン溶液の容積と接触させること;
ヘマトキシリン溶液が一又は複数のスライドと接触した後に、ヘマトキシリン溶液を
(a)ヘマトキシリン溶液の容積中のアルミニウムの量に対して化学量論的に過剰のアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤をもたらす濃度を得るためにある量が添加される、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤、及び任意選択的に、2以上のpHを得るために十分な容積のpH調整剤が添加される、pH調整要素;並びに
(b)2.0から3.5のpHを得るために十分な容積が添加される、酸;
(c)ヘマトキシリン廃液及び洗浄組成物が、組み合わされたとき、9.0以上のpHを有する、酸化剤及び任意選択的に塩基;
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の組成物と接触させること;
を含む、操作することと
を含む方法。
[49]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[50]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[51]組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、更に、組み合わされたヘマトキシリン溶液及び組成物のpHが4から9である、[48]から[50]のいずれか一項に記載の方法。
[52]組成物が酸を含み、酸が、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、ギ酸、フマル酸、マロン酸、酢酸、シュウ酸、過塩素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、クエン酸、酒石酸、スルファミン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、リンゴ酸、及びそれらの組合せから成る群より選択される、[48]に記載の方法。
[53]酸が、2.0から3.3の範囲のpHを得るのに十分な比で、ヘマトキシリン溶液と組み合わされる、[48]に記載の方法。
[54]pHが2.0から3.1である、[53]に記載の方法。
[55]組成物が酸化組成物を含み、且つ、任意選択的に塩基を含み、更に、
酸化剤が、過酸化水素、過酸化尿素、過硫酸ナトリウム、過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過炭酸ナトリウム、塩素酸ナトリウム、過酢酸溶液、次亜塩素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択され;且つ
塩基が、存在する場合、水酸化カリウム、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、リン酸三ナトリウム十二水和物、水酸化ナトリウム、セスキ炭酸ナトリウム、水酸化リチウム、炭酸リチウム、炭酸カリウム、及びそれらの組合せから成る群より選択される、
[48]に記載の方法。
[56]組成物及びヘマトキシリン溶液が、10.0以上のpHを得るのに十分な比で組み合わされる、[55]に記載の方法。
[57]組成物が金属塩を含み、金属塩が硫酸アルミニウムカリウム又は塩化第二鉄である、[48]に記載の方法。
[58]自動スライドステイナーが、
生物試料をヘマトキシリン溶液で染色するのに適している染色システム;及び
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後にのみ、ヘマトキシリン溶液を組成物に接触させるのに適している洗浄システム
を含む、[48]から[57]のいずれか一項に記載の方法。
[59]自動スライドステイナーが、
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後に、ヘマトキシリン溶液を染色システムから除去し、任意選択的にヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、
洗浄システムが、組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に分配するのに適している、[58]に記載の方法。
[60]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去する前に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[61]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去するのと同時に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[62]ヘマトキシリン廃棄物システムによる、染色システムからのヘマトキシリン溶液の別々の除去の間に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[63]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去した後に、組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、[59]に記載の方法。
[64]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン廃液を保管するための貯蔵器を含み、組成物の少なくとも一部が貯蔵器中に直接分配される、[58]から[63]のいずれか一項に記載の方法。
[65]ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、組成物の少なくとも一部が流体チャネル中に直接分配される、[58]から[64]のいずれか一項に記載の方法。
[66]ヘマトキシリン廃液中又は自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素上のヘマトキシリン沈殿物の形成を防ぐ、除去する、減少させる、又は抑制するための、
(a)アルミニウムキレート剤又は錯化剤;及び
(b)酸;
(c)酸化剤及び任意選択的に塩基;並びに
(d)金属塩
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物の使用。
以下の特許請求の範囲で列挙される参照番号は、本特許出願の精査を容易にするためのみのもので例示的であり、本発明の範囲を図面中の対応する参照番号を有する特定の特徴に限定するものと決して意図されていない。
Claims (13)
- ヘマトキシリン溶液における沈殿物の形成を抑制する又は沈殿物を溶解させる方法であって、
組み合わされたとき、ヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物が2以上のpHを有する、アルミニウムキレート剤又は錯化剤
から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物とヘマトキシリン溶液を混合することを含み、
洗浄組成物及びヘマトキシリン溶液が、ヘマトキシリン沈殿物の形成を減少させるのに十分な一又は複数の要素の濃度をもたらす比率で混合される、方法。 - アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)、エチレングリコール四酢酸(EGTA)、ジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)、フッ化ナトリウム、クエン酸塩、酒石酸塩、スルホサリチル酸、8−ヒドロキシキノリン、イミノ二酢酸(IDA)、トランス−1,2−シクロヘキサンジアミン四酢酸(CDTA)、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、リン酸塩、タイロン、及びそれらの組合せから成る群より選択される、請求項1に記載の方法。
- アルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤が、リン酸、リン酸バッファー、リン酸バッファー及びプロピレングリコール、フッ化水素酸、フッ化ナトリウム、スルホサリチル酸、エチレンジアミン−N,N’−ジコハク酸(EDDS)、タイロン、クエン酸塩、並びに酒石酸塩から成る群より選択される、請求項1に記載の方法。
- 洗浄組成物がアルミニウムキレート剤又はアルミニウム錯化剤を含み、更に、組み合わされたヘマトキシリン溶液及び洗浄組成物のpHが4から9である、請求項1から3のいずれか一項に記載の方法。
- 生物試料をヘマトキシリン溶液で染色するのに適している染色システム;及び
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後にのみ、ヘマトキシリン溶液を洗浄組成物に接触させるのに適している洗浄システム
を含む自動スライドステイナーにおいて実行される、請求項1から4のいずれか一項に記載の方法。 - 自動スライドステイナーが、
ヘマトキシリン溶液が生物試料を染色するのに使用された後に、ヘマトキシリン溶液を染色システムから除去し、任意選択的にヘマトキシリン溶液を保管するのに適しているヘマトキシリン廃棄物システム
を更に含み、洗浄システムが、洗浄組成物をヘマトキシリン廃棄物システム中に分配するのに適している、請求項5に記載の方法。 - ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去する前に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、請求項6に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去するのと同時に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、請求項6に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃棄物システムによる、染色システムからのヘマトキシリン溶液の別々の除去間に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、請求項6に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから除去した後に、洗浄組成物がヘマトキシリン廃棄物システム中に分配される、請求項6に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン廃液を保管するための貯蔵器を含み、洗浄組成物の少なくとも一部が貯蔵器中に直接分配される、請求項5から10のいずれか一項に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃棄物システムがヘマトキシリン溶液を染色システムから移動させるための流体チャネルを含み、洗浄組成物の少なくとも一部が流体チャネル中に直接分配される、請求項5から11のいずれか一項に記載の方法。
- ヘマトキシリン廃液中又は自動ヘマトキシリンステイナーの構成要素上のヘマトキシリン沈殿物の形成を防ぐ、除去する、減少させる、又は抑制するための、
アルミニウムキレート剤又は錯化剤から成る群より選択される一又は複数の要素を含む洗浄組成物の使用。
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