JP2018083848A - ドライアイ治療用点眼剤 - Google Patents
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Abstract
Description
HCE細胞(ヒト角膜上皮細胞)を、ジクロフェナクを含む高浸透圧培地で培養した。培地は、150mMのNaCl、280mMのグルコース、または280mMのソルビトールにより高浸透圧条件とした。生細胞の数をMTT法により測定し、コントロール(等張圧条件)の吸光度に対する相対値を算出した。結果を図1Aおよび図1Bに示した。数値は平均±S.D.(n=3)、*P<0.05;**P<0.01である。
ジクロフェナクに代えて、その他の非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)を用いた以外は実施例1と同じ操作を行った。結果を図1Aに示した。
HCE細胞を、ジクロフェナク、および150mMのNaClを含む高浸透圧培地で培養した。6時間培養後のカスパーゼ3様活性を、蛍光ペプチド基質を使用して測定し、結果を図2Aに示した。また、12時間培養後、細胞増殖をBrdU取り込みアッセイにより検討し、その結果をコントロール(等張圧条件)の吸光度に対する相対値として記載した。結果を図2Bに示した。数値は平均±S.D.(n=3)、*P<0.05;**P<0.01である。
ジクロフェナクに代えて、ブロムフェナクを用いた以外は実施例2と同じ操作を行った。結果を図2A〜Bに示した。
HCE細胞を、ジクロフェナク、150mMのNaCl、および/またはPGE2を含む高浸透圧培地で24時間培養した。生細胞の数をMTT法により測定し、コントロール(等張圧条件)の吸光度に対する相対値として記載した。結果を図3A、および図3Cに示した。
ジクロフェナクに代えて、ブロムフェナクを用いた以外は実施例3と同じ操作を行った。結果を図3A〜Cに示した。
HCE細胞を、ジクロフェナク、および150mMのNaClを含む高浸透圧培地で6時間(図4Aおよび図4C)、または1時間(図4B)培養した。全細胞破砕液(図4Aおよび図4B)、または核抽出液(図4B)を、NFAT5、アクチンまたはラミンBに対する抗体を使用して、イムノブロット法により解析した。NFAT5のバンドの強度を測定し、コントロール(ジクロフェナクを含まない等張圧条件)に対する相対値として記載した(図4Aおよび図4B)。bgt1 mRNAの相対的な発現量をリアルタイムRT−PCRで測定し、アクチンの発現量により基準化した数値を、コントロール(ジクロフェナクを含まない等張圧条件)に対する相対値として記載した(図4C)。数値は平均±S.D.(n=3)、*P<0.05;**P<0.01である。
ジクロフェナクに代えて、ブロムフェナクを用いた以外は実施例4と同じ操作を行った。結果を図4A〜Cに示した。
ラットの涙腺を除去し、ドライアイモデルを作製した。涙腺除去の1〜5週間後、ジクロフェナク(0.1%、3.1mM)を含む目薬(5μl)を1日3回投与した。涙液量をコットン糸テストにより測定し、結果を図5Aに示した。フルオロセイで染色された角膜の画像を図5Bに示した。フルオレセインのスコアを算出し、図5Cに示した。涙腺除去の5週間後に眼組織の切片を作製し、TUNELアッセイおよびDAPI染色を行い、結果を図5Dに示した(スケールバーは50μm)。TUNEL陽性細胞数を図5Eに示した。数値は平均±S.E.M.、*P<0.01であり、n.s.はnot significantを意味する。
ジクロフェナクに代えて、ブロムフェナクを用いた以外は実施例5と同じ操作を行った。結果を図5A〜Eに示した。
HCE細胞を、0μg/ml、1μg/ml、または10μg/mlのポリソルベート80を含む培地で24時間、前培養した。さらに、1μMのジクロフェナク、150mMのNaCl、および前培養と同じ濃度のポリソルベート80を含む高浸透圧培地で24時間培養した。生細胞の数をMTT法により測定し、結果を図6に示した。
ジクロフェナクを用いない以外は、実施例6と同じ操作を行い、結果を図6に示した。
HCE細胞を、0μg/ml、4μg/ml、または40μg/mlのホウ砂を含む培地で24時間、前培養した。さらに、1μMのジクロフェナク、150mMのNaCl、および前培養と同じ濃度のホウ砂を含む高浸透圧培地で24時間培養した。生細胞の数をMTT法により測定し、結果を図7に示した。
ジクロフェナクを用いない以外は、実施例7と同じ操作を行い、結果を図7に示した。
HCE細胞を、0μg/ml、10μg/ml、または100μg/mlのポピドンを含む培地で24時間、前培養した。さらに、1μMのジクロフェナク、150mMのNaCl、および前培養と同じ濃度のポピドンを含む高浸透圧培地で24時間培養した。生細胞の数をMTT法により測定し、結果を図8に示した。
ジクロフェナクを用いない以外は、実施例8と同じ操作を行い、結果を図8に示した。
HCE細胞を、1μg/mlの併用点眼薬を含む培地で24時間、前培養した。さらに、3μMの併用点眼薬、150mMのNaClを含む高浸透圧培地で24時間培養した。生細胞の数をMTT法により測定した。また、併用点眼薬に代えてジクロフェナクを使用して同じ操作を行った。結果を図9に示した。なお、併用点眼液は処方例3の組成の点眼薬である。
ジクロフェナクまたは併用点眼薬を用いない(CTRL)、または緩衝液を用いた(Vehicle)以外は、実施例9と同じ操作を行い、結果を図9に示した。
ラットの涙腺を除去し、ドライアイモデルを作製した。涙腺除去の1週間後、ジクロフェナク(0.05%、1.55mM、または0.1%、3.1mM)を含む目薬(5μl)を1日3回投与した。投与4週間後に涙液をフルオレセインで染色しそのスコアを算出した。結果を図10に示した。
ジクロフェナクに代えて緩衝液を用いた(Vehicle)以外は、実施例10と同じ操作を行い、結果を図10に示した。
ジクロフェナクナトリウム100mg、ホウ砂573mg、ホウ酸868mg、塩化ナトリウム290mg、およびβ−シクロデキストリン100mgを蒸留水約80mlに溶解し、これに乳酸カルシウム150mgを添加して溶解し、蒸留水で希釈して100mlとし、除菌濾過して点眼剤を得る。
ジクロフェナクナトリウム100mg、NaH2PO4(無水)200mg、Na2HPO4(無水)710mg、塩化ナトリウム300mgおよびβ−シクロデキストリン1000mgを蒸留水約80mlに溶解し、これにパントテン酸カルシウム150mgを加えて溶解し、蒸留水で希釈して100mlとし、除菌濾過して点眼剤を得る。
ジクロフェナクナトリウム100mg、ホウ砂450mg、ホウ酸1500mg、クロロブタノール500mg、ポリビニルピロリドンK25 3000mgおよびポリソルベート80(Tween80)500mgを滅菌精製水で溶解して全量100mlとし点眼剤を得る。
Claims (8)
- ジクロフェナクまたはその薬学的に許容可能な塩を含む、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを抑制するための、涙液の高浸透圧によるアポトーシスを有するドライアイの治療用点眼剤。
- ジクロフェナクまたはその薬学的に許容可能な塩を0.01〜0.7重量/容量%の濃度で含む、請求項1に記載の点眼剤。
- ジクロフェナクの薬学的に許容可能な塩がジクロフェナクナトリウムである、請求項1または2に記載の点眼剤。
- さらに、ポリソルベート80、ホウ砂、またはポリビニルピロリドンを含む、請求項1〜3のいずれかに記載の点眼剤。
- ジクロフェナクまたはその薬学的に許容可能な塩を含む、角膜表面障害を抑制するための、角膜表面障害を有するドライアイの治療用点眼剤。
- ジクロフェナクまたはその薬学的に許容可能な塩を0.01〜0.7重量/容量%の濃度で含む、請求項5に記載の点眼剤。
- ジクロフェナクの薬学的に許容可能な塩がジクロフェナクナトリウムである、請求項5または6に記載の点眼剤。
- さらに、ポリソルベート80、ホウ砂、またはポリビニルピロリドンを含む、請求項5〜7のいずれかに記載の点眼剤。
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