JP2018029491A - ラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
したがって、IL−10とIL−12の産生量の比率(IL−10/IL−12の産生量の比率)も、IL−10の産生誘導活性と同様に、抗炎症活性の重要な指標と捉えられている。つまり、IL−10の産生誘導活性が高くて、かつ、IL−12の産生誘導活性が低い菌株(乳酸菌など)を選抜して使用することができれば、免疫調節活性(抗炎症機能)が高い商品を提供することができる。そして、その結果として、腸炎や心筋梗塞などの疾病以外にも、様々な炎症に起因する疾病(メタボリックシンドローム、癌、自己免疫疾患、神経変性疾患など)を改善することを期待できる。
この方法によれば、インターロイキン−10とインターロイキン−12の産生量の比率(インターロイキン−10/インターロイキン−12の産生量の比率)として、10以上の値を得ることができる。
乳酸菌などの培養期間については、例えば、特許文献3に、パン種の製造方法において、パン生地状の生地の発酵を、酵母と乳酸菌が対数増殖期を経て定常期の終了に到るまでの期間にわたり行うことが記載されている。
例えば、非特許文献4に、定常期のプランタラム菌(L. plantarum)WCFS1に比べて、対数増殖期のプランタラム菌WCFS1では、ヒト由来の末梢血単核球(PBMC)において、IL−10の産生を強く誘導することが報告されている。
また、非特許文献5に、被験者(8名)に対数増殖期と定常期のプランタラム菌WCFS1を投与して、十二指腸粘膜の遺伝子の発現をマイクロアレイで網羅的に解析したところ、定常期のプランタラム菌WCFS1では、炎症メディエーターのNF-κBの活性化に関わる遺伝子群の発現を誘導したが、対数増殖期の プランタラム菌WCFS1では、抗炎症性に関わる遺伝子群の発現を誘導したことが 報告されている。
[1] 不飽和脂肪酸エステルを含む培地を用いて、ラクトバチルス・プランタラムを、対数増殖期の終了時点を超えない時点まで培養して、ラクトバチルス・プランタラムの培養物を得ることを特徴とするラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[2] 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの培養時の菌数が最高到達菌数の半分の菌数に達した時点で表される、上記[1]に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[3] 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの中和培養時に用いる中和剤の消費量が消費総量の半分の量に達した時点で表される、上記[1]に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[4] 上記不飽和脂肪酸エステルが、一価もしくは多価の不飽和脂肪酸と多価アルコールとが反応してなるエステル、または、該エステルの誘導体である、上記[1]〜[3]のいずれかに記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[5] 上記一価もしくは多価の不飽和脂肪酸が、炭素数16〜23の一価〜三価の不飽和脂肪酸である、上記[4]に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[6] 上記不飽和脂肪酸エステルが、モノオレイン酸エステルである、上記[4]又は[5]に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[7] 上記不飽和脂肪酸エステルが、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、または、ポリソルベートである、上記[6]に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
[8] 上記[1]〜[7]のいずれかに記載の製造方法によって製造されたラクトバチルス・プランタラムの培養物を有効成分として含むことを特徴とする抗炎症剤。
[9] 不飽和脂肪酸エステルを含む培地を用いて、ラクトバチルス・プランタラムの複数の菌株の各々を、対数増殖期の終了時点を超えない時点まで培養して、各菌株の培養物を得た後、得られた各菌株の培養物について、インターロイキン−10の産生誘導活性を評価し、その評価結果に基いて、上記複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜することを特徴とするラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
[10] 上記インターロイキン−10の産生誘導活性の評価に加えて、インターロイキン−12の産生誘導活性を評価し、これらの評価結果に基いて、上記複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜する、上記[9]に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
[11] 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの培養時の菌数が最高到達菌数の半分の菌数に達した時点で表される、上記[9]又は[10]に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
[12] 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの中和培養時に用いる中和剤の消費量が消費総量の半分の量に達した時点で表される、上記[9]又は[10]に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
ラクトバチルス・プランタラム(以下、プランタラム菌と略すことがある。)としては、任意の菌株を用いることができる。
ラクトバチルス・プランタラムの菌株の例としては、OLL2712(受託番号:FERM BP−11262)、OLL2770等が挙げられる。
不飽和脂肪酸エステルとしては、例えば、一価もしくは多価の不飽和脂肪酸と多価アルコールとが反応してなるエステルや、該エステルの誘導体が挙げられる。
一価の不飽和脂肪酸としては、例えば、炭素数16〜23の一価の不飽和脂肪酸が挙げられる。炭素数16〜23の一価の不飽和脂肪酸としては、例えば、オレイン酸(炭素数:16)、バクセン酸(炭素数:16)、パルミトレイン酸(炭素数:19)、ネルボン酸(炭素数:23)等が挙げられる。
多価の不飽和脂肪酸としては、例えば、炭素数16〜23の二価〜四価の不飽和脂肪酸が挙げられる。炭素数16〜23の二価〜四価の不飽和脂肪酸としては、例えば、リノール酸(二価、炭素数:16)、8,11−イコサジエン酸(二価、炭素数:19)、リノレン酸(三価、炭素数:16)、エレオステアリン酸(三価、炭素数:16)、5,8,11−イコサトリエン酸(三価、炭素数:18)、アラキドン酸(四価、炭素数:18)等が挙げられる。
グリセリンが3〜15個結合してなるポリグリセリンとしては、例えば、トリグリセリン、テトラグリセリン、ペンタグリセリン、ヘキサグリセリン、ヘプタグリセリン、オクタグリセリン、ノナグリセリン、デカグリセリン、ウンデカグリセリン、ドデカグリセリン等が挙げられる。
一価もしくは多価の不飽和脂肪酸と多価アルコールとが反応してなるエステルの誘導体としては、例えば、ポリソルベート等が挙げられる。
ポリソルベートは、一価もしくは多価の不飽和脂肪酸とソルビタンとが反応してなるソルビタン脂肪酸に、酸化エチレンを縮合させてなるものである。ここで、縮合させる酸化エチレンの数は、例えば、15〜25個である。
本発明において、不飽和脂肪酸エステルの好ましい一例としては、モノオレイン酸エステル(例えば、オレイン酸1分子と、ポリグリセリン、ソルビタンまたはポリソルベート1分子が反応してなるもの)が挙げられる。
培地中の不飽和脂肪酸エステルの濃度は、不飽和脂肪酸エステルの量の増大による培養のコストの増大を避ける観点からは、好ましくは1重量%以下、より好ましくは0.5重量%以下、さらに好ましくは0.3重量%以下、さらに好ましくは
0.1重量%以下、特に好ましくは0.08重量%以下である。
不飽和脂肪酸エステル以外の培地の成分としては、乳酸菌の培養に用いられている一般的な成分を用いればよい。
対数増殖期の終了時点は、例えば、以下の(a)または(b)で表される。
(a)ラクトバチルス・プランタラムの培養時の菌数が、最高到達菌数の半分の菌数に達した時点
(b)ラクトバチルス・プランタラムの中和培養時に用いる中和剤の消費量が、消費総量の半分の量に達した時点
上記(b)において、中和培養とは、菌の増殖を最適な状態に保つために、中和剤(例えば、水酸化ナトリウム)を培養液に添加してpHを一定の範囲に保ちながら培養することをいう。
また、中和培養時に用いる中和剤の消費総量とは、培養の開始時から、最高到達菌数が得られる時まで、pHが一定の範囲になるように中和剤を添加していった場合における、添加された中和剤の総量をいう。
上記(a)の「最高到達菌数」および上記(b)の「消費総量」は、例えば、本発明の製造方法の一例を実施する前に、この一例と全く同じ条件(例えば、ラクトバチルス・プランタラムの菌株の種類、不飽和脂肪酸エステルおよび他の培地成分の種類、培養時の温度等)の下で培養を行なうことによって、予め定めておくことができる。
プランタラム菌の数は、例えば、プランタラム菌の培養物を含む懸濁液の濁度の測定値として表すことができる。濁度の測定手段としては、例えば、分光光度計が挙げられる。
プランタラム菌の対数増殖期の長さは、温度、培地の成分組成等によっても異なるが、例えば、9〜11時間である。
この培養物は、IL−10とIL−12の産生量の比率(IL−10/IL−12の産生量の比率)が、従来の製造方法によって製造された培養物(従来品)における該比率よりも大きいものである点で、従来品と区別することができる。
本発明の製造方法によって製造される培養物において、IL−10/IL−12の産生量の比率は、不飽和脂肪酸エステルを配合しない培地を用いた場合の該比率を基準にして、好ましくは20%以上大きいものであり、より好ましくは25%以上大きいものであり、特に好ましくは30%以上大きいものである。
本発明のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法(以下、本発明の選抜方法と略すことがある。)は、不飽和脂肪酸エステル(例えば、モノオレイン酸エステル)を含む培地を用いて、ラクトバチルス・プランタラムの複数の菌株の各々を、対数増殖期の終了時点を超えない時点まで培養して、各菌株の培養物を得た後、得られた各菌株の培養物について、インターロイキン−10の産生誘導活性を評価し、その評価結果に基いて、上記複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜するものである。
本発明の選抜方法は、インターロイキン−10の産生誘導活性の評価に加えて、インターロイキン−12の産生誘導活性を評価し、これらの評価結果に基いて、複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜するものとすることができる。
インターロイキン−12およびインターロイキン−10の各々についての産生誘導活性は、例えば、免疫学的測定法(例えば、ELISA;Enzyme-linked immuno-sorbent assay)等によって評価することができる。
ビタミン類、ミネラル類、飽和脂肪酸エステル類、または不飽和脂肪酸エステル類(モノオレイン酸エステル類)を配合した培地を使用し、プランタラム菌OLL2712を培養して、これら各成分の抗炎症活性への影響について検討した。
[実験方法1−1] プランタラム菌OLL2712の調製方法
MRS培地(Becton Dickinson社)を使用し、プランタラム菌OLL2712を静置培養(37℃、18時間、2回)して、プランタラム菌OLL2712の賦活培養液を調製した。そして、ホエイ分解培地を使用し、プランタラム菌OLL2712の賦活培養液を、ホエイ分解培地100重量%に対して1重量%の量で添加してから、静置培養(37℃、9時間)して、プランタラム菌OLL2712の培養液を調製した。
ここで、ホエイ分解培地の組成(重量基準)は、ホエイパウダー6.25%、ホエイタンパク濃縮物(WPC80;タンパク質の含有率:80%)、プロテアーゼ0.12%、酵母エキス0.50%、魚肉エキス0.50%、硫酸マンガン四水和物0.01%、他の副原料0.05%(後で添加;詳細は後述する。)または0%(対照用)、蒸留水90.82%または90.87%(対照用)である。
その後に、プランタラム菌OLL2712の凍結乾燥菌体をリン酸緩衝液(PBS)に懸濁してから、細胞培養用の培地を使用して、10mg/mLとなるように希釈して、プランタラム菌OLL2712の希釈液を調製した。
[ホエイ分解培地の副原料の種類]
(a)不飽和脂肪酸エステル:4種類
(a−1)モノオレイン酸デカグリセリン:サンソフトQ−17S(商品名)、親水性、太陽化学社製
(a−2)ペンタグリセリンモノオレイン酸エステル:サンソフトA−171E(商品名)、親水性、太陽化学社製
(a−3)ソルビタンモノオレイン酸エステル:サンソフトNo.81S(商品名)、親油性、太陽化学社製
(a−4)モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン:Tween80(商品名)、親水性、和光純薬工業社製
(b)飽和脂肪酸エステル:1種類
(b−1)モノステアリン酸デカグリセリン:サンソフトQ−18S(商品名)、両親媒性、太陽化学社製
(c)ビタミン類:9種類(アスコルビン酸ナトリウム、チアミン塩酸塩、リボフラビン、ニコチン酸、ニコチンアミド、パントテン酸カルシウム、ピリドキシン塩酸塩、ビオチン、葉酸)
(d)ミネラル類:4種類(硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硫酸鉄、硫酸第二鉄アンモニウム)
自動磁気細胞分離装置(auto MACS、Miltenyi Biotec 社)を使用し、8週齢の雄BALB/cマウス(日本SLC社)の骨髄から未分化の樹状細胞のみを分離した。そして、Granulocyte Macrophage Colony-Stimulating Factor (以下、GM−CSFと略す。)を含むRPMI培地(Invitrogen社)を使用し、未分化の樹状細胞を培養(37℃、CO2(5%)の環境下、8日間)して、十分に分化させることで、骨髄由来の樹状細胞(BMDC;免疫細胞)を調製した。
その後に、この樹状細胞(BMDC)を回収して、2.5×105cells/wellの濃度になるように、48ウェル・プレートに播種してから、上述の各種のホエイ培地で培養したプランタラム菌OLL2712を、乾燥重量で50μg/mLとなるように添加した。そして、GM−CSFを含むRPMI培地を使用し、前記の48ウェル・プレートを培養(37℃、CO2(5%)の環境下、24時間)してから、この培養上清を回収した。
そして、「Mouse IL-10 ELISA Set」(Becton Dickinson社)を使用し、この培養上清のIL−10濃度を測定すると共に、「Mouse IL-12 (p70) ELISA Set」(Becton Dickinson社)を使用し、この培養上清のIL−12濃度を測定した。ここで、IL−12濃度では、活性型であるIL−12 (p70)濃度を測定した。
以上の実験の結果(4回の実験の平均値、および、標準偏差等)を表1〜表6および図1〜図6に示す。
表1〜表3(図1〜図3)は、副原料として、不飽和脂肪酸エステル(4種類のいずれか)、または飽和脂肪酸エステル(1種類;Q−18S)を用いた場合の結果、及び、副原料を用いなかった場合(Control)の結果を示す。表4〜表6(図4〜図6)は、副原料として、ビタミン類(9種類のいずれか)またはミネラル類(4種類のいずれか)を用いた場合の結果、及び、副原料を用いなかった場合(Control)の結果を示す。
表2(図2)から、ホエイ分解培地に、脂肪酸エステルのうち、飽和脂肪酸エステルであるモノステアリン酸デカグリセリンを配合して、プランタラム菌OLL2712を培養すると、対照(Control)に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が、大きくは低減されないこと、および、脂肪酸エステルのうち、不飽和脂肪酸エステル(4種類のいずれか)を配合して、プランタラム菌OLL2712を培養すると、対照(Control)に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が大きく低減されることを確認できた。
表3(図3)から、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステル(4種類のいずれか)を配合して、プランタラム菌OLL2712を培養すると、対照(Control)や飽和脂肪酸エステルに比べて、免疫細胞のIL−10/IL−12産生比率が大きく増大することを確認できた。
表5(図5)から、ホエイ分解培地に、ビタミン類やミネラル類を配合して、プランタラム菌OLL2712を培養しても、対照(Control)に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が大きくは変化しないことを確認できた。
表6(図6)から、ホエイ分解培地に、ビタミン類やミネラル類を配合して、プランタラム菌OLL2712を培養しても、対照((Control)に比べて、免疫細胞のIL−10/IL−12産生比率が大きくは変化しないことを確認できた。
以上の結果から、不飽和脂肪酸エステルを配合した培地を使用し、プランタラム菌OLL2712を培養すると、IL−10/IL−12産生比率が著しく大きくなり、例えば抗炎症活性の向上を期待できること、および、不飽和脂肪酸エステル以外の物質(飽和脂肪酸エステル、ビタミン類、ミネラル類)では、このような効果(IL−10/IL−12産生比率の著しい増大など)が期待できないことを確認できた。
[実験方法2−1] プランタラム菌OLL2712の調製方法
実験方法1−1と同様にして、プランタラム菌OLL2712の賦活培養液を調製した。そして、実験方法1−1で用いたホエイ分解培地と同じ培地を使用し、プランタラム菌OLL2712の賦活培養液を4重量%で添加してから、中和剤にK2CO3(40重量%)を使用し、pHを5.8に制御しながら撹拌培養(33℃、N2の上面の通気下、200rpm)して、プランタラム菌OLL2712の高濃度培養液を調製した。なお、この撹拌培養では、事前に培養条件を検討し、最高の菌体濃度が得られる培養条件に設定した。
その後に、実験方法1−1と同様にして、プランタラム菌OLL2712の凍結乾燥菌体を調製した。
その後に、プランタラム菌OLL2712の凍結乾燥菌体をリン酸緩衝液(PBS)に懸濁してから、細胞培養用の培地を使用し、10mg/mLとなるように希釈して、プランタラム菌OLL2712の希釈液を調製した。
実験方法1−1で調製したホエイ分解培地であって、副原料として、モノオレイン酸デカグリセリン(サンソフトQ−17S(商品名))を含むもの、または、副原料を含まないものを用いて、実験方法1−2と同様にして、免疫細胞のIL−10とIL−12の産生誘導活性を評価した。
この際、対数増殖期の中期(対数増殖期の始点から4時間後)、対数増殖期の後期(対数増殖期の始点から8時間後)、定常期の初期(対数増殖期の始点から12時間後)、定常期の中期(対数増殖期の始点から16時間後)の各時点にて、免疫細胞のIL−10とIL−12の産生誘導活性を評価した。
なお、この培養における対数増殖期の終了時点は、対数増殖期の始点から10時間経過後の時点(最高到達菌数の半分の菌数に到達した時点)であった。
以上の実験の結果(4回の実験の平均値、および、標準偏差)を表7〜表9および図7〜図9に示す。
また、ホエイ分解培地に不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(12時間、18時間)までプランタラム菌OLL2712を培養すると、ホエイ分解培地に不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(12時間、18時間)まで、プランタラム菌OLL2712を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−10の産生誘導活性が低減されることを確認できた。
また、ホエイ分解培地に不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(12時間、18時間)までプランタラム菌OLL2712を培養すると、ホエイ分解培地に不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(12時間、18時間)までプランタラム菌OLL2712を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が変化しないことを確認できた。
また、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(12時間、18時間)まで、プランタラム菌OLL2712を培養すると、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(12時間、18時間)まで、プランタラム菌OLL2712を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−10/IL−12産生比率が低減されることを確認できた。
以上から、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、プランタラム菌OLL2712を定常期の範囲内の時点まで培養せず、対数増殖期の範囲内の時点で培養を終了させると、IL−10/IL−12産生比率が著しく増大し、抗炎症活性の向上を期待できることを確認できた。
プランタラム菌OLL2712に代えて、プランタラム菌OLL2770を用いたこと、および、免疫細胞のIL−10とIL−12の産生誘導活性の測定時点を、4つの時点から、対数増殖期の中期(培養開始から5時間後)、定常期の中期(培養開始から16時間後)の2つの時点に変更したこと以外は、上記「2.培養期間の長さを変えることによるIL−10/IL−12の産生量の比率への影響(プランタラム菌OLL2712を用いた場合)」と同様にして、実験した。
なお、この培養における対数増殖期の終了時点は、培養開始から7時間経過後の時点(中和剤が消費総量の半分に達した時点)であった。
以上の実験の結果(4回の実験の平均値、および、標準偏差)を表10〜表12および図10〜図12に示す。
また、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養すると、 ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−10の産生誘導活性が変化しないことを確認できた。
表11(図11)から、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、対数増殖期(5時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養すると、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合せず、対数増殖期(5時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が有意に低減することを確認できた。
また、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養すると、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−12の産生誘導活性が変化しないことを確認できた
また、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養すると、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合せず、定常期(16時間)まで、プランタラム菌OLL2770を培養した場合に比べて、免疫細胞のIL−10/IL−12産生比率が有意に低減することを確認できた。
したがって、プランタラム菌の種類に影響されず、プランタラム菌に共通して、ホエイ分解培地に、不飽和脂肪酸エステルを配合して、 プランタラム菌を定常期の範囲内の時点まで培養せず、 対数増殖期の範囲内の時点で培養を終了させると、IL−10/IL−12産生比率が向上し、抗炎症活性の向上を期待できることを確認できた。
Claims (12)
- 不飽和脂肪酸エステルを含む培地を用いて、ラクトバチルス・プランタラムを、対数増殖期の終了時点を超えない時点まで培養して、ラクトバチルス・プランタラムの培養物を得ることを特徴とするラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの培養時の菌数が最高到達菌数の半分の菌数に達した時点で表される、請求項1に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの中和培養時に用いる中和剤の消費量が消費総量の半分の量に達した時点で表される、請求項1に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記不飽和脂肪酸エステルが、一価もしくは多価の不飽和脂肪酸と多価アルコールとが反応してなるエステル、または、該エステルの誘導体である請求項1〜3のいずれか1項に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記一価もしくは多価の不飽和脂肪酸が、炭素数16〜23の一価〜三価の不飽和脂肪酸である請求項4に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記不飽和脂肪酸エステルが、モノオレイン酸エステルである請求項4又は5に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 上記不飽和脂肪酸エステルが、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、または、ポリソルベートである請求項6に記載のラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法。
- 請求項1〜7のいずれか1項に記載の製造方法によって製造されたラクトバチルス・プランタラムの培養物を有効成分として含むことを特徴とする抗炎症剤。
- 不飽和脂肪酸エステルを含む培地を用いて、ラクトバチルス・プランタラムの複数の菌株の各々を、対数増殖期の終了時点を超えない時点まで培養して、各菌株の培養物を得た後、得られた各菌株の培養物について、インターロイキン−10の産生誘導活性を評価し、その評価結果に基いて、上記複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜することを特徴とするラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
- 上記インターロイキン−10の産生誘導活性の評価に加えて、インターロイキン−12の産生誘導活性を評価し、これらの評価結果に基いて、上記複数の菌株の中から、抗炎症作用の程度が大きい菌株を選抜する請求項9に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
- 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの培養時の菌数が最高到達菌数の半分の菌数に達した時点で表される、請求項9又は10に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
- 上記対数増殖期の終了時点が、上記ラクトバチルス・プランタラムの中和培養時に用いる中和剤の消費量が消費総量の半分の量に達した時点で表される、請求項9又は10に記載のラクトバチルス・プランタラムの菌株の選抜方法。
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