JP2017536893A

JP2017536893A - 抗菌および抗ウイルス衛生製品

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Publication number: JP2017536893A
Application number: JP2017528515A
Authority: JP
Inventors: フィクレッティン・シャヒン; ゼイネプ・ウスタオール; セラミ・デミルジ; オカン・デミル; アイラ・ブルチン・アスタイ
Original assignee: Yeditepe Universitesi
Current assignee: Yeditepe Universitesi
Priority date: 2014-11-27
Filing date: 2015-11-23
Publication date: 2017-12-14
Also published as: DK3223764T3; US20170319737A1; EP3223764B1; WO2016085434A1; EP3223764A1; US10124085B2; ES2962622T3

Abstract

本発明は、サニタリーパッド、タンポン等の衛生製品、抗菌剤を製造する患者/成人用おむつおよび幼児用おむつに関する。本発明において、ホウ酸ナトリウム、ホウ酸亜鉛、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物、四ホウ酸二ナトリウム塩と称されるホウ素化合物から、グルコポン、グルコン酸クロルヘキシジンおよびトリクロサンの混合物が得られる；この混合物は、織布製品または不織布製品および衛生製品に抗真菌性、抗カンジダイド性、抗微生物性および抗ウイルス性を付与する。加えて、前記衛生製品は、本発明によって親水性となる。

Description

本発明は、サニタリーパッド、膀胱パッド、タンポン、患者および幼児用おむつといった衛生製品に関し、これらは抗菌性および抗ウイルス性である。

社会生活が発展し従来の方法が使用されなくなるにつれて、世界における子供、患者および女性のための衛生製品の使用が増加することが認められている。これらの製品は滅菌されておらず、抗菌性でもないので、湿って栄養分を含んだこれらの培地で微生物が容易に増殖し、人々に重大な病気を引き起こす可能性がある。月経中に女性の体から排出される血液の成分は、微生物の増殖に適した培地を提供する。これらの微生物は、月経中に女性が使用するサニタリーパッドまたはタンポンで生殖して、健康を脅かす重大な疾患を引き起こす。さらに、膀胱および腸の動きを制御できない幼児に装着されたおむつまたはケアを必要とする患者によって使用される患者/高齢者用おむつも、日和見病原体にとって適切な増殖培地である。

特にサニタリーパッドを使用する女性において、腸および尿路への生殖器官の近接に起因して起こり得る感染が、解剖学的に生殖器官を脅かす原因となる。膣は正常時にはpHが低く尿道から膀胱への通過を妨げる形態であることが膣感染リスクを最小にするが、月経中に栄養分が豊富であり膣のpHレベルを正常化するため、微生物の増殖のために適切な培地が形成される[1]。使用されるパッドにおける、微生物の増殖にとって適切な培地の形成、血液中の豊富な栄養素および湿気は、感染リスクを増加させる。使用されるパッドが頻繁に交換されない場合、生殖システムおよび尿路の感染が生じる[2]。パッドの長期使用に伴う感染や臭気を防ぐために、パッドは微生物の増殖を妨げるべきである。

タンポンは、月経中に女性が使用する別の製品であり、衛生パッドのように月経中に体内から膣を通じて排出される血液を保持する。サニタリーパッドと異なり、膣タンポンは、血液が膣から排出される前に血液の吸収を可能にする。パッドの使用の結果として女性の社会生活を困難にする要因が、タンポンの使用によって排除することができる。月経血は、空気と接触すると特別な臭いを生じる。しかし、タンポンでは、血液が空気と接触しないので、臭気は排除される。膣タンポンは、月経期間中の生活を容易にし、適切に使用するとリスクを引き起こすことはないが、誤って使用されると生命を脅かす原因となることがある。例えば、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）によって引き起こされる敗血症性ショックといった命を脅かす疾患が、膣内で長時間保持される血液のために起こり得る。生殖器領域の細菌は敗血症性ショックにおいて急速に増殖し、生成する毒素がユーザーの血液に行き渡る[3-4]。このような事態を避けるため、タンポンは頻繁に変更する必要がある。しかしながら、取ることができる最良の予防策は、タンポンが微生物増殖防止特性を有することである。

幼児は膀胱や腸の動きをコントロールすることができないため、制御不能に排尿や排便を行う。このため、今日、紙ベースの使い捨てのおむつが使用されている。幼児の便は、幼児の敏感な皮膚に刺激的な影響を与える。皮膚の表面の薄い脂肪層は、水分や便を通過する際に、皮膚を刺激する。幼児の臀部には、おむつかぶれと呼ばれる明るい赤色の刺激が時々生じる。刺激された皮膚における熱および湿気の増加は、いくつかの微生物の増殖のための適切な培地を作り出し、したがって発疹は「感染」する。皮膚に発疹が発症する原因として受け入れられている要因は、尿素を分解するバチルスアンモニアゲネス（Bacillus ammoniagenes）細菌の影響下で放出されるアンモニアである。発疹が感染した場合、皮膚発疹は明るい赤色になり、おむつが皮膚に接触する領域の外側の領域に広がる[5]。実施された研究では、発疹が認められた皮膚領域に黄色ブドウ球菌が検出されたが；この細菌が主な原因であるのか、発疹の二次的な理由であるのかはまだ明らかにされていない[6]。実質的な量である所見の85％において、カンジダアルビカンス(Candida albicans)種が発疹領域で検出された。細菌性の場合と同様に、カンジダアルビカンス感染が発疹形成の主要な原因であるのか第2の原因であるのかについてはまだ明らかにされていない[7]。しかしながら、これらの微生物のいずれかが感染発疹を引き起こすことが確認されている。幼児用おむつに生じる問題は、患者用おむつにおいても起こり得る。

ホウ素化合物の抗菌性に関するいくつかの最新の研究がある。 Baileyら（1980）は、彼らが行った実験により、ホウ酸が腸内細菌に対して抗菌活性を有することを実証した[8]。ホウ素を含有する抗菌剤が、グラム陰性細菌（大腸菌およびプロテウスミラビリス）で試験され、有効であることが観察された。

さらに、Benkovicら（2005）の研究では、ホウ酸エステルが広範囲の抗菌活性を有することが観察された[9]。彼らの研究の結果は、ホウ酸エステルがグラム陰性および陽性細菌においてDNAメチルトランスフェラーゼを阻害することを明らかにしている。

Reynold ら（2007）は、2つの異なるホウ素を含む親油性の2,4-ジアミノ-6-メチルピリミジン葉酸拮抗化合物が、ミコバクテリウムアビウム（Mycobacterium avium）細菌およびラクトバシルスカセイ（Lactobacillus casei）に対して中程度の抗菌活性を有することを示した[10]。さらに、いくつかのホウ素誘導体が抗真菌活性を有することが示されている。

Qinらによる研究（2007）は、四ホウ酸カリウムがペニシリウムエクスパンシウム（Penicillium expansium）のミセル成長に阻害効果を有することを示した。四ホウ酸カリウムの0.1％濃度がミセルの成長を妨げる最小濃度であることが判明した[11]。Qinら（2010）はまた、灰色カビ病に至る病原体であるボトリチスシネレア（Botrytis cinerea）に四ホウ酸カリウムが及ぼす影響を調べた[12]。彼らは、1％の濃度の四ホウ酸カリウムを使用することによってブドウに病気を引き起こすこのカビを制御できることを示した。しかしながら、前記研究のいずれにもホウ素添加抗菌サニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつおよび患者用おむつを開発していない。

Hennessey（2006）による研究は、様々な菌株を0.02％クロルヘキシジン溶液に10分間暴露すると、これらの微生物が99.99％阻害されることを示した[13]。

Regosらによる研究は、トリクロサンは、大腸菌、クレブシエラエドワジイ（Klebsiella edwardsii）およびサルモネラ種について、ヘキサクロロフェンよりも10〜100倍有効であり、連鎖球菌（streptococci）、ミクロコッカス（micrococci）およびプロピオニバクテリウムアクネ（Propionibacterium acnes）に対してはあまり効果的ではないことを示している。また、低濃度のトリクロサンでもグラム陰性菌とグラム陽性菌、特にプロテウスブルガリス（Proteus vulgaris）、サルモネラ属菌（Salmonella spp.）、マイコバクテリア（mycobacteria）および嫌気性菌（anaerobic bacteria）の両方に広域スペクトル効果があることを明らかにした[14]。

Bernsteinら（1990）の研究では、歯腐病、サイトメガロウイルス（CMV）、A型インフルエンザ、パラインフルエンザ、ポリオ、B型肝炎（HBV）に関連する単純ヘルペスウイルス（HSV）に対する0.12％グルコン酸クロルヘキシジン含有口内洗浄剤(Peridex)が調査され、結果は30秒以内にポリオウイルス以外の全てのウイルスに対してそれが有効であることを示した[15]。

BaileyとLongson（1972）の研究は、0.02％のグルコン酸クロルヘキシジンは室温で90分間の暴露終了時にヘルペスウイルスホミニス（Herpesvirus hominis）のウイルス力価を99％以上低下させたが、ポリオウイルスとアデノウイルスに対しては効果がなかった[16 ]。

最新技術では、米国特許第4896768号および米国特許第6488948号において抗菌サニタリーパッドが開発された[17-18]。さらに、米国特許第4405323号は、敗血症性ショックを予防するための抗菌性タンポンの開発について開示されている[19]。しかし、該産物が真菌、酵母およびウイルスに何らかの影響を及ぼすかどうかは示されなかった。衛生製品に使用されるポリエチレンおよびポリプロピレンポリマーは、銀ナノ粒子と組み合わされて、黄色ブドウ球菌、肺炎桿菌（Klebsiella pneumoniae）および大腸菌に対して抗菌性の製品を製造する[20]。

上記の発明は、抗真菌性、抗カンジダ性および抗ウイルス活性を開示していない。前記用途は細菌に対してのみ意図されている。

本発明の目的は、抗真菌性の衛生製品を提供することである。

本発明の別の目的は、抗カンジダ性の衛生製品を提供することである。

本発明の更なる目的は、抗細菌性の衛生製品を提供することである。

本発明の別の目的は、抗ウイルス性の衛生製品を提供することである。

本発明の別の目的は、サニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつ、患者/成人用おむつに抗菌（抗真菌、抗カンジダ、抗細菌、抗ウイルス）特性を提供することである。

本発明のさらなる目的は、微生物の増殖を防止することによって発酵臭を防止する衛生製品を提供することである。

本発明の別の目的は、その衛生的な製品が使用される地域において、女性、子供および高齢者/患者において頻繁に生じる感染によって引き起こされるアレルギー、発疹および開放傷の形成を防止する衛生製品を提供することである。

本発明のさらなる目的は、親水性繊維材料（織布および不織布）を開発することを可能にすることである。

発明の詳細な説明

本発明の目的を達成するために開発された抗菌および抗ウイルス性の衛生製品は、添付図面に示されている。

図１−ａは、アスペルギルスニガー（Aspergillus niger）に対するホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)_5.10H₂O)を含有するサニタリーパッドの抗真菌効果の図である。図1-bは、ホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)_5.10H₂O)を含有しないサニタリーパッドにおけるアスペルギルスニガー増殖の図である。図２−ａは、アスペルギルスニガーに対するホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)_5.10H₂O)を含有するタンポンの抗真菌効果の図である。図２−ｂは、ホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)_5.10H₂O)を含有しないタンポン上でのアスペルギルスニガー増殖の図である。図3-ａは、ペニシリウム属（Penicillium spp.）に対するホウ酸亜鉛(2ZnO.3B₂O_3.3.5H₂O)を含有するタンポンにおける抗真菌効果の図である。図3-ｂはホウ酸亜鉛(2ZnO.3B₂O_3.3.5H₂O)を含有しないタンポンにおけるペニシリウム属の増殖の図である。

全ての試験において、ホウ素化合物を含有しない基準の衛生製品がネガティブコントロールとして使用される。

本発明の範囲内で; ホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)₅.10H₂O)、ホウ酸亜鉛（2ZnO.3B₂O_3.3.5H₂O）、過ホウ酸ナトリウム四水和物（NaBO₃.4H₂O）、ホウ砂五水和物(Na₂B₄O₇.5H₂O)およびオクタホウ酸二ナトリウム四水和物(Na₂B₈O₁₃.4H₂O)ホウ素化合物およびグルコポン、グルコン酸クロルヘキシジン、トリクロサンを使用する衛生的なサニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつ、患者用おむつについて応用がなされ；こうして新たな特性を有する衛生的な製品が得られる。

実験的研究

抗菌試験

改変ディスク拡散法
標準的なNCCLSディスク拡散法[21]が、試験されている各微生物上のホウ素化合物の抗微生物活性を決定するために改変されて用いられた。10⁸ cfu / mlの細菌、10⁶ cfu / mlの酵母および10⁴ spore/ mlの真菌を含む100μlの溶液を新しい培養物で調製し、それらを栄養寒天培地（NA）、サブローデキストロース寒天培地（SDA）およびポテトデキストロース寒天培地（PDA）にそれぞれ散布法で接種した。空のディスクに20μlの滅菌水を滴下し、これを粉砕したホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物、ホウ酸オクタホウ酸二ナトリウム四水和物に別々に浸漬した。ホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物、ホウ酸オクタホウ酸二ナトリウム四水和物でコード化したディスクを、接種したペトリ皿に入れた。 20μlの滅菌水を滴下した空のディスクをネガティブコントロールとして使用した。ポジティブコントロールとして、オフロキサシン（10μg/disc）およびナイスタチン（30μg/disc）をそれぞれ細菌および真菌に使用した。接種されて改変ディスク拡散法を適用したペトリ皿を、細菌については36±1℃で24時間、酵母については48時間、真菌類については25±1℃で72時間維持した。改変ディスク拡散法で試験した微生物に対する抗菌活性を、阻害ゾーン（微生物が増殖しないゾーン）を観察することによって評価した。試験したホウ素化合物の抗菌活性試験結果を表1にまとめる。全ての試験を少なくとも2回繰り返した。

ホウ素化合物、グルコン酸クロルヘキシジン、トリクロサンを含有する衛生製品を得る方法

異なる濃度（0.05-50 mg/cm²）のホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物および二ナトリウム二ホウ酸塩四水和物をSAP（超吸収性）材料と混合する。そして、それらは、吸水性内面と不透過性外面との間の幼児用おむつの層およびパッドに分散される。前記混合物は、タンポンの吸収性内側層に均質に分散される。

皮膚と接触する表面の吸収を増大させ、抗菌性を提供するために、
- 1000gの溶液用に、0.3 gのトリクロサンを70gのグルコポン（Glucopon） 215 CS UP 中で均一になるまで混合し、
- 75gの20％グルコン酸クロルヘキシジンを混合物に加え、ホモジナイザーを用いて溶液を均一化し、
- 得られた溶液に854.7gの蒸留水を加え、1〜1.5時間混合する。
-溶液のpH値をクエン酸または酢酸を用いて5〜7とする。
- 調製された溶液を保持タンクに移し、適用される繊維材料をその表面を完全に覆うように浸漬する。 5〜10分間保持した後、25〜90℃で完全に乾燥させる。

4x4cmおよび1x1cmのサイズに成形された開発した幼児用おむつ、タンポン、サニタリーパッドおよび患者/成人用おむつのセクションの抗菌活性試験を、以下の方法によって実施した。

抗菌試験

ホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物およびホウ酸オクタホウ酸二ナトリウム四水和物を用いて上記のように調製したサニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつおよび患者/成人用おむつの抗菌活性試験を、2つの異なる方法によって同時に行った。

−第1の試験方法において;細菌大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）からの分離株；酵母カンジダアルビカンス（Candida albicans）およびカンジダグラブラタ（Candida glabrata）ならびに菌類アスペルギルスニゲル（Aspergillus niger）、ボトリチスシネレア（Botrytis cinerea）、フサリウムオキシスポルム（Fusarium oxysporum）、ペニシリウムビナセウム（Penicillium vinaceum）、ペニシリウムエキスパンスム（Penicillium expansum）を適切な培地（それぞれNA、SDAおよびPDA）を含むペトリ皿に接種した。1x1cmのサイズに成形されたクロルヘキシジンおよびトリクロサンを含有する親水性表面を有するホウ素添加衛生製品の吸収部分を、培地表面に接触するように接種したペトリ皿上においた。接種したペトリ皿を細菌については24時間、酵母については48時間、36±1℃で、真菌については25±1℃で72時間インキュベートした。衛生製品の抗菌活性は、適用された試料の周囲に形成された阻害ゾーン（微生物が成長しないゾーン）を観察することによって評価した。

−第2の方法では、空のペトリ皿に入れた4×4cmのサイズを有するホウ素含有または非含有のパッド、タンポンおよび幼児用おむつの表面を、緩衝溶液を用いる新鮮な培地から調整した（10⁸ cfu/mlの細菌、10⁶ cfu/mlの酵母および10⁴ spore/mlの真菌を含む）100μlの溶液でコンタミネーションした。コンタミネーションされた衛生製品は、細菌および酵母については36±1℃で、真菌については25±1℃でインキュベートした。 1時間、3時間および6時間の間隔でレグレッシブの単離を実施することによって、試験した衛生製品表面の表面上に微生物増殖が存在するかどうかを判定した。

予備的な試験結果によれば、使用された濃度のうち、4 mg/cm²のホウ酸亜鉛、4 mg/cm²のホウ酸ナトリウム、5.5 mg/cm²の過ホウ酸ナトリウム四水和物、5.5 mg/cm²のホウ砂五水和物および5.5 mg/cm²のホウ酸オクタホウ酸二ナトリウム四水和物が最も効果的な抗菌性（抗真菌性、抗カンジダ性および抗微生物性）の結果となった。次いで、上記に記載の実験を、最も効果的な濃度のホウ素化合物のみについて、3回繰り返した。結果を表2にまとめる。

特定の真菌、酵母および細菌種を用いて実験的研究を行った。これらの微生物のうち、細菌は大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌であった。実験に用いた酵母はカンジダアルビカンス（Candida albicans）およびカンジダグラブラタ（Candida glabrata）であり、同様に使用された真菌はフサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）、ボトリチスシネレア（Botrytis cinerea）、アスペルギルスニガー(Aspergillus niger)、ペニシリウムビナセウム(Penicillium vinaceum)およびペニシリウムエクスパンスム(Penicillium expansum)であった。

抗ウイルス試験
グルコン酸クロルヘキシジンの抗ウイルス活性試験;
ヒトアデノウイルス5型アデノイド75株およびポリオウイルス1型チャット株ウイルスを産生させて実験を実施するために、ヒト単層腫瘍細胞であるHEp-2細胞（ATCC CCL-23）の完全層を使用した。ウイルス力価を決定するために、リファレンスのヒトアデノウイルス5型アデノイド75株およびポリオウイルス1型チャット株をHEp-2細胞に対して連続希釈を行い接種し、倒立顕微鏡で識別可能な細胞変性効果を生じるウイルス希釈物を基準にして、Spearman-Karber法を用いて力価を計算した。グルコン酸クロルヘキシジンのサブ細胞毒性濃度を測定するために、グルカン酸クロルヘキシジンをEagle最小必須培地（MEM）で10倍段階希釈し、無毒性濃度を細胞培養で検出し、非毒性濃度を抗ウイルス試験に用いた。コントロール用に、MEM接種HEp-2細胞、グルコン酸クロルヘキシジンを添加できなかった全層HEp-2細胞、10倍希釈リファレンスウイルス力価コントロール、ホルムアルデヒドコントロールおよび毒性濃度のグルコン酸クロルヘキシジン含有コントロールをネガティブコントロールとしてウイルスの代わりに使用した。

細胞培養培地および化学物質の調製
MEM培地：細胞が表面に吸着して増殖するために、酵素、ホルモンおよび成長因子を含む10％血清（FBS）；および菌および細菌の汚染を防止するために40 IU/mlのペニシリン、0.04 mg/mlのストレプトマイシン、0.5mg / mlのグルタミン;および緩衝液として1％重炭酸ナトリウムを添加した。（FBS：不活性化されておりマイコプラズマなし）、（重炭酸ナトリウム：滅菌7.5％溶液）

ウイルス接種に使用される培地：真菌および細菌のコンタミネーションを防ぐために1％の抗生物質（ペニシリン、ストレプトマイシン、アンフォテリシンB）および緩衝溶液として1％重炭酸ナトリウムを含む培地。 FBS血清はこの培地に添加しなかった。

硬水の準備：
溶液A：19.84gの非水性塩化マグネシウム（MgCl₂）または水和塩化マグネシウムおよび46.24gの非水性塩化カルシウム（CaCl₂）または水和塩化カルシウムを水中に同じ等量の水に溶解する。それを1000mlに希釈し、オートクレーブする。
溶液B：35.2gの重炭酸ナトリウム（NaHCO₃）を水に溶解し、1000mlに希釈する。それをろ過する（メッシュサイズは0.22μMであるべきである）。
硬水：

-6.0mlの溶液Aおよび8.0mlの溶液Bを600mlの水に添加する。
-それを攪拌し、1000mlに希釈する。
-硬水のpH値は7.0±0.2であるべきである。
- pH値を調整するために、40 g/lの水酸化ナトリウム（NaOH）（1 mol/l）または塩酸（HCl）（1 mol/l）を使用する。
-無菌状態で調製され12時間以内に使用されるべきである。

クリーンおよび汚染培地の調整
クリーンな培地; 0.3 gのウシ血清アルブミン画分Vを100mlの滅菌水に溶解する。得られた溶液をメッシュサイズ0.22μMのフィルターに通すことにより滅菌する。

汚染された培地;ヒツジ赤血球およびBSAが汚染された培地用に使用される。 3 gのBSAを100mlの滅菌水に溶解し、濾過する。97mlのBSAに対して3 mlのヒツジ赤血球を完成した。

赤血球;新鮮なヒツジ血液8mlを800Gで10分間回転させ、次いでその上清を除去した；8mlのリン酸緩衝液塩（PBS）を加えた後、ピペッティングを行い、再び800Gで10分間回転させた。この手順を3回繰り返した。

分析
まず、液状グルコン酸クロルヘキシジンを細胞培地（MEM）で連続希釈し、細胞培地中の無毒性濃度を算出した。試験されるグルコン酸クロルヘキシジン8 mlを硬水2 mlと混合した。得られた溶液をMEMで連続希釈し（希釈段階1:10）、96ウェル単層セル中においてインキュベートした。生じた微視的変化を記録した。細胞変性効果（CPE）を示す濃度を測定した。グルコン酸クロルヘキシジンおよびホルムアルデヒドCPE値を比較した。細胞上のグルコン酸クロルヘキシジンの無毒性濃度を決定した後、クリーンでな、および汚染された培地中での1〜60分間の適用期間の結果としてのグルコン酸クロルヘキシジンのウイルス力価に対する効果を研究した。コントロール用に、MEM接種HEp-2細胞、グルコン酸クロルヘキシジンを添加できなかった全層HEp-2細胞、10倍希釈リファレンスウイルス力価コントロール、ホルムアルデヒドコントロールおよび毒性濃度のグルコン酸クロルヘキシジン含有コントロールをネガティブコントロールとしてウイルスの代わりに使用した。

倒立顕微鏡で識別できる細胞変性効果が形成されるウイルス希釈物を基礎として、Spearman-Karber法を用いてウイルス力価をTCID₅₀値として計算した。

TS EN 14476（2007年3月）の基準によれば、消毒剤は抗ウイルス活性のために4またはそれ以上のlogでウイルス力価を減少させるべきである。

グルコポン溶液の抗ウイルス活性試験;
表面を親水性にするために使用した8％グルコポンを上記のヒト単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）Maclntyre株で試験した。倒立顕微鏡で見られる細胞変性効果が現れる、Vero（ATCC CCL-81）細胞を段階希釈することにより接種されるウイルス希釈液を基礎として、Spearman-Karber法を用いてウイルス力価をTCID₅₀値として算出した。

グルコン酸クロルヘキシジン、グルコポンおよびトリクロサンの混合物の抗ウイルス活性試験;
前に述べたように、グルコン酸クロルヘキシジン、グルコポンおよびトリクロサンを含む表面に適用する溶液を以下のようにして調製した：1000gの溶液に対して、0.3 gのトリクロサンを70 gのグルコポン中で均質になるまで混合し、ついで75 gの20%グルコン酸クロルヘキシジンを加え、ホモジナイザーを用いて溶液をホモジナイズし、854.7gの蒸留水を加えて1〜1.5時間攪拌した。溶液のpH値は、クエン酸または酢酸を用いて5~7とすることによって調整した。上に述べたように、ヒトアデノウイルス5型アデノイド75株、ポリオウイルス1型チャット株、およびヒト単純ヘルペスウイルス1型（HSV-1）Maclntyre株ウイルスに対する抗ウイルス活性を抗ウイルス試験した。

グルコン酸クロルヘキシジン、グルコポンおよびトリクロサンの混合物が適用された布帛表面の抗ウイルス活性試験;
溶液を適用した繊維表面の異なる点から2cm×2cmの表面を切り出し、直径0.5cmのバイアルに置いた。1 mlのウイルスストックを特定の領域の表面に通した。次いで、バイアルに集められたウイルスストックを、0.22μMのメッシュサイズのフィルターに通すことによって滅菌した。上記のウイルス実験手順を、この溶液について3種のウイルス株に対して試験した。

実験結果

改変ディスク拡散法による抗菌活性試験によれば、試験した全ての微生物（細菌、酵母および真菌）の増殖を防止する効果がホウ素化合物に存在すると判断される。（表1）

ホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物およびホウ酸オクタホウ酸二ナトリウム四水和物を含有または含有しない1×1cmの衛生製品（サニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつ、患者/成人用おむつ）をin vitro条件で調製した。細菌（大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌）、酵母（カンジダアルビカンス（Candida albicans）、カンジダグラブラタ（Candida glabrata））および真菌（フサリウムオキシスポルム(Fusarium oxysporum)、ボトリチスシネレア(Botrytis cinerea)、アスペルギルスニゲル(Aspergillus niger)、ペニシリウムビナセイム(Penicillium vinaceum), ペニシリウムエキスパンスム(Penicillium expansum)）分離株を用いて抗菌活性を試験した。得られた結果によれば、ホウ酸亜鉛、ホウ酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウム四水和物、ホウ砂五水和物、四ホウ酸二ナトリウム四水和物を含有する衛生製品は、試験した全ての微生物に対して抗菌活性を有するが、添加物を含まない衛生製品はいずれの抗菌活性も示さない（表2）。

実験研究の結果、ホウ酸ナトリウムが添加されたサニタリーパッドとタンポンにおいて増殖は見られなかったが、添加物のない衛生製品では真菌の増殖と胞子形成が検出された（図1a、1b、図3a、3b）。

ホウ酸亜鉛を添加したサニタリーパッドとタンポンには真菌の増殖は認められなかったが、添加物のない衛生製品では真菌の増殖と胞子形成が検出された（図2a、2b）。

試験したグルコン酸クロルヘキシジンの10％および1％懸濁液は、細胞培養物中の細胞に対して細胞変性効果を示したので、細胞変性効果を示さない最低比率の前記グルコン酸クロルヘキシジン、すなわち0.1％がこの試験で使用される。試験終了時の計算の結果、グルコン酸クロルヘキシジンは、1〜60分間の適用期間内で、室温（20℃）で、クリーンおよび汚染培地中における適用の結果として、すべての実験条件における、ヒトアデノウイルス5型、ポリオウイルス1型および単純ヘルペス（表3、表4および表5）に対するウイルス力価において少なくとも4対数の減少を引き起こすことが判明した。

結論として;これらの実験結果は、直接、希釈されることなく、室温（２０℃）で1〜60分の適用期間で使用された場合、グルコン酸クロルヘキシジンが、ヒトアデノウイルスタイプ5ウイルスに対して99.9％活性、ポリオウイルスタイプ1ウイルスに対して99.9％活性、単純ヘルペスウイルスに対して99.9％活性であることを示している。

試験した8％グルコポン溶液は、細胞培養物中の細胞に対して細胞変性効果を示したので、細胞変性効果を示さない前記グルコポンの最も低い比率、すなわち0.1％がこの試験では使用される。試験終了時の計算の結果、試験終了時の計算の結果、グルコン酸クロルヘキシジンは、1〜60分間の適用期間内で、室温（20℃）で、クリーンなおよび汚染された培地中における適用の結果として、実験条件における、グルコポンは単純ヘルペスウイルス（表6）に対するウイルス力価の低下を引き起こさなかったことが判明した。

抗ウイルス活性試験の結果、グルコン酸クロルヘキシジン、グルコポンおよびトリクロサンの混合物は、1〜60分間の適用期間内で、クリーンなおよび汚染された培地中における適用の結果として、全ての実験条件（表7、表8および表9）においてウイルス力価の少なくとも4対数の減少を引き起こしたことが判明した。

抗ウイルス活性試験の結果、グルコン酸クロルヘキシジン、グルコポンおよびトリクロサンの混合物が適用された布帛表面が、すべての実験条件（表10、表11および表12）においてウイルス力価において少なくとも4対数の減少を引き起こしたことが判明した。

トルコ標準協会（TSE）のTS EN 14476（MARCH 2007）規格によれば、洗浄、拭き取り、含浸（濡れ/浸漬）のいずれかの方法で使用する場合、DNAモデルのウイルス試料であるヒトアデノウイルス5型に対する殺ウイルス活性が調査されているこの製品は、HBVといった実験室で実際に試験することができない他のエンベロープまたは非エンベロープDNAウイルスに対しても少なくとも上記の溶解度および期間で使用されるならば同様の殺ウイルス活性を示すこと;およびRNAモデルウイルス試料であるポリオウイルス1型に対する殺ウイルス活性が調査されているこの製品は、HCVおよびHIVといった実験室で実際に試験することができない他のエンベロープまたは非エンベロープRNAウイルス（例えば、エボラ、メル、サルなど）に対しても少なくとも上記の溶解度および期間で使用されるならば同様の殺ウイルス活性を示すこと、が認められている。

作製した抗菌製品が皮膚に刺激を与えるかどうかを調べるために、OECD / OCDE 404法に従って刺激試験を行った。試験結果によれば、14日以内に刺激が生じなかったことが確認された。

本発明は、上述のサニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつ、患者/成人用おむつに限定されず、類似の衛生製品が使用される全ての繊維製品および全ての分野に応用することができる

参考文献
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Claims

ホウ素化合物を使用することにより抗菌性を付与した衛生製品。
グルコポン、グルコン酸クロルヘキシジンおよびトリクロサンを使用することにより抗ウイルス性が付与された請求項１に記載の衛生製品。
使用するホウ素化合物が、ホウ酸ナトリウム((Na₂O)(B₂O₃)_5.10H₂O)、ホウ酸亜鉛(2ZnO.3B₂O_3.3.5H₂O)、過ホウ酸ナトリウム(NaBO₃.4H₂O)、ホウ砂五水和物(Na₂B₄O₇.5H₂O)およびオクタホウ酸二ナトリウム4水和物(Na₂B₈O₁₃.4H₂O)の混合物を含む、請求項２に記載の衛生製品。
ホウ素化合物を.05〜50 mg/cm²の濃度で使用して得られる請求項３に記載の衛生製品。
表面に3〜10％で適用されているグルコポンを特徴とする請求項４に記載の衛生製品。
表面に0.1〜5％で適用されているグルコン酸クロルヘキシジンを特徴とする請求項５に記載の衛生製品。
表面に0.01〜0.1％で適用されているトリクロサンを特徴とする請求項６に記載の衛生製品。
大腸菌（Escherichia coli）、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus）および緑膿菌（Pseudomonas aeruginosa）の細菌に抗菌作用を有する請求項７に記載の衛生製品。
カンジダアルビカンス（Candida albicans）およびカンジダグラブラタ（Candida glabrata）の酵母に対する抗カンジダ活性を有する請求項８に記載の衛生製品。
フサリウムオキシスポラム（Fusarium oxysporum）、ボトリチスシネレア（Botrytis cinerea）、アスペルギルスニガー（Aspergillus niger）、ペニシリウムビナセウム（Penicillium vinaceum）およびペニシリウムエクスパンスム（Penicillium expansum）の真菌に対して活性を有する、請求項９に記載の衛生製品。
エンベロープおよび非エンベロープのDNAおよびRNAウイルスに対して抗ウイルス活性を有する、請求項１０に記載の衛生製品。
織物および不織物である繊維材料に抗菌、抗ウイルスおよび親水性を付与した衛生製品。
サニタリーパッド、タンポン、幼児用おむつ、患者/成人用おむつに適用できる衛生製品。