ES2962622T3 - Productos higiénicos antimicrobianos y antivíricos - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere a productos higiénicos tales como toallas sanitarias y tampones, pañales para pacientes/adultos y pañales para bebés que están fabricados con agentes antimicrobianos. En la presente invención se obtiene una mezcla de glucopón, gluconato de clorhexidina y triclosán a partir de los compuestos de boro denominados borato de sodio, borato de zinc, perborato de sodio tetrahidrato, bórax pentahidrato y octaborato disódico tetrahidrato; y esta mezcla proporciona propiedades antifúngicas, anticándidas, antibacterianas y antivirales a los productos textiles y productos higiénicos tejidos o no tejidos. Además, dichos productos higiénicos se vuelven hidrófilos mediante la invención. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Productos higiénicos antimicrobianos y antivíricos
Campo de la invención
La presente invención se refiere a productos higiénicos, tales como compresas higiénicas, compresas para incontinencia, tampones, pañales para pacientes y para bebés que se producen para que sean antimicrobianos y antivíricos.
Antecedentes de la invención
Se ha observado un incremento de la utilización de productos higiénicos para niños, pacientes y mujeres a medida que se ha desarrollado la vida social y se han ido abandonando los métodos convencionales. Debido a que dichos productos no son estériles y los microorganismos antimicrobianos pueden proliferar fácilmente en estos medios, que son húmedos e incluyen nutrición, de esta manera pueden provocar importantes enfermedades en las personas. El contenido de la sangre descargada del cuerpo de una mujer durante la menstruación proporciona un medio adecuado para la reproducción de los microorganismos. Estos microorganismos se reproducen en las compresas higiénicas o tampones utilizados por las mujeres durante el periodo de la menstruación y causan enfermedades graves que amenazan a la salud. Además, los pañales sujetos a los bebés que no pueden controlar la vejiga ni la evacuación o los pañales para pacientes/adultos utilizados por pacientes con necesidades de cuidado también son medios de reproducción adecuados para los patógenos oportunistas.
Especialmente en mujeres que utilizan compresas higiénicas, las infecciones que pueden producirse debido a la proximidad anatómica de los órganos reproductivos a los intestinos y al tracto urinario causan una amenaza para los órganos reproductivos. Aunque la vagina presenta un pH bajo habitualmente y existe una forma que obstruye el paso de la uretra a la vejiga, minimizando el riesgo de infección vaginal, se forma un medio adecuado para la reproducción de los microorganismos debido a que la sangre de la menstruación es rica en nutrientes durante el periodo de la menstruación y normaliza el nivel de pH de la vagina [1]. La formación de un medio adecuado para la reproducción de los microorganismos, la riqueza de nutrientes de la sangre y la humedad de la compresa durante el uso incrementan el riesgo de infección. En el caso de que las compresas utilizadas no se sustituyan con frecuencia, se producen infecciones del sistema reproductor y del tracto urinario [2]. Con el fin de prevenir las infecciones y el olor que se producen con el uso a largo plazo de compresas, estas deberían evitar el crecimiento microbiano.
Los tampones, que son otro producto utilizado por las mujeres durante el periodo de la menstruación, retienen la sangre que descarga el cuerpo por la vagina durante el periodo de la menstruación, del mismo modo que las compresas higiénicas. Los tampones vaginales, a diferencia de las compresas higiénicas, permiten absorber la sangre antes de que esta sea descargada al exterior de la vagina. Los factores que dificultan la vida social de las mujeres como consecuencia del uso de las compresas pueden eliminarse mediante el uso de tampones. La sangre de la menstruación produce un olor especial al entrar en contacto con el aire. Sin embargo, en los tampones se elimina el olor ya que la sangre no entra en contacto con el aire. Aunque los tampones vaginales facilitan la vida durante las menstruaciones y no plantean riesgos en caso de que se utilicen adecuadamente, pueden provocar situaciones potencialmente letales si se utilizan incorrectamente. Por ejemplo, pueden producirse enfermedades potencialmente mortales, tales como el choque séptico causado por la bacteriaStaphylococcus aureus,si la sangre permanece excesivo tiempo en la vagina. Las bacterias en la zona genital proliferan rápidamente en el choque séptico y las toxinas que producen pasan a la sangre del usuario [3-4]. Los tampones deberían cambiarse con frecuencia a fin de evitar dicha situación. Sin embargo, la mejor precaución que puede tomarse es que los tampones posean propiedades de prevención del crecimiento microbiano.
Debido a que los bebés no pueden controlar su vejiga y evacuaciones, orina y defecan de manera incontrolada. Para este propósito actualmente se utilizan pañales para bebé desechables a base de celulosa. Las heces de los bebés presentan un efecto irritante de la sensible piel de los bebés. La delgada capa grasa sobre la superficie de la piel la irrita a medida que pasa la humedad y las heces. Ocasionalmente se producen irritaciones denominadas dermatitis de la zona del pañal, de apariencia roja brillante, en la piel de los glúteos del bebé. El incremento del calor y la humedad sobre la piel irritada crea un medio adecuado para la reproducción de algunos microorganismos y, de esta manera, la dermatitis "se infecta". El factor que se acepta como motivo para el desarrollo de la dermatitis cutánea es el amonio liberado bajo el efecto de la bacteriaBacillus ammoniagenes,que descompone la urea. En el caso de que la dermatitis se infecte, la erupción en la piel se vuelve rojo brillante y se extiende a áreas fuera de la zona en la que el pañal entra en contacto con la piel [5]. En los estudios realizados, se han observadoStaphylococcus aureussobre la zona de piel en donde se observa dermatitis; sin embargo, todavía no se sabe con certeza si esta bacteria es el motivo principal o un motivo secundario de la dermatitis [6]. En el 85 % de los casos, lo que es una proporción sustancial, se ha detectado la especieCandida albicansen la zona de dermatitis. De manera similar al caso de la bacteria, todavía no se sabe con certeza si la infección porCandida albicanses la causa principal o secundaria de la formación de la dermatitis [7]. Sin embargo, se ha determinado que uno de dichos microorganismos causa la infección de la dermatitis. Los problemas que ocurren con los pañales para bebés también ocurren con los pañales para pacientes.
Se han realizado estudios en el estado de la técnica sobre las propiedades antimicrobianas de algunos compuestos de boro. Bailey et al. (1980) han encontrado a través de los experimentos que han realizado que el ácido bórico posee actividad antibacteriana de las bacterias entéricas [8]. Se han probado agentes antimicrobianos que contienen boro sobre bacterias Gram-negativas(Escherichia coliyProteus mirabilis)y se ha observado que resultan eficaces.
Además, en un estudio de Benkovic et al. (2005), se ha observado que los ésteres bóricos presentan una actividad antibacteriana de amplio espectro [9]. Los resultados de este estudio revelan que los ésteres bóricos inhiben la ADN metiltransferasa en bacterias Gram-negativas y Gram-positivas.
Reynold et al. (2007) indican que el compuesto antifolato 2,4-diamino-6-metilpirimidina lipofílico, que comprende dos boros, presenta una actividad antibacteriana de nivel moderado contra las bacteriasMycobacterium aviumyLactobacillus casei[10]. Además, se ha mostrado que algunos derivados del boro poseen actividades antifúngicas.
Un estudio por Qin et al. (2007) ha mostrado que el tetraborato potásico posee un efecto inhibidor del crecimiento miceliar dePenicillium expansium.Se ha determinado que una concentración de 0,1 % de tetraborato potásico es la concentración mínima que evita el crecimiento miceliar [11]. Qin et al. (2010) también han investigado los efectos del tetraborato potásico sobreBotrytis cinerea,que es el patógeno que causa la enfermedad del moho gris [12]. Mostraron que podían controlar esta enfermedad, que se manifiesta como moho en la uva, mediante la utilización de tetraborato potásico a una concentración de 1 %. Sin embargo, en ninguno de dichos estudios se han desarrollado compresas higiénicas, tampones, pañales para bebé y pañales para pacientes antimicrobianos con adición de boro.
Un estudio de Hennessey (2006) ha mostrado que una exposición de 10 minutos de diversas cepas bacterianas a solución de clorhexidina al 0,02 % conduce a una inhibición de 99,99 % de dichos microorganismos [13].
Un estudio por Regos et al. indica que el triclosano es 10 a 100 veces más eficaz que el hexaclorofeno sobreEscherichia coli, Klebsiella edwardsiiySalmonellaspp., pero resulta menos eficaz sobre los estreptococos, micrococos yPropionibacterium acnes.El estudio reveló, además, que incluso la concentración baja de triclosano presentaba un efecto de amplio espectro sobre bacterias tanto Gram-negativas como Gram-positivas, especialmente sobreProteus vulgaris, Salmonellaspp., micobacterias y bacterias anaerobias [14].
En un estudio de Bernstein et al. (1990), se investigó la actividad de enjuague bucal que contenía gluconato de clorhexidina al 0,12 % (Peridex) contra el virus del herpes simple (VHS) relacionado con caries, el citomegalovirus (CMV), y los virus influenza A, parainfluenza, polio y hepatitis B (VHB), y los resultados indicaron que resultaba eficaz contra todos los virus, excepto el virus de la polio, en un espacio de 30 segundos [15].
Un estudio de Bailey y Longson (1972) indica que, aunque el gluconato de clorhexidina al 0,02 % redujo el título vírico deHerpesvirus hominisen más de 99 % al final de una exposición de 90 minutos a temperatura ambiente, seguía resultando ineficaz contra poliovirus y adenovirus [16].
En los documentos de patente US n.° US4896768 y n.° US6488948, en el estado de la técnica, se han desarrollado compresas higiénicas antibacterianas [17-18]. Además, el documento de patente US n.° US4405323 da a conocer el desarrollo de un tampón antibacteriano para prevenir el choque séptico [19]. Sin embargo, no se indica si dichos productos presentan algún efecto sobre hongos, levaduras y virus. Se combinan polímeros de polietileno y polipropileno en productos higiénicos junto con nanopartículas de plata para producir dichos productos antibacterianos contra bacterias deStaphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniaeyEscherichia coli[20].
El documento de patente US n.° US5885263 A da a conocer composiciones que reducen en gran medida, o eliminan, los olores desagradables asociados a la utilización de ropa interior y pañales. Dichas composiciones están compuestas de polímeros superabsorbentes de tipo poliacrílico y de determinados derivados de boro, en particular, tetraborato sódico.
El documento n.° WO2013/072883 A1 se refiere a textiles que están dotados de propiedades antifúngicas, anticandidiales y antibacterianas. El objetivo de la invención en el presente documento es conseguir textiles antimicrobianos que reduzcan la incidencia de infecciones comunicadas o contagiadas por textiles, reducir los costes adicionales y energía para garantizar la higiene y fortalecer la condición higiénica de textiles desechables.
El documento n.° WO2008/062291 A2 se refiere a un material de película que presenta un recubrimiento antimicrobiano y/o absorbente del olor y un procedimiento para producir dicho material de película.
El documento n.° US2010/069861 A1 se refiere a un artículo absorbente que incluye una capa externa impermeable a la humedad, una capa interna sustancialmente coextensa con la capa externa y una capa absorbente interpuesta entre la capa externa y la capa interna. La capa interna se trata con por lo menos un refuerzo antimicrobiano. La capa absorbente se trata con por lo menos un agente antimicrobiano. El documento n.° US2003157149 A1 se refiere a artículos absorbentes que incluyen una cantidad eficaz de un compuesto inhibidor, tal como cerulenina, triclosano o hexaclorofeno, por ejemplo, para inhibir sustancialmente la producción de TSST-1 por bacterias Gram-positivas.
Las invenciones anteriormente mencionadas no dan a conocer actividades antifúngicas, anticandidiales y antivíricas; dichas solicitudes solo están dirigidas contra bacterias.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a productos higiénicos antimicrobianos y antivíricos que contienen compuestos de boro, gluconato de clorhexidina y triclosano según el objeto de la reivindicación 1.
Un objetivo de la presente invención es proporcionar productos higiénicos antifúngicos.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar productos higiénicos anticandidiales. Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar productos higiénicos antibacterianos. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar productos higiénicos antivíricos. Otro objetivo de la presente invención es proporcionar propiedades antimicrobianas (antifúngicas, anticandidiales, antibacterianas y antivíricas) a compresas higiénicas, tampones, pañales para bebé y pañales para pacientes/adultos.
Un objetivo adicional de la presente invención es proporcionar productos higiénicos que evitan los olores de fermentación mediante la prevención del crecimiento de microorganismos.
Otro objetivo de la presente invención es proporcionar productos higiénicos que evitan la formación de alergias, erupciones y llagas causadas por infecciones de incidencia frecuente en mujeres, niños y personas de edad avanzada/pacientes en las zonas en las que se utilizan los productos higiénicos.
Un objetivo adicional de la presente invención es permitir el desarrollo de un material textil hidrofílico (tejidos tejidos y no tejidos).
Descripción detallada de la invención
Los productos higiénicos antimicrobianos y antivíricos desarrollados para cumplir los objetivos de la presente invención se ilustran en las figuras adjuntas, en las que:
la figura 1-a es una vista del efecto antifúngico de una compresa higiénica que contiene borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O) contraAspergillus niger.
La figura 1-b es una vista del crecimiento deAspergillus nigersobre una compresa higiénica que no contiene borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O).
La figura 2-a es una vista del efecto antifúngico de un tampón que contiene borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O) contraAspergillus niger.
La figura 2-b es una vista del crecimiento deAspergillus nigersobre un tampón que no contiene borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O).
La figura 3-a es una vista del efecto antifúngico de un tampón que contiene borato de zinc (2ZnO-3B2O3-3,5H2O) contraPenicilliumspp.
La figura 3-b es una vista del crecimiento dePenicilliumspp. sobre un tampón que no contiene borato de zinc (2ZnO-3B2O3-3,5H2O).
En la totalidad de los ensayos, se utilizaron los productos higiénicos estándares, que no contienen compuestos de boro, como el control negativo.
Dentro del alcance de la invención, se llevaron a cabo aplicaciones sobre compresas sanitarias higiénicas, tampones, pañales para bebé y pañales para pacientes mediante la utilización de los compuestos de boro, borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O), borato de zinc (2ZnO-3B2O3-3,5H2O), tetrahidrato de perborato sódico (NaBO3-4H2O), pentahidrato de bórax (Na2B4O7-5H2O) y tetrahidrato de octaborato disódico (Na2B8Oi3'4H2O), y Glucopon, gluconato de clorhexidina y triclosano; y de esta manera se obtuvieron productos higiénicos con nuevas propiedades.
Estudios experimentales.
Pruebas antimicrobianas.
Método modificado de difusión en disco.
Se utilizó el método de difusión en disco estándar de NCCLS [21] que se modificó con el fin de determinar la actividad antimicrobiana de compuestos de boro sobre cada microorganismo sometido a ensayo. Se prepararon 100 ml de solución que contenía 108 UFC/ml de bacterias, 106 UFC/ml de levaduras y 104 esporas/ml de hongos a partir de cultivos nuevos, y se inocularon mediante el método de extensión sobre agar nutritivo (AN), agar dextrosa Sabouraud (SDA, por sus siglas en inglés) y agar con dextrosa de patata (PDA, por sus siglas en inglés), respectivamente. Se depositaron 20 ml de agua estéril sobre los discos vacíos y se sumergieron por separado en borato de zinc pulverizado, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico. Los discos codificados con borato de zinc, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax, tetrahidrato de octaborato disódico se introdujeron en placas Petri inoculadas. Como control negativo se utilizaron discos vacíos en los que se habían depositado 20 ml de agua estéril. Como control positivo se utilizó ofloxacino (10 pg/disco) y nistatina (30 pg/disco) para bacterias y hongos, respectivamente. Las placas Petri, que habían sido inoculadas y sobre las que se había aplicado el método modificado de difusión en disco, se mantuvieron a 36±1 °C para las bacterias durante 24 horas y para las levaduras durante 48 horas, y a 25±1 °C para los hongos durante 72 horas. Se evaluó la actividad antimicrobiana contra los microorganismos analizados con el método modificado de difusión en disco mediante la observación de la zona de inhibición (zona en la que no crecen microorganismos). Los resultados de ensayo de actividad antimicrobiana de los compuestos de boro sometidos a ensayo se resumen en la Tabla 1. Todos los ensayos se repitieron por lo menos dos veces.
Método de obtención de productos higiénicos que contienen compuestos de boro, gluconato de clorhexidina y triclosano.
Se mezcló borato de zinc, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico de diferentes concentraciones (0,05 a 50 mg/cm2) con material SAP (superabsorbente). A continuación, se dispersaron en la capa de pañales para bebé y las compresas entre la superficie interior absorbente de agua y la capa exterior impermeable. Dicha mezcla se dispersó homogéneamente en la capa interior absorbente del tampón.
Con el fin de incrementar la absorbancia de la superficie en contacto con la piel y proporcionar propiedades antimicrobianas:
- para 1000 g de solución se mezclaron 0,3 g de triclosano en 70 g de Glucopon 215 CS UP© hasta la homogeneidad, - se añadieron 75 g de gluconato de clorhexidina al 20 % a la mezcla y la solución se homogeneizó con la ayuda de un homogeneizador,
- se añadieron 854,7 g de agua destilada a la solución obtenida y se mezclaron durante 1 a 1,5 horas,
- se llevó el valor del pH de la solución a 5-7 con ayuda de ácido cítrico o ácido acético.
- La solución preparada se transfirió a un depósito de retención y el material textil, sobre el que se aplicará, se sumergió en el mismo de manera que la solución cubriese por completo la superficie; se mantuvo en el mismo durante 5 a 10 minutos y después se secó por completo a una temperatura de entre 25 °C y 90 °C.
Se llevaron a cabo ensayos de actividad antimicrobiana de los pañales para bebé, tampones, compresas higiénicas y pañales para pacientes/adultos producidos, preparados en secciones de 4x4 cm y 1x1 cm, mediante los métodos mencionados posteriormente.
Ensayos antimicrobianos
Se llevaron a cabo simultáneamente mediante dos métodos diferentes, ensayos de actividad antimicrobiana de compresas higiénicas, tampones, pañales para bebé y pañales para pacientes/adultos, preparados tal como se ha indicado anteriormente, con borato de zinc, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico.
- En el primer método de ensayo, se inocularon aislados de las bacteriasEscherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa;las levadurasCandida albicansyCandida glabratay los hongosAspergillus niger, Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum, Penicillium vinaceumyPenicillium expansum,sobre placas Petri que contenían medio adecuado (NA, SDA y PDA, respectivamente). Las partes absorbentes de los productos higiénicos con adición de boro y con superficies hidrofílicas que contenían clorhexidina y triclosano, y preparadas en una sección de 1x1 cm, se depositaron sobre placas Petri inoculadas de manera que tocasen la superficie de medio. Las placas Petri inoculadas se incubaron durante 24 horas para las bacterias y durante 48 horas para las levaduras, a 36±1 °C y durante 72 horas para hogos a 25±1 °C. Se evaluaron las actividades antimicrobianas de los productos higiénicos mediante observación de la zona de inhibición (zona en la que no crecen los microorganismos) formada en torno a las muestras sobre las que se realizó la aplicación.
- En el segundo método, las superficies de compresa, tampón y pañal para bebé que contenía boro o que no contenía boro, con un tamaño de 4x4 cm, depositadas en placas Petri vacías se contaminaron con 100 ml de las soluciones (que contenían 108 UFC/ml de bacteria, 106 UFC/ml de levaduras y 104 esporas/ml de hongos) preparadas a partir de medios recién preparados en la solución de tampón. Los productos higiénicos contaminados se incubaron a 36±1 °C para bacterias y levaduras, y a 25±1 °C para hongos. Se determinó si había crecimiento microbiano sobre las superficies de los productos higiénicos sometidos a ensayo mediante realización de aislamiento regresivo a intervalos de 1, 3 y 6 horas.
Según los resultados de ensayos previos, se determinó que de entre las concentraciones que se utilizaron, 4 mg/cm2 de
borato de zinc, 4 mg/cm2 de borato sódico, 5,5 mg/cm2 de tetrahidrato de perborato sódico, 5,5 mg/cm2 de pentahidrato de bórax y 5,5 mg/cm2 de tetrahidrato de octaborato disódico proporcionan los resultados antimicrobianos (antifúngicos, anticandidiales y antibacterianos) más eficaces. A continuación, se continuaron los experimentos anteriormente resumidos, para solo las concentraciones más eficaces de compuestos de boro, en 3 repeticiones. Se resumen los resultados en la Tabla 2.
Se llevaron a cabo estudios experimentales con determinadas especies de hongos, levaduras y bacterias. Entre estos microorganismos, las bacterias eranEscherichia coli, Staphylococcus aureusyPseudomonas aeruginosa.
Las levaduras utilizadas en los estudios experimentales eranCandida albicansyCandida glabrata,y los hongos utilizados en los mismos eranFusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Aspergillus niger, Penicillium vinaceumyPenicillium expansum.
Ensayos antivíricos.
Ensayos de actividad antivírica del gluconato de clorhexidina.
Con el fin de producir la cepa de adenovirus humano de tipo 5 adenoide 75 y el poliovirus de tipo 1 cepa Chat, y para llevar a cabo el experimento, se utilizó una capa completa de células HEp-2 (ATCC n.° CCL-23), que son células tumorales en monocapa humanas. Para determinar el título de virus, se inoculó adenovirus humano de tipo 5 cepa adenoide 75 y poliovirus de tipo 1 cepa Chat mediante la realización de diluciones en serie en células HEp-2 y tomando como base, la dilución del virus que producía un efecto citopático visible en el microscopio invertido; el título de virus se calculó mediante la utilización del método de Spearman-Karber. Con el fin de determinar la concentración subcitotóxica del gluconato de clorhexidina, se diluyó 10 veces en serie gluconato de clorhexidina con medio esencial mínimo (MEM) de Eagle y se detectó la concentración no tóxica en el cultivo celular y se utilizaron las concentraciones no tóxicas en los ensayos antivíricos. Para los controles, como control negativo en lugar del virus se utilizaron células HEp-2 con inoculación de MEM, células HEp-2 en las que no se podía añadir gluconato de clorhexidina, control de titulación de virus de referencia diluido 10 veces, control de formaldehído y controles que contenían concentraciones tóxicas de gluconato de clorhexidina.
Preparación de medio de cultivo celular y los compuestos químicos.
Medio MEM: suero al 10 % (FBS) que contenía enzimas, hormonas y factores de crecimiento para que las células se adsorban a las superficies y proliferen, y se añadieron 40 Ul/ml de penicilina, estreptomicina 0,04 mg/ml, glutamina 0,5 mg/ml para prevenir la contaminación por hongos y bacterias, y bicarbonato sódico al 1 % como solución tampón. (FBS: inactivado y sin micoplasmas), (Bicarbonato sódico: solución al 7,5 % estéril).
Medio utilizado en la inoculación vírica:el medio incluía 1 % de antibiótico (penicilina, estreptomicina y anfotericina B) con el fin de prevenir la contaminación por hongos y bacterias, y bicarbonato sódico al 1 % como una solución tampón. No se añadió suero FBS a este medio.
Preparación de agua dura:
Solución A: se disolvieron en agua en cantidad igual, 19,84 g de cloruro de magnesio no acuoso (MgCh) o cloruro de magnesio hidratado y 46,24 g de cloruro cálcico no acuoso (CaCh) o cloruro de calcio hidratado en agua. Se diluyó hasta 1000 ml y se esterilizó en autoclave.
Solución B: se disolvieron 35,2 g de bicarbonato sódico (NaHCOs) en agua y se diluyeron a 1000 ml. Se filtró (el tamaño de malla debería ser de 0,22 pm).
Agua dura:
- Se añadieron 6,0 ml de solución A y 8,0 ml de solución B a 600 ml de agua.
- Se sometió a agitación y se diluyó a 1000 ml.
- El valor del pH del agua dura debería ser de 7,0±0,2.
- Se utilizaron 40 g/l de hidróxido sódico (NaOH) (1 mol/l) o ácido clorhídrico (HCl) (1 mol/l) para ajustar el valor del pH.
- Debe prepararse bajo condiciones estériles y utilizarse en 12 horas.
Preparación de medios limpios y contaminados.
Medio limpio: se disolvieron 0,3 g de fracción V de albúmina de suero bovino en 100 ml de agua estéril. La solución obtenida se esterilizó pasándola por un filtro con un tamaño de malla de 0,22 pm.
Medio contaminado: se utilizaron eritrocitos de oveja y BSA para el medio contaminado. Se disolvieron 3 g de BSA en 100 ml de agua estéril y se filtraron. Se añadieron 3 ml de eritrocitos de oveja a 97 ml de BSA.
Eritrocitos: se centrifugaron 8 ml de sangre de oveja recién extraída, a 800 G durante 10 minutos, y después se eliminó su sobrenadante; tras añadir 8 ml de tampón de sal fosfato (PBS), se llevó a cabo el pipeteado y se centrifugó nuevamente a 800 G durante 10 minutos. Este procedimiento se repitió tres veces.
Análisis.
En primer lugar, se diluyó gluconato de clorhexidina líquida con el medio de cultivo celular (MEM) y se estimó su concentración no tóxica en cultivo celular. Se mezclaron con 2 ml de agua dura 8 ml del gluconato de clorhexidina que se va a someter a ensayo. La solución obtenida se diluyó en serie (etapa de dilución 1:10) con MEM y se incubó en cepas en monocapa en placas de 96 pocillos. Se registraron los cambios microscópicos ocurridos. Se determinaron las concentraciones que mostraban un efecto citopático (ECP). Se compararon los valores de ECP del gluconato de clorhexidina y de formaldehído. Tras determinar la concentración no tóxica del gluconato de clorhexidina sobre las células, se estudió el efecto del gluconato de clorhexidina sobre la titulación de virus como resultado de periodos de aplicación de 1 a 60 minutos en medio limpio y medio contaminado. Para los controles, como control negativo en lugar del virus se utilizaron células HEp-2 con inoculación de MEM, células HEp-2 en las que no se podía añadir gluconato de clorhexidina, control de titulación de virus de referencia diluido 10 veces, control de formaldehído y controles que contenían concentraciones tóxicas de gluconato de clorhexidina.
Tomando como base las diluciones de virus en las que era visible un efecto citopático bajo microscopio invertido, se estimó el título de virus como el valor TCID50 mediante la utilización del método de Spearman-Karber.
Según la norma TS EN 14476 (marzo de 2007), los desinfectantes deberían reducir el título de virus en 4 o más logaritmos para sus actividades antivíricas.
Ensayos de actividad antivírica de solución de Glucopon.
El Glucopon al 8 %, que se utilizó para hacer que las superficies fuesen hidrofílicas, se sometió a ensayo con la cepa de virus del herpes simple humano de tipo 1 (VHS-1) cepa MacIntyre tal como se ha indicado anteriormente. Tomando como base las diluciones de virus inoculadas antes de realizar diluciones en serie de células Vero (ATCC n.° CCL-81) y en las que era visible un efecto citopático bajo microscopio invertido, se calculó el título de virus como el valor TCID50 mediante la utilización del método de Spearman-Karber.
Ensayos de actividad antivírica de mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano.
Tal como se ha mencionado anteriormente, se preparó una solución que contenía gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano para la aplicación en una superficie del modo siguiente: para 1000 g de solución, se mezclaron 0,3 g de triclosano en 70 g de Glucopon hasta la homogeneidad; a continuación, se añadieron 75 g de gluconato de clorhexidina al 20 % y la solución se homogeneizó con ayuda de un homogeneizador, y tras añadir 854,7 g de agua destilada, la solución se sometió a agitación durante 1 a 1,5 horas. Se ajustó el valor del pH de la solución llevándolo a 5-7 con ayuda de ácido cítrico o ácido acético. Tal como se ha mencionado anteriormente, los ensayos antivíricos analizaban la actividad antivírica contra adenovirus humano de tipo 5 cepa adenoide 75, poliovirus de tipo 1 cepa Chat y virus humano del herpes simple de tipo 1 (VHS-1) cepa MacIntyre.
Ensayos de actividad antivírica de superficies de tejido sobre las que se había aplicado la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano.
Se recortaron superficies de 2 cm x 2 cm de los diferentes puntos de las superficies textiles sobre las que se había aplicado la solución y se introdujeron en viales de 0,5 cm de diámetro. Se pasó 1 ml de solución vírica por las superficies de área especificada. A continuación, la solución vírica recogida en los viales se esterilizó pasándola por un filtro con un tamaño de malla de 0,22 pm. El procedimiento experimental vírico anteriormente mencionado se realizó contra 3 cepas víricas para esta solución.
Resultados experimentales.
Según el ensayo de actividad antimicrobiana llevado a cabo mediante el método modificado de difusión en disco, se determinó que los compuestos de boro presentan un efecto de prevención del crecimiento de todos los microorganismos sometidos a ensayo (bacterias, levaduras y hongos) (Tabla 1).
Se prepararon bajo condiciones in vitro productos higiénicos (compresas higiénicas, tampones, pañales para bebés y pañales para pacientes/adultos) de 1x1 cm que contenían o no contenían borato de zinc, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico. Se sometieron a ensayo actividades antimicrobianas de los productos preparados mediante la utilización de aislados de bacterias(Escherichia coli, Staphylococcus aureusyPseudomonas aeruginosa),levaduras(Candida albicansyCandida glabrata)y hongos(Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Aspergillus niger, Penicillium vinaceumyPenicillium expansum).Según los resultados obtenidos, se determinó que los productos higiénicos que contenían borato de zinc, borato sódico, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico presentaban actividad antimicrobiana sobre todos los microorganismos sometidos a ensayo, mientras que se observó que los productos higiénicos sin ningún aditivo no mostraban ninguna actividad antimicrobiana (Tabla 2).
Como consecuencia de los estudios experimentales, mientras que no se observó ningún crecimiento en las compresas higiénicas y tampones con adición de borato sódico, se detectó crecimiento y esporulación fúngicos en los productos higiénicos sin aditivos (figuras 1a y 1b, y figuras 3a y 3b).
Mientras que no se observó crecimiento fúngico en las compresas higiénicas y tampones con adición de borato de zinc, se detectó crecimiento y esporulación fúngicos en los productos higiénicos sin aditivos (figuras 2a y 2b).
Debido a que las suspensiones al 10 % y al 1 % del gluconato de clorhexidina sometido a ensayo mostraban un efecto citopático sobre las células en el cultivo celular, en el presente estudio se utilizó la proporción más baja de dicho gluconato de clorhexidina que no mostraba efecto citopático, es decir, 0,1 %. Como resultado de los cálculos realizados al final del ensayo, se determinó que el gluconato de clorhexidina causaba una reducción de como mínimo 4 logaritmos del título vírico contra el adenovirus humano de tipo 5, el poliovirus de tipo 1 y el virus del herpes simple (Tablas 3, 4 y 5) bajo todas las condiciones experimentales como consecuencia de la aplicación a temperatura ambiente (20 °C) en medio limpio y en medio contaminado y en periodos de aplicación de 1 minuto y 60 minutos.
En conclusión: estos resultados experimentales muestran que el gluconato de clorhexidina es 99,9 % activo contra el adenovirus humano de tipo 5, 99,9 % activo contra el poliovirus de tipo 1 y 99,9 % activo contra el virus del herpes simple, al utilizarlo directamente sin dilución a temperatura ambiente (20 °C) en los periodos de aplicación de 1 y 60 minutos.
Debido a que la solución de Glucopon al 8 % sometida a ensayo mostró un efecto citopático sobre las células en el cultivo celular, en el presente estudio se utilizó la proporción más baja de dicho Glucopon que no mostraba efecto citopático, es decir, 0,1 %. Como resultado de los cálculos realizados al final del ensayo, se determinó que el Glucopon no causaba ninguna reducción del título de virus contra el virus del herpes simple (Tabla 6) bajo las condiciones experimentales como consecuencia de la aplicación a temperatura ambiente (20 °C) en medio limpio y en medio contaminado y en los periodos de aplicación de 1 minuto y 60 minutos.
Se determinó como resultado de los ensayos de actividad antivírica que la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano causaba una reducción de por lo menos 4 logaritmos del título de virus bajo todas las condiciones experimentales (Tablas 7, 8 y 9) como resultado de la aplicación en medio limpio y medio contaminado y en los periodos de aplicación de 1 y 60 minutos.
Se determinó como resultado de los ensayos de actividad antivírica que las superficies textiles sobre las que se había aplicado la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano causaba una reducción del título de virus de por lo menos 4 logaritmos bajo todas las condiciones experimentales (Tablas 10, 11 y 12) como resultado de la aplicación en medio limpio y medio contaminado y en los periodos de aplicación de 0 y 60 minutos.
De acuerdo con las normas TS EN 14476 (marzo de 2007) del Instituto de normas turcas (TSE, por sus siglas en inglés), se acepta que, al utilizarlo con cualquiera de los métodos de lavado, frotado, impregnación (humectación/sumersión), este producto cuya actividad virucida contra el adenovirus humano de tipo 5, que es una muestra de virus ADN modelo, se ha investigado, muestra la misma actividad virucida contra otros virus ADN con cubierta o sin cubierta que no puede someterse a ensayo de manera práctica en laboratorio, tal como el VHB, excepto si se utiliza por lo menos la solubilidad y periodos anteriormente mencionados, y que este producto, cuya actividad virucida contra el poliovirus de tipo 1, que es una muestra de virus ARN modelo, se ha investigado, muestra la misma actividad virucida contra otros virus ARN con cubierta o sin cubierta (p. ej., virus ébola, Mers, Sars, etc.) que no puede someterse a ensayo de manera práctica en laboratorio, tal como el VHC y el VIH, excepto en el caso de que se utilice por lo menos la solubilidad y periodos anteriormente mencionados.
Se llevaron a cabo ensayos de irritación de acuerdo con el método OECD/OCDE 404 para los productos antimicrobianos preparados, con el fin de averiguar si causaba alguna irritación en la piel. Según los resultados de ensayo, se observó que no ocurría ninguna irritación en un periodo de 14 días.
Tabla 1. Actividad antimicrobiana del borato de zinc (ZB), borato sódico (BS), tetrahidrato de perborato sódico (TPS), pentahidrato de bórax (PB) y tetrahidrato de octaborato disódico (TOD) sobre los microorganismos analizados.
(continuación)
Tabla 2. Resultados de ensayo de actividad antimicrobiana de productos higiénicos que contienen borato sódico, borato de zinc, tetrahidrato de perborato sódico, pentahidrato de bórax y tetrahidrato de octaborato disódico.
Tabla 3. Actividad antivírica del gluconato de clorhexidina en cultivo celular de HEp-2 contra adenovirus de tipo 5 humano cepa adenoide 75.
Tabla 4. Actividad antivírica de gluconato de clorhexidina en el cultivo celular de HEp-2 contra el poliovirus de tipo 1 cepa Chat.
Tabla 5. Actividad antivírica del gluconato de clorhexidina en cultivo celular Vero contra el virus humano del herpes simple de tipo 1 (VHS-1) cepa MacIntyre.
Tabla 6. Actividad antivírica del Glucopon en cultivo celular Vero contra el virus humano del herpes simple de tipo 1
(VHS-1) cepa MacIntyre.
Tabla 7. Actividad antivírica de la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular HEp-2 contra el poliovirus de tipo 1 cepa Chat.
abla 8. Actividad antivírica de la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular HEp-2 contra el adenovirus humano de tipo 5 cepa adenoide 75.
Tabla 9. Actividad antivírica de la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular Vero contra el virus humano del herpes simple de tipo 1 (VHS-1) cepa MacIntyre.
Tabla 10. Actividad antivírica de las superficies de tejido sobre las que se ha aplicado la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular HEp-2 contra el poliovirus de tipo 1 cepa Chat.
Tabla 11. Actividad antivírica de las superficies de tejido sobre las que se ha aplicado la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular HEp-2 contra el adenovirus humano de tipo 5 cepa adenoide
75.
Tabla 12. Actividad antivírica de las superficies de tejido sobre las que se ha aplicado la mezcla de gluconato de clorhexidina, Glucopon y triclosano en cultivo celular Vero contra el virus humano del herpes simple de tipo 1 (VHS-1) cepa MacIntyre.
La presente invención no se encuentra limitada a las compresas higiénicas, tampones, pañales para bebé, pañales para pacientes/adultos anteriormente mencionados, sino que puede aplicarse a todos los productos textiles y en todos los campos en los que se utilicen productos higiénicos similares.
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Claims (10)
- REIVINDICACIONESi.Productos higiénicos antimicrobianos y antivíricos que contienen compuestos de boro, gluconato de clorhexidina y triclosano a los que se proporcionan propiedades antimicrobianas mediante la utilización de compuestos de boro, en los que los compuestos de boro que se utilizan comprenden mezclas de borato sódico ((Na2O)(B2O3)5-10H2O), borato de zinc (2ZnO-3B2O3-3,5H2O), tetrahidrato de perborato sódico (NaBO3-4H2O), pentahidrato de bórax (Na2B4O7-5H2O) y tetrahidrato de octaborato disódico (Na2BsOi3-4H2O) y con propiedades antivíricas, mediante la utilización de Glucopon, gluconato de clorhexidina y triclosano.
- 2. Productos higiénicos según la reivindicación 1, que se obtienen mediante la utilización de compuestos de boro a concentraciones de entre 0,05 y 50 mg/cm2.
- 3. Productos higiénicos según la reivindicación 2, caracterizados porque se aplica Glucopon en la superficie al 3-10 %.
- 4. Productos higiénicos según la reivindicación 3, caracterizados porque se aplica gluconato de clorhexidina en la superficie al 0,1-5 %.
- 5. Productos higiénicos según la reivindicación 4, caracterizados porque se aplica triclosano en la superficie al 0,01-0,1 %.
- 6. Productos higiénicos según la reivindicación 5, que presentan actividad antibacteriana contra las bacteriasEscherichia coli, Staphylococcus aureusyPseudomonas aeruginosa.
- 7. Productos higiénicos según la reivindicación 6, que presentan actividad anticandidial contra las levadurasCandida albicansyCandida glabrata.
- 8. Productos higiénicos según la reivindicación 7, que presentan actividad sobre los hongosFusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Aspergillus niger, Penicillium vinaceumyPenicillium expansum.
- 9. Productos higiénicos según la reivindicación 8, que presentan actividad antivírica contra virus ADN y ARN con cubierta y sin cubierta.
- 10. Productos higiénicos según cualesquiera de las reivindicaciones anteriores, que pueden aplicarse sobre compresas higiénicas, tampones, pañales para bebé y pañales para pacientes/adultos.
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