JP2017534259A - 抗met抗体および組成物 - Google Patents
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Abstract
Description
本出願は、2014年9月16日に出願された米国仮特許出願第62/051,190に基づく優先権の利益を主張し、その内容全体は、引用により本明細書中に包含される。
本出願は、ASCII形式で電子的に提出され、その内容全体が引用により本明細書中に包含される配列表を含む。2015年9月15日に作成されたASCIIコピーの名称は、110285-0051-WO1_SL.txtであり、そのサイズは78,490バイトである。
本発明は、抗MET抗体および抗体組成物ならびにMETと関連する疾患および病状の処置におけるそれらの使用法に関する。
MET(c−METとしても知られる)は、50kDaのα−サブユニットおよび145kDaのβ−サブユニットを含む受容体チロシンキナーゼである。METに対する既知のリガンドは、細胞分散因子としても公知の肝細胞増殖因子(HGF)のみである。METへのHGFの結合は、受容体二量体化ならびにβ−サブユニット残基Y1349およびY1356の自己リン酸化をもたらし、ホスホイノシトール 3−キナーゼ(PI3K)−タンパク質キナーゼB(Akt)経路、シグナル伝達兼転写活性化因子因子(STAT)経路、マイトージェン−活性化プロテインキナーゼ(MAPK)経路、および活性化B細胞の核因子カッパ−軽鎖エンハンサー(NFκB)経路を含む、下流シグナル伝達経路を活性化させる。これは、最終的に、有糸分裂促進、細胞増殖、細胞生存、および細胞運動性の増加をもたらす。HGFの過剰発現、遺伝子増幅、突然変異、または選択的スプライシング、あるいはHGFリガンド誘導性オートクリン/パラクリンループシグナル伝達を介して、METまたはHGF活性の調節不全が起こり得る。このような調節不全は、癌浸潤性、血管形成、転移および腫瘍増殖を促進することによって多くの癌において役割を果たし、より悪性の癌表現型および予後不良をもたらす。
本発明は、新規のMETを標的とする組換え抗体、ならびに2以上のこれらの抗体を含む組成物、および非小細胞肺癌、胃癌、肝細胞癌、食道癌、結腸直腸癌、乳頭状腎細胞癌、腎芽細胞腫、副腎皮質癌、腎細胞癌、前立腺癌、およびMETを発現もしくは過剰発現するか、またはMET経路活性化に依存する他の癌種を含む癌を治療するための抗体および組成物の使用を対象とする。抗体治療を含む、このような癌に対する現在利用可能な治療と比較して、本発明の抗体は、単独で、または2以上のかかる抗体を含む組成物のいずれかで優れた臨床応答を提供すると考えられる。
・マウスまたはニワトリのMETに結合しない;
・SEMAドメイン上に存在する残基を含むヒトMETのエピトープに結合する;
・METの分解を誘発する;
・1×10−9M以下のKDでヒトMETに結合する;
・SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
・METリン酸化を阻害する;
・MET下流シグナル伝達を阻害する;
・HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および、
・インビボでの腫瘍増殖を阻害する。
・METの分解を誘発する;
・SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
・METリン酸化を阻害する;
・MET下流シグナル伝達を阻害する;
・HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および、
・インビボでの腫瘍増殖を阻害する。
・マウスまたはニワトリのMETに結合しない;
・SEMAドメイン上に存在する残基を含むヒトMETのエピトープに結合する;
・METの分解を誘発する;
・1×10−9M以下のKDでヒトMETに結合する;
・SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
・METリン酸化を阻害する;
・MET下流シグナル伝達を阻害する;
・HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および、
・インビボでの腫瘍増殖を阻害する。
定義および一般的技術
本明細書において他に定義しない限り、本発明に関連して用いられる科学用語および技術用語は、当業者によって一般的に理解される意味を有するものとする。本明細書に記載のものと類似または同等の方法および材料を本発明の実施または試験においても使用することができるが、例示的な方法および材料は、以下に記載される。本明細書で言及するすべての刊行物および他の文献は、その全体を引用により本明細書中に包含させる。矛盾する場合、定義を含む本明細書が優先されるものとする。多数の文献が、本明細書に引用されているが、この引用は、これらの文献のいずれかが当該技術分野における共通の一般知識の一部を形成するという承認を構成するものではない。
特記しない限り、本明細書で用いる、「MET」は、ヒトMET(ヒトc−METとしても知られる)を意味する。ヒトMETポリペプチド配列は、NCBI受託番号NM_000245.2により入手可能であり、配列番号:1として示されている。ヒトMETは、19個のアミノ酸がIPTドメイン3(755−755:S→STWWKEPLNIVSFLFCFAS(配列番号:2))に挿入されている異なるアイソフォーム(アイソフォーム2;配列番号:2)にも存在する。
本発明は、ヒトMETに対する抗体、または該抗体の抗原結合部分に関する。本発明は、キメラおよびヒト化形態の両方の新規の抗MET抗体9006および9338を提供する。図26−30は、これらの抗体の、全長(HCおよびLC)および可変ドメイン(VHおよびVL)重鎖および軽鎖ヌクレオチドならびにアミノ酸配列を示す。以下の表1は、これらの配列の配列番号を提供する。以下の表2は、抗体9006および9338の重鎖および軽鎖CDRアミノ酸配列(キメラ形態とヒト化形態とで同じ)の配列番号を提供する。CDR配列は、IMGT(登録商標)定義にしたがって割り当てられた。
−ヒトMETへの結合について、それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−重配列番号:6のアミノ酸配列を含む鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分を提供する。
−配列番号:23のH−CDR3配列および配列番号:26のL−CDR3配列;または
−配列番号:29のH−CDR3配列および配列番号:32のL−CDR3配列
を含む。
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3;または
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3
を含む。
−それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含む、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3;または
−それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含む、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3
を含む。
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3ならびにそれぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含む、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3;または
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3ならびにそれぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含む、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3
を含む。
−配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン;または
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン
を含む。
−マウスまたはニワトリのMETに結合しない;
−SEMAドメイン上に存在する残基を含むヒトMETのエピトープに結合する;
−METの分解を誘導する;
−1×10−9M以下のKDでヒトMETに結合する;
−SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
−METリン酸化を阻害する;
−MET下流シグナル伝達を阻害する;
−HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および
−インビボでの腫瘍増殖を阻害する
または、該機能的特性の任意の組み合わせ。ある態様において、1またはそれ以上の本発明の抗体または抗原結合部分(および、特に、本発明の抗MET抗体組成物)のMETへの結合は、受容体を発現する細胞(すなわち、腫瘍細胞)の成長および増殖を阻害し得る。
一面において、本発明は、少なくとも2つの本発明の抗体またはその抗原結合部分を含む抗体組成物を提供する。用語“抗MET抗体組成物”は、少なくとも2つの抗MET抗体またはその抗原結合部分を含む組成物を意味する。
−それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−重配列番号:6のアミノ酸配列を含む鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3および配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3ならびにそれぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:6または14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:8または16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよびの配列番号:8アミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:6のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:14のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:34のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
そして、第二の抗MET抗体は、以下からなる群より選択される:
−ヒトMETへの結合について、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、H−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−ヒトMETへの結合について、配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3および配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3およびそれぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:10または18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインを有する抗MET抗体またはその抗原結合部分、;
−配列番号:12または20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:10のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:18のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;
−配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分。
上記の第一および第二の抗MET抗体の何れかの組み合わせが意図される。
−ヒトMETへの結合について、それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−ヒトMETへの結合について、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2、H−CDR3、L−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する抗体と同じヒトMETのエピトープン結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−ヒトMETへの結合について、配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−ヒトMETへの結合について、配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−ヒトMETへの結合について、配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−ヒトMETへの結合について、配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−ヒトMETへの結合について、配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−ヒトMETへの結合について、配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と同じヒトMETのエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3および配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3および配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3およびそれぞれ配列番号:24、25および26を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3およびそれぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
−配列番号:6のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:10のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
第一および第二の抗体の上記の同一性パーセントの任意の組合せが意図される。
−配列番号:14のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:18のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
第一および第二の抗体の上記の同一性パーセントの任意の組合せが意図される。
−配列番号:34のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列と少なくとも91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%または99%同一のアミノ酸配列を有する軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
を含む。
第一および第二の抗体の上記の同一性パーセントの任意の組合せが意図される。
さらなる面において、本明細書に記載の何れか2つの個々の抗体の結合特異性は、1つの二重特異性結合分子に組み込まれ得る。例えば、二重特異性結合分子は、抗MET抗体9006および9338の結合特異性を有し得る。ある態様において、二重特異性結合分子は、
−それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3およびそれぞれ配列番号:24、25および26を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1、H−CDR2およびH−CDR3およびそれぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1、L−CDR2およびL−CDR3を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
の結合特異性を有し得る。
−配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
の結合特異性を有し得る。
−配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメインおよび配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメインを有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
の結合特異性を有し得る。
−配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分;および
−配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖および配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する、抗MET抗体またはその抗原結合部分
の結合特異性を有し得る。
本発明はまた、本明細書に記載の抗MET抗体またはその抗原結合部分をコードする核酸分子を提供する。ある態様において、異なる核酸分子は、抗MET抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖アミノ酸配列をコードする。他の態様において、同じ核酸分子は、抗MET抗体またはその抗原結合部分の重鎖および軽鎖アミノ酸配列をコードする。
任意の態様において、本発明は、(a)非ヒトトランスジェニック動物をMET、METの一部またはMETを発現する細胞もしくは組織で免疫化し;(b)該トランスジェニック動物にMETに対する免疫応答をマウントするのを可能にし;(c)該トランスジェニック動物から抗体産生細胞を単離し;(d)抗体産生細胞を不死化し;(e)不死化した抗体産生細胞の個々のモノクローナル集団を生成し;そして、(f)不死化した抗体産生細胞をスクリーニングして、METに対する抗体を同定すること、を含む、METに対するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合部分を産生する細胞株を作製するための方法を提供する。
本発明は、ヒト抗体のライブラリーをファージ上に合成する工程、該ライブラリーをMETまたはその抗体結合部分でスクリーニングする工程、METに結合するファージを単離する工程、およびファージから抗体を得る工程を含む、抗MET抗体またはその抗原結合部分を産生する方法を提供する。一例として、ファージディスプレイ技術に使用するための抗体のライブラリーを調製するための一方法は、非ヒト動物をMETまたはその抗原部分で免疫化して免疫応答を作成する工程、免疫化した動物から抗体産生細胞を抽出する工程;抽出した細胞から本発明の抗体の重鎖および軽鎖をコードするRNAを単離する工程、RNAを逆転写してcDNAを作成する工程、プライマーを用いてcDNAを増幅する工程、および抗体がファージ上で発現されるようにファージディスプレイベクターへcDNAを導入する工程を含む。本発明の組換え抗MET抗体は、このようにして得ることができる。
本発明のさらなる面は、本発明の抗体組成物ならびに抗体およびその抗原結合部分の製造法に関する。本発明のこの面の一態様は、抗体を発現し得る組換え宿主細胞を提供し、抗体の発現に適した条件下で該宿主細胞を培養し、そして得られた抗体を単離することを含む、本明細書で定義される抗体を産生するための方法に関する。そのような組換え宿主細胞におけるそのような発現によって産生される抗体は、本明細書中、“組換え抗体”と称される。本発明はまた、そのような宿主細胞の子孫細胞、およびそれにより産生される抗体を提供する。
−第一の宿主細胞が、本発明の第一の抗MET抗体を発現可能であり、第二の宿主細胞が、本発明の第二の抗MET抗体を発現可能である、少なくとも第一および第二の宿主細胞を提供し;
−抗MET抗体の発現に適する条件下で第一および第二の宿主細胞を培養し;そして
−得られた抗体を単離すること
を含む。
本発明の抗MET抗体およびその抗原結合部分はまた、目的の免疫グロブリン重鎖および軽鎖配列についてトランスジェニックである哺乳動物または植物の作製、およびそれから回収可能な形態での抗体の産生を介してトランスジェニック的に製造することができる。哺乳動物におけるトランスジェニック生産に関連し、抗MET抗体および部分は、ヤギ、ウシ、または他の哺乳動物の乳汁中に産生され、乳汁から回収することができる。例えば、米国特許第5,827,690号、同第5,756,687号、同第5,750,172号、および同第5,741,957号を参照のこと。ある態様において、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を含む非ヒトトランスジェニック動物は、上記の通り、ヒトMETまたはその免疫原性部分で免疫化される。植物において抗体を作製する方法は、例えば、米国特許第6,046,037号および同第5,959,177号に記載されている。
本発明の別の面は、本発明の抗MET抗体またはその抗原結合部分または抗MET抗体組成物を有効成分として(または、唯一の有効成分として)含む医薬組成物である。かかる医薬組成物は、任意の本明細書に記載の抗MET抗体組成物または抗体またはその抗原結合部分を含み得る。ある態様において、組成物は、MET介在性障害(例えば、METの過剰発現により特徴付けられる障害)および/または癌の改善、予防および/または処置を目的とする。任意の態様において、組成物は、非小細胞肺癌、胃癌、肝細胞癌、食道癌、結腸直腸癌、乳頭状腎細胞癌、神経膠芽腫、腎細胞癌、前立腺癌、および/または副腎皮質癌の改善、予防、および/または処置を目的とする。
本発明の抗体組成物および抗体およびその抗原結合部分の治療的使用のための別のオプションは、免疫複合体の形態であり、すなわち、抗体またはその抗原結合部分と、抗がん剤などの1つまたは複数の薬剤音の複合体である。2以上の抗MET抗体を含む本発明の組成物は、免疫複合体の形態で単一の抗体を含んでもよく、またはそれらは、免疫複合体の形態で2以上の抗体を含んでいてよい。
一面において、本発明の抗MET抗体およびその抗原結合部分および抗MET組成物は、MET介在性障害の処置に使用される。ある態様において、MET介在性障害とは、METの過剰発現により特徴付けられる状態である。任意の態様において、医薬組成物は、癌、例えば、非小細胞肺癌、胃癌、肝細胞癌、食道癌、結腸直腸癌、乳頭状腎細胞癌、グリア芽腫、副腎皮質癌、腎細胞癌、前立腺癌、およびMETを発現するかもしくは過剰発現するかまたはMET経路活性化に依存する他の癌の処置に使用するためのものである。
−処置を必要とする患者への、本発明の抗体組成物/抗体/抗原結合部分および治療剤(複数可)のこのような組み合わせの同時投与であって、かかる成分が単一剤形に共に製剤されるとき、該患者に実質的に同時に該成分が放出される、
−処置を必要とする患者への、本発明の抗体組成物/抗体/抗原結合部分および治療剤(複数可)のこのような組み合わせの実質的同時投与であって、かかる成分が互いに別個の剤形に分離して製剤されるとき、該患者に実質的に同時に投与されることにより、該患者に実質的に同時に該成分が放出される、
−処置を必要とする患者への、本発明の抗体組成物/抗体/抗原結合部分および治療剤(複数可)のこのような組み合わせの連続投与であって、かかる成分が互いに別個の剤形に分離して製剤されるとき、各投与間に有意な時間間隔で該患者に連続で投与されることにより、該患者に実質的に異なる時間に該成分が放出される;および、
−処置を必要とする患者への、本発明の抗体組成物/抗体/抗原結合部分および治療剤(複数可)のこのような組み合わせの連続投与であって、かかる成分が単一剤形に共に製剤されるとき、該成分が制御された様式で放出されることにより、それらが該患者に同時に、連続して、ならびに/または同時におよび/または異なる時間に重複して放出されて、各部分が同一または異なる経路のいずれかによって投与され得る。
ある態様において、化合物は、レチノイン酸、フェニル酪酸、オールトランスレチノイン酸および活性型ビタミンDからなる群より選択される。
本発明の抗体組成物は、問題の病状の処置に有効な量で、すなわち所望の結果を達成するのに必要な投与量および期間で投与され得る。治療的有効量は、処置される特定の病状、患者の年齢、性別および体重などの因子、ならびに抗体が単独処置として投与されるか、または1もしくはそれ以上の付加的な抗癌処置剤と組み合わせて投与されるかによって異なり得る。
本発明の抗体はまた、診断的方法において有用である(例えば、インビトロ、エキソビボ)。例えば、抗体は、患者からのサンプル(例えば、組織サンプル、または炎症性滲出液、血液、血清、腸液、唾液、もしくは尿のような体液サンプル)中のMETのレベルを検出および/または測定するために使用可能である。好適な検出および測定方法としては、フローサイトメトリー、酵素免疫吸着測定法(ELISA)、化学発光分析法、放射免疫測定法、および免疫組織学のような免疫学的方法が挙げられる。本発明はさらに、本明細書に記載の抗体を含む複数部分のキット(例えば、診断用キット)を包含する。
実施例1:抗MET抗体のクローニング
抗MET抗体は、WO2005/042774に記載の通り、本質的にSymplex(商標) を用いて得た。簡潔には、BALB/c、C57およびC3Hマウスを、METを過剰発現するヒト癌細胞株(HCT−116)、組換えヒトMETタンパク質(Sino Biologicals)、リガンド(HGF)と予めインキュベートした組換えヒトMETタンパク質、またはトリプシン消化したMETを用いて隔週で免疫化した。脾臓および鼠径リンパ節から得られたマウス血漿細胞をFACSで選別し、VHおよびVLをコードする配列の連鎖は、選別された血漿細胞上で遂行され、一段階の多重オーバーラップ・エクステンションRT−PCR、その後のネステッドPCRに基づく二段階PCR手順を利用して、配列の同族の対合を促進させた。同族のVHおよびVL配列の連鎖のための原理は、WO2005/042774およびMeijer et al., J Mol Biol 358(3):764-72 (2006)に詳細に記載されている。
本実施例は、リード候補を同定するための、METを標的とするキメラモノクローナル抗体およびこれらのモノクローナル抗体の混合物のインビトロでの試験を記載する。モノクローナル抗体および混合物は、癌細胞株EBC1、MKN45、OE33およびSNU5の増殖を阻害する能力について評価した。
ヒトのMETを標的とするマウス由来の抗体を、ヒト癌細胞株のインビトロでの増殖を阻害するそれらの能力についてアッセイした。モノクローナル抗体および2−抗体混合物(2つのモノクローナル抗体の1:1混合物)を、2%FBSおよび1%P/Sを添加したRPMI1640グルタマックス培地中、100μg/mlの最終総抗体濃度に希釈して、5μg/mlの終濃度を得た。その後、適切な数の細胞(EBC1:1500細胞/ウェル、MKN45:2000細胞/ウェル、OE33 4300細胞/ウェルおよびSNU5:800細胞/ウェル)を、384ウェルプレート中の試験プレートに添加し、抗体と共に、加湿インキュベーター中で37℃にて4日インキュベートした。その後、WST−1試薬をプレートに添加し、37℃で1時間インキュベートした。吸光度を、ELISAリーダーを用いて、450nmおよび620nm(基準波長)で測定した。620nMでの吸光度を450nMでの吸光度から差し引いた。代謝活性細胞(MAC)の量を、以下のように未処理対照の割合として計算した:
代謝活性は生存細胞の数と相関し、より低い%MACは抗体によるより高いレベルの細胞増殖阻害に対応することを意味すると考えられる。
抗体混合物は、癌細胞株のパネル間の細胞増殖を阻害するそれらの能力に基づいてランク付けした。細胞株EBC1、MKN45、OE33およびSNU5の代謝活性に対するモノクローナル抗体および2つの抗体の混合物の生存率の結果を、表3に示す。7つの異なる混合物が、平均50%未満に代謝活性を阻害する。
本実施例は、9006および9338抗体のマウス抗体フレームワーク領域のヒト化について記載する。抗体のヒト化は、親の非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに適用したとき、最小限の免疫原性を有する分子を作製するために実施される。
9006および9338抗体のヒト化を、“CDR移植”アプローチを用いて行った。まず初めに、元のマウス生殖細胞系遺伝子を、マウス生殖細胞系VおよびJ遺伝子データベースに対して9006(図26)および9338(図27)のV遺伝子配列をブラスト検索することによって同定した。これは、最も近いマウス生殖細胞系遺伝子は、9006のアミノ酸配列の可変重鎖および可変軽鎖遺伝子についてIGHV9−1*02/IGHJ4*01およびIGKV8−28*01/IGKJ2*01であることを示唆した。同様に、最も近いマウス生殖細胞系遺伝子は、9338のアミノ酸配列の可変重鎖および可変軽鎖遺伝子についてIGHV1−4*01/IGHJ3*01およびIGKV4−79*01/IGKJ4*01であった。第二に、抗体VHおよびVL遺伝子を、抗体の機能および/または構造において役割を果たし得るフレームワーク領域内の体細胞突然変異を同定するために、マウス生殖細胞系に対してアラインさせた。このような残基は、所謂“復帰突然変異”残基として最終ヒト化抗体遺伝子に含まれ得る。その後、9006および9338の可変抗体配列をヒト免疫グロブリンデータベースに対してブラスト検索して、そのフレームワーク領域が抗体のヒト化のために使用され得る最も近いヒト生殖細胞系を同定した。抗体9006について、保持されたヒト生殖細胞系は、可変重鎖および可変軽鎖遺伝子のそれぞれについてIGHV7−4−1*02/IGHJ6*01およびIGKV4−1*01/IGKJ2*01であった。抗体9338について、保持されたヒト生殖細胞系は、可変重鎖および可変軽鎖遺伝子のそれぞれについてIGHV1−69*08/IGHJ1*01およびIGKV3−11*01/IGKJ2*01であった。最後に、各抗体について、キメラ抗体由来のCDR領域を、選択したヒトフレームワークおよびJ遺伝子セグメント中に移植した。CDR配列をIMGT(登録商標)に従って定義づけた。
最終的なヒト化9006および9338抗体配列を、それぞれ図28および図29に示す。
本実施例は、アミノ酸配列の供給源および抗MET対照抗体の類縁体の作製に使用される最終的な抗体フォーマットを示す。列挙された抗体のいくつかは、広範囲に特徴付けられ、明確に定義されたエピトープを有している。数多くの抗体が臨床評価に入っている。
表4の抗体類縁体の可変重鎖および軽鎖ドメインをコードするアミノ酸配列を、列挙された特許または特許出願から得た。タンパク質配列は、ヒトのコドン対比表を用いてDNA配列に逆変換した。対応するDNA配列を遺伝子合成し、完全長抗体の発現をもたらす、一定のヒト重鎖または軽鎖ドメインを含有する発現ベクターにクローニングした。唯一の例外は、Fab断片として発現させた5D5抗体である。発現のために選択したヒト抗体アイソタイプは、適用可能なFc領域に導入された追加の突然変異と共に抗体フォーマットカラムに表示される。CHO細胞を、標準的なハイブリドーマ培養技術を用いて増殖させた、ハイブリドーマクローンHB−12093を除いて、標準的なタンパク質発現システムを使用して、対応する発現プラスミドでトランスフェクトした。対応する抗体上清を、標準的なプロテインA精製カラムクロマトグラフィーを用いて精製した。
本実施例は、MET抗体がペアごとの競合パターンに基づくエピトープビン(bin)にグループ分けを示す。異なるエピトープビンに属する抗体はMET細胞外ドメイン(ECD)上の異なるエピトープを認識する。
ペアごとの抗体競合の調査を、Octet QK384機器(Fortebio, USA)を用いてバイオレイヤー干渉法(BioLayer Interferometry: BLI)分析によって行った。市販のヒトMET Fc融合タンパク質(R&D Systems)を、抗ヒトFcセンサーチップ(Fortebio, USA)およびハーセプチン陰性対照抗体でブロックした残余の抗Fc部位上に捕捉した。抗原コーティングされた表面を、80μg/mlの抗MET抗体濃度で飽和させ、その後、競合結合試験でペアごとの抗MET抗体の組み合わせを評価した。センサー表面を10mMグリシン−HCl(pH1.5)と共にインキュベーションして再生し、新たな競合サイクルに再利用した。
13個の試験したMET抗体の競合パターンを図1に示す。MET抗体は、12の異なるエピトープビンのグループに分かれることが見いだされた。抗体Hu9006は、C8−H241と重複する異なるエピトープに結合することが見いだされた。しかしながら、C8−H241も、Hu9338および36C4によって阻止されたが、Hu9006は阻止されなかったため、エピトープはC8−H241とは異なっていた。その結果、Hu9006およびC8−H241は、異なるエピトープビンに割り当てられた。Hu9338のエピトープは、36C4と重複し、両抗体は、試験したパネル内の他の抗体と同一の競合パターンを示し、これらは結果的に同じエピトープビンに割り当てられた。
本実施例は、抗MET抗体のパネルが、バイオレイヤー干渉法分析を用いて競合アッセイを行うことにより、HGFリガンド遮断活性について分析された方法を示す。
HGFリガンド遮断活性の検討を、Octet QK384機器(Fortebio, USA)を用いて、バイオレイヤー干渉法(BioLayer Interferometry: BLI)分析によって行った。市販のヒトMET Fc融合タンパク質(R&D Systems)を、抗ヒトFcセンサーチップ(Fortebio, USA)およびハーセプチン陰性対照抗体でブロックした残余の抗Fc部位上に捕捉した。次に、抗原コーティングされた表面を、80μg/ml(533nM)の抗MET抗体濃度(5D5Fab断片は、26.7μg/ml(533nM)に希釈された)で飽和させた。その後、抗体でMETを飽和した後、HGFリガンド遮断活性を、20μg/ml(222nM)で試験したヒトHGFリガンド(R&D Systems)と共にインキュベートすることにより評価した。ハーセプチンIgG1を陰性対照抗体として使用した。
競合分析の結果を以下の表5に示す。抗体Hu9006およびHu9338は両方とも、HGFリガンド結合を約80%阻害することが見いだされたが、5D5 Fabは、HGF結合を完全に(100%)阻害することが見いだされた。等モル濃度のHu9006およびHu9338を混合したとき(80μg/mlの総濃度、533nM)、HGFリガンド結合は、約90%阻害された。この結果、より効率的なHGFリガンド遮断活性は、抗体Hu9006とHu9338を1:1で混合することにより得られた。抗体C8−H241および36C4は、HGFリガンド結合をそれぞれ約80%および75%阻害することが見いだされたが、抗体13−METおよび28−METは、HGF結合をそれぞれ約80%および50%阻害した。アゴニスト作用を示す抗体5882および陰性対照抗体ハーセプチンは、HGF結合を阻害しなかった(3−7%のHGF結合阻害)。
本実施例は、本発明のMET抗体の結合エピトープが、細胞上に発現されたキメラMET構築物への結合を分析することにより、SEMA−αドメイン中のブレード(blade)2または3にマッピングされた方法を示す。本実施例はまた、本発明の抗体のエピトープが、試験した対照抗体類縁体と如何に異なるかを示す。
ヒトMET受容体は、907アミノ酸(残基25−932)の細胞外ドメインからなる。該細胞外ドメインは、以下のアミノ酸配列によって定義された、SEMAドメイン(残基27−515)、システインに富むプレキシンセマフォリンインテグリンドメイン(PSIドメイン、残基520−561)および4つの免疫グロブリン様ドメインに細分され得る。IPT1:AA563−655。IPT2:AA657−739。IPT3:AA742−836。IPT4:AA837−932。ドメインの定義は、Gherardi et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 100(21):12039-44 (2003) および Uniprot entry P08581に記載されている。SEMAドメインは、7枚の羽根のプロペラ構造に折り畳まれた7つのβシート(ブレード)からなる(Stamos J. et al., EMBO J. 23:2325-2335. (2004))。フリン切断部位は、αおよびβ鎖にSEMAドメインを分割する、位置307−308に存在する。SEMA−αドメインは、ブレード1−4から構成されるアミノ酸残基27−307によりコード化され、SEMA−βドメインは、ブレード5−7から構成されるアミノ酸残基308−515によりコード化される。SEMA−αドメインは、HGFリガンドのβ鎖のための結合部位を含むが、HGF α鎖のMET結合部位は、含まないままである(Merchant et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 110(32):E2987-96 (2013))。僅かに1個のレポートが、MET ECDのIPT3およびIPT4ドメインもまた、高親和性HGF結合を仲介することを報告している(Basilico et al., J Biol Chem. 283(30):21267-21277 (2008))。
野生型およびキメラのヒト、ニワトリまたはマウスMET ECDコンストラクトの表面発現レベルを、SV5染色で評価した。すべての評価した構築物は十分に発現され、ニワトリSEMA−βサブドメインを含む構築物を除いて、SV5抗体で染色することができた。構築物に結合する各MET抗体の力価を評価した(データは示していない)。異なる試験をしたキメラ構築物に結合する抗体のまとめを図2に示す。SEMA−αサブドメイン中の15AAセグメントが順次マウスに交換されている、ヒトMET ECD構築物に対する抗体結合の差のまとめを表6に示し、SEMA−αサブドメイン中の表面に露出した残基がマウス配列に変異されたヒトMET ECD構築物に対する抗体結合の差のまとめを表7に示す。最後に、すべてのエピトープ所見のまとめを表8に示す。
本実施例は、抗MET抗体9006および9338のヒト化変異体が、それらのキメラ対応物に匹敵する親和性を有することを示しており、該ヒト化抗体が、キメラ抗体の完全な機能活性を有することを示唆している。さらに、該ヒト化抗MET抗体は、ヒトおよびカニクイザルMET ECDの両方に同等な結合を示す。
精製したヒト化およびキメラ9006および9338変異体の動態結合分析を、Octet QK384バイオレイヤー干渉法(BLI)バイオセンサー(Fortebio, USA)またはXPR−36表面プラズモン共鳴(SPR)バイオセンサー(Bio-Rad, USA)上で実施した。
Octetのバイオセンサーを用いる動態測定により、3つの復帰突然変異を有する9006のヒト化変異体(Hu9006)および復帰突然変異を有さない9338のヒト化変異体(Hu9338)が、キメラ親抗体と比較してヒトMET抗原に対してわずかに改善された親和性を有することが示された(表9)。
本実施例は、抗MET抗体9006および9338が、単独でまたは組み合わせで、METの分解を誘導することを実証する。2つの抗体の組合せは、何れかの抗体単独よりも有効にMET受容体の分解を誘導する。
個々の抗MET抗体9006および9338、9006および9338の混合物、ならびにC8−H241類縁体(表4参照)により誘導されるMET受容体の分解レベルを調べるために、ウェスタンブロット分析またはシンプルウェスタン分析を24または48時間の間、抗体で処理したSNU5細胞、EBC1細胞およびMKN45細胞の全細胞溶解物に対して行った。要するに、T−75培養フラスコ中で増殖させ、50%コンフルエントのときに培養培地を除去し、細胞を洗浄し、そして20μg/mlの全抗体濃度のC8−H241、9006、9338、9338+9006、または陰性対照抗体(非哺乳動物標的に対するヒトIgG1)の何れかで、24時間または48時間、加湿インキュベーター中で37℃にて処理した。全細胞溶解物を、標準的なRIPA緩衝液を用いて調製した。総タンパク質濃度をBCAアッセイを用いて決定し、1−10μgのタンパク質を、Sally装置(ProteinSimple)での単純ウェスタン自動化イムノアッセイによって、またはMET対する一次検出抗体を用いたウェスタンブロット分析によって分析した。β−アクチンに対する抗体を、ウェスタンブロット分析のためのローディングコントロールとして用いた。
ウェスタンブロット試験による結果(図3)は、個々の抗体(とりわけ9006)での処理が、試験した全ての細胞株においてMETの分解を誘導することを示す。しかしながら、抗MET抗体混合物9338+9006は、試験した全ての細胞株において個々の抗体(9006または9338)と比較して増強されたMET受容体の分解を誘導する。9006+9338またはC8−H241での処理の24時間後または48時間後の細胞MET受容体レベルを、3種の細胞株SNU5、EBCおよびMKN45における単純ウェスタン分析により比較した。図4に示された結果は、3種全ての細胞株において9006+9338で処理した後にMET分解が増強されたことを実証する。
本実施例は、抗MET抗体9006および9338が、METリン酸化および下流シグナル伝達(pERK2およびpAKTのレベルによって決定される)に差異効果および細胞依存的効果を有することを実証する。抗MET抗体混合物9006+9338は、METリン酸化および下流シグナル伝達の効率的阻害を誘導する。
抗MET抗体9006および9338ならびに抗MET抗体混合物9006+9338により誘導されるMETリン酸化および下流シグナル伝達の阻害レベルを調べるために、単純ウェスタン分析を、抗体で24時間処理したMKN45細胞およびEBC−1細胞の全細胞溶解物で実施した。細胞を、6ウェルプレート中で増殖させた。50%コンフルエントに達したとき、培養培地を除去し、そして細胞を1xPBSで洗浄して、20μg/mlの全抗体濃度の抗体(9006、9338、9006+9338、または陰性対照抗体Synagis(登録商標))で、24時間、加湿インキュベーター中で37℃にて処理した。全細胞溶解物を、標準的なRIPA緩衝液を用いて調製した。総タンパク質濃度をBCAアッセイを用いて決定し、約1mg/mlのタンパク質を、Sally装置(自動化サイズベースのイムノアッセイシステム、ProteinSimple)での単純ウェスタン自動化イムノアッセイによって、ならびにリン酸化MET(Tyr1234/1235およびTyr1349)、リン酸化ERK2(pERK2)、およびリン酸化AKT(pAKT)に対する一次抗体を用いて分析した。β−アクチンに対する抗体を、ローディングコントロールとして用いた(データは示さず)。
METのリン酸化レベル(図5)ならびにERK2およびAKTのリン酸化レベル(図6)の単純ウェスタン分析からの結果は、9006または9338単独での処理が、試験した細胞株におけるリン酸化に対する差異効果および細胞株依存的効果を誘導することを示す。しかしながら、抗MET抗体混合物9006+9338は、MKN45細胞およびEBC−1細胞の両方において、モノクローナル抗MET抗体9006または9338での処理と比較してMETリン酸化および下流シグナル伝達の効果的な阻害を誘導する。
ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)は、感受性の血管モデルにおける生物学的効果を評価するのに適した初代内皮細胞である。抗MET抗体9006および9338ならびに抗体混合物9006+9338は、METリガンドHGFの不在下および存在下の両方で、HUVECの増殖を阻害し得ることが示された。
皮膚線維芽細胞を解凍し、96ウェルプレート中の培養培地に播種した。室温で線維芽細胞の沈降後、GFP標識したHUVECのバイアルを解凍した。培養培地に再懸濁したHUVECを、線維芽細胞懸濁液の上部に添加し、37℃にて5%CO2下、Incucyte装置(Essen Bioscience)中で一晩培養した。一晩のインキュベーション後、共培養細胞から培地を除去し、増殖培地で置き換え、さらに24時間インキュベートした。翌日、アッセイ培地を調製し、異なるリガンド/抗体混合物をアッセイ培地中に合わせ、混合した。増殖培地を除去し、抗体/リガンドの異なる組み合わせを含むアッセイ培地と交換した。培地を2〜3日毎に抗体/リガンド混合物を含む新鮮なアッセイ培地と交換した。GFP−HUVECの写真を、4時間ごとに記録した。細胞数、細胞ネットワークの長さ、およびネットワーク分岐点の数を含むいくつかの細胞パラメータを、Incucyteソフトウェアを用いて分析した。
図7−11は、抗体9006および9338の初代内皮細胞増殖を特異的に阻害する効果を示し、対照的に、無関係の抗体対照はいかなる阻害効果も示さなかった。抗体混合物9006+9338は、特にHGFが培地中に存在するとき、HUVEC増殖の優れた阻害を示す。
本実施例は、キメラ9006、キメラ9338およびキメラ9338+9006と、ヒト化変異体、すなわちヒト化9006(Hu9006)、ヒト化9338(Hu9338)およびヒト化9338+9006(Hu9338+Hu9006)とのインビトロでの比較を記載する。モノクローナル抗体および混合物を、数種の癌細胞株:Okajima、EBC1、MKN45、HCC827R1_cet#3、HCC827R1_cet#1およびKatoIIの増殖を阻害するその能力について評価した。
9006、9338、9338+9006(2つの成分の1:1混合物)、Hu9006、Hu9338およびHu9338+Hu9006(2つの成分の1:1混合物)と、陰性対照抗体(Synagis(登録商標))とを、2%FBSおよび1%P/Sを添加したRPMI1640グルタマックス培地中100μg/mlの最終総抗体濃度に希釈し、最高の抗体濃度を含む1ウェル当たり25μg/mlの終濃度を得た。その後、抗体を2倍の連続希釈を行い、17種までの異なる濃度を得た。関連する細胞の数(Okajima:1000細胞/ウェル、EBC1:750細胞/ウェル、MKN45:500細胞/ウェル、HCC827R1_cet#3:500細胞/ウェル、HCC827R1_cet#1:500細胞/ウェル;KatoII:750細胞/ウェル)を、384ウェルプレートにおける実験ウェルに添加し、抗体と共に4日間、加湿インキュベーター中で37℃にてインキュベートした。次いで、WST−1試薬をプレートに添加し、1時間、37℃にてインキュベートした。吸光度を、ELISAリーダーを用いて450nmおよび620nm(参照波長)で測定した。620nMでの吸光度を450nMでの吸光度から差し引き、代謝活性細胞(MAC)の量を、実施例2に記載の通り、未処理対照の%として計算した。
図12および13は、キメラおよびヒト化9006および9338抗体ならびにキメラおよびヒト化9006+9338抗体混合物の、細胞株HCC827R1_cet#3(12A)、HCC827R1_cet#1(12B)、MKN45(12C)、EBC−1(13A)、KatoII(13B)、およびOkajima(13C)に対する滴定からの生存率の結果を示す。Hu9006、Hu9338およびHu9338+Hu9006は、それらのキメラ対応物と同等の抗増殖作用を有することがグラフから明らかである。
本実施例は、ヒト化9338+9006(Hu9338+Hu9006)、13−MET、28−METおよび13−MET+28−METのインビトロでの試験を記載する(表4参照)。モノクローナル抗体および混合物を、4種の癌細胞株:EBC1、MKN45、SNU5およびKatoIIの増殖を阻害するその能力について評価した。
抗体Hu9338+Hu9006(2つの成分の1:1混合物)、13−MET、28−METおよび13−MET+28−MET(2つの成分の1:1混合物)と、陰性対照抗体(Synagis(登録商標))とを、上記の通り、EBC1(500細胞/ウェル)、MKN45(750細胞/ウェル)、SNU5(750細胞/ウェル)およびKatoII(750細胞/ウェル)における抗代謝効果について試験した。
Hu9338+Hu9006、13−MET、28−METおよび13−MET+28−MET抗体の、細胞株EBC1、MKN45、SNU5およびKatoIIにおける滴定からの生存率の結果を図14に示す。抗MET抗体が、試験した細胞株によって異なるレベルの有効性および効能を有することが明らかになった。しかしながら、Hu9338およびHu9006の組み合わせは、試験したすべての細胞株において、13−MET、28−METおよび13−MET+28−METと比較して代謝活性の優れた阻害を示す。
本実施例は、ヒトMET増幅させた非小細胞肺癌細胞株EBC−1の異種移植片における9006+9338抗体混合物のインビボでの有効性を実証する。
5×106 EBC−1細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。120mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液(10mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH6.0)、モノクローナル抗体9006、モノクローナル抗体9338、またはモノクローナル抗体9006+9338の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、50mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006処理および9338処理動物は、9006または9338のそれぞれを50mg/kgで投与し、一方、9006+9338で処理した動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与した。
接種後10日目に、120mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを8匹毎の4群に無作為化し、処理を開始した。図15に示すように、モノクローナル抗体9338による処理は、ビークル対照と比較して、動物における腫瘍増殖に影響を及ぼさなかった。対照的に、9006での処理は腫瘍増殖遅延をもたらし、一方、9006+9338での処理は、処理中の増殖の安定化をもたらし、このモデルにおけるすべての他の処理よりも優れていた。ビークル処理または9006もしくは9338単独処理の群の試験は、腫瘍過成長または腫瘍関連潰瘍により処理期間中に終了し、一方、9006+9338群の動物は、処理を完了し、処理終了後2から3週間観察した。
本実施例は、ヒトMET増幅された非小細胞肺癌細胞株EBC−1の異種移植片における9006+9338抗体混合物の漸増用量のインビボでの効果を実証する。
5×106 EBC−1細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。150mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液(10mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH6.0)またはモノクローナル抗体9006+9338の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。9006+9338の1:1混合物を、注入用量当たり、50、25、5または1mg/kgの総抗体濃度で投与した。
接種後11日目に、150mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを10匹毎の5群に無作為化し、処理を開始した。図16に示すように、ビークル対照処理した動物と比較して、低濃度の9006+9338(1mg/kg)で処理した動物では、腫瘍増殖は影響を受けなかった。5mg/kgの9006+9338での処理は、後の時点での腫瘍増殖遅延をもたらし、一方で、25または50mg/kgの9006+9338での処理は、同等のレベルの強力な腫瘍増殖阻害と増殖安定化をもたらした。
本実施例は、ヒトMET増幅させた胃癌細胞株MKN−45の異種移植片における9006+9338抗体混合物のインビボでの有効性を実証する。
5×106 MKN−45細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。80mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液(10mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH6.0)、モノクローナル抗体9006、モノクローナル抗体9338、またはモノクローナル抗体9006+9338の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、50mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006処理および9338処理動物は、9006または9338のそれぞれを50mg/kgで投与し、一方、9006+9338で処理した動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与した。
接種後10日目に、80mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを8匹毎の4群に無作為化し、処理を開始した。図17に示すように、モノクローナル抗体9006または9338単独により処理した動物では、ビークル対照処理した動物と比較して、腫瘍増殖がわずかに阻害された。対照的に、9006+9338での処理は、処理中の増殖の安定化をもたらし、このモデルにおけるすべての他の処理よりも優れていた。ビークル処理または9006単独処理の群の試験は、腫瘍過成長または腫瘍関連潰瘍により処理期間中に終了し、一方、9338群および9006+9338群の動物は、処理を完了した。9006+9338群は処理終了後2週間観察し、この期間のほとんどの間、増殖安定化が保持された。
本実施例は、ヒトMET増幅させた胃癌細胞株SNU5の異種移植片における9006+9338抗体混合物のインビボでの有効性を実証する。
1×107 SNU5細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。165mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液(10mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH6.0)、モノクローナル抗体9006、モノクローナル抗体9338、またはモノクローナル抗体9006+9338の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、50mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006処理および9338処理動物は、9006または9338のそれぞれを50mg/kgで投与し、一方、9006+9338で処理した動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与した。
接種後15日目に、165mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを8匹毎の4群に無作為化し、処理を開始した。図18に示すように、モノクローナル抗体9006または9338単独または9006+9338抗体混合物により処理した動物で、ビークル対照処理した動物と比較して、腫瘍の緩解が観察された。9006または9006+9338での処理は、9338での処理よりも優れており、9006処理群および9006+9338処理群において、処理終了後50日以上、腫瘍の緩解が保持された。
本実施例は、ヒト肝細胞癌(HCC)の患者由来の異種移植片モデル(LI1037)における9006+9338抗体混合物のインビボでの有効性を実証する。
モデルLI1037の腫瘍源は、肝臓癌患者の腫瘍に由来し、それをヌードマウスの皮下にて維持した。腫瘍を3mm3断片に刻み、1つの断片を各マウスの片方の前面脇腹に皮下移植した。動物を、腫瘍が平均220mm3の体積に達したときに、処理群に無作為化した。マウスに、ビークル緩衝液(10mMクエン酸ナトリウム、150mM塩化ナトリウム、pH6.0)またはモノクローナル抗体9006+9338の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、50mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006処理および9338処理動物は、9006または9338のそれぞれを50mg/kgで投与し、一方、9006+9338で処理した動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与した。
接種後21日目に、220mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを4匹毎の2群に無作為化し、処理を開始した。図19に示すように、9006+9338抗体混合物で処理した動物において、ビークル対照で処理した動物と比較して、腫瘍増殖の阻害が観察された。
本実施例では、キメラ9006+9338抗体混合物およびヒト化Hu9006+Hu9338抗体混合物のインビボでの有効性を、ヒトMET増幅させた非小細胞肺癌細胞株EBC−1の異種移植片において比較した。
5x106 EBC−1細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。細胞接種後20日目に、〜130mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを10匹毎の3群に無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液、キメラ9006+9338の1:1混合物、またはヒト化の9006+9338(Hu9006+Hu9338)の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、50mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006+9338およびHu9006+Hu9338で処理した動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与された。
図20に示すように、ビークル対照処理動物と比較して、9006+9338およびHu9006+Hu9338で処理した動物の両方において、腫瘍の緩解が観察された。Hu9006+Hu9338および9006+9338の腫瘍阻害効果は、高度に類似していることが明らかとなった。
本実施例では、キメラ9006+9338抗体混合物およびヒト化Hu9006+Hu9338抗体混合物のインビボでの有効性を、ヒトMET増幅させた食道胃癌細胞株OE33の異種移植片で比較する。
OE33腫瘍を、これまでに確立された腫瘍から直列的に移植した。腫瘍は、試験時点で8回継代されていた。〜1mm3の腫瘍断片を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下移植した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。腫瘍接種後30日目に、200mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを7匹毎の3群に無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液、キメラ9006+9338の1:1混合物、またはヒト化の9006+9338(Hu9006+Hu9338)の1:1混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。全ての抗体処理は、30mg/kgの総抗体濃度で投与した。従って、9006+9338およびHu9006+Hu9338で処理した動物は、15mg/kgの各抗体を含む混合物を投与された。
図21に示されるように、ビークル対照処理動物と比較して、9006+9338およびHu9006+Hu9338で処理した動物の両方において、腫瘍の緩解が観察され、増殖曲線は高度に類似していた。
本実施例では、Hu9006+Hu9338抗体混合物および比較としてのモノクローナル抗体C8−H241(表4参照)のインビボでの有効性を、ヒトMET増幅させた非小細胞肺癌細胞株EBC−1およびヒトMET増幅させた胃癌細胞株Hs746T(METのエクソン14の欠失を有する)において比較する。
5x106 EBC−1細胞または3.7x106 Hs746T細胞を、雌の無胸腺マウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。EBC−1について140mm3の平均腫瘍サイズおよびHs746Tについて120mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを無作為化し、処理を開始した。
EBC−1:接種後15日目に、140mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを10匹毎の3群に無作為化し、処理を開始した。図22に示されるように、ビークル対照処理動物と比較して、C8−H241で処理したマウスにおいて、限定された応答が観察された。対照的に、Hu9006+Hu9338での処理は、腫瘍の緩解を誘導した。最後の投与の21日後に、500mm3の平均腫瘍体積で、C8−H241処理群の残りのマウスに、Hu9006+Hu9338での再処理を行った。図22はまた、該マウスが二次処理に応じて腫瘍の緩解を有したことを示す。
本実施例では、Hu9006+Hu9338抗体混合物および比較物モノクローナル抗体C8−H241(表4参照)のインビボでの有効性を、4名のヒトMETを増幅させた非小細胞肺癌(NSCLC)患者由来の異種移植片モデルにおいて比較した。
各マウスを、腫瘍形成(development)のためのモデルLXFA0526、LU0858、LU1901またはLU2503(直径2−3mm)からの原発性NSCLC組織断片を脇腹に皮下接種した。腫瘍を、二次元でノギスにより週に2回測定し、腫瘍体積(mm3)を、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。
図24に示すように、4つのモデルにおいてC8−H241処理時の異なる応答が観察された。対照的に、Hu9006+Hu9338での処理は、4つすべてのモデルにおいて、C8−H241処理と比較して、優れた有効性および/または進行の遅延と共に腫瘍の緩解を誘導した。C8−H241は、別のMET増幅させた初代MET増幅による異種移植片NSCLCモデル(LXFA−1647)において顕著に有効であることが既に報告されている(Liu et al. Clin Cancer Res. 20:6059-6070 (2014))。
本実施例において、の2つの抗体Hu9006およびHu9338の異なる比率からなる混合物インビボでの有効性を、ヒトMET増幅させた非小細胞肺癌細胞株EBC−1の異種移植片において比較した。
5x106 EBC−1細胞を、8−9週齢の雌無胸腺ヌードマウスの脇腹に皮下接種した。腫瘍を、週に3回、ノギスにより二次元で測定し、腫瘍体積をmm3単位で、式:(幅)2×長さ×0.5によって計算した。細胞接種後13日目に、150mm3の平均腫瘍サイズで、マウスを10匹毎の3群に無作為化し、処理を開始した。マウスに、ビークル緩衝液、1:1、2:1または1:2の抗体比のモノクローナル抗体Hu9006+Hu9338混合物の腹腔内注射による計10回の処理を週に3回行い、その後、観察した。抗体処理は、いずれかを50mg/kgで投与するか、または、スキュー比の抗体混合物について、以下の通り10mg/kgの総抗体濃度で投与された:1:1比の処理動物は、25mg/kgの各抗体を含む混合物を投与された。1:2比の処理動物は、10mg/kgの総投与のために3mg/kgのHu9006および7mg/kgのHu9338を含む混合物を投与されるか、または50mg/kgの総投与のために17mg/kgのHu9006および33mg/kgのHu9338を含む混合物を投与された。同様に、2:1比の処理動物は、10mg/kgの総投与のために7mg/kgのHu9006および3mg/kgのHu9338を含む混合物を投与されるか、または50mg/kgの総投与のために、33mg/kgのHu9006および17mg/kgのHu9338を含む混合物を投与された。
図25に示す通り、等しい比およびスキュー比の両者でのHu9006+Hu9338の投与、および両用量での処理とも、腫瘍の緩解を誘導した。腫瘍の緩解レベルは、等しい比およびスキュー比の両者で単一の抗体組成物で腫瘍の成長阻害をもたらすことを示している、全ての試験した抗体処理に類似していることが明らかとなった。
配列番号:1 (ヒト MET アイソフォーム1 アミノ酸配列):
MKAPAVLAPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETLDAQTFHTRIIRFCSINSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRTEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHTLNQNGYTLVITGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDPVITSISPKYGPMAGGTLLTLTGNYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSNSILECYTPAQTISTEFAVKLKIDLANRETSIFSYREDPIVYEIHPTKSFISGGSTITGVGKNLNSVSVPRMVINVHEAGRNFTVACQHRSNSEIICCTTPSLQQLNLQLPLKTKAFFMLDGILSKYFDLIYVHNPVFKPFEKPVMISMGNENVLEIKGNDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENIHLHSEAVLCTVPNDLLKLNSELNIEWKQAISSTVLGKVIVQPDQNFTGLIAGVVSISTALLLLLGFFLWLKKRKQIKDLGSELVRYDARVHTPHLDRLVSARSVSPTTEMVSNESVDYRATFPEDQFPNSSQNGSCRQVQYPLTDMSPILTSGDSDISSPLLQNTVHIDLSALNPELVQAVQHVVIGPSSLIVHFNEVIGRGHFGCVYHGTLLDNDGKKIHCAVKSLNRITDIGEVSQFLTEGIIMKDFSHPNVLSLLGICLRSEGSPLVVLPYMKHGDLRNFIRNETHNPTVKDLIGFGLQVAKGMKYLASKKFVHRDLAARNCMLDEKFTVKVADFGLARDMYDKEYYSVHNKTGAKLPVKWMALESLQTQKFTTKSDVWSFGVLLWELMTRGAPPYPDVNTFDITVYLLQGRRLLQPEYCPDPLYEVMLKCWHPKAEMRPSFSELVSRISAIFSTFIGEHYVHVNATYVNVKCVAPYPSLLSSEDNADDEVDTRPASFWETS
配列番号:2 (ヒト MET アイソフォーム2 アミノ酸配列):
MKAPAVLAPGILVLLFTLVQRSNGECKEALAKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVILHEHHIFLGATNYIYVLNEEDLQKVAEYKTGPVLEHPDCFPCQDCSSKANLSGGVWKDNINMALVVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVFPHNHTADIQSEVHCIFSPQIEEPSQCPDCVVSALGAKVLSSVKDRFINFFVGNTINSSYFPDHPLHSISVRRLKETKDGFMFLTDQSYIDVLPEFRDSYPIKYVHAFESNNFIYFLTVQRETLDAQTFHTRIIRFCSINSGLHSYMEMPLECILTEKRKKRSTKKEVFNILQAAYVSKPGAQLARQIGASLNDDILFGVFAQSKPDSAEPMDRSAMCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARRDEYRTEFTTALQRVDLFMGQFSEVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVVSRSGPSTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHTLNQNGYTLVITGKKITKIPLNGLGCRHFQSCSQCLSAPPFVQCGWCHDKCVRSEECLSGTWTQQICLPAIYKVFPNSAPLEGGTRLTICGWDFGFRRNNKFDLKKTRVLLGNESCTLTLSESTMNTLKCTVGPAMNKHFNMSIIISNGHGTTQYSTFSYVDPVITSISPKYGPMAGGTLLTLTGNYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSNSILECYTPAQTISTEFAVKLKIDLANRETSIFSYREDPIVYEIHPTKSFISTWWKEPLNIVSFLFCFASGGSTITGVGKNLNSVSVPRMVINVHEAGRNFTVACQHRSNSEIICCTTPSLQQLNLQLPLKTKAFFMLDGILSKYFDLIYVHNPVFKPFEKPVMISMGNENVLEIKGNDIDPEAVKGEVLKVGNKSCENIHLHSEAVLCTVPNDLLKLNSELNIEWKQAISSTVLGKVIVQPDQNFTGLIAGVVSISTALLLLLGFFLWLKKRKQIKDLGSELVRYDARVHTPHLDRLVSARSVSPTTEMVSNESVDYRATFPEDQFPNSSQNGSCRQVQYPLTDMSPILTSGDSDISSPLLQNTVHIDLSALNPELVQAVQHVVIGPSSLIVHFNEVIGRGHFGCVYHGTLLDNDGKKIHCAVKSLNRITDIGEVSQFLTEGIIMKDFSHPNVLSLLGICLRSEGSPLVVLPYMKHGDLRNFIRNETHNPTVKDLIGFGLQVAKGMKYLASKKFVHRDLAARNCMLDEKFTVKVADFGLARDMYDKEYYSVHNKTGAKLPVKWMALESLQTQKFTTKSDVWSFGVLLWELMTRGAPPYPDVNTFDITVYLLQGRRLLQPEYCPDPLYEVMLKCWHPKAEMRPSFSELVSRISAIFSTFIGEHYVHVNATYVNVKCVAPYPSLLSSEDNADDEVDTRPASFWETS
配列番号:3 (ニワトリ MET アミノ酸配列):
MKPVTAYPSGIILFLFALLQRSHGQCKEAAKKSEMNLNVKYDLPNFITETPIQNVVLYKHHVYIGAVNKIYVLNETLQNISVYKTGPILESPGCAPCEDCKDKANLSNSVWKDNVNMALLLETYYDDQLISCGSVSGGVCHRHIIPPDNPADIESEVHCMYSPQVDGEADNCPDCVVSTLGTKVLVTEKDRFVNFFVGNTMTSAFQPPHVLHSISVRRLKETQDGFEFLTDQSYIDILPQFRDSYPIKYVHAFEHDHFVYFLTVQRESLDSQTFHTRIIRFCTLDSEMRSYMEMPLECIFTEKRRKRSIRKEVFNILQAAYVSKPGAALAHEMGLGLIDDILYGVFAQTNQIPQEPTNRSAVCAVSVRTINEFFNKIVDKQNMKCLQHFYGKDSKYCLNRAFSRNASYCRAQDDEYRLEVTTPLQRVDLFMGQFNNILLTSISVFTKGNLTIANLGTSEGRFMQIVVSRSEPTAPHVSFQLDSHAVSPQVVVEQSAAADGYTLVVTGKKITKVPLNGPGCHHFQSCSQCLLAPAFMRCGWCGQQCLRAPECNGGTWTQETCLPRVYEILPSSAPLEGGTKLTLCGWDFGFSKNNRFELRNTVVHIGGQICALEAKSSNKNKLECTAPAAKNASFNISSSVSVGHGKTLFNTFSYVNPIITSISPTYGPKSGGTLLTIAGKYLNSGKSRRIFVGEKPCSLKSTSESSVECYTPAQRIPQEYRVRVGIDGAIRDAKGYFTYREDPVVLKIHPAKSFLSGGSTITAQGINLNSVCFPRMVITVPKLGMNFSVACSHRSSSEIICCTTPSLKAFNLQPPFVTKVFFIFDGVSSLYFDFDYVNNPVFKHFEKPVLISRSNPNVLEIKGNHIDSEAVKGEVLKVGNKSCENLLLQSETILCTVPSDLLKSNSELNIEWKQEVLSTVIGKVLIRQDQNFTGLIAGVVSTSVLIYIFLVFFLWRRKKKQIKDLGSDLVRYDGRVHTPHLDRLVSARSVSPTTEMVSSESVDYRSTFLEDQFPSMSQNGSCRPAQYPHSDLSPILSSGDSDLASPLLQTNVHIDISALNPDLVKEVQHVVIGADSLMVHFSEVIGRGHFGCVSHGTLLDNDGRKIHCAVKSLNRITDLEEVAQFLKEGIIMKDFTHPNVLSLLGICLPNEGSPLVVLPYMKHGDLRNFIRNETHNPTVKDLIGFGLQVAKGMKYLASKKFVHRDLAARNCMLDEKFTVKVADFGLARDVYDKEYYSVHNKTGAKLPVKWMALESLQTQKFTTKSDVWSFGVLLWELMTRGAPPYPDVNSFDITVYLLQGRRLLQPEYCPDPLYEVMLKCWHPKPEMRPAFSELVSKISTIFSTFIGEHYVHVNATYVNVKCVAPYPSLLSSQDNTDMDVDT
MKAPTVLAPGILVLLLSLVQRSHGECKEALVKSEMNVNMKYQLPNFTAETPIQNVVLHGHHIYLGATNYIYVLNDKDLQKVSEFKTGPVLEHPDCLPCRDCSSKANSSGGVWKDNINMALLVDTYYDDQLISCGSVNRGTCQRHVLPPDNSADIQSEVHCMFSPEEESGQCPDCVVSALGAKVLLSEKDRFINFFVGNTINSSYPPGYSLHSISVRRLKETQDGFKFLTDQSYIDVLPEFQDSYPIKYIHAFESNHFIYFLTVQKETLDAQTFHTRIIRFCSVDSGLHSYMEMPLECILTEKRRKRSTREEVFNILQAAYVSKPGANLAKQIGASPSDDILFGVFAQSKPDSAEPVNRSAVCAFPIKYVNDFFNKIVNKNNVRCLQHFYGPNHEHCFNRTLLRNSSGCEARSDEYRTEFTTALQRVDLFMGRLNQVLLTSISTFIKGDLTIANLGTSEGRFMQVVLSRTAHLTPHVNFLLDSHPVSPEVIVEHPSNQNGYTLVVTGKKITKIPLNGLGCGHFQSCSQCLSAPYFIQCGWCHNQCVRFDECPSGTWTQEICLPAVYKVFPTSAPLEGGTVLTICGWDFGFRKNNKFDLRKTKVLLGNESCTLTLSESTTNTLKCTVGPAMSEHFNVSVIISNSRETTQYSAFSYVDPVITSISPRYGPQAGGTLLTLTGKYLNSGNSRHISIGGKTCTLKSVSDSILECYTPAQTTSDEFPVKLKIDLANRETSSFSYREDPVVYEIHPTKSFISGGSTITGIGKTLNSVSLPKLVIDVHEVGVNYTVACQHRSNSEIICCTTPSLKQLGLQLPLKTKAFFLLDGILSKHFDLTYVHNPVFEPFEKPVMISIGNENVVEIKGNNIDPEAVKGEVLKVGNQSCESLHWHSGAVLCTVPSDLLKLNSELNIEWKQAVSSTVLGKVIVQPDQNFAGLIIGAVSISVVVLLLSGLFLWMRKRKHKDLGSELVRYDARVHTPHLDRLVSARSVSPTTEMVSNESVDYRATFPEDQFPNSSQNGACRQVQYPLTDLSPILTSGDSDISSPLLQNTVHIDLSALNPELVQAVQHVVIGPSSLIVHFNEVIGRGHFGCVYHGTLLDNDGKKIHCAVKSLNRITDIEEVSQFLTEGIIMKDFSHPNVLSLLGICLRSEGSPLVVLPYMKHGDLRNFIRNETHNPTVKDLIGFGLQVAKGMKYLASKKFVHRDLAARNCMLDEKFTVKVADFGLARDMYDKEYYSVHNKTGAKLPVKWMALESLQTQKFTTKSDVWSFGVLLWELMTRGAPPYPDVNTFDITIYLLQGRRLLQPEYCPDALYEVMLKCWHPKAEMRPSFSELVSRISSIFSTFIGEHYVHVNATYVNVKCVAPYPSLLPSQDNIDGEGNT
配列番号:5 (キメラ 9006 重鎖可変ドメイン核酸配列):
CAGATCCATTTGGGGCAGTCTGGACCTGAGCTGAAGAAGCCTGGAGAGACAGTCAAGATCTCCTGCAAGGCTTCTGGGTATACCTTCACAAACTTTAGAATGAACTGGGTGAAGCAGGCTCCAGGAAAGGGTTTAAAGTGGATGGGCTGGATAAACACCTACACTGGAGAGCCAACATATGTTGATGACTTGAAGGGACGGTTTGCCTTCTCTTTGGAAACCTCTGCCAGCACTGCCTATTTGCAGATCAACAACCTCAAAAATGAGGACATGGCTACATATTTCTGTGCAAGGAAAGGGATTGCGAGGGCTATGGACTACTGGGGTCAAGGAACCTCAGTCACCGTCTCGAGT
配列番号:6 (キメラ 9006 重鎖可変ドメインアミノ酸配列):
QIHLGQSGPELKKPGETVKISCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGKGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFAFSLETSASTAYLQINNLKNEDMATYFCARKGIARAMDYWGQGTSVTVSS
配列番号:7 (キメラ 9006 軽鎖可変ドメイン核酸配列):
AACATTGTGATGACACAGTCTCCATCCTCCCTGAGTGTGTCAGCAGGAGAGATGGTCACTATGAGTTGTAAGTCCAGTCAGAGTCTGTTAGACAGTGGAAATCAAAAGAACTACTTGGCCTGGTACCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCTCAACTTTTGATCTTCGGGGCATCCACTAGGGAATCTGGGGTCCCTGATCGCTTCACAGGCAGTGGATCTGGAACCGATTTCACTCTTACCGTCAGCAGTGTGCAGGCTGAAGACCTGGCAGTTTATTACTGTCAGAATGATCATAGTTATCCGTACACGTTCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAAATAAAA
NIVMTQSPSSLSVSAGEMVTMSCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPQLLIFGASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTVSSVQAEDLAVYYCQNDHSYPYTFGGGTKLEIK
配列番号:9 (キメラ 9338 重鎖可変ドメイン核酸配列):
CAGGTCCAACTGCAACAGCCTGGGGCTGAACTGGCAAAACCTGGGGCCTCAGTGAGGATGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGTTACTGGATGCACTGGGTAAAACAGAGGCCTGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGATACATTAATCCTAGCAGTGGTCATATTGAGAACAATCAGAAGTTCAAGGACAAGGCCACATTGACTGCAGACAAATCCTCCAGCACAGCCTACATGCAACTGAGCAGCCTGACATTTGAGGACTCTGCAGTCTATTACTGTGCAAGAGGACGGTTTGCTTACTGGGGCCAAGGGACTCTGGTCACTGTCTCGAGT
配列番号:10 (キメラ 9338 重鎖可変ドメインアミノ酸配列):
QVQLQQPGAELAKPGASVRMSCKASGYTFTSYWMHWVKQRPGQGLEWIGYINPSSGHIENNQKFKDKATLTADKSSSTAYMQLSSLTFEDSAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSS
配列番号:11 (キメラ 9338 軽鎖可変ドメイン核酸配列):
GATATTGTGATGACCCAGTCTCCAGCAATCATGTCTGCATCTCCTGGGGAGAAGGTCACCTTGACCTGCAGTGCCAGCTCAAGTGTAAGTTCCGGCTACTTGTACTGGTACCAGCAGAAGCCAGGATCCTCCCCCAAACTCTGGATTTATAGCACATCCAACCTGGCTTCTGGAGTCCCTGCTCGCTTCAGTGGCAGTGGGTCTGGGACCTCTTACTCTCTCACAGTCAACAGCATGGAGGCTGAAGATGCTGCCTCTTATTTCTGCCATCAGTGGAGTAGTTACCCATTCACGTTCGGCTCGGGGACCAAGCTGGAGCTGAAA
配列番号:12 (キメラ 9338 軽鎖可変ドメインアミノ酸配列):
DIVMTQSPAIMSASPGEKVTLTCSASSSVSSGYLYWYQQKPGSSPKLWIYSTSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTVNSMEAEDAASYFCHQWSSYPFTFGSGTKLELK
配列番号:13 (ヒト化 9006 重鎖可変ドメイン核酸配列):
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGATCCGAGCTGAAGAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCCGGCTACACCTTTACCAACTTCCGGATGAACTGGGTCAAGCAGGCCCCAGGCCAGGGCCTGAAATGGATGGGCTGGATCAACACCTACACCGGCGAGCCCACCTACGTGGACGACCTGAAGGGCAGATTCGTGTTCTCCCTGGACACCTCCGTGTCCACCGCCTACCTGCAGATCTCCAGCCTGAAGGCCGAGGATACCGCCGTGTACTACTGCGCCCGGAAGGGAATCGCCAGAGCCATGGATTATTGGGGCCAGGGCACCACCGTGACAGTCTCGAGT
配列番号:14 (ヒト化 9006 重鎖可変ドメインアミノ酸配列):
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSS
GACATCGTGATGACCCAGTCCCCCGACTCTCTGGCCGTGTCTCTGGGCGAGAGAGCCACCATCAACTGCAAGTCCTCCCAGTCCCTGCTGGACTCCGGCAACCAGAAGAACTACCTGGCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGCCTCCCAAGCTGCTGATCTTTGGCGCCTCCACCCGGGAATCTGGCGTGCCCGATAGATTCTCCGGCTCCGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCAGCTCCCTGCAGGCCGAGGATGTGGCCGTGTACTACTGCCAGAACGACCACTCCTACCCCTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG
配列番号:16 (ヒト化 9006 軽鎖可変ドメインアミノ酸配列):
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPYTFGQGTKLEIK
配列番号:17 (ヒト化 9338 重鎖可変ドメイン核酸配列):
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCTGAAGTGAAGAAACCCGGCTCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCCTCCGGCTACACCTTTACCAGCTACTGGATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAGGGCCTGGAATGGATGGGCTACATCAACCCCTCCAGCGGCCACATCGAGAACAACCAGAAATTCAAGGACCGCGTGACCATCACCGCCGACAAGTCCACCTCCACCGCCTACATGGAACTGTCCTCCCTGCGGAGCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCCAGAGGCAGATTCGCCTACTGGGGCCAGGGCACCCTCGTGACAGTCTCGAGT
配列番号:18 (ヒト化 9338 重鎖可変ドメインアミノ酸配列):
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSS
配列番号:19 (ヒト化 9338 軽鎖可変ドメイン核酸配列):
GAGATCGTGCTGACCCAGTCTCCTGCCACCCTGTCTCTGAGCCCTGGCGAGAGAGCTACCCTGTCCTGCTCCGCCTCCTCCTCTGTGTCCTCCGGCTACCTGTACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCTCGGCTGCTGATCTACTCTACCTCCAACCTGGCCTCCGGCATCCCTGCCAGATTCTCCGGCTCTGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACCATCTCCAGCCTGGAACCCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCACCAGTGGTCCAGCTACCCCTTCACCTTTGGCTCCGGCACCAAGCTGGAAATCAAG
配列番号:20 (ヒト化 9338 軽鎖可変ドメインアミノ酸配列):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIK
配列番号:21 (9006 重鎖CDR1 アミノ酸配列):
GYTFTNFR
配列番号:22 (9006 重鎖CDR2 アミノ酸配列):
INTYTGEP
配列番号:23 (9006 重鎖CDR3 アミノ酸配列):
ARKGIARAMDY
配列番号:24 (9006 軽鎖CDR1 アミノ酸配列):
QSLLDSGNQKNY
配列番号:25 (9006 軽鎖CDR2 アミノ酸配列):
GAS
配列番号:26 (9006 軽鎖CDR3 アミノ酸配列):
QNDHSYPYT
配列番号:27 (9338 重鎖CDR1 アミノ酸配列):
GYTFTSYW
INPSSGHI
配列番号:29 (9338 重鎖CDR3 アミノ酸配列):
ARGRFAY
配列番号:30 (9338 軽鎖CDR1 アミノ酸配列):
SSVSSGY
配列番号:31 (9338 軽鎖CDR2 アミノ酸配列):
STS
配列番号:32 (9338 軽鎖CDR3 アミノ酸配列):
HQWSSYPFT
配列番号:33 (ヒト化 9006 軽鎖アミノ酸配列):
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号:34 (ヒト化 9006 重鎖アミノ酸配列):
QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
配列番号:35 (ヒト化 9338 軽鎖アミノ酸配列):
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
配列番号:36 (ヒト化 9338 重鎖アミノ酸配列):
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
Claims (53)
- 第一の抗MET抗体またはその抗原結合部分および第二の抗MET抗体またはその抗原結合部分を含む抗体組成物であって、ここで、
a)該第一の抗MET抗体が、それぞれ配列番号21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含む重鎖(H)CDR1〜3および軽鎖(L)CDR1〜3を有する抗体と、ヒトMETへの結合について競合するか、またはヒトMETの同じエピトープに結合し、そして
b)該第二の抗MET抗体が、それぞれ配列番号27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む重鎖H−CDR1〜3および軽鎖L−CDR1〜3を有する抗体と、ヒトMETへの結合について競合するか、またはヒトMETの同じエピトープに結合する、抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体が、
a)配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する抗体;
b)それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3を有する抗体;
c)配列番号:6または14のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)を有する抗体;
d)配列番号:6または14のアミノ酸配列を含むVHを有する抗体;
e)配列番号:34のアミノ酸配列を含む重鎖(HC)を有する抗体;
f)配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する抗体;
g)それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含むL−CDR1〜3を有する抗体;
h)配列番号:8または16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン(VL)を有する抗体;および
i)配列番号:8または16のアミノ酸配列を含むVLを有する抗体;
j)配列番号:33のアミノ酸配列を含む軽鎖(LC)を有する抗体;
k)配列番号:23のアミノ酸配列を含むH−CDR3が、およよび配列番号:26のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有数r抗体;
l)それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体;
m)配列番号:6または14のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVH、および配列番号:8または16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVLを有する抗体;
n)配列番号:6または14のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号:8または16のアミノ酸配列を含むVLを有する抗体;および
o)配列番号:34のアミノ酸配列を含むHC、および配列番号:33のアミノ酸配列を含むLCを有する抗体
からなる群より選択される、請求項1に記載の抗体組成物。 - 該第二の抗MET抗体が、
a)配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3を有する抗体;
b)それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3を有する抗体;
c)配列番号:10または18のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVHを有する抗体;
d)配列番号:10または18のアミノ酸配列を含むVHを有する抗体;
e)配列番号:36のアミノ酸配列を含む重鎖(HC)を有する抗体;
f)配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する抗体;
g)それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むL−CDR1〜3を有する抗体;
h)配列番号:12または20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVLを有する抗体;
i)配列番号:12または20のアミノ酸配列を含むVLを有する抗体;
j)配列番号:35のアミノ酸配列を含む軽鎖(LC)を有する抗体;
k)配列番号:29のアミノ酸配列を含むH−CDR3、および配列番号:32のアミノ酸配列を含むL−CDR3を有する抗体;
l)それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体;
m)配列番号:10または18のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVH、および配列番号:12または20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するVLを有する抗体;
n)配列番号:10または18のアミノ酸配列を含むVH、および配列番号:12または20のアミノ酸配列を含むVLを有する抗体;および
o)配列番号:36のアミノ酸配列を含むHC、および配列番号:35のアミノ酸配列を含むLCを有する抗体
からなる群より選択される、請求項1に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のH−CDR3およびL−CDR3が、それぞれ配列番号:23および26のアミノ酸配列を含み、そして
該第二の抗MET抗体のH−CDR3およびL−CDR3が、それぞれ配列番号:29および32のアミノ酸配列を含む、請求項1に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含み、そして
該第二の抗MET抗体のH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、請求項4に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:6および8のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有し、そして
該第二の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:10および12のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する、請求項1に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:6および8のアミノ酸配列を含み、そして
該第二の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:10および12のアミノ酸配列を含む、請求項6に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:14および16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有し、そして
該第二の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:18および20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する、請求項1に記載の抗体組成物。 - 該第一の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:14および16のアミノ酸配列を含み、そして
該第二の抗MET抗体のVHおよびVLが、それぞれ配列番号:18および20のアミノ酸配列を含む、請求項8に記載の抗体。 - 第一の抗MET抗体、第二の抗MET抗体、または両抗体が、アイソタイプIgG抗体である、請求項1から9のいずれか一項に記載の抗体組成物。
- 第一の抗MET抗体、第二の抗MET抗体、または両抗体が、アイソタイプサブクラスIgG1抗体である、請求項10に記載の抗体組成物。
- 第一の抗MET抗体またはその抗原結合部分および第二の抗MET抗体またはその抗原結合部分を含む抗体組成物であって、ここで、
該第一の抗MET抗体のHCおよびLCが、それぞれ配列番号:34および33のアミノ酸配列を含み、そして
該第二の抗MET抗体のHCおよびLCが、それぞれ配列番号:36および35のアミノ酸配列を含む、抗体組成物。 - 該組成物中の各抗体が、
a)マウスまたはニワトリのMETに結合しない;
b)SEMAドメイン上に存在する残基を含むヒトMETのエピトープに結合する;
c)METの分解を誘導する;
d)1×10−9M以下のKDでヒトMETに結合する;
e)SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
f)METリン酸化を阻害する;
g)MET下流シグナル伝達を阻害する;
h)HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および
i)インビボでの腫瘍増殖を阻害する
からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有する、請求項1から12のいずれか一項に記載の抗体組成物。 - 該組成物が、
a)METの分解を誘導する;
b)SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
c)METリン酸化を阻害する;
d)MET下流シグナル伝達を阻害する;
e)HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および
f)インビボでの腫瘍増殖を阻害する
からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有する、請求項1から12のいずれか一項に記載の抗体組成物。 - 請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- a)それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体;および
b)それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体
からなる群より選択される抗体と、ヒトMETへの結合について競合するか、またはヒトMETの同じエピトープに結合する、抗MET抗体またはその抗原結合部分。 - 該抗体が、
a)そのH−CDR3が、配列番号:23のアミノ酸配列を含む抗体;
b)そのL−CDR3が、配列番号:26のアミノ酸配列を含む抗体;
c)そのH−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含む抗体;
d)そのL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含む抗体;
e)そのVHが、配列番号:6または14のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する抗体;
f)そのVLが、配列番号:8または16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する抗体;
g)そのVHが、配列番号:6または14のアミノ酸配列を含む抗体;
h)そのVLが、配列番号:8または16のアミノ酸配列を含む抗体;
i)そのHCが、配列番号:34のアミノ酸配列を含む抗体;および
j)そのLCが、配列番号:33のアミノ酸配列を含む抗体
からなる群より選択される、抗MET抗体またはその抗原結合部分。 - 該抗体が、
a)そのH−CDR3が、配列番号:23のアミノ酸配列を含むか;
b)そのH−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:21、22および23のアミノ酸配列を含むか;
c)そのVHが、配列番号:6または14のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するか;
d)そのVHが、配列番号:6または14のアミノ酸配列を含むか;または、
e)そのHCが、配列番号:34のアミノ酸配列を含む
重鎖、ならびに
a)そのL−CDR3が、配列番号:26のアミノ酸配列を含むか;
b)そのL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:24、25および26のアミノ酸配列を含むか;
c)そのVLが、配列番号:8または16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するか;
d)そのVLが、配列番号:8または16のアミノ酸配列を含むか;または
e)そのLCが、配列番号:33のアミノ酸配列を含む
軽鎖を含む、請求項17に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。 - 該抗体のH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含む、請求項18に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:6または14のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)ならびに配列番号:8または16のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項18に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:6のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)ならびに配列番号:8のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項18に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:14のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)ならびに配列番号:16のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項18に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、
a)そのH−CDR3が、配列番号:29のアミノ酸配列を含む抗体;
b)そのL−CDR3が、配列番号:32のアミノ酸配列を含む抗体;
c)そのH−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含む抗体;
d)そのL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含む抗体;
e)そのVHが、配列番号:10または18のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する抗体;
f)そのVLが、配列番号:12または20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する抗体;
g)そのVHが、配列番号:10または18のアミノ酸配列を含む抗体;
h)そのVLが、配列番号:12または20のアミノ酸配列を含む抗体;
i)そのHCが、配列番号:36のアミノ酸配列を含む抗体;および
j)そのLCが、配列番号:35のアミノ酸配列を含む抗体
からなる群より選択される、抗MET抗体またはその抗原結合部分。 - 該抗体が、
a)そのH−CDR3が、配列番号:29のアミノ酸配列を含むか;
b)そのH−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:27、28および29のアミノ酸配列を含むか;
c)そのVHが、配列番号:10または18のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するか;
d)そのVHが、配列番号:10または18のアミノ酸配列を含むか;または、
e)そのHCが、配列番号:36のアミノ酸配列を含む
重鎖、ならびに
a)そのL−CDR3が、配列番号:32のアミノ酸配列を含むか;
b)そのL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:30、31および32のアミノ酸配列を含むか;
c)そのVLが、配列番号:12または20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有するか;
d)そのVLが、配列番号:12または20のアミノ酸配列を含むか;または
e)そのLCが、配列番号:35のアミノ酸配列を含む
軽鎖を含む、請求項19に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。 - 該抗体のH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3が、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含む、請求項24に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:10または18のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン(VH)ならびに配列番号:12または20のアミノ酸配列と少なくとも90%の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項24に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:10のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)および配列番号:12のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項26に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、配列番号:18のアミノ酸配列を含む重鎖可変ドメイン(VH)および配列番号:20のアミノ酸配列を含む軽鎖可変ドメイン(VL)を有する、請求項26に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。
- 該抗体の重鎖(HC)が、配列番号:34のアミノ酸配列を含み、そして該抗体の軽鎖(LC)が、配列番号:33のアミノ酸配列を含む、抗MET抗体またはその抗原結合部分。
- 該抗体の重鎖(HC)が、配列番号:36のアミノ酸配列を含み、そして該抗体の軽鎖(LC)が、配列番号:35のアミノ酸配列を含む、抗MET抗体またはその抗原結合部分。
- 抗体がアイソタイプIgG抗体である、請求項6から28のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分。
- 抗体がアイソタイプサブクラスIgG1抗体である、請求項31に記載の抗体または抗原結合部分。
- 該抗体が、
a)マウスまたはニワトリのMETに結合しない;
b)SEMAドメイン上に存在する残基を含むヒトMETのエピトープに結合する;
c)METの分解を誘導する;
d)1×10−9M以下のKDでヒトMETに結合する;
e)SNU5、EBC1、MKN45、KatoII、OE33およびOkajimaから選択される少なくとも1つの細胞株のインビトロでの増殖を阻害する;
f)METリン酸化を阻害する;
g)MET下流シグナル伝達を阻害する;
h)HGFの存在下または不存在下での初代内皮細胞増殖を阻害する;および
i)インビボでの腫瘍増殖を阻害する
からなる群より選択される少なくとも1つの特性を有する、請求項16から32のいずれか一項に記載の抗MET抗体または抗原結合部分。 - 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体または抗原結合部分および薬学的に許容される賦形剤を含む、医薬組成物。
- 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体の、重鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、軽鎖もしくはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、またはその両方を含む、単離された核酸分子。
- 配列番号:5、7、9、11、13、15、17または19のヌクレオチド配列を含む、請求項35に記載の単離された核酸分子。
- 発現制御配列をさらに含む、請求項35または36に記載の単離された核酸分子を含むベクター。
- 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体の、重鎖またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、および軽鎖またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含む、宿主細胞。
- 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体の、重鎖またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列、および軽鎖またはその抗原結合部分をコードするヌクレオチド配列を含み、該ヌクレオチド配列を発現する、非ヒトトランスジェニック動物または植物。
- 請求項38に記載の宿主細胞を提供し、該宿主細胞を抗体またはその部分の発現に適する条件下で培養し、そして得られた抗体またはその部分を単離することを含む、請求項16から33のいずれか一項に記載の抗体または抗原結合部分の製造法。
- 第一の抗MET抗体または抗原結合部分を発現可能な第一の宿主細胞および第二の抗MET抗体または抗原結合部分を発現可能な第二の宿主細胞を提供し、該第一および第二の宿主細胞を抗体またはその部分の発現に適する条件下で培養し、そして得られた抗体または部分を単離することを含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物の製造法。
- 第一および第二の宿主細胞を単一のバイオリアクター中で培養する、請求項41に記載の方法。
- 該ポリクローナル細胞株が、該第一の抗MET抗体またはその抗原結合部分を発現可能な第一の宿主細胞および該第二の抗MET抗体またはその抗原結合部分を発現可能な第二の宿主細胞を含む、請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物を発現可能なポリクローナル細胞株。
- 請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物の第一および第二の抗MET抗体または抗原結合部分の結合特異性を有する、二重特異性結合分子。
- 該二重特異性結合分子が、それぞれ配列番号:21、22、23、24、25および26のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体の抗原結合部分;および、それぞれ配列番号:27、28、29、30、31および32のアミノ酸配列を含むH−CDR1〜3およびL−CDR1〜3を有する抗体の抗原結合部分を含む、請求項44に記載の二重特異性結合分子。
- 請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物または請求項15に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、MET介在性障害を有する患者の処置法。
- 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体または抗原結合部分、請求項34に記載の医薬組成物、または請求項44もしくは45に記載の二重特異性結合分子を患者に投与することを含む、MET介在性障害を有する患者の処置法。
- 請求項1から14のいずれか一項に記載の抗体組成物または請求項15に記載の医薬組成物を患者に投与することを含む、該患者における癌の処置法。
- 請求項16から33のいずれか一項に記載の抗MET抗体または抗原結合部分、請求項34に記載の医薬組成物、または請求項44もしくは45に記載の二重特異性結合分子を患者に投与することを含む、該患者における癌の処置法。
- 癌がMET活性化に依存する、請求項48または49に記載の方法。
- 癌が、非小細胞肺癌、胃癌、肝細胞癌、食道癌、結腸直腸癌、乳頭状腎細胞癌、神経膠芽腫、腎細胞癌、前立腺癌、または副腎皮質癌である、請求項48または49に記載の方法。
- さらに化学療法剤、抗腫瘍剤、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤、またはMET経路阻害剤を投与することを含む、請求項46から51のいずれか一項に記載の方法。
- 患者がヒトである、請求項46から52のいずれか一項に記載の方法。
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