JP2017518367A - ストレプトコッカス・スイス感染に対するワクチン組成物 - Google Patents
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(a)IdeSsuisと命名されたタンパク質,その類縁体又は断片;
(b)rIdeSsuisと命名されたタンパク質,その類縁体又は断片;
(c)タンパク質IdeSsuis,その類縁体又は断片をコードするポリヌクレオチドを挿入したベクター;
(d)タンパク質rIdeSsuis,その類縁体又は断片をコードするポリヌクレオチドを挿入したベクター;
から選択される少なくとも1種のポリペプチド又は1種のベクターの有効量;及び
少なくとも1種の薬剤学的担体,希釈剤,又はアジュバンドを含んでなる。
(a.a)配列番号1のアミノ酸配列;
(a.b)配列番号1のアミノ酸配列の断片又は類縁体:又は
(a.c)IgMプロテアーゼ活性を有する(a.a)又は(a.b)の何れかの断片
を含んでいる。
(b.a)配列番号2,6,又は7のアミノ酸配列;
(b.b)配列番号2,6,又は7のアミノ酸配列の断片又は相同体;
(b.c)酸配列番号1のアミノの1〜34位までのアミノ酸が欠失してなるアミノ酸配列;
(b.d)配列番号1のタンパク質IdeSsuisのアミノ酸配列に対し,少なくとも60%,好ましくは70%,最も好ましくは85%相同体であるアミノ酸配列;
(b.e)IgMプロテアーゼ活性を有する(b.a)又は(b.b)又は(b.c)又は(b.d)の何れかの断片;あるいは
(b.f)配列番号5のアミノ酸配列,又はこれに対し少なくとも95%相同であるアミノ酸配列を含んでなるか又は当該アミノ酸配列からなる,(b.a)又は(b.b)又は(b.c)又は(b.d)の何れかの断片,
を含んでなる又はよりなる。
配列番号7(「抗原rIdeSsuisB2」ともいう。)は,S. suis血清型7株の成熟IdeSsuisタンパク質の完全なアミノ酸配列を含むが,N末端にHISタグが付加されている。S. suis 血清型7株のIdeSsuisタンパク質は,配列番号1と比べて114個のアミノ酸からなる配列を欠いているため,タンパク質のC末端の半分が相違している。配列番号7のアミノ酸80〜414(いわゆるMac−1ドメインの高度保存部分)は,配列番号5の配列と97.9%が一致している。配列番号7と配列番号1との間の全体の同一性は,(N末端のHISタグと114個のアミノ酸のギャップとを考慮しなければ)96.4%である。
「相同体」は,上に開示されたアミノ酸配列に類似しており,且つそれら元のアミノ酸配列(例えば配列番号1,2,6又は7)との相同性のレベルが,少なくとも60%,好ましくは70%,最も好ましくは85%を示すアミノ酸配列とみなすことができる。95%といったより高い相同性のレベルも,ここでは考慮されている。ここで用いられているように,相同性は,同一性を意味する。そのようなものとして,配列は,置換,欠失,又は挿入により,互いに異なっていてもよい。
(a.a)配列番号1のアミノ酸配列;
(a.b)配列番号1のアミノ酸配列の断片又は類縁体;又は
(a.c)IgMプロテアーゼ活性を有する(a.a)又は(a.b)何れかの断片。
(c.a)配列番号3の配列又はその相補配列;
(c.b)(c.a)の配列の断片;又は
(c.c)IgMプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする(c.a)の配列の断片
を含んでなることを特徴とする。
(b.a)配列番号2のアミノ酸配列;
(b.b)配列番号2のアミノ酸配列の断片又は類縁体;
(b.c)配列番号1のアミノ酸配列の1−34位までのアミノ酸を欠いているアミノ酸配列;
(b.d)配列番号1のタンパク質IdeSsuisのアミノ酸配列に対し少なくとも60%,好ましくは70%,最も好ましくは85%相同であるアミノ酸配列:又は
(b.e)IgMプロテアーゼ活性を有する(b.a)又は(b.b)又は(b.c)又は(b.d)の何れかの断片;及び/又は
(b.f)配列番号5のアミノ酸配列又はこれと少なくとも95%相同であるアミノ酸配列を含んでなる又は当該アミノ酸配列からなる(b.a)又は(b.b)又は(b.c)又は(b.d)の何れかの断片
を含んでなる。
(d.a)配列番号4,8又は9又はその相補配列;
(d.b)(d.a)の配列の断片;又は
(d.c)IgMプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする(d.a)の配列の断片
を含んでなることを特徴とする。
(1)遺伝子発現における制御的役割を有する遺伝子要素,例えばプロモータ又はエンハンサー;
(2)mRNAに転写されて,タンパク質に翻訳される構造配列又はコード配列;及び
(3)適切な転写の開始配列及び停止配列。
酵母又は真核生物の発現システムで使用することを意図する構造単位は,宿主細胞によって翻訳されたタンパク質の細胞外分泌を可能にするリーダー配列を含むことが好ましい。あるいは組換えタンパク質が,リーダー又は輸送配列なしで発現されるところでは,N末端メチオニン残基を含んでいてもよい。このメチオニン残基は,発現した組み換えタンパクから,最終の生産物を与えるよう,実質的に切断されてもよく,されなくてもよい。
本発明の更なる目的は,トランスフェクトされた宿主細胞であるベクター又は種々の生物において,組換えタンパク質の発現に適した条件下で,ゲスト抗原としてrIdeSsuisで定義されるタンパク質を生産するための方法を提供することである。
上記抗体は,S.suis感染症に罹患しているヒト又は動物(ブタ)患者の治療的処置のための非経口組成物の一部を形成し得る。しかしながら,それは同様に予防目的ので使われてもよい。
(a)オプソニン化抗体の誘導は,S. suis細菌ワクチンの予防効能に極めて重要である
(b)IdeSsuisは,ワクチン接種された子ブタの血中でのS. suisの生存を促進する。
・rIdeSsuis(配列番号2)は,S. suisの種々の血清型全体にわたって免疫保護を付与する;
・高度に保存されたMac−1ドメイン(配列番号5)を少なくとも含んでいるタンパク質は,免疫保護を提供するのに十分である;
・高度に保存されたMac−1ドメイン(配列番号5)を少なくとも含んでいる他の血清型のIdeSsuisタンパク質も,たとえこのMac−1ドメイン外の全体的配列が血清型2株のそれと異なっていても(たとえある配列セグメントの全体が欠けていても),保護を誘導する。
以下の実施例は,S. suisに感染した子ブタに,ワクチン接種チャレンジに実験を行った後の実験データを示している。
種々のS. suis血清型(血清型2及び血清型9)及び感染ルート(静脈投与及び鼻腔投与)についての子ブタでのワクチン接種チャレンジ実験の確立
組換えタンパク質rIdeSsuis自体を用いた子ブタの免疫接種は,S. suis血清型2感染から子ブタを保護するのに十分であることが実験から明らかになった(図2)。
この実施例では,与えられたワクチンの有効性を評価するのに,殺菌分析を用いた。この殺菌分析は,テスト用動物の血中に,ある血清型のS.suisバクテリアを追加した後,生存している同血清型のS.suisバクテリアを決定することを伴う。もし,ある血清型に対して防御を示す抗体が,このテスト動物の血中に存在するならば,2時間の潜伏期間の間に,バクテリアは殺されるだろう。防御の程度は「生存係数(survival factor:SF)」として表される。生存係数は,120分後にカウントされたコロニー数と,テスト動物の血中へのバクテリア添加直後にカウントされたコロニー数との比率である。生存係数が低いことは,血中のバクテリアを有効に死滅させたことを意味し,したがって,テスト動物が有効に保護されたことを意味する。
子ブタは,0.25mgのrIdeSsuis又は0.25mgのrIdeSsuisB2又は0.5mgのrIdeSsuis相同体で,アジュバントとして20%[vol/vol]のEmulsigenを含んでいるワクチン1.5mlを,初回及び追加抗原投与(プライム及びブースター)方式でワクチン接種した。
2頭又は4頭の同腹の子ブタが,無作為に,2つの試験グループ(1グループのn=9):対照グループ1(プラセボ),rIdeSsuis(配列番号2)で免疫接種されるグループ2に分配された。これらの動物は,以下のテストスキームにしたがって,免疫接種され,テストされた。
対照グループ(プラセボ)は,ワクチン接種グループよりも非常に高い生存係数を示した。組換え抗原rIdeSsuis(ワクチン接種グループ)は,血清型2株のタンパク質IdeSsuisの完全配列(配列番号2)を含み,血清型9株と同様に血清型2株のS. suisバクテリアを効率的に殺菌できる有効な抗体を誘導する。
同腹の4頭の子ブタのそれぞれが,以下の4つの試験グループ(n=6,但しグループ4についてはn=5)に無作為に分配された。グループ1:対照グループ(免疫接種なし),グループ2:rIdeSsuis相同体(配列番号6)で免疫接種,グループ3:血清型7株に由来するIdeSsuis(rIdeSsuisB2;配列番号7)で免疫接種,グループ4:配列番号2で免疫接種。これらの動物は,以下のテストスキームにしたがって,免疫接種され,テストされた。
これらの結果では,3つのワクチン接種グループと比べて,対照グループ(グループ1)が,かなり高い生存係数であることを示している。組換え型抗原rIdeSsuis相同体(グループ2)は,高度に保存されたMac−1ドメイン(IgM−プロテアーゼドメイン)を含むN末端断片を含むだけで,対照グループと比べてより優れた殺菌力を有する抗体を誘導した。グループ2の結果は,グループ4で得られた結果と比べることができる。抗原rIdeSsuisも,S. suis血清型2株の成熟したIdeSsuisタンパク質の完全なアミノ酸配列を含んでいて,血中でのS. suis血清型9株の生存をかなり減らす抗体を誘導する。血清型9株の生存は,抗原rIdeSsuisB2(グループ3)によって誘導された抗体によって,さらに一層減じられている。
・rIdeSsuis(配列番号2)は,S. suisの種々の血清型全体にわたって,免疫保護を提供する,
・高度に保存されたMac−1ドメインを少なくとも含むアミノ酸は,免疫保護を提供するのに十分である。
・高度に保存されたMac−1ドメインを少なくとも含んでいる他の血清型のIdeSsuisタンパク質も,たとえこのドメインの外側の全体的配列が,血清型2株の配列のそれと異なっていても(たとえ特定の配列セグメントがまったく欠けていても),防御を誘導する。
Claims (23)
- 以下の群:
(a)IdeSsuisと命名されたタンパク質,その類縁体又は断片;
(b)rIdeSsuisと命名されたタンパク質,その類縁体又は断片;
(c)該タンパク質IdeSsuis,その類縁体又は断片をコードするポリヌクレオチドが挿入されたベクター;及び
(d)該タンパク質rIdeSsuis,その類縁体又は断片をコードするポリヌクレオチドが挿入されたベクター;
から選択される少なくとも1種のポリペプチド又は少なくとも1種のベクターの有効量を含み,且つ
薬剤学的担体,希釈剤又はアジュバントを少なくとも含んでなる,ワクチン組成物。 - (a)のIdeSsuisが,
(a.a)配列番号1のアミノ酸配列;
(a.b)配列番号1のアミノ酸配列の断片若しくは類縁体;又は
(a.c)IgMプロテアーゼ活性を有する(a.a)若しくは(a.b)の何れかの断片
を含んでなることを特徴とする,請求項1に記載のワクチン組成物。 - (b)のrIdeSsuisが,
(b.a)配列番号2,6又は7のアミノ酸配列;
(b.b)配列番号2,6又は7のアミノ酸配列の断片又は類縁体;
(b.c)配列番号1のアミノ酸配列の1〜34位までのアミノ酸が欠失してなるアミノ酸配列;
(b.d)配列番号1のタンパク質IdeSsuisに対して,少なくとも60%,好ましくは70%,最も好ましくは85%相同体であるアミノ酸配列;
(b.e)IgMプロテアーゼ活性を有する(b.a)若しくは(b.b)若しくは(b.c)若しくは(b.d)の何れかである断片;あるいは
(b.f)配列番号5のアミノ酸配列を含んでなる又は当該配列からなる(b.a)若しくは(b.b)若しくは(b.c)若しくは(b.d)の何れかの断片,又は当該断片と少なくとも95%相同であるアミノ酸配列
を含むことを特徴とする,請求項1に記載のワクチン組成物。 - 配列番号5のアミノ酸配列又はこれと少なくとも95相同であるアミノ酸配列を含んでなる又は当該配列からなるタンパク質を含む又は実質的にからなる,請求項1に記載のワクチン組成物。
- 前記タンパク質又はベクターが,唯一の活性成分又は免疫原性成分である,請求項1〜4の何れか1項に記載のワクチン組成物。
- 配列番号1,2,6若しくは7のアミノ酸配列と少なくとも60%,70%,85%若しくは95%相同である及び/又は配列番号5のアミノ酸配列又はこれと少なくとも95%相同であるrIdeSsuisタンパク質より本質的になるものである,請求項1〜5の何れかに記載のワクチン組成物。
- 前記ポリペプチド(a)又は(b)の有効量の断片が,少なくとも1種の他のタンパク質との融合タンパク質の一部分であることを特徴とする,請求項1〜6の何れか1項に記載のワクチン組成物。
- 全体量として,約0.05〜2mgのタンパク質を含む,請求項1〜7の何れか1項に記載のワクチン組成物。
- 前記(c)のポリヌクレオチドが,請求項2に記載のタンパク質をコードする配列を含んでなることを特徴とする請求項1に記載のワクチン組成物。
- 前記ポリヌクレオチドが,
(c.a)配列番号3の配列又はその相補配列;
(c.b)(c.a)の配列の断片;又は
(c.c)IgMプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする(c.a)の配列の断片
であることを特徴とする,請求項9に記載のワクチン組成物。 - 前記(d)のポリヌクレオチドが,請求項3に記載のタンパク質をコードする配列を含んでなることを特徴とする,請求項1に記載のワクチン組成物。
- 前記ポリヌクレオチドが,
(d.a)配列番号4,8若しくは9の配列,又はこれらの相補配列;
(d.b)配列(d.a)の配列の断片;又は
(d.c)IgMプロテアーゼ活性を有するタンパク質をコードする(d.a)の配列の断片
を含んでなることを特徴とする,請求項11に記載のワクチン組成物。 - 前記ポリヌクレオチドがDNA又はRNAであり,
好ましくはベクター中に導入され,該ベクターの発現制御領域に作動可能に連結され,且つ該ベクターはプラスミド又はウィルスベクターである発現ベクターであることを特徴とする,請求項9〜12の何れか1項に記載のワクチン組成物。 - 生理学的に投与可能な,且つ筋肉内注射,静脈内注射,皮下注射,皮内注射又は粘膜投与に適した形で提供されることを特徴とする,請求項1〜13の何れかに記載のワクチン組成物。
- 配列番号5のアミノ酸配列を含んでなる又は当該アミノ酸配列からなるか,又はこれと95%相同であるアミノ酸配列を含んでなる又は当該配列からなる,ldeSsuisの類縁体又は断片。
- 配列番号6若しくは7のアミノ酸配列,又は配列番号6若しくは7のタンパク質IdeSsuisのアミノ酸配列と少なくとも60%,好ましくは70%,より好ましくは85%相同であるアミノ酸配列;又はそれらの類縁体若しくは断片
を含んでなる又は当該配列からなるrIdeSsuisタンパク質。 - 請求項1〜16の何れか1項に記載のIdeSsuis又はrIdeSsuisタンパク質,類縁体,又は断片を認識する抗体。
- 請求項17の抗体を含んだ非経口組成物。
- 請求項1〜16の何れか1項に記載のIdeSsuis又はrIdeSsuisタンパク質の,請求項17に記載の抗体を製造するための使用。
- 請求項3,15,又は16に記載のタンパク質をコードするポリヌクレオチドでトランスフェクトした宿主細胞。
- ブタ又はヒトにおけるストレプトコッカス・スイス感染の予防処置,集団的発症防止処置,又は治療的処置における請求項1〜14の何れかに記載のワクチン組成物,又は請求項18に記載の非経口組成物の使用。
- ブタ又はヒトにおけるストレプトコッカス・スイス感染の予防処置,集団的発症防止処置,又は治療的処置における,請求項21に記載のワクチン組成物の使用であって,前記処置が,少なくとも1回,好ましくは2回の免疫接種を含むものである使用。
- ブタ又はヒトにおけるストレプトコッカス・スイス感染の予防処置,集団的発症防止処置,又は治療的処置における請求項22のワクチン組成物の使用であって,ブタ又はヒトに対して投与されるIdeSsuis又はrIdeSsuisの全体の投与量が0.05〜2.0mgである使用。
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