JP2017508971A - 3つの抗体を利用する発光酸素チャネリング免疫測定法並びにその製造方法及び使用 - Google Patents
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Abstract
Description
該当せず。
ここで、第一の区画は、第一の3つの組成物(即ち、一重項酸素で活性化可能な組成物と会合した第一及び第二の抗体/結合断片並びに第三の抗体/結合断片)を含有してもよく、第二の区画は、増感剤を含有する。更に、2つの区画を含有するこのマイクロ流体デバイスは、更に、それを通って試料が適用されうる入口経路を含有していてもよい。この配置において、第一の区画は、入口経路と流体連通することができてもよく、第二の区画は、入口経路及び第一の区画の少なくとも一方と流体連通することができてもよい。もう1つの実施態様において、マイクロ流体デバイスは、少なくとも3つの区画を含有してもよく、第一、第二及び第三の区画は、それぞれ、第一、第二及び第三の成分を含有していてもよい。更に、(第一の成分中に存在する)第一の抗体/結合断片が高度の親和性で標的被検体に結合することが望ましく、他方、(第二の成分中に存在する)第二の抗体/結合断片が低い親和性で標的被検体に結合することが望ましい。このようにして、より高い親和性を有する抗体/結合断片が、より低い親和性を有する抗体/結合断片よりも前に、被検体と接触する。
図13は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従って構築された開放系マイクロ流体デバイスの一実施態様の写真を含む。図13に示されたマイクロ流体デバイスは、図6に図示されたマイクロ流体デバイス10aのそれと類似する基本的な構造を含む。図13において「光学的セル」と標識された区画は、マイクロ流体デバイス10aの読み取り室28を表わし、他方、「凍結乾燥した試薬を含有する反応ウエル」は、マイクロ流体デバイス10aの第一、第二及び第三区画14a、24及び26を表わす。
図14は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従って構築された閉鎖系マイクロ流体デバイスの一実施態様の写真を含む。図14に示されたマイクロ流体デバイスは、図11に図示されたマイクロ流体デバイス110aのそれと類似する基本的な構造を含む。図14において「光学的セル」と標識された区画は、マイクロ流体デバイス110aの読み取り室122aを表わし、他方、「反応ウエルに包装された凍結乾燥試薬領域」は、マイクロ流体デバイス110aの第一、第二及び第三区画118a、120a及び136に配置された組成物124a、126a、128a及び130aを表わす。更に、「希釈剤」と標識された区画は、試薬134aを含有する追加の区画132aを表わす。
この実施例は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従ってcTnI免疫測定法に用いるための、3つの抗体/結合断片を利用するエピトープの組合せを提供する。cTnI分子のN−末端及びC−末端が壊死性心筋中に存在するタンパク分解酵素及び患者の血漿中に存在するタンパク分解酵素の両方によってタンパク分解されるので、いくつかの実施態様において、3つのエピトープがcTnI配列の内部(コア部分)に位置することが望ましい。
この実施例は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従って、3つの抗体/結合断片を利用するcTnI免疫測定法に用いるもう一つのエピトープの組合せを提供する。図16に図示するcTnI免疫測定において、第一及び第二の抗体/結合断片は、図4の領域B(即ち、配列番号3)内の重複エピトープに結合し、他方、第三の抗体/結合断片は、図4の領域C(即ち、配列番号4)内のエピトープに結合する。特に、第一の抗体/結合断片は、配列番号9のエピトープに特異的に結合し、第二の抗体/結合断片は、配列番号11のエピトープに特異的に結合する。配列番号9及び配列番号11のエピトープは、共に、それぞれ、cTnIの連続アミノ酸配列から形成された直鎖状アミノ酸エピトープである。配列番号9及び配列番号11は、直鎖状の観点から、互いに重複し、配列番号11に特異的に結合する抗体/結合断片は、配列番号9を特異的に認識する抗体/結合断片がcTnIに結合しているときは、そのcTnIに結合することができない。同様に、配列番号9に特異的に結合する抗体/結合断片は、配列番号11を特異的に認識する抗体/結合断片がcTnIに結合しているときは、そのcTnIに結合することができない。第三の抗体又はその結合断片は、配列番号10の直鎖状エピトープに特異的に結合する。配列番号10は、配列番号9及び配列番号11のいずれとも重複しない。従って、配列番号9及び配列番号11のいずれかのエピトープに結合している抗体/結合断片は配列番号10のエピトープへの他の抗体/結合断片の結合に干渉しない。かくして、第三の抗体/結合断片と第一及び第二の抗体/結合断片の一方とは、両方とも、単一のcTnI分子に結合することができる。
この実施例は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従って、3つの抗体/結合断片を利用するcTnI免疫測定法に用いるもう一つのエピトープの組合せを提供する。図17に図示されたcTnI免疫測定法において、第一の抗体/結合断片は、図4のエピトープ領域A(配列番号2)内の配列番号12のエピトープと特異的に結合し、第二の抗体/結合断片は、図4のエピトープ領域F(配列番号7)内の配列番号13のエピトープと特異的に結合し、第三の抗体又はその断片は、図4のエピトープ領域B(配列番号3)内の配列番号14のエピトープと特異的に結合する。配列番号12及び配列番号13のエピトープは、直鎖状構造の観点から重複しなくてもよいが、これら2つのエピトープは、cTnI分子の三次元立体配座構造において重複してもよい。
この例は、本明細書に開示し特許請求する発明概念に従って3つの抗体/結合断片を利用するBNP免疫測定における使用のためのエピトープの組合せを提供する。図18は、BNPの32アミノ酸配列(配列番号17を割り当てられている)及びこの非限定的な例の3つのエピトープを描写する。
以下に例示的な実施態様を示す。しかしながら、本明細書に開示し特許請求する発明概念は、その適用において、特定の実験、結果及び実験手順に限定されないことが理解されるべきである。むしろ、例示的実施態様は、単に、種々の実施態様の1つとして提供されるにすぎず、例示的であり、完全なものでないことを意図している。
(a)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物、それに会合した第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物。ここで、前記第一の抗体又はその結合断片は、被検体の第一のエピトープに特異的に結合し、それによって前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が前記第一の抗体又はその結合断片を介して前記被検体に間接的に結合できる検出抗体である。
(b)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第二の抗体又はその結合断片を含有する第二組成物。ここで、前記第二の抗体又はその結合断片は、前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合し、それによって一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が前記第二の抗体又はその結合断片を介して前記被検体に間接的に結合できる検出抗体であり、ここで前記第一及び第二のエピトープは、少なくとも部分的に重複して、この結果、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない。
及び
(c)第三の抗体又はその結合断片を含有してなる第三組成物。ここで、前記第三の抗体又はその結合断片は、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができ、このとき、前記第三の抗体又はその結合断片は、励起状態で一重項酸素を発生することができる増感剤と会合することができ、これによって、前記第三の抗体又はその結合断片の増感剤との会合により、前記増感剤の前記被検体との間接的な結合が可能になる。
(a)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号2内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号3〜7のうちの1つの内部でエピトープに特異的に結合する。
(b)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号3内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号2及び4〜7のうちの1つの内部でエピトープに特異的に結合する。
(c)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号4内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号2〜3及び5〜7のうちの1つの内部でエピトープに特異的に結合する。
(d)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号5内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号2〜4及び6〜7のうちの1つの内部でエピトープに特異的に結合する。
(e)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号6内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号2〜5及び7のうちの1つの領域内でエピトープに特異的に結合する。
(f)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、配列番号7内において、重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片は、配列番号2〜6のうちの1つの内部でエピトープに特異的に結合する。
(i)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11の1つのエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11の1つのエピトープに特異的に結合し、前記第三抗体又はその結合断片が配列番号10のエピトープに特異的に結合する。
及び、
(ii)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号12及び13のエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号12及び13のエピトープに特異的に結合し、前記第三抗体又はその結合断片が配列番号14のエピトープに特異的に結合する。
(i)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物。ここで、前記第一の抗体又はその結合断片は、特異的な被検体の第一のエピトープに特異的に結合し、それにより前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が、前記第一抗体又はその結合断片を介して、前記被検体に間接的に結合することができる検出抗体である。
(ii)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第二の抗体又はその結合断片を含有してなる第二組成物。ここで、前記第二の抗体又はその結合断片は、前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合し、それにより前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が、前記第二抗体又はその結合断片を介して、前記被検体に間接的に結合することができる検出抗体であり、そして、前記第一及び第二のエピトープは、少なくとも部分的に重複して、この結果、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない。
(iii)第三の抗体又はその結合断片を含有する第三組成物であって、前記第三の抗体又はその結合断片は、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができる。
及び、
(iv)前記第三抗体又はその結合断片に会合することができる増感剤であって、励起状態で一重項酸素を発生することができる増感剤。ここで、前記第三抗体又はその結合断片の前記増感剤との会合により、前記増感剤の前記被検体への間接的結合が可能になる。
(a)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号2内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号3〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(b)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号3内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2及び4〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(c)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号4内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜3及び5〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(d)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号5内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜4及び6〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(e)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号6内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜5及び7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(f)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号7内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜6のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合する。
(i)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11のうちの1つのエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11のうちの1つのエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号10のエピトープに特異的に結合し、
(ii)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号12又は13のエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号12又は13のエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号14のエピトープに特異的に結合する、
マイクロ流体デバイス。
(a)同時に又は全てを若しくは一部分を逐次的に、下記を合一する工程。
(i)前記特定の被検体を含有していると推定される試料。
(ii)一重項酸素で活性化可能な化合物及びそれに会合している第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物。ここで、前記第一の抗体又はその結合断片が特定の被検体の第一のエピトープに特異的に結合する検出抗体である。
(iii)一重項酸素で活性化可能な化合物及びそれに会合している第二の抗体又はその結合断片を含有してなる第二組成物。ここで、前記第二の抗体又はその結合断片が前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合する検出抗体であり、且つ、前記第一及び第二のエピトープが少なくとも部分的に重複し、これにより、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない。
(iv)第三の抗体又はその結合断片を含有してなる第三組成物。ここで、前記第三の抗体又はその結合断片は、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができる。
(v)前記第三の抗体又はその結合断片と会合できる増感剤であって、励起状態で一重項酸素を発生することができる増感剤。
(b)(ii)、(iii)及び/又は(iv)を、試料内の被検体に結合させる工程。ここで、被検体分子、(ii)及び(iv)を含有してなる第一のサンドウィッチ錯体が形成され、もう1つの被検体分子、(iii)及び(iv)を含有してなる第二のサンドウィッチ錯体が形成され、且つ、(v)は、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中の(iv)と会合し、斯くして、増感剤を、(ii)及び(iii)の化学発光化合物に極めて接近させる。
(c)増感剤を活性化して、一重項酸素を発生させる工程。ここで、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する増感剤の活性化により、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する化学発光化合物が活性化される。
(d)前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する活性化された化学発光化合物により発生された化学発光の量を測定する工程。
(e)所望により、工程(b)〜(d)を繰り返す工程。
(f)このようにして生成された化学発光の量を分析することにより、前記被検体の存在及び/又は濃度を検出する工程。ここで、化学発光の量は、試料中の被検体の量に正比例する。
(a)前記第一及び第二の抗体又はその結合断片が配列番号内の重複するエピトープに特異的に結合し、第三の抗体又はその結合断片が配列番号3〜7のうちの1つのエピトープに特異的に結合し;
(b)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号3内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2及び4〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(c)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号4内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜3及び5〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(d)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号5内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜4及び6〜7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;
(e)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号6内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜5及び7のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合し;そして、
(f)前記第一及び第二抗体又はその結合断片が配列番号7内の重複するエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号2〜6のうちの1つの内部のエピトープに特異的に結合する;
方法。
(i)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11のうちの1つのエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号8、9及び11のうちの1つのエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号10のエピトープに特異的に結合し;そして、
(ii)前記第一の抗体又はその結合断片が配列番号12又は13のエピトープに特異的に結合し、前記第二の抗体又はその結合断片が配列番号12又は13のエピトープに特異的に結合し、前記第三の抗体又はその結合断片が配列番号14のエピトープに特異的に結合する;
方法。
SB:センシビーズ
Ab1:検出抗体
Ab2:検出抗体
10:マイクロ流体デバイス
12:ハウジング
14:区画
16:第一組成物
18:第二組成物
20:第三組成物
22:増感剤
10a:マイクロ流体デバイス
12a:ハウジング
14a:第一区画
16a:第一組成物
18a:第二組成物
20a:第三組成物
22a:増感剤
24:第二区画
26:第三区画
28:読み取り室
40:マイクロ流体デバイス
42:ハウジング
44:区画
46:第一組成物
48:第二組成物
50:第三組成物
52:増感剤
54:試料適用室
56:入口経路
40a:マイクロ流体デバイス
42a:ハウジング
44a:第一区画
46a:第一組成物
48a:第二組成物
50a:第三組成物
52a:増感剤
54a:試料適用室
56a:入口経路
58:第二区画
60:試薬
80:マイクロ流体デバイス
82:ハウジング
84:試料適用室
86:入口経路
88:第一区画
90:第二区画
92:第一組成物
94:第二組成物
96:第三組成物
98:増感剤
110:マイクロ流体デバイス
112:ハウジング
114:試料適用室
116:入口経路
118:第一区画
120:第二区画
122:読み取り室
124:第一組成物
126:第二組成物
128:第三組成物
130:増感剤
132:追加の区画
134:試薬
110a:マイクロ流体デバイス
112a:ハウジング
114a:試料適用室
116a:入口経路
118a:第一区画
120a:第二区画
122a:読み取り室
124a:第一組成物
126a:第二組成物
128a:第三組成物
130a:増感剤
132a:追加の区画
134a:試薬
136:第三区画
200:マイクロ流体デバイス
202:ハウジング
204:試料適用室
206:第一入口経路
208:第二入口経路
210:第一区画
212:第二区画
214:第一組成物
216:第二組成物
218:第三組成物
220:増感剤
Claims (15)
- 特定の被検体のための化学発光検出システムを含有するキットであって、該キットが
(a)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物であって、前記第一の抗体又はその結合断片が、被検体の第一のエピトープに特異的に結合し、それによって前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が前記第一の抗体又はその結合断片を介して前記被検体に間接的に結合できる検出抗体である組成物、
(b)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第二の抗体又はその結合断片を含有する第二組成物であって、前記第二の抗体又はその結合断片が、前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合し、それによって一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が前記第二の抗体又はその結合断片を介して前記被検体に間接的に結合できる検出抗体であり、且つ、前記第一及び第二のエピトープは、少なくとも部分的に重複して、この結果、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない組成物、及び
(c)第三の抗体又はその結合断片を含有してなる第三組成物であって、前記第三の抗体又はその結合断片が、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができ、このとき、前記第三の抗体又はその結合断片は、励起状態で一重項酸素を発生することができる増感剤と会合することができ、これによって、前記第三の抗体又はその結合断片の増感剤との会合により、前記増感剤の前記被検体との間接的な結合が可能になる組成物を
含有してなるキット。 - 更に増感剤を含有してなり、第三組成物が前記第三の抗体又はその結合断片に会合した増感剤を更に含有してなる請求項1に記載のキット。
- 前記第一及び第二組成物のうちの少なくとも1つが、前記活性化された化学発光化合物によって励起された少なくとも1つの蛍光分子を、更に含有してなる請求項1又は2に記載のキット。
- (a)〜(c)の少なくとも1つが凍結乾燥された試薬の形態にあると更に定義される請求項1〜3のいずれか1項に記載のキット。
- 凍結乾燥された試薬の再構築のための賦形剤を更に含有してなる請求項4に記載のキット。
- マイクロ流体デバイスであって、
(i)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物であって、前記第一の抗体又はその結合断片が、特異的な被検体の第一のエピトープに特異的に結合し、それにより前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が、前記第一抗体又はその結合断片を介して、前記被検体に間接的に結合することができる検出抗体である第一組成物;
(ii)一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物及びそれに会合した第二の抗体又はその結合断片を含有してなる第二組成物であって、前記第二の抗体又はその結合断片が、前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合し、それにより前記一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が、前記第二抗体又はその結合断片を介して、前記被検体に間接的に結合することができる検出抗体であり、且つ、前記第一及び第二のエピトープは、少なくとも部分的に重複して、この結果、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない第二組成物;及び
(iii)第三の抗体又はその結合断片を含有する第三組成物であって、前記第三の抗体又はその結合断片は、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができる第三組成物;及び
(iv)前記第三抗体又はその結合断片に会合することができる増感剤であって、励起状態で一重項酸素を発生することができ、前記第三抗体又はその結合断片の前記増感剤との会合により、前記増感剤の前記被検体への間接的結合が可能になる増感剤;を
含有する少なくとも1つの区画を含有してなるマイクロ流体デバイス。 - それを通して試料が配置される入口経路を更に含有してなり、前記少なくとも1つの区画が前記入口経路と流体連通することができる請求項6に記載のマイクロ流体デバイス。
- 更に少なくとも2つの区画を含有してなるものであり、第一区画が(i)、(ii)及び(iii)を含有し、第二区画が(iv)を含有する請求項7に記載のマイクロ流体デバイス。
- それを通して試料が配置される入口経路を更に含有してなり、前記第一区画が前記入口経路と流体連通でき、前記第二区画が前記入口経路及び前記第一区画のうちの少なくとも1つと流体連通できる請求項8に記載のマイクロ流体デバイス。
- 前記入口経路及び前記少なくとも1つの区画と流体連通できる少なくとも1つの追加の区画を更に含有してなり、前記少なくとも1つの追加の区画が希釈剤を含有する請求項6〜9のいずれか1項に記載のマイクロ流体デバイス。
- 試料中の特定の被検体の存在及び/又は濃度を検出する方法であって、以下の工程を含有してなる方法。
(a)同時に又は、全てを若しくは一部分を、逐次的に、下記を合一する工程;
(i)前記特定の被検体を含有していると推定される試料;
(ii)一重項酸素で活性化可能な化合物及びそれに会合している第一の抗体又はその結合断片を含有してなる第一組成物であって、前記第一の抗体又はその結合断片が特定の被検体の第一のエピトープに特異的に結合する検出抗体である組成物;
(iii)一重項酸素で活性化可能な化合物及びそれに会合している第二の抗体又はその結合断片を含有してなる第二組成物であって、前記第二の抗体又はその結合断片が前記被検体の第二のエピトープに特異的に結合する検出抗体であり、且つ、前記第一及び第二のエピトープが少なくとも部分的に重複し、これにより、前記第一及び第二の抗体又はその結合断片は、両方ともが、単一の被検体分子に結合することはできない組成物;
(iv)第三の抗体又はその結合断片を含有してなる第三組成物であって、前記第三の抗体又はその結合断片は、前記第一及び第二エピトープに重複しない前記被検体の第三のエピトープに特異的に結合する捕捉抗体であり、これにより、単一の被検体分子が前記第三の抗体又はその結合断片並びに前記第一及び第二の抗体又はその結合断片の一つに結合することができる組成物;及び
(v)前記第三の抗体又はその結合断片と会合できる増感剤であって、励起状態で一重項酸素を発生することができる増感剤。
(b)(ii)、(iii)及び/又は(iv)を、試料内の被検体に結合させる工程であって、
被検体分子、(ii)及び(iv)を含有してなる第一のサンドウィッチ錯体が形成され、もう1つの被検体分子、(iii)及び(iv)を含有してなる第二のサンドウィッチ錯体が形成され、且つ、(v)が、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中の(iv)と会合し、斯くして、増感剤を、(ii)及び(iii)の化学発光化合物に極めて接近させる工程;
(c)増感剤を活性化して、一重項酸素を発生させる工程であって、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する増感剤の活性化により、前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する化学発光化合物が活性化される工程;
(d)前記第一及び第二サンドウィッチ錯体中に存在する活性化された化学発光化合物により発生された化学発光の量を測定する工程;
(e)所望により、工程(b)〜(d)を繰り返す工程;及び
(f)このようにして生成された化学発光の量を分析することにより、前記被検体の存在及び/又は濃度を検出する工程であって、化学発光の量は、試料中の被検体の量に正比例する工程。 - 前記増感剤が光増感剤であり、且つ、工程(c)が光照射により光増感剤を活性化するものと更に定義される請求項11に記載の方法。
- (ii)〜(iv)のいずれかを合一するのに先立って前記試料を分離工程に付する工程を更に含有してなる請求項12に記載の方法。
- 前記第一及び第二組成物の一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が同一である請求項11〜13のいずれか1項に記載の方法。
- 前記第一及び第二組成物の一重項酸素で活性化可能な化学発光化合物が異なるものである請求項11〜14のいずれか1項に記載の方法。
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