JP2017506514A - 癌の治療に使用するための１６８ａ−ｔ２のポリペプチドフラグメントおよびそれらを含む組成物 - Google Patents

Abstract

本発明は、抗血管新生活性を有する特定のポリペプチド、および癌を治療するためのそれらの用途に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、血管新生関連疾患、より具体的には癌および／または腫瘍の治療の分野に関する。本発明は、より具体的には、細胞がＣＤ９パートナー１（ＣＤ９Ｐ−１）を発現する癌および／または腫瘍を治療する抗血管新生活性を有するポリペプチドに関する。

血管新生は、既存の血管から新規の血管を形成させる工程に対応する。血管新生は、内皮細胞の活性化と共に開始し、内皮細胞の遊走、増殖、および毛細血管への分化を含む。血管新生は、増殖、発達、および創傷治癒において正常かつ重要な工程であるが、この工程は、癌および腫瘍の進行にも鍵となる役割を果たし得る。実際に、新規の血管形成は、多くの場合、腫瘍により放出された分子のシグナリングにより刺激され、これにより栄養素および酸素の供給、および無駄な産物を除去するための新規に形成された血管のネットワークが亢進される。よって、腫瘍誘導型血管形成は、腫瘍の増殖およびおそらくは離れた部位への腫瘍の転移をもたらす。結果として、抗血管新生化合物の開発は、制癌剤の開発における主な焦点となっている。血管新生を標的化するいくつかの化学療法用の分子がすでに市場で入手可能である。これらのうち、よく知られた血管新生阻害剤として、アンジオスタチン、エンドスタチン、インターフェロン、血小板因子４、プロラクチン１６ｋＤａフラグメント、トロンボスポンジン、ＴＩＭＰ−１（メタロプロテアーゼ−１の組織阻害剤）、ＴＩＭＰ−２およびＴＩＭＰ−３、ならびに、たとえばコンブレスタチン（Ｃｏｍｂｒｅｓｔａｔｉｎ）Ａ４、ＥＭＤ１２１９７４、ＴＮＰ−４７０、スクアラミン、サリドマイド、インターフェロン−α、抗ＶＥＧＦ抗体などの他の薬剤が挙げられる。にもかかわらず、これら薬剤の有効性は依然として十分ではなく、その用途は、多くの場合有害な二次的効果を伴う。よって、有効性が増大しており、浸潤性または毒性が少なく、かつ回復率の増加をもたらす代替的な治療が依然として必要とされている。

国際特許公開公報第０３／０８０１０５号は、血管新生の調節に関与する５つの遺伝子、より具体的にはＣＤ９パートナー１「ＣＤ９Ｐ−１」としても知られている「タンパク質１６８Ａ」をコードする遺伝子「１６８」を記載している。特に、国際特許公開公報第０３／０８０１０５号は、タンパク質１６８Ａが血管新生の活性化に関与しており、たとえばＴＮＦ−αなどの血管新生誘導因子で刺激した内皮細胞で発現することを開示している。また、国際特許公開公報第０３／０８０１０５号は、遺伝子１６８の発現の阻害が、毛細血管の形成の阻害をもたらすことを記載している。

国際特許公開公報第２００８／１３８８９４号は、タンパク質１６８Ａの様々な切断型を開示しており、このうちのタンパク質１６８Ａ−Ｔ２は、タンパク質１６８Ａの細胞外ドメインのフラグメントに対応する。国際特許公開公報第２００８／１３８８９４号は、タンパク質１６８Ａ‐Ｔ２（以下ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３と同定）が、用量依存的に、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトの内皮細胞の増殖と、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける毛細血管の形成の両方を阻害し得ることをさらに開示している。さらに、この出願は、１６８Ａ−Ｔ２が、ｉｎ ｖｉｔｒｏで内皮細胞の遊走の阻害を用量依存的に誘導し得ることを開示している。よって、国際特許公開公報第２００８／１３８８９４号に開示された結果により、１６８Ａ−Ｔ２は、抗ＶＥＧＦ ｍＡｂおよび／またはＶＥＧＦ受容体（ＫＤＲ）系の同定されたペプチドよりも少なくとも６００倍効力がある強力な抗血管新生化合物であると思われる。最終的に、国際特許公開公報第２００８／１３８８９４号は、タンパク質１６８Ａ−Ｔ２は、ｉｎ ｖｉｔｏにおける強力な抗腫瘍活性、およびたとえばシスプラチンなどの他の化学療法剤との併用での強力な相乗的活性を有することを開示している。

さらに、ＧＳ−１６８ＡＴ２（１６８Ａ−Ｔ２のタグ付けした形態）でのＮＣ−Ｈ４６０を異種移植したヌードマウスの処置により、腫瘍の増殖が顕著に阻害され、腫瘍におけるＣＤ９のｉｎ ｖｉｖｏでのダウンレギュレーションがもたらされたことが示された（Ｇｕｉｌｍａｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， １０４： ４９６−５０４）。

ＣＤ９は、最も研究されたテトラスパニンであり、膜の融合、分化、および細胞の運動性を含む複数の細胞の事象で機能することが知られており、転移の鍵となる役割を有していると考えられている。臨床的観察は、ＣＤ９のダウンレギュレーションが、固形腫瘍の進行と関連することを示唆している。テトラスパニンは、大きさの異なる２つの細胞外ドメインを表す４つの膜貫通ドメインを含むタンパク質ファミリーを構成しており、血管新生、細胞の遊走、細胞‐細胞の接触および融合を含む多くの生理的な工程に関与している。テトラスパニンの機能は、互いと相互作用し、かつ他の様々な他の表面タンパク質と相互作用することにより、テトラスパニンウェブと呼ばれる分子の相互作用のネットワークを形成する能力に関連すると考えられている。ＣＤ９パートナー１（「ＣＤ９Ｐ−１」、「ＦＰＲＰ」、または「ＥＷＩ−Ｆ」としても知られている）は、ＣＤ９、ＣＤ８１、およびＣＤ１５１と結合し、よってテトラスパニンの中に局在化する。

さらに、ＣＤ９Ｐ―１の発現が、血管新生に必要であり、タンパク質ＧＳ−１６８ＡＴ２（ＣＤ９Ｐ−１の切断型）は、ヒト内皮細胞（ｈＥＣ）の増殖、遊走、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏでの血管新生、ならびにｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖を用量依存的に阻害することが示された。特に、ＣＤ９Ｐ−１の発現の低減において、細胞表面でＣＤ９およびＣＤ１５１をダウンレギュレートすることによる作用をＧＳ−１６８ＡＴ２が行ったことが提唱された（Ｃｏｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， ２０１１， Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ， １０５：１００２−１０１１）。

１６８Ａ−Ｔ２は、ＣＤ９、ＣＤ１５１、およびＣＤ９Ｐ−１の分解をもたらす、テトラスパニンウェブの強力な混乱を誘導することが示されていた。よって、１つのテトラスパニンのみを特異的に標的化する治療上の解決策を提供することに関心が集まっている。

驚くべきことに、本発明者らは、１６８Ａ−Ｔ２の配列の中に含まれている２つのペプチド（以下それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１および２のＰ３およびＰ４）は、それ自体が抗血管新生活性を実質的に有することを発見した。よって、以下で提示されるデータは、これらペプチドが、血管新生関連疾患の治療のため、より具体的には癌および／または腫瘍を治療するための、主な抗腫瘍剤として、または主な細胞毒性薬に対する付加的な共同療法として使用され得ることを示している。驚くべきことに、上記ペプチドは、ＣＤ９およびＣＤ９Ｐ−１の細胞内レベルを変化させないまま、ＣＤ１５１の分解のみをもたらすことにより、テトラスパニンウェブ（１６８Ａ−Ｔ２で入手）の破壊（ｄｅｓｔｒｕｃｔｕｒａｔｉｏｎ）からもたらされる有害な作用を限定することが示された。さらに好都合なことに、上記ペプチドは、最先端の抗ＣＤ１５１抗体とは対照的に、細胞が血管新生状態下にある場合のみ（すなわち細胞がＣＤ９−Ｐ１を発現する場合のみ）、阻害活性を発揮することが示された。よって、ペプチドＰ３およびＰ４は、たとえば、組み換えエンドスタチンの欠点（大量に生成することが困難であること、長期間の保存での生物学的活性の喪失、二次的効果をもたらす患者への投与など）を伴わず、主な血管新生阻害剤であるエンドスタチンの発現を誘導することができるため、今まで知られている癌治療に対する、予測されていなかった有益な代替物を構成している。

よって、本発明は、
（ｉ）配列ＧＮＹＹＣＳＶＴＰＷＶＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のペプチドと、
（ｉｉ）配列ＩＨＳＫＰＶＦＩＴＶＫＭＤＶＬＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）のペプチドと、
（ｉｉｉ）それらの機能的なフラグメントまたは変異体または誘導体と
からなる群から選択される少なくとも１つのペプチドを含み、
上記ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のうち５０未満、４０未満、好ましくは３０未満、好ましくは２０未満の連続したアミノ酸を含む、
ポリペプチドに関する。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、抗血管新生活性を有する。

特定の実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドの両方を含む。本発明の特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドからなる。本発明の別の特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドからなる。

本発明の一実施形態では、上記ポリペプチドは、リン酸基、酢酸基、脂質または糖の基などの１つもしくは複数の官能基の付加により、かつ／または１つもしくは複数の保護基の付加により修飾されている。

一実施形態では、上記ポリペプチドは、抗腫瘍活性をさらに有する。

さらに本発明は、上述のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドに関する。

さらに本発明は、上述のポリペプチドまたはポリヌクレオチドを含む医薬組成物に関する。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤をさらに含む。

さらに本発明は、上述のポリペプチドまたはポリヌクレオチドと、少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤とを含む医薬組成物に関する。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの細胞毒性薬、化学療法剤、または抗癌剤をさらに含む。本発明の特定の実施形態では、医薬組成物は、シスプラチンからなる群から選択された白金錯体をさらに含む。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、少なくとも１つの抗血管新生剤をさらに含む。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドを含むポリペプチド、または
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドを含む第１のポリペプチドおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドを含む第２のポリペプチド
を含む。

特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドからなるポリペプチドを含む。本発明の別の特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドからなるポリペプチドを含む。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、局所投与、全身投与、経口投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、または腹腔内投与に適した形態である。

さらに本発明は、血管新生関連疾患の治療に使用するための本発明に係るポリペプチドまたは医薬組成物に関する。

一実施形態では、本発明は、ヒトまたは動物の身体における癌および／または腫瘍の治療に使用するための、本発明に係るポリペプチドまたは医薬組成物に関する。

一実施形態では、本発明は、癌細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍の治療に使用するための、本発明に係るポリペプチドまたは医薬組成物に関する。

一実施形態では、本発明は、その必要がある対象の癌および／または腫瘍の治療に使用するためのポリペプチドまたは医薬組成物に関する。ここでは癌細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現し、治療の前に、上記対象の癌および／または腫瘍の細胞を含む試料でＣＤ９Ｐ−１の発現を試験する。

詳細な説明
よって、本発明は、上記ポリペプチドが、ペプチド配列ＧＮＹＹＣＳＶＴＰＷＶＫＳ（Ｐ３−ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）；ＩＨＳＫＰＶＦＩＴＶＫＭＤＶＬＮＡ（Ｐ４−ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）を含み、もしくはからなり、またはその機能的なフラグメントもしくは変異体もしくは誘導体であることを特徴とし、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のうち５０未満、４５未満、４０未満、３５未満、３０未満、２５未満、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満、１６未満、１５未満、１４未満、１３未満の連続したアミノ酸を含むことを特徴とする、ポリペプチドを指す。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは抗血管新生活性を有する。

本明細書中に使用されるように、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含むポリペプチドの「機能的なフラグメント」は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のフラグメント、またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と同一の機能を有する、好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の抗血管新生活性を有するＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１もしくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含むポリペプチドのフラグメントを指す。

本明細書中に記載されるように、用語「ポリペプチド」は、定義された順序でのアミノ酸の結合であって、少なくとも１０、１５、２０、２５、５０、７５〜１００個のアミノ酸のうち、結合から形成された分子を意味する。本発明に係る「単離した」ポリペプチドは、天然の環境から取り除かれたポリペプチド、または当業者により設計されたポリペプチドを指す。

一実施形態では、本発明に係るポリペプチドは、少なくとも１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、７５、８０、９０、または１００個の長さのアミノ酸を有する。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、１３〜５０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３〜４０個のアミノ酸を含む。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３〜３０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３〜２５、２４、２３、２２、または２１個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３〜２０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３〜１９、１８、１７、１６、１５、または１４個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１３個のアミノ酸を含む（またはからなる）。

別の実施形態では、本発明のポリペプチドは、１７〜５０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１７〜４０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１７〜３０個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１７〜２５、２４、２３、２２、または２１個のアミノ酸を含む（またはからなる）。本発明の別の実施形態では、ポリペプチドは、１７〜２０、１９、または１８個のアミノ酸を含む（またはからなる）。

本発明の一実施形態では、上記ペプチドは、５０、４０、３０、２５、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３のアミノ酸長を有し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチド配列を含み、上記ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のうち、５０未満、４５未満、４０未満、３５未満、３０未満、２５未満、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満、１６未満、１５未満、１４未満、１３未満の連続したアミノ酸を含む。

本発明の別の実施形態では、上記ペプチドが、５０、４０、３０、２５、２２、２０、１９、１８、１７個の長さのアミノ酸を有し、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチド配列を含み、上記ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３のうち５０未満、４５未満、４０未満、３５未満、３０未満、２５未満、２０未満、１９未満、１８未満、１７未満の連続したアミノ酸を含む。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、およびＣ末端に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれ以上のアミノ酸、ならびに／またはＮ末端に２、３、４、５、６、７、８、９、１０、もしくはそれ以上のアミノ酸を含む。

本明細書中に使用されるように、「アミノ酸」は、当業者に良く知られている完全名、３文字のコード、または１文字のコードにより表されている。ペプチドのアミノ酸残基は、以下のように略記されている：フェニルアラニンはＰｈｅまたはＦであり、ロイシンはＬｅｕまたはＬであり、イソロイシンはＩｌｅまたはＩであり、メチオニンはＭｅｔまたはＭであり、バリンはＶａｌまたはＶであり、セリンはＳｅｒまたはＳであり、プロリンはＰｒｏまたはＰであり、スレオニンはＴｈｒまたはＴであり、アラニンはＡｌａまたはＡであり、チロシンはＴｙｒまたはＹであり、ヒスチジンはＨｉｓまたはＨであり、グルタミンはＧｌｎまたはＱであり、アスパラギンはＡｓｎまたはＮであり、リジンはＬｙｓまたはＫであり、アスパラギン酸はＡｓｐまたはＤであり、グルタミン酸はＧｌｕまたはＥであり、システインはＣｙｓまたはＣであり、トリプトファンはＴｒｐまたはＷであり、アルギニンはＡｒｇまたはＲであり、グリシンはＧｌｙまたはＧである。

本明細書中で使用されるように、用語「アミノ酸」は、天然および合成のアミノ酸の両方、およびＤアミノ酸およびＬアミノ酸の両方を含む。「標準的なアミノ酸」または「天然に存在するアミノ酸」は、一般的に天然に存在するペプチドで見出される２０鎖のＬアミノ酸のいずれかを意味する。「非標準的なアミノ酸残基」は、合成して調製されているか、または天然の供給源に由来するかどうかにかかわらず、標準的なアミノ酸以外のいずれかのアミノ酸を意味する。たとえば、ナフチルアラニンは、合成を促進するためにトリプトファンと置換することができる。置換できる他の合成アミノ酸として、限定するものではないが、Ｌ−ヒドロキシプロピル、Ｌ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニル、Ｌ−α−ヒドロキシリシル、およびＤ‐α―メチルアラニル、Ｌ−α−メチルアラニルなどのαアミノ酸、βアミノ酸、ならびにイソキノリルが挙げられる。

本明細書中で使用されるように、「アミノ酸」は、限定するものではないが、塩、アミノ酸誘導体（アミドなど）、および置換基を含む、化学的に修飾されたアミノ酸をも含む。本発明のポリペプチド内、特にカルボキシ末端またはアミノ末端に含まれるアミノ酸は、本発明のポリペプチドの活性に有害な影響を与えることなく、ポリペプチドの循環半減期を変化させることができる他の化学基とのメチル化、アミド化、アセチル化、または置換により修飾することができる。さらに、ジスルフィド結合が本発明のポリペプチドに存在してもよく、または存在しなくてもよい。

本発明のポリペプチドは、天然の標準的なアミノ酸または非標準的なアミノ酸を含んでもよい。ポリペプチドの模倣物は、以下の修飾を有するポリペプチド：ｉ）ペプチジル―Ｃ（Ｏ）ＮＲ結合のうちの１つまたは複数が、ＣＨ_２−カルバメート結合（−ＣＨ_２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ−）、ホスホネート結合、−ＣＨ_２−スルホンアミド（−ＣＨ_２−Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ−）結合、尿素（−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨ−）結合、−ＣＨ_２−二級アミン結合などの非ペプチジル結合により、またはアルキル化ペプチジル結合（−Ｃ（Ｏ）ＮＲ−）を用いて置換されており、ＲがＣ１〜Ｃ_４アルキルである、ポリペプチド；ｉｉ）Ｎ末端が、−ＮＲＲ^１基、−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基、−ＮＲＣ（Ｏ）ＯＲ基、−ＮＲＳ（Ｏ）_２Ｒ基、−ＮＨＣ（Ｏ）ＮＨＲ基に誘導体化されており、ＲおよびＲ^１が水素であるポリペプチド、またはＲおよびＲ^１が両方とも水素ではない場合はＣ_１〜Ｃ_４アルキルである、ポリペプチド；ｉｉｉ）Ｃ末端が、−Ｃ（Ｏ）Ｒ^２に誘導体化されており、Ｒ^２が、Ｃ１〜Ｃ_４アルコキシおよび−ＮＲ^３Ｒ^４からなる群から選択されており、Ｒ^３およびＲ^４が、独立して、水素およびＣ_１〜Ｃ_４アルキルからなる群から選択されている、ポリペプチドを含む。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、またはその変異体を含む。一実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の変異体は、抗血管新生活性を有し、好ましくはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と等価の抗血管新生活性を有する。

一実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の変異体は、それぞれＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と比較して、保存的アミノ酸置換基を含む。

本明細書中で使用されるように、用語「保存的アミノ酸置換基」は、以下の５つの群：
Ｉ．小分子の脂肪族、非極性またはわずかに極性の残基：Ａｌａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ；
ＩＩ．極性の、負に荷電している残基およびそれらのアミド：Ａｓｐ、Ａｓｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｎ；
ＩＩＩ．極性の、正に荷電している残基：Ｈｉｓ、Ａｒｇ、Ｌｙｓ；
ＩＶ．大分子の、脂肪族、非極性の残基：Ｍｅｔ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、Ｃｙｓ；
Ｖ．大分子の、芳香族残基：Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ
のうちの１つの中でのアミノ酸の交換として定義されている。

別の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２と、それぞれ少なくとも７０％、好ましくは少なくとも７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、またはそれ以上の配列同一性を有するポリペプチドである。

別の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の変異体は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１またはＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２の配列由来の１、２、３、４、または５個のアミノ酸が、存在していない、またはいずれかのアミノ酸により置換されており、１、２、３、４、または５個のアミノ酸（連続している、または連続していない）が添加されているポリペプチドである。

２つ以上のポリペプチドの配列間の関係で使用される場合の用語「同一性」または「同一である」は、２つ以上のアミノ酸残基の鎖の間での一致数により決定される、ポリペプチド間の配列の関係性の度合いを指す。「同一性」は、特定の数学的なモデルまたはコンピュータプログラム（すなわちアルゴリズム）により提示されるギャップアライメント（ある場合には）と２つ以上の配列の小さな配列間での同一性の一致のパーセントを測定する。関連するポリペプチドの同一性は、既知の方法により容易に計算することができる。このような方法として、限定するものではないが、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８８； Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ： Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．， ｅｄ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９３； Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ １， Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．， ｅｄｓ．， Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ， １９９４； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９８７； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．， ｅｄｓ．， Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９９１；およびＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８， １０７３ （１９８８）に記載される方法が挙げられる。好ましい同一性を決定する方法は、試験した配列間で最も大きな一致を得るように設計されている。同一性を決定する方法は、公開されているコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定する好ましいコンピュータプログラム方法として、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ． Ｒｅｓ． ／２， ３８７ （１９８４）； Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， Ｗｉｓ．）、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、およびＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． ＭｏＩ． Ｂｉｏｌ． ２１５， ４０３−４１０ （１９９０））を含むＧＣＣプログラムパッケージが挙げられる。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）および他の供給源（ＢＬＡＳＴ Ｍａｎｕａｌ， Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ Ｂｅｔｈｅｓｄａ， Ｍｄ． ２０８９４； Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， ｓｕｐｒａ）から公開されている。またよく知られたＳｍｉｔｈ Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも、同一性を決定するために使用してもよい。

本明細書中で記載されるポリペプチドは、当業者に良く知られているように化学的合成または酵素的合成により合成して作製することができる。あるいは、本発明のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を、タンパク質発現ベクターに導入し、かつ適切な宿主生物（たとえば細菌、昆虫細胞など）で産生させ、次に精製することができる。追加的なポリペプチド（「タグ」）を、ポリペプチドを精製または同定または精製するために付加することができる。タンパク質のタグにより、たとえばポリペプチドを高い親和性でマトリックスに吸着させ、次に複合体を全く溶出させることなく適切なバッファーでストリンジェント洗浄し、その後、吸着した複合体を選択的に溶出させることが可能となる。当業者に知られているタンパク質タグの例として、（Ｈｉｓ）_６タグ、Ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、赤血球凝集素タグ、グルタチオントランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、親和性キチン結合タグを有するインテイン、またはマルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグがある。これらのタンパク質タグは、Ｎ末端、Ｃ末端、および／または内部に位置することができる。

本発明の一実施形態では、上記の本明細書中で記載されるポリペプチドは、たとえば、リン酸基、酢酸基、脂質または糖の基などの１つもしくは複数の官能基の付加により、および／または１つもしくは複数の保護基の付加により、当該分野でよく知られた方法により修飾されている。

たとえば、ポリペプチドは、リン酸塩、酢酸塩、または様々な脂質および糖などの１つまたは複数の官能基の付加により修飾することができる。また本発明のポリペプチドは、ポリペプチド誘導体として存在することもできる。用語「ポリペプチド誘導体」は、アミノ基（−−ＮＨ−−）、より具体的にはペプチド結合を有する化合物を指す。ポリペプチドは、置換されたアミドとみなされてもよい。アミド基のように、ペプチド結合は、高い度合いの共鳴安定化を示す。ペプチド結合のＣ−Ｎ単結合は、概して、約４０％の二重結合の特徴を有し、Ｃ＝Ｏ二重結合は、約４０％の単結合の特徴を有する。「保護基」は、保護されていない官能基が関与する望ましくない反応（タンパク質分解など）を防止する基である。アミノ保護基の特定の例として、ホルミル；トリフルオロアセチル；ベンジルオキシカルボニル；（オルトまたはパラ）クロロベンジルオキシカルボニルおよび（オルトまたはパラ）ブロモベンジルオキシカルボニルなどの置換ベンジルオキシカルボニル；およびｔ−ブトキシカルボニルおよびｔ−アミルオキシカルボニル（ａｍｉｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）などの脂肪族オキシカルボニルが挙げられる。アミノ酸のカルボキシル基は、エステル基への変換により保護することができる。エステル基は、ベンジルエステル、メトキシベンジルエステルなどの置換ベンジルエステル；シクロヘキシルエステル、シクロヘプチルエステル、またはｔ−ブチルエステルなどのアルキルエステルを含む。グアニジノ部分は、たとえ保護基を必要としなくても、ニトロ；またはトシル、メトキシベンゼンスルホニル、もしくはメチレンスルホニルなどのアリールスルホニルにより保護されてもよい。イミダゾールの保護基として、トシル、ベンジル、およびジニトロフェニルが挙げられる。トリプトファンのインドール基は、ホルミル基により保護されていてよく、または保護されていなくてもよい。

ポリペプチドの修飾は、特に、ｉｎ ｖｉｖｏでのポリペプチドの寿命を改善することを目的としている。ある種類の修飾は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のポリペプチドのＮ末端またはＣ末端への付加である。ＰＥＧは、高い水溶性、溶液中の高い移動性、および低い免疫原性などのポリペプチドにとって理想的キャリアーとなる多くの特性を有することが、当業者に知られている。またこの修飾は、エキソペプチターゼからポリペプチドを保護することにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのポリペプチド全体の安定性を上げる。

エンドペプチダーゼまたはエキソペプチターゼによるポリペプチドの分解を防止するために使用される他の修飾は、アセチル化またはグリコシル化などのＮ末端の修飾、アミド化などのＣ末端の修飾、ならびにポリペプチド内の特定の部位の非天然のアミノ酸（βアミノ酸およびα−トリフルオロメチルアミノ酸）の使用を含む。

ポリペプチドの分子の大きさを増大するための別の代替例として、ヒトのガンマ免疫グロブリンのＦｃドメインへのポリペプチドの遺伝的融合、またはアルブミンへのポリペプチドの融合がある。

特定の実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドの両方を含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドに融合したＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドを含む。一実施形態では、本発明のポリペプチドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、またはそれ以上のアミノ酸のアミノ酸配列に対応する、リンカーにより分離したＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２を含む、またはからなる。一実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２は、本発明のポリペプチドにおいて同一に配向している。別の実施形態では、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２は、本発明のポリペプチドで対向して配向している。

本発明の別の特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドからなる。本発明の別の特定の実施形態では、ポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドからなる。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１または２のペプチドからなり、かつペグ化されている。

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つのポリペプチドを含む組成物である。

本発明の別の目的は、薬学的に許容可能な賦形剤と組み合わせた、本明細書中に上述するポリペプチドのうちの少なくとも１つを含む医薬組成物である。

本発明の別の目的は、本発明の少なくとも１つのポリペプチドを含む薬物である。

用語「薬学的に許容可能な」は、過剰な毒性を伴うことなく哺乳類に投与され得る化合物および組成物を指す。よって、「薬学的に許容可能な賦形剤」は、動物、好ましくはヒトに投与される場合に、逆反応、アレルギー反応、または他の望ましくない反応を生じない賦形剤を指す。これは、あらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤、ならびに吸収遅延剤などを含む。ヒトの投与では、調製物は、たとえばＦＤＡ局またはＥＭＡなどの規制局により要求されている無菌性、発熱性、一般的な安全性、および純度基準と一致すべきである。

適切な賦形剤として、水、生理食塩水、リンガー溶液、ブドウ糖溶液、およびエタノール溶液、グルコース、スクロース、デキストラン、マンノース、マンニトール、マンニトール、ソルビトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、リン酸塩、酢酸塩、ゼラチン、コラーゲン、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、植物油などが挙げられる。さらに、適切な保存剤、安定剤、抗酸化剤、抗菌剤、およびたとえばＢＨＡ、ＢＨＴ、クエン酸、アスコルビン酸、テトラサイクリンなどの緩衝剤などを含んでもよい。

本発明の組成物に使用し得る薬学的に許容可能な賦形剤の他の例として、限定するものではないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミンなどの血清タンパク質、リン酸塩などの緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分的なグリセリド混合物、水、プロタミンスルファート、リン酸水素、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛の塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどの塩または電解質、ポリアクレート、ワックス、ポリエチレン‐ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコール、および羊毛脂が挙げられる。

一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、たとえば界面活性剤（たとえばヒドロキシプロピルセルロース；たとえば水、エタノール、ポリオール（たとえばグリセロール、プロピレングリコール、および液体のポリエチレングリコールなど）、それらの適切な混合物、およびたとえばピーナッツ油およびゴマ油などの植物油を含む溶媒および分散媒体などの適切なキャリアー；たとえば糖または塩化ナトリウムなどの等張剤；たとえばレシチンなどのコーティング剤；たとえばモノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンなどの吸収遅延剤；たとえば塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、クロロブタノール、チメロサールなどの保存剤；たとえばホウ酸、および炭酸水素ナトリウムおよび炭酸水素カリウム、ホウ酸ナトリウムおよびホウ酸カリウム、炭酸ナトリウムおよび炭酸カリウム、酢酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどのバッファー；たとえばデキストラン４０、デキストラン７０、ブドウ糖、グリセリン、塩化カリウム、プロピレングリコール、塩化ナトリウムなどの等張化剤；たとえば亜硫酸水素ナトリウム、二亜硫酸ナトリウム、チオ硫酸ナトリウム、チオ尿素などの抗酸化剤および安定剤；たとえばポリソルベート８０、ポリソルベート２０、ポロクサマー２８２、およびチロキサポールなどの非イオン性湿潤剤または清澄剤；たとえばデキストラン４０、デキストラン７０、ゼラチン、グリセリン、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシメチルプロピルセルロース（ｙｄｒｏｘｍｅｔｈｙｌｐｒｏｐｙｌｃｅｌｌｕｌｏｓｅ）、ラノリン、メチルセルロース、ワセリン、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどの粘度変性剤などのいくつかの賦形剤を含んでもよい。

一実施形態では、組成物、医薬組成物、または薬物は、ポリペプチドの薬学的に許容可能な塩を含む。

薬学的に許容可能な塩として、無機塩基を含む塩、有機塩基を含む塩、無機酸を含む塩、有機酸を含む塩、塩基性または酸性のアミノ酸を含む塩などが挙げられる。無機塩基を含む塩の例として、ナトリウム塩およびカリウム塩などのアルカリ金属塩；カルシウム塩およびマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩；ならびにアンモニウム塩が挙げられる。有機塩基を含む塩の例として、トリメチルアミンを含む塩、トリエチルアミンを含む塩、ピリジンを含む塩、ピコリンを含む塩、２，６−ルチジンを含む塩、エタノールアミンを含む塩、ジエタノールアミンを含む塩、トリエタノールアミンを含む塩、シクロヘキシルアミンを含む塩、ジシクロヘキシルアミンを含む塩、およびＮ，Ｎ’‐ジベンジルエチレンジアミンを含む塩が挙げられる。無機酸を含む塩の例として、塩酸を含む塩、ホウ酸を含む塩、硝酸を含む塩、硫酸を含む塩、およびリン酸を含む塩が挙げられる。有機酸を含む塩の例として、ギ酸を含む塩、酢酸を含む塩、トリフルオロ酢酸を含む塩、フタル酸を含む塩、フマル酸を含む塩、シュウ酸を含む塩、酒石酸を含む塩、マレイン酸を含む塩、クエン酸を含む塩、コハク酸を含む塩、リンゴ酸を含む塩、メタンスルホン酸を含む塩、ベンゼンスルホン酸を含む塩、およびｐ−トルエンスルホン酸を含む塩が挙げられる。塩基性アミノ酸を含む塩の例として、アルギニンを含む塩、リジンを含む塩、およびオルニチンを含む塩を含む塩が挙げられる。酸性アミノ酸を含む塩の例として、アスパラギン酸を含む塩およびグルタミン酸を含む塩が挙げられる。適切な塩の列挙は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １７ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐａ．， ｐ １４１８， １９８５に開示されており、この開示全体が、参照として本明細書中に援用されている。

一実施形態では、薬物、組成物、または医薬組成物に存在する本発明のポリペプチドの量は、血管新生関連疾患を治療するため、好ましくは癌および／または腫瘍および／または感受性の癌および／または感受性の腫瘍を治療するために有効である。好ましくは、ポリペプチドは、薬物または組成物中で、０．０１〜９０重量％、好ましくは０．１〜１０重量％、より好ましくは１〜５重量％の量で存在する。この量は、当業者によりルーチンで調節可能であり、ここで当業者は回復させる患者に投与するための最良な量を選択することができる。

一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、本明細書に上述したポリペプチドを少なくとも１０ｍｇ、好ましくは少なくとも２０ｍｇ、より好ましくは少なくとも５０ｍｇを含む。好ましい実施形態では、組成物、医薬組成物、または薬物は、本発明のポリペプチドを１０〜３０００ｍｇ、好ましくは５０〜２０００ｍｇ、より好ましくは１００〜１５００ｍｇ含む。

特定の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドからなるポリペプチドを含む。本発明の別の特定の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドからなるポリペプチドを含む。本発明の別の特定の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ペグ化されているＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１または２のペプチドからなるポリペプチドを含む。

一実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチド、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドの２つのペプチドを含む、本明細書中上述したポリペプチドを含む。

別の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドを含む第１のポリペプチド、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドを含む第２のポリペプチドの２つのポリペプチドを含む。別の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドからなる第１のポリペプチド、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドからなる第２のポリペプチドの２つのポリペプチドを含む。

一実施形態では、本発明のポリペプチドは、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物に含まれている唯一の活性成分である。

別の実施形態では、本発明の組成物、医薬組成物、または薬物は、別の活性成分をさらに含み、よって本発明のポリペプチドは、上記別の活性成分に付加的な治療剤であってもよい。

本発明の特定の実施形態では、組成物、医薬組成物、または薬物は、細胞毒性薬、化学療法剤、または抗癌剤をさらに含む。

抗癌剤の例として、限定するものではないが、たとえばシクロホスファミド（ＣＴＸ；たとえばＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；たとえばＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；たとえばＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標））、オキサリプラチン（たとえばＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））、ブスルファン（たとえばＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなどのアルキル化反応を伴うアルキル化剤など；たとえばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；たとえばＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（ｔｈｉｏｃｇｕａｎｉｎｅ）（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（たとえばＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などの代謝拮抗剤など；たとえば、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；たとえばＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシンなどの抗生剤など；たとえばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンといったビンカアルカロイドなどのアルカロイド類など；たとえばパクリタキセル（たとえばＴＡＸＯＬ（登録商標））およびパクリタキセル誘導体などの他の抗腫瘍剤、細胞分裂阻害剤、デキサメタゾン（ＤＥＸ；たとえばＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））などのグルココルチコイド、およびたとえばプレドニゾンなどのコルチコステロイド、たとえばヒドロキシ尿素などのヌクレオシド酵素阻害剤、たとえばアスパラギナーゼなどのアミノ酸欠失酵素、ロイコボリン、フォリン酸、ラルチトレキセドおよび他の葉酸誘導体、ならびに類似の様々な抗腫瘍剤が挙げられる。また以下の薬剤：アミホスチン（たとえばＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ｌｏｒｎｕｓｔｉｎｅ）（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（たとえばＤＯＸＩＬ（登録商標））、ゲムシタビン（たとえばＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（たとえばＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（たとえばＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシ ７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンα、インターフェロンβ、ミトキサントロン、トポテカン、リュープロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、またはクロラムブシルを、追加的な薬剤として使用してもよい。

好ましい実施形態では、医薬組成物は白金錯体をさらに含む、上記白金錯体は、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン（ｔｒｉｐｌａｔｉｎ）、リポプラチン（ｌｉｐｏｐｌａｔｉｎ）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されてもよい。

一実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドとシスプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明に係る少なくとも１つのポリペプチドとカルボプラチンとを含む。

好ましい実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のポリペプチド（Ｐ３）とシスプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のポリペプチド（Ｐ４）とシスプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のポリペプチド（Ｐ３）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のポリペプチド（Ｐ４）と、シスプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のポリペプチド（Ｐ３）と、カルボプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のポリペプチド（Ｐ４）と、カルボプラチンとを含む。別の実施形態では、本発明の医薬組成物は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のポリペプチド（Ｐ３）と、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のポリペプチド（Ｐ４）と、カルボプラチンとを含む。

本発明の別の実施形態では、医薬組成物は、抗血管新生剤をさらに含む。抗血管新生剤の例として、限定するものではないが、抗ＶＥＧＦ−Ａ、抗ＶＥＧＦＲ（ＶＥＧＦＲ−１、ＶＥＧＦＲ−２またはＶＥＧＦＲ−３）、抗ＰＤＧＦＲ（αまたはβ）、抗ＥＧＦＲ、抗ｃ−ＫＩＴが挙げられる。一実施形態では、上記抗血管形成剤は、ベバシズマブ、ラニビズマブ、ペガプタニブ、ＶＥＧＦトラップ、アキシチニブ、イマチニブ、バタラニブ、ソラフェニブ、セマクサニブ、スニチニブ、バンデタニブ、アンジオスタチン、エンドスタチン、トロンボスポンジン−１、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されてもよい。

本発明の別の目的は、血管新生関連疾患を治療するため、好ましくはヒトまたは動物の身体の癌および／または腫瘍を治療するための本明細書中上述したポリペプチドまたは本明細書中上述した医薬組成物である。

一実施形態では、本発明は、癌細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍の治療に使用するための、本発明に係るポリペプチドまたは医薬組成物に関する。

本明細書中で使用されるように、用語「治療する」は、特定の障害もしくは疾患の予防、または特定の障害もしくは病態に関連する症状の軽減、および／または上記症状の予防もしくは排除を含む。よって、一実施形態では、用語「治療」は、治療的処置、および目的が標的化された病態または障害を予防または遅延（和らげる）ことである予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃまたはｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）手段の両方を指す。治療を必要とする対象は、すでに障害を有している対象および障害を有する傾向がある対象、または障害を予防すべき対象を含む。本発明に係るポリペプチドの治療量を投与した後に、患者が、以下：病原体の細胞数の減少；病原性のある細胞の総数のパーセントの減少；および／または特定の疾患または病態に関連する症状の１つまたは複数のある程度までの緩和；罹患率および死亡率の低下；ならびに生活の質の問題の改善のうちの１つまたは複数における、観察可能かつ／または測定可能な減少または不存在を示す場合に、対象または哺乳類は、感染症に関して成功して「治療」されている。疾患における治療の成功および改善を評価するための上記のパラメータは、医師によく知られているルーチンの手法により容易に測定可能である。

「予防的」処置は、疾患に関連した病態を発症するリスクを低下させる目的のために、疾患の徴候を呈していない対象または疾患の初期の徴候のみを呈する対象に投与する治療である。「治療的」処置は、これらの徴候を減少または排除させる目的のために、病態の徴候を呈する対象に投与する治療である。

化合物の「治療上有効量」は、化合物を投与する対象に有益な効果を提供するために十分な化合物の量である。よって、一実施形態では、「治療上有効量」は、疾患もしくは病態の１つもしくは複数の症状の進行、悪化、もしくは増悪を遅延もしくは停止するため、または、疾患もしくは病態の症状を軽減するため、または疾患もしくは病態を治癒するために必要かつ十分な本発明のポリペプチドの量に関する。

本発明の別の目的は、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療するための方法であって、本発明のポリペプチドの少なくとも１つの治療上有効量を、その必要がある対象に投与することを含む、方法である。

一実施形態では、本発明の方法は、血管新生を阻害することにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する方法である。別の実施形態では、本発明の方法は、内皮細胞の増殖、遊走および／または毛細血管への分化を阻害することにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する方法である。別の実施形態では、本発明の方法は、エンドスタチンの産生を増大させることにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する方法である。

別の実施形態では、本発明の方法は、腫瘍の増殖を阻害させる、かつ／もしくは腫瘍容積を限定もしくは減少させることにより、癌および／または腫瘍を治療する方法である。別の実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ９、ＣＤ９Ｐ−１、およびＣＤ８１の細胞内レベルを変化させないまま、ＣＤ１５１の分解をもたらすことにより、癌および／または腫瘍、好ましくは癌および／または腫瘍の細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍を治療する方法に関する。別の実施形態では、本発明の方法は、ＣＤ９Ｐ−１とＣＤ９との間、および／またはＣＤ９Ｐ−１とＣＤ１５１との間、および／またはＣＤ９とＣＤ１５１との間の相互作用を減少または阻害することにより、癌および／または腫瘍、好ましくは癌および／または腫瘍の細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍を治療する方法である。

本発明の別の目的は、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療するため、または治療に使用するための、本明細書中上述したポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物である。

好ましい実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物は、癌細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍の治療に使用するためのものである。一実施形態では、ＣＤ９Ｐ−１の発現が、治療の前に対象から入手した癌および／または腫瘍の細胞を含む試料で試験されている。

一実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物は、血管新生を阻害することにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。別の実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、または薬物は、内皮細胞の増殖、遊走、および毛細血管への分化を阻害することにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。別の実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、または薬物は、エンドスタチンの産生を増大させることにより、血管新生関連疾患、好ましくは癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。

別の実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物は、腫瘍の増殖を阻害、かつ／または腫瘍容積を限定もしくは減少させることにより、癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。別の実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、または薬物は、ＣＤ９、ＣＤ９Ｐ−１、およびＣＤ８１の細胞内レベルを変化させないまま、ＣＤ１５１の分解をもたらすことにより、癌および／または腫瘍、好ましくは癌および／または腫瘍の細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。別の実施形態では、上記ポリペプチド、組成物、または薬物は、ＣＤ９Ｐ−１とＣＤ９との間、および／または、ＣＤ９Ｐ−１とＣＤ１５１との間、および／またはＣＤ９とＣＤ１５１との間の相互作用を減少または阻害させることにより、癌および／または腫瘍、好ましくは癌および／または腫瘍の細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍を治療する際に使用するためのものである。

本発明によると、対象は、任意の動物、好ましくはヒトであってもよい。

「治療上有効用量または治療上有効量」は、所望の生物学的結果を誘導するために十分な用量レベルを指す。この結果は、疾患の徴候、症状、もしくは原因の軽減、または他のいずれかの望ましい生物学的なシステムの変化とすることができる。好ましくは、この用量または量は、癌細胞を殺傷することにより癌性病態を軽減するためには十分であり、さらに癌の増殖および／または転移の阻害をもたらす効果をも有する。

一実施形態では、本発明の方法は、本明細書中に上述のポリペプチドを少なくとも１０ｍｇ、好ましくは少なくとも２０ｍｇ、より好ましくは少なくとも５０ｍｇの投与を含む。好ましい実施形態では、本発明の方法は、１０〜３０００ｍｇ、好ましくは５０〜２０００ｍｇ、より好ましくは１００〜１５００ｍｇの本発明のポリペプチドの投与を含む。

一実施形態では、本発明に係る使用のための組成物、医薬組成物、または薬物は、少なくとも１０ｍｇ、好ましくは少なくとも２０ｍｇ、より好ましくは少なくとも５０ｍｇの量で投与される。好ましい実施形態では、本発明に係る使用のためのポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物は、１０〜３０００ｍｇ、好ましくは５０〜２０００ｍｇ、より好ましくは１００〜１５００ｍｇの量で投与される。

本発明の一態様では、本発明に係るポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物の治療上有効量は、約１〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日、好ましくは約３〜約４０ｍｇ／ｋｇ／日、より好ましくは約５〜約３０ｍｇ／ｋｇ／日、の範囲である。

一実施形態では、本発明に係る使用のためのポリペプチド、組成物、医薬組成物、または薬物は、１日に１回もしくは２回、または１週間に１、２、３、４、５、６回投与される。特定の実施形態では、本発明に係る使用のためのポリペプチド、組成物、または薬物は、少なくとも７日間、好ましくは少なくとも１０日間、より好ましくは少なくとも１２日間毎日投与される。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療され得る癌として、限定するものではないが、
心臓性癌：肉腫（血管肉腫、線維肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫）、粘液腫、横紋筋腫、線維腫、脂肪腫およびテラトーマ；
肺癌：非小細胞肺癌、気管支原性肺癌（扁平細胞、未分化小細胞、未分化大細胞、腺癌）、肺胞（細気管支）癌、気管支腺腫、肉腫、リンパ腫、軟骨性過誤腫（ｃｈｏｎｄｒｏｍａｔｏｓｉｓ ｈａｍａｒｔｏｍａ）、中皮腫；
胃腸癌：食道（扁平上皮癌、細胞腫、腺癌、平滑筋肉腫、リンパ腫）、胃（細胞腫、リンパ腫、平滑筋肉腫）、膵臓（管状腺癌、インスリノーマ、グルカゴン産生腫瘍、ガストリン産生腫瘍、カルチノイド腫瘍、ビポーマ）、小腸（腺癌、リンパ腫、カルチノイド腫瘍、カポジ肉腫、平滑筋腫、血管腫、脂肪腫、神経線維腫、線維腫）、大腸（腺癌、管状腺腫、絨毛腺腫、過誤腫、平滑筋腫）、結腸、結腸直腸、直腸；
泌尿生殖器癌：腎臓（腺癌、ウィルムス腫瘍（Ｗｉｈｎ’ｓ ｔｕｍｏｒ）［腎芽腫］、リンパ腫、白血病）、膀胱および尿道（扁平上皮癌、移行上皮癌、腺癌）、前立腺（腺癌、肉腫）、精巣（セミノーマ、テラトーマ、胚性癌腫、テラトカルシノーマ、絨毛癌、肉腫、間質細胞腫、線維腫、線維腺腫、腺腫様腫瘍、脂肪腫）；
肝臓癌：肝細胞腫（肝細胞癌）、胆管細胞癌、肝芽腫、血管肉腫、肝細胞腺腫、血管腫；
骨癌：骨肉腫（骨肉腫）、線維肉腫、悪性線維性組織球腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性リンパ腫（細網肉腫）、多発性骨髄腫、悪性巨細胞腫脊索腫、骨軟骨腫（骨軟骨性外骨症（ｏｓｔｅｏｃａｒｔｉｌａｇｉｎｏｕｓ ｅｘｏｓｔｏｓｅｓ））、良性軟骨腫、軟骨芽細胞腫、軟骨粘液性線維腫、類骨腫および巨細胞腫；
神経系癌：頭蓋（骨腫、血管腫、肉芽腫、黄色腫、変形性骨炎）、髄膜（髄膜腫、髄膜肉腫、神経膠腫症）、脳（星状細胞腫、髄芽腫、神経膠腫、上衣腫、胚細胞腫［松果体腫］、多形神経膠芽腫、乏突起神経膠腫、シュワン腫、網膜芽細胞腫、先天性腫瘍）、脊髄神経線維腫、髄膜腫、神経膠腫、肉腫）；
婦人科癌：子宮（子宮内膜癌）、頸部（子宮頸癌、腫瘍誘導性子宮頸部異形成）、卵巣（卵巣癌［漿液性嚢胞腺癌、粘液性嚢胞腺癌、未分類の腺癌］、顆粒膜−莢膜細胞腫瘍、セルトリ−ライディッヒ細胞腫瘍、未分化胚細胞腫、悪性テラトーマ）、外陰部（扁平上皮癌、上皮内癌、腺癌、線維肉腫、メラノーマ）、腟（腎明細胞癌、扁平上皮癌、ブドウ状肉腫［胎児性横紋筋肉腫］、卵管［細胞腫］）；
血液系癌：血液（骨髄性白血病［急性および慢性］、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、骨髄増殖性疾患、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群）、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫［悪性リンパ腫］；
皮膚癌：悪性メラノーマ、基底細胞癌、扁平上皮癌、カポジ肉腫（Ｋａｒｐｏｓｉ´ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、黒子異型母斑、脂肪腫、血管腫、皮膚線維腫、ケロイド、乾癬；ならびに
副腎の癌；神経芽細胞種
が挙げられる。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌として、限定するものではないが、乳癌、前立腺癌、結腸癌、結腸直腸癌、肺癌、非小細胞肺癌、脳癌、精巣癌、胃癌、膵臓癌、皮膚癌、小腸癌、大腸癌、咽頭癌、頭頸部癌、口腔癌、骨癌、肝臓癌、膀胱癌、腎臓癌、甲状腺癌、および血液癌が挙げられる。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌として、乳癌、前立腺癌、結腸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、肺癌、および非小細胞肺癌が挙げられる。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌として、乳癌、結腸癌（結腸直腸癌）、および肺癌（非小細胞肺癌）が挙げられる。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌として、リンパ腫および白血病が挙げられる。

本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌は、乳癌（細胞腫）、膀胱の細胞腫、結腸の細胞腫、口腔腫瘍、進行型の腫瘍、ヘアリーセル白血病、メラノーマ、進行型の頭頸部癌、転移性腎臓細胞、非ホジキンリンパ腫、転移性乳癌、乳腺癌、進行型メラノーマ、膵臓癌、胃癌、神経膠芽腫、肺癌、卵巣癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、小細胞肺癌、腎細胞腫、様々な固形腫瘍、多発性骨髄腫、転移性前立腺癌、悪性神経膠腫、腎細胞癌、リンパ腫、難治性転移性疾患、難治性多発性骨髄腫、子宮頸癌、カポジ肉腫、再発性未分化神経膠腫、および転移性結腸癌が挙げられる。

好ましくは、本発明のペプチド、組成物、および方法により治療し得る癌として、限定するものではないが、乳癌、カルチノイド、子宮頸癌、結腸直腸癌、子宮内膜癌、神経膠腫、頭頸部癌、肝臓癌、肺癌、メラノーマ、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、胃癌、甲状腺癌、および／または尿路上皮癌が挙げられる。

特定の実施形態では、本発明のペプチド、組成物、および方法により治療される癌は肺癌である。

本発明のポリペプチド、組成物、および方法は、腫瘍細胞の転移を予防または減少させるようにも意図されている。

さらに、血管新生が関連する疾患を治療または予防する方法であって、本発明のポリペプチドの治療上有効量を当該治療の必要がある対象に投与することを含む方法は、本発明の範囲内にある。

血管新生関連疾患は、眼性血管新生疾患（たとえば虚血性網膜症、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、網膜静脈閉塞症、加齢黄斑変性、角膜血管新生、血管新生緑内障）、アテローム性動脈硬化、関節炎、乾癬、肥満、およびアルツハイマー病が挙げられる。

本発明によると、本発明のポリペプチドは、経口投与、局所投与、または皮下注射、経皮注射、もしくは筋肉内注射、徐放性製剤の移植、静脈内注射、鼻腔内投与などを含む非経口手段により、投与してもよい。

本発明によると、本発明のポリペプチドを含む組成物は、水溶液、エマルジョン、クリーム、軟膏、懸濁剤、ゲル、リポソーム懸濁剤などであってもよい。

本発明の別の実施形態では、本発明のポリペプチドの少なくとも１つを含む組成物を、相乗的な活性を提供するために、たとえば抗血管新生剤、細胞毒性薬、化学療法剤、または抗癌剤などの血管新生関連疾患を治療するための少なくとも１つの他の活性成分と併用して使用してもよい。本発明の一態様では、本発明のポリペプチドまたはポリペプチドの少なくとも１つを含む組成物は、血管新生関連疾患の治療のため、より具体的には癌および／または腫瘍を治療するための、主要の抗血管新生剤、細胞毒性薬、化学療法剤、または抗癌剤にとって付加的な相乗的な治療として使用してもよい。

「相乗的な」は、有効成分を併用した効果の全体が、各有効成分の別々での効果よりも高いことを意味する。「付加的な相乗的な治療」は、単剤治療の治療上の効果を改善する相補的な作用機構を伴う薬剤を用いた併用療法を意味する。

抗癌剤の例として、限定するものではないが、たとえばシクロホスファミド（ＣＴＸ；たとえばＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、クロラムブシル（ＣＨＬ；たとえばＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；たとえばＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標））、オキサリプラチン（たとえばＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））、ブスルファン（たとえばＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなどのアルキル化反応を伴うアルキル化剤など；たとえばメトトレキサート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；たとえばＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオグアニン（ｔｈｉｏｃｇｕａｎｉｎｅ）（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（たとえばＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などの代謝拮抗剤など；たとえば、アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；たとえばＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミスラマイシンなどの抗生剤など；たとえばビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンといったビンカアルカロイドなどのアルカロイドなど；ならびにたとえばパクリタキセル（たとえばＴＡＸＯＬ（登録商標））およびパクリタキセル誘導体などの他の抗腫瘍剤、細胞分裂阻害剤、デキサメタゾン（ＤＥＸ；たとえばＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））などのグルココルチコイド、たとえばプレドニゾンなどのコルチコステロイド、たとえばヒドロキシ尿素などのヌクレオシド酵素阻害剤、たとえばアスパラギナーゼなどのアミノ酸欠失酵素、ロイコボリン、フォリン酸、ラルチトレキセド、および他の葉酸誘導体、および類似の様々な抗腫瘍剤が挙げられる。以下の薬剤：アミホスチン（たとえばＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ｌｏｒｎｕｓｔｉｎｅ）（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（たとえばＤＯＸＩＬ（登録商標））、ゲムシタビン（たとえばＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（たとえばＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（たとえばＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、クラドリビン、カンプトテシン、１０−ヒドロキシ ７−エチル−カンプトテシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンα、インターフェロンβ、ミトキサントロン、トポテカン、リュープロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペグアスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、またはクロラムブシルを、追加的な薬剤として使用してもよい。

化学療法のレジメンにおける上述の細胞毒性薬、化学療法剤、および他の抗癌剤の用途は、癌治療の分野では一般的に良好に特徴づけられており、本明細書中のこれらの用途は、一部を調整しつつ、耐性および有効性のモニタリングおよび投与経路および用量の制御を行うための同じ考えの下にある。有効な細胞毒性薬の典型的な用量は、製造社が推奨する範囲とすることができ、ここでｉｎ ｖｉｔｒｏで表される応答または動物モデルでの応答は、最大約１桁の濃度および／または量だけ減少することができる。よって、実際の用量は、培養した主要の悪性細胞または組織培養した組織試料のｉｎ ｖｉｔｒｏでの応答性、または適切な動物モデルで観察される応答に基づく、医師の判断、患者の病態、および治療方法の有効性に依存する。

特定の実施形態では、上述の治療方法に関連した本発明は、少なくとも１つの抗新生物剤または抗腫瘍剤を投与することをさらに含む。

特定の実施形態では、本発明は、
上述の少なくとも１つのポリペプチド、好ましくはＰ３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）またはＰ４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）；および
白金錯体
の有効量を、治療の必要がある対象に投与することを含む治療方法であって、
好ましくは、上記有効量が、癌または腫瘍の増殖を阻害するために十分である、
方法に関する。

上記白金錯体は、好ましくは、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチン、ネダプラチン、トリプラチン、リポプラチン（ｌｉｐｏｐｌａｔｉｎ）、およびそれらの組み合わせからなる群から選択されてもよい。

驚くべきことに、本出願人は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１からなるポリペプチドおよび白金錯体を両方投与することにより相乗効果が示されたことを発見した。

一実施形態では、上記ポリペプチドおよび上記白金錯体は同時に投与される。別の実施形態では、上記ポリペプチドおよび上記白金錯体は、順次投与される。好ましくは、上記ポリペプチドおよび上記白金錯体は、別々の経路により投与される。

本発明の治療方法の特定の実施形態では、治療すべき対象を、ＣＤ９Ｐ−１を発現する癌細胞の存在に関して試験する、またはあらかじめ試験した。

上記ＣＤ９Ｐ−１を発現する癌細胞の同定を、たとえばＣＤ９Ｐ−１に特異的なプライマー、配列、抗体を使用した、免疫組織化学的検査、ＰＣＲ、ｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーションなどの当該分野でよく知られたいずれかの方法により実行してもよい。抗ＣＤ９Ｐ−１抗体の例として、以下のＳＡＢ２７００３７９、ＰＡ０１７０７４（Ｓｉｇｍａ）がある。

本発明の目的は、本発明の治療の必要がある対象を選択するための診断キットである。一実施形態では、上記診断キットは、ＣＤ９Ｐ−１の発現を測定するためのイムノアッセイ試薬、またはプライマー、または配列を含む。ＣＤ９Ｐ−１は、コンパニオン診断試験のためのバイオマーカーとして使用される。

本発明の別の目的は、その必要がある対象において癌を治療する方法であって、
上記対象において、ＣＤ９Ｐ−１を発現する癌細胞の存在を評価することと、
ＣＤ９Ｐ−１を発現する癌細胞が検出される場合、次に、本明細書中上述するように上記対象を治療することと
を含む、方法である。

本発明の別の目的は、その必要がある対象において癌を治療する方法であって、
治療前に、ＣＤ９Ｐ−１を発現する癌細胞の存在を検出することを含む、上記対象のコンパニオン診断試験を行うことと、
コンパニオン診断試験の陽性的な結果により、本明細書中上述するように上記対象を治療することと
を含む、方法である。

また本発明は、癌細胞および／または腫瘍細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する、その必要がある対象における癌および／または腫瘍を治療する方法に関する。

本発明は、続く実験の詳細から良好に理解されるものである。しかしながら、当業者は、論述されている特定の方法および結果が、以下に続く特許請求の範囲により完全に記載される本発明の単なる例示であり、これに限定されるようには全く考えられていないことを容易に理解するものである。

ペプチド３および４によるＨＵＶＥＣ増殖の用量依存的な阻害を示すグラフである。ヒト内皮細胞の増殖は、溶媒の存在下で培養したＨＵＶＥＣからなる対照の増殖のパーセンテージで表されており、ペプチド濃度（μＭ）の関数として表されている。ペプチドＰＣＲ（ペプチド対照）、Ｐ３、およびＰ４で得た結果が比較されている。 Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）細胞外マトリックス上で培養したＨＵＶＥＣによる毛細血管ネットワークの形成にわたる、ペプチド３および４の阻害を示す写真である。毛細血管ネットワークは、顕微鏡（倍率４０倍）を用いて、カルセインで蛍光標識することにより裏付けられている。この結果は、６．５μＭ、１３μＭ、および３３μＭのペプチド濃度に関して示されている。溶媒は、対照として使用されている。 Ｐ３によるＨＵＶＥＣの阻害を示す写真である。のみの先端で作製した創傷にわたるＨＥＵＶＥＣの遊走が、溶媒（対照）、ＰＣＴ（６６μＭ）、またはＰ３（１３μＭ、３３μＭ、および６６μＭ）の存在下でｔ＝０時間およびｔ＝２０時間で比較されている。 腫瘍細胞を多く含み、かつ、ペプチドＰ３、Ｐ４、Ｐ１（１０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内注射、または溶媒単独により１２時間処置したスイス‐ヌード／ヌードマウスに皮下移植したｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）インプラントで測定したヘモグロビンのレベルを示すヒストグラムである。※※ｐ＜０．０１。 スイス‐ヌード／ヌードマウスに移植したＮＣＩ−Ｈ４６０細胞の腫瘍の増殖に関するｉｎ ｖｉｖｏでのペプチド溶媒およびＰ３の作用を示すヒストグラムである。腫瘍容積（ｍｍ^３）は、試験したペプチドの関数として表されている。溶媒は対照として使用されている。※※＜０．０１ Ｐ３および／またはシスプライチンの作用の下での腫瘍の増殖のｉｎ ｖｉｖｏでの阻害を示すヒトグラムである。治療（１３日間）の完了時の腫瘍容積（ｍｍ^３）は、投与した治療の関数として表されている。ＰＣＴ：対照ペプチド；ｃｉｓ：シスプラチン；ｎ．ｓ：非有意性 ＵＭＵＣ−３腫瘍細胞のライセート上のＣＤ９Ｐ−１の発現を示すウェスタンブロットの写真である。タンパク質の量を増加して充填した。レーン１：１０μｇ、レーン２：２０μｇ、レーン３：３０μｇ、レーン４：４０μｇ、レーン５：５０μｇ、レーン６：６０μｇ、レーン７：２５μｇのＢＴ２０ライセート（陽性対照）。ラインＡのウェスタンブロットは、抗ＣＤ９Ｐ−１モノクローナル抗体を用いて行った。ラインＢのウェスタンブロットは、抗アクチンモモノクローナル抗体を用いて行った。 ＵＭＵＣ−３細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖に関して、併用または単独で投与されたペプチドＰ３およびシスプラチンの作用を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、行った治療の関数として治療（１３日間）の完了時の腫瘍容積（ｍｍ^３）の分布を示す。溶媒は、対照として使用した。ｎ．ｓ．：非有意性；※ｐ＜０．０５ 図９Ａは、ＧＳ―１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたＨＵＶＥＣにおけるＣＤ９の分解を示す写真である。列は、インキュベーションから１分後、１５分後、３０分後、１時間後、または３時間後の抗ＣＤ９抗体を用いて得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図９Ｂは、ＧＳ−１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたＨＵＶＥＣにおけるＣＤ９の分解を示すヒストグラムである。ウェスタンブロットにおけるＣＤ９に対応するバンドは、定量化されており、ＧＡＰＤＨに関して正規化されており、ビヒクルでインキュベートしたＨＵＶＥＣに関するパーセンテージで表されている。ＣＤ９の量は、試験したペプチドの関数として表されている。 図９Ｃは、ビヒクルまたはＧＳ−１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたＨＵＶＥＣにおけるＣＤ１５１の分解を示す写真である。上部から下部までのラインは、抗ＣＤ１５１抗体、抗ＣＤ８１抗体、および抗ＧＡＰＤＨ抗体を用いて得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図９Ｄは、ＧＳ−１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたＨＵＶＥＣにおけるＣＤ１５１の分解を示すヒストグラムである。ウェスタンブロットにおけるＣＤ１５１に対応するバンドは、定量化されており、ＧＡＰＤＨに関して正規化されており、ビヒクルと共にインキュベートしたＨＵＶＥＣに関するパーセンテージで表されている。ＣＤ１５１の量は、試験したペプチドの関数として表されている。 図９Ｅ：ＧＳ−１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたヒトのＥＣにおけるＣＤ８１の分解を示すヒストグラムである。ウェスタンブロットにおけるＣＤ８１に対応するバンドは、定量化されており、ＧＡＰＤＨに関して正規されており、ビヒクルでインキュベートしたＨＵＶＥＣに関するパーセンテージで表されている。ＣＤ８１の量は、試験したペプチドの関数として表されている。 ＨＵＶＥＣにおけるＣＤ１５１、ＣＤ９、ＣＤ８１、ＣＤ９Ｐ−１、およびインテグリンβ１鎖の発現に関するペプチドＰ３のｉｎ ｖｉｔｒｏでの作用を示す写真である。ラインＡ〜Ｅは、それぞれ、抗ＣＤ１４１抗体（レーンＡ）；抗ＣＤ９抗体（レーンＢ）；抗ＣＤ８１抗体（レーンＣ）；抗ＣＤ９Ｐ−１抗体（レーンＤ）；抗β１インテグリン抗体（レーンＥ）、および抗ＧＡＰＤＨ抗体（レーンＦ）を用いて、３３μＭのＰ３と最大５時間インキュベートした後に得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図１１Ａは、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を多く含むｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）インプラントにおけるＰ３およびＰ４の存在下でのＣＤ１５１の分解を示す写真である。ライン１〜３は、抗ＣＤ１５１抗体（レーン１）；抗ＣＤ９Ｐ−１抗体（レーン２）、および抗ＧＡＰＤＨ抗体（レーン３）を用いて得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図１１Ｂは、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を多く含むｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）インプラントにおけるＰ３およびＰ４の存在下でのＣＤ１５１の分解を示すヒストグラムである。ウェスタンブロットで２８ｋＤａのバンドに対応するＣＤ１５１は、定量化されており、ＧＡＰＤＨに関して正規化されており、溶媒に関するパーセンテージで表されている。ＣＤ１５１の量は、試験したペプチドの関数として表されている。 図１２Ａは、スイスヌード／ヌードマウスを、ペプチド３および４で処置する場合のＮＣＩ−Ｈ４６０細胞の異種移植片におけるＣＤ１５１の分解を示す写真である。ライン１〜３は、抗ＣＤ１５１抗体（レーン１）；抗ＣＤ９Ｐ‐１抗体（レーン２）、および抗ＧＡＰＤＨ抗体（レーン３）を用いて得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図１２Ｂは、スイスヌード／ヌードマウスをペプチド３および４で処置した場合の、ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞の異種移植片におけるＣＤ１５１の分解を示すヒストグラムである。ウェスタンブロットのＣＤ１５１に対応するバンドは、定量化されており、ＧＡＰＤＨに関して正規化されており、溶媒単独で処置したマウスの異種移植片に関するパーセンテージで表されている。ＣＤ１５１の量は、試験したペプチドの関数として表されている。 ＨＵＶＥＣにおけるＰ３によるＣＤ９−ＣＤ９Ｐ−１、ＣＤ９Ｐ−１−ＣＤ１５１、およびＣＤ９−ＣＤ１５１の複合体の解離を表す写真である。ＥＧＭ２−ＭＶ培地中３３μＭのＰ３、ＰＣＴ、または溶媒で２時間インキュベートしたＨＵＶＥＣを、ｂｒｉｊ ９７バッファーに溶解し、次に、ＣＤ８１、ＣＤ９、またはＣＤ１５１を、対応する抗体で免疫沈降した。ラインＡ：免疫沈降したＣＤ８１、ＣＤ９、およびＣＤ１５１から抗ＣＤ９Ｐ‐１抗体で得たウェスタンブロットの結果。ラインＢ：免疫沈降したＣＤ８１、ＣＤ９、およびＣＤ１５１から抗ＣＤ９抗体で得たウェスタンブロットの結果。ラインＣ：免疫沈降したＣＤ８１、ＣＤ９、およびＣＤ１５１から抗ＣＤ１５１抗体で得たウェスタンブロットの結果。ＰＣＴ：対照のペプチド。ＩＰ：免疫沈降。 図１４Ａは、ｉｎ ｖｉｖｏでＰ３とインキュベートしたＨＵＶＥＣの上清におけるエンドスタチンの産生の増加を示すヒストグラムである。ＥＬＩＳＡにより定量化した上清中のエンドスタチンの濃度（細胞ライセート中のｎｇ／ｍｇのタンパク質で表されている）は、Ｐ３濃度の関数として表されている。※※ｐ＜０．０１（溶媒に対する非パラメトリックスチューデントアッセイ）。 図１４Ｂは、ｉｎ ｖｉｖｏでＰ３とインキュベートしたＨＵＶＥＣの上清におけるエンドスタチンの産生の増加を示す写真である。ウェスタンブロットの結果は、抗ＣＯＬ１８Ａ１ポリクローナル抗体により同一の容量の上清におけるエンドスタチンの免疫沈降の後に入手した。 図１５Ａは、ｉｎ ｖｉｖｏでの循環するエンドスタチンのＰ３誘導型の増加を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、試験したペプチドの関数としての上清中のエンドスタチンの濃度を表す（ｎｇ／ｍｇのタンパク質）。エンドスタチンの濃度は、ｉｎ ｖｉｖｏでの試験で得た血清でのＥＬＩＳＡにより測定した。 図１５Ｂは、ｉｎ ｖｉｖｏでの循環するエンドスタチンのＰ３誘導型の増加を示す写真である。この画像は、抗ＣＯＬ１８Ａ１抗体を用いたｉｎ ｖｉｖｏでの試験で得た血清のウェスタンブロットにより入手した。 ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＨＵＶＥＣ中のＰ３および／またはＧＭ６００１により誘導されたエンドスタチン産生の阻害を示すヒストグラムである。上清中のエンドスタチンの濃度（ｎｇ／ｍｇのタンパク質）を、ＥＬＩＳＡにより測定した（溶媒に対する非パラメトリックスチューデントアッセイ）。 抗ＣＤ１５１抗体の存在下でＨＵＶＥＣの上清中のエンドスタチンのｉｎ ｖｉｖｏでの産生を示すヒストグラムである。上清中のエンドスタチンの濃度（ｎｇ／ｍｇのタンパク質）は、細胞に提供された処置の関数として表されている。上清中のエンドスタチンの濃度は、ＥＬＩＳＡにより測定した（溶媒に対する非パラメトリックスチューデントアッセイ）。 図１８Ａは、エンドスタチン産生の増大が、ＨＵＶＥＣにおけるＣＤ１５１の欠乏に関連していることを示す写真である。画像は、様々なｓｉＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ ＦＩＴＣ、ｓｉＲＮＡ ＣＤ１５１、またはｓｉＲＮＡ ＣＤ９）で処置した後のＨＵＶＥＣライセートで得たウェスタンブロットの結果に対応する。 図１８Ｂは、エンドスタチン産生の増大が、ＨＵＶＥＣにおけるＣＤ１５１の欠乏に関連していることを示すヒストグラムである。上清中のエンドスタチンの濃度（ｎｇ／ｍｇのタンパク質）は、細胞に提供された処置の関数として表されている。上清中のエンドスタチンの濃度を、ｓｉＲＮＡと４８時間インキュベートしたＨＵＶＥＣの上清中でＥＬＩＳＡにより測定した。 Ｃａｌｕ−６細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖における、併用または単独で投与したペグ化ペプチドＰ４およびシスプラチンの作用を示すヒストグラムである。ヒストグラムは、行われた治療の関数として治療（１６日間）の完了時の腫瘍容積（ｍｍ３）の分布を示す。溶媒は、対照として使用した。

実施例
材料および方法
細胞培養
ヒトの臍静脈由来の内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、ＥＧＭ２−ＭＶ培地（５％のＳＶＦ；０．４％のヒトＦＧＦ−２；０．１％のＶＥＧＦ；３位でグルタミンがアルギニンと置換された０．１％のＩＧＦ−１（Ｒ３−ＩＧＦ−１）；０．１％ヒトＥＧＦ；０．０４％のヒドロコルチゾン；０．１％のアスコルビン酸；０．１％のゲンタマイシン‐１００を含むＥＢＭ２培地）で培養した。

ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（非小細胞肺由来のヒトの癌細胞）を、２．５ｇ／ｌのグルコース；１０ｍＭのＨＥＰＥＳ；１ｍＭのピルビン酸ナトリウム；１０％のＳＶＦを補充したＲＰＭＩ１６４０培地で培養した。

ＵＭＵＣ−３細胞（ヒトの膀胱癌細胞）を、１０％のＳＶＦ；１ｍＭのピルビン酸ナトリウム；および２ｍＭのグルタミンを補充したＭＥＭ ＮＥＡＡ培地で培養した。

ペプチドを選択する方法
ペプチドを、ＧＥＮＥＣＵＳＴにより合成し、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの試験では１０ｍｇ／ｍｌ、およびｉｎ ｖｉｖｏの試験では１ｍｇ／ｍｌで、１０％のＤＭＳＯに可溶化した。対照のペプチド（ＰＣＴ）（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ５：ＮＱＫＧＣＹＤＬＶＴ；分子量１１４０Ｄａ）を、試験したペプチドと同一の最終濃度で使用した。

細胞増殖試験
細胞増殖の評価を、４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５ ジフェニルテトラゾリウムブロミド（ＭＴＴ）の試験を使用して行った。１８時間の培養の後、培地を、ゲンタマイシンおよび５％のＳＶＦを補充したＥＢＭ２により変えた。異なる濃度のペプチドを、１０μｌ／ウェルの容量で添加した。細胞を、３７℃で４８時間インキュベートした。ＭＴＴ（５０μｌ／ウェル）を細胞に３時間添加した。

毛細血管形成の評価
Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）上での毛細血管の形成を評価することは、Ｇｒａｎｔ ｅｔ ａｌ（１９８９ Ｃｅｌｌ ５８， ９３３−９４３）に記載されるｉｎ ｖｉｔｒｏでの血管新生の試験により行った。Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）を、９６ウェルプレートのウェルに滴下し、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）の固化のために、３７℃で３０分間維持した。次にＨＵＶＥＣ細胞を播種し、５μｌのペプチドを添加した。

次に、ペプチドを３７℃で１８時間インキュベートした後、細胞を、カルセリン溶液（８μＭで５０μｌ／ウェル）で洗浄し、２０分間インキュベートした。生存しているＨＵＶＥＣは、緑色の蛍光成分でカルセリンを代謝する。

創傷試験後の遊走試験
細胞の遊走を、創傷試験にしたがって評価した（Ｓａｔｏ ａｎｄ Ｒｉｆｋｉｎ １９８８ Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １０７， １１９９−１２０５）。ＨＵＶＥＣを培養して、ＥＧＭ２−ＭＶ培地にコンフルエントにした。創傷の幅を、ソフトウェア「Ａｎａｌｙｓｉｓ」（Ｓｏｆｔ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ Ｇｍｂｈ Ｄｉｇｉｔａｌ， Ｏｌｙｍｐｕｓ）を使用して測定した。次に、試験するペプチドを培地に添加した。

Ｉｎ ｖｉｖｏでの血管新生の試験
Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）のインプラントは、血管新生のｉｎ ｖｉｖｏのモデルを表す。ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞を使用して、Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）マトリックス内の血管形成に必要な増殖因子を提供する。次に、この混合物をＳｗｉｉｓ ｎｕ／ｎｕマウスに皮下注射した。ペプチド（１ｍｇ／ｍｌ）を腹腔内注射により毎日処置した。１２日後にインプラントを回収した。

Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）のインプラント内のヘモグロビンレベルの定量化
インプラントのヘモグロビンの用量を、インプラントの血管の指標として使用した。インプラントの重量を計測し、粉砕した。

Ｉｎ ｖｉｖｏにおける腫瘍増殖の試験
５〜６週齢のＳｗｉｓｓ ｎｕ／ｎ雌性マウスに、キシラジン（１２ｍｇ／ｋｇ）およびケタミン（８０ｍｇ／ｋｇ）を用いて麻酔をかけた。腫瘍細胞（ＮＣＩ−Ｈ４６０またはＵＭＵＣ−３）を、マウスの側腹部に皮下移植した。１０日間の播種の後に腫瘍が１００ｍｍ^３に達した際に、動物を無作為化し、１日おきにペプチド、シスプラチンを用いて腹腔内注射により１３日間処置した。腫瘍の大きさを測定し、腫瘍の容積を計算した。疼痛の症状を検出するためにマウスの体重を測定した。

テトラスパニンの発現の抑制
ＨＵＶＥＣを、製造社の指示にしたがって、トランスフェクト剤ＧＥＮＪＥＴを使用してｓｉＲＮＡでトランスフェクトした。４８時間インキュベートした後、上清を回収し、ウェスタンブロットによりタンパク質発現を試験し、エンドスタチンを定量化した。

本発明は、さらに以下の実施例により例示されている。

実施例１：Ｐ３およびＰ４によるＨＵＶＥＣの増殖の容量依存的な阻害
細胞を、ＥＧＭ２−ＭＶ中で４８時間増殖させ、増殖を、ＭＴＴアッセイにより定量化した。結果は、図１に表されており、溶媒の存在下で培養したＨＵＶＥＸに関する細胞増殖のパーセンテージとして表されている。

３つのペプチドの効果を、ＨＵＶＥＣ増殖に関して試験した。Ｐ１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４：ＶＳＷＦＡＶＨＳＦＧＬＤＫＡＰＶＬＬＳＳ）によって、ＰＣＴ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５：ＮＱＫＧＣＹＤＬＶＴ）では、増殖に関しては効果が観察されなかった。

対照的にペプチド３（Ｐ３−ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）は、用量依存的にＨＵＶＥＣ増殖を阻害する（図１）。６６μＭでは、５０％±１．２％（ｐ＜０．００１；ｎ＝３）のＨＵＶＥＣの増殖が、Ｐ３により阻害されている。２６４μＭでは、Ｐ３条件での増殖は、２７．３％±０．３％（ｐ＜０．００１、ＰＣＴに関連；ｎ＝３）である。ペプチド４（Ｐ４−ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）で行った試験は、６６μＭの濃度まで、ＨＵＶＥＣの増殖に関して２０％の阻害を示した（図１）。１３２μＭの濃度では、Ｐ４は、２６％±１．７５％（ｐ＝０．０１２１、ＰＣＴに関連；ｎ＝３）のＨＵＶＥＣの増殖に関する阻害を高めた。

実施例２：Ｍａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）上で培養したＨＵＶＥＣによる毛細血管ネットワークの形成のＰ３およびＰ４の阻害
細胞を播種した後、ペプチドを、６．５μＭ、１３μＭ、および３３μＭの濃度で培養培地（ＥＧＭ２−ＭＶ）に添加した。プレートを、３７℃で１８時間インキュベートした。蛍光標識を、カルセインを添加することにより行った。カメラを備えた蛍光顕微鏡（倍率４０倍）で写真を撮影した。結果は、図２に示されている。

観察されるネットワーク構造の形成は、溶媒の存在下で自然に発生する。ＰＣＴの添加は、ＨＵＶＥＣによる毛細血管の形成に関して効果がない（図２）。反対に、Ｐ３は、毛細血管の長さおよびジャンクションの数の両方の用量依存的な減少を亢進し、これにより、有意なin vitroでの抗血管新生活性を示す（図２）。またＰ４も、in vitroでの優位な抗血管新生活性を示す、毛細血管の長さおよびジャンクションの数の両方の有意な減少を示す。

実施例３：ＨＵＶＥＣのＰ３に依存的な遊走の阻害
創傷は、細胞層上で、のみの先端を用いて行われた。ペプチドの添加後のＨＵＶＥＣの遊走を、創傷アッセイにより評価し、ＨＵＶＥＣの遊走先端の進行を、２０時間の培養後に解析した。結果は、溶媒またはＰＣＴを添加した創傷が、２０時間 のインキュベーションの後に完全に閉鎖されていることを示す。カメラを備えた顕微鏡（拡大４０倍）を用いて写真を撮影した。１３μＭのＰ３でインキュベートした細胞で、部分的な創傷の阻害が観察される。３３μＭでは、Ｐ３は、ＨＵＶＥＣを完全に遊走しないようにさせると考えられ、遊走先端の進行は、有意に阻害されている、またはほぼ停止している（図３）。

実施例４：ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖におけるＰ３およびＰ４の効果
Ｐａｓｓａｎｉｔｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｅｒｏｎｔｏｌｏｇｙ ２７， ５５９−５６６）に記載される血管新生のｉｎ ｖｉｖｏのモデルを利用して、Ｐ３およびＰ４の効果を評価した。簡潔に述べると、癌細胞をＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）に組み込むことにより、癌細胞は、血管形成に必要な増殖および血管新生因子を提供する。混合物を、マウスの側腹部の皮下形態のすぐ下に注射した。播種した後、２０匹のマウス（Ｓｗｉｓｓ ｎｕ−ｎｕ）を、５匹のマウスを含む４つのグループにそれぞれ無作為化し、以下の通りに治療を行った：グループ１のマウスを、連続して１２日間、溶媒単独を２００μｌ／注射／日により処置した；グループ２のマウスを、連続して１２日間、溶媒／注射／日で、Ｐ１溶液（１ｍｇ／ｍｌ）２００μｌにより処置した；グループ３のマウスを、連続して１２日間、溶媒／注射／日で、Ｐ３溶液（１ｍｇ／ｍｌ）２００μｌより処置した；グループ４のマウスを、連続して１２日間、溶媒／注射／日で、Ｐ４溶液（１ｍｇ／ｍｌ）２００μｌにより処置した。

１３日目にマウスを屠殺し、インプラントを回収し、試験した。グループ１（溶媒単独を有する対照マウス）およびグループ２（１０ｍｇ／ｋｇのＰ１を有するマウス）のインプラントは、赤色を特徴とし、対してグループ３（１０ｍｇ／ｋｇのＰ３を有するマウス）およびグループ４（１０ｍｇ／ｋｇのＰ４を有する）マウスから回収したインプラントは、一部赤い点を伴う黄色で特徴付けられているとの結果が示され、これは、ｉｎ ｖｉｖｏでの血管新生の阻害を示唆するものである。インプラントにおけるヘモグロビンの用量を使用して、血液を定量することにより、インプラント内の機能的な血管の密度を評価した。Ｐ３およびＰ４により処置したインプラントの解析は、これらペプチドが、グループ１と比較して６７．２±６．５％（ｐ＝０．００１２）および２９．２±８．４％（ｐ＝０．００２９）の量のヘモグロビンの阻害を誘導することを示す（図４）。これらの結果は、Ｐ３およびＰ４は、抗血管新生特性を表すことを示す。

実施例５：腫瘍の増殖‐ＮＣＩ−Ｈ４６０モデルに関するＰ３の効果
Ｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖におけるペプチドの効果の評価を行った。癌細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０を、Ｓｗｉｓｓ−ｎｕ／ｎｕマウスの側腹部（ｎ＝２０）に皮下投与により注射した。腫瘍細胞播種から１０日後、マウスを２グループ（グループあたり５匹のマウス）に無作為化した。異なるグループのマウスを以下のように処置した。グループ１のマウスを、溶媒（２００μｌ／注射／４８時間）で処置し、グループ２のマウスを、Ｐ３（Ｐ３（１ｍｇ／ｍｌ）を含む溶媒２００μｌ／注射／４８時間）で処置した。すべての処置を、連続して１３日間の腹腔内注射により行った。

１３日の処置の後、溶媒で腫瘍を処置した平均腫瘍容積は、１５６０±１８８．３ｍｍ^３（ｎ＝５）（ｐ＝０．２６２５；ｎ＝５）であるとの結果が示されている（図５）。対照的に、Ｐ３で処置したマウスの平均腫瘍容積は、６５１．５±８０．９７ｍｍ^３（ｐ＝０．００５；ｎ＝５）（図５）であり、これにより６４．７９±４．３７％（ｐ＜０．０５）のｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍増殖の阻害が示唆される。

並行して、マウスで試験されるペプチドの毒性作用を試験するために、マウスの体重を処置に沿って測定した。表１に表す通り、体重に有意差は見られなかった。

表１：処置開始時（０日目）および終了時（１３日目）のマウスの平均体重、および溶媒およびＰ３による処置の間のマウスの体重差異（％）

実施例６：腫瘍の増殖に関するＰ３およびシスプラチンの併用的な効果
ＧＳ−１６８ＡＴ２とＰ３の生物学的な活性を比較するために、ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＰ３単独またはシスプラチンと併用したＰ３の抗腫瘍活性に関する試験を行った。

ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞（１００〜１５０ｍｍ^３の腫瘍容積）の播種のため、マウス（ｎ＝３５）を、それぞれ５匹のマウスを含む７つのグループに無作為化した。異なるグループ由来のマウスを以下のように処置した。グループ１は、溶媒（２００μｌ／注射／４８時間）で処置した；グループ２のマウスは、シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）で処置した。グループ３のマウスは、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。グループ４のマウスは、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）およびシスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）と交互に処置した。グループ５のマウスは、シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）で処置した。グループ６のマウスは、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）およびシスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）で交互に処置した。グループ７のマウスは、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）およびシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ）で交互に処置した。すべての処置を、連続して１３日間にわたり腹腔内注射により行った。

Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）による単剤治療が、シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）の１つと近い、または類似する治療上の効果を示すとの結果が示されている。Ｐ３で処置したグループの平均腫瘍容積は、約６５１．５±８０．９ｍｍ^３（ｐ＝０．００１３；ｎ＝５）であり、対照グループの平均腫瘍容積は、１６９８±１６４．９ｍｍ^３（ｎ＝５）であり、Ｐ３単独での処置は、６１．６１±４．７４％（ｐ＜０．０５；ｎ＝５）のｉｎ ｖｉｖｏでの腫瘍の増殖の阻害を誘導することが示唆される（図６）。シスプラチン単独（５ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスの平均腫瘍容積は、６２６±１１８．５ｍｍ^３（ｐ＝０．００１９；ｎ＝５）であり、この処置がＰ３の効果と同様の腫瘍増殖の阻害を誘導することが示唆される（図６）。シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）およびＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）の毎日交互に行う２剤療法の効果は、この２剤療法で処置したグループの平均腫瘍容積は、５５１．９±１２２．４ｍｍ^３（ｐ＝０．００１２；ｎ＝５）であることを示す。結果的に、この２剤療法は、６９．８５±７．２％（ｐ＜０．０５；ｎ＝５）だけ、ｉｎ ｖｉｖｏで腫瘍増殖を阻害する。

単剤治療またはＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）と毎日交互に行った２剤療法で投与したシスプラチン（２．５、次いで１ｍｇ／ｋｇ）の投与の減少。
この目的は、５ｍｇ／ｋｇの用量のシスプラチンで観察された潜在的な全身性の作用、または最終的には化学療法剤の用量に依存する耐性機構を限定しつつ、治療上の有効性を維持することである。シスプラチンの１／２の用量の減少（２．５ｍｇ／ｋｇ）は、抗腫瘍性の効力の減少を亢進する（平均腫瘍容積は、１０１７±１１９．８ｍｍ^３；ｐ＝０．０１１；ｎ＝５である）。しかしながら、シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）およびＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）、またはシスプラチン（１ｍｇ／ｋｇ）およびＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）を用いて毎日交互に行う２剤療法による処置は、それぞれ、３１８．７±１０３．３ｍｍ^３；（ｐ＝０．０００４；ｎ＝５）および２６５．４±７２．１ｍｍ^３（ｐ＝０．０００２；ｎ＝５）の平均腫瘍容積を伴い、治療上の有効性を維持する。（図６）。

さらに、シスプラチン（５ｍｇ／ｋｇ）で処置したマウスは、対照と比較して２０±７％の体重の減少（ｐ＝０．０１５９、ｎ＝５）を呈し、またはＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）と交互に処置したマウスは、１８±１１％の減少を呈した（対照と比較、Ｐ＝０．０７９；ｎ＝５）。シスプラチンの用量を半分減少させること（２．５ｍｇ／ｋｇ）は、体重の減少を６±３％に減少させる。シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）およびＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）で交互に処置したマウスの体重の変化は、−７±１％である。シスプラチンの用量の減少（１ｍｇ／ｋｇ）は、表２に記載されるように体重の変化を強めるものではない。

表２：処置開始時（０日目）および完了時（１３日目）のマウスの平均体重、ならびにＰ３および／またはシスプラチンの処置の間のマウスの体重の差異（％）

実施例７：ＣＤ９Ｐ―１の依存性を示す、ＵＭＵＣモデルにおける腫瘍増殖に関するＰ３の効果

Ｐ３は、ＣＤ９Ｐ−１に由来する。Ｐ３がＣＤ９Ｐ−１と相互作用するかどうかを確認するために、Ｐ３を、ＣＤ９Ｐ−１を発現しない腫瘍細胞株に関して試験した。ＵＭＵＣ−３細胞株（膀胱腫瘍細胞株）を、ＣＤ９Ｐ−１を発現しない細胞株としてスクリーニングアッセイで同定した。ウェスタンブロットにより解析したＵＭＵＣ−３のライセートの増加量（１０〜６０μｇ）は、これらの細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現しないことを示す。

次に、Ｐ３の効果を、ＵＭＵＣ−３の異種移植片のｉｎ ｖｉｖｏのモデルにおいて、腫瘍増殖に関して試験した。ＵＭＵＣ−３細胞を、１０日間播種し（腫瘍容積：１００〜１５０ｍｍ^３）、マウス（ｎ＝２０）をそれぞれ５匹のマウスを含む４つのグループに無作為化した。異なるグループを、以下のように処置した：グループ１のマウスを、溶媒（２００μｌ／注射／４８時間）で処置した；グループ２のマウスを、シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）で処置した；グループ３のマウスを、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。グループ４のマウスを、シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）およびＰ３（１０ｍｇ／ｋｇ）で交互に処置した。Ｐ３で処置したマウスの腫瘍容積は、溶媒で処置したマウスの腫瘍容積と比較して有意に変化しなかった（図８）ことから、Ｐ３は、ＣＤ９Ｐ−１を発現しない腫瘍の増殖に影響しないことが示唆される。しかしながら、これらの腫瘍は、シスプラチン（２．５ｍｇ／ｋｇ）での処置下で減少する（図８）。

実施例８：テトラスパニンに関するＰ３の効果
最先端の研究では、ＧＳ−１６８ＡＴ２が、ＣＤ９、ＣＤ１５１と結合し、ＣＤ８１とはそれらより弱く結合することがすでに示されている。次に、ＣＤ９、ＣＤ１５１、およびＣＤ８１の状態を、ＧＳ−１６８ＡＴ２の存在下で経時的に評価した（Ｃｏｌｉｎ ｅｔ ａｌ． ２０１１ Ｂｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １０５， １００２−１０１１）。ＨＵＶＥＣをＧＳ−１６８ＡＴ２（４０μｇ／ｍｌ）と共にインキュベートし、次に、溶解し、細胞ライセートを、抗ＣＤ９、抗ＣＤ１５１、および抗ＣＤ８１の抗体を用いてウェスタンブロットを行った。結果は、ＧＳ−１６８ＡＴ２が、１時間の処置の後に、ＣＤ９およびＣＤ１５１の分解を誘導することを示した（図９ＡおよびＣ）。さらに試験するために、ＧＳ−１６８ＡＴ２と共にインキュベートしたＨＵＶＥＣを、ＦＡＣＳによっても解析した。結果は、対照と比較してＧＳ−１６８ＡＴ２の存在下で、経時的に細胞表面のＣＤ９およびＣＤ１５１の量の重要な減少を示し、それぞれ約４０％少ない（Ｐ＜０．０５；図９Ｂ）および約７０％少ない（Ｐ＜０．０１、図９Ｄ）。しかしながら、ＧＳ−１６８ＡＴ２に細胞を曝露した後のＣＤ８１の状態の有意な変化は観察されなかった（図９ＣおよびＥ）。ＣＤ９およびＣＤ１５１の分解は、ＣＤ９とＣＤ１８１との間、ＣＤ９とＣＤ１５１との間、およびＣＤ８１とＣＤ９Ｐ−１との間での相互作用を減少させる。次に類似の機構を、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおいて異なる細胞モデルに関してＰ３で試験した。

テトラスパニン（ＣＤ９、ＣＤ８１、およびＣＤ１５１）、およびインテグリンβ１に関するＰ３のｉｎ ｖｉｔｒｏでの作用を、内皮細胞で行った。ＨＵＶＥＣを異なる時点で、Ｐ３（３３μＭ）と共にインキュベートした。Ｐ３は、インキュベーションから２時間後に、ＣＤ１５１の有意な減少を誘導する（図１０Ａ）。しかしながら、ＣＤ９の発現（図１０Ｂ）、ＣＤ８１（図１０Ｃ）、およびＣＤ９Ｐ−１（図１０Ｄ）、およびインテグリンβ１は、Ｐ３に影響されない。

ＣＤ１５１およびＣＤ９Ｐ−１の発現の解析を、ＮＣＩ−Ｈ４６０を多く含むＭａｔｒｉｇｅｌ（登録商標）のインプラントのホモジネートを用いてウェスタンブロットで行った。ＣＤ１５１のプロファイルは、ウェスタンブロットでの２つのバンド（１つは、２８ｋＤａであり、ＣＤ１５１に対応し、もう１つは２６ｋＤａであり、ＣＤ１５１の分解した産物に対応する）を特徴とする。結果は、１２日間、Ｐ３およびＰ４（１０ｍｇ／ｋｇ）により処置したマウスのライセートにおけるＣＤ１５１の有意な減少を示す（図１１Ａ−１）。しかしながら、ＣＤ９Ｐ−１のレベルは変化しない（図１１Ａ−２）。ＣＤ１５１に対応するバンドの定量化（図１１Ｂ）は、Ｐ３およびＰ４で処置したマウスのライセートにおいてＣＤ１５１に対応するバンドの５７％および５１％の減少を示す。

Ｐ３またはＰ４（１０ｍｇ／ｋｇ）により１日置きに１３日間処置したマウス由来の異種移植片ＮＣＩ−Ｈ４６０細胞からのライセートでは、ＣＤ１５１のレベルの減少が、溶媒で処置したマウスと比較して、それぞれ７３％および５０％で観察される（図１２ＡおよびＢ）。ＣＤ９Ｐ−１の変化は観察されなかった（図１２Ａ）。

テトラスパニン、ＣＤ９、ＣＤ８１、およびＣＤ１５１とＣＤ９Ｐ−１の結合に関するＰ３の効果をより正確に試験するために、免疫沈降（ＩＰ）の実験を行った。対照の実験（溶媒を用いる）では、ＣＤ９およびＣＤ８１とＣＤ９Ｐ−１を共沈させた。弱い共沈が、Ｐ３とＣＤ１５１との間で観察された。テトラスパニンとＣＤ９Ｐ−１との間の結合は、ＰＣＴ条件下では、改変しない。しかしながら、ＣＤ９Ｐ−１とＣＤ９との間、およびＣＤ９Ｐ−１とＣＤ１５１との間の相互作用は減少し、ここではＨＵＶＥＣは、３３μＭのＰ３と共に２時間インキュベートされている。ＣＤ９Ｐ−１とＣＤ８１との間の結合は、Ｐ３により改変しない（図１３Ａ）。

対照の実験（溶媒を用いる）では、ＣＤ９とＣＤ１５１との間、およびＣＤ９とＣＤ８１との間の結合は類似する。Ｐ３の添加は、ＣＤ９とＣＤ１５１との間の結合の減少を誘導するが、ＣＤ９とＣＤ８１との間の結合の減少を誘導しない（図１３Ｂ）。Ｐ３の添加は、複合体ＣＤ１５１―ＣＤ９の解離を誘導するが、ＣＤ１５１−ＣＤ８１の解離を誘導しない（図１３Ｃ）。

実施例９：ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏのモデルにおけるエンドスタチンの産生に関するＰ３の効果
エンドスタチンは、コラーゲンＸＶＩＩＩのフラグメントであり（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ． １９９７ Ｃｅｌｌ ８８， ２７７−２８５）、有名な血管新生の阻害剤である。さらに、ＧＳ−１６８ＡＴ２は、ｉｎ ｖｉｖｏおよびｉｎ ｖｉｔｒｏでエンドスタチンの産生を誘導し、よって、この活性に影響するＧＳ−１６８ＡＴ２由来のＰ３の特性に関連する問題が問われる。

エンドスタチンのレベルを、Ｐ３またはＰＣＴの濃度を増加させて４８時間インキュベートしたＨＵＶＥＣのライセートで、ＥＬＩＳＡにより定量化した。ＰＣＴは、溶媒条件と比較してエンドスタチンのレベルを改変しないが、３３％および６２％のエンドスタチン産生の増加が、それぞれ３３μＭおよび６６μＭのＰ３で観察される（図１４Ａ）。

エンドスタチンはコラーゲンＸＶＩＩＩ由来であるため、抗体は、エンドスタチンおよびコラーゲンＸＶＩＩＩの両方を検出することができる。次に、ＥＬＩＳＡによる用量が、エンドスタチンによるものであったかを確認するために、ＩＰを行った（図１４Ｂ）。

Ｉｎ ｖｉｖｏでのエンドスタチンの産生に関するＰ３の効果を試験するために、腫瘍細胞ＮＣＩ−Ｈ４６０を含む異種移植片マウス由来の血清を、ＥＬＩＳＡおよびウェスタンブロットにより解析した。溶媒で処置したマウスと比較して、Ｐ３（１０ｍｇ／ｋｇ）により処置したマウスの血清で２４％の増加が観察されている（図１５Ａ）。エンドスタチンのいくつかの形態は、ウェスタンブロットにより観察される。ウェスタンブロットによる血清の解析は、Ｐ３で処置したマウスの血清におけるエンドスタチンレベルの増加を確認し、２８ｋＤａの大きさを有することを確認した（図１５Ｂ）。

エンドスタチンの産生におけるメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）の役割を評価するために、ＭＭＰの多価阻害剤である、ＧＭ６００１を使用した。上清におけるエンドスタチンの濃度は、６．２ｎｇ／ｍｇタンパク質のライセート／４８時間である。エンドスタチンの約３０％（４．４ｎｇ／ｍｇタンパク質のライセート／４８時間）の有意な減少が、対照と比較してＭＭＰの阻害剤で観察された。３３μＭｎのＰ３を用いたエンドスタチンの１０％の増加（６．８５ｎｇ／ｍｇタンパク質のライセート／４８時間）、および６６μＭのＰ３を用いた４６％の増加（８．４８ｎｇ／ｍｇタンパク質のライセート／４８時間）が観察された。Ｐ３の添加の４５分前にＭＭＰの阻害剤を添加すると、対照と比較して３０％のエンドスタチンのレベルの有意な減少が観察された（図１６）。ＧＭ６００１は、Ｐ３により誘導されたエンドスタチンの産生を阻害する。よってＭＭＰは、Ｐ３により誘導したエンドスタチンの産生に関与し得る。

上述の結果は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおけるＣＤ１５１の減少、ならびにｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏにおけるエンドスタチンの増加が、Ｐ３により誘導されたことを示した。これにより、エンドスタチンの産生と、ＣＤ１５１の減少との間の関連についての疑問が生じた。よって、ＣＤ１５１を欠失させ、エンドスタチンのレベルを上清で決定した。これを行うために、ＣＤ１５１の発現を、抗ＣＤ１５１抗体およびＣＤ１５１をコードするｍＲＮＡに対して特異的である低分子干渉ＲＮＡ（ｐＲＮＡｉまたはｓｉＲＮＡ）を使用して抑制した。

ＨＵＶＥＣを、抗ＣＤ１５１抗体（１１Ｇ５ａ）または無関係の抗体（いずれのタンパク質も認識できない陰性対照）を含むＥＧＭ２―ＭＶ培地で４８時間インキュベートした。次に、エンドスタチンのレベルを、上清においてＥＬＩＳＡにより測定した。ＨＵＶＥＣを、ＨＵＶＥＣ細胞を単独で培養した基礎のエンドスタチンの産生と比較して、抗ＣＤ１５１抗体（１１Ｇ５ａ）と共にインキュベートした場合、３３％の増加が観察された（図１７）。

ＨＵＶＥＣ細胞を、ＣＤ１５１およびＣＤ９の特異的なｓｉＲＮＡを用いてトランスフェクトした。タンパク質の発現をウェスタンブロットで解析した。並行して、エンドスタチンのレベルを、上清においてＥＬＩＳＡにより測定した。ＣＤ１５１およびＣＤ９に特異的なｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＨＵＶＥＣは、それぞれの発現を抑制した（図１８Ａ）。ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＨＵＶＥＣ細胞の上清におけるエンドスタチンのレベルを測定した。対照とＣＤ９の発現を抑制したもの（それぞれ、１．２６ｎｇ／ｍｇのタンパク質ライセート／４８時間および２ｎｇ／ｍｇのタンパク質のライセート／４８時間）との間に変化は観察されなかった。対照的に、エンドスタチンのレベルは、ＣＤ１５１を欠失したＨＵＶＥＣにおいて、９．４ｎｇ／ｍｇタンパク質のライセート／４８時間で、エンドスタチンのレベルが増加した（図１８Ｂ）。よって、ＣＤ１５１は、エンドスタチンの産生に関与する。

実施例１０：腫瘍容積に関するペグ化ペプチド４の効果
すべての実験は、Ｇｅｎｏｐｏｌｅの組織化された動物のケアおよび用途の委員会により検閲されており、動物のケアに関する組織化されたガイドラインに従って行われた。メスのＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウス（ｎ＝２４）を、５から６週齢で使用した。この動物を、病原体フリーの条件下で、１４時間の明期／１０時間の暗期のスケジュールの下、層流型キャビネットに収容し、オートクレーブした標準的な固形飼料および水を自由に与えた。Ｃａｌｕ−６細胞（５×１０^６細胞を含む血清フリーＲＰＭＩ１２００μｌ）を、マウスの右側腹部に皮下注射した。生着後（１０日目）、腫瘍容積（ＴＶ）を測定し（Ｂａｌｓａｒｉ ｅｔ ａｌ， Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ． ２００４ Ｍａｙ；４０（８）：１２７５−８１）、動物を無作為化し、それぞれ６匹の動物の４つのグループに分けて、ｉ．ｐ．注射（注射あたり２００μｌ）により、１６日間１日おきに処置した（８回の注射）。対照のグループ（グループ１）には、ビヒクル（０．９％の生理食塩水）を与えた。シスジアンミン白金（ＩＩ）ジクロリド（ＣＤＤＰ；シグマ）を、０．５ｍｇ／ｍｌで０．９％の生理食塩水に溶かし、５ｍｇ／ｋｇの用量で注射した（グループ２）。ペグ化したペプチド（Ｐ４−ＰＥＧ）を、１ｍｇ／ｍｌでビヒクルに溶かし、１０ｍｇ／ｋｇの用量で注射した（グループ３）。グループ４では、マウスに、ＣＤＤＰおよびＰ４―ＰＥＧの両方を投与した。腫瘍容積および体重を、処置期間（１６日間）の間１日置きに測定した。

腫瘍容積における有意な減少が、ＣＤＤＰ単独、Ｐ４―ＰＥＧ単独、ならびにＣＤＤＰおよびＰ４−ＰＥＧの両方で処置したマウスで観察される。結果的に、Ｐ４−ＰＥＧは、有意な抗腫瘍作用を有する。

Claims (13)

1. （ｉ）配列ＧＮＹＹＣＳＶＴＰＷＶＫＳ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）のペプチドと、
   （ｉｉ）配列ＩＨＳＫＰＶＦＩＴＶＫＭＤＶＬＮＡ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）のペプチドと、
   （ｉｉｉ）それらの機能的なフラグメントまたは変異体または誘導体と
   からなる群から選択される少なくとも１つペプチドを含むポリペプチドであって、
   前記ポリペプチドが、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３の配列のうち５０未満、好ましくは４０未満、好ましくは３０未満、好ましくは２０未満の連続したアミノ酸を含む、
   ポリペプチド。
2. 前記ポリペプチドが、リン酸基、酢酸基、脂質または糖の基などの１つもしくは複数の官能基の付加により、かつ／または１つもしくは複数の保護基の付加により、修飾されている、請求項１に記載のポリペプチド、
3. 前記ポリペプチドが、抗血管新生および／または抗腫瘍活性を有する、請求項１または２に記載のポリペプチド。
4. 請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド。
5. 請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチドまたは請求項４に記載のポリヌクレオチド、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な賦形剤を含む医薬組成物
6. 少なくとも１つの抗血管新生剤、細胞毒性薬、化学療法剤、または抗癌剤をさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
7. シスプラチンおよび／またはカルボプラチンからなる群から選択される白金錯体をさらに含む、請求項５または６に記載の医薬組成物。
8. ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドおよびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドを含む、請求項１に記載のポリペプチド、または
   ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１のペプチドを含む請求項１に記載の第１のポリペプチド、およびＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２のペプチドを含む請求項１に記載の第２のポリペプチド
   を含む、請求項５〜７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
9. 前記組成物が、局所投与、全身性投与、経口投与、皮下投与、経皮投与、筋肉内投与、または腹腔内投与に適した形態である、請求項５〜８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
10. 血管新生に関連した疾患の治療に使用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド、または請求項５〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
11. ヒトまたは動物の身体の癌および／または腫瘍の治療に使用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド、または請求項５〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
12. 癌細胞がＣＤ９Ｐ−１を発現する癌および／または腫瘍の治療に使用するための、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリペプチド、または請求項５〜９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
13. 前記治療の前に、ＣＤ９−Ｐ１の発現が対象の癌および／または腫瘍の細胞を含む試料で試験されている、その必要がある対象の癌および／または腫瘍の治療に使用するための、請求項１２に記載のポリペプチドまたは医薬組成物。

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