JP2017206519A - 延長したインビボ半減期を有するヒト抗ｉｌ−６抗体ならびに腫瘍学、自己免疫疾患、および炎症性疾患の治療におけるそれらの使用 - Google Patents

延長したインビボ半減期を有するヒト抗ｉｌ−６抗体ならびに腫瘍学、自己免疫疾患、および炎症性疾患の治療におけるそれらの使用 Download PDF

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Abstract

【課題】延長したインビボ半減期を有するヒト抗ＩＬ−６抗体の提供。【解決手段】ＩＬ−６に特異的に結合する治療的単離抗体であり、可変ドメインと野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインに比べて１つ以上のアミノ酸を有する、修飾されたヒトＩｇＧ１定常ドメインを含む延長したインビボ半減期を有する抗体。即ち、炎症性疾患及び障害、自己免疫疾患及び障害、腫瘍等、並びに、これらに限定されない、ＩＬ−６媒介性疾患及び障害を治療及び予防するための治療的抗体。また、該治療的抗体を用いた、薬学的組成物、治療的組成物、及び方法。【選択図】なし

Description

本発明は、ＩＬ−６の生物学的効果を阻害し、延長したインビボ半減期を有する、抗ＩＬ−６抗体分子に関する。抗ＩＬ−６抗体は、炎症性障害、自己免疫障害、腫瘍、およびうつ病を含む、ＩＬ−６と関連する障害の治療に有用である。
インターロイキン６（ＩＬ−６）は、種々の細胞型によって産生される２６ｋＤａの多面的な炎症性サイトカインであり、これには、刺激された線維芽細胞、単球、および内皮細胞が含まれ、それらはインビボでＩＬ−６の主要な供給源を形成する。Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ケラチノサイト、骨芽細胞、および幾つかの他の細胞等の細胞は、刺激されるとＩＬ−６を産生することができる。ＩＬ−６はまた、腫瘍細胞株および腫瘍細胞、例えば、肺癌、前立腺癌、骨髄腫、副腎腫、および心臓粘液腫由来の細胞から発現される（Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，（１９８９）Ｂｌｏｏｄ ７４：１−１０、Ｓｍｉｔｈ Ｐ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｄ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗｓ １２：３３−４０）。非炎症条件下では、脂肪組織からＩＬ−６が分泌される（Ｗａｌｌｅｎｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７５）。
細胞のシグナル伝達を開始させるために、ＩＬ−６は、膜貫通受容体であるＩＬ−６受容体アルファ（ＩＬ−６Ｒα、ＩＬ−６Ｒａ、ＩＬ−６Ｒ、ｇｐ８０、またはＣＤ１２６とも称される）に対して低親和性で結合し、複合体「ＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａ」を形成する。この複合体は、ｇｐ１３０シグナル受容体に結合し、ＩＬ−６Ｒαおよびｇｐ１３０は一緒になって、高親和性のＩＬ−６結合部位を形成し、ＩＬ−６、ＩＬ−６Ｒａ、およびｇｐ１３０のそれぞれの２つのコピーから構成される六量体の形成を導く（Ｓｏｍｅｒｓ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９７）１．９ ＥＭＢＯ Ｊ．１６：９８９−９９７）。ＩＬ−６Ｒａの膜貫通および細胞質ドメインは、ＩＬ−６Ｒａが可溶性分泌型（ｓＩＬ−６ＲまたはｓＩＬ−６Ｒａ）としても存在するため、シグナル変換に必要とされない。可溶性受容体は、ＩＬ−６Ｒａメッセージの異なったスプライシングまたはタンパク質分解による分断によって産生される。ｓＩＬ−６Ｒは、ＩＬ−６とのリガンド受容体複合体「ＩＬ−６：ｓＩＬ−６Ｒａ」を形成することができる。この複合体は、細胞上のｇｐ１３０に結合することができ、それによって、これらの細胞がＩＬ−６Ｒａを発現しない場合でさえ、ｇｐ１３０陽性細胞での細胞のシグナル伝達を開始させる。ゆえに、ｓＩＬ−６Ｒは、ＩＬ−６に応答する細胞のレパートリーを広げる潜在性を有し、ＩＬ−６媒介性炎症において重要な役割を果たすと考えられる（Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ａ ｅｔ ａｌ．（２００１）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１５：４３−５８）。
ヒトＩＬ−６リガンドの結晶構造は、解明されている（Ｓｏｍｅｒｓ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９７）１．９ ＥＭＢＯ Ｊ．１６：９８９−９９７）。ヒトＩＬ−６Ｒａの細胞外ドメインの結晶構造（Ｖａｒｇｈｅｓｅ ｅｔ ａｌ． （２００２）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９９：１５９５９−１５９６４）、およびＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体の六量体構造（Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３００：２１０１−２１０４）も解明されている。これらの構造は、突然変異誘発研究と組み合わされて、種々の受容体構成要素と複合したＩＬ−６の機能的活性に関与するＩＬ−６の表面上の３つの部位を同定している。部位１の残基は、ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒａの間の相互作用に関与する。部位２の残基は、ＩＬ−６とｇｐ１３０サイトカイン結合ドメインの間の相互作用に関与する。ＩＬ−６の部位３中の残基は、六量体複合体中の第２のｇｐ１３０のＩｇ様ドメインとの相互作用に関与する。六量体のＩＬ−６／ＩＬ−６Ｒ／ｇｐ１３０複合体中で、ＩＬ−６がＩＬ−６の第２の分子と相互作用する、ＩＬ−６上の第４の部位も同定されている（Ｍｅｎｚｉａｎｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２９，５２８）。
多くの抗ＩＬ−６リガンドモノクローナル抗体が単離されている。マッピング研究が実施され、上記のように、ヒトＩＬ−６の表面上の異なる結合部位にこれらが結合することを示している（Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：５６１−５６８、Ｗｉｊｄｅｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１１８３−１１９１、Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９４）ＪＢＣ ２６９：８６、Ｋａｌａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２３８ ７１４−７２３、Ｋａｌａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ８９：１３１９−１３３３）。
ＩＬ−６の増加は、種々の疾患徴候において重要なサイトカインとしてかかわることが示されている。循環ＩＬ−６のレベルは、リウマチ性関節炎、キャッスルマン病、若年性特発性関節炎、およびクローン病等の疾患において増加することが示されている（Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｎ，ａｎｄ Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ．（２００４）Ｃｕｒｒ Ｏｐ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４：３８６−３９１）。このため、ＩＬ−６は、これらの炎症性徴候での病理の駆動に関係するとされている。さらにまた、種々の腫瘍型がＩＬ−６によって刺激されることが示されており、これには、黒色腫、腎細胞癌、カポジ肉腫、卵巣癌、リンパ腫、白血病、多発性骨髄腫、および前立腺癌が含まれる（Ｋｅｌｌｅｒ Ｅ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．１：３４０−５７）。さらに、ＩＬ−６の循環レベルの増加が、幾つかの癌で報告されている。幾つかの癌徴候では、ＩＬ−６レベルの増加が該疾患の予後指標として使用されている。
疾患でのＩＬ−６の役割に起因して、種々のマウス、キメラ、ヒト化、およびヒト抗ヒトＩＬ−６モノクローナル抗体が、可能性のある治療法として開発されている（例えば、ＵＳ５８５６１３５号、ＷＯ２００４／０２０６３３号、ＵＳ２００６０２５７４０７Ａ１号、ＵＳ７２９１７２１号）。キメラヒト−マウス抗ＩＬ−６抗体であるｃＣＬＢ８（ＣＮＴＯ３２８として知られている）は、多発性骨髄腫を有する患者を治療するために使用されていて（ｖａｎ Ｚａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｒｉｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １０２：７８３）、大多数の患者で疾患安定化が観察されている。
癌および炎症性疾患でのＩＬ−６シグナル伝達を阻害する陽性結果はまた、ヒト化抗ＩＬ−６Ｒａ抗体であるトシリズマブ（Ｔｏｃｉｌｉｚｕｍａｂ）（ｈＰＭ−１、ＭＲＡ、およびＡｃｔｅｍｒａとしても知られている）の使用によってさらに脚光を浴びている。これは、マウス抗ＩＬ６Ｒａ抗体であるＰＭ−１のヒト化型である。この抗体による患者の治療は、多くの疾患において有効であることが証明されていて、これには、リウマチ性関節炎、若年性特発性関節炎、クローン病、骨髄増殖性疾患、キャッスルマン病、および全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）が含まれる（Ｍｉｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ．５：６８３−９０）。
ＵＳ５８５６１３５ ＷＯ２００４／０２０６３３ ＵＳ２００６０２５７４０７Ａ１ ＵＳ７２９１７２１
Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．，（１９８９）Ｂｌｏｏｄ ７４：１−１０ Ｓｍｉｔｈ Ｐ．Ｃ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｄ Ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗｓ １２：３３−４０ Ｗａｌｌｅｎｉｕｓ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．８：７５ Ｓｏｍｅｒｓ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９７）１．９ ＥＭＢＯ Ｊ．１６：９８９−９９７ Ｊｏｎｅｓ，Ｓ．Ａ ｅｔ ａｌ．（２００１）ＦＡＳＥＢ Ｊ．１５：４３−５８ Ｓｏｍｅｒｓ，Ｗ．，ｅｔ ａｌ（１９９７）１．９ ＥＭＢＯ Ｊ．１６：９８９−９９７ Ｖａｒｇｈｅｓｅ ｅｔ ａｌ． （２００２）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ９９：１５９５９−１５９６４ Ｂｏｕｌａｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｓｃｉｅｎｃｅ ３００：２１０１−２１０４ Ｍｅｎｚｉａｎｉ ｅｔ ａｌ（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ２９，５２８ Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４５：５６１−５６８ Ｗｉｊｄｅｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：１１８３−１１９１ Ｂｒａｋｅｎｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．（１９９４）ＪＢＣ ２６９：８６ Ｋａｌａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｅｕｒ Ｊ Ｂｉｏｃｈｅｍ ２３８ ７１４−７２３ Ｋａｌａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ８９：１３１９−１３３３ Ｎｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｎ，ａｎｄ Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ Ｔ．（２００４）Ｃｕｒｒ Ｏｐ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ４：３８６−３９１ Ｋｅｌｌｅｒ Ｅ．Ｔ．ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｆｒｏｎｔ Ｂｉｏｓｃｉ．１：３４０−５７ ｖａｎ Ｚａａｎｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｂｒｉｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ．Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ １０２：７８３ Ｍｉｈａｒａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｈｅｒａｐｙ．５：６８３−９０
抗体に基づいた療法における１つの重要な問題は、循環中の免疫グロブリンの持続性である。免疫グロブリンのクリアランス率は、免疫グロブリンの投与量および投与頻度に直接的に影響を及ぼす。投与量および投与頻度の増加は、患者に悪影響を及ぼすことがあり、医療コストを増加させ得る。抗ＩＬ−６抗体に基づいた療法の薬学的重要性を考慮すると、増加したインビボ半減期を有する修飾された高親和性ヒト抗ＩＬ−６抗体を開発することが必要とされる。
本発明は、ヒトＩＬ−６に特異的に結合し、延長したインビボ半減期を有する高親和性ヒト抗ＩＬ−６抗体に関する。一実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体のインビボ半減期は、１０日間から４０日間である。特定の実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体のインビボ半減期は、２５日間から３５日間である。一実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、ＰＣＴ公開ＷＯ２００８／０６５３７８号に記載の抗ＩＬ−６抗体のＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅのアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号９の重鎖配列および配列番号１０の軽鎖配列を含む。
本発明は、さらに、延長した半減期を有するヒト抗ＩＬ−６抗体をコードする核酸、この核酸を含むベクター、このベクターを含む細胞、および延長した半減期を有するヒト抗ＩＬ−６抗体を作製する方法に関する。
さらなる態様において、本発明は、本発明による延長した半減期を有するヒト抗ＩＬ−６抗体をコードする配列を含む単離核酸、および延長した半減期を有するヒト抗ＩＬ−６抗体を調製する方法を提供し、これには、該ヒト抗ＩＬ−６抗体の産生をもたらす条件下で、該核酸を発現することと、それを回収することと、を含む。
さらなる態様は、本発明の核酸を含有するか、またはそれで変換される、宿主細胞を提供する。
本発明のさらなる態様は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む組成物、ならびにＩＬ−６に結合する、阻害する、および／または中和する方法におけるそれらの使用を提供し、これには、療法によるヒトまたは動物の体を治療する方法が含まれる。一実施形態において、本発明の組成物は、滅菌された液体製剤である。特定の実施形態において、本発明の組成物は、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。別の実施形態において、本発明の組成物は、凍結乾燥製剤である。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、薬学的製剤である。
本発明による抗体は、ヒトまたは動物の体における（例えば、ヒト患者における）、疾患または障害を治療する方法（予防のための治療を含み得る）等の治療または診断の方法に使用され得、これには、有効量の本発明の結合性メンバーを該患者に投与することを含む。本発明に従って治療可能な状態は、本明細書の他の箇所で詳細に論じられる、ＩＬ−６が役割を果たすいずれも含む。
本発明はまた、ＩＬ−６活性を中和することを、それを必要とするヒト患者の血清中において行う方法も包含し、これには、有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体をヒト患者に投与することを含む。本発明は、炎症性疾患もしくは障害、自己免疫疾患もしくは障害、増殖性疾患、ＩＬ−６の異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる疾患もしくは障害、ＩＬ−６受容体の異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる疾患もしくは障害、あるいは、これらの１つ以上の症状を予防する、管理する、治療する、または緩和する方法をさらに提供し、該方法には、予防、もしくは治療有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体を、それを必要とする対象に投与することを含む。
本発明の一態様は、ＩＬ−６に特異的に結合する単離された修飾抗体に関し、該修飾抗体は、可変ドメインと、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインとを含み、該抗体は、該可変ドメインおよび野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインを含む親抗体の半減期と比較して半減期が増加している。本発明のこの態様の一実施形態において、該修飾抗体の半減期は、該野生型抗体の半減期よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍長い。別の実施形態において、該修飾抗体の半減期は、該野生型抗体の半減期よりも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または２０倍長い。さらなる実施形態において、該修飾抗体の半減期は、該野生型抗体の半減期よりも２倍〜３倍、２倍〜５倍、２倍〜１０倍、３倍〜５倍、または３倍〜１０倍長い。さらに別の実施形態において、該修飾抗体の半減期は、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも２６日間、少なくとも２７日間、少なくとも２８日間、少なくとも２９日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、または少なくとも５０日間である。なおさらなる実施形態において、該修飾抗体の半減期は、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、２６日間、２７日間、２８日間、２９日間、３０日間、３５日間、４０日間、４５日間、または５０日間である。なおさらなる実施形態において、該修飾抗体の半減期は、１０日間〜２０日間、１０日間〜３０日間、１０日間〜４０日間、１０日間〜５０日間、２０日間〜３０日間、２０日間〜４０日間、２０日間〜５０日間、２５日間〜３０日間、２５日間〜４０日間、２５日間〜５０日間、３０日間〜４０日間、３０日間〜５０日間、または４０日間〜５０日間である。またさらなる実施形態において、該修飾抗体の半減期は、哺乳類において測定された半減期である。別の実施形態において、該修飾抗体の半減期は、非ヒト霊長類において測定された半減期である。さらなる実施形態において、該修飾抗体は、ヒト対象において測定された半減期である。
本発明の別の態様は、ＩＬ−６に特異的に結合する単離された修飾抗体に関し、該修飾抗体は、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、該抗体は、該野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインを含む野生型抗体のクリアランス率と比較して、クリアランス率が低下している。本発明のこの態様の一実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、該野生型抗体のクリアランス率よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍低い。別の実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、該野生型抗体のクリアランス率よりも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または２０倍低い。なおさらなる実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、該野生型抗体のクリアランス率よりも２倍〜３倍、２倍〜５倍、２倍〜１０倍、３倍〜５倍、または３倍〜１０倍低い。別の実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、最大で１ｍＬ／ｋｇ／日、最大で２ｍＬ／ｋｇ／日、最大で３ｍＬ／ｋｇ／日、最大で４ｍＬ／ｋｇ／日、最大で５ｍＬ／ｋｇ／日、最大で７ｍＬ／ｋｇ／日、最大で１０ｍＬ／ｋｇ／日、最大で１５ｍＬ／ｋｇ／日、または最大で２０ｍＬ／ｋｇ／日である。さらなる実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、１ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日、４ｍＬ／ｋｇ／日、５ｍＬ／ｋｇ／日、７ｍＬ／ｋｇ／日、１０ｍＬ／ｋｇ／日、１５ｍＬ／ｋｇ／日、または２０ｍＬ／ｋｇ／日である。さらに別の実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、１ｍＬ／ｋｇ／日〜２ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜３ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜１５ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、または５ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日である。またさらなる実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、哺乳類において測定されたクリアランス率である。別の実施形態において、該修飾抗体は、非ヒト霊長類において測定されたクリアランス率である。さらなる実施形態において、該修飾抗体のクリアランス率は、ヒト対象において測定されたクリアランス率である。またさらなる実施形態において、該アミノ酸置換は、Ｍ２５２Ｙ、Ｍ２５２Ｆ、Ｍ２５２Ｗ、Ｍ２５２Ｔ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｓ、Ｔ２５６Ｒ、Ｔ２５６Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５６Ｄ、Ｔ２５６Ｔ、Ｌ３０９Ｐ、Ｑ３１１Ｓ、Ｈ４３３Ｒ、Ｈ４３３Ｋ、Ｈ４３３Ｓ、Ｈ４３３Ｉ、Ｈ４３３Ｐ、Ｈ４３３Ｑ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｎ４３４Ｙ、およびＮ４３６Ｈからなる群から選択され、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。別の実施形態において、該アミノ酸置換のうちの少なくとも１つは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｆ、およびＮ４３６Ｈからなる群から選択され、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。さらに別の実施形態において、該修飾されたＩｇＧ定常ドメインは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。なお別の実施形態において、該修飾されたＩｇＧ定常ドメインは、該野生型ＩｇＧ定常ドメインよりもＦｃＲｎに対する親和性が高い。さらなる実施形態において、該ヒトＩｇＧ定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常ドメインである。なおさらなる実施形態において、該ＩｇＧは、ＩｇＧ１である。
本発明の別の態様は、上記の修飾抗体に関し、該可変ドメインは、配列番号１と同一の、または配列番号１と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２と同一の、または配列番号２と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３と同一の、または配列番号３と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、配列番号４と同一の、または配列番号４と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５と同一の、または配列番号５と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６と同一の、または配列番号６と比べて１つ、２つ、もしくは３つのアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。一実施形態において、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の修飾抗体であって、該可変ドメインは、配列番号１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、配列番号３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む。別の実施形態において、該可変ドメインは、３つのＣＤＲを含むＶＨドメインおよび３つのＣＤＲを含むＶＬドメインを含み、該ＶＨドメインのこれらの３つのＣＤＲは、配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含む。さらなる実施形態において、該可変ドメインは、３つのＣＤＲを含むＶＨドメイン、および３つのＣＤＲを含むＶＬドメインを含み、該ＶＬドメインのこれらの３つのＣＤＲは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む。またさらなる実施形態において、該可変ドメインは、配列番号７と同一の、または配列番号７と比べて１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、もしくは１０のアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み、配列番号８と同一の、または配列番号８と比べて１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つ、９つ、もしくは１０のアミノ酸残基置換を含む、アミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。別の実施形態において、該可変ドメインは、配列番号７のＶＨドメインおよび配列番号８のＶＬドメインを含む。
本発明の別の態様は、前述の修飾抗体をコードするアミノ酸配列をコードする核酸に関する。一実施形態において、該核酸は、配列番号１１〜１４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む。
本発明の別の態様は、前述の核酸を含むベクターに関する。
本発明の別の態様は、前述のベクターを含む単離細胞に関する。
本発明の別の態様は、前述の修飾抗体を発現する単離細胞に関する。
本発明の別の態様は、修飾抗体を産生する方法に関し、抗体を産生するのに十分な条件下で、前述の単離細胞を培養することと、この培養物から抗体を回収することと、を含む。
本発明の別の態様は、前述の修飾抗体を含む薬学的組成物に関する。
本発明の別の態様は、必要とするヒトの血清中の遊離ＩＬ−６の少なくとも９０％を中和する方法に関し、これには、有効量の前述の修飾抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、必要とするヒトの血清中のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の少なくとも９０％を阻害する方法に関し、これには、有効量の前述の修飾抗体をヒトに投与することを含む。
本発明の別の態様は、必要とするヒトの滑液中の遊離ＩＬ−６の少なくとも９０％を中和する方法に関し、これには、有効量の該修飾抗体をヒトに投与することを含む。
本発明の別の態様は、必要とするヒトの滑液中のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の少なくとも９０％を阻害する方法に関し、これには、有効量の前述の抗体をヒトに投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける滑膜細胞増殖を低下させる方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける滑膜炎を軽減させる方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける自己免疫疾患または障害を治療する方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける悪性腫瘍を治療する方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける炎症性疾患または障害を治療する方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。
本発明の別の態様は、ヒトにおける全身性エリテマトーデス、リウマチ性関節炎、または炎症性腸疾患を治療する方法に関し、これには、それを必要とするヒトに、治療有効量の前述の抗体を投与することを含む。一実施形態において、請求項４０〜４９のいずれか１項に記載の方法であって、該治療有効量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。別の実施形態において、該治療有効量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。なお別の実施形態において、該治療有効量の修飾抗体は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与される。なおさらなる実施形態において、該治療有効量の修飾抗体は、静脈内または皮下投与される。別の実施形態において、該患者は、単一の負荷用量の修飾抗体が投与され、その後に少なくとも１回の維持用量の修飾抗体を投与される。なおさらなる実施形態において、該負荷用量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。なおさらなる実施形態において、該負荷用量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。さらに別の実施形態において、該維持用量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。なお別の実施形態において、該維持用量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの修飾抗体の単回または分割量を含む。別の実施形態において、該維持用量は、負荷用量を投与してから１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、８週間後、または１２週間後に投与される。さらに別の実施形態において、該少なくとも２回の維持用量が、該患者に投与され、該維持用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回、投与される。なお別の実施形態において、該負荷用量の修飾抗体は、静脈内または皮下投与される。別の実施形態において、該維持用量は、静脈内または皮下投与される。さらなる実施形態において、該治療有効量の該修飾抗体は、第２の治療剤と組み合わせて投与される。
本発明の別の態様は、前述の抗体を含む滅菌された安定な水性製剤に関する。本発明のこの態様の一実施形態において、該抗体は、凍結乾燥に供さなかった。別の実施形態において、該抗体は、凍結乾燥に供した。別の実施形態において、当該修飾抗体の濃度は、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬである。さらなる実施形態において、該製剤は、少なくとも約１つの緩衝成分をさらに含む。別の実施形態において、該製剤は、少なくとも１つの賦形剤をさらに含む。さらに別の実施形態において、該緩衝成分は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。なお別の実施形態において、該緩衝成分は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、または約５ｍＭ〜約２０ｍＭの濃度のものである。さらに別の実施形態において、該緩衝成分は、約１０ｍＭ、約１５ｍＭ、約２０ｍＭ、または約２５ｍＭの濃度のものである。さらなる実施形態において、該賦形剤は、糖類である。さらに別の実施形態において、糖類は、二糖類である。さらに別の実施形態において、該二糖類は、トレハロースまたはスクロースである。さらなる実施形態において、該二糖類は、約１％〜約４０％、約２％〜約２０％、または約２％〜約１０％の濃度のものである。なおさらなる実施形態において、該二糖類は、約２％、約４％、または約８％の濃度のものである。さらに別の実施形態において、該賦形剤は、塩類である。なお別の実施形態において、該塩類は、塩化ナトリウムである。さらなる実施形態において、該塩化ナトリウムは、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度のものである。別の実施形態において、該塩化ナトリウムは、約７０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２０ｍＭ、または約１５０ｍＭの濃度のものである。さらなる実施形態において、該賦形剤は、界面活性剤である。さらなる実施形態において、該界面活性剤は、ポリソルベートである。なおさらなる実施形態において、該ポリソルベートは、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０である。またさらなる実施形態において、該界面活性剤は、約０．００１％〜約２％の濃度のものである。別の実施形態において、該界面活性剤は、約０．０１％、約０．０２％、約０．０４％、または約０．０８％の濃度のものである。なおさらなる実施形態において、該賦形剤は、アミノ酸である。さらに別の実施形態において、該アミノ酸は、グリシン、ヒスチジン、またはアルギニンからなる群から選択される。なお別の実施形態において、該アミノ酸は、約１０ｍＭ〜約４００ｍＭの範囲の濃度のものである。さらに別の実施形態において、該アミノ酸は、約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、または約４００ｍＭの濃度のものである。またさらなる実施形態において、該製剤は、約５．５〜約６．５の範囲のｐＨを有する。さらに別の実施形態において、当該製剤は、約６．０のｐＨを有する。さらに別の実施形態において、該製剤は、等張性である。別の実施形態において、該製剤は、４０℃での保存時に、少なくとも約４週間安定している。さらに別の実施形態において、該製剤は、５℃での保存時に、少なくとも約３ヶ月間安定している。別の実施形態において、該製剤は、５℃での保存時に、少なくとも約１２ヶ月間安定している。さらに別の実施形態において、該抗体は、４０℃で少なくとも約４週間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で２０％損失する。またさらなる実施形態において、該抗体は、５℃で少なくとも約３ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で２０％損失する。さらに別の実施形態において、該抗体は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で２０％損失する。さらに別の実施形態において、該抗体は、４０℃で少なくとも約４週間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で１０％損失する。別の実施形態において、請求項６４〜９３のいずれか１項に記載の製剤であって、該抗体は、５℃で少なくとも約３ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で１０％損失する。別の実施形態において、抗体は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で１０％損失する。別の実施形態において、該抗体は、４０℃で少なくとも約４週間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で５％損失する。別の実施形態において、該抗体は、５℃で少なくとも約３ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で５％損失する。別の実施形態において、該抗体は、５℃で少なくとも約１２ヶ月間にわたる該製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性を最大で５％損失する。別の実施形態において、該抗体は、凝集、または断片化の影響を受けやすい。別の実施形態において、当該抗体の約２％未満が、ＨＰＳＥＣによって測定して、４０℃での少なくとも約４週間にわたる保存時に凝集体を形成する。別の実施形態において、当該抗体の約２％未満が、ＨＰＳＥＣによって測定して、５℃での少なくとも３ヶ月間にわたる保存時に凝集体を形成する。別の実施形態において、当該抗体の約２％未満が、ＨＰＳＥＣによって測定して、５℃での少なくとも約１２ヶ月間にわたる保存時に凝集体を形成する。別の実施形態において、当該抗体の約５％未満が、ＳＥＣによって測定して、４０℃での少なくとも約４週間保存時に断片化される。別の実施形態において、当該抗体の約５％未満が、ＳＥＣによって測定して、５℃での少なくとも約３ヶ月間にわたる保存時に断片化される。別の実施形態において、当該抗体の約５％未満が、ＳＥＣによって測定して、５℃での少なくとも約１２ヶ月間にわたる保存時に断片化される。別の実施形態において、該製剤は、注射製剤である。別の実施形態において、該製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与に適している。別の実施形態において、該製剤は、エアロゾル投与に適している。
本発明の別の態様は、ヒトへの非経口投与に適している薬学的単位投与剤形に関し、好適な容器内に前述の抗体製剤のいずれかを含む。一実施形態において、該抗体製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内に投与される。
本発明の別の態様は、ヒトへのエアロゾル投与に適している薬学的単位剤形に関し、前述の抗体製剤のいずれかを含む。本発明のこの態様の一実施形態において、該抗体製剤は、鼻腔内に投与される。
本発明の別の態様は、前述の製剤のいずれかを含む密閉された容器に関する。
本発明の別の態様は、前述の製剤のいずれかを含むあらかじめ充填された注射器（ｐｒｅ−ｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）に関する。
本発明の別の態様は、前述の製剤のいずれかを含むキットに関する。
これらの態様および本発明の他の態様は、以下にさらに詳細に記載される。
用語
ここで、本明細書で使用される「および／または」は、２つの指定された特徴または構成要素のそれぞれが、他方を含む場合と含まない場合とを含めて具体的に開示されているものと解釈されるべきであることを指摘しておくのが便宜である。例えば、「Ａおよび／またはＢ」は、本明細書で個々に示されているかのように、（ｉ）Ａ、（ｉｉ）Ｂ、ならびに（ｉｉｉ）ＡおよびＢのそれぞれの特定の開示と解釈されるべきである。
ＩＬ−６およびＩＬ−６受容体
ＩＬ−６は、インターロイキン６である。ＩＬ−６はまた、「抗原」として本明細書に称され得る。
ヒトＩＬ−６の全長アミノ酸配列は、配列番号１５である。この配列は、インビボで切断されて、Ｎ末端リーダーペプチドが除去され、成熟ＩＬ−６を産生する。成熟ヒトＩＬ−６は、アミノ酸配列の配列番号１６を有する。成熟配列は、インビボ循環ＩＬ−６を示し、これは、本明細書中に記載の治療およびインビボ診断用途の標的抗原である。したがって、本明細書中で言及されるＩＬ−６は、通常、文脈によって特に示されない限り、成熟ヒトＩＬ−６である。
ＩＬ−６は、例えば、本明細書中に記載のアッセイで使用するために、ＨＩＳ ＦＬＡＧ等の検出可能な標識に結合してもよい。例えば、ＨＩＳ ＦＬＡＧ配列に結合したＩＬ−６を含む融合タンパク質を使用してもよい。
ＩＬ−６受容体ａすなわちＩＬ−６Ｒａは、インターロイキン６の受容体である。ＩＬ−６Ｒａはまた、ＩＬ−６Ｒα、ＩＬ−６Ｒａ、ＩＬ−６Ｒ、およびＣＤ１２６としても知られている。ＩＬ−６Ｒａは、膜貫通型および可溶性型の形態でインビボに存在する。ＩＬ−６Ｒａへの言及は、文脈によって特に指定されない限り、膜貫通ＩＬ−６Ｒａおよび／または可溶性ＩＬ−６Ｒａであり得る。
本明細書で言及されるＩＬ−６受容体は、特に指定されない限り、通常、ヒトＩＬ−６受容体である。ヒト可溶性ＩＬ−６Ｒａ（ｓＩＬ−６Ｒａ、ｓＩＬ−６Ｒ）のアミノ酸配列は、配列番号１７である。ヒト膜貫通ＩＬ−６Ｒａのアミノ酸配列は、配列番号１８である。
ＩＬ−６は、ＩＬ−６Ｒａに結合し、複合体のＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａを形成する。この複合体は、可溶性（ｓＩＬ−６Ｒａを含む）または膜結合型（膜貫通ＩＬ−６Ｒａを含む）のいずれかであり得る。ＩＬ−６Ｒａが可溶性型である場合、この複合体は、ＩＬ−６：ｓＩＬ−６Ｒａと示される。ＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａへの言及には、文脈によって特に指定されない限り、膜貫通ＩＬ−６Ｒａまたは可溶性ＩＬ−６Ｒａと複合体を形成したＩＬ−６が含まれ得る。
ｇｐ１３０
ｇｐ１３０は、ＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａ複合体の受容体である。ｇｐ１３０のクローニングおよび特徴付けは、Ｈｉｂｉ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ ６３：１１４９−１１５７（１９９０）に報告されている。ヒトｇｐ１３０の配列は、配列番号１９で示される。
結合性メンバー
ここで、互いに結合する分子対の１つのメンバーを説明する。結合対のメンバーは、天然由来であっても、全体的または部分的に合成によって生成してもよい。該分子対の１つのメンバーは、その表面上にある領域または空洞を有し、これは、分子対の他方のメンバーの特定の空間的および極性構成に結合し、したがって、それに相補的である。結合対の型の例は、抗原−抗体、ビオチン−アビジン、ホルモン−ホルモン受容体、受容体−リガンド、酵素−基質である。本発明は、抗原−抗体型の反応に関係している。
結合性メンバーは、通常、抗原結合部位を有する分子を含む。例えば、結合性メンバーは、抗体分子、または抗原結合部位を含む非抗体タンパク質であり得る。
抗原結合部位は、非抗体タンパク質骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）上、例えば、フィブロネクチンまたはシトクロムＢ等上でのＣＤＲの配置を用いて（Ｈａａｎ ＆ Ｍａｇｇｏｓ（２００４）ＢｉｏＣｅｎｔｕｒｙ，１２（５）：Ａ１−Ａ６、Ｋｏｉｄｅ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２８４：１１４１−１１５１、Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：４６３−４６９）、または所望の標的に対して結合特異性を付与するようにタンパク質骨格内ループのアミノ酸残基を無作為化するか、もしくは突然変異させることによって提供され得る。タンパク質中の新規結合部位を工学操作するための骨格は、Ｎｙｇｒｅｎらによって詳細に概説されている（Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，７：４６３−４６９）。擬似抗体（ａｎｔｉｂｏｄｙ ｍｉｍｉｃｓ）のためのタンパク質骨格は、ＷＯ／００３４７８４号（参照することによりその全体が本明細書中に組み入れられる）に開示されており、そこで発明者は、少なくとも１つの無作為化されたループを有するフィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含むタンパク質（擬似抗体）を説明している。１つ以上のＣＤＲ、例えば、ＨＣＤＲセットを移植するために好適な骨格は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーの任意のドメインメンバーによって提供することができる。この骨格は、ヒトまたは非ヒトタンパク質であり得る。非抗体タンパク質骨格の利点は、それが、少なくとも幾つかの抗体分子より小さくかつ／または製造が容易な骨格分子中に抗原結合部位を提供することができることである。結合性メンバーのサイズが小さいと、有用な生理学的特性、例えば、細胞に入る能力、組織に深く浸透する能力、または他の構造内の標的に到達する能力、または標的抗原のタンパク質空洞内に結合する能力がもたらされ得る。非抗体タンパク質骨格中の抗原結合部位の使用は、Ｗｅｓｓにおいて概説されている（Ｗｅｓｓ，Ｌ．（２００４）Ｉｎ：ＢｉｏＣｅｎｔｕｒｙ，Ｔｈｅ Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｎ ＢｉｏＢｕｓｉｎｅｓｓ，１２（４２），Ａ１−Ａ７）。安定な主鎖および１つ以上の可変ループを有するタンパク質が典型的であり、該ループまたは複数のループのアミノ酸配列が、標的抗原に結合する抗原結合部位を作り出すように特異的にまたはランダムに突然変異させられている。このようなタンパク質には、Ｓ．ａｕｒｅｕｓ由来のプロテインＡのＩｇＧ結合ドメイン、トランスフェリン、テトラネクチン（ｔｅｔｒａｎｅｃｔｉｎ）、フィブロネクチン（例えば、第１０フィブロネクチンＩＩＩ型ドメイン）、リポカリン（ｌｉｐｏｃａｌｉｎｓ）、ならびにガンマクリスタリン（ｇａｍｍａ−ｃｒｙｓｔａｌｌｉｎｅ）および他のＡｆｆｉｌｉｎ（商標）骨格（Ｓｃｉｌ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）が含まれる。他のアプローチの例には、分子内ジスルフィド結合を有するサイクロチド−小タンパク質に基づく合成「ミクロボディ（Ｍｉｃｒｏｂｏｄｉｅｓ）」、Ｍｉｃｒｏｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｖｅｒｓａｂｏｄｉｅｓ（商標），Ａｍｕｎｉｘ）、およびアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ）が含まれる。
抗体配列および／または抗原結合部位に加えて、本発明による結合性メンバーは、例えば、折り畳まれたドメイン等のペプチドまたはポリペプチドを形成するか、または抗原に結合する能力に加えて、別の機能的特徴を分子に付与する他のアミノ酸を含み得る。本発明の結合性メンバーは、検出可能な標識を保持してよく、毒素または標的部分または酵素に（例えば、ペプチジル結合またはリンカーを介して）共役してもよい。例えば、結合性メンバーは、触媒部位（例えば、酵素ドメイン中）ならびに抗原結合部位を含んでよく、該抗原結合部位は、抗原に結合し、ゆえに触媒部位を抗原に標的する。この触媒部位は、例えば、切断によって抗原の生物学的機能を阻害し得る。
上記のように、ＣＤＲを非抗体骨格によって担持させることができるが、本発明のＣＤＲまたはＣＤＲセットを担持するための構造は、概して、抗体重鎖もしくは軽鎖配列またはその実質的な部分であり、ＣＤＲまたはＣＤＲセットは、再配置された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる天然に存在するＶＨおよびＶＬ抗体可変ドメインのＣＤＲまたはＣＤＲセットに対応する位置に位置する。免疫グロブリン可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ．４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ． ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ．（１９８７））、およびこの最新版を参照するによって決定され得る。このデータベースに問い合わせるために、多くの学術的および商業的オンラインリソースが利用可能である。例えば、参考文献Ｍａｒｔｉｎ，Ａ．Ｃ．Ｒ．（Ａｃｃｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｋａｂａｔ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａｂａｓｅ ｂｙ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ ＰＲＯＴＥＩＮＳ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，２５（１９９６），１３０−１３３）、および関連オンラインリソース、現在のワールドワイドウェブアドレスのｂｉｏｉｎｆ．ｏｒｇ．ｕｋ／ａｂｓ／ｓｉｍｋａｂ．ｈｔｍｌを参照のこと。
ＣＤＲ領域またはＣＤＲとは、Ｋａｂａｔら（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ．ＵＳ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｐｕｂｌｉｃ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎまたは改訂版）、またはＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７（１９８７））によって定義される免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の超可変領域を示すことを意図する。抗体は、一般的に、３つの重鎖ＣＤＲおよび３つの軽鎖ＣＤＲを含有する。「ＣＤＲまたは複数のＣＤＲ」という用語は、場合により、それが認識する抗原またはエピトープに対する抗体の親和性による結合を担うアミノ酸残基の大部分を含有するこれらの領域の１つ、またはこれらの領域の数個、さらにはその全体を示すために、本明細書中で使用される。
６つの短いＣＤＲ配列のうち、重鎖の第３のＣＤＲ（ＨＣＤＲ３）は、より高いサイズ可変性（それを生じさせる遺伝子の配置機構に本質的に起因する大きな多様性）を有する。それは、短ければ２アミノ酸であり得るが、既知の最長サイズは２６である。また、ＣＤＲの長さは、具体的な基礎となるフレームワークによって収容できる長さに従って変動し得る。機能上、ＨＣＤＲ３は、抗体の特異性の決定に部分的に役割を果たす（Ｓｅｇａｌ ｅｔ ａｌ．，（１９７４）ＰＮＡＳ，７１：４２９８−４３０２、Ａｍｉｔ ｅｔ ａｌ．，（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３３：７４７−７５３、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１−９１７、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ，３４２：８７７−８８３、Ｃａｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：１９６５−１９６８、Ｓｈａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）ＰＮＡＳ，８７：４８１４−４８１７、Ｓｈａｒｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４４：４８６３−４８６９、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：１７０９−１７１９、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３（９）：１１２６−１１３６ ２００５）。
ＨＣＤＲ１は、カバット残基３１〜３５からなる、５アミノ酸長であり得る。
ＨＣＤＲ２は、カバット残基５０〜６５からなる、１７アミノ酸長であり得る。
ＨＣＤＲ３は、カバット残基９５〜１０２からなり、任意にカバット残基１００Ｄを含む、１１または１２アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ１は、カバット残基２４〜３４からなる、１１アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ２は、カバット残基５０−５６からなる、７アミノ酸長であり得る。
ＬＣＤＲ３は、カバット残基８９〜９７からなり、任意にカバット残基９５を含む、８または９アミノ酸長であり得る。
抗体分子
ここでは、天然であるか、または部分的もしくは完全に合成によって生成される、免疫グロブリンを説明する。この用語はまた、抗体抗原結合部位を含む任意のポリペプチドまたはタンパク質も含む。本発明は、天然の形態での抗体に関するものではなく、すなわち、それらは、それらの天然環境中に存在しないが、それらは、天然供給源から単離することができたか、または精製によって得ることができたか、または遺伝子組換え、もしくは化学合成によって得ることができたものであり、かつ後に記載されるように、それらは、非天然アミノ酸を含有できることが理解されなければならない。抗体抗原結合部位を含む抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、ｓｃＦｖ、Ｆｖ、ｄＡｂ、およびＦｄ等の分子が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、Ｆａｂ２、Ｆａｂ３、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、およびミニボディー（ｍｉｎｉｂｏｄｉｅｓ）を含む、１つ以上の抗体抗原結合部位を含む種々の他の抗体分子が、作製されている。抗体分子およびそれらの構築および使用のための方法は、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ（Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３（９）：１１２６−１１３６（２００５））に記載されている。
モノクローナル抗体および他の抗体を使用し、かつ組換えＤＮＡ技術の技術を使用して標的抗原に結合する他の抗体またはキメラ分子を製造することが可能である。このような技術は、抗体の免疫グロブリン可変領域、またはＣＤＲをコードするＤＮＡを異なる免疫グロブリンの定常領域、または定常領域とフレームワーク領域に導入することを含み得る。例えば、ＥＰ−Ａ−１８４１８７、ＧＢ ２１８８６３８Ａ、またはＥＰ−Ａ−２３９４００、およびそれに続く多くの文献を参照のこと。ハイブリドーマまたは、抗体を産生する他の細胞を、遺伝子突然変異または他の変化に供してもよく、これらは、産生される抗体の結合特異性を変化させてもさせなくてもよい。
抗体は、多くの方法で改変できるので、「抗体分子」という用語は、必要な特異性を有する抗体抗原結合部位を有し、かつ／または抗原に結合する、任意の結合性メンバーまたは物質を含むと解釈されるべきである。したがって、この用語は、抗体断片および誘導体を含み、これには、天然であるか完全または部分的に合成されたものであるかにかかわらず、抗体抗原結合部位を含む任意のポリペプチドが含まれる。したがって、別のポリペプチド（例えば、別の種由来または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する）に融合された、抗体抗原結合部位または等価物を含むキメラ分子が含まれる。キメラ抗体のクローニングおよび発現は、ＥＰ−Ａ−０１２０６９４およびＥＰ−Ａ−０１２５０２３、およびそれに続く多くの文献に記載されている。
抗体工学分野で利用可能なさらなる技術によって、ヒト抗体およびヒト化抗体を単離することが可能になった。例えば、ヒトハイブリドーマは、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＆ Ｄｕｂｅｌ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ ＆ Ｄｕｂｅｌ，Ｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＬＬＣ；２００１，ＩＳＢＮ：３５４０４１３５４５）によって記載されるように作製することができる。結合性メンバーを作製するための別の既存技術であるファージディスプレイは、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ＆ Ｄｕｂｅｌ（Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ ＆ Ｄｕｂｅｌ，Ｓ，Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＬＬＣ；２００１，ＩＳＢＮ：３５４０４１３５４５）および第ＷＯ９２／０１０４７号（さらに以下で考察される）、ならびに米国特許第ＵＳ５９６９１０８号、第ＵＳ５５６５３３２号、第ＵＳ５７３３７４３号、第ＵＳ５８５８６５７号、第ＵＳ５８７１９０７号、第ＵＳ５８７２２１５号、第ＵＳ５８８５７９３号、第ＵＳ５９６２２５５号、第ＵＳ６１４０４７１号、第ＵＳ６１７２１９７号、第ＵＳ６２２５４４７号、第ＵＳ６２９１６５０号、第ＵＳ６４９２１６０号、第ＵＳ６５２１４０４号等の多くの刊行物で詳細に記載されている。
トランスジェニックマウス、例えばマウス抗体遺伝子が不活性化され、ヒト抗体遺伝子で機能的に置換されつつ、マウス免疫系の無傷の他の構成要素を残しているマウスを、ヒト抗体の単離に使用することができる（Ｍｅｎｄｅｚ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ，１５（２）：１４６−１５６）。ヒト化抗体は、例えば、ＷＯ第９１／０９９６７号、ＵＳ第５，５８５，０８９号、ＥＰ第５９２１０６号、ＵＳ第５６５，３３２号、およびＷＯ第９３／１７１０５号に開示されるもの等の当該技術分野において公知の技術を使用して生成することができる。さらに、ＷＯ第２００４／００６９５５号は、非ヒト抗体の可変領域のＣＤＲ配列の標準的ＣＤＲ構造型を、ヒト抗体配列、例えば、生殖細胞系抗体遺伝子セグメントのライブラリーからの対応するＣＤＲの標準的ＣＤＲ構造型と比較することによる、ヒト抗体遺伝子由来の可変領域フレームワーク配列の選択に基づいて、抗体をヒト化するための方法を記載している。非ヒトＣＤＲと類似の標準的ＣＤＲ構造型を有するヒト抗体可変領域は、ヒトフレームワーク配列が選択される、メンバーヒト抗体配列のサブセットを構成する。該サブセットメンバーを、ヒトおよび非ヒトＣＤＲ配列間のアミノ酸類似性によってさらに分類してよい。ＷＯ第２００４／００６９５５号の方法においては、選択したサブセットメンバーヒトフレームワークを用いて、ヒトＣＤＲ配列を非ヒトＣＤＲ対応物で機能的に置換するキメラ抗体を構築するためのフレームワーク配列を提供するために、最高位にランキングされたヒト配列を選択し、それによって、非ヒト抗体とヒト抗体との間のフレームワーク配列を比較する必要なく、高親和性かつ低免疫原性のヒト化抗体を提供する。この方法に従って作製されたキメラ抗体もまた開示される。
合成抗体分子は、例えば、Ｋｎａｐｐｉｋら（Ｋｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９６，５７−８６）またはＫｒｅｂｓら（Ｋｒｅｂｓ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４ ６７−８４）によって記載されるように、合成されかつ好適な発現ベクター内に組み立てられたオリゴヌクレオチドを用いて作製された遺伝子から発現させることによって作製してよい。
全抗体の断片は、抗原に結合する機能を達成できることが示されている。結合性断片の例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、およびＣＨ１ドメインからなるＦａｂ断片、（ｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、（ｉｉｉ）単一抗体のＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｉｖ）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ，Ｅ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１，５４４−５４６、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ，３４８，５５２−５５４、Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１，４８４−４９０）、（ＶＨまたはＶＬドメインからなる）、（ｖ）単離されたＣＤＲ領域、（ｖｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片（２つの連結されたＦａｂ断片を含む二価断片）（ｖｉｉ）一本鎖Ｆｖ分子（ｓｃＦｖ）（ＶＨドメインとＶＬドメインが、２つのドメインが結合して抗原結合部位を形成することを可能にするペプチドリンカーによって連結されている）（Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４２，４２３−４２６、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ，（１９８８）ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８５，５８７９−５８８３）、（ｖｉｉｉ）二重特異性一本鎖Ｆｖ二量体（ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９９６５）および（ｉｘ）遺伝子融合によって構築された、多価、または多重特異性断片である「ダイアボディ」（ＷＯ第９４／１３８０４号、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ，（１９９３）ＰＮＡＳ ＵＳＡ９０ ６４４４−６４４８）である。ＶＨおよびＶＬドメインを連結するジスルフィド架橋を組み込むことによって、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、またはダイアボディ分子を安定化することができる（Ｒｅｉｔｅｒ，Ｙ．ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ，１４，１２３９−１２４５）。また、ＣＨ３ドメインに連結されたｓｃＦｖを含むミニボディを作製することもできる（Ｈｕ，Ｓ．ｅｔ ａｌ，（１９９６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５６，３０５５−３０６１）。結合断片の他の例は、Ｆａｂ’（重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシル末端に少数の残基が付加されていることによって、Ｆａｂ断片と異なり、抗体ヒンジ領域由来の１つ以上のシステインを含む）およびＦａｂ’−ＳＨ（定常ドメインのシステイン残基（群）が遊離のチオール基を担持するＦａｂ’断片）である。
Ｑｕｉら（Ｑｕｉ ｅｔ ａｌ．，（２００７）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２５：９２１−９２９）は、フレームワーク領域によって連結されている２つのＣＤＲのみ含有する抗体分子を説明した。ＶＨまたはＶＬドメイン由来のＣＤＲ３が、他方のドメインのＣＤＲ１またはＣＤＲ２ループに連結された。選択されたＣＤＲ１またはＣＤＲ２のＣ末端とＣＤＲ３のＮ末端がＦＲ領域を介して連結された。Ｑｕｉらは、最少の疎水性部分を有するＦＲ領域を選択した。試験した抗体の最良の組み合わせは、ＶＨ ＦＲ２によってＶＨ ＣＤＲ３に連結されたＶＬ ＣＤＲ１であることが見出された（ＶＨＣＤＲ１−ＶＨＦＲ２−ＶＬＣＤＲ３）。約３ｋＤａの分子量で、これらの抗体分子は、完全免疫グロブリン（約１５０ｋＤａ）またはｓｃＦｖ（約２８ｋＤａ）と比較して改善された組織浸透性の点で利点を提供する。
本発明の抗体断片は、酵素、例えば、ペプシンもしくはパパインによる消化等の方法、および／または化学的還元によるジスルフィド架橋の切断によって、親抗体分子、または抗体分子２、３、４、５、７、８、１０、１４、１６、１７、１８、１９、２１、２２、および２３のいずれかから出発して得ることができる。別の様式では、本発明に含まれる抗体断片は、同様に、当業者に周知の遺伝子組換え技術、または例えば、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ等の企業によって供給されるような自動ペプチドシンセサイザーを用いるペプチド合成、または核酸合成および発現によって得ることができる。
本発明による機能的抗体断片には、化学修飾、特にペグ化によって、またはアルブミンもしくはその断片への融合によるリポソームへの取り込みによって、半減期を増加した任意の機能的断片が含まれる。
ｄＡｂ（ドメイン抗体）は、抗体の単量体の抗原結合小断片であり、すなわち抗体重鎖または軽鎖の可変領域である（Ｈｏｌｔ ｅｔ ａｌ（２００３）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１，４８４−４９０）。ＶＨ ｄＡｂは、ラクダ科動物（例えばラクダ、ラマ）に天然に存在し、ラクダ科動物を標的抗原で免疫化し、抗原特異的Ｂ細胞を単離し、個々のＢ細胞からｄＡｂ遺伝子を直接クローニングすることによって生成することができる。ｄＡｂはまた、細胞培養で生成可能である。それらの小さいサイズ、良好な溶解度、および温度安定性によって、それらは、特に生理学的に有用であり、かつ選択および親和性成熟に好適である。ラクダ科動物のＶＨ ｄＡｂは、「ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）」の名称で治療用途に開発中である。本発明の結合性メンバーは、実質的に本明細書中に示されているＶＨもしくはＶＬドメイン、または実質的に本明細書中に示されているＣＤＲセットを含むＶＨもしくはＶＬドメインを含むｄＡｂであり得る。
二重特異性または二機能性抗体は、２つの異なる可変領域が同一分子中で組み合わされている第２世代のモノクローナル抗体を形成する（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｂｏｈｌｅｎ（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ ＆ Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ Ｒｅｖ．１８：４１１−４１９）。それらの使用は、新規エフェクター機能を動員するか、または腫瘍細胞の表面上の幾つかの分子を標的にするそれらの能力から、診断分野および治療分野でともに実証されている。二重特異性抗体が使用される場合、これらは、従来の二重特異性抗体であり得、種々の方法で製造することができ（Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ Ｇ．（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．４，４４６−４４９）、例えば、化学的にまたはハイブリッドハイブリドーマから調製することができるか、または上述の二重特異性抗体断片のいずれかであり得る。これらの抗体は、化学的方法（Ｇｌｅｎｎｉｅ Ｍ Ｊ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９，２３６７−２３７５、Ｒｅｐｐ Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｊ．Ｈｅｍａｔｏｔｈｅｒ．４：４１５−２１）または身体的方法（ｓｏｍａｔｉｃ ｍｅｔｈｏｄｓ）（Ｓｔａｅｒｚ Ｕ．Ｄ．ａｎｄ Ｂｅｖａｎ Ｍ．Ｊ．（１９８６）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８３：１４５３−７、Ｓｕｒｅｓｈ Ｍ．Ｒ．ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｍｅｔｈｏｄ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１２１：２１０−２２８）によって取得することができるか、同様かつ優先的に、ヘテロ二量体化を強制することが可能で、ゆえに求められる抗体の精製プロセスを容易にする遺伝子工学技術によって得ることができる（Ｍｅｒｃｈａｎｄ ｅｔ ａｌ．（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１６：６７７−６８１）。二重特異性抗体の例には、ＢｉＴＥ（商標）技術の二重特異性抗体が含まれ、その技術では異なる特異性を有する２つの抗体の結合ドメインを使用し、かつ短い柔軟なペプチドを介して直接連結することができる。これは、短い単一ポリペプチド鎖上で２つの抗体を組み合わせる。ダイアボディおよびｓｃＦｖは、可変ドメインのみを用いて、Ｆｃ領域を用いずに構築することができ、抗イディオ型反応の影響を低減する可能性がある。
二重特異性抗体は、完全ＩｇＧとして、二重特異性Ｆａｂ’２として、Ｆａｂ’ＰＥＧとして、ダイアボディとして、または二重特異性ｓｃＦｖとして構築することができる。さらに、当該技術分野において公知の慣用の方法を用いて、２つの二重特異性抗体を連結し、四価抗体を形成することができる。
二重特異性完全抗体とは対照的に、二重特異性ダイアボディは、容易に構築することができ、かつ大腸菌で発現することができるため、これらは、特に有用であり得る。適切な結合特異性のダイアボディ（および抗体断片等の多数の他のポリペプチド）は、ファージディスプレイ（ＷＯ第９４／１３８０４号）を用いて、ライブラリーから容易に選択することができる。ダイアボディの一方のアームが一定に保たれて、例えば、ＩＬ−６に対する特異性を有する場合、他方のアームが変動するライブラリーを作製することができ、適切な特異性の抗体を選択することができる。Ｒｉｄｇｅｗａｙら（Ｒｉｄｇｅｗａｙ，Ｊ．Ｂ．Ｂ．ｅｔ ａｌ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，９，６１６−６２１）に記載されるような、代替の操作方法によって、二重特異性完全抗体を作製し得る。
当該技術分野において、ＩＬ−６に対する抗体を取得するための種々の方法が利用可能である。抗体は、特にヒト、マウス、キメラ、またはヒト化起源のモノクローナル抗体であり得、それは当業者に周知の標準的方法に従って取得することができる。
一般に、特にマウス起源のモノクローナル抗体またはそれらの機能的断片の調製では、特に手引「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｎ．Ｙ．，ｐｐ．７２６，１９８８）に記載される技術またはＫｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７）によって記載されるハイブリドーマからの調製技術を参照することが可能である。
モノクローナル抗体は、例えば、ＩＬ−６、または該モノクローナル抗体によって認識されるエピトープを含有するその断片の１つに対して免疫化された動物のＢ細胞から取得することができる。それらを含む好適な断片およびペプチドまたはポリペプチドは、本明細書中に記載されており、それを使用して、動物を免疫し、ＩＬ−６に対する抗体を作製することができる。該ＩＬ−６、またはその断片の１つは、特に、ＩＬ−６またはその断片をコードするｃＤＮＡ配列に含有される核酸配列から出発する遺伝子組換えによって、ＩＬ−６および／またはその断片のペプチド配列に含まれるアミノ酸配列から出発するペプチド合成によって、通常の作業方法に従って製造することができる。
モノクローナル抗体は、例えば、アフィニティーカラムで精製することができ、これには、ＩＬ−６、または該モノクローナル抗体によって認識されるエピトープを含有するその断片の１つが予め固定されている。さらに具体的には、モノクローナル抗体は、プロテインＡおよび／またはＧでのクロマトグラフィーによって精製することができ、その後、残留するタンパク質混入物ならびにＤＮＡおよびＬＰＳ自体を排除するためのイオン交換クロマトグラフィーを行うかまたは行わずに、その後、二量体または他の多量体の存在に起因する潜在的凝集物を排除するために、セファロースゲルでの排除クロマトグラフィーを行うかまたは行わずに精製することができる。一実施形態において、これらの全技術を、同時にまたは順次使用することができる。
抗原結合部位
ここでは、標的抗原の全体または部分に結合し、それと相補的な分子の部分を説明する。抗体分子では、それは、抗体抗原結合部位と称され、標的抗原の全体または部分に結合し、それと相補的な抗体の部分を含む。抗原が大きい場合、抗体は、抗原の特定部分にしか結合せず、該部分は、エピトープと称される。抗体抗原結合部位は、１つ以上の抗体可変ドメインによって提供され得る。抗体抗原結合部位は、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得る。
ＷＯ第２００６／０７２６２０号は、免疫グロブリンドメインのベータ鎖間に延在する構造的（非ＣＤＲ）ループ中での抗原結合部位の操作を説明する。抗原結合部位は、ＣＤＲの天然の位置から分離する抗体分子の領域中、例えば、ＶＨもしくはＶＬドメインのフレームワーク領域中、または抗体定常ドメイン中、例えば、ＣＨ１および／もしくはＣＨ３中で操作され得る。構造的領域中で操作される抗原結合部位は、ＶＨおよびＶＬドメインのＣＤＲのセットによって形成される抗原結合部位に加えられるか、またはその代わりであり得る。複数の抗原結合部位が、抗体分子中に存在する場合、それらは、同一の抗原（ＩＬ−６）に結合し、それによって、結合性メンバーの結合価を増加し得る。代替として、複数の抗原結合部位は、異なる抗原（ＩＬ−６および１つ以上の別の抗原）に結合し得、これを使用して、エフェクター機能を追加し得るか、半減期を延長し得るか、または抗体分子のインビボの送達を改善し得る。
単離された
これは、本発明の結合性メンバー、またはかかる結合性メンバーをコードする核酸が、概して、本発明に合っている状態を指す。ゆえに、本発明による結合性メンバー、ＶＨおよび／もしくはＶＬドメイン、およびコード核酸分子およびベクターは、実質的に純粋または均質な形態で、例えば、それらの天然環境から単離および／もしくは精製されている状態、または核酸の場合、必要な機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の起源の核酸または遺伝子を含まないか、または実質的に含まない状態で提供することができる。単離されたメンバーおよび単離された核酸は、それらに天然に付随している物質、例えば、それらの天然環境、またはかかる調製が体外もしくはインビボで実行される組み換えＤＮＡ技術に基づく場合には、それらが調製される環境（例えば、細胞培養）中で、それらと共に見出される他のポリペプチドまたは核酸等を含まないか、または実質的に含まない。メンバーおよび核酸は、希釈剤またはアジュバントと共に製剤化することができ、それでも事実上単離されていることができ、例えば、該メンバーは、イムノアッセイで用いるためのマイクロタイタープレートをコーティングするために使用される場合、通常、ゼラチンまたは他の担体と混合されるか、または診断もしくは治療で使用される場合、薬学的に許容される担体または希釈剤と混合される。結合性メンバーは、天然に、または異種真核細胞（例えば、ＣＨＯもしくはＮＳ０（ＥＣＡＣＣ８５１１０５０３）細胞）の系によってグリコシル化され得るか、または（例えば、原核細胞での発現によって生成される場合）非グリコシル化され得る。
また、抗ＩＬ−６抗体分子を含む不均一調製物も、本発明の部分を形成する。例えば、このような調製物は、完全長重鎖およびＣ末端リシンを欠いている重鎖を有し、種々の程度のグリコシル化を有し、かつ／または誘導体化アミノ酸、例えば、ピログルタミン酸残基を形成するＮ末端グルタミン酸の環化等を有する抗体の混合物であり得る。
本明細書中で使用される、「実質的に示されているように」という語句は、本明細書中に記載の結合性メンバーのＶＨまたはＶＬドメインの関連ＣＤＲの特徴が、本明細書中に配列が示されている特定領域と同一であるか、または非常に類似していることを指す。本明細書中で使用される、１つ以上の可変ドメインの特定領域に関する「非常に類似している」という語句は、ＣＤＲおよび／またはＶＨまたはＶＬドメイン中で１〜約５、例えば、１〜４（例えば、１〜３、または１もしくは２、または３もしくは４を含む）のアミノ酸置換を行い得ることが企図される。
抗体１８ではない、抗体１８ＥのＦｃ領域は、ＹＴＥエピトープを含む。Ｆｃ領域内のＹＴＥエピトープの存在は、ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、抗ＹＴＥ捕捉抗体を用いることによって検出された。抗体１８および抗体１８Ｅに対するＥＬＩＳＡ滴定曲線を示す。 抗体１８、抗体１８Ｅ、ＩＬ−６抗体Ａ（ＡＢ Ａ）、およびＩＬ−６抗体Ｂ（ＡＢ Ｂ）によって結合するＩＬ−６が、ＥＬＩＳＡアッセイを用いてモニターされた。大腸菌由来の組換えＩＬ−６が、捕捉試薬として使用された。抗体１８および抗体１８Ｅは、実質的には同一のＩＬ−６の結合活性を示した。抗体１８および抗体１８Ｅに対して検出されたＥＣ５０は、それぞれ、６．１ｐＭおよび６．５ｐＭであった。 抗体１８および抗体１８Ｅは、ＩＬ−６によって誘発されるＴＦ−１細胞増殖を、実質的に同一の有効性で阻害する。ＩＣ５０値は、抗体１８、抗体１８Ｅ、ＩＬ−６抗体Ａ（ＡＢ Ａ）、およびＩＬ−６抗体Ｂ（ＡＢ Ｂ）に対して決定された。抗体濃度の関数として最大阻害％曲線を示す。抗体１８および抗体１８Ｅに対して検出されたＩＣ５０は、それぞれ、４．５ｐＭおよび５．２ｐＭであった。 抗体１８および抗体１８Ｅは、ＩＬ−６によって誘発される、ヒト滑液線維芽細胞からのＶＥＧＦの内因性放出を、実質的には同一の有効性で阻害する。ＩＣ５０値は、抗体１８、抗体１８Ｅ、ＩＬ−６抗体Ａ（ＡＢ Ａ）、およびＩＬ−６抗体Ｂ（ＡＢ Ｂ）に対して決定された。抗体濃度の関数として最大阻害％曲線を示す。抗体１８および抗体１８Ｅに対して検出されたＩＣ５０は、それぞれ、１．３ｐＭおよび１．２ｐＭであった。 抗体１８および抗体１８Ｅの薬物動態学的プロファイル ５ｍｇ／ｋｇの単回用量の抗体１８または抗体１８Ｅを、カニクイザルに皮下または静脈内に投与した。抗体投与後に検出された血漿抗体レベルを、時間の関数として示す。静脈内および皮下投与後の抗体１８の半減期は、それぞれ、約８．５日間および９．１日間である。静脈内および皮下投与後の抗体１８Ｅの半減期は、それぞれ、約２８．４日間および２８．８日間である。 抗体１８および抗体１８Ｅの薬物動態学的および薬力学的プロファイル ５ｍｇ／ｋｇの抗体１８または抗体１８Ｅ抗体を、カニクイザルに皮下投与した。抗体投与後に検出された血漿抗体レベルおよび総血漿ＩＬ−６レベルを、時間の関数として示す。記号は、実験に基づくＰＫおよびＰＤデータを示し、点線は、ＰＫおよびＰＤデータに同時にフィットしたＰＫＰＤモデルである。抗体１８および抗体１８Ｅの推定された半減期は、それぞれ、９．１日間および２８．８日間である。抗体１８および抗体１８Ｅの推定されたクリアランスは、それぞれ、１３．１ｍＬ／日／ｋｇおよび２．８ｍＬ／日／ｋｇである。 種々の用量の抗体１８Ｅの皮下投与後のＲＡ患者の血漿中の遊離ＩＬ−６レベルの模擬実験。この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、１００ｍｇの抗体１８Ｅの８週間ごとの皮下投与によって、または５０ｍｇの抗体１８Ｅの４週間ごとの皮下投与によって達成されることを予測する。１００ｍｇの抗体１８Ｅの１２週間ごとの皮下投与は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害を達成しないことを予測する。 抗体１８または抗体１８Ｅの皮下投与後のＲＡ患者の血漿中の遊離ＩＬ−６レベルの模擬実験。この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、２００ｍｇの抗体１８Ｅの単回負荷用量を投与し、続いて、１００ｍｇの維持用量の抗体１８Ｅを８週間ごとに投与することによって達成されることを予測する。この模擬実験は、５００ｍｇの抗体１８の８週間ごとの投与が、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害を達成しないことを予測する。 種々の用量の抗体１８または抗体１８Ｅの皮下投与後のＲＡ患者の血漿中の遊離ＩＬ−６レベルの模擬実験 この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、１００ｍｇの抗体１８Ｅの単回負荷用量を皮下投与し、続いて、５０ｍｇの維持用量の抗体１８Ｅを月１回皮下投与することによって達成されることを示す。この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、１００ｍｇの抗体１８の隔週の皮下投与によって達成されるであろうが、１００ｍｇの抗体１８の月１回の皮下投与によってでは達成されないことを予測する。 種々の用量の抗体１８または抗体１８Ｅの皮下投与後のＲＡ患者の血漿中の遊離ＩＬ−６レベルの模擬実験。この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、２００ｍｇの抗体１８Ｅの単回負荷用量を皮下投与し、続いて、１００ｍｇの維持用量の抗体１８Ｅを４週間ごとまたは８週間ごとに皮下投与することによって達成されることを予測する。この模擬実験は、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した少なくとも９０％の阻害が、１００ｍｇの抗体１８を４週間ごとまたは８週間ごとに投与することによって達成され得ないことをさらに予測する。 マウスＦＣＡ尾部のモデルにおいて、４６℃での熱に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の効果を示す。 マウスＦＣＡ尾部のモデルにおいて、機械的圧力に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の効果を示す。 マウスＦＣＡの２４時間モデルにおいて、熱に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の効果を示す。 マウスＦＣＡの４８時間モデルにおいて、熱に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の用量依存性効果を示す。 マウスＦＣＡの２４時間モデルにおいて、機械的圧力に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の用量依存性効果を示す。 マウスＦＣＡの４８時間モデルにおいて、機械的圧力に対する過敏症におけるｍＡａｂ４０６の用量依存性効果を示す。 ４８時間でのマウスＦＣＡの尾部モデルにおいて、熱に対する過敏症における小分子ナプロキセンの効果を示す。 ４８時間でのマウスＦＣＡの尾部モデルにおいて、機械的圧力に対する過敏症における小分子ナプロキセンの効果を示す。
本発明は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を作製するための方法に関する。本発明の方法を用いて、抗ＩＬ−６親抗体を修飾して、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を作製し得る。ヒトＩＬ−６抗原に特異的に結合する任意の抗ＩＬ−６抗体は、本発明の方法を実行する目的で、使用され得る。一実施形態において、ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０６５３７８号に開示される抗ＩＬ−６抗体は、本発明の方法を実行する目的で、修飾または使用され得る。特定の実施形態において、抗体１８（以下、抗体１８またはＡｂ１８）としてＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０６５３７８号に表される抗ＩＬ−６抗体は、本発明の方法を実行する目的で、修飾または使用され得る。
本発明は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を提供する。一実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも長い延長したインビボ半減期を有する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、抗体１８の半減期よりも長い延長したインビボ半減期を有する。
本発明は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を提供する。一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、哺乳類において測定された半減期である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザルまたはマカク（ｍａｃａｑｕｅ）であるが、これに限定されない）において測定された半減期である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、ヒト対象において測定された半減期である。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍長い。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または２０倍長い。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも２倍〜３倍、２倍〜５倍、２倍〜１０倍、３倍〜５倍、または３倍〜１０倍長い。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、少なくとも約２０倍長い。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、または約２０倍長い。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体の半減期よりも約２倍〜約３倍、約２倍〜約５倍、約２倍〜約１０倍、約３倍〜約５倍、または約３倍〜約１０倍長い。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、少なくとも１０日間、少なくとも１５日間、少なくとも２０日間、少なくとも２５日間、少なくとも２６日間、少なくとも２７日間、少なくとも２８日間、少なくとも２９日間、少なくとも３０日間、少なくとも３５日間、少なくとも４０日間、少なくとも４５日間、または少なくとも５０日間である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、１０日間、１５日間、２０日間、２５日間、２８日間、２９日間、３０日間、３５日間、４０日間、４５日間、または５０日間である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、１０日間〜２０日間、１０日間〜３０日間、１０日間〜４０日間、１０日間〜５０日間、２０日間〜３０日間、２０日間〜４０日間、２０日間〜５０日間、２５日間〜３０日間、２５日間〜４０日間、２５日間〜５０日間、３０日間〜４０日間、３０日間〜５０日間、または４０日間〜５０日間である。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、少なくとも約２０日間、少なくとも約２５日間、少なくとも約２６日間、少なくとも約２７日間、少なくとも約２８日間、少なくとも約２９日間、少なくとも約３０日間、少なくとも約３５日間、少なくとも約４０日間、少なくとも約４５日間、または少なくとも約５０日間である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、約１０日間、約１５日間、約２０日間、約２５日間、約２８日間、約２９日間、約３０日間、約３５日間、約４０日間、約４５日間、または約５０日間である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、約１０日間〜約２０日間、約１０日間〜約３０日間、約１０日間〜約４０日間、約１０日間〜約５０日間、約２０日間〜約３０日間、約２０日間〜約４０日間、約２０日間〜約５０日間、約２５日間〜約３０日間、約２５日間〜約４０日間、約２５日間〜約５０日間、約３０日間〜約４０日間、約３０日間〜約５０日間、または約４０日間〜約５０日間である。
本発明は、クリアランス率が低下している抗ＩＬ−６抗体をさらに提供する。本明細書中に使用される、クリアランスという用語は、薬物材料、すなわち、抗ＩＬ−６抗体が、単位時間当たり完全に除去される、血漿量を示すことが理解される。一実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、親抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率と比較して、クリアランス率が低下している。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、抗体１８のクリアランス率と比較して、クリアランス率が低下している。
本発明は、クリアランス率が低下している抗ＩＬ−６抗体を提供する。一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、哺乳類において測定されたクリアランス率である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、非ヒト霊長類（例えば、カニクイザルまたはマカク（ｍａｃａｑｕｅ）に限定されない）において測定されたクリアランス率である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、ヒト対象において測定されたクリアランス率である。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍低い。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、または２０倍低い。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも２倍〜３倍、２倍〜５倍、２倍〜１０倍、３倍〜５倍、または３倍〜１０倍低い。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも少なくとも約２倍、少なくとも約３倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、または少なくとも約２０倍低い。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約１０倍、または約２０倍低い。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、同一の可変ドメインおよび野生型定常ドメインを有する抗体のクリアランス率よりも約２倍〜約３倍、約２倍〜約５倍、約２倍〜約１０倍、約３倍〜約５倍、または約３倍〜約１０倍低い。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、最大で１ｍＬ／ｋｇ／日、最大で２ｍＬ／ｋｇ／日、最大で３ｍＬ／ｋｇ／日、最大で４ｍＬ／ｋｇ／日、最大で５ｍＬ／ｋｇ／日、最大で７ｍＬ／ｋｇ／日、最大で１０ｍＬ／ｋｇ／日、最大で１５ｍＬ／ｋｇ／日、または最大で２０ｍＬ／ｋｇ／日である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、１ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日、４ｍＬ／ｋｇ／日、５ｍＬ／ｋｇ／日、７ｍＬ／ｋｇ／日、１０ｍＬ／ｋｇ／日、１５ｍＬ／ｋｇ／日、または２０ｍＬ／ｋｇ／日である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、１ｍＬ／ｋｇ／日〜２ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜３ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、１ｍＬ／ｋｇ／日〜１５ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、２ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日〜５ｍＬ／ｋｇ／日、３ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日、または５ｍＬ／ｋｇ／日〜１０ｍＬ／ｋｇ／日である。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、最大で約１ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約２ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約３ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約４ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約５ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約７ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約１０ｍＬ／ｋｇ／日、最大で約１５ｍＬ／ｋｇ／日、または最大で約２０ｍＬ／ｋｇ／日である。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、約１ｍＬ／ｋｇ／日、約２ｍＬ／ｋｇ／日、約３ｍＬ／ｋｇ／日、約４ｍＬ／ｋｇ／日、約５ｍＬ／ｋｇ／日、約７ｍＬ／ｋｇ／日、約１０ｍＬ／ｋｇ／日、約１５ｍＬ／ｋｇ／日、または約２０ｍＬ／ｋｇ／日である。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体のクリアランス率は、約１ｍＬ／ｋｇ／日〜約２ｍＬ／ｋｇ／日、約１ｍＬ／ｋｇ／日〜約３ｍＬ／ｋｇ／日、約１ｍＬ／ｋｇ／日〜約５ｍＬ／ｋｇ／日、約１ｍＬ／ｋｇ／日〜約１０ｍＬ／ｋｇ／日、約１ｍＬ／ｋｇ／日〜約１５ｍＬ／ｋｇ／日、約２ｍＬ／ｋｇ／日〜約５ｍＬ／ｋｇ／日、約２ｍＬ／ｋｇ／日〜約１０ｍＬ／ｋｇ／日、約３ｍＬ／ｋｇ／日〜約５ｍＬ／ｋｇ／日、約３ｍＬ／ｋｇ／日〜約１０ｍＬ／ｋｇ／日、または約５ｍＬ／ｋｇ／日〜約１０ｍＬ／ｋｇ／日である。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、変異型Ｆｃ領域を含む。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｆｃリガンドタンパク質に対する親和性を変化させた変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、ＦｃＲｎに対する親和性を変化させた変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、ＦｃＲｎは、マウス、ヒト、または霊長類（例えば、カニクイザル）ＦｃＲｎタンパク質であり得る。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｆｃリガンドタンパク質に対する親和性が増加している変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、ＦｃＲｎに対する親和性が増加している変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、ＦｃＲｎは、マウス、ヒト、または霊長類（例えば、カニクイザル）ＦｃＲｎタンパク質であり得る。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｆｃリガンドタンパク質に対する結合親和性がｐＨ依存的な変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、ＦｃＲｎに対するｐＨ依存的な結合親和性を有する変異型Ｆｃ領域を含む。特定の実施形態において、ＦｃＲｎは、マウス、ヒト、または霊長類（例えば、カニクイザル）ＦｃＲｎタンパク質であり得る。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、野生型ヒトＩｇＧ定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含む。様々な実施形態において、該ヒトＩｇＧ定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常ドメインであり得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ１定常ドメインを含む。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｍ２５２Ｆ、Ｍ２５２Ｗ、Ｍ２５２Ｔ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｓ、Ｔ２５６Ｒ、Ｔ２５６Ｑ、Ｔ２５６Ｅ、Ｔ２５６Ｄ、Ｔ２５６Ｔ、Ｌ３０９Ｐ、Ｑ３１１Ｓ、Ｈ４３３Ｒ、Ｈ４３３Ｋ、Ｈ４３３Ｓ、Ｈ４３３Ｉ、Ｈ４３３Ｐ、Ｈ４３３Ｑ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４Ｆ、Ｎ４３４Ｙ、およびＮ４３６Ｈからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、Ｔ２５６Ｅ、Ｈ４３３Ｋ、Ｎ４３４Ｆ、およびＮ４３６Ｈからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。別の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅからなる群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有するヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅのアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。様々な実施形態において、該ヒトＩｇＧ定常ドメインは、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４定常ドメインであり得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅのアミノ酸置換を含むヒトＩｇＧ１定常ドメインを含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされる。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、抗体１８の１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、または６つ全てのＣＤＲを含む（ＰＣＴ公開第ＷＯ２００８／０６５３７８号を参照のこと）。
カバットに従って定義された抗体１８の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３に対するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号１、配列番号２、および配列番号３として特定される。カバットに従って定義された抗体１８の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３に対するアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号４、配列番号５、および配列番号６として特定される。
カバットの番号付けは、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）、技術情報局（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ）による３巻セットとして刊行される、Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２の影響力の大きい研究に基づいている（以下、「カバット」）。カバットは、多種多様な抗体アイソタイプからの免疫グロブリン鎖の多重配列アラインメントを提供する。整列された配列は、単一のナンバリングシステム、すなわちカバットナンバリングシステムに従って、番号付けされる。カバット配列は、１９９１年の刊行以来更新されてきており、電子配列データベースとして利用可能である（最新ダウンロード可能なバージョン１９９７）。いかなる免疫グロブリン配列も、カバット参照配列を用いてアラインメントを行うことによってカバットに従って番号付けすることができる。したがって、カバットナンバリングシステムは、免疫グロブリン鎖を番号付けするための統一システムを提供する。特に示されない限り、本明細書中に記載の全ての免疫グロブリンアミノ酸配列は、カバットナンバリングシステムに従って番号付けされる。同様に、本明細書中に言及される全ての単一のアミノ酸の位置は、カバットナンバリングシステムに従って番号付けされる。
ある実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号１、配列番号２、および配列番号３からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む、重鎖可変領域のＶＨを含み得る。ある実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み得る。
ある実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号４、配列番号５、および配列番号６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのＣＤＲを含む、軽鎖可変領域のＶＬを含み得る。ある実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含み得る。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含み、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨドメインをさらに含む。
本発明は、ヒトＩＬ−６に結合する抗体を包含し、これには、ヒトＩＬ−６に結合し得る本明細書中に記載のＶＨドメイン、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、ＶＨ ＣＤＲ３、ＶＬドメイン、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、またはＶＬ ＣＤＲ３の誘導体を含む。当業者に公知の標準的技術を使用して、例えば、アミノ酸置換を生成するために通常使用される部位指定突然変異誘発およびＰＣＲ介在性突然変異誘発を含む、抗体をコードするヌクレオチド配列において、突然変異（例えば、付加、欠失、および／または置換）を導入することができる。一実施形態において、このＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ誘導体は、抗体１８の抗ＩＬ−６抗体の元のＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲと比べて、２５個未満のアミノ酸置換、２０個未満のアミノ酸置換、１５個未満のアミノ酸置換、１０個未満のアミノ酸置換、５個未満のアミノ酸置換、４個未満のアミノ酸置換、３個未満のアミノ酸置換、２個未満のアミノ酸置換、または１個未満のアミノ酸置換を含み得る。別の実施形態において、このＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲ誘導体は、１つ以上の予測される非必須アミノ酸残基（すなわち、抗体がヒトＩＬ−６に特異的に結合するのに重要ではないアミノ酸残基）においてなされる保存的アミノ酸置換（例えば、上記を参照）を有し得る。また、飽和突然変異誘発等によってＶＨおよび／またはＶＬ ＣＤＲコード配列の全てまたは一部に沿って突然変異をランダムに導入することもでき、得られる突然変異を生物学的活性についてスクリーニングして、活性を保つ突然変異を特定することができる。突然変異誘発後、コードされた抗体を発現させることができ、抗体の活性を決定することができる。
本発明は、ヒトＩＬ−６に結合する抗体をさらに包含し、該抗体または抗体断片は、１つ以上のＣＤＲを含み、該ＣＤＲは、抗体１８の１つ以上のＣＤＲのアミノ酸配列に少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントは、ＢＬＡＳＴタンパク質検索が挙げられるが、これに限定されない、当業者に公知の任意の方法によって決定することができる。
本発明は、ヒトＩＬ−６に結合する抗体をさらに包含し、該抗体または抗体断片は、ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含み、該ＶＨおよび／またはＶＬドメインは、抗体１８のＶＨおよび／またはＶＬドメインのアミノ酸配列に少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％同一のアミノ酸配列を含む。２つのアミノ酸配列の同一性パーセントは、ＢＬＡＳＴタンパク質検索が挙げられるが、これに限定されない、当業者に公知の任意の方法によって決定することができる。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、抗体１８の親和性と同等の親和性を有するヒトＩＬ−６に結合し得る。
一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、抗体１８と同一のＩＬ−６のエピトープに特異的に結合する。
一実施形態において、抗ＩＬ−６抗体は、ＩＬ−６結合に対して抗体１８と特異的に競合する。競合アッセイは、例えば、ＥＬＩＳＡアッセイまたはラジオイムノアッセイに限定されない、当該技術分野において公知の任意の結合アッセイを用いて、行われ得る。
本発明は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをさらに提供する。本発明はまた、本明細書中に定義される、厳密な、または低い厳密性ハイブリダイゼーション条件下で、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドも包含する。
一実施形態において、本明細書中に記載の延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ６抗体をコードする本発明のポリヌクレオチドは、最適化されたポリヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体のＶＨドメインをコードする本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１１のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体のＶＬドメインの本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１２のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体の重鎖をコードする本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１３のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体の軽鎖の本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１４のヌクレオチド配列を含む。
本発明の別の実施形態は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含むベクターである。
一実施形態において、本発明のベクターは、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列は、最適化されたヌクレオチド配列である。特定の実施形態において、本発明のベクターは、配列番号１１〜１４のヌクレオチド配列のうちのいずれか１つを含む。さらなる特定の実施形態において、本発明のベクターは、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含み、このヌクレオチド配列は、配列番号１１〜１４を含む群から選択される。
本発明は、さらに、ベクターを含む単離細胞に関し、該ベクターは、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードする１つ以上のヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態において、本発明の単離細胞は、配列番号１１〜１４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドを含む。
本発明の抗ＩＬ−６抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ヒトアイソタイプの抗体を含む。
本発明は、さらに、配列番号１〜１０のアミノ酸配列のうちのいずれか１つを含む抗ＩＬ−６抗体を含む薬学的組成物に関する。
本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体は、ヒトＩＬ−６抗原に対して高い結合親和性を有し得る。例えば、本明細書中に記載の抗体は、少なくとも２×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１ｓ−１、少なくとも１０７Ｍ−１ｓ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１ｓ−１、または少なくとも１０８Ｍ−１ｓ−１の会合速度定数またはｋｏｎ速度（抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ）ｋｏｎ→Ａｂ−Ａｇ）を有し得る。
別の実施形態において、抗ＩＬ−６抗体は、５×１０−１ｓ−１未満、１０−１ｓ−１未満、５×１０−２ｓ−１未満、１０−２ｓ−１未満、５×１０−３ｓ−１未満、１０−３ｓ−１未満、５×１０−４ｓ−１未満、または１０−４ｓ−１未満のｋｏｆｆ速度（（Ａｂ−Ａｇ）ｋｏｆｆ→抗体（Ａｂ）＋抗原（Ａｇ））を有し得る。別の実施形態において、本発明の抗体は、５×１０−５ｓ−１未満、１０−５ｓ−１未満、５×１０−６ｓ−１未満、１０−６ｓ−１未満、５×１０−７ｓ−１未満、１０−７ｓ−１未満、５×１０−８ｓ−１未満、１０−８ｓ−１未満、５×１０−９ｓ−１未満、１０−９ｓ−１未満、または１０−１０ｓ−１未満のｋｏｆｆを有する。
別の実施形態において、抗ＩＬ−６抗体は、少なくとも１０２Ｍ−１、少なくとも５×１０２Ｍ−１、少なくともｌ０３Ｍ−１、少なくとも５×１０３Ｍ−１、少なくとも１０４Ｍ−１、少なくとも５×１０４Ｍ−１、少なくとも１０５Ｍ−１、少なくとも５×１０５Ｍ−１、少なくとも１０６Ｍ−１、少なくとも５×１０６Ｍ−１、少なくとも１０７Ｍ−１、少なくとも５×１０７Ｍ−１、少なくとも１０８Ｍ−１、少なくとも５×１０８Ｍ−１、少なくともｌ０９Ｍ−１、少なくとも５×１０９Ｍ−１、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも５×１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１、少なくとも５×１０１１Ｍ−１、少なくとも１０１２Ｍ−１、少なくとも５×１０１２Ｍ−１、少なくとも１０１３Ｍ−１、少なくとも５×１０１３Ｍ−１、少なくとも１０１４Ｍ−１、少なくとも５×１０１４Ｍ−１、少なくとも１０１５Ｍ−１、または少なくとも５×１０１５Ｍ−１の親和定数またはＫａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）を有し得る。なお別の実施形態において、抗ＩＬ−６抗体は、５×１０−２Ｍ未満、１０−２Ｍ未満、５×１０−３Ｍ未満、１０−３Ｍ未満、５×１０−４Ｍ未満、１０−４Ｍ未満、５×１０−５Ｍ未満、１０−５Ｍ未満、５×１０−６Ｍ未満、１０−６Ｍ未満、５×１０−７Ｍ未満、１０−７Ｍ未満、５×１０−８Ｍ未満、１０−８Ｍ未満、５×１０−９Ｍ未満、１０−９Ｍ未満、５×１０−１０Ｍ未満、１０−１０Ｍ未満、５×１０−１１Ｍ未満、１０−１１Ｍ未満、５×１０−１２Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１３Ｍ未満、１０−１２Ｍ未満、５×１０−１４Ｍ未満、１０−１４Ｍ未満、５×１０−１５５Ｍ未満、または１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄ（ｋｏｆｆ／ｋｏｎ）を有し得る。
本明細書中に記載の方法に従って使用される抗体は、ＩＬ−６に免疫特異的に結合し得、本明細書中に記載の方法、または当業者に公知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）（Ｂｉａｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を用いて評価して、３０００ｐＭ未満、２５００ｐＭ未満、２０００ｐＭ未満、１５００ｐＭ未満、１０００ｐＭ未満、７５０ｐＭ未満、５００ｐＭ未満、２５０ｐＭ未満、２００ｐＭ未満、１５０ｐＭ未満、１００ｐＭ未満、７５ｐＭ未満の解離定数（Ｋｄ）を有し得る。特定の実施形態において、本明細書中に記載の方法に従って使用される抗体は、ヒトＩＬ−６抗原に免疫特異的に結合し得、本明細書中に記載の方法または当業者に公知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）を用いて評価して、２５〜３４００ｐＭ、２５〜３０００ｐＭ、２５〜２５００ｐＭ、２５〜２０００ｐＭ、２５〜１５００ｐＭ、２５〜１０００ｐＭ、２５〜７５０ｐＭ、２５〜５００ｐＭ、２５〜２５０ｐＭ、２５〜１００ｐＭ、２５〜７５ｐＭ、２５〜５０ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を有し得る。別の実施形態において、本明細書中に記載の方法に従って使用される抗体は、ＩＬ−６に免疫特異的に結合し得、本明細書中に記載の方法または当業者に公知の方法（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ、ＥＬＩＳＡ）を用いて評価して、５００ｐＭ、１００ｐＭ、７５ｐＭ、または５０ｐＭの解離定数（Ｋｄ）を有し得る。
本発明は、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをさらに提供する。本発明はまた、例えば、本明細書中に定義される、厳密な、または低い厳密性ハイブリダイゼーション条件下で、延長したインビボ半減期を有する抗ＩＬ−６抗体をコードするポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドも包含する。
厳密なハイブリダイゼーション条件としては、６倍塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でフィルター結合ＤＮＡにハイブリダイゼーション、続いて、０．２倍ＳＳＣ／０．１％ ＳＤＳ中、約５０〜６５℃で１回以上の洗浄、６倍ＳＳＣ中、約４５℃でフィルター結合ＤＮＡにハイブリダイゼーション、続いて、０．１倍ＳＳＣ／０．２％ ＳＤＳ中、約６０℃で１回以上の洗浄等の高度に厳密な条件、または当業者に公知の任意の他の厳密なハイブリダイゼーション条件が挙げられるが、これらに限定されない（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ． １９８９ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ ａｔ ｐａｇｅｓ ６．３．１ ｔｏ ６．３．６ ａｎｄ ２．１０．３を参照のこと）。
当該技術分野において公知の任意の方法によって、ポリヌクレオチドを取得し、ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列を決定し得る。例えば、抗体のヌクレオチド配列が公知である場合、抗体をコードするポリヌクレオチドは、化学的に合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てられ得（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １７：２４２（１９９４）に記載されるような）、これには、簡潔に言えば、抗体をコードする配列の一部を含む重複オリゴヌクレオチドの合成、これらのオリゴヌクレオチドをアニーリングし、連結すること、およびそれに続くＰＣＲによって連結したオリゴヌクレオチドの増幅を含む。
抗体をコードするポリヌクレオチドはまた、好適な源からの核酸から生成され得る。特定の抗体をコードする核酸を含むクローンが入手できないが、抗体分子の配列がわかっている場合、配列の３’および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅によって、または例えば、抗体をコードするｃＤＮＡライブラリーからのｃＤＮＡクローンを特定するために特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いてクローニングすることによって、免疫グロブリンをコードする核酸を、好適な源（例えば、抗体を発現するために選択されたハイブリドーマ細胞等の抗体を発現する任意の細胞または組織から生成されたｃＤＮＡライブラリーまたは抗体ｃＤＮＡライブラリー、またはそれから単離された核酸、好ましくはポリＡ＋ＲＮＡ）から得るか、または化学合成することができる。次いで、ＰＣＲによって生成した増幅核酸は、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、複製可能なクローニングベクターにクローン化され得る。
ＩＬ−６は、多くの疾患および状態に関連付けられている。この疾患および状態としては、炎症、疼痛、および癌が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書中に記載の本発明の抗ＩＬ−６抗体は、好ましくは、例えば、ＩＬ−６を中和し、体内のＩＬ−６レベルを低下させ、ＩＬ−６のシグナル伝達を拮抗することができる。したがって、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、好ましくは、これらの状態および疾患を治療するための薬物としての役割を果たすことができる。
本発明は、さらに、長期間、対象における、ＩＬ−６活性を効果的に中和する抗体を提供する。作用の特定の機構に拘束されるものではないが、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、ＩＬ−６に結合することによってＩＬ−６を中和し、それによって、ＩＬ−６が、ＩＬ−６媒介性シグナル変換に必要なタンパク質相互作用に関与することを妨げ得る。一実施形態において、本発明の抗体は、遊離（すなわち、抗ＩＬ−６抗体によって結合されない）ＩＬ−６の血漿濃度を低下させることができる。生体液（例えば、血漿）中の遊離ＩＬ−６レベルは、例えば、Ｐａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓ ｅｔ．ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ａｎａｌｙｓｉｓ ９：２３４−３７（１９９５）に記載のバイオアッセイに限定されない、定量的バイオアッセイを用いて、決定され得る。簡潔に言えば、バイオアッセイは、特定のハイブリドーマ細胞（例えば、Ｂ９ハイブリドーマ細胞）のＩＬ−６によって誘発される増殖を測定する。遊離ＩＬ−６の濃度はまた、サンドイッチイムノアッセイによっても判定され得る。簡潔に言えば、血清中の遊離ＩＬ−６は、抗ＩＬ−６捕捉抗体によって捕捉される。この捕捉抗体は、抗体１８Ｅおよび可溶性ＩＬ−６受容体の不在下でのみ、ＩＬ−６に結合する。この捕捉されたＩＬ−６は、捕捉抗体と競合しない、ルテニウムあるいはＨＲＰのいずれかで標識される、検出抗体によって検出される。測定される電気化学発光または比色シグナルは、血清中の遊離ＩＬ−６の濃度に比例する。血清中の遊離ＩＬ−６の濃度は、標準曲線に基づいて算出される。
一実施形態において、本発明の抗体は、遊離（すなわち、抗ＩＬ−６抗体によって結合されない）ＩＬ−６の血清濃度を低下させることができる。有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。遊離ＩＬ−６レベルの低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
別の実施形態において、１を超える用量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の５０ｍｇの用量の４週間ごとの投与は、遊離ＩＬ−６の血清濃度の持続した少なくとも９０％の低下を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の１００ｍｇの用量の８週間ごとの投与は、遊離ＩＬ−６の血清濃度の持続した少なくとも９０％の低下を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の２００ｍｇの用量の１２週間ごとの投与は、遊離ＩＬ−６の血清濃度の持続した少なくとも９０％の低下を達成する。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、本発明の抗体は、対象における、血清ＩＬ−６を中和することができる。有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。血清ＩＬ−６の中和は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
別の実施形態において、１を超える用量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量が、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の５０ｍｇの用量の４週間ごとの投与は、血清ＩＬ−６の持続した少なくとも９０％の中和を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の１００ｍｇの用量の８週間ごとの投与は、血清ＩＬ−６の持続した少なくとも９０％の中和を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の２００ｍｇの用量の１２週間ごとの投与は、血清ＩＬ−６の持続した少なくとも９０％の中和を達成する。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、本発明の抗体は、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害することができる。有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
別の実施形態において、１を超える用量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の５０ｍｇの用量の４週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の１００ｍｇの用量の８週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の２００ｍｇの用量の１２週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、本発明の抗体は、対象における、滑膜細胞増殖を低下させることができる。有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。対象における、滑膜細胞増殖の低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
別の実施形態において、１を超える用量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の５０ｍｇの用量の４週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の１００ｍｇの用量の８週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の２００ｍｇの用量の１２週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、本発明の抗体は、対象における、滑膜炎を軽減させることができる。有効量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の軽減を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。対象における、滑膜炎の軽減は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
別の実施形態において、１を超える用量の本発明の抗ＩＬ−６抗体の投与は、対象における、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の軽減を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の５０ｍｇの用量の４週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の１００ｍｇの用量の８週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体の２００ｍｇの用量の１２週間ごとの投与は、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
本発明は、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させ、対象における、血清ＩＬ−６を中和し、対象における、ＩＬ−６を中和し、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害し、対象における、滑膜細胞増殖を低下させ、対象における、滑膜炎を軽減するための方法をさらに提供する。
一実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６（すなわち、抗ＩＬ−６抗体によって結合されない）の血清濃度を低下させる方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。遊離ＩＬ−６レベルの低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を少なくとも約９０％低下させる方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させる方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させ得る。一実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持し得る。一実施形態において、対象における、持続した遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の持続した遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を少なくとも９０％低下させる方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を少なくとも９０％低下させる方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、遊離ＩＬ−６の血清濃度を少なくとも９０％低下させる方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させる方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させる方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度を低下させる方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の遊離ＩＬ−６の血清濃度の低下を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、対象における、血清ＩＬ−６を中和する方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。血清ＩＬ−６の中和は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、血清ＩＬ−６の少なくとも９０％の中和は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、血清ＩＬ−６を中和する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を達成し得る。一実施形態において、対象における、血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を維持し得る。一実施形態において、対象における、持続した血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の血清ＩＬ−６の中和を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％の血清ＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の血清ＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、対象における、ＩＬ−６を中和する方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６の中和を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。ＩＬ−６の中和は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、ＩＬ−６の少なくとも９０％の中和は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、ＩＬ−６を中和する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６の中和を達成し得る。一実施形態において、対象における、ＩＬ−６の中和を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６の中和を維持し得る。一実施形態において、対象における、持続したＩＬ−６の中和を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６の中和を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６の中和を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６の中和を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６の中和を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６を中和する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、ＩＬ−６の少なくとも９０％の中和を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６の中和を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成し得る。一実施形態において、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持し得る。一実施形態において、対象における、ＩＬ−６媒介性シグナル伝達の持続した阻害を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも約９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達を阻害する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％のＩＬ−６媒介性シグナル伝達の阻害を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を低下させる方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。滑膜細胞増殖の低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を低下させる方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を達成し得る。一実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を維持し得る。一実施形態において、対象における、持続した滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜細胞増殖の低下を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜細胞増殖を少なくとも約９０％低下させる方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜細胞増殖の低下を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
一実施形態において、対象における、滑膜炎を軽減させる方法は、有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。有効量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の軽減を達成し得る。有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。滑膜炎の軽減は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続し得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、有効量の１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含み、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減は、少なくとも約１日間、少なくとも約２日間、少なくとも約３日間、少なくとも約４日間、少なくとも約５日間、少なくとも約６日間、少なくとも約７日間、少なくとも約１０日間、少なくとも約１５日間、または少なくとも約２０日間持続する。
一実施形態において、対象における、滑膜炎を軽減させる方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の軽減を達成し得る。一実施形態において、対象における、滑膜炎の軽減を維持する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の軽減を維持し得る。一実施形態において、対象における、持続した滑膜炎の軽減を達成する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。１を超える用量の抗ＩＬ−６抗体の投与は、持続した少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９９％、または少なくとも約１００％の滑膜炎の低下を達成し得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、投与量を分ける時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、または１２週間に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、滑膜炎を少なくとも約９０％軽減させる方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を維持する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。特定の実施形態において、対象における、持続した少なくとも９０％の滑膜炎の軽減を達成する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法によって投与され得る。対象は、ヒトまたは非ヒト霊長類であり得る。
本発明のさらなる態様は、本発明の結合性メンバーを含む組成物、ならびにＩＬ−６を結合する、阻害する、および／または中和する方法におけるそれらの使用を提供し、これには、療法によるヒトまたは動物の体を治療する方法が含まれる。
本発明による結合性メンバーは、ヒトまたは動物の体における（例えば、ヒト患者における）、疾患または障害を治療する方法（予防のための治療を含み得る）等の治療または診断の方法に使用され得、これには、有効量の本発明の結合性メンバーを該患者に投与することを含む。本発明に従って治療可能な状態は、本明細書中の他の箇所で詳細に論じられる、ＩＬ−６が役割を果たすいずれをも含む。
一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、治療有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、治療有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎を治療する方法は、治療有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ヒトにおける、炎症性腸疾患またはＳＬＥを治療する方法は、治療有効量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。一実施形態において、治療有効量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、治療有効量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、治療有効量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、投与され得る。特定の実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。
一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。特定の実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、１を超える用量の延長した半減期を有する抗ＩＬ−６抗体を投与することを含む。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。一実施形態において、単回量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、単回量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、単回量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、１を超える用量のそれぞれは、同量の抗ＩＬ−６抗体を含む。一実施形態において、初期負荷用量の後に、その後の維持用量が続く。一実施形態において、初期負荷用量は、この維持用量よりも２倍、３倍、４倍、５倍、または１０倍以上の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、負荷用量は、１ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、７５ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、２００ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、または５００ｍｇの本明細書中に記載の抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、負荷用量は、約０．１〜５ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．１〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜２ｍｇ／ｋｇ、約０．３〜１ｍｇ／ｋｇ、約０．５〜２ｍｇ／ｋｇ、または約０．５〜１ｍｇ／ｋｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。別の実施形態において、負荷用量は、約２０〜５００ｍｇ、約２０〜２００ｍｇ、約２０〜１００ｍｇ、約５０〜５００ｍｇ、約５０〜２００ｍｇ、または約５０〜１００ｍｇの抗ＩＬ−６抗体を含み得る。一実施形態において、用量の投与を分割する時間間隔は、一定である。抗ＩＬ−６抗体の用量は、１週間に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または６ヶ月に１回投与され得る。抗ＩＬ−６抗体は、例えば、皮下または静脈注射であるが、それに限定されない、当該技術分野において公知の任意の方法を用いて、投与され得る。
一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、（ａ）負荷用量の１００ｍｇの抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、治療を必要とするヒトを治療する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。
一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、乾癬、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。
一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することを含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）１００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）５０ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を４週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）２００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）１００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を８週間ごとに投与することと、を含む。一実施形態において、ヒトにおける、リウマチ性関節炎、炎症性腸疾患、またはＳＬＥを治療する方法は、（ａ）４００ｍｇの負荷用量の抗ＩＬ−６抗体を投与することと、（ｂ）２００ｍｇの用量の抗ＩＬ−６抗体を１２週間ごとに投与することと、を含む。
抗ＩＬ−６抗体
本発明による結合性メンバーは、高い効力でＩＬ−６を中和することを示している。中和とは、ＩＬ−６の生物学的活性の阻害を意味する。本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６の１つ以上の活性を中和し得る。阻害される生物学的活性は、一般的に、１つ以上のその結合パートナーに対するＩＬ−６の結合である。例えば、阻害される生物学的活性は、膜貫通および／または可溶性ＩＬ−６Ｒαに対するＩＬ−６の結合であり得る。このことは、ここで簡潔に記載され、以下でさらに詳細に記載される、以下のアッセイにおいて実証されている：ＴＦ−１アッセイは、ＴＦ−１細胞が、可溶性ＩＬ−６Ｒａを産生しないと思われるために、本発明による結合性メンバーが膜ＩＬ−６Ｒａに対するＩＬ−６の結合を阻害することを示す。したがって、本発明の結合性メンバーは、膜受容体に対するＩＬ−６の結合を阻害する。滑膜線維芽細胞アッセイにおいて、それが機能するためにｓＩＬ−６Ｒａをこのアッセイに加える必要があることから、本発明による結合性メンバーは、可溶性ＩＬ−６Ｒａに対するＩＬ−６の結合を阻害する。添加したＩＬ−１ベータにより内因性ＩＬ−６の産生が誘発され、該ＩＬ−６は、本発明の結合性メンバーによって阻害されると、ＶＥＧＦ産生を妨げる。
本発明に従って、ＩＬ−６Ｒαに対するヒトまたは非ヒト霊長類の、例えば、カニクイザルのＩＬ−６の結合を阻害し得、例えば、結合性メンバーは、ＩＬ−６Ｒαに対する成熟ヒトＩＬ−６の結合を阻害し得る。
生物学的活性の阻害は、部分的または完全であり得る。結合性メンバーは、ＩＬ−６の生物学的活性を、結合性メンバーの不在下での活性の１００％、または少なくとも９５％、少なくとも９０％、少なくとも８５％、少なくとも８０％、少なくとも７５％、少なくとも７０％、少なくとも６０％、または少なくとも５０％阻害し得る。
結合性メンバーの中和効力が決定され得る。特に記述がない限り、効力は、通常ＩＣ５０値としてｎＭ単位で表記される。機能的アッセイでは、ＩＣ５０は、生物学的応答をその最大応答の５０％低下させる結合性メンバーの濃度である。リガンド結合研究では、ＩＣ５０は、リガンド−受容体複合体の形成を最大特異的結合レベルを５０％低下させる濃度である。ＩＣ５０は、最大生物学的応答の％を結合性メンバー濃度の対数の関数としてプロットし、かつＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄ）またはＯｒｉｇｉｎ（Ｏｒｉｇｉｎ Ｌａｂｓ）等のソフトウェアプログラムを使用してシグモイド関数をデータにフィッティングし、ＩＣ５０値を得ることによって算出され得る。効力は、当業者に公知のおよび／または本明細書中に記載のもしくは本明細書中で言及される１つ以上のアッセイを使用して決定または測定され得る。
本明細書中に記載のアッセイ、例えば、ＴＦ−１増殖アッセイまたは下記の他の細胞ベースのアッセイでの結合性メンバーによるＩＬ−６活性の中和は、結合性メンバーがＩＬ−６に結合し、中和することを示す。結合性メンバーのＩＬ−６への結合を決定するために使用され得る他の方法には、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法、免疫沈降、アフィニティークロマトグラフィー、および生化学アッセイが含まれる。
本明細書中に記載の結合性メンバーは、内因性ヒトＩＬ−６に結合し、かつその生物学的効果を中和することが実証され、本明細書中の実施例１．７および２．７で報告される、内因性ヒトＩＬ−６に応答したヒト滑膜線維芽細胞からのＶＥＧＦ放出の阻害についてのアッセイで示される通りである。このアッセイでは、リウマチ性関節炎患者由来の滑膜線維芽細胞が、ＩＬ−１βおよび可溶性ＩＬ−６Ｒαでの刺激に応答してＩＬ−６を産生し、ＩＬ−６誘発性のＶＥＧＦ分泌を生じる。ゆえに、ヒト滑膜線維芽細胞によって産生されたＩＬ−６は、内因性ヒトＩＬ−６を示す。内因性ＩＬ−６は、ヒトにおける医療処置の分子標的であるから、内因性ＩＬ−６の中和は、該結合性メンバーの治療能力の重要な指標である。該アッセイは、リウマチ性関節炎患者から得られた滑膜線維芽細胞を用いて行われたため、その結果は、リウマチ性関節炎を治療するための結合性メンバーの使用に特に関連する。ＶＥＧＦ放出アッセイで試験した最適化抗体分子の中和効力は、既知の抗Ｉｌ−６抗体ＣＮＴＯ−３２８の効力に勝るものであった。
本発明による結合性メンバーは、０．６ｐＭ ヒトＩＬ−１βおよび２．４ｎＭ 可溶性ヒトＩＬ−６Ｒαで刺激されたヒト滑膜線維芽細胞からのＶＥＧＦ放出の阻害についてのアッセイにおいて、５０ｎＭ未満、例えば、５ｎＭ未満、例えば、１ｎＭ未満のＩＣ５０を有し得る。
内因性ＩＬ−６は、グリコシル化および非グリコシル化形態の混合物であることが知られている。本発明の結合性メンバーの内因性ＩＬ−６への結合は、このアッセイでは、ヒト滑膜線維芽細胞由来のＩＬ−６、すなわち内因性ＩＬ−６を利用するため、滑膜線維芽細胞アッセイで実証されている。
本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６によって誘発されるＴＦ−１細胞の増殖を阻害し得る。ＴＦ−１は、赤白血病に罹患する患者から確立されたヒト前骨髄（ｐｒｅｍｙｅｌｏｉｄ）細胞株である（Ｋｉｔａｍｕｒａ ｅｔ ａｌ １９８９）。ＴＦ−１細胞株は、生存および増殖に成長因子の存在を必要とする。ＴＦ−１細胞が応答できる個々の成長因子には、ＩＬ−６、ＧＭ−ＣＳＦ、およびオンコスタチンＭが含まれる。本発明の結合性メンバーは、２０ｐＭ ヒトＩＬ−６に応答したＴＦ−１細胞の増殖の阻害に関するアッセイにおいて、１００ｎＭ未満、例えば、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ、または１ｎＭ、例えば、１００ｐＭ、７０ｐＭ、５０ｐＭ、４０ｐＭ、３０ｐＭ、２０ｐＭ、または１０ｐＭ未満のＩＣ５０を有し得る。本明細書中に記載の（実施例１．５を参照のこと）、親ＩｇＧ「ＣＡＮ０２２Ｄ１０」は、ＴＦ−１増殖アッセイにおいて、約９３ｎＭのＩＣ５０を有することが示され、その後、発明者らは、実質的に増加した効力（概して、１００ｐＭ未満のＩＣ５０）を有するＣＡＮ０２２Ｄ１０の最適化変異体を作製し、このことは、実施例２．２、２．５、および２．６（それぞれ、表３、４、および５）に示される通りである。特に、最適化クローンの幾つか、例えば、生殖細胞系列化ＩｇＧ抗体７、抗体１７、および抗体１８に関するＩＣ５０値は、５ｐＭ以下程度の低い値であることが測定され、これは、これらの抗体の極めて高い中和効力を示した。
本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６によって誘発されるＢ９細胞の増殖を阻害し得る。Ｂ９細胞は、ＩＬ−６に対するその特異的応答に基づいて選択されたマウスＢ細胞ハイブリドーマ細胞株Ｂ１３．２９のサブクローンである。Ｂ９細胞は、生存および増殖にＩＬ−６を必要とし、非常に低濃度のＩＬ−６に応答する。したがって、ＩＬ−６抗体の存在下で、これらの細胞の増殖を評価し、該抗体の親和性を決定することができる。本明細書中の実施例２．１０は、抗体１８がＩＬ−６に応答したＢ９細胞の増殖を阻害し、このアッセイにおいて高親和性を示したことを示す。
リウマチ性関節炎での自己抗体産生は、ほとんどがＩｇＭクラスのものである。ＳＫＷ６．４は、クローン性ＩｇＭ分泌ヒトリンパ芽球様Ｂ細胞株である。ＩＬ−６で刺激されると、これらの細胞は、ＩｇＭを分泌し、ゆえにこのアッセイは、リウマチ性関節炎に対して適切であると理解された。ＳＫＷ６．４細胞をアッセイにおいて使用し、ＩＬ−６に応答したＩｇＭ分泌の阻害を決定することによって、ＩＬ−６の中和についての結合性メンバーの効力を決定することができる。本発明の結合性メンバーは、１００ｐＭ ヒトＩＬ−６に応答したＩｇＭ分泌の阻害についてのＳＫＷ６．４細胞アッセイにおいて、１０ｐＭ未満、例えば、５ｐＭ未満のＩＣ５０を有し得る。抗体１８は、このアッセイでＩＬ−６の作用を中和することが示された−実施例２．１１（表９）を参照のこと。
本発明は、ヒトＩＬ−６に対する高親和性結合性メンバーを提供する。カニクイザル由来のＩＬ−６に対する高親和性も実証された。本発明の結合性メンバーは、１ｎＭ以下、例えば、１００ｐＭ、５０ｐＭ、３０ｐＭ、または１０ｐＭ以下のＫＤでヒトＩＬ−６および／またはカニクイザルＩＬ−６に結合し得る。該ＫＤは、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）によって決定され得る。親和性のＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）測定については、本明細書中の実施例２．９に記載されている。注目すべきほどに、抗体７および１８の親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）機器を使用して測定可能な限界を超えることが見出され、これは、１０ｐＭ未満のＫＤ値を示した。
本明細書中の他の箇所で記載されるように、表面プラズモン共鳴は、支持体に付着させたリガンド上に液体相のアナライトを通過させて、アナライトとリガンドとの間の結合を判定することを含む。表面プラズモン共鳴は、例えば、支持体に付着させた結合性メンバー上の液体相においてＩＬ−６を通過させることにより実施され得る。表面プラズモン共鳴データを、一価アナライトデータモデルにフィッティングすることができる。親和性定数Ｋｄは、一価アナライトデータモデルを使用して、表面プラズモン共鳴によって測定される速度定数ｋｄ／ｋａの比から算出され得る。
代替として、ＩＬ−６に対する結合性メンバーの親和性は、例えば、種々の濃度のヒトＩＬ−６に応答したＴＦ−１細胞の増殖の阻害についてのアッセイに基づいて、シルド分析（Ｓｃｈｉｌｄ ａｎａｌｙｓｉｓ）によって算出され得る。本発明の結合性メンバーは、シルド分析によって算出すると、１０ｐＭ未満、例えば、１ｐＭ未満の親和性を有し得る。本明細書中の実施例２．１０で報告されるように、ヒトＩＬ−６に対する抗体１８の親和性は、シルド分析を使用して、０．４ｐＭであると算出された。
本発明の結合性メンバーは、任意に、以下のもののうちの１つ以上、または全てと交差反応しないものであり得る：白血病阻害因子（ＬＩＦ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、ＩＬ−１１、またはオンコスタチンＭ。
本発明の結合性メンバーは、任意に、ラットＩＬ−６、マウスＩＬ−６、および／またはイヌＩＬ−６と交差反応しないものであり得る。
他のタンパク質または非ヒトＩＬ−６に結合するための結合性メンバーの交差反応性は、例えば、実施例１．６に記載のＤＥＬＦＩＡ（登録商標）エピトープ競合アッセイ等の、支持体上に固定された結合性メンバーに対するヒトＩＬ−６結合の阻害に関する時間分解蛍光アッセイにおいて試験され得る。例えば、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＩＬ−１１、オンコスタチンＭ、ラットＩＬ−６、およびマウスＩＬ−６のいずれか、または全ては、支持体上に固定化され結合性メンバーに対する標識ヒトＩＬ−６結合の阻害に関する時間分解蛍光アッセイにおいて、阻害を示さないか、５０％未満の阻害を示すか、または０．５ｍＭより大きいか、もしくは１ｍＭより大きいＩＣ５０を有し得る。例えば、ＬＩＦ、ＣＮＴＦ、ＩＬ−１１、オンコスタチンＭ、ラットＩＬ−６、およびマウスＩＬ−６のいずれか、または全ては、交差反応性を試験するための時間分解蛍光アッセイにおいて、阻害を示さないか、または非標識ヒトＩＬ−６のＩＣ５０の少なくとも１０倍または１００倍のＩＣ５０を有し得る。このアッセイでは、標識野生型成熟ヒトＩＬ−６が、結合性メンバーとのその相互作用のＫｄである最終濃度で使用される。
本発明の結合性メンバーは、カニクイザルＩＬ−６と交差反応し得る。交差反応性は、上記の時間分解蛍光アッセイにおいて、支持体上に固定された結合性メンバーに対する標識ヒトＩＬ−６結合の阻害として決定され得る。例えば、カニクイザルＩＬ−６は、この時間分解蛍光アッセイにおいて、５ｎＭ未満、例えば、２．５ｎＭ未満、例えば、約１ｎＭのＩＣ５０を有し得る。カニクイザルＩＬ−６は、このアッセイにおいて、非標識ヒトＩＬ−６のＩＣ５０とは１０倍未満の差、例えば、５倍未満の差を示すＩＣ５０を有し得る。
一実施形態において、抗ＩＬ−６抗体は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−６配列間で保存されているが、ヒト配列と比較してマウス、ラット、およびイヌＩＬ−６配列では異なっている、ＩＬ−６上のエピトープに結合する。
一実施形態において、結合性メンバーは、ＩＬ−６の「部位１」領域に結合し、これは、ＩＬ−６Ｒαと相互作用する領域である。ゆえに、本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６Ｒαに結合するＩＬ−６を競合的に阻害し、それによって、ＩＬ−６Ｒαを通して媒介されるＩＬ−６の生物学的効果を中和する。
本発明の結合性メンバーは、Ｐｈｅ１０２および／またはＳｅｒ２０４でヒトＩＬ−６に結合し得る。本発明の結合性メンバーはまた、Ａｒｇ２０７でヒトＩＬ−６に結合し得る。任意に、結合性メンバーは、Ｐｈｅ１０２および／またはＳｅｒ ２０４での結合に加えて、ＩＬ−６分子中の隣接残基または構造的に近接する残基に結合し得る。慣例によると、残基の番号付けは、完全長ヒトＩＬ−６（配列番号１５）に対応する。しかしながら、成熟ヒトＩＬ−６を使用して結合を決定することができる。ＩＬ−６残基に対する結合は、以下で説明されるように、部位特異的突然変異誘発によって決定される。
構造を活性と相関させるためのタンパク質の単一のアミノ酸および領域の突然変異誘発は、当業者に周知であり、抗体に結合するタンパク質の領域を画定するために使用されている（Ｌｕ ｅｔ ａｌ．，（２００５）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ４４：１１１０６−１４）。突然変異体ヒトＩＬ−６に対する結合および／またはその中和は、結合性メンバーが、Ｐｈｅ１０２、Ｓｅｒ２０４、および／またはＡｒｇ２０７に結合するかどうか評価をするために使用され得る。野生型と比較して、突然変異体ＩＬ−６を用いた場合、結合もしくは中和の不存在、または結合もしくは中和の顕著な低下は、結合性メンバーがその突然変異残基に結合することを示す。
ＩＬ−６中の残基に対する結合は、支持体上に固定される結合性メンバーに対する標識野生型ヒトＩＬ−６の結合の阻害についての時間分解蛍光アッセイにおいて、選択した残基で突然変異させたＩＬ−６を使用して決定され得、標識された野生型成熟ヒトＩＬ−６は、結合性メンバーとのその相互作用のＫｄと等しい最終濃度のものである。突然変異体ＩＬ−６が、結合性メンバーに対する標識された野生型ＩＬ−６の結合を阻害しない場合、または突然変異体ＩＬ−６が、非標識の野生型ＩＬ−６のＩＣ５０より大きい（例えば、１０倍または１００倍より大きい）ＩＣ５０を有する場合、このことは、その突然変異残基が結合性メンバーに結合することを示す。
本発明の結合性メンバーは、任意に、残基Ｐｈｅ１０２、Ｓｅｒ２０４、および／またはＡｒｇ２０７での変異、例えば、変異Ｐｈｅ１０２Ｇｌｕ、Ｓｅｒ２０４Ｇｌｕ、Ｓｅｒ２０４Ｔｙｒ、および／またはＡｒｇ２０７Ｇｌｕを有する変異体ヒトＩＬ−６と結合せず、かつ／またはそれを中和しないものであり得る。
本発明の結合性メンバーは、抗体分子、例えば、ヒト抗体分子を含み得る。該結合性メンバーは、通常、抗体ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。結合性メンバーのＶＨおよびＶＬドメインもまた、本発明の部分として提供される。各ＶＨおよびＶＬドメインには、相補性決定領域（「ＣＤＲ」）およびフレームワーク領域（「ＦＲ」）が含まれる。ＶＨドメインは、ＨＣＤＲセットを含み、ＶＬドメインは、ＬＣＤＲセットを含む。抗体分子は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３、ならびにフレームワークを含む抗体ＶＨドメインを含み得る。それは、代替として、またはさらに、ＶＬ ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３、ならびにフレームワークを含む抗体ＶＬドメインを含み得る。ＶＨまたはＶＬドメインフレームワークは、以下の構造でＣＤＲが組み入れられている４つのフレームワーク領域ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４を含む：ＦＲ１−ＣＤＲ１−ＦＲ２−ＣＤＲ２−ＦＲ３−ＣＤＲ３−ＦＲ４。
本発明による抗体ＶＨおよびＶＬドメインおよびＣＤＲの例は、本開示の一部分を構成する配列表に列挙されている通りである。さらなるＣＤＲは、ＰＣＴ公開ＷＯ第２００８／０６５３７８号に開示される。本明細書、およびＰＣＴ公開ＷＯ第２００８／０６５３７８号に開示される、全てのＶＨおよびＶＬ配列、ＣＤＲ配列、ＣＤＲセット、およびＨＣＤＲセット、およびＬＣＤＲセットは、本発明の態様および実施形態である。本明細書中に記載の「ＣＤＲセット」は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、およびＣＤＲ３を含む。ゆえに、ＨＣＤＲセットとは、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を指し、ＬＣＤＲセットとは、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を指す。特に記述がない限り、「ＣＤＲセット」には、ＨＣＤＲおよびＬＣＤＲが含まれる。典型的には、本発明の結合性メンバーは、モノクローナル抗体である。
本発明の結合性メンバーは、さらに以下で考察されるように、非抗体タンパク質骨格（ｓｃａｆｆｏｌｄ）中の１つ以上のＣＤＲ、例えば、ＣＤＲセットによって通常提供される、非抗体分子内の抗原結合部位を含み得る。
上記のように、本発明に従う結合性メンバーは、ＩＬ−６の生物学的活性を調節し、かつＩＬ−６の生物学的活性を中和し得る。本明細書中に記載するとおり、本発明のＩＬ−６結合性メンバーは、中和効力に対して最適化され得る。一般に、効力の最適化は、選択された結合性メンバーの配列（通常は抗体の可変ドメイン配列）を突然変異させて、結合性メンバーのライブラリーを作製することを含み、該ライブラリーを効力に関してアッセイし、より強力な結合性メンバーを選択する。ゆえに、選択された「効力最適化」結合性メンバーは、ライブラリーを作製した結合性メンバーより高い効力を有する傾向がある。それでもなお、高い効力の結合性メンバーはまた、最適化されずに取得され得、例えば、高い効力の結合性メンバーは、初期スクリーニング、例えば、生化学的中和アッセイから直接、取得され得る。「効力最適化」結合性メンバーとは、ＩＬ−６の特定の活性または下流の機能の中和効力が最適化されている結合性メンバーを指す。アッセイおよび効力は、本明細書中の他の箇所でより詳細に記載されている。本発明は、効力最適化および非最適化結合性メンバーの両方、ならびに選択された結合性メンバーから効力を最適化するための方法を提供する。ゆえに、本発明は、当業者が、高い効力を有する結合性メンバーを作製することを可能にする。
さらなる態様において、本発明は、抗原に結合可能な１つ以上の結合性メンバーを取得する方法を提供し、該方法には、本発明による結合性メンバーのライブラリーおよび該抗原を接触させることと、該抗原に結合可能なライブラリーの１つ以上の結合性メンバーを選択することと、を含む。
該ライブラリーは、粒子または分子複合体、例えば、複製可能な遺伝的パッケージ、例えば、酵母粒子、細菌粒子、またはバクテリオファージ（例えば、Ｔ７）粒子、ウイルス、細胞、または共有結合性、リボソーム性、または他のインビトロディスプレイ系上で提示され得、各粒子または分子複合体は、その上に提示される抗体ＶＨ可変ドメイン、およびさらに、任意に、存在する場合には提示されるＶＬドメイン、をコードする核酸を含有する。ファージディスプレイは、国際公開第９２／０１０４７号、および例えば、米国特許第５９６９１０８号、第５５６５３３２号、第５７３３７４３号、第５８５８６５７号、第５８７１９０７号、第５８７２２１５号、第５８８５７９３号、第５９６２２５５号、第６１４０４７１号、第６１７２１９７号、第６２２５４４７号、第６２９１６５０号、第６４９２１６０号、および第６５２１４０４号に記載され、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
抗原に結合可でき、かつバクテリオファージまたは他のライブラリー粒子もしくは分子複合体上に提示される結合性メンバーの選択後に、核酸は、該選択した結合性メンバーを提示するバクテリオファージまたは他の粒子もしくは分子複合体から採取され得る。このような核酸は、該選択した結合性メンバーを提示するバクテリオファージまたは他の粒子もしくは分子複合体から採取された核酸の配列を有する核酸からの発現によって、結合性メンバーまたは抗体ＶＨもしくはＶＬ可変ドメインのその後の製造に使用され得る。
本発明のＶＨおよびＶＬドメインおよびＣＤＲの変異体（アミノ酸配列が本明細書中に記載されているもの、および本発明の結合性メンバーで用いることができるものを含む）は、配列を改変または突然変異させ、かつ所望の特性を有する抗原結合性メンバーをスクリーニングする方法を用いて取得することができる。所望の特性の例には、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。
抗原に特異的な既知の抗体と比較して高い、抗原に対する結合親和性
抗原活性が既知である場合、抗原に特異的な既知の抗体と比較して高い、抗原活性の中和性
特定モル比での、抗原に対する既知の抗体またはリガンドとの、所定の競合能力
複合体を免疫沈降させる能力
指定エピトープに結合する能力
線形エピトープ、例えば、本明細書中に記載のペプチド結合スキャンを使用して（例えば、線形および／または拘束コンフォメーションでスクリーニングされたペプチドを使用する）特定されるペプチド配列
不連続残基によって形成される立体構造エピトープ
ＩＬ−６または下流の分子の新規生物学的活性を調節する能力。
このような方法もまた、本明細書に提供される。
本明細書中に開示される抗体分子の変異体を生成し、本発明において使用することができる。多変量データ解析技術を構造／特性−活性関係に対して適用する場合の計算化学の手引（Ｗｏｌｄ，ｅｔ ａｌ．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ ｄａｔａ ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｃｈｅｍｏｍｅｔｒｉｃｓ−Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｅｄ．：Ｂ．Ｋｏｗａｌｓｋｉ），Ｄ．Ｒｅｉｄｅｌ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｄｏｒｄｒｅｃｈｔ，Ｈｏｌｌａｎｄ，１９８４（ＩＳＢＮ ９０−２７７−１８４６−６））に従って、周知の数学的手法、例えば、統計回帰、パターン認識、および分類（Ｎｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ；３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ（Ａｐｒｉｌ １９９８）ＩＳＢＮ：０４７１１７０８２８、Ｋａｎｄｅｌ，Ａｂｒａｈａｍ ＆ Ｂａｃｋｅｒ，Ｅｒｉｃ．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｒｅａｓｏｎｉｎｇ ｉｎ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｐｒｅｎｔｉｃｅ Ｈａｌｌ ＰＴＲ，（Ｍａｙ １１，１９９５），ＩＳＢＮ：０１３３４１８８４７、Ｋｒｚａｎｏｗｓｋｉ，Ｗｏｊｔｅｋ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ Ｕｓｅｒ’ｓ Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ（Ｏｘｆｏｒｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｎｏ ２２（Ｐａｐｅｒ））．Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；（Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２０００），ＩＳＢＮ：０１９８５０７０８９、Ｗｉｔｔｅｎ，Ｉａｎ Ｈ．＆ Ｆｒａｎｋ，Ｅｉｂｅ．Ｄａｔａ Ｍｉｎｉｎｇ：Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｍａｃｈｉｎｅ Ｌｅａｒｎｉｎｇ Ｔｏｏｌｓ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｗｉｔｈ Ｊａｖａ Ｉｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｓ．Ｍｏｒｇａｎ Ｋａｕｆｍａｎｎ；（Ｏｃｔｏｂｅｒ １１，１９９９），ＩＳＢＮ：１５５８６０５５２５、Ｄｅｎｉｓｏｎ Ｄａｖｉｄ Ｇ．Ｔ．（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｃ．Ｈｏｌｍｅｓ，Ｂａｎｉ Ｋ．Ｍａｌｌｉｃｋ，Ａｄｒｉａｎ Ｆ．Ｍ．Ｓｍｉｔｈ．Ｂａｙｅｓｉａｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ Ｎｏｎｌｉｎｅａｒ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ（Ｗｉｌｅｙ Ｓｅｒｉｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｂａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）．Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ；（Ｊｕｌｙ ２００２），ＩＳＢＮ：０４７１４９０３６９、Ｇｈｏｓｅ，Ａｒｕｐ Ｋ．＆ Ｖｉｓｗａｎａｄｈａｎ，Ｖｅｌｌａｒｋａｄ Ｎ．．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｔｏｏｌｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ．ＩＳＢＮ：０−８２４７−０４８７−８）を使用して、抗体の定量的活性−特性関係を導き出すことができる。抗体の特性は、抗体配列、機能的、および３次元構造の経験的および理論的モデル（例えば、接触候補残基の分析または計算上の物理化学的特性）から導き出すことができ、これらの特性は単一でおよび組み合わせて考慮することができる。
ＶＨドメインおよびＶＬドメインからなる抗体抗原結合部位は、典型的に、６つのポリペプチドループ、すなわち軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）由来の３つおよび重鎖可変ドメイン（ＶＨ）由来の３つによって形成される。既知の原子構造の抗体についての分析により、抗体結合部位の配列と３次元構造との間の関係が解明されている（Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２２７，７９９−８１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２７３（４），９２７−９４８）。これらの関係は、ＶＨドメイン中の第３領域（ループ）を除いて、結合部位ループが少数の主鎖コンフォメーション、すなわち標準構造のうちの１つを有することを意味する。特定のループ中で形成される標準構造は、そのサイズ、ならびに、ループおよびフレームワークの両方の領域中の重要部位での特定の残基の存在によって決定されることが示されている（Ｃｈｏｔｈｉａ Ｃ．ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２２７，７９９−８１７、Ａｌ−Ｌａｚｉｋａｎｉ，ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２７３（４），９２７−９４８）。
配列−構造関係についてのこの研究は、そのＣＤＲループの３次元構造の維持に重要な、ひいては、結合特異性を維持する、配列が既知で３次元構造が未知の抗体中のこれらの残基を予測するために使用することができる。これらの予測は、先のリード最適化実験からの出力と該予測を比較することによって確認することができる。構造的アプローチでは、任意の無料で利用可能な、または市販パッケージ、例えば、ＷＡＭ（Ｗｈｉｔｅｌｅｇｇ，Ｎ．Ｒ．ｕ．＆ Ｒｅｅｓ，Ａ．Ｒ（２０００）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇ．，１２，８１５−８２４）等を使用して、抗体分子のモデルを作製することができる（Ｃｈｏｔｈｉａ，ｅｔ ａｌ．（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２３，７５５−７５８）。次いで、タンパク質視覚化および解析ソフトウェアパッケージ、例えば、Ｉｎｓｉｇｈｔ ＩＩ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．）、またはＤｅｅｐ Ｖｉｅｗ（Ｇｕｅｘ，Ｎ．ａｎｄ Ｐｅｉｔｓｃｈ，Ｍ．Ｃ．（１９９７）Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ １８，２７１４−２７２３）等を使用して、ＣＤＲ中の各位置での置換候補を評価し得る。次いで、この情報を使用して、活性に関して最小または有益な効果を有する可能性が高い置換を施し得る。
ＣＤＲ、抗体ＶＨまたはＶＬドメイン、および結合性メンバーのアミノ酸配列内で置換を施すために必要とされる技術は、概して、当該技術分野において利用可能である。活性に関して最小または有益な効果を有すると予測され得るか、またはされ得ない置換を施して変異体配列を作製し、ＩＬ−６に結合し、かつ／もしくはそれを中和する能力、および／または任意の他の所望の特性に関して試験し得る。
本明細書中で配列が具体的に開示されている任意のＶＨおよびＶＬドメインの可変ドメインアミノ酸配列変異体を、考察されるように、本発明に従って用いてよい。
本発明のＶＬドメインの変異体、およびそれらを含む結合性メンバーまたは抗体分子には、カバット残基１０８位にアルギニンが存在しない（例えば、カバット残基１０８位が異なる残基であるか、または欠失している）ＶＬドメインが含まれる。例えば、定常ドメインを欠いている抗体分子、例えば、ｓｃＦｖ等の抗体分子は、本明細書中に記載のＶＬドメイン配列またはその変異体を有するＶＬドメインであって、カバット残基１０８位のアルギニンが、アルギニン以外のアミノ酸残基であるか、または欠失しているＶＬドメインを含み得る。
本発明のさらなる態様は、添付の配列表に示される抗体１８のＶＨドメインと、少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８、または９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＨドメインを含み、かつ／または、添付の配列表に示される抗体１８のＶＬドメインと、少なくとも６０、７０、８０、８５、９０、９５、９８、または９９％のアミノ酸配列同一性を有するＶＬドメインを含む抗体分子である。２つのアミノ酸配列の％同一性を算出するために使用できるアルゴリズムには、例えば、ＢＬＡＳＴ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０５−４１０）、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ（１９８８）ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８５：２４４４−２４４８）、またはＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズム（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ｊ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．１４７：１９５−１９７）（例えば、デフォルトパラメータを用いる）が含まれる。
特定の変異体は、１つ以上のアミノ酸配列改変（アミノ酸残基の付加、欠失、置換、および／または挿入）を含み得る。
１つ以上のフレームワーク領域および／または１つ以上のＣＤＲにおいて改変を施し得る。該改変は、通常、機能喪失を生じさせず、したがって、そのように改変されたアミノ酸配列を含む結合性メンバーは、ＩＬ−６に結合し、かつ／またはそれらを中和する能力を保持し得る。それは、例えば、本明細書中に記載のアッセイにおいて測定された場合に、改変が施されていない結合性メンバーと同一の定量的結合および／または中和能力を保持し得る。そのように改変されたアミノ酸配列を含む結合性メンバーは、ＩＬ−６に結合し、かつ／またはそれらを中和する改善された能力を有し得る。
改変は、１つ以上のアミノ酸残基を、天然に存在しないか、もしくは非標準アミノ酸で置換すること、１つ以上のアミノ酸残基を修飾して、天然に存在しない型か、もしくは非標準型にすること、または１つ以上の天然に存在しないか、もしくは非標準アミノ酸を配列内に挿入することを含み得る。本発明の配列中の改変の数および位置の例は、本明細書中の他の箇所で記載されている。天然に存在するアミノ酸には、２０種の「標準」Ｌ−アミノ酸が含まれ、その標準一文字コードによってＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｍ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｎ、Ｑ、Ｙ、Ｃ、Ｋ、Ｒ、Ｈ、Ｄ、Ｅとして特定される。非標準アミノ酸には、ポリペプチド骨格に組み込まれ得るか、または既存のアミノ酸残基の修飾から生じる任意の他の残基が含まれる。非標準アミノ酸は、天然に存在しても、天然に存在しなくてもよい。幾つかの天然に存在する非標準アミノ酸は、当該技術分野において公知であり、例えば、４−ヒドロキシプロリン、５−ヒドロキシリシン、３−メチルヒスチジン、Ｎ−アセチルセリン等である（Ｖｏｅｔ ＆ Ｖｏｅｔ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，（Ｗｉｌｅｙ）１９９５）。Ｎ−アルファ位置で誘導体化されているこれらのアミノ酸残基は、アミノ酸配列のＮ末端にのみ位置する。本発明では、通常、アミノ酸は、Ｌ−アミノ酸であるが、Ｄ−アミノ酸であってもよい。したがって、改変は、Ｌ−アミノ酸を修飾してＤ−アミノ酸にするか、またはＬ−アミノ酸をＤ−アミノ酸で置換することを含む。メチル化、アセチル化、および／またはリン酸化型のアミノ酸もまた既知であり、本発明のアミノ酸は、このような修飾に供し得る。
本発明の抗体ドメインおよび結合性メンバー中のアミノ酸配列は、上記の非天然または非標準アミノ酸を含み得る。非標準アミノ酸（例えば、Ｄ−アミノ酸）は、合成中に、またはアミノ酸配列の合成後に「元の」標準アミノ酸の修飾または置換によってアミノ酸配列に組み込まれ得る。
非標準および／または天然に存在しないアミノ酸の使用により、構造的および機能的多様性が高まり、ゆえに本発明の結合性メンバーにおける所望のＩＬ−６結合および中和特性を達成するための潜在能力を高めることができる。さらに、Ｄ−アミノ酸および類似体は、動物、例えば、ヒトへの投与後のＬ−アミノ酸を有するポリペプチドのインビボ分解により、標準Ｌ−アミノ酸と比較して異なる薬物動態学的プロファイルを有することが示されており、このことは、幾つかのインビボ適用では、Ｄ−アミノ酸が有益であることを意味する。
本発明のＣＤＲ由来配列を保持する新規ＶＨまたはＶＬ領域は、可変ドメイン全体内の突然変異を生じさせる１つ以上の選択されるＶＨおよび／またはＶＬ遺伝子のランダム突然変異誘発を使用して作製され得る。このような技術は、Ｇｒａｍら（Ｇｒａｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）ＰＮＡＳ ＵＳＡ，８９：３５７６−３５８０）によって記載され、変異性ＰＣＲ法（ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ ＰＣＲ）を使用した。幾つかの実施形態において、可変ドメイン全体またはＣＤＲセット内で１つまたは２つのアミノ酸置換がなされる。
使用され得る別の方法は、ＶＨまたはＶＬ遺伝子のＣＤＲ領域に対する直接突然変異誘発である。このような技術は、Ｂａｒｂａｓら（Ｂａｒｂａｓ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）ＰＮＡＳ ＵＳＡ，９１：３８０９−３８１３）およびＳｃｈｉｅｒら（Ｓｃｈｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６３：５５１−５６７）によって開示されている。
全ての上記の技術は、当該技術分野においてそのような技術として公知であり、当業者は、該技術を使用し、当該技術分野の所定の方法論を使用して本発明の結合性メンバーを得ることができる。
本発明のさらなる態様は、ＩＬ−６に対する抗体抗原結合部位を得るための方法を提供し、該方法には、本明細書中に記載のＶＨドメインのアミノ酸配列中の１つ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換、または挿入を用いて、該ＶＨドメインのアミノ酸配列変異体であるＶＨドメインを提供すること、任意に、そのように提供されたＶＨドメインを１つ以上のＶＬドメインと組み合わせること、およびＶＨドメインまたはＶＨ／ＶＬの組み合わせ、または複数の組み合わせを試験して、ＩＬ−６に対する結合性メンバーまたは抗体抗原結合部位（任意に、１つ以上の所望の特性、例えばＩＬ−６活性を中和する能力を有する）を特定することが含まれる。該ＶＬドメインは、本明細書中に実質的に記載されるアミノ酸配列を有し得る。本明細書中で開示されるＶＬドメインの１つ以上の配列変異体を１つ以上のＶＨドメインと組み合わせる類似の方法が用いられ得る。
上記のように、本明細書中に実質的に記載されるＣＤＲアミノ酸配列は、ヒト抗体可変ドメイン、またはその本質的部分中のＣＤＲとして保持され得る。本明細書中に実質的に記載されるＨＣＤＲ３配列は、本発明の実施形態であり、これらのそれぞれは、ヒト重鎖可変ドメインまたはその本質的部分中のＨＣＤＲ３として保持され得る。
本発明で用いられる可変ドメインは、任意の生殖細胞系列または再配置（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）ヒト可変ドメインから取得し得るか、もしくはそれに由来し得るか、または既知のヒト可変ドメインのコンセンサス配列または実際の配列に基づく合成可変ドメインであり得る。可変ドメインは、非ヒト抗体に由来することができる。本発明のＣＤＲ配列（例えば、ＣＤＲ３）は、組換えＤＮＡ技術を使用して、ＣＤＲ（例えば、ＣＤＲ３）を欠いている可変ドメインのレパートリーに導入され得る。例えば、Ｍａｒｋｓら（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ （１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３）は、該可変ドメイン領域の５’末端に対するか、またはそれに隣接するコンセンサスプライマーを、ヒトＶＨ遺伝子の第３フレームワーク領域に対するコンセンサスプライマーと共に用いて、ＣＤＲ３を欠いているＶＨ可変ドメインのレパートリーを得る、抗体可変ドメインのレパートリーを製造する方法を記載している。Ｍａｒｋｓらは、このレパートリーを特定の抗体のＣＤＲ３とどのように組み合わせ得るかをさらに記載している。類似の技術を用いて、本発明のＣＤＲ３由来配列を、ＣＤＲ３を欠いているＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーとシャッフルし、シャッフルされた完全なＶＨまたはＶＬドメインを同族（ｃｏｇｎａｔｅ）ＶＬまたはＶＨドメインと組み合わせて本発明の結合性メンバーを得ることができる。次いで、このレパートリーは、好適な宿主系、例えば、ＷＯ第９２／０１０４７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）、または後の多数の文献のいずれか（Ｋａｙ，Ｗｉｎｔｅｒ ＆ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ（Ｋａｙ，Ｂ．Ｋ．，Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．，ａｎｄ ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ，Ｊ．（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）を含む）のファージディスプレイ系等でディスプレイされ得、それにより好適な結合性メンバーが選択され得る。レパートリーは、１０４の個別のメンバー以上、例えば、少なくとも１０５、少なくとも１０６、少なくとも１０７、少なくとも１０８、少なくとも１０９、または少なくとも１０１０メンバーまたはそれ以上のいずれかから構成され得る。他の好適な宿主系としては、酵母ディスプレイ、細菌ディスプレイ、Ｔ７ディスプレイ、ウイルスディスプレイ、細胞ディスプレイ、リボソームディスプレイ、および共有結合ディスプレイが含まれるが、これらに限定されない。
ＩＬ−６抗原に対する結合性メンバーを調製する方法が提供され、該方法には、
（ａ）置換すべきＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３コード領域を欠いているＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供すること、
（ｂ）該レパートリーを、ＶＨ ＣＤＲ３に関して本明細書中に実質的に記載されるアミノ酸配列をコードするドナー核酸と組み合わせて、該ドナー核酸をレパートリー中のＣＤＲ３領域に挿入し、それによりＶＨドメインをコードする核酸の生成物レパートリーを得ること、
（ｃ）該生成物レパートリーの核酸を発現させること、
（ｄ）ＩＬ−６に対する結合性メンバーを選択すること、および
（ｅ）該結合性メンバーまたはそれをコードする核酸を回収することを含む。
さらに、本発明のＶＬ ＣＤＲ３を、置換すべきＣＤＲ３を含むか、あるいはＣＤＲ３コード領域を欠いているＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと組み合わせる、類似の方法が使用され得る。
同様に、１つ以上の、または全ての３つのＣＤＲを、ＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーに移植し、次いで、ＩＬ−６に対する結合性メンバーまたは複数の結合性メンバーに関してスクリーニングしてよい。
同様に、本明細書中に開示されている他のＶＨおよびＶＬドメイン、ＣＤＲセットおよびＨＣＤＲセット、および／またはＬＣＤＲセットを用いてよい。
免疫グロブリン可変ドメインの大部分は、少なくとも３つのＣＤＲ領域をそれらの間のフレームワーク領域と共に含み得る。また、該部分は、第１および第４フレームワーク領域の一方、または両方の少なくとも約５０％を含んでもよく、該５０％は第１フレームワーク領域のＣ末端の５０％であり、第４フレームワーク領域のＮ末端の５０％である。可変ドメインの本質的部分のＮ末端またはＣ末端の追加の残基は、天然に存在する可変ドメイン領域に通常付随しない残基であってよい。例えば、組換えＤＮＡ技術によって作製される本発明の結合性メンバーの構築は、クローニングまたは他の操作ステップを容易にするために導入されるリンカーによってコードされるＮまたはＣ末端残基を導入してよい。他の操作ステップには、抗体定常領域、他の可変ドメイン（例えば、ダイアボディを製造する場合）または本明細書中の他の箇所でさらに詳細に考察される検出可能／機能的標識を含むさらなるタンパク質配列への、本発明の可変ドメインを付着させるためのリンカーの導入が含まれる。
本発明の幾つかの態様において、結合性メンバーは、一対のＶＨおよびＶＬドメインを含むが、ＶＨまたはＶＬドメイン配列のいずれかに基づく単一の結合ドメインは、本発明のさらなる態様を形成する。単一の免疫グロブリンドメイン、特に、ＶＨドメインは、特異的様式で標的抗原と結合可能であることが知られている。例えば、上記のｄＡｂについての考察を参照のこと。
いずれの単一結合ドメインの場合でも、これらのドメインを使用して、ＩＬ−６に結合することができる２つのドメイン結合性メンバーを形成可能な相補的ドメインに関してスクリーニングすることができる。これは、ＷＯ第９２／０１０４７号（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されるいわゆる階層的二重コンビナトリアルアプローチ（ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ ｄｕａｌ ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ）を使用するファージディスプレイスクリーニング法によって達成され得、ＨまたはＬ鎖クローンのいずれかを含有する個々のコロニーを使用して、他方の鎖（ＬまたはＨ）をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、得られた２重鎖結合性メンバーが、該参考文献に記載のようなファージディスプレイ技術に従って選択される。この技術はまた、Ｍａｒｋｓらの同書（Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：７７９−７８３）に開示されている。
本発明の結合性メンバーは、抗体定常領域またはそれらの一部、例えば、ヒト抗体定常領域またはそれらの一部をさらに含み得る。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端で、ヒトＣκまたはＣλ鎖を含む抗体軽鎖定常ドメインに結合し得る。同様に、ＶＨドメインに基づく結合性メンバーは、そのＣ末端で、任意の抗体アイソタイプ、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、およびＩｇＭ、ならびにアイソタイプのサブクラス、特に、ＩｇＧ１およびＩｇＧ４のいずれかに由来する免疫グロブリン重鎖の全てのまたは一部（例えば、ＣＨ１ドメイン）に結合し得る。ＩｇＧ１は、そのエフェクター機能および製造の容易さのため、有益である。これらの特性を有し、可変領域を安定化する任意の合成または他の定常領域変異体もまた、本発明において有用であり得る。
本発明の結合性メンバーは、検出可能または機能的標識で標識され得る。ゆえに、結合性メンバーまたは抗体分子は、検出可能および／または定量化可能なシグナルを得るために、イムノコンジュゲートの形態で存在させることができる。イムノコンジュゲートは、検出可能または機能的標識とコンジュゲートされた本発明の抗体分子を含み得る。標識は、シグナルを生じさせるか、またはシグナルの発生を誘発できる任意の分子であり得、それには、蛍光剤、放射性標識、酵素、化学発光剤（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｒｓ）、または光増感剤が含まれるが、これらに限定されない。ゆえに、結合は、蛍光または発光、放射能、酵素活性または吸光度を検出することによって検出および／または測定され得る。
好適な標識は、限定的ではなく例示的に、以下のものがふくまれる。
− 酵素、例えば、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ（「Ｇ６ＰＤＨ」）、アルファ−Ｄ−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、グルコースアミラーゼ、炭酸脱水酵素、アセチルコリンエステラーゼ、リゾチーム、リンゴ酸デヒドロゲナーゼ、およびペルオキシダーゼ、例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、
− 色素、
− 蛍光標識または蛍光剤、例えば、フルオレセインおよびその誘導体、蛍光色素、ローダミン化合物および誘導体、ＧＦＰ（ＧＦＰは「緑色蛍光タンパク質」を表す）、ダンシル、ウンベリフェロン、フィコエリトリン、フィコシアニン、アロフィコシアニン、ｏ−フタルデヒド（ｏ−ｐｈｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）、およびフルオレサミン；フルオロフォア、例えば、ランタニドクリプタートおよびキレート、例えば、ユーロピウム等（Ｐｅｒｋｉｎ ＥｌｍｅｒおよびＣｉｓ Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、
− イソルミノール、ルミノールおよびジオキセタン等の化学発光標識または化学発光剤、
− ルシフェラーゼおよびルシフェリン等の生物発光標識、
− 増感剤、
− 補酵素、
− 酵素基質、
− 臭素７７、炭素１４、コバルト５７、フッ素８、ガリウム６７、ガリウム６８、水素３（トリチウム）、インジウム１１１、インジウム１１３ｍ、ヨウ素１２３ｍ、ヨウ素１２５、ヨウ素１２６、ヨウ素１３１、ヨウ素１３３、水銀１０７、水銀２０３、リン３２、レニウム９９ｍ、レニウム１０１、レニウム１０５、ルテニウム９５、ルテニウム９７、ルテニウム１０３、ルテニウム１０５、スカンジウム４７、セレン７５、イオウ３５、テクネチウム９９、テクネチウム９９ｍ、テルル１２１ｍ、テルル１２２ｍ、テルル１２５ｍ、ツリウム１６５、ツリウム１６７、ツリウム１６８、イットリウム１９９、および本明細書中に記載の他の放射性標識が挙げられるが、これらに限定されない、放射性標識、
− 例えば、ラテックスまたは炭素粒子；金属ゾル；微結晶；リポソーム；細胞、等の粒子（色素、触媒、または他の検出可能な基でさらに標識してよい）、
− ビオチン、ジゴキシゲニン（ｄｉｇｏｘｙｇｅｎｉｎ）、または５−ブロモデオキシウリジン等の分子、
− 毒素成分、例えば、シュードモナス外毒素（ＰＥまたはその細胞傷害性断片もしくは突然変異体）、ジフテリア（Ｄｉｐｔｈｅｒｉａ）毒素またはその細胞傷害性断片もしくは突然変異体、ボツリヌス毒素Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、もしくはＦ、リシンまたはその細胞傷害性断片、例えば、リシンＡ、アブリンまたはその細胞傷害性断片、サポリン（ｓａｐｏｒｉｎ）またはその細胞傷害性断片、ポークウィード（ｐｏｋｅｗｅｅｄ）抗ウイルス毒素またはその細胞傷害性断片、およびブリョジン（ｂｒｙｏｄｉｎ）１またはその細胞傷害性断片の群から選択される毒素部分。
好適な酵素および補酵素は、ＬｉｔｍａｎらのＵＳ第４２７５１４９号、およびＢｏｇｕｓｌａｓｋｉらのＵＳ第４３１８９８０号に開示されており、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。好適な蛍光剤および化学発光剤は、ＬｉｔｍａｎらのＵＳ第４２７５１４９号に開示されており、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。標識には、特定の同起源の検出可能部分、例えば、標識アビジンまたはストレプトアビジンとの結合を介して検出され得る化学的部分、例えば、ビオチンがさらに含まれる。検出可能な標識は、当該技術分野において公知の従来化学を用いて本発明の抗体に結合し得る。
イムノコンジュゲートまたはその機能的断片は、当業者に公知の方法によって調製することができる。それらは、直接、または、スペーサー基もしくは連結基、例えば、ポリアルデヒド、例えば、グルタルアルデヒド、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ジエチレン−トリアミン五酢酸（ＤＰＴＡ）の仲介によって、または治療用コンジュゲートに関して上に記載されるようなカップリング剤の存在下で、酵素または蛍光標識にカップリングすることができる。フルオレセインタイプの標識を含有するコンジュゲートは、イソチオシアン酸と反応させることによって調製することができる。
直接、または上記のキレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡを介して治療用放射性同位体を抗体にカップリングするための既存の当業者に公知の方法を、診断で使用できる放射性元素に関して使用することができる。同様に、クロラミンＴ法（Ｈｕｎｔｅｒ Ｗ．Ｍ．ａｎｄ Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ Ｆ．Ｃ．（１９６２）Ｎａｔｕｒｅ １９４：４９５）によるナトリウム１２５での標識化、またはＣｒｏｃｋｆｏｒｄら（ＵＳ第４４２４２００号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）の技術によるか、もしくはＨｎａｔｏｗｉｃｈ（ＵＳ第４４７９９３０号、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）によって記載されるように、ＤＴＰＡを介して結合させるテクネチウム９９ｍでの標識化を実施することが可能である。
標識が、外部手段、例えば、視覚的試験、電磁放射線、熱、および化学試薬によって検出可能なシグナルを生成できる多数の方法がある。本発明の抗体に結合する別の結合性メンバー、または支持体に標識を結合させることもできる。
標識は、シグナルを直接生成することができ、したがって、シグナルの生成に追加の成分は必要とされない。多数の有機分子、例えば、蛍光剤は、紫外光および可視光を吸収することができ、光吸収は、これらの分子にエネルギーを移し、それらを励起エネルギー状態に高める。次いで、この吸収エネルギーは、第２の波長での光の放出によって消散される。この第２の波長での発光もまた、標識受容体分子にエネルギーを移し、得られるエネルギーは、光の放出、例えば、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）によって受容体分子から消散する。シグナルを直接生成する他の標識には、放射性同位体および色素が含まれる。
代替として、標識は、シグナルを生成するために他の成分を必要とすることがあり、該シグナル生成系は、測定可能なシグナルを生成するために必要とされる全ての成分を含み、それには、基質、補酵素、エンハンサー、追加の酵素、酵素産物と反応する物質、触媒、アクチベーター、補助因子、阻害剤、スカベンジャー、金属イオン、およびシグナル生成物質の結合に必要とされる特定の結合物質が含まれ得る。好適なシグナル生成系についての詳細な考察は、ＵｌｌｍａｎらのＵＳ第５１８５２４３号に見出され得、これは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
本発明は、本明細書で提供されるＩＬ−６に対する結合性メンバーを結合することを含む方法を提供する。上記のように、そのような結合は、インビボで、例えば、結合性メンバー、または結合性メンバーをコードする核酸の投与後に生じ得るか、またはそれはインビトロで、例えば、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロッティング、免疫細胞化学、免疫沈降、アフィニティークロマトグラフィー、および生化学的または細胞に基づくアッセイ、例えば、ＴＦ−１細胞増殖アッセイにおいて生じ得る。
本発明はまた、例えば、バイオセンサー系で本発明による結合性メンバーを用いることによって抗原レベルを直接測定することを提供する。例えば、本発明は、ＩＬ−６に対する結合の検出および／または測定方法を含み、該方法には、（ｉ）ＩＬ−６に対する該結合性メンバーを曝露することと、（ｉｉ）ＩＬ−６に対する該結合性メンバーの結合を検出することと、を含み、ここで、結合は、本明細書中に記載の任意の方法または検出可能な標識を使用して検出される。この方法、および本明細書中に記載の任意の他の結合検出方法は、方法を実施する者が、例えば、検出可能な標識を視覚的に観察することによって直接解釈し得る。代替として、この方法、または本明細書中に記載の任意の他の結合検出方法では、オートラジオグラフ、写真、コンピュータプリントアウト、フローサイトメトリーレポート、グラフ、チャート、結果を含有する試験管もしくは容器もしくはウェル、または本方法の結果についての任意の他の視覚的または物理的表現の形式でレポートを得ることができる。
ＩＬ−６に対する結合性メンバーの結合の量が、測定され得る。定量化は、診断上対象となり得る、試験試料中の抗原の量に関するものであってよい。ＩＬ−６結合に関するスクリーニングおよび／またはその定量化は、例えば、本明細書中で言及される疾患もしくは障害、および／または、異常なＩＬ−６発現および／もしくは活性を伴って生じる任意の他の疾患もしくは障害についての患者のスクリーニングにおいて有用であり得る。
本発明の診断方法は、（ｉ）被験体から組織または液体試料を取得することと、（ｉｉ）該本発明の組織または液体試料を１つ以上の本発明の結合性メンバーに曝露することと、（ｉｉｉ）対照試料と比較して、結合したＩＬ−６を検出することと、を含み得、ここで、対照試料と比較してＩＬ−６結合の量の増加は、ＩＬ−６の異常なレベルの発現または活性を示し得る。試験するべき組織または液体試料には、血液、血清、尿、生検材料、腫瘍、または異常なＩＬ−６レベルを含有すると疑われる任意の組織が含まれる。異常なＩＬ−６レベルまたは活性に関して陽性であると試験された被験体はさらに、本明細書中で後に開示される治療方法によって恩恵を受け得る。
当業者は、本明細書中で開示される方法を考慮して、その好みおよび一般的知識に従って、抗原に対する結合性メンバーの結合を測定する好適な様式を選択することができる。
試料中の結合性メンバーの反応性は、任意の適切な手段によって測定され得る。ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）は一候補である。放射性標識抗原は、非標識抗原（試験試料）と混合させ、結合性メンバーに結合させる。結合した抗原は、非結合抗原から物理的に分離し、結合性メンバーに結合している放射性抗原の量を測定する。試験試料中に多くの抗原が存在するほど、少ない放射性抗原しか結合性メンバーに結合しない。レポーター分子に連結された抗原または類似体を使用して、非放射性抗原での競合結合アッセイを使用してもよい。該レポーター分子は、スペクトルによって分離される吸収または発光特性を有する蛍光色素、リン光体、またはレーザー色素であり得る。好適な蛍光色素には、フルオレセイン、ローダミン、フィコエリトリン、およびテキサスレッド、ならびにランタニドキレートまたはクリプタートが含まれる。好適な発色色素には、ジアミノベンジジンが含まれる。
他のレポーターには、高分子コロイド粒子または微粒子材料、例えば、有色、磁気、または常磁性のラテックスビーズ、および視覚的に観察されるか、電子的に検出されるか、または別の方法で記録される検出可能なシグナルを直接または間接的に生じさせることができる生物学的または化学的に活性な薬剤が含まれる。これらの分子は、例えば、発色させるか、または変色させるか、または電気的特性の変化を生じさせる反応を触媒する酵素であってよい。それらは、エネルギー状態間の電子遷移が特徴的スペクトル吸収または発光を生じさせるよう分子的に励起可能であり得る。それらには、バイオセンサーと共に使用される化学物質が含まれ得る。ビオチン／アビジンまたはビオチン／ストレプトアビジンおよびアルカリホスファターゼ検出系が用いられ得る。
個々の結合性メンバー−レポーターコンジュゲートによって生成されるシグナルを使用して、試料（正常および試験試料）中の関連する結合性メンバーの結合についての定量可能な絶対的または相対的データを導き出し得る。
また、本発明の任意の態様または実施形態による結合性メンバーを含むキットが本発明の態様として提供される。該キットでは、例えば、以下でさらに記載されるように、結合性メンバーを標識して、試料中のその反応性の測定を可能にしてよい。さらに、結合性メンバーを固体支持体に付着させても付着させなくてもよい。キットの構成要素は、概して、滅菌されていて、密封バイアルまたは他の容器内である。キットは、結合性メンバーが有用である診断解析または他の方法において用いられ得る。キットは、方法、例えば、本発明に従う方法での構成要素の使用に関する説明書を含有してよい。このような方法を支援するか、またはその実施を可能にするための付属材料が本発明のキット内に含まれ得る。該付属材料には、第１の結合性メンバーに結合する第２の異なる結合性メンバーが含まれ、検出可能な標識（例えば、蛍光標識、放射性同位体、または酵素）にコンジュゲートされる。抗体に基づくキットはまた、免疫沈降を実施するためのビーズを含み得る。キットの各構成要素は、概して、それ自体の好適な容器内にある。ゆえに、これらのキットは、概して、各結合性メンバーに好適な個別の容器を含む。さらに、該キットは、アッセイを実施するための指示書、および該アッセイの実施から得られたデータを解釈および解析するための方法を含み得る。
本発明はまた、競合アッセイにおいて抗原レベルを測定するための上記結合性メンバーの使用、すなわち、本発明によって提供される結合性メンバーを競合アッセイで用いることによって試料中の抗原レベルを測定する方法を提供する。これは、結合した抗原を非結合抗原から物理的に分離することが必要とされない場合であり得る。レポーター分子を結合性メンバーに連結し、結合時に、物理的または光学的変化が生じるようにすることが一候補である。該レポーター分子は、直接的または間接的に検出可能なシグナルを生成してよく、これは、定量可能であってよい。レポーター分子の連結は、直接的または間接的に、例えば、ペプチド結合を介して、共有結合的に、または非共有結合的に行われ得る。ペプチド結合を介した連結は、抗体およびレポーター分子をコードする融合遺伝子の組み換え発現の結果として生じ得る。
種々の態様および実施形態において、本発明は、本明細書中で定義される任意の結合性メンバー、本発明は、例えば、抗体１８の、例えば、ＩｇＧ１形態のもの、によるＩＬ−６への結合に関して競合する結合性メンバーにまで及ぶ。結合性メンバー間の競合は、例えば、タグが付いていない他方の結合性メンバーの存在下で検出できる特定のレポーター分子を一方の結合性メンバーにタグ付けすることによって、インビトロで容易にアッセイされ得、同一エピトープまたはオーバーラップエピトープに結合する結合性メンバーの同定が可能になる。競合は、例えば、ＥＬＩＳＡを使用して測定され得、ＩＬ−６をプレートに固定し、タグが付いているか、または標識されている第１の結合性メンバーを、タグが付いていないか、または標識されていない１つ以上の他の結合性メンバーと共に該プレートに加える。タグが付いている結合性メンバーと競合する、タグが付いていない結合性メンバーの存在は、タグが付いている結合性メンバーによって放出されるシグナルの低下によって観察される。
例えば、本発明は、ＩＬ−６結合化合物を同定する方法を含み、これには、（ｉ）ＩＬ−６を支持体に固定することと、（ｉｉ）該固定したＩＬ−６を、タグが付いているか、または標識されている少なくとも１つの本発明の結合性メンバーおよびタグが付いていないか、または標識されていない１つ以上の試験結合化合物と、同時に、または段階的様式で接触させることと、（ｉｉｉ）タグが付いている結合性メンバーからの結合タグ量の低下を観察することによって、新規ＩＬ−６結合化合物を特定することと、を含む。マルチウェルまたはアレイ形式を使用して、このような方法をハイスループット様式で実施することができる。また、このようなアッセイは、溶液中で実施され得る。例えば、Ｕ．Ｓ．第５，８１４，４６８号を参照されたく、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。上記のように、結合の検出は、該方法の実施者が直接、例えば、検出可能な標識またはその存在の減少を視覚的に観察することによって解釈することができる。代替として、本発明の結合方法は、オートラジオグラフ、写真、コンピュータプリントアウト、フローサイトメトリーレポート、グラフ、チャート、結果を含有する試験管もしくは容器もしくはウェル、または本方法の結果についての任意の他の視覚的または物理的表現の形式でレポートを得ることができる。
また、エピトープマッピングにおいて競合アッセイを使用することもできる。ある例において、エピトープマッピングを使用して、任意に、最適化された中和および／または調節特性を有し得る、ＩＬ−６結合性メンバーが結合するエピトープを同定することができる。このようなエピトープは、線形または立体構造エピトープであり得る。立体構造エピトープは、ＩＬ−６の少なくとも２つの異なる断片を含むことができ、該断片は、ＩＬ−６がその三次元または四次元構造に折り畳まれる場合に、互いに接近して位置して立体構造エピトープを形成し、それが、例えば、ＩＬ−６結合性メンバー等のＩＬ−６の阻害剤によって認識される。競合試験では、抗原のペプチド断片、特に、対象となるエピトープを含むか、または本質的にそれから構成されるペプチドを用いてよい。エピトープ配列に加えていずれかの末端に１つ以上のアミノ酸を有するペプチドを使用してよい。本発明による結合性メンバーは、抗原に対するその結合が、所与の配列を有するか、または所与の配列を含むペプチドによって阻害されるようにしてよい。
本発明は、本発明の結合性メンバーをコードする単離された核酸をさらに提供する。核酸は、ＤＮＡおよび／またはＲＮＡを含み得る。一方で、本発明は、上で定義される本発明のＣＤＲまたはＣＤＲセットまたはＶＨドメインまたはＶＬドメインまたは抗体抗原結合部位または抗体分子、例えば、ｓｃＦｖまたはＩｇＧ１をコードする核酸を提供する。
本発明はまた、上記の少なくとも１つのポリヌクレオチドを含むプラスミド、ベクター、転写、または発現カセットの形態の構築物を提供する。
本発明はまた、上記の１つ以上の構築物を含む組換え宿主細胞を提供する。提供される任意のＣＤＲまたはＣＤＲセットまたはＶＨドメインまたはＶＬドメインまたは抗体抗原結合部位または抗体分子、例えば、ｓｃＦｖまたはＩｇＧ１をコードする核酸は、それ自体が、コード核酸からの発現を含むコード産物の産生方法と同様、本発明の態様を形成する。核酸を含有する組換え宿主細胞を適切な条件下で培養することによって、発現は、好都合に達成され得る。発現による産生後、ＶＨまたはＶＬドメイン、または結合性メンバーは、任意の好適な技術を用いて、単離および／または精製され得、次いで、必要に応じて使用され得る。
本発明による核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含み得、完全にまたは部分的に合成され得る。本明細書中に記載のヌクレオチド配列への言及は、文脈上特に要求されない限り、指定配列を有するＤＮＡ分子を包含し、かつ、Ｔの代わりにＵが用いられる指定配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
なおさらなる態様は、抗体ＶＨ可変ドメインの産生方法を提供し、該方法には、コード核酸からの発現を生じさせることが含まれる。このような方法は、該抗体ＶＨ可変ドメインの産生条件下で宿主細胞を培養することを含み得る。
ＶＬ可変ドメインおよび、ＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む結合性メンバーを産生するための類似の方法は、本発明のさらなる態様として提供される。
産生方法は、生成物を単離および／または精製するステップを含み得る。産生方法は、この生成物を、薬学的に許容される賦形剤等の少なくとも１つの追加の成分を含む組成物に製剤化するステップを含み得る。
種々の異なる宿主細胞におけるポリペプチドのクローニング系および発現系は周知である。好適な宿主細胞には、細菌、哺乳類細胞、植物細胞、糸状菌、酵母およびバキュロウイルス系およびトランスジェニック植物および動物が含まれる。原核細胞での抗体および抗体断片の発現は、当該技術分野において確立されている。概説に関しては、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ａ．（１９９１）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：５４５−５５１）を参照のこと。一般的な細菌宿主は、大腸菌である。
培養中の真核細胞での発現もまた、結合性メンバーを産生するための選択肢として当業者に利用可能である（Ｃｈａｄｄ ＨＥ ａｎｄ Ｃｈａｍｏｗ ＳＭ（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：１８８−１９４、Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＤＣ ａｎｄ Ｋｒｕｍｍｅｎ Ｌ（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １３：１１７、Ｌａｒｒｉｃｋ ＪＷ ａｎｄ Ｔｈｏｍａｓ ＤＷ（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １２：４１１−４１８）。当該技術分野において、異種ポリペプチドの発現に利用可能な哺乳類細胞株には、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎細胞、ＮＳ０マウス黒色腫細胞、ＹＢ２／０ラット骨髄腫細胞、ヒト胚性腎細胞、ヒト胚性網膜細胞、および多数の他の細胞が含まれる。
プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子、および必要に応じて他の配列を含む、好適な調節配列を含有する好適なベクターは、選択または構築され得る。ベクターは、必要に応じて、プラスミド、例えば、ファージミド、またはウイルス、例えば「ファージ」であり得る（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ：３ｒｄ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ）。核酸を操作するための多数の公知技術およびプロトコル、例えば、核酸構築物の調製における、突然変異誘発、シークエンシング、細胞へのＤＮＡの導入および遺伝子発現、ならびにタンパク質の分析は、Ａｕｓｕｂｅｌら（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，Ｓｈｏｒｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ １９９９）に詳細に記載されている。
本発明のさらなる態様は、本明細書中で開示される核酸を含有する宿主細胞を提供する。このような宿主細胞は、インビトロであってよく、培養中であってよい。このような宿主細胞は、インビボであってよい。宿主細胞のインビボでの存在により、本発明の結合性メンバーを「イントラボディ」または細胞内抗体として細胞内で発現することが可能になる。イントラボディは、遺伝子治療に使用され得る。
なおさらなる態様は、本発明の核酸を宿主細胞内に導入することを含む方法を提供する。該導入では、任意の利用可能な技術を用いてよい。真核細胞では、好適な技術には、リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥデキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクション、およびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えば、ワクシニアまたは、昆虫細胞では、バキュロウイルスを用いる形質導入が含まれ得る。宿主細胞、特に、真核細胞での核酸の導入では、ウイルスまたはプラスミドに基づく系が使用され得る。プラスミド系は、エピソームとして維持され得るか、または宿主細胞内もしくは人工染色体内に組み込まれ得る。取り込みは、単一または複数の遺伝子座で１つ以上のコピーのランダムな組込み、または標的組込み（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ）によって行われ得る。細菌細胞では、好適な技術には、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーション、およびバクテリオファージを用いたトランスフェクションが含まれる。
導入後に、例えば、該遺伝子の発現条件下で宿主細胞を培養することによって、核酸からの発現を生じさせるか、または可能にしてよい。発現産物の精製は、当業者に公知の方法によって達成され得る。
本発明の核酸は、宿主細胞のゲノム（例えば、染色体）に組み込まれ得る。標準的技術に従って、ゲノムとの組換えを促進する配列を含めることによって、組込みは促進され得る。
本発明はまた、上記結合性メンバーまたはポリペプチドを発現するために、発現系で上記構築物を用いることを含む方法を提供する。
本明細書中の他の箇所で考察されるように、種々の障害でのＩＬ−６の関与に関する証拠が存在する。したがって、本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６と関連している障害の診断または治療方法において使用され得る。このような障害は、例えば、炎症性および／または自己免疫性障害、例えば、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、悪液質、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、若年性特発性関節炎、喘息、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、クローン病、またはアテローム性動脈硬化症であり得る。また、本発明の結合性メンバーは、腫瘍および／または癌等の障害を治療するために使用され得る。さらに、本発明の結合性メンバーは、本明細書中に列記される疾患および病態から生じる、またはそれらと関連する疼痛を治療するおよび／または予防するために使用され得る。また、本発明の結合性メンバーは、患者、動物、器官、組織、または細胞において、少なくとも１つのＩＬ−６関連疾患を診断または治療する方法に使用され得、これには、以下の疾患が挙げられるが、これらに限定されない。慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）を含む閉塞性気道疾患；気管支、アレルギー性、内因性、外因性、および塵埃喘息、特に慢性または難治性喘息（例えば遅発型喘息および気道応答性亢進）等の喘息；気管支炎；乾酪性鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｃａｓｅｏｓａ）、肥厚性鼻炎、化膿性鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｐｕｒｕｌｅｎｔａ）、乾性鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｓｉｃｃａ）および薬物性鼻炎（ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｍｅｄｉｃａｍｅｎｔｏｓａ）を含む急性、アレルギー性、萎縮性鼻炎、および慢性鼻炎；クループ性、線維素性および偽膜性鼻炎および腺病性鼻炎を含む膜性鼻炎；神経性鼻炎（枯草熱）および血管運動性鼻炎、副鼻腔炎、特発性肺線維症（ＩＰＦ）を含む季節性鼻炎；サルコイドーシス、農夫肺および関連疾患、成人呼吸促迫症候群、過敏性肺炎、肺線維症、および特発性間質性肺炎；リウマチ性関節炎、若年性慢性関節炎、全身性発症若年性関節炎、血清反応陰性脊椎関節症（強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、およびライター病を含む）、ベーチェット病、シェーグレン（Ｓｉｏｇｒｅｎ）症候群および全身性硬化症、痛風、骨粗鬆症、および変形性関節炎；乾癬、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎および他の湿疹性（ｅｃｚｍａｔｏｕｓ）皮膚疾患、アレルギー性接触皮膚炎、脂漏性（ｓｅｂｏｒｒｈｏｅｔｉｃ）皮膚炎、扁平苔癬、強皮症、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、表皮水泡症、じんま疹、皮膚脈管炎、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、ブドウ膜炎、円形脱毛症、アレルギー性結膜炎、および春季結膜炎（ｖｅｒｎａｌｖｅｍａｌ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ）；（消化管）胃潰瘍、セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎（ｅｏｓｉｎｏｐｉｌｉｃ ｇａｓｔｒｏ−ｅｎｔｅｒｉｔｉｓ）、肥満細胞症、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、抗リン脂質症候群））、腸から遠隔の影響を有する食物関連アレルギー、例えば、片頭痛、鼻炎、および湿疹；悪液質、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、メサンギウム増殖性糸球体腎炎、ネフローゼ症候群、腎炎、糸球体腎炎、急性腎不全、血液透析、尿毒症、局所または円板状エリテマトーデス、全身性エリテマトーデス、キャッスルマン病、ハシモト甲状腺炎、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、Ｂ型インスリン抵抗性糖尿病、鎌状赤血球貧血、虹彩毛様体炎／ブドウ膜炎／視神経炎、腎炎症候群、好酸球増加症筋膜炎、ハイパーＩｇＥ症候群、全身性血管炎／ウェグナー肉芽腫症、睾丸炎／精管切除回復術、らい腫らい、アルコール誘発肝炎、セザリー症候群、および特発性血小板減少症紫斑病；術後接着、ネフローゼ、全身性炎症反応症候群、敗血症症候群、グラム陽性敗血症、グラム陰性敗血症、培養陰性敗血症、真菌敗血症、好中球減少性発熱、急性膵炎、尿性敗血症、グレーブス病、レイノー病、抗体媒介細胞傷害性、ＩＩＩ型過敏性反応、ＰＯＥＭＳ症候群（多発神経障害、臓器巨大症、内分泌障害、単クローン性免疫グロブリン血症、および皮膚変化症候群）、混合結合組織病、特発性アジソン病、真性糖尿病、慢性活動性肝炎、原発性胆汁性肝硬変、白斑、ＭＩ（心臓切開）後症候群、ＩＶ型過敏症、細胞内生物に起因する肉芽腫、ウィルソン病、ヘモクロマトーシス、アルファ−Ｉ−アンチトリプシン欠乏症、糖尿病網膜症、ハシモト甲状腺炎、視床下部・下垂体・副腎軸評価、甲状腺炎、脳脊髄炎、新生児慢性肺疾患、家族性食血細胞リンパ組織球増多症、脱毛症、放射線療法（例えば、無力症、貧血、悪液質等が含まれるが、これらに限定されない）、慢性サリチル酸中毒、睡眠時無呼吸、肥満症、心不全、および髄膜炎菌性敗血症；例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、膵臓、骨髄、骨、小腸、皮膚、軟骨、および角膜の移植後の急性および慢性拒絶；および慢性移植片対宿主病；白血病、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性白血病、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはＦＡＢ ＡＬＬ、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、脊髄形成異常（ｍｙｅｌｏｄｙｐｌａｓｔｉｃ）症候群（ＭＤＳ）、任意のリンパ腫、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、任意の悪性リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、カポジ肉腫、腎細胞癌、結腸直腸癌、前立腺癌、膵癌、上咽頭癌、悪性組織球増殖症、悪性腫瘍の腫瘍随伴症候群／高カルシウム血症、固形腫瘍、腺癌、肉腫、悪性黒色腫、血管腫、転移性疾患、癌関連骨吸収、癌関連骨痛；癌転移の抑制；癌悪液質の改善；嚢胞性線維症、脳卒中、心臓、脳、末梢肢（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｌｉｍｂｓ）および他の器官の再潅流傷害；やけど創傷、外傷／出血、電離放射線曝露、慢性皮膚潰瘍；生殖疾患（例えば、排卵、月経および着床の障害、早期陣痛、子癇前症、子宮内膜症）；急性または慢性細菌感染、細菌、ウイルスおよび真菌感染を含む急性および慢性寄生もしくは感染プロセス、ＨＩＶ感染／ＨＩＶ神経障害、髄膜炎、肝炎（Ａ、Ｂ、もしくはＣ、または他のウイルス性肝炎等）、敗血性関節炎、腹膜炎、肺炎、喉頭蓋炎、大腸菌Ｏ１５７：ｈ７、溶血性尿毒症症候群／血栓性血小板減少性紫斑病、マラリア、デング出血熱、レーシュマニア症、ハンセン病、中毒性ショック症候群、連鎖球菌性筋炎、ガス壊疸、ヒト型結核菌、マイコバクテリウム・アビウム・イントラセルラーレ（ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｖｉｕｍ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、カリニ肺炎、骨盤内炎症性疾患、睾丸炎／エピディディミティス（ｅｐｉｄｙｄｉｍｉｔｉｓ）、レジオネラ、ライム病、インフルエンザＡ、エプスタイン・バーウイルス、生命関連赤血球貧食症候群（ｖｉｔａｌ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｈｅｍａｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、ウイルス性脳炎／無菌性髄膜炎、うつ病等。したがって、本発明は、ＩＬ−６関連障害を治療する方法を提供し、これには、治療を必要としている患者に、有効量の本発明の１つ以上の結合性メンバーを、単独で、または、当該技術分野において公知、もしくは本明細書中に記載の別の適切な医薬と併用療法レジメンで投与することを含む。
一実施形態において、ＩＬ−６関連障害はうつ病であり、大うつ病性障害として本明細書中に称される。大うつ病性障害（臨床的うつ病、大うつ病、単極性うつ病、または単極性障害としてもしられ、本明細書中に称される）は、低い自尊心、および通常の楽しい活動における興味や喜びの損失を伴う、全ての包括的な気分の低下を特徴とする、精神障害である。「大うつ病性障害」という用語は、１９８０年版の精神障害の診断と統計の手引（ＤＳＭ−ＩＩＩ）の分類で、この症状群を気分障害として指定するために米国精神医学会によって選択され、以来、幅広く使用されている。一般用語のうつ病は、この障害を示すために使用されることが多いが、心理的うつ状態の他のタイプに関連して使用することができる場合、臨床的および研究用途におけるこの障害に対するさらに正確な専門用語が、好ましい。大うつ病は、個人の家族、仕事、または学校生活、睡眠および食習慣、ならびに総体的な健康に悪影響を及ぼす身体に障害を引き起こす状態（ｄｉｓａｂｌｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）である。
うつ病は、全身性炎症を伴って生じる疾患と極めて併存する。全身性炎症は、炎症の血漿バイオマーカーの上昇に反映される場合、多くのうつ病患者において観察される。さらに、活性化したサイトカインシグナル経路は、うつ病患者の血液およびＣＳＦ中に検出され得る。さらに、サイトカイン（ＩＦＮ−ａ、ＩＬ−２）は、精神病の病歴のない医学的に病気の患者において、大うつ病性障害の症状を誘発し得る。したがって、本発明は、うつ病を治療する方法を提供し、これには、有効量の本発明の１つ以上の結合性メンバーを単独で、または当該技術分野において公知の、例えば、セルトラリン、エスシタロプラム、フルオキセチン、パロキセチン、およびシタロプラム等の選択的セロトニン再取り込み阻害剤（ＳＳＲＩ）等の抗うつ剤；または本明細書中に記載の、別の適切な医薬と組み合わせた治療レジメンにおいて、治療を必要とする患者に投与することを含む。
本発明の結合性メンバーはまた、鎮痛特性を有する。このように、本明細書中に列記される疾患と関連する疼痛、ならびに、創傷、医学的手技、手術、損傷、外傷等から生じるか、またはそれらと関連する、慢性および急性疼痛を治療するおよび／または予防するための鎮痛剤として適切である。例えば、結合性メンバーは、術後の鎮痛剤として使用され得る。また、それらは、強直性脊椎炎、炎症性腰痛、神経因性疼痛、疼痛性神経腫、線維筋痛、頭痛、例えば、慢性頭痛および肩頭痛、膵臓炎、脊髄圧迫症候群および非悪性骨格痛、炎症性骨関節炎疼痛、リウマチ性関節炎、癌性疼痛、例えば、骨肉腫疼痛から生じる、またはそれらと関連する疼痛を治療する、または予防するために、使用され得る。
本発明の結合性メンバーはまた、ＣＯＰＤ、硬皮症、全身性エリテマトーデス、ＰＯＥＭ、ならびに特発性肺高血圧症があるが、これらに限定されない、幾つかの疾患と関連する肺高血圧症を治療するためにも使用され得る。ＩＬ−６レベルの上昇は、これらの病態の多くと関連する肺高血圧症に罹患している患者において報告されている（Ｓａｖａｌｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．（２００９）１０，６およびこの中の参考文献、Ｓｔｅｉｎｅｒ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ ａｌ Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．（２００９）１０４（２）２３６−２４４およびこの中の参考文献）。低酸素症に曝したＩＬ−６欠損マウスは、低酸素症に曝したＷＴマウスと比較した場合、右心室最大血圧の低下および右心室肥大の軽減を示す（Ｓａｖａｌｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｒｅｓ．（２００９）１０，６およびこの中の参考文献）。さらに、ＩＬ−６−過剰発現遺伝子導入マウスは、非遺伝子導入対照と比較した場合、低酸素条件下で、右心室最大血圧の上昇および右心室肥大の増大に発展し（Ｓｔｅｉｎｅｒ，Ｍ．Ｋ．ｅｔ ａｌ Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．（２００９）１０４（２）２３６−２４４およびこの中の参考文献）、体外から投与されたＩＬ−６は、慢性酸素欠乏に曝したマウスにおいて、肺高血圧症の発症を悪化させる（Ｇｏｌｅｍｂｅｓｋｉ，Ｓ．Ｍ．ｅｔ ａｌ Ｃｈｅｓｔ（２００５）１２８（６追加）５７２Ｓ−５７３Ｓ）。
さらに、安定ＣＯＰＤ患者は、健常な対照を超えるＩＬ−６の血清レベルの増加を有することが観察されている（Ｙａｎｂａｅｖａ，Ｄ．Ｇ．ｅｔ ａｌ ＢＭＣ Ｍｅｄ Ｇｅｎｅｔ（２００９）１０，２３、Ｓａｖａｌｅ，Ｌ．ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（２００９）１７９（７），５６６−５７１、Ｅｉｃｋｈｏｆｆ，Ｐ．ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．（２００８）１７８（１２）１２１１−１２１８）。ＩＬ−６レベルの上昇は、ＣＯＰＤ患者において、肺機能障害と関連している（Ｒ．Ｅ．ｅｔ ａｌ Ｃｈｅｓｔ（２００８）１３３（１）１９−２５、Ｔｈｏｒｌｅｉｆｅｓｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．ｅｔ ａｌ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．（２００９）１０３（１０）１５４８−１５５３）。また、幾つかの研究は、再燃への変換で測定されたＩＬ−６レベルまたは安定ＣＯＰＤ患者において、測定されたＩＬ−６レベルと比較した場合、ＣＯＰＤの再燃の発病で、痰および／または血清中のＩＬ−６レベルの上昇が報告されている（Ｖａｌｉｐｏｕｒ，Ａ．ｅｔ ａｌ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ（２００８）１１５（７），２２５−２３２、Ｇｒｏｅｎｅｗｅｇｅｎ，Ｋ．Ｈ．ｅｔ ａｌ Ｒｅｓｐｉｒ．Ｍｅｄ．（２００７）１０１（１１）２４０９−２４１５、Ｐｅｒｅｒａ，Ｗ．Ｒ．ｅｔ ａｌ Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．（２００７）２９（３），５２７−５３４）。また、ＩＬ−６レベルの上昇は、さらに高頻度の悪化因子と関連している（Ｂｈｏｗｍｉｋ，Ａ．ｅｔ ａｌ Ｔｈｏｒａｘ（２０００）５５（２）１１４−１２０）。抗ＩＬ−６抗体を有するマウスまたはＩＬ−６の欠損したマウスの処置は、ある動物モデルにおいて、肺炎症、例えば、オゾン誘発性肺炎症およびブレオマイシン誘発性肺炎症および線維症の軽減を示す（Ｓａｉｔｏ，Ｆ．ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（２００８）３８（５）５６６−５７１、Ｌａｎｇ，Ｊ．Ｅ．ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００８）２９４（５）Ｌ１０１３−Ｌ１０２０、Ｊｏｈｎｓｔｏｎ，Ｒ．Ａ．ｅｔ ａｌ Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｌｕｎｇ Ｃｅｌｌ Ｍｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（２００５）２８８（２）Ｌ３９０−Ｌ３９７）。また、高いＩＬ−６レベルは、ＣＯＰＤ、例えば、肺高血圧症のある併存障害と関連している（Ｃｈａｏｕａｔ，Ａ．ｅｔ ａｌ Ｃｈｅｓｔ（２００９）１３６（３）６７８−６８７、Ｅｄｄａｈｉｂｉ，Ｓ．ｅｔ ａｌ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｈｏｒａｃｉｃ Ｓｏｃｉｅｔｙ（２００６）３（６），４７５−４７６）。
ある他の障害におけるＩＬ−６の関与の証拠は、十分に理解される。本明細書およびＰＣＴ公開ＷＯ第２００８／０６５３７８号に示されるデータは、さらに、本発明の結合性メンバーが、予防的処置および障害の重症度の軽減を含む、このような障害を治療するために使用することができることを示す。したがって、本発明は、本明細書中に言及される障害のいずれかの少なくとも１つの症状を治療する、または重症度を軽減する方法を提供し、これには、上記の障害のいずれかの少なくとも１つの症状の重症度が軽減されるように、有効量の本発明の１つ以上の結合性メンバーを単独で、または当該技術分野において公知の、または本明細書中に記載の別の適切な医薬と共に組み合わせた治療レジメンにおいて、治療を必要とする患者に投与することを含む。
ゆえに、本発明の結合性メンバーは、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒａの発現および／または活性、特に、異常な発現／活性を伴って生じる疾患または障害の治療において、治療剤として有用である。治療の方法は、有効量の本発明の結合性メンバーを、治療を必要とする患者に投与することを含み得、これにより、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒａの異常な発現／活性が軽減される。治療の方法は、（ｉ）例えば、上記の診断方法を用いて、異常なＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａレベルまたは活性を示す患者を特定することと、（ｉｉ）有効量の本発明の結合性メンバーを、治療を必要とする患者に投与することと、を含み得、これにより、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒａの異常な発現／活性が軽減される。本発明による有効量とは、治療すべき特定の疾患または障害の少なくとも１つの症状の重症度を軽減または低減するために、ＩＬ−６および／またはＩＬ−６Ｒａの異常な発現および／または活性を軽減するが、必ずしもこの疾患または障害を治癒するとは限らない、量である。
本発明はまた、ＩＬ−６の少なくとも１つの作用を拮抗する方法を提供し、これには、該ＩＬ−６の少なくとも１つの作用が拮抗するように、有効量の本発明の１つ以上の結合性メンバーと接触させること、または投与することを含む。本発明の方法によって拮抗され得るＩＬ−６の作用には、ｇｐ１３０へのＩＬ−６結合、およびこの結合の結果として生じる下流作用が含まれる。
したがって、本発明のさらなる態様は、提供される結合性メンバー、このような結合性メンバーを含む薬学的組成物を投与すること、ならびに、投与のために医薬の製造において、例えば、薬学的に許容される賦形剤と共に結合性メンバーを製剤化することを含む、医薬または薬学的組成物を作製する方法において、このような結合性メンバーを使用することを含む、治療の方法を提供する。薬学的に許容される賦形剤は、二次反応を引き起こすことなく、薬学的組成物に入る化合物または化合物の組み合わせであり得、これらは、例えば、活性化合物の投与を促進する、体内でのその寿命および／またはその有効性の増加、溶液中のその溶解度の増加、またはその保存を改善させる。これらの薬学的に許容されるビヒクルは、選択される活性化合物の性質および投与様式の機能として、当業者には周知であり、適用される。
本発明の結合性メンバーは、通常、薬学的組成物の形態で投与され、これには、結合性メンバーに加えて少なくとも１つの成分を含み得る。ゆえに、本発明による薬学的組成物、および本発明に従って使用する薬学的組成物は、活性成分に加えて、薬学的に許容される賦形剤、担体、緩衝剤、安定剤、または当業者に周知の他の材料を含み得る。このような材料は、非毒性であり、活性成分の有効性を妨げてはいけない。担体または他の材料の正確な性質は、以下に論じられるように、経口、吸入、気管内、局所、小胞内、または注射によるものであり得る、投与の経路に依存する。
本発明は、本発明の抗体を含む、滅菌された安定な薬学的製剤に関する。
本発明は、本発明の抗体を安定化する方法を提供する。
本発明は、さらに、本発明の抗体を含む、滅菌された安定な製剤を作製するプロセスに関する。
本明細書中に記載の本発明の抗体の全ての製剤は、集合的に、「本発明の製剤」、「本発明の液体製剤」、「本発明の高濃度の安定な液体製剤」、「本発明の抗体液体製剤」、「本発明の再構成された液体製剤」、または「本発明の抗体製剤」として称される。
本明細書中で使用される、「薬学的に許容される」という語句は、連邦政府または州政府の監督官庁によって承認されているか、または米国薬局方、欧州薬局方、もしくは、動物での使用、およびさらに特にヒトでの使用に関する他の一般に認識されている薬局方に列挙されていることを意味する。
本発明の抗体（その抗体断片を含む）を含む液体製剤の文脈において、本明細書中で使用される、「安定性」および「安定な」という用語は、所与の製造、調製、輸送、および保存条件下での、製剤中の抗体（その抗体断片を含む）に対する、または凝集、分解、または断片化に対する抵抗を指す。本発明の「安定な」製剤は、所与の製造、調製、輸送、および保存条件下での、生物学的活性を保持する。該抗体（その抗体断片を含む）の安定性は、参照製剤と比較して、ＨＰＳＥＣ、逆相クロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光（Ｆｏｕｒｉｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素アンフォールディング技術（ｕｒｅａ ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、固有トリプトファン蛍光（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳ結合技術によって測定される凝集、分解、または断片化の程度によって評価することができる。例えば、参照製剤は、ヒスチジン、ｐＨ６．０〜６．５中の１０ｍｇ／ｍＬの抗体（その抗体断片を含む）、任意に、１つ以上の賦形剤からなる−７０℃で凍結された参照標準であり得、この参照製剤は、通常、ＨＰＳＥＣにより単独のモノマーピーク（例えば、≧９７％面積）を示す。抗体（その抗体断片を含む）を含む製剤の全般的安定性は、例えば、単離された抗原分子を用いて、ＥＬＩＳＡおよびラジオイムノアッセイを含む、種々の免疫学的アッセイにより評価することができる。
本明細書中で使用される、「低レベルから検出不可能なレベルの凝集」という語句は、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）または静的光散乱（ＳＬＳ）技術によって測定された場合、タンパク質の重量で、約５％以下、約４％以下、約３％以下、約２％以下、約１％以下、約０．５％以下の凝集しか含有しない試料を指す。
本明細書中で使用される、「低レベルから検出不可能なレベルの断片化」という語句は、例えば、ＨＰＳＥＣ、または逆相クロマトグラフィーによって測定される場合には、単一ピークにて、または、還元キャピラリーゲル電気泳動（ｒＣＧＥ）によって測定される場合には、２つのピーク（例えば、重鎖および軽鎖）（またはサブユニットが存在する場合は多くのピーク）にて、総タンパク質の約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９８％、もしくは約９９％またはそれ以上を含有し、非分解抗体またはその非分解断片を示し、かつ各ピーク中に総タンパク質の約５％超、約４％超、約３％超、約２％超、約１％超、または約０．５％超を有する他の単一ピークを含有しない試料を指す。本明細書中で使用される、「還元キャピラリーゲル電気泳動」という語句は、抗体のジスルフィド結合を還元するのに十分な還元条件下でのキャピラリーゲル電気泳動を指す。
本発明は、本発明の抗体の安定な、高濃度の製剤に関する。一実施形態において、本発明の製剤は、液体製剤である。別の実施形態において、本発明の製剤は、凍結乾燥製剤である。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、再構成された液体製剤である。
一実施形態において、本発明の製剤は、安定な液体製剤である。一実施形態において、本発明の液体製剤は、水性製剤である。特定の実施形態において、本発明の液体製剤は、水性製剤であり、この水性担体は、蒸留水である。
一実施形態において、本発明の製剤は、滅菌されている。
一実施形態において、本発明の製剤は、均質である。
一実施形態において、本発明の製剤は、等張性である。
本発明は、対象となる単一抗体（その抗体断片を含む）、例えば、ＩＬ−６に特異的に結合する抗体を含む安定な液体製剤を包含する。本発明はまた、対象となる２つ以上の抗体（その抗体断片を含む）、例えば、ＩＬ−６ポリペプチドに特異的に結合する抗体を含む安定な液体製剤も包含する。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約９０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２５ｍｇ／ｍＬの範囲、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約１５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約７５ｍｇ／ｍＬ、または約２５ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約９０ｍｇ／ｍＬ〜約１１０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬ〜約２１０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。さらなる実施形態において、本明細書中に記載の製剤は、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１１０ｍｇ／ｍＬ、約１２０ｍｇ／ｍＬ、約１３０ｍｇ／ｍＬ、約１４０ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１６０ｍｇ／ｍＬ、約１７０ｍｇ／ｍＬ、約１８０ｍｇ／ｍＬ、約１９０ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１３０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１１０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１３０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１４０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１６０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１７０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも１９０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１７５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも２００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、１ｍｇ／ｍＬ〜２５ｍｇ／ｍＬの範囲、１ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、２５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、５０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、７５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、１００ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、１２５ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、１５０ｍｇ／ｍＬ〜２００ｍｇ／ｍＬの範囲、２５ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、５０ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、７５ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、１００ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、１２５ｍｇ／ｍＬ〜１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、２５ｍｇ／ｍＬ〜１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、５０ｍｇ／ｍＬ〜１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、７５ｍｇ／ｍＬ〜１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、１００ｍｇ／ｍＬ〜１２５ｍｇ／ｍＬの範囲、２５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの範囲、５０ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの範囲、７５ｍｇ／ｍＬ〜１００ｍｇ／ｍＬの範囲、２５ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬの範囲、５０ｍｇ／ｍＬ〜７５ｍｇ／ｍＬの範囲、または２５ｍｇ／ｍＬ〜５０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、９０ｍｇ／ｍＬ〜１１０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１００ｍｇ／ｍＬ〜２１０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。さらなる実施形態において、本明細書中に記載の製剤は、２０ｍｇ／ｍＬ、３０ｍｇ／ｍＬ、４０ｍｇ／ｍＬ、５０ｍｇ／ｍＬ、６０ｍｇ／ｍＬ、７０ｍｇ／ｍＬ、８０ｍｇ／ｍＬ、９０ｍｇ／ｍＬ、１００ｍｇ／ｍＬ、１１０ｍｇ／ｍＬ、１２０ｍｇ／ｍＬ、１３０ｍｇ／ｍＬ、１４０ｍｇ／ｍＬ、１５０ｍｇ／ｍＬ、１６０ｍｇ／ｍＬ、１７０ｍｇ／ｍＬ、１８０ｍｇ／ｍＬ、１９０ｍｇ／ｍＬ、２００ｍｇ／ｍＬ、２５０ｍｇ／ｍＬ、または３００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１２５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１５０ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１７５ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、２００ｍｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
任意に、本発明の製剤は、一般的な賦形剤、ならびに／または緩衝剤、サッカライド、塩、および界面活性剤等の添加剤をさらに含み得る。さらに、または代替として、本発明の製剤は、一般的な賦形剤、ならびに／または可溶化剤、希釈剤、結合剤、安定剤、塩、親油性溶媒、アミノ酸、キレート剤、保存剤等の添加剤をさらに含み得る。
ある実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。他の実施形態において、サッカライド賦形剤は、トレハロース、スクロース、マンニトール、マルトース、およびラフィノースからなる群から選択される。さらに他の実施形態において、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート８０、およびＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ６８からなる群から選択される。なお他の実施形態において、この塩は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＭｇＣｌ２、およびＣａＣｌ２からなる群から選択される。
任意に、本発明の製剤は、好適な賦形剤、ポリオール、可溶化剤、希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、キレート剤、保存剤等であるが、これらに限定されない、他の一般的な補助成分をさらに含み得る。
本発明の製剤は、改善されたｐＨ制御を提供するために緩衝剤またはｐＨ調整剤を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、約３．０〜約９．０の範囲、約４．０〜約８．０の範囲、約５．０〜約８．０の範囲、約５．０〜約７．０の範囲、約５．０〜約６．５の範囲、約５．５〜約８．０の範囲、約５．５〜約７．０、または約５．５〜約６．５の範囲のｐＨを有する。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、約３．０、約３．５、約４．０、約４．５、約５．０、約５．１、約５．２、約５．３、約５．４、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、約７．０、約７．５、約８．０、約８．５、または約９．０のｐＨを有する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約６．０のｐＨを有する。
本発明の製剤は、改善されたｐＨ制御を提供するために緩衝剤またはｐＨ調整剤を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、３．０〜９．０の範囲、４．０〜８．０の範囲、５．０〜８．０の範囲、５．０〜７．０の範囲、５．０〜６．５の範囲、５．５〜８．０の範囲、５．５〜７．０の範囲、または５．５〜６．５の範囲のｐＨを有する。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、７．５、８．０、８．５、または９．０のｐＨを有する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、６．０のｐＨを有する。当業者により、製剤のｐＨは、一般には、製剤に使用されるべき特定の抗体（その抗体断片を含む）の等電点と等しいべきではないことが理解されよう。
典型的には、緩衝剤は、有機または無機の酸または塩基から調製された塩である。代表的な緩衝剤としては、クエン酸、アスコルビン酸、グルコン酸、炭酸、酒石酸、コハク酸、酢酸、またはフタル酸の塩等の有機酸の塩；トリス、トロメタミン塩酸塩、またはリン酸緩衝液が挙げられるが、これらに限定されない。加えて、アミノ酸成分は、緩衝化能において機能することもできる。本発明の製剤中で緩衝剤として利用され得る代表的なアミノ酸成分としては、グリシンおよびヒスチジンが挙げられるが、これらに限定されない。ある実施形態において、緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。特定の実施形態において、緩衝剤はヒスチジンである。別の特定の実施形態において、緩衝剤はクエン酸塩である。緩衝剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％であるべきである。ヒスチジンの文脈において、本明細書中で使用される「純度」という用語は、例えば、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，１３ｔｈ ｅｄ．，Ｏ’Ｎｅｉｌ ｅｔ ａｌ．ｅｄ．（Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，２００１）に記載されるように、当該技術分野で理解されるヒスチジンの化学的純度を指す。
緩衝剤は、典型的には、所望のイオン強度および必要とされる緩衝能に応じて、約１ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲または該範囲内の任意の範囲もしくは値の濃度で使用される。非経口製剤中で用いられる従来の緩衝剤の通常の濃度は、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｖｏｌｕｍｅ １，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｃｈａｐｔｅｒ ５，ｐ．１９４，Ｄｅ Ｌｕｃａ ａｎｄ Ｂｏｙｌａｎ，“Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｌｌ Ｖｏｌｕｍｅ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｓ”，Ｔａｂｌｅ５：Ｃｏｍｍｏｎｌｙ ｕｓｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅｓ ｉｎ Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓに見出すことができる。一実施形態において、緩衝剤は、約１ｍＭ、または約５ｍＭ、または約１０ｍＭ、または約１５ｍＭ、または約２０ｍＭ、または約２５ｍＭ、または約３０ｍＭ、または約３５ｍＭ、または約４０ｍＭ、または約４５ｍＭ、または約５０ｍＭ、または約６０ｍＭ、または約７０ｍＭ、または約８０ｍＭ、または約９０ｍＭ、または約１００ｍＭの濃度である。一実施形態において、緩衝剤は、１ｍＭ、または５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または６０ｍＭ、または７０ｍＭ、または８０ｍＭ、または９０ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。特定の実施形態において、緩衝剤は、約５ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲の濃度である。別の特定の実施形態において、緩衝剤は、５ｍＭ〜２０ｍＭの範囲の濃度である。
さらなる実施形態において、緩衝剤は、１ｍＭ、または５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または６０ｍＭ、または７０ｍＭ、または８０ｍＭ、または９０ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。一実施形態において、緩衝剤は、１ｍＭ、または５ｍＭ、または１０ｍＭ、または１５ｍＭ、または２０ｍＭ、または２５ｍＭ、または３０ｍＭ、または３５ｍＭ、または４０ｍＭ、または４５ｍＭ、または５０ｍＭ、または６０ｍＭ、または７０ｍＭ、または８０ｍＭ、または９０ｍＭ、または１００ｍＭの濃度である。特定の実施形態において、緩衝剤は、５ｍＭ〜５０ｍＭの範囲の濃度である。別の特定の実施形態において、緩衝剤は、５ｍＭ〜２０ｍＭの範囲の濃度である。
ある実施形態において、本発明の製剤は、緩衝剤を含む。一実施形態において、該緩衝剤は、ヒスチジン、クエン酸塩、リン酸塩、グリシン、および酢酸塩からなる群から選択される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、緩衝剤としてヒスチジンを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１ｍＭ、少なくとも約５ｍＭ、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２０ｍＭ、少なくとも約３０ｍＭ、少なくとも約４０ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、または少なくとも約２００ｍＭのヒスチジンを含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、約１ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約１ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲、約１ｍＭ〜約７５ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約７５ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲、約２０ｍＭ〜約７５ｍＭの範囲、約２０ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲、約２０ｍＭ〜約４０ｍＭの範囲、または約２０ｍＭ〜約３０ｍＭの範囲のヒスチジンを含む。本発明のさらなる実施形態において、約１ｍＭ、約５ｍＭ、約１０ｍＭ、約２０ｍＭ、約２５ｍＭ、約３０ｍＭ、約３５ｍＭ、約４０ｍＭ、約４５ｍＭ、約５０ｍＭ、約６０ｍＭ、約７０ｍＭ、約８０ｍＭ、約９０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、または約２００ｍＭのヒスチジンを含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１０ｍＭのヒスチジンを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１ｍＭ、少なくとも５ｍＭ、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２０ｍＭ、少なくとも３０ｍＭ、少なくとも４０ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも７５ｍＭ、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、または少なくとも２００ｍＭのヒスチジンを含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、１ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、１ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、１ｍＭ〜１００ｍＭの範囲、１ｍＭ〜７５ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜１００ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜７５ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜５０ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜４０ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜３０ｍＭの範囲、２０ｍＭ〜７５ｍＭの範囲、２０ｍＭ〜５０ｍＭの範囲、２０ｍＭ〜４０ｍＭの範囲、または２０ｍＭ〜３０ｍＭの範囲のヒスチジンを含む。本発明のさらなる実施形態において、１ｍＭ、５ｍＭ、１０ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、６０ｍＭ、７０ｍＭ、８０ｍＭ、９０ｍＭ、１００ｍＭ、１５０ｍＭ、または２００ｍＭのヒスチジンを含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、１０ｍＭのヒスチジンを含む。
ある実施形態において、本発明の製剤は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、増粘剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、安定剤、増量剤、可溶化剤等として作用し得る。炭水化物賦形剤は、一般に、重量または容量単位で約１％〜約９９％の範囲で存在する。一実施形態において、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約２０％の範囲で存在する。別の実施形態において、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約１５％の範囲で存在する。特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約５％の範囲、または約１％〜約２０％の範囲、または約５％〜約１５％の範囲、または約８％〜約１０％の範囲、または約１０％〜約１５％の範囲、または約１５％〜約２０％の範囲で存在する。別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜２０％の範囲、または５％〜１５％の範囲、または８％〜１０％の範囲、または１０％〜１５％の範囲、または１５％〜２０％の範囲で存在する。なお別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、約０．１％〜約５％の範囲で存在する。なお別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、約５％〜約１０％の範囲で存在する。さらに別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、約１５％〜約２０％の範囲で存在する。さらに他の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、１％、または１．５％、または２％、または２．５％、または３％、または４％、または５％、または１０％、または１５％、または２０％で存在する。
ある実施形態において、本発明の製剤は、炭水化物賦形剤を含む。炭水化物賦形剤は、例えば、増粘剤（ｖｉｓｃｏｓｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ａｇｅｎｔｓ）、安定剤、増量剤、可溶化剤等として作用し得る。炭水化物賦形剤は、一般に、重量または容量単位で１％〜９９％の範囲で存在する。一実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜２０％の範囲で存在する。別の実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜１５％の範囲で存在する。特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜５％の範囲、または１％〜２０％の範囲、または５％〜１５％の範囲、または８％〜１０％の範囲、または１０％〜１５％の範囲、または１５％〜２０％の範囲で存在する。別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜２０％の範囲、または５％〜１５％の範囲、または８％〜１０％の範囲、または１０％〜１５％の範囲、または１５％〜２０％の範囲で存在する。なお別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、０．１％〜５％の範囲で存在する。なお別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、５％〜１０％の範囲で存在する。さらに別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、１５％〜２０％の範囲で存在する。さらに他の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、１％、または１．５％、または２％、または２．５％、または３％、または４％、または５％、または１０％、または１５％、または２０％で存在する。
本発明の製剤中で用いるのに好適な炭水化物賦形剤には、例えば、フルクトース、マルトース、ガラクトース、グルコース、Ｄ−マンノース、ソルボース等の単糖類；例えば、ラクトース、ショ糖、トレハロース、セロビオース等の二糖類；例えば、ラフィノース、メレジトース、マルトデキストリン、デキストラン、デンプン等の多糖類；および例えば、マンニトール、キシリトール、マルチトール、ラクチトール、キシリトールソルビトール（グルシトール）等のアルジトールが含まれる。一実施形態において、本発明で用いる炭水化物賦形剤は、スクロース、トレハロース、ラクトース、マンニトール、およびラフィノースからなる群から選択される。特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、トレハロースである。別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、マンニトールである。さらに別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、スクロースである。なお別の特定の実施形態において、炭水化物賦形剤は、ラフィノースである。炭水化物賦形剤の純度は、少なくとも９８％、または少なくとも９９％、または少なくとも９９．５％であるべきである。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１％、少なくとも約２％、少なくとも約４％、少なくとも約８％、少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、または少なくとも約４０％のトレハロースを含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、約１％〜約４０％の範囲、約１％〜約３０％の範囲、約１％〜約２０％の範囲、約２％〜約４０％の範囲、約２％〜約３０％の範囲、約２％〜約２０％の範囲、約４％〜約４０％の範囲、約４％〜約３０％の範囲、または約４％〜約２０％の範囲のトレハロースを含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、約１％、約２％、約４％、約８％、約２０％、約３０％、または約４０％のトレハロースを含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約４％のトレハロースを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも４％、少なくとも８％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、または少なくとも４０％のトレハロースを含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、１％〜４０％の範囲、１％〜３０％の範囲、１％〜２０％の範囲、２％〜４０％の範囲、２％〜３０％の範囲、２％〜２０％の範囲、４％〜４０％の範囲、４％〜３０％の範囲、または４％〜２０％の範囲のトレハロースを含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、１％、２％、４％、８％、２０％、３０％、または４０％のトレハロースを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、賦形剤を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、糖、塩、界面活性剤、アミノ酸、ポリオール、キレート剤、乳化剤、および保存剤からなる群から選択される少なくとも１つの賦形剤を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、塩を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、ＮａＣｌ、ＫＣｌ、ＣａＣｌ２、およびＭｇＣｌ２からなる群から選択される塩を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、ＮａＣｌを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１０ｍＭ、少なくとも約２５ｍＭ、少なくとも約５０ｍＭ、少なくとも約７５ｍＭ、少なくとも約８０ｍＭ、少なくとも約１００ｍＭ、少なくとも約１２５ｍＭ、少なくとも約１５０ｍＭ、少なくとも約１７５ｍＭ、少なくとも約２００ｍＭ、または少なくとも約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態において、本明細書中に記載の製剤は、約１０ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約１７５ｍＭの範囲、約１０ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約１７５ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約７５ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約７５ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約７５ｍＭ〜約１７５ｍＭの範囲、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、または約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲の塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、約１０ｍＭ、約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約７５ｍＭ、約８０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１２５ｍＭ、約１５０ｍＭ、約１７５ｍＭ、約２００ｍＭ、または約３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも１０ｍＭ、少なくとも２５ｍＭ、少なくとも５０ｍＭ、少なくとも７５ｍＭ、少なくとも８０ｍＭ、少なくとも１００ｍＭ、少なくとも１２５ｍＭ、少なくとも１５０ｍＭ、少なくとも１７５ｍＭ、少なくとも２００ｍＭ、または少なくとも３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態において、本明細書中に記載の製剤は、１０ｍＭ〜３００ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜１７５ｍＭの範囲、１０ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、２５ｍＭ〜３００ｍＭの範囲、２５ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、２５ｍＭ〜１７５ｍＭの範囲、２５ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、５０ｍＭ〜３００ｍＭの範囲、５０ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、５０ｍＭ〜１７５ｍＭの範囲、５０ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、７５ｍＭ〜３００ｍＭの範囲、７５ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、７５ｍＭ〜１７５ｍＭの範囲、７５ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲、１００ｍＭ〜３００ｍＭの範囲、１００ｍＭ〜２００ｍＭの範囲、１００ｍＭ〜１７５ｍＭの範囲、または１００ｍＭ〜１５０ｍＭの範囲の塩化ナトリウムを含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、１０ｍＭ、２５ｍＭ、５０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、１００ｍＭ、１２５ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ、または３００ｍＭの塩化ナトリウムを含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、アミノ酸を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、アミノ酸塩を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、リシン、アルギニン、およびヒスチジンからなる群から選択されるアミノ酸を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約２５ｍＭのアミノ酸、少なくとも約５０ｍＭのアミノ酸、少なくとも約１００ｍＭのアミノ酸、少なくとも約１５０ｍＭのアミノ酸、少なくとも約２００ｍＭのアミノ酸、少なくとも約２５０ｍＭのアミノ酸、少なくとも約３００ｍＭのアミノ酸、少なくとも約３５０ｍＭのアミノ酸、または少なくとも約４００ｍＭのアミノ酸を含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、約２５ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約３５０ｍＭの範囲、約２５ｍＭ〜約４００ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約３５０ｍＭの範囲、約５０ｍＭ〜約４００ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、約１００ｍＭ〜約４００ｍＭの範囲、約１５０ｍＭ〜約２５０ｍＭの範囲、約１５０ｍＭ〜約３００ｍＭの範囲、または約１５０ｍＭ〜約４００ｍＭの範囲のアミノ酸を含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、約２５ｍＭ、約５０ｍＭ、約１００ｍＭ、約１５０ｍＭ、約２００ｍＭ、約２５０ｍＭ、約３００ｍＭ、約３５０ｍＭ、または約４００ｍＭのアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２５ｍＭのアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約５０ｍＭのアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約７５ｍＭのアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約１００ｍＭのアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２００ｍＭのアミノ酸を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、トレハロースおよびアミノ酸を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、約０．１、約０．５、約０．７５、約１、約５、約１０、約２０、約３０、約４０、約５０、約６０、約７０、約８０、約９０、約１００、約２００、または約３００のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、約１．５、約１．７、約１．８、約１．９、約２、約２．１、約２．２、約２．３、約２．４、約２．５、約２．６、約２．７、約２．８、約２．９、約３、約３．１、約３．２、約３．３、約３．４、約３．５、または約４のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．１のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．２のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．４のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．５のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．６のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約２．７のモル比のトレハロースおよびアミノ酸を含む。
本発明の製剤は、界面活性剤をさらに含み得る。本明細書で使用される「界面活性剤」という用語は、両親媒性構造を有する有機物質を指し、すなわち、それらは、反対の溶解度傾向の基、典型的に油溶性炭化水素鎖および水溶性イオン基からなる。界面活性剤は、界面活性部分の電荷に応じて、アニオン性、カチオン性、および非イオン性界面活性剤に分類することができる。界面活性剤は、大抵、生物学的物質の種々の薬学的組成物および調製物のための湿潤剤、乳化剤、可溶化剤、および分散剤として使用される。薬学的に許容される界面活性剤、ポリソルベート（例えば、ポリソルベート２０または８０）；ポリオキサマー（ｐｏｌｙｏｘａｍｅｒ）（例えば、ポロキサマー１８８）；Ｔｒｉｔｏｎ；オクチルグリコシドナトリウム；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−、またはステアリル−スルホベタイン；ラウリル−、ミリスチル−、リノレイル−またはステアリル−サルコシン；リノレイル−、ミリスチル−、またはセチル−ベタイン；ラウロアミドプロピル（ｌａｕｒｏａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−、コカミドプロピル（ｃｏｃａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−、リノレアミドプロピル（ｌｉｎｏｌｅａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−、ミリスタミドプロピル（ｍｙｒｉｓｔａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−、パルミドプロピル（ｐａｌｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−、またはイソステアラミドプロピル（ｉｓｏｓｔｅａｒａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）−ベタイン（例えば、ラウロアミドプロピル）；ミリスタミドプロピル−、パルミドプロピル−、またはイソステアラミドプロピル−ジメチルアミン；ナトリウムメチルココイル−、またはジナトリウムメチルオレイル−タウラート；およびＭＯＮＡＱＵＡ（商標）シリーズ（Ｍｏｎａ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｐａｔｅｒｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ポリエチルグリコール、ポリプロピルグリコール、ならびにエチレンおよびプロピレングリコールのコポリマー（例えば、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ，ＰＦ６８等）を、任意に、本発明の製剤に加えて、凝集を減少させることができる。界面活性剤は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して、製剤を投与する場合に特に有用である。薬学的に許容される界面活性剤が存在すると、タンパク質が凝集する性向が緩和される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約０．００１％〜約１％、または約０．００１％〜約０．１％、または約０．０１％〜約０．１％の範囲の濃度のポリソルベートを含む。他の特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度のポリソルベートを含む。別の特定の実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．００１％〜１％、または０．００１％〜０．１％、または０．０１％〜０．１％の範囲の濃度のポリソルベートを含む。他の特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．００１％、または０．００２％、または０．００３％、または０．００４％、または０．００５％、または０．００６％、または０．００７％、または０．００８％、または０．００９％、または０．０１％、または０．０１５％、または０．０２％の濃度のポリソルベートを含む。別の特定の実施形態において、ポリソルベートは、ポリソルベート８０である。
一実施形態において、本発明の製剤は、界面活性剤を含む。一実施形態において、本発明の製剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、またはポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、ポリソルベート８０を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約０．００１％、少なくとも約０．００２％、少なくとも約０．００５％、少なくとも約０．０１％、少なくとも約０．０２％、少なくとも約０．０５％、少なくとも約０．１％、少なくとも約０．２％、または少なくとも約０．５％のポリソルベート８０を含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、約０．００１％〜約０．５％の範囲、約０．００１％〜約０．２％の範囲、約０．００１％〜約０．１％の範囲、約０．００１％〜約０．０５％の範囲、約０．００２％〜約０．５％の範囲、約０．００２％〜約０．２％の範囲、約０．００２％〜約０．１％の範囲、約０．００２％〜約０．０５％の範囲、約０．００５％〜約０．５％の範囲、約０．００５％〜約０．２％の範囲、約０．００５％〜約０．１％の範囲、約０．００５％〜約０．０５％の範囲、約０．０１％〜約０．５％の範囲、約０．０１％〜約０．２％の範囲、約０．０１％〜約０．１％、または約０．０１％〜約０．０５％の範囲のポリソルベート８０を含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、約０．００１％、約０．００２％、約０．００５％、約０．０１％、約０．０２％、約０．０５％、約０．１％、約０．２％、および約０．５％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約０．０２％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約０．０４％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、約０．０５％のポリソルベート８０を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも０．００１％、少なくとも０．００２％、少なくとも０．００５％、少なくとも０．０１％、少なくとも０．０２％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、または少なくとも０．５％のポリソルベート８０を含む。別の実施形態において、本発明の製剤は、０．００１％〜０．５％の範囲、０．００１％〜０．２％の範囲、０．００１％〜０．１％の範囲、０．００１％〜０．０５％の範囲、０．００２％〜０．５％の範囲、０．００２％〜０．２％の範囲、０．００２％〜０．１％の範囲、０．００２％〜０．０５％の範囲、０．００５％〜０．５％の範囲、０．００５％〜０．２％の範囲、０．００５％〜０．１％の範囲、０．００５％〜０．０５％の範囲、０．０１％〜０．５％の範囲、０．０１％〜０．２％の範囲、０．０１％〜０．１％の範囲、または０．０１％〜０．０５％の範囲のポリソルベート８０を含む。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、０．００１％、０．００２％、０．００５％、０．０１％、０．０２％、０．０５％、０．１％、０．２％、および０．５％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．０２％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．０４％のポリソルベート８０を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、０．０５％のポリソルベート８０を含む。
任意に、本発明の製剤は、他の一般的な賦形剤、および／または希釈剤、結合剤、安定剤、親油性溶媒、保存剤、アジュバント等が挙げられるが、これらに限定されない、添加物をさらに含み得る。薬学的に許容される賦形剤および／または添加物は、本発明の製剤中で使用され得る。一般に使用される賦形剤／添加物、例えば、薬学的に許容されるキレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡまたはＥＧＴＡに限定されない）は、任意に、本発明の製剤に加えて、凝集を減少させることができる。これらの添加物は、ポンプまたはプラスチック容器を使用して、製剤を投与する場合に、特に有用である。
保存剤、例えば、フェノール、ｍ−クレゾール、ｐ−クレゾール、ｏ−クレゾール、クロロクレゾール、ベンジルアルコール、亜硝酸フェニル水銀、フェノキシエタノール、ホルムアルデヒド、クロロブタノール、塩化マグネシウム（例えば、六水和物に限定されない）、アルキルパラベン（メチル、エチル、プロピル、ブチル等）、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、デヒドロ酢酸ナトリウムおよびチメロサール、またはその混合物は、任意に、約０．００１％〜約５％の範囲、または該範囲内の任意の範囲または値の濃度のような任意の好適な濃度で本発明の製剤に加えることができる。本発明の製剤中で使用される保存剤の濃度は、微生物効果（ａｎ ｍｉｃｒｏｂｉａｌ ｅｆｆｅｃｔ）を得るために十分な濃度である。このような濃度は、選択された保存剤に依存し、当業者によって容易に決定される。
本発明の製剤中で利用され得る他の企図される賦形剤／添加物には、例えば、香味物質、抗菌剤、甘味料、酸化防止剤、帯電防止剤、リン脂質または脂肪酸等の脂質、コレステロール等のステロイド、血清アルブミン（ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、組換えヒトアルブミン（ｒＨＡ））等のタンパク質賦形剤、ゼラチン、カゼイン、ナトリウム等の塩形成対イオンが含まれる。本発明の製剤での使用に好適なこれらの、および追加の公知の薬学的賦形剤および／または添加物は、当該技術分野において公知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：“Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）、および“Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ”，６０ｔｈ ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，Ｎ．Ｊ．（２００５）に列挙されている。当該技術分野において周知であるような、または本明細書中に記載の投与様式、Ｆｃ変異体タンパク質の溶解度、および／または安定性に好適な薬学的に許容される担体は、通常、選択することができる。
本発明の製剤は、ヒト血液と等張であり得ること、すなわち本発明の製剤は、ヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有することが当業者に理解されよう。このような等張製剤は、一般に、約２５０ｍＯＳｍ〜約３５０ｍＯＳｍの範囲の浸透圧を有する。等張性は、例えば、蒸気圧または製氷型浸透圧計を使用することによって測定することができる。製剤の張性は、張性調節因子（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）の使用によって調節される。「張性調節因子」は、製剤に加えて該製剤の等張性を提供することができる薬学的に許容される不活性物質である。本発明に好適な張性調節因子には、サッカライド、塩、およびアミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。
ある実施形態において、本発明の製剤は、約１００ｍＯＳｍ〜約１２００ｍＯＳｍの範囲、または約２００ｍＯＳｍ〜約１０００ｍＯＳｍの範囲、または約２００ｍＯＳｍ〜約８００ｍＯＳｍの範囲、または約２００ｍＯＳｍ〜約６００ｍＯＳｍの範囲、または約２５０ｍＯＳｍ〜約５００ｍＯＳｍの範囲、または約２５０ｍＯＳｍ〜約４００ｍＯＳｍの範囲、または約２５０ｍＯＳｍ〜約３５０ｍＯＳｍの範囲の浸透圧を有する。
ある実施形態において、本発明の製剤は、１００ｍＯＳｍ〜１２００ｍＯＳｍの範囲、または２００ｍＯＳｍ〜１０００ｍＯＳｍの範囲、または２００ｍＯＳｍ〜８００ｍＯＳｍの範囲、または２００ｍＯＳｍ〜６００ｍＯＳｍの範囲、または２５０ｍＯＳｍ〜５００ｍＯＳｍの範囲、または２５０ｍＯＳｍ〜４００ｍＯＳｍの範囲、または２５０ｍＯＳｍ〜３５０ｍＯＳｍの範囲の浸透圧を有する。
本発明の製剤の種々の成分のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせの濃度を調節して、最終製剤の所望の張性を達成する。例えば、抗体に対する炭水化物賦形剤のモル比は、当該技術分野において周知の方法に従って調節され得る（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号）。ある実施形態において、抗体に対する炭水化物賦形剤のモル比は、約１モルの抗体に対して約１００モル〜約１０００モルの炭水化物賦形剤、または約１モルの抗体に対して約２００モル〜約６０００モルの炭水化物賦形剤、または約１モルの抗体に対して約１００モル〜約５１０モルの炭水化物賦形剤、または約１モルの抗体に対して約１００モル〜約６００モルの炭水化物賦形剤であり得る。
本発明の製剤の種々の成分のうちのいずれか１つまたは任意の組み合わせの濃度を調節して、最終製剤の所望の張性を達成する。例えば、抗体に対する炭水化物賦形剤のモル比は、当該技術分野において周知の方法に従って調節され得る（例えば、米国特許第６，６８５，９４０号）。ある実施形態において、抗体に対する炭水化物賦形剤のモル比は、１モルの抗体に対して１００モル〜１０００モルの炭水化物賦形剤、または１モルの抗体に対して２００モル〜６０００モルの炭水化物賦形剤、または１モルの抗体に対して１００モル〜５１０モルの炭水化物賦形剤、または１モルの抗体に対して１００モル〜６００モルの炭水化物賦形剤であり得る。
最終製剤の所望の等張性はまた、製剤の塩濃度を調節することによっても達成され得る。薬学的に許容され、かつ張性調節因子として本発明に適している塩としては、塩化ナトリウム、コハク酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウム、硫酸マグネシウム、および塩化カルシウムが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の製剤は、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ２、および／またはＣａＣｌ２を含む。一実施形態において、ＮａＣｌの濃度は、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭの範囲である。別の実施形態において、ＭｇＣｌ２の濃度は、約１ｍＭ〜約１００ｍＭの範囲である。薬学的に許容され、かつ張性調節因子として本発明に適しているアミノ酸としては、プロリン、アラニン、Ｌ−アルギニン、アスパラギン、Ｌ−アスパラギン酸、グリシン、セリン、リジン、およびヒスチジンが挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態において、本発明の製剤は、内毒素および／または関連する発熱物質が実質的にないピロゲンを含まない製剤である。内毒素は、微生物の内側に閉じ込められている毒素を含み、微生物が分解し、または死滅した場合のみ放出される。発熱性物質はまた、細菌および他の微生物の外膜からの発熱を誘発する、熱安定性の物質（糖タンパク質）を含む。これらの物質は両方とも、ヒトに投与した場合に、発熱、血圧低下、およびショックを引き起こし得る。潜在的に有害な効果があるので、少量の内毒素でも、静脈内投与する薬剤の薬物溶液から除去しなければならない。食品医薬品局（「ＦＤＡ」）は、静脈内への薬物適用に対して、１回１時間に１キログラム体重あたり１用量につき、５内毒素単位（ＥＵ）の上限を設定している（Ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎ，Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａｌ Ｆｏｒｕｍ ２６（１）：２２３（２０００））。１キログラム体重あたり数百または数千ミリグラムの量の治療用タンパク質を投与する場合、抗体の場合と同じであり得るように、痕跡量であっても有害かつ危険な内毒素は、除去しなければならない。ある特定の実施形態において、組成物における内毒素および発熱レベルは、１０ＥＵ／ｍｇ未満、または５ＥＵ／ｍｇ未満、または１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．０１ＥＵ／ｍｇ未満、または０．００１ＥＵ／ｍｇ未満である。
インビボで投与するために用いる場合は、本発明の製剤は、滅菌されていなければならない。本発明の製剤は、滅菌濾過、放射線療法等を含む、種々の滅菌方法によって滅菌され得る。一実施形態において、抗体製剤は、あらかじめ滅菌された０．２２ミクロンのフィルターを用いて濾過滅菌する。注射用の滅菌組成物は、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ＆ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ”，２１ｓｔ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ，（２００５）に記載の慣用の薬務に従って製剤化することができる。本明細書で開示されるような抗体を含む製剤は、通常、凍結乾燥形式または溶液中で保存される。抗体を含む滅菌組成物を、滅菌取り出し口を有する容器、例えば、製剤の回収を可能にするアダプター、例えば、皮下注射針によって穴をあけることができるストッパー等を有する静脈内用溶液バッグまたはバイアルに入れることが企図される。一実施形態において、本発明の組成物は、あらかじめ充填された注射器として提供される。
一実施形態において、本発明の製剤は、凍結乾燥製剤である。「凍結乾燥（ｌｙｏｐｈｉｌｉｚｅｄ）」または「フリーズドライ（ｆｒｅｅｚｅ−ｄｒｉｅｄ）」という用語は、凍結乾燥法等の乾燥手順に供した物質の状態を含み、水分の少なくとも５０％が除去されている。
「充填剤」という語句は、薬学的に許容され、かつリオケーキ（ｌｙｏ ｃａｋｅ）に容積を追加する化合物を含む。当業者に公知の充填剤には、例えば、デキストロース、リボース、フルクトース等の単糖を含む炭水化物、マンニトール、イノシトール、およびソルビトール等のアルコール糖、トレハロース、スクロース、およびラクトースを含む二糖類、デンプン、デキストラン、キトサン、ヒアルロン酸、タンパク質（例えば、ゼラチンおよび血清アルブミン）、グリコーゲン等の天然のポリマー、ならびに合成モノマーおよびポリマーが含まれる。
「リオプロテクタント（ｌｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔ）」は、対象となるタンパク質と混合された場合に、凍結乾燥およびその後の保存時のタンパク質の化学的および／または物理的不安定性を顕著に防止するか、または減少させる分子である。リオプロテクタントとしては、糖およびその対応する糖アルコール；グルタミン酸一ナトリウムまたはヒスチジン等のアミノ酸；ベタイン等のメチルアミン；硫酸マグネシウム等の離液性の塩；例えば、グリセリン、デキストラン、エリスリトール、グリセロール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール、およびマンニトール等の３価またはさらに高分子量の糖アルコールのポリオール；プロピレングリコール；ポリエチレングリコール；Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（商標）；およびその組み合わせが含まれるが、これらに限定されない。リオプロテクタントの追加の例には、グリセリンおよびゼラチン、および糖メリビオース（ｍｅｌｌｉｂｉｏｓｅ）、メレジトース、ラフィノース、マンノトリオース（ｍａｎｎｏｔｒｉｏｓｅ）、およびスタキオースが含まれるが、これらに限定されない。還元糖の例には、グルコース、マルトース、ラクトース、マルツロース、イソマルツロース、およびラクツロースが含まれるが、これらに限定されない。非還元糖の例には、糖アルコールおよび他の直鎖ポリアルコールから選択されるポリヒドロキシ化合物の非還元グリコシドが含まれるが、これらに限定されない。糖アルコールの例には、モノグリコシド、ラクトース、マルトース、ラクツロース、およびマルツロース等の二糖類の還元によって得られる化合物が含まれるが、これらに限定されない。グリコシド側基は、グルコシドまたはガラクトシドのいずれかであり得る。糖アルコールの追加の例には、グルシトール、マルチトール、ラクチトール、およびイソマルツロースが含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、トレハロースまたはスクロースを、リオプロテクタントとして使用する。
「リオプロテクト量」のリオプロテクタントを、あらかじめ凍結乾燥した製剤に加えるが、この「リオプロテクト量」とは、リオプロテクト量のリオプロテクタントの存在下でタンパク質を凍結乾燥すると、凍結乾燥および保存時にタンパク質がその物理的および化学的安定性および完全性を本質的に保持することを意味する。
一実施形態において、本発明の製剤のリオプロテクタント（例えば、トレハロース）と抗ＩＬ−６抗体分子のモル比は、少なくとも約１０、少なくとも約５０、少なくとも約１００、少なくとも約２００、または少なくとも約３００である。別の実施形態において、本発明の製剤のリオプロテクタント（例えば、トレハロース）と抗ＩＬ−６抗体分子のモル比は、約１、約２、約５、約１０、約５０、約１００、約２００、または約３００である。
「再構成された」製剤は、希釈剤中に凍結乾燥した抗体製剤を溶解させて、再構成された製剤中で抗体が分散するようにすることによって調製される製剤である。再構成された製剤は、対象となるタンパク質で治療される患者に投与（例えば、非経口投与）するのに適し、本発明のある実施形態において、皮下投与に適するものであり得る。
本明細書の対象となる「希釈剤」は、薬学的に許容され（ヒトへの投与に関して安全かつ無毒で）、かつ凍結乾燥後に再構成される製剤等の液体製剤の調製に有用な希釈剤である。幾つかの実施形態において、希釈剤には、滅菌水、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、ｐＨ緩衝液（例えば、リン酸緩衝生理食塩水）、滅菌生理食塩水溶液、リンゲル液、またはブドウ糖液が含まれるが、これらに限定されない。代替的な実施形態において、希釈剤には、塩および／または緩衝剤の水性溶液が含まれ得る。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、４００シェイク／分の速度で４時間、該バイアルを振とうした際に、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％がバイアルから回収され、該バイアルは、その容量の半分まで該製剤で満たされている。別の実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、該製剤を３回の凍結／解凍サイクルに付した際に、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％がバイアルから回収され、該バイアルは、その容量の半分まで該製剤で満たされている。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、該製剤から作製された凍結乾燥ケーキを再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、４００シェイク／分の速度で４時間、該バイアルを振とうした際に、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％がバイアルから回収され、該バイアルは、その容量の半分まで該製剤で満たされている。別の実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、該製剤を３回の凍結／解凍サイクルに付した際に、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％がバイアルから回収され、該バイアルは、その容量の半分まで該製剤で満たされている。さらなる実施形態において、本発明の製剤は、本発明のＩＬ−６抗体を含む凍結乾燥製剤であり、該製剤から作製された凍結乾燥ケーキを再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、少なくとも約４週間、少なくとも約５週間、または少なくとも約６週間の約４０℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、または少なくとも約６ヶ月の約４０℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、少なくとも約１ヶ月、少なくとも約２ヶ月、少なくとも約３ヶ月、少なくとも約４ヶ月、少なくとも約５ヶ月、少なくとも約６ヶ月、少なくとも約７ヶ月、少なくとも約８ヶ月、少なくとも約９ヶ月、少なくとも約１０ヶ月、少なくとも約１１ヶ月、または少なくとも約１２ヶ月の約５℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。一実施形態において、、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、または少なくとも約５年間の約５℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約５週間、または約６週間の約４０℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。一実施形態において、本発明の凍結乾燥製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体分子を含み、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、または約５年間の約５℃での保存時に、該凍結乾燥製剤を再構成することによって、該抗体の少なくとも約９０％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、または少なくとも約９９％が回収される。
一実施形態において、本発明の製剤は、再構成された製剤である。ある実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、本明細書中に記載の凍結乾燥製剤から調製される。
一実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、あらかじめ凍結乾燥した液体製剤と同じ濃度の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、あらかじめ凍結乾燥した液体製剤よりも高い濃度の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、あらかじめ凍結乾燥した液体製剤よりも、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍高い濃度の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、あらかじめ凍結乾燥した液体製剤よりも低い濃度の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、あらかじめ凍結乾燥した液体製剤よりも、約２倍、約３倍、約４倍、約５倍、約６倍、約７倍、約８倍、約９倍、約１０倍、約１５倍、約２０倍、約３０倍、約４０倍低い濃度の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、水性製剤である。特定の実施形態において、本発明の再構成された液体製剤は、水性製剤であり、水性担体は、蒸留水である。
一実施形態において、本発明の再構成された製剤は、滅菌されている。
一実施形態において、本発明の再構成された製剤は、均質である。
一実施形態において、本発明の再構成された製剤は、等張性である。一実施形態において、本発明の再構成された製剤は、低張性である。一実施形態において、本発明の再構成された製剤は、高張性である。
ある実施形態において、本発明の再構成された製剤は、パーティクルマルチサイザー（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ）によって測定された場合に、直径２〜４μｍの約３．４Ｅ＋５粒子／ｍＬ未満、直径４〜１０μｍの約４．０Ｅ＋４粒子／ｍＬ未満、直径１０〜２０μｍの約４．２Ｅ＋３粒子／ｍＬ未満、直径２０〜３０μｍの約５．０Ｅ＋２粒子／ｍＬ未満、直径３０〜４０μｍの約７．５Ｅ＋１粒子／ｍＬ未満、および直径４０〜６０μｍの約９．４粒子／ｍＬ未満の粒子プロファイルを含む（か、または凝集フラクションとして該粒子プロファイルからなる）。ある実施形態において、本発明の再構成された製剤は、４０μｍより大きい、または３０μｍより大きい検出可能な粒子を含有しない。
ある実施形態において、約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約７時間、約８時間、約９時間、約１２時間、約１５時間、約１８時間、または約２４時間の保存後の本発明の再構成された液体製剤は、パーティクルマルチサイザー（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ）によって測定された場合に、直径２〜４μｍの約３．４Ｅ＋５粒子／ｍＬ未満、直径４〜１０μｍの約４．０Ｅ＋４粒子／ｍＬ未満、直径１０〜２０μｍの約４．２Ｅ＋３粒子／ｍＬ未満、直径２０〜３０μｍの約５．０Ｅ＋２粒子／ｍＬ未満、直径３０〜４０μｍの約７．５Ｅ＋１粒子／ｍＬ未満、および直径４０〜６０μｍの約９．４粒子／ｍＬ未満の粒子プロファイルを含む（か、または凝集フラクションとして該粒子プロファイルからなる）。ある実施形態において、本発明の液体製剤は、４０μｍより大きい、または３０μｍより大きい検出可能な粒子を含有しない。
特定の実施形態において、薬学的組成物には、
（ａ）ｐＨ６．０で、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、２５ｍＭ ヒスチジン、１．６ｍＭ グリシンからなる滅菌された液体製剤、
（ｂ）ｐＨ６．０で、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、２５ｍＭ ヒスチジンからなる滅菌された液体製剤、
（ｃ）ｐＨ６．０で、５ｍｇ／ｍＬの抗体、２０ｍＭ クエン酸、１００ｍＭ ＮＡＣｌ、１．５％ マンニトール、５０ １ ＤＴＰＡ、および０．０２％ ＰＳ８０からなる滅菌された液体製剤、
（ｄ）ｐＨ６．０で、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、２５ｍＭ ヒスチジン、８％ トレハロース、および０．０２％ ＰＳ８０からなる滅菌された液体製剤、
（ｅ）ｐＨ６．０で、２０ｍｇ／ｍＬの抗体、１０ｍＭ Ｈｉｓ、２．３５％（ｗ／ｖ） リシン−ＨＣｌ、および０．０２％ ＰＳ−８０（ｗ／ｖ）からなる滅菌された液体製剤、
（ｆ）ｐＨ６．０で、５ｍｇ／ｍＬの抗体、１０ｍＭ クエン酸ナトリウム緩衝剤、ＮａＣｌ（０．１５Ｍ）、およびＴｗｅｅｎ８０（０．０２％）からなる滅菌された液体製剤、
（ｇ）ｐＨ６．０で、１００ｍｇ／ｍＬの抗体、１０ｍＭ ヒスチジン、および１５０ｍＭ ＮａＣｌからなる滅菌された液体製剤が含まれるが、これらに限定されない。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を安定化する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体の凝集を防ぐ。別の実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体の断片化を防ぐ。
一実施形態において、本発明の製剤は、約４０℃での保存時に、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約４０℃での保存時に、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
一実施形態において、本発明の製剤は、約２５℃での保存時に、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約２５℃での保存時に、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
一実施形態において、本発明の製剤は、約５℃での保存時に、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約５℃での保存時に、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
一実施形態において、本発明の製剤は、約４０℃での保存時に、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約４０℃での保存時に、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
一実施形態において、本発明の製剤は、約２５℃での保存時に、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約２５℃での保存時に、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
一実施形態において、本発明の製剤は、約５℃での保存時に、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間安定である。一実施形態において、本発明の製剤は、約５℃での保存時に、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間安定である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中での保存時に、安定である。
本発明は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む安定な製剤を提供する。該抗体の安定性は、参照抗体を含む参照製剤と比較して、ＨＰＳＥＣ、逆相クロマトグラフィー、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光（Ｆｏｕｒｉｅｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍ Ｉｎｆｒａｒｅｄ Ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素アンフォールディング技術（ｕｒｅａ ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、固有トリプトファン蛍光（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ）、示差走査熱量測定、および／またはＡＮＳ結合技術によって測定される凝集、分解または断片化の程度によって評価することができる。例えば、参照製剤は、７５ｍＭ ＮａＣｌおよび４％ トレハロースを含有する１０ｍＭ ヒスチジン（ｐＨ６．０）中の１０ｍｇ／ｍＬの参照抗体（その抗体断片を含む）（例えば、１６Ｃ４可変領域、およびフコースが糖鎖中の還元末端においてＮ−アセチルグルコサミンに結合していない、複合型Ｎ−グリコシド結合糖鎖を有するＦｃ領域を含む抗体であるが、これに限定されない）からなる、−７０℃で凍結された参照標準であり得、この参照製剤は、通常、ＨＰＳＥＣにより単一のモノマーピーク（例えば、≧９５％の領域）を示す。ある実施形態において、参照製剤は、安定性が試験される製剤と同一であり、安定性試験中、−７０℃で凍結された参照製剤を保存し、その元の状態において、この参照製剤を保持し得る。例えば、４０℃で保存された製剤中のＩＬ−６抗原の結合活性のいかなる喪失を評価するための参照標準は、−７０℃で３０日間保存された同一の製剤であり得る。抗体（その抗体断片を含む）を含む製剤の全体的な安定性はまた、単離された抗原分子を用いて、例えば、ＥＬＩＳＡおよびラジオイムノアッセイを含む種々の免疫学的アッセイによって評価され得る。さらに、抗体を含む製剤の安定性はまた、例えば、抗原結合アフィニティー、インビトロＡＤＣＣ活性、インビボ枯渇活性、インビトロＣＤＣ活性、阻害アッセイ、細胞増殖アッセイ等の抗体の機能特性を測定するように設計される種々のアッセイを用いて評価され得る。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％のＩＬ−６結合活性を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約４０℃で、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％のＩＬ−６結合活性を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約４０℃で、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％のＩＬ−６結合活性を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約２５℃で、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％のＩＬ−６結合活性を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約２５℃で、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約５℃で、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約５℃で、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約４０℃で、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約４０℃で、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約２５℃で、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約２５℃で、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約５℃で、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間保存されたものである。一実施形態において、本発明の製剤は、参照抗体のＩＬ−６結合活性の少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、または少なくとも９９％の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、約５℃で、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間保存されたものである。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％を損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％を損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。本明細書で使用される「最大で（ａｔ ｍｏｓｔ）」および「〜を超えない（ｎｏ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ）」という用語は、同一の意味を有する。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約２５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約２５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の約５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の約５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約４０℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約２５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約２５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の約５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該抗体は、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の約５℃での製剤の保存時に、そのＩＬ−６結合活性の最大で５０％、最大で４０％、最大で３０％、最大で２０％、最大で１０％、最大で５％、または最大で１％損失する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約４０℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約２５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の約５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約４０℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約２５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の約５℃での保存時に、ＨＰＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、凝集体を形成する。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約４０℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約２５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の約５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約４０℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約２５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。一実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の約５℃での保存時に、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＳＥＣによって測定された場合に、１％未満、２％未満、３％未満、４％未満、５％未満、７％未満、または１０％未満の該抗体が、断片化される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約４０℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１週間、少なくとも約２週間、少なくとも約３週間、または少なくとも約４週間の約２５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、または少なくとも約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１ヶ月間、少なくとも約２ヶ月間、少なくとも約３ヶ月間、少なくとも約４ヶ月間、少なくとも約５ヶ月間、少なくとも約６ヶ月間、少なくとも約７ヶ月間、少なくとも約８ヶ月間、少なくとも約９ヶ月間、少なくとも約１０ヶ月間、少なくとも約１１ヶ月間、または少なくとも約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、少なくとも約１年間、少なくとも約２年間、少なくとも約３年間、少なくとも約４年間、少なくとも約５年間、少なくとも約６年間、少なくとも約７年間、少なくとも約８年間、少なくとも約９年間、少なくとも約１０年間、少なくとも約１１年間、または少なくとも約１２年間の約５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約４０℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約４０℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、約１週間、約２週間、約３週間、または約４週間の約２５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、または約６ヶ月間の約２５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、約１ヶ月間、約２ヶ月間、約３ヶ月間、約４ヶ月間、約５ヶ月間、約６ヶ月間、約７ヶ月間、約８ヶ月間、約９ヶ月間、約１０ヶ月間、約１１ヶ月間、または約１２ヶ月間の約５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。一実施形態において、本発明の製剤は、約１年間、約２年間、約３年間、約４年間、約５年間、約６年間、約７年間、約８年間、約９年間、約１０年間、約１１年間、または約１２年間の約５℃での保存時に、目視検査によって測定された場合に無色透明である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
ある実施形態において、本発明の製剤は、例えば、室温もしくは４℃で、延長した期間中（例えば、１週間、１ヶ月間、６ヶ月間、１年間、２年間、３年間、または５年間であるが、これらに限定されない）、または３８℃〜４２℃の高温で、期間中（１週間、２週間、３週間、１ヶ月間、２ヶ月間、３ヶ月間、または６ヶ月間であるが、これらに限定されない）、保存時での改善された凝集プロファイルを維持する。ある実施形態において、該製剤は、保存時に改善された凝集プロファイルを維持する一方、最大で１０％、または最大で２０％、または最大で３０％、または最大で４０％、または最大で５０％、または最大で６０％、または最大で７０％、または最大で８０％、または最大で９０％、または最大で１００％の相対湿度が挙げられるが、これらに限定されない、種々の湿度条件下で、光に曝されるか、または暗所に保存される。「周囲」条件という用語は、一般に、光への曝露を伴って、１０％〜６０％の範囲の相対湿度で、約２０℃の温度を指すことを当該技術分野において理解されよう。同様に、約１０％未満の相対湿度で、約２℃〜約８℃の温度は、集合的に、「４℃」または「５℃」として称され、約６０％の相対湿度で、約２３℃〜約２７℃の温度は、集合的に、「２５℃」として称され、約７５％の相対湿度で、約３８℃〜約４２℃の温度は、集合的に、「４０℃」として称される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。
ある実施形態において、少なくとも１ヶ月間の４℃での保存後に、本発明の製剤は、パーティクルマルチサイザー（ｐａｒｔｉｃｌｅ ｍｕｌｔｉｓｉｚｅｒ）によって測定された場合に、直径２〜４μｍの約３．４Ｅ＋５粒子／ｍＬ未満、直径４〜１０μｍの約４．０Ｅ＋４粒子／ｍＬ未満、直径１０〜２０μｍの約４．２Ｅ＋３粒子／ｍＬ未満、直径２０〜３０μｍの約５．０Ｅ＋２粒子／ｍＬ未満、直径３０〜４０μｍの約７．５Ｅ＋１粒子／ｍＬ未満、および直径４０〜６０μｍの約９．４粒子／ｍＬ未満の粒子プロファイルを含む（か、または凝集フラクションとして該粒子プロファイルからなる）。ある実施形態において、本発明の製剤は、４０μｍより大きい、または３０μｍより大きい検出可能な粒子を含有しない。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。
タンパク質製剤（例えば、本発明の抗体製剤）に存在する凝集体の程度、および／または凝集体の種類、および／または大きさを測定するために有用な多数の方法が、当該技術分野において公知であり、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、高性能サイズ排除クロマトグラフィー（ＨＰＳＥＣ）、静的光散乱（ＳＬＳ）、フーリエ変換赤外分光（ＦＴＩＲ）、円偏光二色性（ＣＤ）、尿素誘発タンパク質アンフォールディング技術（ｕｒｅａ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｕｎｆｏｌｄｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、固有トリプトファン蛍光、示差走査熱量測定、および１−アニリノ−８−ナフタレンスルホン酸（ＡＮＳ）タンパク質結合技術が挙げられるが、これらに限定されない。例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）を実施し、適切な樹脂で充填されたカラムに対して分子を通過させることによって、それらのサイズに基づいて分子を分離することができ、大きい分子（例えば、凝集体）は、小さい分子（例えば、モノマー）より先に溶出する。分子は、一般に、２８０ｎｍでのＵＶ吸光度によって検出され、さらなる特性評価のために回収され得る。ＳＥＣ分析では、高圧液体クロマトグラフィーカラムが利用されることが多い（ＨＰ−ＳＥＣ）。具体的なＳＥＣ法は、以下の「実施例」と題されるセクションで詳説する。代替として、分析用超遠心（ＡＵＣ）を利用してよい。ＡＵＣは、液体試料中の高分子の沈降係数（Ｓｖｅｄｂｅｒｇ，Ｓに報告される）を測定する直交技術である。ＳＥＣと同様に、ＡＵＣでは、モノマーから抗体断片／凝集体を分離および検出することが可能であり、さらに、分子量に関する情報を提供することができる。また、製剤中のタンパク質凝集は、コールターカウンターを使用するパーティクルカウンター分析によって、または濁度計を使用する濁度測定によって特徴付けられ得る。濁度は、溶液中の粒子が光を散乱する量の尺度であり、ゆえに、タンパク質凝集の一般的指標として使用され得る。加えて、非還元ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）またはキャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）を使用して、本発明の製剤中の抗体またはその断片の凝集および／または断片化状態を特徴付けることができる。
一実施形態において、本発明の製剤は、非経口投与用である。一実施形態において、本発明の製剤は、注射製剤である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、関節包内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、神経周囲、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外、ならびに胸骨下の注射および注入に適している。一実施形態において、本発明の製剤は、静脈内、皮下、または筋肉内投与用である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、皮下注射用である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、本発明の抗ＩＬ−６抗体を含み、該製剤は、膀胱内注射用である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中で保存される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、静脈内投与用であり、該製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの範囲、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの範囲、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約２０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの範囲、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約６０ｍｇ／ｍＬの範囲、約３０ｍｇ／ｍＬ〜約５０ｍｇ／ｍＬの範囲、または約３０ｍｇ／ｍＬ〜約４０ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、神経周囲またはくも膜下腔内投与用であり、該製剤は、約０．０１μｇ／ｍＬ〜約５０μｇ／ｍＬの範囲、約０．０５μｇ／ｍＬ〜約４５ｍｇ／ｍＬの範囲、約０．１μｇ／ｍＬ〜約３０μｇ／ｍＬの範囲、約０．１５μｇ／ｍＬ〜約２５μｇ／ｍＬの範囲、約０．２μｇ／ｍＬ〜約２０μｇ／ｍＬの範囲、約０．２５μｇ／ｍＬ〜約１７．５μｇ／ｍＬの範囲、約０．５μｇ／ｍＬ〜約１５μｇ／ｍＬの範囲、約０．７５μｇ／ｍＬ〜約１２．５μｇ／ｍＬの範囲、約０．６μｇ／ｍＬ〜約１０μｇ／ｍＬの範囲、約１．０μｇ／ｍＬ〜約８μｇ／ｍＬの範囲、約１．２５μｇ／ｍＬ〜約７．５μｇ／ｍＬの範囲、または約１．５μｇ／ｍＬ〜約６μｇ／ｍＬの本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、皮下投与用であり、該製剤は、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約１ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約１ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約２５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、約５０ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１００ｍｇ／ｍＬの範囲、約７５ｍｇ／ｍＬ〜約１５０ｍｇ／ｍＬの範囲、または約７５ｍｇ／ｍＬ〜約２００ｍｇ／ｍＬの範囲の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中に提供される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、エアロゾル投与用である。
本発明はまた、ヒトへの非経口投与に適している薬学的単位剤形を提供し、これは、好適な容器内に本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。一実施形態において、本発明の薬学的単位投与量は、静脈内、皮下、または筋肉内送達される本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。別の実施形態において、本発明の薬学的単位投与量は、エアロゾル送達される本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。特定の実施形態において、本発明の薬学的単位投与量は、皮下送達される本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。別の実施形態において、本発明の薬学的単位投与量は、エアロゾル送達される本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。さらなる実施形態において、本発明の薬学的単位投与量は、鼻腔内投与される本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含む。一実施形態において、好適な容器は、あらかじめ充填された注射器である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
一実施形態において、本発明の製剤は、密閉された容器内に提供される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中に提供される。特定の実施形態において、本発明の製剤は、延長したインビボ半減期を有する本発明の抗ＩＬ−６抗体を含む。
本発明は、さらに、本発明の抗ＩＬ−６抗体製剤を含むキットを提供した。本発明は、本発明の液体製剤または凍結乾燥製剤で充填された１つ以上の容器を含む薬学的パックまたはキットを提供する。一実施形態において、本発明の液体製剤で充填された容器は、あらかじめ充填された注射器である。特定の実施形態において、本発明の製剤は、異種タンパク質、異種ポリペプチド、異種ペプチド、巨大分子、小分子、マーカー配列、診断もしくは検出可能な薬剤、治療的部分、薬物部分、放射性金属イオン、二次抗体、および固相支持体が含まれるが、これらに限定されない、別の部分へ組換えにより融合された、または化学的に複合された抗体（その抗体断片を含む）を含む。特定の実施形態において、本発明の製剤は、滅菌した液体として、単回量バイアル中に製剤化される。本発明の製剤は、１．２ｍＬの標的容積で、３ｃｃのＵＳＰのＩ型ホウケイ酸褐色バイアル（Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｅｒｉｃｅｓ−部品番号６８００−０６７５）中で供給され得る。任意に、このような容器（複数）は、医薬品または生物学的製品の製造、使用、または販売を規制する政府機関により規定された形式の注意書きを伴い、この注意書きは、ヒト投与に関する製造、使用、または販売の監督官庁による承認を反映するものである。別の実施形態において、本発明の製剤は、あらかじめ充填された注射器中に供給され得る。
一実施形態において、本発明の液体製剤で充填された容器は、あらかじめ充填された注射器である。当業者に公知の任意のあらかじめ充填された注射器は、本発明の液体製剤と組み合わせて使用され得る。使用され得るあらかじめ充填された注射器は、例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ第０５０３２６２７号、ＷＯ第０８０９４９８４号、ＷＯ第９９４５９８５号、ＷＯ第０３０７７９７６号、ＵＳ特許ＵＳ第６７９２７４３号、ＵＳ第５６０７４００号、ＵＳ第５８９３８４２号、ＵＳ第７０８１１０７号、ＵＳ第７０４１０８７号、ＵＳ第５９８９２２７号、ＵＳ第６８０７７９７号、ＵＳ第６１４２９７６号、ＵＳ第５８９９８８９号、ＵＳ特許公開ＵＳ第２００７０１６１９６１Ａ１号、ＵＳ第２００５００７５６１１Ａ１号、ＵＳ第２００７００９２４８７Ａ１号、ＵＳ第２００４０２６７１９４Ａ１号、ＵＳ第２００６０１２９１０８Ａ１号に記載されているが、これらに限定されない。あらかじめ充填された注射器は、種々の材料から作製され得る。一実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、ガラス製注射器である。別の実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、プラスチック製注射器である。当業者は、注射器を製造するために使用される材料の性質および／または品質は、注射器中に保存されるタンパク質製剤の安定性に影響を及ぼし得ることが理解されよう。例えば、注射器チャンバーの内面に付着させるシリコンベースの潤滑剤は、タンパク質製剤中の粒子形成に作用し得る。一実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、シリコンベースの潤滑剤を含む。一実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、シリコン焼成（ｂａｋｅｄ ｏｎ ｓｉｌｉｃｏｎｅ）を含む。別の実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、シリコンベースの潤滑剤が存在しない。また、当業者は、注射器バレル、注射器先端キャップ、プランジャー、またはストッパーから製剤に浸出する少量の汚染成分が、製剤の安定性に影響を及ぼし得ることを理解されよう。例えば、製造プロセス時に導入されるタングステンは、製剤の安定性に悪影響を及ぼし得ることを理解されよう。一実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、５００ｐｐｂを超えるレベルのタングステンを含み得る。別の実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、低タングステンの注射器である。別の実施形態において、あらかじめ充填された注射器は、約５００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約４００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約３００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約２００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約１００ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約５０ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲、約２５ｐｐｂ〜約１０ｐｐｂの範囲のレベルでタングステンを含み得る。
製品
本発明はまた、完成され、包装され、およびラベルが付けられた医薬品を包含する。この製品は、密封されたガラス製バイアル、あらかじめ充填された注射器、または他の容器等の適切な瓶または容器中の適切な単位投与剤形を含む。一実施形態において、この単位投与剤形は、非経口投与に適している抗ＩＬ−６抗体を含む滅菌粒子フリーの溶液として提供される。別の実施形態において、この単位投与剤形は、再構成に適している抗ＩＬ−６抗体を含む滅菌凍結乾燥粉末として提供される。
一実施形態において、この単位投与剤形は、静脈内、筋肉内、鼻腔内、経口、局所、または皮下送達に適している。ゆえに、本発明は、各送達経路に適した滅菌溶液を包含する。本発明は、さらに、再構成に適している滅菌凍結乾燥粉末を包含する。
任意の医薬品と同様に、包装材料および容器は、保存および出荷時の製品の安定性を保護するように設計される。さらに、本発明の製品は、使用のための指示書、または、問題の疾患または障害を適切に予防または治療するための手引を医師、技術者、もしくは患者に助言する他の情報資料を含む。換言すれば、該製品は、実際の用量、モニタリング手順、および他のモニタリング情報が含まれるが、これらに限定されない、投薬レジメンを示すかまたは示唆する指示手段を含む。
特に、本発明は、箱、瓶、チューブ、バイアル、容器、あらかじめ充填された注射器、噴霧器、吸入器、静脈内（ｉ．ｖ．）バッグ、エンベロープ等の包装材料；および該包装材料内に含有される医薬品の少なくとも１つの単位投与剤形を含む製品を提供し、該医薬品は、抗体を含有する液体製剤を含む。包装材料は、該抗体を使用して、疾患または障害と関連する１つ以上の症状をいかに予防、治療、および／または管理することができるかを示す指示手段を含む。
また、経口投与用の薬学的組成物、例えば、単一ドメイン抗体分子（例えば、「ｎａｎｏｂｏｄｙ（商標）」）等は、本発明において想定される。このような経口製剤は、錠剤、カプセル、粉末、液体、または半固体の剤形であり得る。錠剤は、ゼラチンまたはアジュバント等の固体担体を含み得る。液体薬学的組成物は、概して、水、石油、動物もしくは植物油、鉱油または合成油等の液体担体を含む。生理食塩水溶液、デキストロース、または他のサッカライド溶液、またはエチレングリコール、プロピレングリコールもしくはポリエチレングリコール等のグリコールが含まれ得る。
静脈内注射、または苦痛部位での注射では、活性成分は、ピロゲンを含まず、好適なｐＨ、等張性、よび安定性を有する、非経口的に許容される水性溶液の剤形である。当業者は、例えば、塩化ナトリウム液、リンガー液、乳酸加リンガー液等の等張性ビヒクルを使用して、好適な溶液を調製することが十分に可能である。保存剤、安定剤、緩衝剤、酸化防止剤、および／または他の添加物を必要に応じて用いることができ、これには、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニン等の酸化防止剤；保存剤（例えば、オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロライド；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール；メチルまたはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３’−ペンタノール；およびｍ−クレゾール）；低分子量ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール等の糖；ナトリウム等の塩形成カウンターイオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が含まれる。
本発明の結合性メンバーは、分子の物理化学的特性および送達経路に応じて、液体、半固体、または固体剤形で製剤化され得る。製剤には、賦形剤、または賦形剤の組み合わせ、例えば：糖、アミノ酸および界面活性剤を含み得る。液体製剤には、広範囲の抗体濃度およびｐＨを含み得る。固体製剤は、例えば、凍結乾燥、スプレー乾燥、または超臨界流体技術による乾燥によって製造され得る。結合性メンバーの製剤は、意図される送達経路に依存する。例えば、肺送達用製剤は、吸入時に肺に深く浸透することを保証する物理的特性を有する粒子からなり得；局所製剤（例えば、瘢痕、例えば真皮瘢痕治療用）には、薬物が作用点に留まる期間を延長する粘性調節剤を含み得る。結合性メンバーは、制御放出製剤等の、急速な放出から該結合性メンバーを保護する担体と共に調製され得、これには、移植片、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系が含まれる。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅｓ）、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸等の生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。このような製剤を調製するための多数の方法は、当業者に公知である（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，Ｊ．Ｒ．ｅｄ．，（１９７８）Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
治療は、経口で（例えば、単一ドメイン抗体分子（例えば、「ｎａｎｏｂｏｄｉｅｓ（商標）」）等）、注射によって（例えば、皮下、関節内、静脈内、腹膜内、動脈内、または筋肉内注射によって）、気管内の吸入によって、小胞内経路（膀胱内への点滴注入）によって、または局所的に（例えば、眼球内、鼻腔内、経直腸、創傷内、皮膚上）施してよい。該治療は、パルス注入によって、特に、少ない用量の結合性メンバーで投与され得る。投与経路は、治療の物理化学的特性によって、疾患に関する特別な配慮によって、または効力を最適化するか、もしくは副作用を最小にする必要性によって、決定することができる。特定の一投与経路は、静脈内である。本発明の薬学的組成物を投与する別の経路は、皮下である。治療は、診療所での使用に制限されないことが想定される。したがって、無針注射デバイスを用いた皮下注射も有益である。
組成物は、単独で、または他の治療と組み合わせて、治療されるべき症状に応じて同時に、もしくは順次に投与され得る。
本発明の結合性メンバーは、追加の薬用成分と組み合わせた併用療法の部分として使用され得る。併用治療、特に、本発明の結合性メンバーと１つ以上の他の薬物を併用して、大きな相乗効果を得ることができる。本発明の結合性メンバーは、本明細書で列挙されている１つ以上の症状の治療のために、別の治療物質または物質群と同時に、または連続して、または混合調製物として投与され得る。
本発明の結合性メンバーは、細胞毒性剤の治療効力を高めることができる化学増感剤として使用され得、ゆえに、１つ以上の細胞毒性剤と組み合わせて、同時に、または連続して投与するために提供され得る。また、結合性メンバーは、放射線の効力を向上させることができる放射線増感剤として使用され得、ゆえに、放射線と組み合わせて、同時に、または連続して投与するために提供され得る。
本発明による結合性メンバーは、１つ以上の以下の薬剤と組み合わせて、またはそれらと共に提供され得る。
− サイトカインまたはサイトカイン機能のアゴニストもしくはアンタゴニスト（例えば、ＳＯＣＳ系のモジュレーター等のサイトカインシグナル伝達経路に作用する薬剤）、例えば、アルファ−、ベータ−、および／またはガンマ−インターフェロン；インシュリン様成長因子Ｉ型（ＩＧＦ−１）、その受容体および関連結合タンパク質；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、１つ以上のＩＬ−１〜３３、および／またはインターロイキンアンタゴニストもしくは阻害剤、例えば、アナキンラ（ａｎａｋｉｎｒａ）；インターロイキンファミリーメンバーの受容体の阻害剤、またはこのような受容体の特定サブユニットの阻害剤、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ−α）阻害剤、例えば、抗ＴＮＦモノクローナル抗体（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ（ａｄａｌｉｍｕｍａｂ）、および／もしくはＣＤＰ−８７０）および／またはＴＮＦ受容体アンタゴニスト、例えば、免疫グロブリン分子（例えば、エタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ））および／または低分子量薬剤、例えば、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｆｙｌｌｉｎｅ）；
− Ｂ細胞のモジュレーター、例えば、Ｂリンパ球を標的にするモノクローナル抗体（ＣＤ２０（リツキシマブ）もしくはＭＲＡ−ａＩＬｌ６Ｒ等）またはＴリンパ球を標的にするもの（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、ＨｕＭａｘ Ｉｌ−１５、もしくはアバタセプト（Ａｂａｔａｃｅｐｔ））、
− 破骨細胞活性を阻害するモジュレーター、例えば、ＲＡＮＫＬに対する抗体、
− ケモカインまたはケモカイン受容体機能のモジュレーター、例えば、ＣＣＲ１、ＣＣＲ２、ＣＣＲ２Ａ、ＣＣＲ２Ｂ、ＣＣＲ３、ＣＣＲ４、ＣＣＲ５、ＣＣＲ６、ＣＣＲ７、ＣＣＲ８、ＣＣＲ９、ＣＣＲ１０、およびＣＣＲ１１（Ｃ−Ｃファミリー）；ＣＸＣＲ１、ＣＸＣＲ２、ＣＸＣＲ３、ＣＸＣＲ４、およびＣＸＣＲ５、およびＣＸＣＲ６（Ｃ−Ｘ−Ｃファミリー）、ならびにＣＸ３ＣＲ１（Ｃ−Ｘ３−Ｃファミリー）のアンタゴニスト、
− マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、すなわち、１つ以上のストロメライシン、コラゲナーゼおよびゼラチナーゼ、ならびにアグレカナーゼ（ａｇｇｒｅｃａｎａｓｅ）、特に、コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、コラゲナーゼ−２（ＭＭＰ−８）、コラゲナーゼ−３（ＭＭＰ−１３）、ストロメライシン−１（ＭＭＰ−３）、ストロメライシン−２（ＭＭＰ−１０）および／またはストロメライシン−３（ＭＭＰ−１１）および／またはＭＭＰ−９および／またはＭＭＰ−１２の阻害剤、例えば、ドキシサイクリン等の薬剤、
− ロイコトリエン生合成阻害剤、５−リポキシゲナーゼ（５−ＬＯ）阻害剤、またはジレウトン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）等の５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質（ＦＬＡＰ）アンタゴニスト；ＡＢＴ−７６１；フェンレウトン（ｆｅｎｌｅｕｔｏｎ）；テポキサリン（ｔｅｐｏｘａｌｉｎ）；Ａｂｂｏｔｔ−７９１７５；Ａｂｂｏｔｔ−８５７６１；Ｎ−（５−置換）−チオフェン−２−アルキルスルホンアミド；２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチルフェノールヒドラゾン；Ｚｅｎｅｃａ ＺＤ−２１３８等のメトキシテトラヒドロピラン；化合物ＳＢ−２１０６６１；Ｌ−７３９，０１０等のピリジニル置換２−シアノナフタレン化合物；Ｌ−７４６，５３０等の２−シアノキノリン化合物；インドールおよび／またはＭＫ−５９１、ＭＫ−８８６および／またはＢＡＹ ｘ １００５等のキノリン化合物、
− 例えば、Ｌ−６５１，３９２等のフェノチアジン−３−１；ＣＧＳ−２５０１９ｃ等のアミジノ化合物；オンタゾラスト（ｏｎｔａｚｏｌａｓｔ）等のベンゾキサラミン（ｂｅｎｚｏｘａｌａｍｉｎｅｓ）；ＢＩＩＬ２８４／２６０等のベンゼンカルボキシミドアミド（ｂｅｎｚｅｎｅｃａｒｂｏｘｉｍｉｄａｍｉｄｅｓ）；およびザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）、アブルカスト（ａｂｌｕｋａｓｔ）、モンテルカスト（ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ）、プランルカスト（ｐｒａｎｌｕｋａｓｔ）、ベルルカスト（ｖｅｒｌｕｋａｓｔ）（ＭＫ−６７９）、ＲＧ−１２５２５、Ｒｏ−２４５９１３、イラルカスト（ｉｒａｌｕｋａｓｔ）（ＣＧＰ ４５７１５Ａ）およびＢＡＹ ｘ ７１９５等の化合物からなる群から選択されるロイコトリエン（ＬＴ）Ｂ４、ＬＴＣ４、ＬＴＤ４、およびＬＴＥ４の受容体アンタゴニスト、
− ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）阻害剤、例えば、メチルキサンタニン（ｍｅｔｈｙｌｘａｎｔｈａｎｉｎｅ）、例えば、テオフィリンおよび／もしくはアミノフィリン；および／または選択的ＰＤＥアイソザイム阻害剤、例えば、ＰＤＥ４阻害剤および／もしくはアイソフォームＰＤＥ４Ｄの阻害剤および／もしくはＰＤＥ５の阻害剤；
− ヒスタミン１型受容体アンタゴニスト、例えば、セチリジン（ｃｅｔｉｒｉｚｉｎｅ）、ロラタジン（ｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、デスロラタジン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、フェキソフェナジン、アクリバスチン（ａｃｒｉｖａｓｔｉｎｅ）、テルフェナジン、アステミゾール、アゼラスチン、レボカバスチン（ｌｅｖｏｃａｂａｓｔｉｎｅ）、クロルフェニラミン、プロメタジン、シクリジン、および／またはミゾラスチン（ｍｉｚｏｌａｓｔｉｎｅ）（概して、経口で、局所的に、もしくは非経口で投与される）、
− プロトンポンプ阻害剤（例えば、オメプラゾール）または胃保護性ヒスタミン２型受容体アンタゴニスト、
− ヒスタミン４型受容体のアンタゴニスト、
− アルファ−１／アルファ−２アドレナリン受容体アゴニスト血管収縮性交感神経様作用薬、例えば、プロピルヘキセドリン、フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、エフェドリン、シュードエフェドリン、塩酸ナファゾリン、塩酸オキシメタゾリン、塩酸テトラヒドロゾリン、塩酸キシロメタゾリン、塩酸トラマゾリン、および塩酸エチルノルエピネフリン、
− 抗コリン作動薬、例えば、ムスカリン受容体（Ｍ１、Ｍ２、およびＭ３）アンタゴニスト、例えば、アトロピン、ヒヨスチン、グリコピロレート、イプラトロピウムブロミド、チオトロピウムブロミド（ｔｉｏｔｒｏｐｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ）、オキシトロピウムブロミド、ピレンゼピン、およびテレンゼピン（ｔｅｌｅｎｚｅｐｉｎｅ）、
− ベータ−アドレナリン受容体アゴニスト（ベータ受容体サブタイプ１−４を含む）、例えば、イソプレナリン、サルブタモール、フォルモテロール、サルメテロール、テルブタリン、オルシプレナリン、ビトルテロールメシレート、および／またはピルブテロール、例えば、そのキラルエナンチオマー、
− クロモン、例えば、クロモグリク酸ナトリウムおよび／またはネドクロミルナトリウム、
− 糖質コルチコイド、例えば、フルニソリド、トリアムシノロンアセトニド、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、ブデソニド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｓｏｎｅ ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、シクレソニド（ｃｉｃｌｅｓｏｎｉｄｅ）、および／またはフランカルボン酸モメタゾン（ｍｏｍｅｔａｓｏｎｅ ｆｕｒｏａｔｅ）、
− ＰＰＡＲ等の核ホルモン受容体をモジュレートする薬剤、
− 免疫グロブリン（Ｉｇ）またはＩｇ調製物または抗ＩｇＥ（例えば、オマリズマブ（ｏｍａｌｉｚｕｍａｂ））等のＩｇ機能を調節するアンタゴニストもしくは抗体、
− 他の全身または局所適用の抗炎症剤、例えば、サリドマイドまたはその誘導体、レチノイド、ジトラノール（ｄｉｔｈｒａｎｏｌ）および／またはカルシポトリオール（ｃａｌｃｉｐｏｔｒｉｏｌ）、
− アミノサリチル酸およびスルファピリジンの組み合わせ、例えば、スルファサラジン、メサラジン、バルサラジド（ｂａｌｓａｌａｚｉｄｅ）、およびオルサラジン（ｏｌｓａｌａｚｉｎｅ）；およびチオプリン（ｔｈｉｏｐｕｒｉｎｅｓ）等の免疫調節剤；およびブデソニド等のコルチコステロイド、
− 抗菌剤、例えば、ペニシリン誘導体、テトラサイクリン、マクロライド、ベータ−ラクタム、フルオロキノロン、メトロニダゾール、および／または吸入アミノグリコシド；および／または抗ウイルス剤、例えば、アシクロビル、ファムシクロビル（ｆａｍｃｉｃｌｏｖｉｒ）、バラシクロビル（ｖａｌａｃｉｃｌｏｖｉｒ）、ガンシクロビル、シドフォビル（ｃｉｄｏｆｏｖｉｒ）；アマンタジン、リマンタジン；リバビリン；ザナマビル（ｚａｎａｍａｖｉｒ）および／またはオセルタマビル（ｏｓｅｌｔａｍａｖｉｒ）；プロテアーゼ阻害剤、例えば、インジナビル、ネルフィナビル、リトナビル、および／またはサキナビル；ジダノシン、ラミブジン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン等のヌクレオシド逆転写酵素阻害剤；ネビラピン、エファビレンツ等の非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤、
− 心血管作動薬、例えば、カルシウムチャネル遮断薬、ベータ−アドレナリン受容体遮断薬、アンギオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンギオテンシン−２受容体アンタゴニスト；スタチンおよび／またはフィブラート（ｆｉｂｒａｔｅ）等の脂質低下剤；血液細胞形態のモジュレーター、例えば、ペントキシフィリン（ｐｅｎｔｏｘｙｆｙｌｌｉｎｅ）；血栓溶解剤および／または抗凝血剤、例えば、血小板凝集阻害剤、
− 中枢神経系薬、例えば、抗うつ剤（セルトラリン等）、抗パーキンソン薬（例えば、デプレニル、Ｌ−ドーパ、ロピニロール（ｒｏｐｉｎｉｒｏｌｅ）、プラミペキソール；ＭＡＯＢ阻害剤、例えば、セレギン（ｓｅｌｅｇｉｎｅ）およびラサギリン（ｒａｓａｇｉｌｉｎｅ）；ｃｏｍＰ阻害剤、例えば、タスマル（ｔａｓｍａｒ）；Ａ−２阻害剤、ドーパミン再摂取阻害剤、ＮＭＤＡアンタゴニスト、ニコチンアゴニスト、ドーパミンアゴニストおよび／もしくはニューロン一酸化窒素シンターゼの阻害剤）および抗アルツハイマー薬、例えば、ドネペジル、リバスティグミン、タクリン、ＣＯＸ−２阻害剤、プロペントフィリン、もしくはメトリホナート、
− 急性および慢性疼痛を治療するための薬剤、例えば、中枢または末梢作用鎮痛剤、例えば、オピオイド類似体もしくは誘導体、カルバマゼピン、フェニトイン、バルプロ酸ナトリウム、アミトリプチリン（ａｍｉｔｒｙｐｔｉｌｉｎｅ）または他の抗うつ剤、パラセタモール、または非ステロイド性抗炎症剤、
− 非経口または局所適用（吸入を含む）局所麻酔剤、例えば、リグノカインまたはその類似体、
− 抗骨粗鬆症剤、例えば、ホルモン剤、例えば、ラロキシフェン、またはビホスホナート、例えば、アレンドロナート（ａｌｅｎｄｒｏｎａｔｅ）、
− （ｉ）トリプターゼ阻害剤、（ｉｉ）血小板活性化因子（ＰＡＦ）アンタゴニスト、（ｉｉｉ）インターロイキン変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤、（ｉｖ）ＩＭＰＤＨ阻害剤、（ｖ）ＶＬＡ−４アンタゴニストを含む接着分子阻害剤、（ｖｉ）カテプシン、（ｖｉｉ）キナーゼ阻害剤、例えば、チロシンキナーゼの阻害剤（例えば、Ｂｔｋ、Ｉｔｋ、Ｊａｋ３ ＭＡＰ阻害剤の例には、ゲフィチニブ、メシル酸イマチニブが含まれ得る）、セリン／スレオニンキナーゼ（例えば、ｐ３８、ＪＮＫ、プロテインキナーゼＡ、ＢおよびＣおよびＩＫＫ等のＭＡＰキナーゼの阻害剤）、または細胞周期調節に関与するキナーゼ（例えば、サイクリン依存性キナーゼ）、（ｖｉｉｉ）グルコース−６リン酸デヒドロゲナーゼ阻害剤、（ｉｘ）キニン−Ｂ１−および／もしくはＢ２−受容体アンタゴニスト、（ｘ）抗痛風剤、例えば、コルヒチン、（ｘｉ）キサンチンオキシダーゼ阻害剤、例えば、アロプリノール、（ｘｉｉ）尿酸排泄剤、例えば、プロベネシド、スルフィンピラゾン、および／もしくはベンズブロマロン、（ｘｉｉｉ）成長ホルモン分泌促進剤、（ｘｉｖ）トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦβ）、（ｘｖ）血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、（ｘｖｉ）線維芽細胞成長因子、例えば、塩基性線維芽細胞成長因子（ｂＦＧＦ）、（ｘｖｉｉ）顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、（ｘｖｉｉｉ）カプサイシンクリーム、（ｘｉｘ）タキキニンＮＫ１および／またはＮＫ３受容体アンタゴニスト、例えば、ＮＫＰ−６０８Ｃ、ＳＢ−２３３４１２（タルネタント（ｔａｌｎｅｔａｎｔ））および／もしくはＤ−４４１８、（ｘｘ）エラスターゼ阻害剤、例えば、ＵＴ−７７および／もしくはＺＤ−０８９２、（ｘｘｉ）ＴＮＦ−アルファ変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、（ｘｘｉｉ）誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）阻害剤、または（ｘｘｉｉｉ）ＴＨ２細胞上で発現される化学誘引物質受容体相同分子（例えば、ＣＲＴＨ２アンタゴニスト）、（ｘｘｉｖ）Ｐ３８の阻害剤（ｘｘｖ）トール（Ｔｏｌｌ）様受容体（ＴＬＲ）の機能を調節する薬剤および（ｘｘｖｉ）Ｐ２Ｘ７等のプリン受容体の活性を調節する薬剤、（ｘｘｖｉｉ）ＮＦｋＢ、ＡＰＩ、および／またはＳＴＡＴＳ等の転写因子活性化の阻害剤。
阻害剤は、特異的であるか、または混合阻害剤、例えば、上述の１つ以上の分子（例えば、受容体）または分子クラスを標的にする阻害剤であり得る。
結合性メンバーはまた、化学療法剤または別のチロシンキナーゼ阻害剤と共に、同時投与で、または免疫複合体の形態で使用することができる。該抗体の断片はまた、組換え機構または生化学的カップリング、および次いで上記抗体の特異性を、ＩＬ−６が関連している活性に関与する他の分子を認識可能な他の抗体の特異性と結び付けることによって取得される二重特異性抗体において使用することができる。
炎症性疾患の治療では、本発明の結合性メンバーを、１つ以上の薬剤、例えば、局所適用であるか全身適用であるかにかかわらず、非ステロイド性抗炎症剤（以下、ＮＳＡＩＤ）、例えば、非選択的シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−１／ＣＯＸ−２阻害剤、例えば、ピロキシカム、ジクロフェナク、プロピオン酸、例えば、ナプロキセン、フルルビプロフェン、フェノプロフェン、ケトプロフェン、およびイブプロフェン、フェナマート、例えば、メフェナム酸、インドメタシン、スリンダク、アザプロパゾン、ピラゾロン、例えば、フェニルブタゾン、サリチラート、例えば、アスピリン）；選択的ＣＯＸ−２阻害剤（メロキシカム、セレコキシブ、ロフェコキシブ、バルデコキシブ、ルマロコキシブ（ｌｕｍａｒｏｃｏｘｉｂ）、パレコキシブ（ｐａｒｅｃｏｘｉｂ）、およびエトリコキシブ（ｅｔｏｒｉｃｏｘｉｂ）等）；シクロオキシゲナーゼ阻害性一酸化窒素ドナー（ＣＩＮＯＤ）；グルココルチコステロイド（局所、経口、筋肉内、静脈内、もしくは関節内経路による投与のいずれでもよい）；メトトレキセート、レフルノミド（ｌｅｆｌｕｎｏｍｉｄｅ）；ヒドロキシクロロキン、ｄ−ペニシラミン、オーラノフィン、または他の非経口もしくは経口金製剤；鎮痛剤；ジアセレイン（ｄｉａｃｅｒｅｉｎ）；ヒアルロン酸誘導体等の関節内治療薬；ならびにグルコサミン等の栄養補助食品と組み合わせてよい。
また、本発明の結合性メンバーは、癌を治療するための既存の治療剤と組み合わせて使用することもできる。組み合わせて使用するために好適な薬剤には、以下の薬剤が含まれる。
（ｉ）内科的腫瘍学において使用される抗増殖性／抗悪性腫瘍薬およびその組み合わせ、例えば、Ｇｌｅｅｖｅｃ（メシル酸イマチニブ）、アルキル化剤（例えば、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロランブシル、ブスルファン、およびニトロソ尿素）；代謝拮抗剤（例えば、葉酸拮抗剤、例えばフルオロピリミジン、例えば、５−フルオロウラシルおよびテガフール、ラルチトレキセド、メトトレキセート、シトシンアラビノシド、ヒドロキシ尿素、ゲムシタビン、およびパクリタキセル）；抗腫瘍性抗生物質（例えば、アントラサイクリン、例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、およびミトラマイシン）；抗分裂剤（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、およびビノレルビン、ならびにタキソイド（ｔａｘｏｉｄｓ）、例えば、タキソールおよびタキソテール）；およびトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エピポドフィロトキシン、例えば、エトポシドおよびテニポシド、アムサクリン、トポテカン、およびカンプトセシン）、
（ｉｉ）細胞増殖抑制剤、例えば、抗エストロゲン剤（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、およびヨードキシフェン（ｉｏｄｏｘｙｆｅｎｅ））、エストロゲン受容体下方制御因子（例えば、フルベストラント）、抗アンドロゲン剤（例えば、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、および酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアンタゴニストもしくはＬＨＲＨアゴニスト（例えば、ゴセレリン、ロイプロレリン（ｌｅｕｐｒｏｒｅｌｉｎ）、およびブセレリン）、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール、レトロゾール、ボラゾール（ｖｏｒａｚｏｌｅ）、およびエキセメスタン）、およびフィナステリド等の５α−レダクターゼ阻害剤、
（ｉｉｉ）癌細胞侵襲を阻害する薬剤（例えば、メタロプロテイナーゼ阻害剤、例えば、マリマスタット（ｍａｒｉｍａｓｔａｔ）およびウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能の阻害剤）、
（ｉｖ）成長因子機能の阻害剤、例えば、成長因子抗体、成長因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツズマブおよび抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤およびセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤、例えば、上皮細胞成長因子ファミリーの阻害剤（例えば、ＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤、例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ（ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）、ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ １０３３））、例えば、血小板由来成長因子ファミリーの阻害剤、および例えば肝細胞成長因子ファミリーの阻害剤、
（ｖ）血管新生阻害剤、例えば、血管内皮増殖因子の効果を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベバシズマブ（ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）、国際特許出願ＷＯ第９７／２２５９６号、ＷＯ第９７／３００３５号、ＷＯ第９７／３２８５６号およびＷＯ第９８／１３３５４号（これらのそれぞれはその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される化合物等の化合物、および他の機構で機能する化合物（例えば、リノミド（ｌｉｎｏｍｉｄｅ）、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤およびアンギオスタチン）、
（ｖｉ）血管損傷剤、例えば、コンブレタスタチン（ｃｏｍｂｒｅｔａｓｔａｔｉｎ）Ａ４、ならびに国際特許出願ＷＯ第９９／０２１６６号、ＷＯ第００／４０５２９号、ＷＯ第００／４１６６９号、ＷＯ第０１／９２２２４号、ＷＯ第０２／０４４３４号、およびＷＯ第０２／０８２１３号（これらのそれぞれはその全体が本明細書に組み込まれる）に開示される化合物、
（ｖｉｉ）アンチセンス治療薬、例えば、上で列記される標的に対するアンチセンス治療薬、例えば、ＩＳＩＳ ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス、
（ｖｉｉｉ）例えば、異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１もしくはＢＲＣＡ２等の異常遺伝子を置換するアプローチ、ＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ治療（ｇｅｎｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｏ−ｄｒｕｇ ｔｈｅｒａｐｙ）アプローチ、例えば、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼ、もしくは細菌性ニトロレダクターゼ酵素を使用するアプローチ、および多剤耐性遺伝子治療等の化学療法または放射線療法に対する患者の耐容性を高めるアプローチを含む、遺伝子治療アプローチ、ならびに
（ｉｘ）患者腫瘍細胞の免疫原性を高めるエクスビボおよびインビボアプローチ、例えば、サイトカイン、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４、または顆粒球マクロファージコロニー刺激因子のトランスフェクション、Ｔ細胞アレルギーを低下させるアプローチ、トランスフェクトされた免疫細胞、例えば、サイトカインでトランスフェクトされた樹状細胞を使用するアプローチ、サイトカインでトランスフェクトされた腫瘍細胞株を使用するアプローチ、および抗イディオタイプ抗体を使用するアプローチを含む、免疫療法アプローチ。
本発明の結合性メンバーおよび１つ以上の上記の追加の薬用成分は、医薬品の製造に使用され得る。該医薬品は、個体に対する単独または複合投与用であり得、したがって、結合性メンバーおよび追加の成分を複合調製物または単独調製物として含み得る。単独調製物を使用して、別々かつ連続した投与または同時投与を容易にし、異なる経路、例えば、経口および非経口投与による成分の投与を可能にし得る。
本発明に従って、提供される組成物は、哺乳類に投与され得る。投与は、通常、「治療有効量」で行われ、これは患者に利益を示すために十分である。このような利益は、少なくとも１つの症状の少なくとも改善であり得る。実際の投与量、ならびに投与の割合および経時変化は、治療されるべき性質および重症度、治療される具体的な哺乳類、個々の患者の臨床症状、障害の原因、組成物の送達部位、結合性メンバーのタイプ、投与方法、投与計画、および医師に公知の他の要因に依存する。治療の処方、例えば、投与量等の決定は、一般の開業医および他の医学博士の責任の範囲内であり、症状の重症度および／または治療すべき疾患の進行度に依存する。抗体の適切な用量は、当該技術分野において周知である（Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ Ｊ．Ａ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４７：６５９−６６４、Ｂａｇｓｈａｗｅ Ｋ．Ｄ．ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ ４：９１５−９２２）。投与される医薬品のタイプに応じて本明細書またはＰｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ Ｄｅｓｋ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（２００３）に示される具体的投与量が使用され得る。本発明の結合性メンバーの治療有効量または好適な用量は、そのインビトロ活性と動物モデルにおけるインビボ活性を比較することによって決定することができる。マウスおよび他の試験動物での有効量をヒトに対して外挿するための方法が公知である。厳密な用量は、幾つかの要因に依存し、これには、抗体が診断用であるか、予防用であるか、または治療用であるか、治療すべき領域のサイズおよび位置、抗体の厳密な性質（例えば、完全抗体、断片、またはダイアボディ）、および抗体に結合されている任意の検出可能な標識または他の分子の性質が含まれる。典型的な抗体用量は、全身適用では、１００μｇ〜１ｇの範囲であり、局所適用では、１μｇ〜１ｍｇの範囲である。最初に高負荷量を投与し、続いて、１回以上の低用量が投与され得る。典型的に、抗体は、完全抗体であり、例えば、ＩｇＧ１アイソタイプである。これは、成人患者の効果的な治療に対する用量であり、子供および乳児に対して比例的に調節され得、また、分子量に比例して他の抗体形態に応じて調節され得る。治療は、医師の裁量で、毎日、週２回、毎週、または毎月の間隔で反復してよい。治療は、皮下投与では、２〜４週毎であってよく、静脈内投与では、４〜８週毎であってよい。治療は、定期的であってよく、投与間の期間は、約２週間以上、例えば、約３週間以上、約４週間以上、または約月一回である。治療は、外科手術前および／または後に施してよく、かつ／または外科治療の解剖部位に直接投与または適用してよい。
本発明のＩＬ−６結合性メンバーは、ｓＩＬ−６Ｒａに対する抗体と比較して、用量および投与要件に関する利点を提供し得る。本明細書の他の箇所で記載されるように、疾患におけるＩＬ−６の循環レベルは、ｓＩＬ−６Ｒａの循環レベルよりかなり低い。したがって、ＩＬ−６結合性メンバーを使用すると、抗ＩＬ−６Ｒ結合性メンバーと対照的に、患者への各投与用に製造されるべき薬物の量がより少ない点で大きな利点を有する。また、抗ＩＬ６治療薬の用量が少なければ、低用量によって皮下注射ならびに静脈内（ｉ．ｖ．）注射が容易になる点において大きな利点があり得る。皮下投与は、投与あたりに必要とされる結合性メンバー、例えば、抗体分子の量によって制限され得ることが当業者に周知である。これは、皮膚の一部位に注射することができる容量によって皮下注射が制限されるためである。１．２ｍＬ以下の皮下注射容量が典型的に利用される。５０ｍｇ／ｍＬより高濃度で皮下注射用に結合性メンバーを製剤化することはますます困難であるため、この経路により１００ｍｇを超える用量は、通常、複数回の注射を必要とし、患者にとってより不快である。
また、低用量の抗ＩＬ−６治療薬を有するということは、全身的ｓＩＬ−６Ｒａと比較して、これはより高濃度であるため、全ての全身的ＩＬ−６を阻害するために、より低い「負荷」用量の抗体を必要とし得る。
追加の利益は、ＩＬ−６受容体というよりも、ＩＬ−６のターゲティングに関するものであり得、それは、ＩＬ−６Ｒａに対する結合性メンバーと比較して、本発明の結合性メンバーのさらなる利点である。
例えば、疾患においてＩＬ−６の循環レベルが、ｓＩＬ−６Ｒａの循環レベルよりかなり低いことを示す文献報告がある（Ｄｅｓｇｅｏｒｇｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９９７）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ ２４：１５１０、Ｙｏｋｏｔａ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ａｒｔｈ ＆ Ｒｈｅｕｍ ５２（３）：８１８−２５）。ｓＩＬ−６Ｒのレベルは、ＩＬ−６レベルよりかなり高いので、ＩＬ−６を中和するために必要とされる抗ＩＬ−６結合性メンバーの量と比較して、ｓＩＬ−６Ｒａを中和するためにはより多量の抗ｓＩＬ−６Ｒ結合性メンバーが必要とされ得る。ゆえに、抗受容体結合性メンバーが使用される場合と比較して、より低量の抗リガンド結合性メンバーが必要とされ得る。
ＩＬ−６受容体というよりも、ＩＬ−６リガンドのターゲティングにより、疾患におけるＩＬ−６のレベルを低減させ得るが、免疫応答の一部としてＩＬ−６が上方制御される感染時には、ＩＬ−６レベルの増加が依然として可能である。
Ｋａｗａｎｏら（Ｎａｔｕｒｅ（１９８８）３３２：８３）は、ＩＬ−６が、強力な成長因子であることを示し、また、患者から新たに単離された骨髄腫細胞がＩＬ−６を産生し、かつその受容体を発現することを示した。さらに、抗ＩＬ−６抗体は、骨髄腫細胞のインビトロ増殖を阻害する。これは、自己分泌ループが、ヒト骨髄腫の発癌において機能していることの直接的証拠である。その研究に続いて、Ｖａｎ Ｚａａｎｅｎら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．（１９９６）９８：１４４１−１４４８）は、抗ＩＬ−６リガンド抗体で処置された場合に、多発性骨髄腫患者でのＩＬ−６の産生が減少することを実証した。
多くの追加の研究で、他の細胞タイプ、例えば、平滑筋細胞（ＳＭＣ）（Ｋｌｏｕｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３（８）４５８３−９）、Ｕ３７３−ＭＧ星細胞腫細胞（Ｏｈ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６：２６９５−７０４）、３Ｔ３脂肪細胞（Ｆａｓｓｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，（２００３）Ｈｏｒｍ．Ｍｅｔａｂ．Ｒｅｓ．３５（３）１４７−５２）、ニューロン（Ｍａｒｚ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ ９５（６）３２５１−６）、内皮細胞（Ｍｏｄｕｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１００（１）２７５２−６）、およびカポジ肉腫細胞（Ｍｕｒａｋａｍｉ−Ｍｏｒｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９６）Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．７（１２）１６９７−７０３）において、ＩＬ−６が自己分泌フィードバックループに関与することが示されている。したがって、疾患において、抗ＩＬ６結合性メンバーを使用してＩＬ−６を阻害することにより、基礎的な疾患ＩＬ−６の産生を減少させることができる。
さらに、抗ＩＬ−６結合性メンバーは、体循環中のＩＬ−６に結合するが、これは治療するべき疾患の病理に関与する細胞の表面上の受容体を占有するために組織に浸透することを必要とするＩＬ−６受容体に対する結合性メンバーとは対照的である。
ＩＬ−６に対する結合性メンバーは、体循環中でＩＬ−６と平衡状態を形成し、障壁、例えば、滑膜を横切って勾配を生じさせる効果を有し、その関節から活性ＩＬ−６を除去し、かつ該結合性メンバーと不活性複合体を形成させる正味の効果を有する。その結果、ＩＬ−６結合性メンバーは即座の作用発現を示すことができ、投与レジメンは、ＩＬ−６Ｒ結合性メンバーと比較して異なり、かつ最適化がより容易である可能性があり得る。
ＩＬ−６シグナル伝達は、ＩＬ−６Ｒに対するＩＬ−６結合およびｇｐ１３０に対する該複合体の結合によって媒介される。ＩＬ−６とＩＬ−６Ｒａの結合が、ナノモル親和性（約５ｎＭ）での結合であり、かつＩＬ６：ＩＬ６Ｒ複合体とｇｐ１３０の結合が、ピコモル親和性での結合であることを考慮すると、ＩＬ−６を標的とする結合性メンバーは、ＩＬ−６結合に関して少量の競合に直面し、そのため、ＩＬ−６シグナル伝達を高い割合で抑制することができる。このことは、可溶性ＩＬ−６Ｒａを標的とし、かつＩＬ−６：ＩＬ−６Ｒａ複合体形成を妨げる結合性メンバーにも適用し得るが、ＩＬ−６Ｒａが膜結合型である場合、立体障害のせいで、抗ＩＬ−６Ｒａが、膜上に存在するＩＬ−６Ｒａに結合してそれを阻害することはより困難であり得る。
本発明は、障害、例えば、ＩＬ−６の異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる障害、ＩＬ−６受容体の異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる障害、自己免疫障害、炎症性障害、増殖性障害、感染、またはそれらの１つ以上の症状を、有効量の本発明の組成物を対象に投与することによって、予防する、治療する、および／または管理する方法を提供する。種々の送達系は、周知であり、本発明の組成物または予防薬もしくは治療剤を投与するために使用することができる。本発明の組成物を投与する方法または療法（例えば、予防薬または治療剤）としては、非経口投与（例えば、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、神経周囲、および皮下）、硬膜外投与、局所投与、および粘膜投与（例えば、鼻腔内および経口経路であるが、これらに限定されない）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、本発明の組成物は、筋肉内、静脈内、または皮下に投与される。一実施形態において、本発明の組成物は、皮下投与される。製剤は、任意の簡便な経路、例えば、注入もしくは静脈内ボーラスによって、上皮もしくは皮膚粘膜内面（例えば、口腔粘膜、直腸、および腸粘膜等）を介した吸収によって投与され得、他の生理活性薬剤と一緒に投与され得る。投与は、全身または局所であり得る。
本発明はまた、本発明の組成物が、抗体（その抗体断片を含む）の分量を示すアンプルまたはサシェ剤等の密封されている容器中に包装されることを提供する。一実施形態において、本発明の組成物は、抗体（その抗体断片を含む）の分量および濃度を示す密封されている容器中にある。一実施形態において、本発明の組成物は、密封されている容器中に供給され、約１ｍＬ、約２ｍＬ、約３ｍＬ、約４ｍＬ、約５ｍＬ、約６ｍＬ、約７ｍＬ、約８ｍＬ、約９ｍＬ、約１０ｍＬ、約１５ｍＬ、または約２０ｍＬの分量で、約１０ｍｇ／ｍＬ、約１５ｍｇ／ｍＬ、約２０ｍｇ／ｍＬ、約３０ｍｇ／ｍＬ、約４０ｍｇ／ｍＬ、約５０ｍｇ／ｍＬ、約６０ｍｇ／ｍＬ、約７０ｍｇ／ｍＬ、約８０ｍｇ／ｍＬ、約９０ｍｇ／ｍＬ、約１００ｍｇ／ｍＬ、約１５０ｍｇ／ｍＬ、約１７５ｍｇ／ｍＬ、約２００ｍｇ／ｍＬ、約２５０ｍｇ／ｍＬ、または約３００ｍｇ／ｍＬのＩＬ−６に特異的に結合する抗体（その抗体断片を含む）を含む。本発明の特定の実施形態において、本発明の組成物は、密封されている容器中に供給され、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの、静脈注射用のＩＬ−６に特異的に結合する抗体（その抗体断片を含む）（例えば、抗体１８Ｅであるが、これに限定されない）、ならびに、少なくとも約１５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約８０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１５０ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約１７５ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２００ｍｇ／ｍＬ、少なくとも約２５０ｍｇ／ｍＬ、または少なくとも約３００ｍｇ／ｍＬの、反復皮下投与用のＩＬ−６に特異的に結合する抗体（例えば、抗体１８Ｅであるが、これに限定されない）を含む。
ＩＬ−６の異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる疾患もしくは障害、ＩＬ−６受容体またはそれらの１つ以上のサブユニットの異常な発現および／もしくは活性と関連する、またはこれらによって特徴付けられる疾患もしくは障害、自己免疫疾患、自己免疫疾患、移植片拒絶反応、移植片対宿主拒絶反応、またはそれらの１つ以上の症状を予防する、治療する、および／または管理するのに有効である本発明の組成物の量は、当該技術分野に公知の、または本明細書中に記載の標準的な臨床技術によって決定することができる。本組成物に利用される正確な用量はまた、投与経路、および炎症性障害、または自己免疫障害の重症度に依存しており、医師の判断およびそれぞれの患者の状況に応じて決定しなければならない。有効量は、インビトロまたは動物モデルの試験系で得た用量反応曲線から外挿してもよい。
本発明によって包含される抗体の組成物に関して、患者に投与される用量は、患者のキログラム（ｋｇ）での体重に、ｍｇ／ｋｇでの投与される用量を乗じることによって算出することができる。次いで、与えられる必要とされる容量（ｍＬ）は、必要とされるｍｇでの用量を、抗体製剤の濃度で除することによって決定される。最終的に算出された必要とされる容量は、本発明の抗体製剤を投与するための注射器に必要な数のバイアルの内容物をプールすることによって得られる。最終的に算出された必要とされる容量は、薬物を投与するための注射器に必要な数のバイアルの内容物をプールすることによって得られる。部位当たり最大容量の２．０ｍＬの抗体製剤を注射することができる。この用量（ｍＬ）は、以下の式を用いて算出することができる：用量（ｍＬ）＝［志願者の体重］（ｋｇ）×［用量］ｍｇ／ｋｇ÷１００ｍｇ／ｍＬの抗体製剤。本発明の抗体は、ヒトの体内で延長した半減期を有する。ゆえに、低用量の本発明の抗体および投与頻度の低減が、大抵、可能である。さらに、本発明の組成物の投与の投与量、容量、および頻度は、組成物中の抗体の濃度を増大させる、抗体の親和性および／もしくは結合活性を増強することによって減少させることができる。
特定の実施形態において、患者に投与される投与量は、患者のキログラム（ｋｇ）での体重に、ｍｇ／ｋｇでの投与される用量を乗じることによって算出される。次いで、与えられる必要とされる容量（ｍＬ）は、必要とされるｍｇでの用量を、製剤（１００ｍｇ／ｍＬ）中の抗体（その抗体断片を含む）の濃度で除することによって決定される。最終的に算出された必要とされる容量は、薬物を投与するための注射器に必要な数のバイアルの内容物をプールすることによって得られる。製剤において、部位当たり最大容量の２．０ｍＬの抗体（その抗体断片を含む）を注射することができる。
特定の実施形態において、本発明の組成物において、０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ／週、１〜１５ｍｇ／ｋｇ／週、２〜８ｍｇ／週、３〜７ｍｇ／ｋｇ／週、または４〜６ｍｇ／ｋｇ／週の、ＩＬ−６に特異的に結合する抗体（その抗体断片を含む）（例えば、１抗体１８Ｅであるが、これに限定されない）が、炎症性障害または自己免疫障害に罹患している対象に投与される。別の実施形態において、対象は、１つ以上の用量の予防的もしくは治療有効量の本発明の組成物が投与され、ここで、この予防的もしくは治療有効量は、それぞれの用量に対して同一ではない。
一実施形態において、本発明の組成物は、所望のレベル（例えば、約０．１〜１００μｇ／ｍＬの範囲）で、ＩＬ−６に特異的な抗体の血漿濃度を維持する投与レジメンにおいて投与され、これは、ＩＬ−６活性を連続的に遮断する。特定の実施形態において、抗体の血漿濃度は、約０．２μｇ／ｍＬ、約０．５μｇ／ｍＬ、約１μｇ／ｍＬ、約２μｇ／ｍＬ、約３μｇ／ｍＬ、約４μｇ／ｍＬ、約５μｇ／ｍＬ、約６μｇ／ｍＬ、約７μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約９μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１５μｇ／ｍＬ、約２０μｇ／ｍＬ、約２５μｇ／ｍＬ、約３０μｇ／ｍＬ、約３５μｇ／ｍＬ、約４０μｇ／ｍＬ、約４５μｇ／ｍＬ、または約５０μｇ／ｍＬで維持される。対象における望ましい血漿濃度は、疾患もしくは障害の性質、疾患もしくは障害の重症度、および対象の病態が挙げられるが、これらに限定されない、幾つかの要因に応じて異なる。このような投与レジメンは、特に、慢性疾患または障害の予防、治療、および／または管理において、有益である。
特定の実施形態において、ＩＬ−６に特異的な共役抗体（その抗体断片を含む）を含む本発明の組成物は、断続的に投与される。本明細書で使用される、「共役抗体または抗体断片」とは、異種ペプチド、ポリペプチド、別の抗体（その抗体断片を含む）、マーカー配列、診断用薬剤、ポリマー、アルブミン、および固体支持体が挙げられるが、これらに限定されない、別の部分に共役されるか、または融合される抗体（その抗体断片を含む）を指す。
別の実施形態において、ヒト対象は、本発明の組成物において、１つ以上の用量の予防的もしくは治療有効量のＩＬ−６に特異的に結合する抗体（例えば、抗体１８Ｅであるが、これに限定されない）が投与され、本発明の組成物において、該対象に投与される予防的もしくは治療有効量の抗体の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、約０．０１μｇ／ｋｇ、約０．０２μｇ／ｋｇ、約０．０４μｇ／ｋｇ、約０．０５μｇ／ｋｇ、約０．０６μｇ／ｋｇ、約０．０８μｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ、約０．２μｇ／ｋｇ、約０．２５μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ、約０．７５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ、約４０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約５５μｇ／ｋｇ、約６０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ、約７０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約８０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ、約９０μｇ／ｋｇ、約９５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、または約１２５μｇ／ｋｇで増加される。
別の実施形態において、対象（例えば、ヒト）は、本発明の組成物において、１つ以上の用量の予防的もしくは治療有効量のＩＬ−６に特異的に結合する抗体（例えば、抗体１８Ｅであるが、これに限定されない）が投与され、本発明の組成物において、該対象に投与される予防的もしくは治療有効量の抗体の用量は、治療が進行するにつれて、例えば、約０．０１μｇ／ｋｇ、約０．０２μｇ／ｋｇ、約０．０４μｇ／ｋｇ、約０．０５μｇ／ｋｇ、約０．０６μｇ／ｋｇ、約０．０８μｇ／ｋｇ、約０．１μｇ／ｋｇ、約０．２μｇ／ｋｇ、約０．２５μｇ／ｋｇ、約０．５μｇ／ｋｇ、約０．７５μｇ／ｋｇ、約１μｇ／ｋｇ、約１．５μｇ／ｋｇ、約２μｇ／ｋｇ、約４μｇ／ｋｇ、約５μｇ／ｋｇ、約１０μｇ／ｋｇ、約１５μｇ／ｋｇ、約２０μｇ／ｋｇ、約２５μｇ／ｋｇ、約３０μｇ／ｋｇ、約３５μｇ／ｋｇ、約４０μｇ／ｋｇ、約４５μｇ／ｋｇ、約５０μｇ／ｋｇ、約５５μｇ／ｋｇ、約６０μｇ／ｋｇ、約６５μｇ／ｋｇ、約７０μｇ／ｋｇ、約７５μｇ／ｋｇ、約８０μｇ／ｋｇ、約８５μｇ／ｋｇ、約９０μｇ／ｋｇ、約９５μｇ／ｋｇ、約１００μｇ／ｋｇ、または約１２５μｇ／ｋｇで減少される。
抗体半減期
ある実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＬ−６抗体の半減期は、少なくとも約１０日間である。ある実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＬ−６抗体の平均半減期は、少なくとも約２０〜４０日間の範囲、２５〜４０日間の範囲、２６〜４０日間の範囲、２０〜３０日間の範囲、２５〜３０日間の範囲、２６〜３０日間の範囲、または２６〜２９日間の範囲である。なおさらなる実施形態において、本発明の組成物および方法の抗ＩＣＯＳ抗体の半減期は、約５０日間までであり得る。ある実施形態において、本発明の組成物および方法の抗体の半減期は、当該技術分野において公知の方法によって延長させることができる。同様に、このような延長は、抗体組成物の投与の量および／または頻度を低減させることができる。改善されたインビボ半減期を有する抗体およびそれらを調製するための方法は、米国特許第６，２７７，３７５号、ならびに国際公開ＷＯ第９８／２３２８９号およびＷＯ第９７／３４６１号に開示されている。
また、抗ＩＬ−６抗体のインビボでの血清循環は、高分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の不活性ポリマー分子を、多機能リンカーを用いて、または用いないで、ＰＥＧと抗体のＮもしくはＣ末端との部位特異的共役を介して、またはリシン残基に存在するε−アミノ基を介して、抗体と結合させることによって、延長させることができる。生物学的活性の低下を最小限に抑える直鎖または分枝鎖ポリマー誘導体化が、使用される。共役の程度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析により綿密にモニターして、ＰＥＧ分子と抗体との適切な共役を確保することができる。未反応ＰＥＧは、サイズ排除またはイオン交換クロマトグラフィーにより、抗体−ＰＥＧ共役から分離することができる。ＰＥＧ誘導体化抗体は、結合活性ならびにインビボ効力について、当業者に公知の方法を用いて、例えば、本明細書中に記載のイムノアッセイによって、試験することができる。
さらに、本発明の組成物および方法の抗体を、抗体をインビボでより安定にする、あるいはインビボにおける半減期をより長くするために、アルブミンに共役させることができる。その技術は、当分野において周知であり、例えば、国際公開ＷＯ第９３／１５１９９号、ＷＯ第９３／１５２００号、ＷＯ第０１／７７１３７号、ならびに欧州特許ＥＰ第４１３，６２２号を参照されたく、これらの全ては、参照により本明細書に組み込まれる。
さらに、抗体におけるインビボ半減期の増加をもたらす変異Ｆｃ領域が、記載されている（米国特許公開ＵＳ第２００３／０１９０３１１ Ａ１号を参照のこと）。本発明の組成物および方法と組み合わせた延長したインビボ半減期を有するＦｃ変異体の使用が企図される。一実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、インビボ半減期の増加を有する変異Ｆｃ領域を含む。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、残基２５２、２５４、および２５６からなる群から選択されるアミノ酸残基の少なくとも１つの置換を含む変異Ｆｃ領域を含み、該アミノ酸残基位置は、ＥＵ慣例に従って決定される。特定の実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸置換を含む変異Ｆｃ領域を含み、該アミノ酸残基位置は、ＥＵ慣例に従って決定される。さらなる実施形態において、本発明の抗ＩＬ−６抗体は、２５２位でＹ、２５４位でＴ、および２５６位でＥからなる群から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基を含む変異Ｆｃ領域を含み、該アミノ酸残基位置は、ＥＵ慣例に従って決定される。
Ｆｃ変異体
本発明は、変異Ｆｃ領域を含む抗ＩＬ−６抗体を提供する。すなわち、天然に存在しないＦｃ領域、例えば、１つ以上の天然に存在しないアミノ酸残基を含むＦｃ領域である。また、アミノ酸の欠失、付加、および／または修飾を含むＦｃ領域は、本発明の変異Ｆｃ領域によって包含される。
本明細書に使用されるＦｃ領域は、第１の定常領域免疫グロブリンドメインを含まない、抗体の定常領域を含むポリペプチドを含む。ゆえに、Ｆｃとは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびＩｇＥおよびＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、およびこれらのドメインに柔軟なヒンジＮ末端を指す。ＩｇＡおよびＩｇＭでは、Ｆｃは、Ｊ鎖を含み得る。ＩｇＧでは、Ｆｃは、免疫グロブリンドメインＣガンマ２およびＣガンマ３（Ｃγ２およびＣγ３）、およびＣガンマ１（Ｃγ１）とＣガンマ２（Ｃγ２）との間のヒンジを含む。Ｆｃ領域の境界は、異なり得るが、ヒトＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域は、通常、残基Ｃ２２６またはＰ２３０をそのカルボキシル末端に含まれるように定義され、番号付けは、Ｋａｂａｔら（１９９１，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ，ＶＡ）のＥＵインデックスに従う。「カバットに記載のＥＵインデックス」とは、Ｋａｂａｔらに記載される（上記参照）、ヒトＩｇＧ１ＥＵ抗体の残基の番号付けを指す。Ｆｃとは、単離するこの領域、または抗体、抗体断片またはＦｃ融合タンパク質におけるこの領域を指し得る。Ｆｃ変異タンパク質は、天然に存在しないＦｃの変異体である、変異Ｆｃ領域を含むタンパク質が挙げられるが、これに限定されない、Ｆｃ領域を含む抗体、Ｆｃ融合、または任意のタンパク質、またはタンパク質ドメインであり得る。注記：幾つかのＦｃ位置で多型が観察されており、これには、カバット２７０、２７２、３１２、３１５、３５６、および３５８が挙げられるが、これらに限定されず、ゆえに、提示される配列と先行技術中の配列との間にわずかな差異が存在することもある。
本発明は、同様の分子（例えば、野生型Ｆｃ領域を有することを除いて同一のアミノ酸配列を有するタンパク質）と比較して、Ｆｃリガンド（例えば、Ｆｃ受容体、Ｃ１ｑ）に対する改変された結合特性を有するＦｃ変異タンパク質を包含する。結合特性の例としては、結合特異性、平衡解離定数（ＫＤ）、解離および会合速度（それぞれ、ｋｏｆｆおよびｋｏｎ）、結合親和性、および／または結合活性が含まれるが、これらに限定されない。一般に、低いＫＤを有する結合分子（例えば、抗体等のＦｃ変異体タンパク質）が、高いＫＤを有する結合分子より好ましいことが理解されよう。しかしながら、場合によっては、ｋｏｎまたはｋｏｆｆの値が、ＫＤの値よりさらに関連性があり得る。当業者は、所与の抗体適用に関して、どの動態パラメータが最も重要であるかを決定することができる。
Ｆｃドメインのそのリガンドに対する親和性および結合特性は、Ｆｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、ＦｃγＲに対するＦｃ領域の特異的結合を決定するための当該技術分野において公知の種々のインビトロアッセイ法（生化学または免疫学ベースのアッセイ）によって決定することができ、これには、平衡法（例えば、酵素結合免疫吸収アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））、または速度論（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）解析）、および他の方法、例えば、間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動、およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）が含まれるが、これらに限定されない。これらのおよび他の方法では、色素生産、蛍光、発光、または同位体標識が含まれるが、これらに限定されない、検査される１つ以上の成分に対する標識を利用し、かつ／または種々の検出方法を用いられ得る。結合親和性および速度論についての詳細な説明は、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ−Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）に見出すことができ、抗体免疫原相互作用に焦点を当てる。
一実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、同等の分子と比べて１つ以上のＦｃリガンドに対する増強された結合性を有する。別の実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、同等の分子の親和性より、少なくとも２倍、または少なくとも３倍、または少なくとも５倍、または少なくとも７倍、または少なくとも１０倍、または少なくとも２０倍、または少なくとも３０倍、または少なくとも４０倍、または少なくとも５０倍、または少なくとも６０倍、または少なくとも７０倍、または少なくとも８０倍、または少なくとも９０倍、または少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高いＦｃリガンドに対する親和性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、Ｆｃ受容体に対する増強された結合性を有する。特定の実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、Ｆｃ受容体ＦｃＲｎに対する増強された結合性を有する。
Ｆｃ領域を含むタンパク質の血清半減期は、ＦｃＲｎに対するＦｃ受容体の結合親和性を増加することによって増加され得る。一実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、同等の分子と比べて増強された血清半減期を有する。
一実施形態において、本発明は、組成物を提供し、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２３４、２３５、２３６、２３７、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２５１、２５２、２５４、２５５、２５６、２６２、２６３、２６４、２６５、２６６、２６７、２６８、２６９、２７９、２８０、２８４、２９２、２９６、２９７、２９８、２９９、３０５、３１３、３１６、３２５、３２６、３２７、３２８、３２９、３３０、３３２、３３３、３３４、３３９、３４１、３４３、３７０、３７３、３７８、３９２、４１６、４１９、４２１、４４０、および４４３からなる群から選択される１つ以上の位置で、Ｆｃ領域が、天然に存在しないアミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に公知の追加および／または代替の位置で天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開ＷＯ第０１／５８９５７号、ＷＯ第０２／０６９１９号、ＷＯ第０４／０１６７５０号、ＷＯ第０４／０２９２０７号、ＷＯ第０４／０３５７５２号、ＷＯ第０４／０７４４５５号、ＷＯ第０４／０９９２４９号、ＷＯ第０４／０６３３５１号、ＷＯ第０５／０７０９６３号、ＷＯ第０５／０４０２１７号、ＷＯ第０５／０９２９２５号、およびＷＯ第０６／０２０１１４号を参照のこと）。
特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体タンパク質組成物を提供し、該Ｆｃ領域は、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｎ、２３４Ｑ、２３４Ｔ、２３４Ｈ、２３４Ｙ、２３４Ｉ、２３４Ｖ、２３４Ｆ、２３５Ａ、２３５Ｄ、２３５Ｒ、２３５Ｗ、２３５Ｐ、２３５Ｓ、２３５Ｎ、２３５Ｑ、２３５Ｔ、２３５Ｈ、２３５Ｙ、２３５Ｉ、２３５Ｖ、２３５Ｆ、２３６Ｅ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２３９Ｎ、２３９Ｑ、２３９Ｆ、２３９Ｔ、２３９Ｈ、２３９Ｙ、２４０Ｉ、２４０Ａ、２４０Ｔ、２４０Ｍ、２４１Ｗ、２４１Ｌ、２４１Ｙ、２４１Ｅ、２４１Ｒ、２４３Ｗ、２４３Ｌ、２４３Ｙ、２４３Ｒ、２４３Ｑ、２４４Ｈ、２４５Ａ、２４７Ｌ、２４７Ｖ、２４７Ｇ、２５１Ｆ、２５２Ｙ、２５４Ｔ、２５５Ｌ、２５６Ｅ、２５６Ｍ、２６２Ｉ、２６２Ａ、２６２Ｔ、２６２Ｅ、２６３Ｉ、２６３Ａ、２６３Ｔ、２６３Ｍ、２６４Ｌ、２６４Ｉ、２６４Ｗ、２６４Ｔ、２６４Ｒ、２６４Ｆ、２６４Ｍ、２６４Ｙ、２６４Ｅ、２６５Ｇ、２６５Ｎ、２６５Ｑ、２６５Ｙ、２６５Ｆ、２６５Ｖ、２６５Ｉ、２６５Ｌ、２６５Ｈ、２６５Ｔ、２６６Ｉ、２６６Ａ、２６６Ｔ、２６６Ｍ、２６７Ｑ、２６７Ｌ、２６８Ｅ、２６９Ｈ、２６９Ｙ、２６９Ｆ、２６９Ｒ、２７０Ｅ、２８０Ａ、２８４Ｍ、２９２Ｐ、２９２Ｌ、２９６Ｅ、２９６Ｑ、２９６Ｄ、２９６Ｎ、２９６Ｓ、２９６Ｔ、２９６Ｌ、２９６Ｉ、２９６Ｈ、２６９Ｇ、２９７Ｓ、２９７Ｄ、２９７Ｅ、２９８Ｈ、２９８Ｉ、２９８Ｔ、２９８Ｆ、２９９Ｉ、２９９Ｌ、２９９Ａ、２９９Ｓ、２９９Ｖ、２９９Ｈ、２９９Ｆ、２９９Ｅ、３０５Ｉ、３１３Ｆ、３１６Ｄ、３２５Ｑ、３２５Ｌ、３２５Ｉ、３２５Ｄ、３２５Ｅ、３２５Ａ、３２５Ｔ、３２５Ｖ、３２５Ｈ、３２７Ｇ、３２７Ｗ、３２７Ｎ、３２７Ｌ、３２８Ｓ、３２８Ｍ、３２８Ｄ、３２８Ｅ、３２８Ｎ、３２８Ｑ、３２８Ｆ、３２８Ｉ、３２８Ｖ、３２８Ｔ、３２８Ｈ、３２８Ａ、３２９Ｆ、３２９Ｈ、３２９Ｑ、３３０Ｋ、３３０Ｇ、３３０Ｔ、３３０Ｃ、３３０Ｌ、３３０Ｙ、３３０Ｖ、３３０Ｉ、３３０Ｆ、３３０Ｒ、３３０Ｈ、３３２Ｄ、３３２Ｓ、３３２Ｗ、３３２Ｆ、３３２Ｅ、３３２Ｎ、３３２Ｑ、３３２Ｔ、３３２Ｈ、３３２Ｙ、３３２Ａ、３３９Ｔ、３７０Ｅ、３７０Ｎ、３７８Ｄ、３９２Ｔ、３９６Ｌ、４１６Ｇ、４１９Ｈ、４２１Ｋ、４４０Ｙ、および４３４Ｗからなる群から選択される少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸残基を含む。任意に、Ｆｃ領域は、当業者に公知の追加および／または代替の天然に存在しないアミノ酸残基を含み得る（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第６，２７７，３７５号、第６，７３７，０５６号、ＰＣＴ特許公開ＷＯ第０１／５８９５７号、ＷＯ第０２／０６９１９号、ＷＯ第０４／０１６７５０号、ＷＯ第０４／０２９２０７号、ＷＯ第０４／０３５７５２号、およびＷＯ第０５／０４０２１７号を参照のこと）。
別の実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体タンパク質組成物を提供し、該Ｆｃ領域は、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２３９、３３０、および３３２からなる群から選択される１つ以上の位置で、少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体タンパク質製剤を提供し、該Ｆｃ領域は、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含む。任意に、該Ｆｃ領域は、さらに、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２５２、２５４、および２５６からなる群から選択される１つ以上の位置で、追加の天然に存在しないアミノ酸を含み得る。特定の実施形態において、本発明は、Ｆｃ変異体タンパク質製剤を提供し、該Ｆｃ領域は、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２３９Ｄ、３３０Ｌ、および３３２Ｅからなる群から選択される少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸を含み、１つ以上の位置で少なくとも１つの天然に存在しないアミノ酸は、カバットに記載のＥＵインデックスによって番号付けされた場合、２５２Ｙ、２５４Ｔ、および２５６Ｅからなる群から選択される。
一実施形態において、本発明のＦｃ変異体は、Ｇｈｅｔｉｅ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１５：６３７−４０、Ｄｕｎｃａｎ ｅｔ ａｌ，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：５６３−５６４、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４７：２６５７−２６６２、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ，１９９２，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：５３−５９、Ａｌｅｇｒｅ ｅｔ ａｌ，１９９４，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ５７：１５３７−１５４３、Ｈｕｔｃｈｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ９２：１１９８０−１１９８４、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，１９９５，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ．４４：１１１−１１７、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｆａｓｅｂ Ｊ ９：１１５−１１９、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ５４：１０１−１０４、Ｌｕｎｄ ｅｔ ａｌ，１９９６，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５７：４９６３−４９６９、Ａｒｍｏｕｒ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２９：２６１３−２６２４、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：４１７８−４１８４、Ｒｅｄｄｙ ｅｔ ａｌ，２０００，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６４：１９２５−１９３３、Ｘｕ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００：１６−２６、Ｉｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １６６：２５７１−２５７５、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７６：６５９１−６６０４、Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７−６５、Ｐｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ ３０：４８７−４９０）、米国特許第５，６２４，８２１号、第５，８８５，５７３号、第５，６７７，４２５号、第６，１６５，７４５号、第６，２７７，３７５号、第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第５，６２４，８２１号、第５，６４８，２６０号、第６，５２８，６２４号、第６，１９４，５５１号、第６，７３７，０５６号、第６，８２１，５０５号、第６，２７７，３７５号、米国特許公開第２００４／０００２５８７号、およびＰＣＴ公開ＷＯ第９４／２９３５１号、ＷＯ第９９／５８５７２号、ＷＯ第００／４２０７２号、ＷＯ第０２／０６０９１９号、ＷＯ第０４／０２９２０７号、ＷＯ第０４／０９９２４９号、ＷＯ第０４／０６３３５１号に開示されているもののような、他の公知のＦｃ変異体と組み合わせられ得る。欠失、付加、および／または修飾を含むＦｃ領域もまた、本発明によって包含される。Ｆｃドメインのさらに他の修飾／置換／付加／欠失は、当業者には、容易に明らかであろう。
天然に存在しないＦｃ領域を作製するための方法は、当該技術分野において公知である。例えば、アミノ酸置換および／または欠失は、部位特異的突然変異誘発（Ｋｕｎｋｅｌ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：４８８−４９２（１９８５））、ＰＣＲ突然変異誘発（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ“ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ｐｐ．１７７−１８３（１９９０））、およびカセット突然変異誘発（Ｗｅｌｌｓ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ３４：３１５−３２３（１９８５））が含まれるが、これらに限定されない、突然変異誘発法によって作製することができる。好ましくは、部位特異的突然変異誘発は、重複伸長ＰＣＲ法によって実施される（Ｈｉｇｕｃｈｉ，ｉｎ “ＰＣＲ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ＤＮＡ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ”，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．６１−７０（１９８９））。また、重複伸長ＰＣＲ（Ｈｉｇｕｃｈｉ、同書）の技術を使用して、任意の所望の突然変異（群）を標的配列（出発ＤＮＡ）に導入することもできる。例えば、重複伸長法のＰＣＲの第１ラウンドは、外部プライマー（プライマー１）と内部突然変異誘発プライマー（プライマー３）を用い、また別途、第２の外部プライマー（プライマー４）と内部プライマー（プライマー２）を用いて、標的配列を増幅することと、２つのＰＣＲセグメント（セグメントＡおよびＢ）を得ることと、を含む。内部突然変異誘発プライマー（プライマー３）は、所望の突然変異（群）を指定する、標的配列に対するミスマッチを含有するように設計される。ＰＣＲの第２ラウンドでは、２つの外部プライマー（プライマー１および４）を用いるＰＣＲによって、ＰＣＲの第１ラウンドの産物（セグメントＡおよびＢ）を増幅する。得られる完全長ＰＣＲセグメント（セグメントＣ）を制限酵素で消化し、得られる制限酵素断片を適切なベクターにクローニングする。突然変異誘発の第１ステップとして、出発ＤＮＡ（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、抗体、または単にＦｃ領域をコードする）を、突然変異誘発ベクターに作動可能にクローニングする。プライマーは、所望のアミノ酸置換を反映するように設計される。変異Ｆｃ領域の生成に有用な他の方法は、当該技術分野において公知である（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、第５，８８５，５７３号、第５，６７７，４２５号、第６，１６５，７４５号、第６，２７７，３７５号、第５，８６９，０４６号、第６，１２１，０２２号、第５，６２４，８２１号、第５，６４８，２６０号、第６，５２８，６２４号、第６，１９４，５５１号、第６，７３７，０５６号、第６，８２１，５０５号、第６，２７７，３７５号、米国特許公開第２００４／０００２５８７号およびＰＣＴ公開ＷＯ第９４／２９３５１号、ＷＯ第９９／５８５７２号、ＷＯ第００／４２０７２号、ＷＯ第０２／０６０９１９号、ＷＯ第０４／０２９２０７号、ＷＯ第０４／０９９２４９号、ＷＯ第０４／０６３３５１号を参照のこと）。
幾つかの実施形態において、Ｆｃ変異体タンパク質は、１つ以上の改変されたグリコフォーム、すなわち、Ｆｃ領域を含む分子に共有結合している炭水化物組成物を含む。改変されたグリコフォームは、種々の目的のために有用であり、これには、エフェクター機能の増強または低減が含まれるが、これらに限定されない。改変されたグリコフォームは、当業者に公知の任意の方法、例えば、改変された、または変異発現菌株を使用することによって、１つ以上の酵素、例えば、ＤＩ Ｎ−アセチルグルコサミン転移酵素ＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）との共発現によって、種々の生物もしくは種々の生物由来の細胞株中でＦｃ領域を含む分子を発現させることによって、またはＦｃ領域を含む分子が発現された後に炭水化物（群）を修飾することによって、作製され得る。改変されたグリコフォームを作製するための方法は、当該技術分野において公知であり、Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ，１９９９，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １７：１７６−１８０、Ｄａｖｉｅｓ ｅｔ ａｌ．，２００１７ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ Ｂｉｏｅｎｇ ７４：２８８−２９４、Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ，２００２，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７７：２６７３３−２６７４０、Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７８：３４６６−３４７３）米国特許第６，６０２，６８４号、米国出願第１０／２７７，３７０号、米国出願第１０／１１３，９２９号、ＰＣＴ ＷＯ第００／６１７３９Ａ１号、ＰＣＴ ＷＯ第０１／２９２２４６Ａ１号、ＰＣＴ ＷＯ第０２／３１１１４０Ａ１、ＰＣＴ ＷＯ第０２／３０９５４Ａ１号、Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）テクノロジー（Ｂｉｏｗａ，Ｉｎｃ．Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化改変テクノロジー（ＧＬＹＣＡＲＴ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ＡＧ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）が含まれるが、これらに限定されない。例えば、ＷＯ第０００６１７３９号、ＥＡ第０１２２９１２５号、ＵＳ第２００３０１１５６１４号、Ｏｋａｚａｋｉ ｅｔ ａｌ．，２００４，ＪＭＢ，３３６：１２３９−４９を参照のこと。
本発明は、ここで、以下の実施例を参照して記載される。これらの実施例は、例示的な目的のみで提供され、本発明は、これらの実施例に制限されるものではないが、むしろ、本明細書に提供される教示の結果として明白である任意かつ全ての変形物を包含するように解釈されるものとする。
実施例１．抗ＩＬ−６抗体の単離
本明細書中に記載の本発明を実施するために使用され得る抗体１８および他の抗ＩＬ−６抗体の単離の詳細な説明は、ＰＣＴ公開ＷＯ第２００８／０６５３７８号に提供される。簡単に言えば、抗体１８の前駆体は、標的として組換えヒトＩＬ−６を用いて、ファージディスプレイライブラリースクリーニングを通して単離された。前駆体は、幾つかの高親和性ヒト抗ＩＬ−６抗体を生成するために、親和性最適化に供された。これらの抗体の特徴付けは、ＰＣＴ公開ＷＯ第２００８／０６５３７８号に記載されている。抗体１８は、ＩＬ−６Ｒに結合するＩＬ−６を遮断することができる。抗体１８は、ヒトおよびカニクイザルＩＬ−６に結合するが、ネズミ、ラット、またはイヌ由来のＩＬ−６に結合しない。抗体１８は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイの１０ｐＭ 検出レベルよりも高い親和性を有するヒトＩＬ−６に結合する。ヒトＩＬ−６に対する抗体１８の親和性は、ＴＦ−１細胞増殖アッセイを用いて、０．４０ｐＭ（９５％ ＣＩ ０．１２ｐＭ〜０．６９ｐＭ）と推定された。
実施例２．半減期の増加を有する抗ＩＬ−６抗体
２．１ Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を有するＦｃ領域を含む変異体抗ＩＬ−６ ＩｇＧ１抗体の生成
抗体１８をコードする発現ベクターを、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換をＦｃ領域に導入するために、標準的な実験室方式を用いて、修飾した。Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を含む修飾抗体１８は、以後、抗体１８Ｅまたは１８Ｅと称される。
抗ＩＬ６抗体の重鎖および軽鎖をコードするポリヌクレオチドは、核酸配列最適化に供され得る。配列最適化プロセスの最終目標は、可能な最高効率で、転写および翻訳されるコーディング領域を作成することである。配列最適化は、（ｉ）コドン使用最適化、（ｉｉ）Ｇ／Ｃ含量適応、（ｉｉｉ）内部スプライシング部位および未熟ポリアデニル化部位（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎ ｓｉｔｅｓ）の排除、（ｉｖ）安定なＲＮＡ二次構造の破壊、（ｖ）直接反復配列の排除、（ｖｉ）宿主細胞転写物との安定なｄｓＲＮＡを形成し得る配列の排除、（ｖｉｉ）宿主細胞ミクロＲＮＡにより標的とされる配列の排除、および（ｖｉｉｉ）ＲＮＡ安定化およびＲＮＡ転位シグナルの導入、の組み合わせによって達成される。詳細な配列最適化法は、ＷＯ第２００４０５９５５６Ａ２号、ＷＯ第２００６０１５７８９Ａ２号、Ｂｒａｄｅｌ−Ｔｒｅｔｈｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １１１：１４５−５６（２００３），Ｖａｌｅｎｃｉｋ ＆ ＭｃＤｏｎａｌｄ，Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ｒｅｓ．．３：２６９−７５（２００１）に記載されている。代替として、配列は、商業供給元（例えば、ＧＥＮＥＡＲＴ Ｉｎｃ．）によって最適化され得る。
抗体１８ＥのＶＨ、ＶＬ、重鎖、および軽鎖をコードするヌクレオチド配列は、本明細書中に記載の方法に従って、最適化された。この１８ＥのＶＨ、ＶＬ、重鎖、および軽鎖をコードする最適化されたヌクレオチド配列は、それぞれ、配列番号：１１〜１４として開示される。
抗体１８Ｅは、完全長１８Ｅ抗体のコーディング領域を含む発現ベクターを用いて安定にトランスフェクトされたＣＨＯ−Ｋ１細胞のプール中に発現させた。抗体１８Ｅは、標準的な実験室技術を用いて、上清から精製した。
２．２ Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を有するＦｃ領域を含む変異体抗ＩＬ−６ ＩｇＧ１抗体のインビトロ特徴づけ
抗体１８Ｅは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を有するＦｃ領域を含む。抗体１８ＥのＦｃ領域における、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換の存在は、ＥＬＩＳＡアッセイを用いて確認された。このアッセイは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を含むＦｃポリペプチドに特異的に結合するが、対応する野生型Ｆｃポリペプチドに特異的に結合しない、２つのモノクローナル抗体を捕捉試薬として利用した。ＥＬＩＳＡアッセイは、標準プロトコルに従って実施された。特異的モノクローナル抗体の置換の１つで得られたＥＬＩＳＡ滴定曲線を、図１に示す。抗体１８ではなく、抗体１８Ｅが、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６ＥのＦｃ領域置換に特異的な抗体によってＥＬＩＳＡアッセイ中に捕捉された。したがって、抗体１８は、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を含むＦｃ領域を含む。
Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を含むＦｃポリペプチドは、野生型Ｆｃポリペプチドの結合親和性と比較して、ＦｃＲｎに対してｐＨ６で結合親和性を増加する。精製された抗体１８および抗体１８ＥのＦｃＲｎ結合親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイを用いて決定された。アッセイは、標準プロトコルに従って実施された。抗体１８Ｅは、ｐＨ６で、抗体１８の親和性よりもかなり高い親和性を有するヒトおよびカニクイザルＦｃＲｎの両方に結合する。ＢＩＡｃｏｒｅによって決定されたＫｄ値を表１に示す。
Figure 2017206519
抗体１８および１８Ｅは、実質的に同等の親和性でＩＬ−６に結合する。抗体１８および１８ＥのＩＬ−６結合親和性は、ＥＬＩＳＡアッセイによって確認された。大腸菌で発現した組換えヒトＩＬ−６調製物（ｒｈｕＩＬ−６）を、捕捉試薬として使用した。ＥＬＩＳＡアッセイは、標準プロトコルに従って実施された。抗体１８および１８Ｅに加えて、２つの競合抗ＩＬ−６抗体（ＡＢ ＡおよびＡＢ Ｂ）も、陽性対照としてアッセイに含められた。得られたデータの一例を図２に示す。抗体１８および１８Ｅに対するＥＣ５０値は、それぞれ、６．１ｐＭおよび６．５ｐＭであった。
抗体１８および１８Ｅは、実質的には同一の有効性でＩＬ−６によって誘発されるＴＦ−１細胞増殖を阻害する。ＩＬ−６によって誘発されるＴＦ−１細胞増殖アッセイは、実質的に本明細書に記載されるように実施された。抗体１８および１８Ｅに加えて、２つの競合抗ＩＬ−６抗体（ＡＢ ＡおよびＡＢ Ｂ）も、陽性対照としてアッセイに含められた。代表的なデータを図３に示す。抗体１８および１８Ｅに対して算出されたＩＣ５０は、それぞれ、４．５ｐＭおよび５．２ｐＭであった。
抗体１８および１８Ｅは、実質的には同一の有効性でヒト滑液線維芽細胞から放出する内因性ＩＬ−６によって誘発されるＶＥＧＦを阻害する。アッセイは、実質的に本明細書に記載されるように実施された。抗体１８および１８Ｅに加えて、２つの競合抗ＩＬ−６抗体（ＡＢ ＡおよびＡＢ Ｂ）も、陽性対照としてアッセイに含められた。代表的なデータを図４に示す。抗体１８および１８Ｅに対して算出されたＩＣ５０は、それぞれ、１．３ｐＭおよび１．２ｐＭであった。
２．３ Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅ置換を有するＦｃ領域を含む変異体抗ＩＬ−６ ＩｇＧ１抗体のインビボ特徴付け
カニクイザルにおける単回量の薬物動態的薬力学的研究を、抗体１８および１８Ｅの血清半減期およびクリアランスを決定するために実施した。研究設計を表２にまとめる。
Figure 2017206519
カニクイザルの血漿における、抗体１８または抗体１８Ｅの定量化に対するＩＬ−６抗原捕捉ＰＫアッセイ（ＥＣＬ）：ＭＡ２４００ ９６ウェルプレート（ＭＳＤ）を、２〜８℃で、２．５ｇ／ｍＬ 組換えヒトＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）で一晩被覆し、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳで洗浄し、Ｉ−Ｂｌｏｃｋ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｔｒｏｐｉｘ）を用いて、室温で１〜２時間遮断した。抗体１８および抗体１８Ｅの標準曲線、品質管理（ＱＣ）、および試験試料希釈剤は、１％ カニクイザルの血漿中で調製され、室温で１時間遮断プレートに添加した。プレートは上記のように洗浄し、検出抗体（結合部位）を吸着させた１μｇ／ｍＬ ＭＳＤ−ＴＡＧ（Ｒｕｔｈｅｎｉｕｍ）標識されたヒツジ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）サルを用いて、さらに１時間インキュベートした。非結合検出抗体は、洗浄することによって除去し、１５０マイクロリットルの１Ｘ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（ＭＳＤ）を添加し、ウェルを平板培養した。プレートは、ＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００を用いて、直ちに読み込み、それぞれのプレート上のＱＣおよび試験試料希釈剤中の抗体１８および抗体１８Ｅ濃度を、そのプレートに対する標準曲線を用いて定量化した。全ての分析は、Ｓｏｆｔｍａｘ Ｐｒｏ ＧｘＰソフトウェア（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）のＬｏｇ−Ｌｏｇの曲線フィッティングにおいて、標準曲線濃度対ＥＣＬシグナルをプロットすることによって実施された。抗体１８および抗体１８Ｅの両方の定量化に対するアッセイ範囲は、１００％ 血漿中の１０，０００〜１３．７ｎｇ／ｍＬ（１０〜０．０１３７マイクログラム／ｍＬ）の範囲である。
ＰＫデータ解析：ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ社の標準操作手順に従って、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌ（バージョン５．２、Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を用いて、全ての動物からの個々のＰＫデータにおける、非コンパートメントトキシコキネティクス解析を実施した。
得られた結果を図５および６に示す。図５は、単回の５ｍｇ／ｍＬ抗体用量の皮下または静脈内投与後の抗体１８および１８Ｅの経時血清濃度を示す。抗体１８および１８Ｅは共に、線形ＰＫプロファイルを示した。静脈内および皮下投与後の抗体１８の血清半減期は、それぞれ、約８．５日間および９．１日間である。静脈内および皮下投与後の抗体１８Ｅの血清半減期は、それぞれ、約２８．４日間および２８．８日間である。静脈内および皮下投与後の抗体１８のクリアランスは、それぞれ、約１２．１ｍＬ／日／ｋｇおよび１３．１ｍＬ／日／ｋｇである。静脈内および皮下投与後の抗体１８Ｅのクリアランスは、それぞれ、約２．８ｍＬ／日／ｋｇおよび３．０ｍＬ／日／ｋｇである。皮下投与された抗体１８および１８Ｅのバイオアベイラビリテイーは、それぞれ、９４％および９６％であった。
図６は、単回の５ｍｇ／ｋｇ抗体用量の皮下投与後の抗体１８および１８Ｅの経時血清濃度を示す。図６は、さらに、抗体１８または１８Ｅの単回の５ｍｇ／ｋｇ用量の皮下投与後の動物において検出された総血清ＩＬ−６濃度を示す。ＩＬ−６の総レベルは、基線を約３対数超えて増加した。総ＩＬ−６の大幅な集積が、抗体１８Ｅで観察された。総ＩＬ−６レベルの勾配は、ＰＫの勾配に対してほぼ平行であった。
２．３ 皮下投与された抗ＩＬ−６抗体による血漿遊離ＩＬ−６の中和率（％）のモデリング
遊離ＩＬ−６濃度は、健常な動物における基線で非常に低い。したがって、遊離ＩＬ−６レベルを測定することによって、抗ＩＬ−６抗体投与後の標的中和率（％）を直接評価することは困難である。ＰＤマーカーとして総ＩＬ−６を用いた抗体ＰＫに関して、遊離ＩＬ−６の中和の速度論を予測するために、ＳＡＡＭ ＩＩソフトウェアパッケージにおいて、ＰＫ／ＰＤモデルを開発した。ＰＫ／ＰＤモデルは、抗体、遊離ＩＬ−６、ＩＬ−６と抗体の複合体、可溶性受容体、およびＩＬ−６と可溶性受容体の複合体の速度論を説明する。開発したモデルは、サルの研究から生成した抗体のＰＫおよび総ＩＬ−６の速度論を適切に説明し、標準相対成長スケーリングの仮定を用いて、異なる用量レジメン後のヒトＲＡ患者における、ＰＫ／ＰＤ時間プロファイルを想定するために、使用された。ヒト血漿遊離ＩＬ−６レベルの９０％阻害レベルは、リウマチ性関節炎患者において検出された血清遊離ＩＬ−６濃度に基づいて設定された（Ｕｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．，Ｊ．ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（１９９７）２４（１１）２０６９−７５）。
ＰＤモデリングの結果を図７〜１０および表３に示す。このモデルは、遊離ＩＬ−６（すなわち、ｓＩＬ−６ＲまたはＩＬ−６Ｒに結合しない）の持続した少なくとも９０％阻害は、以下の投薬レジメンのうちのいずれか１つに従って、抗体１８Ｅを投与することによって達成され得ることを予測する。
１００ｍｇの抗体１８Ｅを８週間ごとに皮下送達する、
５０ｍｇの抗体１８Ｅを４週間ごとに皮下送達する、
２００ｍｇの単回負荷用量の抗体１８Ｅを皮下送達し、続いて、１００ｍｇの抗体１８Ｅを８週間ごとに皮下送達する、
１００ｍｇの単回負荷用量の抗体１８Ｅを皮下送達し、続いて、５０ｍｇの抗体１８Ｅを４週間ごとに皮下送達する。
このモデルは、さらに、血清遊離ＩＬ−６の持続した阻害の同様のレベルのために、さらに高頻度および／または高用量の抗体１８を必要とすることを予測する。例えば、遊離ＩＬ−６（すなわち、ｓＩＬ−６ＲまたはＩＬ−６Ｒに結合しない）の持続した少なくとも９０％阻害は、１００ｍｇの抗体１８を２週間ごとに皮下投与することによって達成され得る。
Figure 2017206519
これらの結果は、インビボのＩＬ−６の全身的作用を阻害する抗ＩＬ−６抗体の能力を示す。一方、本発明の特定の実施形態は、説明の目的のために上記されており、多くの変形例の詳細は、添付された特許請求の範囲に記載される本発明から逸脱することなくなされ得ることは、当業者により理解されよう。
実施例３．ＦＣＡによって誘発される炎症性疼痛マウスモデルにおける有効性
マウス尾部（尾部の遠位端から３ｃｍ）における、フロイント完全アジュバント（「ＦＣＡ」）の局所皮下投与（２０マイクロリットル）によって誘発される炎症性疼痛を覆すその能力に対して、ｍＡｂ４０６（抗マウスＩＬ−６、モノクローナルＩｇＧ１から精製、クローンＭＰ５−２０Ｆ３、ロットＡＨＶ１００９０４Ａ，Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を、試験した。この物質は、時間に伴って徐々に生じ、投与から２４時間〜４８時間後の安定期に達する、局所炎症性反応を引き起こす。結果の炎症は、尾部の熱による、または機械的な刺激に対する過敏症を引き起こす。温熱性痛覚過敏は、熱刺激（温水、４６℃）からの尾退避反応潜時を記録することによって評価され、一方、機械的痛覚過敏は、ａｎａｌｇｅｓｙｍｅｔｅｒ（Ｒａｎｄａｌｌ Ｓｅｌｉｔｔｏ ａｐｐａｒａｔｕｓ）によって生じる漸増圧迫からの尾退避反応閾値によって評価される。ＩｇＧ１アイソタイプ対照（ｍＡｂ００５、モノクローナルＩｇＧ１から精製、クローン４３４１４、ロットＣＡＮ０４９０４Ａ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓから購入）およびｍＡｂ４０６を、ＦＣＡ処置後、６時間、腹腔内（ｉｐ）に投与した。炎症反応が明らかに開始していることを示唆する証拠には、サイトカインレベルの上昇、一酸化窒素の産生、および過敏症から軽度の有害刺激が含まれる。初期検査は、ｍＡｂ４０６の単回量（２０ｍｇ／ｋｇ）を評価した。この用量は、熱痛覚過敏アッセイにおいて、２４時間および４８時間の両方で、５０％のＥ−ｍａｘを生じ（図１１を参照のこと）、２４時間および４８時間で、機械的痛覚過敏の４０％の反転を生じた（図１２を参照のこと）。これらの動物における、ＩＬ−６の全身血漿レベルのインビトロプロファイリングは、全てのＩＬ−６が、中和されていたことを示した。続いて、種々の用量のｍＡｂ４０６（および高用量のＩｇＧ１対照）は、疼痛阻害および痛覚過敏の反転に対して、有効性およびＩＬ−６中和を特徴付けるために評価された。１〜２０ｍｇ／ｋｇの範囲の同一の実験的パラダイム用量を用いて、熱痛覚過敏および機械的痛覚過敏の両方に対して、２４時間および４８時間の両方で、腹腔内（ｉｐ）が試験された。図１３は、熱痛覚過敏は、２４時間で、抗ＩＬ６処置によって用量依存的に反転したことを示し、同様の結果が、４８時間で得られた（図１４を参照のこと）。この第２の検査における、Ｅ−ｍａｘは、６４％の反転であり、これは、わずかに高いが、上で得られた反転と同様である。図１５および図１６は、それぞれ、２４時間および４８時間での、機械的痛覚過敏に対する結果を示す。また、用量依存的反転は、４８時間で、９１％のＥ−ｍａｘに達することが観察され、これは、第１の検査において得られた反転よりも高い。副作用は、いずれの試験用量でも、いずれの検査においても、観察されなかった。概して、ｍＡｂ４０６を用いたインビボ有効性は、同一のモデルにおいて、ベンチマークの小分子化合物のナプロキセンに対して、同等であるか、または高い（熱に対する痛覚過敏におけるナプロキセンに対して図１７、および機械的圧力に対する痛覚過敏におけるナプロキセンに対して図１８を参照のこと）。
本明細書に引用される全ての刊行物、特許、および特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許、または特許出願を参照により組み込んでいることを具体的、かつ個別に示す場合と同じ範囲まで、参照により本明細書に組み込まれる。
材料および方法
精製したｓｃＦｖおよびＩｇＧによるＩＬ−６によって誘発されるＴＦ−１細胞の増殖の阻害
ＴＦ−１細胞は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓからの贈答物であり、供給されたプロトコルに従って維持された。アッセイ培地は、５％ 胎児ウシ血清（ＪＲＨ）および１％ ピルビン酸ナトリウム（Ｓｉｇｍａ）を含有するＧＬＵＴＡＭＡＸ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を伴うＲＰＭＩ−１６４０を含んだ。それぞれのアッセイ前に、３００ｘｇで５分間、遠心分離によってＴＦ−１細胞をペレットにし、吸引によって培地を除去し、アッセイ培地中で細胞を再懸濁した。このプロセスは、５×１０５細胞／ｍＬの最終濃度で、アッセイ培地中で再懸濁した細胞を用いて２回繰り返された。細胞は、９６ウェルアッセイプレート中で１００μｌ／ウェルを用いて、平板培養した。プレートは、ＧＭ−ＣＳＦの細胞を枯渇させるために、３７℃で２４時間、および５％ ＣＯ２でインキュベートした。精製したｓｃＦｖまたはＩｇＧ（二重で）の試験溶液は、アッセイ培地中で所望の濃度まで希釈した。ＩＬ−６に向けられない無関連抗体を、陰性対照として使用した。１００μｌ／ウェルの合計容量で適切な試験抗体と混合した際、２０ｐＭ（ヒトＩＬ−６）または１００ｐＭ（カニクイザル）のいずれかの最終濃度まで、組換えバクテリア由来のヒト（Ｒ＆Ｄ）およびカニクイザル（室内）のＩＬ−６を添加した。アッセイにおいて使用したＩＬ−６の濃度は、最終アッセイ濃度で、約８０％の最大増殖反応を得た用量として選択された。全ての試料は、室温で３０分間インキュベートした。次いで、１００μｌのＩＬ−６と抗体の混合物を、１００μｌの細胞に添加し、合計アッセイ容量を２００μｌ／ウェルとした。プレートは、３７℃で２４時間、および５％ ＣＯ２でインキュベートした。次いで、２０μｌのトリチウム化したチミジン（５μＣｉ／ｍＬ）を、それぞれのアッセイポイントに添加し、プレートは、さらに２４時間、インキュベーターに戻した。細胞採取機（ｃｅｌｌ ｈａｒｖｅｓｔｅｒ）を用いて、ガラス繊維フィルタープレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）上に細胞を採取した。Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔマイクロプレート液体シンチレーション計数器を用いて、チミジン取込みを測定した。次いで、Ｇｒａｐｈｐａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いてデータを分析した。
精製したＩｇＧによりヒト滑液線維芽細胞から放出する内因性ＩＬ−６によって誘発されたＶＥＧＦの阻害
全関節置換手術からのリウマチ性関節炎膝の試料を、抗生物質を含有するＤＭＥＭ中に入れた。培地中に浸潤させた滑膜を関節から切開し、細かく刻んだ。１０％ ＦＣＳを補充した培地で、滑膜組織を洗浄した。３７℃のＣＯ２のインキュベーター中で、２時間、コラゲナーゼ溶液中の細胞懸濁液をインキュベートした。１０ｍＬのピペットで、繰り返し吸引することによって、消化された滑膜細胞懸濁液を分裂し、細胞を染色し、４００ｇで、室温で５分間遠心分離を行った。１０％ ＦＣＳを補充したＤＭＥＭ中で細胞を再懸濁し、ｃｅｌｌ ｓｔｒａｉｎｅｒを通過させ、１×１０６細胞／ｍＬまで調整し、３７℃のＣＯ２のインキュベーター中で、２２５ｃｍ２細胞培養フラスコ（３００１，ＣｏＳｔａｒ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．）中でインキュベートした。付着後、培地の大部分は、廃棄し、新しいものと取り替え、長期のインキュベーションのためにインキュベーターに戻した。細胞は、週毎に検査し、１／３の通過率で、トリプシン処理によって、コンフルエンスでパッセージした。
フラスコ当たり１０ｍＬの０．１％ トリプシンＥＤＴＡ溶液（２５３００−０５４， Ｇｉｂｃｏ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いて、３７℃で５〜１０分間インキュベートすることによって、コンフルエンスで線維芽細胞（Ｐ３−５）をフラスコから除去した。１０％ ＦＣＳを補充した等量のＤＭＥＭベースの培養培地を、細胞に添加し、次いで、３３０ｇで、室温で５分間遠心分離によってこれらをペレットにした。１０％ ＦＣＳを補充したＤＭＥＭベースの培養培地を用いた１回の洗浄ステップ後、細胞懸濁液（１×１０５細胞／ｍＬ）を、１．５×１０４細胞／ウェルで、滅菌９６ウェル細胞培養クラスター、平底ポリスチレンプレート（３５９８、Ｃｏｒｎｉｎｇ ＣｏＳｔａｒ）のウェルに添加した（１５０μＬ／ウェル）。１０％ ＦＣＳを補充したさらに追加したＤＭＥＭベースの培養培地を、それぞれのウェルに添加し（１００μＬ／ウェル）、１ウェル当たりの合計容量を２５０μＬにした。付着および休止させるために、細胞を３７℃で一晩インキュベートした。
細胞がコンフルエントに達し、良好な状態（例えば、汚染のない）であることが確実であるように、９６ウェルプレートを検査した。次いで、培地をウェルから吸引し、１００μＬの、１０％ ＦＣＳを補充したＤＭＥＭベースの培養培地を直ちに添加した。これに、試料ＩｇＧ、または培地のみのいずれかを含有する、１０％ ＦＣＳを補充した５０μＬのＤＭＥＭベースの培養培地を、ウェルに添加した（アッセイへと１：５に希釈）。
これに続いて、組換えヒト可溶性（ｒｈｓ）ＩＬ−６Ｒα（５００ｎｇ／ｍＬ、１２ｎＭ）およびｒｈＩＬ−１β（５０ｐｇ／ｍＬ、２．９５ｐＭ、アッセイへと１：５に希釈）を含有する１０％ ＦＣＳを補充した１ウェル当たり５０μＬのＤＭＥＭベースの培養培地を添加した。
別々のウェルに、ｒｈ−ＩＬ−６（０、１００ｎｇ／ｍＬ、２１．５ｎＭ）、ｓＩＬ−６Ｒα（５００ｎｇ／ｍＬ、１２ｎＭ）、ｒｈＩＬ−１β（５０ｐｇ／ｍＬ、２．９５ｐＭ）、または培地のみのいずれかを含有する、１０％ ＦＣＳを補充した５０μＬのＤＭＥＭベースの培養培地を添加した（アッセイへと１：５に希釈）。それぞれのウェル中の最終容量は、２５０μＬであった。
プレートは、３７℃で４８時間インキュベートした。インキュベーションは、プレート形式に記載の二重または三重ウェルにおいて実施された。プレートは、３３０ｇで、室温で５分間遠心分離し、上清培地を除去し、マイクロタイター平底プレート（６１１Ｆ９６、Ｓｔｅｒｉｌｉｎ）中で、−４０℃で保存した。
ＶＥＧＦは、製造業者の説明書に従って、ＥＬＩＳＡ（ＤＹ２９３Ｂ、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて測定された。簡潔に言えば、ＥＬＩＳＡプレートを、４℃で一晩、マウス抗ヒトＶＥＧＦ抗体で被覆し、１％ ＢＳＡ／ＰＢＳで遮断した。プレートは、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳで洗浄し、ヒト滑膜由来の線維芽細胞およびビオチン化ヤギ抗ヒトＶＥＧＦ抗体の培養上清を用いて、室温で一晩インキュベートした。洗浄後、ストレプトアビジン西洋ワサビペルオキシダーゼを用いることによってＶＥＧＦを検出した。プレートを、１：１のＨ２Ｏ２：テトラメチルベンジジンを用いて発色させた。２Ｍ Ｈ２ＳＯ４を用いて反応を停止させ、光学密度は、５４０ｎｍで設定された補正波長を用いて４５０ｎｍで測定された。
総血漿ＩＬ−６レベルの測定
全てのＩＬ−６は、製造業者の推奨に従って、Ｍｉｌｌｉｐｌｅｘ（商標）ＭＡＰキット（ＭＰＸＨＣＹＴＯ６０Ｋ）を用いて測定される。全ての必要とされる試薬は、アッセイキットにおいて供給される。簡潔に言えば、アッセイフィルタープレートは、２００μＬのアッセイ緩衝液で水和し、液体は、真空除去される。以下の試薬のそれぞれを、２５μＬ／ウェルでプレートに添加する：（ａ）アッセイ緩衝液（ｂ）血漿試料、標準またはＱＣ、および（ｃ）アッセイマトリックス中で抗ＩＬ−６捕捉抗体を用いて共役されるビーズ。最終アッセイ容量は、７５μＬであり、最終アッセイマトリックスは、２５％のＩＬ−６を枯渇した正常なカニクイザルＥＤＴＡ血漿中の１３３．３μｇ／ｍＬの薬物候補（抗体１８または抗体１８Ｅ）である。プレートは、密閉され、４℃で一晩インキュベートする。洗浄緩衝液で２回洗浄した後、２５μＬ／ウェルのビオチン化抗ＩＬ６検出抗体を添加する。３０分間のインキュベーション後、２５μＬ／ウェルのＳＡ−ＰＥをウェルに添加し、プレートは、さらに３０分間インキュベートする。プレートは、２回洗浄し、ビーズは、１５０μＬ／ウェルのＬｕｍｉｎｅｘ Ｓｈｅａｔｈ Ｆｌｕｉｄで再懸濁する。ビーズと関連する蛍光強度は、Ｌｕｍｉｎｅｘ２００プレートリーダーによって測定される。捕捉および検出抗ＩＬ−６抗体は共に、抗体１８または抗体１８Ｅの存在下で、ＩＬ−６に結合することができるため、蛍光強度は、試料中の全ＩＬ−６濃度に比例する。ＩＬ−６の濃度は、ＢｅａｄＶｉｅｗ Ｓｏｆｔｗａｒｅ（Ｕｐｓｔａｔｅ Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ）でプロットされる標準曲線から外挿される。１００％のカニクイザル血漿中のＩＬ−６に対する検出範囲は、１．８ｐｇ／ｍＬ〜５７６９ｐｇ／ｍＬである。
上記の他の箇所で言及されるものを含む、本明細書の他の箇所で言及された全ての参照は、参照によりその全体が全ての目的のために本明細書に組み込まれる。
Figure 2017206519
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Claims (15)

  1. ＩＬ−６に特異的に結合する単離抗体であって、前記抗体は、可変ドメインと、野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインと比べて１つ以上のアミノ酸置換を有する修飾されたヒトＩｇＧ１定常ドメインとを含み、
    前記抗体は、前記可変ドメインおよび前記野生型ヒトＩｇＧ１定常ドメインを含む抗体の半減期と比較して半減期が増加しており、
    前記修飾されたＩｇＧ１定常ドメインは、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、およびＴ２５６Ｅのアミノ酸置換を含み、アミノ酸残基は、カバットのＥＵインデックスに従って番号付けされ、
    前記可変ドメインは、３つのＣＤＲを含むＶＨドメイン、および３つのＣＤＲを含むＶＬドメインを含み、前記ＶＨドメインの前記３つのＣＤＲは、
    （ａ）配列番号１のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ１、
    （ｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ２、および
    （ｃ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨ ＣＤＲ３を含み、
    前記ＶＬドメインの前記３つのＣＤＲは、
    （ａ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ１、
    （ｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ２、および
    （ｃ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＶＬ ＣＤＲ３を含む、抗体。
  2. 前記修飾されたＩｇＧ１定常ドメインは、前記野生型ＩｇＧ１定常ドメインよりもＦｃＲｎに対する親和性が高い、請求項１に記載の抗体。
  3. 前記可変ドメインは、配列番号７の前記ＶＨドメインおよび配列番号８の前記ＶＬドメインを含む、請求項１に記載の抗体。
  4. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体をコードする、単離核酸。
  5. 配列番号１１、１２、１３、および１４からなる群から選択されるヌクレオチド配列を含む、請求項４に記載の核酸。
  6. 請求項４または５に記載の核酸を含む、ベクター。
  7. 請求項６に記載のベクターを含む、単離細胞。
  8. 請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を発現する、単離細胞株。
  9. 薬学的に許容される担体中に請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗体を含む、薬学的組成物。
  10. 炎症性および／または自己免疫障害の治療に使用するための、請求項９に記載の薬学的組成物。
  11. 前記炎症性および／または自己免疫障害は、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、悪液質、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、若年性特発性関節炎、喘息、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される、請求項１０に記載の薬学的組成物。
  12. ヒトにおける疼痛の治療および／または予防に使用するための、請求項９に記載の薬学的組成物。
  13. 前記疼痛は、炎症性および／または自己免疫障害と関連するか、またはその結果である、あるいは
    前記疼痛は、ＩＬ−６レベルの増加と関連する状態と関連するか、またはその結果である、あるいは
    前記疼痛は、強直性脊椎炎、炎症性腰痛、神経障害、痛風、神経腫、線維筋痛、急性および／もしくは慢性頭痛、片頭痛、膵臓炎、脊髄神経圧迫、非悪性骨格痛、または癌と関連する、またはその結果である、あるいは
    前記疼痛は、創傷、医学的手技、手術、損傷、または外傷と関連するか、またはその結果である、請求項１２に記載の薬学的組成物。
  14. 前記炎症性および／または自己免疫障害は、リウマチ性関節炎、変形性関節炎、悪液質、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、若年性特発性関節炎、喘息、全身性エリテマトーデス、炎症性腸疾患、クローン病、潰瘍性大腸炎、およびアテローム性動脈硬化症からなる群から選択される、請求項１３に記載の薬学的組成物。
  15. 前記抗体は、前記創傷、医学的手技、手術、損傷、または外傷を受ける前に、前記ヒトに投与される、請求項１３に記載の薬学的組成物。
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