JP2017156178A - 牛白血病ウイルス感染動物の特定方法および医薬品組成物 - Google Patents
牛白血病ウイルス感染動物の特定方法および医薬品組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2017156178A JP2017156178A JP2016038319A JP2016038319A JP2017156178A JP 2017156178 A JP2017156178 A JP 2017156178A JP 2016038319 A JP2016038319 A JP 2016038319A JP 2016038319 A JP2016038319 A JP 2016038319A JP 2017156178 A JP2017156178 A JP 2017156178A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody
- amino acid
- leukemia virus
- bovine leukemia
- acid sequence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 title claims abstract description 113
- 241000714266 Bovine leukemia virus Species 0.000 title claims abstract description 88
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 83
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 43
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 87
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims abstract description 28
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 87
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 78
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 60
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 54
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 43
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 43
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 43
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 43
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 42
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 37
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 36
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 34
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 21
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 claims description 16
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 claims description 16
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 64
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 36
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 30
- 101800001271 Surface protein Proteins 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 14
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 9
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 108010063590 BoLA-DRB3 antigen Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 6
- 125000003295 alanine group Chemical group N[C@@H](C)C(=O)* 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 5
- 102220497245 Serine-tRNA ligase, cytoplasmic_R9A_mutation Human genes 0.000 description 5
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 101150034979 DRB3 gene Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 4
- 101100333573 Bovine leukemia virus env gene Proteins 0.000 description 3
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 101100278514 Oryza sativa subsp. japonica DRB2 gene Proteins 0.000 description 3
- -1 column Substances 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 3
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 3
- 230000017960 syncytium formation Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 2-[3-(dimethylamino)-6-dimethylazaniumylidenexanthen-9-yl]-4-isothiocyanatobenzoate Chemical compound C=12C=CC(=[N+](C)C)C=C2OC2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC(N=C=S)=CC=C1C([O-])=O OBYNJKLOYWCXEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 241000283699 Bos indicus Species 0.000 description 2
- 241000030939 Bubalus bubalis Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 206010052804 Drug tolerance Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 2
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 230000026781 habituation Effects 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012114 Alexa Fluor 647 Substances 0.000 description 1
- 244000303258 Annona diversifolia Species 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 229920001342 Bakelite® Polymers 0.000 description 1
- 241000283725 Bos Species 0.000 description 1
- 241000282817 Bovidae Species 0.000 description 1
- 241000283698 Bubalus Species 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 240000007839 Kleinhovia hospita Species 0.000 description 1
- 238000012218 Kunkel's method Methods 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102220465832 La-related protein 1_F10A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102220469013 Putative uncharacterized protein URB1-AS1_R7A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 1
- 102220527169 Sarcolipin_Y18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 1
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102200063830 rs4880 Human genes 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M sodium;1-[4-[(2,5-dioxopyrrol-1-yl)methyl]cyclohexanecarbonyl]oxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].O=C1C(S(=O)(=O)[O-])CC(=O)N1OC(=O)C1CCC(CN2C(C=CC2=O)=O)CC1 VUFNRPJNRFOTGK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
【解決手段】被験動物から採取された生物学的試料中に、WPPPQGRRRFGARAMVTYDCのアミノ酸配列の少なくとも一部を認識する抗体が存在するか否かを検出する工程と、当該抗体が存在する場合には被験動物が牛白血病ウイルスに感染していると判定する工程とを含む、牛白血病ウイルス感染動物の特定方法。
【選択図】なし
Description
本発明に係る検出方法は、動物における牛白血病ウイルスの有無を検出する方法であって、当該動物から採取された生物学的試料中に、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程を含む。
本発明に係る牛白血病ウイルス感染動物の特定方法は、被験動物から採取された生物学的試料中に、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程と、当該抗体が存在する場合には当該被験動物が牛白血病ウイルスに感染していると判定する判定工程とを含む。
本発明はまた、動物における牛白血病ウイルスの有無を検出するためのキットであって、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を含む、ペプチド、タンパク質、およびウイルス粒子のうちの少なくとも1つを抗原として備える、検出キットを提供する。これらの抗原は、より好ましくは配列番号2に示すアミノ酸配列の少なくとも一部を含み、さらに好ましくは配列番号3に示すアミノ酸配列の少なくとも一部を含む。
本発明に係る医薬品組成物は、牛白血病ウイルス感染動物に共通のB細胞エピトープの少なくとも1つのアミノ酸に変異を有する、変異体ペプチド、変異体タンパク質、変異体ウイルス粒子、およびこれらをコードする核酸のうちの少なくとも1つを含む。
本発明に係る識別方法は、上述の本発明に係る医薬品組成物が接種された動物の中から牛白血病ウイルス感染動物を識別する方法であって、当該医薬品組成物が接種された被験動物から採取された生物学的試料中に、前記共通のB細胞エピトープを認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程と、当該抗体が存在する場合には当該被験動物が牛白血病ウイルスに感染していると判定する判定工程とを含む。
本発明に係る検出用抗体は、本発明に係る識別方法に使用される検出用抗体であって、牛白血病ウイルス感染動物に共通のB細胞エピトープを認識する抗体である。当該抗体はレポーター分子で標識されていることが好ましい。
BLVのEnv領域のタンパク質(gp51)およびBLVのGag領域のタンパク質(p15、p24、およびp12)上のエピトープを網羅的に探索するために、これらタンパク質のアミノ酸配列に由来する15アミノ酸からなる候補ペプチドを合計156種類合成した(図1、図2)。これらは4アミノ酸ずつずらして作製されたペプチドである。これらをスライドガラスに固定化したペプチドマイクロアレイ(JPT Peptide Technologies社製)を作製した。候補ペプチド1種類につき3ヶ所に固定した。なお、gp51、p15、p24、およびp12の全長のアミノ酸配列はそれぞれ、配列番号4、11〜13に示すとおりである。
ペプチドマイクロアレイは多検体のエピトープの探索には適さないため、4頭のBLV感染牛で特異的に反応したgp51No16ペプチドを用いたペプチドELISAの開発を試みた。ペプチドをELISAプレートに固相化するため、キャリアタンパク質を利用するペプチドELISA法を選択した。キャリアタンパク質mcKLH(Mariculture Keyhole Limpet Hemocyanin)をSulfo−SMCCにマレイミド化し、96ウェル平底マイクロプレート(住友ベークライト株式会社製)に固相化した。このマレイミド化KLHのマレイミド基がフリーのスルフヒドリルを含むシステイン(Cys)と反応し、安定なチオエーテル結合を形成する。この反応を利用し、gp51No16ペプチドのアミノ酸配列を含むBLV由来の20アミノ酸からなるペプチドgp51p57(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC;配列番号1)のC末端側のCysを利用して、mcKLHと結合したペプチドELISA法の構築を試みた。
共通B細胞エピトープの同定を試みるために、上記で同定したgp51No16を含むgp51p57(配列番号1)を合成して、異なるBoLA−DRB3アリルを有する大量の検体サンプル(917検体)を用いて反応性を調べた。その結果、gp51p57は25種類のBoLA−DRB3アリルを有する647頭のBLV自然感染牛由来の血清サンプルの中の590サンプル(91.2%)、および23種類のBoLA−DRB3アリルを有する270頭のBLV陰性牛由来の血清サンプルの中の33サンプル(12.2%)に対して陽性反応を示した。以上の結果から、gp51p57は共通B細胞エピトープを含んでいることが示唆された。
共通のB細胞エピトープを含んでいるgp51p57における抗体結合部位の同定を行った。そのために、gp51p57のアミノ酸配列の1つのアミノ酸をアラニンに置換したペプチドを合成して(図7左)、上述した4頭のBLV実験感染牛由来の血清(図7中央)および71頭のBLV自然感染牛由来の血清(図7右)を用いて、ELISA実験を行った。野生型配列のgp51p57をポジティブコントロールとし、ペプチド無添加をネガティブコントロールとした。刺激指数(SI)を以下の式を用いて算出した:SI=(野生型gp51p57または変異gp51p57のOD450)/(ペプチド無添加のOD450)。SI値がペプチド無添加の場合と同じかそれより低い場合に、反応性が低下していると判定した。4頭のBLV実験感染牛および71頭BLV自然感染牛由来の血清サンプルを用いた実験において、gp51p57は全ての血清サンプルに反応したが、一方、シングルアラニン置換ペプチドR7A、R9A、F10A、V16A、およびY18Aは、調べた血清サンプルに対して反応を示さなかった。以上の結果から、共通B細胞エピトープgp51p57の中に、5つの抗体結合に寄与するアミノ酸:R(7)、R(9)、F(10)、V(16)、Y(18)が同定された。
同定された抗体結合部位をDIVA配列の候補として利用するには、gp51タンパク質の発現およびシンシチウムの形成に影響がないことを確認する必要がある。そのため、同定された抗体結合部位のアミノ酸をアラニンに置換した変異体BLV感染性分子クローンpBLV−IFを構築した。具体的には、BLV感染性分子クローンpBLV−IFのenv遺伝子を含む領域をpBluescript SK−II(−)ベクターにクローニングした。これを鋳型とし、PrimeSTAR GXL(タカラバイオ社製)を用いたsite−direct mutagenesisによって、シングルアラニン置換を導入した。このシングルアラニン置換が導入されたenv遺伝子断片を、制限酵素サイトHindIIIおよびBmgBIを利用して、pBLV−IFに挿入した。
DIVA配列として利用するには高い保存性が必要である。そのため、GenBankのデータベースからダウンロードした517種類のBLV配列を解析した(図8のc)。同定された抗体結合部に相当するアミノ酸R(7)およびF(10)には変異が見つからなかったことから、非常の高い保存性を有することが示された。
DIVAのモノクローナル抗体の作製過程において、ウサギの抗血清の中に、シングルアラニン置換ペプチドR9Aに対して反応性が低下したものが存在したことから、R9Aが医薬品組成物(例えばワクチン組成物)に組み込むDIVA変異配列の候補の一つと考えられた。
23CLN細胞(ブタ由来細胞;理研登録番号RCB0179)を、5%FBSおよび1x Penicillin−Streptomycin−Glutamine(ThermoFisher Scientific社製)を添加したD−MEM培地で培養した。トランスフェクション用に1×106個の23CLN細胞を10cmφのdish20枚に播種し、1日間培養した。
Claims (11)
- 動物における牛白血病ウイルスの有無を検出する方法であって、
前記動物から採取された生物学的試料中に、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程を含む、検出方法。 - 被験動物から採取された生物学的試料中に、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程と、
前記抗体が存在する場合には前記被験動物が牛白血病ウイルスに感染していると判定する判定工程とを含む、牛白血病ウイルス感染動物の特定方法。 - 前記判定工程では、さらに、前記抗体が存在しない場合には前記被験動物が牛白血病ウイルスに感染していないと判定する、請求項2に記載の特定方法。
- 前記配列番号1に示すアミノ酸配列の少なくとも一部を認識する抗体は、配列番号3に示すアミノ酸配列(GRRRFGARAMVTY)の少なくとも一部を認識する抗体である、請求項1〜3の何れか一項に記載の方法。
- 動物における牛白血病ウイルスの有無を検出するためのキットであって、
配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の少なくとも一部を含む、ペプチド、タンパク質、およびウイルス粒子のうちの少なくとも1つを抗原として備える、検出キット。 - 牛白血病ウイルス感染動物に共通のB細胞エピトープの少なくとも1つのアミノ酸に変異を有する、変異体ペプチド、変異体タンパク質、変異体ウイルス粒子、およびこれらをコードする核酸のうちの少なくとも1つを含む、医薬品組成物。
- 前記共通のB細胞エピトープは、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)に含まれる1つまたは複数のエピトープである、請求項6に記載の医薬品組成物。
- 前記変異を有するエピトープは、配列番号1に示すアミノ酸配列(WPPPQGRRRFGARAMVTYDC)の7、9、10、16および18番目のアミノ酸の少なくとも1つに変異を有するアミノ酸配列を含む、請求項6または7に記載の医薬品組成物。
- 牛白血病ウイルスワクチン組成物である、請求項6〜8の何れか一項に記載の医薬品組成物。
- 請求項6〜9の何れか一項に記載の医薬品組成物が接種された動物の中から牛白血病ウイルス感染動物を識別する方法であって、
請求項6〜9の何れか一項に記載の医薬品組成物が接種された被験動物から採取された生物学的試料中に、前記共通のB細胞エピトープを認識する抗体が存在するか否かを検出する検出工程と、
前記抗体が存在する場合には前記被験動物が牛白血病ウイルスに感染していると判定する判定工程とを含む、識別方法。 - 請求項10に記載の識別方法に使用される検出用抗体であって、
牛白血病ウイルス感染動物に共通のB細胞エピトープを認識する抗体である、検出用抗体。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016038319A JP6854462B2 (ja) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | 牛白血病ウイルス感染動物の特定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016038319A JP6854462B2 (ja) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | 牛白血病ウイルス感染動物の特定方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2017156178A true JP2017156178A (ja) | 2017-09-07 |
JP6854462B2 JP6854462B2 (ja) | 2021-04-07 |
Family
ID=59809503
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016038319A Active JP6854462B2 (ja) | 2016-02-29 | 2016-02-29 | 牛白血病ウイルス感染動物の特定方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP6854462B2 (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63264600A (ja) * | 1987-03-20 | 1988-11-01 | ローヌ メリユ | ウシ白血病ウイルスに対する感染防御抗体を誘導するペプチド分画と、この分画を得る方法と、この分画の遺伝暗号配列と、この分画から製造されるワクチン |
US20110250624A1 (en) * | 2008-09-29 | 2011-10-13 | Andrzej Rapak | Elisa assay for detecting antibodies against blv surface antigen gp 51 in bovine serum |
WO2014157595A1 (ja) * | 2013-03-27 | 2014-10-02 | 独立行政法人理化学研究所 | 新規なポリペプチドおよびその利用 |
-
2016
- 2016-02-29 JP JP2016038319A patent/JP6854462B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS63264600A (ja) * | 1987-03-20 | 1988-11-01 | ローヌ メリユ | ウシ白血病ウイルスに対する感染防御抗体を誘導するペプチド分画と、この分画を得る方法と、この分画の遺伝暗号配列と、この分画から製造されるワクチン |
US20110250624A1 (en) * | 2008-09-29 | 2011-10-13 | Andrzej Rapak | Elisa assay for detecting antibodies against blv surface antigen gp 51 in bovine serum |
WO2014157595A1 (ja) * | 2013-03-27 | 2014-10-02 | 独立行政法人理化学研究所 | 新規なポリペプチドおよびその利用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6854462B2 (ja) | 2021-04-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Okech et al. | Fine specificity of serum antibodies to Plasmodium falciparum merozoite surface protein, PfMSP-119, predicts protection from malaria infection and high-density parasitemia | |
JP2021167805A (ja) | SARS−CoV−2感染症を診断するための方法および試薬 | |
EP3084441B1 (en) | Improved diagnostic test for csfv antibodies | |
JP2009039107A5 (ja) | ||
US20230235028A1 (en) | Antibody against sars-cov-2, method for detecting sars-cov-2 using antibody and kit containing antibody | |
JP6080850B2 (ja) | 改善されたワクチン診断法 | |
CN115819565A (zh) | 新型冠状病毒Omicron突变株特异性抗体及其应用 | |
JPWO2011096302A1 (ja) | 薬剤耐性インフルエンザウイルス特異的抗体及びその用途 | |
WO2008119358A2 (en) | Surface-located streptococcus pneumoniae polypeptides for use in vaccine compositions | |
KR20160074756A (ko) | 공수병 바이러스 p 단백을 표적으로 하는 단클론 항체 또는 항원 검출 및 중화항체가 측정 시험을 위한 용도 | |
US6071737A (en) | Equine Neospora isolate and its uses | |
JP6854462B2 (ja) | 牛白血病ウイルス感染動物の特定方法 | |
US7794714B2 (en) | Newcastle disease virus monoclonal antibodies | |
US11174310B2 (en) | Disulfide-type HMGB1-specific antibody, method for measuring disulfide-type HMGB1 and kit for said measurement, and measurement method capable of quantitating all of HMGB1 molecules including reduced HMGB1, disulfide-type HMGB1 and thrombin-cleavable HMGB1 and kit for said measurement | |
JP4701391B2 (ja) | IgA腎症関連抗体の検出法 | |
JP2008058194A (ja) | ウエストナイルウイルス感染の鑑別方法 | |
JP5476582B2 (ja) | Vrk1蛋白質抗体とその製造方法、抗原、検知方法 | |
JP4395004B2 (ja) | 胚細胞腫瘍の検出方法 | |
KR101329342B1 (ko) | 돼지인플루엔자 바이러스 뉴라미니다아제 검출용 항체 및 이의 용도 | |
JP5397932B2 (ja) | Nuf2蛋白質抗体とその製造方法、抗原、検知方法 | |
KR20240009997A (ko) | 노로바이러스의 면역 측정 방법 및 면역 측정 기구 | |
JP2008081414A (ja) | ヒト癌抗原に特異的なモノクローナル抗体 | |
NZ621257B2 (en) | Improved vaccine diagnostics | |
JP2013203733A (ja) | イヌ糸状虫22kDaタンパク質を利用したイヌ糸状虫感染の検出 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20160329 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20181217 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20181217 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20181217 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20190802 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20190924 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20191011 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200121 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200728 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20200917 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201113 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210112 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210204 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210224 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210302 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6854462 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |