JP2016527878A - 腎臓前駆細胞 - Google Patents
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Abstract
Description
末期腎疾患の発病率は世界で毎年8%上昇しており1、腎臓再生戦略が至急必要とされている。腎臓は、中間中胚葉(IM)から、尿管芽(UB)の形成およびこの芽と隣接するIM由来後腎間葉(MM)の間の相互作用を通じて分化する中胚葉系臓器である2。ネフロンは、このMM由来のネフロン前駆集団から生じる3。IM自体は、後部原始線条に由来する4。腎臓の発生起源は十分理解されているが2、ヒト腎臓におけるネフロンの形成は、出生前に完了する5。したがって、失われたネフロンと置き換わることができる出生後幹細胞は存在しない。
本発明者らは、通常の胚形成時に使用される成長因子を用いる完全に化学的に定義された単層培養条件下での後部原始線条および中間中胚葉(IM)を通じたヒト多能性幹細胞の分化の誘導に成功した。この分化プロトコルは、インビトロで、ネフロン形成を含む自己組織化する構造を形成する尿管芽(UB)および後腎間葉(MM)を同期的に誘導する。そのようなhESC由来成分は、エクスビボで腎臓に関連する幅広い潜在能力を示し、これにより多能性幹細胞ベースの腎臓再生の可能性が示された。
(i)hPSCを、hPSCの後部原始線条細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;
(ii)後部原始線条細胞を、後部原始線条細胞のIM細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;および
(iii)IM細胞を、FGF9単独と、またはBMP7;RA;RAアンタゴニスト;Wntアゴニスト;および/もしくはFGF20;ならびにヘパリンの1つもしくは複数と組み合わせたFGF9と接触させ、それによってIM細胞からネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程
の連続工程を含む方法を提供する。
本発明は、少なくとも部分的に、中間中胚葉(IM)からのネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞の同期的、同時的な分化を促進することに適した特定のインビトロ培養条件の発見に基づいている。より詳細に、FGF9が、ヘパリンのみと共に、または骨形成タンパク質7(BMP7)、レチノイン酸(RA)、RAアンタゴニスト;Wntアゴニスト;および/もしくはFGF20を含む1つもしくは複数の作用物質ならびにヘパリンとの組み合わせで、中間中胚葉のネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞への分化を促進することができる。これに加えて、このインビトロ培養法は、ヒト胚性幹細胞を、後部原始線条、IMおよび後腎間葉の段階を通じてネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生ずるよう分化させるシステムを提供する。有利な点として、特定の分子、例えばRA、RAアンタゴニストおよび/またはWntアゴニストの存在または非存在が、尿管上皮前駆細胞に対してネフロン前駆細胞を、またはその逆を、優先的に生成するよう操作され得る。
(i)hPSCを、hPSCの後部原始線条細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;
(ii)後部原始線条細胞を、後部原始線条細胞の中間中胚葉細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;ならびに
(iii)中間中胚葉細胞を、FGF9、ならびに任意で、BMP7;レチノイン酸;RAアンタゴニスト、例えばAGN193109;Wntアゴニスト、例えばCHIR99021;FGF20;およびヘパリンの1つまたは複数と接触させ、それによって中間中胚葉細胞から後腎間葉細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程
の連続工程を含む方法を提供することが理解されるであろう。これらの連続工程は、以下のように、本明細書中の以降で説明されるであろう。
上記から理解されるように、hPSCを、血清の非存在下で適切な培養培地、例えば、これに限定されないがAPEL分化培地(Ng et al., 2008, Nat. Protoc. 3:768)において、BMP4、アクチビンAおよび/またはCHIR99021と接触させ、それによって後部原始線条細胞を適切に含む後部原始線条細胞を生成する。hPSCは、hESCまたはiPSCであり得る。
適切に、後部原始線条細胞または後部原始線条細胞を含む混合原始線条集団を、血清の非存在下、適切な培養培地、例えばAPEL分化培地中で、少なくともFGF9および任意でFGF2および/もしくはFGF20を含む1つもしくは複数の線維芽細胞増殖因子(FGF)、ならびに/またはレチノイン酸(RA)アンタゴニストと接触させる。
適切に、後部原始線条細胞とFGF2、FGF9および/またはFGF20との接触の後、生じたIM細胞を、血清の非存在下、適切な培養培地、例えばAPEL分化培地中で、FGF9単独またはBMP7、RA、RAアンタゴニスト、FGF20、Wntアゴニストおよび/もしくはヘパリンの1つもしくは複数と組み合わされたFGF9と接触させる。
(a)ヒト多能性幹(hPCS)細胞をCHIR99021と接触させ、hPSC細胞の後部原始線条細胞への分化を促進する工程;
(b)後部原始線条細胞を、FGF9単独と、またはFGF9およびRAアンタゴニスト、例えばAGN193109と接触させ、後部原始線条細胞のIM細胞への分化を促進する工程;ならびに
(c)IM細胞を、FGF9およびヘパリンのみと、またはFGF9およびヘパリンならびにRAアンタゴニスト、例えばAGN193109と接触させ、それによってIM細胞からネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程
の連続工程を含む。
慢性腎疾患は、毎年3100万人の米国人および170万人のオーストラリア人に影響を及ぼしている深刻な医学的状態である。患者は、症状を示す前に腎機能の90%を失い、腎不全および透析または腎臓移植に至る可能性がある。後期段階の腎疾患に対する米国におけるMedicareの出費は、2010年度で280億ドルと見積もられた。
本明細書に記載される単離されたネフロン前駆細胞および/または尿管上皮前駆細胞の誘導分化は腎毒性スクリーニングのための精製、分化した腎細胞、腎臓オルガノイドまたは腎組織サブタイプの潜在的供給源を提供し得ることも理解されるであろう。
hESCの培養および分化
HES3(MIXL1GFP/wt)細胞は、20%KnockOut血清代替物(Life Technologies)、100μM MEM NEAA(Life Technologies)、110μM 2-メルカプトエタノール(Life Technologies)、1 x ペニシリン/ストレプトマイシン(Life Technologies)、1 x Glutamax(Life Technologies)および10 ng/mL bFGF(R&D systems)を補充したF12/DMEM(Life Technologies)中、照射されたMEFフィーダー細胞上で慣用的に培養した。分化を開始する前日に、細胞を、Matrigelコート96ウェルプレート上に、12,000〜15,000細胞/cm2となるようプレーティングした。一晩の培養後、細胞を、以前に構築された無血清培地APEL中で2〜3日間、30 ng/mL BMP4(R&D systems)および10 ng/mLアクチビンA(R&D systems)または8μM CHIR99021に、次いでAPEL培地中で4日間、200 ng/mL FGF9および1μg/mLヘパリンに暴露し、IM細胞を誘導した。BMP4/アクチビンA誘導の場合、その後、細胞を、200 ng/mL FGF9、50 ng/mL BMP7、0.1μM RAおよび1μg/mLヘパリンに4〜11日間暴露した。CHIR99021誘導の場合、細胞を、200 ng/mL FGF9および1μg/mLヘパリンに6日間暴露し、その後APEL基本培地中でさらに6日間培養した。培地は2日毎に交換した。
未分化のまたは分化させたhESCから細胞懸濁物を調製した。hESCを、37℃で5分間TripLE Select(Life Technologies)を用いて収集し、先細ピペットを用いて解離した。40μmナイロンメッシュを通して細胞をろ過した後、それらを、0.5%FCSおよび1mM EDTAを含むPBS中に、2 x 106細胞/mlの最終密度となるよう再懸濁させた。死細胞を標識するため、ヨウ化プロピジウム(Sigma)を50 mg/mlの終濃度で添加した。FACS分析は、FACS Aria(Becton Dickinson)を用いて行った。死細胞を、ヨウ化プロピジウムに基づきプロットから除外した。すべてのFACS分析を3回超適当に繰り返し、代表結果を示した。
細胞を、PBS中4%パラホルムアルデヒドを用いて4℃で10分間固定し、その後にPBSで洗浄した。次いで細胞を、1%BSA、0.2%ミルク、0.3%Triton X/PBSを用いて室温で1時間ブロックし、そして一次抗体と共に4℃で一晩インキュベートした。二次抗体を室温で1時間インキュベートした。以下の抗体および希釈物を使用した:ウサギ抗PAX2(1:200、#71-6000、Zymed Laboratories Inc.)、ヤギ抗OSR1(1:75、#sc-67723、Santa Cruz Biotechnology)、ヤギ抗LHX1(1:75、#sc-19341、Santa Cruz Biotechnology)、マウス抗TBX6(1:200、AF4744、R&D systems)、ヤギ抗SOX17(1:200、#AF1924、R&D systems)、ウサギ抗SIX2(1:200、#11562-1-AP、Proteintech)、マウス抗ECAD(1:200、#610181、BD Biosciences)、ウサギ抗WT1(1:100、#sc-192、Santa Cruz Biotechnology)、マウス抗HOXD11(1:200、#SAB1403944、Sigma-Aldrich)、ヤギ抗GATA3(1:200、AF2605、R&D systems)、ウサギ抗JAG1(1:200、#ab7771、Abcam)、ウサギ抗CDH6(1:100、#HPA007047、Sigma Aldrich)およびヤギ抗SYNPO(1:200、#sc-21537、Santa Cruz Biotechnology)。二次抗体は:Alexa-488結合ヤギ抗ウサギ、Alexa-594結合ロバ抗ウサギ、Alexa-488結合ロバ抗ヤギおよびAlexa-594結合ヤギ抗マウス(1:250、Life Technologies)であった。画像は、Nikon Ti-U顕微鏡またはZeiss LSM 510 Meta UV共焦点顕微鏡を用いて撮影した。すべてのIF分析を3回超適当に繰り返し、代表画像を示した。
ペレットを4℃で10分間、4%PFAで固定し、パラフィン包埋し、そして7μm厚の切片にした。切片を室温で1時間ヒツジ血清でブロックし、次いでAntigen Unmasking Solution(Vector labs)を用いて抗原回復を行った。一次抗体を4℃で一晩インキュベートし、そして二次抗体を室温で1時間インキュベートした。以下の抗体および希釈物を使用した:ウサギ抗CALB1(1:200、#C2724、Sigma-Aldrich)、ウサギ抗AQP1(1:200、sc-20810、Santa Cruz Biotechnology)、ウサギ抗AQP2(1:200、AB3274、Millipore)、ウサギ抗SLC3A1(1:100、16343-1-AP、Proteintech)およびウサギ抗ヒトミトコンドリア特異的(HuMt)(1:800、#ab92824、Abcam)。OCTコンパウンド(Sakura)に包埋した凍結切片を、抗ヒト核特異的(HuNu)(1:800、#MAB1281、Merck)による染色に使用した。画像は、Olympus BX-51顕微鏡またはZeiss LSM 510 Meta UV共焦点顕微鏡を用いて撮影した。すべてのIF分析を3回超適当に繰り返し、代表画像を示した。
総RNAを、RNeasyマイクロキット(QIAGEN)を用いて細胞から抽出し、そしてcDNAを、Super Script III逆転写酵素(Life Technologies)を用いて>100 ng RNAから合成した。定量RT-PCR(qRT-PCR)分析を、ABI PRISM 7500リアルタイムPCR機によりSyber Green(Applied Biosystems)を用いて行った。すべての絶対データをまずGAPDHに対して標準化し、次いで対照サンプルに対して標準化した(デルタ-デルタ-Ct法)。従来的なRT-PCR分析を、OneTaq DNAポリメラーゼ(NEB)を製造元の指示にしたがい用いて行った。すべてのRT-PCR分析を3回超適当に繰り返し、代表画像を示した。RT-PCRおよびqRT-PCRに使用したプライマーの配列が列挙されている(表1および表2)。
PAX2+、LHX1+、SOX17+、SIX2+またはWT1+に関して陽性の分化細胞の比率を定量するため、細胞を、核染料DAPIと共に各抗体で免疫蛍光染色した。総細胞に対する分化細胞の比率は、Olympus BX-51顕微鏡、10倍レンズを用いて1回の実験あたり1つまたは2つの代表的な視野(3回の独立した実験からの合計3〜5つの代表的な視野、合計1〜1.5 x 103細胞)においてImage Jを用いて手作業で計数した。
分化第12〜13日にTripLE select(Life Technologies)を用いてhESC由来誘導腎細胞を収集し、解離し、単一細胞にした。10 x 105細胞をx400gで2分間沈降させてペレットを形成し、次いで10μg/cm2のCollagen IV(Becton Dickinson)がコーティングされた13 mm径の0.4μm孔を有するろ過膜(#7060-1304 Whatman)上にプレーティングした。このろ過膜を、10%FCS/DMEMの培養培地上に4日間浮かべた。
再集合アッセイは、以前に記載されたようにして実施した5,29。簡潔に言うと、ろ過膜に10μg/cm2のCollagen IV(Becton Dickinson)をコーティングした。組換えを行う胚腎臓細胞を調製するため、12.5〜13.5 dpcマウス由来の胚腎臓を、37℃で10分間Accutase(Life Technologies)で消化し、手作業のピペット操作により解離した。100μmナイロンメッシュを通じて細胞をろ過した後、4〜10 x 105の胚腎臓細胞を4%のhESC由来細胞と組み合わせ、次いでx400gで2分間遠心分離してペレットを形成した。このペレットを上記のようにして調製したろ過膜上にプレーティングし、そして10%FCS/DMEM培養培地を用いて4日間培養した。
本発明者らは、特定の最終結果を標識または排除する遺伝子を含む、発生期の腎臓の鍵となる細胞コンパートメントへのhESCの分化の3段階フレームワークを定義した6(図1a)。中胚葉および内胚葉の両方にとっての前駆体集団である原始線条は、アクチビンAを用いてマウスES細胞(mESC)から誘導することができ7、BMP4およびアクチビンAの反対勾配が、マウスにおける前部(内胚葉) 対 後部(中胚葉)原始線条を規定する8,9。標準的なWntシグナルもまた、マウスおよびヒトESCにおける原始線条の誘導因子として報告されている7,10。IMは後部原始線条から最初に生じるので、本発明者らはまず、hESCがマウスと同様の様式でこれらのモルフォゲンに応答するかどうかを試験した。本発明者らは以前に、20/100(ng/mL)のBMP4/アクチビンAが、原始線条の堅固なマーカーであるMIXL1遺伝子座にGFPがノックインされているレポーターhESC系MIXL1GFP/wtからGFP+原始線条を誘導したことを示した11。このレポーター系を単層培養において用いて、本発明者らは、最適な分化に関して、BMP4およびアクチビンAの様々な組み合わせ(5/200、20/100、30/10、30/0および0/0 ng/mL)または異なる濃度の標準的WntシグナルアゴニストCHIR99021(5、7、9μM)を試験した。すべてのインビトロ実験を、化学的に定義された無血清培養条件下で行った12。MIXL1、T(後部原始線条)およびSOX17(前部原始線条)の発現比較は、高BMP4/低アクチビンA(30/10)または高CHIR99021(>7μM)が後部原始線条に最適であることを示唆した(図1c、d;図2a〜c)。両条件の下で、およそ90%の細胞がGFP+になった(図1b)。
・腎毒性スクリーニングのためのミニ腎臓オルガノイドもしくは精製された腎細胞の作製;
・共通のもしくは患者ごとのいずれかの疾患モデリングのためのミニ腎臓オルガノイドもしくは精製された腎細胞の作製;および/または
・腎疾患の治療的処置のための薬物スクリーニングのためのミニ腎臓オルガノイドもしくは精製された腎細胞の作製
を含み得る。
・細胞療法(急性腎損傷もしくは慢性腎損傷)のための腎細胞型の作製;
・複数の小さな腎臓をひとつに連結し置換「臓器」を形成することを必要とし得る全臓器置換バイオエンジニアリングのための腎細胞型の作製;および/または
・脱細胞化スキャホールドの再細胞化のための腎細胞型の作製
を含み得る。
Claims (29)
- ネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する方法であって、中間中胚葉(IM)細胞を、線維芽細胞増殖因子9(FGF9)および/または線維芽細胞増殖因子20(FGF20)、ならびに任意で、以下:骨形成タンパク質7(BMP7);ヘパリン;Wntアゴニスト;レチノイン酸(RA)、アナログまたはアゴニスト;およびRAアンタゴニストからなる群より選択される1つまたは複数と接触させ、それによって該IM細胞からネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程を含む、方法。
- FGF9および/またはFGF20が、約20 ng〜1μg/mLの範囲;約50〜500 ng/mLの範囲;約100〜300 ng/mLの範囲;および約200 ng/mLからなる群より選択される濃度である、請求項1に記載の方法。
- BMP7が、約25〜75 ng/mLの範囲;約35〜60 ng/mLの範囲;約45〜55 ng/mLの範囲;および約50 ng/mLからなる群より選択される濃度で存在する、請求項1または請求項2に記載の方法。
- RA、アナログまたはアゴニストが、IM細胞からの尿管上皮前駆細胞の相対的生成を増加させる、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- RA、アナログまたはアゴニストが、約10 pM〜1μMの範囲;約30 pM〜0.5μMの範囲;約50 pM〜0.2μMの範囲;および約0.1μMからなる群より選択される濃度で存在する、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- RAアンタゴニストが、IM細胞からのネフロン前駆前駆細胞の相対的生成を増加させる、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- RAアンタゴニストが、約0.50 pM〜10μMの範囲;約0.01μM〜5μMの範囲;約0.1μM〜5μMの範囲;および約1μMからなる群より選択される濃度で存在する、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- Wntアゴニストが、IM細胞からのネフロン前駆前駆細胞の相対的生成を増加させる、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- Wntアゴニストが、約0.1μM〜10μMの範囲;約0.2μM〜5μMの範囲;および約1〜2μMの範囲からなる群より選択される濃度で存在する、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- ヘパリンが、約0.1〜10μg/mLの範囲の濃度で存在する、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 中間中胚葉(IM)細胞を、FGF9単独と、またはBMP7、RA、RAアンタゴニスト、Wntアゴニスト、FGF20および/もしくはヘパリンの1つもしくは複数と組み合わせたFGF9と、約72〜360時間接触させる、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- ネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞が、IM細胞から同期的にまたは同時に生成される、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 後部原始線条細胞を、該後部原始線条細胞のIM細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- ヒト多能性幹細胞(hPSC)を、該hPSCの後部原始線条細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程を含む、請求項13に記載の方法。
- hPSCが、ヒト胚性幹細胞または人工ヒト多能性幹細胞である、請求項14に記載の方法。
- 以下の連続工程を含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法:
(a)ヒト多能性幹(hPCS)細胞を、該hPSC細胞の後部原始線条細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;
(b)後部原始線条細胞を、該後部原始線条細胞のIM細胞への分化を促進する1つまたは複数の作用物質と接触させる工程;ならびに
(c)IM細胞を、FGF9単独と、またはBMP7;RA;RAアンタゴニスト;Wntアゴニスト;FGF20;および/もしくはヘパリンの1つもしくは複数と組み合わせたFGF9と接触させ、それによって該IM細胞からネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程。 - 後部原始線条細胞と接触させる前記1つまたは複数の作用物質が、線維芽細胞増殖因子9(FGF9)単独、またはFGF2および/もしくはFGF20と組み合わせたFGF9を含む、請求項13〜16のいずれか1項に記載の方法。
- FGF9、FGF2および/またはFGF20が、約100〜400 ng/mLの濃度である、請求項17に記載の方法。
- hPSCと接触させる前記1つまたは複数の作用物質が、BMP4、アクチビンAおよび/またはWntアゴニストを含む、請求項14〜18のいずれか1項に記載の方法。
- (i)BMP4が約5〜40 ng/mLの濃度であり;(ii)アクチビンAが約3〜40 ng/mLの濃度であり;および/またはWntアゴニストが約0.5〜50μMの範囲の濃度である、請求項19に記載の方法。
- 以下の連続工程を含む、請求項16に記載の方法:
(a)ヒト多能性幹(hPCS)細胞を、Wntアゴニストと接触させ、該hPSC細胞の後部原始線条細胞への分化を促進する工程;
(b)該後部原始線条細胞を、FGF9単独と、またはFGF9およびRAアンタゴニストと接触させ、該後部原始線条細胞のIM細胞への分化を促進する工程;ならびに
(c)該IM細胞を、FGF9単独と、またはBMP7;RA;RAアンタゴニスト;Wntアゴニスト;FGF20;および/もしくはヘパリンの1つもしくは複数と組み合わせたFGF9と接触させ、それによって該IM細胞からネフロン前駆細胞および尿管上皮前駆細胞を生成する工程。 - 生存能力のあるネフロン前駆細胞および/または尿管上皮前駆細胞を同定する工程をさらに含む、前記請求項のいずれか1項に記載の方法。
- 生存能力のあるネフロン前駆細胞および/または尿管上皮前駆細胞の同定が、生存能力のあるネフロンおよび/または尿管上皮前駆細胞を同定または識別するマーカーとしての複数の核酸および/またはタンパク質の共発現の測定または検出を含む、請求項22に記載の方法。
- 請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法にしたがい生成された、単離、濃縮または精製されたネフロン前駆細胞および/または尿管上皮前駆細胞。
- 腎臓または腎細胞もしくは腎組織を生成する方法であって、請求項24に記載の単離または精製されたネフロンおよび/または尿管上皮前駆細胞から腎臓または腎細胞もしくは腎組織に分化させ、それによって腎臓または腎細胞もしくは腎組織を生成する工程を含む、方法。
- 腎臓または腎細胞もしくは腎組織の生成において使用するための、請求項24に記載の単離、濃縮または精製されたネフロン前駆細胞および/または尿管上皮前駆細胞。
- (i)腎臓移植もしくは慢性腎疾患の処置のための全腎臓および腎組織のバイオプリンティングもしくはバイオエンジニアリングのため;(ii)全臓器脱細胞化された腎臓の再細胞化による再構成腎臓もしくは代替腎臓の作製のため;または(iii)腎疾患および腎臓の状態の細胞療法のための、請求項24に記載の方法。
- 1つまたは複数の化合物の腎毒性を決定する方法であって、1つまたは複数の化合物を、請求項26に記載の単離もしくは精製されたネフロン前駆細胞および/もしくは尿管上皮前駆細胞、またはそれらから分化させたもしくはそれ以外の方法で得た腎細胞もしくは腎組織と接触させ、それによって該1つまたは複数の化合物が腎毒性であるか否かを決定する工程を含む、方法。
- 前記1つまたは複数の化合物を腎臓オルガノイドと接触させることによって実施される、請求項28に記載の方法。
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018216743A1 (ja) * | 2017-05-25 | 2018-11-29 | 国立大学法人京都大学 | 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法 |
WO2023033137A1 (ja) | 2021-09-03 | 2023-03-09 | 大塚製薬株式会社 | 腎臓オルガノイド及びその製造方法 |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9719068B2 (en) | 2010-05-06 | 2017-08-01 | Children's Hospital Medical Center | Methods and systems for converting precursor cells into intestinal tissues through directed differentiation |
NZ715302A (en) | 2013-06-14 | 2021-12-24 | Univ Queensland | Renal progenitor cells |
MX2015017330A (es) * | 2013-07-29 | 2016-04-06 | Hoffmann La Roche | Metodo para la diferenciacion de celulas madre pluripotenciales en precursores renales multi-competentes. |
ES2860423T3 (es) | 2014-05-28 | 2021-10-05 | Childrens Hospital Med Ct | Métodos y sistemas para convertir células precursoras en tejidos gástricos mediante diferenciación dirigida |
JP6804438B2 (ja) | 2014-10-17 | 2020-12-23 | チルドレンズ ホスピタル メディカル センター | 多能性幹細胞を使用するヒト小腸のin vivoモデル、並びにそれを作製、及び使用する方法 |
AU2014277667B2 (en) * | 2014-12-15 | 2022-07-14 | The University Of Queensland | Differentiation of pluripotent stem cells to form renal organoids |
AU2016318114B2 (en) * | 2015-09-03 | 2023-04-20 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Three-dimensional differentiation of epiblast spheroids to kidney organoids models stage-specific epithelial physiology, morphogenesis, and disease |
US20180258404A1 (en) * | 2015-09-17 | 2018-09-13 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods of generating nephrons from human pluripotent stem cells |
ES2929758T3 (es) | 2016-05-05 | 2022-12-01 | Childrens Hospital Med Ct | Métodos para la fabricación in vitro de tejido del fondo gástrico y composiciones relacionadas con el mismo |
AU2017335841A1 (en) | 2016-09-28 | 2019-04-04 | Organovo, Inc. | Use of engineered renal tissues in assays |
AU2017373767B2 (en) | 2016-12-05 | 2021-09-16 | Children's Hospital Medical Center | Colonic organoids and methods of making and using same |
WO2018213886A1 (en) | 2017-05-24 | 2018-11-29 | Murdoch Childrens Research Institute | Genetically induced nephron progenitors |
WO2019006127A1 (en) * | 2017-06-28 | 2019-01-03 | Rutgers, The State University Of New Jersey | ORGANOIDS DERIVED FROM A SINGLE RENAL CELL |
WO2019084612A1 (en) | 2017-10-31 | 2019-05-09 | Murdoch Childrens Research Institute | Composition and method |
CN110468095A (zh) * | 2019-09-05 | 2019-11-19 | 安徽中盛溯源生物科技有限公司 | 一种肾上皮细胞及其制备方法和应用 |
WO2021066076A1 (ja) * | 2019-10-01 | 2021-04-08 | 国立大学法人京都大学 | 尿管芽先端部細胞の単離方法 |
CN111961640B (zh) * | 2020-04-27 | 2023-05-12 | 同济大学 | 一种尿源性肾干细胞三维分化模型的构建方法及培养体系 |
CN111638342A (zh) * | 2020-07-08 | 2020-09-08 | 上海市浦东新区公利医院(第二军医大学附属公利医院) | Sox17蛋白在制备肾透明细胞癌诊断或预后评估试剂盒中的应用 |
WO2023028550A1 (en) * | 2021-08-26 | 2023-03-02 | Vanderbilt University | Accelerated protocol for the differentiation of podocytes from human pluripotent stem cells |
WO2023060190A1 (en) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Vanderbilt University | Nephron progenitor exosomes |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005075636A1 (en) * | 2004-02-09 | 2005-08-18 | The University Of Queensland | Molecular markers associated with metanephric development and renal progenitors |
WO2014200115A1 (ja) * | 2013-06-11 | 2014-12-18 | 国立大学法人京都大学 | 腎前駆細胞の製造方法及び腎前駆細胞を含む医薬 |
Family Cites Families (32)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6517872B1 (en) | 1995-06-12 | 2003-02-11 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | FGFR3 as a marker for mesenchymal skeletal progenitor cells |
US7045519B2 (en) | 1998-06-19 | 2006-05-16 | Chiron Corporation | Inhibitors of glycogen synthase kinase 3 |
DE69919707T2 (de) | 1998-06-19 | 2005-09-01 | Chiron Corp., Emeryville | Glycogen synthase kinase 3 inhibitoren |
US7005252B1 (en) | 2000-03-09 | 2006-02-28 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Serum free cultivation of primate embryonic stem cells |
US7439064B2 (en) | 2000-03-09 | 2008-10-21 | Wicell Research Institute, Inc. | Cultivation of human embryonic stem cells in the absence of feeder cells or without conditioned medium |
US7326570B2 (en) | 2000-06-16 | 2008-02-05 | The Regents Of The University Of California | Induction of tubular morphogenesis using pleiotrophin |
US6477783B1 (en) | 2000-09-19 | 2002-11-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Transportation | Gyratory compactor angle measurement device |
EP1456374A4 (en) | 2001-11-26 | 2005-08-17 | Advanced Cell Tech Inc | METHODS FOR THE PRODUCTION AND USE OF REPROGRAMME HUMAN SOMATIC CELL CORES AND AUTOLOGOUS AND ISOGENIC HUMAN STEM CELLS |
AU2004269409A1 (en) | 2003-08-29 | 2005-03-10 | Regents Of The University Of Minnesota | Kidney derived stem cells and methods for their isolation, differentiation and use |
US8597947B2 (en) | 2004-12-29 | 2013-12-03 | Hadasit Medical Research Services & Development Limited | Undifferentiated stem cell culture systems |
GB2436737B (en) | 2006-03-30 | 2008-07-09 | Univ Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors,and uses thereof |
GB0615327D0 (en) | 2006-03-30 | 2006-09-13 | Univ Edinburgh | Culture medium containing kinase inhibitors and uses thereof |
EP2115125B1 (en) | 2007-01-03 | 2016-09-07 | NeoStem Oncology, LLC | Stem cell growth media and methods of making and using same |
WO2008133904A1 (en) | 2007-04-23 | 2008-11-06 | Stowers Institute For Medical Research | Methods and compositions for stem cell self-renewal |
US9080145B2 (en) | 2007-07-01 | 2015-07-14 | Lifescan Corporation | Single pluripotent stem cell culture |
EP3112456A1 (en) | 2008-06-04 | 2017-01-04 | Cellular Dynamics International, Inc. | Methods for the production of ips cells using non-viral approach |
US8278105B2 (en) | 2008-09-09 | 2012-10-02 | University Of Southern California | Induction, propagation and isolation of liver progenitor cells |
CN102317442B (zh) | 2008-12-17 | 2014-08-13 | 斯克里普斯研究所 | 干细胞的产生和保持 |
WO2010108126A2 (en) | 2009-03-19 | 2010-09-23 | Fate Therapeutics, Inc. | Reprogramming compositions and methods of using the same |
US10894944B2 (en) | 2009-04-10 | 2021-01-19 | Monash University | Cell culture media |
SG178404A1 (en) * | 2009-08-17 | 2012-03-29 | Organ Technologies Inc | Process for production of bioartificial organ |
CN102242146B (zh) | 2010-05-10 | 2015-11-25 | 高丽大学校产学协力团 | 组合物和用其产生诱导全能干细胞的方法 |
EP2569417B1 (en) | 2010-05-13 | 2018-04-18 | Tel HaShomer Medical Research Infrastructure and Services Ltd. | Isolated populations of adult renal cells and methods of isolating and using same |
WO2012011610A1 (en) * | 2010-07-21 | 2012-01-26 | Kyoto University | Method for inducing differentiation of human pluripotent stem cell into intermediate mesoderm cell |
US8951798B2 (en) | 2011-10-13 | 2015-02-10 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of cardiomyocytes from human pluripotent stem cells |
US9890357B2 (en) | 2011-12-19 | 2018-02-13 | Kyoto University | Method for inducing differentiation of human pluripotent stem cells into intermediate mesoderm cells |
KR20130119683A (ko) | 2012-04-24 | 2013-11-01 | 사회복지법인 삼성생명공익재단 | 줄기세포 배양 배지 및 이를 이용한 줄기세포의 배양방법 |
KR101523040B1 (ko) | 2012-06-26 | 2015-05-26 | 라정찬 | 고농도의 줄기세포 제조방법 |
US8962322B2 (en) | 2012-12-03 | 2015-02-24 | City Of Hope | Enhancers of induced pluripotent stem cell reprogramming |
US20150037883A1 (en) | 2013-03-03 | 2015-02-05 | Royan Institute | Method for derivation and long-term establishment of ground state pluripotent embryonic stem cells |
NZ715302A (en) | 2013-06-14 | 2021-12-24 | Univ Queensland | Renal progenitor cells |
CN103555660B (zh) | 2013-09-09 | 2016-03-30 | 依科赛生物科技(太仓)有限公司 | 一种胚胎干细胞无血清培养基及其应用 |
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2021
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005075636A1 (en) * | 2004-02-09 | 2005-08-18 | The University Of Queensland | Molecular markers associated with metanephric development and renal progenitors |
WO2014200115A1 (ja) * | 2013-06-11 | 2014-12-18 | 国立大学法人京都大学 | 腎前駆細胞の製造方法及び腎前駆細胞を含む医薬 |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
BIOMATERIALS, vol. 33, JPN6018026397, 2012, pages 4700 - 4711, ISSN: 0004061011 * |
DEVELOPMENTAL BIOLOGY, vol. 302, JPN6018026394, 2007, pages 92 - 103, ISSN: 0003835263 * |
DEVELOPMENTAL CELL, vol. 22, JPN6018026392, 2012, pages 1191 - 1207, ISSN: 0003835262 * |
DEVELOPMENTAL DYNAMICS, vol. 216, JPN6018026389, 1999, pages 72 - 88, ISSN: 0004061009 * |
INTERNATIONAL SOCIETY FOR STEM CELL RESEARCH POSTER ABSTRACTS, vol. 11th, JPN7014003209, 12 June 2013 (2013-06-12), pages 2184, ISSN: 0004061010 * |
日児腎誌, vol. 26, no. 1, JPN6014047601, 15 April 2013 (2013-04-15), pages 64 - 69, ISSN: 0003835264 * |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2018216743A1 (ja) * | 2017-05-25 | 2018-11-29 | 国立大学法人京都大学 | 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法 |
CN110662832A (zh) * | 2017-05-25 | 2020-01-07 | 国立大学法人京都大学 | 由间介中胚层细胞分化诱导肾祖细胞的方法和由多能干细胞分化诱导肾祖细胞的方法 |
JPWO2018216743A1 (ja) * | 2017-05-25 | 2020-03-26 | 国立大学法人京都大学 | 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法 |
JP7161775B2 (ja) | 2017-05-25 | 2022-10-27 | 国立大学法人京都大学 | 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法 |
JP2022188229A (ja) * | 2017-05-25 | 2022-12-20 | 国立大学法人京都大学 | 中間中胚葉細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法、および多能性幹細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法 |
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