JP2016507233A - 膀胱癌を診断するための非侵襲的診断法 - Google Patents

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Abstract

本発明は、被験対象由来のサンプルにおいて１以上のマーカーの発現レベルを決定することに基づく膀胱癌を診断するための非侵襲的診断法に関し、前記マーカーの１つはＩＧＦ２遺伝子である。他の好適なマーカーとして、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣＩＡ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭＩＯ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、およびＭＭＰ１２、ならびに可能性としてはＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫ、ＣＤＫ１を含む。

Description

発明の属する技術分野
本発明の適用分野は、保健分野、主として「腫瘍学的泌尿器学」および「分子生物学」の分野である。具体的には、本発明は、膀胱癌の診断のための非侵襲的診断法に関する。
発明の背景
膀胱の尿路上皮癌（ＵＣ）は、男性において世界で７番目に多い悪性腫瘍であり、年間に診断される新たな症例はおよそ３５０．０００件である。ＵＣは、新生物による死因の第４位であり、前立腺癌に次いで泌尿器系で２番目に多い腫瘍であり、その高い再発率のために、泌尿器腫瘍学的注意の主因である(Boyle P., Ferlay J. Cancer incidence and mortality in Europe, 2004. Ann Oncol 2005; 16:481-8)。
膀胱のＵＣの９０％を超える原因は移行上皮癌であるが、それらはまた腺癌および扁平上皮癌として存在する場合もある。移行細胞上皮は尿路上皮粘膜の内層に位置し、粘膜固有層により筋層から分離されている。ＵＣの原因のおよそ７５〜８０％は表在性腫瘍であり、すなわち、それらは筋層には浸潤しないことから、非筋層浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）と呼ばれる。それらの７０〜８０％は尿路上皮粘膜にのみ限局され（ＴａおよびＣＩＳステージ）、一方、２０〜３０％は、膀胱壁の筋層に浸潤することなく、粘膜固有層に達する（Ｔ１ステージ）(Cheng L, Weaver AL, Neumann RM, Scherer BG, Bostwick DG. Substaging of T1 bladder carcinoma based on the depth of invasion as measured by micrometer: A new proposal. Cancer 1999; 86:1035-43)。ＮＭＩＢＣは、それらの多発性、それらの再発傾向およびそれらの良好な予後を特徴とする。ＮＭＩＢＣ患者の生存率は、５年で９０％、１０年で８０％である(Pansadoro V, Emilliozzi P, Defidio L, et al. Bacillus Calmette-Guerin in the treatment of stage T1 grade 3 transitional cell carcinoma of the bladder: long-term results. J Urol 1995; 154:2054-8)。これらの患者の再発リスクはおよそ７０％であるが、１０〜１５％のみが筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）へ進行する。腫瘍悪性度と腫瘍進行のリスクの間には密接な関係が見られた(Jordan AM, Weingarten J, Murphy WM. Transitional cell neoplasms of the urinary bladder. Can biologic potential be predicted from histologic grading? Cancer 1987; 60:2766-74)。ほとんどのＴａ腫瘍は低悪性度の腫瘍である。これらの腫瘍は再発することが多いが、進行するのは５％未満である。他方、多くのＴ１腫瘍は高悪性度腫瘍であり、３０〜５０％が筋層浸潤性腫瘍へ進行する。対照的に、ＵＣのおよそ２０％の症例は、診断時にＭＩＢＣとして存在する。これらは、治療されなければ２年で死に至る悪性腫瘍である。ＭＩＢＣ患者の５０％は、根治的外科処置を受けても遠隔転移または限局的再発のために２年後に死に至る。ＭＩＢＣの根本的問題はその前浸潤段階の短さにあり、これらの病態は、臨床相に達した際に、症例の２７〜６０％がすでに深筋層を侵しており、２５％が膀胱前脂肪に達し、１４％が臨床的に検知可能な遠隔転移を有する。
現行の診断システムは、泌尿器細胞診（尿中の落屑細胞から）と膀胱鏡検査による膀胱の直接的観察の組合せに基づくものである。実際には、膀胱鏡検査が主要な腫瘍診断およびモニタリング技術である。膀胱鏡検査は経尿道経路によって行われ、従って侵襲的であり、患者にとってはかなり面倒な技術である。この技術の感度および特異度はかなり高いと考えられていたが、技術そのものの改良（蛍光膀胱鏡検査）が、おそらくそうではなく、表在性腫瘍に見られる再発部分が、その目に見えない部分を全部切除できないことによるものであり得ることを示す(Jones JS. DNA-based molecular cytology for bladder cancer surveillance. Urology 2006;67:35-45)。さらに、細胞診の解釈が観察者によるところが大きく、従って、特に低悪性度腫瘍においては観察者間の相違が存在し得る。
ＵＣ進行に至る分子イベントに関する知識の進展は、非筋層浸潤性腫瘍および筋層浸潤性腫瘍(Bastacky S, Ibrahim S, Wilczynski SP, Murphy WM. The accuracy of urinary cytology in daily practice. Cancer 1999;87:118-28; aboe M, Marcussen N, Jensen KM, Thykjaer T, Dyrskjot L, Orntoft TF. Gene expression profiling of noninvasive primary urothelial tumours using microarrays. Br J Cancer 2005;93:1182-90; Thykjaer T, Workman C, Kruhoffer M, et al. Identification of gene expression patterns in superficial and invasive human bladder cancer. Cancer Res 2001;61:2492-9)、ＵＣ進行の異なる病期(Sanchez-Carbayo M, Socci ND, Charytonowicz E, et al. Molecular profiling of bladder cancer using cDNA microarrays: defining histogenesis and biological phenotypes. Cancer Res 2002;62:6973-80)および異なる臨床進行を有する患者(Sanchez-Carbayo M, Socci ND, Lozano J, Saint F, Cordon-Cardo C. Defining molecular profiles of poor outcome in patients with invasive bladder cancer using oligonucleotide microarrays. J Clin Oncol 2006;24:778-89)を含む、異なるクラスのＵＣから得られたＲＮＡを用いたＤＮＡマイクロアレイの手段による遺伝子発現プロフィールの研究を刺激した。また、同じアプローチが、種々の治療薬に関して非奏功ＵＣ患者から奏功ＵＣ患者を分ける１４の予測遺伝子のパネルの同定にも用いられた(Takata R, Katagiri T, Kanehira M, et al. Predicting response to methotrexate, vinblastine, doxorubicin, and cisplatin neoadjuvant chemotherapy for bladder cancers through genome-wide gene expression profiling. Clin Cancer Res 2005;11:2625-36)。
直接的尿路上皮組織分析は、慣例の診断方法を開発するための最も苦痛のない代替法であるが、侵襲的手順は患者の生活の質を低下させ、ずっと大きい経済的保健負担をなるので、侵襲的でないことが大きな関心事となろう。膀胱上皮全体と、従って腫瘍塊と接触している血液、特に尿は、それらが分析対象サンプルを取得する容易で非侵襲的な方法であることを考えれば、腫瘍マーカーの検出に好適な生体材料源である。
相当な数の論文が、膀胱のＵＣを診断するための非侵襲的診断法の探索において、尿中の腫瘍マーカーの研究に焦点を当てている。実際に、この目的で種々の検査が市販されているが（ＮＭＰ２２、ＵｒｏＶｙｓｉｏｎ、ＩｍｍｕｎｏＣｙｔ、Ａｃｃｕ−Ｄｘなど）、これらのほとんどのものが泌尿器細胞診よりも感度が高いとしても、泌尿器細胞診がやはり最も特異的である。
膀胱癌のマーカー遺伝子の同定は、前記腫瘍のヘテロな性質のために複雑である。尿中のマーカータンパク質の検出を含んでなる診断法（ＷＯ２００８／１１９８５８Ａ１）が最近開発されたが、移行性癌の診断において有効であるにすぎない。国際特許出願ＷＯ２００８／１１３８７０には、とりわけ、膀胱液サンプルにおけるＡＮＸＡ１０、Ｃ１４ｏｒｆ７８（ＡＨＮＡＫ２）、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０遺伝子の発現プロファイルに基づく膀胱癌の診断および／または予後のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ非侵襲法を記載しており、この方法は高い感度および特異度を有するものの、その使用には１４のマーカーを分析する必要があり、分析コストは高くなり、方法論的観点から極めて複雑となる。
膀胱癌を診断するための非侵襲的診断法はいくつか存在するものの、それらには臨床実践に慣用されているものはなく、従って、高い感度および特異度で膀胱癌の診断を可能とし、かつ、分析を必要とするマーカーの数が少ない、膀胱癌の非侵襲的診断のための代替法を開発する必要がなおある。
発明の簡単な説明
一態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法に関し、前記方法は、本発明の第１の方法、本発明の第２の方法または本発明の第３の方法として本明細書に示されるものである。
別の態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するための方法に関し、前記方法は、本発明の第４の方法、本発明の第５の方法または本発明の第６の方法として本明細書に示されるものである。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法に関し、前記方法は、本発明の第７の方法、本発明の第８の方法または本発明の第９の方法として本明細書に示されるものである。
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断におけるまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしてのＩＧＦ２遺伝子の使用に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断においてまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしての、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子とを含んでなる、または、それらからなる遺伝子の組合せの使用に関する。
別の態様において、本発明は、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記組合せは以下の組合せ：
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
のいずれでもない）とを含んでなる遺伝子の組合せの、膀胱癌の診断におけるまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしての使用に関する。
別の態様において、本発明はキットに関し、前記キットは、本発明の第１のキット、本発明の第２のキットまたは本発明の第３のキットとして本明細書に示されるものである。
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断または膀胱癌のモニタリングのための、本発明により提供される前記キットの使用に関する。
１２−遺伝子モデルの診断性能（Ａ）トレーニングコホート（ｎ＝２１１）およびバリデーションコホート（ｎ＝２０７）における１２−遺伝子モデルのＲＯＣ曲線。カットオフ：０．５２５。（Ｂ）バリデーションセットサンプルにおける種々のリスク群の１２−遺伝子モデル感度（Ｔａ ＧｘおよびＴｘ ＬＧサンプルは、この分析から除外した）。 ＵＣ診断において検討した各遺伝子の影響を示す棒グラフ。参照ラインを超える棒は、統計的に有意な関係に相当する（ｐ＜０．０５）。濃い棒は、負の関係を表し（ＥＢＦ１、ＡＨＮＡＫ２、ＭＡＧＥＡ９．ＭＡＧＥＡ９Ｂ、ＫＬＦ９、ＣＲＨおよびＫＲＴ１４）、薄い棒は正の関係を表す。大部分はＵＣ診断の遺伝子シグネチャーからの遺伝子の選択は、より高い影響を表す棒を有する遺伝子と一致する。
発明の詳細な説明
本発明の著者らは、遺伝子マーカーとして機能する１以上の遺伝子の発現レベルを決定することに基づく膀胱癌診断のためのｉｎ ｖｉｔｒｏ非侵襲的方法を開発した。
本発明の方法
本発明の著者らは、ＩＧＦ２遺伝子が膀胱癌診断の良好なマーカーであることを見出した。この知見により、検討下の対象由来のサンプルにおける前記遺伝子（および場合により、膀胱癌診断価値を有する他の遺伝子）の発現レベルをその参照値と比較することに基づく非侵襲的方法による対象における膀胱癌診断を決定することが可能となる。
よって、一態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法、以下、「本発明の第１の方法」であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定すること；および
ｂ）前記サンプルにおける前記ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較することを含んでなり、
前記遺伝子の前記参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法に関する。
本明細書において使用される場合、用語「膀胱癌」は、膀胱組織に起源するタイプの癌を意味し、例えば、移行上皮癌（尿路上皮癌またはＵＣとしても知られる）、扁平上皮癌、腺癌または小細胞癌など、ＴＮＭ分類[Sobin LH & Wittekind CH. TNM Classification of Malignant Tumours. International Union Against Cancer., ed. 6th. New York: John Wiley & Sons; 2002]によっていずれの病期に分類される癌も含む。予後は、下記の病期は分類結果と密接に関連する。
ＴＭ：原発腫瘍
・Ｔａ：非浸潤性乳頭癌または粘膜に限局する乳頭癌。
・Ｔｉｓ：上皮内癌。粘膜固有層に浸潤していない扁平表在性腫瘍。
・Ｔ１：上皮下結合組織に浸潤しているまたは粘膜固有層に浸潤している腫瘍。従って、ＴｉｓおよびＴ１は高悪性度として分類され、すなわち、それらは悪性および浸潤の極めて高い可能性を有する。
・Ｔ２：膀胱筋層に浸潤している腫瘍、これはさらに以下に分類される：
・Ｔ２ａ：表在性筋層または内側半分に浸潤している腫瘍；および
・Ｔ２ｂ：深筋層または外側半分に浸潤している腫瘍。
・Ｔ３：筋層を超えて浸潤しているまたは膀胱前脂肪に浸潤している腫瘍、これはさらに以下に分類される：
・Ｔ３ａ：顕微鏡的浸潤；および
・Ｔ３ｂ：肉眼的浸潤。
・Ｔ４：膀胱に隣接する構造に浸潤している腫瘍。これは２つのサブタイプに分類される：
・Ｔ４ａ：前立腺、子宮または膣の浸潤；および
・Ｔ４ｂ：骨盤または腹壁の浸潤。
ＮＸ：リンパ節転移。この分類は転移のあるリンパ節の数およびそのサイズに基づいて行われる：Ｎ０（リンパ節転移無し）、Ｎ１（２ｃｍより小さい１個のリンパ節転移）、Ｎ２（５ｃｍ以下の１以上のリンパ節転移）およびＮ３（５ｃｍより大きいリンパ節転移）。
ＭＸ：転移の存在。Ｍ０：遠隔転移無し。Ｍ１：遠隔転移。
膀胱癌はまた、世界保健機関（ＷＨＯ）によって確立された癌の悪性度の特徴に従って分類することもできる。この分類によれば、腫瘍は、他の組織に浸潤する高い浸潤力および高悪性度を有することを特徴とする場合には高悪性もしくはＨＧ腫瘍でありと見なされ、または低い悪性度および浸潤能を有することを特徴とする場合には低悪性またはＬＧ腫瘍と見なされる。
本明細書において使用される場合、用語「診断する」または「診断」は、それに従って、対象が特定の病態（この場合、膀胱癌）に罹患している確率を評価することを意味する。当業者が理解するように、このような評価は、診断を受ける対象の１００％に正確であることが好ましいが、そうでなくてもよい。しかしながら、この用語は、対象が前記病態（この場合、膀胱癌）に罹患しているなど、対象の統計的に有意な部分を特定できる必要がある。当業者ならば、ある部分が統計的に有意であるか否かを、様々な周知の統計学的評価ツールを用いて、例えば、信頼区間の決定、ｐ値の決定、スチューデントのｔ検定、マン・ホイットニー検定などの手段によって決定することができる。前記ツールに関する情報および詳細は、Dowdy and Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983に見出すことができる。好ましい信頼区間は、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％または少なくとも９５％である。ｐ値は好ましくは、０．２、０．１、０．０５、０．０２５、０．００１またはそれ未満である。
本明細書において使用される場合、用語「対象」は、哺乳動物として分類される任意の動物を意味し、限定されるものではないが、家庭内動物および農用動物、霊長類およびヒト、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、ウマ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、または齧歯類が含まれる。対象は好ましくは、年齢または人種を問わずヒト男性または女性である。
本明細書において使用される場合、用語「マーカー」または「マーカー遺伝子」は、異なる表現型を示す集団において示差的に発現される遺伝子を意味し、その示差的発現は、単独でまたは他の遺伝子と組み合わさって、無作為に予想されるものよりも大きな程度で特定の表現型と関連する。
本明細書において使用される場合、用語「サンプル」は、対象から単離された生体材料を意味し、従って、生体サンプルを含む。前記サンプルは、所望のマーカーを検出するために好適ないずれの生体材料も含み、対象由来の細胞および／または非細胞材料を含んでなり得る。一般に、サンプルは、いずれの好適な生体組織または体液から単離されてもよいが、前記サンプルは好ましくは、本発明を実施するためには、検討下の対象由来の膀胱液を含んでなるサンプルである。前記膀胱液サンプルは、尿サンプル、例えば、排尿サンプル、膀胱洗液サンプルなどであり得、任意の従来法によって得ることができる。
第１の工程では、本発明の第１の方法は、検討下の対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定することを含んでなる、またはからなる。本明細書において使用される場合、用語「発現レベル」は、特定の遺伝子の発現程度を評価するパラメーターの値を意味する。前記の値は、対象遺伝子のｍＲＮＡレベルを測定することまたは前記対象遺伝子によりコードされるタンパク質の量を測定することによって決定することができる。
本明細書において使用される場合、用語「ＩＧＦ２」は、インスリン様成長因子２を意味し、Ｃ１１ｏｒｆ４３、ＩＧＦ−ＩＩ、ＦＬＪ２２０６６、ＦＬＪ４４７３４、ＩＮＳＩＧＦまたはＰＰ９９７４としても知られる。ヒトＩＧＦ２遺伝子は１１番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月１６日版）では受託番号ＮＧ＿００８８４９．１を有する。
事実上、遺伝子の発現レベルを検出および定量するためのいずれの従来法も、本発明の枠組み内で、特定の遺伝子の発現レベルを検出および定量するために使用可能である。限定されない例として、遺伝子の発現レベルは、前記遺伝子のｍＲＮＡレベルを定量する手段によるか、または前記遺伝子によりコードされるタンパク質のレベルを定量する手段によって決定することができる。
特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、検討下の対象由来のサンプルにおいて、前記遺伝子の転写産物（ｍＲＮＡ）の発現レベルを測定することによって決定される。この目的で、サンプルに、さらなる分析向けに核酸を調製するために細胞内成分を水溶液または有機溶液中に放出させる目的で、組織または細胞の構造を物理的または機械的に破壊する処理を施すことができる。抽出プロセス中にＲＮＡ分解を防ぐために注意することが好ましい。
好ましい実施形態では、発現レベルは、検討下の対象由来の膀胱液サンプル、例えば、尿中に含まれる細胞から得られるＲＮＡを用いて決定される。限定されない例として、膀胱液サンプル、例えば、尿は、そのために好適な容器、好ましくは、ＲＮＡ安定化剤（例えば、１／２５容量の０．５Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ８）で処理した容器中に採取することができる。このサンプルは、それが採取された時点で処理することもできるし、あるいは所望により、後の、例えばその後２４時間内での処理のために、サンプルの分解を防ぐ好適な条件下で保存することもできる。膀胱液サンプル、例えば尿、の細胞を沈降させるために、４℃、１，０００ｘｇで１０分間などの好適な遠心分離を行うことができる。その後、細胞ペレットを適切に処理することもできるし、あるいはＲＮＡを抽出するまで、例えば−８０℃で冷凍することもできる。所望により、遠心分離後に、細胞ペレットを、ＲＮＡを単離するために好適な薬剤、例えば、トリゾール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、ＣＡ、ＵＳＡ）に再懸濁させることもできる。細胞ペレットに添加するトリゾールの容量は、サンプルの初期用量に応じて調整することができる。所望により、サンプルを遠心分離して細胞ペレットを得た後に、好適な容量のトリゾール、例えば、５０または１００ｍｌの膀胱液、例えば尿、につき１ｍｌを加え、そのサンプルを、処理が望まれるまで−８０℃で保存することができる。サンプルから得られたＲＮＡの総量は、２６０ｎｍでの吸光度を測定する分光光度計（例えば、ＮａｎｏＤｒｏｐ）の手段によって定量することができる。
ｍＲＮＡの量を決定するための方法は現況技術において周知である。例えば、検討下の対象由来の膀胱液サンプルなどのサンプル中に含まれる核酸は、従来法に従って、例えば、溶解酵素、化学溶液または固定樹脂の使用によって抽出される。抽出されたｍＲＮＡは、ハイブリダイゼーション（例えば、ｍＲＮＡを標識ｃＤＮＡに変換した後に、ノーザンブロット分析またはＤＮＡもしくはＲＮＡアレイ（マイクロアレイ））および／または酵素的連鎖反応により増幅によって検出することができる。一般に、定量的または半定量的な酵素的増幅法が好ましい。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲまたは半定量的ＲＴ−ＰＣＲ技術が特に有利である。プライマー対は、好ましくは、ゲノムＤＮＡ（ｇＤＮＡ）の混入からｃＤＮＡ増幅を識別するためにイントロンを重複させる目的で設計される。ｇＤＮＡの混入からＤＮＡ増幅を識別する目的で、所望により、２つのエキソンの間に位置する領域で特異的にハイブリダイズする、好ましくは例えば蛍光で標識されたさらなるプライマーまたはプローブも設計される。所望により、前記プライマーは、５’末端からプライマーの全長の半分までをおおよそ含んでなるヌクレオチドは対象エキソンの一方とハイブリダイズし、３’末端から前記プライマーの全長の半分までをおおよそ含んでなるヌクレオチドは他方の目的エキソンとハイブリダイズするように設計することができる。好適なプライマーは、当業者により容易に設計することができる。他の増幅方法としては、リガーゼ連鎖反応(ligase chain reaction)（ＬＣＲ）、転写増幅法(transcription-mediated amplification)（ＴＭＡ）、ストランド変位増幅(strand displacement amplification)（ＳＤＡ）および核酸配列に基づく増幅(nucleic acid sequence based amplification)（ＮＡＳＢＡ）が含まれる。ｍＲＮＡの量は、好ましくは、定量的または半定量的に測定される。遺伝子の発現レベルを定量するための従来法についての関連情報は、例えば、Sambrook et al., 2001 [Sambrook, J., et al., “Molecular cloning: a Laboratory Manual”, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, N.Y., Vol. 1-3]に見出すことができる。
特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ｑＰＣＲ）により決定される。
種々のサンプル間である遺伝子の発現値を正規化するために、検討対象の対象由来のサンプルにおける対象遺伝子のｍＲＮＡレベルを対照ＲＮＡレベルと比較することが可能である。本明細書において使用される場合、「対照ＲＮＡ」は、発現レベルが腫瘍細胞であるか非腫瘍細胞であるかによって異ならない遺伝子、例えば、腫瘍細胞と非腫瘍細胞の両方で構成的に発現される遺伝子のＲＮＡであり；対照ＲＮＡは、好ましくは、構成的に発現され、かつ、必須の細胞機能を遂行するタンパク質をコードするハウスキーピング遺伝子に由来するｍＲＮＡである。本発明において使用するためのハウスキーピング遺伝子の限定されない実例としては、ＧＵＳＢ（β−グルクロニダーゼ）、ＰＰＩＡ（ペプチジル−プロリルイソメラーゼＡ）、β−２−ミクログロブリン、ＧＡＰＤＨ、ＰＳＭＢ４（プロテアソームサブユニットβ型−４）、ユビキチン、トランスフェリン受容体、１８−ＳリボソームＲＮＡ、シクロフィリン、チューブリン、β−アクチン、３−モノオキシゲナーゼ／トリプトファン５−モノオキシゲナーゼチロシン活性化タンパク質（ＹＷＨＡＺ）などが挙げられる。特定の実施形態では、対照ＲＮＡは、ＧＵＳＢおよび／またはＰＰＩＡ ｍＲＮＡである。
他方、対象遺伝子の発現レベルは、遺伝子の発現の増加は通常、対応するタンパク質の量の増加を伴うので、前記遺伝子によりコードされるタンパク質の発現レベルを決定することにより決定することも可能である。特定の遺伝子の発現に相当するタンパク質の量の決定は、例えば、イムノアッセイなどの手段による、タンパク質検出および定量のためのいずれの従来法を用いて行ってもよい。限定されない例として、前記の決定は、決定対象のタンパク質（または抗原決定基を有するその断片）と特異的に結合する能力を有する抗体とその後の抗原抗体複合誘導体の定量を用いて行うことができる。前記抗体は、例えば、ポリクローナル血清、ハイブリドーマ上清またはモノクローナル抗体、抗体のフラグメント、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディー、ヒト化抗体などであり得る。前記抗体はマーカーで標識されてよい（またはされなくてもよい）。本発明において使用可能なマーカーの限定されない実例としては、放射性同位体、酵素、蛍光団、化学発光試薬、酵素補因子、酵素基質、酵素阻害剤などが挙げられる。本発明において使用可能な周知のアッセイには、例えば、ウエスタンブロットまたは免疫ブロット技術に基づくアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）、ＲＩＡ（ラジオイムノアッセイ）、ＥＩＡ（酵素イムノアッセイ）、ＤＡＳ−ＥＬＩＳＡ（二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ）、免疫細胞化学的または免疫組織化学的技術などの多様なものが存在する。タンパク質を検出および定量する他の方法としては、アフィニティークロマトグラフィー、リガンド結合アッセイ技術などがある。
第２の工程では、本発明の第１の方法は、検討下の対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較することを含んでなる、またはからなる。用語「参照値」は、対象から得られたサンプルから取得した値／データに対する参照として使用される臨床検査値を意味する。参照値（または参照レベル）は、絶対値、相対値、上限および／または下限を有する値、一連の値、平均値(average value)、中央値、平均値(mean value)、または対照値もしくは参照値の参照により表される値であり得る。参照値は、例えば、検討対象の対象由来のサンプルから得られたものであるが、過去の時点で得られた値など、ある個体サンプルから得られた値に基づいてもよい。参照値は、検討対象の対象と一致する暦年齢群の対象の集団で得られた値などの多数のサンプルに基づいてもよいし、あるいは分析対象サンプルの包含または除外サンプルのセットに基づいてもよい。参照値は、ある病態または特定の表現型を持たない健常な対象由来のサンプルから得られた比較対象のマーカーの発現値に基づいてもよい。例えば、参照値は、膀胱癌を持たない、または膀胱癌の病歴を持たない対象由来の膀胱液サンプル、例えば、尿から得られた分析対象マーカーの発現レベルに基づいてもよい。他方、参照値は、腫瘍の外科的切除が行われ、かつ、再発を受けていない対象から得られた分析対象遺伝子の発現レベルに基づいてもよい。好ましい実施形態では、参照値は、健常な対象または膀胱癌の前病歴を持たない対象由来のサンプルまたはサンプルセットから得る。別の好ましい実施形態では、参照値は、膀胱腫瘍の外科的切除が行われ、かつ、好ましくは補助化学療法の不在下で、再発を受けていない対象由来のサンプルまたはサンプルセットから得る。当業者ならば、実施される特定の方法に応じてサンプルの種類が異なり得ることが分かるであろう。
参照値が確定されれば、検討下の対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを参照値と比較する。この比較の結果として、対象由来のサンプルにおける対象遺伝子（例えば、本発明の第１の方法ではＩＧＦ２）の発現レベルは、前記遺伝子の前記参照値「よりも大きい」もしくは「増加している」、「小さい」もしくは「低下している」、または「と同等」の場合がある。本発明に関しては、対象由来のサンプルにおける前記遺伝子の発現レベルが、前記遺伝子の参照値に比べて例えば、５％、１０％、２５％、５０％、１００％もしくはさらにはそれを超えて増加している場合、または前記遺伝子の参照値に比べて例えば、少なくとも１．１倍、１．５倍、２倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００もしくはさらにはそれを超えて増加している場合に、対象由来のサンプルにおける対象遺伝子の発現レベルは、前記遺伝子の参照値「よりも大きい」または「に比べて増加している」と見なされる。本発明に関してはまた、対象由来のサンプルにおける前記遺伝子の発現レベルが、前記遺伝子の参照値に比べて、例えば、５％、１０％、２５％、５０％、７５％、もしくはさらには１００％低下している場合に、対象由来のサンプルにおける対象遺伝子の発現レベルは、前記遺伝子の参照値「よりも小さい」または「に比べて低下している」と見なされる。
本発明に関してはまた、前記遺伝子の発現レベルが参照値に比べて実質的に変化してない場合に、対象由来のサンプルにおける対象遺伝子の発現レベルは、前記遺伝子の参照値「と同等である」と見なされ；例えば、レベルの違いが０．１％以下、０．２％以下、０．３％以下、０．４％以下、０．５％以下、０．６％以下、０．７％以下、０．８％以下、０．９％以下、１％以下、２％以下、３％以下、４％以下、５％以下、またはその決定に用いた試験方法に関する誤差と同じパーセンテージ値以下である場合に、対象由来のサンプルにおける遺伝子の発現レベルは、参照値「と同等である」を見なされる。
対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと前記遺伝子の参照値との比較が行われれば、本発明の第１の方法は、検討下の対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルが前記参照値よりも大きいか否かに基づき、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断することができる。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを用いれば、多施設バリデーションコホートにおいて感度７６．８５％および特異度９１．２６％（ＡＵＣ＝０．９０７）で膀胱癌を診断できることを明らかに示す（表６）。
さらに、本発明の著者らは、ＩＧＦ２遺伝子と、膀胱癌を診断するための第２の遺伝子との組合せが膀胱癌診断に使用できることを見出した。この知見により、検討下の対象由来のサンプルにおいて前記ＩＧＦ２遺伝子と膀胱癌の診断のための前記第２の遺伝子の発現レベルをその参照値と比較することに基づく非侵襲的方法によって、対象における膀胱癌診断を確立することができる。
よって、別の態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法、以下、「本発明の第２の方法」であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；ならびに
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること
を含んでなり、
前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０もしくはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法に関する。
第１の工程では、本発明の第２の方法は、検討下の対象由来のサンプルにおいて、（ｉ）ＩＧＦ２遺伝子の発現レベル、および（ｉｉ）ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルを決定することを含んでなる、またはそれからなる。
用語「診断」、「対象」、「膀胱癌」、「サンプル」、「発現レベル」および「ＩＧＦ２」は、本発明の第１の方法に関して従前に定義されており、引用することによりここに組み込む。
本明細書において使用される場合、用語「ＭＡＧＥＡ３」は、インスリン様黒色腫関連抗原３を意味し、ＣＴ１．３、ＨＩＰ８、ＨＹＰＤ、またはＭＡＧＥ３としても知られる。ヒトＭＡＧＥＡ３遺伝子はＸ染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１０月３０日版）では受託番号ＮＣ＿００００２３．１０を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＡＮＸＡ１０」は、アネキシンＡ１０を意味し、ＡＮＸ１４としても知られる。ヒトＡＮＸＡ１０遺伝子は４番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年６月２８日版）では受託番号ＮＭ＿００７１９３．４を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＡＨＮＡＫ２」は、神経芽細胞分化関連タンパク質ＡＨＫＡＫを意味し、Ｃ１４ｏｒｆ７８またはＫＩＡＡ２０１９としても知られる。ヒトＡＨＮＡＫ２遺伝子は１４番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１２月５日版）では受託番号ＮＭ＿００１６２０．１を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＣＴＳＥ」はカテプシンＥを意味し、ＣＡＴＥ４としても知られる。ヒトＣＴＳＥ遺伝子は１番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月１２日版）では受託番号ＮＭ＿００１９１０．３を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＣＲＨ」はコルチコトロピン放出ホルモンを意味し、ＣＲＦとしても知られる。ヒトＣＲＨ遺伝子は８番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１２月２３日版）では受託番号ＮＭ＿００７５６．２を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＫＬＦ９」はＫｒｕｐｐｅｌ様因子９を意味する。ヒトＫＬＦ９遺伝子は９番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月７日版）では受託番号ＮＭ＿００１２０６．２を意味する。
本明細書において使用される場合、用語「ＫＲＴ２０」はケラチン２０を意味し、Ｋ２０、ＣＫ２０、ＫＲＴ２１、ＭＧＣ３５４２３としても知られる。ヒトＫＲＴ２０遺伝子は１７番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１０月３０日版）では受託番号ＮＣ＿００００１７．１０を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＰＯＳＴＮ」はペリオスチン，骨芽細胞特異的因子を意味する。ヒトＰＯＳＴＮ遺伝子は１３番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２８日版）では受託番号ＮＭ＿００１１３５９３４．１を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ」は、タンパク質ホスファターゼ１，調節（阻害剤）サブユニット１４Ｄを意味し、ＧＢＰＩ−１、ＦＬＪ２０２５１、ＭＧＣ１１９０１４、ＭＧＣ１１９０１６、ＣＰＩ１７様としても知られる。ヒトＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ遺伝子は１５番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１０月３０日版）では受託番号ＮＣ＿００００１５．９を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＳＬＣ１Ａ６」は溶質輸送体ファミリー１（高親和性アスパラギン酸／グルタミン酸メンバー６）を意味し、ＥＡＡ Ｔ ４、ＭＧＣ３３０９２およびＭＧＣ４３６７１としても知られる。ヒトＳＬＣ１Ａ６遺伝子は１９番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１０月３０日版）では受託番号ＮＣ＿００００１９．９を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＴＥＲＴ」はテロメラーゼ逆転写酵素を意味し、ＴＰ２、ＴＲＴ、ＥＳＴ２、ＴＣＳ１およびｈＥＳＴ２としても知られる。ヒトＴＥＲＴ遺伝子は５番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２８日版）では受託番号ＮＭ＿００１１９３３７６．１を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＡＳＡＭ」は脂肪細胞特異的接着分子を意味し、ＡＣＡＭ、ＣＬＭＰおよびＦＬＪ２２４１５としても知られる。ヒトＡＳＡＭ遺伝子は１１番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１２年１０月３０日版）では受託番号ＮＣ＿００００１１．９を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＭＣＭ１０」はミニ染色体維持欠損１０（Ｓ．セレビシエ(S. cerevisiae)）を意味し、ＣＮＡ４３、ＰＲ０２２４９およびＭＧＣ１２６７７６としても知られる。ヒトＭＣＭ１０遺伝子は１０番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２４日番）では受託番号ＮＭ＿１８２７５１．２を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＥＢＦ１」は初期Ｂ細胞因子１を意味し、ＣＯＥ１、ＥＢＦおよびＯＬＦ１としても知られる。ヒトＥＢＦ１遺伝子は５番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月６日版）では受託番号ＮＭ＿０２４００７．３を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＣＦＨ」は補体Ｈ因子を意味し、ＨＦ、ＡＲＭＳ１およびＦＨＬ１としても知られる。ヒトＣＦＨ遺伝子は１番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２８日版）では受託番号ＮＭ＿００１０１４９７５．２を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＭＭＰ１２」はマトリックス（細胞外）メタロプロテイナーゼ−２を意味し、マクロファージメタロエステラーゼ、マクロファージエステラーゼ、ＨＭＥ、ＭＭＥおよびＭＭＰ−１２としても知られる。ヒトＭＭＰ１２遺伝子は１番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月１３日版）では受託番号ＮＭ＿００２４２６．４を有する。
本発明の第２の方法のこの第１の工程で選択される遺伝子の発現レベルは、本発明の第１の方法に関して述べた通りに、すなわち、対象遺伝子（すなわち、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１ ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される遺伝子）のｍＲＮＡレベルを測定することによるか、または前記対象遺伝子によりコードされるタンパク質の量を測定することによって決定することができる。対象遺伝子のｍＲＮＡレベルを決定するため、または前記対象遺伝子によりコードされるタンパク質の量を測定するための方法および技術は、本発明の第１の方法に関して従前に定義されており、引用することによりここに組み込む。
特定の実施形態では、以下のものが決定される：
・ＩＧＦ２遺伝子の発現レベル、および
・第２の遺伝子の発現レベル、ここで、前記第２の遺伝子はＭＡＧＥＡ３遺伝子、またはＡＮＸＡ１０遺伝子、またはＡＨＮＡＫ２遺伝子、またはＣＴＳＥ遺伝子、またはＣＲＨ遺伝子、またはＫＬＦ９遺伝子、またはＫＲＴ２０遺伝子、またはＰＯＳＴＮ遺伝子、またはＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ遺伝子、またはＳＬＣ１Ａ６遺伝子、またはＴＥＲＴ遺伝子、またはＳＡＭ遺伝子、またはＭＣＭ１０遺伝子、またはＥＢＦ１遺伝子、またはＣＦＨ遺伝子、またはＭＭＰ１２遺伝子である。
さらに特定の実施形態では、以下のものが決定される：
・ＩＧＦ２遺伝子の発現レベル、および
・第２の遺伝子の発現レベル、ここで、選択される前記第２の遺伝子は、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子からなる群から選択される。
特定の好ましい実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＡＧＥＡ３遺伝子発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＲＨ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＫＬＦ９遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＨＮＡＫ２遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＴＳＥ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＰＯＳＴＮ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＴＥＲＴ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＳＡＭ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＣＭ１０遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＥＢＦ１遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＦＨ遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルとが決定される。
第２の工程では、本発明の第２の方法は、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子に関して検討下の対象由来のサンプルにおいて得られた発現レベルを、前記遺伝子の参照値と比較することを含んでなる、またはそれからなる。特定の遺伝子の参照レベルを確定するための用語「参照値」およびそれを得る方法、ならびに検討下の対象由来のサンプルにおける対象遺伝子の発現レベルとそれらの参照値との比較に適用される「より大きい」、「より小さい」または「と同等」という用語は、本発明の第１の方法に関して従前に定義されており、引用することによりここに組み込む。
対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子、ならびにＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルと、前記遺伝子の参照値の間で比較が行われたならば、本発明の第２の方法は、
・前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルが前記遺伝子の参照値よりも大きければ；また、
・前記遺伝子の参照値と比較した場合に、前記第２の遺伝子の発現レベルが変化していれば、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断することができ、ここで、前記発現レベルの変化は、
・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０もしくはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
である。
本明細書で使用される場合、発現レベルに適用する用語「増加」は、参照値と比較して少なくとも１．１倍、１．５倍、５倍、１０倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、６０倍、７０倍、８０倍、９０倍、１００倍またはさらにはそれを超える倍率の参照値を超える発現レベルを意味する。他方、少なくとも５％、１０％、２５％、５０％、７５％、もしくはさらには１００％の、参照値を下回る発現レベルの低下、あるいはまた、参照値に比べて少なくとも０．９倍、０．７５倍、０．２倍、０．１倍、０．０５倍、０．０２５倍、０．０２倍、０．０１倍、０．００５倍もしくはさらに低い、参照値を下回る発現レベルの低下を表す場合、発現レベルの「低下」と見なされる。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＭＡＧＥＡ３遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、バリデーションコホートにおいて感度８１．４８％および特異度９１．２６％、ＡＵＣ＝０．９１８で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す（表６）。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＣＲＨ遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７５．４６％および特異度９０．９４％ ＡＵＣ＝０．８９３）で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す（表６）。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７５．４６％特異度９０．９４％（ＡＵＣ＝０．９０２）で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す（表６）。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７６．３９％および特異度９２．２３％（ＡＵＣ＝０．９０７）で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す（表６）。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＫＬＦ９遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、感度７６．３９％および特異度９１．５９％（ＡＵＣ＝０．９０４）で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルと組み合わせて使用すると、感度７５．５４％および特異度９１．２６％（ＡＵＣ＝０．９０７）で膀胱癌を診断することができることを明らかに示す。
よって、特定の実施形態では、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するための本発明の第２の方法は、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルを決定すること；ならびに
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること
からなり、
・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す。
特定の好ましい実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＡＧＥＡ３遺伝子の発現レベルとが決定される。
別の特定の好ましい実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＲＨ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＫＬＦ９遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の好ましい実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＨＮＡＫ２遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＴＳＥ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の好ましい実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＰＯＳＴＮ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＴＥＲＴ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＡＳＡＭ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＣＭ１０遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＥＢＦ１遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＣＦＨ遺伝子の発現レベルとが決定される。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルとＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルとが決定される。
さらに、本発明の著者らは、ＩＧＦ２遺伝子と膀胱癌を診断するための２以上の遺伝子との組合せが膀胱癌診断の診断に使用可能であることを見出した。この知見により、検討下の対象由来のサンプルにおいて、前記ＩＧＦ２遺伝子と膀胱癌を診断するための２以上の前記遺伝子との組合せの発現レベルをその参照値と比較することに基づく非侵襲的方法によって、対象の膀胱癌診断を確立することができる。
よって、別の態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法、以下、「本発明の第３の方法」であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること
；ならびに
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること
を含んでなり、
・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法に関する。
第１の工程では、本発明の第３の方法は、検討下の対象由来のサンプルにおいて、（ｉ）ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、（ｉｉ）ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される２以上の遺伝子の発現レベルを決定することを含んでなる。
用語「診断」、「対象」、「膀胱癌」、「サンプル」、「発現レベル」、「ＩＧＦ２」、「ＭＡＧＥＡ３」、「ＡＮＸＡ１０」、「ＡＨＮＡＫ２」、「ＣＴＳＥ」、「ＣＲＨ」、「ＫＬＦ９」、「ＫＲＴ２０」、「ＰＯＳＴＮ」、「ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ」、「ＳＬＣ１Ａ６」、「ＴＥＲＴ」、「ＡＳＡＭ」、「ＭＣＭ１０」、「ＥＢＦ１」、「ＣＦＨ」および「ＭＭＰ１２」は、本発明の第２の方法に関して従前に定義されており、引用することによりここに組み込む。
本発明の第３の方法のこの第１の工程で選択される遺伝子の発現レベルは、本発明の第１の方法に関して述べた通りに、すなわち、対象遺伝子（すなわち、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子）のｍＲＮＡレベルを測定することによるか、または前記対象遺伝子によりコードされるタンパク質の量を測定することによって決定することができる。対象遺伝子のｍＲＮＡレベルを決定するため、または前記対象遺伝子によりコードされるタンパク質の量を測定するための方法および技術は、本発明の第１の方法に関して従前に定義されており、引用することによりここに組み込む。
特定の実施形態では、本発明の第３の方法は、前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定することを含んでなり、ただし、前記遺伝子の組合せは以下の組合せ：
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
のいずれでもない。
よって、本発明の第３の方法のこの特定の実施形態によれば、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記遺伝子の組合せは、以下の組合せ：
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
のいずれでもない）
とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること
；ならびに
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること
を含んでなり、
・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法を提供する。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される２つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される３つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される４つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される５つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される６つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される７つの遺伝子の発現レベルとが決定され、ただし、前記７つの遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せ、またはＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される８つの遺伝子の発現レベルとが決定され、前記８つの遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０の組合せではない。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される９つの遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１０の遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１１の遺伝子の発現レベルとが決定され、ただし、前記１１の遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１２の遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１３の遺伝子の発現レベルとが決定され、ただし、前記１３の遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０の組合せではない。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１４の遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１５の遺伝子の発現レベルとが決定される。
本発明の第３の方法の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１６の遺伝子の発現レベルとが決定される。
特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰＲ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルが決定される。
場合により、所望であれば、特定の実施形態での本発明の第３の方法は、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１以上の遺伝子の発現レベルを決定することをさらに含む。
本明細書において使用される場合、用語「ＦＯＸＭ１」はＦＯＸＭ１（フォークヘッドボックスタンパク質Ｍ１）癌原遺伝子を意味し、ＦＫＨＬ１６、ＦＯＸＭ１Ｂ、ＨＦＨ−１１、ＨＦＮ−３、ＩＮＳ−１、ＭＰＨＯＳＰＨ２およびＭＰＰ−２としても知られる。ヒトＦＯＸＭ１遺伝子は１２番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２８日版）では受託番号ＮＭ＿００１２４３０８８．１を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＫＩＦ２０Ａ」は、キネシン様タンパク質を意味し、ＭＫＬＰ２およびＲＡＢ６ＫＩＦＬとしても知られる。ヒトＫＩＦ２０遺伝子は５番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月２７日版）では受託番号ＮＭ＿００５７３３．２を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＭＥＬＫ」は母性胚性ロイシンジッパーキナーゼタンパク質を意味し、ＨＰＫ３８としても知られる。ヒトＭＥＬＫ遺伝子は９番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２０１３年１月１３日版）では受託番号ＮＭ＿００１２５６６８５．１を有する。
本明細書において使用される場合、用語「ＣＤＫ１」はサイクリン依存性キナーゼ１を意味し、ＣＤＣ２、ＣＤＣ２８ＡおよびＰ３４ＣＤＣ２としても知られる。ＣＤＫ１遺伝子は１０番染色体に位置し、ＧｅｎＢａｎｋデータベース（２００９年１１月１日版）では受託番号ＮＭ＿００１１３０８２９．１を有する。
特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の発現レベルが決定される。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７７．７８％および特異度９３．２％（ＡＵＣ＝０．９０４）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７７．３１％および特異度８９．３２％（ＡＵＣ＝０．９０３）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７５％および特異度９１．２６％（ＡＵＣ＝０．８９７）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７７．７８％および特異度９１．５９％（ＡＵＣ＝０．８９７）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルを使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７５．９３％および特異度９０．９４％（ＡＵＣ＝０．８９５）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す（表６）。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７６．１７％および特異度９１．５９％（ＡＵＣ＝０．９０２）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７９．１７％および特異度９１．５９％（ＡＵＣ＝０．９０３）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す（表６）。
実施例３で得られた結果は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを使用すると、多施設バリデーションコホートにおいて感度７９．６３％および特異度９３．５３％（ＡＵＣ＝０．９０８）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す（表６）。
本発明者らにより行われた分析は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の発現レベルを使用すると、感度７９．６３％および特異度８９．９７％（ＡＵＣ＝０．９０９）で膀胱癌の診断が可能であることを明らかに示す。
別の態様において、本発明は、対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するための方法、以下、「本発明の第４の方法」であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較すること、ここで、前記遺伝子の前記参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；および
ｃ）前記遺伝子の発現レベルに従って前記対象が膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
を含んでなる方法に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を診断するための方法（以下、「本発明の第５の方法」と呼称）であって、
ａ）前記対象由来の尿サンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０またはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
ｃ）遺伝子の発現レベルに従って前記対象が前記膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
を含んでなる方法に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を診断するための方法（以下、「本発明の第６の方法」と呼称）であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
ｃ）前記遺伝子の発現レベルに従って前記対象が膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
を含んでなる方法に関する。
本発明の第４、第５および第６の方法の工程ａ）およびｂ）の詳細は、それぞれ本発明の第１、第２および第３の方法に関して従前に述べられており、引用することによりここに組み込む。前記工程はｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。
本発明の第４、第５および第６の方法の工程ｃ）は、言い換えれば、その診断が膀胱癌陽性であれば、内視鏡処置を指示するまたは実施することを含んでなる。従って、簡単に述べれば、対象が膀胱癌に罹患していると診断されれば、対象に内視鏡処置、例えば、膀胱鏡検査を施す。膀胱鏡検査は、尿道を介した膀胱の内視鏡検査である。膀胱鏡検査は、膀胱鏡、すなわち、医師が膀胱粘膜に焦点を合わせるレンズを備えた装置を用いて実施される。装置の先端から他方の末端にあるビューイングピースへ画像を送る光ファイバー（フレキシブルグラスファイバー）を用いた膀胱鏡もある。多くの膀胱鏡は、泌尿器の問題を処置するための外科手術手順用の他の装置をガイドするエクストラチューブを備えている。膀胱鏡検査には２つの主要なタイプ、すなわち、膀胱鏡の柔軟性が異なるフレキシブルとリジッドがある。フレキシブル膀胱鏡検査は通常、局所麻酔とともに行われる。リジッド膀胱鏡検査は一般に、探針によって起こる痛みのために全身麻酔下で行われる。
本発明による膀胱癌を診断するための方法［すなわち、本発明の第１、第２または第３の方法］のいずれかに従って、対象が膀胱癌に罹患していないと診断されれば、その対象には内視鏡処置を行わない。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法（以下、「本発明の第７の方法」と呼称）であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較すること、ここで、前記遺伝子の前記参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；および
ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
を含んでなる方法に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法(以下、「本発明の第８の方法と呼称」）であって、
ａ）前記対象由来の尿サンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０もしくはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
を含んでなる方法に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法(以下、「本発明の第９の方法と呼称」）であって、
ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること；
ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す：ならびに
ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
を含んでなる方法に関する。
本発明の第７、第８および第９の方法の工程ａ）およびｂ）の詳細は、それぞれ本発明の第１、第２および第３の方法に関して従前に述べられており、引用することによりここに組み込む。前記工程はｉｎ ｖｉｔｒｏで行われる。
本発明の第７、第８および第９の方法の工程ｃ）によれば、本発明の第１、第２および第３の方法のいずれかによって対象が膀胱癌に罹患していると診断されれば、前記療法の投与から利益を受けると思われる前記対象に療法は施される。
周知のように、膀胱癌の処置は、腫瘍がどのくらい深く膀胱壁に浸潤しているかによって異なる。総ての患者が第一段階としてＴＵＲに進む。非筋層浸潤性膀胱癌（ＮＭＩＢＣ）（筋層へ侵入していないもの）は、膀胱鏡に取り付けられた電気焼灼器（この場合には、切除鏡と呼ばれる）を用いて除去できる。この手順はＴＵＲと呼ばれ、主として病期分類に役立つ。非筋層浸潤性膀胱癌の場合、ＴＵＲはそれ自体が処置であるが、筋層浸潤性膀胱癌（ＭＩＢＣ）の場合には、この手順は最終処置としては不十分である。
カルメット・ゲラン(桿菌Bacillus Calmette-Guerin)（ＢＣＧ）の膀胱内(intravesicular)送達による免疫療法も、ＮＭＩＢＣの再発を治療および予防するために使用される。ＢＣＧは、ヒトにおける病原性を喪失した弱毒（減弱化）生ウシ結核菌(Mycobacterium bovis)から調製される、結核に対するワクチンである。ＢＣＧ免疫療法は、この病期の最大２／３において有効であり、無作為化治験で、標準化学療法よりも優れていることが示された。
マイトマシンおよびその他などの膀胱腔内化学療薬の注入が、再発を治療および予防するための妥当な選択肢である。デバイスにより補助される化学療法は、ＮＭＩＢＣを処置するために使用されるこのような一群の新規な技術である。これらの技術では、膀胱に直接注入される化学療法薬の吸収および作用を促進するために種々の機構を用いる。別の技術では、薬物の吸収を高めるために電流を使用する。また別の技術である温熱療法では、膀胱壁を直接加熱するために高周波エネルギーを使用し、化学療法と併用すると相乗作用を示し、腫瘍細胞を死滅させる互いの能力を高め合う。
ＢＣＧ処置後に腫瘍を再発した患者は、治療がより困難である。多くの医師はこれらの患者に膀胱切除を推奨する。この推奨は、欧州泌尿器学会(European Association of Urologists)（ＥＡＵ）および米国泌尿器学会(American Urological Association)（ＡＵＡ）のガイドラインに従ったものである。しかしながら、患者は、この最終の根治的治療選択肢を選ぶ前に温存的処置を望み得る。
処置しなければ、表在性腫瘍は進行し、膀胱の筋壁に浸潤する場合がある。膀胱の筋層に浸潤した腫瘍にはより根治的な手術が必要であり、通常、総ての膀胱が除去され（膀胱切除術と呼ばれる手法）、尿流は単離した腸管ループに迂回させる（回腸導管または尿路変更術と呼ばれる）。熟練の外科医ならば、腸管組織のセグメントから代用膀胱（新膀胱）を作出できる場合もあるが、これは患者の選択、患者の年齢、腎機能および疾患の部位によるところが大きい。
放射線療法と化学療法の組合せも、浸潤性疾患の治療に使用することができる。この形態の処置の有効性は根治的除去手術の有効性にどの程度匹敵するかはまだ決定されてない。
筋層浸潤性尿路上皮膀胱癌には、複数の治療選択肢がある。ゴールドスタンダードは、記載のような根治的膀胱除去術である。これは通常、男性では前立腺、女性では子宮および膣の一部の除去も含む。それ自体、長期保存に影響を及ぼす微小転移性疾患の問題に取り組むためには、新たな治療選択肢が必要である。微小転移性播種は、多くの場合、大手術だけでは処置できず、術前化学療法という概念が考案されている。複数の世界的な無作為化前向き試験において、結果は、５年の追跡期間に、この療法による５〜８％の間の生存利益を示した。従って、患者はまず３または４サイクルの化学療法を受け、その後、最初に大手術を受ける。
本発明による膀胱癌を診断するための方法［すなわち、本発明の第１、第２または第３の方法］のいずれかに従って、対象が膀胱癌に罹患していないと診断されれば、その対象にはいずれの処置も行わない。
本発明により提供された結果を考慮して、医師は、好適なアプローチ（例えば、膀胱鏡検査）を選択することにより、対象に適用するための膀胱癌の診断を最適化することができる。従って、本発明により提供される方法および手段は、膀胱癌に罹患している可能性のある対象に最も好適な診断選択肢を選択できるように医師を助けることができる。さらに、不要な侵襲性診断法の適用に伴って対象に生じる不快、ならびにその場合に含まれる不要なコストを避けることができる。
本発明の使用
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断におけるまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしてのＩＧＦ２遺伝子の使用に関する。
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断におけるまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしての、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子とを含んでなる、またはからなる遺伝子の組合せの使用に関する。
特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＭＡＧＥＡ３である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＣＲＨである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＫＬＦ９である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＳＬＣ１Ａ６である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＡＮＸＡ１０である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＡＨＮＡＫ２である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＣＴＳＥである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＫＲＴ２０である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＰＯＳＴＮである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＰＰＰ１Ｒ１４Ｄである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＴＥＲＴである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＡＳＡＭである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＭＣＭ１０である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＥＢＦ１である。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＣＦＨである。
別の特定の実施形態では、前記第２の遺伝子はＭＭＰ１２である。
別の態様において、本発明は、膀胱癌の診断における、または膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしての、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記組合せは、以下の組合せ：
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
のいずれでもない）とを含んでなる遺伝子の組合せの使用に関する。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される２つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される３つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される４つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される５つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される６つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される７つの遺伝子（ただし、前記の７つの遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せ、またはＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない）とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される８つの遺伝子（ただし、前記の８つの遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０の組合せではない）とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される９つの遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１０の遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１１の遺伝子（ただし、前記の１１の遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない）とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１２の遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１３の遺伝子、（ただし、前記の１３の遺伝子の組合せは、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０の組合せではない）とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１４の遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１５の遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１６の遺伝子とを含んでなる。
特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝を含んでなる、またはそれらからなる。
別の特定の実施形態では、前記遺伝子の組合せは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝を含んでなる、またはそれらからなる。
当業者が理解し得るように、本発明の教示はまた、以前に膀胱癌に罹患した患者および処置されたがこの種の癌の再発のリスクが高いためになお警戒下におくべき患者において、経時的に周期的または反復的診断をモニタリングまたは追跡するために適用可能である。一般に、患者は、通常には最後の処置から３か月〜１年の範囲の様々な期間、モニタリングされる。
よって、別の態様において、本発明は、膀胱癌のモニタリングのための、本発明により提供される遺伝子またはそれらの組合せの使用に関する。本発明により提供される前記遺伝子および遺伝子の組合せの詳細は従前に述べられており、引用することによりここに組み込む。
本発明のキット
別の態様において、本発明は、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための試薬を含んでなるキット、以下、「本発明の第１のキット」に関する。
特定の実施形態では、前記試薬は、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬である。別の特定の実施形態では、前記試薬は、ＩＧＦ２遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための試薬である。
特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２を認識する抗体である。
別の態様において、本発明は、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子とを含んでなる、またはそれらからなる遺伝子の組合せの発現レベルを検出および／または定量するための試薬を含んでなるキット、以下、「本発明の第２のキット」に関する。
特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬とを含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。特定の実施形態では、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記第２の遺伝子のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記第２の遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記第２の遺伝子の前記ｍＲＮＡの前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。具体的な特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬と、ＭＡＧＥＡ３遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬とを含んでなり、ここで、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなり、かつ、ＭＡＧＥＡ３遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＭＡＧＥＡ３のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＭＡＧＥＡ３のｍＲＮＡ、もしくは前記ＭＡＧＥＡ３のｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。他の特定の実施形態では、検出および／または定量対象の第２の遺伝子は、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＳＬＣ１Ａ６、ＡＮＸＡ１０またはＫＬＦ９である。
別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２を認識する抗体である。別の特定の実施形態では、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される前記第２の遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、前記第２の遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＭＡＧＥＡ３を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＣＲＨを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＫＬＦ９を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＳＬＣ１Ａ６を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＡＮＸＡ１０を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＡＨＮＡＫ２を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＣＴＳＥを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＫＲＴ２０を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＰＯＳＴＮを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＴＥＲＴを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＡＳＡＭを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＭＣＭ１０を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＥＢＦ１を認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＣＦＨを認識する抗体である。
特定の実施形態では、第２のマーカー遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、ＭＭＰ１２を認識する抗体である。
別の態様において、本発明は、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記組合せは、以下の組合せ：
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
のいずれでもない）とを含んでなる遺伝子の組合せの発現レベルを検出および／または定量するための試薬を含んでなるキット、以下、「本発明の第３のキット」に関する。
特定の実施形態では、前記の本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される遺伝子およびその組合せのｍＲＮＡを検出および／または定量するための２つ以上の試薬とを含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの組合せのｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記遺伝子のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２遺伝子により、またＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの組合せによりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための前記試薬は、前記遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体である。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される２つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量する１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される３つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される４つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される５つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される６つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される７つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなり、ただし、前記キットは、以下の組合せ：ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；およびＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの発現レベルを検出および／または定量するための試薬からならない。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される８つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなり、ただし、前記キットは、以下の遺伝子組合せ：ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０の発現レベルを検出および／または定量するための試薬からならない。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される９つの遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１０の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１１の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなり、ただし、前記キットは、以下の遺伝子組合せ：ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの発現レベルを検出および／または定量するための試薬からならない。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１２の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１３の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなり、ただし、前記キットは、以下の遺伝子組合せ：ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０の発現レベルを検出および／または定量するための試薬からならない。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１４の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１５の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１６の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬とを含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨの前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨの前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９およびＣＲＨ遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＴＳＥおよびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＡＮＨＡＫ２、ＢＦＥ１およびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭの前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＡＳＡＭ遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＭＣＭ１０遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨの前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＥＢＦ１遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨの前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、前記の本発明の第３のキットは、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子からなる群から選択される１以上の遺伝子およびそれらの任意の組合せの発現レベルを検出および／または定量するための試薬をさらに含んでなる。この目的で、前記キットに、その発現レベルが定量される１または複数の遺伝子に応じて必要な試薬、例えば、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の１以上のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬、例えば、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよび／もしくはＣＤＫ１の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよび／もしくはＣＤＫ１遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよび／もしくはＣＤＫ１遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を組み込む。別の特定の実施形態では、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよび／またはＣＤＫ１遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよび／またはＣＤＫ１遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
特定の実施形態では、本発明の第３のキットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための１以上の試薬を含んでなる。特定の実施形態では、前記キットは、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬を含んでなる。特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための前記試薬は、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１の前記ｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブ、または前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の前記ｍＲＮＡ、もしくは前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の前記ｍＲＮＡに対する前記ｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対を含んでなる。別の特定の実施形態では、ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための前記試薬は、前記ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０、ＭＭＰ１２、ＴＥＲＴ、ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体を含んでなる。
別の態様において、本発明は、膀胱癌診断のための本発明のキットのいずれかの使用に関する。
さらに、当業者が理解し得るように、本発明の教示はまた、以前に膀胱癌に罹患した患者および処置されたがこの種の癌の再発のリスクが高いためになお警戒下におくべき患者において、経時的に周期的または反復的診断をモニタリングまたは追跡するために適用可能である。一般に、患者は、通常には最後の処置から３か月〜１年の範囲の様々な期間、モニタリングされる。
よって、別の態様において、本発明は、膀胱癌のモニタリングのための、本発明のキットのいずれかの使用に関する。本発明のキットの詳細は従前に述べられており、引用することによりここに組み込む。
以下の実施例を用いて本発明を説明するが、その範囲の限定と考えるべきでない。このような実施例を実施するために、そこに記載されている材料および方法を使用した。
実施例１
膀胱癌診断のために１２の遺伝子の組合せによって形成されたモデルの臨床バリデーション
本実施例は、独立した患者および対照コホートで開発した１２遺伝子モデル［ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ］の精度をバリデートするために実施した。
材料および方法
サンプルおよび患者
本実施例で使用した２３９名の治療継続膀胱癌患者由来の尿サンプルおよび対照サンプルは、Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃ ｏｆ Ｂａｒｃｅｌｏｎａで２００９年２月〜２０１０年１月に前向き収集された。本試験に含まれた総ての個人は事前に試験の目的を知らされ、インフォームドコンセントフォームに署名した。このバリデーション試験は、病院倫理委員会により事前に承認されたグローバルプロジェクトに由来する。
収集した２３９の尿サンプルのうち１４は、得られたＲＮＡが１０ｎｇ未満であったことを考慮して試験から除外した。他方、ＲＮＡ品質基準に合わなかったサンプルは除外した（ｎ＝１８、以下の「データ分析」に関する節を参照）。最後に、２０７の尿サンプルをこのバリデーション試験で分析した：原発性または再発性膀胱腫瘍および組織学的に確認された腫瘍を有するために外科的経尿道的切除（ＴＵＲ）を受けた患者由来の９６サンプル（男性７２、女性２４、平均年齢７１．８歳）および非新生物性泌尿器疾患を有する対照患者および健常な対照由来の１１１の尿サンプル（男性４７、女性６４、平均年齢５８．３歳）（表１）。腫瘍の悪性度および病期は世界保健機関（ＷＨＯ）分類[Lopez-Beltran A et al. Tumours of the Urinary System. In: Eble JN, Sauter G, Epstein JI, Sesterhenn IA, editors. Pathology and Genetics of Tumours of the Urinary System and Male Genital Organs. World Health Organization Classification of Tumours. Lyon: IARC Press, 2004. p. 89-157]およびＴＮＭ分類[Sobin LH & Wittekind CH. TNM Classification of Malignant Tumours. International Union Against Cancer., ed. 6th. New York: John Wiley & Sons; 2002]に従って決定した。
腫瘍はそれらのリスクに従って３つのカテゴリーに分類した：
・低リスク非筋層浸潤性膀胱癌（併発ＣＩＳ無しのＮＭＩＢＣ、ＴａおよびＴ１低悪性度）；
・高リスクＮＭＩＢＣ（併発ＣＩＳがある低悪性度ＴａまたはＴ１、高悪性度ＴａまたはＴ１およびＴｉｓ）；および
・筋層浸潤性膀胱癌（併発ＣＩＳ有りまたは無しのＭＩＢＣ、Ｔ２、Ｔ３、Ｔ４およびＬＧ ＨＧ）。
本試験に含まれる患者および対照者の臨床病理的特徴を表１に示す。
尿サンプルの処理
尿サンプルは、症例群の場合には患者がＴＵＲを受ける前に、または対照の場合にはＵｒｏｌｏｇｙ Ｓｅｒｖｉｃｅにおける試験中に採取した。５０〜１００ｍｌの間の尿を、ＲＮＡ安定化剤（１／２５容量の０．５Ｍエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ８．０）を準備した容器に採取し、４℃で保存し、続いての２４時間にわたって処理した。サンプルを４℃、１０００ｘｇで１０分間遠心分離した。次に、上清を廃棄し、細胞ペレットを１ｍｌのトリゾール（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、ＣＡ、ＵＳＡ）に再懸濁させ、その後の全ＲＮＡ抽出まで−８０℃で保存した。
トリゾール試薬中で、供給者の説明書に従って（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カールスバッド、ＣＡ、ＵＳＡ）ホモジナイズした尿サンプルから、全ＲＮＡを抽出した。次に、得られたＲＮＡを分光光度計（ＮａｎｏＤｒｏｐ ＮＤ−１０００）によって定量した。
ＴａｑＭａｎアレイにおける定量的ＰＣＲ
尿サンプルから得られた全ＲＮＡのうち、利用可能度に応じて１０〜５００ｎｇを用い、反応の最終容量を２５μｌとしたこと以外は供給者の説明書に従い、ＴａｑＭａｎ ＲＮＡ逆転写キット（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を得た。合計６．２５μｌの各ｃＤＮＡを４５の標的遺伝子と２つの内因性対照を含んだマルチプレックス反応により、最終反応容量を２５μｌとしたこと以外は供給者の推奨に従い、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＰｒｅＡｍｐ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて前増幅した（表２）。最後に、５μｌの前増幅し希釈したｃＤＮＡを５０μｌの２Ｘ ＴａｑＭａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒｍｉｘ（ＡＢ）と最終容量１００μｌで混合し、製造者の推奨（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用い、シンプレックス反応にてＴａｑＭａｎアレイによって増幅した。
同発明者らによって実施された従前の試験[Mengual L et al. Gene expression signature in urine for diagnosing and assessing aggressiveness of bladder urothelial carcinoma. Clin Cancer Res 2010;16:2624-33]で分析された４５の標的遺伝子（検討下のモデルの１２遺伝子の組合せを含む）および２つの内因性対照を、遺伝子を追加または削除することにより、本モデルの改良の可能性を評価する目的で、バリデーション試験の総てのサンプルにおいても分析した。
データ分析
定量的ＰＣＲデータは、ＳＤＳ ２．４およびＥｎｔｅｒｐｒｉｓｅプログラム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて処理した。各遺伝子の閾値およびベースラインは自動で確立した。手作業による閾値で抽出された従前のデータとの比較を可能とするために、従前に分析されたサンプルの閾値を自動で再分析した。
データは、２つの参照遺伝子（ＧＵＳＢおよびＰＰＩＡ）のサイクル閾値またはＣＴの幾何平均を用いて正規化した。結果の信頼性を確保する目的で、ＲＮＡ品質が低いと考えられた、ＧＵＳＢ ＣＴ値±患者群全体のＧＵＳＢ ＣＴの３平均ＳＤ（標準偏差）の高いサンプルは分析から除外した（ｎ＝１８サンプル、１２の対照および６つの腫瘍；ＧＵＳＢ ＣＴ＝２４．６２；ＧＵＳＢ ＣＴ範囲＝２２．４〜３０．２７）。
サンプルにおける標的遺伝子の総体的発現レベルをΔＣＴとして表した。
ΔＣＴ＝ＣＴ（照遺伝子平均）−ＣＴ（標的遺伝子）
３５より大きいＣＴ値を有する遺伝子を低発現と見なし、それらのΔＣＴをその遺伝子の最小ΔＣＴ値とした。ロジスティック回帰を用いて、独立したサンプルバリデーションセットにおいて１２遺伝子の組合せの性能を評価した。多次元尺度構成プロットを構築し、１２遺伝子の発現による、対照群と腫瘍群の間の相違を調べた。総ての計算に、また、ヒートマップおよび散布図の作成のためにＲソフトウエアを使用した。ＲＯＣ曲線を用いてモデルの感度および特異度を計算した。ＲＯＣ曲線は、ＤｉａｇｎｏｓｉｓＭｅｄ(http://CRAN.R-project.org/package=DiagnosisMed)およびＰｒｏｃパッケージを用いて作成した。総ての計算はＲソフトウエアを用いて行った。
結果
２０７の尿サンプルを、上記非侵襲的膀胱癌診断に関して１２の遺伝子［ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ］の組合せからなる群をバリデートするために用いた。バリデーションセットのシグネチャー感度（ＳＮ）および特異度（ＳＰ）はそれぞれ８０％および８６％であった（ＡＵＣ：０．９１４）（図１Ａ）。トレーニングセットについては、ＳＮは腫瘍リスクの増大とともに増え、低リスクＮＭＩＢＣでは低く（１９の誤って分類され腫瘍サンプルのうち１５を含む）、ＭＩＢＣでは１００％に達する（図１Ｂ）。ＳＰについては、１１１のうち１５の対照サンプルが、バリデーションセットにおいて１２の遺伝子の遺伝子シグネチャーによって誤って分類されていた。独立したバリデーションセットにおける診断の総合精度は８４％であった。
実施例２
膀胱癌診断のための遺伝子シグネチャーの第二世代の同定
サンプルの使用数が少ないことによるモデルのオーバートレーニングを可能な限り緩和する目的で、分析した総ての尿サンプル［モデルのトレーニングに用いたサンプルとバリデーションに用いたサンプル（実施例１）］を一緒に分類し、より大きなトレーニングサンプルセットを得た。ＧＵＳＢ ＣＴ値±先のバリデーションセットの全患者群および対照のＧＵＳＢ ＣＴの２平均ＳＤが大きいサンプルを分析から除外した（ｎ＝１４サンプル、１１の対照サンプルと３つの腫瘍サンプル）。従って、拡張された新たなサンプルセットは最終的に４０４サンプル（２１１＋１９３）を含んだ。この拡張されたサンプルセットを、先の１２遺伝子モデルを再評価するためと、精度がより高く、遺伝子の数がより少ない膀胱癌診断ために本発明により提供されるいくつかの遺伝子シグネチャーを生じた新たな遺伝子の組合せを作出するための両方に使用した。
非侵襲的ＵＣ診断のための、精度がより高く、遺伝子数の少ない他の遺伝子組合せが存在するか否かを決定するために、前方ステップワイズロジスティック回帰を用いた[Hastie TJ & Pregibon D. Generalized linear models. In: Chambers JM, Hastie TJ, editors. Statistical Models in S. Wadsworth & Brooks/Cole, 1992]。
ＲＯＣ曲線はＤｉａｇｎｏｓｉｓＭｅｄ(http://CRAN.R-project.org/package=DiagnosisMed)およびＰｒｏｃパッケージ[Robin X et al. pROC: an open-source package for R and S+ to analyze and compare ROC curves. BMC Bioinformatics 2011; 12:77]を用いて作成した。計算は総てＲソフトウエアを用いて行った。Ｂｉｏｃｏｎｄｕｃｔｏｒソフトウエアパッケージの「グローバルテストアルゴリズム」[Goeman JJ et al. A global test for groups of genes: testing association with a clinical outcome. Bioinformatics 2004; 20:93-9]を用いて、検討した遺伝子と診断推定および悪性度との関連を分析した。
尿サンプルのトレーニングセットにおいて再評価された（表４において「ＧＳ＿Ｄ１２」として示される）１２遺伝子診断モデルの評価は、対照尿とＵＣ患者尿の識別に８８％の精度（ＡＵＣ ０．９４４）を達成した（表３）。
ＵＣ診断に関して極めて正確であった遺伝子の種々の組合せを見出した。それらの総てのうち、５つおよび１０の遺伝子を含んだ２つの遺伝子組合せ（表４においてそれぞれ「ＧＳ＿Ｄ５」および「ＧＳ＿Ｄ１０」として示される）を選択した。３つの特定の遺伝子組合せ（ＧＳ＿Ｄ１２、ＧＳ＿Ｄ５およびＧＳ＿Ｄ１０）は５つのマーカー（ＩＧＦ２、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６）を共通に持っていたことを指摘しておくべきであろう。
次に、３つの遺伝子シグネチャーを共通に持つ５つの遺伝子を、シグネチャーにおける各遺伝子の重要性を見出すためにさらに詳細に評価し、
・２つの遺伝子の組合せ（ＧＳ＿Ｄ２（１））［ＩＧＦ２およびＭＡＧＥＡ３］が膀胱癌診断に関して極めて正確であり（表３）、互いに相補的であったこと；および
・ＩＧＦ２遺伝子はそれ自体で腫瘍サンプルと対照サンプルを識別することができるが、ＭＡＧＥＡ３を加えると、高リスク腫瘍における感度が大幅に高まること
が判定された。
最後に、ＩＧＦ２がそれ自体、最も診断情報を与える遺伝子であることを考えて、その診断性能（ＧＳ＿Ｄ１）を、他の遺伝子シグネチャー［ＧＳ＿Ｄ１０、ＧＳ＿Ｄ５、ＧＳ＿Ｄ３および４つのＧＳ＿Ｄ２シグネチャー、ＧＳ＿Ｄ２（１）、ＧＳ＿Ｄ２（２）、ＧＳ＿Ｄ２（３）およびＧＳ＿Ｄ２（４）］の診断性能とともに、独立した患者および対照コホートにおいて評価した（実施例３）。
実施例３
独立コホートにおけるＧＳ＿Ｄ１２、ＧＳ＿Ｄ１０、ＧＳ＿Ｄ５、ＧＳ＿Ｄ２およびＧＳ＿Ｄ１シグネチャーのセットの臨床バリデーション
材料および方法
サンプルおよび患者
ＧＳ＿１２、ＧＳ＿Ｄ１０、ＧＳ＿Ｄ５、ＧＳ＿Ｄ３（１）、ＧＳ＿Ｄ３（２）、ＧＳ＿Ｄ３（１）、ＧＳ＿Ｄ２（１）、ＧＳ＿Ｄ２（２）、ＧＳ＿Ｄ２（３）、ＧＳ＿Ｄ２（４）およびＧＳ＿Ｄ１遺伝子シグネチャー（表４）を独立した患者および対照コホートにおいてバリデートした。７９０の尿サンプルを２００９年２月〜２０１０年７月に５か所の欧州施設［Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｃｌｉｎｉｃ（バルセロナ、スペイン）、Ｆｕｎｄａｃｉｏ Ｐｕｉｇｖｅｒｔ（バルセロナ、スペイン）、Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｖｉｒｇｅｎ ｄｅｌ Ｒｏｃｉｏ（セビリア、スペイン）、Ｔｈｅ Ｒａｄｂｏｕｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｎｉｊｍｅｇｅｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｒｅ（ナイメーヘン、オランダ）およびＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｖｉｅｎｎａ（ウィーン、オーストリア）］で後向き収集した。
これらのサンプルは３７０名の膀胱癌患者と４２０名の対照者に相当する。試験に含まれた７９０の被験者のうち、１４７サンプル（１７％）は、スクリーニングの不備と思われたので除外し、１１８サンプル（１４％）も技術上の問題（サンプルの採取中またはその分析中）のために除外した。最終的に、５２５名（２１６名の膀胱癌患者と３０９名の対照者）が試験に含まれた。試験に含まれた患者の臨床的および組織病理学的変数は表５に含まれている。腫瘍の悪性度および病期は、それぞれＷＨＯおよびＴＮＭ判定基準に従って決定した。
臨床バリデーション
サンプルの採取および処理、ならびにサンプル分析は、トレーニングセットの場合と厳密に同様に行った（実施例１）。
種々の施設でサンプルを採取し、トリゾール試薬を添加するまでの処理を行い、ＲＮＡ抽出および分析のためにリファレンスセンターに送る。
ジスティック回帰を用いて、バリデーションセットの種々のシグネチャーセットの性能を評価した。各サンプルが対照サンプルまたは腫瘍サンプルである確率は、トレーニングセットからのデータを用いて計算した。ＲＯＣ曲線を用い、バリデーションセットにおける１２モデルの感度（ＳＮ）および特異度（ＳＰ）を、年齢および性別に関して調整した後に拡大されたトレーニングセット（ｎ＝４０４）と比較して決定した。ＲＯＣ曲線は、ＤｉａｇｎｏｓｉｓＭｅｄ (http://CRAN.R-project.org/package=DiagnosisMed)およびＰｒｏｃパッケージ[Robin X et al. pROC: an open-source package for R and S+ to analyze and compare ROC curves. BMC Bioinformatics 2011;12:77]を用いて作成した。総ての計算はＲソフトウエアを用いて行った。
各診断シグネチャーのＡＵＣは、拡大されたトレーニングセットとバリデーションセットでは若干異なった（表６）。
得られた結果は、最大の診断性能をもたらした遺伝子シグネチャーはＧＳ＿Ｄ１０（ＡＵＣ０．９０８；精度８７．８１％）であったことを明らかに示す。それでもなお、ＧＳ＿Ｄ２（１）遺伝子シグネチャーは極めて高い精度値に達しいている（ＡＵＣ０．９１８；精度８７．２４％）。最後に、１つの遺伝子ＧＳ＿ＤＳ１だけに基づく非侵襲的ＵＣ診断は精度８５．３３％に達し、ＡＵＣは０．９０７である。
実施例４
有意な差での標的遺伝子の示差的発現
対照サンプルと腫瘍サンプルとの差が、マイクロアレイ、具体的には、ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２で得られた発現結果に基づいてより有意であると考えられた標的遺伝子の発現レベルの差は、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲにより確認した。
ＲＮＡサンプルからのｃＤＮＡ合成とその後のｃＤＮＡ増幅は、材料および方法の節に記載されているように、Ｔａｑｍａｎ ＲＮＡ逆転写キット（登録商標）（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）によって行った。逆転写は、２５℃で１０分の１サイクル、次いで、３７℃で２時間の１サイクルおよび８５℃で５秒の１サイクルによって行った。ｃＤＮＡの前増幅は、以下の条件下で行った：９５℃で１０分の１サイクル、次いで、９５℃で１５秒および６０℃で４分の１４サイクル。定量的ＰＣＲ条件は、５０℃で２分の１サイクル、９５℃で１０分の１サイクル、および９５℃で１５秒および６０℃で１分の４０サイクルであった。
得られた結果を表７に示す。

Claims (35)

  1. 対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；ならびに
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること
    を含んでなり、
    前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
    前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
    ・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０もしくはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
    ・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法。
  2. 前記第２の遺伝子がＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
  3. 対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記遺伝子の組合せは、以下の組合せ：
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
    のいずれでもない）
    とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること；ならびに
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること
    を含んでなり、
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す、方法。
  4. ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１以上の遺伝子の発現レベルを決定することをさらに含んでなる、請求項３に記載の方法。
  5. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される２つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  6. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される３つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  7. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される４つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  8. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される５つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  9. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される６つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  10. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される７つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなり、ただし、前記７つの遺伝子の組合せが、ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せまたはＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない、請求項３または４に記載の方法。
  11. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される８つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなり、ただし、前記８つの遺伝子の組合せが、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０の組合せではない、請求項３または４に記載の方法。
  12. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される９つの遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  13. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１０の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  14. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１１の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなり、ただし、前記１１の遺伝子の組合せが、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴの組合せではない、請求項３または４に記載の方法。
  15. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１２の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  16. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１３の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなり、ただし、前記１３の遺伝子の組合せが、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０の組合せではない、請求項３または４に記載の方法。
  17. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１４の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  18. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１５の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  19. ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される１６の遺伝子の発現レベルとを決定することを含んでなる、請求項３または４に記載の方法。
  20. ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子の発現レベルを決定することを含んでなる、請求項３に記載の方法。
  21. ・ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＫＬＦ９遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３およびＣＲＨ遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＳＬＣ１Ａ６遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＬＦ９遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＫＲＴ２０；
    ・ＩＧＦ２、ＣＲＨおよびＡＮＸＡ１０遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子；
    ・ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９およびＳＬＣ１Ａ６遺伝子；ならびに
    ・ＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＰＯＳＴＮ、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子
    からなる群から選択される遺伝子の組合せの発現レベルを決定することを含んでなる、請求項３に記載の方法。
  22. 対象が膀胱癌に罹患しているか否かを診断するための方法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較すること、ここで、前記遺伝子の前記参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；および
    ｃ）前記遺伝子の発現レベルに従って前記対象が膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
    を含んでなる、方法。
  23. 膀胱癌に罹患している対象を診断するための方法であって、
    ａ）前記対象由来の尿サンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
    前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
    前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
    ・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０またはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
    ・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
    ｃ）遺伝子の発現レベルに従って前記対象が前記膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
    を含んでなる、方法。
  24. 膀胱癌に罹患している対象を診断するための方法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
    ｃ）前記遺伝子の発現レベルに従って前記対象が膀胱癌に罹患しているならば、前記対象に内視鏡処置を施すこと
    を含んでなる、方法。
  25. 膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいてＩＧＦ２遺伝子の発現レベルを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルをその参照値と比較すること、ここで、前記遺伝子の前記参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベルは、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；および
    ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
    を含んでなる、方法。
  26. 膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法であって、
    ａ）前記対象由来の尿サンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子の発現レベルと、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子の発現レベルとを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子の発現レベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
    前記遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２遺伝子の発現レベル；および
    前記遺伝子の参照値と比較した場合の、前記対象由来のサンプルにおける前記第２の遺伝子の発現レベルの変化、すなわち、
    ・ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０もしくはＭＭＰ１２遺伝子の発現レベルの増加、または
    ・ＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１またはＣＦＨ遺伝子の発現レベルの低下
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す；ならびに
    ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
    を含んでなる、方法。
  27. 膀胱癌に罹患している対象を治療するための方法であって、
    ａ）前記対象由来のサンプルにおいて、ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ中に存在する各遺伝子の発現レベルを決定すること；
    ｂ）前記サンプルにおける前記遺伝子のレベルをそれらの参照値と比較すること、ここで、
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも大きい、前記対象由来のサンプルにおけるＩＧＦ２、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０およびＭＭＰ１２遺伝子の発現レベル、および
    ・前記の各遺伝子の参照値よりも小さい、前記対象由来のサンプルにおけるＫＬＦ９、ＡＨＮＡＫ２、ＥＢＦ１およびＣＦＨ遺伝子の発現レベル
    は、前記対象が膀胱癌に罹患していることを示す：ならびに
    ｃ）前記対象が膀胱癌に罹患していると診断され、かつ、前記対象が経尿道的切除（ＴＵＲ）の投与から利益を受けると思われる場合に、前記対象に前記療法を施すこと
    を含んでなる、方法。
  28. 膀胱癌の診断におけるまたは膀胱癌のモニタリングのためのマーカーとしての、
    １）ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せ；または
    ２）ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記組合せは、以下の組合せ：
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
    のいずれでもない）とを含んでなる遺伝子の組合せの使用。
  29. 前記第２の遺伝子がＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＳＬＣ１Ａ６、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０およびＫＲＴ２０遺伝子からなる群から選択される、請求項２８に記載の使用。
  30. ａ）ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子とを含んでなる遺伝子の組合せの発現レベルを検出および／または定量するための試薬を含んでなるキット；ならびに
    ｂ）ＩＧＦ２遺伝子と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも２つの遺伝子（ただし、前記組合せは、以下の組合せ：
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭおよびＭＣＭ１０；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＰＯＳＴＮ、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ；
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴおよびＭＣＭ１０；または
    ・ＡＮＸＡ１０、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＲＴ２０、ＭＡＧＥＡ３、ＳＬＣ１Ａ６およびＴＥＲＴ
    のいずれでもない）とを含んでなる遺伝子の組合せの発現レベルを検出および／または定量するための試薬を含んでなるキット
    から選択されるキット。
  31. ＦＯＸＭ１、ＫＩＦ２０Ａ、ＭＥＬＫおよびＣＤＫ１遺伝子ならびにそれらの任意の組合せからなる群から選択される１以上の遺伝子の発現レベルを検出および／または定量するための試薬をさらに含んでなる、請求項３０に記載のキット。
  32. ＩＧＦ２遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される第２の遺伝子のｍＲＮＡを検出および／または定量するための試薬；あるいはＩＧＦ２遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための試薬と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨおよびＭＭＰ１２遺伝子からなる群から選択される前記第２の遺伝子によりコードされるタンパク質を検出および／または定量するための試薬、を含んでなる、請求項３０または３１に記載のキット。
  33. 前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブまたは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡもしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対と、前記第２の遺伝子のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブまたは前記第２の遺伝子のｍＲＮＡもしくは前記第２の遺伝子のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対；あるいはＩＧＦ２を認識する抗体と、前記第２の遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体、を含んでなる、請求項３２に記載のキット。
  34. 前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブまたは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡもしくは前記ＩＧＦ２のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの組み合わせのうちの２つ以上のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするプローブまたは前記遺伝子のｍＲＮＡもしくは前記遺伝子のｍＲＮＡに対するｃＤＮＡとハイブリダイズするオリゴヌクレオチドプライマー対；あるいはＩＧＦ２遺伝子によりコードされるタンパク質を認識する抗体と、ＭＡＧＥＡ３、ＡＮＸＡ１０、ＡＨＮＡＫ２、ＣＴＳＥ、ＣＲＨ、ＫＬＦ９、ＫＲＴ２０、ＰＯＳＴＮ、ＰＰＰ１Ｒ１４Ｄ、ＳＬＣ１Ａ６、ＴＥＲＴ、ＡＳＡＭ、ＭＣＭ１０、ＥＢＦ１、ＣＦＨ、ＭＭＰ１２遺伝子およびそれらの組合せによりコードされるタンパク質を認識する抗体、を含んでなる、請求項３０または３１に記載のキット。
  35. 膀胱癌の診断または膀胱癌のモニタリングのための、請求項３０〜３４のいずれか一項に記載のキットの使用。
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