JP2016503663A5 - - Google Patents
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Claims (15)
- SEQ ID NO：57のアミノ酸配列に対して少なくとも90％の配列同一性を含む、バリアントアシル-ACPレダクターゼ（AAR）ポリペプチドであって、アミノ酸位置18にS18Wである突然変異を含み、且つアシル-ACPから脂肪アルデヒドへの変換を触媒する、AARポリペプチド。
- 組換え宿主細胞におけるバリアントAARポリペプチドの発現が、対応する野生型宿主細胞における野生型AARポリペプチドの発現によって産生される力価と比較して、より高い力価の脂肪アルコール組成物をもたらす、請求項1記載のバリアントAARポリペプチド。
- 脂肪アルコール組成物が、C12またはC14脂肪アルコール組成物である、請求項2記載のバリアントAARポリペプチド。
- アミノ酸8、16、21、24、31、34、35、43、50、63、86、112、113、116、118、120、135、148、153、154、155、157、159、168、172、187、188、191、209、210、211、236、277、281、283、285、291、324、328、335、337および338からなる群より選択されるアミノ酸位置に突然変異をさらに含む、請求項1〜4のいずれか一項記載のバリアントAARポリペプチド。
- 突然変異が、L8A、D16L、M21L、D24E、D24Y、D24V、D24P、L31V、L31M、W34F、W35F、D43E、A50Q、C63A、C63G、C63Y、S86G、A112R、S113K、Q116G、R118Q、T120S、A135S、T148C、T148E、T148V、I153P、T154A、Q155C、Q155L、T157V、A159V、I168V、C172L、T187V、T188H、T188V、Q191A、L209R、E210Y、A211W、T236C、Q277V、A281L、E283G、E283S、A285V、M291V、A324T、A328S、Q335N、L337VおよびL338Wからなる群より選択される、請求項4記載のバリアントAARポリペプチド。
- M21L突然変異、C63GA突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、A281L突然変異、またはL8A突然変異を含む、請求項5記載のバリアントAARポリペプチド。
- （a）M21L突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：58のアミノ酸配列を含む；
（b）L8A突然変異、M21L突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：59のアミノ酸配列を含む；
（c）D16L突然変異、M21L突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：60のアミノ酸配列を含む；
（d）L8A突然変異、D24V突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、Q155L突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：61のアミノ酸配列を含む；
（e）D24P突然変異、L31M突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：62のアミノ酸配列を含む；
（f）L8A突然変異、D16L突然変異、D24V突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：63のアミノ酸配列を含む；または
（g）D24E突然変異、C63G突然変異、S113K突然変異、T154A突然変異、およびA281L突然変異をさらに含み、好ましくはSEQ ID NO：64のアミノ酸配列を含む、
請求項1〜3のいずれか一項記載のバリアントAARポリペプチド。 - 請求項1〜7のいずれか一項記載のバリアントAARポリペプチドを発現する組換え宿主細胞。
- 炭素源を含有する培地中で、バリアントAARポリペプチドを発現させるのに有効な条件下で培養した時に、対応する野生型AARポリペプチドを発現する宿主細胞によって産生される脂肪アルコール組成物の力価を少なくとも10％上回る、少なくとも15％上回る、少なくとも20％上回る、少なくとも25％上回る、または少なくとも30％上回る力価の脂肪アルコール組成物を産生し、好ましくは脂肪アルコール組成物が細胞外に産生される、請求項8記載の組換え宿主細胞。
- 脂肪アルコール組成物が約30g／L〜約250g／Lの力価で産生される、請求項9記載の組換え宿主細胞。
- 請求項8〜10のいずれか一項記載の組換え宿主細胞を含む細胞培養物。
- 脂肪アルコール組成物が、C6、C8、C10、C12、C13、C14、C15、C16、C17、およびC18脂肪アルコールのうち1つまたは複数を含む、請求項11記載の細胞培養物。
- 脂肪アルコール組成物が、
（a）C10：1、C12：1、C14：1、C16：1、およびC18：1不飽和脂肪アルコールのうち1つまたは複数；
（b）不飽和脂肪アルコール；
（c）脂肪アルコールの還元末端からC 7 〜C 8 の間の炭素鎖の位置7に二重結合を有する脂肪アルコール；または
（d）飽和脂肪アルコール
を含む、請求項12記載の細胞培養物。 - 力価の増大した脂肪アルコール組成物を生産する方法であって、
i．請求項8記載の宿主細胞を炭素源とともに培養する段階；および
ii．脂肪アルコール組成物を採取する段階
を含む方法。 - 脂肪アルコール組成物の力価が、野生型AARを発現する宿主細胞によって産生される脂肪アルコール組成物の力価を少なくとも20％〜30％上回る、請求項14記載の方法。
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