JP2016088939A - タンポポ抽出物を含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物とその利用 - Google Patents
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Abstract
【解決手段】タンポポ抽出物又はその分画物は、ヒアルロン酸の生成及びヒアルロン酸合成酵素の発現を効果的に促進させるため、関節保護、関節炎の予防若しくは治療、皮膚弾力性の改善、老化防止、シワの予防若しくは治療、及び皮膚の保湿に有利に用いることができる。
【選択図】なし
Description
下記の実施例で使用したタンポポ抽出物はエタノール抽出物であり、OBM RAP CO.,LTDから購入して使用した。
タンポポ抽出物の細胞毒性を評価するために、退行性関節炎患者から採取したヒト線維芽細胞様滑膜細胞(Human Fibroblast-like Synoviocyte、HFLS-OA、Cell Applications)の細胞分裂の変化をCell Counting Kit-8(Dojindo Lab、米国)を使用して測定した。
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地(Synoviocyte Growth Medium、Cell Applications)で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地 200μlに交換し、タンポポ抽出物を濃度別(5及び10ppm)に添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することが知られているグルコサミン塩酸塩(Glucosamine hydrochloride、Sigma-aldrich)を1000ppmで処理した。24時間培養した後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット(R&D Systems)を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表2に示した。
退行性関節炎患者由来のヒト線維芽細胞量滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で6-ウェルプレートに分注し、3日間培養した後、培地を交換し、10ppmの濃度のタンポポ抽出物を24時間処理した。細胞を回収し、RNeasy mini kit(Qiagen)で全体RNAを抽出した後、定量して1μgのRNAをGeneAmp(登録商標)RNA PCR kit(Applied Biosystems)を用いて逆転写した。逆転写の反応はMycycler(登録商標)PCR機器(Biorad)を用いて行った。
ヒトの線維芽細胞様滑膜細胞を滑膜細胞増殖培地で培養し、96-ウェルプレートにウェル当たり2.0×103個の細胞を分注した。3日間培養した後、滑膜細胞増殖培地200μlに交換し、タンポポ抽出物を10ppmで添加した。陰性対照群として同量の溶媒を処理し、陽性対照群としては、グルコサミン塩酸塩1000ppmで処理した。24時間培養後、細胞培養液を回収し、ヒアルロン酸ELISAキット(R&D Systems)を用いてヒアルロン酸濃度を測定して表4に示した。
体重200g前後の雄性SDラット(サムタコ、韓国)を購入し、温度23±1℃、湿度55±5%に調整された恒温恒湿飼育装置(デジョン機器商社、韓国)内で1週間適応させた後、実験に使用した。試料処置群(n=8)にタンポポ抽出物を生理食塩水で希釈し、それぞれラットの体重1kg当たり100又は500mgを1日1回15日間経口投与し、対照群(n=8)の場合、溶媒のみ同様の方法で投与した。その後、ヒアルロン酸濃度を測定するために大腿骨及び脛骨を共に摘出した後、左膝関節腔内に生理食塩水0.5mlを注射して洗浄し、洗浄された滑膜を100μl以上採取して検査前まで-70℃で凍結保管した。滑液内のヒアルロン酸濃度をヒアルロン酸ELISAキット(R&D Systems)により測定して表5に示した。
人体由来の角質形成細胞であるHaCaT細胞を、10%のFBSを含むDMEM培地に2×104 cells/mlで製造し、24-ウェルプレートに1mlずつ分注した。24時間培養した後、牛血清を含まないDMEM培地1mlに交換し、タンポポ抽出物を30ppmで添加した。陰性対照群として同量のエタノールを処理し、陽性対照群としてヒアルロン酸の生成を促進することで知られているグルコサミン塩酸塩(Sigma-aldrich)を100ppmで処理した。48時間培養後、細胞培養液を回収してヒアルロンサンELISAキット(R&D Systems)を用い、ヒアルロン酸濃度を測定して表6に示した。
タンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚水分量の増加効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50%の恒温恒湿室で健康な成人30人の下膊内側に一定量(2mg/cm2)を塗布し、塗布前、塗布1時間後及び塗布2時間後の皮膚の水分含有量を測定した。対照群の場合タンポポ抽出物の代わりに同量のエタノールを含有した栄養クリームを同様の方法で製造して塗布し、如何なる処理もされていない正常な皮膚を無処理群として使用した。水分保持能の測定はコルネオメーター(Corneometer)(Courage + Khazaka、GmbH、Germany)を使用し、皮膚表面の電気伝導度を測定した。その結果は、次の表7に示した。
本発明のタンポポ抽出物を含有する化粧料に対する皮膚弾力性の増進効果をヒトの皮膚に適用させるために、下記製剤例2の栄養クリームの組成に応じて製造し、22℃及び相対湿度50%の恒温恒湿室で健康な成人30人の首のまわりに4週間塗布した後、塗布前、塗布後の弾力性を測定し、皮膚弾力性の改善効果を比較評価した。
タンポポ抽出物 0.1mg
クエン酸 1000mg
オリゴ糖 100g
梅濃縮液 2g
タウリン 1g
精製水を加えて、全900mL
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含む栄養クリームを常法に従って製造した。
ベータ-1,3-グルカン 5.0重量%
ロウ 10.0重量%
ポリソルベート60 1.5重量%
PEG-60 硬化ヒマシ油 2.0重量%
ソルビタンセスキオレエート 0.5重量%
流動パラフィン 10.0重量%
スクアラン 5.0重量%
トリ(カプリル酸/ カプリン酸)グリセリル 5.0重量%
グリセリン 5.0重量%
ブチレングリコール 3.0重量%
プロピレングリコール 3.0重量%
トリエタノールアミン 0.2重量%
防腐剤 0.05重量%
色素 0.05重量%
香料 0.05重量%
精製水 to 100重量%
下記組成のように、タンポポ抽出物を有効成分として含むゲル軟膏剤を常法に従って製造した。
ベータ-1,3-グルカン 10.0重量%
ポリアクリル酸(Carbopol 940)1.5重量%
イソプロパノール 5.0重量%
ヘキシレングリコール 25.0重量%
トリエタノールアミン 1.7重量%
脱イオン水 〜100重量%
タンポポ抽出物 2mg
大豆抽出物 50mg
グルコース 200mg
澱粉 600mg
Claims (6)
- タンポポ(Taraxacum spp.)抽出物又はその分画物を有効成分として含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物。
- 請求項1の組成物を有効成分として含む関節保護、又は関節炎の予防若しくは治療のための組成物。
- 請求項1の組成物を有効成分として含む皮膚弾力性の改善、老化防止、又はシワの予防若しくは改善のための組成物。
- 請求項1の組成物を有効成分として含む皮膚の保湿用組成物。
- 前記組成物は、化粧料組成物、食品組成物、薬学的組成物及び医薬部外品組成物からなる群から選択されるいずれか一つとして用いられる、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記組成物は、タンポポ抽出物又はその分画物を組成物の総重量に対して0.00001〜10重量%含む、請求項1〜4のいずれか一項に記載の組成物。
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