KR101956842B1 - Hcure-1을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 - Google Patents

Hcure-1을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 HCURE-1을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장품, HCURE-1을 포함하는 의약외품 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 아미노산 복합물은 피부 진피층의 섬유아세포에 직접적으로 작용하여 콜라겐 합성을 유의적으로 증가시키며 세포독성이 없으므로 주름개선용, 보습용, 콜라겐 합성 촉진용 또는 노화방지용 조성물의 개발에 안전하게 활용할 수 있다.

Description

HCURE-1을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물{Cosmetic composition for anti-wrinkle and improving collagen synthesis comprising HCURE-1}
본 발명은 HCURE-1을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 및 이를 포함하는 기능성 화장품, HCURE-1을 포함하는 의약외품 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.
노화는 사람이 성장하면서 자연스럽게 진행되는 자연 현상이다. 하지만, 현대 사회에 접어들면서 다양한 외부요인(자외선, 환경 오염 등)과 내부요인(스트레스, 약물 등)들에 의해 노화가 가속화되고 있다. 주름은 피부의 노화로 생기며 노화된 피부란 노화의 과정과 연관된 자연적 변화의 총체이다. 피부노화는 크게 두 가지로 구분되는데, 피부표면 전체에서 나이와 관련된 피부 기능, 구조 모양의 변화를 나타내는 생리적 노화와 자외선에 의한 광노화이다. 피부에 노화가 진행되면 진피의 변화가 일어나는데 진피의 변화는 섬유아세포(fibroblast)의 숫자와 그들의 합성 능력의 감소로 인하여 세포외 기질중 큰 분자량을 가진 물질들이 변화함으로써 발생한다. 그 구체적인 변화로는 콜라겐 다발의 분리, 점다당질 합성감소, 콜라겐과 탄력섬유(elastin) 수와 직경 감소, 콜라겐과 탄력섬유 분쇄, 혈관의 팽창 등이 있다.
노화에 따른 진피 내 콜라겐 결핍은 주름의 주원인으로 섬유아세포에서의 콜라겐 합성이 감소되거나, 효소에 의한 콜라겐의 분해가 증가되었을 경우에 생긴다. 따라서 주름을 개선시킬 수 있는 물질로 섬유아세포 수나 콜라겐 합성을 증가시키거나 콜라겐 분해 효소를 억제할 수 있는 물질을 사용할 수 있다.
피부를 구성하고 있는 여러층 가운데 외부 환경으로부터 신체를 보호하고 탄력있고 촉촉한 피부를 유지 시켜주는 가장 중요한 부분은 표피층이다. 표피층은 다시 각질층, 과립층, 유극층, 기저층으로 나뉘는데, 각질층이 적당량의 수분을 유지하는 것은 피부의 탄력이나 유연성을 유지하는데 대단히 중요하며 정상적인 피부는 약 30%정도의 수분이나 수용성 성분을 함유하고 있다. 각질층의 수분 함량이 20% 이하로 떨어지면 피부가 건조해지고 표면이 거칠어지기 시작하며 10% 이하가 되면 피부가 갈라지게 된다. 또한, 피부는 수분을 함유할 수 있도록 각질층 내에 아미노산, 당류와 같은 천연보습인자 성분을 가지고 있으며, 이들은 각질층의 수분유지에 중심적인 역할을 한다. 이러한 견지에서 외부에서 공급될 수 있는 아미노산 구성비율이 최적화 되었을 때 각질층의 피부 함습율이 최적으로 유지되고 피부세포가 활성화되어 탄력섬유 단백질인 콜라겐과 엘라스틴의 합성이 증가되는 등 피부 노화방지 효과를 나타낼 수 있다는 것을 예측할 수 있으므로, 이러한 효과를 나타내는 최적의 아미노산 구성비율에 대한 연구가 필요한 실정이다.
이에 본 발명자들은 아미노산에 주목하였고 특정 구성비율로 구성된 아미노산 복합물을 처리할 경우 피부 진피층에 직접 작용하여 콜라겐 생합성이 유의하게 증가하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서 본 발명의 목적은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물 및 상기 조성물을 포함하는 기능성 화장품을 제공하는 것이다.
본 발명의 또다른 목적은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 의약외품 조성물, 약학적 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 기능성 화장품을 제공한다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 의약외품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 아미노산 복합물은 피부 진피층의 섬유아세포에 직접적으로 작용하여 콜라겐 합성을 유의적으로 증가시키며 세포독성이 없으므로 주름개선용, 보습용, 콜라겐 합성 촉진용 또는 노화방지용 조성물의 개발에 안전하게 활용할 수 있다.
도 1은 아미노산 복합물의 세포독성을 MTT 분석법으로 확인한 결과를 나타낸 도이다.
도 2는 단백질 표준 곡선을 나타낸 도이다.
도 3은 아미노산 복합물의 콜라겐 합성 효과를 type Ⅰ 프로콜라겐의 양을 통해 확인한 결과를 나타낸 도이다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에서 "아미노산 복합물"은 프롤린, 글라이신, 알라닌 및 세린을 포함한다.
본 발명의 아미노산 복합물은 피부 진피층의 섬유아세포에 직접적으로 작용하여 콜라겐 합성을 유의적으로 증가시키며 세포독성이 없으므로 주름개선용, 보습용, 콜라겐 합성 촉진용 또는 노화방지용 기능성 화장품에 활용할 수 있다.
본 명세서에서 "피부"라 함은, 동물의 체표를 덮는 조직을 의미하는 것으로서, 얼굴 또는 바디 등의 체표를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 명세서에서 "콜라겐"은 인체 내에서 양적 및 기능적으로 가장 큰 부분을 차지하는 단백질로, 인체 내 모든 세포의 뼈대를 형성하는 세포외기질(extracellular matrix), 보다 구체적으로 결합조직(connective tissue)의 주요 구성 인자를 의미한다. 콜라겐을 다량 함유하는 인체 조직으로는 피부(skin), 뼈 및 연골 등의 골(bone) 조직, 건(tendon), 인대(ligament) 등이 있다. 상기 조직들의 노화로 인해 피부 주름 및 처짐, 골다공증 등의 인체 노화 질환들이 비롯되며, 이는 조직의 콜라겐 합성 감소로 인한 체내 콜라겐 양 및 기능 감소에 의한 것으로 알려져 있다.
한편, 피부섬유아세포의 주된 기능으로 세포외기질 합성과 증식을 통한 손상된 피부 조직 재생 등을 들 수 있는데, 광노화와 같은 외인성노화 요인 또는 유리 산소에 의한 손상 누적, 텔로미어 단절로 인한 세포 노화 등에 따른 내인성 노화 요인들은 진피층 내에 있는 피부섬유아세포의 생리 활성 기능을 저하시키게 된다. 피부 세포외기질 중 95% 이상을 차지하고, 세포의 부착분자(adhesion molecule) 및 세포 골격(cytoskeleton) 등과의 상호 작용과 신호 교류를 통해 섬유아세포의 생리 활성에 매우 주요한 부분을 담당하는 제 I 형 콜라겐의 합성이 저하될 경우, 피부 조직 내 콜라겐 양이 감소되고, 이에 따라 표면 장력이 감소되어 피부 주름을 형성할 뿐만 아니라, 세포의 증식 및 재생 기능을 포함하는 생리 활성 기능이 감소하는 악순환의 원인이 된다. 따라서 피부 섬유아세포의 콜라겐은 피부 노화, 피부 주름 형성 및 피부 손상 시 조직의 수복 또는 재생과 직접적인 관련이 있다고 볼 수 있다.
즉, 피부 섬유아세포의 콜라겐 또는 프로콜라겐의 합성이 촉진되면, 피부 주름을 예방 및 개선하며, 상처를 치유하고, 손상된 피부 조직을 수복 및 재생하며, 피부 노화를 방지 및 개선할 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 아미노산 복합물은 아미노산 복합물 총 중량에 대하여 프롤린 1-5 중량%, 글라이신 1-5 중량%, 알라닌 0.5-2 중량% 및 세린 0.5-2 중량%를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
더욱 바람직하게, 본 발명의 아미노산 복합물은 프롤린:글라이신:알라닌:세린을 3:3:1:1의 중량비로 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 아미노산 복합물은 본 발명의 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.01 내지 10 중량%, 바람직하게는 1 내지 5 중량%로 포함된다. 그 함량이 0.01 중량% 미만일 경우에는 주름개선 효과를 달성할 수 없으며, 10 중량%를 초과할 경우에는 제제화가 어렵고 사용감이 저하될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 통상적으로 사용되는 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 향료 등과 같은 통상적인 보조제 및 담체가 더 포함함 수 있다. 예를 들어, 상기 화장료 조성물에는 글리세린, 부틸렌글라이콜, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 토코페릴 아세테이트, 시트릭산, 판테놀, 스쿠알란, 소듐 시트레이트, 알란토인 등의 보조성분이 추가로 더 포함될 수 있고, 용제로는 헥산디올, 정제수 등을 포함할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 기본적으로 피부에 도포되는 것이므로, 당업계의 화장료 조성물을 참조하여 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있다. 예를 들어, 화장수, 유액, 페이스트, 젤, 크림, 에센스, 팩, 앰플, 로션, 세정료, 비누, 오일, 립스틱, 파우더, 스프레이 및 파운데이션으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 등이 포함될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄, 디메틸 에테르 등의 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유액인 경우에는 담체 성분으로 용매, 용해화제, 유탁화제 등이 포함될 수 있고, 구체적으로 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜, 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로 물, 에탄올, 프로필렌글리콜 등의 액상 희석제; 에톡실화이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 등의 현탁제; 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라칸트 등이 포함될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 포함될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 화장료 조성물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 기능성 화장품을 제공한다.
본 발명에서 용어 "기능성 화장품(cosmedical, cosmeceutical)"이란 화장품에 의약품의 전문적인 치료기능이 도입되어, 일반 화장품과 달리 생리활성적인 효능, 효과가 강조된 전문적인 기능성을 갖는 제품으로서, 피부의 미백에 도움을 주는 제품, 피부 주름개선에 도움을 주는 제품, 피부를 곱게 태우거나 자외선으로부터 피부를 보호하는데 도움을 주는 제품 중에서 보건복지부령이 정하는 화장품을 의미한다.
본 발명에서, 상기 기능성 화장품은 다양한 기능성 화장품 중에서 피부의 보습, 주름개선, 또는 콜라겐 합성 촉진에 도움을 주는 제품을 의미하고, 바람직하게는 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 기능성 화장품이 될 수 있으며, 보다 바람직하게는 프롤린, 글라이신, 알라닌 및 세린을 포함하는 아미노산 복합물을 유효성분으로 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 기능성 화장품이 될 수 있다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 의약외품 조성물을 제공한다.
본 발명에서 용어, "의약외품"은 사람이나 동물의 질병을 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용되는 섬유, 고무제품 또는 이와 유사한 것, 인체에 대한 작용이 약하거나 인체에 직접 작용하지 아니하며, 기구 또는 기계가 아닌 것과 이와 유사한 것, 감염형 예방을 위하여 살균, 살충 및 이와 유사한 용도로 사용되는 제제 등에 해당하는 물품으로서, 사람이나 동물의 질병을 진단, 치료, 경감, 처치 또는 예방할 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것 및 사람이나 동물의 구조와 기능에 약리학적 영향을 줄 목적으로 사용하는 물품 중 기구, 기계 또는 장치가 아닌 것을 제외한 물품을 의미한다.
본 발명의 조성물을 의약외품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 의약외품 또는 의약외품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
본 발명의 의약외품 조성물은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 바디 클렌저, 소독 청결제, 세정제, 주방용 세정제, 청소용 세정제, 치약, 가글제, 물티슈, 세제, 비누, 핸드 워시, 헤어 세정제, 헤어 유연제, 가습기 충진제, 마스크, 연고제 및 필터충진제로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상일 수 있나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은, 상기 아미노산 복합물을 유효 성분으로 함유하는 것에 더하여, 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서, 상기 "약학적으로 허용 가능"하다는 것은, 이를 투여 시 생물체를 자극하지 않으면서, 투여되는 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는, 약학 분야에서 통상적으로 사용되는 것을 의미한다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은, 상기 담체와 함께 제제화되어, 의약품, 사료 첨가제, 음용수 첨가제 등으로 활용될 수 있다.
본 발명에서, 상기 담체의 종류는 특별히 제한되지 아니하며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다. 상기 담체의 비제한적인 예로는, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사 용액, 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 말토 덱스트린, 글리세롤, 에탄올 등을 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 상기 약학적 조성물은 필요한 경우, 부형제, 희석제, 항산화제, 완충액 또는 정균제 등 기타 약학적으로 허용 가능한 첨가제 들을 첨가하여 사용할 수 있으며, 충진제, 증량제, 습윤제, 붕해제, 분산제, 계면활성제, 결합제 또는 윤활제 등을 부가적으로 첨가하여 사용할 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여를 위한 적합한 다양한 제형으로 제제화되어 사용될 수 있다.
상기 경구 투여용 제제의 비제한적인 예로는, 트로키제(troches), 로젠지(lozenge), 정제, 수용성 현탁액, 유성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제 등을 들 수 있다.
본 발명의 상기 약학적 조성물을 경구 투여용으로 제제화하기 위하여, 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴(Amylopectin), 셀룰로오스(Cellulose) 또는 젤라틴(Gelatin) 등과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트(Dicalcium phosphate) 등과 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분 등과 같은 붕괴제; 스테아르산 마그네슘(Magnesium stearate), 스테아르산 칼슘(Calcium stearate), 스테아릴 푸마르산 나트륨(Sodium stearyl fumarate) 또는 폴리에틸렌 글리콜 왁스(Polyethylene glycol wax) 등과 같은 윤활유 등을 사용할 수 있으며, 감미제, 방향제, 시럽제 등도 사용할 수 있다.
나아가 캡슐제의 경우에는 상기 언급한 물질 외에도 지방유와 같은 액체 담체 등을 추가로 사용할 수 있다.
비경구용 제제의 비제한적인 예로는, 주사액, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 크림 등을 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물을 비경구 투여용으로 제제화하기 위하여, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조 제제, 외용제 등을 사용할 수 있으며, 상기 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
또한, 보다 구체적으로 본 발명의 상기 약학적 조성물을 주사액으로 제제화하는 경우, 본 발명의 상기 조성물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플(ampoule) 또는 바이알(vial)의 단위 투여용으로 제제화할 수 있다. 또한, 본 발명의 상기 약학 조성물을 에어로졸제로 제제화하는 경우, 수분산된 농축물 또는 습윤 분말이 분산되도록 추진제 등이 첨가제와 함께 배합할 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물을 연고, 크림 등으로 제제화하는 경우에는, 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화 아연 등을 담체로 사용하여 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 상기 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 상기 약학 조성물의 투여로 달성하고자 하는 반응의 종류와 정도, 투여 대상이 되는 개체의 종류, 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 질병의 증세나 정도, 성별, 식이, 배설, 해당 개체에 동시 또는 이시에 함께 사용되는 약물 기타 조성물의 성분 등을 비롯한 여러 인자 및 의약 분야에서 잘 알려진 유사 인자에 따라 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물의 보다 바람직한 효과를 위한 투여량은, 바람직하게는 1일 1 mg/kg 내지 1,000 mg/kg, 보다 바람직하게는 10 mg/kg 내지 500 mg/kg일 수 있다. 본 발명의 상기 약학 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로 및 투여 방식은 각각 독립적일 수 있으며, 그 방식에 있어 특별히 제한되지 아니하며, 목적하는 해당 부위에 상기 약학적 조성물이 도달할 수 있는 한 임의의 투여 경로 및 투여 방식에 따를 수 있다. 상기 약학적 조성물은 경구 투여 또는 비경구 투여 방식으로 투여할 수 있다.
상기 비경구 투여하는 방법으로는, 예를 들어 정맥 내 투여, 복강 내 투여, 근육 내 투여, 경피 투여 또는 피하 투여 등을 이용할 수 있으며, 상기 조성물을 질환 부위에 도포하거나 분무, 흡입하는 방법 또한 이용할 수 있으나 이들에 제한되지 아니한다.
본 발명의 약학적 조성물은 바람직하게는 경구 투여 또는 주사 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 식품 조성물을 건강기능식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강기능식품 또는 건강기능식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용 목적에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조 시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 바람직하게는 15 중량부 이하, 보다 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가할 수 있다. 그러나, 건강 조절 및 위생을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 식품 조성물을 첨가할 수 있는 건강기능식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있고, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함할 수 있으며, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품을 포함할 수 있다.
또한, 본 발명의 식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 수크로스와 같은 디사카라이드, 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨과 같은 당알콜일 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 이에 제한되지는 않으나, 본 발명의 조성물 100 ㎖ 당 바람직하게는 약 0.01 내지 0.04g, 보다 바람직하게는 0.02 내지 0.03g일 수 있다. 상기 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제 및 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제일 수 있다.
상기 외에 본 발명의 식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 아미노산 복합물의 제조
아미노산 복합물을 제조하기 위하여, 하기 표 1에 기재된 바와 같이 글라이신(C2H5NO2:75.07), L-프롤린(C5H9NO2:115.13), L-알라닌(C3H7NO2:89.09), L-세린(C3H7NO3:105.09g), 부틸렌글라이콜, 1,2-헥산디올을 정량하였다. 정량한 성분을 정제수에 녹인 뒤 여과하여 아미노산 복합물을 수득하였다.
원료명 규격 함량( 중량% )
글라이신 ICID 3.0
L-프롤린 ICID 3.0
L-알라닌 ICID 1.0
L-세린 ICID 1.0
부틸렌글라이콜 ICID 10.0
1,2-헥산디올 ICID 3.0
정제수 ICID 79.0
수득한 아미노산 복합물은 투명한 액체로 약간의 특이한 냄새가 있다. 이하, 본 발명의 아미노산 복합물을 "HCURE-1"으로 지칭한다.
실시예 2. 아미노산 복합물의 세포독성 시험
실시예 1에서 제조한 아미노산 복합물의 세포독성을 시험하기 위하여 MTT(3-(4,5-dimetylthiazol-2-yl)2,5-diphenyltetrazolium bromide) 분석법을 수행하였다.
2.1 세포배양
인간 진피 섬유아세포(Human dermal fibroblast cell)를 10 % FBS를 첨가한 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium) 배지에서 37℃, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 계대 후 8~12 세대 세포를 실험에 사용하였다.
2.2 세포독성 시험
MTT(3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 PBS(pH 7.4)에 1 mg/ml 농도로 녹인 후 0.2 μm 실린지 필터로 여과한 후 분주해서 냉장 보관하였다.
인간 진피 섬유아세포를 96 웰 플레이트에 2X104 개/웰 농도로 접종한 후 하루동안 배양하였다. 세포부착을 확인한 후 무혈청 배지로 교체하고 각각의 웰에 HCURE-1 시료가 최종적으로 0.5, 1, 2, 4 % 농도가 되도록 처리하였다. 상기 처리된 세포를 48시간 동안 다시 배양하였다. 상기와 같은 처리 후 전체 배지의 1/10되는 양으로 MTT 용액 (PBS 내 1 mg/ml)을 첨가하고 37℃, CO2 배양기에서 4 시간 동안 반응시켰다. 반응 후 배양액을 모두 제거하고 각 웰에 DMSO를 100 μl씩 넣고 세포 내 형성된 포르마잔(formazan)을 용해시켰다. 570 nm에서 ELISA Reader system (Powerwave X, Bio-tek INC, VT)으로 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 TGF-β를 사용하였고, TGF-β를 10 μl/mL 농도로 무혈청 DMEM 배양액에 녹인 후 전체 부피의 1/1000로 처리하여 최종 작용 농도가 10 ng/mL가 되도록 하였다. O.D. 측정값을 표 2에, 세포독성 시험 결과를 도 1에 나타내었다.
농도(%) O.D 570 nm 측정값
1회 2회 3회 평균 S.D. 대조군에 대한 % P value
대조군 (-) 2.46 2.48 2.40 2.45 0.04 100.0 (-)
HCURE-1
(%)		 0.5 2.40 2.39 2.42 2.41 0.01 98.4 >0.05
1 2.45 2.46 2.39 2.43 0.04 99.5 >0.05
2 2.39 2.34 2.36 2.36 0.02 96.6 >0.05
4 2.34 2.31 2.42 2.36 0.06 96.4 >0.05
표 2 및 도 1에 나타낸 바와 같이, HCURE-1을 0.5, 1, 2, 4% 농도로 처리했을 때, 4% 농도까지 인간 진피 섬유아세포의 세포모양 변형 및 세포생존률의 변화가 거의 없음을 확인하였다.
따라서, HCURE-1이 4% 농도까지는 세포 독성이 없는 물질임을 알 수 있다.
실시예 3. 아미노산 복합물의 콜라겐 합성 시험
실시예 1에서 제조한 아미노산 복합물의 콜라겐 생합성 효과를 다음과 같은 원리에 의해 시험하였다. 콜라겐(type I, Ⅱ, Ⅲ, Ⅳ 및 V)들은 프로콜라겐이라는 전구물질의 형태로 합성되고, 프로콜라겐은 아미노 말단과 카복시 말단에 프로펩티드라는 펩티드 염기서열을 포함한다. 프로펩티드의 기능은 소포체 내에서 프로콜라겐 분자의 폴딩(folding)을 도와줌과 동시에 콜라겐 중합반응이 일어날 때 콜라겐 분자로부터 절단, 분리된다고 알려져 있다. 따라서 분리된 프로펩타이드의 양을 측정함으로써, 세포 내에서의 콜라겐 생합성 정도를 파악할 수 있으므로, 인간 진피 섬유아세포 배양시 HCURE-1의 처리에 의한 type Ⅰ 프로콜라겐의 합성 수준을 측정하였다.
3.1 세포배양
인간 진피 섬유아세포를 24 웰 디쉬에 3X105의 세포수로 시딩(seeding)한 후 하루동안 배양하였다. 이후 상기 세포를 무혈청 DMEM(WelGENE, Korea) 배양액에서 16시간 배양하였다. FBS(Gibco,CA)가 0.05% 들어있는 DMEM 배양액으로 교환 후 각각의 웰에 HCURE-1의 최종 작용 농도가 0.5, 1, 2, 4% 되도록 처리하였다. HCURE-1을 용해한 DMSO 용매 영향을 보정하기 위해 대조군과 양성대조군(TGF-β처리군)에 DMSO를 동일한 비율 (1/1000)로 처리하였다. 48시간 후, 세포 배지를 수집하였다.
수집한 각 시료 중 100 μl를 항체로 코팅된 마이크로플레이트의 각 웰에 넣고, 37℃에서 2시간 동안 배양하였다. 배앙 후 각 웰을 PBS 300 μl 로 3회 세척하였다. 용액I (Antibody-POD conjugate solution)을 각 웰에 100 μl씩 넣고, 37℃에서 1시간 동안 배양하였다. 배양 후 각 웰을 PBS 400 μl로 3회 세척하였다. 기질용액(TMBZ) 100 μl을 각 웰에 첨가한 후, 상온(20-30℃)에 15분간 배양하였다. 1N H2SO4 100 μl를 각 웰에 첨가하여 잘 섞은 후, 750 nm에서 ELISA Reader system (Powerwave X, Bio-tek INC, VT)으로 흡광도를 측정하였다. 단백질 표준 곡선을 도 2에 나타내었고, 각 시료의 단백질 환산값을 표 3에 나타내었다.
농도(%) 흡광도(750 nm) 단백질 환산(mg/mL)
1회 2회 3회 1회 2회 3회
대조군 (-) 0.176 0.172 0.187 0.736 0.711 0.816
TGF-β
(ng/mL)		 10 0.185 0.175 0.188 0.800 0.729 0.820
HCURE-1
(%)		 0.5 0.192 0.196 0.181 0.849 0.881 0.775
1 0.195 0.179 0.189 0.871 0.760 0.828
2 0.182 0.188 0.197 0.779 0.818 0.886
4 0.189 0.192 0.181 0.828 0.849 0.772
표 3의 결과를 도 2의 표준 곡선에 의해 환산한 콜라겐의 양을 표 4에 나타내었다.
농도(%) 흡광도(490 nm) 콜라겐 환산(ng/mL)
1회 2회 3회 1회 2회 3회
대조군 (-) 0.354 0.306 0.370 27.72 14.39 32.17
TGF-β
(ng/mL)		 10 0.758 0.738 0.732 139.94 134.39 132.72
HCURE-1
(%)		 0.5 0.310 0.322 0.302 15.50 18.83 13.28
1 0.552 0.54 0.54 82.72 79.39 79.39
2 0.774 0.762 0.762 144.39 141.06 141.06
4 0.802 0.77 0.77 152.17 143.28 143.28
상기 결과들로부터 type Ⅰ 프로콜라겐의 값을 환산한 결과를 표 5에 나타내었다.
단백질 보정값
(μg Type I 프로콜라겐/mg 단백질)
1 회 2 회 3 회 P value
대조군 (-) 37.65 20.24 39.44 (-)
TGF-beta (ng/mL) 10 174.93 184.26 161.90 <0.05

HCURE-1(%)		 0.5 18.25 21.39 17.14 >0.05
1 95.01 104.50 95.85 <0.05
2 185.40 172.51 159.29 <0.05
4 183.72 168.67 185.66 <0.05
상기 표 5의 결과를 도 3에 그래프로 나타내었다.
도 3에 나타낸 바와 같이, 세포 내에서의 콜라겐 합성에 대한 HCURE-1의 효능을 시험한 결과, 0.5% 이상의 처리 농도에서 콜라겐 합성능이 유의하게 증가하는 것을 확인하였다.
상기 결과를 종합하면, 본 발명의 아미노산 복합물은 세포독성이 없으며 피부 진피층에 직접 작용하여 섬유아세포에서 콜라겐의 합성을 유의적으로 증가시키므로, 주름개선용 또는 보습용 화장품의 제조에 사용할 수 있음을 확인할 수 있다.
하기에 본 발명의 화장료 조성물을 위한 제제예를 예시한다.
제제예 1. 유연화장수의 제조(함량 : 중량% )
아미노산 복합물 1.0
글리세린 3.0
부틸렌 글리콜 2.0
프로필렌 글리콜 2.0
카복시비닐폴리머 0.1
에탄올 10.0
트리에탄올아민 0.1
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량
총계 100.0
제제예 2. 영양화장수의 제조 (함량 : 중량% )
아미노산 복합물 1.0
밀납 4.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.5
유동파라핀 5.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 5.0
글리세린 3.0
부틸렌 글리콜 3.0
프로필렌 글리콜 3.0
카복시비닐폴리머 0.1
트리에탄올아민 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량
총계 100.0
제제예 3. 마사지 크림의 제조 (함량 : 중량% )
아미노산 복합물 1.0
밀납 10.0
폴리소르베이트 60 1.5
소르비탄세스퀴올레이트 0.8
유동파라핀 40.0
스쿠알란 5.0
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 4.0
글리세린 5.0
부틸렌 글리콜 3.0
프로필렌 글리콜 3.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량
총계 100.0
제제예 4. 팩의 제조 (함량 : 중량% )
아미노산 복합물 1.0
폴리비닐알콜 13.0
소듐카복시메틸셀룰로스 0.2
알란토인 0.1
에탄올 5.0
노닐페닐에테르 0.3
방부제, 미량색소, 미량향료, 미량정제수 잔량
총계 100.0

Claims (10)

  1. L-프롤린:글라이신:L-알라닌:L-세린을 3:3:1:1의 중량비로 포함하는 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 화장료 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서, 상기 아미노산 복합물은 조성물 총 중량에 대하여 1 내지 5 중량%로 포함되는 것인, 화장료 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 유액, 페이스트, 젤, 크림, 에센스, 팩, 앰플, 로션, 세정료, 비누, 오일, 립스틱, 파우더, 스프레이 및 파운데이션으로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 제형을 갖는 것인, 화장료 조성물.
  7. 제1항, 제5항 및 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 기능성 화장품.
  8. L-프롤린:글라이신:L-알라닌:L-세린을 3:3:1:1의 중량비로 포함하는 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 의약외품 조성물.
  9. 삭제
  10. L-프롤린:글라이신:L-알라닌:L-세린을 3:3:1:1의 중량비로 포함하는 아미노산 복합물을 포함하는 주름개선 및 콜라겐 합성 촉진용 식품 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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WO2013168803A1 (ja) * 2012-05-11 2013-11-14 協和発酵バイオ株式会社 肌質改善剤

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