JP2016053156A - 高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法 - Google Patents
高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2016053156A JP2016053156A JP2015162913A JP2015162913A JP2016053156A JP 2016053156 A JP2016053156 A JP 2016053156A JP 2015162913 A JP2015162913 A JP 2015162913A JP 2015162913 A JP2015162913 A JP 2015162913A JP 2016053156 A JP2016053156 A JP 2016053156A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phospholipid
- fatty acid
- pufa
- reaction
- dha
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Fats And Perfumes (AREA)
Abstract
【解決手段】水と相分離する溶媒中で、ランダム型リパーゼの存在下にリン脂質と高度不飽和脂肪酸とを反応させることを含む、高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法。
【選択図】なし
Description
原料のリン脂質、PUFA、および製造したリン脂質の脂肪酸組成は、構成脂肪酸を予めメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーにかけて定量分析した。
メチルエステル化では、各測定試料を20倍量の0.5M水酸化カリウム−メタノール溶液に懸濁し、100℃、5分間加熱した。ここに塩酸:メタノール=4:1(v/v)を0.5M水酸化カリウム−メタノール溶液の約半量加え、100℃で15分間加熱した。加熱後、イオン交換水とヘキサンをそれぞれ測定試料の40倍量加え、撹拌後、2層に分離するまで静置した。水層を除去し、さらに数回油層をイオン交換水で洗浄し、最後に無水硫酸ナトリウムで油層を脱水した。
油層に含まれる各種脂肪酸のメチルエステルを、下記条件でガスクロマトグラフィーに供し、脂肪酸組成を分析した。
(ガスクロマトグラフィー条件)
カラム:HR-SS-10結合型キャピラリ―カラム
カラム温度(DHAの場合):125℃→170℃→186℃→200℃
キャリアーガス:ヘリウム
注入口温度:250℃
検出器:水素炎イオン検出器(FID)
生成したリン脂質の2位に結合する脂肪酸を同定した。ホスホリパーゼA2を用いて、生成したリン脂質の2位の脂肪酸を選択的に加水分解し、次いで得られた脂肪酸を参考例1記載の手順でガスクロマトグラフィーに供することで、リン脂質の2位に結合する脂肪酸を同定した。さらに、加水分解後の残りのリゾリン脂質の1位の脂肪酸の組成を、参考例1記載の脂肪酸組成分析の手順に従って分析した。なお、ホスホリパーゼA2の加水分解の効率に起因して、脂肪酸組成分析の手法で得られる分析値と、ホスホリパーゼA2による加水分解後の分析値に若干の変動があった。
原料リン脂質として大豆リン脂質(ベイシスLS−60:日清オイリオ製;アシル基の脂肪酸組成:エイコサペンタエン酸(EPA)0%、ヘンイコサペンタエン酸(HPA)0%、ドコサペンタエン酸(DPA)0%、ドコサヘキサエン酸(DHA)0%,パルミチン酸22.8%、ステアリン酸2.9%、オレイン酸10.8%、リノール酸57.3%、リノレン酸6.1%)を用いた。
原料PUFAとして、DHA高含有油(トリグリセリド形態、PUFA組成:EPA純度11.7%、DHA純度33.3%)、DHAエチルエステル(エステル形態、PUFA組成:EPA純度13.8%、HPA純度7.6%、DPA純度10.1%、DHA純度68.5%)、または遊離DHA(遊離脂肪酸形態、PUFA組成:EPA純度11.7%、HPA純度8.1%、DPA純度9.2%、DHA純度71.0%)を用いた。
リパーゼとしては、ランダム型リパーゼであるリパーゼOF(名糖産業製;キャンディダ・シリンドラセ由来、360000U/g、至適pH6〜7、至適温度45〜50℃)を用いた。
アシル基比を5にした以外は、実施例1と同様の手順で反応を行い、リン脂質画分を分取した。
アシル基比を7にした以外は、実施例1と同様の手順で反応を行い、リン脂質画分を分取した。
大豆リン脂質としてアセトンにより脱水処理したものを用いた以外は、実施例2と同様にして反応を行い、リン脂質画分を分取した。なお、大豆リン脂質の脱水処理は次のように行った:大豆リン脂質20gを少量のヘキサンに分散し、200mLの冷アセトンを加えて0.5℃の氷浴で1時間静置した後、溶媒を除去し、真空乾燥機で2日間乾燥した。
参考例1に記載の手順で、実施例1〜4で製造したリン脂質の脂肪酸組成分析を行い、DHAの組成比を算出した。算出した組成比を、リン脂質へのDHA導入率(PUFA(DHA)−リン脂質生成率)とした。実施例1〜4のリン脂質におけるDHA導入率を表1に示す。反応時間6時間では、PUFA原料としてDHA高含有油とDHAエチルエステルを用いた場合、アシル基比が増加するほどDHA導入率も増加することがわかった。逆に、PUFA原料としてDHAを用いた場合、アシル基比が増加するほどDHA導入率は低下した。また、脱水処理をしたリン脂質を用いると、導入率が向上した。
リン脂質として脱水処理大豆リン脂質を、PUFAとしてDHAエチルエステルを用い、アシル基比を6、7または8、反応時間を24時間、48時間または72時間とした以外は、実施例1と同様にして反応を行い、リン脂質画分を分取した。
参考例1に記載の手順で、実施例5〜13で製造したリン脂質の脂肪酸組成分析を行い、EPA、HPA、DPA、DHAそれぞれのPUFAについて組成比を算出した。算出した組成比を、リン脂質への各PUFAの導入率(各PUFA−リン脂質生成率)とした。結果を表2に示す。PUFAとしてエチルエステルを用いた場合、反応時間の延長とともに、脂肪酸導入率が向上した。一方、アシル基比については、アシル基比6に比べて7では脂肪酸導入率が向上したが、アシル基比7と8では導入率に大きな差はなかった。したがって、PUFAとしてエチルエステルを用い、アシル基比を5〜7、好ましくは6〜7とし、反応時間を24時間以上、好ましくは48時間以上とすることで、非常に効率よく多くのPUFAをリン脂質に導入できることがわかった。
参考例2に記載の手順に従って、実施例10で得られたリン脂質の2位に結合している脂肪酸と1位に結合している脂肪酸の組成を調べた。参考として、天然のPUFA−リン脂質源として知られるオキアミ油リン脂質の脂肪酸組成を同様の手順で調べた。結果を表3に示す。実施例10のリン脂質は、2位結合型PUFA−リン脂質を多く含み、かつ天然に存在するオキアミ油リン脂質に比べても2位選択的かつ高含有量でPUFAを有するものであった。この結果から、本発明の製造方法によれば、リン脂質の2位に対して極めて選択的に、PUFAを導入することができることがわかった。
実施例1と同様の手順で、ただし、リパーゼとしてランダム型リパーゼに代えて、リン脂質の2位の脂肪酸を選択的に加水分解するリパーゼであるホスホリパーゼA2(ナガセケムテックス(株)製;110810U/g、至適pH9、至適温度50℃)を用いて、エステル交換反応を行った。
大豆リン脂質には、実施例4記載の方法により調製したアセトンによる脱水処理を施した大豆リン脂質を用いた。原料PUFAとしては、PUFA高含有油(トリグリセリド形態、PUFA組成:EPA純度22.9%、DHA純度14.1%)、PUFAエチルエステル(エステル形態、PUFA組成:EPA純度8.9%、HPA純度7.4%、DPA純度11.3%、DHA純度72.4%)、または遊離PUFA(遊離脂肪酸形態、PUFA組成:EPA純度10.2%、HPA純度7.6%、DPA純度11.7%、DHA純度70.4%)のいずれかをアシル基比6になる量で添加した。
エステル交換反応を6時間または24時間行い、リン脂質画分を分取した。次いで、参考例1の方法に従い、製造したリン脂質の脂肪酸組成分析を行い、EPA、HPA、DPA、DHAのそれぞれについて組成比を算出した。算出した組成比の合計を、リン脂質へのPUFA導入率(PUFA−リン脂質生成率)とした。リン脂質中のPUFAの組成比とPUFA導入率を表4に示す。リパーゼとしてホスホリパーゼA2を用いた場合は、ランダム型のリパーゼを使用した場合に比してリン脂質へのPUFA導入率は低かった。またホスホリパーゼA2を用いた場合、反応時間を24時間まで延長してもPUFA導入率は向上しなかった。
Claims (11)
- 水と相分離する溶媒中で、ランダム型リパーゼの存在下にリン脂質と高度不飽和脂肪酸とを反応させることを含む、高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法。
- 上記高度不飽和脂肪酸が、遊離脂肪酸、アルキルエステルもしくはグリセリドの形態であるか、またはそれらの混合物である、請求項1記載の方法。
- 前記高度不飽和脂肪酸が、炭素数16以上の高度不飽和脂肪酸を遊離脂肪酸換算で50質量%以上含む組成物である、請求項1又は2記載の方法。
- 前記リン脂質が脱水処理されたリン脂質である、請求項1〜3のいずれか1項記載の方法。
- 前記反応におけるアシル基比が1〜15である、請求項1〜4のいずれか1項記載の方法。
- 前記反応の反応時間が1〜100時間である、請求項1〜5のいずれか1項記載の方法。
- 前記水と相分離する溶媒がヘキサンまたはジエチルエーテルである、請求項1〜6のいずれか1項記載の方法。
- 前記ランダム型リパーゼがキャンディダ属に属する菌類由来のランダム型リパーゼである、請求項1〜7のいずれか1項記載の方法。
- 前記キャンディダ属に属する菌類がキャンディダ・ルゴサまたはキャンディダ・シリンドラセである、請求項8記載の方法。
- 前記反応で得られた生成物が、グリセロール骨格の2位に結合した構成脂肪酸の50%が高度不飽和脂肪酸であるリン脂質である、請求項1〜9のいずれか1項記載の方法。
- グリセロール骨格の2位に結合した構成脂肪酸の50%が高度不飽和脂肪酸であるリン脂質。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2014178010 | 2014-09-02 | ||
JP2014178010 | 2014-09-02 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2016053156A true JP2016053156A (ja) | 2016-04-14 |
Family
ID=55744691
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2015162913A Pending JP2016053156A (ja) | 2014-09-02 | 2015-08-20 | 高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2016053156A (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115478083A (zh) * | 2021-06-15 | 2022-12-16 | 嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司 | 一种无溶剂体系制备磷脂型多不饱和脂肪酸的方法 |
CN115478083B (zh) * | 2021-06-15 | 2024-06-11 | 嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司 | 一种无溶剂体系制备磷脂型多不饱和脂肪酸的方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61129191A (ja) * | 1984-11-27 | 1986-06-17 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質 |
JPH01131189A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエン酸含有リン脂質の製造法 |
JPH01160988A (ja) * | 1987-12-18 | 1989-06-23 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエノイルジアシルグリセロールの製造法 |
JPH04148691A (ja) * | 1990-10-09 | 1992-05-21 | Nisshin Oil Mills Ltd:The | 改質リン脂質の製造方法 |
JPH05236974A (ja) * | 1991-03-29 | 1993-09-17 | Nichiro Corp | 高度不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法 |
JPH0859678A (ja) * | 1994-12-05 | 1996-03-05 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造法 |
JPH0867635A (ja) * | 1994-08-30 | 1996-03-12 | Suisanchiyou Chokan | 赤血球変形能向上剤 |
JPH09206088A (ja) * | 1996-02-02 | 1997-08-12 | Bizen Kasei Kk | リン脂質中の長鎖高度不飽和脂肪酸の濃縮方法 |
JP2007143479A (ja) * | 2005-11-28 | 2007-06-14 | Kyushu Univ | スキゾキトリウム属の微生物を用いた長鎖高度不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法 |
-
2015
- 2015-08-20 JP JP2015162913A patent/JP2016053156A/ja active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS61129191A (ja) * | 1984-11-27 | 1986-06-17 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエン酸含有グリセロリン脂質 |
JPH01131189A (ja) * | 1987-11-17 | 1989-05-24 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエン酸含有リン脂質の製造法 |
JPH01160988A (ja) * | 1987-12-18 | 1989-06-23 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエノイルジアシルグリセロールの製造法 |
JPH04148691A (ja) * | 1990-10-09 | 1992-05-21 | Nisshin Oil Mills Ltd:The | 改質リン脂質の製造方法 |
JPH05236974A (ja) * | 1991-03-29 | 1993-09-17 | Nichiro Corp | 高度不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法 |
JPH0867635A (ja) * | 1994-08-30 | 1996-03-12 | Suisanchiyou Chokan | 赤血球変形能向上剤 |
JPH0859678A (ja) * | 1994-12-05 | 1996-03-05 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | ドコサヘキサエノイルホスファチジルコリンの製造法 |
JPH09206088A (ja) * | 1996-02-02 | 1997-08-12 | Bizen Kasei Kk | リン脂質中の長鎖高度不飽和脂肪酸の濃縮方法 |
JP2007143479A (ja) * | 2005-11-28 | 2007-06-14 | Kyushu Univ | スキゾキトリウム属の微生物を用いた長鎖高度不飽和脂肪酸含有リン脂質の製造方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115478083A (zh) * | 2021-06-15 | 2022-12-16 | 嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司 | 一种无溶剂体系制备磷脂型多不饱和脂肪酸的方法 |
CN115478083B (zh) * | 2021-06-15 | 2024-06-11 | 嘉必优生物技术(武汉)股份有限公司 | 一种无溶剂体系制备磷脂型多不饱和脂肪酸的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Haraldsson et al. | Preparation of phospholipids highly enriched with n‐3 polyunsaturated fatty acids by lipase | |
KR100538480B1 (ko) | 리파아제를 이용한 글리세리드의 제조방법 | |
EP1456330B1 (en) | Functional acylglycerides | |
JP2006506483A5 (ja) | ||
JP2006506483A (ja) | リパーゼ触媒した海産油のエステル化 | |
Řezanka et al. | Effect of starvation on the distribution of positional isomers and enantiomers of triacylglycerol in the diatom Phaeodactylum tricornutum | |
Zhang et al. | Concentration of omega-3 polyunsaturated fatty acids from oil of Schizochytrium limacinum by molecular distillation: optimization of technological conditions | |
EP2453020B1 (en) | Method for producing phospholipid | |
JP5416861B2 (ja) | リパーゼによる高度不飽和脂肪酸含有油脂の製造方法 | |
Chojnacka et al. | Enzymatic enrichment of egg-yolk phosphatidylcholine with α-linolenic acid | |
Bogojevic et al. | Designer phospholipids–structural retrieval, chemo-/bio-synthesis and isotopic labeling | |
Wang et al. | Improved synthesis of monopalmitin on a large scale by two enzymatic methods | |
Li et al. | Phospholipid-based surfactants | |
Choi et al. | Preparation of phytosteryl ester and simultaneous enrichment of stearidonic acid via lipase-catalyzed esterification | |
JP5617141B2 (ja) | リン脂質の製造方法 | |
JP6175198B2 (ja) | Dha含有グリセリド含有組成物の製造方法 | |
JP6715586B2 (ja) | 高度不飽和脂肪酸の製造方法 | |
Sitompul et al. | Synthesis of Structured Triglycerides Based on Canarium Oil for Food Application. | |
Castejón et al. | Integrated Green and Enzymatic Process to Produce Omega‐3 Acylglycerols from Echium plantagineum Using Immobilized Lipases | |
Cervera et al. | Acyl migration evaluation in monoacylglycerols from Echium plantagineum seed oil and Marinol | |
JP2016053156A (ja) | 高度不飽和脂肪酸結合型リン脂質の製造方法 | |
KR20220160041A (ko) | 분자 증류에 의한 2개 탄소의 차이가 있는 지방산의 분별 방법 | |
JP2023503200A (ja) | 多価不飽和脂肪酸で強化された微生物油組成物 | |
Rahman et al. | Synthesis and characterization of 2-monoacylglycerols from Canarium oil (Canarium indicum) | |
KR100850646B1 (ko) | 인지질 조성물 제조방법 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20180129 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20180816 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20180828 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20181018 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20190129 |